ES2240080T3 - Metodo de utilizacion de anticuerpos antifosfolipasa a2 para mejorar el crecimiento o la eficacia de la alimentacion. - Google Patents

Abstract

El uso de un agente que comprende un anticuerpo para la fabricación de un medicamento que se usa en un método para reducir la inflamación gastrointestinal en un animal, donde el agente reduce la biodisponibilidad en el animal de un precursor lípido de la prostaglandina o leucotrieno y se administra por vía oral.

Description

Método de utilización de anticuerpos anti-fosfolipasa A_{2} para mejorar el crecimiento o la eficacia de la alimentación.

Antecedentes de la invención

La presente invención se refiere a medicamentos para modular la actividad de una o más enzimas que producen precursores de metabolitos de lípidos asociados con la inflamación gástrica, a fin de reducir los efectos nocivos de la inflamación gástrica y aumentar el crecimiento animal y de seres humanos o mejorar la eficiencia de la alimentación.

El aumento del crecimiento animal o eficiencia de la alimentación, puede tener un impacto sustancial en, por ejemplo, la industria cárnica animal al reducir el alto coste de alimentar los animales de alimentación y mejorar directamente el beneficio. Por ejemplo, en la industria avícola, incluso un ligero aumento en la velocidad de crecimiento del pollo unido a una reducción en el consumo de pienso conseguirá que el pollo esté listo para el mercado más rápidamente y a un costo más bajo. Con aproximadamente 7 mil millones de pollos criados anualmente en Estados Unidos, pueden realizarse ahorros significativos.

Se conocen métodos para controlar el comportamiento de alimentación por medio de la modulación de la actividad de péptidos intestinales que controlan la movilidad gastrointestinal. Estos péptidos intestinales incluyen colecistoquinina (CCK), el polipéptido pancreático de las aves (aPP), bombesina, gastrina, somatostatina y el neuropéptido Y. Duke, G.E., "Recent Studies on Regulation of Gastric Motility in Turkeys", World's Poultry Science Association Invited Lecture, pp. 1-8 (1991); Baile et al., "Hormones and feed intake", Proc. Nutr. Soc., 42:113-27 (1983). El efecto de reguladores fisiológicos diferentes de los péptidos intestinales en el comportamiento de alimentación es prácticamente desconocido.

Un grupo de dichos reguladores incluyen metabolitos inflamatorios tales como los leucotrienos y las prostaglandinas que pueden tener efectos beneficiosos, así como nocivos en el huésped.

En los animales, el ácido linoleico se convierte en ácido araquidónico. El ácido araquidónico se libera (como araquidonato) de la posición sin2 de los fosfolípidos de la membrana por la fosfolipasa A_{2} (PLA_{2}) y se convierte por la acción de la lipoxigenasa o ciclooxigenasa en precursores de prostaglandinas y leucotrienos biológicamente activos. Los animales pueden contener concentraciones altas de los precursores de prostaglandina y leucotrieno quizás como resultado de concentraciones de ácido linoleico artificialmente altas por la dieta. El documento de patente de Estados Unidos 5.821.264 se refiere al uso de tocotrienoles y compuestos semejantes al tocotrienol para inhibir la producción de ácido araquidónico.

Las prostaglandinas son ácidos grasos C_{20} formadas por la actividad de las ciclooxigenasas sobre el ácido araquidónico. Las prostaglandinas causan efectos inflamatorios en traumas gastrointestinales, tales como colitis y úlceras, y están involucradas en la vasodilatación, vasoconstricción, y estimulación del músculo liso intestinal o bronquial. Se encuentran prostaglandinas en exudados inflamatorios y pueden inducir fiebre y eritema. Los leucotrienos, que se forman a partir del ácido araquidónico en respuesta a la estimulación de leucocitos inmunológicos o no inmunológicos y a la estimulación de macrófagos, causan contracción del músculo liso, tal como el músculo liso intestinal, atraen a los leucocitos y estimulan la permeabilidad vascular.

Puede ser posible reducir la inflamación reduciendo la síntesis gastrointestinal de prostaglandinas, quizás usando inhibidores selectivos de la ciclooxigenasa-2, una enzima que se expresa en las zonas de inflamación. Esto reduciría o eliminaría la necesidad de fármacos no esteroides antiinflamatorios estándares que se sabe tienen efectos secundarios ulcerogénicos. Sin embargo, Reuter et al. han demostrado que la inhibición de productos de la ciclooxigenasa, tal como la prostaglandina, exarcebó la colitis y aumentó la lesión del colon asociada con la inflamación. Reuter et al., "Exacerbation of Inflammation-associated Colonic Injury in Rat through Inhibition of Cicloxygenase-2", J.Clin.Invest., 98 (9): 2976-85 (1996). De forma similar, Uribe et al han demostrado que el uso de indometacina para inhibir la síntesis de prostaglandinas causa úlceras intestinales. Uribe et al , "Endogenous Prostaglandins and Microflora Modulate DNA Synthesis and Neuroendocrine Peptides in the Rat Gastrointestinal Tract", Scand. J. Gastro., 32:691-99 (1997). Otras investigaciones han mostrado que las prostaglandinas son necesarias para la reparación de la función del intestino. Blikslager et al., "Prostaglandins I_{2} and E_{2} have a Synergistic Role in Rescuing Epithelial Barrier Function in Porcine Ileum", J.Clin.Invest., 100 (8): 1928-33 (1997).

Estos resultados sugieren que la regulación disminuida de la actividad de las prostaglandinas sería nociva para el sistema gastrointestinal del animal.

El documento de patente alemana DE-A-4.142.552 se refiere al uso de anticuerpos de la fosfolipasa tipo I en el tratamiento de la pancreatitis.

Breve resumen de la invención

La presente invención se resume en que se proporciona medicamentos que reducen la inflamación gastrointestinal, originando una mejora en la salud intestinal, aumento del crecimiento y aumento de la eficiencia alimentaria en los animales, sin efectos nocivos, limitando la biodisponibilidad de un precursor del leucotrieno y de la prostaglandina.

De esta forma la invención proporciona el uso de un agente que comprende un anticuerpo para la fabricación de un medicamento que se usa en un método para reducir la inflamación gastrointestinal en un animal, donde el agente reduce la biodisponibilidad en el animal de un precursor lípido de la prostaglandina o leucotrieno y se administra por vía oral.

En un aspecto relacionado, la invención se resume en que el anticuerpo puede limitar la disponibilidad del ácido araquidónico.

La invención también proporciona el uso de un agente que comprende un anticuerpo para la fabricación de un medicamento que se usa en un método para aumentar el crecimiento o comportamiento de alimentación en un animal en relación a un animal de control, en donde el agente reduce la biodisponibilidad en el animal de un precursor lípido de la prostaglandina o leucotrieno y se administra por vía oral.

En otro aspecto de la invención, anticuerpos anti-PLA_{2} se usan en la fabricación de un medicamento para aumentar el crecimiento o mejorar la eficiencia de la alimentación en un animal. Los anticuerpos anti-PLA_{2} limitan la disponibilidad del ácido araquidónico, un precursor de los metabolitos lípidos inflamatorios tales como leucotrienos y prostaglandinas.

La invención también proporciona un pienso de animales que comprende una preparación de huevo que comprende un anticuerpo anti-PLA_{2}.

En todavía otro aspecto de la invención, los anticuerpos anti-PLA_{2} se usan en la fabricación de medicamentos para contrarrestar en un animal los problemas inflamatorios que envuelven el intestino, tanto si es por exposición a endotoxinas o agentes infecciosos, como si se trata de procesos inflamatorios tales como los de Crohn.

Es un objeto de esta invención proporcionar un método para reducir la inflamación del tracto gastrointestinal, originando una mejoría de la salud, aumento del crecimiento o aumento de la eficiencia de la alimentación en animales, sin efectos nocivos, limitando la disponibilidad de precursores a los metabolitos leucotrienos y prostaglandinas.

Es otro objeto de la presente invención reducir la disponibilidad del ácido araquidónico sin detrimento para el animal.

Breve descripción de varias vistas de los dibujos

No aplicable.

Descripción detallada de la invención

Se cree que las prostaglandinas y leucotrienos causan inflamación gastrointestinal lo que aumenta el daño de los tejidos y afecta negativamente la habilidad de los animales, particularmente mamíferos y aves, para trasformar la ingesta en peso corporal. Limitando la disponibilidad de los precursores de estos metabolitos de lípidos se reduce el espesor de la pared intestinal, se altera el comportamiento de alimentación del animal y se mejora la salud del animal.

Cuando el intestino encuentra endotoxinas, la fosfolipasa A_{2} (PLA_{2}) se torna activa y se inicia una respuesta inflamatoria que puede causar el espesamiento de la pared intestinal y la disminución de la ganancia de peso. Mediante la limitación de la producción de metabolitos de lípidos tales como prostaglandinas y leucotrienos durante la digestión normal de la comida, se reduce la estimulación del músculo liso intestinal, lo que causa una conversión del alimento más eficiente y crecimiento del cuerpo más eficiente. Por limitación de estos metabolitos de lípidos durante los traumas gastrointestinales, tales como colitis y necrosis, se reduce la inflamación y se evita el daño tisular adicional. La invención se practica preferiblemente en aves o mamíferos. Las aves preferidas incluyen pollos, patos, pavos, codornices, y gansos. Los mamíferos preferidos incluyen animales bovinos, ovinos porcinos, caprinos, roedores y seres humanos.

En una realización preferida de la presente invención, la producción de prostaglandina y leucotrieno está limitada mediante la disminución de la disponibilidad de araquidonato, un precursor necesario, reduciendo o previniendo que el araquidonato sea eliminado de los fosfolípidos de membrana. Un método para hacerlo así envuelve interferir con la fosfolipasa A_{2} (PLA_{2}), la enzima que elimina el araquidonato de los fosfolípidos de membrana. Mediante la reducción o prevención de la liberación del araquidonato, la prostaglandina y precursores de leucotrieno almacenados disponibles están reducidos necesariamente.

El solicitante ha determinado que reduciendo el araquidonato disponible, los niveles de prostaglandinas y leucotrienos se reducen. La estrategia se practica preferiblemente previniendo la liberación de araquidonato. Esto puede lograrse preferiblemente reduciendo o eliminando la actividad de la enzima PLA_{2}. La actividad de la enzima PLA_{2} puede reducirse usando un anticuerpo anti-PLA_{2} que, sin intentar limitar al solicitante, se cree que acompleja con la enzima PLA_{2} y por ello interfiere con su actividad de fosfolipasa. Pueden prepararse o administrarse anticuerpos policlonales o monoclonales anti-PLA_{2} utilizando cualquiera de los varios métodos conocidos en la técnica para producir un anticuerpo o factor semejante al anticuerpo, que incluyen pero no se limitan a la producción en plantas transgénicas o animales de producción de leche. Los anticuerpos adecuados pueden ser, pero no es necesario, purificados eliminando el material que no es anticuerpo presente durante la preparación. Los anticuerpos se consideran adecuados según el presente método si pueden reducir la actividad de la enzima PLA_{2} comparativamente con los controles no tratados en las experiencias realizadas a la vez in vivo. Una persona familiarizada con la técnica apreciará también que el medicamento puede actuar interfiriendo con la transcripción o translación de PLA_{2}. El agente también puede limitar la disponibilidad de un precursor diferente de las prostaglandinas o leucotrienos.

El agente puede administrarse por vía oral, y se administra preferiblemente en combinación con un vehículo adecuado del tipo usado usualmente para la administración de medicamentos o suplementos de nutrición. La administración oral incluye, pero no está limitada a, administración en comprimidos o en forma de polvo. Lo más preferido, el agente se administra directamente mezclándolo con el alimento o recubriendo las partículas de alimento como se describe en el documento de patente de los Estados Unidos Nº 5.725.873.

En un procedimiento preferido, los anticuerpos se preparan como se describe a continuación. Un animal productor se inmuniza con un péptido o proteína, tal como PLA_{2}, contra el cual se desean anticuerpos de modo que, el animal productor produce un anticuerpo a dicho péptido o proteína. Se obtiene una sustancia que contiene el anticuerpo de dicho animal productor. El anticuerpo puede purificarse posteriormente si se desea o puede usarse sin preparación posterior en un pienso.

El método de Tokoro (documento de patente de los Estados Unidos Nº 5.080.895), puede usarse para producir una preparación de anticuerpos de yema del huevo.

Gallinas ponedoras pueden inocularse con PLA_{2}. Preferiblemente, se administra un adyuvante adecuado en conjunción con la inoculación con la PLA_{2} de gallina para aumentar la inmunización. Un adyuvante eficaz para este propósito es una emulsión de agua en aceite tal como el adyuvante de Freund completo. La PLA_{2}causa que las gallinas produzcan anticuerpos anti-PLA_{2} que se transfieren pasivamente a las yemas de huevo puestos por las gallinas.

Una preparación de huevo, por ejemplo yemas de huevo o huevos enteros que contienen anticuerpos anti-PLA_{2} puede recogerse y homogenizarse para formar una emulsión. La emulsión resultante puede secarse para formar un polvo que contiene el anticuerpo anti-PLA_{2}. Este polvo puede formularse después de manera apropiada para la ruta de administración y después administrarse a los animales deseados usando métodos conocidos en la técnica. La preparación se administra oralmente, lo más preferido como un suplemento en la dieta de los animales.

Los ejemplos siguientes se proporcionan para ilustrar más la presente invención. La presente invención no está limitada a los detalles específicos establecidos en los ejemplos.

Ejemplo

Se inyectaron pollos (gallinas ponedoras) intramuscularmente con cantidades variables de fosfolipasa A_{2} (PLA_{2}) (0,05 a 10 mg) en adyuvante de Freund completo. Tres semanas después de la inyección, las yemas de huevo o los huevos completos que contenían el anticuerpo PLA_{2} se recogieron, y se alimentaron durante 21 días a pollitos con de 0,0 a 0,5 g de yema de huevo seca para alimentación por kg de pienso (comenzando en el día uno de edad). Los pollos se alimentaron también con yemas de huevo que contenían cantidades comparables del anticuerpo anti-ureasa.

El peso corporal y la eficiencia de la alimentación se determinaron catorce, y veintiún días después de la dieta de alimentación. Véase Tabla 1. En el día catorce, los pollos alimentados con anticuerpos anti-PLA_{2}, mostraron, de media, una mejora de dos puntos en la eficacia de conversión (1,58 frente a 1,60) y ganaron 41 gramos de peso corporal más que los pollos no tratados control. La eficiencia de la conversión del alimento se define como la cantidad de alimento en gramos requerida para causar que un animal gane 1 gramo de peso. Una mejora de 100 puntos en la eficiencia de la alimentación corresponde a una disminución de un gramo en la cantidad de alimento requerido para causar al animal una ganancia de un gramo. En vista del mercado sustancial para, por ejemplo, pollos de asar en los Estados Unidos solo (7.000 millones por año), un punto de mejora tiene efectos comerciales significativos en la reducción del coste de la alimentación. En el día veintiuno, los pollos alimentados con anticuerpos anti PLA_{2}, de media, exhibían una mejora de cuatro puntos en la eficiencia de conversión de la alimentación (1,68 frente a 1,72) y ganaron 57 gramos de peso corporal más que los pollos control no tratados.

TABLA 1 Efectos del tratamiento de PLA_{2} en pollos jóvenes

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La presente invención no intenta estar limitada a lo anterior, sino incluir todas y cada una de las modificaciones y variaciones que siguen dentro del alcance de las reivindicaciones incluidas en el apéndice.

Claims (15)

1. El uso de un agente que comprende un anticuerpo para la fabricación de un medicamento que se usa en un método para reducir la inflamación gastrointestinal en un animal, donde el agente reduce la biodisponibilidad en el animal de un precursor lípido de la prostaglandina o leucotrieno y se administra por vía oral.

2. El uso según la reivindicación 1, donde el precursor lípido de la prostaglandina o leucotrieno es el ácido araquidónico.

3. El uso según las reivindicaciones 1 o 2, donde el agente previene la liberación del precursor del lípido de un fosfolípido.

4. El uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el agente comprende un anticuerpo anti-fosfolipasa A_{2} (anti-PLA_{2}).

5. El uso según la reivindicación 4, donde el agente se mezcla con pienso o comida.

6. El uso de un agente que comprende un anticuerpo para la fabricación de un medicamento que se usa en un método para aumentar el crecimiento o comportamiento de alimentación en un animal en relación a un animal de control, en donde el agente reduce la biodisponibilidad en el animal de un precursor lípido de la prostaglandina o leucotrieno y se administra por vía oral.

7. El uso según la reivindicación 6, donde el precursor lípido de la prostaglandina o leucotrieno es el ácido araquidónico.

8. El uso según la reivindicación 8, donde el agente previene la liberación del precursor del lípido de un fosfolípido.

9. El uso según cualquiera de las reivindicaciones 6 a 8, donde el agente comprende un anticuerpo anti-fosfolipasa A_{2} (anti-PLA_{2}).

10. El uso según la reivindicación 9, donde el agente se administra oralmente y se mezcla con pienso o comida.

11. El uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, donde el animal es un ave o mamífero.

12. El uso según la reivindicación 11, donde el ave es un pollo, pavo o pato.

13. El uso según la reivindicación 11, donde el mamífero es un bovino, ovino, porcino, caprino, roedor o un ser humano.

14. El uso según las reivindicaciones 5 o 10, donde la etapa de administrar el anticuerpo comprende alimentar el animal con una preparación de huevo que comprende el anticuerpo.

15. Un pienso animal que comprende una preparación de huevo que comprende un anticuerpo anti-PLA_{2}.