ES2234152T3 - Vectores de antigenos en forma de vesiculas multilamelares. - Google Patents
Vectores de antigenos en forma de vesiculas multilamelares.Info
- Publication number
- ES2234152T3 ES2234152T3 ES98944010T ES98944010T ES2234152T3 ES 2234152 T3 ES2234152 T3 ES 2234152T3 ES 98944010 T ES98944010 T ES 98944010T ES 98944010 T ES98944010 T ES 98944010T ES 2234152 T3 ES2234152 T3 ES 2234152T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- antigen
- vesicles
- vector
- antigens
- protein
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
- A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers
- A61K9/1272—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers with substantial amounts of non-phosphatidyl, i.e. non-acylglycerophosphate, surfactants as bilayer-forming substances, e.g. cationic lipids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Liposomes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55555—Liposomes; Vesicles, e.g. nanoparticles; Spheres, e.g. nanospheres; Polymers
Abstract
Vector de antígeno, caracterizado por estar constituido por una dispersión de vesículas multilamelares en el seno de las cuales dicho antígeno se encuentra al menos parcialmente encapsulado, estando constituidas dichas vesículas, desde su centro hasta su periferia, por una sucesión de bicapas concéntricas que contienen al menos un agente tensoactivo y que están separadas por un medio líquido.
Description
Vectores de antígenos en forma de vesículas
multilamelares.
La presente invención se relaciona con vectores
de antígenos en forma de vesículas multilamelares y con
composiciones que contienen antígenos encapsulados en estas
vesículas.
Más de 100 años después del descubrimiento de los
agentes infecciosos por Louis Pasteur, la cuestión siguiente está
siempre de actualidad: ¿cómo preparar al sistema inmunitario para
ser duraderamente eficaz contra una infección en condiciones de
seguridad total?. La apuesta de las investigaciones es no sólo
poner a punto nuevas vacunas, sino también mejorar las ya
existentes, reduciendo el número de inyecciones.
En nuestros días, la mayoría de las vacunas
víricas son de virus vivos atenuados. Esta estrategia ha resultado
menos fructuosa contra las bacterias, ya que se utiliza una sola
vacuna bacteriana atenuada al día de la fecha: la BCG. La evolución
de la atenuación de los microorganismos ha hecho enormes progresos
gracias a las técnicas de Biología Molecular, que hacen posible
modificar la función de virulencia de estos agentes patógenos. No
obstante, es difícil conciliar la atenuación de esta virulencia y
una estimulación eficaz de las defensas inmunitarias. Las vacunas
llamadas moleculares, a base de antígenos purificados, exigen el
concurso de adyuvantes a propósito de los cuales queda aún por
desarrollar toda una investigación. A modo de ejemplo, la primera
vacuna de este tipo fue puesta a punto contra la hepatitis B en 1987
a partir de una proteína de la envuelta vírica (antígeno HBs)
producida por las células animales. Estas vacunas moleculares son
aún poco numerosas, ya que los antígenos purificados son
rápidamente eliminados por el organismo. Además, los antígenos
purificados, inyectados solos, son poco eficaces y necesitan el
empleo de substancias que favorezcan su reconocimiento por el
sistema inmunitario y que ralenticen su degradación: los
adyuvantes. Actualmente, el hidróxido de aluminio,
Al(OH)_{3}, descubierto en 1926, es un adyuvante
autorizado en el hombre. Se han descubierto nuevas substancias en
el curso de los últimos años: derivados sintéticos de la pared de
las micobacterias (dipéptido de muramilo y sus derivados).
Sin embargo, la demostración de la inocuidad de
estos nuevos agentesnecesita una multitud de pruebas antes de que
puedan ser utilizados en vacunas para uso humano. Finalmente, se
plantea el problema del número de inyecciones, ya que, en ausencia
de recuerdos, la memoria inmunitaria se vuelve entonces
insuficiente.
La vacunación moderna, en particular la que
utiliza proteínas recombinantes, se basa en la respuesta inmunitaria
ligada a la administración de un antígeno por diferentes vías
(intramuscular, oral). Sin embargo, ésta puede estar mal
estimulada, ya sea por la biodisponibilidad insuficiente del
antígeno (duración de vida demasiado corta, proteolisis y dilución
en los fluidos biológicos), ya sea por la ausencia de una captura y
de una presentación eficaz por las células presentadoras de
antígenos (accesibilidad de las células dendríticas al sitio de
inmunización, conformación del antígeno que no permite a la vez
asociación a las moléculas de clase I y de clase II del Complejo
Mayor de Histocompatibilidad), ya sea por un reconocimiento
imperfecto de los determinantes antigénicos por las células
inmunitarias, incluso cuando la secuencia proteica es conocida de
forma óptima (por ejemplo, las glicoproteínas asociadas al virus
HIV o los marcadores tumorales).
Existe, pues, un gran interés en vectorizar estas
moléculas con el fin de intentar paliar las limitaciones descritas
anteriormente.
Clásicamente, la vacunación se dirige a una
respuesta inmunitaria humoral. Este sistema protege al individuo
vacunado de una exposición eventual al agente patógeno, previniendo
de este modo la diseminación de una infección extracelular. Sin
embargo, es ineficaz frente a una infección intracelular. La
respuesta inmunitaria celular es, pues, el complemento indispensable
para la eliminación de la célula infectada. Por consiguiente, una
vacunación ideal debería favorecer los dos tipos de inmunidad, la
celular y la humoral. La respuesta inmunitaria celular permite la
eliminación de agentes patógenos intracelulares, tales como los
virus, o la destrucción de las células cancerosas. En el momento
actual, la obtención de una respuesta inmunitaria adecuada por
administración de un antígeno se enfrenta aún a numerosas
dificultades. Es por ello aún imposible obtener una vacunación
contra los antígenos tumorales específicos (por ejemplo, cáncer de
mama) o contra antígenos débilmente inmunogénicos (por ejemplo,
glicoproteínas asociadas al VIH).
Existe, pues, una necesidad evidente de un método
que permita vectorizar los antígenos con el fin de inducir una
respuesta celular excluyendo eventuales choques anafilácticos o una
proteolisis en el suero.
Una multitud de enfermedades podrían beneficiarse
de la administración de proteínas o de péptidos antigénicos
terapéuticos vectorizados. Esto permitiría reducir los efectos
secundarios indeseables ligados a la cantidad demasiado grande de
antígenos que se han de administrar con el fin de "suscitar"
la respuesta inmunitaria (por ejemplo, vacunación
anticancerosa).
Se ha propuesto en la literatura utilizar
liposomas a la vez como vector de antígeno y como inmunoadyuvante
para la obtención de vacunas. La solicitud internacional WO 95/22961
muestra una selección particular de los fosfolípidos que entran en
la composición de tales liposomas, estando destinada esta selección
a mejorar la respuesta inmunitaria, y ello tanto si los antígenos
son simplemente utilizados en presencia de los liposomas como si
están encapsulados en estos liposomas.
Los inventores de la presente invención han
puesto a punto, para diferentes aplicaciones en campos totalmente
diferentes de los de la presente invención, vesículas
multilamelares que presentan una estructura llamada en
"cebolla" y que están constituidas, desde su centro hasta su
periferia, por una sucesión de capas lamelares separadas por un
medio líquido. Estas vesículas pueden ser obtenidas por un
procedimiento que consiste en la preparación de una fase lamelar
cristal-líquido y su transformación por aplicación
de un corte. Tal procedimiento está, en particular, descrito en la
patente WO 93/19735, procedente de la patente francesa
FR-2.689.418, o en WO 95/18601, aquí incorporadas
como referencia.
Según la patente francesa
FR-2.689.418, esta transformación puede hacerse por
una etapa de corte homogéneo de la fase
cristal-líquido, lo que conduce a vesículas también
llamadas microcápsulas de tamaño controlado. Sin embargo, actuando
sobre la formulación de la fase lamelar
cristal-líquido, en particular sobre la naturaleza
de los tensoactivos que entran a formar parte de su composición, la
transformación de esta fase cristal-líquido en
vesículas puede ser obtenida por simple solicitación mecánica, en
particular por mezcla de los constituyentes.
Las investigaciones conducidas por los inventores
les han llevado a descubrir que la utilización de las tecnologías
antes descritas permitía poner a punto nuevos vectores
multilamelares de pequeño tamaño, que presentan una gran eficacia
de encapsulación y una gran facilidad de preparación y que pueden
ser utilizados para vectorizar antígenos, con el resultado de
aumentar la respuesta inmunitaria del organismo contra el antígeno
encapsulado.
Tal vector presenta en muchos sentidos las
ventajas buscadas para un adyuvante de vacunación.
Otra ventaja es que todas las moléculas que
entran a formar parte de la preparación de las composiciones de la
invención tienen disponibilidad comercial.
Otras ventajas están ligadas al procedimiento de
preparación particularmente simple de las vesículas multilamelares
útiles según la invención, que permite utilizar una gran variedad
de tensoactivos.
Otra ventaja, también ligada al procedimiento de
preparación, de las vesículas multilamelares útiles según la
invención es que permite, como se deduce de la exposición que se
dará a continuación, coencapsular varios antígenos en la misma
vesícula, permitiendo así el acceso eventualmente a vacunas
plurivalentes, o coencapsular con uno o varios antígenos aditivos
que permitan funcionalizar las vesículas, permitiendo, por ejemplo,
mejorar el abordaje de la composición o influir sobre la
orientación (humoral o celular) de la respuesta inmunitaria.
Otra ventaja, también ligada esencialmente al
procedimiento utilizado para preparar las vesículas con estructura
en cebolla utilizadas según la invención, reside en el hecho de que
se incorporan los principios activos y los aditivos previamente a
la formación de las vesículas, lo que permite un excelente
rendimiento de encapsulación y por ello una mayor eficacia y una
economía muy importante para moléculas extremadamente costosas.
Además, otra ventaja también ligada al
procedimiento utilizado para la preparación de las vesículas
utilizadas según la invención es que se pueden incorporar
indiferentemente principios activos o aditivos, ya sean
hidrosolubles o liposolubles.
Más concretamente, la presente invención propone
un nuevo medio de vectorización de antígenos con objeto de aumentar
la respuesta inmunitaria del organismo contra este o estos
antígenos. La presente invención contempla más concretamente un
método para administrar un antígeno que permite mejorar
significativamente la respuesta inmunitaria, tanto celular como
humoral.
Así, según una de sus características esenciales,
la invención se relaciona con un nuevo vector de antígeno,
constituido por una dispersión de vesículas multilamelares en el
seno de las cuales dicho antígeno se encuentra al menos
parcialmente encapsulado, estando constituidas dichas vesículas por
bicapas que tienen al menos un agente tensoactivo, siendo dichas
bicapas concéntricas y confiriendo a dichas vesículas una
estructura en cebolla.
Por antígeno, se entiende cualquier substancia
que induce una respuesta del sistema inmunitario y/o la producción
de anticuerpos. Una substancia antigénica incluye al menos un
determinante antigénico o epitopo, compuesto por unidades
moleculares reconocidas por anticuerpos específicos y/o por las
células del sistema inmunitario.
Los antígenos utilizados según la invención son
ventajosamente antígenos de tipo proteico. Podrá tratarse, en
particular, de antígenos constituidos por proteínas naturales o
recombinantes o por péptidos.
Se podrán utilizar también las vesículas de la
invención como vectores de antígenos de tipo glicoproteínas o
polisacáridos.
Las vesículas de la invención podrán contener un
antígeno o una mezcla de antígenos. A modo de mezcla de antígenos,
se citarán, en particular, las mezclas obtenidas por síntesis o por
biotecnología, o por extracción a partir de los microorganismos en
cuestión.
Por estructura en "cebolla", se entiende,
como se ha expuesto anteriormente, una estructura multilamelar en la
cual las vesículas de forma sensiblemente esférica están
constituidas por una sucesión de bicapas concéntricas y ello desde
el centro hasta la periferia, de donde viene el nombre de
estructura en cebolla utilizado, por analogía, para calificar dichas
estructuras.
Tales estructuras son ventajosamente obtenidas
por incorporación de al menos un antígeno en una fase lamelar
cristal-líquido que contiene al menos un agente
tensoactivo y transformación después de esta fase
cristal-líquido lamelar en una fase densa de
vesículas multilamelares de pequeño tamaño.
Así, según otra característica esencial de la
invención, ésta se relaciona con un procedimiento de preparación de
una composición que contiene al menos un antígeno, según el cual se
prepara una fase cristal-líquido lamelar que
incorpora dicho antígeno y se provoca la reorganización de dicha
fase cristal-líquido en vesículas multilamelares
por aplicación de un corte.
Este corte podrá ser un corte homogéneo, lo que
presenta la ventaja de conducir a vesículas de tamaño perfectamente
homogéneo. Sin embargo, una simple agitación mecánica podrá
revelarse como suficiente para dar lugar a la formación de las
vesículas multilamelares de la invención.
Según otra característica más, la invención se
relaciona con los productos susceptibles de ser obtenidos por este
procedimiento.
Según la patente francesa
FR-2.689.418, esta transformación puede hacerse por
una etapa de corte homogéneo de la fase
cristal-líquido, lo que conduce a vesículas o
microcápsulas de tamaño controlado. Sin embargo, actuando sobre la
formulación de la fase lamelar cristal-líquido, en
particular sobre la naturaleza de los tensoactivos que entran a
formar parte de su composición, se puede obtener la transformación
de esta fase cristal-líquido en vesículas por
simple solicitación mecánica, en particular por mezcla de los
constituyentes.
La formulación hace intervenir ventajosamente a
una mezcla de moléculas tensoactivas. Se utilizan generalmente dos
tensoactivos diferentes que tienen equilibrios
hidrófilo-lipófilo diferentes, lo que permite
regular de forma continua las propiedades de las bicapas y
controlar así la aparición de la inestabilidad que gobierna la
formación de las vesículas multilamelares.
Parece que esta estructura sea responsable de los
resultados particularmente ventajosos obtenidos y que las vesículas
multilamelares de la invención permitan al antígeno llegar intacto
hasta las células presentadoras del antígeno (CPA) y favorecer su
captura por estas células. Parece, pues, que la función de las
vesículas de la invención es vectorizar, proteger y mejorar la
captura del antígeno por el sistema inmunitario.
Según una variante ventajosa, las vesículas que
constituyen las composiciones de la presente invención tienen
diámetros inferiores a 20 \mum, preferiblemente inferiores a 10
\mum, preferiblemente aún inferiores a 1 \mum, preferiblemente
aún comprendidos entre 0,1 y 1 \mum.
Según una variante ventajosa, las membranas de
las vesículas contenidas en las composiciones de la invención
contienen al menos un agente tensoactivo seleccionado entre el grupo
constituido por:
- -
- fosfolípidos hidrogenados o no hidrogenados;
- -
- ácidos grasos C_{6} a C_{18}, saturados o mono- o poliinsaturados, lineales o ramificados, en forma de ácido o de sal de un metal alcalino o alcalinotérreo o de una amina;
- -
- ésteres, etoxilados o no, de estos mismos ácidos grasos y de
- \bullet
- sacarosa,
- \bullet
- sorbitán,
- \bullet
- manitol,
- \bullet
- glicerol o poliglicerol o
- \bullet
- glicol;
- -
- mono-, di- o triglicéridos o mezclas de glicéridos de estos mismos ácidos grasos;
- -
- alcoholes grasos C_{6} a C_{18}, saturados o mono- o poliinsaturados, lineales o ramificados, etoxilados o no;
- -
- éteres, etoxilados o no, de estos mismos alcoholes grasos y de
- \bullet
- sacarosa,
- \bullet
- sorbitán,
- \bullet
- manitol,
- \bullet
- glicerol o poliglicerol o
- \bullet
- glicol;
- -
- aceites vegetales polietoxilados, hidrogenados o no hidrogenados;
- -
- polímeros secuenciados de polioxietileno y de polioxipropileno (poloxámeros);
- -
- hidroxiestearato de polietilenglicol, y
- -
- alcoholes con esqueleto de esterol, tales como el colesterol y el sitosterol.
Los tensoactivos seleccionados, en particular los
tensoactivos antes citados, son ventajosamente seleccionados entre
la categoría de los tensoactivos permitidos por la legislación para
utilización farmacéutica en función de la vía de
administración.
Se seleccionarán ventajosamente entre los
tensoactivos anteriores dos tensoactivos que presenten propiedades
relativamente diferentes, en particular un equilibrio
hidrófilo-lipófilo ("HLB") diferente. El primer
tensoactivo presentará ventajosamente un equilibrio
hidrófilo-lipófilo comprendido entre 1 y 6,
preferiblemente entre 1 y 4, mientras que el segundo tensoactivo
tendrá un equilibrio hidrófilo-lipófilo comprendido
entre 3 y 15, preferiblemente comprendido entre 5 y 15.
Como se ha visto anteriormente, se podrá obtener
un mejor control del tamaño de las vesículas multicapa procediendo
según la patente FR 2.689.418.
La preparación obtenida tras la transformación de
la fase lamelar cristal-líquido en vesículas
multilamelares puede ser luego diluida, en particular con un
solvente acuoso, tal como, por ejemplo, una solución tampón, una
solución salina o una solución fisiológica, para obtener así una
suspensión acuosa de vesículas.
La técnica de encapsulación utilizada según la
presente invención permite alcanzar fácilmente rendimientos de
encapsulación muy elevados, incluso próximos al 100%. Sin embargo,
tales rendimientos no son siempre indispensables en función de las
aplicaciones contempladas.
Así, el rendimiento de encapsulación del (o de
los) antígeno(s) en las composiciones de la invención es
ventajosamente superior al 50%, preferiblemente superior al 80%.
Otra ventaja ligada a la técnica de encapsulación
de la invención es que permite coencapsular varios antígenos en el
seno de las mismas vesículas, pero también uno o varios antígenos
con aditivos que permitan funcionalizar estas vesículas; esto
permite, en particular, mejorar el abordaje. Se podrán, por
ejemplo, coencapsular citokinas, que van a permitir influir sobre la
orientación (humoral o celular) de la respuesta inmunitaria.
La invención proporciona un medio de
vectorización de antígenos, en particular de antígenos de tipo
proteico, pudiendo realizar esta vectorización in vivo tras
inyección por vía intravenosa o intraperitoneal.
Según otra de sus características esenciales, la
invención se relaciona con una composición que contiene al menos un
antígeno contra el cual se desea producir anticuerpos específicos o
una respuesta celular específica, donde dicho (dichos)
antígeno(s) se encuentra(n) al menos perfectamente
encapsulado(s) en las vesículas multilamelares de un vector
tal como se ha definido anteriormente.
Las composiciones que contienen al menos un
antígeno encapsulado en las vesículas multilamelares previamente
descritas pueden ser tanto composiciones farmacéuticas destinadas a
ser utilizadas como vacunas como composiciones destinadas a la
producción de anticuerpos monoclonales.
Finalmente, según otra de sus características
esenciales, la invención se relaciona con un procedimiento de
preparación de las composiciones definidas anteriormente.
Este procedimiento comprende las etapas
siguientes de:
- -
- preparación de una fase lamelar cristal-líquido que incluye al menos un agente tensoactivo y que incorpora el(los) antígeno(s);
- -
- transformación de la fase cristal-líquido en vesículas multilamelares con estructura en cebolla por corte, y
- -
- dispersión en una solución acuosa para obtener la concentración deseada de antígeno(s).
Más concretamente, según este procedimiento, se
prepara en una primera etapa una fase
cristal-líquido constituida por una mezcla de
moléculas anfífilas y de una solución acuosa que contiene el (o
los) antígeno(s). La fase acuosa puede contener, en
particular, un tampón PBS o cualquier otra solución fisiológica. Se
entiende que el modo operativo será adaptado para tener en cuenta
la falta eventual de solubilidad de determinados antígenos. Se
incorporarán entonces ventajosamente en la fase acuosa diferentes
aditivos o cosolventes susceptibles de favorecer la solución del
antígeno, tales como glicerol, polietilenglicol, propilenglicol o
urea. El experto en la técnica seleccionará la naturaleza de los
tensoactivos y sus proporciones para tener una transformación
ulterior facilitada de la fase cristal-líquido en
vesículas multilamelares con estructura en cebolla. Podrá
seleccionar, sin que ello sea obligatorio, para estos tensoactivos
al menos una molécula anfífila más bien hidrofóbica que presente un
HLB preferiblemente inferior a 4 y otra molécula anfifílica más
bien hidrofílica que presente un HLB preferiblemente superior a 5.
Tal elección permitirá una más fácil transformación de la fase
cristal-líquido.
En una segunda etapa, le mezcla homogénea
constituida por la fase cristal-líquido formada es
cortada según uno de los procedimientos antes descritos. Se
aplicará ventajosamente un corte homogéneo para obtener un tamaño
regular de las vesículas. Sin embargo, la utilización de dicho corte
homogéneo no siempre se revela como necesaria y, a condición de
actuar sobre la formulación de la fase
cristal-líquido, una simple mezcla en un mezclador
industrial puede permitir transformar la fase lamelar
cristal-líquido en vesículas multilamelares según
la invención.
En una tercera etapa, la mezcla constituida por
las vesículas multilamelares según la invención es dispersada en un
exceso de solución acuosa, por ejemplo de suero fisiológico, para
llevar esta mezcla a la concentración de antígeno deseada.
La invención es ilustrada por los ejemplos que se
dan a continuación, que muestran que es posible contemplar la
utilización de las microvesículas multilamelares de tensoactivos
para la vacunación humana y animal con las ventajas siguientes:
- 1)
- Es posible vectorizar uno o varios antígenos, por separado o conjuntamente, en vesículas multilamelares de pequeño tamaño.
- 2)
- Se puede contemplar, teniendo en cuenta el aumento de la respuesta inmunitaria, la utilización de una cantidad menor de antígeno. Esto puede ser importante cuando se pretende recurrir a antígenos recombinantes y/o costosos.
- 3)
- La amplificación de la respuesta inmune por la microencapsulación permite contemplar la utilización de moléculas débilmente inmunógenas que por sí solas no conducen a una respuesta inmunitaria suficiente.
- 4)
- La rapidez del desarrollo de la respuesta inmunitaria permite contemplar una disminución de los cambios entre la realización de los recuerdos sucesivos. En efecto, en el último recuerdo, sólo se presenta un 30% de las personas tratadas y, por lo tanto, un 70% de los individuos, aunque hayan sufrido una primera inyección, no están inmunizados eficazmente. Un retraso más breve entre los recuerdos debería asegurar una mejor vacunación de la población.
- 5)
- El aumento de la respuesta inmune celular es la garantía de una mejor vacunación.
- 6)
- El hecho de que el efecto de amplificación de la respuesta inmunitaria de un antígeno encapsulado sea aún más neto con la presencia de un adyuvante, tal como el QS21, permite contemplar (sin obligación) copulaciones tecnológicas.
En conclusión, los resultados demuestran un
efecto amplificador de la respuesta inmunitaria que es muy general y
puede ser potencialmente aplicado en numerosas vacunas humanas y
animales o para la producción de composiciones que contienen
antígenos.
Los ejemplos siguientes son dados a modo
puramente ilustrativo y no limitativo de la invención.
El ejemplo 3 es ilustrado mediante las figuras 1
a 4, que dan, respectivamente:
- figura 1: los resultados concernientes a la
producción de IgG séricas anti-HSA tras inmunización
según el protocolo IP/IV, definido en el ejemplo 3, a D=19, D=35 y
D=50 para cuatro tipos de tratamientos realizados con HSA
encapsulada (1), HSA libre en PBS (2) y HSA libre en mezcla con
vesículas vacías (3) y vesículas llenas
(4);
(4);
- figura 2: la respuesta isotípica
anti-HSA tras inmunización según el protocolo IP/IV
definido en el ejemplo 3, expresada por los títulos medios de
isotipos IgG después de los cuatro tipos de tratamientos antes
definidos (1, 2, 3 y 4);
- figura 3: los resultados concernientes a la
producción de IgG séricas anti-HSA tras inmunización
según el protocolo SC definido en el ejemplo 3 a D=19, D=35 y D=50
para tres tipos de tratamientos denominados respectivamente como 1
(con HSA encapsulada), 2 (con HSA libre en PBS) y 3 (con vesículas
vacías);
- figura 4: la respuesta isotípica
anti-HSA después de tres inmunizaciones según el
protocolo SC definido en el ejemplo 3 en el caso de tres
tratamientos denominados como 1, 2 y 3 con HSA encapsulada (1), HSA
libre en PBS (2) y vesículas vacías (3).
Las figuras 5 y 6 son dadas en relación al
ejemplo 4 y dan, respectivamente, los resultados de dosificación de
las células linfocíticas B productoras de anticuerpos
anti-NP de isotipos IgG con respecto a las células
esplénicas totales tras aplicación de los dos protocolos de
inmunización definidos en el ejemplo 4, consistentes,
respectivamente, en una inmunización IP (figura 5) y tres
inmunizaciones IP (figura 6).
Se prepara una composición que contiene vesículas
multilamelares y que presenta la composición siguiente, en la cual
las proporciones están expresadas en porcentaje en peso:
| fosfatidilcolina (PC90 de Natterman) | 45,5 |
| oleato de potasio | 5 |
| colesterol | 5 |
| sulfato de colesterol | 2,5 |
| laureth 4 (Lauropal 4 de Witco) | 2 |
| solución acuosa a 10 mg/ml de albúmina sérica humana (HSA) | 40 |
procediendo como se expone a
continuación.
Se mezclan previamente el oleato de potasio, el
colesterol, el sulfato de colesterol y el laureth 4 con agitación
magnética a 55ºC durante 1 h. Se añaden lentamente a la pasta
obtenida, enfriada a temperatura ambiente, con agitación suave la
solución acuosa de HSA (o de agua pura para las microvesículas
vacías) y luego la fosfatidilcolina. Se introduce entonces la
mezcla en una célula de corte constituida por dos cilindros
coaxiales, uno de los cuales está fijo y el otro en rotación. Este
tipo de dispositivo está descrito en la patente WO93/19735. Se
mantiene un corte de alrededor de 10 s^{-1} durante 1 h. Se
dispersa luego la muestra en agua estéril, a razón de 250 mg de
pasta por 1 ml de agua.
Se efectúa una segunda dilución antes de la
inyección, a razón de 0,5 ml de la solución anterior en 2 ml de agua
estéril. Para las muestras que contienen un adyuvante, éste es
previamente incorporado en el agua de dispersión a razón de 5
\mul de solución acuosa de adyuvante (a 20 \mug/\mul) en
1,995 ml de agua. Se obtiene, pues, en la solución inyectada una
concentración de 20 \mug de antígeno por 100 \mul de volumen
inyectable y, en caso de utilizar un adyuvante, su concentración
final es de 4 \mug por 100 \mul.
La razón de encapsulación es estimada por
dosificación tras la separación de las vesículas del sobrenadante y
liberación después del antígeno. Se ultracentrifuga la dispersión de
vesículas (40.000 rpm, 1 h). Se diluye la pella de vesículas 10
veces con una solución al 10% en sal de desoxicolato de sodio. Se
somete la suspensión de vesículas destruidas por la sal de
desoxicolato a un efecto vorticial intenso y se ultracentrifuga
después (50.000 rpm, 60 minutos). Se realiza la dosificación del
antígeno por espectrofotometría sobre la pella por la técnica de
Bradford (Analytical Biochemistry, 1976, 72, p. 248) recurriendo a
la dosificación del "ensayo de proteínas
Bio-Rad" según el protocolo proporcionado
(Bio-Rad Laboratories, EE.UU.).
Los valores asociados a la pella y
correspondientes a la cantidad de antígeno encapsulado (HSA) son del
80% \pm 5%.
El tamaño medio de las vesículas multilamelares
que contienen la HSA es medido por la técnica de difusión dinámica
de la luz. Se encuentra un tamaño de 0,218 \mum con una
polidispersidad del 20%, lo que muestra que se tiene una muestra
homogénea en cuanto al tamaño de las vesículas.
Se determina la respuesta inmunitaria de un
antígeno microencapsulado administrado in vivo recurriendo a
un modelo murino.
Se puso en marcha un protocolo de vacunación
acelerado con el fin de estudiar la capacidad de los vectores para
inducir rápidamente una respuesta inmunitaria. Se realizaron tres
inyecciones en veinte días y se efectuaron luego dosificaciones de
las inmunoglobulinas totales (IgG, IgM) a las dos y a las cuatro
semanas.
Se estudiaron cuatro formulaciones diferentes
(indicadas como 1 a 4) que contenían las mismas cantidades de
antígenos y dos formulaciones control (indicadas como 5 y 6):
- 1)
- el antígeno solo,
- 2)
- el antígeno asociado a un adyuvante conocido (QS21 de AQUILA, EE.UU.),
- 3)
- el antígeno encapsulado en las microvesículas multilamelares de tensoactivos según el ejemplo 1,
- 4)
- el antígeno encapsulado en las microvesículas multilamelares de tensoactivos según el ejemplo 1 asociadas a QS21,
- 5)
- las microvesículas multilamelares de tensoactivos análogas a las obtenidas según el ejemplo 1 pero vacías y
- 6)
- las microvesículas multilamelares de tensoactivos análogas a las obtenidas según el ejemplo 1 pero vacías y asociadas al adyuvante QS21.
Todas las formulaciones fueron preparadas de
forma que un volumen de inyección de 100 \mul contuviera 20 \mug
de antígeno (libre o encapsulado) y, cuando está presente, 4 \mug
de adyuvante QS21 (véase lo anterior).
El modelo murino es el de los ratones BALB/c
hembras de 8 semanas de edad, con un peso medio de 20 g. Transcurren
10 días entre la primera y la segunda inyección intraperitoneal. La
tercera y última administración es intravenosa 10 días después. El
protocolo se espacia, pues, a lo largo de 20 días en total. Se
sigue el mismo protocolo para las seis formulaciones
correspondientes a los seis grupos de cuatro ratones numerados de 1
a 6. Cada grupo fue tratado con la formulación del mismo
número.
Se mantienen los animales en condiciones
"normales", con alimentación ad libitum y normalmente
hidratados.
Se efectúan dos recogidas de sangre (recogida
retroorbitaria) a las 2 y 4 semanas después de la última inyección,
con el fin de dosificar las inmunoglobulinas totales (IgG, IgM) en
el suero tras la centrifugación de la sangre total
heparinizada.
Se hace la dosificación de la respuesta total de
anticuerpos titulando las inmunoglobulinas mediante una prueba ELISA
(Saunders G.C., "Immunoassays in the clinical laboratory", Ed.
Nakamura y col., 1979) con ayuda de inmunoglobulinas de conejo
anti-inmunoglobulinas de ratón (Institut Pasteur,
París), marcadas con peroxidasa. Se revelan las inmunoglobulinas
fijadas por adición del substrato de la enzima.
La medida efectuada en esta prueba es
clásicamente una medida de absorbancia a 405 nm, absorbiendo el
producto de la reacción enzimática formado en la prueba ELISA la
luz en esta longitud de onda. El método de análisis utilizado da
resultados idénticos a la medida de la absorbancia a media altura
de la saturación, pero con más precisión para los valores débiles y
procede por un método que permite acceder a una dimensión
proporcional a la cantidad de antígenos presente en el suero por
parametraje de las curvas que dan la absorbancia en función de la
dilución. En efecto, la ley de dilución puede ser modelada de la
forma siguiente:
I(D) =
I_{o} + \frac{I_{s}}{(1 +
C_{o}D)}
donde:
- I(D) es la absorbancia medida a la dilución D,
- I_{o} es el ruido de fondo de la medida,
- I_{s} es la medida a la saturación (meseta) y
- C_{o} es proporcional a la concentración de anticuerpos buscada (C_{o} tiene la dimensión de una concentración).
I_{o} es medido directamente, I_{s} es
obtenido a partir de un experimento cuya respuesta es suficiente
para alcanzar la saturación. El valor obtenido es entonces
utilizado en el parametraje de las otras medidas de la misma serie
de experimentos, incluso si para estas últimas no se consigue jamás
la saturación.
El parametraje de las curvas permite deducir
C_{o} para cada experimento y, por lo tanto, un número
proporcional a la cantidad de anticuerpos presentes en el suero
estudiado.
Este método es más fino que la simple medida de
la dilución para obtener la hemimeseta, ya que permite obtener una
medida, incluso en ausencia de saturación. Está, pues,
particularmente adaptado a las respuestas débiles.
Los resultados a las dos semanas y a las cuatro
semanas (después de finalizar el protocolo de vacunación) para el
conjunto de las preparaciones son dados en la tabla 1
siguiente.
Los valores obtenidos por este método están
indicados en la tabla 1 siguiente y son, pues, proporcionales a las
tasas de inmunoglobulinas presentes en la sangre.
| Grupo de ratones y Nº de formulación | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 |
| Respuesta a las 2 semanas | - | - | 145 | 335 | - | - |
| Respuesta a las 4 semanas | - | 7 | 467 | 894 | - | - |
El signo "-" corresponde a una respuesta
inferior a 2, juzgada como no significativa.
Se ve, pues, que, desde las 2 semanas, se obtiene
una respuesta inmunitaria significativa para las formulaciones
encapsuladas (con o sin adyuvante). Al final de las cuatro semanas,
las fórmulas encapsuladas dan una respuesta muy importante, más de
50 veces superior a la respuesta del antígeno asociado al adyuvante
y más de 100 veces superior cuando se añade el adyuvante QS21 al
antígeno encapsulado.
Se realizaron otros ensayos de inmunización con
HSA en ratones BALB/c según 2 protocolos de inmunización denominados
a continuación IP/IV y SC, que consisten en los tratamientos
siguientes:
- -
- protocolo IP/IV: 2 inyecciones intraperitoneales (IP) seguidas de una inyección intravenosa (IV) y
- -
- protocolo SC: 3 inyecciones subcutáneas (SC).
Las formulaciones de las vesículas eran idénticas
a las del ejemplo 1. En todos los casos, la dosis de HSA era de 20
\mug por inyección de 100 \mul. Todas las inyecciones fueron
espaciadas en 10 días, es decir, una inyección a D=0, D=10 y D=20.
Las recogidas (retroorbitarias) tuvieron lugar a D=19, es decir, un
día antes de la última inyección, y a D=35 y D=50.
Se sometieron grupos de 4 ratones cada uno a los
tratamientos siguientes:
- -
- Para el protocolo IP/IV:
- \ding{51}
- HSA sola disuelta en tampón PBS (control);
- \ding{51}
- HSA encapsulada en las vesículas según la invención, a razón de 20 \mug de proteína en 5 mg de vesículas dispersas en tampón PBS hasta un volumen total de 100 \mul;
- \ding{51}
- HSA disuelta en tampón PBS a la que se han añadido vesículas vacías (20 \mug de proteína y 5 mg de vesículas vacías dispersas hasta 100 \mul en tampón PBS), y
- \ding{51}
- vesículas vacías (5 mg de vesículas dispersas hasta 100 \mul en tampón PBS).
- -
- Para el protocolo SC:
- \ding{51}
- HSA sola disuelta en tampón PBS (control);
- \ding{51}
- HSA encapsulada en las vesículas según la invención a razón de 20 \mug de proteína en 5 mg de vesículas dispersas en tampón PBS hasta un volumen total de 100 \mul, y
- \ding{51}
- vesículas vacías (5 mg de vesículas dispersas hasta 100 \mul en tampón PBS).
Las dosificaciones de los anticuerpos fueron
realizadas por ELISA sobre las inmunoglobulinas totales (IgGH+L) a
D=19, D=35 y D=50 y sobre los isotipos IgG_{1}, IgG_{2a} e
IgG_{2b} e IgG_{3} a D=50.
En las figuras 1 a 4 se dan los resultados, en
las cuales aparecen los títulos medios (media de las dosificaciones
de los sueros individuales). Se observa:
- 1)
- Una respuesta nula de anticuerpos cuando se utiliza la HSA libre no encapsulada, así como con las vesículas vacías.
- 2)
- Una producción importante de inmunoglobulinas totales, en las dos vías de administración, cuando la HSA está encapsulada, con un máximo a D=35.
- 3)
- Una fuerte amplificación de la respuesta de IgG total (H+L) con la HSA encapsulada administrada por vía subcutánea.
- Los resultados figuran en la siguiente tabla 2.
| D=19 | D=35 | D=50 | |
| Protocolo IP/IV | 700 | 1.700 | 1.600 |
| Protocolo SC | 10.000 | 35.000 | 40.000 |
- 4)
- Ningún efecto adyuvante de las vesículas vacías, ya que la HSA libre en presencia de las vesículas vacías no conlleva más que una respuesta muy débil.
- 5)
- Una producción dominante de IgG_{1}, la presencia de IgG_{2a} en los dos protocolos con títulos mucho más importantes en el caso de administraciones subcutáneas, así como la presencia de IgG_{2b}. No se ha podido observar ninguna producción de IgG_{3} sea cual sea el protocolo de administración.
Este ejemplo completa los resultados del ejemplo
2 y demuestra que la encapsulación de un antígeno en las vesículas
multilamelares según la invención amplifica la respuesta inmunitaria
para diferentes tipos de inyección. Además, indican que el efecto
de las vesículas no es un efecto adyuvante, ya que la adición de
las vesículas vacías al antígeno no encapsulado no aporta ninguna
amplificación de respuesta.
Los ensayos de inmunización con la proteína NP
del sarampión (proteína interna del virus del sarampión) fueron
realizados con dos protocolos de inmunización por inyección
intraperitoneal (IP):
- \ding{51}
- una sola inyección (los resultados están representados en la figura 5) y
- \ding{51}
- tres inyecciones a intervalos de 7 días (en la figura 6 se dan los resultados), cada una con una dosis de proteína NP de 30 \mug, en ratones BALB/c hembras.
Las vesículas fueron preparadas según la
formulación y el modo operativo del ejemplo 1, con una dosis de 30
\mug de proteína en 75 mg de vesículas dispersas en tampón PBS
(inyecciones de 300 \mul tituladas a 30 \mug de proteína).
En el caso de las inyecciones que contenían
vesículas vacías, éstas eran dosificadas a 75 mg de vesículas para
un volumen final de 300 \mul (tampón PBS).
Para cada protocolo y cada dosis, se trataban
grupos de 4 ratones por:
- \ding{51}
- NP disuelta en tampón PBS (I),
- \ding{51}
- NP encapsulada en las vesículas según la invención (II),
- \ding{51}
- NP disuelta en tampón PBS al que se habían añadido vesículas vacías (III) y
- \ding{51}
- NP en tampón PBS, emulsionada con adyuvante completo de FREUND. Se realiza la mezcla extemporáneamente justo antes de la inyección a razón de 1 volumen de solución tampón que contiene la proteína con 1 volumen de adyuvante CFA (SIGMA, St. Louis, EE.UU.) (IV).
Las dosificaciones fueron realizadas por ELISPOT
sobre IgG 7 días después de la última inmunización. Esta
dosificación consiste en enumerar las células linfocíticas B
productoras de anticuerpos anti-NP de isotipos IgG
con respecto a las células esplénicas totales. El resultado es,
pues, expresado como una razón r del número de células productoras
de los anticuerpos específicos con respecto al número total de
células observadas.
- 1)
- Protocolo de 1 inmunización
- \ding{51}
- Mejora muy ligera de la respuesta por NP encapsulada (r = 500 x 10^{-7}) con respecto a NP sola (r = 400 x 10^{-7}).
- \ding{51}
- Ningún efecto de amplificación con las vesículas vacías asociadas a NP no encapsulada (r = 400 x 10^{-7}).
- 2)
- Protocolo de 3 inmunizaciones
- \ding{51}
- NP encapsulada muy netamente superior (r = 900 x 10^{-7}) a NP sola (r = 250 x 10^{-7}) y comparable a NP con adyuvante completo de FREUND (r = 900 x 10^{-7}).
- \ding{51}
- NP libre asociada a las vesículas vacías similar a NP sola (r = 300 x 10^{-7}).
Este ejemplo confirma completamente, en otro
modelo, los resultados del ejemplo 3 e indica que los valores de
amplificación de la respuesta obtenida por encapsulación en las
vesículas multilamelares según la invención son comparables a los
obtenidos con los adyuvantes más potentes (el adyuvante de FREUND
es particularmente eficaz, pero, debido a su toxicidad, no está
autorizado en formulaciones con fines vacunales o terapéuticos).
Claims (14)
1. Vector de antígeno, caracterizado por
estar constituido por una dispersión de vesículas multilamelares en
el seno de las cuales dicho antígeno se encuentra al menos
parcialmente encapsulado, estando constituidas dichas vesículas,
desde su centro hasta su periferia, por una sucesión de bicapas
concéntricas que contienen al menos un agente tensoactivo y que
están separadas por un medio líquido.
2. Vector según la reivindicación 1,
caracterizado por tener dichas vesículas un diámetro inferior
a 20 \mum y de al menos 0,1 \mum.
3. Vector según la reivindicación 2,
caracterizado por seleccionar dichos agentes tensoactivos que
constituyen dichas bicapas entre el grupo constituido por:
- -
- fosfolípidos hidrogenados o no hidrogenados;
- -
- ácidos grasos C_{6} a C_{18}, saturados o mono- o poliinsaturados, lineales o ramificados, en forma de ácido o de sal de un metal alcalino o alcalinotérreo o de una amina;
- -
- ésteres, etoxilados o no, de estos mismos ácidos grasos y de
- \bullet
- sacarosa,
- \bullet
- sorbitán,
- \bullet
- manitol,
- \bullet
- glicerol o poliglicerol o
- \bullet
- glicol;
- -
- mono-, di- o triglicéridos o mezclas de glicéridos de estos mismos ácidos grasos;
- -
- alcoholes grasos C_{6} a C_{18}, saturados o mono- o poliinsaturados, lineales o ramificados, etoxilados o no;
- -
- éteres, etoxilados o no, de estos mismos alcoholes grasos y de
- \bullet
- sacarosa,
- \bullet
- sorbitán,
- \bullet
- manitol,
- \bullet
- glicerol o poliglicerol o
- \bullet
- glicol;
- -
- aceites vegetales polietoxilados, hidrogenados o no hidrogenados;
- -
- polímeros secuenciados de polioxietileno y de polioxipropileno;
- -
- hidroxiestearato de polietilenglicol, y
- -
- alcoholes con esqueleto de esterol, tales como el colesterol y el sitosterol.
4. Vector según una de las reivindicaciones 1 a
3, caracterizado por contener las bicapas de dichas vesículas
al menos dos agentes tensoactivos, uno de los cuales presenta un
equilibrio hidrófilo-lipófilo (HLB) comprendido
entre 1 y 6, preferiblemente comprendido entre 1 y 4, y el otro un
equilibrio hidrófilo-lipófilo (HLB) comprendido
entre 3 y 15, preferiblemente comprendido entre 5 y 15.
5. Vector según una de las reivindicaciones 1 a
4, caracterizado por ser el rendimiento de encapsulación
superior al 50%, preferiblemente superior al 80%.
6. Vector según una de las reivindicaciones 1 a
5, caracterizado por ser dicho antígeno un antígeno proteico
o peptídico.
7. Vector según la reivindicación 6,
caracterizado por estar constituido dicho antígeno proteico
por una proteína natural o recombinante.
8. Composición que contiene al menos un antígeno
contra el cual se desea producir anticuerpos específicos o una
respuesta celular específica, caracterizada por encontrarse
dicho(s) antígeno(s) al menos parcialmente
encapsulado(s)
en las vesículas multilamelares de un vector tal como se ha definido según una de las reivindicaciones 1 a 7.
en las vesículas multilamelares de un vector tal como se ha definido según una de las reivindicaciones 1 a 7.
9. Composición según la reivindicación 8,
caracterizada por tratarse de una composición farmacéutica,
en particular de una vacuna.
10. Composición según la reivindicación 8,
caracterizada por tratarse de una composición destinada a la
producción de anticuerpos monoclonales.
11. Procedimiento de preparación de una
composición según una de las reivindicaciones 8 a 10,
caracterizado por consistir en las siguientes etapas:
- -
- preparación de una fase lamelar cristal-líquido que incluye al menos un agente tensoactivo y que incorpora el(los) antígeno(s);
- -
- transformación de la fase cristal-líquido en vesículas multilamelares con estructura en cebolla por corte, y
- -
- dispersión en una solución acuosa para obtener la concentración deseada de antígeno(s).
12. Procedimiento según la reivindicación 11,
caracterizado por ser dicho corte un corte homogéneo.
13. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 11 ó 12, caracterizado por utilizar al menos
2 tensoactivos, uno de los cuales presenta un HLB comprendido entre
1 y 6, preferiblemente entre 1 y 4, y el otro un HLB comprendido
entre 3 y 15, preferiblemente entre 5 y 15.
14. Procedimiento según una de las
reivindicaciones 11 a 13, caracterizado por ser dicho
antígeno un antígeno proteico o peptídico.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9712085A FR2769022B1 (fr) | 1997-09-29 | 1997-09-29 | Vecteurs d'antigenes et compositions therapeutiques contenant des antigenes |
| FR9712085 | 1997-09-29 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2234152T3 true ES2234152T3 (es) | 2005-06-16 |
Family
ID=9511580
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES98944010T Expired - Lifetime ES2234152T3 (es) | 1997-09-29 | 1998-09-17 | Vectores de antigenos en forma de vesiculas multilamelares. |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1024830B1 (es) |
| JP (1) | JP2001518452A (es) |
| AU (1) | AU744308B2 (es) |
| CA (1) | CA2304824A1 (es) |
| DE (1) | DE69827837T2 (es) |
| ES (1) | ES2234152T3 (es) |
| FR (1) | FR2769022B1 (es) |
| WO (1) | WO1999016468A1 (es) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2798288B1 (fr) * | 1999-09-14 | 2001-11-30 | Capsulis | Compositions vaccinales destinees a une administration par voie muqueuse |
| FR2850872A1 (fr) * | 2003-02-12 | 2004-08-13 | Ethypharm Sa | Composition vaccinale destinee a induire une reponse immunitaire contre le virus responsable du sida |
| FR2851422B1 (fr) | 2003-02-24 | 2006-09-08 | Jean Christian Horel | Scarificateur de patons de maniement sur et aise |
| JP2007512304A (ja) * | 2003-11-29 | 2007-05-17 | パッション フォー ライフ ヘルスケア リミテッド | 組成物及び送達システム |
| FR2868951B1 (fr) * | 2004-04-15 | 2006-07-21 | Ethypharm Sa | Compositions contenant ds vesicules lamellaires incorporant un principe actif peu soluble dans l'eau et produits intermediaires utiles pour leur preparation |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2735658B1 (fr) * | 1995-06-21 | 1997-09-12 | Capsulis | Encapsulation de composes a usage alimentaire par des tensioactifs |
| FR2689418B1 (fr) * | 1992-04-03 | 1994-07-01 | Centre Nat Rech Scient | Procede de preparation de micro-capsules ou de liposomes de tailles controlees par application d'un cisaillement constant sur une phase lamellaire. |
| FR2716373B1 (fr) * | 1994-02-23 | 1996-05-03 | Pasteur Institut | Liposomes, et leur utilisation pour l'obtention de vaccins. |
| FR2751222B1 (fr) * | 1996-07-16 | 1998-10-09 | Capsulis | Compositions contenant au moins un acide nucleique et leurs applications dans le domaine biomedical, en particulier en therapie genique |
-
1997
- 1997-09-29 FR FR9712085A patent/FR2769022B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
1998
- 1998-09-17 ES ES98944010T patent/ES2234152T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-17 WO PCT/FR1998/001991 patent/WO1999016468A1/fr active IP Right Grant
- 1998-09-17 EP EP98944010A patent/EP1024830B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1998-09-17 CA CA002304824A patent/CA2304824A1/en not_active Abandoned
- 1998-09-17 JP JP2000513601A patent/JP2001518452A/ja not_active Withdrawn
- 1998-09-17 AU AU91697/98A patent/AU744308B2/en not_active Ceased
- 1998-09-17 DE DE69827837T patent/DE69827837T2/de not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1024830A1 (fr) | 2000-08-09 |
| CA2304824A1 (en) | 1999-04-08 |
| AU744308B2 (en) | 2002-02-21 |
| AU9169798A (en) | 1999-04-23 |
| DE69827837T2 (de) | 2005-12-01 |
| FR2769022A1 (fr) | 1999-04-02 |
| WO1999016468A1 (fr) | 1999-04-08 |
| DE69827837D1 (de) | 2004-12-30 |
| EP1024830B1 (fr) | 2004-11-24 |
| FR2769022B1 (fr) | 2000-11-03 |
| JP2001518452A (ja) | 2001-10-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2258108T3 (es) | Vacunas con respuesta inmune mejorada y procedimientos de preparacion de las mismas. | |
| Frezard | Liposomes: from biophysics to the design of peptide vaccines | |
| CA2086831C (en) | Immunostimulating and immunopotentiating reconstituted influenza virosomes and vaccines containing them | |
| ES2398235T3 (es) | Emulsiones de aceite en agua microfluidizadas y composiciones de vacunas | |
| ES2210268T3 (es) | Procedimiento para potenciar respuestas inmunes y composiciones correspondientes. | |
| EP0356339B1 (en) | Influenza vaccine and novel adjuvants | |
| ES2243497T3 (es) | Composicion de vacuna, procedimiento de preparacion de la misma y procedimiento para vacunacion de vertebrados. | |
| ES2220973T3 (es) | Vehiculos de cocleato para la administracion de moleculas biologicamente relevantes. | |
| ES2315880T3 (es) | Composiciones y procedimientos para estabilizar formulaciones adyuvantes con base lipidica usando glucolipidos. | |
| PT1742659E (pt) | Emulsões de óleo em água microfluidizadas e composições de vacinas | |
| US5643574A (en) | Protein- or peptide-cochleate vaccines and methods of immunizing using the same | |
| Jain et al. | Mannosylated niosomes as adjuvant-carrier system for oral mucosal immunization | |
| ES2227698T3 (es) | Formulacion de lipidos inmunoestimuladores. | |
| AU626271B2 (en) | Vaccine adjuvant | |
| ES2234152T3 (es) | Vectores de antigenos en forma de vesiculas multilamelares. | |
| Gregoriadis | Liposomes as immunological adjuvants for peptide and protein antigens | |
| WO2014092528A1 (es) | Adyuvante de vacunación, preparación y vacunas que lo contienen | |
| ES2295011T3 (es) | Medios en forma de dispersiones complejas, su procedimiento de preparacion y sus usos. | |
| ES2242376T3 (es) | Administracion de particulas inmunogenas mediante particulas de agshb. | |
| FR2798288A1 (fr) | Compositions vaccinales destinees a une administration par voie muqueuse | |
| US20020136762A1 (en) | Method for inducing a systemic immune response to an antigen | |
| KR20070106988A (ko) | 백신용 약학적 조성물 | |
| Kersten et al. | Antigen Carriers: A Success Determining Factor for Subunit Vaccines? | |
| FR2850872A1 (fr) | Composition vaccinale destinee a induire une reponse immunitaire contre le virus responsable du sida | |
| WO2012152707A1 (en) | Microemulsions |