ES2234132T3 - Epitopos de toxina de tipo shigella y su utilizacion como vacuna y en diagnostico. - Google Patents
Epitopos de toxina de tipo shigella y su utilizacion como vacuna y en diagnostico.Info
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Abstract
La invención se refiere a epitopes inmunógenos de toxinas de tipo Shigella (SLT), más en particular a la toxina de tipo Shigella de E. Coli O157.H7, a su utilización como inmunógenos y al tratamiento o el diagnóstico, a agentes (po ejemplo anticuerpos y fragmentos aniligantes) que los neutralizan, a su utilización en el tratamiento y el diagnóstico así como a procedimientos de preparación.
Description
Epítopos de toxina de tipo Shigella y su
utilización como vacuna y en diagnóstico.
La presente invención se refiere a péptidos
portadores de epítopos inmunogénicos de toxinas de tipo Shigella
(SLTs), particularmente la toxina tipo Shigella de E. coli
O157:H7, que pueden utilizarse como inmunógenos y en el tratamiento
o diagnóstico, a agentes (por ejemplo anticuerpos y fragmentos que
se unen a antígenos) que pueden utilizarse para neutralizarlos
específicamente, y en el tratamiento y diagnóstico.
Las toxinas de tipo Shigella (también conocidas
como toxinas tipo Shiga y toxinas Vero) son bien conocidas (Schmitt,
C.K. et al, 1991, Infection and Immunity, 59 (13):
1065-1073), y son producidas por un amplio conjunto
de patógenos que incluyen E. coli O157:H7, infección que
causa diarrea sanguinolenta y fallo renal agudo, con muchos
pacientes, particularmente los jóvenes y los ancianos, que no
sobreviven a la infección. Los brotes son esporádicos pero de
entidad significativa y plantean una carga sustancial respecto a los
recursos sanitarios (Berkelman, R.L. et al., 1994, Science,
264:368-370; Slutsker, L. et al.,
1997, Ann. Intern. Med., 126:505-513). Sólo
en los Estados Unidos se considera que tienen lugar anualmente
20.000 casos de infección por E. coli O157:H7. La infección
se produce frecuentemente como resultado de consumir alimentos
contaminados, particularmente productos de ternera picada tales como
hamburguesas, y mediante contactos persona-persona
en centros de atención infantil. Otros brotes de los que se ha
informado han tenido lugar en Escocia y Japón (1996, BMJ,
313:1424), en el Noroeste del Pacífico
(Antibiotic-Resistant Bacteria, Office of Technology
Assessment, Congress of the United States, pág.
150-151) y Canada (Slutsker, L. et al., 1997,
Ann. Intem. Med., 126:506-513), aunque de
ninguna manera los brotes están limitados a estas regiones.
Muchos de los patógenos infectantes han adquirido
múltiples resistencias a los medicamentos, y se ha encontrado que el
tratamiento antibiótico puede provocar que las bacterias aumenten la
producción de las toxinas de tipo Shigella
(Antibiotic-Resistant Bacteria, supra).
Durante muchos años se ha experimentado la necesidad de nuevas
terapéuticas para los patógenos que expresan toxinas de tipo
Shigella (véase por ejemplo Antibiotic-Resistant
Bacteria, supra). Se ha sugerido
(Antibiotic-Resistant Bacteria, supra) que
los anticuerpos específicos contra las toxinas de tipo Shigella de
E. coli O157:H7 pueden tener potencial terapéutico, pero
hasta la fecha éstos no han sido utilizados terapéuticamente.
Varias toxinas de tipo Shigella se han clonado y
secuenciado (Meyer,T. et al., 1992, Zbl. Bakt.,
276:176-188, Schmitt, C.K. et al.,
1991, Infection and Immunity, 59 (3):
1065-1073, Ramotar, K. et al., 1995, J. Clin.
Microbiol, 33 (3): 519-524). Sin embargo, las
regiones inmunogénicas, particularmente los epítopos específicos de
las toxinas no se han identificado.
Los presentes inventores han identificado ahora
con éxito diversos epítopos de toxinas tipo Shigella de E.
coli, particularmente las de E. coli O157:H7. Los
epítopos pueden utilizarse ampliamente, pueden emplearse
terapéuticamente como inmunógenos, por ejemplo como vacunas, o
detectar de forma diagnóstica agentes (por ejemplo, anticuerpos) que
se unen específicamente a ellos. Asimismo, pueden utilizarse para
producir agentes neutralizantes, por ejemplo anticuerpos, que
neutralizan la toxina. Los agentes que se unen a los epítopos pueden
utilizarse tanto terapéutica como diagnósticamente.
Según la presente invención, se proporciona un
péptido portador de un epítopo de una toxina de tipo Shigella,
poseyendo dicho péptido una secuencia seleccionada de entre el grupo
formado por SEC ID nºs 1-7. El epítopo puede tener
una secuencia seleccionada a partir de cualquiera de las SEC ID nºs:
1 y 3.
Los péptidos portadores de epítopos de SEC ID Nºs
1-7 no se han identificado previamente, ni se han
sugerido. Aunque las secuencias de varias SLTs son conocidas, los
epítopos específicos no lo son.
La toxina de tipo Shigella puede ser la
originaria de una E. coli. Puede ser la de una E. coli
O157 seleccionada de entre el grupo O157:H7, O157:H y O26:H11.
Alternativamente, la toxina de tipo Shigella puede ser seleccionada
de entre el grupo de la de Shigella sonnei, Shigella boydii,
Shigela flexneri, y Shigella dysenteriae.
El péptido portador del epítopo puede utilizarse
en un procedimiento para el tratamiento o el diagnóstico del
organismo humano o animal.
El péptido portador del epítopo puede por ejemplo
utilizarse como un inmunógeno, por ejemplo, una vacuna.
También según la presente invención, se
proporciona un anticuerpo o un fragmento del mismo que se une al
antígeno que es específico contra un péptido portador de un epítopo
según la presente invención.
Los anticuerpos son bien conocidos (Harlow, E. y
Lane, D., "Antibodies- A Laboratoy Manual", Cold Spring Harbor
Laboratory, Cold Spring Harbor Press, New York, 1988). El anticuerpo
puede consistir en un anticuerpo entero o en un fragmento del
mismoque se une al antígeno y puede en general pertenecer a
cualquier tipo de inmunoglobulina. De este modo, por ejemplo, puede
ser un anticuerpo IgM o IgG. El anticuerpo o fragmento puede ser de
un animal, por ejemplo, de origen mamífero y puede ser, por ejemplo,
de origen murino, de rata, de oveja o humano. Puede consistir en un
anticuerpo natural o un fragmento suyo, o, si se desea, un fragmento
de anticuerpo recombinante, es decir, un anticuerpo o fragmento de
anticuerpo que se ha producido utilizando técnicas del ADN
recombinante.
Anticuerpos recombinantes particulares o
fragmentos de anticuerpo incluyen, (1), aquéllos en que parte de los
cuales, por lo menos, se derive de un anticuerpo diferente, por
ejemplo aquéllos en los cuales las regiones hipervariables o
complementarias determinantes de un anticuerpo se hayan injertado en
las regiones estructurales variables de un segundo anticuerpo
distinto (tal como se describe, por ejemplo, en la patente EP
239400) y que tienen un sitio que se une al antígeno; (2)
anticuerpos recombinantes o fragmentos en los que las secuencias
no-Fv han sido sustituidas por secuencias
no-Fv de otros anticuerpos diferentes (tal como se
describe en, por ejemplo, las patentes EP 171469, 173494 y 194276);
o (3) anticuerpos recombinantes o fragmentos que posean
sustancialmente la estructura de una inmunoglobulina natural, pero
en los cuales la región bisagra posee un número diferente de
residuos de cisteína de los encontrados en la inmunoglobulina
natural, pero en los que uno o más residuos de cisteína en una
cavidad superficial del anticuerpo o fragmento recombinante, se
encuentra en lugar de otro residuo aminoácido que está presente en
la inmunoglobulina natural (tal como se describe en, por ejemplo,
las patentes PCT/GB88/00730 y PCT/GB88/00729).
El anticuerpo o fragmento de anticuerpo puede ser
de origen policlonal o monoclonal. Puede ser específico para por lo
menos un epítopo.
Los fragmentos del anticuerpo que se unen al
antígeno incluyen, por ejemplo, fragmentos derivados mediante
fragmentación proteolítica de un anticuerpo completo, tal como los
fragmentos F (ab')2, Fab' o Fab, o los fragmentos obtenidos mediante
técnicas del ADN recombinante, por ejemplo los fragmentos Fv (tal
como se describen, por ejemplo, en la patente PCT/GB88/0747).
Los anticuerpos según la invención pueden
prepararse utilizando técnicas inmunológicas bien conocidas. De este
modo, por ejemplo, a cualquier huésped apropiado se le puede
inyectar la proteína y recuperar el suero para obtener el anticuerpo
policlonal deseado después de una purificación y/o concentración
apropiadas (por ejemplo, mediante cromatografía de afinidad
utilizando la proteína inmovilizada como medio de afinidad).
Alternativamente, los esplenocitos o linfocitos pueden recuperarse a
partir del huésped al que se le inyectó la proteína e inmortalizarse
utilizando, por ejemplo, el procedimiento de Kohler et al.
(1076, Eur. J. Immunol., 6:511), segregándose las células
resultantes para obtener una progenie genética única que produce
anticuerpos monoclonales. Los fragmentos de anticuerpos pueden ser
producidos utilizando técnicas convencionales, por ejemplo, mediante
digestión enzimática con pepsina o papaína. Si se desean producir
anticuerpos recombinantes según la invención, éstos pueden obtenerse
utilizando, por ejemplo, los procedimientos descritos en las
patentes EP 171469, EP 173494, EP 194276 y EP 239400.
Los anticuerpos según la invención pueden ser
marcados con un marcador detectable utilizando procedimientos
convencionales, ampliándose la invención a dichos anticuerpos
marcados.
Los anticuerpos y los fragmentos de los mismos
que se unen al antígeno ("agentes de unión") según la presente
invención, pueden utilizarse en un procedimiento para el tratamiento
o diagnóstico de un organismo humano o animal.
También se proporciona según la presente
invención la utilización de un péptido portador de un epítopo o un
anticuerpo o un fragmento del mismo que se une al antígeno, según la
presente invención, para la preparación de un medicamento destinado
a tratar una situación que se derive de una toxina de tipo Shigella.
Asimismo, según la presente invención, se proporciona un
procedimiento para preparar un medicamento destinado al tratamiento
de una patología que se derive de una toxina de tipo Shigella, que
comprende la utilización de un péptido portador de un epítopo o un
anticuerpo o un fragmento del mismo que se une al antígeno según la
presente invención.
De este modo, la presente invención proporciona
péptidos portadores de unos epítopos de toxinas de tipo Shigella,
los cuales pueden utilizarse terapéutica o diagnósticamente, junto
con agentes de unión derivados de ellos, pudiendo utilizarse ellos
mismos tanto diagnóstica como terapéuticamente.
También se proporciona según la presente
invención un procedimiento de ensayo diagnóstico para una toxina de
tipo Shigella que muestra un epítopo portado por un péptido, según
la presente invención, que comprende las etapas siguientes:
i) hacer reaccionar el anticuerpo o un fragmento
del mismo que se une al antígeno, según la presente invención, con
una muestra
ii) detectar una reacción de unión
anticuerpo-antígeno; y
iii) correlacionar la detección de la reacción de
unión con la presencia de la toxina de tipo Shigella.
Si el agente de unión es un anticuerpo o un
fragmento del mismo que se une al antígeno, los epítopos pueden
considerarse como antígenos.
También se proporciona un procedimiento de ensayo
diagnóstico para un anticuerpo específico contra una toxina de tipo
Shigella, que comprende las etapas siguientes:
i) hacer reaccionar un péptido según la presente
invención con una muestra;
ii) detectar una reacción de unión
anticuerpo-antígeno; y
iii) correlacionar la detección de la reacción de
unión antígeno-anticuerpo con la presencia de un
anticuerpo específico contra una toxina de tipo Shigella.
La muestra puede provenir de un paciente, por
ejemplo de una muestra de suero o de un dializado peritoneal, aunque
cualquier otra muestra que pueda contener, o que pudiera esperarse
que contuviera toxinas de tipo Shigella, puede, por supuesto,
utilizarse.
Según otro aspecto de la presente invención,
también se proporciona un kit de ensayos de diagnóstico para llevar
a cabo un procedimiento de ensayo diagnóstico según la presente
invención. Los equipos de ensayo diagnóstico son bien conocidos y
pueden incluir, por ejemplo, ensayos que se realizan mediante un
pinchazo, según la patente WO 88/08534. El kit de ensayo puede
incluir instrucciones para su utilización en un procedimiento de
ensayo diagnóstico según la presente invención.
Los medicamentos según la presente invención
resultarán evidentes para los expertos en la materia. Los
medicamentos pueden prepararse utilizando vehículos
farmacéuticamente aceptables, diluyentes o excipientes (Remington's
Pharmaceutical Sciences and US Pharmacopeia (1984) Mack Publishing
Company, Easton, PA, USA). Los medicamentos pueden obtenerse
utilizando una cantidad farmacéuticamente efectiva del péptido
portador del epítopo o el anticuerpo o el fragmento del mismo que se
une al antígeno específico para un péptido, según la presente
invención. Las dosis apropiadas se harán enseguida evidentes para el
experto en la materia, pudiéndose determinar fácilmente, por
ejemplo, mediante experimentos de
dosis-respuesta.
La invención se pondrá más claramente de
manifiesto a partir de la descripción siguiente, que muestra,
únicamente a título de ejemplo, unos epítopos según la presente
invención, y péptidos portadores de los mismos.
Se obtuvieron sueros de varios pacientes
infectados con E. coli O157:H7 (1996, BMJ, 313:1424)
en diversos estadios de infección. Se elaboraron mapas de epítopos
(a continuación) y se realizaron comparaciones para identificar los
epítopos que se encontraban en el interior de la secuencia
aminoácida derivada de la subunidad A de la SLT (Verotoxin, Meyer,
T. et al., 1992, Zbl. Bakt., 276:
176-188) expresada por la bacteria.
Una serie de nonapéptidos que se solapaban y que
cubrían la secuencia aminoácida derivada se sintetizó sobre pernos
de uretano con reactivos procedentes de un equipo de rastreo (o
escaneado) epitópico (Cambridge Research biochemicals, Cambridge,
UK) tal como se ha descrito previamente por Geysen et al.,
(1987, Journal of Immunological Methods, 102:
259-274). El Péptido 1 (pocillo 1) estaba formado
por los residuos 1 a 9 (SEC ID nº 8), el péptido 2 (pocillo 2)
estaba formado por los residuos 2 a 10 (SEC ID nº 9), etc. Esto se
llevó a cabo para la verotoxina derivada de E. coli O157. La
reactividad de cada clon con los sueros de los pacientes (con
diluciones de 1 en 1000), se determinó para IgG mediante ELISA. Los
datos se expresaron como A405 después de 30 minutos de
incuba-
ción.
ción.
A partir de 3 pacientes en estadios tempranos
(día 3) y tardíos (6 semanas después) de la infección, se dispuso
de sueros que se emparejaron. Combinando los resultados de los tres
pacientes, se calculó, para cada pocillo, un promedio para ambos
tipos de sueros, los que presentaban estadios tempranos de la
infección y los que los presentaban tardíos. Los resultados de los
sueros tardíos se restaron de los resultados de los sueros
tempranos. Las áreas en las que, por lo menos, tres pocillos
consecutivos resultaban positivos (por lo menos 0,19) se consideró
que definían un epítopo. En segundo lugar, se examinó un suero
único de un paciente (extraído en el tercer día de la infección) que
murió más tarde debido a ésta. Los valores obtenidos se sustrajeron
de los valores promedio previamente descritos para los sueros con
estadios tempranos de la infección de los pacientes que
sobrevivieron. Las áreas en las que por lo menos tres pocillos
consecutivos resultaban positivos (por lo menos 0,19), se consideró
que definían un epíto-
po.
po.
Esto condujo a la identificación de siete
epítopos (SEC ID nºs: 1-7 respectivamente). Los
siete epítopos que se describen cumplieron por lo menos uno de estos
criterios. Los epítopos 1 y 3 cumplieron ambos criterios
(Tabla
1).
1).
Se llevó a cabo una elaboración complementaria de
mapas epitópicos tal como se explica a continuación, utilizando las
mismas series de nonapéptidos que, como anteriormente, se
solapaban.
De los pacientes en los que se confirmó que
padecían el síndrome urémico hemolítico (HUS), se obtuvieron seis
sueros. De los pacientes en los que se había aislado E. coli
O157 a partir de una muestra de las heces y que no habían progresado
a HUS, se obtuvieron tres sueros, y un suero se obtuvo como control
negativo de un paciente leucémico. En todos los sueros se midió la
IgG.
Añadiendo los valores promedio de la absorbancia
de los seis sueros de los pacientes con HUS, a los de los tres
sueros de los pacientes con una muestra fecal positiva, y después de
restar el control negativo, los epítopos se definieron como una
serie consecutiva de 3 o más pocillos que mostraba una absorbancia
superior a un umbral de 0,5. Mediante este criterio, se
identificaron un total de 7 epítopos. La secuencia epitópica y el
número de péptidos en los que se presentan, se muestran en la Tabla
4. En la subunidad B no se mostraron epítopos.
Se llevaron a cabo otros experimentos, de la
siguiente forma:
Se sintetizaron cinco áreas como péptidos cortos
mediante un sintetizador peptídico múltiple BT 7400 (Biotech
Instruments, Luton, UK). Estos se utilizaron en el ELISA indirecto.
El número de péptidos y las secuencias aminoácidas eran como se
define a continuación: los péptidos
1-5-SEC ID nºs :
10-14 respectivamente. El péptido 1 era portador del
epítopo de la SEC ID nº: 2. El péptido 2 era portador del epítopo de
la SEC ID nº 3. El péptido 3 era portador del epítopo de la SEC ID
nº:4. Los péptidos 4 y 5 eran portadores del epítopo de la SEC ID nº
5.
25 sueros en total con distintas historias
clínicas, 3 sueros procedentes de pacientes sin evidencia de
infección por E. coli O157, 20 sueros de pacientes que habían
sido hospitalizados con un diagnóstico de síndrome hemolítico
urémico y un cultivo positivo de heces fecales de E. coli
O157, y un segundo suero recuperado cuatro semanas más tarde
procedente de 2 pacientes afectos de una patología relacionada con
E. coli O157. Los sueros emparejados se numeraron 1 y 2, y 3
y 4, respectivamente. Los sueros de control fueron los números
23-25 (Tabla 2).
Mediante una adsorción única de péptidos a una
placa de microtitulación, se llevó a cabo el siguiente procedimiento
para cada péptido. El péptido se disolvió en 2 ml de 0,01 M solución
salina tamponada de fosfato (PBS), pH 7,2, y se diluyó hasta una
concentración de 10 \mug/ml (1/100) en el mismo tampón.
(1) Alícuotas de 150 \mul del péptido (10
\mug/ml en 0,01 M PBS) se pipetearon en los pocillos de una placa
de microensayo Falcon 3912 y se incubaron por la noche a 4ºC.
(2) El péptido que no estaba unido se extrajo
lavando cuatro veces (4 x 10 minutos) con Tween 20 al 0,05% en 0,01
M PBS (pH 7,2).
(3) Las placas se bloquearon con leche desnatada
al 2%-FCS al 10% en 0,01 M PBS durante 1 hora a 37ºC.
(4) Las placas se lavaron cuatro veces (4 x 10
minutos) con Tween 20 al 0,05% en 0,01 M PBS, y el suero que se
investigaba (dilución 1/100 en la solución de bloqueo) se añadió a
los pocillos de la placa de microensayo (se utilizaron tres pocillos
para cada suero) y se incubaron durante 2 horas a 37ºC.
(5) Las placas se lavaron cuatro veces (4 x 10
minutos) con Tween 20 al 0,05% en 0,01 M PBS, y el segundo
anticuerpo, conjugado de anti-IgM (o IgG)
humana-peroxidasa (dilución 1/1000) en solución
bloqueante) se añadió y la incubación siguió durante 1 hora a
37ºC.
(6) Las placas se lavaron cuatro veces (4 x 10
minutos) con Tween 20 al 0,05% en 0,01 M PBS, seguido por otro
lavado con 0,01 M PBS. La placa se incubó entonces durante 45
minutos a temperatura ambiente con agitación en 0,5 mg/ml de 2,2
Azino-bis [ácido
3-etilbenz-tiazolina-6-sulfónico]
diamonio recién preparado (comprimidos ABTS) en tampón citrato de pH
4,0 con peróxido de hidrógeno al 0,01% (peso/vol).
(7) En cada placa se utilizaron pocillos de
control. Sólo se utilizaron los tres pocillos que sólo contenían la
solución ABTS y los tres pocillos que contenían la solución ABTS más
el conjugado anti-IgG (o IgM) humana -peroxidasa de
rábano.
(8) Las mediciones de la densidad óptica (OD) se
llevaron a cabo con un lector de placa para ELISA
(Titertek-Multiscan) a una longitud de onda de 405
nm.
(9) Se determinaron las lecturas promedio para
cada uno de los tres pocillos por suero de paciente.
Estos se sumarizan en la Tabla 2. Con una OD
umbral de 0,2 para IgM y de 0,3 para IgG, el péptido 4 fue el más
inmunoreactivo, aunque un suero de control fue positivo para IgM.
Cuando la OD umbral aumentó hasta 0,25 (IgM) y 0,35 (IgG), el
péptido 5 fue el más inmunoreactivo (Tabla 3).
Con los puntos de umbral más sensible y
definiendo un suero positivo si la IgM y/o la IgG era positiva, el
péptido 1 fue entonces positivo en 4 casos, el péptido 2 en 6 casos,
el péptido 3 en 12 casos, el péptido 4 en 16 casos y el péptido 5 en
9 casos. Los sueros de los casos 6,7 y 15 fueron negativos con la
totalidad de los 5 péptidos. Los sueros emparejados del Caso 1
mostraron un aumento en la IgM respecto a los péptidos 1,3,4 y 5,
mientras los niveles de IgG permanecieron constantes. Los sueros
emparejados del Caso 2 mostraron un aumento en la IgM contra los
péptidos 1,2,3 y 4 y de la IgG contra los péptidos 2 y 3.
Se produjeron anticuerpos contra péptidos
derivados de la toxina de E. coli O157. Esto confirmó los
resultados de la elaboración del mapa epitópico y que estas áreas en
el interior de la molécula constituyen dianas para la terapia con el
anticuerpo. El péptido 4 y el péptido 5 contenían el mismo epítopo
(SEC ID nº:5) pero en el péptido 4 éste se unió a la secuencia
correspondiente de E. coli O157, mientras en el péptido 5
éste fue el equivalente de la holotoxina de Shigella
dysenteriae (Fraser et al., Nature Structural Biology,
1 (1): 59-64). La reducción en la
inmunogenicidad con la secuencia derivada del S. dysenteriae
subraya la especificidad de la reacción contra el epítopo derivado
de E. coli O157.
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(Tabla pasa a página
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<110> BURNIE, James P
MATTHEWS, Ruth C
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<120> Epítopos de la toxina tipo
Shigella y su utilización como vacuna y en el diagnóstico
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<130> 264666
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<400> 10
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\sa{Asp Val Tyr Gln Ala Arg Phe Asp His Leu Arg
Leu Ile Ile Glu}
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<400> 11
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\sa{Thr Thr Leu Gln Arg Val Ala Ala Leu Glu Arg
Ser Ser Gly His Gln}
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<400> 12
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\sa{Thr Arg Asp Ala Ser Arg Ala Val Leu Arg Phe
Val Thr Val Thr}
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<211> 15
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<212> PRT
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<213> Escherichia coli
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<400> 13
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\sa{Leu Arg Phe Arg Gly Ile Gln Arg Glu Phe Arg
Gln Ala Leu Ser}
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<211> 15
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<212> PRT
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<213> Secuencia artificial
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<220>
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<223> Descripción del epítopo de la
secuencia artificial unido a la secuencia de la holotoxina de
Shigella dysenteriae
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<400> 14
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ala Glu Ala Leu Arg Phe Arg Gln Ile Gln Arg
Glu Phe Arg Gln}
Claims (15)
1. Péptido portador de un epítopo de una toxina
de tipo Shigella, presentando dicho péptido una secuencia
seleccionada de entre el grupo formado por SEC ID
nºs:1-7.
2. Péptido según la reivindicación 1, proviniendo
la toxina de tipo Shigella de una E. coli.
3. Péptido según la reivindicación 2, proviniendo
la toxina de tipo Shigella de una E. coli O157 seleccionada
de entre el grupo formado por O157:H7, O157:H- y 026:H11.
4. Péptido según la reivindicación 1, siendo la
toxina de tipo Shigella seleccionada de entre el grupo formado por:
Shigella sonnei, Shigella boydii, Shigela flexneri, y
Shigella dysenteriae.
5. Péptido según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, para su utilización en un procedimiento
de tratamiento o diagnóstico del cuerpo humano o animal.
6. Péptido según cualquiera de las
reivindicaciones anteriores, para su utilización como
inmunógeno.
7. Péptido según la reivindicación 6, para su
utilización como una vacuna.
8. Anticuerpo o un fragmento del mismo que se une
al antígeno específico contra un péptido portador de un epítopo,
según cualquiera de las reivindicaciones anteriores.
9. Anticuerpo o un fragmento del mismo que se une
al antígeno según la reivindicación 8, para su utilización en un
procedimiento de tratamiento o de diagnóstico del cuerpo humano o
animal.
10. Utilización de un péptido portador de un
epítopo o un anticuerpo o un fragmento del mismo que se une al
antígeno según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, para
la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento de una
patología que resulta de una toxina de tipo Shigella.
11. Procedimiento para la fabricación de un
medicamento que trate una situación que resulta de una toxina de
tipo Shigella, que comprende la utilización de un péptido portador
de un epítopo o un anticuerpo o un fragmento del mismo que se une al
antígeno, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9.
12. Procedimiento de ensayo de diagnóstico para
una toxina de tipo Shigella que muestra un epítopo portado por un
péptido, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, que
comprende las etapas siguientes:
i) hacer reaccionar el anticuerpo o un fragmento
del mismo que se une al antígeno, según cualquiera de las
reivindicaciones 8 y 9, con una muestra;
ii) detectar una reacción de unión
anticuerpo-antígeno; y
iii) correlacionar la detección de la reacción de
unión con la presencia de la toxina de tipo Shigella.
13. Procedimiento de ensayo de diagnóstico para
un anticuerpo específico contra una toxina de tipo Shigella, que
comprende las etapas siguientes:
i) hacer reaccionar un péptido según cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 5 con una muestra;
ii) detectar una reacción de unión
anticuerpo-antígeno; y
iii) correlacionar la detección de la reacción de
unión antígeno-anticuerpo con la presencia de un
anticuerpo específico contra una toxina de tipo Shigella.
14. Procedimiento de ensayo de diagnóstico según
cualquiera de las reivindicaciones 12 ó 13, siendo la muestra la de
un paciente.
15. Kit de ensayo de diagnóstico para realizar un
procedimiento de ensayo de diagnóstico según cualquiera de las
reivindicaciones 12 a 14, que comprende un péptido según cualquiera
de las reivindicaciones 1 a 7, o un anticuerpo o un fragmento del
mismo que se une al antígeno según cualquiera de las
reivindicaciones 8 y 9.
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