ES2222099B1 - Procedimiento de obtencion de celulas mononucleares. - Google Patents
Procedimiento de obtencion de celulas mononucleares.Info
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Abstract
Procedimiento de obtención de células mononucleares, partiendo de una extracción, de sangre periférica, mediante el sistema vacutainer comprendiendo el procedimiento diferentes fases, realizándose dos extracciones del vacutainer, a inyectar en respectivos viales (2) y (3) con un separador celular; una centrifugación de dichos viales (2) y (3); una aspiración de la capa de células mononucleares (5) para inyectarlas en viales (9) y (10) con un medio de cultivo; una centrifugación de ambos viales (9) y (10); una aspiración de parte (14) de su contenido, mientras que los últimos ml., conteniendo las células mononucleares (19), se agitan y se inyectan en respectivos viales (15) y (16), con un medio de cultivo; una nueva centrifugación; una nueva aspiración de parte (18) de su contenido, mientras que los últimos ml., conteniendo las células mononucleares (19), se agitan y se inyectan en un vial contenedor del elemento a implantar.
Description
Procedimiento de obtención de células
mononucleares.
La siguiente invención, según se expresa en el
enunciado de la presente memoria descriptiva, se refiere a
procedimiento de obtención de células mononucleares, siendo llevado
a cabo a partir de una extracción de sangre periférica,
preferentemente, de la flexura del codo del propio paciente, con
objeto de obtener en pequeñas clínicas la separación y crecimiento
posterior de las células mononucleares de una forma rápida y
operativa, sin precisar laboratorios especializados y pudiendo
realizarse en el momento en el que se va a realizar la operación de
implantación de carácter ambulatorio sin necesidad de ingreso en
centros hospitalarios.
Así, las células mononucleares serán utilizadas
como baño de inmersión de un elemento de implante, tal como un
implante dental, de forma que el procedimiento de obtención puede
ser llevado a cabo sin precisar un laboratorio estéril de cultivo,
por lo que es de especial aplicación, para ser utilizado con
carácter ambulatorio y en salas de consulta.
De esta forma, el procedimiento de obtención de
células mononucleares que se presenta tiene por objeto la obtención
de células mononucleares a partir de una extracción de sangre
periférica, preferentemente de la flexura del codo, pudiendo ser
llevado a cabo en consultas médicas, tales como las odontológicas,
permitiendo, durante el propio tiempo de consulta para efectuar el
implante dental, haber mantenido el cuerpo de implante inmerso en
un baño de células mononucleares del propio paciente, presentando
la ventaja de minimizar el riesgo de rechazo, así como permitiendo
que el paciente se vaya con el implante colocado.
En la presente memoria se describe un
procedimiento de obtención de células mononucleares, cuyo
procedimiento es de especial aplicación para su puesta en practica
en pequeñas clínicas al poder ser llevado a cabo sin necesidad de
disponer de un laboratorio de cultivo y en un ambiente no estéril y
eliminando la campana de flujo laminar.
Como es conocido en hematología a partir de una
extracción sanguínea, preferentemente periférica, en grandes
centros hospitalarios o laboratorios especializados, se pueden
obtener células mononucleares, mediante un adecuado tratamiento y
requiriendo tiempo y aceleradores de crecimiento, para su
utilización en operaciones quirúrgicas a realizar al propio
paciente con posterioridad, siendo de especial utilidad en
implantología, al conseguir un aumento de estas células.
Por otra parte, en todas las especialidades
médicas, y en general en todas las industrias, se ha producido un
gran avance técnico, de manera que en especialidades médicas, tales
como en odontología, se trata de evitar, en lo posible, las
habituales, en tiempos, extracciones de las piezas dentales,
tratando de mantener, siempre que sea posible, las piezas
naturales.
Lógicamente, a pesar de ello, en numerosas
ocasiones se hace preciso la extracción de piezas dentales, siendo
cada día más habitual sustituirlas por implantes fijos, en lugar de
por puentes provisionales o permanentes, consistentes en elementos
de una o más piezas dentales artificiales fijados a un soporte que
se sostiene en las piezas dentales naturales contiguas, de forma
que, ante la carencia de un número importante de piezas dentales su
sustitución se lleva a cabo por medio de una dentadura postiza
parcial, e incluso total, ante la carencia total de piezas dentales
naturales.
De esta forma, la implantología dental ha
experimentado un importante avance, y, entre otros objetivos, se
trata de evitar los rechaces del cuerpo de implante, de manera que
si el cuerpo de implante es sometido a un baño de células
mononucleares del propio paciente las células se adhieren al
implante minimizando el riesgo de rechazos del mismo, al poder
conseguir un aumento de dichas células previamente a la
implantación del implante, además de facilitar la
osteointegración.
Así, uno de los principales inconvenientes que se
presentan es poder llevar a cabo dicha técnica con carácter
ambulatorio o sin necesidad de ingreso en un centro
hospitalario.
Por otra parte, podemos citar la Patente de
Invención española P200000984 por: implante dental y método
operativo de implantación, en la cual se presenta un método de
obtención de células mononucleares con objeto de actuar como baño
de inmersión de un implante dental, de forma que el mismo se
caracteriza porque una vez extraída sangre al paciente, mantenida
en el correspondiente recipiente de extracción provisto de un
anticoagulante, una cantidad predeterminada de la misma se vierte
en un recipiente al que se añade idéntica cantidad de suero,
introduciendo la mezcla obtenida en un recipiente que contiene un
separador celular de densidad 1077, centrifugándose para la
separación en diferentes capas de los componentes sanguíneos,
extrayéndose la capa de células mononucleares obtenida para
realizarle dos lavados consecutivos en medio de cultivo de McCOYS,
y su posterior introducción en el recipiente contenedor del
implante a implantar, incubándose durante un tiempo predeterminado
a una temperatura constante de 37ºC, adhiriéndose las células
mononucleares al cuerpo de implante, quedando ya dispuesto para su
inmediata implantación.
En la presente memoria se describe un
procedimiento de obtención de células mononucleares, partiendo de
una extracción de sangre periférica, preferentemente, de la flexura
del codo, siendo llevado a cabo mediante el sistema vacutainer®
para rellenar el vacutainer® conteniendo suero fisiológico con la
sangre extraída y una, posterior, extracción del aire de su
interior, de forma que el procedimiento comprende las siguientes
fases:
- \blacklozenge
- dos sucesivas extracciones de 3 ml. del contenido del vacutainer® siendo inyectadas en respectivos viales conteniendo un separador celular;
- \blacklozenge
- una centrifugación de los dos viales, uno frente al otro, a 2.000 r.p.m. durante 20 minutos;
- \blacklozenge
- una aspiración de la capa de células mononucleares para ser inyectadas en correspondientes viales con un medio de cultivo;
- \blacklozenge
- una centrifugación de ambos viales a 1.000 r.p.m. durante 5 minutos;
- \blacklozenge
- una aspiración de parte del contenido de ambos viales y su desecho o inyección en correspondientes viales, mientras que los últimos 1 ó 1,5 ml., conteniendo las células mononucleares, se agitan y se inyectan en otro vial con un medio de cultivo;
- \blacklozenge
- una nueva centrifugación a 1.000 r.p.m. durante 5 minutos;
- \blacklozenge
- una aspiración de parte del contenido de ambos viales y su desecho o inyección en correspondientes, mientras que los últimos 1 ó 1,5 ml., conteniendo las células mononucleares, se agitan y se inyectan en un vial contenedor del elemento a implantar o directamente se aplica al paciente.
Además, la parte aspirada del contenido de los
viales no desechada e inyectada en los correspondientes viales
conteniendo CICa permite la obtención de gel.
De esta forma, la gran ventaja que presenta el
procedimiento propuesto es que el mismo se puede llevar a cabo en
un medio no estéril, pudiendo ser aplicado con carácter ambulatorio
y en consultas, tales como las odontológicas.
Así, el procedimiento que se presenta, aplicable,
genéricamente, en implantología, es de especial utilidad para su
aplicación en implantes dentales, dado que para su puesta en
práctica se necesita una mínima inversión económica, de manera que
en una única operación se pueden llevar a cabo los implantes
deseados.
Para complementar la descripción que seguidamente
se va a realizar, y con objeto de ayudar a una mejor comprensión de
las características de la invención, se acompaña a la presente
memoria descriptiva, de un juego de planos, en cuyas figuras de
forma ilustrativa y no limitativa, se representan los detalles más
característicos de la invención.
Figura 1. Muestra una vista de las sucesivas
fases relativas al procedimiento de obtención de células
mononucleares, partiendo de una extracción sanguínea periférica.
A la vista de la comentada figura y de acuerdo
con la numeración adoptada podemos observar como una vez que se ha
partido de una extracción de sangre periférica, preferentemente, de
la flexura del codo, mediante el sistema vacutainer® para rellenar
el vacutainer® con suero fisiológico con la sangre extraída y una,
posterior, extracción del aire de su interior, en una primera fase
se procederá a realizar dos extracciones de 3 ml. cada una de ellas
del vacutainer® 1 siendo inyectadas en respectivos viales 2 y 3 que
contienen un separador celular.
A continuación, en una segunda fase, los viales 2
y 3 son centrifugados por medio de la centrifugadora 4, uno frente
al otro, a 2.000 r.p.m. durante 20 minutos, de forma que las
células mononucleares 5 conforman un anillo de color blanco opaco,
quedando por encima de ellas la placa leucoplaquetar 6 e
inferiormente queda el separador 7 y en el fondo la capa
eritrocitaria 8.
En una tercera fase las células mononucleares 5
son aspiradas e inyectadas en correspondientes viales 9 y 10
contenedores de un medio de cultivo, para, en una cuarta fase, ser
centrifugados, por medio de la centrifugadora 11, a 1.000 r.p.m.
durante 5 minutos, de forma que las células mononucleares 19 quedan
agrupadas en proximidad al fondo del vial.
En una quinta fase se aspira parte 14 del
contenido de los viales 9 y 10 y se desecha o inyecta en
correspondientes viales 13 y 12 contenedores de CICa, de forma que
con los últimos 1 ó 1,5 ml., conteniendo las células mononucleares
19 se agita y se inyecta en otros viales 15 y 16 que contienen un
medio de cultivo, de manera que, en una sexta fase, se centrifugan,
en la centrifugadora 17, los viales 15 y 16 a 1.000 r.p.m. durante
5 minutos.
Finalmente, en una séptima fase se aspira parte
18 del contenido de los viales 15 y 16 y se desecha o inyecta en
correspondientes viales 20 y 21 contenedores de CICa, de forma que
el resto, conteniendo las células mononucleares 19, se agita y se
aspira para su utilización, de manera que el mismo puede ser
inyectado en un vial que contenga un cuerpo de implante dental,
puede ser colocado directamente en un alvéolo donde vaya a ser
implantado un implante dental, puede ser mezclado con hueso
autólogo o no, etc..
Asimismo, la parte (14)-(18) aspirada del
contenido de los viales (9)-(10) y (15)-(16) e inyectada en los
correspondientes viales (13)-(12) y (20)-(21) conteniendo ClCa
permite la obtención de gel.
Así, mediante el procedimiento descrito se
permite obtener en pequeñas clínicas células mononucleares de una
forma rápida y operativa, sin precisar un laboratorio
especializado, siendo de especial aplicación en implantología de
carácter ambulatorio.
De esta forma, el procedimiento de obtención de
células mononucleares es de especial aplicación en implantología
dental, dado que el mismo puede ser aplicado en pequeñas clínicas
con carácter ambulatorio, sin necesidad de disponer de un
laboratorio especial, por lo que no es precisa una gran inversión
económica, y con la ventaja añadida de poder llevarse a cabo en el
momento de realizar la operación de implantación.
Claims (2)
1. Procedimiento de obtención de células
mononucleares, partiendo de una extracción de sangre periférica,
preferentemente, de la flexura del codo, mediante el sistema
vacutainer® (1), u otro similar, para rellenar el vacutainer® con
suero fisiológico con la sangre extraída y una, posterior,
extracción del aire de su interior, caracterizado porque el
procedimiento comprende las siguientes fases:
- \blacklozenge
- dos sucesivas extracciones de 3 ml. del contenido del vacutainer® (1) siendo inyectadas en respectivos viales (2) y (3) conteniendo un separador celular;
- \blacklozenge
- una centrifugación, por medio de una centrifugadora (4), de los dos viales (2) y (3), uno frente al otro, a 2.000 r.p.m. durante 20 minutos;
- \blacklozenge
- una aspiración de la capa de células mononucleares (5) para ser inyectadas en correspondientes viales (9) y (10) con un medio de cultivo;
- \blacklozenge
- una centrifugación, por medio de una centrifugadora (11), de ambos viales (9) y (10) a 1.000 r.p.m. durante 5 minutos;
- \blacklozenge
- una aspiración de parte (14) del contenido de ambos viales (9) y (10) y su desecho o inyección en correspondientes viales (13) y (12), mientras que los últimos 1 ó 1,5 ml., conteniendo las células mononucleares (19), se agitan y se inyectan en otro vial (15) y (16), respectivamente, con un medio de cultivo;
- \blacklozenge
- una nueva centrifugación, por medio de una centrifugadora (17), a 1.000 r.p.m. durante 5 minutos;
- \blacklozenge
- una aspiración de parte (18) del contenido de ambos viales (15) y (16) y su desecho o inyección en correspondientes viales (20) y (21), mientras que los últimos 1 ó 1,5 ml., conteniendo las células mononucleares (19), se agitan y se inyectan en un vial contenedor del elemento a implan-tar.
2. Procedimiento de obtención de células
mononucleares, según reivindicación 1ª, caracterizado porque
la parte (14)-(18) aspirada del contenido de los viales (9)-(10) y
(15)-(16) e inyectada en los correspondientes viales (13)-(12) y
(20)-(21) conteniendo CICa permite la obtención de gel.
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ES2179731B1 (es) * | 2000-04-14 | 2004-04-16 | Alberto Arruga Artal | Implante dental y metodo operativo de implantacion. |
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