ES2343142T3 - Kit para preparar una composicion que comprende unas celulas adipocitarias. - Google Patents
Kit para preparar una composicion que comprende unas celulas adipocitarias. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2343142T3 ES2343142T3 ES06831202T ES06831202T ES2343142T3 ES 2343142 T3 ES2343142 T3 ES 2343142T3 ES 06831202 T ES06831202 T ES 06831202T ES 06831202 T ES06831202 T ES 06831202T ES 2343142 T3 ES2343142 T3 ES 2343142T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- cells
- tube
- sterile
- kit according
- fraction
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 46
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 77
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 31
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 15
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims abstract description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 130
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 73
- 239000002243 precursor Substances 0.000 claims description 62
- 210000000577 adipose tissue Anatomy 0.000 claims description 34
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 34
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 32
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 30
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 26
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 18
- 230000029087 digestion Effects 0.000 claims description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 11
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims description 10
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 claims description 8
- FGUUSXIOTUKUDN-IBGZPJMESA-N C1(=CC=CC=C1)N1C2=C(NC([C@H](C1)NC=1OC(=NN=1)C1=CC=CC=C1)=O)C=CC=C2 Chemical compound C1(=CC=CC=C1)N1C2=C(NC([C@H](C1)NC=1OC(=NN=1)C1=CC=CC=C1)=O)C=CC=C2 FGUUSXIOTUKUDN-IBGZPJMESA-N 0.000 claims description 7
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims description 7
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 claims description 6
- 238000007443 liposuction Methods 0.000 claims description 5
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 4
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 4
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims description 4
- 239000000815 hypotonic solution Substances 0.000 claims description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 claims description 3
- 238000004891 communication Methods 0.000 claims description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 abstract description 21
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 23
- 230000001698 pyrogenic effect Effects 0.000 description 14
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 12
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 12
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 12
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 11
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 7
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 7
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 7
- 238000005553 drilling Methods 0.000 description 6
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 5
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 5
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 5
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 5
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 5
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- -1 polypropylene Polymers 0.000 description 4
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 3
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 3
- 239000008156 Ringer's lactate solution Substances 0.000 description 3
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- ZEWYCNBZMPELPF-UHFFFAOYSA-J calcium;potassium;sodium;2-hydroxypropanoic acid;sodium;tetrachloride Chemical compound [Na].[Na+].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[Cl-].[K+].[Ca+2].CC(O)C(O)=O ZEWYCNBZMPELPF-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 3
- 239000013013 elastic material Substances 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 229920002457 flexible plastic Polymers 0.000 description 3
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 3
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 3
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical class [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N Glycerol 2-phosphate Chemical compound OCC(CO)OP(O)(O)=O DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 2
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 2
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N acrylic acid group Chemical group C(C=C)(=O)O NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000002293 adipogenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 230000002648 chondrogenic effect Effects 0.000 description 2
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 2
- 239000000501 collagen implant Substances 0.000 description 2
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 2
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 2
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N hydrocortisone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3[C@@H](O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 JYGXADMDTFJGBT-VWUMJDOOSA-N 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N indomethacin Chemical compound CC1=C(CC(O)=O)C2=CC(OC)=CC=C2N1C(=O)C1=CC=C(Cl)C=C1 CGIGDMFJXJATDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 2
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 230000001114 myogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002188 osteogenic effect Effects 0.000 description 2
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 2
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 2
- 239000002510 pyrogen Substances 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- APIXJSLKIYYUKG-UHFFFAOYSA-N 3 Isobutyl 1 methylxanthine Chemical compound O=C1N(C)C(=O)N(CC(C)C)C2=C1N=CN2 APIXJSLKIYYUKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001823 Aquamid® Polymers 0.000 description 1
- 108010008457 Artecoll Proteins 0.000 description 1
- 108010044811 Autologen Proteins 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 229920000544 Gore-Tex Polymers 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920002439 Polyalkylimide Polymers 0.000 description 1
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001954 Restylane Polymers 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000001269 cardiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 229920000295 expanded polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 108010020199 glutaraldehyde-cross-linked collagen Proteins 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 229960000890 hydrocortisone Drugs 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940072322 hylan Drugs 0.000 description 1
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 229960000905 indomethacin Drugs 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000002988 nephrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 231100000065 noncytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002020 noncytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 229920001432 poly(L-lactide) Polymers 0.000 description 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 239000011736 potassium bicarbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000028 potassium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000015497 potassium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M potassium hydrogencarbonate Chemical compound [K+].OC([O-])=O TYJJADVDDVDEDZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 231100000732 tissue residue Toxicity 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M45/00—Means for pre-treatment of biological substances
- C12M45/09—Means for pre-treatment of biological substances by enzymatic treatment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M45/00—Means for pre-treatment of biological substances
- C12M45/05—Means for pre-treatment of biological substances by centrifugation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
- C12M47/00—Means for after-treatment of the produced biomass or of the fermentation or metabolic products, e.g. storage of biomass
- C12M47/04—Cell isolation or sorting
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0653—Adipocytes; Adipose tissue
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Edible Oils And Fats (AREA)
Abstract
Kit para preparar una composición que comprende unas células adipocitarias, comprendiendo dicho kit: a) por lo menos un tubo estéril (1) apropiado para ser centrifugado, que comprende un cuerpo (11) y un tapón (12) que presenta un elemento de material elástico y retraíble, estando el cuerpo (11) herméticamente cerrado por el tapón (12), comprendiendo dicho tapón (12) un orificio de salida de aire (13) provisto de una membrana de filtro que tiene un tamaño de poro inferior a 0,30 μm; b) por lo menos una aguja estéril que comprende un canal central, del que uno de los extremos está provisto de un dispositivo de fijación a una jeringa, y del que el otro extremo está en forma de bisel, siendo el diámetro del canal central de 3 milímetros o más, preferentemente de 5 milímetros o más.
Description
Kit para preparar una composición que comprende
unas células adipocitarias.
La presente invención se refiere al campo de la
obtención de células adipocitarias, y a la aplicación de las
composiciones celulares resultantes para la fabricación de
composiciones con fines estéticos o médicos para regenerar
localmente los tejidos, incluidos los tejidos adiposos.
Numerosos procedimientos de obtención de células
precursoras de adipocitos son conocidos en el estado de la
técnica.
En general, dichos procedimientos tienen en
común una etapa de obtención de un tejido adiposo de partida, que
procede de un lipoaspirado, que es seguida de una etapa de digestión
enzimática del tejido adiposo, con el fin de liberar las células
adipocitarias del tejido conjuntivo circundante, y después una etapa
de purificación de las células precursoras de adipocitos.
En general, las células precursoras de
adipocitos se utilizan a continuación por su capacidad, como células
cepas, para diferenciarse en numerosos tipos celulares distintos,
que se pueden utilizar en terapia.
Un procedimiento de este tipo se describe por
ejemplo en la solicitud de patente americana US 2003/0082152
publicada el 1 de mayo del 2003. Según esta solicitud de patente
americana, las células precursoras de adipocitos, una vez
purificadas, se disponen en cultivo durante unos tiempos variables,
y en presencia de diferentes factores solubles, con el fin de
diferenciarse en unas células de diversos tipos celulares. Por
ejemplo, se induce la diferenciación de las células precursoras de
adipocitos en tejido osteógeno cuando se incuban en presencia de
una combinación de dexametasona, de fosfato de acido ascórbico, y de
beta-glicerofosfato. Para obtener una
diferenciación de las células precursoras de adipocitos en células
de tejido condrogénico, las células precursoras se incuban en
presencia de suero de ternera fetal, de TGF-beta 1 y
de insulina. Para inducir la diferenciación de las células
precursoras de adipocitos en células de tejido miogénico, las
células precursoras de adipocitos purificadas se incuban en
presencia de suero de caballo y de hidrocortisona. Para inducir la
diferenciación de las células precursoras de adipocitos en tejido
adipogénico, las células precursoras de adipocitos purificadas se
incuban en presencia de una combinación de
isobutil-metilxantina, de dexametasona, de insulina
y de indometacina.
Según otros procedimientos, las células
precursoras de adipocitos, después de haber sufrido una etapa de
purificación, son administradas a los pacientes sin la utilización
de una etapa de diferenciación previa.
Dichos procedimientos de obtención de células
precursoras de adipocitos comprenden una etapa de purificación de
las células precursoras de adipocitos que puede ser de una duración
y de una complejidad variable. La etapa de purificación puede
consistir, o bien en una etapa de selección positiva de las células
precursoras de adipocitos, o bien en una etapa de selección
negativa en la que las células no deseadas son eliminadas, o también
en una combinación de una etapa de selección positiva y de una
etapa de selección negativa. La utilización de etapas de selección
positiva y/o de etapas de selección negativa en un procedimiento de
preparación de una fracción celular enriquecida con precursores de
adipocitos comunes, se describe por ejemplo en la solicitud de
patente americana US 2004/0106196 publicada el 3 de junio 2004.
En la solicitud de patente US 2004/0106196, se
describe por ejemplo una etapa de selección positiva de las células
precursoras de adipocitos por adherencia selectiva de las células
precursoras, por ejemplo sobre ciertos tipos de soportes para
membrana de filtración. Se puede también hacer uso de anticuerpos, o
de combinación de anticuerpos que reconocen las moléculas de
superficie expresadas sobre las células precursoras, o por el
contrario sobre las otras células de la población celular de
partida. Dichos anticuerpos son inmovilizados sobre un soporte
solido, con el fin de retener selectivamente las células que
expresan en su superficie los antígenos en contra de los que se
dirigen los anticuerpos inmovilizados. La purificación de las
células precursoras de adipocitos se puede realizar asimismo
mediante separación inmunomagnética con la ayuda de anticuerpos
apropiados. Asimismo, la etapa de purificación se puede ser
realizar mediante una primera etapa de incubación de las células
con unos anticuerpos dirigidos contra unos antígenos de superficie
celular, y después el paso de las células así tratadas sobre una
columna de inmunocromatografía en la que se inmovilizan los
anticuerpos secundarios que se fijan sobre los anticuerpos
primarios citados anteriormente. La etapa de purificación celular se
puede realizar asimismo mediante la utilización de gradientes de
densidad, continuos o discontinuos. La etapa de purificación de los
precursores de adipocitos se puede realizar asimismo con la ayuda de
aparatos de selección celular, tales como unos aparatos de
elutriación, con o sin contracorriente. El estado de purificación de
los precursores de adipocitos se puede realizar asimismo gracias a
una etapa de adhesión selectiva de la población celular de partida
sobre la superficie plástica de un soporte de cul-
tivo.
tivo.
Después de la purificación, las células
precursoras de adipocitos purificadas como se ha descrito
anteriormente pueden ser directamente administradas a los
pacientes.
Se ha descrito asimismo un procedimiento de
obtención de una fracción enriquecida con células adipocitarias que
comprende una etapa de desagregación de fragmentos de tejido adiposo
de un lipoaspirado en un primer contenedor, y después una etapa de
enriquecimiento celular en un segundo contenedor, por ejemplo por
separación sobre gradiente de densidad, centrifugación,
elutriación, adherencia celular diferencial, selección por unos
anticuerpos o también con la ayuda de bolas inmunomagnéticas (véase
la solicitud de patente de los Estados Unidos US 2004/0106196).
Según los objetivos que se persiguen, los
procedimientos del estado de la técnica descritos anteriormente
pueden resultar plenamente satisfactorios, en particular para
preparar unas poblaciones de células diferenciadas hacia diferentes
tipos tisulares, o también cuando las aplicaciones terapéuticas
previstas necesitan un grado muy alto de pureza de las células
precursoras de adipocitos.
Sin embargo, los procedimientos de obtención de
células precursoras de adipocitos descritos en el estado de la
técnica, y por tanto los principales de entre ellos están ilustrados
más arriba, son largos, y costosos y están por tanto destinados a
corregir unas situaciones fisiológicas, en particular patológicas,
susceptibles de poner en juego la vida del paciente.
Ahora bien, existe la necesidad en el estado de
la técnica de unos procedimientos de obtención de células
precursoras adipocitarias que sean más simples, más rápidos de
realizar y mucho menos costosos que los procedimientos
conocidos.
Según la invención, se ha puesto a punto un
procedimiento de obtención de una fracción celular enriquecida con
células adipocitarias, incluida una fracción enriquecida con células
precursoras adipocitarias y de una fracción enriquecida con células
de adipocitos maduras, más simple y menos costoso que los
procedimientos conocidos, así como un kit específicamente ideado
para la realización de este nuevo procedimiento.
Las "células adipocitarias" según la
invención engloban las células precursoras y las células de
adipocitos maduras.
Por "células precursoras" o "células
precursoras adipocitarias", se entienden según la invención las
células cepas contenidas en el tejido adiposo y que son capaces, en
las condiciones apropiadas, de diferenciarse en unas células de
diversos tipos celulares, como se ha descrito en el estado de la
técnica.
Según la invención, las "células
precursoras" engloban las células multipotentes y pluripotentes
que son capaces de diferenciarse en una diversidad de tipos
celulares, incluidas las células adipogénicas, condrogénicas,
cardiogénicas, dermatogénicas, hematopoyéticas, hemangiogénicas,
miogénicas, nefrogénicas, urogenitogénicas, osteogénicas,
pericardiogénicas o también estromales.
El solicitante se ha aplicado en poner a punto
un kit destinado a la preparación de una composición que comprende
unas células adipocitarias que permite la utilización de un
procedimiento simple de obtención de dicha composición, que se
puede utilizar en rutina por el facultativo y que no necesita
utilizar unos aparellajes costosos.
El solicitante ha buscado así la puesta a punto
de un kit para preparar una composición que comprende unas células
adipocitarias purificadas, que permite que el facultativo utilice la
composición final que comprende unas células adipocitarias
purificadas, en caso necesario de manera extemporánea, en el ser
humano o el animal.
En el curso de esta investigación, el
solicitante ha puesto a punto un tubo estéril, apropiado para ser
centrifugado, y que pueda ser utilizado de forma repetida en unas
condiciones estériles, y si es posible también en unas condiciones
apirógenas, en el curso de un procedimiento de obtención de una
composición que comprende unas células adipocitarias, que puede ser
utilizada extemporáneamente en el ser humano o en el animal.
Así, la invención tiene por objeto un tubo
estéril (1) apropiado para ser centrifugado, que comprende un cuerpo
(11) y un tapón (12) que comprende un elemento en material elástico
y retráctil, estando el cuerpo (11) herméticamente cerrado por el
tapón (12) presentando dicho tapón (12) un orificio (13) que permite
los intercambios gaseosos entre el interior del tubo y el medio
exterior, estando dicho orificio (13) provisto de una membrana de
filtro que tiene un tamaño de poro inferior a 0,30 \mum.
Las diferentes características adicionales
susceptibles de caracterizar el tubo (1) anterior se describen a
continuación en relación con las características del kit en el que
el tubo (1) puede ser incluido.
La invención tiene asimismo por objeto un kit
para preparar una composición que comprende unas células precursoras
adipocitarias purificadas para una utilización extemporánea en el
ser humano o el animal, comprendiendo dicho kit:
- a)
- por lo menos un tubo estéril (1) apropiado para ser centrifugado, que comprende un cuerpo (11) y un tapón (12) que comprende un elemento en material elástico y retráctil, estando el cuerpo (11) herméticamente cerrado por el tapón (12), presentando dicho tapón (12) un orificio de salida de aire (13) provisto de una membrana de filtro que tiene un tamaño de poro inferior a 0,30 \mum;
- b)
- por lo menos una aguja estéril que presenta un canal central, del que uno de los extremos está provisto de un dispositivo de fijación a una jeringa, y del que el otro extremo está en forma de bisel, siendo el diámetro del canal central de 3 milímetros o más, preferentemente de 5 milímetros o más.
Gracias al kit anterior, el experto en la
materia puede obtener, la mayor parte de las veces en menos de dos
horas después de la obtención de un lipoaspirado o de una lipectomía
extraída de un paciente, una composición que comprende unas células
precursoras adipocitarias purificadas que se puede utilizar
directamente para su inyección al mismo paciente, en particular,
con fines de reconstrucción corporal o con fines terapéuticos.
Por "lipoaspirado", se entiende según la
invención una muestra de tejido obtenido por una operación de
liposucción.
Por "lipectomía" se entiende según la
invención una muestra de tejido, preferentemente una muestra de
tejido adiposo, conteniendo dicha muestra de tejido unos
adipocitos, siendo dicha muestra de tejido extraída de un paciente
por un acto quirúrgico.
El kit anterior está particularmente adaptado
para la realización de un procedimiento de obtención de una
composición que comprende unas células adipocitarias purificadas que
comprende las etapas siguientes:
- a)
- introducir una suspensión de tejido adiposo que procede de un lipoaspirado en un tubo (1) tal como el definido anteriormente;
- b)
- realizar, en el tubo (1), una digestión enzimática de la suspensión de tejido adiposo con la ayuda de una preparación enzimática que contiene por lo menos una proteasa;
- c)
- centrifugar la suspensión después de la digestión enzimática;
- d)
- recoger las fracciones de la suspensión centrifugada que contiene las células de interés:
- d1)
- recoger la fracción (PA) de células precursoras adipocitarias, que está localizada en el residuo en el fondo del tubo (1);
- d2)
- en caso necesario, recoger la fracción de células adipocitarias maduras (AM) encontrada en la parte superior de la suspensión de tejido adiposo centrifugadas en la etapa c);
- e)
- incubar la fracción (PA) en una solución hipotónica, con el fin de realizar una lisis de los hematíes; y
- f)
- realizar una composición de células adipocitarias a partir de una de las fracciones celulares f1), f2) o f3) siguientes:
- f1)
- la fracción (PA) de células precursoras adipocitarias tal como la obtenida al final de la etapa (e);
- f2)
- la fracción (AM) de células adipocitarias maduras tal como la obtenida en la etapa (d1); y
- f3)
- una mezcla de las células de la fracción (PA) y de las células de la fracción (AM).
\vskip1.000000\baselineskip
Las composiciones obtenidas con el procedimiento
de la invención pueden ser utilizadas de forma extemporánea en el
ser humano o el animal.
En particular, el kit, según la invención, está
particularmente adaptado para la realización de procedimientos de
obtención de fracciones enriquecidas con células precursoras que no
comprenden ninguna etapa compleja de purificación de alto nivel de
las células precursoras adipocitarias, distintas de las etapas c),
d) y e) del procedimiento general descrito anteriormente.
Como ya se ha mencionado, al kit de la invención
comprende por lo menos un tubo estéril (1) tal como del definido
anteriormente, que es estéril y que está preparado para el empleo
para realizar las etapas a) a d), incluso las etapas a) a e) del
procedimiento anterior.
Por ejemplo, el tubo (1) puede ser utilizado
hasta la etapa e), incluso en ciertos casos hasta la etapa f), del
procedimiento general definido más arriba cuando, después de la
centrifugación de la suspensión tratada por la preparación
enzimática, casi la totalidad de la suspensión de tejido adiposo
tratada por las enzimas y centrifugada es eliminada conservando al
mismo tiempo el residuo celular localizado en el fondo del tubo (1)
que contiene las células precursoras, siendo dicho residuo celular
puesto de nuevo en suspensión en la etapa e) con una solución
hipotónica, previamente a la realización de una o varias etapas de
centrifugación y de lavado con un medio isotónico, y después la
realización de la mezcla de las células precursoras con el material
de matriz biológica, en la etapa f) del procedimiento.
Con el fin de permitir la realización de las
etapas a) a d), o alternativamente de las etapas a) a e), del
procedimiento anterior solamente con el tubo estéril (1), dicho tubo
estéril (1) comprende un tapón (12) que comprende un elemento en
material elástico y retráctil, con el fin de que dicho tapón (12)
pueda ser traspasado múltiples veces por la aguja de una jeringa,
conservando al mismo tiempo su estanqueidad con respecto al entorno
exterior después de la retirada de la aguja.
Según una primera alternativa, la totalidad del
tapón (12) está constituida por un material elástico y retráctil,
como se ha representado en la figura 1.
Según una segunda alternativa, solamente una
parte del tapón (12) está realizada en un material elástico y
retráctil, preferentemente la parte central del tapón (12). Según
esta alternativa, la parte central del tapón (12) que está
constituida por un material elástico y retráctil, está insertada,
por ejemplo engarzada o encastada, en la parte exterior del tapón
(12). La parte exterior del tapón (12) que puede ser de metal o de
material plástico, está en contacto con el borde superior del
cuerpo (11) del tubo (1), y asegura la estanqueidad del tubo
(1).
El tapón (12) puede ser roscado sobre el tubo
(1), gracias a unos pasos de rosca complementarios localizados
respectivamente en el tapón (12) y en el extremo superior del cuerpo
(11) del tubo (1). En otros modos de realización, el tapón (12)
está acoplado a forzamiento en el extremo superior del cuerpo (11)
del tubo (1).
En particular, el material elástico y retráctil
de tapón (12) permite atravesar este tapón con la aguja de una
jeringa, por lo menos en las etapas siguientes del procedimiento
general anterior:
- en la etapa a) de introducción de la
suspensión de tejido adiposo en el tubo (1);
- en caso necesario, en la etapa b), cuando se
introduce una preparación enzimática en el tubo (1), en los modos
de realización del procedimiento en los que el tubo (1) no contiene
inicialmente dicha preparación enzimática, en forma líquida o
liofilizada;
- en la etapa d) en la que se recogen las
diferentes fracciones celulares de la suspensión centrifugada que
contiene las células de interés, en caso necesario, mediante la
eliminación del volumen de la suspensión celular que se sitúa en el
tubo (1) por encima del residuo localizado en el fondo del tubo que
contiene la fracción de células precursoras (PA);
- en la etapa e) en la que la solución
hipotónica puede ser añadida directamente en el tubo (1) con el fin
de poner de nuevo en suspensión la fracción celular que contiene las
células precursoras;
- durante la o las etapas de lavado y
centrifugación de la fracción celular obtenida al final de la etapa
e), con un medio isotónico, con el fin de eliminar los hematíes que
han sido lisados por la incubación anterior con el medio
hipotónico; y
- en caso necesario, cuando tiene lugar la etapa
f) de realización de una mezcla de las células precursoras
adipocitarias con el material de matriz biológica, etapa en el curso
de la cual el material de matriz biológica puede ser añadido
directamente en el tubo (1) que contiene la suspensión celular en un
medio isotónico.
La figura 1 ilustra un modo de realización
particular del tubo (1) contenido en el kit según la invención.
En este modo de realización ventajoso, el tapón
(12) del tubo estéril (1) comprende por lo menos una superficie de
peroración (14) estéril. La esterilidad de la superficie de
perforación (14) está preservada en el tiempo gracias a una
película amovible (15) que recubre la superficie de perforación
(14). La película amovible (15) está constituida por un material
estanco a los líquidos y eventualmente estanco a los gases. Por
ejemplo, la película amovible (15) puede consistir en una película
de parafina o también en una película metálica, por ejemplo una
película de aluminio. En caso necesario, la película amovible (15)
puede ser retirada y después aplicada de nuevo sobre la superficie
de perforación (14) correspondiente una pluralidad de veces, con el
fin de permitir una utilización repetida de la superficie de
perforación (14) para el paso de la aguja de una jeringa en las
diferentes etapas de adición o de extracción de material en o a
partir del tubo (1), siempre que las condiciones de esterilidad en
el momento de la adición o de la extracción de material en o a
partir de un tubo (1) sean rigurosamente respetadas.
Sin embargo, de forma ventajosa, el tapón (12)
del tubo estéril (1) comprende múltiples superficies de perforación
(14), en particular por lo menos dos superficies de perforación
(14), por ejemplo de dos a cinco superficies de perforación (14),
con el fin de realizar el procedimiento general definido
anteriormente utilizando una sola vez una misma superficie de
perforación (14) para la adición o la extracción de material en o a
partir del tubo (1).
En otro modo de realización del tapón (12) del
tubo estéril (1), éste comprende más de cinco superficies de
perforación (14). Así, en ciertos modos de realización del kit según
la invención, el tapón (12) del tubo estéril (1) comprende hasta
diez superficies de perforación (14).
En general, el tubo (1) consiste en un tubo cuyo
cuerpo (1) es de material plástico, por ejemplo de polipropileno,
de poliestireno o de polietileno, de un tipo conocido y adecuado
para la centrifugación de suspensión celular. El tubo (1) puede ser
de un volumen de 50 mililitros a 100 mililitros. El tubo (1) está
adaptado a una etapa de centrifugación con una aceleración por lo
menos igual a 1.000 g, preferentemente por lo menos igual a 1.500
g.
De manera general, el tubo (1) es un tubo
estéril y apirógeno.
Como ya se ha mencionado, el tapón (12) está
constituido, por lo menos en parte, por un material elástico y
retraíble de cualquier tipo conocido por el experto en la materia,
como por ejemplo en un material de caucho o de silicona.
Según otra característica, el tapón (12)
presenta un orificio de salida de aire (13) provisto de una membrana
de filtro que tiene un tamaño de poro inferior a 0,30 \mum. El
orificio de salida de aire (13) permite el intercambio gaseoso
entre el interior del tubo (1) y el medio exterior, impidiendo al
mismo tiempo el paso de partículas, incluidos los microorganismos,
hacia el interior del tubo (1). El orificio de salida de aire (13)
permite añadir o extraer fácilmente material en o a partir del tubo
(1), sin crear simultáneamente ningún vacío o sobrepresión en el
interior del tubo
(1).
(1).
La membrana de filtro es de un tipo conocido por
el experto en la materia, por ejemplo un filtro de nitrocelulosa.
La membrana del filtro que equipa el orificio de salida de aire (13)
puede presentar un tamaño de poro de aproximadamente 0,2 \mum,
por ejemplo 0,22 \mum.
En ciertos modos de realización del kit según la
invención, el tubo estéril (1) contiene una preparación enzimática
apropiada para la digestión del tejido adiposo, pudiendo dicha
preparación enzimática estar en forma líquida o en forma sólida,
por ejemplo, en forma de una preparación enzimática liofilizada. De
manera totalmente preferida, dicha preparación enzimática es
estéril y apirógena. Según este modo de realización del kit de la
invención, la etapa b) del procedimiento general definido
anteriormente puede ser realizada inmediatamente después de la
introducción de la suspensión de tejido adiposo en el tubo (1).
En otros modos de realización del kit según la
invención, el tubo estéril (1) no comprende ninguna preparación
enzimática. En este otro modo de realización del kit según la
invención, dicho kit puede comprender además un contenedor, por
ejemplo un tubo o un frasco, que contiene una preparación enzimática
apropiada para la digestión del tejido adiposo, estando dicha
preparación enzimática en forma líquida o en forma liofilizada.
El contenedor consiste en un contenedor estéril
y apirógeno herméticamente taponado. Puede ser un frasco de
material plástico o de cristal, o también una ampolla de cristal, o
también una bolsa flexible que contiene la preparación enzimática,
preferentemente en forma líquida.
Ventajosamente, la preparación enzimática
comprende por lo menos una proteasa, y preferentemente por lo menos
una colagenasa de cualquier tipo conocido por el experto en la
materia. A título ilustrativo, el experto en la materia puede
utilizar una preparación enzimática descrita en la patente americana
US nº 5.952.215 o en la patente americana US nº 6.475.764.
Como se ha descrito más arriba, el kit según la
invención comprende asimismo por lo menos una aguja estéril
biselada, adaptable al orificio de salida de una jeringa y cuyo
diámetro del canal central es de 3 milímetros o más,
preferentemente de 5 milímetros o más. Esta aguja estéril y
apirógena se utiliza en la etapa a) del procedimiento general
anterior para introducir la suspensión de tejido adiposo previamente
extraída de manera estéril del paciente en el tubo (1).
Ventajosamente, esta aguja de un gran diámetro
posee un extremo biselado con el fin de evitar cualquier efecto de
sacabocados en el momento del atravesado del tapón (12) del tubo (1)
en el momento de su utilización, en la etapa a) del procedimiento
general anterior. Esta aguja estéril y apirógena de gran diámetro
debe ser de una longitud suficiente para atravesar el tapón del
tubo. Ventajosamente, esta aguja estéril y apirógena tiene una
longitud superior o igual a 50 milímetros.
El otro extremo de la aguja estéril y apirógena
de gran diámetro está provisto de un dispositivo de fijación a una
jeringa, que puede ser un dispositivo de fijación de cualquier tipo
conocido por el experto en la materia. Ventajosamente, dicho
dispositivo de fijación a una jeringa consiste en un sistema de
bloqueo de tipo "Luer-Lock®" bien conocido por
el experto en la materia.
En ciertos modos de realización del kit según la
invención, dicho kit comprende varios tubos estériles y apirógenos
(1). En efecto, sucede frecuentemente que el volumen de extracción
del tejido adiposo excede ampliamente el volumen útil de un solo
tubo estéril (1), lo que necesita el empleo, en la etapa a) del
procedimiento general anterior, de varios tubos estériles (1).
Ventajosamente, un kit según la invención comprende 2, 3, 4, 6, 7 u
8 tubos estériles
(1).
(1).
En ciertos modos de realización del kit según la
invención, dicho kit comprende además por lo menos un frasco que
contiene un medio hipotónico adecuado para la lisis de los hematíes.
El frasco que contiene un medio hipotónico, que puede ser de
cualquier tipo conocido por el experto en la materia, se utiliza
ventajosamente para la realización de la etapa e) del procedimiento
general definido anteriormente.
A título ilustrativo, dicho medio hipotónico
consiste en una solución acuosa que comprende (i) hidrogenocarbonato
de potasio (KHCO_{3}) a la concentración final de 10 mM, (ii)
cloruro de amonio (NH_{4}Cl) a la concentración final de 155 mM y
(iii) sal disódica del ácido etilendiaminotetraacético
(Na_{2}EDTA) a la concentración final de 1 mM. Ventajosamente,
dicho medio hipotónico posee un pH comprendido entre 7,2 y 7,6.
En otros modos de realización según la
invención, dicho kit comprende también por lo menos un frasco que
contiene un medio isotónico adecuado para la nueva puesta en
suspensión de las células, por ejemplo cuando tiene lugar la o las
etapas de lavado y centrifugación que se pueden realizar después de
la etapa e) de lisis de los hematíes, y antes de la mezcla de la
fracción purificada de células precursoras adipocitarias con el
material de matriz bioló-
gica.
gica.
Ventajosamente, el frasco que contiene el medio
hipotónico puede ser una bolsa de plástico flexible, por ejemplo
una bolsa de plástico flexible de un volumen de 250 ml de tipo
Ringer, que comprende un tapón sellado de silicona que es
perforable por una aguja. El tapón, por ejemplo de silicona, debe
poder ser perforado, preferentemente una pluralidad de veces, con
una aguja de un diámetro de 18 Gauges sin afectar a la estanqueidad
del frasco que contiene la solución hipotónica estéril y apirógena.
En ciertos modos de realización, la bolsa plástica que contiene la
solución hipotónica está colocada en un embalaje estéril individual
que se puede abrir fácilmente. Según aún otros modos de realización
del kit según la invención, dicho kit comprende además por lo menos
un dispositivo estéril y apirógeno de filtración provisto de una
membrana filtrante que tiene un tamaño de poro comprendido entre 40
\mum y
200 \mum.
200 \mum.
El dispositivo estéril de filtración se utiliza
en ciertos modos de realización del procedimiento general definido
anteriormente, en los que la suspensión celular obtenida al final de
las etapas de lavado y de centrifugación que siguen a la etapa e)
de este procedimiento se introduce por aspiración en el volumen
interior de una jeringa, y después se filtra después de haber
dispuesto el dispositivo de filtración en la embocadura de salida de
la jeringa, con el fin de eliminar de la suspensión celular los
desechos, en particular de tejidos conjuntivos, con el fin de
obtener después de la filtración una suspensión que contiene
exclusivamente, o casi exclusivamente, las células de interés.
El dispositivo de filtración del kit según la
invención es de cualquier tipo conocido. Ventajosamente, la
membrana de filtración que tiene un tamaño de poro comprendido entre
40 \mum y 200 \mum, consiste en una membrana de filtración de
nylon que se mantiene en posición fija en el interior del
dispositivo de filtración. El dispositivo de filtración es a su vez
de un tipo conocido, por ejemplo del tipo de los dispositivos de
filtración adaptables a unas jeringas comercializadas habitualmente
por las compañías MILLIPORE o SARTORIUS. Ventajosamente, el
dispositivo de filtración comprende un sistema de adaptación al
terminal de una jeringa constituido por un medio de bloqueo de tipo
"Luer-Lock®". Ventajosamente, el kit según la
invención comprende también una aguja adaptable al otro extremo del
dispositivo de filtración, en caso necesario provista de un sistema
de bloqueo de tipo "Luer-lock®", de manera que
se introduzca la suspensión de células precursoras de adipocitos en
un tubo receptor, ventajosamente un tubo (1)
estéril.
estéril.
En ciertos modos de realización del kit según la
invención, el filtro y la aguja son solidarios uno del otro,
estando la aguja directamente soldada al dispositivo de
filtración.
Preferentemente, la aguja destinada a ser
utilizada en combinación con el dispositivo de filtración consiste
en una aguja de por lo menos 16 Gauges, y cuyo tamaño de aguja es
suficiente para atravesar el tapón del tubo (1), siendo la longitud
de la aguja preferentemente superior o igual a 50 milímetros.
En este modo de realización particular de un kit
según la invención, dicho kit puede comprender un conjunto que
comprende la combinación de un dispositivo de filtración y de una
aguja, tal como el definido anteriormente, en varios
ejemplares.
Ventajosamente, un kit según la invención
comprende 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 ejemplares de un conjunto que
comprende la combinación de un dispositivo de filtración y de una
aguja tal como se ha definido anteriormente.
De manera general, para la realización del
procedimiento general definido anteriormente, se utilizan tantos
conjuntos que comprenden la combinación de un dispositivo de
filtración y de una aguja como tubos (1) estériles utilizados en la
etapa a) del procedimiento.
En aún otros modos de realización del kit de la
invención, dicho kit comprende asimismo por lo menos una aguja de
más de 18 Gauges que presenta preferentemente una longitud de por lo
menos 125 milímetros. Dicha aguja está adaptada para la realización
de la etapa d1) del procedimiento, para recuperar el sobrenadante de
centrifugación que no contiene la fracción (PA) enriquecida con
células precursoras adipocitarias. Dicha aguja está adaptada
asimismo para eliminar el líquido localizado en el tubo (1) por
debajo de la banda celular que contiene las células adipocitarias
maduras previamente a la recuperación de las células precursoras que
están en forma de un residuo celular en el fondo del tubo (1).
En aún otros modos de realización del kit según
la invención, dicho kit comprende además un dispositivo que permite
la obtención de una composición final de células adipocitarias con
un material matriz, para la realización de la etapa f) del
procedimiento general definido en la presente descripción.
Así, en ciertos modos de realización del
procedimiento de la invención, la composición final se prepara en
la etapa f) combinando un material matriz con las células
adipocitarias, es decir con las células (PA), las células (AM) o
una mezcla de estas células.
Por "material matriz", se entiende según la
invención un material no citotóxico que es estéril y apirógeno, y
que favorece la implantación de las células adipocitarias obtenidas
mediante el procedimiento, en el organismo humano o animal.
Un dispositivo (2) de este tipo está ilustrado
en la figura 2:
- (i)
- una primera jeringa (21) destinada a ser llenada con un volumen apropiado de un material matriz;
- (ii)
- una segunda jeringa (22) destinada a ser llenada con una suspensión de células precursoras adipociotarias en un medio isotónico, y
- (iii)
- un tubo (23) que une el orificio de salida de cada una de las jeringas (21; 22) poniendo dicho tubo (23) las jeringas (21), (22) en comunicación fluídica.
\vskip1.000000\baselineskip
Ventajosamente, las jeringas (21) y (22)
consisten en unas jeringas de plástico estériles y apirógenas de un
tipo conocido. Ventajosamente, las jeringas (21) y (22) consisten en
unas jeringas que tienen un volumen útil de por lo menos 50
mililitros y que pueden alcanzar hasta 100 mililitros o más.
Ventajosamente, el tubo (23) es un tubo flexible
o rígido, estéril y apirógeno. El tubo (23) puede ser de material
plástico flexible o de silicona. En un modo de realización
particular del dispositivo (2), la primera jeringa (21) está
previamente llenada con un volumen apropiado del material matriz
elegido.
Según otra característica adicional del kit
según la invención, dicho kit puede comprender asimismo por lo
menos un soporte de plástico adaptado para recibir los tubos (1). El
soporte de tubos puede consistir en un soporte de cualquier tipo
conocido por el experto en la materia. En particular, dicho soporte
de tubos puede ser de una concepción muy simple, suficiente para
mantener los tubos (1) en posición vertical durante las diversas
manipulaciones necesarias para la realización del procedimiento
general definido anteriormente en la descripción. Ventajosamente,
dicho soporte debe tener un tamaño suficiente para poder mantener en
posición vertical hasta 20 tubos (1). Dicho soporte puede ser de
una concepción muy simple y de un coste de fabricación muy
bajo.
La presente invención tiene asimismo por objeto
un procedimiento de obtención de una composición de células
adipocitarias, para una utilización en el ser humano o el animal,
que comprende las etapas siguientes:
- a)
- introducir una suspensión de tejido adiposo que procede de un lipoaspirado o de una lipectomía en un tubo (1), tal como el definido en la presente descripción;
- b)
- realizar, en el tubo (1), una digestión enzimática de la suspensión de tejido adiposo con la ayuda de una preparación enzimática que contiene por lo menos una proteasa;
- c)
- centrifugar la suspensión después de la digestión enzimática;
- d)
- recoger las fracciones de la suspensión centrifugada que contiene las células de interés;
- d1)
- recoger la fracción (PA) de células precursoras localizadas en el residuo en el fondo del tubo (1);
- d2)
- en caso necesario, recoger la fracción de células adipocitos maduras (AM) que se encuentran en la parte superior de la suspensión de tejido adiposo centrifugada;
- e)
- incubar la fracción PA en una solución hipotónica, con el fin de realizar una lisis de los hematíes; y
- f)
- realizar una composición de adipocitos a partir de las fracciones celulares siguientes:
- f1)
- la fracción (PA) de células precursoras tal como la obtenida al final de la etapa e),
- f2)
- la fracción (AM) de células adipocitos maduras tal como la obtenida en la etapa d1); y
- f3)
- una mezcla de las células de la fracción (PA), y de las células de la fracción (AM).
\vskip1.000000\baselineskip
Previamente a la etapa a) del procedimiento, el
tejido adiposo es extraído de manera estéril, por lipoaspiración
según las técnicas conocidas por el experto en la materia, o bien
por aspiración manual, o bien también por aspiración con la ayuda
de una bomba apropiada.
El tejido adiposo extraído se recoge en una
jeringa estéril, por ejemplo en una jeringa estéril de un tipo
provisto de un sistema de bloqueo con tornillo de tipo
"Luer-Lock®". Después de la decantación, el
suero es expulsado de la jeringa.
Para la continuación del procedimiento, el
experto en la materia utiliza el kit según la invención que ha sido
definido en detalle anteriormente en la presente descripción.
Utilizando el kit según la invención, la aguja
estéril que constituye el elemento b) del kit, está adaptada a la
jeringa que contiene el tejido adiposo. Después, el contenido de la
jeringa se introduce en el tubo (1).
En ciertos casos, previamente a la etapa a) del
procedimiento, se pueden obtener varias jeringas que contienen
tejido adiposo después de la lipoaspiración. En la etapa a) del
procedimiento, el contenido de varias jeringas que contienen el
tejido adiposo puede ser introducido en un solo tubo (1).
En caso necesario, cuando el volumen de tejido
adiposo excede del volumen útil del tubo (1), se pueden utilizar
varios tubos (1) contenidos en un kit según la invención con el fin
de recoger el tejido adiposo.
Cuando se utiliza el modo de realización del kit
según la invención en el que el tubo (1) es llenado previamente con
una preparación enzimática apta para la digestión del tejido
adiposo, la etapa b) de digestión enzimática se puede realizar
directamente.
En contrapartida, en el modo de realización del
kit de la invención en el que el tubo (1) no contiene ninguna
preparación enzimática, la etapa b) de digestión enzimática está
precedida por la introducción en el tubo (1) de la cantidad
apropiada de preparación enzimática contenida en el kit en un
contenedor separado.
Ventajosamente, en la etapa b) del
procedimiento, la preparación enzimática comprende colagenasa que se
utiliza a una concentración final en el tubo (1) comprendida entre
0,05 y 5 unidades de colagenasa por mililitro de tejido adiposo
contenido en el tubo (1), siendo la unida de colagenasa la unida de
actividad PZ tal como la definida por Wünsch. Según Wünsch, una
unidad de colagenasa cataliza la hidrólisis de 1 \mumol de
4-fenilazobenciloxicarbonil-L-propil-L-leucil-glicil-L-propil-D-arginina
por minuto a 25ºC y a pH 7,1.
Cuando la preparación enzimática apropiada para
la digestión del tejido adiposo se presenta en forma de polvo, por
ejemplo en forma liofilizada, en un contenedor separado del tubo
(1), el experto en la materia reconstituye una solución líquida de
preparación enzimática añadiendo a dicho contenedor un volumen
apropiado de un medio isotónico compatible con la utilización en el
ser humano, por ejemplo un medio isotónico del tipo
Ringer-Lactate, con el fin de poner de nuevo en
solución las enzimas. Después, un volumen definido de la solución
enzimática se introduce mediante inyección en el o los tubos (1)
que contiene(n) el tejido adiposo.
Ventajosamente, una vez que se ha realizado la
mezcla del tejido adiposo con la preparación enzimática en el o los
tubos (1), se añade un medio fisiológico compatible con una
administración en el ser humano en cada uno de los tubos (1), con
el fin de llenarlos.
El o los tubos (1) son incubados a continuación
a una temperatura que puede estar comprendida entre 10ºC y 60ºC,
mejor entre 25ºC y 45ºC, y aún mejor entre 30ºC y 40ºC, por ejemplo
37ºC, con el fin de realizar la etapa b) de digestión enzimática.
Cuando tiene lugar la etapa b), los tubos (1) son sometidos
preferentemente a una agitación continua. En general, en la etapa
b), la digestión enzimática tiene una duración comprendida entre 5
minutos y 2 horas, mejor entre 10 minutos y 30 minutos.
De manera facultativa, al final de la etapa b),
la suspensión obtenida después de la digestión enzimática puede ser
filtrada a través de un dispositivo de filtración, preferentemente
un dispositivo de filtración de un tipo descrito anteriormente en
la presente descripción, que presenta una membrana de filtración que
tiene un tamaño de poro comprendido entre 40 \mum y 200 \mum.
Esta etapa de filtración facultativa permite eliminar los desechos
y residuos de tejido adiposo que resultan de la digestión
enzimática, con el fin de obtener, al final de la etapa b), una
suspensión liquida que contiene esencialmente unas células.
En la etapa c) del procedimiento, la suspensión
celular, en caso necesario liberada de la mayoría de los desechos
del tejido adiposo por filtración, se centrifuga a una aceleración
comprendida entre 10 g y 5.000 g, mejor entre 800 g y 3.000 g, y
aún mejor entre 1.000 g y 2.000 g.
La etapa c) de centrifugación tiene una duración
comprendida entre 5 segundos y 30 minutos, según la velocidad de
centrifugación que ha sido elegida. A título ilustrativo, la
centrifugación se puede realizar a 1.500 g, durante 10 minutos.
Al final de la etapa c) de centrifugación, la
fracción celular enriquecida con células precursoras, también
designada fracción (PA) en la presente descripción, se encuentra en
el residuo en el fondo del tubo (1).
Al final de la etapa c) de centrifugación, una
fracción celular enriquecida con células de adipocitos maduras se
encuentra en forma de una banda celular localizada en la parte
superior de la suspensión líquida contenida en el tubo (1).
En la etapa d1) del procedimiento, la fracción
(PA) enriquecida con células precursoras se recupera mediante
eliminación del líquido sobrenadante localizado en el tubo (1) por
encima del residuo celular. Ventajosamente, el sobrenadante se
elimina del tubo (1) mediante aspiración con ayuda de una jeringa
provista de una aguja estéril cuya longitud es por lo menos igual a
la altura total del tubo (1).
En ciertos modos de realización del
procedimiento de la invención, se recupera asimismo, en la etapa
d2), la fracción de células de adipocitos maduras, también
denominada fracción (AM) en la presente descripción, que se
encuentran en la parte superior de la suspensión de tejido adiposo
centrifugada.
La recuperación de la banda celular que contiene
los adipocitos maduros se puede realizar con la ayuda de una
jeringa, provista de una aguja estéril y apirógena, mediante
aspiración de la banda celular de interés en la jeringa.
En general, la fracción celular (AM) de
adipocitos maduros es introducida a continuación en un tubo (1)
vacío.
En la práctica, cuando se efectúa la etapa d2),
esta etapa se realiza generalmente antes de la etapa d1).
A continuación de la etapa d1), la fracción
celular (PA) de células precursoras se dispone de nuevo en
suspensión en un medio hipotónico, estéril y apirógeno, que se
introduce en el tubo (1) que contiene el residuo celular procedente
de la etapa d1), con la ayuda de una jeringa provista de una aguja
estéril y apirógena.
Después de la introducción del volumen apropiado
del medio hipotónico, los tubos (1) que contienen las células
precursoras en el medio hipotónico se agitan fuertemente y después
son sometidas a una centrifugación. Ventajosamente, los tubos (1)
son centrifugados a una aceleración comprendida entre 100 g y 5.000
g por una duración comprendida entre 30 segundos y 30 minutos. Las
condiciones de la centrifugación realizada al final de la etapa e)
del procedimiento son en general idénticas a las condiciones de la
centrifugación realizada en la etapa c) del procedimiento.
Al final de la centrifugación anterior, las
células precursoras se encuentran en el residuo del fondo de los
tubos (1). El sobrenadante líquido se elimina del tubo mediante
aspiración, gracias a una jeringa provista de una aguja estéril y
apirógena.
Después, el residuo celular de cada uno de los
tubos (1) se dispone de nuevo en suspensión en un medio isotónico
compatible con la inyección en el ser humano, como por ejemplo, un
medio isotónico del tipo Ringer-Lactate. El medio
isotónico se introduce en los tubos (1) con la ayuda de una jeringa
estéril provista de una aguja estéril y apirógena.
En caso necesario, las suspensiones celulares
así obtenidas son reunidas en un solo tubo (1), si su volumen lo
permite.
De manera facultativa, la fracción celular así
puesta de nuevo en suspensión puede ser sometida a una etapa de
filtración con la ayuda de un dispositivo de filtración de un tipo
descrito anteriormente en la presente descripción, que presenta una
membrana filtrante que tiene un tamaño de poro comprendido entre 40
\mum y 200 \mum, con el fin de eliminar de la fracción celular
los eventuales residuos indeseables de tejido adiposo o de tejido
conjuntivo presentes en el seno de la suspensión celular.
En los modos de realización del procedimiento de
la invención, en los que se realiza la etapa d2), las fracciones
celulares que contienen las células de adipocitos maduras son
sometidas a una centrifugación del mismo tipo que la descrita
anteriormente para la fracción celular procedente de la etapa d1), y
después es puesta de nuevo en suspensión en un medio isotónico
compatible con una inyección en el ser humano, por ejemplo del tipo
Ringer-Lactate.
De manera general, ya sea para las células
precursoras procedentes de la etapa d1) o para las células de
adipocitos maduras procedentes de la etapa d2), es deseable
realizar varias etapas de centrifugación y después nueva puesta en
suspensión de las fracciones celulares en un medio isotónico
(lavado) antes de la obtención de las fracciones celulares
respectivamente de células precursoras (PA) o de adipocitos maduros
(AM) finales que se pueden utilizar para la realización de la etapa
f) del procedimiento.
En la etapa f) del procedimiento, se realiza la
composición final que comprende unas células de la fracción (PA),
unas células de la fracción (AM) o una mezcla de células de fracción
(PA) y de células de la fracción (AM), por ejemplo con una relación
celular (PA)/(AM) comprendida entre 1/99 y 99/1, en caso necesario
en combinación con uno o varios principios activos farmacéuticos
y/o uno o varios excipientes farmacéuticamente aceptables. Por
ejemplo, se pueden combinar las células adipocitarias, con un
material de matriz, con el fin de obtener una composición final que
comprende unas células adipocitarias purificadas. Dicha composición
se puede utilizar de forma extemporánea y administrar directamente
en el ser humano o el animal.
El material de matriz puede consistir en un
material de matriz biológica, que se puede seleccionar de entre
todos los materiales de matriz biológica compatibles con una
administración en el ser humano o el animal, de un tipo conocido
por el experto en la materia. Ventajosamente, el material de matriz
biológica se selecciona de entre los materiales de matriz
reabsorbibles, que engloban el colágeno, el ácido hialurónico o
también unos hidrogeles tales como unos hidrogeles acrílicos que
pueden comprender también ácido hialurónico.
A título ilustrativo, un material de matriz
reabsorbible que comprende colágeno se puede seleccionar de entre
los materiales comercializados con los nombres Artecoll®, Zyderm®,
Zyplast® o también Autologen®.
A título ilustrativo, un material matriz
reabsorbible que comprende ácido hialurónico se puede seleccionar
de entre los materiales comercializados con los nombres Hylaform®,
Restylane®, Perlane®, Juvederm®, Hylan® o también Hydrafill®.
A título ilustrativo, un material matriz
reabsorbible a base de un hidrogel acrílico que comprende ácido
hialurónico se puede seleccionar de entre los materiales
comercializados con los nombres Derlakuve® o también Dermadeep®.
El material matriz se puede seleccionar asimismo
de entre los materiales matriz no reabsorbibles, que engloban los
materiales a base de polímeros naturales o sintéticos tales como el
politerafluoroetileno expandido, el poliéster expandido, el ácido
poli-L-láctico, las poliacrilamidas
reticuladas o también la
poli-alquil-imida.
A título ilustrativo, un material matriz no
reabsorbible a base de politetrafluoroetileno expandido se puede
seleccionar de entre los materiales comercializados con los nombres
Softform® o también Gortex®.
A título ilustrativo, un material matriz no
reabsorbible a base de poliéster expandido elástico se puede
seleccionar de entre los materiales comercializados con los nombres
M-SI Fil® o también Filladerm®.
A título ilustrativo, un material matriz no
reabsorbible a base de acido poli-L- láctico, por
ejemplo a base de microesferas de ácido
poli-L-l-actico,
puede consistir en un material comercializado con la denominación
New File®.
A título ilustrativo, un material matriz no
reabsorbible a base de una poliacrilamida reticulada puede consistir
en un material comercializado con la denominación Aquamid®.
A titulo ilustrativo, un material matriz no
reabsorbible a base de
poli-alquil-imida puede consistir en
un material comercializado bajo la denominación
Bio-alcamid®.
A título ilustrativo, se puede utilizar, como
material de matriz biológica, el ácido hialurónico reticulado o no
reticulado.
Ventajosamente, en la etapa f) del
procedimiento, la composición final que contiene las células
precursoras de adipocitos preparadas para el empleo para la
administración en el ser humano comprende una cantidad de material
matriz de 0,001 a 10 gramos de dicho material para un volumen de 100
mililitros de dicha composición final. Preferentemente, la
composición final preparada para el empleo comprende de 0,1 a 1
gramo de material matriz biológico, para un volumen de 100
mililitros de dicha composición final.
En la etapa f) del procedimiento, se puede, en
ciertos modos de realización, incluir en la composición final de
células adipocitarias un principio activo o una combinación de
principios activos farmacéuticos de uso humano o veterinario.
A título ilustrativo, la composición final de
células adipocitarias puede comprender uno o varios factores de
crecimiento, como por ejemplo un factor de crecimiento de los
fibroblastos (FGF), el factor de crecimiento de la epidermis (EGF)
o también un factor de estimulación de las colonias (CSF).
A título ilustrativo, una composición final
preparada para el empleo según la invención comprende de 0,2 a 0,5
gramos de ácido hialurónico no reticulado para 100 mililitros de
composición final.
De manera general, la composición final
preparada para el empleo según la invención comprende de 10^{3} a
10^{9} células de interés por mililitro de composición final,
mejor de 10^{4} a 10^{8} células de interés por mililitro de
composición final y aún mejor de 5 a 10x10^{6} células de interés
por mililitro de composición final.
En último lugar, la invención tiene por objeto
un tubo (1) estéril tal como el definido en detalle en la presente
descripción.
Claims (21)
1. Kit para preparar una composición que
comprende unas células adipocitarias, comprendiendo dicho kit:
- a)
- por lo menos un tubo estéril (1) apropiado para ser centrifugado, que comprende un cuerpo (11) y un tapón (12) que presenta un elemento de material elástico y retraíble, estando el cuerpo (11) herméticamente cerrado por el tapón (12), comprendiendo dicho tapón (12) un orificio de salida de aire (13) provisto de una membrana de filtro que tiene un tamaño de poro inferior a 0,30 \mum;
- b)
- por lo menos una aguja estéril que comprende un canal central, del que uno de los extremos está provisto de un dispositivo de fijación a una jeringa, y del que el otro extremo está en forma de bisel, siendo el diámetro del canal central de 3 milímetros o más, preferentemente de 5 milímetros o más.
2. Kit según la reivindicación 1,
caracterizado porque el tapón (12) del tubo estéril (1)
comprende por lo menos una superficie de perforación (14) estéril
recubierta por una película amovible (15).
3. Kit según la reivindicación 2,
caracterizado porque el tapón (12) del tubo estéril (1)
comprende de 2 a 5 superficies de perforación (14).
4. Kit según la reivindicación 2,
caracterizado porque el tapón (12) del tubo estéril (1)
comprende más de 5 superficies de perforación (14).
5. Kit según una de las reivindicaciones 1 a 4,
caracterizado porque el tubo estéril (1) contiene una
preparación enzimática apropiada para la digestión del tejido
adiposo, estando dicha preparación enzimática en forma líquida o en
forma liolifilizada.
6. Kit según una de las reivindicación 1 a 4,
caracterizado porque el tubo estéril (1) no comprende una
preparación enzimática.
7. Kit según la reivindicación 6,
caracterizado porque comprende un contenedor que contiene una
preparación enzimática apropiada para la digestión del tejido
adiposo, estando dicha preparación enzimática en forma líquida o en
forma liofilizada.
8. Kit según una de las reivindicaciones 1 a 7,
caracterizado porque comprende 2, 3, 4, 5, 6, 7 u 8 tubos
estériles (1).
9. Kit según una de las reivindicaciones 1 a 8,
caracterizado porque comprende un frasco que contiene un
medio hipotónico adaptado para la lisis de los hematíes.
10. Kit según una de las reivindicaciones 7 u 8,
caracterizado porque dicho medio hipotónico posee un pH
comprendido entre 7,2 y 7,6.
11. Kit según una de las reivindicaciones 1 a
10, caracterizado porque comprende un frasco que contiene un
medio isotónico adecuado para la nueva puesta en suspensión de las
células.
12. Kit según una de las reivindicaciones 1 a
11, caracterizado porque comprende por lo menos un
dispositivo estéril de filtración provisto de una membrana
filtrante que tiene un tamaño de poro comprendido entre 40 \mum y
200 \mum.
13. Kit según la reivindicación 12,
caracterizado porque el dispositivo estéril de filtración
comprende asimismo una aguja estéril de por lo menos 16 Gauges.
14. Kit según una de las reivindicaciones 1 a
13, caracterizado porque comprende asimismo por lo menos una
aguja de más de 18 Gauges.
15. Kit según una de las reivindicaciones 1 a
14, caracterizado porque comprende además un dispositivo (2)
que permite la obtención de una composición de mezcla de células
precursoras con una matriz biológica, estando dicho dispositivo
constituido por:
- (i)
- una primera jeringa (21) destinada a ser llenada con un volumen apropiado de una matriz biológica;
- (ii)
- una segunda jeringa (22) destinada a ser llenada con una suspensión de células precursoras en un medio isotónico; y
- (iii)
- un tubo (23) que une el orificio de salida de cada una de las jeringas (21, 22) poniendo dicho tubo (23) las jeringas (21), (22) en comunicación fluídica.
16. Procedimiento de obtención de una
composición que contiene unas células adipocitarias, que comprende
las etapas siguientes:
- a)
- introducir una suspensión de tejido adiposo procedente de un lipoaspirado o de una lipectomía en un tubo (1), tal como el definido en la reivindicación 1;
- b)
- realizar, en el tubo (1), una digestión enzimática de la suspensión de tejido adiposo con la ayuda de una preparación enzimática que contiene por lo menos una proteasa;
- c)
- centrifugar la suspensión después de la digestión enzimática;
- d)
- recoger las fracciones de la suspensión centrifugada que contienen las células de interés:
- d1)
- recoger la fracción (PA) de células precursoras adipocitarias localizadas en el residuo en el fondo del tubo (1);
- d2)
- en caso necesario, recoger la fracción de células adipocitos maduras (AM) encontradas en la parte superior de la suspensión de tejido adiposo centrifugada;
- e)
- incubar la fracción (PA) en una solución hipotónica, con el fin de realizar una lisis de los hematíes; y
- f)
- realizar una composición de células adipocitarias a partir de una de las fracciones celulares siguientes:
- f1)
- la fracción (PA) de células precursoras adipocitarias precursoras tal como la obtenida al final de la etapa e);
- f2)
- la fracción (AM) de células de adipocitos maduras tal como la obtenida en la etapa d1); y
- f3)
- una mezcla de las células de la fracción (PA), y de las células de la fracción (AM).
17. Procedimiento según la reivindicación 16,
caracterizado porque en la etapa f), cuando la mezcla se
realiza a la vez con las células de la fracción (PA) y con las
células de la fracción (AM), la relación celular (PA)/(AM) está
comprendida entre 1/99 y 99/1.
18. Tubo estéril (1) apropiado para ser
centrifugado, que comprende un cuerpo (11) y un tapón (12) que
comprende un elemento de material elástico y retraíble, estando el
cuerpo (11) herméticamente cerrado por el tapón (12), presentando
dicho tapón (12) un orificio de salida de aire (13) provisto de una
membrana de filtro que tiene un tamaño de poro inferior a 0,30
\mum.
19. Tubo estéril (1) según la reivindicación 18,
caracterizado porque el tapón (12) del tubo estéril (1)
comprende por lo menos una superficie de perforación (14) estéril
recubierta con una película amovible (15).
20. Tubo estéril (1) según una de las
reivindicaciones 18 y 19, caracterizado porque el tapón (12)
del tubo estéril (1) comprende por lo menos dos superficies de
perforación (14).
21. Tubo estéril (1) según una de las
reivindicaciones 18 a 20, caracterizado porque contiene una
preparación enzimática apropiada para la digestión del tejido
adiposo, estando dicha preparación enzimática en forma líquida o en
forma liofilizada.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR0552827A FR2890976B1 (fr) | 2005-09-20 | 2005-09-20 | Kit pour preparer une composition comprenant des cellules adipocytaires et procede d'obtention de ladite composition |
| FR0552827 | 2005-09-20 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2343142T3 true ES2343142T3 (es) | 2010-07-23 |
Family
ID=36540209
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES06831202T Active ES2343142T3 (es) | 2005-09-20 | 2006-09-20 | Kit para preparar una composicion que comprende unas celulas adipocitarias. |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20080318317A1 (es) |
| EP (1) | EP1926557B1 (es) |
| AT (1) | ATE461747T1 (es) |
| AU (1) | AU2006293780B8 (es) |
| CA (1) | CA2623170C (es) |
| DE (1) | DE602006013158D1 (es) |
| ES (1) | ES2343142T3 (es) |
| FR (1) | FR2890976B1 (es) |
| MA (1) | MA29801B1 (es) |
| TN (1) | TNSN08135A1 (es) |
| WO (1) | WO2007034115A1 (es) |
| ZA (1) | ZA200802779B (es) |
Families Citing this family (31)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030205538A1 (en) | 2002-05-03 | 2003-11-06 | Randel Dorian | Methods and apparatus for isolating platelets from blood |
| US7832566B2 (en) | 2002-05-24 | 2010-11-16 | Biomet Biologics, Llc | Method and apparatus for separating and concentrating a component from a multi-component material including macroparticles |
| US20060278588A1 (en) | 2002-05-24 | 2006-12-14 | Woodell-May Jennifer E | Apparatus and method for separating and concentrating fluids containing multiple components |
| US7845499B2 (en) | 2002-05-24 | 2010-12-07 | Biomet Biologics, Llc | Apparatus and method for separating and concentrating fluids containing multiple components |
| US8567609B2 (en) | 2006-05-25 | 2013-10-29 | Biomet Biologics, Llc | Apparatus and method for separating and concentrating fluids containing multiple components |
| US7806276B2 (en) | 2007-04-12 | 2010-10-05 | Hanuman, Llc | Buoy suspension fractionation system |
| US8328024B2 (en) | 2007-04-12 | 2012-12-11 | Hanuman, Llc | Buoy suspension fractionation system |
| PL2259774T3 (pl) | 2008-02-27 | 2013-04-30 | Biomet Biologics Llc | Sposoby i kompozycje dla wprowadzania antagonisty receptora interleukiny-1 |
| WO2009111338A1 (en) * | 2008-02-29 | 2009-09-11 | Biomet Manufacturing Corp. | A system and process for separating a material |
| AU2009201915C1 (en) * | 2008-08-22 | 2015-02-26 | Regeneus Ltd | Therapeutic methods |
| US8187475B2 (en) | 2009-03-06 | 2012-05-29 | Biomet Biologics, Llc | Method and apparatus for producing autologous thrombin |
| US8313954B2 (en) | 2009-04-03 | 2012-11-20 | Biomet Biologics, Llc | All-in-one means of separating blood components |
| US9011800B2 (en) | 2009-07-16 | 2015-04-21 | Biomet Biologics, Llc | Method and apparatus for separating biological materials |
| US8591391B2 (en) | 2010-04-12 | 2013-11-26 | Biomet Biologics, Llc | Method and apparatus for separating a material |
| US10130736B1 (en) | 2010-05-14 | 2018-11-20 | Musculoskeletal Transplant Foundation | Tissue-derived tissuegenic implants, and methods of fabricating and using same |
| US9352003B1 (en) | 2010-05-14 | 2016-05-31 | Musculoskeletal Transplant Foundation | Tissue-derived tissuegenic implants, and methods of fabricating and using same |
| US8883210B1 (en) | 2010-05-14 | 2014-11-11 | Musculoskeletal Transplant Foundation | Tissue-derived tissuegenic implants, and methods of fabricating and using same |
| US8834928B1 (en) | 2011-05-16 | 2014-09-16 | Musculoskeletal Transplant Foundation | Tissue-derived tissugenic implants, and methods of fabricating and using same |
| US20140024011A1 (en) * | 2012-07-23 | 2014-01-23 | AdiCyte, Inc. | Method for Preparing Adipose Tissue |
| US9642956B2 (en) | 2012-08-27 | 2017-05-09 | Biomet Biologics, Llc | Apparatus and method for separating and concentrating fluids containing multiple components |
| US20140271589A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-18 | Biomet Biologics, Llc | Treatment of collagen defects using protein solutions |
| US10208095B2 (en) | 2013-03-15 | 2019-02-19 | Biomet Manufacturing, Llc | Methods for making cytokine compositions from tissues using non-centrifugal methods |
| US9895418B2 (en) | 2013-03-15 | 2018-02-20 | Biomet Biologics, Llc | Treatment of peripheral vascular disease using protein solutions |
| US9950035B2 (en) | 2013-03-15 | 2018-04-24 | Biomet Biologics, Llc | Methods and non-immunogenic compositions for treating inflammatory disorders |
| US10143725B2 (en) | 2013-03-15 | 2018-12-04 | Biomet Biologics, Llc | Treatment of pain using protein solutions |
| US20150037436A1 (en) | 2013-07-30 | 2015-02-05 | Musculoskeletal Transplant Foundation | Acellular soft tissue-derived matrices and methods for preparing same |
| WO2016187413A1 (en) | 2015-05-21 | 2016-11-24 | Musculoskeletal Transplant Foundation | Modified demineralized cortical bone fibers |
| US10912864B2 (en) | 2015-07-24 | 2021-02-09 | Musculoskeletal Transplant Foundation | Acellular soft tissue-derived matrices and methods for preparing same |
| US11052175B2 (en) | 2015-08-19 | 2021-07-06 | Musculoskeletal Transplant Foundation | Cartilage-derived implants and methods of making and using same |
| CN106264776B (zh) * | 2016-10-26 | 2018-08-17 | 王东 | 脂肪乳糜化方法 |
| FR3068986B1 (fr) | 2017-07-12 | 2019-08-09 | Stemcis | Dispositif de fragmentation mecanique de tissus destine a la preparation d'une composition de cellules isolees, procede correspondant |
Family Cites Families (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3654926A (en) * | 1969-11-17 | 1972-04-11 | Parke Davis & Co | Mixing vial |
| US4198974A (en) * | 1978-11-09 | 1980-04-22 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Combination stopper for use in medical and chemical sampling or testing |
| US4236647A (en) * | 1979-01-15 | 1980-12-02 | Kotturan Paulson A | Container for sterile liquids |
| US4358425A (en) * | 1981-02-17 | 1982-11-09 | Beckman Instruments, Inc. | Penetrable centrifuge tube |
| US4364903A (en) * | 1981-04-02 | 1982-12-21 | Becton, Dickinson And Company | Contamination-free separation device |
| US5632396A (en) * | 1993-05-06 | 1997-05-27 | Becton, Dickinson And Company | Combination stopper-shield closure |
| US5830741A (en) * | 1996-12-06 | 1998-11-03 | Boehringer Mannheim Corporation | Composition for tissue dissociation containing collagenase I and II from clostridium histolyticum and a neutral protease |
| ES2258329T3 (es) * | 1998-03-18 | 2006-08-16 | Osiris Therapeutics, Inc. | Celulas madre mesenquimaticas para la prevencion y tratamiento de respuestas inmunes en trasplantes. |
| US20030082152A1 (en) * | 1999-03-10 | 2003-05-01 | Hedrick Marc H. | Adipose-derived stem cells and lattices |
| US6508987B1 (en) * | 1999-08-06 | 2003-01-21 | Becton, Dickinson And Company | Biological fluid collection device with a pivotable faucet |
| US6382441B1 (en) * | 2000-03-22 | 2002-05-07 | Becton, Dickinson And Company | Plastic tube and resealable closure having protective collar |
| US6526812B2 (en) * | 2001-07-14 | 2003-03-04 | Leap Technologies, Inc. | Self-washing injection apparatus |
| US20030161816A1 (en) * | 2001-12-07 | 2003-08-28 | Fraser John K. | Systems and methods for treating patients with processed lipoaspirate cells |
| US20050095228A1 (en) * | 2001-12-07 | 2005-05-05 | Fraser John K. | Methods of using regenerative cells in the treatment of peripheral vascular disease and related disorders |
| US20040101959A1 (en) * | 2002-11-21 | 2004-05-27 | Olga Marko | Treatment of tissue with undifferentiated mesenchymal cells |
| ITRM20040397A1 (it) * | 2004-08-04 | 2004-11-04 | Univ Roma | Dispositivo monouso per una o piu' introduzioni, trattamento e prelievi di materiale biologico da almeno una delle fasi di separazione, presenti all'interno del dispositivo, in condizioni di sterilita' e a pressione costante. |
-
2005
- 2005-09-20 FR FR0552827A patent/FR2890976B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
2006
- 2006-09-20 ES ES06831202T patent/ES2343142T3/es active Active
- 2006-09-20 DE DE602006013158T patent/DE602006013158D1/de active Active
- 2006-09-20 WO PCT/FR2006/050913 patent/WO2007034115A1/fr active Application Filing
- 2006-09-20 AU AU2006293780A patent/AU2006293780B8/en active Active
- 2006-09-20 AT AT06831202T patent/ATE461747T1/de not_active IP Right Cessation
- 2006-09-20 CA CA2623170A patent/CA2623170C/fr active Active
- 2006-09-20 EP EP06831202A patent/EP1926557B1/fr active Active
- 2006-09-20 US US12/067,493 patent/US20080318317A1/en not_active Abandoned
-
2008
- 2008-03-19 MA MA30776A patent/MA29801B1/fr unknown
- 2008-03-19 TN TNP2008000135A patent/TNSN08135A1/fr unknown
- 2008-03-28 ZA ZA200802779A patent/ZA200802779B/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ZA200802779B (en) | 2008-12-31 |
| WO2007034115A1 (fr) | 2007-03-29 |
| AU2006293780B2 (en) | 2011-06-16 |
| CA2623170A1 (fr) | 2007-03-29 |
| FR2890976A1 (fr) | 2007-03-23 |
| ATE461747T1 (de) | 2010-04-15 |
| FR2890976B1 (fr) | 2007-12-14 |
| MA29801B1 (fr) | 2008-09-01 |
| CA2623170C (fr) | 2013-05-28 |
| US20080318317A1 (en) | 2008-12-25 |
| DE602006013158D1 (de) | 2010-05-06 |
| EP1926557A1 (fr) | 2008-06-04 |
| AU2006293780B8 (en) | 2011-07-14 |
| TNSN08135A1 (fr) | 2009-07-14 |
| EP1926557B1 (fr) | 2010-03-24 |
| AU2006293780A1 (en) | 2007-03-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2343142T3 (es) | Kit para preparar una composicion que comprende unas celulas adipocitarias. | |
| US8802362B2 (en) | Methods and devices for separating liquid components | |
| US6841170B2 (en) | Process for preparing an autologous platelet gel and membrane thereof | |
| US9931445B2 (en) | System and methods for preparation of adipose-derived stem cells | |
| US20180221550A1 (en) | System and methods for preparation of adipose-derived stem cells | |
| US20090258056A1 (en) | Systems and methods for preparing autologous fibrin glue | |
| US11766459B2 (en) | System and methods for preparation of adipose-derived stem cells | |
| CN111542350B (zh) | 用于制备脂肪来源干细胞的系统和方法 | |
| EP2980206A1 (en) | Methods of using regenerative cells in the treatment of musculoskeletal disorders | |
| US10563173B2 (en) | Autoserum-containing bone marrow cell culture system, autoserum-containing bone marrow cell culture method, and method for producing medicinal composition comprising autoserum-containing cultured bone marrow cells as active ingredient | |
| JP2012006937A (ja) | 液体成分を分離する方法及び装置 | |
| CN100497580C (zh) | 细胞处理装置、组织再生用组合物及组织再生方法 | |
| CN112843338B (zh) | 一种制备含胶原蛋白的间充质干细胞注射剂的方法 | |
| US20240016851A1 (en) | System and Methods for Preparation of Adipose-Derived Stem Cells |