ES2216712B2 - Derivados de nitroprolinas. - Google Patents
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Abstract
La presente invención se refiere a compuestos derivados de nitroprolinas quirales con carbonos C2, C3, C4, C5 y C3-1'' de configuración (R) o (S), que presentan la siguiente fórmula I: **FIGURA** donde: R1, R3 y R4 representan indistintamente un grupo seleccionado entre un radical C1-C6 alquilo (lineal o ramificado), bencilo, bencilo sustituido y arilo; R2 representa un átomo de hidrógeno; y (X) representa un grupo seleccionado entre metileno y el(R)/(S)-C1-C6 alquilmetileno, así como al procedimiento para su preparación, a compuestos intermedios y al uso de los compuestos de fórmula I para el tratamiento de la metástasis cancerosa.
Description
Derivados de nitroprolinas.
La invención se relaciona con nuevos compuestos
derivados de nitroprolinas, con procedimientos para su preparación
y con el uso de los mismos como agentes para el tratamiento de la
metástasis cancerosa, al inhibir éstos la adhesión de las células
cancerosas a la pared vascular.
La síntesis de anillos de pirrolidina se puede
llevar a cabo mediante reacciones I,3-dipolares
entre iluros de azometino y compuestos insaturados, tales como
alquenos y alquinos (Kanemasa y Tsuge, en Advances in Cycloaddition
Chemistry; Curran, D.P., Ed.. Jai Press: Greenwich, CT, 1993;
Vol.3, pp 99-159).
También es conocida la reacción entre iluros de
azometino y compuestos carbonílicos alfa,
beta-insaturados homoquirales para la preparación
estereocontrolada de pirrolidinas quirales altamente sustituidas
(Annunciatta y colab., Tetrahedron: Asymmetry 1991, 2, 1329.
Galley y colab. J. Org. Chem. 1995, 60, 5005. Barr y colab.
Tetrahedron 1995, 51, 273. Waldmann y colab. Chem. Eur. J. 1995, 1,
150). Además, es conocida la reacción entre iluros de azometinos
metalados con nitroalquenos homoquirales derivados del
L-lactato de metilo y del isopropilidén
gliceraldehído, que da lugar a anillos de pirrolidina homoquirales
con estereocontrol moderado (Ayerbe y colab. J. Org. Chem. 1998,
63, 1795).
Por otro lado, es sabido que los procesos de
complejación integrina-ligando están involucrados
en la metástasis cancerosa. En particular, la unión de la integrina
VLA-4 (antígeno de aparición
tardía-1) con el ligando VCAM-1
(molécula de adhesión celular-1) está involucrada
en la metástasis de melanoma (Quian y colab. Cell 1994, 77, 335),
cáncer renal (Tomita y colab. Int. J. Cancer 1995, 60, 753), cáncer
de huesos (Matsumura y colab. Am. J. Pathol. 1996, 148, 55),
cáncer de estómago (Yasoshima y colab., Jpn. Cancer Res. 1996, 87,
153) y linfoma (Papadimitron y colab., Clin. Exp. Metastasis 1999,
17, 669). La formación de metástasis por las células tumorales
circulantes requiere un proceso previo de adhesión tumoral a la
pared endotelial del sistema vascular que está regulado por
moléculas de adhesión activadas por factores proinflamatorios
(citocinas) (Weiss y colab. Clin Exp Metastasis 1989;7:127).
Utilizando el melanoma murino B16, se ha demostrado que la
implantación de las células tumorales en el sistema microvascular
del hígado (sinusoides hepáticos) precede a la formación de
metástasis. El proceso está regulado por factores solubles
liberados por las propias células tumorales del melanoma. Tales
factores activan la expresión de la molécula de adhesión
VCAM-1 sobre la superficie del endotelio sinusoidal
hepático, lo que a su vez permite la adhesión endotelial de las
células del melanoma que expresan la integrina
VLA-4 (ligando de VCAM-1). Esta
etapa condiciona otras posteriores en el proceso de metástasis
porque los anticuerpos dirigidos contra la VCAM-1
endotelial o la integrina VLA-4 previenen la
formación de metástasis (Mendoza y colab. Hepatology
2001;34:298-310). Sin embargo, la
VCAM-1 aparece al término de una cascada de
citocinas proinflamatorias, generada por el endotelio activado, en
la que sucesivamente participan el TNF-\alpha,
la IL-1\beta y la IL-18
(Vidal-Vanaclocha y colab. Proc. Natl. Acad. Sci.
USA 2000, 97, 734). Ésta última induce la expresión endotelial de
VCAM-1 a través de un mecanismo dependiente de
H_{2}O_{2} (Mendoza y colab. Hepatology 2001;34:298).
Aunque diversos investigadores han preparado
inhibidores no naturales de la interacción in vitro entre
VLA-4 y VCAM-1 (Boer y colab.,
Angew. Chem. Int. Ed. 2001, 40, 3870; Wattanassin y colab..,
Bioorg. Med. Chem. Lett. 2001, 11, 2955; Kopla y colab., Bioorg.
Med. Chem. Lett. 2002, 12, 637; Chen y colab. Bioorg. Med. Chem.
Lett. 2002, 12, 137; Lin y colab., Bioorg. Med. Chem. Lett. 2002,
12, 133), dichos compuestos sólo han sido probados en modelos de
adhesión in vitro no relacionados con la metástasis
cancerosa, por lo que su efectividad en este campo no ha sido
probada. Por otra parte, dichos compuestos no poseen buenas
propiedades farmacodinámicas, bien porque su absorción in
vivo no es adecuada o es desconocida, o bien porque su
naturaleza peptídica, basada en aminoácidos cíclicos naturales, los
hace fácilmente degradables por los enzimas proteolíticos. Así por
ejemplo, se ha publicado que algunos péptidos bicíclicos
incluyendo secuencias RGD inhiben la adhesión de células tumorales
a través de su interacción con integrinas de tipo
\alpha_{v}\beta_{3} y \alpha_{v}\beta_{5}, pero no de
tipo \alpha_{4}\beta_{1}. Sin embargo, estos péptidos, muy
inestables en condiciones fisilógicas, no han sido probados en
experimentos con organismos completos (de Groot y colab. Mol.
Cancer Therapeutics 2002, 1, 901). Asimismo, recientemente se ha
publicado la inhibición experimental de la metástasis cancerosa en
pulmón, hígado y riñones de ratones por el agente inmunosupresor
BTY720 (un
2-amino-1,3-propanodiol
acíclico), presumiblemente a través un proceso diferente como es
la reducción de la expresión de integrinas, si bien el carácter
hipotético del mecanismo de acción antimetastática dificulta el
desarrollo de otros agentes relacionados estructuralmente (Azuma y
colab. Cancer Res. 2002, 62, 1410).
En este contexto, hay que señalar que la
preparación y utilización de derivados de nitroprolinas en la
inhibición de la adhesión celular es desconocida. Asimismo, es
desconocida la capacidad de estos últimos compuestos para inhibir la
adhesión vascular de las células tumorales y sus metástasis.
Existe por tanto en el estado de la técnica la
necesidad de inhibidores alternativos de la unión entre
VLA-4 y VCAM-1, que además presenten
ventajas como pueden ser las buenas propiedades farmacodinámicas,
la estabilidad química en fase sólida y en disolución, la
facilidad y eficiencia de la síntesis química y, finalmente, la
accesibilidad y variabilidad de los reactivos de partida.
La figura 1A muestra un gráfico donde se pone de
manifiesto el porcentaje de adhesión entre células de melanoma (MB
16) tratadas con los compuestos Ia, Ib, Ic, Id, Ie v If, y células
del endotelio del sinusoide hepático (ESH), tratadas y no tratadas
previamente con TNF-\alpha.
La figura 1B muestra otro gráfico en el que se
analiza el porcentaje de adhesión entre células MB 16 tratadas con
concentraciones crecientes del compuesto Ie y células del ESH
tratadas y sin tratar con TNF-\alpha. La
inhibición máxima de la adhesión se alcanza a la concentración de
50 \mug/millón de células.
La figura 2 representa el porcentaje de adhesión
de células MB16 tratadas con concentraciones crecientes del
compuesto Ie y VCAM-1 humana recombinante,
inmovilizada en placas de 96 pocillos. Este ensayo demuestra que el
efecto antiadhesivo se debe al bloqueo de la unión
VLA-4/VCAM-1.
La figura 3A pretende demostrar la retención
microvascular hepática in vivo de células MB16 tratadas con Ie, en
ratones C57BL/6J. Las unidades de luz relativas emitidas tras el
lisado del hígado cuantifican la adhesión que se ha producido en
este, en las primeras 18 horas. La preincubación de las células MB16
con Ie disminuye la retención intrahepática de estas células un
50%.
La figura 3B, en consonancia con la anterior,
relaciona la luminiscencia con la cantidad de células que han
producido metástasis al hígado.
La figura 3C es una imagen de los hígados de los
ratones inoculados con células MB16, sin tratar en un caso y
tratadas con dosis variables de Ie en el otro.
La figura 3D representa la densidad de metástasis
obtenida en ratones inoculados con células MB16 tratadas y sin
tratar con Ie, expresada en n° de focos/unidad de volumen de
hígado. Asimismo, también se representa la densidad de metástasis
en función de su tamaño, siendo las metástasis de tamaño grande y
mediano las que se ven más afectadas por el tratamiento con Ie.
La presente invención tiene por objeto los
derivados de nitroprolinas de fórmula general I:
así como los de fórmula general
II:
Asimismo, otro objeto de la presente invención es
la preparación de dichos compuestos de fórmula general I y II.
Otro objeto adicional de la invención es el uso
de estos derivados para el tratamiento de la metástasis
cancerosa.
Por último, esta invención tiene por objeto la
elaboración de una composición farmacéutica que comprenda al menos
uno de los nuevos derivados de nitroprolinas.
En primer lugar, la presente invención
proporciona unos compuestos derivados de nitroprolinas quirales con
carbonos C2, C3, C4, C5 y C3-1' de configuración
(R) o (S), que presentan la siguiente fórmula I:
donde
:
R^{1}, R^{3} y R^{4} representan
indistintamente un grupo seleccionado entre un radical
C1-C6 alquilo (lineal o ramificado), bencilo,
bencilo sustituido y arilo;
R^{2} representa un átomo de hidrógeno; y
(X) representa un grupo seleccionado entre
metileno y el (R)/(S)- C1-C6 alquilmetileno.
En una realización preferida dichos compuestos de
fórmula I son:
-
[(2S,3R,4S,5S)-3-[(1S,2S)-1-Benciloxi-2-etilbutil]-4-nitro-5-fenil]pirrolidín-2-carboxilglicina,
-
[(2S,3R,4S,5S)-3-[(1S,2S)-1-(2-Fluorofenil)metoxi-2-metilbutil]-4-nitro-5-fenil]pirrolidín-2-carboxilglicina,
-
[(2S,3R,4S,5S)-3-[(1S,2S)-1Benciloxi-metilbutil)-5-(4-clorofenil]-4-nitro]pirrolidín-2-carboxilglicina,
-
[(2S,3R,4S,5S)-3-(1-(S)-Benciloxi-2-metilpropil)-5-(2-metoxifenil)-4-nitro]pirrolidín-2-carboxilglicina,
y
-
[(2S,3R,4S,5S)-3-(1-(S)-(3,5-Difluorofenil)metoxi-2-metilpropil)-4-nitro-5-fenil]pirrolidin-2-carboxilglicina.
El procedimiento para la preparación de
compuestos derivados de nitroprolinas quirales de formula I
comprende hacer reaccionar en un disolvente orgánico, una mezcla
que comprende:
a) un compuesto derivado de nitroprolina quiral
con carbonos C2, C3, C4, C5 y C3-1' de
configuración (R) o (S), de la siguiente fórmula II,
donde:
R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4} tienen la
significación dada anteriormente;
b) una sal de un alfa- o
beta-aminoéster con la siguiente fórmula III,
\vskip1.000000\baselineskip
donde:
(X) tiene la significación dada
anteriormente,
A^{-} representa un grupo seleccionado entre un
anión cloruro, bromuro, yoduro, mesilato o tosilato, y
R^{5} representa un grupo C1-C6
alquilo o arilo;
c) un reactivo de activación del grupo carboxilo,
y
d) una base orgánica terciaria, seleccionada
entre las alifáticas con C3-C10 carbonos o
alcanoaromáticas con C9-C15 carbonos.
Para los fines de la invención, la mezcla de
reacción formada por los cuatro componentes arriba indicados se
puede realizar adicionando uno de los compuestos a la mezcla
previa de los otros tres en el disolvente orgánico y a la
temperatura de -85°C a +25°C, preferentemente a temperaturas
próximas a cero grados centígrados. Luego se deja un tiempo para
completar la reacción, pudiendo alcanzar la temperatura ambiente.
Una vez separado el éster resultante de la reacción de acoplamiento
anterior, dicho producto se hace reaccionar con una mezcla de
hidróxido de litio, dimetoxietano y agua, rindiendo así, tras el
tratamiento correspondiente, los compuestos de la fórmula I antes
especificados.
La preparación del compuesto de fórmula II
mencionado anteriormente, se efectúa en un disolvente orgánico, tal
como el acetonitrilo o el éter etílico, haciendo reaccionar una
mezcla que comprende:
a) un nitroalqueno quiral (R) o (S) con la
siguiente fórmula IV,
donde R^{3} y R^{4} tienen la
significación dada
anteriormente;
b) una imina generalmente quiral de configuración
(R) o (S) con la siguiente fórmula V,
donde R^{2} tiene la
configuración dada anteriormente, y R^{5} representa un grupo
C1-C6 alquilo o
arilo;
c) una sal metálica, preferentemente seleccionada
entre el acetato de plata, el perclorato de plata o el perclorato
de litio, y
d) una base orgánica terciaria, seleccionada
entre las alifáticas con C3-C10 carbonos o alcano
aromáticos con C9-C15 carbonos.
Para los fines de la invención, la mezcla de
reacción formada por los cuatro componentes arriba indicados se
puede realizar adicionando uno de los componentes a la mezcla
previa de los otros tres, en el disolvente orgánico y a la
temperatura de -25°C a +25°C, preferentemente a temperaturas
próximas a cero grados centígrados. Se deja un tiempo para
completar la reacción, pudiendo alcanzar la temperatura ambiente.
Una vez separado el éster resultante de la reacción de
cicloadición anterior, dicho producto se hace reaccionar con una
mezcla de hidróxido de litio, dimetoxietano y agua, rindiendo así,
tras el tratamiento correspondiente, los compuestos de la fórmula
II especificada.
Un aspecto adicional de esta invención se refiere
al uso de los compuestos de fórmula general I para el tratamiento
de la metástasis cancerosa. El mecanismo de acción de dichos
compuestos se explica por sus propiedades antagonistas con la
integrina VLA-4 expresadas por las células
tumorales. Dichas propiedades impiden o bloquean la unión
VLA-4/VCAM-l. lo que se traduce en
una inhibición de la adhesión de las células tumorales a las
paredes vasculares y por lo tanto, en una inhibición de la
metástasis.
Un último aspecto de la invención supone la
elaboración de una composición que comprenda al menos uno de los
compuestos de formulas generales I y uno o más excipientes
farmacéuticamente aceptables. Los compuestos de formula I de la
presente invención pueden ser administrados tanto como sustancia
pura, como en forma de formulaciones farmacéuticas., aunque es
preferible la administración del compuesto de forma combinada. La
combinación del medicamento es preferiblemente en forma de una
formulación la cual (1) contenga el compuesto de fórmula general I
solo (2) contenga uno o más excipientes y/o sustancias
transportadoras y (3) pueda contener alguna sustancia adicional
terapéuticamente activa.
Los excipientes, sustancias transportadoras y
sustancias auxiliares tienen que ser famacéuticamente y
farmacológicamente tolerables, de modo que puedan ser combinados
con otros componentes de la formulación o preparación y no ejerzan
efectos adversos en el organismo tratado.
Las formulaciones incluyen aquellas que son
adecuadas para la administración oral o parenteral (incluyendo
subcutánea, intradérmica, intramuscular e intravenosa), aunque la
mejor vía de administración depende del estado del paciente.
Las formulaciones pueden ser en forma de dosis
sencillas. Las formulaciones se preparan de acuerdo con métodos
conocidos en el campo de la farmacología. Las cantidades de
sustancias activas para administrarse pueden variar en función de
las particularidades de la terapia.
Para facilitar la comprensión de las ideas
precedentes, se describen seguidamente unos ejemplos de realización
de la presente invención de carácter meramente ilustrativo.
A una disolución de L-valina (2.92 g, 25.0
mmol) en H_{2}SO_{4} 2N (37.5 ml, solución acuosa), enfriada a
0°C, le fue adicionada una disolución de NaNO_{2} 2N (2.57 g,
37.0 mmol) en agua (9 ml). La temperatura fue mantenida por debajo
de 5°C durante la adición, y la mezcla fue enfriada durante 24 h.
La solución fue saturada con (NH_{4})_{2}SO_{4},
extraída con éter (3x25 ml), secada sobre Na_{2}SO_{4} y
evaporada a presión reducida rindiendo 2.72 g (23.0 mmol) de ácido
(S)-2-hidroxi-3-metilbutanoico
como un aceite. Una solución de este material aceitoso, ácido
p-toluensulfonico monohidratado (0.03 g, 0.16 mmol)
y dimetoxipropano (2.8 ml, 23.0 mmol) en metanol (1.15 ml) fue
calentada a 45°C durante 24 h. La mezcla de reacción fue evaporada
bajo presión reducida rindiendo 2.64 g (20.0 mmol) de
(S)-2-hidroxi-3-metilbutanoato
de metilo como un aceite. Este material en tetrahidrofurano
anhidro (40 ml) y N,N-dimetilformamida anhidra (12
ml), bajo atmósfera inerte, fue enfriado a 0°C. NaH (0.48 g, 20.0
mmol) fue adicionado y la mezcla fue agitada durante 10 min.
Iodopentano (3.13 ml, 24.0 mmol) fue adicionado gota a gota, y la
mezcla fue llevada hasta temperatura ambiente. La reacción fue
monitorizada por TLC (cromatografia de capa fina). Finalizada la
reacción la mezcla fue diluida en éter (130 ml) y lavada con agua
(3x50 ml). La fase orgánica Ilie secada sobre Na_{2}SO_{4} y
evaporada a presión reducida, obteniéndose 2.53 g de un aceite.
El producto fue purificado por cromatografía en columna flash,
rindiendo 1.90 g (9.4 mmol, 38%) de un aceite incoloro: p.e.
60-61°C (0.5 mm Hg); IR 1754 cm^{-1};
^{1}H-RMN (\delta ppm. CDC1_{3}) 3.73 (s, 3H),
3.61-3.50 (m, 2H), 3.32-3.21 (m,
1H), 2.07-1.97 (m, 1H), 1.67-1.52
(m, 2H), 1.39-1.20 (m, 4H),
0.96-0.85 (m, 9H); ^{13}C-RMN
(\delta ppm, CDCl_{3}) 173.3, 84.5, 71.0, 51.5, 31.6, 29.2,
28.1, 22.4, 18.6, 17.8, 14.0; [\alpha]^{25}_{D}= -37.8
(c= 1.0, CH_{2}Cl_{2}).
El compuesto del título fue preparado de un modo
similar al Ejemplo 1 utilizando bromuro de
(3,5-difluorofenil)metoxilo en lugar de un
ioduro. Rendimiento: 32%. p.e. 70-72°C (0.5 mm
Hg); IR 1750, 1115 cm^{-1}; ^{1}H-RMN (\delta
ppm, CDCl_{3}) 6.90-6.84 (m, 2H),
6.75-6.66 (m, 1H), 4.66 (d, 1H, J= 12.4 Hz), 4.33
(d, 1H, J= 12.4 Hz), 3.76 (s, 3H), 3.72 (d, 1H, J= 5.3 Hz),
2.17-2.08 (m, 1H), 0.98 (d, 6H, J= 8.4 Hz);
^{13}C-RMN (\delta ppm, CDCl_{3}) 172.4,
165.5, 165.3, 160.6, 160.3, 142.1, 141.9, 141.7, 110.2, 110.0,
109.9, 109.7, 103.3, 102.8, 102.3, 83.7, 71.1, 51.6, 31.6, 18.7,
17.5; [\alpha]^{25}_{D} = -64.4 (c= 1.05,
CH_{2}Cl_{2}).
Este material fue preparado utilizando
L-isoleucina en lugar de L-valina siguiendo un
procedimiento sustancialmente similar al utilizado en el Ejemplo 1,
obteniéndose el compuesto del título. Rendimiento: 48%. p.e.
77-78°C (0.3 mm Hg); IR 1744, 1207 cm^{-1};
^{1}H-RMN (\delta ppm, CDCl_{3})
7.25-7.03 (m, 3H), 4.70 (d, 1H, J= 12.2 Hz), 4.48
(d, 1H, J= 12.8 Hz), 3.78 (d, 1H. J= 5.7 Hz), 3.75 (s. 3H),
1.93-1.77 (m, 1H), 1.59-1.42 (m,
1H), 1.36-1.13 (m, 1H), 0.92-0.82
(m, 6H); ^{13}C-RMN (\delta ppm, CDCl_{3})
172.6, 152.9, 152.6, 151.1, 150.9, 148.0, 147.7, 146.2, 145.9,
127.4, 127.1, 124.9, 124.8, 124.7, 124.1, 124.0, 123.9, 116.8,
116.5, 8:3.2, 65.7, 65.6, 65.5, 51.7, 38.0, 24.6, 15.2, 11.3;
[\alpha]^{25}_{D}; = -56.7 (c= 0.4,
CH_{2}Cl_{2}).
Una disolución de hidruro de aluminio (0.76 g,
20.0 mmol) en éter anhidro (30 ml), bajo atmósfera inerte, fue
enfriada a 0°C.
(2S,3S)-2-(3,5-difluorofenil)metoxi-3-metilpentanoato
de metilo (5.45 g, 20.0 mmol) en éter anhidro (40 ml) fue
adicionado gota a gota, y la mezcla fue agitada a temperatura
ambiente durante 3 h. A continuación, la mezcla de reacción fue
enfriada en baño de hielo y tratada con agua (130 ml). El crudo
fue filtrado a través de celita, y el filtrado fue lavado con agua
(3x80 ml). La capa orgánica fue secada sobre Na_{2}SO_{4} y
evaporada a presión reducida, obteniéndose 4.78 g de un aceite. El
producto fue purificado por destilación a presión reducida
utilizando un aparato de destilación Kugelrohr, rindiendo 4.29 g
(17.6 mmol, 87.8%) de un aceite incoloro: p.e.
90-92°C (0.7 mm Hg); IR 3441, 1115 cm^{-1};
^{1}H-RMN (\delta ppm, CDCl_{3})
6.93-6.66 (m, 3H), 4.60 (d, 1H, J= 11.5Hz), 4.52
(d, 1H, J= 12.0 Hz), 3.76-3.59 (m, 2H),
3.40-3.32 (m, 1H), 1.84-1.62 (m,
2H), 1.59-1.42 (m, 1H), 1.30-1.08
(m, 1H), 0.95-0.88 (m, 6H);
^{13}C-RMN (\delta ppm, CDCl_{3}) 165.6,
165.3, 160.7, 160.4, 142.9, 142.7, 142.5, 110.1, 109.9, 109.8,
109.6, 103.3, 102.7, 102.2, 84.2, 70.7, 61.7, 35.5, 25.4, 14.3,
11.7; [\alpha]^{25}_{D} = +7.4 (c= 0.95,
CH_{2}Cl_{2}).
Este material fue preparado por un procedimiento
sustancialmente similar al del Ejemplo 4, obteniéndose el compuesto
del título (Rdto.: 70%): p.e. 80-81°C (0.1 mm Hg);
IR 3435 cm^{-1}; ^{1}H-RMN (\delta ppm,
CDCl_{3}) 3.66-3.46 (m, 4H),
3.09-3.01 (m, 1H), 2.06 (t_{b}, 1H, J= 6.6 Hz),
2.00-1.80 (m, 1H), 1.70-1.48 (m,
2H), 1.40-1.15 (m, 8H), 0.96-0.80
(m, 9H); ^{13}C-RMN (\delta ppm, CDCl^{3})
85.1, 70.5, 61.5, 31.7, 30.1, 29.1, 28.9, 26.1, 22.5, 18.6, 18.1,
13.9; [\alpha]^{25}_{D} = +5.9 c= 1.14,
CH_{2}Cl_{2}).
Este material fue preparado por un procedimiento
sustancialmente similar al del Ejemplo 4, obteniéndose el compuesto
del título (Rdto.: 64%): p.e. 80-82°C (0.6 mm Hg);
IR 3406, 1232 cm^{-1}; ^{1}H-RMN (\delta ppm,
CDCl_{3}) 7.44-6.99 (m, 4H),
4.72-4.58 (m, 2H), 3.78-3.53 (m,
2H), 3.30-3.22 (m, 1H), 2.08-1.86
(m, 2H), 0.97 (d, 3H, J= 6.8 Hz), 0.92 (d, 3H, J= 6.8 Hz);
^{13}C-RMN (\delta ppm, CDCl_{3}) 163.2,
158.2, 130.2, 130.1, 129.5, 129.3, 125.6, 125.3, 124.0, 123.9,
115.4, 114.9, 85.3, 66.2, 66.1, 61.7, 28.9, 18.5, 18.1;
[\alpha]^{25}_{D}; = +2.0 (c= 1.96,
CH_{2}Cl_{2}).
Una disolución de cloruro de oxalilo (1.82 ml,
21.0 mmol) en cloruro de metileno anhidro (42 ml), bajo atmósfera
inerte, fue enfriada a -70°C. Dimetil sulfoxido anhidro (1.96 ml,
28.0 mmol) en cloruro de metileno anhidro (42 ml) fue adicionado
gota a gota durante 10 min. La temperatura fue mantenida por
debajo de -60°C durante la adición.
(S)-2-(2,6-Difluorodifluorofenil)metoxi-3-metilbutanol
(3.22 g, 14.0 mmol) en cloruro de metileno anhidro (45 ml) fue
adicionado gota a gota durante 10 min. La temperatura fue
mantenida por debajo de -60°C durante la adición. Luego, la mezcla
fue agitada a -70°C durante 20 min. Trietilamina (7.84 ml, 56.0
mmol) fue adicionada gota a gota durante 5 min. La reacción fue
seguida por cromatografía en capa fina. Cuando la reacción fue
completa se dejó alcanzar la temperatura ambiente. HCl lN (56 ml,
solución acuosa) y hexano (140 ml) fueron adicionados. La fase
acuosa fue separada y extraída dos veces con alícuotas de éter. La
fase orgánica residual y los extractos de éter se juntaron y
lavaron con una disolución saturada deNaHCO_{3} (2x70 ml), agua
(2x70 ml) y disolución saturada de NaCl (2x70 ml), secada sobre
Na_{2}SO_{4} y evaporada a presión reducida obteniéndose 2.88
g de un aceite. El producto fue purificado por destilación a
presión reducida utilizando un aparato de destilación Kugelrohr,
rindiendo 2.57 g (11.26 mmol, 80.4%) de un aceite incoloro: p.e.
75-76°C (0.3 mm Hg); IR 1729, 1225 cm^{-1};
^{1}H-RMN (\delta ppm, CDCl_{3}) 9.65 (d, 1H,
J= 2.7 Hz), 7.37-7.22 (m, 1H),
6.96-6.S6 (m, 2H), 4.73 (d_{b}, 1H, J= 11.0 Hz),
4.60 (d_{b}, 1H, J= 11.1 Hz), 3.45 (dd, 1H, J= 5.9 Hz, J'= 2.7
Hz), 2.12-1.96 (m, 1H), 0.95 (d, 3H, J= 2.0 Hz),
0.91 (d, 3H, J= 2.0 Hz); ^{13}C-RMN (\delta
ppm, CDCl_{3}) 204.1, 164.4, 164.2, 159.4, 159.3, 130.7, 130.6,
130.5, 1 13.6, 113.3, 113.2, 111.5, 111.3, 111.2, 111.0, 88.5,
60.2, 60.1, 60.0, 29.8, 18.2, 17.3; [\alpha]^{25}_{D} =
-73.1 (c=1.14, CH_{2}Cl_{2}).
Este material fue preparado por un procedimiento
sustancialmente similar al del Ejemplo 7, obteniéndose el compuesto
del título (Rdto.: 95%): p.e. 105-106°C (0.5 mm
Hg); IR 1732 cm^{-1}; ^{1}H-RMN (\delta ppm,
CDCl_{3}) 9.60 (d, 1H, J= 2.9 Hz), 3.61-3.52 (m,
1H), 3.41-3.33 (m, 1H), 3.28 (dd, 1H, J= 6.0 Hz, J'=
2.9 Hz), 2.10-1.98 (m, 1H),
1.70-1.52 (m, 2H), 1.45-1.20 (m,
14H), 0.98 (d, 3H, J= 3.5 Hz), 0.96 (d, 3H, J= 3.6 Hz),
0.94-0.85 (m, 3H); ^{13}C-RMN
(\delta ppm, CDCl_{3}) 204.8, 88.9, 71.1, 31.8, 29.8, 29.7,
29.5, 29.3, 29.2, 25.9, 22.5, 18.2, 17.4, 13.9;
[\alpha]^{25}_{D} = -61.3 (c=1.1, CH_{2}Cl_{2}).
Este material fue preparado por un procedimiento
sustancialmente similar al del Ejemplo 7, obteniéndose el compuesto
del título (Rdto.: 93%): p.e. 67-68°C (0.8 mm Hg);
IR 1732 cm^{-1}; ^{1}H-RMN (\delta ppm,
CDCl_{3}) 9.67 (d, 1H, J= 2.8 Hz), 7.35-7.25 (m,
5H), 4.66 (d, 1H, J= 11.7 Hz), 4.48 (d, 1H, J= 11.7 Hz), 3.53 (t,
1H, J= 2.9 Hz), 1.92-1.79 (m, 1H),
1.69-1.47 (m, 1H), 1.41-1.18 (m,
1H), 0.96-0.83 (m, 6H);
^{13}C-RMN (\delta ppm, CDCl_{3}) 204.0,
137.3, 128.2, 127.7, 87.0, 72.5, 36.2, 24.3, 14.8, 11.2;
[\alpha]^{25}_{D} = -84.5 (c=1.0, CH_{2}Cl_{2}).
Una mezcla de
(2S,3S)-2-(2,6-difluorofenil)metoxi-3-metilpentanal
(3.86 g, 16.0 mmol), nitrometano (4.30 ml, 80.0 mmol) y
trietilamina (0.32 ml, 2.28 mmol) fue agitada a temperatura
ambiente durante 16 h. El exceso de nitrometano fue eliminado por
evaporación a presión reducida. El nitroaldol así obtenido como una
mezcla de diastereómeros fue disuelto en cloruro de metileno
anhidro (32 ml) y enfriado a -70°C. Cloruro de metanosulfonilo
(1.48 ml, 19.11 mmol) fue adicionado gota a gota seguido por una
disolución de N,N-diisopropiletilamina (6.85 ml,
39.81 mmol) en cloruro de metileno seco (8 ml), manteniéndose la
mezcla de reacción por debajo de -60°C. La mezcla fue agitada a
-70°C durante 2 h y luego fue llevada hasta temperatura ambiente.
La disolución fue lavada con agua (8 ml), HCl IN (4x8 ml, solución
acuosa) y NaCl (8 ml, disolución saturada), secada sobre
Na_{2}SO_{4} y evaporada. El producto fue purificado por
cromatografia en columna flash, rindiendo 3.27 g (11.46 mmol, 72%)
de un aceite amarillo pálido: bp 114-115°C (0.4 mm
Hg); IR 1530, 1354, 1235 cm^{-1}; ^{1}H-RMN
(\delta ppm, CDCl_{3}) 7.38-7.15 (m, 3H),
6.98-6.84 (m, 2H), 4.62 (d_{b}, 1H, J= 10.9 Hz),
4.54 (d_{b}, 1H, J= 10.8 Hz), 3.96-3.92 (m, 1H),
1.81-1.58 (m, 1H), 1.52-1.38 (m,
1H), 1.27-1.05 (nl, 1H), 0.90-0.81
(m, 6H); ^{13}C-RMN (\delta ppm, CDCl_{3})
164.2, 164.1, 159.3, 159.1, 140.3, 130.6, 130.4, 130.2, 113.5,
113.1, 112.7, 111.4, 111.3, 111.2, 111.0, 110.8, 79.4, 58.9, 58.8,
58.7, 38.8, 24.7, 14.1, 10.9; [\alpha]^{25}_{D} = -30.8
(c=1.4, CH_{2}Cl_{2}).
Este material fue preparado por un procedimiento
sustancialmente similar al del Ejemplo 10, obteniéndose el
compuesto del título como un aceite amarillo (Rdto.: 50%): p.e.
50-52°C (0.3 mm Hg); IR 1527, 1351 cm^{-1};
^{1}H-RMN (\delta ppm, CDCl_{3})
7.23-7.03 (m, 2H), 3.71 (t, 1H, J= 5.2 Hz),
3.51-3.29 (m, 2H), 2.04-1.82 (m,
1H), 1.60-1.50 (m, 2H), 1.40-1.23
(m, 4H), 1.00-0.81 (m, 9H);
^{13}C-RMN (\delta ppm, CDCl_{3}) 141.5,
140.2, 81.1, 70.4, 32.5, 29.5, 28.2, 22.4, 17.9, 13.9;
[\alpha]^{25}_{D} = -11.4 (c=1.1, CH_{2}Cl_{2}).
Este material fue preparado por un procedimiento
sustancialmente similar al del Ejemplo 10, obteniéndose el
compuesto del título, como un aceite amarillo (Rdto.: 75%): p.e.
92-94°C (0.4 mm Hg); IR 1523, 1351 cm^{-1};
^{1}H-RMN (\delta ppm, CDCl_{3})
7.36-7.30 (m, 5H); 7.19-7.17 (m,
2H), 4.61 (s, 2H), 4.32 (q_{d}, 1H, J= 6.6 Hz, J'= 3.3 Hz),
1.39 (d, 3H, J= 6.6 Hz); ^{13}C-RMN (\delta ppm,
CDCl_{3}) 142.8, 139.3, 137.3, 128.4, 127.8, 127.4, 70.9, 19.9;
[\alpha]^{25}_{D} = -39.1 (c=1.2, CH_{2}Cl_{2}).
A una disolución de clorhidrato del éster
metílico de la glicina (2.9 g, 23.0 mmol) en cloruro de metileno
(35 ml) fueron adicionados MgSO_{4} (2.5 g) y trietilamina (3.5
ml, 25.0 mmol) a temperatura ambiente. La mezcla resultante fue
agitada a la misma temperatura durante 1 h. A continuación
2-furfural (1.65 ml, 20.0 mmol) fue adicionado y la
mezcla resultante fue agitada durante 16 h. Luego el MgSO_{4} fue
filtrado y la fase orgánica lavada con agua (3x15 ml), secada con
Na_{2}SO_{4}, y evaporada bajo presión reducida. La imina
(Rdto.: 70%) mostró un espectro de ^{1}H-RMN
(\delta ppm, CDCl_{3}) satisfactorio: 8.09 (s, 1H), 7.54 (d, 1H,
J= 1.6 Hz), 6.84 (d, 1H, J= 3.3 Hz), 6.49 (dd, 1H, J= 3.4 Hz, J'=
1.7 Hz), 4.38 (d, 2H, J= 1.1 Hz), 3.77 (s, 3H) y fue utilizada
inmediatamente en la reacción posterior sin más purificación.
Una disolución de
4-hidroxibenzaldehído (2.7 g, 22.0 mmol),
iodoheptano (4.0 ml, 24.2 mmol) y éter
18-corona-6 (1.5 g, 5.5 mmol) en
acetona anhidra (88 ml), bajo atmósfera inerte, fue llevado a
reflujo. La reacción fue seguida por TLC. Cuando la reacción fue
completada, se dejo alcanzar la temperatura ambiente, evaporada y
luego disuelta en cloruro de metileno (80 ml). La solución fue
lavada con agua (2x50 ml), secada sobre Na_{2}SO_{4} y
evaporada bajo presión reducida proporcionando 4.4 g (20.0 mmol) de
4-heptiloxibenzaldehído como un aceite. Este
material fue utilizado en lugar de
2-furfuraldehído en un procedimiento sustancialmente
similar al descrito en el Ejemplo 13, obteniéndose el compuesto
del título (Rdto.: 82%): ^{1}H-RMN (\delta ppm,
CDCl_{3}) 8.20 (s, 1H), 7.70 (d, 2H, J= 8.8 Hz), 6.91 (d, 2H, J=
8.8 Hz), 4.37 (s, 2H), 4.03- 3.95 (m, 2H), 3.76 (s, 3H),
1.82-1.71 (m, 2H), 1.44-1.26 (m,
8H), 0.91-0.85 (m, 3H).
Este material fue preparado mediante un
procedimiento sustancialmente similar al descrito en el Ejemplo 13
utilizando 4-clorobenzaldehído, obteniéndose el
compuesto del título (Rdto.: 80%): ^{1}H-RMN
(\delta ppm, CDCl_{3}) 8.25 (s, 1H), 7.71 (d, 2H, J= 8.4 Hz),
7.39 (d, 2H, J= 8.3 Hz), 4.41 (d, 2H, J=, 1.1 Hz), 3.77 (s, 3H).
N-[(2-Metoxifenil)metiliden]glicinato
de metilo (1.36 g, 5.0 mmol) fue disuelto en acetonitrilo (50
ml), y luego fueron adicionadas sucesivamente trietilamina (0.7 ml,
5.0 mmol),
(E)-(3S)-3-benciloxi-4-metil-1-nitro-1-penteno
(1.18 g, 5.0 mmol) y acetato de plata (0.13 g, 0.75 mmol). El
progreso de la reacción fue seguido por cromatografía en capa fina.
Una vez completada la reacción, la mezcla fue filtrada a través de
un lecho (le Celita y lavada con una disolución saturada de
NH_{4}Cl (2x10 ml) y con agua (2x10 ml). Una vez secada sobre
MgSO_{4}, la disolución fue evaporada bajo presión reducida,
obteniéndose 2.0 g de un sirupo amarillo. El producto fue purificado
por cromatografía de columna flash, rindiendo 1.3 g (2.95 mmol,
59%) de unos cristales incoloros: p.f. 112-113°C;
IR 3345, 3303, 1739, 1536, 1336 cm^{-1};
^{1}H-RMN (\delta ppm, CDCl_{3})
7.40-7.18(m. 7H), 6.96-6.84
(m, 2H), 5.70 (dd, 1H, J= 5.8 Hz, J'= 2.5 Hz), 4.82 (d, 1H, J=
11.7 Hz). 4.68 (s_{b}, 1H), 4.57 (d, 1H, J= 11.6 Hz), 3.84 (s,
3H), 3.83 (s, 3H), 3.80 (s_{b}, 1H), 3.55 (d_{b}, 1H, J= 6.4
Hz, J'= 1.4 Hz), 3.20 (Si), 1H), 3.06 (ddd, 1H, J= 8.1 Hz, J'= 2.4
Hz, J''= 1.5 Hz), 2.20-2.00 (m, 1H). 1.02 (d, 3H,
J= 6.8 Hz), 0.91 (d, 3H, J= 6.9 Hz); ^{13}C-RMN
(\delta ppm, CDCl_{3}) 172.0, 156.4, 138.2, 129.3, 128.4,
127.6, 127.0, 125.8, 122.6, 120.6, 110.1, 90.2, 84.0, 73.6, 63.9,
55.4, 52.7, 52.4, 31.3, 19.2, 18.1; [\alpha]^{25}_{D} =
+27.8 (c=1.02, CH_{2}Cl_{2}); Anal. Calcd. para
C_{24}H_{30}O_{6}N_{2}: C, 65.13; H, 6.85; N, 6.33.
Encontrado: C, 65.20; H, 6.88; N, 6.40.
Este material fue preparado mediante un
procedimiento sustancialmente similar al descrito en el Ejemplo 16,
obteniéndose un aceite viscoso incoloro (Rdto.: 63%): IR 3340.
3303, 1746, 1547, 1361, 1199 cm^{-1}; ^{1}H-RMN
(\delta ppm, CDCl_{3}) 7.45-6.92 (m, 7H), 5.41
(dd, 1H, J= 5.8 Hz, J'= 2.2 Hz), 4.75 (d, 1H, J= 11.3 Hz), 4.55
(s_{b}, 1H, J= 11.3 Hz), 4.45 (s_{b}, 1H), 3.81 (m, 4H), 3.68
(d, 1H, J= 5.5 Hz), 3.00 (d, 1H, J= 6.5 Hz),
2.03-1.78 (m, 1H), 1.76-1.57 (m,
1H), 1.56-1.33 (m, 1H), 1.32-1.06
(m, 1H), 0.99-0.89 (m, 6H);
^{13}C-RMN (\delta ppm, CDCl_{3}) 171.8,
163.3, 158.4, 135.1, 130.3, 130.2, 130.1, 129.9, 126.1, 125.7,
124.9, 124.6, 124.3, 124.2, 122.2, 115.7, 115.3, 91.3, 82.1, 66.7,
66.6, 65.5, 64.4, 52.4, 37.2, 26.1, 14.4, 11.7;
[\alpha]^{25}_{D} = +5.0 (c=1.7, CH_{2}Cl_{2}).
Este material fue preparado mediante un
procedimiento sustancialmente similar al descrito en el Ejemplo 16,
obteniéndose un aceite viscoso amarillo pálido (Rdto.: 35%):
IR.3343, 3303, 1747, 1547, 1366 cm^{-1};
^{1}H-RMN (\delta ppm, CDCl_{3}) 7.19 (d, 2H,
J= 8.8 Hz). 6.84 (d. 2H, J= 8.8 Hz), 5.33 (dd, 1H, J= 6.0 Hz, J'=
2.3 Hz), 4.46 (s_{b}, 1H), 3.91 (t, 2H, J= 6.4 Hz), 3.85
(s_{b}, 4H), 3.75-3.64 (m, 1H),
3.49-3.38 (m, 1H), 3.30 (dd, 1H, J= 6.4 Hz. J'=
1.1 Hz), 3.15 (S_{b}, 1H), 3.03 (d_{b}, 1H, J= 8.0 Hz),
2.05-1.88 (m, 1H), 1.82-0.77 (m,
32H); ^{13}C-RMN (\delta ppm, CDCl_{3}) 172.0,
159.0, 127.3, 125.9, 114.4, 91.9, 84.3, 72.4, 68.3, 67.8, 64.1,
52.8, 52.4, 31.7. 31.4, 30.3, 29.2, 29.1, 29.0, 26.2, 25.9, 22.5,
19.1, 18.1, 14.0; [\alpha]^{25}_{D} =+7.7 (c=1.37,
CH_{2}Cl_{2}).
(2S,3R,4S,5S)-3-(1-(S)-deciloxi-2-metilpropil)-5-(4-
deciloxifenil)-4-nitropirrolidina
(0.62 g, 1.0 mmol) en etilenglicol dimetil éter (5 ml) fue enfriado
a 0°C. LiOH 1N (3 ml, solución acuosa) fue adicionado gota a gota,
y la mezcla fue agitada a 0°C. El progreso de la reacción fue
monitorizado por TLC. Una vez completada la reacción, ácido
cítrico 10% (3 ml, solución acuosa) fue adicionado (pH\approx6).
La solución fue extraída con cloruro de metileno (3x4 ml), secada
sobre Na_{2}SO_{4} y evaporada bajo presión reducida. El crudo
del producto fue triturado en éter para dar 0.42 g (0.7 mmol, 70%)
de un sólido blanco: p.f. 100-102°C; IR 1576, 1558,
1377 cm^{-1}; ^{1}H-RMN (\delta ppm,
CDCl_{3}) 9.10 (s_{b}, 2H), 7.21 (d, 2H, J= 8.7 Hz), 6.83 (d,
2H, J= 8.6 Hz), 5.33 (d_{b}, 1H, J= 5.9 Hz), 4.77 (d_{b}, 1H, J=
5.4 Hz), 4.05 (db, 1H, J= 7.4 Hz), 3.87 (t, 2H, J= 6.3 Hz),
3.68-3.60 (m. 1H), 3.59-3.52 (m,
1H), 3.37 (d_{b}, 1H, J= 6.4 Hz), 3.02 (d_{b}, 1H, J= 7.2 Hz).
2.00-1.88 (m, 1H), 1.80-0.82 (m,
44H); ^{13}C-RMN (\delta ppm, CDCl_{3})
172.9, 159.4,127.3. 123.3. 114.7, 90.4, 84.3, 73.0, 67.9, 65.8,
63.1, 51.8, 31.9, 31.5, 30.3, 29.7, 29.5, 29.4, 29.3, 29.2, 29.1,
26.3, 26.0, 22.6, 18.7, 18.4, 14.1; [\alpha]^{25}_{D} =
+23.0 (c=1.1, CH_{2}Cl_{2}).
Este material fue preparado mediante un
procedimiento sustancialmente similar al descrito en el Ejemplo 19,
obteniéndose un sólido blanco (Rdto.: 67%): p.f.
163-164°C dec; IR 3303, 1712, 1546, 1364, 1210
cm^{-1}; ^{1}H-RMN (\delta ppm, CDCl_{3})
8.64-8.60 (m, 2H), 7.90 (s_{b}, 2H),
7.76-7.72 (m, 1H), 7.40-7.27 (m,
3H), 6.99-6.89 (m, 2H), 5.39 (dd, 1H, J= 6.1 Hz,
J'= 2.2 Hz), 4.87 (d, 1H, J= 10.6 Hz), 4.67 (d, 1H, J= 10.6 Hz),
4.55 (d, I H, J= 6.4 Hz), 3.88 (d, 1H, J= 7.8 Hz), 3.65 (d, 1H, J=
7.5 Hz), 3.18 (d_{b}, 1H, J= 8.4 Hz), 2.12-1.95
(m, 1H), 1.09 (d, 3H, J= 6.6 Hz), 0.92 (d, 3H, J= 6.8 Hz);
^{13}C-RMN (\delta ppm, CDCl_{3}) 173.6,
164.3, 164.2, 159.4, 159.2, 148.3, 146.8, 135.4, 131.4, 130.9,
130.7, 130.5, 123.9, 113.8, 113.4, 111.8, 111.6, 111.5, 111.3,
91.0, 84.3, 77.0, 76. 4,65.3. 63.5, 61.4, 52.4, 31.8, 19.1, 18.4; ;
[\alpha]^{25}_{D} = +5.7 (c=0.57, CH_{2}Cl_{2});
Anal. Calcd. para C_{21}H_{23}O_{5}N_{3}F_{2}: C, 57.92;
H, 5.33; N, 9.65. Encontrado: C, 57.03; H, 5.40; N, 9.51.
Este material fue preparado por un procedimiento
sustancialmente similar al del Ejemplo 19, obteniéndose el
compuesto del título (Rdto.: 94%): p.f. 120-122°C;
IR 3271, 1727, 1550, 1358, 1095 cm^{-1};
^{1}H-RMN (\delta ppm,
CDCl_{3})7.38-7.17 (m, 9H), 5.79
(s_{b}), 2H), 5.40 (dd, 1H, J= 6.0 Hz, J'= 2.0 Hz), 4.75 (d, 1H,
J= 11.2 Hz), 4.62 (d, 1H, J= 6.0 Hz), 4.51 (d, 1H, J= 11.2 Hz),
3.90 (d, 1H, J= 7.6 Hz), 3.72 (d, 1H, J= 6.3 Hz), 3.09 (d_{b},
1H, J= 7.6 Hz), 1.97-1.75 (m, 1H),
1.58-1.33 (m, 1H), 1.30-1.03 (m,
1H), 0.96-0.85 (m, 6H); ^{13}C-RMN
(\delta ppm, CDCl_{3})173.3, 137.7, 134.8, 130.7,
129.0, 128.6, 128.0, 127.9, 127.5, 90.5, 82.6, 73.3, 66.1, 63.6,
51.2, 37.3, 25.8, 14.3, 11.7; [\alpha]^{25}_{D} = +21.8
(c=0.9, CH_{2}Cl_{2}); Anal. Calcd. para C_{23}
H_{27}N_{2}O_{5}C_{1}: C, 61.80; H, 6.10; N, 6.27.
Encontrado C, 61.43; H, 5.99; N, 6.17.
Una disolución de ácido (2S, 3R,
4S,
5S)-3-(1-(S)-benciloxi-2-metilpropil)-5-terc-butil-4-
nitropirrolidín-2-carboxílico (0.19
g, 0.5 mmol) y del clorhidrato del éster metílico de la glicina
(0.063 g, 0.5 mmol) en N,N-dimetilformamida anhidra
(1.25 ml), bajo una atmósfera inerte, fue enfriada a 0°C.
Cianofosfonato de dietilo (0.091 ml, 0.6 mmol) en
N,N-dimetilformamida anhidra (0.25 ml) fue
adicionado gota a gota. Luego trietilamina (0.14 ml, 1.0 mmol) fue
adicionada gota a gota. La temperatura fue mantenida a 0°C durante
la adición. Se permitió que la mezcla alcanzara la temperatura
ambiente y fue agitada durante 16 h. Este material fue disuelto en
una mezcla de 100 ml de acetato de etilo y tolueno (con una
relación en volumen de 1:1). La solución fue lavada con agua (25
ml), Na_{2}S_{2}O_{3} 1N (25 ml, solución acuosa), agua (25
ml), NaHCO_{3} (25 ml, solución acuosa saturada) and NaCl (25
ml, solución acuosa saturada), secada sobre Na_{2}SO_{4} y
evaporada bajo presión reducida, obteniéndose 0.40 g de un aceite
viscoso. El producto fue purificado por cromatografía en columna
flash, rindiendo 0.28g (0.64 mmol, 64%) de un sirupo amarillo
pálido: IR 3390, 1750, 1673, 1548, 1367 cm^{-1};
^{1}H-RMN (\delta ppm, CDCl_{3}) 7.54
(t_{b}, 1H, J= 5.5 Hz), 7.40-7.25 (m, 5H), 5.07
(dd, 1H, J= 5.5 Hz, J'= 1.4 Hz), 4.79 (d, 1H, J= 11.5 Hz), 4.49
(d, 1H, J= 11.5 Hz), 4.18 (dd, 1H, J= 18.5 Hz, J'= 5.9 Hz), 4.01
(dd, 1H, J= 18.4 Hz, J'= 5.4 Hz), 3.76 (s, 3H), 3.52 (d, 1H, J= 6.6
Hz), 3.48 (dd, 1H, J= 6.4 Hz, J'= 2.2 Hz), 3.07 (d, 1H, J= 5.4 Hz),
2.93 (dt, 1H, J= 6.4 Hz, J'= 1.8 Hz), 2.10-1.90
(m, 2H), 1.02-0.85 (m, 15H);
^{13}C-RMN (\delta ppm, CDCl_{3}) 173.1,
169.9. 138.1, 128.3, 127.6, 127.2, 86.5, 85.3, 74.1, 73.1, 63.2,
52.0, 51.8, 40.6, 32.3, 31.3, 26.2, 18.8, 18.5;
[\alpha]^{25}_{D} = +5.5 (c=1.02, CH_{2}Cl_{2}).
[\alpha]^{25}_{D} = +5.5 (c=1.02, CH_{2}Cl_{2}).
Este material fue preparado por un procedimiento
sustancialmente similar al del Ejemplo 22, obteniéndose el
compuesto del título (Rdto.: 72%): IR 3379, 3315, 1750, 1670.
1546, 1367, 1207 cm^{-1}; ^{1}H-RMN (\delta
ppm, CDCl_{3}) 7.78 (tb, 1H, J= 5.6 Hz),
7.39-7.24 (m, 6H), 6.99-6.87 (m,
2H), 5.22 (dd, 1H, J= 6.8 Hz, J'= 2.6 Hz), 4.86 (d, 1H, J= 10.1
Hz), 4.70 (d, 1H, J= 10.2 Hz), 4.60 (d, 1H, J= 6.7 Hz), 4.21 (dd,
1H, J= 18.1 Hz, J'= 5.9 Hz), 4.09 (dd, 1H, J= 18.2 Hz, J'= 5.5
Hz), 3.82 (d, 1H, J= 7.5 Hz), 3.78 (s, 3H), 3.61 (dd, 1H, J= 7.3
Hz, J'= 1.5 Hz), 3.17 (dt, 1H, J= 7.2 Hz, J'= 2.2 Hz), 2.40
(s_{b}, 1H), 2.16-1.88 (m, 1H), 1.06 (d, 3H, J=
6.7 Hz), 0.87 (d, 3H, J= 6.9 Hz); ^{13}C-RMN
(\delta ppm. CDCl_{3}) 173.1, 170.1, 164.4, 164.2, 159.4,
159.2, 135.5, 130.7, 130.5, 130.3, 128.7, 128.5, 126.8, 114.0,
113.6, 113.3, 111.7, 111.5, 111.4, 111.2, 90.6, 84.6, 66.7, 63.2,
61.5, 61.4, 52.3, 50.8, 40.8, 31.6, 19.1, 18.5;
[\alpha]^{25}_{D} = +22.2 (c=1.15,
CH_{2}Cl_{2}).
Este material fue preparado por un procedimiento
sustancialmente similar al del Ejemplo 22, obteniéndose el
compuesto del título (Rdto.: 60%): IR 3372, 3315, 1748, 1673,
1550, 1362, 1207 cm^{-1}; ^{1}H-RMN (\delta
ppm, CDCl_{3}) 7.76 (t_{b}, 1H, J= 5.7 Hz),
7.37-7.09 (m, 8H), 5.31 (dd, 1H, J= 6.8 Hz, J'= 2.4
Hz), 4.78 (d, 1H, J= 11.4 Hz), 4.68 (d, 1H, J= 11.6 Hz), 4.62 (d,
1H, J= 6.8 Hz), 4.21 (dd, 1H, J= 18.1 Hz, J'= 3.7 Hz), 4.09 (dd,
1H, J= 18.1 Hz, J'= 3.4 Hz), 3.80 (m, 5H), 3.17 (d_{b}, 1H, J= 7.7
Hz), 2.34 (S_{b}, 1H), 1.96-1.73 (m, 1H),
1.62-1.39 (m, 1H), 1.31-1.05 (m,
1H), 0.97-0.83 (m, 6H);
^{13}C-RMN (\delta ppm, CDCl_{3}) 172.8,
169.9, 153.0, 152.7, 151.3, 151.0, 148.0, 147.8, 146.4,
146.1,135.2, 128.7, 128.4, 127.6, 127.4, 126.7, 124.7, 124.6, 124.3,
124.2, 124.0, 117.2, 116.8, 90.6, 82.9, 66.8, 63.5, 52.2, 49.9,
40.7, 37.1, 25.9, 14.3, 11.6; [\alpha]^{25}_{D} = +23.0
(c=0.8, CH_{2}Cl_{2}).
Una disolución de
[(2S,3R,4S,5S)-3-[(1S,2S)-1-Benciloxi-
2-metilbutil]-4-nitro-5-fenil]pirrolidín-2-carboxil
glicinato de metilo (0.48 g, 1.0 mmol) en etilenglicol dimetil éter
(5 ml) fue enfriada a 0°C. LiOH 1N (3 ml, solución acuosa) fue
adicionado gota a gota, y la mezcla fue agitada a 0°C. El progreso
de la reacción fue monitorizado por cromatografía en capa fina. Una
vez completada la reacción, ácido cítrico 10% (3 ml, solución
acuosa) fue adicionado (pH\approx 6). La solución fue extraída
con cloruro de metileno (3 x 4 ml), secada sobre Na_{2}SO_{4} y
evaporada bajo presión reducida. El crudo del producto fue
triturado en dietil éter para dar 0.31 g de un sólido blanco (0.65
mmol, 87%): p.f 156-157°C; IR 3368, 3321, 1737,
1669, 1545, 1363 cm^{-1}; ^{1}H-RMN (\delta
ppm, CDCl_{3}) 7.70 (t_{b}, 1H, J= 5.2 Hz),
7.38-7.25 (m, 10H), 6.39 (S_{b}, 2H), 5.37 (dd,
1H, J= 6.8 Hz, J'= 2.4 Hz), 4.78 (d, 1H, J= 11.5 Hz), 4.61 (d, 1H,
J= 6.4 Hz), 4.54 (d, 1H, J= 11.4 Hz), 4.19 (d_{b}, 1H, J= 18.4
Hz, J'= 3.1 Hz), 4.09 (dd, 1H, J= 18.2 Hz, J'= 2.9 Hz), 3.78 (d,
1H, J= 7.6 Hz), 3.73 (d, 1H, J= 5.9 Hz), 3.16 (d_{b}, 1H, J= 8.4
Hz), 1.97-1.73 (m, 1H), 1.59-1.36
(m, 1H), 1.27-1.01 (m, 1H),
0.95-0.83 (m, 6H); ^{13}C-RMN
(\delta ppm, CDCl_{3}) 173.1, 172.9, 138.1, 134.6, 128.8,
128.6, 127.9, 127.6, 126.6, 90.8, 82.5, 73.1, 66.9, 63.5, 50.2,
41.1, 37.2, 26.0, 14.4, 11.7; [\alpha]^{25}_{D} = +39.2
(c=1.0, CH_{2}Cl_{2}); Anal. Calcd. para
C_{25}H_{31}N_{3}O_{6}: C, 63.99; H, 6.67; N, 8.96.
Encontrado: C, 63.94; H, 6.56; N, 9.05.
Este material fue preparado por un procedimiento
sustancialmente similar al del Ejemplo 25, obteniéndose el
compuesto del título (Rdto.: 85%): p.f 146-147°C; IR
3320, 1741, 1669, 1545, 1363, 1220 cm^{-1};
^{1}H-RMN (\delta ppm, CDCl_{3}) 7.78
(t_{b}, 1H, J= 5.4 Hz), 7.44-7.03 (m, 9H), 5.70
(S_{b}, 2H), 5.33 (dd, 1H, J= 6.6 Hz, J'= 2.1 Hz), 4.76 (d, 1H,
J= 11.1 Hz), 4.65 (d, 1H, J= 9.7 Hz), 4.61 (d, 1H, J= 6.4 Hz), 4.19
(dd, 1H, J= 18.2 Hz, J'= 3.0 Hz), 4.14 (dd, 1H, J= 18.5 Hz, J'=
3.1 Hz), 3.82 (d, 1H, J= 7.5 Hz), 3.74 (d, 1H, J=.5.7 Hz), 3.16
(d_{b}, 1H, J= 7.6 Hz), 1.93-1.70 (m, 1H),
1.59-1.38 (m, 1H), 1.28-1.01 (m.
1H), 0.96-0.81 (m, 6H); ^{13}C-RMN
(\delta ppm, CDCl_{3}) 173.2, 173.1, 163.3, 158.4, 134.7,
130.3, 130.2, 130.0, 129.8, 128.8, 128.5, 126.6, 125.2, 124.9,
124.3, 124.2, 115.7, 115.3, 90.7, 82.8, 67.4, 67.3, 66.9, 63.5,
50.3, 41.1, 37.3, 25.9, 14.4, 11.7; [\alpha]^{25}_{D} =
+36.2 (c=1.0, CH_{2}Cl_{2}); Anal. Calcd. para
C_{25}H_{30}N_{3}O_{6}F: C, 61.58; H, 6.21; N, 8.62.
Encontrado: C, 61.74; H, 6.12; N, 8.52.
Este material fue preparado por un procedimiento
sustancialmente similar al del Ejemplo 25, obteniéndose el
compuesto del título (Rdto.: 90%): p.f 82-84°C; IR
3388, 3321, 1741, 1665, 1550, 1363 cm^{-1};
^{1}H-RMN (\delta ppm, CDCl_{3}) 7.66
(t_{b}, 1H, J= 5.9 Hz), 7.39-7.21 (m, 9H), 6.12
(s_{b}, 2H), 5.33 (dd, 1H, J= 6.6 Hz, J'= 2.2 Hz), 4.77 (d, 1H,
J= 11.4 Hz), 4.57 (d, 1H, J= 6.9 Hz), 4.52 (d, 1H, J= 11.4 Hz),
4.18 (dd, 1H, J= 16.8 Hz, J'= 1.6 Hz), 4.08 (dd, 1H, J= 16.5 Hz,
J'= 1.5 Hz), 3.76 (d, 1H, J= 7.3 Hz), 3.72 (d, 1H, J= 5.5 Hz),
3.14 (d_{b}, 1H, J= 7.6 Hz), 1.94-1.72 (m, 1H),
1.57-1.03 (m, 2H), 0.99-0.77 (m.
6H); ^{13}C-RMN (\delta ppm, CDCl_{3}) 173.2,
173.1, 138.1, 134.6, 133.3, 128.8, 128.6, 128.0, 127.9, 127.6,
90.6, 82.5, 73.1, 66.2, 63.5, 50.2, 41.1, 37.2, 26.0, 14.7, 11.7;
[\alpha]^{25}_{D} =+28.1 (c=0.9, CH_{2}Cl_{2}); Anal.
Calcd. para C_{25}H_{30}N_{3}O_{6}Cl: C, 59.57; H, 6.01; N,
8.34. Encontrado: C, 58.91; H, 6.02; N, 8.21.
Este material fue preparado por un procedimiento
sustancialmente similar al del Ejemplo 25, obteniéndose el
compuesto del título (Rdto.: 86%): p.f 154-155°C; IR
3378, 3311, 1736, 1674, 1545, 1363 cm^{-1};
^{1}H-RMN (\delta ppm, CDCl_{3}) 7.74
(t_{b}, 1H, J= 5.6 Hz). 7.38-7.22 (m, 7H),
6.93-6.82 (m, 2H), 6.74 (s_{b}, 2H), 5.59 (dd,
1H, J= 6.4 Hz, J'= 2.4 Hz), 4.89 (d, 1H, J= 6.2 Hz), 4.82 (d, 1H,
J= 11.8 Hz), 4.62 (d, 1H, J= 11.7 Hz), 4.16 (dd, 1H, J= 18.3 Hz,
J'= 5.8 Hz), 4.05 (dd, 1H, J= 18.3 Hz, J'= 5.4 Hz), 3.83 (s, 3H),
3.80 (d, 1H, J= 1.8 Hz), 3.57 (dd, 1H, J= 5.3 Hz, J'= 1.4 Hz), 3.17
(d_{b}, 1H, J= 4.0 Hz), 2.10-1.93 (m, 1H), 0.99
(d, 3H, J= 6.6 Hz), 0.87 (d, 3H, J= 6.8 Hz);
^{13}C-RMN (8 ppm, CDCl_{3}) 173.1, 172.8,
156.5, 138.5, 129.6, 128.4, 127.5, 127.0, 126.2, 122.9,120.6,
110.1, 88.6, 84.1, 73.7, 63.1, 61.7, 55.4, 50.9, 41.3, 31.3, 19.1,
18.3; [\alpha]^{25}_{D}= +52.7 (c=1.0, CH_{2}Cl_{2});
Anal. Calcd. para C_{25}H_{31}N_{3}O_{7} : C, 61.83; H,
6.45; N, 8.65. Encontrado: C, 61.09; H, 6.40; N, 8.64.
Este material fue preparado por un procedimiento
sustancialmente similar al del Ejemplo 25, obteniéndose el
compuesto del título (Rdto.: 86%): mp 162-163°C; IR
3240, 1682. 1555, 1376, 1117 cm^{-1}; ^{1}H-RMN
(\delta ppm, CDCl_{3}) 7.78 (t_{b}, 1H, J= 5.7 Hz),
7.37-7.30 (m, 5H), 6.89-6.70 (m,
3H), 5.33 (dd, 1H, J= 6.9 Hz, J'=2.8 Hz), 4.78 (d, 1H, J= 12.0
Hz). 4.62 (d, 1H, J= 10.8 Hz), 4.61 (d, 1H, J= 6.9 Hz), 4.18 (d, 2H,
J= 6.0 Hz), 4.10 (s_{b}, 2H), 3.78 (d, 1H, J= 7.7 Hz), 3.63
(d_{b}, 1H, J= 6.5 Hz), 3.24 (d_{b}, 1H, J= 8.8 Hz),
2.10-1.91 (m, 1H), 0.99 (d, 3H, J= 6.8 Hz), 0.86 (d,
3H, J= 6.8 Hz); ^{13}C-RMN (\delta ppm,
CDCl_{3}) 173.1, 172.8, 165.6, 165.4, 160.7, 160.4, 142.3, 142.1,
141.9, 134.2, 129.0, 128.7, 126.6, 110.0, 109.8, 109.7, 109.5,
103.6, 103.1, 102.6, 90.5, 84.5, 72.7,66.8, 63.1, 50.6, 41.1, 31.3,
19.1, 18.1; [\alpha]^{25}_{D}= +23.7 (c=0.8,
CH_{2}Cl_{2}); Anal. Calcd. para
C_{24}H_{27}N_{3}O_{6}F_{2}: C, 58.64; H, 5.55; N. 8.55.
Encontrado: C, 58.30; H, 5.61; N, 8.58.
Para determinar cuál de los compuestos
sintetizados posee mayor capacidad de actuar como antagonista de
VLA-4, se realiza un procedimiento discriminatorio
basado sobre un ensayo in vitro de adhesión de células
tumorales a monocapas del ESH en cultivo primario tratadas o no
con TNF-\alpha para estimular la expresión de
VCAM-1. El tumor empleado es la sublínea B16F10
del MB16, cuya expresión de VLA-4 es
constitutiva.
Las células tumorales de MB16 (sublínea B16F10)
se cultivan en estufa a 37°C, con atmósfera de CO_{2} al 5%, en
medio de cultivo DMEM (Dulbecco's modified Eagle's medium), ajustado
a un pH de 7.4 y suplementado con penicilina (100 U/ml),
estreptomicina (100 \mug/ml), y suero bovino fetal al 5%. Las
células se mantienen y subcultivan según un método descrito
previamente (Vidal-Vanaclocha y colab. Cancer
Research, 1994, 54, 2667).
Las células sinusoidales del hígado se aíslan de
ratones C57BL/6J (machos, de edad entre 6-8
semanas) suministrados por IFFA Credo (L'Arbreole, Francia). Para
su purificación e identificación se sigue el protocolo descrito
previamente (Vidal-Vanaclocha y colab. Hepatology,
1993, 18, 328-339). Los cultivos primarios de las
células del ESH se obtienen sembrando las células sobre un sustrato
de colágeno tipo I (Sigma Chemicals Co, St Louis, MO) en presencia
de DMEM, suplementado con penicilina (100 U/ml), estreptomicina
(100 \mug/ml), y 10% de suero bovino fetal, a 37°C y en atmósfera
con 5% CO_{2}.
Las células endoteliales se aíslan 24 horas antes
del ensayo de adhesión y se siembran en placas de 24 pocillos,
manteniéndolas un mínimo de 4 horas en medio libre de suero antes
de incubarlas con DMEM en presencia o no de 10 ng/ml
TNF-\alpha durante 6 horas. Las células del B16
se marcan con 40 \mug/ml de la sonda fluorescente
BCECF-AM (carboxifluoresceína,
2',7'-bis-(2-carboxi-etil)-5-(6)carboxifluoresceina
aminoximetil éster), suministrada por Molecular Probes Inc.
(Oregon, EEUU). Posteriormente, se realiza un lavado con medio DMEM
sin suero, para retirar el exceso de fluorocromo, y se incuban con
los compuestos de fórmula general I a 37°C durante 15 minutos. a
la concentración de 50 \mug/ 1 x 10^{6} células del MB16.
Entonces, se realizan dos lavados. se calcula el número de células
viables mediante el test de exclusión con azul tripán, y se
resuspenden a una concentración de 2 x 10^{5} células/ml. Se
añade 1 ml de la suspensión de células del MB16 a cada pocillo de
la placa de cultivo primario de células del ESH, y los
co-cultivos se incuban en estufa a 37°C durante 8
minutos. El porcentaje de adhesión celular se calcula mediante un
sistema de medida de fluorescencia descrito previamente
(Vidal-Vanaclocha y colab. Cancer Research, 1994,
54, 2667).
En la figura 1A se observa que la preincubación
del MB16 con el compuesto Ib o el compuesto le inhibe
significativamente (P<0.01) el incremento del porcentaje de
adhesión de las células tumorales al ESH tratado con
TNF-\alpha, siendo el compuesto le el más
eficaz en su efecto inhibitorio. Las estructuras de los compuestos
probados en la figura 1A se indican en el esquema 1.
Seguidamente, se realiza otro ensayo de adhesión,
incubando las células del MB16 con concentraciones crecientes de Ie
(Figura 1B). Se requiere una dosis de Ie de 25 \mug/millón de
células para que se produzca una inhibición significativa sobre el
incremento de adhesión de células del MB16 al ESH tratado con
TNF-\alpha. Se alcanza un máximo de inhibición
con la dosis de 50 \mug/millón de células. Todas las
determinaciones se realizan en triplicado.
Para demostrar que el efecto
anti-adhesivo del compuesto Ie se debe al bloqueo
de la unión
VLA-4-VCAM-1, se
realizan ensayos de adhesión del MB16 a substratos de
VCAM-1 recombinante humana, inmovilizada en placa de
96 pocillos. Tal como se observa en la figura 2, la incubación del
MB16 con concentraciones crecientes del compuesto Ie disminuye su
adhesión a la VCAM-1, incluso este efecto
inhibitorio se observa en células del MB16 preincubadas con 1
ng/ml de IL-18 recombinante murina, durante 6
horas, para incrementar su expresión de VLA-4.
A continuación, se describe el efecto del
compuesto le sobre la capacidad metastática del MB16 en ensayos
in vivo. A tal efecto, las células del MB16 tratadas con Ie
se inoculan por vía intra-esplénica en ratones
C57BL/6J (3 x 10^{5} células viables por animal, resuspendidas en
solución salina estéril libre de endotoxinas), y se determina su
retención microvascular en las primeras 18 horas y su capacidad de
desarrollar metástasis en el día 12° después de la inoculación
tumoral.
El bloqueo de la VLA-4 tumoral
tras la preincubación de las células del MB16 con el compuesto Ie
disminuye un 50% su retención intrahepática después de 18 horas de
ser inoculadas (Figura 3A). Estos experimentos de retención se
realizan con células del MB16 transfectadas con el gen de la
luciferasa, según protocolo descrito previamente (Mendoza y colab.
Hepatology, 2001, 34, 298).
En la figura 3B se presentan los datos relativos
al número de metástasis obtenidos tras la inoculación de las
células del MB16, preincubadas o no con Ie (50 \mug/millón de
células) durante 15 minutos a 37°C. En concordancia con los
resultados obtenidos en los ensayos de retención, el compuesto Ie
disminuye la densidad de metástasis más de un 50%, según se indica
en la figura 3D, en la que puede observarse que la distribución
por tamaños de las metástasis también varía significativamente en
presencia del compuesto le, en particular las metástasis de tamaño
mediano y grande, denotadas en la figura 3D como M y G,
respectivamente (Las iniciales MP y P denotan las metástasis de
tamaño muy pequeño y pequeño, respectivamente, agrupadas por
tamaños según el criterio indicado en dicha figura).
Asimismo, las cifras de inhibición logradas con
Ie sobre la retención intrahepática y la formación de metástasis
del melanoma B16 coinciden con la inhibición de los mismos
parámetros obtenida tras la preincubación del melanoma con
anticuerpos anti-VLA-4 o la
pre-administración intravenosa de anticuerpos
anti-VCAM-1 murina en animales
inoculados con células del melanoma B16 (Anasagasti y colab.
Hepatology 1997;25:840-846; Mendoza y colab.
Hepatology 2001;34:298).
Claims (11)
1. Compuestos derivados de nitroprolinas quirales
con carbonos C2, C3, C4, C5 y C3-1' de configuración
(R) o (S), que presentan la siguiente fórmula I:
donde:
- R^{1}, R^{3} y R^{4} representan indistintamente un grupo seleccionado entre un radical C1-C6 alquilo (lineal o ramificado), bencilo, bencilo sustituido y arilo;
- R^{2} representa un átomo de hidrógeno; y
- (X) representa un grupo seleccionado entre metileno y el (R)/(S)- C1-C6 alquilmetileno.
2. Compuestos derivados de nitroprolinas quirales
según la reivindicación 1 seleccionados de entre:
- -
- [(2S, 3R, 4S, 5S)-3-[(1S,2S)-1-Benciloxi-2-metilbutil]-4-nitro-5-fenil]pirrolidín-2-carboxilglicina,
- -
- [(2S, 3R, 4S, 5S)-3-[(1S,2S)-1-(2-Fluorofenil)metoxi-2-metilbutil]-4-nitro-5-fenil]pirrolidín-2-carboxilglicina,
- -
- [(2S, 3R, 4S, 5S)-3-[(1S,2S)-1Benciloxi-metilbutil)-5-(4-clorofenil]-4-nitro]pirrolidín-2-carboxil glicina,
- -
- [(2S, 3R, 4S, 5S)-3-(1-(S)-Benciloxi-2-metilpropil)-5-(2-metoxifenil)-4-nitro]pirrolidín-2-carboxil glicina, y
- -
- [(2S, 3R, 4S, 5S)-3-(1-(S)-(3,5-Difluorofenil)metoxi-2-metilpropil)-4-nitro-5-fenil]pirrolidin-2-carboxil glicina
3. Procedimiento para la preparación de
compuestos derivados de las nitroprolinas quirales según las
reivindicaciones anteriores que comprende hacer reaccionar en un
disolvente orgánico, una mezcla que comprende:
- a)
- un compuesto derivado de nitroprolina quiral con carbonos C2, C3, C4, C5 y C3-1' de configuración (R) o (S), de la siguiente fórmula II,
- donde:
- R^{1}, R^{2}, R^{3} y R^{4} tienen la significación dada anteriormente;
- b)
- una sal de un alfa- o beta-aminoéster con la siguiente fórmula III,
- donde:
- (X) tiene la significación dada anteriormente,
- A^{-} representa un grupo seleccionado entre un anión cloruro, bromuro, yoduro, mesilato o tosilato, y
- R^{5} representa un grupo C1-C6 alquilo o arilo;
- c)
- un reactivo de activación del grupo carboxilo, y
- d)
- una base orgánica terciaria, seleccionada entre las alifáticas con C3-C10 carbonos o alcanoaromáticas con C9-C 15 carbonos.
4. Procedimiento según la reivindicación 3
caracterizado porque se efectúa a una temperatura entre -85 y
25°C.
5. Procedimiento según las reivindicaciones 3 y 4
caracterizado porque el compuesto de formula II se obtiene
previamente por reacción de una mezcla comprende por:
- a)
- un nitroalqueno quiral (R) o (S) con la siguiente fórmula IV,
- donde R^{3} y R^{4} tienen la significación dada anteriormente;
- b)
- una imina generalmente quiral de configuración (R) o (S) con la siguiente fórmula V,
- donde R^{2} y R^{5} tienen la significación dada anteriormente;
- c)
- una sal metálica, preferentemente seleccionada entre el acetato de plata, el perclorato de plata o el perclorato de litio, y
- d)
- una base orgánica terciaria, seleccionada entre las alifáticas con C3-C10 carbonos o alcano aromáticos con C9-C15 carbonos.
6. Compuestos según las reivindicación 1 para el
tratamiento de la metástasis cancerosa.
7. Compuestos según la reivindicación 2 para el
tratamiento de la metástasis cancerosa.
8. Uso de los compuestos según la reivindicación
1 en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de la
metástasis cancerosa.
9. Uso de los compuestos según la reivindicación
2 en la elaboración de un medicamento para el tratamiento de la
metástasis cancerosa.
10. Composición farmacéutica que comprende al
menos un compuesto según la reivindicación 1.
11. Composición farmacéutica que comprende al
menos un compuesto según la reivindicación 2.
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ES200300837A ES2216712B2 (es) | 2003-04-09 | 2003-04-09 | Derivados de nitroprolinas. |
| US11/403,881 US7446125B2 (en) | 2003-04-09 | 2006-04-14 | Derivatives of nitroproline compounds, processes of manufacture and uses in the treatment of integrin mediated disorders |
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|---|---|---|---|
| ES200300837A ES2216712B2 (es) | 2003-04-09 | 2003-04-09 | Derivados de nitroprolinas. |
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-
2003
- 2003-04-09 ES ES200300837A patent/ES2216712B2/es not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Journal Organic Chemistry, Vol. 63, páginas 1795-1805, 1998. AYERBE et al. "Stereocontrolled synthesis of highly substituted proline esters via [3+2] cycloaddition between N-metalated azomethine ylides and nitroalkenes". Página 1798, esquema 3; página 1804, compuesto 4p. \\ A * |
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| ES2216712A1 (es) | 2004-10-16 |
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