ES2198447T3 - Uso del acido 5-(tetradeciloxi)-2-furancarboxilico para el tratamiento de la enfermedad de alzheimer o la psicosis. - Google Patents
Uso del acido 5-(tetradeciloxi)-2-furancarboxilico para el tratamiento de la enfermedad de alzheimer o la psicosis.Info
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Abstract
COMPUESTOS QUE ACTIVAN EL RECEPTOR QUE POTENCIA LOS EFECTOS DEL FACTOR DE CRECIMIENTO NERVIOSO Y PUEDEN SER UTILES EN EL TRATAMIENTO DE LA ENFERMEDAD DE ALZHEIMER.
Description
Uso del ácido
5-(tetradeciloxi)-2-furancarboxilico
para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer o la
psicosis.
La presente invención es el resultado de un
procedimiento para encontrar potenciadores de los receptores
empleando un procedimiento de selección que utiliza el nuevo
receptor de la hormona esteroidea humana recombinante llamado en
adelante NER. Se ha encontrado a través del anterior procedimiento
de selección empleando NER que el compuesto TOFA (ácido
5-(tetradeciloxi)-2-furancarboxílico)
es un potenciador de ligandos para otros receptores, en particular
para receptores acoplados a proteínas G, sin tener ningún efecto
independiente sobre los receptores.
Los compuestos que activan al receptor NER, tales
como el TOFA, potencian los efectos del factor de crecimiento
nervioso (FCN) y pueden resultar útiles en el tratamiento de la
enfermedad de Alzheimer y de las psicosis, más particularmente de
la esquizofrenia. Adicionalmente, los compuestos que activan el
receptor NER también resultan útiles para potenciar los efectos de
los antagonistas de dopamina D1 en el tratamiento de las psicosis,
en particular de la esquizofrenia, y en el tratamiento de los
trastornos del crecimiento tales como la distonia, la disquinesia
tardía y el síndrome de Gilles de la Tourette.
Además, la invención se refiere a un
procedimiento para identificar los ligandos funcionales del
receptor NER.
Las hormonas retinoides, esteroidales y tiroideas
y posiblemente otras moléculas producen sus efectos biológicos
ligándose a proteínas de la superfamilia de los receptores
esteroideos. Estos receptores interactúan con secuencias de ADN
específicas y modulan la expresión de los genes (para consultar
estudios, remítase a JM Berg, Cell 57:1065-1068
(1989); RM Evans, Science 240:899-895 (1988);
M Beato, Cell 56:335-344 (1989)). El
análisis de las secuencias y los estudios funcionales de estos
receptores reveló dos regiones importantes que muestran un alto
grado de conservación del residuo de aminoácido. El nivel más
amplio de similitud entre los receptores se encuentra en una región
que contiene nueve residuos de cisteína que se ligan con átomos de
zinc para formar dos ``dedos de zinc'', que interactúan con los
elementos de respuesta esteroidea cognados del ADN (J Miller, y
col., EMBO J 4:1609-1614 (1985); RM Evans,
Cell 52:1-3 (1988)). La segunda región, que se
conserva menos, es el dominio de ligación del ligando, responsable
de la interacción con la hormona (J. Carlstedt-Duke,
y col., Proc Natl Acad Sci USA 79:4260-4264
(1982). J. Carlstedt-Duke, y col., Proc Natl Acad
Sci USA 84:4437-4440 (1987)). Estudios
recientes han atribuido funciones adicionales a otros dominios de
estos receptores, tales como la interacción
proteína-proteína que participa en la regulación
transcripcional (R Scule, y col., Cell
62:1217-1226 (1990); H F Yang, Cell
62:1205-1215 (1990); JM Holloway y col., Proc
Natl Acad Sci USA 87:8160-8164 (1990)). La
conservación de los aminoácidos en el dominio de ligación al ADN ha
llevado a la identificación de nuevos miembros de la superfamilia
de los receptores esteroideos.
Por ejemplo, se han clonado hER1 y hER2 mediante
hibridación a baja temperatura y alto contenido salino de
bibliotecas de cADN con una sonda de ADN que codifica el dominio de
ligación del ADN del receptor de estrógenos (Giguere, y col.,
Nature 331:91-94 (1988)). Enfoques similares
han llevado al descubrimiento de los receptores del ácido retinoico
y al receptor del activador del proliferador de peroxisoma (PPAR)
(I Issemann, y col., Nature 347:645-650
(1990); DJ Mangelsdorf, y col., Nature
345:224-229 (1990)). Recientemente, se han descrito
tres nuevos miembros de la superfamilia de receptores de la
hormona nuclear Xenopus (C Dreyer, Cell
68:879-887 (1992)). Además, la patente de EE.UU. nº
4.981.784 de Evans, y col. describe la identificación de un
receptor del ácido retinoico y el uso de construcciones quiméricas
para producir receptores híbridos para la identificación de nuevos
ligandos. No obstante, la bibliografía anterior no describe ni
sugiere la presente invención.
Se ha documentado que el TOFA (ácido
5-(tetradeciloxi)-2-furancarboxílico)
inhibe la síntesis de ácidos grasos al inhibir la
acetil-CoA carboxilasa, la etapa limitante de la
velocidad en la síntesis de ácidos grasos de novo, in vivo a
dosis altas,
es decir, 0,15% de la dieta (Véase, por ejemplo,
Arbeeny, ``Inhibition of fatty acid synthesis decreases renal low
density lipoprotein secretion in the hamster,'' J. Lipid
Res. 33: 843-851, (1992);
Ribeneau-Gyon y Gilles, FEBS Lett. 62:
309-312, (1976); Halvorson y McCune, ``Inhibition
of fatty acid synthesis in isolated adipocytes by
5-(tetradecyloxy)-2-furoric acid,''
Lipids 19(11): 851-856, (1984); Otto
y col., ``Reciprocal effects of
5-(tetradecyloxy)-2-fuoric acid on
fatty acid oxidation,'' Arch. Biochem. Biophys.
242(1):23-31, (1985); Parker y col.,
``5-(tetradecyloxy)-2-furancarboxylic
acid and related hypolipidemic fatty acid-like
alkyloxyarylcarboxylic acids,'' J. Med. Chem.
20:781-791, 1977). La presente invención comprende
en una realización el uso de TOFA en baja dosis para potenciar la
actividad de los ligandos de los receptores enlazados a G y para
potenciar la actividad de las hormonas o neurotransmisores
producidos de forma endógena.
Powell y col., (``Dopamine activation of an
orphan of the steroid receptor family'') Science 252:
1546-48, (1991), y ``Dopaminergic and ligand
independent activation of steroid hormone receptors''
Science 254: 1636-39, (1991) han informado
de que la dopamina activa la transmisión, mediada por los
receptores hormonales esteroideos, mediante un mecanismo
independiente de ligandos. No obstante, al contrario que la
dopamina, el TOFA y los activadores del NER no tienen de por sí una
actividad dopaminérgica en los niveles de dosificación
utilizados.
Los receptores de dopamina son proteínas de
membrana que tienen siete dominios transmembranales y median en la
formación de señales transmembranales por medio de las proteínas G
heterotriméricas. Los receptores se localizan predominantemente en
el sistema nervioso central, pero los órganos periféricos tales
como el riñón, el esófago inferior y las arterias cardiaca y
mesentérica también responden a la dopamina a través de sitios de
ligación específicos. (Strange, ``Dopamine receptors: structure and
function,'' Prog Brain Res. 99:167-79, 1993;
Strange, ``New insights into dopamine receptors in the central
nervous system,'' Neurochem. Int.
22(3):223-236, 1993.) La clonación molecular
reveló que esta familia de receptores consiste en cinco genes,
D1-D5, que modulan la actividad de la adenilil
ciclasa. Los receptores de dopamina D1 y D5 estimulan la actividad
de la adenilil ciclasa, mientras que los receptores D2, D3 y D4
inhiben a esta enzima. (Seeman y Van-Tol,
``Dopamine receptor pharmacology,'' Curr. Opin. Neurol.
Neurosurg. 6(4):602-608, 1993; Kebabian,
``Multiple dopamine receptors and their implications in medicine,''
Curr. Opin. Neurol. Neurosurg.
5(4):514-518, 1992; Kebabian, ``Brain
dopamine receptors: 20 years of progress,'' Neurochem. Res.
18(1):101-104, 1993; Sibley, y col.,
``Molecular neurobiology of dopaminergic receptors,'' Int. Rev.
Neurobiol. 35:391-415, 1993).
Los agentes dopaminérgicos y sus antagonistas
sirven para tratar los trastornos del movimiento, otros trastornos
neuropsiquiátricos, náuseas, y ciertos trastornos hormonales.
Los receptores D1 de dopamina están acoplados a
la adenil ciclasa. Los antagonistas conocidos de dopamina D1
incluyen SCH 23390 (hemimaleato de
8-cloro-2,3,4,5-tetrahidro-3-metil-5-fenil-1H-3-benzacepin-7-ol):
Los antagonistas de dopamina D1 han demostrado
ser importantes en el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer.
En la prueba del laberinto de brazo radial, un ensayo utilizado
para examinar los agentes potenciadores de la memoria, las lesiones
de la ruta colinérgica media producen evidencias de pérdida de
memoria y el tratamiento crónico con SCH 23390 invirtió la pérdida
de rendimiento inducida por la lesión. (McGurk y col.
``Dopaminergic drugs reverse the impairment of
radial-arm maze performance caused by lesions
involving the cholinergic medial pathway,'' Neuroscience.
50(1):129-135, 1992).
Los antagonistas del receptor D1 de dopamina
también resultan útiles para el tratamiento de trastornos del
movimiento tales como el síndrome de Gilles de la Tourette, la
distonia y la disquinesia tardía. Los antagonistas del receptor D1
de dopamina también resultan útiles para el tratamiento de
psicosis, lo más particularmente de la esquizofrenia.
El síndrome de Gilles de la Tourette o el
síndrome de los tics múltiples hereditario, comienza en la niñez
con tics simples pero progresa hacia movimientos múltiples y
complejos que incluyen tics respiratorios y vocales. En 50% de los
pacientes aparece la coprolalia y las emisiones escatológicas
involuntarias. Los tics y la coprolalia pueden ser suficientemente
graves para provocar un impedimento físico y social. El síndrome de
Gilles de la Tourette se trata generalmente con haloperidol, entre
0,5 y 40 mg/día. La dosificación de haloperidol está limitada por
los efectos secundarios tales como disfonía, parkinsonismo y
acatisia. Clonidina, entre 0,1 y 0,6 mg/día, también puede resultar
eficaz en algunos pacientes, pero está limitada por el efecto
secundario de hipotensión. La presente invención, potenciando los
antagonistas del receptor dopamina D1, permite el tratamiento del
síndrome de Gilles de la Tourette con una administración disminuida
de antagonistas del receptor D1 de dopamina.
La distonia está caracterizada por unas posturas
anómalas sostenidas y por interrupciones del movimiento resultantes
de alteraciones del tono muscular. La distonia se trata en general
con anticolinérgicos de dosis alta tales como trihexifenidilo entre
6 y 30 mg/día, benzotropina entre 3 y 14 mg/día, y reserpina, un
medicamento de eliminación de dopamina, entre 0,1 y 0,6 mg/día.
La disquinesia tardía está caracterizada por
movimientos coreiformes de los músculos
bucal-lingual-facial, menos comunes
en las extremidades. En raras ocasiones se puede observar una
distonia focal o incluso generalizada. La disquinesia tardía puede
estar causada por elevadas dosis de fenotiazinas administradas
durante un largo tiempo, una práctica común en esquizofrénicos
jóvenes. Los pacientes más viejos, en particular mujeres y aquellos
con lesiones cerebrales, presentan una mayor incidencia de la
disquinesia tardía. El problema no desaparece cuando se termina el
tratamiento con el medicamento, y resiste los tratamientos estándar
para los trastornos del movimiento. Los anticolinérgicos pueden
empeorar la disquinesia tardía. La incidencia ha aumentado con el
uso común y prolongado de fenotiazinas. Al potenciar el efecto de
los antagonistas del receptor D1 de dopamina administrados, los
activadores del receptor NER resultan útiles para la prevención de
la disquinesia tardía.
Los antagonistas del receptor D1 de dopamina
conocidos incluyen SKF 38390
(1-fenil-7,8-dihidroxi-2,3,4,5-tetrahidro-1H-3-benzacepina):
Los antagonistas del receptor de D1 de dopamina
resultan útiles para el tratamiento de la enfermedad de
Parkinson.
Haloperidol es un bloqueador preferente de los
receptores D2 de dopamina. Otros moduladores del receptor D2 de
dopamina incluyen dihidroergocriptina y bromocriptina.
Se identificó TOFA como un ligando del receptor
NER por medio de la selección dirigida de los compuestos
topológicamente similares a los ácidos grasos a partir de la Merck
Chemical Collection. Los compuestos se seleccionaron de la Base de
Datos de Estructuras Químicas de Merck utilizando el programa de
similitud topológica de Merck (TOPOSIM) que es el resultado de un
trabajo no publicado de Simon Kearsley que se basa en los
descriptores de similitud desarrollados en los Lederle Laboratories
(Raymond E. Charhart, Dennis H. Smith, R. Venkataraghavan, J.
Chem. Inf. Comp. Science, 1985, 25:64-73) pero
que incluye descriptores adicionales tales como la carga parcial.
Se seleccionaron aproximadamente 250 compuestos para realizar las
pruebas en los ensayos de transactivación. El TOFA estimuló la
expresión mediada por los receptores híbridos GR/NER, GR/NUC y
GR/PPAR de forma dependiente de la dosis. En contraste con el TOFA,
los ligandos Wy14643 y ácido oleico mantuvieron su especificidad
para el receptor esperada y activaron la expresión mediada por los
receptores GR/PPAR y GR/NUC pero no por los GR/NER. No obstante, el
TOFA no actuó como un estimulador general de la transcripción dado
que no estimuló la expresión del gen informador de la
MMTV-luciferasa tras la cotransfección del NUCI
nativo y de los receptores glucocorticoides. La acción específica
de TOFA se demostró adicionalmente mediante el hecho de que TOFA no
estimuló la expresión de luciferasa en células transfectadas sólo
con el gen informador de la MMTV-luciferasa, o con
un gen informador en el que la expresión estuvo bajo el control
del promotor temprano de SV40.
Estos ensayos de transcripción dependientes de
ligandos y los ensayos de ligación al receptor NER se pueden
utilizar para identificar compuestos adicionales, incluyendo los
que sean más potentes que el TOFA o tengan una mejor selectividad
frente a la activación de los receptores acoplados a proteína
G.
Se encontró que el TOFA activó la transcripción
mediada por el dominio de ligación de ligandos de los receptores
NUC y NER no relacionados. Así pues es posible que el TOFA pueda
interactuar de forma indirecta con estos receptores de forma
dependiente de ligandos semejante a la interacción de dopamina con
el receptor COUP-TF (Power y col., Dopamine
activation of an orphan of the steroid receptor superfamily,
Science 252(5012): 1546-1548, 1991;
Power y col., Dopaminergic and ligand-independent
activation of steroid hormone receptors, Science
254(5038): 1636-1639, 1991; Power y col.,
New insights into activation of the steroid hormone receptor
superfamily, Trends Pharmacol. Sci. 13(8):
318-323, 1992). Para obtener más información acerca
de la interacción entre el TOFA y el sistema dopaminérgico D1,
ensayamos la interacción in vitro e in vivo entre el
agonista del receptor dopamina, dopamina, el antagonista del
receptor D1 de dopamina, SCH 23390, y el TOFA in vivo e
in vitro. Al contrario de los informes divulgados por Power
y col. (supra) acerca de que el tratamiento de las células CV1 con
dopamina activan la transcripción mediada por receptores de la
hormona esteroidea, el tratamiento de las células CV1 con dopamina
no estimuló la transcripción mediada por GR/NER. Además, en las
células COS que no expresan el receptor D1 de dopamina, el TOFA
activó la transcripción mediada por el receptor quimérico GR/NER.
Adicionalmente, dopamina suprimió la transcripción mediada por
GR/NER en células CV1 pero no en células COS. El tratamiento con
SCH 23390 aumentó la transcripción y mitigó la supresión de la
transcripción inducida por dopamina. Estos resultados indican que,
aunque existe una relación entre el TOFA y el sistema
dopaminérgico, el TOFA activa los receptores por medio de un
mecanismo molecular distinto al sugerido para la estimulación de
los receptores de la hormona esteroidea por dopamina. Para obtener
más información acerca de la interacción entre el TOFA y el sistema
dopaminérgico D1, in vivo, ensayamos in vivo la
interacción entre el agonista del receptor dopamina, SCH 23390, y
TOFA utilizando la catalepsia inducida por los antagonistas del
receptor D1 en ratas. El pretratamiento con TOFA aumentó
notablemente la catalepsia SCH 23390 al menos 25 veces. La
catalepsia inducida por pilocarpina, un agonista del receptor
colinérgico muscarínico se potenció aproximadamente 3 veces
utilizando un pretratamiento con TOFA. No obstante, la catalepsia
inducida por el antagonista haloperidol del receptor D2 de dopamina
no se vio afectada por el pretratamiento con TOFA.
También se describe un procedimiento para
encontrar potenciadores de los receptores, en particular
potenciadores de los antagonistas del receptor D1 de dopamina. Este
procedimiento emplea un procedimiento de selección que utiliza el
nuevo receptor hormonal esteroideo humano recombinante, NER.
El ensayo de selección de ligandos utilizado en
el presente procedimiento se describe a continuación:
Los ensayos de selección de transcripción
dependiente de ligandos se llevan a cabo mediante la coexpresión
del receptor NER y de un gen informador en el que la transcripción
se encuentra bajo el control del receptor NER. Tal gen informador
es preferiblemente el gen informador de la
MMTV-luciferasa en el que el promotor MMTV se
modifica para que esté bajo el control del receptor NER. Los
plásmidos que contienen cADN para el receptor hormonal esteroideo
NER y el gen informador apropiado se transfectan en COS o en otras
células adecuadas. Los ligandos o extractos se añaden tras la
transfección y entre 18 y 48 horas después las células se lavan, se
preparan los extractos celulares y se examina su actividad de
luciferasa. De forma alternativa, la transfección se puede llevar a
cabo en un modo por lotes el grandes placas de cultivo tisular.
Tras 18 horas, las células se lavan y se siembran en placas
multipocillo. Tras el reposo de las células, se añaden los ligandos
y se examinan las actividades de la luciferasa uno o dos días más
tarde. Todos los compuestos o extractos se secan y se disuelven en
su disolvente apropiado tal como etanol o DMSO como disoluciones de
reserva 100-1.000 veces concentradas.
Adicionalmente, esta invención se refiere al uso
del TOFA (ácido
5-(tetradeciloxi)-2-furancarboxílico),
y las sales y ésteres farmacéuticamente aceptables del mismo, como
potenciadores de la inhibición del receptor D1 de dopamina. Se
encontró el TOFA por medio del procedimiento anterior que emplea el
NER. El TOFA activa al NER y es un potenciador de ligandos para
otros receptores. No obstante, el TOFA no tiene un efecto
independiente sobre los receptores cuyos ligandos están potenciados
por el TOFA.
El TOFA parece actuar a través de un nuevo
mecanismo de interacción con mecanismos de recepción de superficie
celular por medio de sus rutas de señalización intracelular. El uso
del potenciador TOFA presenta unas ventajas clínicas claras, dado
que al eludir los efectos directos en los receptores de los
neurotransmisores, se evita la alteración de las regulaciones al
alza y a la baja del receptor que comprometen frecuentemente la
acción de los medicamentos activos del receptor directo.
El TOFA resulta particularmente útil para el
tratamiento de las enfermedades para las que resulta útil el
antagonista del receptor D1 de dopamina, SCH 23390. Así pues, el
TOFA resulta útil para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer
o de una psicosis, en particular la esquizofrenia. Por ejemplo, SCH
23390 previene las propiedades adictivas de la cocaína y puede
resultar útil para proteger o prevenir los efectos tóxicos que
resultan de una sobredosis de cocaína, anfetaminas u otros
estimulantes del SNC. (Lomax, y Daniel, ``Cocaine and body
temperature in the rat: effect of dopamine D1 antagonists'',
Proc. West Pharmacol. Soc. 34:5-9, 1991; and
Witkin y col., ``Interaction of haloperidol and SCH 23390 with
cocaine and dopamine receptor subtype-selective
agonists on schedule-controlled behavior of
squirrel monkeys'', Psychopharmacology Berl.
104(4):452-431, 1991.) Adicionalmente, el
TOFA también puede resultar útil para potenciar los efectos de SCH
23390 en el tratamiento de la esquizofrenia y de los trastornos del
movimiento, incluyendo los desarrollados durante el tratamiento con
medicamentos antipsicóticos. Además, el TOFA resulta útil para
potenciar los efectos de SCH 23390 para prevenir el desarrollo de
la presión intraocular inducida por agonistas de dopamina en los
trastornos hidrodinámicos del ojo (véase, Virno y col., ``Dopamine,
dopaminergic drugs and ocular hypertension'', Int.
Ophthalmol.
16(4-5):349-353, 1992), y en
pacientes con un aumento de la presión intracraneal (véase Boyson y
Alexander, ``Net Production of cerebrospinal fluid is decreased by
SCH22390'', Ann. Neurol.
27(6):631-635, 1990).
El TOFA también resulta útil para potenciar los
efectos de SCH22390 en el tratamiento de la enfermedad de
Alzheimer.
Además, dado que el TOFA potencia notablemente el
efecto de diferenciación de NGF en las células PC12 y potencia el
efecto in vivo del estimulante del receptor colinérgico
(pilocarpina), el TOFA también se puede emplear de forma
beneficiosa para el tratamiento de trastornos de la memoria
asociados con deficiencias colinérgicas (tanto las asociadas con el
envejecimiento normal como las enfermedades relacionadas con la
edad tales como la enfermedad de Alzheimer).
Aunque el TOFA es conocido por ser un potente
inhibidor de la síntesis de los ácidos grasos, es poco probable que
esta acción sea el mecanismo compartido mediante el que el TOFA
active estos receptores. Cerulenina, otro compuesto que es un
potente inhibidor de la síntesis de los ácidos grasos, Kawaguchia,
A., y col. J. Biochem. Tokyo, (1982) 92,
7-12, no imita los efectos de potenciación del TOFA,
añadiendo pruebas adicionales para demostrar que la inhibición de
la síntesis de los ácidos grasos per se no es responsable de la
activación de los receptores quiméricos y de la relación con la
ruta de señalación del receptor de dopamina.
En resumen, hemos identificado un nuevo miembro
de la superfamilia de los receptores hormonales esteroideos. La
identificación de estas funciones nos puede proporcionar más
conocimientos acerca de un nuevo sistema regulado hormonal.
Las sales farmacéuticamente aceptables del
compuesto de esta invención incluyen las formadas a partir de
cationes tales como sodio, potasio, aluminio, calcio, litio,
magnesio, zinc, y a partir de bases tales como amoniaco,
etilendiamina, N-metil-glutamina,
lisina, arginina, ornitina, colina,
N,N'-dibenciletilendiamina, cloroprocaína,
dietanolamina, procaína, N-bencilfenetilamina,
dietilamina, piperazina,
tris(hidroximetil)aminometano, e hidróxido de
tetrametilamonio. Estas sales se pueden preparar mediante
procedimientos estándar, por ejemplo haciendo reaccionar el ácido
libre con una base orgánica o inorgánica adecuada.
Los ésteres del TOFA se pueden preparar
disolviendo el TOFA en un disolvente orgánico seco, preferiblemente
tetrahidrofurano (THF) a 0-30ºC y tratando con la
isourea sustituida apropiada durante 8-24 horas,
enfriando hasta -15ºC y filtrando la urea. El filtrado se
concentra bajo presión reducida para producir el éster deseado. Los
ésteres especialmente adecuados de la presente invención
incluyen:
(a) alquilo C_{1-5}, o
(a) alquilo C_{1-5} sustituido
con
(i) fenilo, o
(ii) fenilo sustituido con metilo, metoxi, Cl,
Br, I, F o hidroxi;
no obstante, se pueden emplear otros ésteres
farmacéuticamente aceptables.
El TOFA se puede administrar en formas de
dosificación por vía oral tales como comprimidos, cápsulas (cada
una de las cuales incluye formulaciones de liberación temporizada
o de liberación prolongada), píldoras, polvos, gránulos, elixires,
tinturas, suspensiones, jarabes, y emulsiones. De igual forma,
también se pueden administrar de forma intravenosa (tanto en forma
de bolo como de infusión), intraperitoneal, subcutánea o
intramuscular, siendo todas ellas formas bien conocidas por los
expertos en la materia normales en las técnicas farmacéuticas.
El régimen de dosificación para utilizar el TOFA
se selecciona de acuerdo con una variedad de factores, que
incluyen el tipo, especie, edad, peso, sexo y estado médico del
paciente; la gravedad del estado a tratar; la ruta de
administración; la función renal y hepática del paciente, y el
compuesto o sal particular del mismo empleado. Un médico o
veterinario normal puede determinar fácilmente y prescribir la
cantidad eficaz del TOFA requerida para potenciar los efectos del
antagonista D1 de dopamina.
Las dosificaciones por vía oral de la presente
invención, cuando se utilizan para los efectos indicados, variarán
entre aproximadamente 0,01 y 100 mg/kg de TOFA, preferiblemente
entre 0,1 y 50 mg por día. Las composiciones se proporcionan
preferiblemente en forma de comprimidos que contienen 0,5, 1,0,
2,5, 5,0, 10,0, 15,0, 25,0, y 50,0 mg de ingrediente activo. De
forma ventajosa, el TOFA se puede administrar en una dosis diaria
única o con menor frecuencia, o la dosis total diaria se puede
administrar en dosis divididas de dos, tres o cuatro veces al día.
Además, TODA se puede administrar en forma intranasal mediante el
uso tópico de vehículos intranasales adecuados, o por medio de
rutas transdérmicas, utilizando las formas de parches para la piel
transdérmicos bien conocidas por los expertos en la materia
normales. Para su administración en forma de un sistema de
administración transdérmica, la administración de la dosis,
obviamente, será continua más que intermitente a lo largo del
régimen de tratamiento. Otras preparaciones por vía tópica
preferidas incluyen cremas, pomadas, lociones, pulverizadores de
aerosol y geles, en los que la concentración del ingrediente activo
estará comprendida entre 0,1% y 15%, p/p o p/v.
En los usos de la presente invención, el TOFA
forma el ingrediente activo de potenciación, y se administra
típicamente mezclado con diluyentes, excipientes o vehículos
farmacéuticamente adecuados (denominados colectivamente en la
presente invención materiales ``vehículos'') seleccionados de forma
adecuada con respecto a la forma de administración pretendida, es
decir, comprimidos orales, cápsulas, elixires, jarabes y
similares, y coherentes con las prácticas farmacéuticas
convencionales.
Por ejemplo, para la administración oral en forma
de un comprimido o cápsula, el componente del medicamento activo
se puede combinar con un vehículo no tóxico farmacéuticamente
aceptable para vía oral tal como etanol, glicerol, agua y
similares. Además, cuando se desee o sea necesario, también se
pueden incorporar en la mezcla agentes de ligación, lubricantes,
agentes desintegrantes y agentes colorantes adecuados. Los agentes
de ligación adecuados incluyen almidón, gelatina, azúcares
naturales tales como glucosa o beta-lactosa,
edulcorantes de maíz, gomas naturales y sintéticas tales como
acacia, tragacanto o alginato de sodio, carboximetilcelulosa,
polietilenglicol, ceras y similares. Los lubricantes utilizados en
estas formas de dosificación incluyen oleato de sodio, estearato de
sodio, estearato de magnesio, benzoato de sodio, acetato de sodio,
cloruro de sodio y similares. Los desintegradores incluyen, sin
limitaciones, almidón, metilcelulosa, agar, bentonita, goma de
xantano y similares.
El TOFA también se pueden administrar en forma de
sistemas de administración de liposomas, tales como vesículas
unilamelares pequeñas, vesículas unilamelares grandes y vesículas
multilamelares. Los liposomas se pueden formar a partir de una
variedad de fosfolípidos que contienen colesterol, estearilamina o
fosfatidilcolinas.
De igual forma, se puede administrar el TOFA
mediante el uso de anticuerpos monoclonales como vehículos
individuales a los que se acoplan las moléculas del compuesto. TOFA
también se pueden acoplar con polímeros solubles como portadores
de medicamentos dirigibles. Tales polímeros pueden incluir
polivinilpirrolidona, copolímero de pirano,
polihidroxipropilmetacrilamidafenol,
polihidroxietilaspanamidafenol, o polietilenóxidopolilisina
sustituida con residuos de palmitoílo. Además, el TOFA pueden estar
acoplado a una clase de polímeros biodegradables útiles para
conseguir una liberación controlada de un medicamento, por ejemplo,
ácido poliláctico, poliépsilon caprolactona, ácido
polihidroxibutírico, poliortoésteres, poliacetales,
polidihidropiranos, policianoacrilatos y copolímeros de bloques
entrecruzados o anfipáticos de hidrogeles.
Lo más preferiblemente, el TOFA se administra en
combinación con compuestos que muestren de por sí agonismo o
antagonismo de receptores acoplados a G, tales como: pilocarpina,
SCH 23390, dihidroergocriptina, bromocriptina, metacolina,
carbacol, betanecol, arecolina y oxotremorina, lo más
preferiblemente pilocarpina y SCH 23390.
Como se utiliza en la presente invención, el
término ``administración'' se refiere tanto a la administración
concurrente como secuenciar de TOFA y de los agentes potenciados.
Los antagonistas del receptor D1 de dopamina ilustrativos son: SCH
23390, dihidroergocriptina, y bromocriptina. Las dosificaciones de
los antagonistas del receptor D1 de dopamina están comprendidas
entre 0,001 y 20 mg/kg, lo más preferiblemente entre 0,1 y 5
mg/kg.
Como se utiliza en la presente invención,
``superfamilia del receptor hormonal esteroideo'' se refiere a una
clase de receptores relacionados compuesta por receptores
glucocorticoides, corticoides minerales, progesterona, estrógeno,
relacionados con estrógenos, vitamina D3, tiroides,
v-erb-A, ácido retinoico y E75
(Drosophila). Como se utiliza en la presente invención, ``receptor
hormonal esteroideo'' se refiere a los miembros de la superfamilia
del receptor hormonal esteroideo.
Como se utiliza en la presente invención,
``ligando'' significa un inductor, tal como una hormona o una
sustancia del crecimiento. Dentro de una célula, el ligando se une
a una proteína receptora, creando por tanto un complejo
ligando-receptor, que por su parte se puede unir a
un elemento de respuesta hormonal apropiado. Los ligandos únicos
pueden tener múltiples receptores.
Como se utiliza en la presente invención, el
término ``potenciador'' significa un agente o mecanismo que
potencia la acción de un segundo agente o mecanismo. El término
``cantidad potenciadora'' se refiere a la cantidad de potenciador
que se debe administrar con el fin de producir el efecto de
potenciación en un sujeto.
El término ``cantidad farmacológicamente eficaz''
debería referirse a la cantidad de un medicamento o agente
farmacéutico que permitirá la respuesta biológica o médica de un
tejido, sistema, animal o humano que persigue un investigador o
médico.
Como se utiliza en la presente invención,
``construcción de expresión'' se refiere a una unidad
transcripcional que comprende un conjunto de (1) un elemento o
elementos genéticos con un papel de regulación en la expresión
genética, por ejemplo promotores o potenciadores, (2) una secuencia
de codificación o estructural que se transcribe en mARN y se
traduce en una proteína, y (3) secuencias de inicio y terminación
de la transcripción adecuadas. ``Sistema de expresión recombinante''
se refiere a una combinación de una construcción de expresión y de
un microorganismo huésped adecuado. Como se utiliza en la presente
invención, el término ``receptor'' se refiere a un lugar de
ligación o reconocimiento con una configuración molecular
específica sobre una superficie celular o dentro de una estructura
celular, que provoca una respuesta fisiológica al estimularse
mediante un neurotransmisor u otro producto químico, incluyendo un
medicamento o toxina.
Como se utiliza en la presente invención, el
término ``receptor acoplado a G'', se refiere a un receptor que
cuando se activa se acopla a una proteína de membrana que se liga
al GTP (proteína G) en su superficie citoplasmática y se acopla al
receptor activado con adenilato ciclasa. ``Receptor acoplado con
adenil ciclasa'' se refiere a un receptor que cuando se activa,
activa directamente la enzima adenilato ciclasa.
Los siguientes ejemplos se proporcionan con el
propósito de ilustrar la presente invención.
Para identificar el ligando putativo del receptor
NER, se examinó el potencial del NER para inducir la transcripción
de un gen informador que contenga elementos de respuesta hormonal
inducibles. Se examinaron diversos elementos de respuesta; ácido
tiroideo/retinoico, estrógeno, vitamina D y los elementos
glucocorticoide/progesterona. Los experimentos de transfección en
células CV-1 y L revelaron una inducción no
dependiente de ligandos del gen informador CAT.Para facilitar la
búsqueda de un ligando, se construyeron moléculas receptoras
híbridas.
Los ensayos de transcripción dependientes de
ligandos fueron según se describe a continuación:
Se prepararon receptores híbridos similares
GR/NER, GR/NUC y GR/PPAR, en fondos de plásmidos de expresión
idénticos fundamentalmente tal y como se describe para la
construcción de receptores quiméricos GR/mPPAR y GR/NUC en el
documento Schmidt y col., ``Identification of a new member of the
steroid hormone receptor superfamily that is activated by a
peroxisome proliferator and fatty acids,'' Mol. Endocrinol.,
6(10):1634-41, 1992, y en Boie y col.,
``Enantioselective activation of the peroxisome
proliferator-activated receptor'', J. Biol.
Chem. 268(8):5530-4, 1993.
En resumen, la porción amino terminal del
receptor glucocorticoides de ratón (mGR), que incluye el domino de
ligación del ADN, se fusionó con los dominios de ligación del
ligando putativo del receptor nuclear NER, hNUC-I
(Schmidt y col., 1992), mPPAR (Issenmann y Green, 1990) para formar
los respectivos receptores quiméricos GR/NER, GR/NUC y GR/PPAR. El
receptor quimérico GR/NER se construyó tal y como se describe para
los receptores híbridos GR/NUC y GR/PPAR (Schmidt y col., 1992;
Boie y col). Las secuencias de cDNA que codifican los aminoácidos
Arg^{155} y Glu^{156} del receptor NER se convirtieron en el
sitio de restricción Xho I que se utilizó posteriormente para la
ligación a las secuencias de cADN GR que codificaron el dominio de
ligación del ADN. Así pues, se convirtieron los residuos de
aminoácido Arg^{155} y Glu^{156} del receptor NER en los
residuos de aminoácido Ser^{155} e His^{156}.
El cADN del receptor NUCI humano (pJ3NUCI) y el
receptor glucocorticoides nativo de ratón (pSV2WREC) se expresaron
bajo el control de vectores de expresión basados en SV40 (Schmidt y
col., 1992; Boie y col., 1993). El gen informador fue el plásmido
pJA358 en el que la expresión de la luciferasa de luciérnaga está
regulada por dos repeticiones en tándem del elemento de respuesta
hormonal glucocorticoide (GRE) unidos al promotor MMTV (Boie y
col., 1993).
La transfección transitoria de las células COS y
CV1 se llevó a cabo según se describió (Schmidt 1992). Las células
se cultivaron en placas (1,5x10^{5} en 1 mL) en placas de 12
pocillos en un medio libre de fenol complementado con suero bovino
fetal tratado con carbón activado. El día siguiente se añadieron a
las células 0,12 mL de ADN 10 \mug/ml (5 \mug de ADN receptor y
5 \mug de plásmido informador), como un precipitado de fosfato de
calcio. Los ligandos se añadieron a las células 30 minutos después
de la transfección. El día siguiente (18 horas), las células se
lavaron y se añadieron ligandos frescos. Veinticuatro horas más
tarde, se prepararon extractos celulares y se examinó su actividad
de la enzima luciferasa utilizando el sistema de ensayo de la
luciferasa (Promega Madison, Wis.). Cada transfección se llevó a
cabo por triplicado y se midió la actividad de luciferasa de cada
muestra por duplicado utilizando el AutoClinilumat (Berthold
Nashua, N.H.).
Las células transfectadas se trataron con TOFA a
2 \muM, 10 \muM, 20 \muM, y 50 \muM y ácido oleico a 50
\muM, y 300 \muM. En la tabla 1 siguiente se describen los
resultados.
| Tratamiento | \muM | Múltiplo de estimulación | ||||
| GR/NER | GR/NUC | GR/PPAR | NUC-I | GR | ||
| Control | 0 | 1,00 \pm 0,13 | 1,00 \pm 0,09 | 1,00 \pm 0,19 | 1,00 \pm 0,40 | 1,00 \pm 0,17 |
| TOFA | 2 | 2,35 \pm 0,09 | 1,95 \pm 0,14 | 2,89 \pm 0,13 | 0,83 \pm 0,12 | 1,02 \pm 0,40 |
| TOFA | 10 | 3,66 \pm 0,40 | 2,85 \pm 0,20 | 4,08 \pm 0,10 | 0,94 \pm 0,08 | 0,80 \pm 0,14 |
| TOFA | 20 | 4,82 \pm 0,28 | ND | 5,75 \pm 0,14 | ND | ND |
| TOFA | 50 | ND | 3,19 \pm 0,20 | ND | 1,27 \pm 0,06 | 0,91 \pm 0,30 |
| Ácido oleico | 50 | 0,90 \pm 0,13 | ND | 2,87 \pm 0,2 | ND | ND |
| Ácido oleico | 150 | ND | 3,42 \pm 0,28 | ND | 0,55 \pm 0,08 | 0,44 \pm 0,17 |
| Ácido oleico | 300 | 0,73 \pm 0,21 | ND | 14,69 \pm 0,06 | ||
| WY14643 | 100 | 0,57 \pm 0,37 | ND | 6,19 \pm 0,44 |
El TOFA estimuló la expresión mediada por los
receptores híbridos GR/NUC, GR/PPAR y GR/NER de forma dependiente
de la dosis. En contraste con TOFA, los ligandos Wy14643 y ácido
oleico mantuvieron su especificidad para el receptor esperada y
activaron la expresión mediada por los receptores GR/PPAR y GR/NUC
pero no por el GR/NER quimérico. No obstante, TOFA no actuó como un
estimulador general de la transcripción dado que no estimuló la
expresión del gen informador de la MMTV-luciferasa
tras la cotransfección del NUCI nativo que no interactúa con el gen
informador MMTV-luciferasa y de los receptores
glucocorticoides. La acción específica del TOFA se demostró
adicionalmente mediante el hecho de que el TOFA no estimuló la
expresión de luciferasa en células transfectadas sólo con el gen
informador de la MMTV-luciferasa, o con un gen
informador en el que la expresión estuvo bajo el control del
promotor de SV40.
El ensayo de transcripción de ligando mediado por
GR/PPAR en células COS se llevó a cabo según se describió en el
ejemplo 1. Las células se trataron con TOFA y cerulenina a 0,1, 1,
10 y 100 \muM. Las concentraciones de cerulenina superiores a 10
\muM resultaron tóxicas para las células.
El TOFA se desarrolló originalmente como un
inhibidor de la síntesis de los ácidos grasos (Parker y col.,
1977). Por consiguiente estudiamos si cerulenina, un inhibidor de
la síntesis de los ácidos grasos que no está relacionado
estructuralmente con el TOFA, puede imitar el perfil de activación
transcripcional inducido por el TOFA. En las concentraciones que
inhiben la síntesis de ácidos grasos, cerulenina no estimuló la
transcripción mediada por GR/PPAR. Estos resultados sugieren que no
es probable que la inhibición de la síntesis de ácidos grasos per
se sea responsable de la acción del TOFA en esta familia de
receptores.
En la tabla 2 siguiente se describen los
resultados.
| Tratamiento | Múltiplo de estimulación | |
| (\muM) | ||
| TOFA | Cerulenina | |
| 0 | 1,0 \pm 0,14 | 1,0 \pm 0,14 |
| 0,1 | 1,04 \pm 0,14 | 1,03 \pm 0,12 |
| 1,0 | 2,38 \pm 0,16 | 1,13 \pm 0,05 |
| 10,0 | 4,43 \pm 0,23 | 0,58 \pm 0,11 |
| 100 | 4,10 \pm 0,52 | - - - |
Se encontró que el TOFA activó la transcripción
mediada por el dominio de ligación de los miembros de la familia
PPAR (NUC-I y PPAR) y el receptor NER no
relacionado. Por tanto es posible que TOFA pueda interactuar de
forma directa con estos receptores de forma independiente del
ligando de forma semejante a la interacción de dopamina con los
receptores COUP-TF y progesterona (Power et al.,
1991, 1991, 1992) que tiene como resultado la estimulación de la
transcripción mediada por estos receptores en células CV1. Por
consiguiente estudiamos la activación de GR/NER por TOFA y dopamina
en células CV1 que expresan los receptores D1 de dopamina
funcionales medidos mediante la elevación de los niveles de cAMP
como respuesta al tratamiento con dopamina. El TOFA estimuló la
expresión de luciferasa mediada por el GR/NER quimérico en células
CV1.
Los ensayos de transcripción dependiente de
ligandos se realizaron según se describió en el ejemplo 1,
utilizando células CV1 en lugar de células COS. Las células CV1
transfectadas se trataron con dopamina, TOFA o con una combinación
de TOFA y dopamina en las concentraciones indicadas y se examinó su
actividad de luciferasa.
En la tabla 3 siguiente se describen los
resultados. Los resultados indican que la dopamina no estimuló la
transcripción mediada por GR/NER según era de esperar a partir de
sus efectos sobre los receptores COUP-TF y
progesterona. En contraste, encontramos que dopamina suprimió la
transcripción mediada por el receptor quimérico GR/NER. Además,
inhibió parcialmente la estimulación de la transmisión por parte
del TOFA. Esta supresión no se observó cuando se transfectó GR/NER
en células COS-7 que no expresan niveles
significativos de los receptores D1 de dopamina. Estos resultados
indican que existe una interacción entre la ruta de señalización
del receptor de dopamina y la ruta del receptor NER.
| Tratamiento (\muM) | Múltiplo de | |
| estimulación | ||
| Dopamina | TOFA | |
| 0 | 0 | 1,00 \pm 0,08 |
| 0,1 | 0 | 1,28 \pm 0,05 |
| 1,0 | 0 | 0,88 \pm 0,11 |
| 10 | 0 | 0,55 \pm 0,06 |
| 100 | 0 | 0,44 \pm 0,14 |
| 100 | 10 | 1,40 \pm 0,05 |
| 100 | 100 | 1,60 \pm 0,07 |
| 0 | 100 | 3,70 \pm 0,06 |
Los ensayos de transcripción dependientes de
ligandos se realizaron según se describió en el ejemplo 1. Las
células COS transfectadas se trataron con dopamina, TOFA o con la
combinación de TOFA y dopamina en las concentraciones indicadas y
se examinó su actividad de luciferasa.
En la tabla 4 siguiente se describen los
resultados.
| Tratamiento (\muM) | Múltiplo de estimulación | |
| Dopamina | TOFA | |
| 0 | 0 | 1,00 \pm 0,07 |
| 0,1 | 0 | 1,10 \pm 0,07 |
| 1,0 | 0 | 0,87 \pm 0,06 |
| 10 | 0 | 0,84 \pm 0,08 |
| 100 | 0 | 0,87 \pm 0,11 |
| 100 | 10 | 3,24 \pm 0,06 |
| 100 | 100 | 2,85 \pm 0,07 |
| 0 | 100 | 3,36 \pm 0,04 |
Para caracterizar adicionalmente la supresión de
la expresión de luciferasa por dopamina, estudiamos si un
antagonista del receptor D1 de dopamina, SCH-23390,
puede prevenir la supresión inducida por dopamina. Las células CV1
se contransfectaron con el gen informador
MMTV-luciferasa (pJA358) y el receptor quimérico
GR/NER según se describió en el ejemplo 1. Las células se trataron
con una cantidad en aumento del antagonista del receptor D1 de
dopamina, SCH 23390, con o sin dopamina 50 \muM.
Los resultados descritos en la tabla 5 siguiente
indican que el tratamiento con SCH-23390 puede
invertir la inhibición de la expresión de luciferasa causada por
dopamina. Además, el antagonista de D1 de dopamina,
SCH-23390, estimuló la transcripción mediada por
GR/NER. Esto confirma adicionalmente la interacción potencial entre
las rutas de señalación del receptor NER y del receptor
dopamina.
| Tratamiento (\muM) | Múltiplo de estimulación | |
| SCH-23390 | Control | Dopamina (50 \muM) |
| 0,1 | 1,32 \pm 0,15 | 0,59 \pm 0,06 |
| 1,0 | 1,22 \pm 0,11 | 0,55 \pm 0,09 |
| 10,0 | 1,64 \pm 0,38 | 0,83 \pm 0,12 |
| 100 | 2,38 \pm 0,19 | 2,61 \pm 0,86 |
Para estudiar adicionalmente la influencia del
TOFA en el sistema nervioso, estudiamos el efecto del TOFA sobre la
diferenciación de las células PC12. Las células PC12 se cultivaron
en placas con una densidad de aproximadamente
100-200/mm^{2} en placas recubiertas con colágeno
en medio RPMI complementado con 10% de suero de caballo, 5% de
suero bovino fetal, 50 g/mL de estreptomicina, 50 U/mL de
penicilina en una atmósfera saturada de humedad de 95% de aire y 5%
de CO_{2}, a 37ºC toda la noche. El medio se sustituyó por RPMI
fresco que contenía 1,5% de suero, 100 ng/mL de NGF y la
concentración indicada de TOFA o un volumen equivalente de vehículo
(DMSO) para proporcionar una concentración final de 0,1% de
DMSO.
A distintos puntos de tiempo durante el
tratamiento, se fotografiaron las células o se fijaron con
formalina al 10%. La morfología se examinó tras cuatro días de
tratamiento con TOFA o con vehículo (DMSO). Se determinó el número
de células que vencieron a las neuritas y la longitud promedio de
las neuritas con la ayuda de un sistema de obtención de imágenes
Bioquant. El tratamiento con TOFA solo no indujo el crecimiento de
neuritas en células PC12 (datos no mostrados). No obstante, como se
muestra en la tabla 6 siguiente, NGF solo indujo un aumento de 15%
del número de células con neuritas y estos crecimientos alcanzaron
una longitud media de 20 \mum. El tratamiento con NGF y TOFA
aumentó el porcentaje de células con neuritas hasta 78%. La máxima
generación de neuritas se observa a una concentración de TOFA 10
\muM. La adición de TOFA también aumentó la longitud de las
neuritas desarrolladas de forma relacionada con la dosis.
| % de células con neuritas | Longitud media de las neuritas (\mum) | |
| Vehículo | 14,98 \pm 1,68 | 19,78 \pm 2,01 |
| TOFA 0,1 \muM | 14,27 \pm 3,51 | 23,67 \pm 2,86 |
| TOFA 1,0 \muM | 24,07 \pm 3,06 | 28,63 \pm 3,92 |
| TOFA 10 \muM | 78,39 \pm 4,89^{a} | 32,43 \pm 2,38^{a} |
Las células se trataron con vehículo (DMSO al
0,1%) o diversas concentraciones de TOFA en presencia de NGF 100
ng/mL durante 4 días, y a continuación se fijaron con formalina al
10%. Se analizaron al menos ochenta células de ocho pocillos en
cada grupo. Los resultados se muestran como la media \pm SEM.
^{a}p<0,01, frente al vehículo mediante una prueba de
Dunnett.
Se pretrataron ratas con 0,4 mg/kg de TOFA o con
vehículo (S.C.). Veinticuatro horas más tarde, las ratas recibieron
0,5 mg/kg de SCH 23390, un antagonista D1 de dopamina, y se siguió
la duración de la catalepsia.
La catalepsia se determinó mediante una
modificación del método de la barra (Undie y Friedman, 1988). Se
suspendió una barra de acero, de 1,1 cm de diámetro y 50 cm de
longitud a una altura de 10 cm por encima de la superficie de
trabajo. Se recubrieron tres lados del banco alrededor de la barra
con cartón marrón, y se seleccionaron unos recubrimientos de la
superficie del banco del mismo color que las paredes de cartón. Se
colocaron las patas traseras del animal sobre el banco, tumbadas, y
se coloraron las patas delanteras sobre la barra. Se observó el
tiempo que la rata permaneció sobre la barra hasta un punto de
corte predeterminado de 120 s. El tiempo se dejó de contar al
observar cualquiera de las siguientes acciones: (1) el animal se
cayó, colocando sus dos garras delanteras sobre el banco, (2) el
animal se subió a la barra con ambas patas traseras, (3) el animal
comenzó a moverse a lo largo o alrededor de la barra.
Posteriormente, se trasladaron las lecturas de tiempo a
calificaciones proporcionando una calificación de 1 para cada 5 s
completados con éxito sobre la barra. Para cada tiempo de
observación, se promediaron los resultados de catalepsia para todos
los animales del grupo para proporcionar la calificación media del
grupo en ese tiempo de observación. Además, se añadieron los
resultados de cada animal en todos los tiempos de observación para
proporcionar la calificación total para ese animal. La media de
este último grupo de números se denominó la calificación total
media del grupo.
Los resultados de la catalepsia se analizaron
mediante computador según los procedimientos estadísticos descritos
por Winer, B.J.: Statistical principles in experimental design.
McGraw-Hill, Nueva York, pp. 10-428,
1971. En general, para un conjunto dado de comparaciones, las
observaciones estuvieron sometidas a un análisis de la varianza
apropiado seguido de pruebas de Dunnett de dos colas o de la t de
Student para detectar las diferencias entre los grupos de
tratamiento.
En la tabla 7 siguiente se muestran los
datos.
| Pretratamiento (Tiempo = 0) | Tratamiento | Duración de la catalepsia |
| (segundos) | ||
| TOFA | ninguno | 0 |
| control | SCH 23390 | 3,1 \pm 1,3 |
| TOFA | SCH 23390 | 75 \pm 17,8 |
Los datos mostrados anteriormente indican que el
pretratamiento con TOFA aumentó notablemente la duración de la
catalepsia inducida por SCH 23390 al menos 25 veces.
Se pretrataron ratas con 0,4 mg/kg de TOFA o con
vehículo (S.C.). Veinticuatro horas más tarde, las ratas recibieron
0,1 mg/kg de haloperidol, un antagonista del receptor D2 de
dopamina, y se siguió la duración de la catalepsia según se
describió en el Ejemplo 7.
En la tabla 8 siguiente se muestran los
datos.
| Pretratamiento | Tratamiento | Duración de la catalepsia |
| (segundos) | ||
| TOFA | ninguno | 0 |
| control | Haloperidol | 20,3 \pm 6,7 |
| TOFA | Haloperidol | 28,9 \pm 4,5 |
Los datos mostrados anteriormente indican que el
pretratamiento con TOFA no afectó de forma significativa a la
catalepsia inducida por Haloperidol.
Claims (4)
1. Uso del ácido
5-(tetradeciloxi)-2-furancarboxílico
o una sal o éster farmacéuticamente aceptable del mismo para la
fabricación de un medicamento para tratar la enfermedad de
Alzheimer o la psicosis.
2. Uso según la reivindicación 1 en el que la
psicosis es esquizofrenia.
3. Un producto que comprende ácido
5-(tetradeciloxi)-2-furancarboxílico
o una sal o éster farmacéuticamente aceptable del mismo y un
antagonista del receptor D1 de dopamina para administración
simultánea o secuencial.
4. El producto de la reivindicación 4, en el que
el antagonista del receptor D1 de dopamina es SCH 23390.
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