EP4475816A1 - Procede d'obtention d'extraits vegetaux comprenant une etape d'autofermentation, compositions comprenant de tels extraits et leurs utilisations cosmetiques - Google Patents

Procede d'obtention d'extraits vegetaux comprenant une etape d'autofermentation, compositions comprenant de tels extraits et leurs utilisations cosmetiques

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Publication number
EP4475816A1
EP4475816A1 EP23702830.3A EP23702830A EP4475816A1 EP 4475816 A1 EP4475816 A1 EP 4475816A1 EP 23702830 A EP23702830 A EP 23702830A EP 4475816 A1 EP4475816 A1 EP 4475816A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
extract
skin
plant
jasmine
plant extracts
Prior art date
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Pending
Application number
EP23702830.3A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Laurine BERGERON
Laura MOURET
Florian LABARRADE
Jean-Marie Botto
Yolène FERREIRA
Marie BRULAS
Elodie OGER
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
ISP Investments LLC
Original Assignee
ISP Investments LLC
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Filing date
Publication date
Application filed by ISP Investments LLC filed Critical ISP Investments LLC
Publication of EP4475816A1 publication Critical patent/EP4475816A1/fr
Pending legal-status Critical Current

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Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
    • A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
    • A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
    • A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • C12P7/42—Hydroxy-carboxylic acids

Definitions

  • the invention relates to the field of cosmetics and more particularly to the preparation of active extracts of plant origin used in cosmetic formulations to combat the signs of skin aging, loss of firmness, improve the barrier function and the hydration or lighten the skin.
  • microorganisms to orchestrate the biotransformation of plants.
  • Many processes involving selected or modified microorganisms are described in the literature and are used in an industrial environment. The most common are based on fermentation, known for millennia as a food preservation process. The main advantages of fermentation are preservation, improved taste or even the nutritional quality of food, due to the presence of a higher quantity of easily assimilated bioactive molecules.
  • microorganisms are widely used for their direct beneficial effects on the skin or to produce fermented or biotransformed plant extracts. Mention may be made, for example, of the documents EP3744339A1 and CN1 10680774A which describe processes for the fermentation of plants, respectively Citrus auriantium and jasmine flowers, involving inoculation with yeasts of the species Saccharomyces cerevisiae or else the document CN101243897A which describes the use of lactic acid bacteria to produce cosmetic or food flower extracts.
  • document FR3103826 describes the preparation of a consortium of microorganisms composed of at least one lactic acid bacterium, a yeast and an acetic acid bacterium, to prepare plant extracts rich in active compounds, capable of be used in the pharmaceutical, cosmetic and food fields.
  • Fermentation can also be based on the endogenous microflora present on the surface or in the internal structures of plants. It is a community of bacterial and fungal, mutualistic or symbiotic microorganisms called phytobiota, hosted by almost all plants or parts of plants (fruits, leaves, flowers, stems, roots, seeds, fungi, algae). We then speak of spontaneous fermentation or self-fermentation.
  • a problem that the invention proposes to solve is to provide a new process for the preparation of natural plant extracts, simple to implement, without adding any living microorganism, any enzyme, or of any exogenous nutrient and nevertheless presenting a remarkable biological effectiveness, as well as an absence of toxicity.
  • the inventors have developed a process comprising a controlled self-fermentation step carried out essentially from the phytobiota of plant materials and in particular flowers, fruits, leaves and roots, without any exogenous input. [13] Under these conditions, a significant amount of organic acids and phenolic acids are generated. The plant extracts obtained then contain a wide range of phytomolecules giving them proven biological effectiveness.
  • the extracts thus obtained can be used in cosmetics for skin care and more particularly to combat the signs of skin aging, loss of firmness or tone, improve barrier function and hydration, lighten the skin or improve the skin's innate immune defenses and well-being in vivo.
  • the subject of the invention is a self-fermentation process for obtaining plant extracts enriched in organic acids and phenolic acids, comprising the following steps:
  • the invention also relates to a self-fermentation process coupled with a subsequent extraction allowing the enrichment in RNA of small molecular weights, comprising the following steps:
  • the extract is diluted with a physiologically acceptable solvent.
  • the invention also relates to diluted plant extracts, advantageously obtained from fresh jasmine flowers (Jasminum grandiflorum) by the self-fermentation process coupled with a subsequent extraction allowing the enrichment of small RNAs above and comprising at least 300 mg/kg of phenolic compounds including at least 140 mg/kg of phenolic acids and at least 300 mg/kg of organic acids, including at least 50 mg/kg of shikimic acid and 10 mg/kg of quinic acid.
  • a further subject of the invention is a composition comprising an effective amount of extract obtained by one of the preceding methods and a physiological medium.
  • a further subject of the invention is the cosmetic use of the above composition for combating the signs of skin aging, loss of firmness, improving the barrier function and hydration, lightening the skin, reducing the reduction associated with age the number or activity of mechano-sensory touch receptors (Piezol) and oxytocin receptors (OXTR), or improve the innate immune defenses of the skin and well-being in vivo.
  • a subject of the invention is also a composition comprising the plant extracts of the invention for improving the innate immune defenses of the skin.
  • FIG 1 1 Evaluation of the effect of a self-fermented jasmine extract enriched in small RNAs at 2% of insensible water loss
  • FIG 12 Evaluation of the effect of a self-fermented jasmine extract enriched with small RNAs at 2% on ITA (Individual Topology Angle)
  • biobiota we mean all the micro-organisms present on the surface or inside plant matter.
  • plant means a living organism belonging to the plant kingdom and provided with a phytobiota, including, among others, plants, mosses, lichens and algae.
  • “Fresh plant material” means that the plant material used in the extraction process has not undergone any chemical or mechanical treatment likely to alter its phytobiota. For example, the plant material was harvested shortly before it was used in the process, or it was frozen quickly after it was harvested, or it was dried under conditions allowing good preservation of the phytobiota, for example at low temperature. Fresh plant material may include plant residues obtained after processing.
  • Self-fermentation means a fermentation process resulting from the own phytobiota naturally present in or on the surface of materials plants involved in the extraction process described in the present application.
  • proteins we mean large molecules made up of chains of amino acids, but also polypeptides and peptides smaller than 20 kDa (or 20 kg/mol).
  • RNA or "low molecular weight RNA” means a mixture of non-coding RNA (ribonucleic acids), of low molecular weight, with a maximum length of 150 nucleotides, such as all types small non-messenger RNAs, single and/or double-stranded, for example microRNAs, interfering RNAs, introns, small nuclear RNAs or any RNA fragment.
  • organic acids is meant derivatives of the catabolism of amino acids, fatty acids and sugars comprising an acid function.
  • This group includes a-hydroxylated (AHA) or polyhydroxylated carboxylic acids such as glycolic, lactic, malic, citric, tartaric, shikimic, quinic acids, carboxylic acids derived from sugars of fruits or any other parts of plants such as uronic acids, or alternatively diacids such as succinic acid.
  • AHA a-hydroxylated
  • carboxylic acids such as glycolic, lactic, malic, citric, tartaric, shikimic, quinic acids, carboxylic acids derived from sugars of fruits or any other parts of plants such as uronic acids, or alternatively diacids such as succinic acid.
  • phenolic compounds we mean all the molecules possessing one or more aromatic rings themselves bearing one or more hydroxyl groups, such as phenolic acids, flavonoids or their derivatives, tannins or any other polyphenols .
  • phenolic acids we mean phenolic compounds derived from benzoic acid and cinnamic acid, molecules with a single aromatic ring.
  • flavonoids we mean phenolic compounds that all share the same basic structure formed by two aromatic rings connected by three carbons.
  • glycosylated flavonoids flavonoids bound to one or more sugars.
  • “Sugars” means all carbohydrates such as mono- and disaccharides as well as oligo- and polysaccharides contained in the extract. [66] By “jasmintides” we mean peptides derived from jasmine characterized by a composition rich in cysteine and non-classical disulphide bridges.
  • biomolecules of interest we mean all the molecules present in the extracts of the invention and in particular, proteins, sugars, phenolic compounds, organic acids, small RNAs of a length of at most 150 nucleotides.
  • compositions described in this application can be any composition described in this application.
  • composition essentially of means that the composition or component may include additional ingredients, but only if the additional ingredients do not alter the basic characteristics or new characteristics of the composition or of the use described herein. request.
  • a "physiologically acceptable medium” means a vehicle suitable for contact with the outer layers of the skin or mucous membranes, without causing toxicity, irritation, undue and similar allergic response or intolerance reaction , and proportionate to a reasonable benefit/risk ratio.
  • Skin means the skin of the face and body including the scalp (including hair follicles and inter-follicular cutaneous spaces) and appendages (hair, body hair and nails).
  • “Signs of skin aging” means any changes in the external appearance of the skin due to aging such as, for example, wrinkles and fine lines, cracks, bags under the eyes, dark circles, wilting, the loss of elasticity, firmness and/or tone of the skin, pigmentary disorders such as senile lentigo or solar lentigo, but also all internal modifications of the skin which do not systematically result in a modified external appearance such as, for example, the decrease in the number or activity of mechano-sensory touch receptors (Piezo 1 ) and oxytocin receptors (OXTR), thinning of the skin, or any internal damage to the skin resulting from environmental stresses such as pollution and solar radiation including UV.
  • Piezo 1 mechano-sensory touch receptors
  • OXTR oxytocin receptors
  • “In vivo well-being” refers to a person’s emotional state, subjective sense of well-being, physiological production of oxytocin, and measure of behavior or emotional expression.
  • the subject of the invention is a process for obtaining plant extracts enriched in organic acids and phenolic acids comprising the following steps:
  • step c) moderate agitation keeps the microorganisms of the phytobiota in suspension in the mixture.
  • step c) The self-fermentation process of step c) is carried out in an open environment to allow gas exchange with the atmosphere, without any particular constraint to ensure sterility, but can alternatively be carried out in a fermenter in order to control gas exchange.
  • the plant materials used are plants of the oleaceae, poaceae or fabaceae family.
  • the plant materials used are plants of the oleaceae family such as jasmine of the species Jasmin um grandiflorum.
  • the plant parts used are selected from flowers, fruits, leaves and roots.
  • the plant parts used are flowers.
  • the plant materials used are algae.
  • the plant material is a plant residue obtained after processing, such as cakes or spent grains.
  • step a) distilled water, demineralized or rich in mineral salts and/or trace elements, is used.
  • the water preferably used is distilled water.
  • the plant material used in step a) can be whole or ground mechanically using a blade grinder, for example, to reduce the particle size from 0.5 mm to a few centimeters without affecting the viability of the plants. microorganisms. Grinding can be done dry or in water.
  • the starting plant material is too thick or composed of large fragments, for example, a whole seaweed or a root, it is preferably ground before step a).
  • the vegetable matter/water ratio is preferably between 3 and 30% by weight/weight, more preferably between 3 and 15%, even more preferably it is 3%, 5% or 15%.
  • step b) the pH is checked and adjusted to a value between 4 and 9, preferably between 6 and 8 and even more preferably at pH 7, by adding hydrochloric acid (HCl) , citric acid or sodium hydroxide (NaOH). The pH is then checked regularly throughout step b) and possibly readjusted.
  • HCl hydrochloric acid
  • NaOH sodium hydroxide
  • step c) the stirring of the mixture is advantageously moderate stirring of the stirring type.
  • the temperature is adjusted and maintained between 20 and 60°C, more preferably between 20 and 40°C, and even more preferably between 30 and 40°C. These temperature ranges are ideal for ensuring the optimal development of microorganisms, indeed below 20°C microbial growth is slowed down and above 60°C the viability of microorganisms decreases.
  • Step c) must be carried out at an optimal pH and temperature to allow the aqueous extraction solution to be enriched in phytomolecules and to create the conditions for the growth of the phytobiota present in the mixture. During this step the pH should not fall below 5.
  • Stage c) of self-fermentation takes place for a period of between 1 and 48 hours, preferably between 6 and 30 hours, and more preferably between 15 and 30 hours.
  • a study of microbial growth kinetics demonstrated that growth is strong, under process conditions, for a period of at least 30 hours, then reaches a plateau.
  • the residual solid matter can be ground to release the cellular content of the microorganisms and thus increase the extraction yield of the phytomolecules.
  • step d) any method known to those skilled in the art may be used.
  • the mixture obtained in c) can for example be filtered through filters with a porosity greater than 30 ⁇ m.
  • the mixture obtained in c) is centrifuged at low speed, for example for at least 10 min at 4000 g.
  • step e successive filtrations are preferably carried out by lowering the filtration threshold from 30 to 1 ⁇ m in order to clarify the mixture.
  • at least 4 filtrations are carried out with filters of porosity ranging from 30 ⁇ m, 4 ⁇ m, 2 and 1 ⁇ m.
  • step f) the pH of the filtrate is checked and readjusted, if necessary, to a value between 4 and 8, and preferably to a value between 4 and 7.
  • the pH can be adjusted by adding a solution or sodium hydroxide (NaOH) or acid hydrochloric acid (HCl) or any other equivalent acid compatible with cosmetic use, such as citric acid.
  • This step is essential to avoid the precipitation of phytomolecules of interest such as sugars, phenolic compounds, organic acids, proteins and thus obtain a stable extract.
  • the pH is adjusted to a value between 4 and 7.
  • the filtrate can be sterilized by any method known to those skilled in the art, for example by steaming or preferably by sterilizing filtration on a 0.2 to 0.45 ⁇ m filter.
  • This concentrated self-fermented extract is characterized by a dry weight of 4 to 30 g/kg, 0.5 to 6 g/kg of sugars, 300 to 900 mg/kg of organic acids including 50 - 500 mg/Kg of shikimic acid and 10 to 100 mg/Kg of quinic acid, 300 to 2000 mg/kg of phenolic compounds including 100 to 200 mg/Kg of phenolic acids and from 1 to 10 g/Kg of proteins. Nevertheless, the extracts obtained can present a significant variability depending on factors such as the place or the year of harvest, the season, the climatic conditions, the biotic stress, etc.
  • the self-fermented extract does not contain ethanol since the process of the invention is not an alcoholic type fermentation.
  • the concentrated self-fermented extracts obtained by the process described above contain at least 300 mg/kg of phenolic compounds including at least 100 mg/Kg of phenolic acids and at least 300 mg/kg of organic acid including at least 50 mg/kg of shikimic acid and 10 mg/kg of quinic acid.
  • step h among the physiologically acceptable solvents, mention may be made of water, glycerol, ethanol, propanediol as well as its natural version from corn, butylene glycol, dipropylene glycol, diglycols ethoxylated or propoxylated, cyclic polyols or any mixture of these solvents.
  • the concentrated self-fermented extract is diluted with butylene glycol, propanediol or even glycerin and even more preferably diluted by adding 30% propanediol to ensure its stability and preservation over time by preventing contamination .
  • the concentrated extract can also be diluted by adding 30% glycerin associated with all types of water-soluble preservatives such as sodium benzoate or potassium sorbate at the final concentration of 0.5% or even phenoxyethanol at the final concentration of 1 .5%.
  • This so-called diluted extract comprises by weight of the total weight of the extract from 2 to 20 g/kg of dry extract, 0.2 to 4 g/kg of sugars, 100 to 700 mg/kg of organic acids of which 50 - 350 mg/Kg of shikimic acid and 10 to 70 mg/Kg of quinic acid, 100 to 1300 mg/kg of phenolic compounds of which 70 to 140 mg/Kg of phenolic acids and 0.1 to 5 g /Kg of protein.
  • the extract of the invention thus comprises a wide range of phytomolecules that may have beneficial effects on the skin, without presenting a risk of skin irritation or other damage to health.
  • the plant material is advantageously a plant of the oleaceae, poaceae or even fabaceae family.
  • the plant material is even more advantageously the fresh flower of jasmine, preferably of the species Jasminum grandiflorum.
  • step c additional extraction steps can be carried out according to any method known to those skilled in the art.
  • additional extraction steps mention may be made of an extraction process allowing the enrichment of low molecular weight RNA described in patents FR 1670672 and US 11,021,505.
  • Step d To the mixture obtained in step c), phytic acid is added at a concentration of between 1 and 5 mM.
  • Step e’J the pH is adjusted, if necessary, to a value between 10 and 11.
  • Step f'J the mixture is kept stirred for 1 to 3 hours, preferably for 2 hours, at a temperature between 50°C and 80°C, preferably at 80°C.
  • Step g′ the residual plant matter is separated.
  • Step h’ the liquid fraction obtained is purified by successive filtrations to clarify the extract.
  • Step i’J the pH of the mixture obtained is adjusted to a value between 6 and 8.
  • One of the advantages of coupling the autofermentation process with a complementary extraction process allowing the enrichment of small RNAs is to increase the yield of the extraction by at least a factor of 2 in comparison with a extract obtained by self-fermentation.
  • the concentration of proteins, sugars, organic acids and total phenolic compounds is also increased by about a factor of 2 to 3.
  • the concentrated extracts enriched in small RNAs obtained by the processes described above have a dry weight at least 2 times greater than the dry weight of the extracts obtained by simple self-fermentation and contain at least 500 mg/kg of phenolic compounds, of which at least least 600 mg/kg of organic acids.
  • Such concentrated extracts are characterized by a dry weight of 4 to 60 g/kg, and include 0.5 to 10 g/kg of sugars, 600 to 1200 g/kg of organic acids including 50 to 700 mg/ Kg of shikimic acid and 20 to 200 mg/Kg of quinic acid, 500 to 3000 mg/kg of phenolic compounds including 200 to 300 mg/Kg of phenolic acids, 2 to 20 g/Kg proteins, as well as 10 at 100 mg/Kg of low molecular weight RNA.
  • the plant material is advantageously a plant of the oleaceae, poaceae or even fabaceae family.
  • the plant material is even more advantageously the fresh flower of jasmine, preferably of the species Jasminum grandiflorum.
  • the extract obtained has a dry weight at least 2 times greater than the dry weight of the extracts obtained by simple self-fermentation and comprises at least 500 mg/kg of compounds phenolics, at least 600 mg/kg of organic acids and at least one jasmintide.
  • Jasmintides are part of the cyclotides family which would have an activity close to oxytocin in relation to well-being and anti-aging effects (Adriano Mollica et al. 2015, Cyclotides: a natural combinatorial peptide library or a bioactive sequence player?, Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry, 30:4, 575-580).
  • Step j' Optionally, the extract is diluted with a physiologically acceptable solvent.
  • the physiologically acceptable solvent is chosen from water, glycerol, ethanol, propanediol and its natural version from corn, butylene glycol, dipropylene glycol, ethoxylated diglycols or propoxylated, cyclic polyols or any mixture of these solvents.
  • the self-fermented extract enriched with concentrated small RNAs is diluted with butylene glycol, propanediol or even glycerin and even more preferably diluted by adding 30% propanediol to ensure its stability and preservation over time. preventing contamination.
  • the concentrated extract can also be diluted by adding 30% glycerin associated with all types of water-soluble preservatives such as sodium benzoate or potassium sorbate at the final concentration of 0.5% or even phenoxyethanol at the final concentration of 1 .5%.
  • such extracts are characterized by a dry weight of 2 to 40 g/kg and include 0.2 to 5 g/kg of sugars; 300 to 900 mg/kg of organic acids including 50 to 500 mg/kg of shikimic acid and 10 to 200 mg/kg of quinic acid; 300 to 2000 mg/kg of phenolic compounds including 140 to 210 mg/Kg of phenolic acids, 2 to 10 g/kg of proteins as well as at least 10 to 60 mg/Kg of low molecular weight RNA.
  • the extract further comprises at least one jasmine.
  • Another object of the invention is a cosmetic composition comprising an effective amount of at least one plant extract obtained according to the method described in the present application.
  • the plant extracts of the invention are used in diluted form and are added in a physiologically acceptable medium at a concentration of 0.05 to 5% by weight relative to the total weight of the composition, preferably at a concentration from 0.1 to 2.5% by weight relative to the total weight of the composition.
  • composition that can be used according to the invention is formulated to be applied by any appropriate route, in particular oral, or external topical, and the formulation of the compositions will be adapted by those skilled in the art.
  • compositions according to the invention are in a form suitable for topical application.
  • These compositions must therefore contain a physiologically acceptable medium, that is to say compatible with the skin and the integuments, without risk of discomfort during their application and cover all suitable cosmetic forms.
  • compositions for the implementation of the invention may in particular be in the form of an aqueous, hydroalcoholic or oily solution, of an oil-in-water emulsion, water-in-oil or multiple emulsions; they can also be in the form of suspensions, or even powders, suitable for application to the skin, the mucous membranes, the lips and/or the hair.
  • These compositions can be more or less fluid and also have the appearance of a cream, a lotion, a milk, a serum, an ointment, a gel, a batter or mousse. They can also be in solid form, such as a stick, or be applied to the skin in the form of an aerosol.
  • adjuvants necessary for the formulation such as solvents, thickeners, diluents, antioxidants, dyes, filters sunscreens, self-tanning agents, pigments, fillers, preservatives, perfumes, odor absorbers, essential oils, vitamins, essential fatty acids, surfactants, film-forming polymers, etc.
  • these adjuvants and their proportions are chosen in such a way as not to harm the desired advantageous properties of the composition according to the invention.
  • These adjuvants can, for example, correspond to 0.01 to 20% of the total weight of the composition.
  • the fatty phase can represent from 5 to 80% by weight and preferably from 5 to 50% by weight relative to the total weight of the composition.
  • the emulsifiers and co-emulsifiers used in the composition are chosen from those conventionally used in the field considered. For example, they can be used in a proportion ranging from 0.3 to 30% by weight relative to the total weight of the composition.
  • the plant extracts of the invention can be encapsulated or included in a cosmetic vector such as liposomes or any other nano capsule or microcapsule used in the field of cosmetics or adsorbed on powdery organic polymers, mineral carriers such as talcs and bentonites.
  • a cosmetic vector such as liposomes or any other nano capsule or microcapsule used in the field of cosmetics or adsorbed on powdery organic polymers, mineral carriers such as talcs and bentonites.
  • composition according to the invention may comprise, in addition to the plant extract according to the invention, at least one other active agent having cosmetic effects similar and/or complementary to those of the invention.
  • the additional active agent(s) can be chosen from: anti-ageing, firming, lightening, moisturizing, draining, microcirculation-promoting, exfoliating, desquamating, extracellular matrix stimulating, activating energy metabolism, antibacterial, antifungal, soothing, anti-free radicals, anti-UV, anti-acne, anti-inflammatory, anesthetic, giving a feeling of warmth, giving a feeling of freshness, slimming.
  • Such additional active agents may be selected from the groups comprising:
  • vitamins B3, B5, B6 and B12 vitamins B3, B5, B6 and B12; vitamin C; vitamins E, F, H, K, PP or coenzyme Q10);
  • GP4GTM FR2817748, ASHLAND®
  • DHA - dehydroacetic acid
  • lipids such as ceramides or phospholipids
  • a further subject of the invention is the cosmetic use of a composition comprising the plant extracts of the invention for caring for the skin and more particularly for combating the signs of skin aging, the loss of firmness or tone, improve barrier function and hydration, brighten skin, alleviate age-related decrease in the number or activity of mechano-sensory touch receptors (Piezol) and oxytocin receptors (OXTR) , or improve the innate immune defenses of the skin and well-being in vivo.
  • the cosmetic uses according to the present invention relate to methods of cosmetic treatment by topical applications on healthy skin.
  • the subject of the invention is the cosmetic use of self-fermented extracts of fresh jasmine flowers (Jasminum grandiflorum).
  • the subject of the invention is the cosmetic use of a composition
  • a composition comprising an extract of fresh jasmine flowers (Jasminum grandiflorum) obtained by a self-fermentation process coupled with an extraction process allowing the enrichment in RNA of small molecular weights (process described in patents FR 1670672 and US 11,021,505).
  • the plant extracts of the invention were tested on biological markers associated with the firmness or tone of the skin, such as e-cadherin, and demonstrated superior efficacy to conventional control plant extracts.
  • a cosmetic composition comprising the plant extracts of the invention made it possible to attenuate the age-related decrease in the number or activity of mechano-sensory touch receptors (Piezol).
  • a cosmetic composition comprising the plant extracts of the invention made it possible to stimulate the expression of the oxytocin receptor, a molecule involved in the prevention of skin aging.
  • jasmine flower extracts demonstrated their ability to stimulate the expression of bugloss, a molecule associated with the skin's innate immune defenses.
  • a composition comprising 2% of extracts of the invention, applied topically by healthy volunteers produced a positive effect on well-being in vivo.
  • the emotional state was assessed through three distinct components: the subjective feeling of well-being, the salivary production of oxytocin and the measure of the behavior or the emotional state (Don Hockenbury and Sandra E. Hockenbury , Discovering psychology, 5th edition, Page 344, chapter 8, Worth Publishers).
  • the invention also relates to a composition comprising the plant extracts of the invention to improve the immune defenses of the skin.
  • Example 1 Preparation of an extract of fresh self-fermented jasmine flowers (Jasminum grandiflorum)
  • Jasminum grandiflorum belongs to the genus Jasminum and is widely used in industry as a fragrance or flavoring.
  • a first step a 200 g of whole fresh jasmine flowers are mixed with 1800 g of distilled water, i.e. 10% of raw material involved in the process and 90% water for a total weight of 2 kg.
  • the undiluted extract has a dry weight of 11.7 g/kg and contains a concentration of 5.2 g/kg of total sugars, 3.7 g/kg of protein, 411.1 mg/ kg of total organic acids, 630 mg/kg of total phenolic compounds.
  • the diluted extract has a dry weight of 8.1 g/kg, and presents a concentration of 3.6 g/kg of total sugars, 2.6 g/kg of proteins, 287.7 mg/kg of of total organic acids, 441 mg/kg of total phenolic compounds.
  • Example 2 Preparation of an extract of fresh jasmine flowers (Jasminum grandiflorum) by self-fermentation coupled with a second extraction process allowing the enrichment of small RNAs
  • the pH is adjusted to pH 1 1 in order to allow an enrichment of the extract in RNA of small molecular weights as well as in various phytomolecules.
  • the extract has a dry weight of 17.5 g/kg, and has a concentration of 6.4 g/kg of total sugars, 6.6 g/kg of proteins, 802, 9 mg/kg of total organic acids, 1301 mg/kg of total phenolic compounds and 45 mg/kg of low molecular weight DNA-free RNA.
  • the extract is then diluted with plant-derived propanediol to a final concentration of 30% propanediol and 70% self-fermented and extracted jasmine flower extract.
  • the diluted extract has a dry weight of 11.7 g/kg, and presents a concentration of 4.1 g/kg of total sugars, 4.6 g/kg of proteins, 562.5 mg/kg of total organic acids, 874 mg/kg of total phenolic compounds and 31 mg/kg of low molecular weight RNA.
  • the mixture is then heated for 1 hour at 25°C, then filtered by a first filtration on filters with a large porosity of 30 ⁇ m in order to remove the solid residual vegetable matter from the liquid part. Then sequential filtrations on filters of decreasing porosity are then carried out in order to clarify the plant extract until a sterilizing filtration at 0.2 m of porosity.
  • the mixture is then filtered using 30 ⁇ m porosity filters, to separate the solid material from the filtrate.
  • the liquid part obtained in the previous step constitutes an extract enriched in small control RNAs.
  • Example 4 Analysis of jasmine flower extracts from examples 1 and 2 versus a conventional extract and an extract enriched in small RNAs from example 3
  • the protein profile of the extracts is shown in [Fig. 1 ], The molecular weights of the conventional extract are distributed between 7200 and 170g/mol.
  • the self-fermentation process of example 1 provides a broadening of the molecular weight distribution of the proteins of the extract with masses ranging from 15800 to 170 g/mol.
  • Comparisons of protein profiles highlight the increase in the amount of protein during the fermentation process compared to a conventional extract for masses greater than 1000 g/mol.
  • example 2 self-fermentation coupled with an extraction
  • the quantification of total proteins shows a 50% increase between the extract of example 2 (self-fermented coupled with an extraction) and the extract enriched in small RNAs.
  • the autofermentation process therefore brings about a modification of the protein profile of the extract and the coupling to an extraction step makes it possible to increase the total protein concentration.
  • the sugar analysis shows a 54% decrease in glucose in the extract of example 2 (self-fermented coupled with an extraction) versus the extract enriched in small RNAs due to the sugar consumption of the micro-organisms in the self-fermented extract followed by extraction.
  • the analysis of the jasmintides highlights the presence of at least one jasmintide in the extract of example 2 (self-fermented coupled with an extraction) as well as the absence of jasmintides in the conventional extract.
  • Example 6 In vitro evaluation of the hyaluronidase inhibiting capacity of the extracts of fresh jasmine flowers obtained according to examples 1 and 3
  • Hyaluronidase catalyzes the breakdown of hyaluronic acid (a glycosaminoglycan strongly present in the dermis of the skin with moisturizing and anti-aging properties) into mono or disaccharides as well as smaller fragments of hyaluronic acid.
  • Hyaluronic acid has the ability to cause turbidity in the presence of an acidic albumin solution, which can be measured spectrophotometer at 600 nm.
  • Protocol The enzyme is incubated with the extracts obtained according to Examples 1 and 3 at the chosen concentration (vol/vol dilution) at a temperature of 37°C.
  • the enzyme substrate, hyaluronic acid is added to the mixture.
  • the whole is slowly homogenized then left to incubate for exactly 45 minutes at 37°C.
  • the hyaluronic acid remaining in the mixture is then brought into contact with an acidic albumin solution for 10 minutes before the transmittance is read at 600 nM on a spectrophotometer.
  • Example 7 Formula of a rich cream [248] [Table 5]
  • phase H sprinkle NatrosolTM in water at room temperature and homogenize while heating to 60°C;
  • composition is thus in the form of a pink butter cream, with a pH of between 4.90 and 5.40 and a viscosity (DO) of 160,000 - 210,000 cps (Brookfield RVT/Spindle D/5 RPM/ 1 minute/25°C).
  • Example 8 Evaluation of the jasmine extract obtained according to Example 2 on the expression of the Piezol receptor in reconstructed epidermis
  • Piezol and Piezo2 have been identified as ion channels mediating mechano-sensory transduction in mammalian cells (Coste, Bertrand et al. “Piezol and Piezo2 are essential components of distinct mechanically activated cation channels.” Science ( New York, NY) 330,6000 (2010): 55-60). In the skin, keratinocytes participate in mediating tactile sensation by detecting and encoding this information for sensory neurons. Piezol is the main mechanotransducer of keratinocytes (Holt, Jesse R et al. Spatiotemporal dynamics of PIEZO1 localization controls keratinocyte migration during wound healing. eLife vol. 10e65415. 27 Sep. 2021).
  • Example 9 Evaluation of the jasmine extract obtained according to example 2 on the expression of the oxytocin receptor (OXTR) on biopsies of human skin
  • Protocol The expression of the oxytocin receptor (OXTR) is evaluated by indirect immunofluorescence on skin biopsies, treated beforehand by topical application of the jasmine extract of example 2 diluted to 2% ( robbery/robbery) for 48 hours (twice a day). Control biopsies incubated in parallel under the same conditions receive the placebo (Phosphate Butter Saline, PBS). At the end of the incubation, the biopsies are fixed and embedded in paraffin for the production of histological sections. Detection of the OXTR receptor is carried out by incubation with anti-OXTR antibody (Proteintech).
  • the sections are incubated in the presence of the anti-rabbit secondary antibody coupled to a fluorophore (Alexa Fluor® 488, Invitrogen).
  • the sections are then examined under an Epi-fluorescence microscope (Zeiss Axiovert 200M microscope).
  • the expression of the OXTR receptor is then observed and quantified by image analysis (Volocity® image analysis software, Improvision).
  • Example 10 Evaluation of the jasmine extract obtained according to example 2 on the expression of oxytocin receptor (OXTR) messenger RNAs in cultured keratinocytes
  • Oxytocin is a natural peptide controlling a wide range of specific actions in its target tissues, ranging from cell growth and differentiation, to reproduction and social behavior (Carter, C Sue et al. “Is Oxytocin "Nature's Medicine Pharmacological reviews vol. 72.4 (2020): 829-861).
  • a large number of scientific publications support the beneficial role of oxytocin in skin physiology and aging (Hayre, Nicole. “Oxytocin Levels Inversely Correlate with Skin Age Score and Solar Damage.” Journal of drugs in dermatology: JDD vol.
  • Protocol The level of expression of the messenger RNAs of the oxytocin receptor OXTR is evaluated by qPCR (quantitative polymerase chain reaction) on skin keratinocytes in culture, previously treated with jasmine extract obtained according to Example 2 for 48 hours at 1% (vol/vol dilution) in the culture medium (once a day). At the end of the culture, the cells are lysed, the total RNAs are extracted then converted into complementary DNA (cDNA) by a reverse transcription reaction. Quantitation of OXTR receptor cDNAs was performed by qPCR using a TaqMan probe for detection. The delta-delta Ct quantification method made it possible to compare the difference in expression (ACt) between the gene of interest (OXTR) and the reference gene (GADPH).
  • Example 15 Evaluation of the jasmine extract obtained according to example 2 on the expression of viperine in keratinocytes in culture
  • Bugloss is one of the innate immune defense factors synthesized by keratinocytes (Garcia, Magali et al. “Innate Immune Response of Primary Human Keratinocytes to West Nile Virus Infection and Its Modulation by Mosquito Saliva.” Frontiers in cellular and infection microbiology vol 8387. 2 Nov 2018,). Viperine has been shown to catalyze the conversion of cytidine triphosphate (CTP) to 3'-deoxy-3',4'-didehydro-CTP (ddhCTP), a previously unknown ribonucleotide analog. Incorporation of ddhCTP causes the premature termination of RNA synthesis in some viruses (Gizzi, Anthony S et al.
  • CTP cytidine triphosphate
  • ddhCTP 3'-deoxy-3',4'-didehydro-CTP
  • Example 16 Evaluation of the jasmine extract obtained according to example 2 on the level of expression of E-cadherin, on biopsies of human skin pretreated with a piezol activity blocker (Dookul)
  • the sections are incubated in the presence of the anti-rabbit secondary antibody coupled to a fluorophore (Alexa Fluor® 488, Invitrogen).
  • the sections are then examined under an Epi-fluorescence microscope (Zeiss Axiovert 200M microscope).
  • the expression of the OXTR receptor is then observed and quantified by image analysis (Volocity® image analysis software, Improvision).
  • Example 17 Evaluation of the jasmine extract obtained according to example 2 on the level of expression of the messenger RNAs of the enzyme 11-HSDl, in cultured keratinocytes
  • 1 1 p-HSDl has been implicated in the degradation of epidermal barrier function during skin aging (Kim, B. J. et al. Increased Expression of 1 1 -Hydroxysteroid Dehydrogenase Type 1 Contributes to Epidermal Permeability Barrier Dysfunction in Aged Skin. Int J. Mol. Sci. 2021, 22, 5750.).
  • Protocol The level of expression of the messenger RNAs of the enzyme 1 1 p-HSD1 is evaluated by qPCR (quantitative polymerase chain reaction) on human skin keratinocytes in culture, previously treated with jasmine extract obtained according to Example 2 for 48 hours at 1% in the culture medium (once a day). At the end of the culture, the cells are lysed, the total RNAs are extracted then converted into complementary DNA (cDNA) by a reverse transcription reaction. The quantification of the cDNAs of the 1 1 p-HSD1 enzyme was carried out by quantitative chain polymerization using a TaqMan probe for detection. The delta-delta Ct quantification method made it possible to compare the difference in expression (ACt) between the gene of interest (1 1 p-HSD1) and the reference gene (GADPH).
  • ACt difference in expression
  • GADPH reference gene
  • Example 18 Evaluation of the jasmine extract obtained according to Example 2 to combat the signs of skin aging, improve the barrier function, skin luminosity and well-being in vivo.
  • Duration of the study 28 days including 3 control visits at D0 (first day of the study), D14 (after 14 days of applications) and D28 (end of the study after 28 days of applications ).
  • Oxytocin is a nonapeptide that plays a key role in several physiological functions (eg, milk ejection) as well as certain types of behavioral regulation such as attachment, social recognition and anxiety.
  • Results of the measures of well-being as illustrated by [Fig. 10], the results show that after one month of application, the volunteers in the treated group improved their well-being.
  • the analysis of the questionnaire on the WHO well-being index shows a 20% increase in well-being felt compared to D0 for the treated group, which is not the case for the placebo group.
  • a significant increase in oxytocin in saliva was also observed in the treated group compared to the placebo group, suggesting that the application of jasmine extract may help improve the release of oxytocin.
  • the treated group showed a significant improvement in their emotional state between D0 and D28, with the volunteers feeling less stressed, while no significant improvement was recorded in the placebo group.
  • transepidermal water loss (TEWL) measurements As shown in [Fig. 1 1 ], transepidermal water loss was significantly lower for the treated group than for the placebo group from 14 days of application until the end of the study. [318] Conclusion of the transepidermal water loss measurements: this result demonstrates that the skin barrier has been reinforced after 14 days of application of the Jasmine extract formulated at 2%.

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Abstract

L'invention concerne des procédés de préparation d'extraits végétaux comprenant une étape d'autofermentation et optionnellement des étapes d'extraction permettant un enrichissement des extraits en ARN de petits poids moléculaires. L'invention concerne encore des compositions comprenant de tels extraits et leurs utilisations cosmétiques pour lutter contre les signes du vieillissement cutané, la perte de fermeté ou de tonicité, améliorer la fonction barrière et l'hydratation, éclaircir la peau ou encore améliorer les défenses immunitaires innées de la peau et le bien-être in vivo.

Description

Description
Titre de l'invention : PROCÉDÉ D’OBTENTION D'EXTRAITS VÉGÉTAUX COMPRENANT UNE ETAPE D’AUTOFERMENTATION, COMPOSITIONS COMPRENANT DE TELS EXTRAITS ET LEURS UTILISATIONS COSMETIQUES
Domaine technique
[1 ] L'invention concerne le domaine de la cosmétique et plus particulièrement la préparation d’extraits actifs d’origine végétale entrant dans des formulations cosmétiques pour lutter contre les signes du vieillissement cutané, la perte de fermeté, améliorer la fonction barrière et l’hydratation ou encore éclaircir la peau.
Arrière-plan technique de l’invention
[2] La préparation d’extraits végétaux utilisables en cosmétique fait appel à l’ensemble des techniques de purifications connues en chimie et phytochimie, par exemple des méthodes d’extraction utilisant des solvants organiques de type polaire ou apolaire (EP3682865) .
[3] Or, on a constaté une volonté toujours plus grande des consommateurs de se tourner vers des produits naturels renfermant le moins d'ingrédients synthétiques possibles. Pour répondre à cette exigence nouvelle, les extraits décrits dans la présente demande sont 100 % naturels.
[4] Une approche consiste à utiliser les micro-organismes pour orchestrer la biotransformation des végétaux. De nombreux procédés faisant intervenir des micro-organismes sélectionnés ou modifiés sont décrits dans la littérature et sont utilisés en milieu industriel. Les plus répandus reposent sur la fermentation, connue depuis des millénaires comme procédé de conservation des aliments. Les principaux avantages de la fermentation sont la conservation, l’amélioration du goût ou encore de la qualité nutritionnelle des aliments, en raison de la présence d'une quantité plus élevée de molécules bioactives facilement assimilables.
[5] Dans le domaine de la cosmétique, les micro-organismes sont largement utilisés pour leurs effets bénéfiques directs sur la peau ou pour produire des extraits de plantes fermentés ou biotransformés. On peut citer par exemple les documents EP3744339A1 et CN1 10680774A qui décrivent des procédés de fermentation de plantes, respectivement du Citrus auriantium et des fleurs de jasmin, impliquant l’inoculation par des levures de l’espèce Saccharomyces cerevisiae ou encore le document CN101243897A qui décrit l’utilisation de bactéries lactiques pour produire des extraits de fleurs cosmétiques ou alimentaires.
[6] Dans le même domaine, le document FR3103826 décrit la préparation d’un consortium de micro-organismes composé d’au moins une bactérie lactique, une levure et une bactérie acétique, pour préparer des extraits végétaux riches en composés actifs, aptes à être utilisés dans les domaines pharmaceutiques, cosmétiques et alimentaires.
[7] Des procédés biotechnologiques mettant en oeuvre des micro-organismes sur des milieux nutritifs synthétiques adaptés pour produire des composés d'intérêt comme les vitamines, l'acide citrique, l'acide lactique ou la vanilline (US 20060269632) sont également décrits.
[8] Cependant les procédés cités ci-dessus impliquent l’apport exogène de microorganismes ou l’apport de nutriments spécifiques pour stimuler la croissance des micro-organismes qui vont assurer la biotransformation des matières végétales.
[9] La fermentation peut aussi reposer sur la microflore endogène présente à la surface ou dans les structures internes des végétaux. Il s’agit d’une communauté de micro-organismes bactériens et fongiques, mutualistes ou symbiotiques appelée phytobiote, hébergée par quasiment tous les végétaux ou partie de végétaux (fruits, feuilles, fleurs, tiges, racines, graines, champignons, algues). On parle alors de fermentation spontanée ou d’autofermentation.
[10] Ainsi, le document US20060269632A1 décrit la préparation d’un médicament efficace contre les allergies obtenu en mélangeant des pousses de pin avec de l’eau et des sucres et en laissant se développer une fermentation spontanée pendant plusieurs mois, en conditions anaérobies.
[1 1 ] Un problème que se propose de résoudre l’invention est de fournir un nouveau procédé de préparation d’extraits végétaux naturels, simple à mettre en oeuvre, sans ajout d’aucun micro-organisme vivant, d’aucune enzyme, ni d’aucun nutriment exogène et présentant néanmoins une efficacité biologique remarquable, ainsi qu’une absence de toxicité.
[12] Les inventeurs ont dans ce but développé un procédé comprenant une étape d’autofermentation contrôlée conduite essentiellement à partir du phytobiote des matières végétales et notamment les fleurs, les fruits, les feuilles, et les racines, sans aucun apport exogène. [13] Dans ces conditions, une quantité importante d’acides organiques et d’acides phénoliques sont générés. Les extraits végétaux obtenus contiennent alors une large gamme de phytomolécules leur conférant une efficacité biologique prouvée.
[14] Les extraits ainsi obtenus peuvent être utilisés en cosmétique pour le soin de la peau et plus particulièrement pour lutter contre les signes du vieillissement cutané, la perte de fermeté ou de tonicité, améliorer la fonction barrière et l’hydratation, éclaircir la peau ou encore améliorer les défenses immunitaires innées de la peau et le bien-être in vivo.
Résumé de l’invention
[15] L’invention a pour objet un procédé d’autofermentation permettant l’obtention d’extraits végétaux enrichis en acides organiques et en acides phénoliques, comprenant les étapes suivantes :
[16] a) on met en présence la matière végétale avec de l’eau,
[17] b) on ajuste si nécessaire le pH à une valeur comprise entre 4 et 9,
[18] c) on maintient le mélange sous agitation douce pendant un temps compris entre 6 heures et 48 heures, à une température comprise entre 20 et 60°C, à un pH compris entre 4 et 7, pour permettre le processus d’autofermentation, dans une enceinte permettant les échanges gazeux avec l’atmosphère.
[19] d) on purifie le mélange obtenu en c) pour éliminer la matière végétale solide résiduelle et récolter la partie liquide,
[20] e) on réalise au moins une filtration de la partie liquide obtenue à l’étape précédente,
[21 ] f) on contrôle et réajuste le pH du filtrat, si nécessaire, à une valeur comprise entre 4 et 8 et préférentiellement entre 4 et 7.
[22] L’invention a encore pour objet un procédé d’autofermentation couplé à une extraction ultérieure permettant l’enrichissement en ARN de petits poids moléculaires, comprenant les étapes suivantes :
[23] a) on met en présence la matière végétale avec de l’eau,
[24] b) on ajuste si nécessaire le pH à une valeur comprise entre 4 et 9, [25] c) on maintient le mélange sous agitation douce pendant un temps compris entre 6 heures et 48 heures, à une température comprise entre 20 et 60°C, à un pH compris entre 4 et 7, pour permettre le processus d’autofermentation, dans une enceinte permettant les échanges gazeux avec l’atmosphère.
[26] d’J Au mélange obtenu à l’étape c) on ajoute de l'acide phytique à une concentration comprise entre 1 et 5 mM
[27] e’J on ajuste si nécessaire le pH à une valeur comprise entre 10 et 1 1 ,
[28] f’J on maintient le mélange sous agitation pendant 1 à 3 heures, à une température comprise entre 50 °C et 80 °C,
[29] g’) on sépare la matière végétale résiduelle
[30] h’) on purifie la fraction liquide obtenue par des filtrations successives pour clarifier l’extrait,
[31 ] i’J on ajuste le pH du mélange obtenu à une valeur comprise entre 6 et 8,
[32] j’J Optionnellement on dilue l’extrait par un solvant physiologiquement acceptable.
[33] L’invention a encore pour objet des extraits végétaux dilués, avantageusement obtenus à partir de fleurs fraîches de jasmin (Jasminum grandiflorum) par le procédé d’autofermentation couplé à une extraction ultérieure permettant l’enrichissement en petits ARN ci-dessus et comprenant au moins 300 mg/kg de composés phénoliques dont au moins 140 mg/Kg d’acides phénoliques et au moins 300 mg/kg d’acide organiques, dont au moins 50 mg/Kg d’acide shikimique et 10 mg/kg d’acide quinique.
[34] L’invention a encore pour objet une composition comprenant une quantité efficace d’extrait obtenu par un des procédés précédents et un milieu physiologique.
[35] L’invention a encore pour objet l’utilisation cosmétique de la composition précédente pour lutter contre les signes du vieillissement cutané, la perte de fermeté, améliorer la fonction barrière et l’hydratation, éclaircir la peau, atténuer la diminution liée à l’âge du nombre ou de l'activité des récepteurs mécano-sensoriels du toucher (Piezol ) et des récepteurs à l’ocytocine (OXTR), ou encore, améliorer les défenses immunitaires innées de la peau et le bien-être in vivo. [36] L’invention a également pour objet une composition comprenant les extraits végétaux de l’invention pour améliorer les défenses immunitaires innées de la peau.
Brève description des dessins
[37] [Fig. 1 ] Profils protéiques obtenus par HPLC des extraits de jasmin
[38] [Fig. 2] Analyse par HPLC des composés phénoliques présents dans les extraits de jasmin
[39] [Fig. 3] Analyse par HPLC des acides organiques présents dans les extraits de jasmin
[40] [Fig. 4] Evaluation d’un extrait de jasmin autofermenté et enrichi en petits ARN à 2 % sur l’expression du récepteur Piezol dans des épidermes reconstruits
[41 ] [Fig. 5] Evaluation d’un extrait de jasmin autofermenté et enrichi en petits ARN à 2 % sur l’expression du récepteur à l’ocytocine (OXTR) sur des biopsies de peau humaine
[42] [Fig. 6] Evaluation d’un extrait de jasmin autofermenté et enrichi en petits ARN à 2 % sur l’expression des ARN messagers du récepteur à l’ocytocine (OXTR) dans des kératinocytes en culture
[43] [Fig. 7] Evaluation d’un extrait de jasmin autofermenté et enrichi en petits ARN à 2 % sur l’expression de la vipérine dans des kératinocytes en culture
[44] [Fig. 8] Evaluation d’un extrait de jasmin autofermenté et enrichi en petits ARN à 2 % sur le niveau d’expression de la E-cadhérine, sur des biopsies de peau humaine prétraitées avec un bloqueur de l’activité de Piezol (Dookul )
[45] [Fig. 9] Evaluation d’un extrait de jasmin autofermenté et enrichi en petits ARN à 2 % sur le taux d’expression des ARN messagers de l’enzyme 1 1 p-HSDl , dans des kératinocytes en culture
[46] [Fig 10] Evaluation de l’effet d’un extrait de jasmin autofermenté et enrichi en petits ARN à 2 % sur le bien-être par questionnaire de l’OMS, par dosage de l’ocytocine salivaire et mesure de l’état émotionnel
[47] [Fig 1 1 ] Evaluation de l’effet d’un extrait de jasmin autofermenté et enrichi en petits ARN à 2 % de la perte insensible en eau [48] [Fig 12] Evaluation de l’effet d’ un extrait de jasmin autofermenté et enrichi en petits ARN à 2 % sur l’ITA (Individual Topology Angle)
[49] [Fig 13] Evaluation de l’effet d’un extrait de jasmin autofermenté et enrichi en petits ARN à 2 % sur la rugosité de la peau au niveau du front
[50] [Fig 14] Evaluation de l’effet d’un extrait de jasmin autofermenté et enrichi en petits ARN à 2 % sur l’état de la peau par l’expert clinique
[51 ] [Fig 15] Schéma du procédé d’autofermentation et du procédé d’autofermentation couplé à une extraction permettant l’enrichissement en ARN de petits poids moléculaires
Description détaillée de l’invention
Définitions
[52] Tous les termes utilisés dans la présente description ont le sens le plus largement connus sauf mention contraire. Pour les besoins de l’invention les termes suivants sont définis comme suit :
[53] On entend par« extrait », le résultat de tous procédés d’extraction aqueuse de la matière végétale.
[54] Par« phytobiote » on entend l’ensemble des micro-organismes présents à la surface ou à l’intérieur de la matière végétale.
[55] Dans la présente description, on entend par « matière végétale » ou
« végétal », un organisme vivant appartenant au règne végétal et pourvu d’un phytobiote, incluant, entre autres, les plantes, les mousses, les lichens et les algues.
[56] On entend par« matière végétale fraîche » que la matière végétale utilisée dans le procédé d’extraction n’a subie aucun traitement chimique ou mécanique susceptible d’altérer son phytobiote. Par exemple, la matière végétale a été récoltée peu de temps avant son engagement dans le procédé ou elle a été congelée rapidement après sa récolte ou encore elle a été séchée dans des conditions permettant une bonne préservation du phytobiote, par exemple à basse température. La matière végétale fraîche peut inclure des résidus de plante obtenus après transformation.
[57] On entend par« autofermentation » un processus de fermentation résultant du propre phytobiote naturellement présent dans ou à la surface des matières végétales engagées dans le procédé d’extraction décrit dans la présente demande.
[58] Par« protéines », on entend des molécules de grande taille composées de chaînes d’acides aminés, mais aussi les polypeptides et peptides de taille inférieure à 20 kDa (ou 20 kg/mol).
[59] Par « petits ARN » ou « ARN de petits poids moléculaires » on entend un mélange d’ARN (acides ribonucléiques) non codants, de petit poids moléculaire, d’une longueur d’au maximum 150 nucléotides, tels que tous types de petits ARN non-messagers, simples et/ou doubles brins, par exemple les micro- ARN, les ARN interférents, les introns, les petits ARN nucléaires ou encore tout fragment d’ARN.
[60] Par « acides organiques » on entend des dérivés du catabolisme des acides aminés, des acides gras et des sucres comprenant une fonction acide. Ce groupe comprend les acides carboxyliques a-hydroxylés (AHA) ou polyhydroxylés tels que les acides glycolique, lactique, malique, citrique, tartrique, shikimique, quinique, les acides carboxyliques dérivés de sucres de fruits ou de toutes autres parties de plantes tels que les acides uroniques, ou encore les diacides tels que l’acide succinique.
[61 ] Par « composés phénoliques », on entend l’ensemble des molécules possédant un ou plusieurs cycles aromatiques portant eux-mêmes un ou plusieurs groupements hydroxyles, tels que les acides phénoliques, les flavonoïdes ou leurs dérivés, les tannins ou tous autres polyphénols.
[62] Par« acides phénoliques », on entend les composés phénoliques dérivés de l’acide benzoïque et de l’acide cinnamique, molécules possédant un seul cycle aromatique.
[63] Par « flavonoïdes » on entend les composés phénoliques partageant tous une même structure de base formée par deux cycles aromatiques reliés par trois carbones.
[64] Par« flavonoïdes glycosylés » on entend les flavonoïdes liés à un ou plusieurs sucres.
[65] Par « sucres » on entend tous les glucides tels que les mono- et disaccharides ainsi que les oligo- et polysaccharides contenus dans l’extrait. [66] Par « jasmintides » on entend des peptides issus du jasmin caractérisés par une composition riche en cystéine et des ponts disulfures non classiques.
[67] Par « phytomolécules d’intérêt », on entend l’ensemble des molécules présentes dans les extraits de l’invention et notamment, les protéines, les sucres, les composés phénoliques, les acides organiques, les petits ARN d’une longueur d’au maximum 150 nucléotides.
[68] Quand une gamme de valeur est décrite, les bornes de cette gamme doivent être comprises comme incluant explicitement toutes les valeurs intermédiaires de la gamme. Par exemple, une gamme de valeur comprise entre 1 % et 10 % doit être comprise comme incluant 1 %, 2 %, 3 %, 4 %, 5 %, 6 %, 7 %, 8 %, 9 %, et 10 %, ainsi que toutes les valeurs décimales entre 1 % et 10 %.
[69] Les valeurs numériques en pourcentage sont des pourcentages en poids, c’est-à-dire le poids d’un composé par rapport au poids total du mélange envisagé, sauf spécifié autrement.
[70] Les compositions décrites dans la présente demande peuvent
« comprendre », « consister en » ou « consister essentiellement en » les composés essentiels ou les ingrédients optionnels.
[71 ] « Consister essentiellement en » signifie que la composition ou le composant peut inclure des ingrédients additionnels, mais seulement si les ingrédients additionnels ne modifient pas les caractéristiques de bases ou les nouvelles caractéristiques de la composition ou de l’utilisation décrite dans la présente demande.
[72] Un « milieu physiologiquement acceptable » désigne un véhicule adapté pour une mise en contact avec les couches externes de la peau ou des muqueuses, sans provoquer de toxicité, d’irritation, de réponse allergique indue et similaire ou de réaction d’intolérance, et proportionné à un rapport avantage/risque raisonnable.
[73] « Peau » désigne la peau du visage et du corps y compris le cuir chevelu (incluant les follicules pileux et les espaces cutanés inter-folliculaires) et les phanères (cheveux, poils et ongles).
[74] Par « quantité efficace » on désigne la quantité minimum d’extrait selon l’invention qui est nécessaire pour obtenir au moins une des activités biologiques recherchées, sans que cette quantité soit toxique. [75] Par « hydratation de la peau », on entend le contenu et la répartition en eau des couches supérieures de l’épiderme.
[76] Par « signes du vieillissement cutané » on entend toutes modifications de l'aspect extérieur de la peau dues au vieillissement comme, par exemple, les rides et ridules, les crevasses, les poches sous les yeux, les cernes, le flétrissement, la perte d'élasticité, de fermeté et/ou de tonus de la peau, les désordres pigmentaires tels que le lentigo sénile ou lentigo solaire, mais également toutes modifications internes de la peau qui ne se traduisent pas systématiquement par un aspect extérieur modifié comme, par exemple, la diminution du nombre ou de l'activité des récepteurs mécano-sensoriels du toucher (Piezo 1 ) et des récepteurs à l’ocytocine (OXTR), l’amincissement de la peau, ou toutes dégradations internes de la peau consécutives à des stress environnementaux tels que la pollution et les rayonnements solaires incluant les UV.
[77] Par « bien être in vivo » on entend l’état émotionnel d’une personne, le sentiment subjectif de bien-être, la production physiologique d’ocytocine et la mesure du comportement ou de l’expression émotionnelle.
[78] Il est bien entendu que l’invention concerne les mammifères et plus particulièrement l’être humain.
Procédés d’autofermentation et d’extraction et extraits obtenus
[79] L’invention a pour objet un procédé d’obtention d’extraits végétaux enrichis en acides organiques et en acides phénoliques comprenant les étapes suivantes :
[80] a) on met en présence la matière végétale avec de l’eau,
[81 ] b) on ajuste si nécessaire le pH à une valeur comprise entre 4 et 9,
[82] c) on maintient le mélange sous agitation douce pendant un temps compris entre 6 heures et 48 heures, à une température comprise entre 20 et 60°C, à un pH compris entre 4 et 7,
[83] d) on purifie le mélange obtenu en c) pour éliminer la matière végétale solide résiduelle et récolter la partie liquide.
[84] e) on réalise au moins une filtration de la partie liquide obtenue à l’étape précédente. [85] f) on contrôle et réajuste le pH du filtrat, si nécessaire, à une valeur comprise entre 4 et 8.
[86] C’est la matière végétale fraîche mise en présence d’eau qui apporte les éléments nutritifs nécessaires à la croissance du phytobiote. La ressource en éléments nutritifs est suffisante pour permettre le développement et la survie du phytobiote pendant plusieurs jours.
[87] Le procédé de l’invention est mis en oeuvre sans apport d’éléments nutritifs exogènes et n’utilise pas de détergents ni de solvants potentiellement toxiques en cosmétique. Il donc est simple à mettre en oeuvre et présente un impact réduit sur l’environnement.
[88] A l’étape c), une agitation modérée permet de maintenir les microorganismes du phytobiote en suspension dans le mélange.
[89] Le procédé d’autofermentation de l’étape c) est réalisé en milieu ouvert pour permettre les échanges gazeux avec l'atmosphère, sans contrainte particulière pour assurer la stérilité, mais peut alternativement être mis en oeuvre dans un fermenteur afin de contrôler les échanges gazeux.
[90] L’autofermentation a lieu quand les micro-organismes du phytobiote, par le biais de leurs enzymes, métabolisent les éléments nutritifs d’origine végétale, tels que les sucres, les protéines, les polyphénols pour produire un extrait riche en diverses familles de composés plus simples et plus facilement assimilables comme les acides organiques, les peptides et les acides phénoliques.
[91 ] Une étude de la cinétique de la croissance microbienne couplé à des essais, ont permis d’observer une modification significative du milieu au cours de l’autofermentation, caractérisée par une baisse de la teneur en flavonoïdes, une baisse de la concentration en sucres, en particulier le glucose et l’augmentation de marqueurs de fermentation comme les acides phénoliques et organiques attestant de l’activité fermentative des micro-organismes.
[92] Dans un mode de réalisation particulier, les matières végétales utilisées sont des plantes de la famille des oleaceae, poaceae ou fabaceae.
[93] Dans un autre mode de réalisation particulier, les matières végétales utilisées sont des plantes de la famille des oleaceae telles que le jasmin de l’espèce Jasmin um grandiflorum. [94] Dans un mode de réalisation particulier, les parties de plantes utilisées sont choisies parmi les fleurs, les fruits, les feuilles et les racines.
[95] Dans un mode de réalisation préféré, les parties de plantes utilisées sont les fleurs.
[96] Dans un autre mode de réalisation, les matières végétales utilisées sont des algues.
[97] Dans un autre mode de réalisation particulier, la matière végétale est un résidu de plante obtenu après transformation comme les tourteaux ou les drèches.
[98] A l’étape a) on utilise de l’eau distillée, déminéralisée ou riche en sels minéraux et/ou oligo-éléments. L’eau préférentiellement utilisée est de l’eau distillée.
[99] La matière végétale utilisée à l’étape a) peut être entière ou broyée de façon mécanique à l’aide d’un broyeur à lame par exemple pour diminuer la granulométrie de 0,5 mm à quelques centimètres sans affecter la viabilité des micro-organismes. Le broyage peut être réalisé à sec ou dans l’eau.
[100] Lorsque la matière végétale est composée de fleur, de préférence elle est utilisée entière, c’est-à-dire non broyée. En effet, des extractions comparatives réalisées avec ou sans broyage ont montré que la diffusion passive des composés contenus dans les fleurs est suffisamment élevée pour rendre le broyage inutile.
[101 ] En revanche, lorsque la matière végétale de départ est trop épaisse ou composée de fragments de grande taille, par exemple, une algue entière ou une racine, de préférence elle est préalablement broyée avant l’étape a).
[102] A l’étape a) le rapport matière végétale / eau est de préférence compris entre 3 à 30 % en poids/poids, plus préférentiellement compris entre 3 et 15 %, encore plus préférentiellement il est de 3 %, 5 % ou 15 %.
[103] Au début de l’étape b) le pH est contrôlé et ajusté à une valeur comprise entre 4 et 9, préférentiellement entre 6 et 8 et encore plus préférentiellement à pH 7, par l’ajout d’acide chlorhydrique (HCl), d’acide citrique ou de soude (NaOH). Le pH est ensuite contrôlé régulièrement tout au long de l’étape b) et éventuellement réajusté. [104] Lorsque de l’acide citrique est utilisé à cette étape, cette quantité d’acide citrique est retirée dans les calculs finaux de concentration en acides organiques de l’extrait.
[105] A l’étape c), l’agitation du mélange est avantageusement une agitation modérée de type brassage. La température est ajustée et maintenue entre 20 et 60°C, plus préférentiellement entre 20 et 40°C, et encore plus préférentiellement entre 30 et 40°C. Ces plages de températures sont idéales pour assurer le développement optimal des micro-organismes, en effet en dessous de 20°C la croissance microbienne est ralentie et au-dessus de 60°C la viabilité des microorganismes diminue.
[106] L’étape c) doit être réalisée à un pH et à température optimaux pour permettre d’enrichir la solution d’extraction aqueuse en phytomolécules et créer les conditions de croissance du phytobiote présent dans le mélange. Pendant cette étape le pH ne doit pas descendre en dessous de 5.
[107] L’étape c) d’autofermentation se déroule pendant une durée comprise entre 1 et 48 h, préférentiellement entre 6 et 30 h, et plus préférentiellement entre 15 et 30 h. Une étude de la cinétique de croissance microbienne a démontré que la croissance est forte, dans les conditions du procédé, pendant une période d’au moins 30 heures, puis atteint un plateau.
[108] Optionnellement, à la fin de l’étape c) la matière solide résiduelle peut être broyée pour libérer le contenu cellulaire des micro-organismes et augmenter ainsi le rendement d’extraction des phytomolécules.
[109] Pour réaliser l’étape d) toute méthode connue par l’homme du métier pourra être utilisée. Le mélange obtenu en c) peut par exemple être filtré sur des filtres de porosité supérieure à 30 pm. Préférentiellement le mélange obtenu en c) est centrifugé à faible vitesse, par exemple pendant au moins 10 min à 4000 g.
[1 10] Pour réaliser l’étape e), de préférence on réalise des filtrations successives en abaissant le seuil de filtration de 30 à 1 pm afin de clarifier le mélange. De préférence, au moins 4 filtrations sont réalisées avec des filtres de porosité allant de 30 pm, 4 pm, 2 et 1 pm.
[1 1 1 ] A l’étape f) on contrôle et réajuste le pH du filtrat, si nécessaire, à une valeur comprise entre 4 et 8, et préférentiellement à une valeur comprise entre 4 et 7. Le pH peut être ajusté par ajout d’une solution ou de soude (NaOH) ou d’acide chlorhydrique (HCl) ou tout outre acide équivalent, compatible avec une utilisation cosmétique, tel que de l’acide citrique. Cette étape est indispensable pour éviter la précipitation des phytomolécules d’intérêt comme les sucres, les composés phénoliques, les acides organiques, les protéines et ainsi obtenir un extrait stable. De préférence, le pH est ajusté à une valeur comprise entre 4 et 7.
[1 12] A l’étape g) optionnellement on peut stériliser le filtrat, par toute méthode connue de l’homme du métier, par exemple par étuvage ou préférentiellement par filtration stérilisante sur filtre de 0,2 à 0,45 pm.
[1 13] A la fin de l’étape f) ou g) on obtient un extrait autofermenté concentré.
[1 14] Cet extrait autofermenté concentré est caractérisé par un poids sec de 4 à 30 g/kg, 0,5 à 6 g/kg de sucres, 300 à 900 mg/kg d’acides organiques dont 50 - 500 mg/Kg d’acide shikimique et 10 à 100 mg/Kg d’acide quinique, 300 à 2000 mg/kg de composés phénoliques dont 100 à 200 mg/Kg d’acides phénoliques et de l à 10 g/Kg protéines. Néanmoins, les extraits obtenus peuvent présenter une variabilité importante en fonction de facteurs tels que le lieu ou l’année de récolte, la saison, les conditions climatiques, le stress biotique, etc.
[1 15] L’extrait autofermenté ne contient pas d’éthanol puisque le procédé de l’invention n’est pas une fermentation de type alcoolique.
[1 16] h) L’extrait autofermenté concentré ainsi obtenu peut être dilué dans un solvant physiologiquement acceptable pour un usage cosmétique.
[1 17] Le procédé d’autofermentation permet l’enrichissement de l’extrait en acides phénoliques issus de la transformation des polyphénols et en acides organiques tels que les acides quinique, succinique et shikimique et lactique.
[1 18] Ainsi, l’analyse par chromatographie liquide haute performance a montré que de manière inattendue les extraits autofermentés concentrés obtenus par le procédé décrit ci-dessus contiennent au moins 300 mg/kg de composés phénoliques dont au moins 100 mg/Kg d’acides phénoliques et au moins 300 mg/kg d’acide organiques dont au moins 50 mg/Kg d’acide shikimique et 10 mg/kg d’acide quinique.
[1 19] En effet, d’une manière générale, l’analyse des acides organiques contenus dans les fleurs et en particulier dans les fleurs de lavande, ne contiennent pas d’acides shikimique et quinique. [120] A l’étape h) parmi les solvants physiologiquement acceptables, on peut citer l’eau, le glycérol, l’éthanol, le propanediol ainsi que sa version naturelle issue du maïs, le butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés, les polyols cycliques ou tout mélange de ces solvants. Un des avantages d’une telle dilution, outre d’obtenir exactement les concentrations en phytomolécules recherchées, est d’améliorer la stabilité et la conservation de l’extrait végétal autofermenté.
[121 ] Préférentiellement, l’extrait autofermenté concentré est dilué par du butylène glycol, du propanediol ou encore de la glycérine et encore plus préférentiellement dilué par ajout de 30 % de propanediol pour assurer sa stabilité et sa conservation dans le temps en empêchant les contaminations. L’extrait concentré peut également être dilué par ajout de 30 % de glycérine associée à tous types de conservateurs hydrosolubles tels que du sodium benzoate ou du potassium sorbate à la concentration finale de 0,5 % ou encore du phénoxyethanol à la concentration finale de 1 ,5 %.
[122] Cet extrait dit dilué comprend en poids du poids total de l’extrait de 2 à 20 g/kg d’extrait sec, 0,2 à 4 g/kg de sucres, 100 à 700 mg/kg d’acides organiques dont 50 - 350 mg/Kg d’acide shikimique et 10 à 70 mg/Kg d’acide quinique, 100 à 1300 mg/kg de composés phénoliques dont 70 à 140 mg/Kg d’acides phénoliques et 0,1 à 5 g/Kg de protéines.
[123] L’extrait de l’invention comprend ainsi une large gamme de phytomolécules pouvant présenter des effets bénéfiques sur la peau, sans présenter de risque d’irritation cutanée ou autre dommage pour la santé.
[124] Dans ce mode de réalisation particulier, la matière végétale est avantageusement une plante de la famille des oleaceae, des poaceae ou encore des fabaceae.
[125] Dans ce mode de réalisation particulier, la matière végétale est encore plus avantageusement la fleur fraîche de jasmin, de préférence de l’espèce Jasminum grandiflorum.
[126] En outre, après l’étape c) des étapes supplémentaires d’extraction peuvent être réalisées selon tout procédé connu de l’homme de métier. [127] Parmi ces étapes supplémentaires d’extraction, on peut citer un procédé d’extraction permettant l’enrichissement en ARN de petits poids moléculaires décrit dans les brevets FR 1670672 et US 1 1 ,021 ,505.
[128] Pour réaliser ce procédé, on réalise les étapes suivantes :
[129] Etape d ’ ) Au mélange obtenu à l’étape c) on ajoute de l'acide phytique à une concentration comprise entre 1 et 5 mM.
[130] Etape e’J on ajuste, si nécessaire, le pH à une valeur comprise entre 10 et 1 1 .
[131 ] Etape f’J on maintient le mélange sous agitation pendant 1 à 3 heures, de préférence pendant 2 heures, à une température comprise entre 50 °c et 80°C, de préférence à 80°C.
[132] Etape g’) on sépare la matière végétale résiduelle.
[133] Etape h’) on purifie la fraction liquide obtenue par des filtrations successives pour clarifier l’extrait.
[134] Etape i’J on ajuste le pH du mélange obtenu à une valeur comprise entre 6 et 8.
[135] Un des avantages de coupler le procédé d’autofermentation avec un procédé d’extraction complémentaire permettant l’enrichissement en petits ARN est d’augmenter d’au moins d’un facteur 2 le rendement de l’extraction en comparaison avec un extrait obtenu par autofermentation. La concentration en protéines, en sucres, acides organiques et en composés phénoliques totaux est également augmentée d’environ un facteur 2 à 3.
[136] Ainsi les extraits concentrés enrichis en petits ARN obtenus par les procédés décrits ci-dessus ont un poids sec au moins 2 fois supérieur au poids sec des extraits obtenus par simple autofermentation et contiennent au moins 500 mg/kg de composés phénoliques dont au moins 600 mg/kg d’acide organiques.
[137] De tels extraits concentrés sont caractérisés par un poids sec de 4 à 60 g/kg, et comprennent 0,5 à 10 g/kg de sucres, 600 à 1200 g/kg d’acides organiques dont 50 à 700 mg/Kg d’acide shikimique et 20 à 200 mg/Kg d’acide quinique, 500 à 3000 mg/kg de composés phénoliques dont 200 à 300 mg/Kg d’acides phénoliques, 2 à 20 g/Kg protéines, ainsi que de 10 à 100 mg/Kg d’ARN de petits poids moléculaires. [138] Dans ce mode de réalisation particulier, la matière végétale est avantageusement une plante de la famille des oleaceae, des poaceae ou encore des fabaceae.
[139] Dans ce mode de réalisation particulier, la matière végétale est encore plus avantageusement la fleur fraîche de jasmin, de préférence de l’espèce Jasminum grandiflorum.
[140] Lorsque la matière végétale est la fleur fraîche de jasmin (Jasminum grandiflorum), l’extrait obtenu a un poids sec au moins 2 fois supérieur au poids sec des extraits obtenus par simple autofermentation et comprend au moins 500 mg/kg de composés phénoliques, au moins 600 mg/kg d’acide organiques et au moins un jasmintide.
[141 ] Les jasmintides font partie de la famille des cyclotides qui auraient une activité proche de l’ocytocine en relation avec des effets de bien-être et antiâges (Adriano Mollica et al. 2015, Cyclotides: a natural combinatorial peptide library or a bioactive sequence player?, Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry, 30:4, 575-580).
[142] Etape j') Optionnellement, on dilue l’extrait par un solvant physiologiquement acceptable.
[143] Pour réaliser cette étape de dilution, le solvant physiologiquement acceptable est choisi parmi l’eau, le glycérol, l’éthanol, le propanediol ainsi que sa version naturelle issue du maïs, le butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés, les polyols cycliques ou tout mélange de ces solvants. Un des avantages d’une telle dilution, outre d’obtenir exactement les concentrations en phytomolécules recherchées, est d’améliorer la stabilité et la conservation de l’extrait végétal autofermenté.
[144] Préférentiellement, l’extrait autofermenté enrichi en petits ARN concentré est dilué par du butylène glycol, du propanediol ou encore de la glycérine et encore plus préférentiellement dilué par ajout de 30 % de propanediol pour assurer sa stabilité et sa conservation dans le temps en empêchant les contaminations. L’extrait concentré peut également être dilué par ajout de 30 % de glycérine associée à tous types de conservateurs hydrosolubles tels que du sodium benzoate ou du potassium sorbate à la concentration finale de 0,5 % ou encore du phénoxyethanol à la concentration finale de 1 ,5 %. [145] Après dilution dons un solvant physiologiquement acceptable, de tels extraits sont caractérisés par un poids sec de 2 à 40 g/kg et comprennent de 0,2 à 5 g/kg de sucres ; 300 à 900 mg/kg d’acides organiques dont 50 à 500 mg/Kg d’acide shikimique et 10 à 200 mg/kg d’acide quinique ; 300 à 2000 mg/kg de composés phénoliques dont 140 à 210 mg/Kg d’acides phénoliques, 2 à 10 g/kg de protéines ainsi qu’au moins 10 à 60 mg/Kg d’ARN de petits poids moléculaires.
[146] Lorsque la matière végétale est la fleur fraîche de jasmin (Jasminum grandiflorum) , l’extrait comprend en outre au moins un jasmintide.
Compositions cosmétiques
[147] Un autre objet de l’invention est une composition cosmétique comprenant une quantité efficace d’au moins un extrait végétal obtenu selon le procédé décrit dans la présente demande.
[148] Avantageusement, les extraits végétaux de l’invention sont utilisés sous forme diluée et sont ajoutés dans un milieu physiologiquement acceptable à une concentration de 0,05 à 5 % en poids par rapport au poids total de la composition, préférentiellement à une concentration de 0,1 à 2,5 % en poids par rapport au poids total de la composition.
[149] La composition utilisable selon l'invention est formulée pour être appliquée par toute voie appropriée, notamment orale, ou topique externe, et la formulation des compositions sera adaptée par l'homme du métier.
[150] Préférentiellement, les compositions selon l'invention se présentent sous une forme adaptée à l’application par voie topique. Ces compositions doivent donc contenir un milieu physiologiquement acceptable, c’est-à-dire compatible avec la peau et les phanères, sans risque d’inconfort lors de leur application et couvrent toutes les formes cosmétiques adaptées.
[151 ] Les compositions pour la mise en oeuvre de l’invention pourront notamment se présenter sous forme d'une solution aqueuse, hydroalcoolique ou huileuse, d'une émulsion huile-dans-eau, eau-dans-huile ou émulsions multiples ; elles peuvent aussi se présenter sous forme de suspensions, ou encore poudres, adaptées à une application sur la peau, les muqueuses, les lèvres et/ou les cheveux. [152] Ces compositions peuvent être plus ou moins fluides et avoir également l’aspect d’une crème, d’une lotion, d’un lait, d’un sérum, d’une pommade, d’un gel, d’une pâte ou d’une mousse. Elles peuvent aussi se présenter sous forme solide, comme un stick ou être appliquées sur la peau sous forme d’aérosol.
[153] A titre de milieu physiologiquement acceptable communément utilisé dans le domaine d'application envisagé, on peut citer par exemple des adjuvants nécessaires à la formulation, tels que des solvants, des épaississants, des diluants, des antioxydants, des colorants, des filtres solaires, des agents auto-bronzants, des pigments, des charges, des conservateurs, des parfums, des absorbeurs d’odeur, des huiles essentielles, des vitamines, des acides gras essentiels, des tensioactifs, des polymères filmogènes, etc.
[154] Dans tous les cas, l'homme de métier veillera à ce que ces adjuvants ainsi que leurs proportions soient choisis de telle manière à ne pas nuire aux propriétés avantageuses recherchées de la composition selon l’invention. Ces adjuvants peuvent, par exemple, correspondre à 0,01 à 20 % du poids total de la composition. Lorsque la composition selon l’invention est une émulsion, la phase grasse peut représenter de 5 à 80 % en poids et de préférence de 5 à 50 % en poids par rapport au poids total de la composition. Les émulsionnants et coémulsionnants utilisés dans la composition sont choisis parmi ceux classiquement utilisés dans le domaine considéré. Par exemple, ils peuvent être utilisés en une proportion allant de 0,3 à 30 % en poids par rapport au poids total de la composition.
[155] Selon un autre mode de réalisation avantageux de l’invention, les extraits végétaux de l’invention peuvent être encapsulés ou inclus dans un vecteur cosmétique tels que les liposomes ou toute autre nano capsule ou microcapsule utilisée dans le domaine de la cosmétique ou adsorbé sur des polymères organiques poudreux, des supports minéraux comme les talcs et bentonites.
[156] Avantageusement, la composition selon l’invention peut comprendre, outre l’extrait végétal selon l'invention, au moins un autre agent actif présentant des effets cosmétiques similaires et/ou complémentaires à ceux de l'invention.
[157] Par exemple, le ou les agents actifs additionnels peuvent être choisis parmi : les agents anti-âge, raffermissants, éclaircissants, hydratants, drainants, favorisant la microcirculation, exfoliants, desquamants, stimulant la matrice extracellulaire, activant le métabolisme énergétique, antibactériens, antifongiques, apaisants, anti-radicalaires, anti-UV, anti-acné, anti-inflammatoires, anesthésiques, procurant une sensation de chaleur, procurant une sensation de fraîcheur, amincissants.
[158] De tels agents actifs additionnels peuvent être choisis dans les groupes comprenant :
- les vitamines (vitamine A et ses dérivés ; vitamines B3, B5, B6 et B12 ; vitamine C ; vitamines E, F, H, K, PP ou encore le coenzyme Q10) ;
- les inhibiteurs de métalloprotéinase, ou les activateurs des TIMP ;
- la DHEA, ses précurseurs et dérivés ;
- les acides aminés, les peptides naturels ou de synthèse,
- l’extrait d’Artémia salina, commercialisé sous le nom GP4G™ (FR2817748, ASHLAND®) ;
- les extraits peptidiques végétaux, les extraits de levures, les extraits de polyphénols ;
- l’acide déhydroacétique (DHA) ;
- les phystostérols d'origine synthétique ou naturelle ;
- l’acide salicylique et ses dérivés, les alpha- et bêta-hydroxyacides, les silanols ;
- les sucres aminés et les polysaccharides ;
- les lipides tels que les céramides ou les phospholipides ;
- l'AMP cyclique et ses dérivés, les méthyls xanthines.
Utilisations cosmétiques
[159] L’invention a encore pour objet l’utilisation cosmétique d’une composition comprenant les extraits végétaux de l’invention pour le soin de la peau et plus particulièrement pour lutter contre les signes du vieillissement cutané, la perte de fermeté ou de tonicité, améliorer la fonction barrière et l’hydratation, éclaircir la peau, atténuer la diminution liée à l’âge du nombre ou de l'activité des récepteurs mécano-sensoriels du toucher (Piezol ) et des récepteurs à l’ocytocine (OXTR), ou encore améliorer les défenses immunitaires innées de la peau et le bien-être in vivo. [160] Préférentiellement, les utilisations cosmétiques selon la présente invention concernent des méthodes de traitement cosmétiques par applications topiques sur des peaux saines.
[161 ] Dans un mode de réalisation particulier, l’invention a pour objet l’utilisation cosmétique d’extraits autofermentés de fleurs fraîches de jasmin (Jasminum grandiflorum) .
[162] Avantageusement, l’invention a pour objet l’utilisation cosmétique d’une composition comprenant un extrait de fleurs fraîches de jasmin (Jasminum grandiflorum) obtenu par un procédé d’autofermentation couplé à un procédé d’extraction permettant l’enrichissement en ARN de petits poids moléculaires (procédé décrit dans les brevets FR 1670672 et US 1 1 ,021 ,505).
[163] Les extraits végétaux de l’invention ont été testés sur des marqueurs biologiques associés au vieillissement et à l’hydratation, tels que l’expression du collagène et de l’acide hyaluronique, et ont démontré une efficacité supérieure à des extraits végétaux conventionnels contrôles.
[164] Les extraits végétaux de l’invention ont été testés sur des marqueurs biologiques associés à la fermeté ou tonicité de la peau, tels que la e-cadhérine et ont démontré une efficacité supérieure à des extraits végétaux conventionnels contrôles.
[165] Les extraits végétaux de l’invention ont été testés sur la tyrosinase, une enzyme associée à la synthèse de mélanine, et donc à la pigmentation de la peau, et ont montré une activité inhibitrice de la tyrosinase supérieure à des extraits végétaux conventionnels contrôles.
[166] Une composition cosmétique comprenant les extraits végétaux de l’invention a permis d’atténuer la diminution liée à l’âge du nombre ou de l'activité des récepteurs mécano-sensoriels du toucher (Piezol ).
[167] Une composition cosmétique comprenant les extraits végétaux de l’invention a permis de stimuler l’expression du récepteur à l’ocytocine, une molécule impliquée dans la prévention du vieillissement cutané.
[168] Dans ce mode de réalisation particulier, les extraits de fleurs jasmin ont démontré leur capacité à stimuler l’expression de la vipérine, une molécule associée à la défenses immunitaires innées de la peau. [169] Dans ce mode de réalisation particulier, une composition comprenant 2 % d’extraits de l’invention, appliquée topiquement par des volontaires sains a produit un effet positif sur le bien-être in vivo. Dans ce test, l’état émotionnel a été évalué à travers trois composantes distinctes : le sentiment subjectif de bien- être, la production salivaire d’ocytocine et la mesure du comportement ou de l’état émotionnel (Don Hockenbury et Sandra E. Hockenbury, Discovering psychology, 5eme édition, Page 344, chapitre 8, éditions Worth Publishers).
[170] Dans un mode de réalisation particulier l’invention a également pour objet une composition comprenant les extraits végétaux de l’invention pour améliorer les défenses immunitaires de la peau.
Exemples
[171 ] A titre illustratif, des exemples de mode de réalisation du procédé selon l’invention sont décrits ci-dessous.
[172] Exemple 1 : Préparation d’un extrait de fleurs de jasmin (Jasminum grandiflorum) fraîches autofermentées
[173] L’espèce Jasminum grandiflorum appartient au genre Jasminum et est largement utilisée dans l’industrie en tant que fragrance ou arôme.
[174] Dans une première étape a), 200 g de fleurs fraîches entières de jasmin sont mélangés à 1800 g d’eau distillée, soit 10 % de matière première engagée dans le procédé et 90 % d’eau pour un poids total de 2 kg.
[175] b) Le pH est ajusté à 7.
[176] c) Le mélange est maintenu à 30°C, dans un bêcher ouvert pour maintenir une atmosphère aérobie, favorable au développement des micro-organismes pendant 24h. Pendant cette étape, le pH est contrôlé régulièrement permettant de noter une acidification du milieu lié au développement des microorganismes, sans que celui-ci ne descende en dessous de 5.
[177] d) Le mélange obtenu est centrifugé 10 min à 4000 g, de manière à sédimenter la matière végétale résiduelle dans le culot et récolter le surnageant.
[178] e) Le mélange obtenu est ensuite soumis à des filtrations successives en abaissant le seuil de filtration de 30 à 0,2 pm. [179] f) Le pH du filtrat obtenu est ajusté à 6,3 en utilisant de l’acide citrique concentré à 10 %.
[180] g) Le filtrat est stérilisé par filtration.
[181 ] L’extrait non dilué a un poids sec de 1 1 ,7 g/kg et contient une concentration de 5,2 g/kg de sucres totaux, 3,7 g/kg de protéines, 41 1 ,1 mg/kg d’acides organiques totaux, 630 mg/kg de composés phénoliques totaux.
[182] h) L’extrait est dilué avec de la glycérine dérivée de plante de manière à obtenir une concentration finale de 30 % de glycérine et 70 % d’extrait de fleurs de jasmin autofermentées.
[183] L’extrait dilué a un poids sec de 8,1 g/kg, et présente une concentration de 3,6 g/kg de sucres totaux, 2,6 g/kg de protéines, 287,7 mg/kg d’acides organiques totaux, 441 mg/kg de composés phénoliques totaux.
[184] Exemple 2 : Préparation d’un extrait de fleurs de jasmin fraîches (Jasminum grandiflorum) par autofermentation couplée à un deuxième procédé d’extraction permettant l’enrichissement en petits ARN
[185] Une fois l’autofermentation réalisée selon les étapes a) à c) de l’exemple 1 .
[186] On ajoute au mélange 2 g/L soit 3 mM d’acide phytique.
[187] Le pH est ajusté à pH 1 1 afin de permettre un enrichissement de l’extrait en ARN de petits poids moléculaires ainsi qu’en diverses phytomolécules.
[188] Le mélange est chauffé 2 h à 80°C sous agitation.
[189] Le mélange est ensuite filtré à l’aide de filtres de porosité de 30 pm, pour séparer la matière solide du filtrat.
[190] Des filtrations séquentielles sur filtres de porosité décroissante sont alors réalisées afin de clarifier l’extrait végétal jusqu’à une filtration à 1 pm de porosité.
[191 ] Le pH est ajusté à 6,3 avec une solution d’acide citrique.
[192] A cette étape, l’extrait a un poids sec de 17,5 g/kg, et présente une concentration de 6,4 g/kg de sucres totaux, de 6,6 g/kg de protéines, de 802,9 mg/kg d’acides organiques totaux, de 1301 mg/kg de composés phénoliques totaux et de 45 mg/kg d’ARN de petits poids moléculaires et dépourvu d’ADN.
[193] L’absence d’ADN a été démontré par un test à la DNAse, enzyme qui dégrade spécifiquement l’ADN et non l’ARN. Le profil électrophorétique après action de la DNase n’est pas modifié, ce qui démontre que l’acide nucléique présent dans l’extrait n’est pas sensible à la DNase et n’est donc pas de l’ADN.
[194] L’extrait est ensuite dilué par du propanediol dérivé de plante de manière à obtenir une concentration finale de 30 % de propanediol et 70 % d’extrait de fleurs de jasmin autofermenté et extrait.
[195] L’extrait dilué a un poids sec de 1 1 ,7 g/kg, et présente une concentration de 4,1 g/kg de sucres totaux, 4,6 g/kg de protéines, 562,5 mg/kg d’acides organiques totaux, 874 mg/kg de composés phénoliques totaux et 31 mg/kg d’ARN de petits poids moléculaires.
[196] Exemple 3 : Préparation d’extraits de jasmin en tant qu’éléments comparatifs
1 / Extraction de fleurs fraîches de jasmin par un procédé conventionnel :
[197] Dans un but comparatif, des extraits conventionnels ont été réalisés en engageant la même quantité de fleurs entières et fraîches de jasmin que dans les exemples 1 ou 2 soit 10 % de matière première végétale dans de l’eau distillée.
[198] Le mélange est ensuite chauffé 1 h à 25°C, puis filtré par une première filtration sur filtres à large porosité de 30 pm afin d’ôter la matière végétale résiduelle solide de la partie liquide. Puis des filtrations séquentielles sur filtres de porosité décroissante sont alors réalisées afin de clarifier l’extrait végétal jusqu’à une filtration stérilisante à 0,2 m de porosité.
[199] La partie liquide obtenue à l’étape précédente constitue un extrait conventionnel contrôle.
[200] Des données analytiques comparatives ont ainsi pu être générées, comme illustrées dans les [Fig. 1 ], [Fig. 2], [Fig. 5] et les exemples.
2/ Extraction de fleurs fraîches de jasmin par un procédé permettant l’enrichissement en petits ARN :
[201 ] Ce procédé est décrit en détails dans les brevets FR 1670672 et US 1 1 ,021 ,505.
[202] Pour obtenir l’extrait de fleur fraîches enrichi en petits ARN, on utilise la même quantité de fleurs entières et fraîches de jasmin que dans les exemples 1 et 2 soit 10 % de matière première végétale dans de l’eau distillée.
[203] On ajoute au mélange 2 g/L soit 3 mM d’acide phytique. [204] Le pH est ajusté à pH 1 1 afin de permettre un enrichissement de l’extrait en ARN de petits poids moléculaires ainsi qu’en diverses phytomolécules.
[205] Le mélange est chauffé 2h à 80°C sous agitation.
[206] Le mélange est ensuite filtré à l’aide de filtres de porosité de 30 pm, pour séparer la matière solide du filtrat.
[207] Des filtrations séquentielles sur filtres de porosité décroissante sont alors réalisées afin de clarifier l’extrait végétal jusqu’à une filtration à 1 m de porosité.
[208] Le pH est ajusté à 6,3 avec une solution d’acide citrique.
[209] La partie liquide obtenue à l’étape précédente constitue un extrait enrichi en petits ARN de contrôle.
[210] Des données analytiques comparatives ont ainsi pu être générées, comme illustrées dans les [Fig. 1 ], [Fig. 2], [Fig. 5].
[21 1 ] Exemple 4 : Analyse des extraits de fleurs de jasmin des exemples 1 et 2 versus un extrait conventionnel et un extrait enrichi en petits ARN de l’exemple 3
[212] Les analyses ont été réalisées sur les extraits des exemples 1 et 2 avant dilution, sur un extrait conventionnel et sur un extrait enrichi en petits ARN de l’exemple 3.
[213] Méthodologies
[214] La teneur totale en composés phénoliques des extraits a été mesurée par spectrophotométrie à 760 nm après réduction du réactif de Folin-Ciocalteu par les phénols. La quantification est effectuée à l’aide d’une courbe standard d’acide gallique, les résultats sont exprimés en équivalent acide gallique.
[215] La teneur totale en protéines a été mesurée par spectrophotométrie à 550 nm après réaction calorimétrique du Biuret combiné avec celle du réactif de Folin-Ciocalteu. La quantification a été effectuée à l’aide d’une courbe standard de BSA (Bovine Sérum Albumine).
[216] Le détail de la composition en composés phénoliques a été réalisé par chromatographie liquide couplée à un détecteur UV fixé à 254 nm. Les échantillons ont été séparés sur une colonne UPTISPHERE CS EVOLUTION Cl 8-AQ par un système HPLC Agilent 1200 (Agilent Technologies). Les phases mobiles consistaient en une solution d’acide formique à 0,1 % et de méthanol. [217] Le profil de distribution des poids moléculaires des protéines a été réalisé par chromatographie d’exclusion stérique couplée à un détecteur UV fixé à 254 nm. Les échantillons ont été séparés sur une colonne YMC Pack Diol 60 (DL06503- 2543WT) par un système HPLC Agilent 1200 (Agilent Technologies). La phase mobile consistait en une solution aqueuse 0,05 % NaN3, 0,2 M NaCI, 0,1 M tampon phosphate à pH 7.
[218] La caractérisation et la quantification des acides organiques a été réalisée par chromatographie liquide haute performance, couplée à une détection par spectromètre de masse (Acquity Qda, Waters) équipé d’une source d’ions électrospray en mode négatif. Les échantillons ont été séparés sur une colonne EC 150 / 4,6 Nucleoshell RP 18plus-5|jm (Macherey Nagel : 763236.46) par un système HPLC Agilent 1260 (Agilent Technologies). Le débit était de 0,3 ml / min. Les phases mobiles consistaient en une solution d’acide formique à 0,01 % et d’acétonitrile.
[219] La caractérisation et la quantification des sucres ont été réalisées par chromatographie liquide haute performance, couplée à une détection par spectromètre de masse (Acquity Qda, Waters) équipé d’une source d’ions électrospray en mode négatif. Les échantillons ont été séparés sur une colonne Luna Omega Suagr 100 A-3|jm (Phenomenex : 00F-4775-E0) par un système HPLC Agilent 1260 (Agilent Technologies) . Le débit était de 0,8 ml / min. Les phases mobiles consistaient en une solution aqueuse d’acétate d’ammonium à 10 mMol et d’acétonitrile à 10 mMol d’acétate d’ammonium.
[220] L’identification des jasmintides a été réalisée par chromatographie liquide ultra haute performance couplée à une détection par spectromètre de masse haute résolution. Les échantillons ont été dénaturés puis séparés sur une colonne Aurora ( 15cm x 75 m x 1 ,6pm x 120A) . Le débit était de 0,3 ml/min. Les phases mobiles consistaient en une solution aqueuse d’acide formique 0.1% et d’acétonitrile à 0.1 % d’acide formique. L’identification des jasmintides a été réalisée par comparaison avec la base de données Swissprot.
Le screening global des extraits a été réalisé par Chromatographie Gazeuse (GC) couplée à un Spectromètre de Masse (MS). Les échantillons ont été dérivés au (N, O-bis(trimethylsilyl)trifluoroacetamide (BSTFA) puis séparés sur une colonne Optima 5HT (Macherey Nagel 726104.15) par un gradient à 3°C/min de 50°C à 300°C. [221 ] Résultats
[222] Le profil protéique des extraits est illustré à la [Fig. 1 ], Les poids moléculaires de l’extrait conventionnel sont répartis entre 7200 et 170g/mol. En comparaison, le procédé d’autofermentation de l’exemple 1 apporte un élargissement de la distribution en poids moléculaires des protéines de l’extrait avec des masses allant de 15800 à 170 g/mol. Les comparaisons de profils protéiques mettent en évidence l’augmentation de la quantité de protéines lors du processus de fermentation par rapport à un extrait conventionnel pour les masses supérieures à 1000 g/mol.
[223] Le procédé de l’exemple 2 (autofermentation couplé à une extraction) augmente la complexité de l’extrait avec l’apparition de protéines de poids moléculaire vers 19000 g/mol et une augmentation du signal pour les petites molécules ayant un poids moléculaire vers 1 OOOg/mol par rapport à l’extrait conventionnel. La quantification en protéines totales montre une augmentation de 50% entre l’extrait de l’exemple 2 (autofermenté couplé à une extraction) et l’extrait enrichi en petits ARN.
[224] Le procédé d’autofermentation apporte donc une modification du profil protéique de l’extrait et le couplage à une étape d’extraction permet d’augmenter la concentration totale en protéine.
[225] L’analyse de la quantité totale de composés phénoliques indique que l’extrait de l’exemple 2 (autofermentation couplée à une extraction) contient plus de composés phénoliques qu’un extrait conventionnel (exemple 3). La [Fig. 2] montre une consommation ciblée des composés phénoliques complexes (flavonoïdes ou flavonoïdes glycosylés) et l’apparition de composés phénoliques simples tels que acides phénoliques lors de la fermentation. La [Fig. 2] indique une augmentation de 120 % de la présence des acides phénoliques entre l’extrait conventionnel et l’extrait autofermenté et une augmentation de 23% entre l’extrait enrichi en petits ARN et l’extrait de l’exemple 2 (autofermenté couplé à une extraction). La [Fig. 2] indique également une diminution de 87 % de la présence des flavonoïdes entre l’extrait conventionnel et l’extrait autofermenté et une diminution de 93% entre l’extrait enrichi en petits ARN et l’extrait de l’exemple 2 (autofermenté couplé à une extraction). [226] L’analyse des acides organiques contenus dans les extraits, telle qu’illustrée par La [Fig. 3], montre l’augmentation de la concentration en acides lactique, succinique, shikimique, quinique et glycolique lors du processus de fermentation.
[227] Le [Tableau 1 ] détaille la présence des acides lactique et quinique dans l’extrait autofermenté contre leur absence dans l’extrait conventionnel et l’augmentation de 72 % et de 79 % des acides succinique et shikimique dans l’extrait autofermenté versus l’extrait conventionnel respectivement. Il détaille également l’augmentation de 75 %, 31 %, 12 %, 66 % et 27 % de la concentration en acides lactique, succinique, shikimique, glycolique et quinique dans l’extrait autofermenté couplé à une extraction versus un extrait enrichi en petits ARN respectivement.
[228] La concentration en acide malique subit une diminution lors du process de fermentation avec une diminution de 38 % dans l’extrait autofermenté versus l’extrait conventionnel et une diminution de 19 % dans l’extrait autofermenté couplé à une extraction versus l’extrait enrichi en petits ARN.
[229] La concentration globale en acides organiques est plus importante dans l’extrait autofermenté couplé à une extraction que dans les extraits conventionnels et enrichis en petits ARN qui ne contiennent pas d’étape de fermentation.
[230] L’analyse des sucres montre une diminution de 54 % en glucose dans l’extrait de l’exemple 2 (autofermenté couplé à une extraction) versus l’extrait enrichit en petits ARN dû à la consommation en sucre des micro-organismes dans l’extrait autofermenté suivi d’une extraction.
[231 ] La concentration globale en acides phénoliques est 57 % plus importante dans l’extrait autofermenté couplé à une extraction que dans l’extrait auto fermenté seul.
[232] L’analyse des jasmintides met en évidence la présence d’au moins un jasmintide dans l’extrait de l’exemple 2 (autofermenté couplé à une extraction) ainsi que l’absence de jasmintides dans l’extrait conventionnel.
[233] L’analyse des extraits par GCMS indique que l’étape d’autofermentation permet d’augmenter la diversité des molécules présente dans l’extrait. En effet 109 molécules sont détectées sur le profil de l’extrait autofermenté contre 95 dans l’extrait conventionnel. 165 molécules sont détectées dans l’extrait de l’exemple 2 (autofermenté couplé à une extraction) contre 132 dans l’extrait enrichi en petits ARN. Le couplage du procédé d’autofermentation à une extraction permet d’obtenir un extrait ayant une composition plus diversifiée que les extractions conventionnelles et un enrichissement en petits ARN.
[234] [Tableau 1 ] : Analyse des composés des extraits de fleurs de jasmin [235] [Tableau 2] : Analyse des composés phénoliques des extraits de fleurs de jasmin (aire sous la courbe)
[236] Exemple 5 : Mise en évidence du rôle du phytobiote dans l’autofermentat on des fleurs de jasmin (Jasminum grandiflorum)
[237] Des fleurs de jasmin fraîches ont été stérilisées par autoclavage pendant 10 minutes à 121 °C pour tuer les micro-organismes. Cette matière végétale privée de son phytobiote vivant a ensuite été engagée dans le procédé décrit à l’exemple 1 pour constituer un extrait contrôle.
[238] L’analyse physico-chimique montre que les taux de composés phénoliques et de protéines diminuent fortement pendant le processus d’autofermentation, alors qu’ils sont stables dans la condition contrôle.
[239] Ces résultats démontrent que les micro-organismes du phytobiote sont directement responsables de la consommation métabolique des composés phénoliques et des protéines lors du processus d’autofermentation décrit dans la présente demande et en particulier dans l’exemple 1 .
[240] [Tableau 3] : Comparaison de la consommation de composés phénoliques et de protéines en situation autofermentative ou contrôle (phytobiote tué)
[241 ] Exemple 6 : Evaluation in vitro de la capacité inhibitrice de la hyaluronidase des extraits de fleurs de jasmin fraîches obtenus selon les exemples 1 et 3
[242] La hyaluronidase catalyse la dégradation de l’acide hyaluronique (un glycosaminoglycane fortement présent au niveau du derme de la peau ayant des propriétés hydratantes et anti-âge) en mono ou disaccharides ainsi qu’en fragments plus petits d’acide hyaluronique.
[243] L'acide hyaluronique a la capacité de provoquer une turbidité en présence d’une solution d'albumine acide, qui peut être mesurée au spectrophotomètre à 600 nm.
[244] Protocole : L’enzyme est incubée avec les extraits obtenus selon les exemples 1 et 3 à la concentration choisie (dilution vol/vol) à une température de 37°C. Le substrat de l’enzyme, l’acide hyaluronique est ajouté au mélange. L’ensemble est homogénéisé lentement puis laissé à incuber pendant exactement 45 minutes à 37°C. L’acide hyaluronique restant dans le mélange est ensuite mis en contact avec une solution d’albumine acide pendant 10 minutes avant que la transmittance ne soit lue à 600 nM au spectrophotomètre.
[245] L’extrait de fleurs de jasmin autofermentées préparé selon l’exemple 1 présente un pouvoir inhibiteur de l’enzyme significativement plus fort que l’extrait préparé de manière conventionnelle selon l’exemple 3. Les résultats sont présentés dans le [Tableau 4],
[246] [Tableau 4] : Comparaison des pourcentages d’inhibition de la hyaluronidase obtenus, in vitro, entre les extraits de jasmin conventionnel et autofermenté
[247] Exemple 7 : Formule d’une crème riche [248] [Tableau 5]
[249] Procédé de préparation
[250] 1 . Homogénéiser la phase A dans le récipient principal et commencer à chauffer à 75-80°C ;
[251 ] 2. A 30°C, saupoudrer dans la Phase B et homogénéiser tout en chauffant ;
[252] 3. Dans un bêcher à part, préparer la phase C, chauffer à 75-80°C jusqu'à homogénéité ;
[253] 4. A 75°C, ajouter la phase C dans le récipient principal et homogénéiser pendant 10 minutes ;
[254] 5. Laisser refroidir la température et ajouter la phase D à 65°C. Bien mélanger pour homogénéiser pendant 10 minutes ;
[255] 6. Prémélanger la phase E avant de l'ajouter dans le récipient principal ;
[256] 7. Ajouter la phase E à 60°C. Bien mélanger pour homogénéiser pendant 10 minutes ;
[257] 8. A 35°C, prémélanger la phase F avant de l'ajouter et de bien mélanger ;
[258] 9. Prémélanger la phase G avant de l'ajouter dans le récipient principal ;
[259] 10. Ajouter la phase G à 35°C. Bien mélanger pour homogénéiser ;
[260] 1 1 . Dans un bêcher à part, préparer la phase H : saupoudrer Natrosol™ dans l'eau à température ambiante et homogénéiser tout en chauffant à 60°C ;
[261 ] 12. Ajouter la phase H à 30°C. Bien mélanger pour homogénéiser ;
[262] 13. Arrêter à 25°C.
[263] La composition se présente ainsi sous forme d’une crème beurre rose, avec un pH compris entre 4,90 et 5,40 et une viscosité (DO) de 160000 - 210000 cps (Brookfield RVT/Spindle D/5 RPM/1 minute/25°C).
[264] Exemple 8 : Evaluation de l’extrait de jasmin obtenu selon l’exemple 2 sur l’expression du récepteur Piezol dans des épidermes reconstruits
[265] Les protéines Piezol et Piezo2 ont été identifiées comme des canaux ioniques médiant la transduction mécano-sensorielle dans les cellules de mammifères (Coste, Bertrand et al. “Piezol and Piezo2 are essential components of distinct mechanically activated cation channels.” Science (New York, N.Y.) vol. 330,6000 (2010): 55-60). Dans la peau, les kératinocytes participent à médier la sensation tactile en détectant et en codant ces informations pour les neurones sensoriels. Piezol est le principal mécanotransducteur des kératinocytes (Holt, Jesse R et al. Spatiotemporal dynamics of PIEZO1 localization controls kératinocyte migration during wound healing. eLife vol. 10 e65415. 27 Sep. 2021 ).
[266] Principe : L’extrait de jasmin obtenu selon l’exemple 2 a été évalué pour sa capacité à moduler l’expression du mécanorécepteur Piezol dans la peau humaine ex vivo.
[267] Protocole : L’expression du récepteur Piezol est évaluée par immunofluorescence indirecte sur des coupes d’épiderme reconstruit, traitées au préalable par application topique de l’extrait de jasmin de l’exemple 2 dilué à
2 % (vol/vol) pendant 48 heures (1 fois par jour). Des épidermes reconstruits contrôles incubés en parallèle dans les mêmes conditions reçoivent le placebo (Phosphate Butter Saline, PBS). Au terme de l’incubation, les épidermes reconstruits sont fixés et inclus en paraffine pour la réalisation de coupes histologiques. La détection du récepteur Piezol est réalisée par incubation avec un anticorps primaire anti-Piezol (Proteintech). Après une heure et demie d’incubation suivie de rinçages, les coupes sont incubées en présence de l’anticorps secondaire anti-lapin couplé à un fluorophore (Alexa Fluor® 488, Invitrogen). Les coupes sont ensuite examinées au microscope à Epi- fluorescence (Zeiss Axiovert 200M microscope). L’expression du récepteur Piezol est alors observée et quantifiée par analyse d’image (Volocity® image analysis software, Improvision).
[268] Résultats : Comme illustré par la [Fig. 4], lorsque les biopsies ont été traitées par l’extrait de jasmin à 2 %, l’expression du récepteur Piezol a augmenté de 39 %.
[269] Conclusion : L’extrait de jasmin a montré un effet positif sur l’expression du récepteur Piezol .
[270] Exemple 9 : Evaluation de l’extrait de jasmin obtenu selon l’exemple 2 sur l’expression du récepteur à l’ocytocine (OXTR) sur des biopsies de peau humaine
[271 ] Principe : Le but de cette expérience est de démontrer un effet de l’extrait de jasmin sur la synthèse du récepteur à l’ocytocine dans des biopsies de peau humaine en culture.
[272] Protocole : L’expression du récepteur à l’ocytocine (OXTR) est évaluée par immunofluorescence indirecte sur des biopsies de peau, traitées au préalable par application topique de l’extrait de jasmin de l’exemple 2 dilué à 2 % (vol/vol) pendant 48 heures (2 fois par jour). Des biopsies contrôles incubées en parallèle dans les mêmes conditions reçoivent le placebo (Phosphate Butter Saline, PBS). Au terme de l’incubation, les biopsies sont fixées et incluses en paraffine pour la réalisation de coupes histologiques. La détection du récepteur OXTR est réalisée par incubation avec de l’anticorps anti-OXTR (Proteintech). Après une heure et demie d’incubation suivie de rinçages, les coupes sont incubées en présence de l’anticorps secondaire anti-lapin couplé à un fluorophore (Alexa Fluor® 488, Invitrogen). Les coupes sont ensuite examinées au microscope à Epi- fluorescence (Zeiss Axiovert 200M microscope). L’expression du récepteur OXTR est alors observée et quantifiée par analyse d’image (Volocity® image analysis software, Improvision).
[273] Résultats : Comme illustré par la [Fig. 5], lorsque les biopsies ont été traitées par l’extrait de jasmin à 2 %, l’expression du récepteur OXTR a augmenté de 63 %.
[274] Conclusion : L’extrait de jasmin a montré un effet positif sur l’expression du récepteur olfactif à l’ocytocine OXTR.
[275] Exemple 10 : Evaluation de l’extrait de jasmin obtenu selon l’exemple 2 sur l’expression des ARN messagers du récepteur à l’ocytocine (OXTR) dans des kératinocytes en culture
[276] L’ocytocine est un peptide naturel contrôlant un large éventail d'actions spécifiques dans ses tissus cibles, allant de la croissance et la différenciation cellulaire, à la reproduction et au comportement social (Carter, C Sue et al. “Is Oxytocin "Nature's Medicine Pharmacological reviews vol. 72,4 (2020): 829-861 ). Un grand nombre de publications scientifiques soutiennent le rôle bénéfique de l'ocytocine dans la physiologie de la peau et le vieillissement (Hayre, Nicole. “Oxytocin Levels Inversely Correlate with Skin Age Score and Solar Damage.” Journal of drugs in dermatology : JDD vol. 19,12 (2020): 1 146-1 148). D’autres recherches soulignent également l’importance du récepteur à l’ocytocine dans la prévention du vieillissement cutané (Cho, S-Y et al. “Oxytocin alleviates cellular senescence through oxytocin receptor-mediated extracellular signal-regulated kinase/Nrf2 signalling.” The British journal of dermatology vol. 181 ,6 (2019): 1216- 1225). [277] Principe : Le but de cette expérience est de démontrer un effet de l’extrait de jasmin sur la synthèse de l’ARN messager du récepteur à l’ocytocine dans des kératinocytes de peau humaine.
[278] Protocole : Le niveau d’expression des ARN messagers du récepteur à l’ocytocine OXTR est évaluée par qPCR (réaction de polymérisation en chaîne quantitative) sur des kératinocytes de peau en culture, traités au préalable avec de l’extrait de jasmin obtenu selon l’exemple 2 pendant 48 heures à 1 % (dilution vol/vol) dans le milieu de culture (1 fois par jour). Au terme de la culture, les cellules sont lysées, les ARN totaux sont extraits puis convertis en ADN complémentaire (ADNc) par une réaction de reverse transcription. La quantification des ADNc du récepteur OXTR a été effectuée par qPCR en utilisant une sonde TaqMan pour la détection. La méthode de quantification des delta-delta Ct a permis de comparer la différence d'expression (ACt) entre le gène d'intérêt (OXTR) et le gène de référence (GADPH).
[279] Résultats : Comme illustré par la [Fig. 6], lorsque les kératinocytes en culture ont été traitées par l’extrait de jasmin obtenu à l’exemple 2 à 1 %, l’expression des ARN messagers du récepteur OXTR est augmenté de 26 %.
[280] Conclusion : L’extrait de jasmin a montré un effet positif sur l’expression des ARN messagers du récepteur OXTR.
[281 ] Exemple 15 : Evaluation de l’extrait de jasmin obtenu selon l’exemple 2 sur l’expression de la vipérine dans des kératinocytes en culture
[282] La vipérine est un des facteurs de la défense immunitaire innée synthétisé par les kératinocytes (Garcia, Magali et al. “Innate Immune Response of Primary Human Kératinocytes to West Nile Virus Infection and Its Modulation by Mosquito Saliva.” Frontiers in cellular and infection microbiology vol. 8387. 2 Nov. 2018,) . II a été démontré que la vipérine catalyse la conversion de la cytidine triphosphate (CTP) en 3’-désoxy-3',4'-didéhydro-CTP (ddhCTP), un analogue de ribonucléotide jusqu’alors inconnu. L’incorporation de ddhCTP provoque l’arrêt prématuré de la synthèse d’ARN de certains virus (Gizzi, Anthony S et al. “A naturally occurring antiviral ribonucleotide encoded by the human genome.” Nature vol. 558,771 1 (2018): 610-614.). [283] Principe : Le but de cette expérience est de démontrer un effet de l’extrait de jasmin sur le niveau d’expression de la vipérine dans des kératinocytes en culture.
[284] Protocole : L’expression de la vipérine est évaluée par immunofluorescence indirecte sur des kératinocytes. Les kératinocytes en culture ont été traités par application de l’extrait de jasmin obtenu selon l’exemple 2 à 1 % (dilution vol/vol) pendant 48 heures (1 fois par jour). Au terme de la culture, les cellules sont fixées. La détection de la vipérine est réalisée par incubation avec un anticorps antivipérine (Sigma). Après une heure et demie d’incubation suivie de rinçages, les cellules sont incubées en présence d’un anticorps secondaire anti-souris couplé à un fluorophore (Alexa Fluor® 488, Invitrogen). Les cellules sont ensuite examinées au microscope à Epi-fluorescence (Zeiss Axiovert 200M microscope). L’expression de la vipérine est alors observée et quantifiée par analyse d’image (Volocity® image analysis software, Improvision).
[285] Résultats : Comme illustré par la [Fig. 7], l’extrait de jasmin obtenu selon l’exemple 2 a montré un effet positif de +40 % sur l’expression de la vipérine dans des kératinocytes en culture.
[286] Conclusion : L’extrait de jasmin a montré un effet positif sur l’expression de la vipérine.
[287] Exemple 16 : Evaluation de l’extrait de jasmin obtenu selon l’exemple 2 sur le niveau d’expression de la E-cadhérine, sur des biopsies de peau humaine prétraitées avec un bloqueur de l’activité de Piezol (Dookul)
[288] Principe : Le but de cette expérience est de démontrer un effet de l’extrait de jasmin sur le niveau d’expression de la E-cadhérine, une molécule impliquée dans la tonicité tissulaire, dans des biopsies de peau humaine en culture.
[289] Protocole : L’expression de la E-cadhérine est évaluée par immunofluorescence indirecte sur des biopsies de peau prétraitées avec un bloqueur de l’activité de Piezol (Dookul ), puis traitées par application topique de l’extrait de jasmin obtenu selon l’exemple 2 pendant 48 heures (2 fois par jour), ou avec un activateur de Piezol (Jedil ) pendant 48 heures (1 fois par jour). Des biopsies contrôles incubées en parallèle dans les mêmes conditions reçoivent le placebo (Phosphate Butter Saline, PBS). Au terme de l’incubation, les biopsies sont fixées et incluses en paraffine pour la réalisation de coupes histologiques. La détection de l’E-cadhérine est réalisée par incubation avec des anticorps anti-E-cadhérine (Abeam). Après une heure et demie d’incubation, suivi de rinçages, les coupes sont incubées en présence de l’anticorps secondaire anti-lapin couplé à un fluorophore (Alexa Fluor® 488, Invitrogen). Les coupes sont ensuite examinées au microscope à Epi-fluorescence (Zeiss Axiovert 200M microscope). L’expression du récepteur OXTR est alors observée et quantifiée par analyse d’image (Volocity® image analysis software, Improvision).
[290] Résultats : Comme illustré par la [Fig. 8], lorsque les biopsies ont été prétraitées avec un bloqueur de l’activité de Piezol (Dookul ), une diminution de -44 % de l’expression de la E-cadhérine est observée. Lorsque les biopsies ont été traitées par l’activateur de Piezol (Jedil ), l’expression de la E-cadhérine est augmenté de 23 %. Lorsque les biopsies ont été traitées avec l’extrait de jasmin, l’expression de la E-cadhérine est augmenté de 95 %.
[291 ] Conclusion : L’extrait de jasmin obtenu selon l’exemple 2 a montré un effet positif sur l’expression de E-cadhérine, en mimant l’effet de l’activateur du récepteur Piezol (Jedil ).
[292] Exemple 17 : Evaluation de l’extrait de jasmin obtenu selon l’exemple 2 sur le niveau d’expression des ARN messagers de l’enzyme 11 -HSDl, dans des kératinocytes en culture
[293] Principe : Le but de cette expérience est de démontrer un effet de l’extrait de jasmin sur le niveau d’expression de l’ARN messager de l’enzyme 1 1 p-HSDl , connu également sous le nom de cortisone réductase, dans des kératinocytes de peau humaine en culture. Une augmentation de l’expression de l’enzyme
1 1 p-HSDl a été impliquée dans la dégradation de la fonction barrière épidermique lors du vieillissement de la peau (Kim, B. J. et al. Increased Expression of 1 1 -Hydroxysteroid Dehydrogenase Type 1 Contributes to Epidermal Permeability Barrier Dysfunction in Aged Skin. Int. J. Mol.Sci. 2021 , 22, 5750.).
[294] Protocole : Le niveau d’expression des ARN messagers de I’enzyme 1 1 p-HSDl est évaluée par qPCR (réaction de polymérisation en chaîne quantitative) sur des kératinocytes de peau humaine en culture, traités au préalable avec de l’extrait de jasmin obtenu selon l’exemple 2 pendant 48 heures à 1 % dans le milieu de culture (1 fois par jour). Au terme de la culture, les cellules sont lysées, les ARN totaux sont extraits puis convertis en ADN complémentaire (ADNc) par une réaction de reverse transcription. La quantification des ADNc de l’enzyme 1 1 p-HSDl a été effectuée par polymérisation en chaîne quantitative en utilisant une sonde TaqMan pour la détection. La méthode de quantification des delta- delta Ct a permis de comparer la différence d'expression (ACt) entre le gène d'intérêt (1 1 p-HSDl ) et le gène de référence (GADPH).
[295] Résultats : Comme illustré par la [Fig. 9], lorsque les kératinocytes en culture ont été traitées par l’extrait de jasmin obtenu selon l’exemple 2 à 1 %, le niveau d’expression des ARNm de l’enzyme 1 1 p-HSDl est diminuée de -24 %.
[296] Conclusion : L’extrait de jasmin a montré un effet d’inhibition sur le niveau d’expression de l’enzyme 1 1 p-HSDl .
[297] Exemple 18 : Evaluation de l’extrait de jasmin obtenu selon l’exemple 2 pour lutter contre les signes du vieillissement cutané, améliorer la fonction barrière la luminosité de la peau et le bien-être in vivo.
[298] Principe : Étudier l’efficacité de l’extrait de Jasmin formulé à 2% obtenu Protocole : étude comparative réalisée en double aveugle contre un placebo, menée sur le visage et l’avant-bras de 34 volontaires (âgés de 36 à 66 ans) répartis en deux groupes de 17 volontaires homogènes selon l’âge et le sexe. Le groupe traité a reçu l’extrait de Jasmin de l’exemple 2 formulé à 2 % dans la formule de soin de la peau détaillée dans le tableau 6 et le groupe placebo, a reçu la même formule de soin mais ne contenant pas l’extrait de jasmin. L’affectation du produit a été effectuée selon une liste de randomisation créée par un générateur de nombres aléatoires.
[299] [Tableau 6 : Formule de soin contenant l’extrait de Jasmin de l’exemple 2 à 2% utilisée lors du test clinique phase
[300] Durée de l’étude : 28 jours comprenant 3 visites de contrôle à D0 (premier jour de l’étude), D14 (après 14 jours d’applications) et D28 (fin de l’étude après 28 jours d’applications).
[301 ] - Mesure du bien-être par trois méthodes différentes à DO et D28 : a. Questionnaire anonymisé sur l’indice de bien-être conçu par l’OMS. b. Quantification de l’ocytocine dans la salive par méthode ELISA (enzyme linked immunosorbent assay). L’ocytocine est un nonapeptide qui joue un rôle clé dans plusieurs fonctions physiologiques (par exemple, l’éjection du lait) ainsi que dans certains types de régulation comportementale comme l’attachement, la reconnaissance sociale et l’anxiété. Plusieurs études suggèrent qu’un toucher agréable est associé à la libération d’ocytocine et induit des effets comportementaux relaxants ..Après un rinçage abondant de la bouche pendant 30 secondes, 2ml de salive des volontaires ont été recueillis dans un tube prégonflé et immédiatement stockés à -80 °C L’ocytocine salivaire a été quantifiée à l’aide d’un kit ELISA (Enzo Life Sciences). c. Mesure de l’état émotionnel par le système Emotion capture® breveté par la société ICONIK®. Cette technologie biométrique mesure en temps réel l’état de stress d’une personne, à l’aide de 3 capteurs différents mesurant : i. les modifications de la charge ionique de la glande sudoripares par capteur galvanique sensible à la peau ii. les modifications cardiaque par capteur optique iii. les changements de température cutanée par capteur de température cutanée
Toutes les données recueillies sont ensuite normalisées et traitée par un algorithme développé par ICONIK, l’état émotionnel des volontaires et leur taux de stress est calculé.
[302] - Perte insensible en eau (TEWL) -sur l’avant-bras mesurée par une méthode en chambre fermée à l’aide de l’AquaFlux® AF200 (Biox®).
[303] - Teint de peau - sur le visage mesuré avec le spectrophotomètre CM-700d (Konica Minolta Sensing, Inc.). Le paramètre ITA° (Individual Topology Angle) a été calculé avec l’équation suivante : ITA°= (Arc tan L*-50/b*)xl 80/n).
[304] L* : valeur de la luminance cutanée
[305] b* : valeurs se situant entre le bleu et le jaune (les valeurs négatives indiquent le bleu et les valeurs positives indiquent le jaune)
[306] - Topographie de la peau du front par réplique de silicone, analysées par la combinaison des technologies de projection de franges et de stéréométrie avec le système AEAVA-HE® (Eotech®). Différents paramètres du microrelief cutané ont été calculés, comme le paramètre de rugosité de surface ainsi que de profil. De plus, des représentations 2D et 3D de la topographie de la peau ont pu être effectuées avec ce même système.
[307] - Photos couleur du visage. Les photos ont été réalisées avec le banc HeadScan* V03 (Orion Concept*).
[308] - Évaluation sur une échelle de 0 à 100 par un expert de l’état de la peau du visage au toucher et selon l’aspect visuel des paramètres suivants :
[309] - Teint de la peau : 0 correspondant à une peau très terne et 100 à une luminosité et un teint parfait. [310] - Homogénéité de la peau : 0 correspondant à une peau non homogène avec rougeurs et taches et 100 à une peau très homogène sans rougeurs et taches.
[31 1 ] - Hydratation de la peau : 0 correspondant à une peau très sèche et 100 à une peau très hydratée.
[312] - Ridules de la patte d’oie : 0 correspondant à une peau lisse sans ridules et 100 à une peau avec un microrelief marqué et des ridules visibles.
[313] -Apparence globale de la peau : 0 correspondant à une mauvaise hydratation de la peau, très rugueuse, sans luminosité et non-homogène et 100 à une peau très hydratée, lumineuse, homogène et lisse.
[314] Toutes les mesures ont été effectuées sur le sujet après une période de repos de 15 minutes dans une pièce où la température (21°C +/-1 ) et l’humidité relative (50 % +/- 5) étaient contrôlées.
[315] Résultats des mesures du bien-être : comme illustré par la [Fig. 10], les résultats montrent qu’après un mois d’application, les volontaires du groupe traité ont amélioré leur bien-être. L’analyse du questionnaire sur l’indice de bien-être de l’OMS montre une augmentation de 20 % du bien-être ressenti par rapport à D0 pour le groupe traité, ce qui n’est pas le cas pour le groupe placebo. On observe également une augmentation significative de l’ocytocine dans la salive dans le groupe traité par rapport au groupe placebo, suggérant que l’application de l’extrait de jasmin peut aider à améliorer la libération d’ocytocine. Enfin, le groupe traité a montré une amélioration significative de son état émotionnel entre D0 et D28, les volontaires se sentant moins stressés, alors qu’aucune amélioration significative n’a été enregistrée dans le groupe placebo.
[316] Conclusions des mesures du bien-être : ces résultats démontrent que l’extrait de Jasmin formulé à 2 % peut améliorer le bien-être in-vivo.
[317] Résultat des mesures de la perte insensible en eau (TEWL) : Comme figuré dans la [Fig. 1 1 ], la perte insensible en eau est significativement plus basse pour le groupe traité que pour le groupe placebo dès 14 jours d’applications et ce jusqu’à la fin de l’étude. [318] Conclusion des mesures de la perte insensible en eau : ce résultat démontre que la barrière cutanée s’est renforcée dès 14 jours d’applications de l’extrait de Jasmin formulé à 2 %.
[319] Résultats des mesures du teint de la peau : la [Fig. 12] montre qu’après un mois d’application de la crème contenant l’extrait de jasmin à 2 %, l’ITA° augmente d’une manière significative comparé placebo.
[320] Conclusion des mesures du teint de la peau : ce résultat démontre que l’extrait de jasmin formulé à 2 % permet d’améliorer le teint du visage.
[321 ] Résultats des mesures de la topographie de la peau du front et des photos couleurs du visage : comme illustré par la [Fig. 13], les paramètres de rugosité de surface et de profil au niveau du front ont diminué pour le groupe traité par rapport au groupe placebo dès 14 jours d’application. De plus, une peau plus lisse et un microrelief moins visible ont pu être observés sur les photos 3D des volontaires du groupe traité, contrairement aux volontaires du groupe placebo. Ces résultats sont confirmés par l’observation des photos couleur du visage.
[322] Conclusion des mesures de la topographie de la peau du front et des photos couleurs du visage : ces résultats mettent en évidence un effet anti-âge de l’extrait de jasmin formulé à 2 %.
[323] Résultats de l’évaluation par un expert : d’après [Fig. 14], après 14 jours d’application avec 2 % d’extrait de Jasmin, l’expert a observé une amélioration du teint, de l’hydratation et de l’apparence globale de la peau, et aucune amélioration après 14 jours d’application du placebo. De même, après un mois d’application, l’expert a remarqué une amélioration de tous les paramètres évalués chez les volontaires du groupe traité et non chez les volontaires du groupe placebo.
[324] Conclusion de l’évaluation par un expert : ces résultats démontrent que l’extrait de Jasmin formulé à 2 % permet de diminuer visuellement les ridules du visage ainsi que d’améliorer l’hydratation et le teint du visage.
[325] Conclusion du test : dans les conditions actuelles, les résultats ci-dessus démontrent que l’extrait de Jasmin formulé à 2 % améliore le bien-être des volontaires et réduit les effets du vieillement cutané

Claims

French Revendications
[Revendication 1 ] Procédé d’obtention d’extraits végétaux enrichis en acides organiques et en acides phénoliques, comprenant les étapes suivantes : a) on met en présence la matière végétale avec de l’eau, b) on ajuste si nécessaire le pH à une valeur comprise entre 4 et 9, c) on maintient le mélange sous agitation douce pendant un temps compris entre 6 heures et 48 heures, à une température comprise entre 20 et 60°C, à un pH compris entre 4 et 7, pour permettre le processus d’autofermentation, dans une enceinte permettant les échanges gazeux avec l’atmosphère, d) on purifie le mélange obtenu en c) pour éliminer la matière végétale solide résiduelle et récolter la partie liquide, e) on réalise au moins une filtration de la partie liquide obtenue à l’étape précédente, f) on contrôle et réajuste le pH du filtrat, si nécessaire, à une valeur comprise entre 4 et 8, et préférentiellement à une valeur comprise entre 4 et 7.
[Revendication 2] Procédé de préparation d’extraits végétaux selon la revendication 1 , caractérisé en ce que l’étape c) d’autofermentation se déroule pendant une durée comprise entre 15 et 30 h, à une température comprise entre 30 et 40°C.
[Revendication 3] Procédé de préparation d’extraits végétaux selon l’une des revendications 1 ou 2 caractérisé en ce que le procédé est poursuivi par les étapes suivantes : g) on stérilise le filtrat, h) on dilue l’extrait par un solvant physiologiquement acceptable.
[Revendication 4] Procédé de préparation d’extraits végétaux caractérisé en ce qu’il comprend les étapes a) à c) selon l’une des revendications 1 ou 2, puis les ultérieures suivantes :
Etape d’j Au mélange obtenu à l’étape c) on ajoute de l'acide phytique à une concentration comprise entre 1 et 5 mM,
Etape e’j on ajuste si nécessaire le pH à une valeur comprise entre 10 et 1 1 , French
Etape f) on maintient le mélange sous agitation pendant 1 à 3 heures, à une température comprise entre 50 °C et 80 °C,
Etape g’) on sépare la matière végétale résiduelle,
Etape h’) on purifie la fraction liquide obtenue par des filtrations successives pour clarifier l’extrait,
Etape i’j on ajuste le pH du mélange obtenu à une valeur comprise entre 6 et 8,
Etape j’j Optionnellement, on dilue l’extrait par un solvant physiologiquement acceptable.
[Revendication 5] Procédé de préparation d’extraits végétaux selon l’une des revendications précédentes, caractérisé en ce que les matières végétales utilisées sont des plantes de la famille des oleaceae, poaceae, fabaceae.
[Revendication 6] Procédé de préparation d’extraits végétaux selon l’une des revendications précédentes, caractérisé en ce que la matière végétale utilisée est la fleur fraîche de jasmin, de préférence de l’espèce Jasminum grandiflorum.
[Revendication 7] Extraits végétaux dilués obtenus par le procédé de la revendication 3 caractérisés en ce qu’ils comprennent en poids du poids total de l’extrait, de 2 à 20 g/kg d’extrait sec, 0,2 à 4 g/kg de sucres, 100 à 700 mg/kg d’acides organiques dont 50 à 350 mg/Kg d’acide shikimique et 10 à 70 mg/Kg d’acide quinique, 100 à 1300 mg/kg de composés phénoliques dont 70 à 140 mg/Kg d’acides phénoliques et 0,1 à 5 g/Kg de protéines.
[Revendication 8] Extraits végétaux dilués obtenus par le procédé de la revendication 4 caractérisés en ce qu’ils comprennent au moins 300 mg/kg de composés phénoliques dont au moins 140 mg/Kg d’acides phénoliques et au moins 300 mg/kg d’acide organiques, dont au moins 50 mg/Kg d’acide shikimique et 10 mg/kg d’acide quinique.
[Revendication 9] Extraits végétaux dilués obtenus par le procédé de la revendication 4, caractérisés en ce qu’ils comprennent en poids du poids total de l’extrait, de 2 à 40 g/kg de poids sec ; 0,2 à 5 g/kg de sucres ; 300 à 900 mg/kg d’acides organiques dont 50 à 500 mg/Kg d’acide shikimique et 10 à 200 mg/kg d’acide quinique ; 300 à 2000 mg/kg de composés phénoliques dont 140 à 210 French mg/Kg d’acides phénoliques et 2 à 10 g/kg de protéines, ainsi que 10 à 60 mg/Kg d’ARN de petits poids moléculaires.
[Revendication 10] Extraits végétaux dilués obtenus par le procédé de la revendication 4, caractérisés en ce que la matière végétale utilisée est la fleur fraîche de jasmin, de préférence de l’espèce Jasminum grandiflorum et qu’il comprend en outre au moins un jasmintide.
[Revendication 1 1 ] Composition comprenant une quantité efficace d’extrait obtenu selon l’un des procédés des revendications 3 ou 4, comprenant préférentiellement de 0,05 à 5 % dudit extrait, et encore plus préférentiellement de 0,1 à 2,5 % dudit extrait en poids par rapport au poids total de la composition, et un milieu physiologiquement acceptable.
[Revendication 12] Utilisation cosmétique de la composition de la revendication 1 1 pour lutter contre les signes du vieillissement cutané, la perte de fermeté ou de tonicité, améliorer la fonction barrière et l’hydratation, éclaircir la peau ou encore améliorer les défenses immunitaires innées de la peau et le bien- être in vivo.
[Revendication 13] Utilisation cosmétique de la composition de la revendication 11 pour atténuer la diminution liée à l’âge des récepteurs du toucher (Piezol ) et des récepteurs à l’ocytocine (OXTR), de la peau et le bien-être in vivo.
[Revendication 14] Composition selon la revendication 11 pour son utilisation pour améliorer les défenses immunitaires innées de la peau.
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