EP4133102A1 - Dispositif et procédé pour déterminer, au départ d'un échantillon préalablement prélevé chez un individu, qu'au moins un anticorps cible a été ou est présent chez ledit individu - Google Patents

Dispositif et procédé pour déterminer, au départ d'un échantillon préalablement prélevé chez un individu, qu'au moins un anticorps cible a été ou est présent chez ledit individu

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Publication number
EP4133102A1
EP4133102A1 EP21717414.3A EP21717414A EP4133102A1 EP 4133102 A1 EP4133102 A1 EP 4133102A1 EP 21717414 A EP21717414 A EP 21717414A EP 4133102 A1 EP4133102 A1 EP 4133102A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
mrna
target antibody
messenger rna
region encoding
molecule
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
EP21717414.3A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Peter Vandeputte
Joris Vandeputte
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Vaccim
Original Assignee
Vaccim
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Vaccim filed Critical Vaccim
Publication of EP4133102A1 publication Critical patent/EP4133102A1/fr
Pending legal-status Critical Current

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Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/52—Use of compounds or compositions for colorimetric, spectrophotometric or fluorometric investigation, e.g. use of reagent paper and including single- and multilayer analytical elements
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/5308—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for analytes not provided for elsewhere, e.g. nucleic acids, uric acid, worms, mites

Definitions

  • Target antibody it is understood, within the meaning of the present invention, an antibody of which one seeks to know, in particular indirectly, if it is or if it was present in an individual from which a sample is taken beforehand.
  • a device finds numerous applications in the fields of health, in particular for demonstrating / for determining, in an individual from whom a sample is simply taken, that at least one target antibody has been or is present. in said individual, this indicating that the individual is subject or has been subject to one or more pathologies or to one or more given diseases. It may for example be a pathology or a viral disease (viral hepatitis, %) or a pathology or a bacterial disease (meningitis, %) or a pathology or a parasitic disease (malaria, ).
  • the demonstration / detection devices for demonstrating / for determining that at least one target antibody has been or is present in an individual are complex, just like the current methods used to implement. evidence / to determine that at least one target antibody has been or is present in an individual.
  • the current devices and methods are inadequate or even totally unsuitable for such demonstrations / detections of at least one target antibody in an individual to be carried out in the field.
  • a device for determining / for demonstrating, starting from a sample previously taken from an individual, that at least one target antibody has been or is present in said individual comprising:
  • a molecule or a compound in particular a molecule or a compound exhibiting redox properties, capable of binding to a messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody or capable of binding to a Complementary DNA (cDNA) obtained from said messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody; and
  • mRNA messenger RNA
  • cDNA Complementary DNA
  • electrodes arranged to be in contact with said sample while the latter is in contact or after the latter has been in contact with said molecule or with said compound capable of binding to messenger RNA (mRNA) comprising a coding region for said at least one target antibody or capable of binding to the complementary DNA (cDNA) obtained from said messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody.
  • mRNA messenger RNA
  • cDNA complementary DNA
  • the electrodes constitute a detection means, that is to say a part or zone of the device which, on its own or in association with an external device / apparatus (not forming an integral part of the device) according to the invention), to carry out an electrochemical measurement making it possible to determine / deduce that at least one target antibody has been or is present in an individual from which a sample has been taken beforehand.
  • a molecule or a compound capable of binding to a messenger RNA (mRNA) or to a complementary DNA (cDNA) it is understood, within the meaning of the present invention, any molecule or any compound which can bind / graft or attach to a messenger RNA (mRNA) or to a complementary DNA (cDNA). It may for example be a molecule or a compound capable of attaching / grafting to the surface of said mRNA or of a molecule or of a compound interacting according to any other mechanism with said messenger RNA (mRNA). .
  • a molecule or of a compound capable of being intercalated one then speaks of an intercalating agent
  • cDNA complementary DNA
  • Such a molecule or such a compound makes it possible to mark / target, within a sample previously taken from an individual, a messenger RNA (mRNA) or a complementary DNA (cDNA) obtained from said messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding the target antibody.
  • it can also be a non-intercalating molecule or a non-intercalating compound, such as for example Os (bpy) 3 2+ ; Ru (NH3) 6 3+ ; FcCH2N + Me3 or FcB (OH) 2.
  • a non-intercalating molecule or a non-intercalating compound such as for example Os (bpy) 3 2+ ; Ru (NH3) 6 3+ ; FcCH2N + Me3 or FcB (OH) 2.
  • mRNA messenger RNA
  • cDNA complementary DNA
  • said molecule or said compound in particular said molecule or said compound exhibiting redox properties, capable of binding to a messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody or able to to bind to a complementary DNA (cDNA) obtained from said messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody, is a molecule or a compound capable of interacting with said electrodes, in particular with a working electrode .
  • mRNA messenger RNA
  • cDNA complementary DNA
  • said molecule or said compound capable of binding to a messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody or capable of binding to a complementary DNA (cDNA) obtained at the start of said messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody is capable of interacting not only with said messenger RNA (mRNA) or capable of binding with said complementary DNA (cDNA) obtained from said messenger RNA (mRNA) ) but also with the electrodes.
  • said molecule or said compound capable of binding to a messenger RNA (mRNA) or capable of binding to a complementary DNA (cDNA) obtained from said messenger RNA (mRNA), in particular said molecule or said compound capable of to bind to a messenger RNA (mRNA) or to a complementary DNA (cDNA) obtained from said messenger RNA (mRNA) and exhibiting redox properties, is capable of exchanging electrons with the electrodes, in particular with an electrode of work, which directly determines the magnitude of a signal measured by electrochemistry.
  • messenger RNA comprising a region encoding said at least one target antibody or if complementary DNA (cDNA) obtained from said messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody is present in the sample
  • a bond is established between said messenger RNA (mRNA) or said complementary DNA (cDNA) and a certain amount of molecule or compound such that a lesser amount of said molecule or said compound is able to interact with the electrodes, in particular with the working electrode, which results in a reduction in the magnitude of the signal measured by electrochemistry.
  • This reduction in the magnitude of the signal measured by electrochemistry makes it possible to determine / deduce that at least one target antibody has been or is present in an individual from which a sample has been taken beforehand.
  • said molecule or said compound for a given messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody, can either bind directly messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody, or bind to a complementary single-stranded or double-stranded DNA (cDNA) obtained from said messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said au minus one target antibody.
  • said molecule or said compound can bind directly to messenger RNA (mRNA) without the latter being subjected to reverse transcription and / or amplification.
  • said molecule or said compound for the establishment of a direct bond between said molecule or said compound and said messenger RNA (mRNA), said molecule or said compound, in particular said molecule or said compound exhibiting redox properties, may be a molecule non-intercalating or a non-intercalating compound (non-intercalating agent) selected from the group consisting of Os (bpy) 3 2+ ; Ru (NH3) 6 3+ ; FcCH2N + Me3; FcB (OH) 2 and mixtures thereof. This list is not exhaustive.
  • Such a device according to the invention while being simple, makes it possible to demonstrate / determine by electrochemical measurement, in particular indirectly, starting from a sample previously taken from an individual, that at least one target antibody was or is present in this individual, in a rapid, precise, reproducible and reliable manner.
  • the device according to the invention is therefore a device making it possible to demonstrate / determine, in particular indirectly, that at least one target antibody has been or is present in an individual, this starting from a sample taken beforehand. in this individual, by binding or not of a compound or a molecule to a messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody or by binding or not of a compound or a molecule to a complementary DNA (cDNA) obtained from said messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding the target antibody, and by determining, through at least one electrochemical measurement, whether or not this bond has been established between said Messenger RNA (mRNA) and said molecule or said compound or by determining, through at least one electrochemical measurement, whether or not this bond has been established between said complementary DNA (cDNA) and said molecule or said compound.
  • mRNA messenger RNA
  • cDNA complementary DNA
  • a device makes it possible more particularly to quickly determine which antibody (s) carries / has carried an individual (target antibody), this on the basis of determining whether or not a binding is established between a messenger RNA (mRNA ) comprising a region encoding said at least one target antibody and said molecule or said compound or on the basis of the determination of the establishment or not of a binding between a complementary DNA (cDNA) obtained from said messenger RNA (mRNA) and comprising a region encoding said at least one target antibody and said molecule or said compound.
  • mRNA messenger RNA
  • cDNA complementary DNA
  • the device according to the invention intrinsically comprises said molecule or said compound capable of binding to messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody or capable of binding to complementary DNA (cDNA). ) obtained from said messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody.
  • mRNA messenger RNA
  • cDNA complementary DNA
  • the device according to the invention intrinsically comprising said molecule or said compound capable of binding to a messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody or capable of binding to a complementary DNA (cDNA) obtained at the start of said messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding the target antibody.
  • mRNA messenger RNA
  • cDNA complementary DNA
  • the term “intrinsically” means "which is inherent in something, which belongs to it in its own right".
  • the term “intrinsically” applied to the device according to the invention therefore means that the device comprises, even before its use and therefore before introduction of a sample, inherently and in its own right the compounds / constituents. indicated as inherently present therein.
  • the device according to the invention allows the operator to dispense with a large quantity of material and reagents but also to considerably reduce the manipulations to be carried out in particular in the field to highlight / to determine, from a sample taken from an individual, that at least one target antibody has been or is present in that individual.
  • a device according to the invention is inexpensive and compact since it does not require large equipment such as those used in the laboratory.
  • a device makes it possible, in a simple, rapid, precise, reproducible and reliable manner, to demonstrate / determine that at least one target antibody has been or is present in an individual by determination of the establishment or otherwise of a bond between a specific mRNA or a cDNA obtained from said specific mRNA corresponding to the target antibody and a molecule or a compound capable of binding to said mRNA or to said cDNA obtained from said mRNA comprising a region encoding said at least one target antibody.
  • an anhydrous or lyophilized form makes it possible to have a device which can be stored for several months or even several years without degradation of the molecule or of the compound capable of binding to a Messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody or capable of binding to a complementary DNA (cDNA) obtained from said messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding the target antibody, said molecule or said compound retaining its properties over time, which contributes to reproducibility of the results.
  • mRNA Messenger RNA
  • cDNA complementary DNA
  • a liquid form of such a molecule or of such a compound is recommended, in particular a liquid form of such a molecule or of such a compound introduced into the device after introduction into the latter of a sample (the molecule or the compound is therefore not intrinsically present in the device).
  • this liquid form is systematically used and recommended to ensure the availability of said molecule or of said compound.
  • the molecule or compound capable of binding to messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody or capable of binding to complementary DNA (CDNA) obtained from said messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody is present in a device according to the invention in a non-liquid form, in particular in an anhydrous or lyophilized form.
  • this non-liquid form in particular this anhydrous or lyophilized form, does indeed make it possible to ensure a bond between said molecule or said compound and a messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody or between said molecule or said compound and a complementary DNA (cDNA) obtained from said messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody, to demonstrate / to determine, in an individual from which a sample is simply taken, that at least one target antibody has been or is present in said individual.
  • mRNA messenger RNA
  • cDNA complementary DNA
  • RNA messenger RNA comprising a region encoding said at least one target antibody or capable of binding to complementary DNA (cDNA) obtained from said RNA messenger (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody
  • cDNA complementary DNA obtained from said RNA messenger (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody
  • said molecule or said compound capable of binding to messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding for said at least one target antibody or capable of binding to complementary DNA (cDNA) obtained from said messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody is present on a support, for example example on a cellulosic support, comprising positive charges and / or positively charged groups and / or positively charged polymers.
  • positively charged groups are associated with a support, in particular with a cellulosic support, by covalent grafting or the like.
  • positively charged polymers are associated with a support, in particular with a cellulosic support, by adsorption.
  • predetermined chemical species are polymerized on the surface of a support, in particular on the surface of a cellulosic support, so that positively charged polymers are associated with this support.
  • mRNA messenger RNA
  • mRNA messenger RNA
  • cDNA complementary DNA
  • the device according to the invention intrinsically comprises said electrodes.
  • the device according to the invention further comprises:
  • reagents enabling reverse transcription of said messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody and / or reagents allowing amplification to be carried out to obtain amplicons of said messenger RNA (MRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody, and, optionally,
  • a heating element for example a heating element comprising an electrical resistance, arranged to heat said sample while the latter is in contact or after the latter has been in contact with said reagents allowing the performance of the reverse transcription of said messenger RNA ( MRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody and / or with said reagents allowing amplification of said messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody.
  • MRNA messenger RNA
  • mRNA messenger RNA
  • the device may or may not include an electric heating element, in particular whether or not intrinsically includes an electric heating element.
  • the heating of the device can, for example, be ensured by placing the device in contact with a heating plate or with any other device making it possible to ensure heating of the sample while the latter is in contact or after the latter has been in contact with said reagents allowing reverse transcription and / or amplification of said messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody.
  • mRNA messenger RNA
  • the device according to the invention therefore makes it possible to perform reverse transcription and / or amplification of said messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody.
  • mRNA messenger RNA
  • RNA messenger RNA
  • RNA messenger RNA
  • amplification techniques PCR, RT-PCR, LAMP and RT-LAMP are techniques well known to those skilled in the art who are therefore even able to determine, for messenger RNA (mRNA ) given, which reagents and which quantities of reagents must be used (for example: buffers, dNTPs, polymerase, DNA polymerase, primers, reverse transcriptase, .
  • RNA messenger RNA
  • mRNA messenger RNA
  • a transcriptase reverse or reverse transcriptase a polymerase
  • a DNA polymerase a DNA polymerase
  • primers a DNA polymerase
  • dNTPs a DNA polymerase
  • Reverse transcriptase or retrotranscriptase is an enzyme used to perform transcription in the reverse direction of the standard direction (reverse transcription or reverse transcription) to obtain DNA from RNA.
  • Reverse transcriptase therefore makes it possible, starting from RNA, to use amplification techniques such as polymerase chain reaction (PCR) or isothermal loop-mediated amplification (LAMP) conventionally carried out using DNA strands.
  • PCR polymerase chain reaction
  • LAMP isothermal loop-mediated amplification
  • RNA can be transcribed into DNA, making RNA analysis feasible using standard DNA amplification techniques.
  • reverse transcriptase or retrotranscriptase is combined with the PCR amplification technique, it is called a reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR).
  • RT-PCR reverse transcriptase polymerase chain reaction
  • LAMP LAMP amplification technique
  • RT-LAMP isothermal amplification mediated by reverse transcription loop
  • CDNA complementary DNA
  • cDNA complementary DNA
  • mRNA complementary DNA
  • the cDNA is obtained after a reverse transcription reaction of an mRNA and is therefore equivalent to the DNA copy of the mRNA.
  • Double-stranded cDNA can result from the copying of a first strand by DNA polymerase.
  • said complementary DNA (cDNA) can be single-stranded or double-stranded.
  • the device according to the invention intrinsically comprises said reagents making it possible to carry out said reverse transcription of said messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody and / or said reagents making it possible to carry out said amplification of said messenger RNA (MRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody.
  • mRNA messenger RNA
  • MRNA messenger RNA
  • said reagents enabling said reverse transcription of said messenger RNA (mRNA) to be carried out comprising a region encoding said at least one target antibody and / or said reagents allowing said amplification of said messenger RNA (mRNA) to be carried out.
  • said reagents enabling said reverse transcription of said messenger RNA (mRNA) to be carried out comprising a region encoding said at least one target antibody and / or said reagents allowing said amplification of said messenger RNA (mRNA) to be carried out.
  • comprising a region encoding said at least one target antibody are in anhydrous or lyophilized form.
  • a liquid form of the reagents allowing the realization of a reverse transcription and / or an amplification is recommended, in particular a liquid form of the reagents allowing the realization of a reverse transcription and / or an amplification introduced into the breast. of the device after introduction into the latter of a sample (the reagents enabling reverse transcription and / or amplification to be carried out are therefore not intrinsically present in the device).
  • this liquid form of the reagents allowing the performance of a reverse transcription and / or an amplification is systematically used and recommended to ensure its availability for a transcription and / or for a correct amplification and reliable can be performed when the reagents allowing the performance of reverse transcription and / or amplification must be able to interact with messenger RNA (mRNA).
  • mRNA messenger RNA
  • the reagents allowing the performance of reverse transcription and / or the performance of amplification are present in a device according to the invention in a non-liquid form, in particular in a anhydrous or lyophilized form.
  • this non-liquid form in particular this anhydrous or lyophilized form, reagents allowing the carrying out of a reverse transcription and / or the carrying out of an amplification make it possible to carry out a correct and reliable transcription and / or amplification to put in place evidence / to determine, in an individual from whom a sample is simply taken, that at least one target antibody has been or is present in said individual.
  • the reagents making it possible to carry out reverse transcription and / or carry out amplification are in anhydrous or lyophilized form and are intrinsically present in a device according to the invention, they are dissolved by the sample. itself following its introduction into the device.
  • said reagents allowing said reverse transcription of said messenger RNA (mRNA) to be carried out comprising a region encoding said at least one target antibody and / or said reagents allowing said amplification of said messenger RNA (mRNA) to be carried out.
  • comprising a region encoding said at least one target antibody are present on a support, for example on a cellulosic support, comprising positive charges and / or positively charged groups and / or positively charged polymers.
  • the device according to the invention further comprises a reagent for lysing said sample or a solution for lysing said sample.
  • said reagent for lysing said sample is in anhydrous or lyophilized form.
  • the advantages of such anhydrous or lyophilized form are identical to those mentioned above.
  • the device according to the invention is in the form of a cartridge or a microfluidic device, for example in the form of a microfluidic cell or chip or of a paper-based microfluidic device.
  • Messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding the target antibody comprises / is a means for labeling said at least one of messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody or a means for labeling said DNA complementary (cDNA) obtained from said messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding the target antibody.
  • RNA messenger RNA
  • cDNA complementary DNA
  • said labeling means is in anhydrous or lyophilized form.
  • the device according to the invention intrinsically comprises said marking means.
  • said marking means is an intercalating agent, in particular an intercalating agent having redox properties.
  • the intercalating agent in particular the intercalating agent exhibiting redox properties, may be methylene blue, methylene green, brilliant cresyl blue, toluidine blue. or else thionine acetate. This list is not exhaustive and any other suitable intercalating agent falls within the scope of the present invention.
  • the device according to the invention intrinsically comprises said intercalating agent.
  • said marking means is a non-intercalating agent, in particular a non-intercalating agent exhibiting redox properties.
  • the device according to the invention intrinsically comprises said non-intercalating agent.
  • said electrodes are arranged to be electrically accessible from outside said device.
  • the device according to the invention intrinsically comprises said reagent for lysing said sample.
  • said sample is a sample chosen from a blood sample, a saliva sample, a urine sample.
  • the device according to the invention has:
  • a second part or zone comprising said molecule or said compound capable of binding to messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody or capable of binding to complementary DNA (cDNA) obtained at departure of said messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding the target antibody, in particular a second part or zone comprising a labeling means capable of binding to the messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody or capable of binding to complementary DNA (cDNA) obtained from said messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding the target antibody, more particularly a second part or area comprising an intercalating agent exhibiting properties redox and capable of being inserted between molecules of said amplicons.
  • mRNA messenger RNA
  • cDNA complementary DNA
  • a distinction between these two parts or areas makes it possible to sequence the steps of reverse transcription and / or amplification and binding of the complementary DNA (cDNA) obtained from said messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least a target antibody.
  • mRNA messenger RNA
  • mRNA messenger RNA
  • amplicons being first obtained before they come into contact with said molecule or said compound capable of binding to a complementary DNA (cDNA) obtained from said starting point.
  • Messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding the target antibody.
  • the device according to the invention comprises a valve located between said first part or zone and said second part or zone.
  • a valve located between said first part or zone and said second part or zone.
  • the device according to the invention has an additional part or zone comprising a reagent for lysing said sample or said solution for lysing said sample, said additional part or zone being located upstream of said first part and of said second part in one direction. flow / displacement of the sample.
  • the device according to the invention can advantageously comprise a lysis chamber ( part or additional zone) in which the sample is lysed before reaching the other parts or zones of the device.
  • the device according to the invention comprises a valve situated between said additional part or zone and said first part or zone and / or said second part or zone.
  • a valve situated between said additional part or zone and said first part or zone and / or said second part or zone.
  • the presence of such a valve makes it possible to control the passage from the part or additional zone where the lysis of the sample takes place to the first and / or the second part after a period of time. determined stay of the sample in this part or additional zone so that the lysis of the sample is optimized.
  • the device according to the invention is in the form of a cartridge through which a solution or a microfluidic device can flow, for example in the form of a cell or a microfluidic chip.
  • the device according to the invention can also be in the form of a paper-based microfluidics device consisting, for example, of a series of hydrophilic cellulose or nitrocellulose fibers which guide a liquid of a entry to a desired area by imbibition and / or capillarity.
  • the paper-based microfluidic device according to the invention is in the form of an origami (“paper-origami based”), that is to say in the form of a microfluidic paper, parts of which are intended to be folded over one another or over each other to be brought into contact.
  • the device may also preferably be in the form of a "paper-based point-of-care NAATs (Nucleic acid amplification-based tests)”.
  • the two parts or zones can be separate chambers fluidly connected (as illustrated in FIGS. 7C and 7D ) or can be distinct locations located in the same (micro-) channel of a chip or of a microfluidic cell (as illustrated in FIG. 7F).
  • a device for demonstrating the presence of at least one target antibody in an individual, starting from a sample comprising:
  • RNA messenger RNA
  • a heating element arranged to heat said sample while the latter is in contact or after the latter has been in contact with said reagents allowing the amplification of said mRNA to be carried out;
  • said reagents allowing an amplification of said mRNA to be carried out, and / or said reagents for lysing said sample are in anhydrous or lyophilized form.
  • said reagents for carrying out an amplification and / or said intercalating agent exhibiting redox properties and / or said reagents for lysing said sample and / or said intercalating agent are in the form of a lyophilisate in the device according to the invention.
  • said reagents making it possible to carry out an amplification of said mRNA, and / or said intercalating agent are present on a support, for example on a cellulosic support, comprising positive charges and / or positively charged groups and / or positively charged polymers.
  • said electrical heating element comprises an electrical resistance, which is supplied by an electrical energy source.
  • the present invention also relates to an assembly comprising:
  • a device or apparatus capable of being electrically connected to the electrodes for performing electrochemical measurements, preferably voltammetric electrochemical measurements, more preferably cyclic or square wave voltammetric electrochemical measurements.
  • the apparatus comprises a potentiostat for applying a potential difference between the electrodes and / or a processing unit of signals emitted by the potentiostat or received by the potentiostat.
  • the present invention also relates to a method for determining / for demonstrating, starting from a sample previously taken from an individual, that at least one target antibody has been or is present in said individual, said method comprising:
  • MRNA messenger RNA
  • cDNA complementary DNA obtained from said messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody
  • mRNA messenger RNA
  • cDNA complementary DNA
  • the first step of bringing into contact is a step of direct binding of said molecule or of said compound, in particular of said molecule or of said compound having redox properties, to an RNA.
  • messenger (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody.
  • the first step of bringing into contact is a step of binding said molecule or said compound, in particular said molecule or said compound having redox properties, to the complementary DNA (cDNA) obtained from said messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody, said messenger RNA (mRNA) being subjected / having been subjected to a reverse transcription and / or amplification.
  • cDNA complementary DNA
  • said molecule or said compound for a given messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody, can either bind directly to messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody, or bind to a complementary single-stranded or double-stranded DNA (cDNA) obtained from said messenger RNA (mRNA) comprising a coding region for said at least one target antibody.
  • said molecule or said compound can bind directly to messenger RNA (mRNA) without the latter being subjected to reverse transcription and / or amplification.
  • said molecule or said compound being able to bind directly to messenger RNA (mRNA), in particular said molecule or said compound being able to bind directly to messenger RNA (mRNA) having redox properties can be a non-intercalating molecule or a non-intercalating compound (non-intercalating agent) selected from the group consisting of Os (bpy) 3 2+ ; Ru (NH3) 6 3+ ; FcCH2N + Me3; FCB (OH) 2 and mixtures thereof. This list is not exhaustive.
  • the method according to the invention further comprises:
  • Heating of said sample, using a heating element, to heat said sample while the latter is in contact or after the latter has been in contact with said reagents allowing performing a reverse transcription of said messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody and / or with said reagents allowing the performance of an amplification of said messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody minus one target antibody.
  • mRNA messenger RNA
  • RNA and said compound and / or when said reagents enabling reverse transcription of said messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody and / or when said reagents enabling amplification to be carried out to obtain amplicons of said messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody are intrinsically present in a device according to the invention in anhydrous or lyophilized form, the sample by passing into / through the device, dissolves said molecule or said compound and / or said reagents.
  • the method according to the invention comprises a prior step of introducing said sample into a device according to the invention or into a device of an assembly according to the invention, said device preferably intrinsically comprising said molecule or said compound, in in particular said molecule or said compound exhibiting redox properties.
  • said amplification of said at least one of messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody is an amplification carried out according to the technique of the polymerase chain reaction technique by reverse transcriptase (RT-PCR) or by the isothermal amplification technique mediated by reverse transcription loop (RT-LAMP) or by any other suitable amplification technique.
  • RT-PCR reverse transcriptase
  • RT-LAMP reverse transcription loop
  • the method according to the invention comprises:
  • mRNA messenger RNA
  • the method according to the invention comprises heating said sample while the latter is in contact or after the latter has been in contact with said reagents allowing the amplification of said at least one to be carried out.
  • Messenger RNA (mRNA) to obtain amplicons of said at least one messenger RNA (mRNA).
  • said first contacting step and / or said second contacting step consists of putting into solution by said sample of said reagents intrinsically present in said device in order to achieve a solution. amplification of said at least messenger RNA (mRNA) and / or by dissolving said intercalating agent intrinsically present in said device, in particular dissolving said intercalating agent intrinsically present in said device and exhibiting redox properties, to achieve an intercalation of said intercalating agent between molecules of said amplicons.
  • the method according to the invention comprises a step of lysis of said sample, preferably a step of lysis of said sample carried out upstream of said first and / or of said second contacting step.
  • the method for determining / for demonstrating the presence of at least one target antibody in an individual, starting from a sample comprises the following steps: a) contacting and heating said sample with reagents making it possible to carry out an amplification of messenger RNA (mRNA) comprising a region encoding said at least one target antibody, in order to obtain amplicons; and b) detecting said amplicons of said amplified mRNA, using detection means.
  • mRNA messenger RNA
  • said amplification is an amplification carried out according to the polymerase chain reaction (PCR) technique or the loop-mediated isothermal amplification technique (LAMP) or according to any technique. adequate amplification.
  • PCR polymerase chain reaction
  • LAMP loop-mediated isothermal amplification technique
  • the method according to the invention comprises a step simultaneous with step a) or delayed in time with respect to step a) of labeling said amplicons. Labeling of the amplicons can allow electrochemical detection.
  • the present invention also relates to a use of a device according to the invention or of an assembly according to the invention to determine / to demonstrate, starting from a sample previously taken from an individual, that at least one target antibody has been or is present in said individual.
  • Figure 1 illustrates a first example of an embodiment of a device according to the invention.
  • FIG. 2 illustrates a second example of an embodiment of a device according to the invention.
  • FIG. 3 illustrates a third example of an embodiment of a device according to the invention.
  • Figure 4 illustrates a fourth example of an embodiment of a device according to the invention.
  • Figures 5A, 5B and 5C are exploded views of exemplary embodiments of devices according to the invention and illustrate the components of different embodiments of a device according to the invention.
  • Figures 6A, 6B, 6C, 6D and 6E are exploded views of exemplary embodiments of devices according to the invention and also illustrate the components of different embodiments of a device according to the invention.
  • Figures 7A, 7B, 7C, 7D, 7E and 7F further illustrate examples of embodiments of devices according to the invention.
  • FIG. 1 illustrates a first embodiment of a device according to the invention which, as illustrated comprises a first part or zone 1, a second part or zone 2, electrodes 3 and an electric heating element 4.
  • this embodiment of a device according to the invention may comprise an additional part or zone comprising reagents for lysing the sample or a solution for lysing a sample taken from an individual.
  • FIG. 1 illustrates an example of a device according to the invention which could be in the form of a cartridge or of a microfluidic device, for example in the form of a paper-based microfluidic device (“paper- based microfluidics ”or“ paper-origami based ”or“ paper-based point-of-care NAATs ”).
  • the first part or zone 1 comprises reagents making it possible to carry out reverse transcription and amplification of said mRNA comprising a region encoding the target antibody, to obtain amplicons of mRNA potentially contained in the sample (for example performing isothermal amplification mediated by reverse transcription loop).
  • the second part or zone 2 comprises a molecule or a compound capable of binding to amplicons, for example an intercalating agent, exhibiting properties redox and being able to fit between molecules of the amplicons, in particular being able to fit in the space between two base pairs of the amplicons.
  • the sample taken from an individual is preferably lysed, that is to say dissolved in a lysis solution, before being introduced into the device as indicated. by the arrow.
  • the lysed sample gains the first part or zone 1, it comes into contact with the reagents allowing the performance of reverse transcription and amplification of said mRNA comprising a coding region.
  • the target antibody to obtain amplicons (for example carrying out isothermal amplification mediated by reverse transcription loop), in the first part or zone 1 under the effect of heating to a predetermined temperature by the electric heating element 4.
  • Amplicons of mRNA comprising a region encoding the target antibody are thus obtained provided that this mRNA is present in the sample taken from the individual.
  • the amplicons obtained then gain, for example under the effect of gravity, the second part or zone 2 comprising a molecule or a compound capable of binding to the amplicons, for example an intercalating agent, which is inserted between the molecules of the amplicons , in particular between two base pairs of amplicons.
  • the electrodes 3 (working electrode, counter-electrode or auxiliary electrode and reference electrode) are in contact with the sample after the latter has been in contact with said reagents allowing the transcription to be carried out. reverse transcription and amplification of said mRNA, to obtain amplicons (for example carrying out isothermal amplification mediated by reverse transcription loop), and with a molecule or a compound capable of binding to amplicons, for example with an agent intercalating.
  • the electrodes 3 are also electrically accessible from outside the device according to the invention so that they can be electrically connected to an apparatus (not illustrated) making it possible to carry out electrochemical measurements (preferably voltammetric electrochemical measurements, more preferably. cyclic or square wave voltammetric electrochemical measurements) using for example a redox indicator (in particular an intercalating agent), the principle and the implementation of such a measurement being well known to those skilled in the art.
  • FIG. 1 also comprises an additional part or zone 5 comprising a solution or reagents for lysing a sample taken from an individual
  • the sample can be directly introduced into the device at the level of the patient.
  • additional part or zone 5 in which the sample is lysed before gaining, for example under the effect of gravity, the first part or zone 1 then the second part or zone 2.
  • Another embodiment according to the invention corresponds to that illustrated in FIG. 1 but without first part or zone 1 (that is to say without reagents allowing the performance of reverse transcription and amplification of said mRNA comprising a region encoding the target antibody) and without an electric heating element 4.
  • the mRNA in the second part or zone 2, is directly linked to a molecule or to a compound, for example to a non-molecular molecule. intercalating agent or to a non-intercalating compound (non-intercalating agent) capable of binding to mRNA comprising a region encoding the target antibody without reverse transcription and without amplification of this mRNA.
  • FIG. 2 illustrates a second embodiment of a device according to the invention.
  • FIG. 2 illustrates an example of a device according to the invention which could be in the form of a cartridge or of a microfluidic device, for example in the form of a paper-based microfluidic device ("paper- based microfluidics ”or“ paper-origami based ”or“ paper-based point-of-care NAATs ”).
  • paper- based microfluidics or“ paper-origami based ”or“ paper-based point-of-care NAATs ”.
  • the first part or zone 1 and the second part or zone 2 are located at the same level, that is to say in the same zone or the same. compartment.
  • a molecule or a compound capable of binding to amplicons located in the second part or zone 2 can coat the side walls of a zone or a compartment of the device, thus surrounding the first part or zone 1 comprising the reagents allowing the performance of the reverse transcription and the amplification of said mRNA, to obtain amplicons of the mRNA potentially contained in the sample (for example the performing isothermal amplification mediated by reverse transcription loop).
  • the reagents allowing the performance of the reverse transcription and the amplification of the said mRNA and that the said molecule or the said compound capable of binding to the amplicons, for example an intercalating agent are present as a mixture in the same zone or in the same compartment, which would then comprise said first and said second part or zone.
  • FIG. 3 illustrates a third embodiment of a device according to the invention.
  • FIG. 3 illustrates an example of a device according to the invention which could be in the form of a cartridge or of a microfluidic device, for example in the form of a paper-based microfluidic device ("paper- based microfluidics ”or“ paper-origami based ”or“ paper-based point-of-care NAATs ”).
  • paper- based microfluidics or“ paper-origami based ”or“ paper-based point-of-care NAATs ”.
  • that illustrated in Figure 3 comprises an additional part or area 7 located upstream and in contact with the electrodes 3 in a direction of flow of the sample.
  • Another embodiment according to the invention corresponds to that illustrated in FIG. 3 but without first part or zone 1 (that is to say without reagents allowing the performance of reverse transcription and amplification of said mRNA comprising a region encoding the target antibody) and without an electric heating element 4.
  • the mRNA in the second part or zone 2, is directly linked to a molecule or to a compound, for example to a non-molecular molecule. intercalator or to a non-intercalating compound (non-intercalating agent) capable of binding to mRNA comprising a region encoding the target antibody without reverse transcription and amplification of this mRNA.
  • FIG. 4 illustrates an example of a device according to the invention which could be in the form of a cartridge or of a microfluidic device, for example in the form of a paper-based microfluidics device (“paper-based microfluidics” or “paper-origami based” or “paper-based point-of-care NAATs”).
  • paper-based microfluidics or “paper-origami based” or “paper-based point-of-care NAATs”.
  • FIGS. 5A, 5B and 5C illustrate the components of different embodiments of a device according to the invention. More particularly, FIGS. 5A, 5B and 5C illustrate the components of a device A according to the invention which is in the form of a cylinder constituting for example a cartridge. In FIG.
  • the device A comprises a first part constituted for example of a permeable disc 1 + 2, for example of a permeable disc of cellulosic material, comprising both the reagents allowing the realization of the reverse transcription and amplification of said mRNA, to obtain amplicons of the mRNA (for example carrying out isothermal amplification mediated by reverse transcription loop), and a molecule or a compound capable of binding to the amplicons, for example example an intercalating agent.
  • An electric heater (not shown) provides heating of the 1 + 2 permeable disc to a predetermined temperature to provide amplification of said mRNA to obtain amplicons of the mRNA (e.g., performing isothermal loop-mediated amplification. reverse transcription).
  • electrodes 3, three in number are in contact with the sample while the latter is in contact with said reagents allowing the performance of the reverse transcription and the amplification of said mRNA, for obtaining amplicons of the mRNA (for example carrying out isothermal amplification mediated by reverse transcription loop), and with a molecule or a compound capable of binding to the amplicons, for example with an intercalating agent.
  • the electrodes 3 are also electrically accessible from outside the device according to the invention so that they can be electrically connected to an apparatus (not illustrated) making it possible to carry out electrochemical measurements (preferably voltammetric electrochemical measurements.
  • the electrodes 3 of the device A according to the invention can be connected electrically to an apparatus (not illustrated) via a base B or a socket fitted with connectors.
  • the device A according to the invention can be screwed on or clipped onto the base or the base B to ensure adequate contact between the connectors and the electrodes 3.
  • FIG. 5B is identical to FIG. 5A but the device A illustrated further comprises an additional part or zone 5 comprising reagents or a solution for lysing a sample taken from an individual.
  • the sample can be directly introduced into the device at the level of the part or additional zone 5 in which the sample is lysed before gaining, for example under the effect of gravity, the part consisting for example of '' a 1 + 2 permeable disc comprising both the reagents allowing the performance of the reverse transcription and the amplification of said mRNA, to obtain amplicons of the mRNA (for example the performance of an isothermal amplification mediated by loop of reverse transcription), and a molecule or a compound capable of binding to amplicons, for example an intercalating agent.
  • FIG. 5C is identical to FIG. 5B but the device A illustrated additionally comprises a valve 6, for example a rotary slide valve, making it possible to control the passage of the sample from the part or additional zone 5 where it is lysed to the part consisting for example of a permeable 1 +2 disc comprising both the reagents allowing the performance of the reverse transcription and the amplification of said mRNA, to obtain amplicons of the mRNA (for example the production of a isothermal amplification mediated by reverse transcription loop), and a molecule or a compound capable of binding to amplicons, for example an intercalator.
  • a valve 6 for example a rotary slide valve
  • FIGS. 5A, 5B and 5C Other embodiments according to the invention correspond to those illustrated in FIGS. 5A, 5B and 5C but without the presence of reagents allowing the performance of reverse transcription and amplification of said mRNA comprising a region encoding the target antibody. and without an electric heating element 4.
  • the mRNA is directly linked to a molecule or to a compound, for example to a non-intercalating molecule or to a non-intercalating compound (non-intercalating agent), capable of binding.
  • mRNA comprising a region encoding the target antibody without reverse transcription and amplification of this mRNA.
  • Figures 6A, 6B, 6C, 6D and 6E also illustrate the components of different embodiments of a device according to the invention. More particularly, FIGS. 6A, 6B, 6C, 6D and 6E illustrate the components of a device A according to the invention which is in the form of a cylinder constituting for example a cartridge.
  • a first part 1 consisting for example of a permeable disc, for example of a permeable disc of cellulosic material, comprising the reagents allowing the performance of the reverse transcription and the amplification of said mRNA, to obtain amplicons of the MRNA (eg performing isothermal amplification mediated by reverse transcription loop); and
  • a second part 2 consisting for example of a permeable disc, for example of a permeable disc of cellulosic material, comprising a molecule or a compound capable of binding to amplicons, for example an intercalating agent.
  • An electric heating element (not shown) provides heating of at least the permeable disk 1 to a predetermined temperature to ensure amplification of said mRNA, to obtain amplicons of the mRNA (for example performing an isothermal amplification mediated by reverse transcription loop).
  • electrodes 3, three in number are in contact with the sample after the latter has been in contact with said reagents allowing the performance of reverse transcription and amplification of said mRNA, to obtain amplicons of the mRNA (for example carrying out an isothermal amplification mediated by a reverse transcription loop), and with a molecule or a compound capable of binding to the amplicons, for example an intercalating agent.
  • the electrodes 3 are also electrically accessible from outside the device according to the invention so that they can be electrically connected to an apparatus (not illustrated) making it possible to carry out electrochemical measurements (preferably voltammetric electrochemical measurements. , more preferably electrochemical voltammetric cyclic or square wave measurements) using for example a redox indicator (in particular an intercalating agent), the principle and the implementation of such a measurement being well known to those skilled in the art.
  • electrochemical measurements preferably voltammetric electrochemical measurements. , more preferably electrochemical voltammetric cyclic or square wave measurements
  • a redox indicator in particular an intercalating agent
  • the electrodes 3 of the device A according to the invention can be electrically connected to an apparatus (not illustrated) via a base B or a base provided with connectors.
  • the device A according to the invention can be screwed on or clipped onto the base or the base B to ensure adequate contact between the connectors and the electrodes 3.
  • Figure 6B is identical to Figure 6A but a valve 6, for example a rotary slide valve, separates the first part 1 from the second part 2 and makes it possible to control the passage of the sample from the first part 1 comprising the reagents allowing the realization of the reverse transcription and the amplification of said mRNA, to obtain amplicons of the mRNA (for example the realization of an isothermal amplification mediated by reverse transcription loop), to the second part 2 comprising a molecule or a compound capable of binding to amplicons, for example an intercalating agent.
  • a valve 6 for example a rotary slide valve
  • Figure 6C is identical to Figure 6A but the device A illustrated further comprises an additional part or zone 5 comprising reagents or a solution for lysing a sample taken from an individual.
  • the sample can be directly introduced into the device at the level of the part or additional zone 5 in which the sample is lysed before gaining, for example under the effect of gravity, the first part 1 consisting of example of a permeable disc comprising the reagents making it possible to carry out the amplification of said mRNA, to obtain amplicons of the mRNA (for example to carry out a reverse transcription and an isothermal amplification mediated by a reverse transcription loop) , then to the second part 2 comprising a molecule or a compound capable of binding to amplicons, for example an intercalating agent.
  • the first part 1 consisting of example of a permeable disc comprising the reagents making it possible to carry out the amplification of said mRNA, to obtain amplicons of the mRNA (for example to carry out a reverse
  • FIG. 6D is identical to FIG. 6C but the device A illustrated additionally comprises a valve 6 ', for example a rotary slide valve, making it possible to control the passage of the sample from the part or additional zone 5 where it is lysed.
  • a valve 6 ' for example a rotary slide valve, making it possible to control the passage of the sample from the part or additional zone 5 where it is lysed.
  • the first part 1 consisting for example of a permeable disc comprising the reagents allowing the performance of the reverse transcription and the amplification of said mRNA, to obtain amplicons of the mRNA (for example the performance of an isothermal amplification mediated through reverse transcription loop) then to the second part 2 comprising a molecule or a compound capable of binding to amplicons, for example an intercalating agent.
  • FIG. 6E is identical to FIG. 6D but the device A illustrated additionally comprises a valve 6, for example a rotary slide valve, making it possible to control the passage of the sample from the first part 1 consisting for example of a disc permeable comprising the reagents allowing the carrying out of the reverse transcription and the amplification of the said mRNA, to obtain amplicons of the mRNA (for example the realization of an isothermal amplification mediated by a reverse transcription loop), to the second part 2 comprising a molecule or a compound capable of binding to amplicons, for example an intercalating agent.
  • a valve 6 for example a rotary slide valve
  • the mRNA is directly linked to a molecule or to a compound, for example to a non-intercalating molecule or to a non-intercalating compound (non-intercalating agent), capable of binding to mRNA comprising a region encoding the target antibody without reverse transcription and without amplification of this mRNA.
  • Figures 7A, 7B, 7C, 7D, 7E and 7F illustrate exemplary embodiments of devices according to the invention in the form of microfluidic devices (microfluidic cells or chips) having an input E through which a sample can be introduced. Elements identical to those illustrated in the preceding figures are repeated.
  • FIG. 7E illustrates a device according to the invention as illustrated in FIGS. 7A to 7D with the difference that the electrodes are in direct contact with a zone comprising both the reagents allowing the performance of reverse transcription and amplification of said mRNA to obtain amplicons of the mRNA (for example carrying out isothermal amplification mediated by reverse transcription loop) and a molecule or a compound capable of binding to the amplicons, for example an agent an agent intercalating.
  • the (micro-) channel C of a microfluidic cell or chip constitutes a first zone or part of the device, this first zone or part comprising a first sub-zone (delimited by the dotted lines) where the reagents are located allowing the performance of the reverse transcription and the amplification of the said mRNA to obtain amplicons of the mRNA (for example the realization of an isothermal amplification mediated by a loop of reverse transcription) and a second sub-zone (delimited by the other dotted lines) where there is a molecule or a compound capable of binding to amplicons, for example an intercalating agent, each of these two sub-zones being located in said first zone or part of the device constituted by said (micro-) channel of a microfluidic device and therefore being in fluid communication.
  • the mRNA is directly linked to a molecule or to a compound, for example to a non-intercalating molecule or to a non-intercalating compound (non-intercalating agent ), capable of binding to mRNA comprising a region encoding the target antibody without reverse transcription and without amplification of this mRNA.

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Abstract

La présente invention porte sur un dispositif et sur un procédé pour déterminer / pour mettre en évidence, au départ d'un échantillon préalablement prélevé chez un individu, en particulier au départ d'un échantillon liquide préalablement prélevé chez un individu, qu'au moins un anticorps cible a été ou est présent chez ledit individu.

Description

Dispositif et procédé pour déterminer, au départ d’un échantillon préalablement prélevé chez un individu, qu’au moins un anticorps cible a été ou est présent chez ledit individu La présente invention porte sur un dispositif et sur un procédé pour déterminer / pour mettre en évidence, au départ d’un échantillon préalablement prélevé chez un individu, en particulier au départ d’un échantillon liquide préalablement prélevé chez un individu (animal ou humain), qu’au moins un anticorps cible a été ou est présent chez ledit individu (animal ou humain). Par les termes « anticorps cible », il est entendu, au sens de la présente invention, un anticorps dont on cherche à savoir, en particulier de façon indirecte, s’il est ou s’il a été présent chez un individu au départ duquel un échantillon est préalablement prélevé.
Un dispositif selon l’invention trouve de nombreuses applications dans les domaines de la santé, notamment pour mettre en évidence / pour déterminer, chez un individu au départ duquel est simplement prélevé un échantillon, qu’au moins un anticorps cible a été ou est présent chez ledit individu, ceci indiquant que l’individu est sujet ou a été sujet à une ou plusieurs pathologies ou à une ou plusieurs maladies données. Il peut par exemple s’agir d’une pathologie ou d’une maladie virale (hépatites virales, ...) ou d’une pathologie ou d’une maladie bactérienne (méningite, ...) ou encore d’une pathologie ou d’une maladie parasitaire (paludisme, ...).
Malheureusement, actuellement, les dispositifs de mise en évidence / de détection pour mettre en évidence / pour déterminer qu’au moins un anticorps cible a été ou est présent chez un individu, sont complexes, tout comme les procédés actuels mis en oeuvre pour mettre en évidence / pour déterminer qu’au moins un anticorps cible a été ou est présent chez un individu.
En outre, généralement, les dispositifs et les procédés actuels sont peu adéquats voire totalement inadaptés pour de telles mises en évidence / détections d’au moins un anticorps cible chez un individu devant être effectuées sur le terrain.
Par ailleurs, les dispositifs actuels nécessitent généralement un prétraitement / une préparation de l’échantillon prélevé chez un individu, ce qui requiert toujours la mise en oeuvre de nombreux réactifs. Ainsi, avec les dispositifs actuels, l’opérateur doit non seulement disposer de matériel (réactifs, solvants, pipettes, dispositif de chauffage, ...) mais aussi réaliser de nombreuses manipulations délicates comme par exemple des dilutions qui se doivent d’être précises. Il est évident que ceci est particulièrement contraignant et d’autant plus sur le terrain où il est même parfois tout simplement impossible d’assurer une préparation correcte de l’échantillon prélevé. Aussi, les réactifs mis en oeuvre sont généralement sensibles aux conditions environnementales (températures élevées, humidité, ...) et/ou dangereux à manipuler, ce qui rend d’autant plus contraignantes les utilisations des dispositifs actuels.
Il existe donc actuellement un réel besoin de procurer un dispositif et un procédé plus simple pour mettre en évidence / pour déterminer qu’au moins un anticorps cible a été ou est présent chez un individu, notamment lorsqu’une telle mise en évidence / détection doit être effectuée sur le terrain.
Pour résoudre au moins en partie ces problèmes, il est prévu, suivant l’invention, un dispositif pour déterminer / pour mettre en évidence, au départ d’un échantillon préalablement prélevé chez un individu, qu’au moins un anticorps cible a été ou est présent chez ledit individu, ledit dispositif comprenant :
• une molécule ou un composé, en particulier une molécule ou un composé présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier à un ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible ou apte à se lier à un ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible ; et
• des électrodes agencées pour être en contact avec ledit échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec ladite molécule ou avec ledit composé apte à se lier à l’ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible ou apte à se lier à l’ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible. Au sens de la présente invention, les électrodes constituent un moyen de détection, c’est-à-dire une partie ou zone du dispositif qui permet à elle seule ou en association avec un dispositif/appareillage externe (ne faisant pas partie intégrante du dispositif selon l’invention), de réaliser une mesure électrochimique permettant de déterminer / de déduire qu’au moins un anticorps cible a été ou est présent chez un individu au départ duquel un échantillon a été préalablement prélevé.
Par les termes « une molécule ou un composé apte à se lier à un ARN messager (ARNm) ou à un ADN complémentaire (ADNc) », il est entendu, au sens de la présente invention, toute molécule ou tout composé qui peut se lier / se greffer ou encore se fixer à un ARN messager (ARNm) ou à un ADN complémentaire (ADNc). Il peut par exemple s’agir d’une molécule ou d’un composé apte à se fixer / se greffer à la surface dudit ARNm ou d’une molécule ou d’un composé interagissant selon tout autre mécanisme avec ledit ARN messager (ARNm). A titre d’exemple, il peut également s’agir d’une molécule ou d’un composé apte à s’intercaler (on parle alors d’agent intercalant) entre des molécules, en particulier entre deux paires de bases, d’ADN complémentaire (ADNc) lorsqu’il est double brin. Une telle molécule ou un tel composé permet de marquer / de cibler, au sein d’un échantillon préalablement prélevé chez un individu, un ARN messager (ARNm) ou un ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour l’anticorps cible. Toujours à titre d’exemple, il peut également s’agir d’une molécule non intercalante ou d’un composé non intercalant, comme par exemple Os(bpy)32+ ; Ru(NH3)63+ ; FcCH2N+Me3 ou FcB(OH)2. Par exemple, lorsque ladite molécule ou ledit composé apte à se lier à un ARN messager (ARNm) ou à un ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) est un agent intercalant, il peut s’agir du bleu de méthylène, du vert de méthylène, du bleu de crésyle brillant, du bleu de toluidine ou encore de l’acétate de thionine. Cette liste est non exhaustive.
Préférentiellement, selon l’invention, ladite molécule ou ledit composé, en particulier ladite molécule ou ledit composé présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier à un ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible ou apte à se lier à un ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible, est une molécule ou un composé apte à interagir avec lesdites électrodes, en particulier avec une électrode de travail.
En particulier, selon l’invention, ladite molécule ou ledit composé apte à se lier à un ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible ou apte à se lier à un ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible est apte à interagir non seulement avec ledit ARN messager (ARNm) ou apte à se lier avec ledit ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) mais aussi avec les électrodes.
En pratique, ladite molécule ou ledit composé apte à se lier à un ARN messager (ARNm) ou apte à se lier à un ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm), en particulier ladite molécule ou ledit composé apte à se lier à un ARN messager (ARNm) ou à un ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) et présentant des propriétés oxydo-réductrices, est apte à échanger des électrons avec les électrodes, en particulier avec une électrode de travail, ce qui détermine directement la grandeur d’un signal mesuré par électrochimie. Si de l’ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible ou si de l’ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible est présent dans l’échantillon, une liaison s’établit entre ledit ARN messager (ARNm) ou ledit ADN complémentaire (ADNc) et une certaine quantité de molécule ou de composé de telle sorte qu’une quantité moindre de ladite molécule ou dudit composé est en mesure d’interagir avec les électrodes, en particulier avec l’électrode de travail, ce qui se traduit par une diminution de la grandeur du signal mesuré par électrochimie. Cette diminution de la grandeur du signal mesuré par électrochimie permet de déterminer / de déduire qu’au moins un anticorps cible a été ou est présent chez un individu au départ duquel un échantillon a été préalablement prélevé. Selon l’invention, pour un ARN messager (ARNm) donné comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible, ladite molécule ou ledit composé, en particulier ladite molécule ou ledit composé présentant des propriétés oxydo-réductrices, peut soit se lier directement à l’ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible, soit se lier à un ADN complémentaire (ADNc) monobrin ou double brin obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible. En d’autres termes, selon un mode de réalisation suivant l’invention, ladite molécule ou ledit composé peut se lier directement à l’ARN messager (ARNm) sans que ce dernier ne soit soumis à une transcription inverse et/ou à une amplification.
Par exemple, pour l’établissement d’une liaison directe entre ladite molécule ou ledit composé et ledit ARN messager (ARNm), ladite molécule ou ledit composé, en particulier ladite molécule ou ledit composé présentant des propriétés oxydo-réductrices, peut être une molécule non intercalante ou un composé non intercalant (agent non intercalant) choisi(e) dans le groupe constitué de Os(bpy)32+ ; Ru(NH3)63+ ; FcCH2N+Me3 ; FcB(OH)2 et leurs mélanges. Cette liste est non exhaustive.
Un tel dispositif selon l’invention, tout en étant simple, permet de mettre en évidence / de déterminer par mesure électrochimique, en particulier de façon indirecte, au départ d’un échantillon préalablement prélevé chez un individu, qu’au moins un anticorps cible a été ou est présent chez cet individu, ceci de façon rapide, précise, reproductible et fiable.
Le dispositif selon l’invention est donc un dispositif permettant de mettre en évidence / de déterminer, en particulier de façon indirecte, qu’au moins un anticorps cible a été ou est présent chez un individu, ceci au départ d’un échantillon préalablement prélevé chez cet individu, par liaison ou non d’un composé ou d’une molécule à un ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible ou par liaison ou non d’un composé ou d’une molécule à un ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour l’anticorps cible, et par détermination, au travers d’au moins une mesure électrochimique, de l’établissement ou non de cette liaison entre ledit ARN messager (ARNm) et ladite molécule ou ledit composé ou par détermination, au travers d’au moins une mesure électrochimique, de l’établissement ou non de cette liaison entre ledit ADN complémentaire (ADNc) et ladite molécule ou ledit composé.
Un dispositif selon l’invention permet plus particulièrement de déterminer rapidement quel(s) anticorps porte/a porté un individu (anticorps cible), ceci sur base de la détermination de l’établissement ou non d’une liaison entre un ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible et ladite molécule ou ledit composé ou sur base de la détermination de l’établissement ou non d’une liaison entre un ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) et comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible et ladite molécule ou ledit composé.
Avantageusement, le dispositif selon l’invention comprend intrinsèquement ladite molécule ou ledit composé apte à se lier à l’ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible ou apte à se lier à l’ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible.
De la sorte, l’échantillon prélevé chez un individu ne nécessite pas de prétraitement / de préparation avant son introduction au sein du dispositif, seule une lyse de l’échantillon étant parfois mais non indispensablement nécessaire selon certains modes de réalisation suivant l’invention, le dispositif selon l’invention comprenant intrinsèquement ladite molécule ou ledit composé apte à se lier à un ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible ou apte à se lier à un ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour l’anticorps cible.
Par définition, le terme « intrinsèquement » signifie « qui est inhérent à quelque chose, qui lui appartient en propre ». Dans le cadre de la présente invention, le terme « intrinsèquement » appliqué au dispositif selon l’invention signifie donc que le dispositif comprend, avant même son utilisation et donc avant introduction d’un échantillon, de façon inhérente et en propre les composés / constituants indiqués comme y étant présent intrinsèquement. Le dispositif selon l’invention permet à l’opérateur de se dispenser d’une quantité importante de matériel et de réactifs mais aussi de réduire considérablement les manipulations à effectuer notamment sur le terrain pour mettre en évidence / pour déterminer, au départ d’un échantillon prélevé chez un individu, qu’au moins un anticorps cible a été ou est présent chez cet individu. Il en résulte notamment que les erreurs de manipulation et les contaminations sont significativement réduites, que les mesures réalisées sont d’autant plus fiables et que le temps requis pour réaliser une détection notamment sur le terrain est significativement réduit. En outre, un dispositif de selon l’invention est peu coûteux et peu encombrant puisqu’il ne nécessite pas d’appareillages imposants tels que ceux utilisés en laboratoire.
En d’autres termes, un dispositif selon l’invention permet de façon simple, rapide, précise, reproductible et fiable, de mettre en évidence / de déterminer qu’au moins un anticorps cible a été ou est présent chez un individu par détermination de l’établissement ou non d’une liaison entre un ARNm spécifique ou un ADNc obtenu au départ dudit ARNm spécifique correspondant à l’anticorps cible et une molécule ou un composé apte à se lier audit ARNm ou audit ADNc obtenu au départ dudit ARNm comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible.
De préférence, selon l’invention, ladite molécule ou ledit composé apte à se lier à l’ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible ou apte à se lier à l’ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible est sous forme anhydre ou lyophilisée.
Au contraire d’une forme liquide (par exemple une forme aqueuse), une forme anhydre ou lyophilisée permet de disposer d’un dispositif qui peut être conservé plusieurs mois voire plusieurs années sans dégradation de la molécule ou du composé apte à se lier à un ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible ou apte à se lier à un ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour l’anticorps cible, ladite molécule ou ledit composé conservant ses propriétés au cours du temps, ce qui contribue à une reproductibilité des résultats. Actuellement, une forme liquide d’une telle molécule ou d’un tel composé est préconisée, en particulier une forme liquide d’une telle molécule ou d’un tel composé introduit(e) au sein du dispositif après introduction dans ce dernier d’un échantillon (la molécule ou le composé n’est donc pas intrinsèquement présent(e) dans le dispositif). Avec les dispositifs actuels, cette forme liquide est systématiquement utilisée et préconisée pour assurer la disponibilité de ladite molécule ou dudit composé.
Au contraire des dispositifs actuels et avantageusement selon la présente invention, la molécule ou le composé apte à se lier à l’ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible ou apte à se lier à l’ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible est présent dans un dispositif selon l’invention sous une forme non liquide, en particulier sous une forme anhydre ou lyophilisée. Il a été montré, dans le cadre de la présente invention et à l’encontre de ce qui est préconisé et rencontré avec les dispositifs actuels, que cette forme non liquide, en particulier que cette forme anhydre ou lyophilisée, permet bien d’assurer une liaison entre ladite molécule ou ledit composé et un ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible ou entre ladite molécule ou ledit composé et un ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible, pour mettre en évidence / pour déterminer, chez un individu au départ duquel est simplement prélevé un échantillon, qu’au moins un anticorps cible a été ou est présent chez ledit individu.
En pratique, lorsque la molécule ou le composé apte à se lier à l’ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible ou apte à se lier à l’ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible, sous forme anhydre ou lyophilisée est intrinsèquement présent(e) dans un dispositif selon l’invention, elle / il est mis(e) en solution par l’échantillon lui-même suite à son introduction dans le dispositif.
Préférentiellement, selon l’invention, ladite molécule ou ledit composé apte à se lier à l’ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible ou apte à se lier à l’ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible est présent(e) sur un support, par exemple sur un support cellulosique, comportant des charges positives et/ou des groupements chargés positivement et/ou des polymères chargés positivement.
Par exemple, des groupements chargés positivement sont associés à un support, en particulier à un support cellulosique, par greffage covalent ou autre. Alternativement ou complémentairement, des polymères chargés positivement sont associés à un support, en particulier à un support cellulosique, par adsorption. Alternativement ou complémentairement, des espèces chimiques prédéterminées sont polymérisées en surface d’un support, en particulier en surface d’un support cellulosique, pour que des polymères chargés positivement soient associés à ce support. Dans le cadre de la présente invention, il a été mis en avant qu’un tel support chargé positivement permet de garantir une disponibilité adéquate de ladite molécule ou dudit composé apte à se lier à un ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible ou apte à se lier à un ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour l’anticorps cible, en ce sens que ladite molécule ou ledit composé ne reste pas accroché(e) au support afin de pouvoir se lier à un ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible ou de pouvoir se lier à un ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour l’anticorps cible de telle sorte à assurer des mesures électrochimiques adéquates.
Selon un mode de réalisation préférentiel suivant l’invention, le dispositif selon l’invention comprend intrinsèquement lesdites électrodes.
Selon un mode de réalisation, le dispositif selon l’invention comprend en outre :
• des réactifs permettant la réalisation d’une transcription inverse dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible et/ou des réactifs permettant la réalisation d’une amplification pour obtenir des amplicons dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible, et, éventuellement,
• un élément chauffant, par exemple un élément chauffant comprenant une résistance électrique, agencé pour chauffer ledit échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de la transcription inverse dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible et/ou avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible.
Selon l’invention, le dispositif comprend ou non un élément chauffant électrique, en particulier comprend ou non intrinsèquement un élément chauffant électrique. Lorsqu’il ne comprend pas d’élément chauffant électrique, le chauffage du dispositif peut être par exemple assurer en mettant le dispositif en contact avec une plaque chauffante ou avec tout autre dispositif permettant d’assurer un chauffage de l’échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de la transcription inverse et/ou de l’amplification dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible.
Selon un mode de réalisation, le dispositif selon l’invention permet donc de réaliser une transcription inverse et/ou une amplification dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible.
Les techniques de transcription inverse de l’ARN, en particulier de l’ARN messager (ARNm) sont bien connues de l’homme de métier.
Les techniques d’amplification de l’ARN, en particulier d’ARN messager (ARNm) sont aussi bien connues de l’homme de métier. En particulier et à titre d’exemple, les techniques d’amplification PCR, RT-PCR, LAMP et RT- LAMP sont des techniques bien connues de l’homme de métier qui est dès lors a même de déterminer, pour ARN messager (ARNm) donné, quels réactifs et quelles quantités de réactifs doivent être mis(es) en oeuvre (par exemple : tampons, dNTPs, polymérase, ADN polymérase, primers, transcriptase inverse, ...).
A titre d’exemple et à titre non exhaustif, peuvent être mis en oeuvre en tant que réactifs permettant la réalisation d’une transcription inverse et/ou d’une amplification de l’ARN messager (ARNm) pour obtenir des amplicons, une transcriptase inverse ou rétrotranscriptase, une polymérase, une ADN polymérase, des primers, des dNTPs et/ou des tampons (buffers).
A titre exemplatif, pour réaliser l’amplification d’ARN messager (ARNm) pour obtenir des amplicons, peuvent être mis en oeuvre en tant que réactifs, une transcriptase inverse ou rétrotranscriptase et/ou une ADN polymérase. La transcriptase inverse ou rétrotranscriptase est une enzyme utilisée pour réaliser la transcription en sens inverse de la direction standard (transcription inverse ou rétrotranscription) pour obtenir de l'ADN à partir d'ARN. La transcriptase inverse permet donc, au départ d’ARN, d’utiliser des techniques d’amplification telles que l'amplification en chaîne par polymérase (PCR) ou l’amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) se réalisant classiquement grâce à des brins d'ADN. En d’autres termes, à l'aide de la transcriptase inverse, l'ARN peut être transcrit en ADN, rendant l'analyse des ARN réalisable en recourant à des techniques d’amplification classiques d’ADN. Lorsque la transcriptase inverse ou rétrotranscriptase est associée à la technique d’amplification PCR, on parle alors de réaction de polymérase en chaîne par transcriptase inverse (RT-PCR). Lorsque la transcriptase inverse ou rétrotranscriptase est associée à la technique d’amplification LAMP, on parle alors d'amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT- LAMP).
Notons que la transcriptase inverse permet de créer de l'ADN complémentaire (ADNc) à partir d'ARNm. L'ADNc est un simple brin synthétisé à partir d'un ARNm, représentant ainsi la partie codante de la région du génome ayant été transcrit en cet ARNm. L’ADNc est obtenu après une réaction de transcription inverse d'un ARNm et équivaut donc à la copie ADN de l'ARNm. De l'ADNc double brin peut résulter de la copie d’un premier brin par une ADN polymérase. Selon l’invention, ledit ADN complémentaire (ADNc) peut être monobrin ou double brin.
Avantageusement, le dispositif selon l’invention comprend intrinsèquement lesdits réactifs permettant la réalisation de ladite transcription inverse dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible et/ou lesdits réactifs permettant la réalisation de ladite amplification dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible.
De préférence, selon l’invention, lesdits réactifs permettant la réalisation de ladite transcription inverse dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible et/ou lesdits réactifs permettant la réalisation de ladite amplification dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible sont sous forme anhydre ou lyophilisée.
Actuellement, une forme liquide des réactifs permettant la réalisation d’une transcription inverse et/ou d’une amplification est préconisée, en particulier une forme liquide des réactifs permettant la réalisation d’une transcription inverse et/ou d’une amplification introduite au sein du dispositif après introduction dans ce dernier d’un échantillon (les réactifs permettant la réalisation d’une transcription inverse et/ou d’une amplification ne sont donc pas intrinsèquement présents dans le dispositif). Avec les dispositifs actuels, cette forme liquide des réactifs permettant la réalisation d’une transcription inverse et/ou d’une amplification est systématiquement utilisée et préconisée pour en assurer la disponibilité pour qu’une transcription et/ou pour qu’une amplification correcte et fiable puisse être effectuées dès lors que les réactifs permettant la réalisation d’une transcription inverse et/ou d’une amplification doivent pourvoir interagir avec l’ARN messager (ARNm).
Au contraire des dispositifs actuels et avantageusement selon la présente invention, les réactifs permettant la réalisation d’une transcription inverse et/ou la réalisation d’une amplification sont présents dans un dispositif selon l’invention sous une forme non liquide, en particulier sous une forme anhydre ou lyophilisée. Il a été montré, dans le cadre de la présente invention et à l’encontre de ce qui est préconisé et rencontré avec les dispositifs actuels, que cette forme non liquide, en particulier que cette forme anhydre ou lyophilisée, des réactifs permettant la réalisation d’une transcription inverse et/ou la réalisation d’une amplification permettent bien de réaliser une transcription et/ou une amplification correcte et fiable pour mettre en évidence / pour déterminer, chez un individu au départ duquel est simplement prélevé un échantillon, qu’au moins un anticorps cible a été ou est présent chez ledit individu. En d’autres termes, contre toute attente, il a été mis en évidence dans le cadre de la présente invention qu’une forme non liquide des réactifs permettant la réalisation d’une transcription inverse et/ou la réalisation d’une amplification, en particulier qu’une forme anhydre ou lyophilisée des réactifs permettant la réalisation d’une transcription inverse et/ou la réalisation d’une amplification, permet bien de réaliser une transcription inverse et/ou une amplification précise et fiable pour mettre en évidence / pour déterminer, chez un individu au départ duquel est simplement prélevé un échantillon, qu’au moins un anticorps cible a été ou est présent chez ledit individu.
En pratique, lorsque les réactifs permettant la réalisation d’une transcription inverse et/ou la réalisation d’une amplification sont sous forme anhydre ou lyophilisée et sont intrinsèquement présents dans un dispositif selon l’invention, ils sont mis en solution par l’échantillon lui-même suite à son introduction dans le dispositif.
Préférentiellement, selon l’invention, lesdits réactifs permettant la réalisation de ladite transcription inverse dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible et/ou lesdits réactifs permettant la réalisation de ladite amplification dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible sont présents sur un support, par exemple sur un support cellulosique, comportant des charges positives et/ou des groupements chargés positivement et/ou des polymères chargés positivement. Les avantages d’un tel support sont mentionnés plus haut.
Avantageusement, le dispositif selon l’invention comprend en outre un réactif pour lyser ledit échantillon ou une solution pour lyser ledit échantillon. De préférence, selon l’invention, ledit réactif pour lyser ledit échantillon est sous forme anhydre ou lyophilisée. Les avantages d’une telle forme anhydre ou lyophilisée sont identiques à ceux mentionnés plus haut.
Avantageusement, le dispositif selon l’invention se présente sous la forme d’une cartouche ou d’un dispositif microfluidique, par exemple sous forme d’une cellule ou d’une puce microfluidique ou d’un dispositif microfluidique à base de papier.
Avantageusement, selon l’invention, ladite molécule ou ledit composé apte à se lier à un ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible ou apte à se lier à un ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour l’anticorps cible comprend / est un moyen de marquage dudit au moins un d’ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible ou un moyen de marquage dudit ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour l’anticorps cible.
Par les termes « moyen de marquage dudit ARN messager (ARNm) ou dudit ADN complémentaire (ADNc) », il est entendu, au sens de la présente invention, un moyen permettant de marquer / de cibler l’ARN messager (ARNm) ou l’ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) de telle sorte à le distinguer parmi les divers composés / constituants d’un échantillon prélevé au départ d’un individu.
De préférence, selon l’invention, ledit moyen de marquage est sous forme anhydre ou lyophilisée.
Avantageusement, le dispositif selon l’invention comprend intrinsèquement ledit moyen de marquage.
Selon un mode de réalisation suivant l’invention, ledit moyen de marquage est un agent intercalant, en particulier un agent intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices.
Selon l’invention, l’agent intercalant, en particulier l’agent intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices, peut être du bleu de méthylène, du vert de méthylène, du bleu de crésyle brillant, du bleu de toluidine ou encore de l’acétate de thionine. Cette liste est non exhaustive et tout autre agent intercalant adéquat tombe sous le couvert de la présente invention.
Avantageusement, le dispositif selon l’invention comprend intrinsèquement ledit agent intercalant.
Selon un autre mode de réalisation suivant l’invention, ledit moyen de marquage est un agent non intercalant, en particulier un agent non intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices.
Avantageusement, le dispositif selon l’invention comprend intrinsèquement ledit agent non intercalant.
De préférence, selon l’invention, lesdites électrodes sont agencées pour être accessibles électriquement depuis l’extérieur dudit dispositif.
Avantageusement, le dispositif selon l’invention comprend intrinsèquement ledit réactif pour lyser ledit échantillon.
De préférence, selon l’invention, ledit échantillon est un échantillon choisi parmi un échantillon sanguin, un échantillon salivaire, un échantillon urinaire.
Selon un mode de réalisation, le dispositif selon l’invention présente :
• une première partie ou zone comprenant lesdits réactifs permettant la réalisation d’une transcription inverse et/ou la réalisation d’une amplification dudit ARNm comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible, pour obtenir des amplicons ; et
• une deuxième partie ou zone comprenant ladite molécule ou ledit composé apte à se lier à l’ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible ou apte à se lier à l’ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour l’anticorps cible, en particulier une deuxième partie ou zone comprenant un moyen de marquage apte à se lier à l’ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible ou apte à se lier à l’ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour l’anticorps cible, plus particulièrement une deuxième partie ou zone comprenant un agent intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices et apte à s’intercaler entre des molécules desdits amplicons.
Une distinction entre ces deux parties ou zones permet de séquencer les étapes de transcription inverse et/ou d’amplification et de liaison de l’ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible. Ceci permet au dispositif selon l’invention d’être optimal, des amplicons étant d’abord obtenus avant qu’ils n’entrent en contact avec ladite molécule ou ledit composé apte à se lier à un ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour l’anticorps cible.
Avantageusement, le dispositif selon l’invention comprend une vanne située entre ladite première partie ou zone et ladite deuxième partie ou zone. La présence d’une vanne permet de commander le passage de l’échantillon lysé ou non depuis la première partie vers la deuxième partie après une durée déterminée de séjour de l’échantillon dans la première partie de telle sorte que la transcription inverse et/ou l’amplification pour obtenir des amplicons est/sont optimisée(s).
Avantageusement, le dispositif selon l’invention présente une partie ou zone additionnelle comprenant un réactif pour lyser ledit échantillon ou ladite solution pour lyser ledit échantillon, ladite partie ou zone additionnelle étant située en amont de ladite première partie et de ladite deuxième partie dans un sens d’écoulement/de déplacement de l’échantillon.
Selon le type d’échantillon prélevé au départ d’un individu, il peut s’avérer utile de procéder à une lyse de l’échantillon. Afin d’éviter que l’opérateur n’ait a effectué une lyse sur le terrain avec du matériel spécifique et encombrant (pipette, solution de lyse, ...), le dispositif selon l’invention peut avantageusement comprendre une chambre de lyse (partie ou zone additionnelle) dans laquelle l’échantillon est lysé avant de gagner les autres parties ou zones du dispositif.
De préférence, le dispositif selon l’invention comprend une vanne située entre ladite partie ou zone additionnelle et ladite première partie ou zone et/ou ladite deuxième partie ou zone. La présence d’une telle vanne permet de commander le passage depuis la partie ou zone additionnelle où a lieu la lyse de l’échantillon vers la première et/ou la deuxième partie après une durée déterminée de séjour de l’échantillon dans cette partie ou zone additionnelle de telle sorte que la lyse de l’échantillon est optimisée.
Avantageusement, le dispositif selon l’invention se présente sous la forme d’une cartouche au travers de laquelle peut s’écouler une solution ou d’un dispositif microfluidique, par exemple sous forme d’une cellule ou d’une puce microfluidique. Le dispositif selon l’invention peut également se présenter sous forme d’un dispositif microfluidique à base de papier (« paper-based microfluidics ») consistant par exemple en une série de fibres de cellulose ou de nitrocellulose hydrophiles qui guident un liquide d'une entrée à une zone souhaitée par imbibition et/ou par capillarité. Eventuellement, le dispositif microfluidique à base de papier selon l’invention se présente sous la forme d’un origami (« paper-origami based »), c’est-à-dire sous la forme d’un papier microfluidique dont des parties sont prévues pour être pliées l’une sur l’autre ou les unes sur les autres pour être mises en contact. Au sens de la présente invention, le dispositif peut préférentiellement encore se présenter sous la forme d’un « paper-based point-of-care NAATs (Nucleic acid amplification-based tests) ».
A titre d’exemple, notamment si le dispositif selon l’invention se présente sous la forme d’une puce ou d’une cellule microfluidique, les deux parties ou zones peuvent être des chambres distinctes reliées fluidiquement (comme illustré aux figures 7C et 7D) ou peuvent être des emplacements distincts situés dans un même (micro-)canal d’une puce ou d’une cellule microfluidique (comme illustré à la figure 7F).
Selon un mode de réalisation, il est prévu, suivant l’invention, un dispositif pour mettre en évidence la présence d’au moins un anticorps cible chez un individu, au départ d’un échantillon, ledit dispositif comprenant :
- des réactifs permettant la réalisation d’une amplification d’ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible ;
- un élément chauffant agencé pour chauffer ledit échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ARNm ; et
- un moyen de détection dudit ARNm amplifié. Avantageusement, selon l’invention, lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit ARNm, et/ou lesdits réactifs pour lyser ledit échantillon sont sous forme anhydre ou lyophilisée.
De façon préférentielle selon l’invention, lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification et/ou ledit agent intercalant présentant des propriétés oxydo-réductrices et/ou lesdits réactifs pour lyser ledit échantillon et/ou ledit agent intercalant se présentent sous la forme d’un lyophilisât dans le dispositif suivant l’invention.
Préférentiellement, selon l’invention, lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit ARNm, et/ou ledit agent intercalant sont présents sur un support, par exemple sur un support cellulosique, comportant des charges positives et/ou des groupements chargés positivement et/ou des polymères chargés positivement.
Préférentiellement, selon l’invention, ledit élément chauffant électrique comprend une résistance électrique, laquelle est alimentée par une source d’énergie électrique.
La présente invention porte également sur un ensemble comprenant :
• un dispositif selon l’invention ; et
• un appareil ou un appareillage apte à être relié électriquement aux électrodes pour effectuer des mesures électrochimiques, de préférence des mesures électrochimiques voltampérométriques, plus préférentiellement des mesures électrochimiques voltampérométriques cycliques ou à ondes carrées.
Typiquement, pour réaliser des mesures électrochimiques, de préférence des mesures électrochimiques voltampérométriques, plus préférentiellement des mesures électrochimiques voltampérométriques cycliques ou à ondes carrées, l’appareillage comprend un potentiostat pour appliquer une différence de potentiel entre les électrodes et/ou une unité de traitement de signaux émis par le potentiostat ou reçus par le potentiostat.
La présente invention porte encore sur un procédé pour déterminer / pour mettre en évidence, au départ d’un échantillon préalablement prélevé chez un individu, qu’au moins un anticorps cible a été ou est présent chez ledit individu, ledit procédé comprenant :
• une première étape de mise en contact de l’échantillon avec une molécule ou avec un composé, en particulier avec une molécule ou avec un composé présentant des propriétés oxydo-réductrices, pour assurer une liaison entre ladite molécule ou ledit composé et un ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible ou pour assurer une liaison entre ladite molécule ou ledit composé et un ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible; et
• une deuxième de mise en contact dudit échantillon avec des électrodes reliées électriquement à un appareil ou à un appareillage pour réaliser au moins une mesure électrochimique, simultanée ou différée dans le temps par rapport à ladite première étape, pour déterminer si une liaison est / a été établie entre ledit ARN messager (ARNm) et ladite molécule ou ledit composé ou pour déterminer si une liaison est / a été établie entre ledit ADN complémentaire (ADNc) et ladite molécule ou ledit composé et en déduire qu’au moins un anticorps cible a été ou est présent chez ledit individu.
Selon un mode de réalisation du procédé suivant l’invention, la première étape de mise en contact est une étape de liaison directe de ladite molécule ou dudit composé, en particulier de ladite molécule ou dudit composé présentant des propriétés oxydo-réductrices, à un ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible.
Par les termes « liaison directe », il est entendu, au sens de la présente invention, que la liaison s’établit entre ladite molécule ou ledit composé et ledit ARM messager (ARNm) sans que ce dernier ne subisse de modification, en particulier sans que ce dernier ne subisse une transcription inverse et/ou une amplification.
Selon un autre mode de réalisation du procédé suivant l’invention, la première étape de mise en contact est une étape de liaison ladite molécule ou dudit composé, en particulier de ladite molécule ou dudit composé présentant des propriétés oxydo-réductrices, à de l’ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible, ledit ARN messager (ARNm) étant soumis / ayant été soumis à une transcription inverse et/ou à une amplification.
En effet, selon l’invention, pour un ARN messager (ARNm) donné comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible, ladite molécule ou ledit composé, en particulier ladite molécule ou ledit composé présentant des propriétés oxydo-réductrices, peut soit se lier directement à l’ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible, soit se lier à un ADN complémentaire (ADNc) monobrin ou double brin obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible. En d’autres termes, selon un mode de réalisation suivant l’invention, ladite molécule ou ledit composé peut se lier directement à l’ARN messager (ARNm) sans que ce dernier ne soit soumis à une transcription inverse et/ou à une amplification. Par exemple, ladite molécule ou ledit composé pouvant se lier directement à l’ARN messager (ARNm), en particulier ladite molécule ou ledit composé pouvant se lier directement à l’ARN messager (ARNm) présentant des propriétés oxydo-réductrices, peut être une molécule non intercalante ou un composé non intercalant (agent non intercalant) choisi dans le groupe constitué de Os(bpy)32+ ; Ru(NH3)63+ ; FcCH2N+Me3 ; FCB(OH)2 et leurs mélanges. Cette liste est non exhaustive.
Avantageusement, le procédé selon l’invention comprend en outre :
• une troisième étape de mise en contact dudit échantillon, simultanée ou différée dans le temps par rapport à ladite première étape et/ou par rapport à ladite deuxième étape, avec des réactifs permettant la réalisation d’une transcription inverse dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible et/ou avec des réactifs permettant la réalisation d’une amplification pour obtenir des amplicons dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible, et
• un chauffage dudit échantillon, à l’aide d’un élément de chauffage, pour chauffer ledit échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation d’une transcription inverse dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible et/ou avec lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible.
Lorsque ladite molécule et ledit composé et/ou lorsque lesdits réactifs permettant la réalisation d’une transcription inverse dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible et/ou lorsque lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification pour obtenir des amplicons dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible, sont intrinsèquement présents dans un dispositif selon l’invention sous forme anhydre ou lyophilisée, l’échantillon par passage dans/au travers du dispositif, met en solution ladite molécule ou ledit composé et/ou lesdits réactifs.
De préférence, le procédé selon l’invention comprend une étape préalable d’introduction dudit échantillon dans un dispositif selon l’invention ou dans un dispositif d’un ensemble selon l’invention, ledit dispositif comprenant préférentiellement intrinsèquement ladite molécule ou ledit composé, en particulier ladite molécule ou ledit composé présentant des propriétés oxydo- réductrices.
Préférentiellement, selon l’invention, ladite amplification dudit au moins un d’ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible est une amplification réalisée selon la technique la technique de réaction de polymérase en chaîne par transcriptase inverse (RT- PCR) ou par la technique d'amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse (RT-LAMP) ou selon toute autre technique d’amplification adéquate.
Selon un mode de réalisation, le procédé selon l’invention comprend :
- une étape d’introduction dudit échantillon dans un dispositif selon l’invention ou dans un dispositif d’un ensemble selon l’invention ;
- une première étape de mise en contact, au sein dudit dispositif, dudit échantillon avec des réactifs intrinsèquement présents dans ledit dispositif pour réaliser une amplification dudit au moins un ARN messager (ARNm) pour obtenir des amplicons dudit au moins un ARN messager (ARNm) ;
- une deuxième étape de mise en contact, au sein dudit dispositif, pendant ou après ladite première mise en contact, dudit échantillon avec un agent intercalant intrinsèquement présent dans ledit dispositif, en particulier avec un agent intercalant intrinsèquement présent dans ledit dispositif et présentant des propriétés oxydo-réductrices, pour réaliser une intercalation dudit agent intercalant entre des molécules desdits amplicons, en particulier une intercalation dudit agent intercalant dans un espace compris entre deux paires de bases desdits amplicons ;
- une troisième étape de mise en contact, au sein dudit dispositif, pendant ou après ladite première mise en contact et/ou pendant ou après ladite deuxième mise en contact, dudit échantillon avec des électrodes reliées électriquement à un appareil ou à un appareillage pour réaliser au moins une mesure électrochimique, afin de déterminer / de mettre en évidence au départ d’un échantillon préalablement prélevé chez un individu, qu’au moins un anticorps cible a été ou est présent chez ledit individu.
De préférence, selon un mode de réalisation, le procédé selon l’invention comprend un chauffage dudit échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit au moins un ARN messager (ARNm) pour obtenir des amplicons dudit au moins un ARN messager (ARNm).
Avantageusement, selon un mode de réalisation du procédé suivant l’invention, ladite première étape de mise en contact et/ou ladite deuxième étape de mise en contact consiste en une mise en solution par ledit échantillon desdits réactifs intrinsèquement présents dans ledit dispositif pour réaliser une amplification dudit au moins ARN messager (ARNm) et/ou en une mise en solution dudit agent intercalant intrinsèquement présent dans ledit dispositif, en particulier une mise en solution dudit agent intercalant intrinsèquement présent dans ledit dispositif et présentant des propriétés oxydo- réductrices, pour réaliser une intercalation dudit agent intercalant entre des molécules desdits amplicons. Préférentiellement, le procédé selon l’invention comprend une étape de lyse dudit échantillon, de préférence une étape de lyse dudit échantillon réalisée en amont de ladite première et/ou de ladite deuxième étape de mise en contact.
Selon un mode de réalisation, le procédé pour déterminer/ pour mettre en évidence la présence d’au moins un anticorps cible chez un individu, au départ d’un échantillon, comprend les étapes suivantes : a) une mise en contact et un chauffage dudit échantillon avec des réactifs permettant la réalisation d’une amplification d’ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible, pour obtenir des amplicons ; et b) une détection desdits amplicons dudit ARNm amplifié, à l’aide d’un moyen de détection.
De préférence, selon le procédé suivant l’invention, ladite amplification est une amplification réalisée selon la technique d'amplification en chaîne par polymérase (PCR) ou la technique d’amplification isothermique à médiation par boucles (LAMP) ou selon toute technique d’amplification adéquate.
Avantageusement, le procédé suivant l’invention comprend une étape simultanée à l’étape a) ou différée dans le temps par rapport à l’étape a) de marquage desdits amplicons. Un marquage des amplicons peut permettre une détection électrochimique.
La présente invention porte également sur une utilisation d’un dispositif selon l’invention ou d’un ensemble selon l’invention pour déterminer / pour mettre en évidence, au départ d’un échantillon préalablement prélevé chez un individu, qu’au moins un anticorps cible a été ou est présent chez ledit individu.
D’autres caractéristiques, détails et avantages de l’invention ressortiront des exemples donnés ci-après, à titre non limitatif et en faisant référence aux figures annexées. Généralement, sur les figures, les éléments similaires portent la même référence.
La figure 1 illustre un premier exemple d’un mode de réalisation d’un dispositif selon l’invention.
La figure 2 illustre un second exemple d’un mode de réalisation d’un dispositif selon l’invention. La figure 3 illustre un troisième exemple d’un mode de réalisation d’un dispositif selon l’invention.
La figure 4 illustre un quatrième exemple d’un mode de réalisation d’un dispositif selon l’invention.
Les figures 5A, 5B et 5C sont des vues éclatées d’exemples de modes de réalisation de dispositifs selon l’invention et illustrent les composants de différents modes de réalisation d’un dispositif selon l’invention.
Les figures 6A, 6B, 6C, 6D et 6E sont des vues éclatées d’exemples de modes de réalisation de dispositifs selon l’invention et illustrent également les composants de différents modes de réalisation d’un dispositif selon l’invention.
Les figures 7A, 7B, 7C, 7D, 7E et 7F illustrent encore des exemples de modes de réalisation de dispositifs selon l’invention.
Exemples
La figure 1 illustre un premier mode de réalisation d’un dispositif selon l’invention qui, comme illustré comprend une première partie ou zone 1 , une deuxième partie ou zone 2, des électrodes 3 et un élément chauffant électrique 4. Optionnellement, comme illustré par les pointillés, ce mode de réalisation d’un dispositif selon l’invention peut comprendre une partie ou zone additionnelle 5 comprenant des réactifs pour lyser l’échantillon ou une solution pour lyser un échantillon prélevé au départ d’un individu. La figure 1 illustre un exemple d’un dispositif selon l’invention qui pourrait se présenter sous la forme d’une cartouche ou d’un dispositif microfluidique, par exemple sous la forme d’un dispositif microfluidique à base de papier (« paper-based microfluidics » ou « paper-origami based » ou « paper-based point-of-care NAATs »).
La première partie ou zone 1 comprend des réactifs permettant la réalisation d’une transcription inverse et d’une amplification dudit ARNm comprenant une région codant pour l’anticorps cible, pour obtenir des amplicons d’ARNm potentiellement contenu dans l’échantillon (par exemple la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse). La deuxième partie ou zone 2 comprend une molécule ou un composé apte à se lier aux amplicons, par exemple un agent intercalant, présentant des propriétés oxydo-réductrices et étant apte à s’intercaler entre des molécules des amplicons, en particulier étant apte à s’intercaler dans l’espace compris entre deux paires de bases des amplicons.
Avec un tel dispositif selon l’invention, l’échantillon prélevé au départ d’un individu est de préférence lysé, c’est-à-dire mis en solution dans une solution de lyse, avant d’être introduit dans le dispositif comme indiqué par la flèche. Lorsque, par exemple sous l’effet de la gravité, l’échantillon lysé gagne la première partie ou zone 1 , il entre en contact avec les réactifs permettant la réalisation d’une transcription inverse et d’une amplification dudit ARNm comprenant une région codant pour l’anticorps cible, pour obtenir des amplicons (par exemple la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), dans la première partie ou zone 1 sous l’effet d’un chauffage à une température prédéterminée par l’élément chauffant électrique 4. Des amplicons d’ARNm comprenant une région codant pour l’anticorps cible sont ainsi obtenus à condition que cet ARNm soit présent dans l’échantillon prélevé au départ de l’individu. Les amplicons obtenus gagnent alors, par exemple sous l’effet de la gravité, la deuxième partie ou zone 2 comprenant une molécule ou un composé apte à se lier aux amplicons, par exemple un agent intercalant, lequel s’intercale entre les molécules des amplicons, en particulier entre deux paires de bases des amplicons.
Selon le mode de réalisation illustré, les électrodes 3 (électrode de travail, contre-électrode ou électrode auxiliaire et électrode de référence) sont en contact avec l’échantillon après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de la transcription inverse et de l’amplification dudit ARNm, pour obtenir des amplicons (par exemple la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), et avec une molécule ou un composé apte à se lier aux amplicons, par exemple avec un agent intercalant. Les électrodes 3 sont également accessibles électriquement depuis l’extérieur du dispositif selon l’invention de telle sorte qu’elles peuvent être reliées électriquement à un appareillage (non illustré) permettant de réaliser des mesures électrochimiques (de préférence des mesures électrochimiques voltampérométriques, plus préférentiellement des mesures électrochimiques voltampérométriques cycliques ou à ondes carrées) utilisant par exemple un indicateur redox (en particulier un agent intercalant), le principe et la mise en œuvre d’une telle mesure étant bien connus de l’homme de métier.
Lorsque le mode de réalisation illustré à la figure 1 comprend également une partie ou zone additionnelle 5 comprenant une solution ou des réactifs pour lyser un échantillon prélevé au départ d’un individu, l’échantillon peut être directement introduit dans le dispositif au niveau de la partie ou zone additionnelle 5 dans laquelle l’échantillon est lysé avant de gagner, par exemple sous l’effet de la gravité, la première partie ou zone 1 puis la deuxième partie ou zone 2.
Un autre mode de réalisation selon l’invention correspond à celui illustré à la figure 1 mais sans première partie ou zone 1 (c’est-à-dire sans réactifs permettant la réalisation d’une transcription inverse et d’une amplification dudit ARNm comprenant une région codant pour l’anticorps cible) et sans élément chauffant électrique 4. Selon ce mode de réalisation, dans la deuxième partie ou zone 2, l’ARNm est directement lié à une molécule ou à un composé, par exemple à une molécule non intercalante ou à un composé non intercalant (agent non intercalant), apte à se lier à l’ARNm comprenant une région codant pour l’anticorps cible sans transcription inverse et sans amplification de cet ARNm.
La figure 2 illustre un second mode de réalisation d’un dispositif selon l’invention. La figure 2 illustre un exemple d’un dispositif selon l’invention qui pourrait se présenter sous la forme d’une cartouche ou d’un dispositif microfluidique, par exemple sous la forme d’un dispositif microfluidique à base de papier (« paper-based microfluidics » ou « paper-origami based » ou « paper- based point-of-care NAATs »). Les mêmes éléments que ceux illustrés à la figure 1 sont repris. Toutefois, selon le mode de réalisation tel qu’illustré à la figure 2, la première partie ou zone 1 et la deuxième partie ou zone 2 sont situées à un même niveau, c’est-à-dire dans une même zone ou un même compartiment. Par exemple, une molécule ou un composé apte à se lier aux amplicons, par exemple un agent intercalant, situé dans la deuxième partie ou zone 2 peut revêtir les parois latérales d’une zone ou d’un compartiment du dispositif en entourant ainsi la première partie ou zone 1 comprenant les réactifs permettant la réalisation de la transcription inverse et de l’amplification dudit ARNm, pour obtenir des amplicons de l’ARNm potentiellement contenu dans l’échantillon (par exemple la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse). Il n’est pas exclu, selon l’invention, que les réactifs permettant la réalisation de la transcription inverse et de l’amplification dudit ARNm et que ladite molécule ou ledit composé apte à se lier aux amplicons, par exemple un agent intercalant, soient présents en mélange dans une même zone ou dans un même compartiment, lequel comprendrait alors ladite première et ladite deuxième partie ou zone.
La figure 3 illustre un troisième mode de réalisation d’un dispositif selon l’invention. La figure 3 illustre un exemple d’un dispositif selon l’invention qui pourrait se présenter sous la forme d’une cartouche ou d’un dispositif microfluidique, par exemple sous la forme d’un dispositif microfluidique à base de papier (« paper-based microfluidics » ou « paper-origami based » ou « paper- based point-of-care NAATs »). A la différence du mode de réalisation illustré à la figure 1 , celui illustré à la figure 3 comprend une partie ou zone 7 supplémentaire située en amont et en contact avec les électrodes 3 dans un sens d’écoulement de l’échantillon.
Un autre mode de réalisation selon l’invention correspond à celui illustré à la figure 3 mais sans première partie ou zone 1 (c’est-à-dire sans réactifs permettant la réalisation d’une transcription inverse et d’une amplification dudit ARNm comprenant une région codant pour l’anticorps cible) et sans élément chauffant électrique 4. Selon ce mode de réalisation, dans la deuxième partie ou zone 2, l’ARNm est directement lié à une molécule ou à un composé, par exemple à une molécule non intercalante ou à un composé non intercalant (agent non intercalant), apte à se lier à l’ARNm comprenant une région codant pour l’anticorps cible sans transcription inverse et amplification de cet ARNm.
Le mode de réalisation illustré à la figure 4 est identique à celui de la figure 3 hormis le fait que le chauffage assuré par l’élément chauffant électrique 4 s’effectue au niveau de la partie ou zone 7 supplémentaire située en amont et en contact avec les électrodes 3 dans un sens d’écoulement de l’échantillon plutôt qu’au niveau de la première partie ou zone 1 . La figure 4 illustre un exemple d’un dispositif selon l’invention qui pourrait se présenter sous la forme d’une cartouche ou d’un dispositif microfluidique, par exemple sous la forme d’un dispositif microfluidique à base de papier (« paper-based microfluidics » ou « paper-origami based » ou « paper-based point-of-care NAATs »).
Les figures 5A, 5B et 5C illustrent les composants de différents modes de réalisation d’un dispositif selon l’invention. Plus particulièrement, les figures 5A, 5B et 5C illustrent les composants d’un dispositif A selon l’invention qui se présente sous la forme d’un cylindre constituant par exemple une cartouche. A la figure 5A, le dispositif A selon l’invention comprend une première partie constituée par exemple d’un disque perméable 1+2, par exemple d’un disque perméable en matière cellulosique, comprenant à la fois les réactifs permettant la réalisation de la transcription inverse et de l’amplification dudit ARNm, pour obtenir des amplicons de l’ARNm (par exemple la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), et une molécule ou un composé apte à se lier aux amplicons, par exemple un agent intercalant. Un élément chauffant électrique (non illustré) assure un chauffage du disque perméable 1 +2 à une température prédéterminée pour assurer l’amplification dudit ARNm pour obtenir des amplicons de l’ARNm (par exemple la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse). Selon le mode de réalisation de la figure 5A, des électrodes 3 au nombre de trois sont en contact avec l’échantillon pendant que ce dernier est en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de la transcription inverse et de l’amplification dudit ARNm, pour obtenir des amplicons de l’ARNm (par exemple la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), et avec une molécule ou un composé apte à se lier aux amplicons, par exemple avec un agent intercalant. En outre, les électrodes 3 sont également accessibles électriquement depuis l’extérieur du dispositif selon l’invention de telle sorte qu’elles peuvent être reliées électriquement à un appareillage (non illustré) permettant de réaliser des mesures électrochimiques (de préférence des mesures électrochimiques voltampérométriques, plus préférentiellement des mesures électrochimiques voltampérométriques cycliques ou à ondes carrées) utilisant par exemple un indicateur redox (en particulier un agent intercalant), le principe et la mise en oeuvre d’une telle mesure étant bien connus de l’homme de métier. Comme illustré à la figure 5A, les électrodes 3 du dispositif A selon l’invention peuvent être reliées électriquement à un appareillage (non illustré) par l’intermédiaire d’une base B ou d’un socle muni de connecteurs. Par exemple, le dispositif A selon l’invention peut être visé ou clipsé sur le socle ou la base B pour assurer un contact adéquat entre les connecteurs et les électrodes 3.
La figure 5B est identique à la figure 5A mais le dispositif A illustré comprend en plus une partie ou zone additionnelle 5 comprenant des réactifs ou une solution pour lyser un échantillon prélevé au départ d’un individu. De la sorte, l’échantillon peut être directement introduit dans le dispositif au niveau de la partie ou zone additionnelle 5 dans laquelle l’échantillon est lysé avant de gagner, par exemple sous l’effet de la gravité, la partie constituée par exemple d’un disque perméable 1 +2 comprenant à la fois les réactifs permettant la réalisation de la transcription inverse et de l’amplification dudit ARNm, pour obtenir des amplicons de l’ARNm (par exemple la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), et une molécule ou un composé apte à se lier aux amplicons, par exemple un agent intercalant.
La figure 5C est identique à la figure 5B mais le dispositif A illustré comprend en plus une vanne 6, par exemple une vanne à tiroir rotative, permettant de commander le passage de l’échantillon depuis la partie ou zone additionnelle 5 où il est lysé vers la partie constituée par exemple d’un disque perméable 1 +2 comprenant à la fois les réactifs permettant la réalisation de la transcription inverse et de l’amplification dudit ARNm, pour obtenir des amplicons de l’ARNm (par exemple la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), et une molécule ou un composé apte à se lier aux amplicons, par exemple un agent intercalant.
D’autres modes de réalisation selon l’invention correspondent à ceux illustrés aux figures 5A, 5B et 5C mais sans présence de réactifs permettant la réalisation d’une transcription inverse et d’une amplification dudit ARNm comprenant une région codant pour l’anticorps cible et sans élément chauffant électrique 4. Selon ces modes de réalisation, l’ARNm est directement lié à une molécule ou à un composé, par exemple à une molécule non intercalante ou à un composé non intercalant (agent non intercalant), apte à se lier à l’ARNm comprenant une région codant pour l’anticorps cible sans transcription inverse et amplification de cet ARNm. Les figures 6A, 6B, 6C, 6D et 6E illustrent également les composants de différents modes de réalisation d’un dispositif selon l’invention. Plus particulièrement, les figures 6A, 6B, 6C, 6D et 6E illustrent les composants d’un dispositif A selon l’invention qui se présente sous la forme d’un cylindre constituant par exemple une cartouche. A la figure 6A, le dispositif A selon l’invention comprend :
- une première partie 1 constituée par exemple d’un disque perméable, par exemple d’un disque perméable en matière cellulosique, comprenant les réactifs permettant la réalisation de la transcription inverse et de l’amplification dudit ARNm, pour obtenir des amplicons de l’ARNm (par exemple la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse) ; et
- une deuxième partie 2 constituée par exemple d’un disque perméable, par exemple d’un disque perméable en matière cellulosique, comprenant une molécule ou un composé apte à se lier aux amplicons, par exemple un agent intercalant.
Un élément chauffant électrique (non illustré) assure un chauffage d’au moins le disque perméable 1 à une température prédéterminée pour assurer l’amplification dudit ARNm, pour obtenir des amplicons de l’ARNm (par exemple la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse). Selon le mode de réalisation de la figure 6A, des électrodes 3 au nombre de trois sont en contact avec l’échantillon après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de la transcription inverse et de l’amplification dudit ARNm, pour obtenir des amplicons de l’ARNm (par exemple la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), et avec une molécule ou un composé apte à se lier aux amplicons, par exemple un agent intercalant. En outre, les électrodes 3 sont également accessibles électriquement depuis l’extérieur du dispositif selon l’invention de telle sorte qu’elles peuvent être reliées électriquement à un appareillage (non illustré) permettant de réaliser des mesures électrochimiques (de préférence des mesures électrochimiques voltampérométriques, plus préférentiellement des mesures électrochimiques voltampérométriques cycliques ou à ondes carrées) utilisant par exemple un indicateur redox (en particulier un agent intercalant), le principe et la mise en oeuvre d’une telle mesure étant bien connus de l’homme de métier. Comme illustré à la figure 6A, les électrodes 3 du dispositif A selon l’invention peuvent être reliées électriquement à un appareillage (non illustré) par l’intermédiaire d’une base B ou d’un socle muni de connecteurs. Par exemple, le dispositif A selon l’invention peut être visé ou clipsé sur le socle ou la base B pour assurer un contact adéquat entre les connecteurs et les électrodes 3.
La figure 6B est identique à la figure 6A mais une vanne 6, par exemple une vanne à tiroir rotative, sépare la première partie 1 de la deuxième partie 2 et permet de commander le passage de l’échantillon depuis la première partie 1 comprenant les réactifs permettant la réalisation de la transcription inverse et de l’amplification dudit ARNm, pour obtenir des amplicons de l’ARNm (par exemple la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), vers la deuxième partie 2 comprenant une molécule ou un composé apte à se lier aux amplicons, par exemple un agent intercalant.
La figure 6C est identique à la figure 6A mais le dispositif A illustré comprend en plus une partie ou zone additionnelle 5 comprenant des réactifs ou une solution pour lyser un échantillon prélevé au départ d’un individu. De la sorte, l’échantillon peut être directement introduit dans le dispositif au niveau de la partie ou zone additionnelle 5 dans laquelle l’échantillon est lysé avant de gagner, par exemple sous l’effet de la gravité, la première partie 1 constituée par exemple d’un disque perméable comprenant les réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ARNm, pour obtenir des amplicons de l’ARNm (par exemple la réalisation d’une transcription inverse et d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), puis vers la deuxième partie 2 comprenant une molécule ou un composé apte à se lier aux amplicons, par exemple un agent intercalant.
La figure 6D est identique à la figure 6C mais le dispositif A illustré comprend en plus une vanne 6’, par exemple une vanne à tiroir rotative, permettant de commander le passage de l’échantillon depuis la partie ou zone additionnelle 5 où il est lysé vers la première partie 1 constituée par exemple d’un disque perméable comprenant les réactifs permettant la réalisation de la transcription inverse et de l’amplification dudit ARNm, pour obtenir des amplicons de l’ARNm (par exemple la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse) puis vers la deuxième partie 2 comprenant une molécule ou un composé apte à se lier aux amplicons, par exemple un agent intercalant.
La figure 6E est identique à la figure 6D mais le dispositif A illustré comprend en plus une vanne 6, par exemple une vanne à tiroir rotative, permettant de commander le passage de l'échantillon depuis la première partie 1 constituée par exemple d’un disque perméable comprenant les réactifs permettant la réalisation de la transcription inverse et de l'amplification dudit ARNm, pour obtenir des amplicons de l’ARNm (par exemple la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse), vers la deuxième partie 2 comprenant une molécule ou un composé apte à se lier aux amplicons, par exemple un agent intercalant.
D’autres modes de réalisation selon l’invention correspondent à ceux illustrés aux figures 6A, 6B, 6C, 6D et 6E mais sans présence de réactifs permettant la réalisation d’une transcription inverse et d’une amplification dudit ARNm comprenant une région codant pour l’anticorps cible et sans élément chauffant électrique 4. Selon ces modes de réalisation, l’ARNm est directement lié à une molécule ou à un composé, par exemple à une molécule non intercalante ou à un composé non intercalant (agent non intercalant), apte à se lier à l’ARNm comprenant une région codant pour l’anticorps cible sans transcription inverse et sans amplification de cet ARNm.
Les figures 7A, 7B, 7C, 7D, 7E et 7F illustrent des exemples de modes de réalisation de dispositifs selon l’invention sous forme de dispositifs microfluidiques (cellules ou puces microfluidiques) présentant une entrée E via laquelle un échantillon peut être introduit. Des éléments identiques à ceux illustrés aux figures précédentes sont repris.
En particulier, la figure 7E illustre un dispositif selon l’invention tel qu’illustré aux figures 7A à 7D à la différence près que les électrodes sont en contact direct avec une zone comprenant à la fois les réactifs permettant la réalisation de la transcription inverse et de l’amplification dudit ARNm pour obtenir des amplicons de l’ARNm (par exemple la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse) et une molécule ou un composé apte à se lier aux amplicons, par exemple un agent un agent intercalant. Selon le mode de réalisation d’un dispositif suivant l’invention illustré à la figure 7F, le (micro-)canal C d’une cellule ou puce microfluidique constitue une première zone ou partie du dispositif, cette première zone ou partie comprenant une première sous-zone (délimitée par les pointillés) où se trouvent les réactifs permettant la réalisation de la transcription inverse et de l’amplification dudit ARNm pour obtenir des amplicons de l’ARNm (par exemple la réalisation d’une amplification isotherme médiée par boucle de transcription inverse) et une deuxième sous-zone (délimitée par les autres pointillés) où se trouve une molécule ou un composé apte à se lier aux amplicons, par exemple un agent intercalant, chacune de ces deux sous-zones étant situées dans ladite première zone ou partie du dispositif constituée par ledit (micro-)canal d’un dispositif microfluidique et étant donc en communication fluidique.
D’autres modes de réalisation selon l’invention correspondent à ceux illustrés aux figures 7A, 7B, 7C, 7D, 7E et 7F mais sans présence de réactifs permettant la réalisation d’une transcription inverse et d’une amplification dudit ARNm comprenant une région codant pour l’anticorps cible et sans élément chauffant électrique 4. Selon ces modes de réalisation, l’ARNm est directement lié à une molécule ou à un composé, par exemple à une molécule non intercalante ou à un composé non intercalant (agent non intercalant), apte à se lier à l’ARNm comprenant une région codant pour l’anticorps cible sans transcription inverse et sans amplification de cet ARNm.
La présente invention a été décrite en relation avec des modes de réalisations spécifiques, qui ont une valeur purement illustrative et ne doivent pas être considérés comme limitatifs. D’une manière générale, il apparaîtra évident pour l’homme du métier que la présente invention n’est pas limitée aux exemples illustrés et/ou décrits ci-dessus.
L’usage des verbes « comprendre », « inclure », « comporter », ou toute autre variante, ainsi que leurs conjugaisons, ne peut en aucune façon exclure la présence d’éléments autres que ceux mentionnés.
L’usage de l’article indéfini « un », « une », ou de l’article défini « le », « la » ou « », pour introduire un élément n’exclut pas la présence d’une pluralité de ces éléments.

Claims

Revendications
1. Dispositif pour déterminer, au départ d’un échantillon préalablement prélevé chez un individu, qu’au moins un anticorps cible a été ou est présent chez ledit individu, ledit dispositif comprenant :
• une molécule ou un composé, en particulier une molécule ou un composé présentant des propriétés oxydo-réductrices, apte à se lier à un ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible ou apte à se lier à un ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible ; et
• des électrodes agencées pour être en contact avec ledit échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec ladite molécule ou avec ledit composé apte à se lier à l’ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible ou apte à se lier à l’ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible.
2. Dispositif selon la revendication 1 , caractérisé en ce qu’il comprend intrinsèquement ladite molécule ou ledit composé apte à se lier à l’ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible ou apte à se lier à l’ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible.
3. Dispositif selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que ladite molécule ou ledit composé apte à se lier à l’ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible ou apte à se lier à l’ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit
ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible est sous forme anhydre ou lyophilisée.
4. Dispositif selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que ladite molécule ou ledit composé apte à se lier à l’ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible ou apte à se lier à l’ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible est présent(e) sur un support, par exemple sur un support cellulosique, comportant des charges positives et/ou des groupements chargés positivement et/ou des polymères chargés positivement.
5. Dispositif selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu’il comprend en outre :
• des réactifs permettant la réalisation d’une transcription inverse dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible et/ou des réactifs permettant la réalisation d’une amplification pour obtenir des amplicons dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible, et, éventuellement,
• un élément chauffant, par exemple un élément chauffant comprenant une résistance électrique, agencé pour chauffer ledit échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation de la transcription inverse dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible et/ou avec lesdits réactifs permettant la réalisation de l’amplification dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible.
6. Dispositif selon la revendication 5, caractérisé en ce qu’il comprend intrinsèquement lesdits réactifs permettant la réalisation de ladite transcription inverse dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible et/ou lesdits réactifs permettant la réalisation de ladite amplification dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible.
7. Dispositif selon la revendication 5 ou 6, caractérisé en ce que lesdits réactifs permettant la réalisation de ladite transcription inverse dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible et/ou lesdits réactifs permettant la réalisation de ladite amplification dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible sont sous forme anhydre ou lyophilisée.
8. Dispositif selon l’une quelconque des revendications 5 à 7, caractérisé en ce que lesdits réactifs permettant la réalisation de ladite transcription inverse dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible et/ou lesdits réactifs permettant la réalisation de ladite amplification dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible sont présents sur un support, par exemple sur un support cellulosique, comportant des charges positives et/ou des groupements chargés positivement et/ou des polymères chargés positivement.
9. Dispositif selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu’il comprend en outre un réactif pour lyser ledit échantillon ou une solution pour lyser ledit échantillon.
10. Dispositif selon la revendication 9, caractérisé en ce que ledit réactif pour lyser ledit échantillon est sous forme anhydre ou lyophilisée.
11 . Dispositif selon l’une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu’il se présente sous la forme d’une cartouche ou d’un dispositif microfluidique, par exemple sous forme d’une cellule ou d’une puce microfluidique ou d’un dispositif microfluidique à base de papier.
12. Ensemble comprenant :
• un dispositif selon l’une quelconque des revendications 1 à 11 ; et
• un appareil ou un appareillage apte à être relié électriquement aux électrodes pour effectuer des mesures électrochimiques, de préférence des mesures électrochimiques voltampérométriques, plus préférentiellement des mesures électrochimiques voltampérométriques cycliques ou à ondes carrées.
13. Procédé pour déterminer, au départ d’un échantillon préalablement prélevé chez un individu, qu’au moins un anticorps cible a été ou est présent chez ledit individu, ledit procédé comprenant :
• une première étape de mise en contact de l’échantillon avec une molécule ou avec un composé, en particulier avec une molécule ou avec un composé présentant des propriétés oxydo-réductrices, pour assurer une liaison entre ladite molécule ou ledit composé et un ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible ou pour assurer une liaison entre ladite molécule ou ledit composé et un ADN complémentaire (ADNc) obtenu au départ dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible; et
• une deuxième de mise en contact dudit échantillon avec des électrodes reliées électriquement à un appareil ou à un appareillage pour réaliser au moins une mesure électrochimique, simultanée ou différée dans le temps par rapport à ladite première étape, pour déterminer si une liaison est / a été établie entre ledit ARN messager (ARNm) et ladite molécule ou ledit composé ou pour déterminer si une liaison est / a été établie entre ledit ADN complémentaire (ADNc) et ladite molécule ou ledit composé et en déduire qu’au moins un anticorps cible a été ou est présent chez ledit individu.
14. Procédé selon la revendication 13, caractérisé en ce qu’il comprend en outre :
• une troisième étape de mise en contact dudit échantillon, simultanée ou différée dans le temps par rapport à ladite première étape et/ou par rapport à ladite deuxième étape, avec des réactifs permettant la réalisation d’une transcription inverse dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible et/ou avec des réactifs permettant la réalisation d’une amplification pour obtenir des amplicons dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible, et
• un chauffage dudit échantillon, à l’aide d’un élément de chauffage, pour chauffer ledit échantillon pendant que ce dernier est en contact ou après que ce dernier ait été en contact avec lesdits réactifs permettant la réalisation d’une transcription inverse dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible et/ou avec lesdits réactifs permettant la réalisation d’une amplification dudit ARN messager (ARNm) comprenant une région codant pour ledit au moins un anticorps cible.
15. Procédé selon la revendication 13 ou 14, caractérisé en ce qu’il comprend une étape préalable d’introduction dudit échantillon, dans un dispositif selon l’une quelconque des revendications 1 à 11 ou dans un dispositif d’un ensemble selon la revendication 12, ledit dispositif comprenant préférentiellement intrinsèquement ladite molécule ou ledit composé, en particulier ladite molécule ou ledit composé présentant des propriétés oxydo-réductrices.
16. Utilisation d’un dispositif selon l’une quelconque des revendications 1 à 11 ou d’un ensemble selon la revendication 12 pour déterminer, au départ d’un échantillon préalablement prélevé chez un individu, qu’au moins un anticorps cible a été ou est présent chez ledit individu.
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