EP2760442A1 - Compositions contenant de la spermine avec cadaverine, putrescine et/ou spermidine. - Google Patents

Compositions contenant de la spermine avec cadaverine, putrescine et/ou spermidine.

Info

Publication number
EP2760442A1
EP2760442A1 EP12773094.3A EP12773094A EP2760442A1 EP 2760442 A1 EP2760442 A1 EP 2760442A1 EP 12773094 A EP12773094 A EP 12773094A EP 2760442 A1 EP2760442 A1 EP 2760442A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
composition
food
spermine
polyamines
spermidine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP12773094.3A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Jacques-Philippe Moulinoux
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
NUTRIALYS MEDICAL NUTRITION SA
Universite de Rennes 1
Original Assignee
Nutrialys Medical Nutrition SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nutrialys Medical Nutrition SA filed Critical Nutrialys Medical Nutrition SA
Publication of EP2760442A1 publication Critical patent/EP2760442A1/fr
Withdrawn legal-status Critical Current

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Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/132—Amines having two or more amino groups, e.g. spermidine, putrescine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/28—Compounds containing heavy metals
    • A61K31/32—Tin compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Definitions

  • the present invention relates to novel compositions containing spermine, pharmaceutical compositions containing them, and their uses in the preparation of medicaments for the treatment in a patient of pathologies related to cellular hyperproliferation.
  • Polyamines are polycationic aliphatic amines which include putrescine, spermidine, spermine in eukaryotes. Cadaverine, other polyamine, is present only in prokaryotes.
  • Polyamines are synthesized from L-arginine or L-methionine. Their pathway of biosynthesis and catabolism is based on a limited number of enzymes.
  • ODC Ornithine Decarboxylase
  • SpdS Spermidine synthetase
  • SpmS spermine synthetase
  • S S AT Spermidine / spermine Nl-acetyltransferase
  • SSAT allows fine regulation of the intracellular levels of the different polyamines which may be toxic to the cell.
  • Spermidine and spermine can also be synthesized from methionine by the action of S-adenosylmethionine decarboxylase (SAMdc).
  • SAMdc S-adenosylmethionine decarboxylase
  • Logically “active” organic polyamines can be identified in particular according to at least one of the following methods:
  • a logically "active" organic polyamine or one of its derivatives must be able to participate in the physiological cellular metabolism of polyamines, or even be able to interfere with the latter or to dysregulate.
  • a logically “active” organic polyamine must therefore be able to associate or even be recognized by the transport system or systems intended to internalize it in a living cell.
  • the addition of a logically "active" bio-labeled polyamine radiolabeled in the culture medium makes it possible to verify its internalization.
  • a logically "active" organic polyamine must be able to suppress the inhibition of cell proliferation caused by the inhibition of the endogenous anabolism of polyamines (eg by ⁇ -DFMO).
  • a logically "active" organic polyamine, including synthesis, by dysregulating the natural metabolism of polyamines must be able to modulate the level of cell proliferation.
  • the exogenous supply (gastrointestinal tract) of "active" polyamines must suppress the beneficial anti-cancer effects caused by the "active" polyamine deficiency induced by the decrease of endogenous and exogenous sources of "active" polyamines ", This exogenous intake being coupled or not with anticancer drugs.
  • Polyamines are essential compounds for cell growth and differentiation.
  • the inventors have shown that a diet depleted of polyamines makes it possible to potentiate the effects of inhibitors of ODC on tumor growth (EP 0 703 731 B1).
  • the antizyme a protein involved in the degradation of ODC, is capable of modulating the entry or exit of polyamines from the cell according to a mechanism that has not yet been elucidated.
  • a mechanism of endocytosis of polyamines mediated by glypican-1 and caveolin-1 has also been reported. More recently, studies have shown the presence of a protein complex consisting of SLC3A2 and LAT proteins capable of excreting putrescine from the cell and returning arginine in exchange.
  • Inhibitors of polyamine anabolic enzymes and inhibitors of polyamine transport play an important role in the endogenous synthesis of polyamines by the cells of the body.
  • the bacteria of the intestinal flora constitute the second source of endogenous synthesis of polyamines.
  • the use of antibiotics targeting these bacteria allows a reduction of this other endogenous source of polyamines.
  • Spermine is the final product of the metabolism of polyamines. Its ability to convert spermidine by two different enzymatic pathways (Spermine oxidase or SSAT and polyamine oxidase) gives it an essential role in maintaining the homeostasis of intracellular polyamines. This polyamine is involved in many cellular functions. The prior art shows that spermine has rather deleterious effects on cellular metabolism.
  • spermine participates in the metastatic process in prostate cancer where it has been shown that the treatment of HT-29 cells with spermine leads to a decrease in the expression of molecules involved in cell adhesion, promoting thus metastatic invasion (Tsujinaka et al., 2011, Int J Oncology, 38: 305-312).
  • the inventors have demonstrated a beneficial effect of spermine on the metabolism of cancer cells which makes it possible to distinguish it from other polyamines participating in cellular homeostasis.
  • One of the aims of the invention is to provide compositions for their uses in the treatment of pathologies related to cellular hyperproliferation, in particular in the treatment of cancer.
  • Another object of the invention is to provide novel compositions spermine enriched more effective than the compositions described in the prior art in the context of the treatment of pathologies related to cellular hyperproliferation, particularly in the treatment of cancer.
  • Another object of the invention is to propose compositions that can be administered to patients together with an anti-cancer treatment.
  • the present invention relates to compositions comprising a mixture of cadaverine, putrescine and spermidine at a concentration ranging from 0.3 to 0.6 nmol per gram of composition, said composition also comprising spermine at a concentration ranging from 150 to 17000 nmol by gram of composition.
  • spermine represents from 99.60% to 100% of the logically active organic polyamines of the compositions of the present invention.
  • the distribution of the logically active organic polyamines of the compositions of the present invention is very different from that of foods constituting a "medium" food ration.
  • compositions comprising on the one hand an impoverished mixture cadaverine, putrescine and spermidine and spermine at a concentration higher than that provided by a standard food diet.
  • compositions of the present invention may be ingested by a patient who is a mammal.
  • mammal means a human being or an animal, said animal may be a pet or a farm animal.
  • compositions of the invention have an efficacy that may depend on the stage of the anticancer treatment followed by the patient. This efficiency can be optimum when the compositions are used as the sole or the main exogenous source of polyamines.
  • cadaverine, putrescine and spermidine intake should be as low as possible.
  • the object of the invention is that the rate of spermine ingested by the patient is much higher than the levels of the other three polyamines. This concentration difference between the spermine and the cadaverine mixture, putrescine and spermidine must be maintained either by the compositions of the invention alone or by the compositions of the invention associated with foods containing little cadaverine, putrescine and spermidine.
  • mixture of cadaverine, putrescine and spermidine is meant the combination of the three natural polyamines corresponding respectively to the formulas NH 2 - (CH 2 ) 5 -NH 2 , NH 2 - (CH 2 ) 4 -NH 2 and NH 2 - (CH 2 ) 3 -NH- (CH 2 ) 4 -NH 2 in a composition potentially containing other excipients.
  • spermine is meant the natural polyamine corresponding to the formula
  • the concentrations of the various polyamines are expressed in nanomoles (nmol) per gram of composition.
  • nano moles, nmoles and nmol are equivalent and can be used interchangeably in the text of this application.
  • the polyamines of the present invention have the property of being biologically "active" in that they possess at least one biological activity having an effect on:
  • N-methyl-D-aspartate (NMD A) receptors and are involved in neurodegenerative processes (Soulet & Rivest 2003).
  • the spermine concentration of the compositions of the invention varies from 150 to 1650 nmoles per gram of composition.
  • the spermine concentration of the compositions of the invention varies from 500 to 1100 nmol per gram of composition.
  • the spermine concentration of the compositions of the invention varies from 1100 to 1650 nmol per gram of composition.
  • the spermine concentration of the compositions of the invention ranges from 1650 to 2500 nmol per gram of composition.
  • the concentration of spermine compositions of the invention ranges from 2500 to 5000 nmol per gram of composition.
  • the spermine concentration of the compositions of the invention varies from 5,000 to 10,000 nmoles per gram of composition.
  • the spermine concentration of the compositions of the invention ranges from 100 to 17000 nmol per gram of composition.
  • the putrescine concentration of the compositions of the invention varies from 0.19 to 0.32 nmoles per gram of composition.
  • the cadaverine concentration of the compositions of the invention ranges from 0.02 to 0.08 nmol per gram of composition. Even more advantageously, the spermidine concentration of the compositions of the invention ranges from 0.09 to 0.20 nmoles per gram of composition.
  • compositions of the invention constitute the sole or the main food source of the patients
  • these compositions can be enriched with lipids, proteins, carbohydrates, vitamins, minerals and electrolytes in a quantity allowing the patient not to suffer from malnutrition or deficiencies.
  • compositions of the invention contain as a percentage of dry weight relative to the total dry weight: 10% to 35% of lipids, 8% to 30% of proteins, 35% to 80% of carbohydrates, up to 10% of a mixture of vitamins, minerals and electrolytes.
  • food source is meant all forms of diet, that is to say all foods that may constitute the diet of a human or animal, a diet consisting of meal replacement, or any other food source that keeps the human or animal alive.
  • vitamins and minerals having a defined role in the body.
  • the vitamins can be selected from a group consisting of vitamin A, vitamin B1, B6, vitamin B, vitamin C, vitamin D3, vitamin K1, riboflavin, pantothenic acid, niacin, folic acid, biotin, choline, inositol.
  • the minerals and electrolytes may be selected from a group consisting of sodium, potassium, calcium, phosphorus, magnesium, iron, zinc, copper, manganese, chlorides, iodine, selenium, chromium, molybdenum.
  • the choice of vitamins, minerals and electrolytes should not be restricted by the lists listed above. Those skilled in the art can adapt the proportions of each of these constituents allowing the patient to receive a balanced diet, meeting his daily nutritional needs.
  • Polyamines in the body come from three main sources: cell proliferation (physiological and tumoral), diet and intestinal bacteria. In order to control as much as possible the supply of polyamines in the body, it may be necessary to limit not only the exogenous supply via a perfectly controlled diet but also to inhibit the endogenous synthesis of the polyamines by using inhibitors of the enzymes involved in the anabolism of polyamines and / or inhibitors of polyamine transport between the cell and the extracellular medium.
  • Specific inhibitor denotes a molecule capable of blocking, totally or partially, directly or indirectly, reversibly or otherwise, the active site of at least one of the enzymes involved in the synthesis of polyamines (ornithine decarboxylase (ODC)).
  • spermidine-spermine Nl-acetyltransferase or spermine oxidase in the human body, or animal.
  • the role of the inhibitor of polyamine biosynthesis is to stop or significantly reduce the endogenous production of polyamines in the organism treated with the product according to the present invention.
  • the joint implementation of an inhibitor of polyamine biosynthesis and dietary intake low in polyamines reduces the amount of bioavailable polyamines in the body.
  • compositions of the invention optionally contain an inhibitor of the intracellular synthesis of polyamines in a proportion of at most 15% by weight relative to the total dry weight of the composition.
  • the inhibitor of the intracellular synthesis of polyamines of the compositions of the invention is an inhibitor of ornithine decarboxylase, spermidine-spermine Nl-acetyltransferase or spermine oxidase.
  • alpha-difluoromethylornithine is a useful compound, well known to those skilled in the art (Fabian et al., 2002, Clin Cancer Res, 8 (10), 3105). 3,117 / Levin et al., 2003, Clin Cancer Res, 9 (3), 981-990 / Meyskens et al., 2008, Cancer Prev Res, 1 (1), 32-38).
  • This example should in no way restrict the choice of an inhibitor of the endogenous synthesis of polyamines to this compound alone.
  • inhibitors capable of inhibiting ornithine decarboxylase, spermidine-spermine Nl-acetyltransferase or spermine oxidase may be used.
  • the amounts of inhibitors will be adapted by the skilled person on the basis of the biological activity data of these compounds and his general knowledge.
  • compositions of the present invention are optionally enriched with at least one polyamine transport inhibitor, in a proportion of at most 15% by weight relative to the total dry weight of the composition.
  • the polyamine transport inhibitors of the compositions of the present invention are preferably inhibitors capable of acting on the intracellular transport, in particular of putrescine and / or spermidine, but which have no effect on the intracellular transport of spermine.
  • antibiotics to limit the intake of polyamines by the bacteria of the intestinal flora.
  • compositions of the invention optionally contain at least one antibiotic.
  • This antibiotic may belong to the group of intestinal antiseptics, such as Ercefuryl ® .
  • This antibiotic can also, in addition to its bacteriostatic or bactericidal effect, have an antiparasitic effect, such as Flagyl ® .
  • antibiotics may lead to reduce the intake of certain vitamins, especially those provided by the intestinal flora of the patient. In this case, it may be necessary to supplement the composition in these vitamins so as not to cause vitamin deficiencies in the patient in case of prolonged administration of the composition.
  • deficits is meant a lack of nutrients that can alter the physical or mental condition of a human or an animal.
  • compositions of the invention may be enriched with vitamins.
  • the carbohydrates of the compositions of the invention belong to the group comprising glucose polymers, maltodextrins, sucrose, modified starches, glucose monohydrate, dehydrated glucose syrup, glycerol monostearate and mixtures thereof.
  • the proteins of the compositions of the invention belong to the group comprising soluble milk proteins, soy proteins, serum peptides, egg white powder, potassium caseinate, non-phosphorylated peptides, casein peptides, mixed caseinate, soy isolate and mixtures thereof.
  • the lipids of the compositions of the invention belong to the group comprising butter oil, peanut oil, medium chain triglycerides, grape seed oil, soy evening primrose oil and mixtures thereof.
  • the lipids of the compositions of the invention consist of a mixture of at least one oil of animal origin, at least one vegetable oil and glycerol stearate.
  • compositions used according to the present invention In order to control the supply of exogenous sources of polyamines, the compositions used according to the present invention must be able to constitute all or part of the patient's diet. In this sense they must provide an energy ration that can meet the nutritional needs of the patient.
  • compositions of the invention constitute the daily food ration of a human being and comprise:
  • an inhibitor of the intracellular synthesis of polyamines at a rate of less than 50 g and preferably at a rate of 0.3 to 10 g per day.
  • compositions of the invention are a submultiple of a daily food ration of a human being and comprise:
  • an inhibitor of the intracellular synthesis of polyamines in a proportion of less than 50 ⁇ g and preferably in a proportion of 1 / x to 10 ⁇ g per day,
  • the daily food ration is adapted according to the category and mass of the animal, whether it is a pet or a farm animal.
  • the distribution of carbohydrates, lipids and proteins as well as the vitamin, mineral and electrolyte requirements of the daily food ration of an animal are well known to those skilled in the art.
  • Concerning the intracellular synthesis inhibitor of polyamines, the dose is adapted according to the mass of the animal and possibly on the basis of data obtained in humans.
  • compositions used according to the present invention may constitute the daily food ration or a sub-multiple of a daily dietary ration of an animal and will have to satisfy the daily nutritional requirements of an animal.
  • compositions used according to the present invention constitute the daily dietary ration of a mouse and comprise:
  • an inhibitor of the intracellular synthesis of polyamines at a rate of less than 300 mg and preferably at a rate of 40 to 200 mg per day.
  • compositions used according to the present invention may be a submultiple of a daily food ration of a mouse and include:
  • vitamins, minerals and electrolytes in sufficient quantities to partially meet the daily nutritional requirements of an animal, and optionally an inhibitor of the intracellular synthesis of polyamines in a proportion of less than 300 / X mg and preferably in a proportion of 40 / X to 200 / X mg per day,
  • X being an integer from 2 to 8 and corresponding to the number of rations to be ingested by the patient to meet his daily nutritional requirements.
  • compositions of the invention may be in solid, liquid or semi-liquid form. Their formulation is adapted according to the ability of the patient to absorb an oral diet but also enterally or parenterally.
  • compositions of the invention are in a dry form to dissolve extemporaneously in a neutral vehicle.
  • compositions of the invention include a neutral vehicle making them ready for use.
  • neutral vehicle an aqueous solution for producing a more or less liquid composition, facilitating the ingestion of the latter by the patient.
  • the compositions of the invention will have a viscosity range extending from that of water to that of milk drinks for a temperature of 4 ° C to 40 ° C, at normal atmospheric pressure.
  • compositions of the invention can be used directly as a medicament.
  • drug any substance that when ingested by the patient, provides a benefit in terms of welfare, improvement of biomarkers, regression or remission of pathology.
  • compositions of the invention may also be included in the formulation of pharmaceutical preparations.
  • compositions of the invention can be used in the preparation of a medicament.
  • compositions of the invention may be used as a supplement or a food substitute.
  • compositions of the invention may be used as a nutraceutical supplement.
  • the metabolism of polyamines plays a key role in cell proliferation. Knowing that a disturbance in the physiology of cell division is almost always harmful, it seems appropriate to analyze the effects of a disruption of the metabolism of polyamines in the context of pathologies involving processes of cellular hyperproliferation, and in particular as part of cancer treatment.
  • compositions of the invention can be used in the treatment, in a patient, of pathologies related to cellular hyperproliferation.
  • compositions of the invention can be used in the treatment, in a patient, of cancer.
  • compositions of the invention may be used in the treatment of pathologies related to cellular hyperproliferation or in the treatment of cancer, said treatment being carried out by administering a unit dose ranging from 6.7 mg to 670 mg of spermine.
  • compositions of the invention may serve as a basis for a diet which may comprise several phases during which the exogenous supply of polyamines is:
  • totally is meant that the patient's diet is restricted to the compositions of the invention. No food other than the compositions of the invention enter the diet of the patient. During this phase, the control of the polyamine intake is maximal.
  • compositions of the invention By “majority”, it is meant the possibility of introducing into the patient's diet a breakfast comprising foods reduced in polyamine content. The rest of the daily food ration is provided by the compositions of the invention.
  • Partially means the possibility of introducing into the patient's diet a breakfast and at least one solid meal including reduced polyamine foods. The rest of the daily food ration is provided by the compositions of the invention.
  • compositions used according to the present invention are administered to the patient according to the following scheme:
  • patient reaction is meant its physiological ability to benefit from a depleted polyamine diet.
  • the benefit can be appreciated especially from the regression of the tumor mass.
  • the improvement or disappearance of any sign of the disease can be evaluated by a clinical examination, biological examinations or imaging performed in a usual way in the context of cancer. These criteria vary depending on the type of cancer. Three hypotheses are possible:
  • the second dose of the composition will contain at most the same level of polyamines as the first dose
  • the second dose of the composition will contain at least the same level of polyamines as the first dose, or Physiological condition of the patient has degraded after administration of a first dose of the composition and in this case, the second dose of the composition will contain a polyamine level either higher or lower than that of the first dose.
  • the three doses are identical, it amounts to administering a single dose to the patient for a period determined by the practitioner.
  • the first period of time varies from 7 to 14 days, in particular 7 days.
  • the second period of time varies from 14 to 21 days, in particular 14 days.
  • the third period of time varies from 28 to 63 days, in particular 63 days.
  • the first, second, and third time periods constitute a complete cycle of patient treatment.
  • the administration of the compositions of the invention may take place for one, two or more cycles. The renewal of these cycles is left to the discretion of the practitioner.
  • the first dose of polyamines varies from 6.7 mg to 5.3 g of spermine / day
  • the second dose of polyamines varies from 6.7 mg to 5.3 g of spermine / day, and
  • the third dose of polyamines ranges from 6.7 mg to 5.3 g of spermine / day.
  • These doses correspond to the doses of polyamines provided by 1 to 8 rations of a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine and spermine-enriched dose 33.4 mg / kg of food at the dose 3340 mg / kg of food .
  • compositions of the present invention provide at least the same daily amount of spermine and up to 800 times more spermine than an average food ration.
  • compositions comprising:
  • spermine at a concentration ranging from 150 to 17000 nmol per gram of composition
  • the total amount of logically active organic polyamines ingested per day by the patient does not exceed 11334 nanomoles per kcal of ingested composition, in particular 5000 nanomoles per kcal of composition ingested, in particular 1000 nanomoles per kcal of ingested composition, in particular 100 nanomoles per kcal of ingested composition.
  • the compositions of the invention may be used as a second therapeutic agent.
  • compositions of the invention may be administered to the patient before and / or during and / or after the anti-cancer treatment.
  • the present invention also relates to a combination of a composition comprising:
  • spermine at a concentration ranging from 150 to 17000 nmol per gram of composition
  • the total amount of bio logically active polyamines ingested per day by the patient not exceeding 11334 nanomoles per kcal of ingested composition , in particular 5000 nanomoles per kcal of ingested composition, in particular 1000 nanomoles per kcal of ingested composition, in particular 100 nanomoles per kcal of ingested composition.
  • This figure represents the variations in tumor volume (in cm 3 , indicated on the ordinate) as a function of the number of days (indicated on the abscissa) elapsed after the grafting of said tumor in male C57BL / 6 mice.
  • the mice are grafted with a solid tumor of Lewis lung carcinoma cells.
  • Figure 1-A Four groups of five mice are fed with different diets 6 days after the transplant took place. The start of treatment is indicated by the arrow on the graph.
  • the curve marked by black circles represents the mice fed a diet containing a normal level of polyamines (125 mg / kg of food or 861 nmol / g of food).
  • the curve represented by empty circles represents the mice fed a diet containing a normal level of polyamines (125 mg / kg of food or 861 nmol / g of food), and a drinking water containing neomycin (2 mg / ml).
  • the curve represented by black squares represents the mice fed a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food).
  • the curve represented by empty squares represents the mice fed a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), and a drinking water containing neomycin (2 mg / ml).
  • Figure 1-B Six groups of five mice are fed with different diets 6 days after the transplant took place. The start of treatment is indicated by the arrow on the graph.
  • the curve marked by black circles represents the mice fed a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), and enriched in spermine (33.4 mg / kg of food (165 nmole / g of food).
  • the curve represented by black squares represents the mice fed a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food) and enriched in spermine (334 mg / kg of food 1650 nmol / g of food).
  • the curve represented by empty squares represents the mice fed with a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), enriched in spermine (334 mg / kg of food 1650 nmol / g of food) and drinking water containing neomycin (2 mg / ml).
  • the curve represented by black diamonds represents the mice fed with a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food 0.350 nmol / g of food) and enriched with spermine (3340 mg / kg of food or 16500 nmol / g of food).
  • the curve represented by empty squares represents the mice fed a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), enriched in spermine (3340 mg / kg of food 16500 nmol / g of food) and drinking water containing neomycin (2 mg / ml).
  • This figure represents the percentage of pulmonary metastatic invasion (on the ordinate) of male C57BL / 6 mice, as a function of the diet (on the abscissa) given to the mice that had received a solid tumor transplant of Lewis carcinoma cells.
  • the percentage of pulmonary metastatic invasion is measured 19 days after the transplant took place.
  • mice Ten groups of mice are fed different diets.
  • the first group (represented by a black column) is fed with a diet containing a normal level of polyamines (125 mg / kg of food or 861 nmole / g of food).
  • the average value of pulmonary metastatic invasion of mice in this group is 27%.
  • the second group (represented by a white column) is fed a diet containing a normal level of polyamines (125 mg / kg of food or 861 nmol / g of food), and a drinking water containing neomycin (2 mg / ml).
  • the average value of pulmonary metastatic invasion of the mice of this group is 11%.
  • the third group (represented by a column containing discontinuous vertical lines) is fed with a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food).
  • the average value of pulmonary metastatic invasion of the mice of this group is 6%.
  • the fourth group (represented by a column containing horizontal discontinuous lines) is fed a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg feed or 0.350 nmole / g feed), and a drinking water containing neomycin (2 mg / ml).
  • the average value of pulmonary metastatic invasion of the mice of this group is 7%.
  • the fifth group (represented by a column containing vertical continuous lines) is fed with a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), and enriched with spermine (33 , 4 mg / kg of food or 165 nmol / g of food).
  • the average value of pulmonary metastatic invasion of the mice of this group is 13%.
  • the sixth group (represented by a column containing horizontal continuous lines) is fed with a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), enriched in spermine (33, 4 mg / kg of food (165 nmole / g of food) and drinking water containing neomycin (2 mg / ml).
  • the average value of pulmonary metastatic invasion of the mice of this group is 4%.
  • the seventh group (represented by a column containing continuous lines pointing to the left) is fed with a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), and enriched in spermine (334 mg / kg of food or 1650 nmol / g of food).
  • the average value of pulmonary metastatic invasion of the mice of this group is 7%.
  • the eighth group (represented by a column containing continuous lines pointing to the right) is fed with a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), enriched in spermine ( 334 mg / kg of food (1650 nmol / g of food) and drinking water containing neomycin (2 mg / ml).
  • the average value of pulmonary metastatic invasion of the mice of this group is 7%.
  • the ninth group (represented by a column containing small dots) is fed with a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), and enriched in spermine (3340 mg / kg of food is 16500 nmol / g of food).
  • the average value of pulmonary metastatic invasion of the mice of this group is 5%.
  • the tenth group (represented by a column containing large dots) is fed with a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), enriched in spermine (3340 mg / kg of food (16500 nmol / g of food) and drinking water containing neomycin (2 mg / ml).
  • the average value of pulmonary metastatic invasion of the mice of this group is 1%.
  • Figure 3 Evolution of tumor levels of polyamines
  • This figure represents the tumor levels of putrescine, spermidine and spermine (on the ordinate) of male C57BL / 6 mice, as a function of the diet (on the abscissa) given to the mice which have received the transplant of a solid tumor of Lewis carcinoma cells. .
  • the tumor levels of putrescine, spermidine and spermine are measured 19 days after the graft has taken place.
  • FIG. 3A Four groups of five mice are fed different diets 6 days after the transplant took place.
  • the black column represents the mice fed a diet containing a normal level of polyamines (125 mg / kg of food or 861 nmol / g of food).
  • the white column represents the mice fed a diet containing a normal level of polyamines (125 mg / kg of food or 861 nmol / g of food), and a drinking water containing neomycin (2 mg / ml).
  • the column containing vertical discontinuous lines represents the mice fed a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food).
  • the column containing horizontal discontinuous lines represents mice fed a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), and a drinking water containing neomycin (2 mg / ml).
  • FIG. 3B Six groups of five mice are fed with different diets 6 days after the transplant took place.
  • the column containing vertical continuous lines represents the mice fed a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), and enriched in spermine (33.4 mg / kg of food (165 nmole / g of food).
  • the column containing horizontal continuous lines represents the mice fed with a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), enriched in spermine (33.4 mg / kg d 'food 165 nmole / g of food) and drinking water containing neomycin (2 mg / ml).
  • the column containing continuous lines pointing to the left represents the mice fed with a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food) and enriched in spermine (334 mg / kg of food is 1650 nmol / g of food).
  • the column containing straight lines pointing to the right represents the mice fed with a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), enriched in spermine (334 mg / kg d feed (1650 nmol / g food) and drinking water containing neomycin (2 mg / ml).
  • the column containing small dots represents the mice fed with a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food) and enriched in spermine (3340 mg / kg of food either 16500 nmol / g of food).
  • the column containing large dots represents the mice fed a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), enriched in spermine (3340 mg / kg of food or 16500 nmol / g food) and drinking water containing neomycin (2 mg / ml).
  • This figure represents the mass of the spleen (ordinate) of male C57BL / 6 mice, as a function of the diet (in abscissas) given to the mice which have received or not the transplant of a solid tumor of Lewis carcinoma cells.
  • the mass of the spleen is measured 19 days after the transplant took place.
  • mice transplanted with a solid tumor of Lewis carcinoma cells are fed different diets.
  • An eleventh group of mice not receiving a graft and placed under a diet containing a normal level of polyamines makes it possible to establish an average reference value of the splenic mass in the mice used in this study.
  • the first group (represented by a black column) is fed with a diet containing a normal level of polyamines (125 mg / kg of food or 861 nmol / g of food).
  • the average value of the splenic mass of mice in this group is 171 mg.
  • the second group (represented by a white column) is fed a diet containing a normal level of polyamines (125 mg / kg of food or 861 nmol / g of food), and a drinking water containing neomycin (2 mg / ml).
  • the mean value of the splenic mass of mice in this group is 151 mg.
  • the third group (represented by a column containing discontinuous vertical lines) is fed with a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food).
  • the mean value of the splenic mass of mice in this group is 88 mg.
  • the fourth group (represented by a column containing horizontal discontinuous lines) is fed a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg feed or 0.350 nmole / g feed), and a drinking water containing neomycin (2 mg / ml).
  • the mean value of the splenic mass of mice in this group is 63 mg.
  • the fifth group (represented by a column containing vertical continuous lines) is fed with a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), and enriched with spermine (33 , 4 mg / kg of food or 165 nmol / g of food).
  • the mean value of the splenic mass of mice in this group is 93 mg.
  • the sixth group (represented by a column containing horizontal continuous lines) is fed with a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), enriched in spermine (33, 4 mg / kg of food (165 nmole / g of food) and drinking water containing neomycin (2 mg / ml).
  • the mean value of the splenic mass of mice in this group is 75 mg.
  • the seventh group (represented by a column containing continuous lines pointing to the left) is fed with a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), and enriched in spermine (334 mg / kg of food or 1650 nmol / g of food).
  • the mean value of the splenic mass of mice in this group is 98 mg.
  • the eighth group (represented by a column containing straight lines pointing to the right) is fed with a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg diet or 0.350 nmol / g feed), spermine-enriched (334 mg / kg diet or 1650 nmol / g food) and drinking water containing neomycin (2 mg / ml).
  • the average value of the splenic mass of mice in this group is 100 mg.
  • the ninth group (represented by a column containing small dots) is fed with a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), and enriched in spermine (3340 mg / kg of food is 16500 nmol / g of food).
  • the mean value of the splenic mass of mice in this group is 81 mg.
  • the tenth group (represented by a column containing large dots) is fed with a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), enriched in spermine (3340 mg / kg of food (16500 nmol / g of food) and drinking water containing neomycin (2 mg / ml).
  • the mean value of the splenic mass of mice in this group is 42 mg.
  • the eleventh group (represented by a gray column), corresponding to the mice not receiving a graft, is fed with a diet containing a normal level of polyamines (125 mg / kg of food or 861 nmol / g of food) .
  • the mean value of the splenic mass of mice in this group is 61 mg.
  • mice Male C57BL / 6 mice, 9 weeks old and weighing 20g (January breeding, Genest St Isle, France) are acclimated 1 week before the start of the study. Animal handling is carried out in accordance with the ethical guidelines for experimentation and according to the recommendations of the European Association for Biomedical Research. The animals are enclosed at 5 individuals per cage under standardized conditions (21 ⁇ 1 ° C, 60% relative humidity, cycles of 12 hours of light, 12 hours of darkness), and have access to food and feed. water ad libitum. 1.2 - Tumor model
  • Lewis lung carcinoma cells (3LL) were obtained from the ECACC (European Collection of Cell Cultures) and grafted by intramuscular injection into the hind paws of male C57BL / 6 mice according to the method previously described (Hergueux J. et al. al., Cell BioL Exp., 1983, 51 (4), 181-191) to produce tumor cells. After 20 days, the tumor cells are collected and dispersed in PBS, counted and diluted to reach 0.5 ⁇ 10 6 cells / 100 ⁇ l, before being grafted into the right hind paw of the mice. The grafted mice are randomly distributed in the cages in groups of 5 individuals.
  • the animals are sacrificed 19 days after the tumor cell transplant.
  • the depleted diet of cadaverine, putrescine and spermidine is marketed under the brand CASTASE TM by Nutrialys (Saint-Grégoire, France).
  • This polyamine-depleted food contains less than 51 ⁇ g of polyamines / kg of food.
  • the rodent feed containing a normal level of polyamines corresponds to a standard commercial feed (UAR, standard feed mill).
  • the products are distributed to the animals according to their profile and their nutritional needs.
  • a mouse consumes about 2 grams per day of feeding.
  • the treatment is set up 6 days after the transplant, when the tumor is palpable and is administered 7 days out of 7 and includes the ad libitum intake of the normal diet or test solutions as well as the drinking water.
  • mice C57BL / 6 mouse
  • tumor model Lewis carcinoma
  • the growth of the tumor is quantified at 6, 8, 11, 14 and 18 days after the graft has taken place by measuring the volume of the tumor, according to the method previously described (Moulinoux et al., Int J. Cancer, 1984, 34 (2), 277-281).
  • mice are divided into ten groups and different diets are administered to each group.
  • the first group is fed a diet containing a normal level of polyamines (125 mg / kg of food or 861 nmol / g of food).
  • the second group is fed a diet containing a normal level of polyamines and a drinking water containing neomycin (2 mg / ml).
  • the third group is fed a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food).
  • the fourth group is fed a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine, and a drinking water containing neomycin (2 mg / ml).
  • the fifth group is fed a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), and enriched in spermine (33.4 mg / kg of food or 165 nmol / g of food).
  • the sixth group is fed a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), enriched in spermine (33.4 mg / kg of food or 165 nmol / g of food) and drinking water containing neomycin (2 mg / ml).
  • the seventh group is fed a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), and enriched in spermine (334 mg / kg of food or 1650 nmol / g feed).
  • the eighth group is fed a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), enriched in spermine (334 mg / kg of food or 1650 nmol / g of food) and drinking water containing neomycin (2 mg / ml).
  • the ninth group is fed a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), and enriched in spermine (3340 mg / kg of food or 16500 nmol / g feed).
  • the tenth group is fed a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), enriched in spermine (3340 mg / kg of food or 16500 nmol / g of food) and drinking water containing neomycin (2 mg / ml).
  • Neomycin is diluted in drinking water (0.2% w / v) whether the animals are fed with a diet in a solid form of kibble, or with a diet in a liquid or semi-liquid form.
  • Neomycin has no effect on the evolution of tumor volume when administered in drinking water on the basis of a diet containing a normal level of polyamines.
  • the depleted diet of cadaverine, putrescine and spermidine causes a 20% decrease in tumor growth on day 19. This decrease is 35% when neomycin is added to this depleted cadaverine, putrescine and spermidine regimen ( Figure 1-A).
  • Neomycin supplemented with a diet containing a normal level of polyamines causes a 60% decrease in metastatic invasion compared to that seen in mice that did not receive this antibiotic.
  • the cadaverine depleted diet, putrescine and spermidine caused a 77% decrease in metastatic invasion compared to that observed in mice fed a diet containing a normal level of polyamines.
  • the addition of neomycin to a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine has no additional benefit.
  • the level of polyamines is measured in the tumor formed at the site of inoculation of Lewis carcinoma cells.
  • the tumor was washed and the cells that compose it are dispersed using a Polytron ® homogenizer in the presence of 0.2 M perchloric acid. After incubation for at least 16 h at 4 ° C, the cells are centrifuged for 15 minutes at 3500 rpm at 4 ° C. The supernatant which contains the polyamines is taken and used for the determination of the polyamines.
  • the polyamines are assayed according to the method previously described (Seiler N et al., 1996, Cancer Research, 56, 5624-5630). The three main polyamines present in mammals (putrescine, spermidine and spermine) were measured for the ten groups of mice each receiving a distinct diet. The results are shown in Figure 3.
  • Neomycin causes a 17% decrease in putrescine, a 7% increase in spermine level and has no effect on spermidine levels based on a normal diet. In contrast, neomycin causes a 17% increase in putrescine level, a 24% increase in spermidine level and a 5% decrease in spermine levels based on a depleted cadaverine, putrescine and spermidine regimen. .
  • the depleted cadaverine, putrescine and spermidine regimen induced an increase of 17% and 24%, respectively, in tumor levels of putrescine and spermidine.
  • This diet has no effect on the tumor rate of spermine.
  • Spermine supplementation of the cadaverine depleted diet, putrescine and spermidine induces variations in tumor levels of putrescine, spermidine and spermine.
  • the tumoral rate of putrescine increases by 17%
  • the tumoral rate of spermidine increases by 25%
  • the tumoral rate of spermine decreased by 6% compared to the tumor levels of these two polyamines in mice fed a diet containing a normal level of polyamines.
  • the tumor rate of spermidine increases by 32% and the tumoral rate of spermine increases by 12%) relative to the tumor levels of these substances.
  • the spleen is taken from the mice and weighed using a precision balance.
  • mice each having a distinct diet, as previously described, an eleventh group of animals was included for this study. These are male C57BL / 6 mice with the same basic physiological characteristics as the mice in the other 10 groups but who did not undergo a Lewis carcinoma cell transplant. The mice of this eleventh group were fed with the diet containing a normal level of polyamines. The splenic mass of these healthy mice (61 mg) serves as a reference for an animal with no sign of inflammation.
  • mice which have been transplanted with Lewis carcinoma cells and placed under a diet containing a normal level of polyamines have a splenic mass. three times higher (171 mg) than healthy mice fed the same diet.
  • Neomycin causes a decrease in splenic mass irrespective of the nature of the diet ingested by the mice.
  • the cadaverine depleted diet, putrescine and spermidine induced a decrease of about 50% of the splenic mass in these mice compared to the transplanted mice that received a diet containing a normal level of polyamines.
  • spermine enrichment of the cadaverine depleted diet, putrescine and spermidine has no additional effect in terms of decreased splenic mass and therefore inflammation in these animals carrying a tumor.
  • Neomycin combined with an enrichment of the cadaverine depleted diet, putrescine and spermidine by 3340 mg spermine / kg feed (ie 16500 nmol / g feed) leads to a decrease in splenic mass below that of healthy animals.
  • mice Male C57BL / 6 mice, 9 weeks old and weighing 20g (January breeding, Genest St Isle, France) are acclimated 1 week before the start of the study. Animal handling is carried out in accordance with the ethical guidelines for experimentation and according to the recommendations of the European Association for Biomedical Research.
  • the animals are enclosed at 5 individuals per cage under standardized conditions (21 ⁇ 1 ° C, 60% relative humidity, cycles of 12 hours of light, 12 hours of darkness), and have access to food and feed. water ad libitum.
  • Lewis lung carcinoma cells (3LL) were obtained from ECACC (European Collection of Cell Cultures) and grafted by injection intramuscularly in the hind legs of male C57BL / 6 mice according to the method previously described (Hergueux J. et al., Exp Cell BioL, 1983, 51 (4), 181-191) to produce tumor cells. After 20 days, the tumor cells are collected and dispersed in PBS, counted and diluted to reach 0.5 ⁇ 10 6 cells / 100 ⁇ l, before being grafted into the right hind paw of the mice. The grafted mice are randomly distributed in the cages in groups of 5 individuals.
  • the tumor becomes palpable a few days after the transplant has taken place.
  • the animals are sacrificed 19 days after the tumor cell transplant. 2 - Food
  • the depleted diet of cadaverine, putrescine and spermidine is marketed under the brand CASTASE TM by Nutrialys (Saint-Grégoire, France).
  • This polyamine-depleted food contains less than 51 ⁇ g of polyamines / kg of food.
  • the rodent feed containing a normal level of polyamines corresponds to a standard commercial feed (UAR, standard feed mill).
  • the products are distributed to the animals according to their profile and their nutritional needs.
  • a mouse consumes about 2 grams per day of feeding.
  • the treatment is set up 6 days after the transplant, when the tumor is palpable and is administered 7 days out of 7 and includes the ad libitum intake of the normal diet or test solutions as well as the drinking water.
  • mice C57BL / 6 mouse
  • tumor model Lewis carcinoma
  • the growth of the tumor is quantified at 6, 8, 11, 14 and 18 days after the graft has taken place by measuring the volume of the tumor, according to the method previously described (Moulinoux et al., Int J. Cancer, 1984, 34 (2), 277-281).
  • mice are divided into fifteen groups and different diets are administered to each group.
  • the first group is fed a diet containing a normal level of polyamines (125 mg / kg of food or 861 nmol / g of food).
  • the second group was fed a diet containing normal levels of polyamines and cyclophosphamide dose of 9 mg.kg "1. Week" 1.
  • the third group is fed a diet containing a normal level of polyamines and a dose of cyclophosphamide of 90 mg.kg- 1 week -1 .
  • the fourth group is fed a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food).
  • the fifth group is fed a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food) and a dose of cyclophosphamide 9 mg.kg "1 .week " 1 .
  • the sixth group is fed a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food) and a cyclophosphamide dose of 90 mg.kg "1 .week " 1 .
  • the seventh group is fed a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), and enriched in spermine (33.4 mg / kg of food or 165 nmol / g of food).
  • the eighth group is fed a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), enriched in spermine (334 mg / kg of food or 1650 nmol / g of 'food).
  • the ninth group is fed a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), and enriched in spermine (3340 mg / kg of food or 16500 nmol / g feed).
  • the tenth group is fed a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), enriched in spermine (33.4 mg / kg of food or 165 nmol / g of food) and a dose of cyclophosphamide of 9 mg.kg- 1 week -1 .
  • the eleventh group is fed a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), enriched in spermine (334 mg / kg of food or 1650 nmol / g of food) and a dose of cyclophosphamide 9 mg.kg "1. week" 1.
  • the twelfth group is fed a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), enriched in spermine (3340 mg / kg of feed is 16500 nmol / g of food) and a dose of cyclophosphamide 9 mg.kg "1. week" 1.
  • the thirteenth group is fed with a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), enriched in spermine (33.4 mg / kg of food or 165 nmol / g of food) and cyclophosphamide dose of 90 mg.kg "1. week" 1.
  • the fourth group is fed a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), enriched in spermine (334 mg / kg of food or 1650 nmol / g of feed) and a dose of cyclophosphamide of 90 mg.kg- 1 week -1 .
  • the fifteenth group is fed with a diet depleted of cadaverine, putrescine and spermidine (51 ⁇ g / kg of food or 0.350 nmol / g of food), enriched in spermine (3340 mg / kg of food or 16500 nmol / g of feed) and a dose of cyclophosphamide of 90 mg.kg- 1 week -1 .
  • Cyclophosphamide (Endoxan) administered at 90 mg.kg -1 week -1 has a significant antiproliferative effect irrespective of the diet provided.
  • the percentage inhibition is of the order of 80 to 95%.
  • a low dose of cyclophosphamide 9 mg.kg "1.
  • Week” 1 associated with a depleted diet cadaverine, putrescine and spermidine increases the antitumor efficacy of 25% compared to a diet containing a ratio normal polyamine (125 mg / kg feed, 861 nmol / g feed) combined with 9 mg.kg- 1 week- 1 cyclophosphamide.
  • This depleted diet cadaverine, putrescine and spermidine enriched spermine increases dose-dependently the antitumor effect of cyclophosphamide to 9 mg.kg "1. Week” 1 5 to 30%, depending on the doses of spermine .

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Abstract

La présente invention porte sur des nouvelles compositions comprenant un mélange de cadavérine, putrescine et spermidine à une concentration variant de 0,3 à 0,6 nmoles par gramme de composition, ladite composition comprenant également de la spermine à une concentration variant de 150 à 17000 nmoles par gramme de composition, et leurs utilisations dans le traitement, chez un patient, de pathologies liées à l'hyperprolifération cellulaire.

Description

COMPOSITIONS CONTENANT DE LA SPERMINE AVEC CADAVERINE, PUTRESCINE ET/OU
SPERMIDINE
La présente invention porte sur de nouvelles compositions contenant de la 5 spermine, les compositions pharmaceutiques les contenant, et leurs utilisations dans la préparation de médicaments destinés au traitement chez un patient de pathologies liées à l'hyperprolifération cellulaire.
Les polyamines sont des aminés aliphatiques polycationiques qui incluent la putrescine, la spermidine, la spermine chez les eucaryotes. La cadavérine, autre0 polyamine, est présente uniquement chez les procaryotes.
Les polyamines sont synthétisées à partir de la L-arginine ou de la L-méthionine. Leur voie de biosynthèse et de catabolisme repose sur un nombre restreint d'enzymes. La synthèse de putrescine à partir d'ornithine (produit de dégradation de l'arginine) fait intervenir l'Ornithine DéCarboxylase (ODC). La spermidine synthétase (SpdS) permet5 la synthèse de la spermidine à partir de la putrescine, qui à son tour va être pris en charge par la spermine synthétase (SpmS) pour former la spermine. La spermidine/spermine Nl-acétyltransférase (S S AT) constitue l'enzyme clé du catabolisme des polyamines qui permet la rétroconversion de la spermine en spermidine et de la spermidine en putrescine. La SSAT permet une régulation fine des niveaux0 intracellulaires des différentes polyamines qui peuvent s'avérer toxiques pour la cellule.
La spermidine et la spermine peuvent également être synthétisées à partir de la méthionine par l'action de la S-adénosylméthionine-Décarboxylase (SAMdc).
Les données de la littérature montrent qu'une ration alimentaire journalière de 2000 kcal (kilo calories) apporte une dose de polyamines bio logiquement « actives » qui5 varie de 200 000 à 700 000 nanomoles (nmol). Cela signifie qu'une ration alimentaire journalière fournit un apport de 100 à 350 nmol de polyamines bio logiquement actives par kilocalorie (Bardocz et al., 1995, Br J Nutr, 73(6) :819-828). Cet écart dépend de la nature des aliments consommés qui contiennent des quantités variables de polyamines.
Pour pouvoir convertir en grammes (g) des quantités de polyamines0 bio logiquement actives exprimées en nanomoles, il est nécessaire de considérer une masse moléculaire moyenne pour l'ensemble des polyamines bio logiquement actives. Cette masse moléculaire moyenne des polyamines bio logiquement actives est une approximation et est estimée à 145,24 g/mol. Ainsi, une ration journalière de 2000 kcal, apporte de 14,5 à 51 μg de polyamines bio logiquement actives/kcal. Ceci correspond à un apport de 29 à 102 mg de polyamines bio logiquement actives/jour ou encore à un apport de 29 à 102 mg de polyamines bio logiquement actives pour 2000 kcal.
Il peut s'avérer nécessaire de considérer, non plus le pool de polyamines bio logiquement actives dans son ensemble mais le taux de chacune des polyamines bio logiquement actives considérées isolément. Les aliments peuvent être répartis en trois classes suivant leur teneur en polyamines (www.guerir.org/magazine/guide- nutritionnel-nutrialys .pdf) . Cette répartition permet d'estimer de manière approximative les taux de chacune des polyamines (cadavérine, putrescine, spermidine et spermine) pour chaque catégorie d'aliments. Ainsi, une ration alimentaire journalière « moyenne » apporte respectivement environ 10,8 mg de putrescine, environ 4,4 mg de cadavérine, environ 15,7 mg de spermidine et environ 6,7 mg de spermine pour 2000 kcal. Cela correspond à un taux global de polyamines (cadavérine, putrescine, spermine et spermidine) d'environ 37,6 mg pour une ration alimentaire « moyenne » journalière de 2000 kcal. Par conséquent, la putrescine représente 28,7%, la cadavérine représente 11,7%, la spermidine représente 41,8% et la spermine représente 17,8% du taux global de polyamines bio logiquement actives de la susdite ration alimentaire.
Les polyamines bio logiquement « actives » peuvent être identifiées notamment selon au moins une des méthodes suivantes :
1) En culture :
Une polyamine bio logiquement « active » ou l'un de ses dérivés doit pouvoir participer au métabolisme cellulaire physiologique des polyamines, voire être capable d'interférer avec ce dernier ou encore de le dysréguler.
a. Une polyamine bio logiquement « active » doit donc pouvoir s'associer voire être reconnue par le ou les systèmes de transport visant à l'internaliser dans une cellule vivante. L'adjonction d'une polyamine bio logiquement « active » radiomarquée au milieu de culture permet de vérifier son internalisation.
b. Une polyamine bio logiquement « active » doit pouvoir supprimer l'inhibition de la prolifération cellulaire provoquée par l'inhibition de l'anabolisme endogène des polyamines (ex: par Γα-DFMO). c. Une polyamine bio logiquement « active », y compris de synthèse, en dysrégulant le métabolisme naturel des polyamines doit pouvoir moduler le niveau de la prolifération cellulaire. 2) In vivo :
Chez l'animal porteur de tumeur greffée, l'apport exogène (tractus gastrointestinal) de polyamines «actives» doit supprimer les effets anticancéreux bénéfiques provoqués par la carence en polyamines «actives» induite par la diminution des sources endogènes et exogènes de polyamines «actives», cet apport exogène étant couplé ou non à des médicaments anticancéreux.
Les polyamines sont des composés essentiels pour la croissance et la différentiation cellulaire. Les inventeurs ont montré qu'un régime alimentaire appauvri en polyamines permettait de potentialiser les effets d'inhibiteurs de l'ODC sur la croissance tumorale (EP 0 703 731 Bl).
Par ailleurs, des études ont montré que les cellules cancéreuses contiennent des taux plus élevés de polyamines que ceux observés dans les cellules saines (WO 1997/11691). La déplétion en polyamines a été utilisée en stratégie anticancéreuse. Cette déplétion est obtenue soit en induisant l'expression de la SSAT ou la stabilisation de son ARN messager par un analogue de la spermine, notamment par le NJN12- diéthylnorspermine (DENSPM) (Parry L et al, 1995, Biochem J 305 : 451-458), soit en inhibant l'ODC à l'aide d'inhibiteurs réversibles ou irréversibles comme α- DiFluoroMéthylOrnithine (α-DFMO) (WO 2002/15895), soit en bloquant le transport des polyamines au niveau des membranes cellulaires.
Bien qu'aucun gène en particulier n'a été identifié comme étant le transporteur des polyamines, trois systèmes distincts de transport des polyamines ont été mis en évidence chez les mammifères (Igarashi et al, 2010, Plant Physiology and Biochemistry, 48, 506-512). L'antizyme, protéine impliquée dans la dégradation de l'ODC, est capable de moduler l'entrée ou la sortie des polyamines de la cellule selon un mécanisme non encore élucidé à ce jour. Un mécanisme d'endocytose des polyamines médié par le glypican-1 et la cavéoline-1 a également été rapporté. Plus récemment, des études ont mis en évidence la présence d'un complexe protéique constitué des protéines SLC3A2 et y LAT capable d'excréter la putrescine de la cellule et d'y faire rentrer l'arginine en échange.
Le développement d'inhibiteurs du transport des polyamines fait l'objet de nombreuses recherches. Différentes classes de molécules ont été développées, notamment des analogues de la spermine (Burns M.R., 2009, J Med Chem, 52, 1983- 1993) ou des dimères de polyamines (US 2005/0267220 Al), éventuellement liés à un noyau anthracène (WO 2010/148390).
Les inhibiteurs des enzymes de l'anabolisme des polyamines et les inhibiteurs du transport des polyamines interviennent essentiellement sur la synthèse endogène des polyamines par les cellules de l'organisme.
Les bactéries de la flore intestinale constituent la seconde source de synthèse endogène des polyamines. L'utilisation d'antibiotiques ciblant ces bactéries permet une réduction de cette autre source endogène de polyamines.
La spermine est le produit final du métabolisme des polyamines. Sa capacité de rétroconversion en spermidine par deux voies enzymatiques différentes (Spermine- oxydase ou SSAT et polyamine-oxydase) lui confère un rôle essentiel dans le maintien de l'homéostasie des polyamines intracellulaires. Cette polyamine est impliquée dans de nombreuses fonctions cellulaires. L'art antérieur montre que la spermine exerce des effets plutôt délétères sur le métabolisme cellulaire.
En effet, la spermine participe notamment au processus métastasique dans le cancer de la prostate où il a été montré que le traitement de cellules HT-29 par de la spermine entraine une diminution de l'expression de molécules impliquées dans l'adhésion cellulaire, favorisant ainsi l'envahissement métastasique (Tsujinaka et al., 2011, Int J Oncology, 38 :305-312).
Par ailleurs, le traitement de macrophages par la spermine inhibe l'activité cytotoxique de ces cellules, les empêchant d'exercer leur fonction d'auxiliaire antitumorale (WO 2000/006546).
Une étude récente menée sur 375 patients atteints de cancers colorectaux et traités pendant trois ans avec une association α-DFMO et sulindac (composé antiinflammatoire) a mis en évidence que les patients possédant un ratio basai spermine / spermidine inférieur à 0,30 sont plus sensibles aux effets chimioprotecteurs de cette association médicamenteuse que les patients possédant un ratio basai spermine/spermidine supérieur à 0,30 (Thompson et al., 2010, Gastroenterology, 139 :797-805).
Dans le cadre du traitement du cancer, l'accroissement de la survie ou de la durée de vie des patients demeure une préoccupation majeure. Il existe par conséquent un réel besoin de mise au point de nouvelles compositions susceptibles de participer au traitement de pathologies liées à l'hyperprolifération cellulaire, et notamment au traitement du cancer.
De manière surprenante, les inventeurs ont mis en évidence un effet bénéfique de la spermine sur le métabolisme des cellules cancéreuses qui permet de la distinguer des autres polyamines participant à l'homéostasie cellulaire.
L'un des buts de l'invention est de fournir des compositions pour leurs utilisations dans le traitement de pathologies liées à l'hyperprolifération cellulaire, notamment dans le traitement du cancer.
Un autre but de l'invention est de fournir de nouvelles compositions enrichies en spermine plus efficaces que les compositions décrites dans l'art antérieur dans le cadre du traitement de pathologies liées à l'hyperprolifération cellulaire, notamment dans le traitement du cancer.
Un autre but de l'invention est de proposer des compositions susceptibles d'être administrées aux patients conjointement à un traitement anti-cancéreux
(chimiothérapeutique) conduisant à un effet synergique en termes de traitement du cancer.
La présente invention concerne des compositions comprenant un mélange de cadavérine, putrescine et spermidine à une concentration variant de 0,3 à 0,6 nmoles par gramme de composition, ladite composition comprenant également de la spermine à une concentration variant de 150 à 17000 nmoles par gramme de composition.
Ainsi la spermine représente de 99,60% à 100% des polyamines bio logiquement actives des compositions de la présente invention. La distribution des polyamines bio logiquement actives des compositions de la présente invention est très différente de celle des aliments constituant une ration alimentaire « moyenne ».
De manière surprenante, les inventeurs ont montré l'existence d'un effet synergique dans le traitement de pathologies liées à l'hyperprolifération cellulaire, reposant sur l'association de compositions comprenant d'une part un mélange appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine et d'autre part de la spermine à une concentration supérieure à celle apportée par une alimentation standard composée d'aliments.
Les compositions de la présente invention peuvent être ingérées par un patient, lequel est un mammifère. Par « mammifère », on désigne un être humain ou un animal, ledit animal pouvant être un animal de compagnie ou un animal d'élevage.
Les compositions de l'invention présentent une efficacité qui pourra dépendre du stade du traitement anticancéreux suivi par le patient. Cette efficacité peut être optimum lorsque les compositions sont utilisées comme l'unique ou la principale source exogène de polyamines. Lorsqu'elles sont associées avec d'autres aliments, l'apport en cadavérine, putrescine et spermidine de ces derniers doit être le plus bas possible. Le but de l'invention est que le taux de spermine ingéré par le patient soit très supérieur aux taux des trois autres polyamines. Cet écart de concentration entre la spermine et le mélange cadavérine, putrescine et spermidine doit être maintenu soit par les compositions de l'invention seules soit par les compositions de l'invention associées à des aliments contenant peu de cadavérine, putrescine et spermidine. Les apports en polyamines variant d'un aliment à l'autre, il existe un guide nutritionnel des aliments (wvvw.guerir.org/faagazine/guide-nutritionnel-nutrialys.pdf) permettant de maintenir un programme nutritionnel à très faible teneur en polyamines concomitamment à la prise des compositions de l'invention.
Par « mélange de cadavérine, putrescine et spermidine », on désigne la combinaison des trois polyamines naturelles correspondant respectivement aux formules NH2-(CH2)5-NH2, NH2-(CH2)4-NH2 et NH2-(CH2)3-NH-(CH2)4-NH2 dans une composition contenant potentiellement d'autres excipients.
Par « spermine », on désigne la polyamine naturelle correspondant à la formule
NH2-(CH2)3- NH-(CH2)4- NH-(CH2)3-NH2.
Les concentrations des différentes polyamines sont exprimées en nano moles (nmol) par gramme de composition. Les termes nano moles, nmoles et nmol sont équivalents et peuvent être utilisés indifféremment dans le texte de cette demande. A titre d'exemple, cela signifie que dans un gramme de composition, la concentration en spermine peut varier de 150 à 17000 nanomoles. Les polyamines de la présente invention ont la propriété d'être bio logiquement « actives » en ce sens qu'elles possèdent au moins une activité biologique ayant un effet sur :
- la stabilisation, la condensation et la conformation de l'ADN (Thomas & Thomas, 2001, CMLS, Cell Mol Life Sci, 58 : 244-258),
- la transcription de l'AR ,
- la croissance et la prolifération cellulaire en intervenant directement sur le cycle cellulaire des cellules (Thomas & Thomas 2001),
- la régulation de la réponse immune (Soulet D & Rivest S, 2003, J Cell Biol, 162 (2): 257-268),
- la modulation du fonctionnement des récepteurs N-méthyl-D-aspartate (NMD A) et sont impliquées dans les processus de neurodégénérescence (Soulet & Rivest 2003).
Selon un mode de réalisation particulier, la concentration en spermine des compositions de l'invention varie de 150 à 1650 nmoles par gramme de composition.
Selon un mode de réalisation particulier, la concentration en spermine des compositions de l'invention varie de 500 à 1100 nmoles par gramme de composition.
Selon un mode de réalisation particulier, la concentration en spermine des compositions de l'invention varie de 1100 à 1650 nmoles par gramme de composition.
Selon un mode de réalisation plus particulier, la concentration en spermine des compositions de l'invention varie de 1650 à 2500 nmoles par gramme de composition.
Selon un autre mode de réalisation, la concentration en spermine des compositions de l'invention varie de 2500 à 5000 nmoles par gramme de composition.
Selon encore un autre mode de réalisation, la concentration en spermine des compositions de l'invention varie de 5000 à 10000 nmoles par gramme de composition.
Selon encore un autre mode de réalisation plus particulier, la concentration en spermine des compositions de l'invention varie de 10 00 à 17000 nmoles par gramme de composition.
Avantageusement, la concentration en putrescine des compositions de l'invention varie de 0,19 à 0,32 nmoles par gramme de composition.
Plus avantageusement, la concentration en cadavérine des compositions de l'invention varie de 0,02 à 0,08 nmoles par gramme de composition. Encore plus avantageusement, la concentration en spermidine des compositions de l'invention varie de 0,09 à 0,20 nmoles par gramme de composition.
Lorsque les compositions de l'invention constituent l'unique ou la principale source alimentaire des patients, ces compositions peuvent être enrichies avec des lipides, des protéines, des glucides, des vitamines, des minéraux et des électrolytes en quantité permettant au patient de ne pas souffrir de dénutrition ou de carences.
Les compositions de l'invention contiennent en pourcentage de poids sec par rapport au poids sec total : 10 % à 35 % de lipides, 8 % à 30 % de protéines, 35 % à 80 % de glucides, jusqu'à 10 % d'un mélange constitué de vitamines, de minéraux et d'électrolytes.
Par « source alimentaire », on désigne toutes formes de régime alimentaire, c'est- à-dire l'ensemble des aliments pouvant constituer l'alimentation d'un humain ou d'un animal, un régime alimentaire composé de substituts de repas, ou tout autre source de nourriture permettant de maintenir l'humain ou l'animal en vie.
Par « mélange constitué de vitamines, de minéraux et d'électrolytes», on désigne les vitamines et minéraux exerçant un rôle défini dans l'organisme. Les vitamines peuvent être choisies dans un groupe constitué de la vitamine A, la vitamine Bl, B6, B12, la vitamine C, la vitamine D3, la vitamine Kl, la riboflavine, l'acide pantothénique, la niacine, l'acide folique, la biotine, la choline, l'inositol. Les minéraux et électrolytes peuvent être choisis parmi un groupe constitué du sodium, potassium, calcium, phosphore, magnésium, fer, zinc, cuivre, manganèse, chlorures, iode, sélénium, chrome, molybdène. Le choix des vitamines, minéraux et électrolytes ne doit pas être restreint par les listes citées ci-dessus. L'homme de l'art peut adapter les proportions de chacun de ces constituants permettant au patient de recevoir une alimentation équilibrée, répondant à ses besoins nutritionnels journaliers.
Les polyamines de l'organisme sont issues de trois sources principales : la prolifération cellulaire (physiologique et tumorale), l'alimentation et les bactéries intestinales. Afin de contrôler au maximum l'apport en polyamines dans l'organisme, il peut s'avérer nécessaire de limiter non seulement l'apport exogène par le biais d'une alimentation parfaitement contrôlée mais également d'inhiber la synthèse endogène des polyamines en utilisant des inhibiteurs des enzymes impliquées dans l'anabolisme des polyamines et/ou des inhibiteurs du transport des polyamines entre la cellule et le milieu extracellulaire. Par « inhibiteur spécifique », on désigne une molécule capable de bloquer, totalement ou partiellement, directement ou indirectement, de manière réversible ou non, le site actif d'au moins une des enzymes intervenant dans la synthèse des polyamines (ornithine décarboxylase (ODC), spermidine-spermine Nl-acétyltransférase ou spermine oxydase) dans l'organisme humain, ou animal. Le rôle de l'inhibiteur de la biosynthèse des polyamines est d'arrêter ou de réduire signifïcativement la production endogène de polyamines dans l'organisme traité avec le produit selon la présente invention. La mise en œuvre conjointe d'un inhibiteur de la biosynthèse des polyamines et d'un apport alimentaire pauvre en polyamines permet de réduire la quantité de polyamines biodisponibles dans l'organisme.
Les compositions de l'invention contiennent éventuellement un inhibiteur de la synthèse intracellulaire des polyamines à raison d'au plus 15 % en poids par rapport au poids sec total de la composition.
Selon un mode de réalisation plus particulier, l'inhibiteur de la synthèse intracellulaire des polyamines des compositions de l'invention est un inhibiteur de l'ornithine décarboxylase, de la spermidine-spermine Nl-acétyltransférase ou de la spermine oxydase.
Parmi les inhibiteurs de l'ODC, l'alpha-dif uorométhylornithine (a-DFMO) constitue un composé utilisable, bien connu de l'homme du métier (Fabian et al., 2002, Clin Cancer Res, 8(10), 3105-3117 / Levin et al, 2003, Clin Cancer Res, 9(3), 981-990 / Meyskens et al., 2008, Cancer Prev Res, 1(1), 32-38). Cet exemple ne doit en aucun cas restreindre le choix d'un inhibiteur de la synthèse endogène des polyamines à ce seul composé.
D'autres composés susceptibles d'inhiber l'ornithine décarboxylase, la spermidine-spermine Nl-acétyltransférase ou la spermine oxydase pourront être utilisés. Les quantités d'inhibiteurs seront adaptées par l'homme du métier sur la base des données d'activité biologique de ces composés et de ses connaissances générales.
Le transport des polyamines entre la cellule et le milieu extracellulaire permet également une régulation fine du contenu intracellulaire en polyamines. La mise en œuvre conjointe d'un inhibiteur du transport des polyamines et d'un apport alimentaire pauvre en polyamines permet de réduire la quantité de polyamines biodisponibles dans l'organisme. Les compositions de la présente invention sont éventuellement enrichies avec au moins un inhibiteur du transport des polyamines, à raison d'au plus 15 % en poids par rapport au poids sec total de la composition.
Les inhibiteurs du transport des polyamines des compositions de la présente invention sont préférentiellement des inhibiteurs capables d'agir sur le transport intracellulaire notamment de la putrescine et/ou de la spermidine mais qui n'ont aucun effet sur le transport intracellulaire de la spermine.
Dans le but de diminuer encore plus la synthèse endogène de polyamines, il peut être envisagé d'avoir recours à des antibiotiques afin de limiter les apports en polyamines par les bactéries de la flore intestinale.
Selon un mode de réalisation particulier, les compositions de l'invention contiennent éventuellement au moins un antibiotique. Cet antibiotique peut appartenir au groupe des antiseptiques intestinaux, tel que l'Ercéfuryl®. Cet antibiotique peut également, en plus de son effet bactériostatique ou bactéricide, avoir un effet antiparasitaire, tel que le Flagyl®.
L'utilisation d'antibiotiques peut conduire à diminuer l'apport en certaines vitamines notamment celles apportées par la flore intestinale du patient. Dans ce cas, il peut s'avérer nécessaire de compléter la composition en ces vitamines afin de ne pas provoquer de carences vitaminiques chez le patient en cas d'administration prolongée de la composition.
Par « carences », on désigne un manque en nutriments pouvant altérer la condition physique ou mentale d'un humain ou d'un animal.
Selon un mode de réalisation particulier, les compositions de l'invention peuvent être enrichies en vitamines.
De façon avantageuse, les glucides des compositions de l'invention appartiennent au groupe comprenant les polymères de glucose, les maltodextrines, le saccharose, les amidons modifiés, le glucose monohydrate, le sirop de glucose déshydraté, le monostéarate de glycérol et leurs mélanges.
De façon avantageuse, les protéines des compositions de l'invention appartiennent au groupe comprenant les protéines solubles du lait, les protéines de soja, les peptides de sérum, le blanc d'œuf en poudre, le caséinate de potassium, les peptides non phosphorylés, les peptides de caséine, le caséinate mixte, l'isolât de soja et leurs mélanges. De façon avantageuse, les lipides des compositions de l'invention appartiennent au groupe comprenant l'huile de beurre, l'huile d'arachide, les triglycérides à chaîne moyenne, l'huile de pépins de raisin, l'huile de soja, l'huile d'onagre et leurs mélanges.
Selon un mode de réalisation particulier, les lipides des compositions de l'invention sont constitués par un mélange d'au moins une huile d'origine animale, d'au moins une huile d'origine végétale et de stéarate de glycérol.
Afin de contrôler l'apport en source exogène de polyamines, les compositions utilisées selon la présente invention doivent pouvoir constituer tout ou partie de l'alimentation du patient. En ce sens elles doivent apporter une ration énergétique susceptible de satisfaire aux besoins nutritionnels du patient.
Lorsque le patient est un être humain, les compositions de l'invention constituent la ration journalière alimentaire d'un être humain et comprennent:
- de 75 g à 500 g de glucides,
- de 20 g à 185 g de lipides,
- de 20 g à 225 g de protéines,
- des vitamines, des minéraux et des électrolytes en quantités suffisantes pour répondre aux besoins nutritionnels journaliers d'un être humain,
- et éventuellement un inhibiteur de la synthèse intracellulaire des polyamines à raison de moins de 50 g et préférentiellement à raison de 0,3 à 10 g par jour.
Selon un mode de réalisation particulier, les compositions de l'invention sont un sous-multiple d'une ration journalière alimentaire d'un être humain et comprennent :
- de 75/X g à 500/X g de glucides,
- de 20/X g à 185 X g de lipides,
- de 20/X g à 225/X g de protéines,
- des vitamines, des minéraux et des électrolytes en quantités suffisantes pour répondre partiellement aux besoins nutritionnels journaliers d'un être humain,
- et éventuellement un inhibiteur de la synthèse intracellulaire des polyamines à raison de moins de 50/X g et préférentiellement à raison de 1/X à 10/X g par jour,
et X étant un entier compris de 2 à 8 et correspondant au nombre de rations devant être ingérées par le patient pour satisfaire ses besoins nutritionnels journaliers. Lorsque le patient est un animal, la ration journalière alimentaire est adaptée en fonction de la catégorie et de la masse de l'animal, qu'il s'agisse d'un animal de compagnie ou d'un animal d'élevage. La répartition en glucides, lipides et protéines ainsi que les besoins en vitamines, minéraux et électrolytes de la ration journalière alimentaire d'un animal sont bien connus de l'homme du métier. Concernant l'inhibiteur de synthèse intracellulaire des polyamines, la dose est adaptée en fonction de la masse de l'animal et éventuellement sur la base des données obtenues chez l'homme.
Les compositions utilisées selon la présente invention peuvent constituer la ration journalière alimentaire ou un sous-multiple d'une ration journalière alimentaire d'un animal et devront satisfaire les besoins nutritionnels journaliers d'un animal.
A titre d'exemple, lorsque le patient est une souris, les compositions utilisées selon la présente invention constituent la ration journalière alimentaire d'une souris et comprennent:
- de 0,6 g à 1,8 g de glucides,
- de 0,04 g à 1,2 g de lipides,
- de 0,01 g à 0,6 g de protéines,
- des vitamines, des minéraux et des électrolytes en quantités suffisantes pour répondre aux besoins nutritionnels journaliers d'un animal,
- et éventuellement un inhibiteur de la synthèse intracellulaire des polyamines à raison de moins de 300 mg et préférentiellement à raison de 40 à 200 mg par jour.
Tout comme pour l'être humain, les compositions utilisées selon la présente invention peuvent être un sous-multiple d'une ration journalière alimentaire d'une souris et comprendre :
- de 0,6/X g à 1,8/X g de glucides,
- de 0,04/X g à 1,2/X g de lipides,
- de 0.01/X g à 0,6 X g de protéines,
- des vitamines, des minéraux et des électrolytes en quantités suffisantes pour répondre partiellement aux besoins nutritionnels journaliers d'un animal, - et éventuellement un inhibiteur de la synthèse intracellulaire des polyamines à raison de moins de 300/X mg et préférentiellement à raison de 40/X à 200/X mg par jour,
et X étant un entier compris de 2 à 8 et correspondant au nombre de rations devant être ingérées par le patient pour satisfaire ses besoins nutritionnels journaliers.
Les proportions des constituants des compositions de la présente invention données dans le cadre de l'alimentation d'une souris, sont données à titre indicatif et peuvent servir de base à l'homme du métier qui peut les adapter, grâce à ses connaissances générales, à d'autres animaux.
Les compositions de l'invention peuvent se présenter sous forme solide, liquide ou semi-liquide. Leur formulation est adaptée en fonction de la capacité du patient à absorber une alimentation par voie orale mais également par voie entérale ou parentérale.
Selon un mode de réalisation particulier, les compositions de l'invention se présentent sous une forme sèche à dissoudre extemporanément dans un véhicule neutre.
Selon un mode de réalisation plus particulier, les compositions de l'invention incluent un véhicule neutre les rendant prêtes à l'emploi.
Par « véhicule neutre », on désigne une solution aqueuse permettant de réaliser une composition plus ou moins liquide, facilitant l'ingestion de cette dernière par le patient. Ainsi, les compositions de l'invention auront une gamme de viscosité s'étendant de celle de l'eau à celle de boissons lactées pour une température comprise de 4°C à 40°C, à la pression atmosphérique normale.
Les compositions de l'invention peuvent être utilisées directement en tant que médicament.
Par « médicament », on désigne toute substance qui une fois ingérée par le patient, lui procure un bénéfice en termes de bien-être, d'amélioration des marqueurs biologiques, de régression ou de rémission de la pathologie.
Les compositions de l'invention peuvent également entrer dans la formulation de préparations pharmaceutiques.
Les compositions de l'invention peuvent être utilisées dans la préparation d'un médicament.
Les compositions de l'invention peuvent être utilisées en tant que complément ou substitut alimentaire. Les compositions de l'invention peuvent être utilisées en tant que complément nutraceutique.
Le métabolisme des polyamines joue un rôle clé dans la prolifération cellulaire. Sachant qu'une perturbation dans la physiologie de la division cellulaire est presque toujours nuisible, il parait pertinent d'analyser les effets d'une perturbation du métabolisme des polyamines dans le cadre de pathologies mettant en jeu des processus d'hyperprolifération cellulaire, et notamment dans le cadre du traitement du cancer.
Les compositions de l'invention peuvent être utilisées dans le traitement, chez un patient, de pathologies liées à l'hyperprolifération cellulaire.
Les compositions de l'invention peuvent être utilisées dans le traitement, chez un patient, du cancer.
Les compositions de l'invention peuvent être utilisées dans le traitement de pathologies liées à l'hyperprolifération cellulaire ou dans le traitement du cancer, ledit traitement s'effectue en administrant une dose unitaire variant de 6,7 mg à 670 mg de spermine.
Afin de contrôler au maximum l'apport exogène en polyamines, les compositions de l'invention peuvent servir de base à un régime alimentaire qui peut comprendre plusieurs phases au cours desquelles l'apport exogène en polyamines est :
- totalement apporté par les compositions utilisées selon l'invention,
- majoritairement apporté par les compositions utilisées selon l'invention,
- partiellement apporté par les compositions utilisées selon l'invention.
Par « totalement », on désigne le fait que l'alimentation du patient est restreinte aux compositions de l'invention. Aucun aliment autre que les compositions de l'invention n'entrent dans le régime alimentaire du patient. Lors de cette phase, le contrôle de l'apport en polyamines est maximal.
Par « majoritairement », on désigne la possibilité d'introduite dans le régime alimentaire du patient un petit déjeuner comprenant des aliments à teneur réduite en polyamines. Le reste de la ration alimentaire journalière est apportée par les compositions de l'invention.
Par « partiellement », on désigne la possibilité d'introduite dans le régime alimentaire du patient un petit déjeuner et au moins un repas solide comprenant des aliments à teneur réduite en polyamines. Le reste de la ration alimentaire journalière est apportée par les compositions de l'invention.
Selon un mode de réalisation particulier, les compositions utilisées selon la présente invention sont administrées au patient selon le schéma suivant:
(i) administration d'une première dose de la composition de l'invention pendant une première période de temps, et consécutivement,
(ii) administration d'une seconde dose de la composition de l'invention pendant une seconde période de temps, la seconde dose est ajustée en fonction de la réaction du patient à la première, et consécutivement,
(iii) administration d'une troisième dose de la composition de l'invention pendant une troisième période de temps, la troisième dose est ajustée en fonction de la réaction du patient à la seconde.
Par « réaction du patient », on désigne sa capacité physiologique à tirer bénéfice d'un régime appauvri en polyamines. Le bénéfice peut être apprécié à partir notamment de la régression de la masse tumorale. L'amélioration ou la disparition de tout signe de la maladie peut être évaluée par un examen clinique, des examens biologiques ou d'imagerie réalisés de façon usuelle dans le cadre du cancer. Ces critères varient en fonction du type de cancer. Trois hypothèses sont envisageables :
- soit l'état physiologique du patient s'améliore après administration d'une première dose de la composition et dans ce cas, la seconde dose de la composition contiendra au plus le même taux de polyamines que la première dose,
- soit l'état physiologique du patient ne présente aucune amélioration après administration d'une première dose de la composition et dans ce cas, la seconde dose de la composition contiendra au moins le même taux de polyamines que la première dose, - soit l'état physiologique du patient s'est dégradé après administration d'une première dose de la composition et dans ce cas, la seconde dose de la composition contiendra un taux de polyamines soit supérieur soit inférieur à celui de la première dose.
Le même type de raisonnement s'applique pour l'administration de la troisième dose. Ainsi, le praticien dispose d'une grande latitude dans le schéma d'administration des compositions de l'invention.
Lorsque les trois doses sont identiques, cela revient à administrer une dose unique au patient pendant une durée déterminée par le praticien. Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, la première période de temps varie de 7 à 14 jours, notamment 7 jours.
Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, la seconde période de temps varie de 14 à 21 jours, notamment 14 jours.
Selon un mode de réalisation particulier de l'invention, la troisième période de temps varie de 28 à 63 jours, notamment 63 jours.
La première, la seconde et la troisième période de temps constitue un cycle complet de traitement du patient. L'administration des compositions de l'invention peut s'effectue pendant un, deux ou plusieurs cycles. Le renouvellement de ces cycles est laissé à l'appréciation du praticien.
Selon un autre mode de réalisation particulier de l'invention :
- la première dose de polyamines varie de 6,7 mg à 5,3 g de spermine/j,
- la seconde dose de polyamines varie de 6,7 mg à 5,3 g de spermine/j, et
- la troisième dose de polyamines varie de 6,7 mg à 5,3 g de spermine/j.
Ces doses correspondent aux doses de polyamines apportées par 1 à 8 rations d'un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine et enrichie en spermine de la dose 33,4 mg/kg d'aliment à la dose 3340 mg/kg d'aliment.
Les compositions de la présente invention apportent au minimum la même quantité journalière de spermine et jusqu'à 800 fois plus de spermine qu'une ration alimentaire moyenne.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne également des compositions comprenant :
un mélange de cadavérine, putrescine et spermidine à une concentration variant de 0,3 à 0,6 nmoles par gramme de composition,
- de la spermine à une concentration variant de 150 à 17000 nmoles par gramme de composition,
pour leur utilisation dans le traitement chez un patient de pathologies liées à l'hyperprolifération cellulaire, la quantité totale de polyamines bio logiquement actives ingérées par jour par le patient ne dépassant pas 11334 nanomoles par kcal de composition ingérée, notamment 5000 nanomoles par kcal de composition ingérée, notamment 1000 nanomoles par kcal de composition ingérée, notamment 100 nanomoles par kcal de composition ingérée. Afin de potentialiser les effets d'un premier traitement anti-cancéreux, les compositions de l'invention peuvent être utilisées comme second agent thérapeutique.
Les compositions de l'invention peuvent être administrées au patient avant et/ou pendant et/ou après le traitement anti-cancéreux.
Selon un mode de réalisation particulier, la présente invention concerne également une combinaison d'une composition comprenant :
un mélange de cadavérine, putrescine et spermidine à une concentration variant de 0,3 à 0,6 nmoles par gramme de composition,
de la spermine à une concentration variant de 150 à 17000 nmoles par gramme de composition,
et d'un agent chimiothérapique pour son utilisation simultanée, séparée ou successive dans le traitement de pathologies liées à l'hyperprolifération cellulaire, la quantité totale de polyamines bio logiquement actives ingérées par jour par le patient ne dépassant pas 11334 nanomoles par kcal de composition ingérée, notamment 5000 nanomoles par kcal de composition ingérée, notamment 1000 nanomoles par kcal de composition ingérée, notamment 100 nanomoles par kcal de composition ingérée.
Description des figures
Figure 1 : Evolution du volume tumoral
Cette figure représente les variations de volume de tumeurs (en cm3, indiqués en ordonnées) en fonction du nombre de jours (indiqués en abscisses) écoulés après la greffe de ladite tumeur chez des souris C57BL/6 mâles. Les souris sont greffées avec une tumeur solide de cellules du carcinome pulmonaire de Lewis.
Figure 1-A : Quatre groupes de cinq souris sont alimentés avec des régimes alimentaires différents 6 jours après que la greffe a eu lieu. Le début de traitement est indiqué par la flèche sur le graphique.
La courbe matérialisée par des cercles noirs représente les souris alimentées avec un régime contenant un taux normal de polyamines (125 mg/ kg d'aliment soit 861 nmole/g d'aliment). La courbe matérialisée par des cercles vides représente les souris alimentées avec un régime contenant un taux normal de polyamines (125 mg/ kg d'aliment soit 861 nmole/g d'aliment), et une eau de boisson contenant de la néomycine (2 mg / ml).
La courbe matérialisée par des carrés noirs représente les souris alimentées avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment).
La courbe matérialisée par des carrés vides représente les souris alimentées avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), et une eau de boisson contenant de la néomycine (2 mg / ml).
Figure 1-B : Six groupes de cinq souris sont alimentés avec des régimes alimentaires différents 6 jours après que la greffe a eu lieu. Le début de traitement est indiqué par la flèche sur le graphique.
La courbe matérialisée par des cercles noirs représente les souris alimentées avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), et enrichi en spermine (33,4 mg/ kg d'aliment soit 165 nmole/ g d'aliment).
La courbe matérialisée par des cercles vides représente les souris alimentées avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), enrichi en spermine (33,4 mg/ kg d'aliment soit 165 nmole/ g d'aliment) et une eau de boisson contenant de la néomycine (2 mg / ml).
La courbe matérialisée par des carrés noirs représente les souris alimentées avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment) et enrichi en spermine (334 mg/ kg d'aliment soit 1650 nmole/ g d'aliment).
La courbe matérialisée par des carrés vides représente les souris alimentées avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), enrichi en spermine (334 mg/ kg d'aliment soit 1650 nmole/ g d'aliment) et une eau de boisson contenant de la néomycine (2 mg / ml).
La courbe matérialisée par des losanges noirs représente les souris alimentées avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment) et enrichi en spermine (3340 mg/ kg d'aliment soit 16500 nmole/ g d'aliment).
La courbe matérialisée par des carrés vides représente les souris alimentées avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), enrichi en spermine (3340 mg/ kg d'aliment soit 16500 nmole/ g d'aliment) et une eau de boisson contenant de la néomycine (2 mg / ml).
Figure 2 : Evolution de la dissémination métastasique pulmonaire
Cette figure représente le pourcentage d'envahissement métastasique pulmonaire (en ordonnées) de souris C57BL/6 mâles, en fonction du régime alimentaire (en abscisses) donné aux souris ayant reçues la greffe d'une tumeur solide de cellules du carcinome de Lewis. Le pourcentage d'envahissement métastasique pulmonaire est mesuré 19 jours après que la greffe a eu lieu.
Dix groupes de souris sont alimentés avec des régimes alimentaires différents. Le premier groupe (représenté par une colonne noire) est alimenté avec un régime contenant un taux normal de polyamines (125 mg/ kg d'aliment soit 861 nmole/g d'aliment). La valeur moyenne d'envahissement métastasique pulmonaire des souris de ce groupe est de 27 %.
Le second groupe (représenté par une colonne blanche) est alimenté avec un régime contenant un taux normal de polyamines (125 mg/ kg d'aliment soit 861 nmole/g d'aliment), et une eau de boisson contenant de la néomycine (2 mg / ml). La valeur moyenne d'envahissement métastasique pulmonaire des souris de ce groupe est de 11 %.
Le troisième groupe (représenté par une colonne contenant des traits discontinus verticaux) est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment). La valeur moyenne d'envahissement métastasique pulmonaire des souris de ce groupe est de 6 %.
Le quatrième groupe (représenté par une colonne contenant des traits discontinus horizontaux) est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), et une eau de boisson contenant de la néomycine (2 mg / ml). La valeur moyenne d'envahissement métastasique pulmonaire des souris de ce groupe est de 7 %. Le cinquième groupe (représenté par une colonne contenant des traits continus verticaux) est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), et enrichi en spermine (33,4 mg/ kg d'aliment soit 165 nmole/ g d'aliment). La valeur moyenne d'envahissement métastasique pulmonaire des souris de ce groupe est de 13 %.
Le sixième groupe (représenté par une colonne contenant des traits continus horizontaux) est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), enrichi en spermine (33,4 mg/ kg d'aliment soit 165 nmole/ g d'aliment) et une eau de boisson contenant de la néomycine (2 mg / ml). La valeur moyenne d'envahissement métastasique pulmonaire des souris de ce groupe est de 4 %.
Le septième groupe (représenté par une colonne contenant des traits continus orientés à gauche) est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), et enrichi en spermine (334 mg/ kg d'aliment soit 1650 nmole/ g d'aliment). La valeur moyenne d'envahissement métastasique pulmonaire des souris de ce groupe est de 7 %.
Le huitième groupe (représenté par une colonne contenant des traits continus orientés à droite) est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), enrichi en spermine (334 mg/ kg d'aliment soit 1650 nmole/ g d'aliment) et une eau de boisson contenant de la néomycine (2 mg / ml). La valeur moyenne d'envahissement métastasique pulmonaire des souris de ce groupe est de 7 %.
Le neuvième groupe (représenté par une colonne contenant des petits points) est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), et enrichi en spermine (3340 mg/ kg d'aliment soit 16500 nmole/ g d'aliment). La valeur moyenne d'envahissement métastasique pulmonaire des souris de ce groupe est de 5 %.
Le dixième groupe (représenté par une colonne contenant des gros points) est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), enrichi en spermine (3340 mg / kg d'aliment soit 16500 nmole/ g d'aliment) et une eau de boisson contenant de la néomycine (2 mg / ml). La valeur moyenne d'envahissement métastasique pulmonaire des souris de ce groupe est de 1 %. Figure 3 : Evolution des taux tumoraux de polyamines
Cette figure représente les taux tumoraux de putrescine, spermidine et spermine (en ordonnées) de souris C57BL/6 mâles, en fonction du régime alimentaire (en abscisses) donné aux souris ayant reçues la greffe d'une tumeur solide de cellules du carcinome de Lewis. Les taux tumoraux de putrescine, spermidine et spermine sont mesurés 19 jours après que la greffe a eu lieu.
Figure 3-A : Quatre groupes de cinq souris sont alimentés avec des régimes alimentaires différents 6 jours après que la greffe a eu lieu.
La colonne noire représente les souris alimentées avec un régime contenant un taux normal de polyamines (125 mg/ kg d'aliment soit 861 nmole/g d'aliment).
La colonne blanche représente les souris alimentées avec un régime contenant un taux normal de polyamines (125 mg/ kg d'aliment soit 861 nmole/g d'aliment), et une eau de boisson contenant de la néomycine (2 mg / ml).
La colonne contenant des traits discontinus verticaux représente les souris alimentées avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment).
La colonne contenant des traits discontinus horizontaux représente les souris alimentées avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), et une eau de boisson contenant de la néomycine (2 mg / ml).
Figure 3-B : Six groupes de cinq souris sont alimentés avec des régimes alimentaires différents 6 jours après que la greffe a eu lieu.
La colonne contenant des traits continus verticaux représente les souris alimentées avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), et enrichi en spermine (33,4 mg/ kg d'aliment soit 165 nmole/ g d'aliment).
La colonne contenant des traits continus horizontaux représente les souris alimentées avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), enrichi en spermine (33,4 mg/ kg d'aliment soit 165 nmole/ g d'aliment) et une eau de boisson contenant de la néomycine (2 mg / ml).
La colonne contenant des traits continus orientés à gauche représente les souris alimentées avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment) et enrichi en spermine (334 mg/ kg d'aliment soit 1650 nmole/ g d'aliment).
La colonne contenant des traits continus orientés à droite représente les souris alimentées avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), enrichi en spermine (334 mg/ kg d'aliment soit 1650 nmole/ g d'aliment) et une eau de boisson contenant de la néomycine (2 mg / ml).
La colonne contenant des petits points représente les souris alimentées avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment) et enrichi en spermine (3340 mg/ kg d'aliment soit 16500 nmole/ g d'aliment).
La colonne contenant des gros points représente les souris alimentées avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), enrichi en spermine (3340 mg/ kg d'aliment soit 16500 nmole/ g d'aliment) et une eau de boisson contenant de la néomycine (2 mg / ml).
Figure 4 : Evolution de la masse de la rate
Cette figure représente la masse de la rate (en ordonnées) de souris C57BL/6 mâles, en fonction du régime alimentaire (en abscisses) donné aux souris ayant reçues ou non la greffe d'une tumeur solide de cellules du carcinome de Lewis. La masse de la rate est mesurée 19 jours après que la greffe a eu lieu.
Dix groupes de souris ayant reçu la greffe d'une tumeur solide de cellules du carcinome de Lewis sont alimentés avec des régimes alimentaires différents. Un onzième groupe de souris n'ayant pas reçu de greffe et placé sous un régime alimentaire contenant un taux normal de polyamines, permet d'établir une valeur moyenne de référence de la masse splénique chez les souris ayant servi à cette étude.
Le premier groupe (représenté par une colonne noire) est alimenté avec un régime contenant un taux normal de polyamines (125 mg/ kg d'aliment soit 861 nmole/g d'aliment). La valeur moyenne de la masse splénique des souris de ce groupe est de 171 mg.
Le second groupe (représenté par une colonne blanche) est alimenté avec un régime contenant un taux normal de polyamines (125 mg/ kg d'aliment soit 861 nmole/g d'aliment), et une eau de boisson contenant de la néomycine (2 mg / ml). La valeur moyenne de la masse splénique des souris de ce groupe est de 151 mg.
Le troisième groupe (représenté par une colonne contenant des traits discontinus verticaux) est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment). La valeur moyenne de la masse splénique des souris de ce groupe est de 88 mg.
Le quatrième groupe (représenté par une colonne contenant des traits discontinus horizontaux) est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), et une eau de boisson contenant de la néomycine (2 mg / ml). La valeur moyenne de la masse splénique des souris de ce groupe est de 63 mg.
Le cinquième groupe (représenté par une colonne contenant des traits continus verticaux) est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), et enrichi en spermine (33,4 mg/ kg d'aliment soit 165 nmole/ g d'aliment). La valeur moyenne de la masse splénique des souris de ce groupe est de 93 mg.
Le sixième groupe (représenté par une colonne contenant des traits continus horizontaux) est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), enrichi en spermine (33,4 mg/ kg d'aliment soit 165 nmole/ g d'aliment) et une eau de boisson contenant de la néomycine (2 mg / ml). La valeur moyenne de la masse splénique des souris de ce groupe est de 75 mg.
Le septième groupe (représenté par une colonne contenant des traits continus orientés à gauche) est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), et enrichi en spermine (334 mg/ kg d'aliment soit 1650 nmole/ g d'aliment). La valeur moyenne de la masse splénique des souris de ce groupe est de 98 mg.
Le huitième groupe (représenté par une colonne contenant des traits continus orientés à droite) est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), enrichi en spermine (334 mg/ kg d'aliment soit 1650 nmole/ g d'aliment) et une eau de boisson contenant de la néomycine (2 mg / ml). La valeur moyenne de la masse splénique des souris de ce groupe est de 100 mg.
Le neuvième groupe (représenté par une colonne contenant des petits points) est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), et enrichi en spermine (3340 mg/ kg d'aliment soit 16500 nmole/ g d'aliment). La valeur moyenne de la masse splénique des souris de ce groupe est de 81 mg.
Le dixième groupe (représenté par une colonne contenant des gros points) est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), enrichi en spermine (3340 mg/ kg d'aliment soit 16500 nmole/ g d'aliment) et une eau de boisson contenant de la néomycine (2 mg / ml). La valeur moyenne de la masse splénique des souris de ce groupe est de 42 mg.
Le onzième groupe (représenté par une colonne grise), correspondant aux souris n'ayant pas reçu de greffe, est alimenté avec un régime contenant un taux normal de polyamines (125 mg/ kg d'aliment soit 861 nmole/g d'aliment). La valeur moyenne de la masse splénique des souris de ce groupe est de 61 mg. Exemples
Exemple 1 : Effet du régime alimentaire appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine et enrichi en spermine 1 - Modèle animal
1.1 - Souche murine
Des souris mâles C57BL/6, âgées de 9 semaines et pesant 20g (élevage Janvier, Le Genest St Isle, France) sont acclimatées 1 semaine avant le début de l'étude. La manipulation des animaux est réalisée en accord avec les directives éthique pour l'expérimentation et selon les recommandations de l'Association Européenne de Recherche Biomédical. Les animaux sont enfermés à raison de 5 individus par cage dans des conditions standardisées (21 ± 1°C ; 60% d'humidité relative, cycles de 12h de lumière, 12h d'obscurité), et ont accès à de la nourriture et à de l'eau à volonté. 1.2 - Modèle tumoral
Les cellules de carcinome pulmonaire de Lewis (3LL) ont été obtenues auprès de l'ECACC (European collection of cell cultures) et greffées par injection intramusculaire dans les pattes postérieures de souris mâles C57BL/6 selon la méthode précédemment décrite (Hergueux J. et al., Exp. Cell BioL, 1983, 51(4), 181-191) pour produire des cellules tumorales. Après 20 jours, les cellules tumorales sont collectées et dispersées dans du PBS, comptées et diluées pour atteindre 0,5 x lO6 cellules / 100 μί, avant d'être greffées dans la patte arrière droite des souris. Les souris greffées sont réparties aléatoirement dans les cages par groupe de 5 individus.
La tumeur devient palpable quelques jours après que la greffe a eu lieu. Les animaux sont sacrifiés 19 jours après la greffe de cellules tumorales.
2 - Alimentation
La nourriture appauvrie en cadavérine, putrescine et spermidine est commercialisée sous la marque CASTASE™ par la société Nutrialys (Saint-Grégoire, France). Cette nourriture appauvrie en polyamines contient moins de 51 μg de polyamines /kg d'aliment.
La nourriture pour rongeur contenant un taux normal de polyamines (125 mg de polyamines par kilo d'aliment soit 861 nmole de polyamines/g d'aliment) correspond à une alimentation standard du commerce (UAR, usine d'alimentation standard).
Les produits sont distribués aux animaux selon leur profil et leur besoin nutritionnel. Une souris consomme environ 2 grammes par jour d'alimentation.
Le traitement est mis en place 6 jours après la greffe, lorsque la tumeur est palpable et est administré 7 jours sur 7 et comprend l'apport ad libitum de l'alimentation normale ou des solutés à tester ainsi que l'eau de boisson.
3 - Résultats
3.1 - Croissance tumorale Le modèle animal (souris C57BL/6) et le modèle tumoral (carcinome de Lewis) sont décrits précédemment. Les souris sont greffées avec 0,5 x lO6 cellules tumorales, par injection intramusculaire dans l'une des pattes arrières.
La croissance de la tumeur est quantifiée 6, 8, 11 , 14 et 18 jours après que la greffe a eu lieu par mesure du volume de la tumeur, selon la méthode précédemment décrite (Moulinoux et al, Int J. Cancer, 1984, 34(2), 277-281).
Les souris sont divisées en dix groupes et des régimes alimentaires différents sont administrés à chaque groupe.
Le premier groupe est alimenté avec un régime contenant un taux normal de polyamines (125 mg / kg d'aliment soit 861 nmole / g d'aliment).
Le deuxième groupe est alimenté avec un régime contenant un taux normal de polyamines et une eau de boisson contenant de la néomycine (2 mg / ml).
Le troisième groupe est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment).
Le quatrième groupe est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine, et une eau de boisson contenant de la néomycine (2 mg / ml).
Le cinquième groupe est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), et enrichi en spermine (33,4 mg/ kg d'aliment soit 165 nmole/ g d'aliment).
Le sixième groupe est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), enrichi en spermine (33,4 mg/ kg d'aliment soit 165 nmole/ g d'aliment) et une eau de boisson contenant de la néomycine (2 mg / ml).
Le septième groupe est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), et enrichi en spermine (334 mg/ kg d'aliment soit 1650 nmole/ g d'aliment).
Le huitième groupe est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), enrichi en spermine (334 mg/ kg d'aliment soit 1650 nmole/ g d'aliment) et une eau de boisson contenant de la néomycine (2 mg / ml).
Le neuvième groupe est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), et enrichi en spermine (3340 mg/ kg d'aliment soit 16500 nmole/ g d'aliment). Le dixième groupe est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), enrichi en spermine (3340 mg/ kg d'aliment soit 16500 nmole/ g d'aliment) et une eau de boisson contenant de la néomycine (2 mg / ml).
La néomycine est diluée dans l'eau de boisson (0,2% m/v) que les animaux soient nourris avec une alimentation sous une forme solide de type croquette, ou avec une alimentation sous une forme liquide ou semi-liquide.
L'évolution du volume des tumeurs (en cm3) est indiquée sur les figures 1-A pour les animaux des groupes 1 à 4 et sur la figure 1-B pour les animaux des groupes 5 à 10.
La néomycine n'a aucun effet sur l'évolution du volume tumoral lorsqu'elle est administrée dans l'eau de boisson sur la base d'un régime contenant un taux normal de polyamines.
Le régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine provoque une diminution de 20% de la croissance tumorale à J19. Cette diminution atteint 35% lorsque la néomycine est ajoutée à ce régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (Figure 1-A).
Une supplémentation en spermine du régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine augmente de façon dose-dépendante l'effet antitumorale de ce régime de respectivement 7%, de 17% et de 37% pour les doses de spermine de 33,4, 334 et 3340 mg /kg d'aliment (figure 1-B).
3.2 - Envahissement métastasique pulmonaire
Immédiatement après le sacrifice des animaux, les poumons sont prélevés, conservés dans du formol à 10% et les métastases pulmonaires sont visualisées à l'aide d'une loupe binoculaire. La dissémination métastasique est exprimée en pourcentage d'envahissement par rapport à la surface totale des poumons. Le pourcentage d'envahissement métastasique a été mesuré chez les souris des dix groupes précédemment décrits, ayant reçu chacun une alimentation distinctes. Les résultats sont illustrés à la figure 2.
La néomycine apportée en complément d'un régime contenant un taux normal de polyamines provoque une diminution de 60% de l'envahissement métastasique par rapport à celui observé chez les souris n'ayant pas reçu cet antibiotique. Le régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine provoque une diminution de 77% de l'envahissement métastasique par rapport à celui observé chez les souris ayant reçu d'un régime contenant un taux normal de polyamines. L'ajout de néomycine à un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine n' entraine aucun bénéfice supplémentaire.
Une supplémentation en spermine du régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine ne semble apporter aucun bénéfice en termes de processus métastasique. A l'inverse, pour une dose de spermine de 33,4 mg/kg d'aliment, l'ajout de spermine contribue à une expansion du processus métastasique. Cet effet disparait pour des doses de spermine supérieures à 33,4 mg/kg d'aliment. L'envahissement métastasique pulmonaire est quasi nul lorsque la néomycine est associée au régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine et enrichi par 3340 mg/kg de composition.
3.3 - Taux tumoraux de polyamines
Le taux de polyamines est mesuré dans la tumeur formée au site d'inoculation des cellules de carcinome de Lewis. La tumeur est lavée puis les cellules qui la composent sont dispersées à l'aide d'un homogénéisateur de type Polytron®, en présence d'acide perchlorique 0,2M. Après une incubation d'au moins 16h à 4°C, les cellules sont centrifugées 15 minutes à 3500 rpm à 4°C. Le surnageant qui contient les polyamines est prélevé et sert au dosage des polyamines. Les polyamines sont dosées selon la méthode précédemment décrite (Seiler N et al, 1996, Cancer Research, 56, 5624-5630). Les trois principales polyamines présentes chez les mammifères (putrescine, spermidine et spermine) ont été dosées pour les dix groupes de souris ayant reçu chacun une alimentation distincte. Les résultats sont illustrés à la figure 3.
La néomycine provoque une diminution de 17% du taux de putrescine, une augmentation de 7% du taux de spermine et est sans effet sur le taux de spermidine sur la base d'un régime alimentaire normal. A l'inverse, néomycine provoque une augmentation de 17% du taux de putrescine, une augmentation de 24% du taux de spermidine et une diminution de 5% du taux de spermine sur la base d'un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine.
Le régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine induit une augmentation respectivement de 17% et de 24% des taux tumoraux de putrescine et spermidine. Ce régime n'a aucun effet sur le taux tumoral de spermine. Une supplémentation en spermine du régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine induit des variations des taux tumoraux de putrescine, spermidine et spermine.
A la dose de 33,4 mg de spermine /kg d'aliment (soit 165 nmole/ g d'aliment), le taux tumoral de putrescine augmente de 17%, le taux tumoral de spermidine augmente de 25% et le taux tumoral de spermine diminue de 6% par rapport aux taux tumoraux de ces deux polyamines chez les souris ayant reçu un régime contenant un taux normal de polyamines.
A la dose 334 mg de spermine /kg d'aliment (soit 1650 nmole/ g d'aliment), le taux tumoral de spermidine augmente de 32% et le taux tumoral de spermine augmente de 12%) par rapport aux taux tumoraux de ces deux polyamines chez les souris ayant reçu un régime contenant un taux normal de polyamines. Le taux tumoral de putrescine reste inchangé.
A la dose 3340 mg de spermine /kg d'aliment (soit 16500 nmole/ g d'aliment), le taux tumoral de putrescine diminue de 50%>, le taux tumoral de spermidine diminue de 19% et le taux tumoral de spermine augmente de 25% par rapport aux taux tumoraux de ces deux polyamines chez les souris ayant reçu un régime contenant un taux normal de polyamines. 3.4 - Masse splénique
Après avoir procéder à l'euthanasie des animaux, la rate est prélevée sur les souris et pesée à l'aide d'une balance de précision.
En plus des dix groupes de souris ayant reçu chacun un régime alimentaire distinct, comme précédemment décrit, un onzième groupe d'animaux a été inclus pour cette étude. Il s'agit de souris mâles C57BL/6 présentant les mêmes caractéristiques physiologiques de bases que les souris des dix autres groupes mais qui n'ont pas subi de greffe de cellules de carcinome de Lewis. Les souris de ce onzième groupe ont été alimentées avec le régime contenant un taux normal de polyamines. La masse splénique de ces souris saines (61 mg) sert de référence pour un animal ne présentant aucun signe d'inflammation.
Les souris ayant reçu une greffe de cellules de carcinome de Lewis et placé sous un régime contenant un taux normal de polyamines, présentent une masse splénique trois fois supérieure (171 mg) à celle des souris saines nourries avec le même régime alimentaire.
La néomycine provoque une diminution de la masse splénique indépendamment de la nature du régime alimentaire ingéré par les souris.
Le régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine induit une diminution de l'ordre de 50% de la masse splénique chez ces souris en comparaison avec les souris greffées ayant reçu un régime contenant un taux normal de polyamines.
Jusqu'à une concentration de 334 mg/kg d'aliment (soit 1650 nmole/ g d'aliment), l'enrichissement en spermine du régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine n'a aucun effet supplémentaire en termes de diminution de la masse splénique et donc d'inflammation chez ces animaux porteurs d'une tumeur.
La néomycine associée à un enrichissement du régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine par 3340 mg de spermine /kg d'aliment (soit 16500 nmole/ g d'aliment) entraine une diminution de la masse splénique en deçà de celle des animaux sains.
Exemple 2 : Effet du régime alimentaire appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine et enrichi en spermine en association avec un anticancéreux 1 - Modèle animal
1.1 - Souche murine
Des souris mâles C57BL/6, âgées de 9 semaines et pesant 20g (élevage Janvier, Le Genest St Isle, France) sont acclimatées 1 semaine avant le début de l'étude. La manipulation des animaux est réalisée en accord avec les directives éthique pour l'expérimentation et selon les recommandations de l'Association Européenne de Recherche Biomédical.
Les animaux sont enfermés à raison de 5 individus par cage dans des conditions standardisées (21 ± 1°C ; 60% d'humidité relative, cycles de 12h de lumière, 12h d'obscurité), et ont accès à de la nourriture et à de l'eau à volonté.
1.2 - Modèle tumoral
Les cellules de carcinome pulmonaire de Lewis (3LL) ont été obtenues auprès de l'ECACC (European collection of cell cultures) et greffées par injection intramusculaire dans les pattes postérieures de souris mâles C57BL/6 selon la méthode précédemment décrite (Hergueux J. et al., Exp. Cell BioL, 1983, 51(4), 181-191) pour produire des cellules tumorales. Après 20 jours, les cellules tumorales sont collectées et dispersées dans du PBS, comptées et diluées pour atteindre 0,5 x lO6 cellules / 100 μί, avant d'être greffées dans la patte arrière droite des souris. Les souris greffées sont réparties aléatoirement dans les cages par groupe de 5 individus.
La tumeur devient palpable quelques jours après que la greffe a eu lieu. Les animaux sont sacrifiés 19 jours après la greffe de cellules tumorales. 2 - Alimentation
La nourriture appauvrie en cadavérine, putrescine et spermidine est commercialisée sous la marque CASTASE™ par la société Nutrialys (Saint-Grégoire, France). Cette nourriture appauvrie en polyamines contient moins de 51 μg de polyamines /kg d'aliment.
La nourriture pour rongeur contenant un taux normal de polyamines (125 mg de polyamines par kilo d'aliment soit 861 nmole de polyamines/g d'aliment) correspond à une alimentation standard du commerce (UAR, usine d'alimentation standard).
Les produits sont distribués aux animaux selon leur profil et leur besoin nutritionnel. Une souris consomme environ 2 grammes par jour d'alimentation.
Le traitement est mis en place 6 jours après la greffe, lorsque la tumeur est palpable et est administré 7 jours sur 7 et comprend l'apport ad libitum de l'alimentation normale ou des solutés à tester ainsi que l'eau de boisson.
3 - Résultats
3.1 - Croissance tumorale
Le modèle animal (souris C57BL/6) et le modèle tumoral (carcinome de Lewis) sont décrits précédemment. Les souris sont greffées avec 0,5 x lO6 cellules tumorales, par injection intramusculaire dans l'une des pattes arrières.
La croissance de la tumeur est quantifiée 6, 8, 11 , 14 et 18 jours après que la greffe a eu lieu par mesure du volume de la tumeur, selon la méthode précédemment décrite (Moulinoux et al, Int J. Cancer, 1984, 34(2), 277-281).
Les souris sont divisées en quinze groupes et des régimes alimentaires différents sont administrés à chaque groupe. Le premier groupe est alimenté avec un régime contenant un taux normal de polyamines (125 mg / kg d'aliment soit 861 nmole / g d'aliment).
Le deuxième groupe est alimenté avec un régime contenant un taux normal de polyamines et une dose de cyclophosphamide de 9 mg.kg"1. semaine"1.
Le troisième groupe est alimenté avec un régime contenant un taux normal de polyamines et une dose de cyclophosphamide de 90 mg.kg"1. semaine"1.
Le quatrième groupe est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment).
Le cinquième groupe est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment) et une dose de cyclophosphamide de 9 mg.kg"1. semaine"1.
Le sixième groupe est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment) et une dose de cyclophosphamide de 90 mg.kg"1. semaine"1.
Le septième groupe est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), et enrichi en spermine (33,4 mg/ kg d'aliment soit 165 nmole/ g d'aliment).
Le huitième groupe est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), enrichi en spermine (334 mg/ kg d'aliment soit 1650 nmole/ g d'aliment).
Le neuvième groupe est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), et enrichi en spermine (3340 mg/ kg d'aliment soit 16500 nmole/ g d'aliment).
Le dixième groupe est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), enrichi en spermine (33,4 mg/ kg d'aliment soit 165 nmole/ g d'aliment) et une dose de cyclophosphamide de 9 mg.kg"1. semaine"1.
Le onzième groupe est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), enrichi en spermine (334 mg/ kg d'aliment soit 1650 nmole/ g d'aliment) et une dose de cyclophosphamide de 9 mg.kg"1. semaine"1.
Le douzième groupe est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), enrichi en spermine (3340 mg/ kg d'aliment soit 16500 nmole/ g d'aliment) et une dose de cyclophosphamide de 9 mg.kg"1. semaine"1.
Le treizième groupe est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), enrichi en spermine (33,4 mg/ kg d'aliment soit 165 nmole/ g d'aliment) et une dose de cyclophosphamide de 90 mg.kg"1. semaine"1.
Le quartozième groupe est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), enrichi en spermine (334 mg/ kg d'aliment soit 1650 nmole/ g d'aliment) et une dose de cyclophosphamide de 90 mg.kg"1. semaine"1.
Le quinzième groupe est alimenté avec un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine (51 μg/ kg d'aliment soit 0,350 nmole/ g d'aliment), enrichi en spermine (3340 mg/ kg d'aliment soit 16500 nmole/ g d'aliment) et une dose de cyclophosphamide de 90 mg.kg"1. semaine"1.
L'évolution du volume des tumeurs (en cm3) est indiquée dans le tableau 1 pour les animaux des groupes 1 à 9.
Tableau 1 : Evolution du volume tumoral
S'agissant des groupes 10, 11 et 12, on observe une amélioration de 5 à 30 % par rapport au groupe 5.
S'agissant des groupes 13, 14 et 15, on observe une amélioration de 1 à 10 % par rapport au groupe 6.
La cyclophosphamide (Endoxan) administrée à 90 mg.kg"1. semaine"1 possède un effet anti-prolifératif important quelle que soit l'alimentation fournie. Le pourcentage d'inhibition est de l'ordre de 80 à 95 %.
Une faible dose de cyclophosphamide (Endoxan®) de 9 mg.kg"1. semaine"1 associé à un régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine permet d'augmenter l'efficacité antitumorale de 25 % par rapport à un régime contenant un taux normal de polyamines (125 mg / kg d'aliment soit 861 nmole / g d'aliment) associé à 9 mg.kg"1. semaine"1 de cyclophosphamide.
Ce régime appauvri en cadavérine, putrescine et spermidine enrichi en spermine permet d'augmenter de façon dose-dépendante l'effet antitumorale de la cyclophosphamide à 9 mg.kg"1. semaine"1 de 5 à 30 %, selon les doses de spermine.
Ce même régime permet d'augmenter de façon dose-dépendante l'effet antitumorale de la cyclophosphamide à 90 mg.kg"1. semaine"1 de 1 à 10 %, selon les doses de spermine.
Ces régimes permettent de potentialiser l'effet antitumoral de la cyclophospamide à une faible dose permettant ainsi de limiter ses effets secondaires.

Claims

REVENDICATIONS
Composition comprenant un mélange de cadavérine, putrescine et spermidine à une concentration variant de 0,3 à 0,6 nmoles par gramme de composition, ladite composition comprenant également de la spermine à une concentration variant de 150 à 17000 nmoles par gramme de composition.
Composition selon la revendication 1, dans laquelle la concentration en putrescine varie de 0,19 à 0,32 nmoles par gramme de composition, et /ou la concentration en cadavérine varie de 0,09 à 0,08 nmoles par gramme de composition, et /ou la concentration en spermidine varie de 0,09 à 0,20 nmoles par gramme de composition.
Composition selon la revendication 1 ou 2, laquelle contient en pourcentage de poids sec par rapport au poids sec total : 10 % à 35 % de lipides, 8 % à 30 % de protéines, 35 % à 80 % de glucides, jusqu'à 10 % d'un mélange constitué de vitamines, de minéraux et d'électrolytes.
Composition selon l'une des revendications 1 à 3, laquelle contient éventuellement au moins un inhibiteur de la synthèse intracellulaire des polyamines, notamment choisi parmi les inhibiteurs de l'ornithine décarboxylase, de la spermidine-spermine Nl-acétyltransférase ou de la spermine oxydase, et/ou au moins un inhibiteur du transport des polyamines, à raison d'au plus 15 % en poids par rapport au poids sec total de la composition.
Composition selon l'une des revendications 1 à 4, laquelle contient au moins un antibiotique, et/ou est enrichie en vitamines.
Composition selon l'une des revendications 3 à 5, dans laquelle les glucides appartiennent au groupe comprenant les polymères de glucose, les maltodextrines, le saccharose, les amidons modifiés, le glucose monohydrate, le sirop de glucose déshydraté, le monostéarate de glycérol et leurs mélanges, et/ou dans laquelle les protéines appartiennent au groupe comprenant les protéines solubles du lait, les protéines de soja, les peptides de sérum, le blanc d'œuf en poudre, le caséinate de potassium, les peptides non phosphorylés, les peptides de caséine, le caséinate mixte, l'isolât de soja et leurs mélanges, et/ou dans laquelle les lipides appartiennent au groupe comprenant l'huile de beurre, l'huile d'arachide, les triglycérides à chaîne moyenne, l'huile de pépins de raisin, l'huile de soja, l'huile d'onagre et leurs mélanges, et/ou dans laquelle les lipides sont constitués par un mélange d'au moins une huile d'origine animale, d'au moins une huile d'origine végétale et de stéarate de glycérol.
Composition selon l'une des revendications 1 à 6, laquelle composition constitue la ration journalière alimentaire d'un être humain et en ce qu'elle comprend:
- de 75 g à 500 g de glucides,
- de 20 g à 185 g de lipides,
- de 20 g à 225 g de protéines,
- des vitamines, des minéraux et des électrolytes en quantités suffisantes pour répondre aux besoins nutritionnels journaliers d'un être humain,
- et éventuellement un inhibiteur de la synthèse intracellulaire des polyamines à raison de moins de 50 g et préférentiellement à raison de 1 à 10 g par jour, ou, laquelle composition est un sous-multiple d'une ration journalière alimentaire d'un être humain et en ce qu'elle comprend :
- de 75/X g à 500 X g de glucides,
- de 20/X g à 185/X g de lipides,
- de 20/X g à 225/X g de protéines,
- des vitamines, des minéraux et des électrolytes en quantités suffisantes pour répondre partiellement aux besoins nutritionnels journaliers d'un être humain,
- et éventuellement un inhibiteur de la synthèse intracellulaire des polyamines à raison de moins de 50/X g et préférentiellement à raison de 1/X à 10 X g par jour, et X étant un entier compris entre 2 et 8 et correspondant au nombre de rations devant être ingérées par le patient pour satisfaire ses besoins nutritionnels journaliers.
Composition selon l'une des revendications 1 à 7, laquelle composition se présente sous une forme sèche à dissoudre extemporanément dans un véhicule neutre. Composition selon l'une des revendications 1 à 8 pour son utilisation en tant médicament. 10. Préparation pharmaceutique comprenant une composition selon l'une des revendications 1 à 9.
11. Composition selon l'une des revendications 1 à 8 pour son utilisation en tant que complément ou substitut alimentaire, ou en tant que complément nutraceutique.
12. Composition selon l'une des revendications 1 à 9 pour son utilisation dans le traitement, chez un patient, de pathologies liées à l'hyperprolifération cellulaire, ou pour son utilisation dans le traitement, chez un patient, du cancer. 13. Composition pour son utilisation selon la revendication 12, dans laquelle le traitement s'effectue en administrant une dose unitaire variant de 6,7 mg à 670 mg de spermine.
14. Composition pour son utilisation selon la revendication 12, dans laquelle la composition est administrée au patient selon le schéma suivant:
(i) administration d'une première dose de la composition de l'invention pendant une première période de temps, et consécutivement,
(ii) administration d'une seconde dose de la composition de l'invention pendant une seconde période de temps, la susdite seconde dose étant ajustée en fonction de la réaction du patient à la première, et consécutivement,
(iii) administration d'une troisième dose de la composition de l'invention pendant une troisième période de temps, la susdite troisième dose étant ajustée en fonction de la réaction du patient à la seconde. 15. Composition pour son utilisation selon la revendication 12, dans laquelle :
- la première période de temps varie de 7 à 14 jours, notamment 7 jours, et ou
- la seconde période de temps varie de 14 à 21 jours, notamment 14 jours, et ou
- la troisième période de temps varie de 28 à 63 jours, notamment 63 jours.
16. Composition pour son utilisation selon la revendication 12, dans laquelle:
- la première dose de polyamines variant de 6,7 mg à 5,3 g de spermine/j, et
- la seconde dose de polyamines variant de 6,7 mg à 5,3 g de spermine /j, et
- la troisième dose de polyamines variant de 6,7 mg à 5,3 g de spermine /j.
17. Composition comprenant :
- un mélange de cadavérine, putrescine et spermidine à une concentration variant de 0,3 à 0,6 nmoles par gramme de composition,
- de la spermine à une concentration variant de 150 à 17000 nmoles par gramme de composition,
pour son utilisation dans le traitement chez un patient de pathologies liées à l'hyperprolifération cellulaire, la quantité totale de polyamines bio logiquement actives ingérées par jour par le patient ne dépassant pas 11334 nanomoles par kcal de composition ingérée, notamment 5000 nanomoles par kcal de composition ingérée, notamment 1000 nanomoles par kcal de composition ingérée, notamment 100 nanomoles par kcal de composition ingérée.
18. Combinaison d'une composition selon la revendication 17 et d'un agent chimiothérapique pour son utilisation simultanée, séparée ou successive dans le traitement de pathologies liées à l'hyperprolifération cellulaire.
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Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
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US11517541B2 (en) 2017-04-20 2022-12-06 Geneheal Biotechnology Co., Ltd. Applications of spermidine and its derivatives
EP3613416B1 (fr) 2017-04-20 2021-12-15 Geneheal Biotechnology Co., Ltd. Application de la spermine et de ses dérivés dans la préparation d'un médicament anticancéreux
EP3830300A1 (fr) 2018-07-31 2021-06-09 Debreceni Egyetem Traitement et diagnostic du cancer du sein
CN110214869A (zh) * 2019-07-03 2019-09-10 四川农业大学 一种促进公猪睾丸细胞增殖发育的复合添加剂及制备方法

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2706255B1 (fr) 1993-06-17 1995-10-27 Univ Rennes Composition à usage alimentaire et/ou pharmaceutique pauvre en polyamines et applications thérapeutiques.
WO1997011691A1 (fr) * 1995-09-29 1997-04-03 Children's Medical Center Corporation Traitement du cancer de la prostate chez l'homme
US7425579B2 (en) 1998-04-21 2008-09-16 Universite Laval Methods for inhibiting activity of polyamine transporters
AU8657398A (en) 1998-07-30 2000-02-21 Picower Institute For Medical Research, The Immunotherapeutic anti-cancer pharmaceutical compositions
JP2004506683A (ja) 2000-08-24 2004-03-04 ザ　リージェンツ　オブ　ザ　ユニバーシティ　オブ　カリフォルニア α−ジフルオロメチルオルニチン（ＤＦＭＯ）は、ヒト前立腺におけるポリアミンレベルを抑制する
FR2858231B1 (fr) * 2003-07-31 2006-02-10 Univ Rennes Utilisation nouvelle d'une composition alimentaire a usage humain pauvre en polyamines pour la realisation d'un aliment therapeutique
FR2896127B1 (fr) * 2006-01-17 2008-04-11 Univ Rennes I Etablissement Pu Utilisation nouvelle d'une composition alimentaire a usage humain ou veterinaire pauvre en polyamines pour la realisation d'un aliment therapeutique
JP4935173B2 (ja) * 2006-04-26 2012-05-23 東洋紡績株式会社 植物からのポリアミン組成物の調製方法
KR20090027896A (ko) * 2007-09-13 2009-03-18 한국과학기술연구원 아민 카르바밀레이티드 유도체화와액체크로마토그래피/전기분무-이중질량분석기를 이용한인체의 뇨 또는 혈청에서의 폴리아민 검출 방법
US9212131B2 (en) 2009-06-19 2015-12-15 University Of Central Florida Research Foundation, Inc. Polyamine transport inhibitors as novel therapeutics
US20110236512A1 (en) * 2009-09-28 2011-09-29 Toyo Boseki Kabushiki Kaisha Stress-reducing agent including plant-derived polyamine-containing extract serving as active component

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
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