Biomarker für die Diagnose von Pankreaskrebs
Beschreibung
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Diagnose von Pankreaskrebs (synonym: Bauspeicheldrüsenkrebs, Pankreaskarzinom) (PaCa) oder dessen Vorläufer- und/oder Begleiterkrankungen, insbesondere PDAC (Pancreatic ductal adenocarcinoma) , PanIN (Pankreatische intraepitheliale
Neoplasien) , Pankreasläsionen, CP (Chronische Pankreatitis) , einschließlich endokriner Tumoren der Pankreas, wobei eine Bestimmung mittels ausgewählten Biomarkern erfolgt. Ferner betrifft die Erfindung hierzu geeignete Kombinationen von Biomarkern, insbesondere zur in-vitro Diagnostik.
Für Pankreaskrebs ist die 5 Jahr-Überlebensrate mit ca. 1 % die niedrigste Rate unter allen Krebsarten (Parkin, D. M., F. Bray, et al. (2001) . "Estimating the world Cancer bürden: Globocan 2000." Int J Cancer 94(2): 153-6). Eine frühzeitige Diagnose könnte die 5 Jahr-Überlebensrate auf 40 % erhöhen (Yeo, C. J. and J. L. Cameron (1998) . "Prognostic factors in ductal pancreatic Cancer." Langenbecks Arch Surg 383(2): 129- 33) . Zur Diagnose sind daher ebenfalls die Vorläufererkrankungen von Pankreaskrebs heranzuziehen, solche wie PDAC (Pancreatic ductal adenocarcinoma) , PanIN (Pankreatische intraepitheliale Neoplasien), Pankreasläsionen, CP (Chronische Pankreatitis) , einschließlich endokrine Tumore der Pankreas. Insbesondere PanIN betrifft Pankreasläsionen und
unterteilt diese morphologisch in Panln IA, IB, 2 und 3 (Kern, S., R. Hruban, et al. (2001). "A white paper: the product of a pancreas Cancer think tank." Cancer Res 61(12): 4923-32). Pankreasläsionen sind ebenfalls für CP beschrieben. Ebenfalls relevant sind endokrine (benignen oder maligne) Tumoren der Pankreas, insbesondere neuroendokrine Tumore.
Zwecks einer geeigneten Therapie von Pankreaskrebs oder dessen Vorläufer- und/oder Begleiterkrankungen, insbesondere PDAC (Pancreatic ductal adenocarcinoma) , PanIN (Pankreatische intraepitheliale Neoplasien) , Pankreasläsionen, CP (Chronische Pankreatitis) , einschließlich endokriner Tumoren der Pankreas, bedarf es einer frühen Diagnose und Differenzierung in Verbindung mit der Notwendigkeit klinische Entscheidungen zu treffen.
Nachteilig an bekannten Diagnoseverfahren unter Verwendung der bisher bekannten Markern ist jedoch, dass eine frühzeitige und vollständige Erfassung von Risikopatienten nicht gelingt und daher eine Diagnose nur ungenügend oder gar zu spät erfolgt.
Eine der Erfindung zugrunde liegende Aufgabe besteht daher darin, ein Verfahren zur Diagnose von Pankreaskrebs oder dessen Vorläufer- und/oder Begleiterkrankungen zu entwickeln, das eine verbesserte frühzeitige Diagnose sowie verbesserte Erfassung von Risikopatienten ermöglicht und den Therapieerfolg verbessert.
Ferner ist nachteilig, dass im Stand der Technik zumeist keine hinreichende Sensitivität und/oder Spezifität der Marker erreicht wird. Zum Beispiel besteht eine wesentliche Schwierigkeit in der Frühdiagnose von PDAC im Fehlen eines spezifischen Biomarkers . Der am meisten verwendete
Serumbiomarker für Pankreaskrebs ist C-19-9, wobei die Spezifität nur 60-90% beträgt, da dieser Marker auch bei anderen Erkrankungen, besonders bei der chronischen Pankreatitis, im Blut nachweisbar ist (Banfi et al. (1996) CA 19.9, CA 242 and CEA in the diagnosis and follow-up of pancreatic Cancer, Int J Biol Markers, 77-81, Banfi et al (1993) Behavior of tumor markers CA19.9, CA195, CAM43, CA242, and TPS in the diagnosis and follow-up^ of pancreatic Cancer, Clin Chem, 420-3) .
Die Aufgabe wird durch ein Verfahren zur Diagnose von Pankreaskrebs oder dessen Vorläufer- und/oder Begleiterkrankungen gelöst, wobei eine Bestimmung mindestens eines der Polypeptide / Proteine ausgewählt aus der Gruppe a.) Keratin 8 protein (SEQ ID No. 1), Vimentin (SEQ ID No. 2), Mitochondrial malate dehydrogenase (SEQ ID No. 3), Beta tropomyosin (SEQ ID No. 4), ACTGl protein (SEQ ID No. 5), Thioredoxin delta 3 (SEQ ID No. 6), B Chain B Triosephosphate Isomerase (SEQ ID No. 7), Annexin A2 (SEQ ID No. 8), TPM4-ALK fusion oncoprotein type 2 (SEQ ID No. 9), Peptidylprolyl isomerase A (SEQ ID No. 10), Smooth muscle mysoin light chain (SEQ ID No. 11), Desmin (SEQ ID No. 12), Major vault protein 1 (SEQ ID No. 13), Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein Al
(SEQ ID No. 14), SlOOAlO (SEQ ID No. 15), EFla-like protein (SEQ ID No. 16), Regulatory myosin light chain long version (SEQ ID No. 17), Tropomyosin 1 alpha chain isoform 3 (SEQ ID No. 18), Tropomyosin 2 (beta) isoform 2 (SEQ ID No. 19), Myosin regulatory light chain MRCL3 (SEQ ID No. 20), Alpha-2- globin (SEQ ID No. 21), Tropomyosin 4 (SEQ ID No. 22), Transgelin (SEQ ID No. 23), Keratin 7 (SEQ ID No. 24), ACTB protein (SEQ ID No. 25), M2-type pyruvate kinase (SEQ ID No. 26) , Actin related protein 2/3 complex subunit 5 (SEQ ID No. 27), Anterior gradient 2 homolog (AGR 2) (SEQ ID No.28),
Stratifin (14-3-3 sigma) (SEQ ID No. 29), Coactosin-like 1 (SEQ ID No. 30), Chaperonin heat shock 6OkD protein 1 (SEQ ID No. 31), Transgelin 2 (SEQ ID No. 32), Aldehyde dehydrogenase 1 (SEQ ID No. 33), Sarcomeric tropomyosin kappa (SEQ ID No. 34), Annexin A3 (SEQ ID No. 35), Delta-globin (SEQ ID No. 36), Serum albumin (SEQ ID No. 37), Protein PP4-X (Annexin A4) (SEQ ID No. 38), Crystallin (SEQ ID No. 39), Myosin regulatory light chain MRCL3 (SEQ ID No. 40) oder Gruppe b.) aldehyde dehydrogenase 1 (SEQ ID No. 41), Aldehyde dehydrogenase IAl (SEQ ID No. 42), T-complex protein 1 subunit beta (SEQ ID No. 43), Apolipoprotein A4 (SEQ ID No. 44), Malate dehydrogenase mitochondrial precursor (SEQ ID No. 45), Voltage-dependent anion selective Channel protein 1 (SEQ ID No. 46), glyceraldehydes-3-phosphate dehydrogenase (SEQ ID No. 47), uracil DNA glycosylase (SEQ ID No. 48), aging-associated- associated 9 protein (SEQ ID No. 49), Nipsnap homolog 3A (SEQ ID No. 50), peroxiredoxin 2 isoform b (SEQ ID No. 51), thiol-
specific antioxidant protein (SEQ ID No. 52), enhancer protein (SEQ ID No. 53), Chromosome 17 open reading frame 25 (SEQ ID No. 54), hypothetical protein LOC51031 (SEQ ID No. 55), CGI- 150 protein (SEQ ID No. 56), Gelsolin isoform a (SEQ ID No. 57), Gelsolin precursor (SEQ ID No. 58), ATP-specific succinyl-CoA synthetase beta subunit (SEQ ID No. 59), TAR DNA binding protein (SEQ ID No. 60), 2, 4-dienoyl-CoA reductase mitochondrial precursor (SEQ ID No. 61), MDH2 (SEQ ID No. 62), heat shock protein beta-1 (SEQ ID No. 63), mitochondrial malate dehydrogenase precursor MDH-2 (SEQ ID No. 64), prostate and colon associated protein (SEQ ID No. 65) , secretagogin (SEQ ID No. 66), TPD 52 (SEQ ID No. 67), tumor protein D52 (SEQ ID No. 68), N8 protein long isoform (Fragment) variant (SEQ ID No. 69), tumor protein D52 isoform 2 (SEQ ID No. 70), triosephosphate isomerase 1 (SEQ ID No. 71) oder jeweils Fragmente oder Teilpeptide davon an einem zu untersuchenden Patienten erfolgt (nachstehend erfindungsgemäßes Verfahren) .
Die erfindungsgemäßen Proteine konnten mittels einer differentiellen Proteomanalyse von krankem pankreatischen duktalen Gewebe - fünf Progressionsstadien - im Vergleich zu normalem (gesundem) pankreatischen duktalen Gewebe als potentielle Biomarker identifiziert werden. Hierzu wurden von erkrankten Patienten entsprechende Gewebeproben entnommen. Die Proben wurden in einem Handhomogenisator mit Lysispuffer homogenisiert und von DNA und sonstigem Zellmaterial befreit, um ein Proteinkonzentrat zu erhalten. Die Proteine wurden mit
einem Farbstoff gelabelt und einer 2D-Gelelektrophorese unterworfen mit einer isoelektrischen Fokussierung in der ersten und einer SDS-Gelelektrophorese in der zweiten Dimension.
Die differentielle Darstellung (krank/gesund) ist in den Tabellen (1 bis 3), Beispielen und Abbildungen dargelegt und zeigen unterschiedliche charakteristische Expression (hoch- (up-) und runter- (down-) reguliert, ausgelesen anhand der Spots) .
Die weitere Auswertung erfolgte mit Hilfe von LC-ESI-MS ( /MS) (Flüssigchomatographie-Elektrosprayionisations- Massenspektrometrie) . Dabei wurden zunächst die Proteine im Gel, in dem die Proben zuvor aufgetrennt wurden, mit Hilfe von Trypsin in einzelne Peptidfragmente zerlegt. Diese wurden mit Hilfe von Reversed-Phase HPLC voneinander separiert und massenspektrometrisch untersucht, um die einzelnen Proteine zu identifizieren. Selbstverständlich können hierbei auch andere geeignete massenspektrometrische Verfahren angewandt werden, beispielsweise MALDI-TOF-MS.
Die erfindungsgemäßen Proteine (Biomarker) erweisen sich wie folgt:
Tabelle 1: Gruppe a.) für PanIN
2206 Beta tropomyosin 21 gι|6573280 48 344 47 299 280 gi|4022610
1962 ACTG1 protein 29 57 395 54 294 110 1
2925 Thioredoxin delta 3 28 22 31 gι|3153859 5 168 57 93 262
B Chain B, Tπosephosphate
2330 gι|999893 65 327 77 386 91 Isomerase gι|1630697
2126 Annexiπ A2 23 57 360 55 298 191 8
TPM4-ALKfusιon gι|1044138
2154 -21 -34 47 355 48 275 498 oncoprotein type 2 6 gι|6220534 2639 Peptidylprolyl isomerase A -23 73 271 79 114 419 9
Smooth muscle mysom light
2765 -41 gι|189022 44 225 47 129 216 chain
821 Vimentin -22 gι|7576229 53 626 51 537 410
Late up-Λtown- regulated spots
999 Desmin 24 30 gι|1408188 53 583 52 535 242 gι|1599047
1243 Major vault protein (MVP) 51 59 536 53 993 31 8
Heterogeneous πuclear gi|1404307
1836 30 81 426 92 387 91 πbonucleoprotein A1 0
3022 S100A10 28 gι|4388970 72 142 75 111 17 gι|2421050
2697 EF1a-lιke protein 210 141 79 254 72 464 49 8
Regulatory myosin light gι|3333806
2711 -19 -21 47 249 46 199 174 chain long version 2 Tropomyosin 1 alpha chain gι|6325289 1926 -21 -26 47 403 46 327 225 isoform 3 6
823 Vimentin -27 -32 gι|7576229 52 624 51 537 485
Tropomyosin 2 (beta) gι|5585970
1738 -30 -26 43 300 46 330 676 isoform 2 3
Myosin regulatory light chain gι|6289669
2649 -18 48 266 45 198 175 MRCL3 7
2946 Alpha-2-globιn -35 gι|1335076 79 164 87 151 397 gι|1280395
2085 Tropomyosin 4 -16 46 367 47 286 403 9
2217 A25074 vimentin -69 gι|7576229 71 344 51 537 245 gι|6220532
2547 Transgelm -27 -18 32 75 285 89 226 647 6
Constant up-Jdown- regulated spots gι|6065572
738 Keratin 7 17 19 40 55 644 54 514 441 3 gι|1527750
1347 ACTB protein 31 42 32 24 59 515 56 402 200 3
2921 Thioredoxin delta 3 19 25 20 14 gι|3153859 50 169 57 93 369 gι|1527750
1276 ACTB protein 39 18 48 59 526 56 402 178 3 gι|3328642
1340 M2-type pyruvate kinase 23 31 60 515 87 580 87 2
Actin related protein 2/3 gι|5620452
2781 20 19 21 19 59 218 56 166 344 complex subunit 5 4 Anterior gradient 2 homolog gι|3718313 2793 60 113 86 38 81 215 95 200 143 (AGR 2) 6
Anterior gradient 2 homolog gι|3718313
2799 33 58 57 54 67 81 211 95 200 40 (AGR 2) 6 gι|1630697
2437 Annexin A2 33 101 69 37 33 55 305 77 386 112 8
2192 Stratifin (14-3-3 sigma) 29 20 40 gι|7981260 46 347 47 278 351 gi|2769562
2843 Coactosm-like 1 24 21 14 1 55 193 54 160 310
Chaperonin, heat shock
734 19 28 gι|6996447 54 645 57 611 222 6OkD protein 1 gι|5596037 2608 Transgelm 2 26 36 66 276 84 224 151 3
791 Aldehyde dehydrogenase 1 -22 -33 -27 -30 -51 gι|2183299 64 634 63 548 78
819 Vimentin -22 -35 -39 -56 -21 gι|7576229 51 625 51 537 345
820 Vimentin -19 -21 -32 -49 gι|7576229 52 625 51 537 410
Sarcomeπc tropomyosin gι|4966001
1828 -29 -32 -30 -24 54 425 45 326 461 kappa, TPM1-kappa 2 1852 gι|1265411
Annexin A3 -17 -27 -43 58 420 56 364 127 5 gι|1846210
2879 Delta-globin -31 -82 -31 76 181 80 161 204
923 Serum albumin -2 1 -2 1 -24 gι|28592 57 602 6 1 694 7 1 1811 Protein PP4-X (Annexin A4) -55 -4 8 -76 gι|189617 59 428 56 36 1 293 2022 Crystailin -80 -14 5 -103 gι|28634 6 1 38 3 55 124 288
Myosm regulatory light chain 2660 -1 8 -2 0 -1 8 gi|2605594 4 9 26 3 46 197 174 MRCL3
NCBI: National Centre for Biotechnology Information
Tabelle 2: Teil der Gruppe b.) für hochregulierte Proteine (Biomarker) in malignen Proben von Tumoren im Pankreas
Tabelle 3: Teil der Gruppe b.) für hochregulierte Proteine (Biomarker) in benignen Proben von Tumoren im Pankreas
Daher betrifft die Erfindung auch solche Aminosäure-Sequenzen (Polypeptide, Proteine), die eine Sequenzidentität oder Homologie von 70% und mehr, vorzugsweise von 80% und mehr, besonders bevorzugt von 90-95% und mehr mit SEQ ID No. 1 bis SEQ ID No. 71 aufweisen. Ebenfalls mit eingeschlossen sind ebenfalls solche analoge Aminosäure-Sequenzen, die aufgrund des Austausches von einer oder mehreren Aminosäure (n) in diesen Sequenzen, dennoch die gewünschte Funktion eines Biomarkers zur Diagnose von Pankreaskrebs gewährleisten. Erfindungsgemäß ausdrücklich eingeschlossen sind insbesondere Teilpeptide oder Fragmente von SEQ ID No. 1 bis SEQ ID No. 71,
In einer weiteren bevorzugten Ausfuhrungsform sind
Kombinationen (Unterkombination aus der obigen Gesamtheit aller erfindungsgemäßen Biomarker) der erfindungsgemäßen Biomarker zur Diagnose vorteilhaft. In der Gruppe a.) sind insbesondere bevorzugt solche Kombination die zumindest Stratifin (14-3-3 sigma) (SEQ ID No. 29) und / oder Vimentin
(SEQ ID No. 2) und / oder Major vault protein 1 (SEQ ID No. 13) und / oder Anterior gradient 2 homolog (AGR 2) (SEQ ID No.28), und / oder SlOOAlO (SEQ ID No. 15) und / oder EFIa- like protein (SEQ ID No. 16) und / oder Annexin A2 (SEQ ID No. 8) und / oder Annexin A4 (SEQ ID No. 38) enthalten.
Der Begriff „Pankreaskrebs" umfasst erfindungsgemäß ebenfalls dessen Vorläufer- und/oder Begleiterkrankungen, insbesondere PDAC (Pancreatic ductal adenocarcinoma) , PanIN (Pankreatische intraepitheliale Neoplasien) , Pankreasläsionen, CP (Chronische Pankreatitis) , einschließlich endokriner Tumoren der Pankreas, insbesondere pankreatische Tumore und pankreatische Neoplasmen.
Die Erfindung betrifft ebenfalls die Identifizierung von Patienten mit erhöhtem Risiko oder/und einer ungünstigen Prognose eines Pankreaskrebs, insbesondere bei symptomatischen und / oder asymptomatischen Patienten.
Das erfindungsgemäße Verfahren ermöglicht daher klinische
Entscheidungen, die zu einem schnellen Therapieerfolg und zur Vermeidung von Todesfällen führen. Solche klinische Entscheidungen umfassen ebenfalls weiterführende Behandlung mittels Arzneimitteln zur Behandlung oder Therapie von Pankreaskrebs.
Daher betrifft die Erfindung ebenfalls ein Verfahren zur Diagnose von Patienten mit Pankreaskrebs zur Durchführung von
klinischen Entscheidungen, wie weiterführende Behandlung und Therapie mittels Arzneimitteln.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens erfolgt die Diagnose zur
Prognose, zur differentialdiagnostischen Früherkennung und Erkennung, zur Beurteilung des Schweregrades und zur therapiebegleitenden Verlaufsbeurteilung.
In einer weiteren bevorzugten Ausführungsform betrifft die Erfindung ein Verfahren zur Diagnostik zur Früh- oder Differentialdiagnose oder Prognose von Pankreaskrebs oder einer Vorläuferkrankheit, wobei eine Bestimmung der Biomarker an einem zu untersuchenden Patienten durchgeführt wird.
In einer Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens wird dem zu untersuchenden Patienten Gewebeproben oder Körperflüssigkeit (Blut, Plasma, Pankreassekret ) entnommen, und die Diagnose erfolgt in vitro/ex vivo, d.h. außerhalb des menschlichen oder tierischen Körpers. Aufgrund der Bestimmung der erfindungsgemäßen Marker wird eine hohe Signifikanz für das Pankreaskrebs oder eine Vorläufer und / oder Begleiterkrankung erzielt und anhand der vorhandenen Menge oder deren Veränderung (Levelierung: Erhöhung / Erniedrigung) in mindestens einer Patientenprobe kann die Diagnose erfolgen.
In einer weiteren Ausführungsform der Erfindung kann das erfindungsgemäße Verfahren im Rahmen einer in-vitro Diagnose
mittels parallelen oder simultanen Bestimmungen der Marker durchgeführt werden (z.B. Multititerplatten mit 96 und mehr Kavitäten) , wobei die Bestimmungen an mindestens einer Patientenprobe durchgeführt werden.
In einer weiteren Ausführungsform der Erfindung kann das erfindungsgemäße Verfahren mit Hilfe einer 2D-Elektrophorese erfolgen, wobei in der ersten Dimension eine isoelektrische Fokussierung, in der zweiten Dimension eine Gelelektrophorese durchgeführt wird (im weitesten Sinne ist hierzu die Proteomforschung („Proteomics") anzuwenden).
In einer weiteren Ausführungsform kann das erfindungsgemäße Verfahren und dessen Bestimmungen mittels einem Schnelltest durchgeführt werden (z.B. lateral-flow Test), sei es in Einzel- oder Multiparameterbestimmung.
In einer weiteren Ausführungsform kann das erfindungsgemäße Verfahren in-vivo durchgeführt werden, wobei die erfindungsgemäßen Biomarker mit einer Sonde, insbesondere ein Antikörper, die ein Kontrastmittel aufweisen markiert und mit einem in der Bildgebung geeignetem Detektor („Molecular Imaging") nachgewiesen werden (Ralph Weissleder, Molecular Imaging in Cancer, Science, Vol. 312, 1168 (2006)).
Ferner betrifft die Erfindung die Verwendung der erfindungsgemäßen Biomarker zur Diagnose und / oder Prognose und/oder zur Früh- oder Differentialdiagnose von Pankreaskrebs
oder dessen Vorläufer- und / oder Begleiterkrankungen.
Eine weitere Aufgabe ist die Bereitstellung einer entsprechenden diagnostischen Vorrichtung zur Durchführung der erfindungsgemäßen Verfahren.
Im Rahmen dieser Erfindung wird unter einer solchen diagnostischen Vorrichtung, insbesondere ein Array oder Assay verstanden (z.B. Immunoassay, ELISA etc.), insbesondere ein Proteinbiochip (US6346413B1. US20050014292) im weitesten Sinne eine Vorrichtung zur Durchführung der erfindungsgemäßen Verfahren.
Die Erfindung betrifft zudem ein Kit zur Durchführung der erfindungsgemäßen Verfahren, insbesondere enthaltend Nachweisreagenzien und weitere Hilfsmittel. Solche Nachweisreagenzien umfassen z.B. Antikörper etc.
Der Nachweis und die Quantifizierung der erfindungsgemäßen Biomarker kann ebenfalls mit Hilfe weiterer, dem Fachmann geläufiger Protein-Diagnoseverfahren durchgeführt werden, insbesondere unter Verwendung radioaktiv oder fluoreszenzmarkierter Antikörper. Zu nennen sind hier insbesondere dazu geeignete bioanalytische Verfahren, wie zum Beispiel Immunhistochemie, Antikörperarrays, Luminex, ELISA, Immunfluoreszenz, Radioimmunoassays sowie weiteren geeigneten bioanalytischen Verfahren, wie zum Beispiel rnassenspektrometrischen Verfahren, z.B. MRM (Multi reaction
monitoring) oder AQUA (absolute Quantification) , mit deren Hilfe die Biomarker quantitativ gemessen werden können, durchgeführt werden.
Nachfolgende Beispiele und Abbildungen dienen zur näheren
Erläuterung der Erfindung, jedoch ohne die Erfindung auf diese Beispiele und Abbildungen zu beschränken.
Beispiele und Abbildungen:
MikrodisSektion
Die Gewebeproben wurden von Patienten gewonnen, die in der Klinik für Allgemeine Chirurgie des Universitätsklinikums Schleswig-Holstein, Campus Kiel (Deutschland) , operiert wurden. Tumorgewebe von duktalen Pankreaskarzinomen und peritumoralem Parenchym wurden unverzüglich postoperativ bei - 800C schockgefroren und gelagert. Für die Darstellung normaler Pankreasgänge und PanINs wurden 5 μm dicke Gefrierschnitte des peritumoralen Pankreasparenchyms angefertigt, diese kurz in Ethanol fixiert (Merck, Darmstadt, Germany) , mit Hämatoxylin- Eosin angefärbt und anschließend von einem Pathologen begutachtet. Die PanINs wurden nach den anerkannten Kriterien (Hruban, R. H., N. V. Adsay, et al. (2001). "Pancreatic intraepithelial neoplasia: a new nomenclature and Classification System for pancreatic duct lesions." Am J Surg Pathol 25(5): 579-86) klassifiziert. Gewebeblöcke, die die erforderten PanIN-Läsionen enthielten wurden in Serien geschnitten (10 μm) . Für die 2-DE wurden die Gewebeschnitte
nur mit Hämatoxilin gefärbt und umgehend bei -200C gelagert. Die PanIN-Läsionen wurden unter einem Mikroskop mit Hilfe einer sterilen Injektionsnadel (size 0.65x25 mm, Fa. Braun, Melsungen, Germany) mikrodisseziert (BH2, Olympus, Wetzlar, Germany) . Vornehmlich wurden mittelgroße interlobuläre Gänge ausgewählt, um eine Kontamination mit periduktalem mesenchymalem und Azinusgewebe zu vermeiden. Die mikrodissezierten Zellen wurden in 100 μl Lysepuffer (TrisCl 30 mM; thiourea 2 M; urea 7 M; CHAPS 4%, pH 8.0) aufgenommen und im Ultraschallbad unmittelbar nach der Mikrodissektion auf Eis gelegt (6 x 10 s pulses; ultrasonic cleaner, VWR Darmstadt, Darmstadt) .
Herstellung des Referenzproteoms Für die Generierung des Referenzproteoms 100 mg Gewebes vom
Adenokarzinom wurden in 148 μl Lysepuffer (TrisCl 30 mM; thiourea 2 M; urea 7 M; CHAPS 4%, pH 8) homogenisiert.
Anschließend wurden die Proben sonifiziert (6 x 10 Pulse, auf
Eis) und zentrifugiert (12.000 x g für 5 min). Die Proteinbestimmung wurde mittels eines Proteinassays durchgeführt (Bio-Rad) .
Proteinlabelling
Die Proben mit jeweils 1000 mikrodissezierter Zellen in 100 μl Lysepuffer wurden durch Zugabe von 2 nmol TCEP reduziert und anschließend bei 370C für Ih im dunkeln inkubiert. Die Sättigungsfarbstoffe, Cy3 und Cy5 wurden zunächst mit DMF (2 nmol/μl; Sigma) verdünnt und dann jeweils 4 nmol zu den
reduzierten Proben zugefügt. Die Inkubation wurde bei 370C für 30 min im dunkeln durchgeführt. Um die Labellingreaktion zu beenden, 10 μl DTT (1.08 g/ml; Bio-Rad) wurden zugefügt. Anschließend wurden die Proben mit jeweils 10 μl Ampholine 2-4 (GE Healthcare) versehen.
Zweidimensionale Gelelektrophorese
Für die Separation der Proteine in der ersten Dimension wurde die Trägerampholyt-basierte IEF (Röhrchengele 20 cm x 1.5 mm) nach Klose und Kobalz eingesetzt (Klose, J. and U. Kobalz (1995). "Two-dimensional electrophoresis of proteins: an updated protocol and implications for a functional analysis of the genome." Electrophoresis 16(6): 1034-59). Nach Ablauf eines 21, 25-stündigen Spannungsprogramms wurden die ausgestoßenen Röhrchengele in Äquillibrierungspuffer (125 mM
Tris, 40% (w/v) Glycerin, 3% (w/v) SDS, 65 mM DTT, pH 6.8) für 10 min inkubiert. Die zweite Dimension wurde in einem Desaphor VA 300 System mit Polyacrylamidgelen (15.2% Acrylamid (total), 1.3% Bisacrylamid) durchgeführt (Klose und Kobalz 1995 (supra) ) . Die Röhrchengele wurden auf die
Polyacrylamidgele (20 cm x 30 cm x 1.5 mm) appliziert und mit 1%-iger Agarose, die 0.01% (w/v) Bromophenolblau Farbstoff enthielt (Riedel deHaen, Seelze, Deutschland) fixiert. Das für die Proteinidentifizierung verwendete Gelsystem (IEF: 20 cm x 1.5 mm, SDS-PAGE: 20 cm x 30 cm x 1.5 mm) wurde unter den gleichen Bedingungen prozessiert. Hierbei wurde das MS- kompatible Silberfärbungsprotokoll nach Nesterenko et al. verwendet (Nesterenko, M. V., M. Tilley, et al. (1994). "A
simple modification of Blum's silver stain method allows for 30 minute detection of proteins in Polyacrylamide gels." J Biochem Biophys Methods 28(3): 239-42).
Bildakquisition und -analyse
Für die Bildakquisition mit Typhoon 9400 Fluoreszenzscanner (Amersham Biosciences/GE Healthcare) verblieben die Gele zwischen den Glasplatten. Die Anregungswellenlänge und die Emissionsfilter wurden spezifisch für die jeweiligen Fluoreszenzfarbstoffe gemäß dem Handbuch ausgewählt. Vor der Bildanalyse mit der DeCyder Software (Amersham Biosciences/GE Healthcare) wurden die Bilder mit der ImageQuant TM Software (Amersham Biosciences/GE Healthcare) zu Recht geschnitten. Die intra-gel Spotdetektion und Quantifizierung wurde mithilfe des Differential In-gel Analysis (DIA) Modus der DeCyder Software durchgeführt. Die geschätzte Spotanzahl wurde auf 3000 gesetzt. Als Ausschlussfilter wurde der Anstieg der Spotflanke (slope) größer als 1,6 gewählt. Für die Bestimmung des Referenzproteoms wurden die Matchingraten zwischen mikrodissektierten PDAC Zellen, einem pankreatischen Zelllinien-Pool und PDAC Tumorgewebe für verschiedene Gelflächen bestimmt.
In-gel Verdau and Proteinidentifizierung mittels nanoLC-ESI- MS/MS
Die Spots wurden aus einem präparativen Gel manuell ausgestochen. Um die Position der Spots im Gel zu bestimmen, wurde nach der Bildakqusition ein maßstabsgerechter
Gelausdruck unter das Gel platziert. Die Spots wurden anschließend im Gel mir Trypsin verdaut (Promega, Mannheim, Deutschland) und die Peptide wie in Schäfer et al. beschrieben extrahiert (Schaefer, H., J. P. Chervet, et al. (2004). "A peptide preconcentration approach for nano-high-performance liquid chromatography to diminish memory effects." Proteomics 4(9): 2541-4; Schaefer, H., K. Marcus, et al. (2003). "Identification of phosphorylation and acetylation sites in alphaA-crystallin of the eye lens (mus musculus) after two- dimensional gel electrophoresis . " Anal Bioanal Chem 376(7):
966-72) . Für die Peptidanalytik wurde ein System bestehend aus FAMOSTM (automatischer Probensammler) , SwitchosTM (Ladepumpe und Schaltventiele) , und UltimateTM (Separationspumpe and UV- detektor) (LC Packings Dionex, Amsterdam, Niederlande) online gekoppelt mit dem Ionenfallen-Massespektrometer LCQ Deca XP (Thermo Electron, San Jose, CA, USA) ausgerüstet mit einer nano-Elektrospray Ionquellen (PicoView™ 100, New Objective Inc., Woburn, MA, USA) und SilicaTips™ (FS360-20-10-D, New Objective Inc.) verwendet. ^Für die Proteinidentifizierung wurden die MS/MS-Spektren mithilfe des SEQUEST™ Algorithmus unter Berücksichtigung der folgenden Suchparameter gegen die NCBI-Proteinsequenz Subdatenbank (human) gesucht (http://www.ncbi.nlm.nih.gov). Hierbei wurden. folgende Suchparameter berücksichtigt: Massentoleranz + 1.5 Da für Eltern- und Fragmentionen. Modifizierung aller Cysteine mit Cy3. Eine überlesene Trypsinschnittstelle. Proteine mit einem SequestMetaScore (ProteinscapeTM) größer als 10 bei mindestens 3 Peptiden
wurden als identifiziert berücksichtigt.
Herstellung von Tissue Arrays
Für normale Pankreasgänge sowie für PanINs wurde jeweils einer, für duktale Adenokarzinome jeweils zwei 1.5-mm dicke
Gewebszylinder aus repräsentativen Arealen ausgestanzt und in Empfängerparaffinblöcke eingebettet, sodass insgesamt 300 Zylinder mit Pankreasgeweben (in insgesamt 6 Tissue Arrays) sowie jeweils zwei Kontrollzylinder bestehend aus gesundem Tonsillengewebe verarbeitet wurden. Die Aufarbeitung erfolgte mithilfe von MTAl tissue arrayer Instrument (Beecher Instruments, Sun Prairie, WI, USA) . Die normalen Pankreasgänge sowie die Gänge der PanINs entstammen 12 Pankreata gesunder suizidierter Menschen, die am Rechtsmedizinischen Institut der Semmelweis Universität in Budapest, Ungarn obduziert wurden
(Genehmigungsnummer: 140-1/1996) als auch 81 Pankreata, die im Rahmen von Operationen gastrointestinaler und pankreatischer Tumoren der chirurgischen Universitätskliniken in Kiel und Dresden, Deutschland, entnommen wurden. Für die Tissue Arrays der Pankreaskarzinome wurden von Gewebsblöcken von 48 in der chirurgischen Universitätsklinik Kiel entfernten Pankreata verwendet .
Immunhistochemie Alle Untersuchungen wurden auf formalinfixierten paraffineingebetteten Geweben durchgeführt. 3 μm-dünne Schnitte wurden entparaffiniert und rehydriert. Anschließend wurden immunhistochemische Färbungen nach der etablierten
Methode angefertigt. Vor der Applikation des primären Antikörpers wurde ein Serum-Blocking für 20 Minuten durchgeführt. Der murine anti-14-3-3-sigma Antikörper (Acris, I.N.6., 2.5 μg/μl, 1:40), der anti-LRP/MVP-Antikörper (Kamiya Biomedical Company, 1032, 0.5 μg/μl, 1:400) sowie der Kaninchen anti-AGR2-Antikörper (Imgenex, 10 μg/μl, 1:50) wurden als primäre Antikörper eingesetzt. Die Signalentwicklung erfolgte durch ein Maus oder Kaninchen Färbekit (Vectastain Elite Peroxidase kit, PK-6102, Vector Laboratories, Burmingame, USA) . Für die Negativkontrolle wurde der primäre Antikörper weggelassen.
Auswertung der immunhistochemischen Färbungen
Die Intensität der Färbung wurde in mild, mäßig und stark eingeteilt (entsprechend einem Punktewert 1, 2 oder 3) . Die angefärbten Areale wurden in Bezug auf die Pankreasgänge bzw. der Tumorareale in Prozent geschätzt und wiederum in
Punktewerte unterteilt (<10%=l, 10-50%=2, 51-80%03, >80%=4) .
Die endgültige Punktzahl (score) wurde vom Produkt der Färbeintesität und Anteil positiv gefärbter Zellen bestimmt
(Minimum 0, Maximum 12) (Remmele, Hildebrand et al. 1986) .
Statistik
Die Mittelwerte der immunhistochemisch bestimmten Punktewerte der normalen Pankreasgänge, der verschiedenen PanIN-Läsionen sowie des duktalen Adenokarzinoms wurden anhand des Mann- Whitney U und Kruskal-Wallis-H Testes verglichen. Allen angewendeten statistischen Tests wurde ein Signifikanzniveau
von 0,05 zugrunde gelegt. Bei multiplen Vergleichen wurde der p-Wert gemäß Bonferroni modifiziert. Alle statistischen Berechnungen wurden mithilfe der SPSS 10.1-Software angefertigt .
Für die Identifizierung der Biomarkerkandidaten für pankreatische Tumorprogression eine differenzielle Proteomanalyse mikrodissezierter Zellen aus PanIN-Läsionen, PDAC und normalen Pankreasgänge wurde durchgeführt. Für diesen Ansatz wurden Tumore von 9 Pankreaskrebspatienten untersucht, die insgesamt 4-9 Proben per Läsion lieferten. Die identifizierten differenziellen Biomarker wurden an Proben (Gewebearrays) von 130 Patienten immunhistochemisch validiert.
Expressionsprofile der differenziellen Proteine In der differenziellen Proteomanalyse mittels 2D Elektrophorese wurden insgesamt 86 unterschiedliche Proteinspots detektiert, die eine differenzielle Expression zeigten. Davon waren 19 Spots in der PanIN 1A-Läsion, 37 in der PanIN 1B-Läsion, 40 in der PanIN 2-Läsion, 39 in der PanIN 3-Läsion und 32 in PDAC differenziell gegenüber der normalen Pankreasgänge reguliert (p < 0.05, Regulationsfaktor > 1.6). Jeweils ein repräsentatives Gel für jedes Tumorstadium inklusive der regulierten Proteinspots ist in der Abbildung 1 dargestellt.
Für die Identifizierung der differenziellen Proteinspots wurde das Referenzproteom aus dem pankreatischen Tumorgewebe verwendet, dessen Proteommuster eine Hoche Übereinstimmung mit
dem Proteom des mikrodissezierten Materials zeigte (> 91 %). Mit Hilfe von LC-ESI-MS/MS konnten insgesamt 38 nicht redundante Proteine identifiziert werden (Tabelle 1).
Validierung der Proteomdaten mittels Immunhistochemie Für die Wahl der Proteine für die immunhistochemische Validierung wurden deren Expressionsprofile während der Tumorprogression berücksichtigt. Deshalb wurden die differenziellen Proteinspots in 3 Gruppen eingeteilt: 1) Proteinspots, die eine frühe Regulation in den Läsionen PanIN IA und PanIN IB zeigen, 2) Konstant veränderte Proteinspots während der gesamten Tumorprogression, 3) Proteinspots, die im fortgeschrittenen Tumorstadium (PanIN 2 bis PDAC) differentiell exprimiert sind (siehe Tabelle 1) . Des Weiteren wurde auch die potentielle Rolle der Proteine bei der Tumorbiologie als Kriterium für immunhistochemische Validierung in Betracht gezogen. Aus den 38 nicht redundanten Proteinen wurden zunächst sieben für die Validierung an 130 Patienten ausgewählt: AGR2, MVP, stratifin, annexin A2, EFIa- like protein, annexin A4 und SlOOAlO. Davon konnten an sechs
Proteinen die Proteomdaten bestätigt werden. Der Vergleich der Proteomdaten und der Validierung wird an drei Proteinen dargestellt: 14-3-3 sigma, MVP und AGR2 (Abbildungen 2, 3 und 4) .
Immunhistochemisches Expressionsmuster von MVP Die Färbungen mit dem MVP-Antikörper zeigten eine intrazytoplasmatische Färbereaktion. Die mittleren Punktewerte
für die MVP-Färbung waren: normale Gänge 3.70 (Standardabweichung 3.0, Spannweite 0-9); PanIN-la 4.60 (Standardabweichung 3.2, Spannweite 0-12); PanIN-lb 7.82 (Standardabweichung 3.2, .Spannweite 0-12); PanIN-2 7.93 (Standardabweichung 3.8, Spannweite 2-12); PanIN-3 10.00 (Standardabweichung 2.8, Spannweite 3-12) sowie duktale Adenokarzinome 8.32 (Standardabweichung 3.0, Spannweite 1-12) (Abbildung 2). Die Punktwerte der verschiedenen Krankheitsgruppen zeigten signifikante Unterschiede untereinander (Kruskal-Wallis-Test, p< 0.001). PanIN-lB, PanIN-2, PanIN-3 und PDAC zeigen eine signifikant höhere Expression von MVP als normale Pankreasgänge (Mann-Whitney U- Test, p< 0.001). Zwischen PanIN-lB, PanIN-2, PanIN-3 und PDAC ließen sich keine statistischen Unterschiede feststellen (Kruskal-Wallis-Test, p=0.110). Die erhöhte Expression von MVP in PanIN-3 konnte sowohl in der Proteomanalyse als auch immunhistochemisch festgestellt werden (Abbildung 3 A, B)
Immunhistochemisches Expressionsmuster von 14-3-3 sigma Die Färbung der Tissue Arrays mit 14-3-3-sigma Antikörper zeigte eine hauptsächlich intrazytoplasmatische und weniger membranständige Färbereaktion. Die mittleren Punktwerte für die 14-3-3 sigma-Färbung waren: normale Pankreasgänge 2.04 (Standardabweichung 3.1, Spannweite 0-12); PanIN-lA 2.80 (Standardabweichung 2.6, Spannweite 0-8); PanIN-lB 5.30 (Standardabweichung 3.8, Spannweite 0-12); PanIN-2 8.34 (Standardabweichung 3.1, Spannweite 2-12); PanIN-3 10.61 (Standardabweichung 1.9, Spannweite 6-12) und PDAC 9.61
(Standardabweichung 2.8, Spannweite 2-12) (Abbildung 2). Die 14-3-3-sigma Expression war signifikant unterschiedlich im Vergleich der verschiedenen Gruppen (Kruskal-Wallis-Test, p< 0.001). 14-3-3-sigma Protein wurde in PanIN-lB signifikant stärker exprimiert als in normalen Gängen und in PanIN-lA
(Mann-Whitney U-Test, p< 0.001). 14-3-3-sigma Protein wurde außerdem in PanIN-2, PanIN-3 und PDAC signifikant stärker exprimiert als in PanIN-lB (Mann-Whitney U-Test, p<0.001). Die Ergebnisse der Proteomanalyse und die Ergebnisse der immunohistochemischen Auswertung zeigten ein ähnliches 14-3-3- sigma Expressionsmuster bei PanIN-lB - PanIN-3 Läsionen
(Abbildung 3 A, B) .
Immunhistochemisches Expressionsmuster von AGR 2 Die Färbung der Tissue Arrays mit AGR2-Antikörper zeigte ein hauptsächlich intrazytoplasmatisches und weniger membranständiges Expressionsmuster. Die mittleren Punktwerte der AGR 2-Färbung waren: normale Pankreasgänge 7.59 (Standardabweichung 3.5, Spannweite 2-12); PanIN-lA 10.97 (Standardabweichung 2.0, Spannweite 6-12); PanIN-lB 10.16 (Standardabweichung 2.6, Spannweite 3-12); PanIN-2 8.96 (Standardabweichung 2.9, Spannweite 3-12); PanIN-3 8.47 (Standardabweichung 3.3, Spannweite 3-12) und PDAC 6.53 (Standardabweichung 2.6, Spannweite 1-12) (Abbildung 2). Im Vergleich der verschiedenen Gruppen untereinander ließen sich signifikante Unterschiede der Punktwerte feststellen (Kruskal- Wallis-Test, p< 0.001). Außerdem konnte gezeigt werden, dass AGR2 in PanIN-lA, PanIN-lB, PanIN-2 und PanIN-3 signifikant
stärker exprimiert wird als in normalen Pankreasgängen (Mann- Whitney U-Test, p= 0.002). Im Vergleich mit den PanIN-Läsionen zeigte AGR2 der PDAC eine signifikant schwächere Expression (Mann-Whitney U-Test, p<0.001). Die Ergebnisse der Proteomanalyse entsprachen den immunhistochemischen Reaktionen für PanIN-lA - PanIN-3.
Differentialdiagnose von Pankreaskrebs, PDAC zur Pankreatitis: Bei den Proteinen AGR 2, 14-3-3 sigma und MVP wurde in der vorliegenden Studie eine erhöhte Expression während der
Progression von PDAC sowohl in der Proteomstudie als auch in der immunhistochemischen Analyse nachgewiesen. Um die Anwendung dieser Proteine zu Differenzierung zwischen Pankreaskrebs und Pankreatitis zu beurteilen, wurde ihre Expression auch bei Gewebearrays von 40 Pankreatitispatienten untersucht. Im Gegensatz zu Pankreaskrebspatienten wurde bei den Pankreatitispatienten keine bzw. eine geringere Konzentration detektiert. Der Expressionslevel dieser Proteine im Gewebe der Pankreatitispatienten ist vergleichbar mit dem Expressionslevel im gesunden Gewebe. Somit zeigen AGR 2, 14-3- 3 sigma und MVP ein hohes Potential für die Verwendung als nicht invasive oder in-vivo Biomarker für die Unterscheidung (Differentialdiagnose) zwischen PDAC bzw. Pankreaskrebs und Pankreatitis (siehe Abbildung 4).
Die erfindungsgemäßen Sequenzen (SEQ ID No. 1 - 71) lauten wie folgt:
SEQ ID No. 1
>gi I 33875698 I gb|AAH00654.2 I KRT8 protein [Homo sapiens]
FSAPSRISAWFGPPASTPASTMSIRVTQKSYKVSTSGPRAFSSRSYTSGPGSRISSSSFSRVGSSNFRGG LGGGYGGASGMGGITAVTVNQSLLSPLVLEVDPNIQAVRTQEKEQIKTLNNKFASFIDKVRFLEQQNKML ETKWSLLQQQKTARSNMDNMFESYINNLRRQLETLGQEKLKLEAELGNMQGLVEDFKNKYEDEINKRTEM ENEFVLIKKDVDEAYMNKVELESRLEGLTDEINFLRQLYEEEIRELQSQISDTSVVLSMDNSRSLDMDSI IAEVKAQYEDIANRSRAEAESMYQIKYEELQSLAGKHGDDLRRTKTEISEMNRNISRLQAEIEGLKGQRA SLEAAIADAEQRGELAIKDANAKLSELEAALQRAKQDMARQLREYQELMNVKLALDIEIATYRKLLEGEE SRLESGMQNMSIHTKTTSGYAGGLSSAYGGLTSPGLSYSLGSSFGSGAGSSSFSRTSSSRAVVVKKIETR DGKLVSESSDVLPK
SEQ ID No. 2
>gi I 7576229 | emb | CAB87963.1 | vimentin [Homo sapiens]
MSTRSVSSSSYRRMFGGPGTASRPSSSRSYVTTSTRTYSLGSALRPSTSRSLYASSPGGVYATRSSAVRL RSSVPGVRLLQDSVDFSLADAINTEFKNTRTNEKVELQELNDRFANYIDKVRFLEQQNKILLAELEQLKG QGKSRLGDLYEEEMRELRRQVDQLTNDKARVEVERDNLAEDIMRLREKLQEEMLQREEAENTLQSFRQDV DNASLARLDLERKVESLQEEIAFLKKLHEEEIQELQAQIQEQHVQIDVDVSKPDLTAALRDVRQQYESVA AKNLQEAEEWYKSKFADLSEAANRNNDALRQAKQESTEYRRQVQSLTCEVDALKGTNESLERQMREMEEN FAVEAANYQDTIGRLQDEIQNMKEEMARHLREYQDLLNVKMALDIEIATYRKLLEGEESRISLPLPNFSS LNLRETNLDSLPLVDTHSKRTLLIKTVETRDGQVINETSQHHDDLE
SEQ ID No. 3
>gi I 12804929 I gb| AAH01917.1 I Malate dehydrogenase 2, NAD (mitochondrial) [Homo sapiens]
MLSALARPVSAALRRSFSTSAQNNAKVAVLGASGGIGQPLSLLLKNSPLVSRLTLYDIAHTPGVAADLSH IETKAAVKGYLGPEQLPDCLKGCDVVVIPAGVPRKPGMTRDDLFNTNATIVATLTAACAQHCPEAMICVI ANPVNSTIPITAEVFKKHGVYNPNKIFGVTTLDIVRANTFVAELKGLDPARVNVPVIGGHAGKTIIPLIS QCTPKVDFPQDQLTALTGRIQEAGTEVVKAKAGAGSATLSMAYAGARFVFSLVDAMNGKEGVVECSFVKS QETECTYFSTPLLLGKKGIEKNLGIGKVSSFEEKMISDAIPELKASIKKGEDFVKTLK
SEQ ID No. 4
>gi I 6573280 I gb I AAF17621.il beta tropomyosin [Homo sapiens]
MDAIKKKMQMLKLDKENAIDRAEQAEADKKQAEDRCKQLEEEQQALQKKLKGTEDEVEKYSESVKEAQEK
LEQAEKKATDAEADVASLNRRIQLVEEELDRAQERLATALQKLEEAEKAADESERGMKVIENRAMKDEEK
MELQEMQLKEAKHIAEDSDRKYEEVARKLVILEGELERSEERAEVAESRARQLEEELRTMDQALKSLMAS
EEEYSTKEDKYEEEIKLLEEKLKEAETRAEFAERSVAKLEKTIDDLE
SEQ ID No. 5
>gi I 402261011 gb I AAH23548.il ACTGl protein [Homo sapiens]
KANREKMTQIMFETFNTPAMYVAIQAVLSLYASGRTTGIVMDSGDGVTHTVPIYEGYALPHAILRLDLAG
RDLTDYLMKILTERGYSFTTTAEREIVRDIKEKLCYVALDFEQEMATAASSSSLEKSYELPDGQVITIGN
ERFRCPEALFQPSFLGMESCGIHETTFNSIMKCDVDIRKDLYANTVLSGGTTMYPGIADRMQKEITALAP
STMKIKIIAPPERKYSVWIGGSILASLSTFQQMWISKQEYDESGPSIVHRKCF
SEQ ID No. 6
>gi| 3153859|gb|AAC17430.1| thioredoxin delta 3 [Homo sapiens]
VKQIESKTAFQEALDAAGDKLVVVDFSATWCGPCKMIKPFFHDVASECEVKCMPTFQFFKKGQKVGEFSG ANKEKLEATINELV
SEQ ID No. 7
>gi I 999893 |pdb| IHTI |B Chain B, Triosephosphate Isomerase (Tim)
(E. C.5.3.1.1) Complexed With 2-Phosphoglycolic Acid
APSRKFFVGGNWKMNGRKQSLGELIGTLNAAKVPADTEVVCAPPTAYIDFARQKLDPKIAVAAQNCYKVT NGAFTGEISPGMIKDCGATWVVLGHSERRHVFGESDELIGQKVAHALAEGLGVIACIGEKLDEREAGITE KVVFEQTKVIADNVKDWSKVVLAYEPVWAIGTGKTATPQQAQEVHEKLRGWLKSNVSDAVAQSTRIIYGG SVTGATCKELASQPDVDGFLVGGASLKPEFVDIINAKQ
SEQ ID No. 8
>gi I 16306978 I gb I AAH09564.il Annexin A2 [Homo sapiens]
MSTVHEILCKLSLEGDHSTPPSAYGSVKAYTNFDAERDALNIETAIKTKGVDEVTIVNILTNRSNAQRQD IAFAYQRRTKKELASALKSALSGHLETLILGLLKTPAQYDASELKASMKGLGTDEDSLIEIICSRTNQEL QEINRVYKEMYKTDLEKDIISDTSGDFRKLMVALAKGRRAEDGSVIDYELIDQDARDLYDAGVKRKGTDV PKWISIMTERSVPHLQKVFDRYKSYSPYDMLESIRKEVKGDLENAFLNLVQCIQNKPLYFADRLYDSMKG KGTRDKVLIRIMVSRSEVDMLKIRSEFKRKYGKSLYYYIQQDTKGDYQKALLYLCGGDD
SEQ ID No. 9
>gi|10441386|gb|AAG17014.1 |AF186109_l TPM4-ALK fusion oncoprotein type 2
[Homo sapiens]
MAGLNSLEAVKRKIQALQQQADEAEDRAQGLQRELDGERERREKAEGDVAALNRRIQLVEEELDRAQERL
ATALQKLEEAEKAADESERGMKVIENRAMKDEEKMEIQEMQLKEAKHIAEEADRKYEEVARKLVILEGEL
ERAEERAEVSELKCGDLEEELKNVTNNLKSLEAASEKYSEKEDKYEEEIKLLSDKLKEAETRAEFAERTV
AKLEKTIDDLEVYRRKHQELQAMQMEL
SEQ ID No. 10
>gi| 62205349|gb|AAH93076.1| PPIA protein [Homo sapiens]
MCQGGDFTRHNGTGGKSIYGEKFEDENFILKHTGPGILSMANAGPNTNGSQFFICTAKTEWLDGKHVVFG
KVKEGMNIVEAMERFGSRNGKTSKKITIADCGQLE
SEQ ID No. 11
>gi I 189022 I gb| AAA36348.1 I smooth muscle mysoin light chain
MRALGQNPTNAEVLKVLGNPKSDEMNVKVLDFEHFLPMLQTVAKNKDQGTYEDYVEGLRVFDKEGNGTVM
GAEIRHVLVTLGEKMTEEEVEMLVAGHEDSNGCINYEAFVRHILSG
SEQ ID No. 12
>gi| 1408188|gb|AAC50680.1| desmin
MSQAYSSSQRVSSYRRTFGGAPGFPLGSPLSSPVFPRAGFGSKGSSSSVTSRVYQVSRTSGGAGGLGSLR ASRLGTTRTPSSYGAGELLDFSLADAVNQEFLTTRTNEKVELQELNDRFANYIEKVRFLEQQNALAAEVN RLKGREPTRVAELYEEELRELRRQVEVLTNQRARVDVERDNLLDDLQRLKAKLQEEIQLKEEAENNLAAF RADVDAATLARIDLERRIESLNEEIAFLKKVHEEEIRELQAQLQEQQVQVEMDMSKPDLTAALRDIRAQY ETIAAKNISEAEEWYKSKVSDLTQAANKNNDALRQAKQEMMEYRHQIQSYTCEIDALKGTNDSLMRQMRE LEDRFASEASGYQDNIARLEEEIRHLKDEMARHLREYQDLLNVKMALDVEIATYRKLLEGEESRINLPIQ TYSALNFRETSPEQRGSEVHTKKTVMIKTIETRDGEVVSEATQQQHEVL
SEQ ID No. 13
>gi I 15990478 I gb| AAH15623.1 I Major vault protein [Homo sapiens]
MATEEFIIRIPPYHYIHVLDQNSNVSRVEVGPKTYIRQDNERVLFAPMRMVTVPPRHYCTVANPVSRDAQ
GLVLFDVTGQVRLRHADLEIRLAQDPFPLYPGEVLEKDITPLQVVLPNTALHLKALLDFEDKDGDKVVAG
DEWLFEGPGTYIPRKEVEVVEIIQATIIRQNQALRLRARKECWDRDGKERVTGEEWLVTTVGAYLPAVFE
EVLDLVDAVILTEKTALHLRARRNFRDFRGVSRRTGEEWLVTVQDTEAHVPDVHEEVLGVVPITTLGPHN
YCVILDPVGPDGKNQLGQKRVVKGEKSFFLQPGEQLEQGIQDVYVLSEQQGLLLRALQPLEEGEDEEKVS
HQAGDHWLIRGPLEYVPSAKVEVVEERQAIPLDENEGIYVQDVKTGKVRAVIGSTYMLTQDEVLWEKELP
PGVEELLNKGQDPLADRGEKDTAKSLQPLAPRNKTRVVSYRVPHNAAVQVYDYREKRARVVFGPELVSLG
PEEQFTVLSLSAGRPKRPHARRALCLLLGPDFFTDVITIETADHARLQLQLAYNWHFEVNDRKDPQETAK
LFSVPDFVGDACKAIASRVRGAVASVTFDDFHKNSARIIRTAVFGFETSEAKGPDGMALPRPRDQAVFPQ
NGLVVSSVDVQSVEPVDQRTRDALQRSVQLAIEITTNSQEAAAKHEAQRLEQEARGRLERQKILDQSEAE
KARKELLELEALSMAVESTGTAKAEAESRAEAARIEGEGSVLQAKLKAQALAIETEAELQRVQKVRELEL
VYARAQLELEVSKAQQLAEVEVKKFKQMTEAIGPSTIRDLAVAGPEMQVKLLQSLGLKSTLITDGSTPIN
LFNTAFGLLGMGPEGQPLGRRVASGPSPGEGISPQSAQAPQAPGDNHVVPVLR
SEQ ID No. 14
>gi I 14043070 I ref |NP_112420.1 I heterogeneous nuclear ribonucleoprotein Al isoform b [Homo sapiens]
MSKSESPKEPEQLRKLFIGGLSFETTDESLRSHFEQWGTLTDCVVMRDPNTKRSRGFGFVTYATVEEVDA
AMNARPHKVDGRVVEPKRAVSREDSQRPGAHLTVKKIFVGGIKEDTEEHHLRDYFEQYGKIEVIEIMTDR GSGKKRGFAFVTFDDHDSVDKIVIQKYHTVNGHNCEVRKALSKQEMASASSSQRGRSGSGNFGGGRGGGF GGNDNFGRGGNFSGRGGFGGSRGGGGYGGSGDGYNGFGNDGGYGGGGPGYSGGSRGYGSGGQGYGNQGSG YGGSGSYDSYNNGGGGGFGGGSGSNFGGGGSYNDFGNYNNQSSNFGPMKGGNFGGRSSGPYGGGGQYFAK PRNQGGYGGSSSSSSYGSGRRF
SEQ ID No. 15
>gi|4388970|pdb| 1BT6|B Chain B, PIl (SlOOaIO), Ligand Of Annexin Ii In
Complex With Annexin Ii N-Terminus
PSQMEHAMETMMFTFHKFAGDKGYLTKEDLRVLMEKEFPGFLENQKDPLAVDKIMKDLDQCRDGKVGFQS
FFSLIAGLTIACNDYFVVHMKQKGKK
SEQ ID No. 16
>gi|24210508|gb|AAN51932.1|AF322220_l cervical Cancer suppressor 3 (EFIa- like protein
MITGTSQADCAVLIVAAGVGEFEAGISKNGQTREHALLAYTLGVKQLIVGVNKMDSTEPPYSQKRYEEIV
KEVSTYIKKIGYNPDTVAFVPISGWNGDNMLEPSANMPWFKGWKVTRKDGNASGTTLLEALDCILPPTRP
TDKPLRLPLQDVYKIGGIGTVPVGRVETGVLKPGMVVTFAPVNVTTEVKSVEMHHEALSEALPGDNVGFN
VKNVSVKDVRRGNVAGDSKNDPPMEAAGFTAQVIILNHPGQISAGYAPVLDCHTAHIACKFAELKEKIDR
RSGKKLEDGPKFLKSGDAAIVDMVPGKPMCVESFSDYPPLGRFAVRDMRQTVAVGVIKAVDKKAAGAGKV TKSAQKAQKAK
SEQ ID No. 17
>gi I 33338062 I gb| AAQ13653.1 I regulatory myosin light chain long Version [Homo sapiens]
MSSKRAKAKTTKKRPQRATSNVFAMFDQSQIQEFKEAFNMIDQNRDGFIDKEDLHDMLASLGKNPTDEYL EGMMSEAPGPYNFTMFLTMFGEKLNGTDPEDVIRNAFACFDEESSGFIHEDHLRELLTTMGDRFTDEEVD EMYREAPIDKKGNFNYVEFTRILKHGAKDKDD
SEQ ID No. 18
>gi| 63252896 I ref | NP_001018004.1 | tropomyosin 1 alpha chain isoform 3 [Homo sapiens]
MDAIKKKMQMLKLDKENALDRAEQAEADKKAAEDRSKQLEDELVSLQKKLKGTEDELDKYSEALKDAQEK
LELAEKKATDAEADVASLNRRIQLVEEELDRAQERLATALQKLEEAEKAADESERGMKVIESRAQKDEEK
MEIQEIQLKEAKHIAEDADRKYEEVARKLVIIESDLERAEERAELSEGKCAELEEELKTVTNNLKSLEAQ
AEKYSQKEDRYEEEIKVLSDKLKEAETRAEFAERSVTKLEKSIDDLEEKVAHAKEENLSMHQMLDQTLLE
LNNM
SEQ ID No. 19
>gi I 55859703 I emb I CAI10974.il tropomyosin 2 (beta) [Homo sapiens]
MDAIKKKMQMLKLDKENAIDRAEQAEADKKQAEDRCKQLEEEQQALQKKLKGTEDEVEKYSESVKEAQEK
LEQAEKKATDAEADVASLNRRIQLVEEELDRAQERLATALQKLEEAEKAADESERGMKVIENRAMKDEEK
MELQEMQLKEAKHIAEDSDRKYEEVARKLVILEGELERSEERAEVAESRARQLEEELRTMDQALKSLMAS
EEEYSTKEDKYEEEIKLLEEKLKEAETRAEFAERSVAKLEKTIDDLEETLASAKEENVEIHQTLDQTLLE
LNNL
SEQ ID No. 20
>gi I 62896697 |dbj IBAD96289.1 I myosin regulatory light chain MRCL3 variant [Homo sapiens]
MSSKRTKTKTKKRPQRATSNVFAMFDQSQIQEFKEAFNMIDQNRNGFIDKEDLHDMLASLGKNPTDEYLD AMMNEÄPGPINFTMFLTMFGEKLNGTDPEDVIRNAFACFDEEATGTIQEDYLRELLTTMGDRFTDEEVDE LYREAPIDKKGNFNYIEFTRILKHGAKDKDD
SEQ ID No. 21
>gi I 13350761 emb ICAA23774.1 I alpha-2-globin [Homo sapiens]
VLSPADKTNVKAAWGKVGAHAGEYGAEALERMFLSFPTTKTYFPHFDLSHGSAQVKGHGKKVADALTNAV AHVDDMPNALSALSDLHAHKLRVDPVNFKLLSHCLLVTLAAHLPAEFTPAVHASLDKFLASVSTVLTSKY
R
SEQ ID No. 22
>gi I 12803959 I gb I AAH02827.il Tropomyosin 4 [Homo sapiens]
MAGLNSLEAVKRKIQALQQQADEAEDRAQGLQRELDGERERREKAEGDVAALNRRIQLFEEELDRAQERL ATALQKLEEAEKAADESERGMKVIENRAMKDEEKMEIQEMQLKEAKHIAEEADRKYEEVARKLVILEGEL ERAEERAEVSELKCGDLEEELKNVTNNLKSLEAASEKYSEKEDKYEEEIKLLSDKLKEAETRAEFAERTV AKLEKTIDDLEEKLAQAKEENVGLHQTLDQTLNELNCI
SEQ ID No. 23
>gi I 62205326 | gb | AAH93050.il Transgelin [Homo sapiens]
MANKGPSYGMSREVQSKIEKKYDEELEERLVEWIIVQCGPDVGRPDRGRLGFQVWLKNGVILSKLVNSLY
PDGSKPVKVPENPPSMVFKQMEQVAQFLKAAEDYGVIKTDMFQTVDLFEGKDMAAVQRTLMALGSLAVTK
NDGHYRGDPNWFMKKAQEHKREFTESQLQEGKHVIGLQMGSNRGASQAGMTGYGRPRQIIS
SEQ ID No. 24
>gi| 60655723|gb|AAX32425.1| keratin 7 [synthetic construct]
MSIHFSSPVFTSRSAAFSGRGAQVRLSSARPGGLGSSSLYGLGASRPRVAVRSAYGGPVGAGIREVTINQ SLLAPLRLDADPSLQRVRQEESEQIKTLNNKFASFIDKVRFLEQQNKLLETKWTLLQEQKSAKSSRLPDI FEAQIAGLRGQLEALQVDGGRLEAELRSMQDVVEDFKNKYEDEINRRTAAENEFVVLKKDVDAAYMSKVE LEAKVDALNDEINFLRTLNETELTELQSQISDTSVVLSMDNSRSLDLDGIIAEVKAQYEEMAKCSRAEAE AWYQTKFETLQAQAGKHGDDLRNTRNEISEMNRAIQRLQAEIDNIKNQRAKLEAAIAEAEERGELALKDA RAKQEELEAALQRAKQDMARQLREYQELMSVKLALDIEIATYRKLLEGEESRLAGDGVGAVNISVMNSTG GSSSGGGIGLTLGGTMGSNALSFSSSAGPGLLKAYSIRTASASRRSARD
SEQ ID No. 25
>gi| 15277503|gb|AAH12854.1| ACTB protein [Homo sapiens]
MCKAGFAGDDAPRAVFPSIVGRPRHQGVMVGMGQKDSYVGDEAQSKRGILTLKYPIEHGIVTNWDDMEKI
WHHTFYNELRVAPEEHPVLLTEAPLNPKANLEKMTQIMFETFNTPAMYVAIQAVLSLYASGRTTGIVMDS GDGVTHTVPIYEGYALPHAILRLDLAGRDLTDYLMKILTERGYSFTTTAEREIVRDIKEKLCYVALDFEQ EMATAASSSSLEKSYELPDGQVITIGNERFRCPEALFQPSFLGMESCGIHETTFNSIMKCDVDIRKDLYA NTVLSGGTTMYPGIADRMQKEITALAPSTMKIKIIAPPERKYSVWIGGSILASLSTFQQMWISKQEYDES GPSIVHRKCF
SEQ ID No. 26
>gi 33286422 I ref | NP_872271.1 | pyruvate kinase 3 isoform 2 [Homo sapiens]
MSKPHSEAGTAFIQTQQLHAAMADTFLEHMCRLDIDSPPITARNTGIICTIGPASRSVETLKEMIKSGMN VARLNFSHGTHEYHAETIKNVRTATESFASDPILYRPVAVALDTKGPEIRTGLIKGSGTAEVELKKGATL KITLDNAYMEKCDENILWLDYKNICKVVEVGSKIYVDDGLISLQVKQKGADFLVTEVENGGSLGSKKGVN LPGAAVDLPAVSEKDIQDLKFGVEQDVDMVFASFIRKASDVHEVRKVLGEKGKNIKIISKIENHEGVRRF DEILEASDGIMVARGDLGIEIPAEKVFLAQKMMIGRCNRAGKPVICATQMLESMIKKPRPTRAEGSDVAN AVLDGADCIMLSGETAKGDYPLEAVRMQHLIAREAEAAMFHRKLFEELVRASSHSTDLMEAMAMGSVEAS YKCLAAALIVLTESGRSAHQVARYRPRAPIIAVTRNPQTARQAHLYRGIFPVLCKDPVQEAWAEDVDLRV NFAMNVGKARGFFKKGDVVIVLTGWRPGSGFTNTMRVVPVP
SEQ ID No. 27
>gi I 56204524 | emb | CAI19482.1 | actin related protein 2/3 complex, subunit 5,
16kDa [Homo sapiens]
MSKNTVSSARFRKVDVDEYDENKFVDEEDGGDGQAGPDEGEVDSCLRHSITGNMTAALQAALKNPPINTK
SQAVKDRAGSIVLKVLISFKANDIEKAVQSLDKNGVDLLMKYIYKGFESPSDNSSAMLLQWHEKALAAGG
VGSIVRVLTARKTV
SEQ ID No. 28
>gi I 37183136 I gb I AAQ89368.il AGR2 [Homo sapiens]
MEKIPVSAFLLLVALSYTLARDTTVKPGAKKDTKDSRPKLPQTLSRGWGDQLIWTQTYEEALYKSKTSNK PLMIIHHLDECPHSQALKKVFAENKEIQKLAEQFVLLNLVYETTDKHLSPDGQYVPRIMFVDPSLTVRAD ITGRYSNRLYAYEPADTALLLDNMKKALKLLKTEL
SEQ ID No. 29
>gi|7981260|emb|CAB92118.1| stratifin [Homo sapiens]
MERASLIQKAKLAEQAERYEDMAAFMKGAVEKGEELSCEERNLLSVAYKNVVGGQRAAWRVLSSIEQKSN
EEGSEEKGPEVREYREKVETELQGVCDTVLGLLDSHLIKEAGDAESRVFYLKMKGDYYRYLAEVATGDDK
KRIIDSARSAYQEAMDISKKEMPPTNPIRLGLALNFSVFHYEIANSPEEAISLAKTTFDEAMADLHTLSE
DSYKDSTLIMQLLRDNLTLWTADNAGEEGGEAPQEPQS
SEQ I D No . 30
>gi | 27695621 | gb | AAH42970 . 1 | Coactosin-li ke 1 ( Dictyostelium) [ Homo sapiens ]
MATKIDKEACRAAYNLVRDDGSAVIWVT FKYDGSTIVHGEQGAEYQHFIQQCTDDVRLFAFVRFTTGDAM
SKRSKFALI TWIGENVSGLQRAKTGTDKTLVKEVVQNFAKEFVISDRKELEEDFIKSELKKAGGANYDAQ
TE
SEQ ID No . 31
>gi| 6996447 | emb | CAB75426.1 | chaperonin 60, Hsp60 [Homo sapiens]
MLRLPTVFRQMRPVSRVLAPHLTRAYAKDVKFGADARALMLQGVDLLADAVAVTMGPKGRTVIIEQSWGS PKVTKDGVTVAKSIDLKDKYKNIGAKLVQDVANNTNEEAGDGTTTATVLARSIAKEGFEKISKGANPVEI RRGVMLAVDAVIAELKKQSKPVTTPEEIAQVATISANGDKEIGNIISDAMKKVGRKGVITVKDGKTLNDE LEIIEGMKFDRGYISPYFINTSKGQKCEFQDAYVLLSEKKISSIQSIVPALEIANAHRKPLVIIAEDVDG EALSTLVLNRLKVGLQVVAVKAPGFGDNRKNQLKDMAIATGGAVFGEEGLTLNLEDVQPHDLGKVGEVIV TKDDAMLLKGKGDKAQIEKRIQEIIEQLDVTTSEYEKEKLNERLAKLSDGVAVLKVGGTSDVEVNEKKDR VTDALNATRAAVEEGIVLGGGCALLRCIPALDSLTPANEDQKIGIEIIKRTLKIPAMTIAKNAGVEGSLI VEKIMQSSSEVGYDAMAGDFVNMVEKGIIDPTKVVRTALLDAAGVASLLTTAEVVVTEIPKEEKDPGMGA MGGMGGGMGGGMF
SEQ ID No. 32
>gi|55960373|emb|CAI14602.1| transgelin 2 [Homo sapiens]
MANRGPAYGLSREVQQKIEKQYDADLEQILIQWITTQCRKDVGRPQPGRENFQNWLKDGTVLCELINALY
PEGQAPVKKIQASTMAFKQMEQISQFLQAAERYGINTTDIFQTVDLWEGKNMACVQRTLMNLGGLAVARD
DGLFSGDPNWFPKKSKENPRNFSDNQLQEGKNVIGLQMGTNRGASQAGMTGYGMPRQIL
SEQ ID No. 33
>gi I 2183299 I gb I AAC51652.il aldehyde dehydrogenase 1 [Homo sapiens]
MSSSGTPDLPVLLTDLKIQYTKIFINNEWHDSVSGKKFPVFNPATEEELCQVEEGDKEDVDKAVKAARQA FQIGSPWRTMDASERGRLLYKLADLIERDRLLLATMESMNGGKLYSNAYLSDLAGCIKTLRYCAGWADKI QGRTIPIDGNFFTYTRHEPIGVCGQIIPWNFPLVMLIWKIGPALSCGNTVVVKPAEQTPLTALHVASLIK EAGFPPGVVNIVPGYGPTAGAAISSHMDIDKVAFTGSTEVGKLIKEAAGKSNLKRVTLELGGKSPCIVLA
DADLDNAVEFAHHGVFYHQGQCCIAASRIFVEESIYDEFVRRSVERAKKYILGNPLTPGVTQGPQIDKEQ YDKILDLIESGKKEGAKLECGGGPWGNKGYFVQPTVFSNVTDEMRIAKEEIFGPVQQIMKFKSLDDVIKR ANNTFYGLSAGVFTKDIDKAITISSALQAGTVWVNCYGVVSAQCPFGGFKMSGNGRELGEYGFHEYTEVK TVTVKISQKNS
SEQ ID No. 34
>gi I 49660012 I gb| AAT68294.1 I sarcomeric tropomyosin kappa; TPMl-kappa [Homo sapiens]
MDAIKKKMQMLKLDKENALDRAEQAEADKKAAEDRSKQLEEDIAAKEKLLRVSEDERDRVLEELHKAEDS
LLAAEEAAAKAEADVASLNRRIQLVEEELDRAQERLATALQKLEEAEKAADESERGMKVIESRAQKDEEK
MEIQEIQLKEAKHIAEDADRKYEEVARKLVIIESDLERAEERAELSEGKCAELEEELKTVTNDLKSLEAQ
AEKYSQKEDRYEEEIKVLSDKLKEAETRAEFAERSVTKLEKSIDDLEDELYAQKLKYKAISEELDHALND
MTSI
SEQ ID No. 35
>gi| 12654115|gb|AAH00871.1| Annexin A3 [Homo sapiens]
MASIWVGHRGTVRDYPDFSPSVDAEAIQKAIRGIGTDEKMLISILTERSNAQRQLIVKEYQAAYGKELKD
DLKGDLSGHFEHLMVALVTPPAVFDAKQLKKSMKGAGTNEDALIEILTTRTSRQMKDISQAYYTVYKKSL
GDDISSETSGDFRKALLTLADGRRDESLKVDEHLAKQDAQILYKAGENRWGTDEDKFTEILCLRSFPQLK
LTFDEYRNISQKDIVDSIKGELSGHFEDLLLAIVNCVRNTPAFLAERLHRALKGIGTDEFTLNRIMVSRS
EIDLLDIRTEFKKHYGYSLYSAIKSDTSGDYEITLLKICGGDD
SEQ ID No. 36
>gi I 18462107 I gb I AAL72118.il delta-globin [Homo sapiens]
MVHLTPEEKTAVNALWGKVNVDAVGGEALGRLLVVYPWTQRFFESFGDLSSPDAVMGNPKVKAHGKKVLG
AFSDGLAHLDNLKGTFSQLSELHCDKLHVDPENFRLLGNVLVCVLARNFGKEFTPQMQAAYQKVVAGVAN
ALAHKYH
SEQ ID No. 37
>gi I 28592 | emb | CAA23754.1 | serum albumin [Homo sapiens]
MKWVTFISLLFLFSSAYSRGVFRRDAHKSEVAHRFKDLGEENFKALVLIAFAQYLQQCPFEDHVKLVNEV TEFAKTCVADESAENCDKSLHTLFGDKLCTVATLRETYGEMADCCAKQEPERNECFLQHKDDNPNLPRLV RPEVDVMCTAFHDNEETFLKKYLYEIARRHPYFYAPELLFFAKRYKAAFTECCQAADKAACLLPKLDELR DEGKASSAKQRLKCASLQKFGERAFKAWAVARLSQRFPKAEFAEVSKLVTDLTKVHTECCHGDLLECADD RADLAKYICENQDSISSKLKECCEKPLLEKSHCIAEVENDEMPADLPSLAADFVESKDVCKNYAEAKDVF LGMFLYEYARRHPDYSVVLLLRLAKTYETTLEKCCAAADPHECYAKVFDEFKPLVEEPQNLIKQNCELFK QLGEYKFQNALLVRYTKKVPQVSTPTLVEVSRNLGKVGSKCCKHPEAKRMPCAEDYLSVVLNQLCVLHEK TPVSDRVTKCCTESLVNRRPCFSALEVDETYVPKEFNAETFTFHADICTLSEKERQIKKQTALVELVKHK PKATKEQLKAVMDDFAAFVEKCCKADDKETCFAEEGKKLVAASQAALGL
SEQ ID No. 38
>gi| 189617 | gb | AAC41689.1| protein PP4-X
MAMATKGGTVKAASGFNAMEDAQTLRKAMKGLGTDEDAIISVLAYRNTAQRQEIRTAYKSTIGRDLIDDL
KSELSGNFEQVIVGMMTPTVLYDVQELQRAMKGAGTDEGCLIEILASRTPEEIRRISQTYQQQYGRSLED
DIRSDTSFMFQRVLVSLSAGGRDEGNYLDDALVRQDAQDLYEAGEKKWGTDEVKFLTVLCSRNRNHLLHV
FDEYKRISQKDIEQSIKSETSGSFEDALLAIVKCMRNKSAYFAEKLYKSMKGLGTDDNTLIRVMVSRAEI
DMLDIRAHFKRLYGKSLYSFIKGDTSGDYRKVLLVLCGGDD
SEQ ID No. 39
>gi I 28634 I emb I CAA32891.il crystallin [Homo sapiens]
MDVTIQHPWFKRTLGPFYPSRLFDQFFGEGLFEYDLLPFLSSTISPYYRQSLFRTVLDSGISEVRSDRDK
FVIFLDVKHFSPEDLTVKVQDDFVEIHGKHNERQ
SEQ ID No. 40
>gi I 2605594 |dbj IBAA23323.1 I myosin regulatory light chain [Homo sapiens]
MSSKKAKTKTTKKRPQRATSNVFAMFDQSQIQEFKEAFNMIDQNRDGFIDKEDLHDMLASLGKNPTDAYL
DAMMNEAPGPINFTMFLTMFGEKLNGTDPEDVIRNAFACFDEEATGTIQEDYLRELLTTMGDRFTDEGVD
ELYREAPIDKKGNFNYIEFTRILKHGAKDKDD
SEQ ID No. 41 ■
>gi I 2183299 |gb| AAC51652.1 I aldehyde dehydrogenase 1 [Homo sapiens] MSSSGTPDLPVLLTDLKIQYTKIFINNEWHDSVSGKKFPVFNPATEEELCQVEEGDKEDVDKAVKAARQA FQIGSPWRTMDASERGRLLYKLADLIERDRLLLATMESMNGGKLYSNAYLSDLAGCIKTLRYCAGWADKI QGRTIPIDGNFFTYTRHEPIGVCGQIIPWNFPLVMLIWKIGPALSCGNTVVVKPAEQTPLTALHVASLIK EAGFPPGVVNIVPGYGPTAGAAISSHMDIDKVAFTGSTEVGKLIKEAAGKSNLKRVTLELGGKSPCIVLA DADLDNAVEFAHHGVFYHQGQCCIAASRIFVEESIYDEFVRRSVERAKKYILGNPLTPGVTQGPQIDKEQ YDKILDLIESGKKEGAKLECGGGPWGNKGYFVQPTVFSNVTDEMRIAKEEIFGPVQQIMKFKSLDDVIKR
ANNTFYGLSAGVFTKDIDKAITISSALQAGTVWVNCYGVVSAQCPFGGFKMSGNGRELGEYGFHEYTEVK TVTVKISQKNS
SEQ ID No. 42
>gi I 21361176 I ref | NP_000680.2 | aldehyde dehydrogenase IAl [Homo sapiens]
MSSSGTPDLPVLLTDLKIQYTKIFINNEWHDSVSGKKFPVFNPATEEELCQVEEGDKEDVDKAVKAARQA
FQIGSPWRTMDASERGRLLYKLADLIERDRLLLATMESMNGGKLYSNAYLNDLAGCIKTLRYCAGWADKI
QGRTIPIDGNFFTYTRHEPIGVCGQIIPWNFPLVMLIWKIGPALSCGNTVVVKPAEQTPLTALHVASLIK
EAGFPPGVVNIVPGYGPTAGAAISSHMDIDKVAFTGSTEVGKLIKEAAGKSNLKRVTLELGGKSPCIVLA
DADLDNAVEFAHHGVFYHQGQCCIAASRIFVEESIYDEFVRRSVERAKKYILGNPLTPGVTQGPQIDKEQ
YDKILDLIESGKKEGAKLECGGGPWGNKGYFVQPTVFSNVTDEMRIAKEEIFGPVQQIMKFKSLDDVIKR
ANNTFYGLSAGVFTKDIDKAITISSALQAGTVWVNCYGVVSAQCPFGGFKMSGNGRELGEYGFHEYTEVK
TVTVKISQKNS
SEQ ID No. 43
T-complex protein 1 subunit beta
ASLSLAPVNI FKAGADEERA ETARLTSFIG AIAIGDLVKS TLGPKGMDKI LLSSGRDASL MVTNDGATIL KNIGVDNPAA KVLVDMSRVQ DDEVGDGTTS VTVLAAELLR EAESLIAKKI HPQTIIAGWR EATKAAREAL LSSAVDHGSD EVKFRQDLMN IAGTTLSSKL LTHHKDHFTK LAVEAVLRLK GSGNLEAIHI IKKLGGSLAD SYLDEGFLLD KKIGVNQPKR IENAKILIAN TGMDTDKIKI FGSRVRVDST AKVAEIEHAE KEKMKEKVER ILKHGINCFI NRQLIYNYPE QLFGAAGVMA IEHADFAGVE RLALVTGGEI ASTFDHPELV KLGSCKLIEE VMIGEDKLIH FSGVALGEAC TIVLRGATQQ ILDEAERSLH DALCVLAQTV KDSRTVYGGG CSEMLMAHAV TQLANRTPGK EAVAMESYAK ALRMLPTIIA DNAGYDSADL VAQLRAAHSE GNTTAGLDMR EGTIGDMAIL GITESFQVKR QVLLSAAEAA EVILRVDNII KAAPRKRVPD HHPC
SEQ ID No. 44 Apolipoprotein A-IV mflkavvltl alvavagara evsadqvatv mwdyfsqlsn nakeavehlq kseltqqlna Ifqdklgevn tyagdlqkkl vpfatelher lakdseklke eigkeleelr arllphanev sqkigdnlre lqqrlepyad qlrtqvntqa eqlrrqldpl aqrmervlre nadslqaslr phadelkaki dqnveelkgr ltpyadefkv kidqtveelr rslapyaqdt qeklnhqleg ltfqmkknae elkarisasa eelrqrlapl aedvrgnlkg nteglqksla elgghldqqv eefrrrvepy genfnkalvq qmeqlrqklg phagdveghl sflekdlrdk vnsffstfke kesqdktlsl peleqqqeqq qeqqqeqvqm laples
SEQ ID No. 45 Malate dehydrogenase, mitochondrial precursor MLSALARPVS AALRRSFSTS AQNNAKVAVL GASGGIGQPL SLLLKNSPLV SRLTLYDIAH TPGVAADLSH IETKAAVKGY LGPEQLPDCL KGCDVVVIPA GVPRKPGMTR DDLFNTNATI VATLTAACAQ HCPEAMICVI ANPVNSTIPI TAEVFKKHGV YNPNKIFGVT TLDIVRANTF VAELKGLDPA RVNVPVIGGH AGKTIIPLIS QCTPKVDFPQ DQLTALTGRI QEAGTEVVKA KAGAGSATLS MAYAGARFVF SLVDAMNGKE GVVECSFVKS 'QETECTYFST PLLLGKKGIE KNLGIGKVSS FEEKMISDAI PELKASIKKG EDFVKTLK
SEQ ID No. 46
Voltage-dependent anion-selective Channel protein 1
AVPPTYADLG KSARDVFTKG YGFGLIKLDL KTKSENGLEF TSSGSANTET TKVTGSLETK YRWTEYGLTF TEKWNTDNTL GTEITVEDQL ARGLKLTFDS SFSPNTGKKN AKIKTGYKRE HINLGCDMDF DIAGPSIRGA LVLGYEGWLA GYQMNFETAK SRVTQSNFAV GYKTDEFQLH TNVNDGTEFG GSIYQKVNKK LETAVNLAWT AGNSNTRFGI AAKYQIDPDA CFSAKVNNSS LIGLGYTQTL KPGIKLTLSA LLDGKNVNAG GHKLGLGLEF QA
SEQ ID No. 47
>gi I 31645 | emb | CAA25833.1 | glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase [Homo sapiens]
MGKVKVGVNGFGRIGRLVTRAAFNSGKVDIVAINDPFIDLNYMVYMFQYDSTHGKFHGTVKAENGKLVIN GNPITIFQERDPSKIKWGDAGAEYVVESTGVFTTMEKAGAHLQGGAKRVIISAPSADAPMFVMGVNHEKY DNSLKIISNASCTTNCLAPLAKVIHDNFGIVEGLMTTVHAITATQKTVDGPSGKLWRDGRGALQNIIPAS TGAAKAVGKVIPELDGKLTGMAFRVPTANVSVVDLTCRLEKPAKYDDIKKVVKQASEGPLKGILGYTEHQ VVSSDFNSDTHSSTFDAGAGIALNDHFVKLISWYDNEFGYSNRVVDLMAHMASKE
SEQ ID No. 48
>gi I 35053 I emb|CAA37794.1 I uracil DNA glycosylase [Homo sapiens]
MGKVKVGVNGFGRIGRLVTRAAFNSGKVDIVAINDPFIDLNYMVYMFQYDSTHGKFHGTVKAENGKLVIN GNPITIFQERDPSKIKWGDAGAEYVVESTGVFTTMEKAGAHLQGGAKRVIISAPSADAPMFVMGVNHEKY
DNSLKIISNASCTTNCLAPLAKVIHDNFGIVEGLMTTVHAITATQKTVDGPSGNCGVMAAGLSRTSSLPL LALKAVGKVIPELNGKLTGMAFRVPTANVSVVDLTCRLEKPAKYDDIKKVVKQASEGPLKGILGYTEHQV VSSDFNSDTHSSTFDAGAGIALNDHFVKLISWYDNEFGYSNRVVDLMASKE
SEQ ID No. 49
>gi I 54303910 I gb| AAV33305.1 I aging-associated gene 9 protein [Homo sapiens]
MGKVKVGVNGFGRIGRLVTRAAFNSGKVDIVAINDPFIDLNYMVYMFQYDSTHGKFHGTVKAENGKLVIN
GNPITIFQERDPSKIKWGDAGAEYVVESTGVFTTMEKAGAHLQGGAKRVIISTPSADAPMLVMGVNHEKY
DNSLKIISNASCTTNCLAPLAKVIHDNFGIVEGLMTTVHAITATQKTVDGPSGKLWRDGRGALQNIIPAS
TGAAKAVGKVIPELNGKLTGMAFRVPTANVSVVDLTCRLEKPAKYDDIKKVVKQASEGPLKGILGYTEHQ
VVSSDFNSDTHSSTFDAGAGIALNDHFVKLISWYDNEFGYSNRVVDLMAHMASKE
SEQ ID No. 50
>gi I 13543557 I gb I AAH05935.il Nipsnap homolog 3A (C. elegans) [Homo sapiens]
MLVLRSALTRALASRTLAPQMCSSFATGPRQYDGIFYEFRSYYLKPSKMNEFLENFEKNAHLRTAHSELV GYWSVEFGGRMNTVFHIWKYDNFAHRTEVRKALAKDKEWQEQFLIPNLALIDKQESEITYLVPWCKLEKP PKEGVYELATFQMKPGGPALWGDAFKRAVHAHVNLGYTKLVGVFHTEYGALNRVHVLWWNESADSRAAGR HKSHEDPRVVAAVRESVNYLVSQQNMLLIPTSFSPLK
SEQ ID No. 51
>gi|33188452|ref |NP_859427.1| peroxiredoxin 2 isoform b [Homo sapiens]
MASGNARIGKPAPDFKATAVVDGAFKEVKLSDYKGINTPRKEGGLGPLNIPLLADVTRRLSEDYGVLKTD
EGIAYRGLFIIDGKGVLRQITVNDLPVGRSVDEALRLVQAFQYTDEHGEVCPAGWKPGSDTIKPNVDDSK
EYFSKHN
SEQ ID No. 52
>gi I 438069 I emb| CAA80269.1 I thiol-specific antioxidant protein [Homo sapiens]
MASGNARIGKPAPDFKATAVVDGAFKEVKLSDYKGKYVVLFFYPLDFTFVCPTEIIAFTTVKRTSAKLGC EVLGVSVDSQFTHLAWINTPRKEGGLGPLNIPLLADVTRRLSEDYGVLKNDEGIAYRGLFIIDGKGVLRQ ITVNDLPVGRSVDEALRLVQAFQYTDEHGEVCPAAWKPGRDTIKPNVDDSKEYFSKHN
SEQ ID No. 53
>gi I 440308 I gb I AAA50465.1 I enhancer protein
MASGNARIGKPAPDFKATAVVDGAFKEVKLSDYKGKYVVLFFYPLDFTFVCPTEIIAFSNRAEDFRKLGC EVLGVSVDSQFNHLAWINTPRKEGGLGPLNIPLLGDVTRRLSEDYGVLKTDEGIAYRGLFIIDGKGVLRQ ITVNDLPVGRSVDEALRLVQAFQYTDEHGEVCPAGWKPGSDTIKPNVDDSKEYFSKHN
SEQ ID No. 54
>gi I 16198390 I gb| AAH15848.1 I Chromosome 17 open reading frame 25 [Homo sapiens]
MAARRALHFVFKVGNRFQTARFYRDVLGMKVLRHEEFEEGCKAACNGPYDGKWSKTMVGFGPEDDHFVAE
LTYNYGVGDYKLGNDFMGITLASSQAVSNARKLEWPLTEVAEGVFETEAPGGYKFYLQNRSLPQSDPVLK
VTLAVSDLQKSLNYWCNLLGMKIYEKDEEKQRALLGYADNQCKLELQGVKGGVDHAAAFGRIAFSCPQKE
LPDLEDLMKRENQKILTPLVSLDTPGKATVQVVILADPDGHEICFVGDEAFRELSKIDPEGSKLLDDAMA
ADKSDEWFAKHNKPKASG
SEQ ID No. 55
>gi| 34850074 | ref | NP_057164.2 | hypothetical protein LOC51031 [Homo sapiens]
MAARRALHFVFKVGNRFQTARFYRDVLGMKVLRHEEFEEGCKAACNGPYDGKWSKTMVGFGPEDDHFVAE
LTYNYGVGDYKLGNDFMGITLASSQAVSNARKLEWPLTEVAEGVFETEAPGGYKFYLQNRSLPQSDPVLK
VTLAVSDLQKSLNYWCNLLGMKIYEKDEEKQRALLGYADNQCKLELQGVKGGVDHAAAFGRIAFSCPQKE
LPDLEDLMKRENQKILTPLVSLDTPGKATVQVVILADPDGHEICFVGDEAFRELSKMDPEGSKLLDDAMS
ADKSDEWFAKHNKPKASG
SEQ ID No. 56
>gi|4929769|gb|AAD34145.1|AF151908_l CGI-150 protein [Homo sapiens]
MRLTPFSLSTGNSFRYSRRLKKNIFGTAPALRVSEMSLRPSSRIFPCFSRNGLDFTIVITLAQPPVPGIS FIVAKPRLFPGAGSAGCGLLERLFLSLLLGTGLRWCLRGCFPGARFCSTTSPEGHTTFTGLRRSARTQRL AQGPKPGPPAATVARQTSRVSPAPPCSLRPGLRHESAPSGIGDVTARGALRGLGCTVRVTAACGGNHGCS QMLHFVFKVGNRFQTARFYRDVLGMKVLRHEEFEEGCKAACNGPYDGKWSKTMVGFGPEDDHFVAELTYN YGVGDYKLGNDFMGITLASSQAVSNARKLEWPLTEVAEGVFETEAPGGYKFYLQNRSLPQSDPVLKVTLA VSDLQKSLNYWCNLLGMKIYEKDEEKQRALLGYADNQCKLELQGVKGGVDHAAAFGRIAFSCPQKELPDL EDLMKRENQKILTPLVSLDTPGKATVQVVILADPDGHEICFVGDEAFRELSKMDPEGSKLLDDAMAADKS DEWFAKHNKPKASG
SEQ ID No. 57
>gi|19684181|gb|AAH26033.1 | Gelsolin (amyloidosis, Finnish type) [Homo sapiens]
MAPHRPAPALLCALSLALCALSLPVRAATASRGASQAGAPQGRVPEARPNSMVVEHPEFLKAGKEPGLQI
WRVEKFDLVPVPTNLYGDFFTGDAYVILKTVQLRNGNLQYDLHYWLGNECSQDESGAAAIFTVQLDDYLN
GRAVQHREVQGFESATFLGYFKSGLKYKKGGVASGFKHVVPNEVVVQRLFQVKGRRVVRATEVPVSWESF
NNGDCFILDLGNNIHQWCGSNSNRYERLKATQVSKGIRDNERSGRARVHVSEEGTEPEAMLQVLGPKPAL
PAGTEDTAKEDAANRKLAKLYKVSNGAGTMSVSLVADENPFAQGALKSEDCFILDHGKDGKIFVWKGKQA
NTEERKAALKTASDFITKMDYPKQTQVSVLPEGGETPLFKQFFKNWRDPDQTDGLGLSYLSSHIANVERV
PFDAATLHTSTAMAAQHGMDDDGTGQKQIWRIEGSNKVPVDPATYGQFYGGDSYIILYNYRHGGRQGQII
YNWQGAQSTQDEVAASAILTAQLDEELGGTPVQSRVVQGKEPAHLMSLFGGKPMIIYKGGTSREGGQTAP
ASTRLFQVRANSAGATRAVEVLPKAGALNSNDAFVLKTPSAAYLWVGTGASEAEKTGAQELLRVLRAQPV
QVAEGSEPDGFWEALGGKAAYRTSPRLKDKKMDAHPPRLFACSNKIGRFVIEEVPGELMQEDLATDDVML
LDTWDQVFVWVGKDSQEEEKTEALTSAKRYIETDPANRDRRTPITVVKQGFEPPSFVGWFLGWDDDYWSV
DPLDRAMAELAA
SEQ ID No. 58 Gelsolin precursor
MAPHRPAPAL LCALSLALCA LSLPVRAATA SRGASQAGAP QGRVPEARPN SMVVEHPEFL KAGKEPGLQI WRVEKFDLVP VPTNLYGDFF TGDAYVILKT VQLRNGNLQY DLHYWLGNEC SQDESGAAAI FTVQLDDYLN GRAVQHREVQ GFESATFLGY FKSGLKYKKG GVASGFKHVV PNEVVVQRLF QVKGRRVVRA TEVPVSWESF NNGDCFILDL GNNIHQWCGS NSNRYERLKA
TQVSKGIRDN ERSGRARVHV SEEGTEPEAM LQVLGPKPAL PAGTEDTAKE DAANRKLAKL
YKVSNGAGTM SVSLVADENP FAQGALKSED CFILDHGKDG KIFVWKGKQA NTEERKAALK TASDFITKMD YPKQTQVSVL PEGGETPLFK QFFKNWRDPD QTDGLGLSYL SSHIANVERV PFDAATLHTS TAMAAQHGMD DDGTGQKQIW RIEGSNKVPV DPATYGQFYG GDSYIILYNY RHGGRQGQII YNWQGAQSTQ DEVAASAILT AQLDEELGGT PVQSRVVQGK EPAHLMSLFG GKPMIIYKGG TSREGGQTAP ASTRLFQVRA NSAGATRAVE VLPKAGALNS NDAFVLKTPS
AAYLWVGTGA SEAEKTGAQE LLRVLRAQPV QVAEGSEPDG FWEALGGKAA YRTSPRLKDK
KMDAHPPRLF ACSNKIGRFV IEEVPGELMQ EDLATDDVML LDTWDQVFVW VGKDSQEEEK TEALTSAKRY IETDPANRDR RTPITVVKQG FEPPSFVGWF LGWDDDYWSV DPLDRAMAEL
AA
SEQ ID No. 59
>gi I 3766197 |gb| AAC64396.1 I ATP-specific succinyl-CoA synthetase beta subunit [Homo sapiens]
FNNHGLQVQQQQQRNLSLHEYMSMELLQEAGVSVPKGYVAKSPDEAYAIAKKLGSKDVVIKAQVLAGGRG
KGTFESGLKGGVKIVFSPEEAKAVSSQMIGKKLFTKQTGEKGRICNQVLVCERKYPRREYYFAITMERSF
QGPVLIGSSHGGVNIEDVAAETPEAIIKEPIDIEEGIKKEQALQLAQKMGFPPNIVESAAENMVKLYSLF
LKYDATMIEINPMVEDSDGAVLCMDAKINFDSNSAYRQKKIFDLQDWTQEDERDKDAAKANLNYIGLDGN
IGCLVNGAGLAMATMDIIKLHGGTPANFLDVGGGATVHQVTEAFKLITSDKKVLAILVNIFGGIMRCDVI
AQGIVMAVKDLEIKIPVVVRLQGTRVDDAKALIADSGLKILACDDLDEAARMVVKLSEIVTLAKQAHVDV
KFQLPI
SEQ ID No. 60
>gi I 56204104 I emb I CAI22099.il TAR DNA binding protein [Homo sapiens]
MSEYIRVTEDENDEPIEIPSEDDGTVLLSTVTAQFPGACGLRYRNPVSQCMRGVRLVEGILHAPDAGWGN LVYVVNYPKDNKRKMDETDASSAVKVKRAVQKTSDLIVLGLPWKTTEQDLKEYFSTFGEVLMVQVKKDLK TGHSKGFGFVRFTEYETQVKVMSQRHMIDGRWCDCKLPNSKQSQDEPLRSRKVFVGRCTEDMTEDELREF FSQYGDVMDVFIPKPFRAFAFVTFADDQIAQSLCGEDLIIKGISVHISNAEPKHNSNRQLERSGRFGVHL ISNVYGRSTSLKVVL
SEQ ID No. 61
2, 4-dienoyl-CoA reductase, mitochondrial precursor
MKLPARVFFT LGSRLPCGLA PRRFFSYGTK ILYQNTEALQ SKFFSPLQKA MLPPNSFQGK VAFITGGGTG LGKGMTTLLS SLGAQCVIAS RKMDVLKATA EQISSQTGNK VHAIQCDVRD PDMVQNTVSE LIKVAGHPNI VINNAAGNFI SPTERLSPNA WKTITDIVLN GTAFVTLEIG KQLIKAQKGA AFLSITTIYA ETGSGFVVPS ASAKAGVEAM SKSLAAEWGK YGMRFNVIQP GPIKTKGAFS RLDPTGTFEK EMIGRIPCGR LGTVEELANL AAFLCSDYAS WINGAVIKFD GGEEVLISGE FNDLRKVTKE QWDTIEELIR KTKGS
SEQ ID No. 62
>gi|49168580|emb|CAG38785.1 I MDH2 [Homo sapiens]
MLSALVRPVSAALRRSFSTSAQNNAKVAVLGASGGIGQPLSLLLKNSPLVSRLTLYDIAHTPGVAADLSH
IETKAAVKGYLGPEQLPDCLKGCDVVVIPAGVPRKPGMTRDDLFNTNATIVATLTAACAQHCPEAMICVI
ANPVNSTIPITAEVFKKHGVYNPNKIFGVTTLDIVRANTFVAELKGLDPARVNVPVIGGHAGKTIIPLIS
QCTPKVDFPQDQLTALTGRIQEAGTEVVKAKAGAGSATLSMAYAGARFVFSLVDAMNGKEGVVECSFVKS
QETECTYFSTPLLLGKKGIEKNLGIGKVSSFEEKMISDAIPELKASIKKGEDFVKTLK
SEQ ID No. 63
Heat-shock protein beta-1
MTERRVPFSL LRGPSWDPFR DWYPHSRLFD QAFGLPRLPE EWSQWLGGSS WPGYVRPLPP ΆAIESPAVAA PAYSRALSRQ LSSGVSEIRH TADRWRVSLD VNHFAPDELT VKTKDGVVEI TGKHEERQDE HGYISRCFTR KYTLPPGVDP TQVSSSLSPE GTLTVEAPMP KLATQSNEIT IPVTFESRAQ LGGPEAAKSD ETAAK
SEQ ID No. 64
>gi I 21735621 I ref |NP_005909.2 I mitochondrial malate dehydrogenase precursor
[Homo sapiens]
MLSALARPASAALRRSFSTSAQNNAKVAVLGASGGIGQPLSLLLKNSPLVSRLTLYDIAHTPGVAADLSH IETKAAVKGYLGPEQLPDCLKGCDVVVIPAGVPRKPGMTRDDLFNTNATIVATLTAACAQHCPEAMICVI ANPVNSTIPITAEVFKKHGVYNPNKIFGVTTLDIVRANTFVAELKGLDPARVNVPVIGGHAGKTIIPLIS QCTPKVDFPQDQLTALTGRIQEAGTEVVKAKAGAGSATLSMAYAGARFVFSLVDAMNGKEGVVECSFVKS QETECTYFSTPLLLGKKGIEKNLGIGKVSSFEEKMISDAIPELKASIKKGEDFVKTLK
SEQ ID No. 65
>gi|27753613|gb|AAO22156.1|AF202897_l prostate and colon associated protein
[Homo sapiens]
MDCREMDLYEDYQSPFDFDAGVNKSYLYLSPSGNSSPPGSPTLQKFGLLRTDPVPEEGEDVAATISATET LSEEEQEELRRELAKVEEEIQTLSQVLAAKEKHLAEIKRKLGINSLQELKQNIAKGWQDVTATSAYKKTS ETLSQAGQKASAAFSSVGSVITKKLEDVKNSPTFKSFEEKVENLKSKVGGTKPAGGDFGEVLNSAANASA TTTEPLPEKTQESL
SEQ ID No. 66
>gi I 3757661 | emb | CAA76365.1 | secretagogin [Homo sapiens]
MDSSREPTLGRLDAAGFWQVWRRFDADEKGYIEEKELDAFFLHMLMKLGTDDTVMKANLHKVKQQFMTTQ
DASKDGRIRMKELAGMFLSEDENFLLLFRRENPLDSSVEFMQIWRKYDADSSGFISAAELRNFLRDLFLH
HKKAISEAKLEEYTGTMMKIFDRNKDGRLDLNDLARILALQENFLLQFKMDACSTEERKRDFEKIFAYYD
VSKTGALEGPEVDGFVKDMMELVQPSISGVDLDKFREILLRHCDVNKDGKIQKSELALCLGLKINP
SEQ ID No. 67
>gi|49457021|emb|CAG46831.1| TPD52 [Homo sapiens]
MDRGEQGLLRTDPVPEEGEDVAATISATETLSEEEQEELRRELAKVEEEIQTLSQVLAAKEKHLAEIKRK
LGINSLQELKQNIAKGWQDVTATSAYKKTSETLSQAGQKASAAFSSVGSVITKKPEDVKNSPTFKSFEEK
VENLKSKVGGTKPAGGDFGEVLNSAANASATTTEPLPEKTQESL
SEQ ID No. 68
>gi|54695758 | gb | AAV38251.1 | tumor protein D52 [Homo sapiens]
MDRGEQGLLRTDPVPEEGEDVAATISATETLSEEEQEELRRELAKVEEEIQTLSQVLAAKEKHLAEIKRK LGINSLQELKQNIAKGWQDVTATSAYKKTSETLSQAGQKASAAFSSVGSVITKKLEDVKNSPTFKSFEEK VENLKSKVGGTKPAGGDFGEVLNSAANASATTTEPLPEKTQESL
SEQ ID No. 69
>gi I 62898994 I dbj IBAD97351.il N8 protein long isoform (Fragment) variant
[Homo sapiens]
RESPAEARRSSARRGGRSEPGRAAGGGAAEDTRRRAGDMDRGEQGLLRTDPVPEEGEDVAATISATETLS
EKEQEELRRELAKVEEEIQTLSQVLAAKEKHLAEIKRKLGINSLQELKQNIAKGWQDVTATSAYKKTSET
LSQAGQKASAAFSSVGSVITKKLEDVKNSPTFKSFEEKVENLKSKVGGTKPAGGDFGEVLNSAANASATT
TEPLPEKTQESL
SEQ ID No. 70
>gi I 70608174 I ref |NP_001020424.1 I tumor protein D52 isoform 2 [Homo sapiens]
MDRGEQGLLRTDPVPEEGEDVAATISATETLSEEEQEELRRELAKVEEEIQTLSQVLAAKEKHLAEIKRK
LGINSLQELKQNIAKGWQDVTATSAYKKTSETLSQAGQKASAAFSSVGSVITKKLEDVKLQAFSHSFSIR
SIQHSISMPAMRNSPTFKSFEEKVENLKSKVGGTKPAGGDFGEVLNSAANASATTTEPLPEKTQESL
SEQ ID No. 71
>gi I 4507645 I ref I NP_000356.1 I triosephosphate isomerase 1 [Homo sapiens]
MAPSRKFFVGGNWKMNGRKQSLGELIGTLNAAKVPADTEVVCAPPTAYIDFARQKLDPKIAVAAQNCYKV TNGAFTGEISPGMIKDCGATWVVLGHSERRHVFGESDELIGQKVAHALAEGLGVIACIGEKLDEREAGIT EKVVFEQTKVIADNVKDWSKVVLAYEPVWAIGTGKTATPQQAQEVHEKLRGWLKSNVSDAVAQSTRIIYG GSVTGATCKELASQPDVDGFLVGGASLKPEFVDIINAKQ