EP1450864A2 - Konjugate makrocyclischer metallkomplexe mit biomolekülen und deren verwendung zur herstellung von mitteln für nmr- und radiodiagnostik sowie die radiotherapie - Google Patents

Konjugate makrocyclischer metallkomplexe mit biomolekülen und deren verwendung zur herstellung von mitteln für nmr- und radiodiagnostik sowie die radiotherapie

Info

Publication number
EP1450864A2
EP1450864A2 EP02794507A EP02794507A EP1450864A2 EP 1450864 A2 EP1450864 A2 EP 1450864A2 EP 02794507 A EP02794507 A EP 02794507A EP 02794507 A EP02794507 A EP 02794507A EP 1450864 A2 EP1450864 A2 EP 1450864A2
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
tris
tetraazacyclododecane
carboxymethyl
mmol
group
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP02794507A
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Johannes Platzek
Heribert Schmitt-Willich
Günther MICHL
Thomas Frenzel
Detlev Sülzle
Hans Bauer
Bernd Radüchel
Hanns-Joachim Weinmann
Heiko Schirmer
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Bayer Pharma AG
Original Assignee
Schering AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Schering AG filed Critical Schering AG
Publication of EP1450864A2 publication Critical patent/EP1450864A2/de
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D257/00—Heterocyclic compounds containing rings having four nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D257/02—Heterocyclic compounds containing rings having four nitrogen atoms as the only ring hetero atoms not condensed with other rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/08—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier
    • A61K49/10—Organic compounds
    • A61K49/14—Peptides, e.g. proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/0002—General or multifunctional contrast agents, e.g. chelated agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/08—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier
    • A61K49/085—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier conjugated systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
    • A61K49/08—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier
    • A61K49/10—Organic compounds
    • A61K49/14—Peptides, e.g. proteins
    • A61K49/143—Peptides, e.g. proteins the protein being an albumin, e.g. HSA, BSA, ovalbumin

Definitions

  • the invention relates to the subject matter characterized in the claims, i. Conjugates of macrocyclic metal complexes.
  • the conjugates are useful in the preparation of agents, especially contrast agents for NMR and radiodiagnostics, as well as radiotherapy agents.
  • Precondition for a targeted and successful therapy is an exact diagnosis.
  • the possibilities have increased very much in recent years, for example, the NMR and X-ray diagnostics are able to represent virtually every anatomical detail selectively and with great accuracy.
  • the corresponding structures are only visible through the use of contrast agents.
  • the image intensity in proton NMR is essentially determined by the water protons. It depends on the core relaxation times. Complexes of paramagnetic transition metals and lanthanides shorten the relaxation times of adjacent protons through dipolar interactions.
  • the paramagnetic contrast agents are not detected directly, but indirect detection is performed based on the fact that the contrast agents can alter relaxation times of adjacent protons such as water protons. Due to their high magnetic moments and relaxation efficiency, Gd 3 ⁇ Fe 3+ and Mn 2+ are preferred paramagnetic metal cations in NMR diagnostics.
  • An important physical quantity describing the relaxation behavior of protons is the longitudinal relaxation time li. Tissues with short relaxation times T generally provide higher intensity images than those with longer relaxation times.
  • radiopharmaceuticals for diagnostic and therapeutic purposes has also long been known in the field of biological and medical research.
  • radiopharmaceuticals are used to represent certain structures such as the skeleton, organs or tissues.
  • the diagnostic application presupposes the use of such radioactive agents which, after administration, specifically accumulate in the structures in the patient to be examined. These locally accumulating radioactive agents can then be detected, plotted or scanned using suitable detectors, such as scintillation cameras or other suitable recording techniques.
  • suitable detectors such as scintillation cameras or other suitable recording techniques.
  • the distribution and relative intensity of the radioactive agent detected characterizes the location of a structure in which the radioactive agent resides and may represent the presence of anomalies in structures and functions, pathological changes, etc.
  • radiopharmaceuticals can be used as therapeutic agents to irradiate certain diseased tissues or areas. Such treatment requires the production of radioactive therapeutic agents that accumulate in certain structures, organs or tissues.
  • the paramagnetic ions are usually not administered in the form of water-soluble salts, but in the form of chelate complexes. These can be excreted practically unchanged by the body.
  • the relaxivity is thus proportional to the molecular mass of the entire complex.
  • a good NMR contrast agent is characterized, inter alia, by the fact that it has a large value for the relaxivity.
  • Gd-DTPA diethylenetriaminepentaacetic acid conjugates with albumin are described, for example, by MD Ogan et al. in Invest.
  • WO 01/08712 proposes a contrast agent which comprises at least two metal chelate units as image-enhancing groups and at least two "target binding units" for binding the contrast agent molecule to the desired target molecule or target organ in the body.
  • Tetraazacyclododecane tetraacetic acid derivatives of high stability and good solubility due to lack of charge, which are suitable for attachment to biomolecules, are described in EP-A-0 565 930.
  • NMR contrast agents for NMR and radiodiagnosis as well as agents for radiotherapy.
  • these NMR contrast agents should have the highest possible relaxivity and should accumulate as selectively as possible at a desired location in the body.
  • Z represents a hydrogen atom or at least two Z represent a metal ion equivalent
  • B represents a hydrogen atom or a C 1-4 -alkyl radical
  • R represents a hydrogen atom or a straight, branched or cyclic, saturated or unsaturated Ci.io-alkyl or aryl radical, optionally with a
  • Carboxyl group, -SO 3 H or -PO 3 H 2 is substituted, and wherein the alkyl chain of the d. ⁇ 0 -
  • Alkyl radical optionally contains an aryl group and / or 1-2 oxygen atoms, with the proviso that the radicals B and R are not both simultaneously hydrogen atoms,
  • A is a straight or branched, saturated or unsaturated C ⁇ . 30 -hydrocarbon chain which optionally contains 1-5 oxygen atoms, 1-5 nitrogen atoms and / or 1-5 -NR'-
  • R ' is defined as R but can be independently selected, optionally containing 1-3 carboxyl groups, 1-3 -SO 3 H, 1-3 -PO 3 H 2 and / or 1-3
  • Halogen atoms is substituted, wherein optionally 1-3 carbon atoms as
  • Carbonyl groups are present, wherein the chain or a part of the chain may be arranged in a ring, and which is designed so that X 'has at least 3 atoms with the
  • X represents the residue of a group X which has reacted with a biomolecule
  • Bio represents the remainder of a biomolecule, and their salts and theirs
  • alkyl radical means a saturated or unsaturated, straight-chain or branched or cyclic alkyl radical having the specified number of carbon atoms. If this radical can contain further groups or atoms, it is understood in the present case that the further groups or atoms may be present in addition to the already existing atoms of the radical and may be inserted at any position of the radical including the terminal positions.
  • aryl is meant herein preferably phenyl, bisphenyl, pyridyl, furanyl, pyrrolyl and imidazolyl. Particularly preferred is phenyl.
  • Hydrocarbon chain which may be wholly or partially ring-shaped, in the present case is preferably understood to mean a hydrocarbon chain, such as an alkyl chain, for example an aliphatic or aromatic optionally heterocyclic 5- or 6-membered ring (eg phenyl (s), pyridyl (s) or cyclohexyl (s)) or consists thereof.
  • alkyl chain for example an aliphatic or aromatic optionally heterocyclic 5- or 6-membered ring (eg phenyl (s), pyridyl (s) or cyclohexyl (s)) or consists thereof.
  • the acetic or carboxylate methyl radicals on three of the nitrogen atoms of the macrocyclic ring may additionally have a substituent R.
  • the macrocyclic ring may have another substituent B at four of its carbon atoms.
  • B and R can not both simultaneously represent hydrogen atoms, ie that the macrocyclic ring must have further substituents either directly on its ring atoms and / or on the acetic or carboxylate methyl substituents of its nitrogen atoms.
  • B may be a hydrogen atom or a are methyl, ethyl and iso-propyl.
  • R is a straight, branched and / or cyclic, saturated or unsaturated C MO - alkyl (preferably C 5- ⁇ 0 alkyl) or aryl radical, optionally substituted by a Carboxyl group, -SO 3 H or -PO 3 H 2 is substituted, and wherein the alkyl chain of the C 1-10 - alkyl radical optionally contains an aryl group and / or 1-2 oxygen atoms.
  • alkyl radicals are straight-chain or branched, preferably saturated C.
  • ⁇ -alkyl radicals such as methyl, ethyl, n-propyl, iso-propyl, n-butyl, iso-butyl and tert-butyl, and cyclohexyl preferred.
  • straight chain, branched or cyclic, preferably saturated C are . ⁇ 0 -alkyl radicals such as pentyl, hexyl, cyclohexyl, heptyl, octyl, nonyl and decyl preferred.
  • the C 1-10 alkyl group for R may optionally be substituted with a carboxyl group, -SO 3 H or -PO 3 H 2 .
  • substituted alkyl groups are -CH 2 -COOH and -C (CH 3 ) 2 -COOH.
  • the alkyl chain of the -10- alkyl radical may contain an aryl group and / or 1-2 oxygen atoms.
  • the aryl group and the oxygen atoms may be present anywhere within the alkyl chain.
  • the aryl group can also be arranged terminally on the alkyl chain and form an aryloxy group together with an oxygen atom.
  • a phenyl group is suitable.
  • a preferred alkyl chain for R optionally containing an aryl group and 1-2 oxygen atoms is a radical of the formula - (CH 2 ) m - (O) n - (phyleneyl) p -Y wherein m is an integer of 1-5 is n, 0 or 1, p is 0 or 1 and Y is a hydrogen atom, a methoxy radical, a carboxyl group, -SO 3 H or -PO 3 H 2 .
  • the substituent Y is preferably in the para position.
  • the aryl radical for R is preferably a phenyl radical which is optionally substituted by a carboxyl group, -SO 3 H or -PO 3 H 2 .
  • R when B is a hydrogen atom, isopropyl, isobutyl, tert-butyl, a straight-chain or branched C 5 . ⁇ 0 alkyl, cyclohexyl, -CH 2 -COOH, -C (CH 3) 2 - COOH, a phenyl radical or a radical of the formula - (CH 2 ) m - (O) n - (phenylene) pY, wherein m is an integer from 1 to 5, n is 0 or 1, p is 0 or 1 and Y is hydrogen, methoxy, carboxyl, -SO 3 H or -PO 3 H 2 , and most preferably isopropyl, cyclohexyl or phenyl.
  • the substituted macrocyclic ring of the conjugate of the formula I has been attached via a spacer A to a biomolecule by means of a group X, which can react with a biomolecule.
  • the spacer A represents a straight or branched, saturated or unsaturated C ⁇ .
  • Contains 30 hydrocarbon chain is that wherein R 'is as above R is as defined, but can be selected independently optionally having from 1-5 oxygen atoms, 1-5 nitrogen atoms and / or 1-5 -NR radicals, optionally substituted with 1-3 Carboxyl groups, 1-3 -SO 3 H, 1-3 -PO 3 H 2 and / or 1-3 halogen atoms is substituted, in which optionally 1-3 carbon atoms are present as carbonyl groups, wherein the chain or a part of the chain be arranged in a ring and is such that X 'is linked to at least 3 atoms of the nitrogen atom to which A is attached.
  • the spacer should have at least three atoms and preferably at least four atoms in a chain between the nitrogen atom of the macrocyclic ring and X '.
  • the chain of atoms is understood to mean the shortest bond between the nitrogen atom of the macrocyclic ring and X ', even across a ring.
  • a para-phenylene group would be considered as a spacer with four atoms in a chain and a meta-phenylene group as a spacer with three atoms in a chain.
  • carbon, nitrogen and oxygen atoms are calculated equally as one atom at a time. Substituents on these atoms or side chains do not belong to the number of atoms within the chain.
  • -AX is chosen differently from the substituents -CH (R) -CO 2 Z.
  • the spacer A can be represented as a radical A'-U, wherein A 'is bonded to the nitrogen atom of the macrocyclic ring and U to X'.
  • a ' is preferable
  • Q represents a hydrogen atom, a Ci.io-alkyl radical which is optionally substituted with a carboxyl group, or an aryl radical which is optionally substituted with a carboxyl group, a d- 1 5-alkoxy group, an aryloxy group or a halogen atom, and R ' as R is defined, but can be chosen independently, or d) a group of the formula
  • o is 0 or 1 and the ring is optionally fused with a benzene ring, which benzene ring, if present, may be substituted with a methoxy or carboxyl group, -SO 3 H or -PO 3 H 2 .
  • the positions indicated by I are bound to the adjacent groups and the position ⁇ is bound to a nitrogen atom of the macrocyclic ring and the position ⁇ to U.
  • Q is preferably a linear or branched d. 10 -, in particular C 1 -alkyl radical, such as methyl, ethyl or iso-propyl, or a cyclohexyl radical. These radicals may optionally be substituted with a carboxyl group, with a carboxymethyl radical being preferred.
  • the preferred aryl radical for Q is phenyl. This aryl radical may be substituted by a carboxyl group, a d. ⁇ 5 alkoxy group, an aryloxy group, in particular a phenoxy group or a halogen atom such as fluorine, chlorine, bromine or iodine, and in particular fluorine or chlorine. If the aryl radical is a phenyl radical, this is preferably substituted in para-position with one of the groups mentioned. Particularly preferred groups for Q are methyl, phenyl and p-dodecanoxyphenyl.
  • R ' is as defined above R, but can be chosen independently of R. More preferably, R 'is a hydrogen atom.
  • a ' is selected from a bond, -CH (CO 2 H) -, -C (CH 3 ) H-CO-NH-, -C (phenyl) H-CO-NH-, -C (p-dodecanoxyphenyl) H-CO-NH-,
  • R 1 is -OCH 3 , -CO 2 H, -SO 3 H or -PO 3 H 2 .
  • U is preferably a straight or branched, saturated or unsaturated C ⁇ .
  • 30 -hydrocarbon chain which optionally contains 1-3 oxygen atoms, 1-3 nitrogen atoms and / or 1-3 -NR "radical, wherein R" is as defined above R, but can be chosen independently contains, and wherein optionally 1- 3 carbon atoms are present as carbonyl groups, wherein the chain or a part of the chain can be arranged in a ring.
  • U is an aryl radical or a C 1-20 -alkyl radical (preferably straight-chain or at least partially cyclic and saturated) which optionally contains 1-3 oxygen atoms, 1-3 -NR "radicals, 1-2 phenylene radicals and / or a pyridylene radical in which optionally 1-3 carbon atoms are present as carbonyl groups and which is optionally substituted by an aryl radical (eg phenyl).
  • a 'and U must together be such that X' has at least three atoms with the nitrogen atom to which A ' The chain of at least three atoms is defined as in A above.
  • the aryl radical for U is preferably a phenyl radical. The d.
  • 20 -alkyl radical U is preferably a linear, saturated alkyl group d- 10 alkyl, cyclohexyl or cyclohexyl-d-5.
  • the alkyl radicals of these radicals may optionally be interrupted by 1 oxygen atom, 1 phenylene radical and / or 1 pyridylene radical or contain a -CO-NR "radical or be substituted by phenyl.
  • U is preferably selected from -CH 2 -, - (CH 2 ) 5 -, - (CH 2 ) 10 -, -phenylene-O-CH 2 -, -phenylene-O- (CH 2 ) 3 -, -phenylene-O- (CH 2 ) 10 -, -CH 2 -phenylene -, -cyclohexylene-O-CH 2 -, -phenylene-, -C (phenyl) H-, -CH 2 -pyridylene-O-CH 2 -, -CH 2 -pyridylene- and -CH 2 -CO- NH-CH 2 -CH 2 -
  • the phenylene groups are preferably substituted in the para-position and the pyridylene groups are preferably pyrid-2,5-ylene or pyrid-2,4-ylene -Groups.
  • Preferred groups for the spacer A are:
  • a group X ' is attached to the macrocyclic ring in the conjugate of the formula I.
  • This group X ' is the remainder of a group X that has reacted with a biomolecule.
  • X is carboxyl (-COOH), activated carboxyl, amino (-NH 2 ), isocyanate (-NCO), isothiocyanate (-NCS), hydrazine (-NHNH 2 ), semicarbazide (-NHCONHNH 2 ), thiosemicarbazide (- NHCSNHNH 2 ), chloroacetamide (-NHCOCH 2 Cl), bromoacetamide (-NHCOCH 2 Br), iodoacetamide (-NHCOCH 2 L), acylamino such as acetylamino (-NHCOCH 3 ), mixed anhydrides, azide, hydroxide, sulfonyl chloride, carbodiimide or a group of formulas
  • Hal represents a halogen atom
  • activated carboxyl group are meant above those carboxyl groups which are derivatized so as to facilitate the reaction with a biomolecule. Which groups can be used for activation is known and reference can be made, for example, to M. and A. Bodanszky, "The Practice of Peptide Synthesis", Springerverlag 1984. Examples are adducts of the carboxylic acid with carbodiimides or activated esters such as e.g. Hydroxybenzotriazole. Most preferably, the activated carboxyl group for X is selected from
  • Z represents a hydrogen atom or a metal ion equivalent.
  • which metal ion is to be complexed in the conjugate according to the invention depends on the intended use of the conjugates.
  • Corresponding conjugates are suitable, for example, for NMR diagnosis, radiodiagnostics and radiotherapy and neutron capture therapy.
  • the conjugates are particularly preferably used in NMR diagnosis as contrast agents.
  • the preparation of complexes for NMR diagnosis can be carried out in the manner disclosed in patents EP 71564, EP 130934 and DE-OS 34 01 052.
  • the metal oxide or a metal salt for example a chloride, nitrate, acetate, carbonate or sulfate
  • a lower alcohol such as methanol, ethanol or isopropanol
  • the complexing agents are to be used for the production of radiodiagnostic agents or therapeutic agents, the complexes can be prepared from the complexing agents according to the methods described in "Radiotracers for Medical Applications", Vol. I, CRC Press, Boca Raton, Florida.
  • the invention also includes a kit for the preparation of radiopharmaceuticals comprising a conjugate of formula I wherein Z is hydrogen and a compound of a desired metal.
  • the invention further pharmaceutical compositions containing at least one physiologically acceptable conjugate of the general formula I, optionally with the usual additives in galenics.
  • the preparation of the pharmaceutical compositions according to the invention is carried out in a conventional manner by suspending or dissolving the conjugates according to the invention - optionally with the addition of the additives customary in galenicals - in an aqueous medium and then optionally sterilizing the suspension or solution.
  • Suitable additives are, for example, physiologically acceptable buffers (such as tromethamine), additions of complexing agents or weak complexes (such as diethylenetriaminepentaacetic acid or the metal complexes according to the invention corresponding Ca complexes) or - if necessary - electrolytes such as sodium chloride or - if necessary - antioxidants such as ascorbic acid.
  • suspensions or solutions of the agents according to the invention in water or physiological saline solution are desired for enteral administration or other purposes, they are mixed with one or more excipients customarily used in galenicals [eg methylcellulose, lactose, mannitol] and / or surfactant (s). [for example, lecithins, Tween ®, Myrj ®] and / or flavoring substance (s) for taste correction [for example, ethereal oils].
  • excipients customarily used in galenicals
  • s eg methylcellulose, lactose, mannitol
  • surfactant for example, lecithins, Tween ®, Myrj ®
  • flavoring substance (s) for taste correction for example, ethereal oils.
  • the invention therefore also relates to processes for the preparation of the complex compounds and their salts. As final security remains a purification of the isolated complex salt.
  • compositions according to the invention preferably contain 1 ⁇ mol-1.3 mol / l of the complex salt and are usually dosed in amounts of 0.0001-5 mmol / kg. They are intended for enteral and parenteral administration.
  • ions of paramagnetic elements with atomic numbers 21-29, 42, 44 and 58-70.
  • suitable ions are the chromium (III), iron (II), cobalt (II), nickel (II), copper (II), praseodymium (III), neodymium (III), samarium (III) and ytterbium (III) ion.
  • the gadolinium (III) -, terbium (III) -, dysprosium (III) -, holmium (III) -, erbium (III) -, manganese (II) - and iron (III) ion are particularly preferred for NMR diagnosis.
  • the conjugates according to the invention fulfill the diverse requirements for suitability as contrast agents for magnetic resonance imaging.
  • they are ideally suited to improve after oral or parenteral administration by increasing the signal intensity of the image obtained using the magnetic resonance imaging in its validity.
  • they show the high potency necessary to burden the body with the least possible amounts of foreign matter and the good compatibility needed to maintain the noninvasive nature of the studies.
  • the good solubility in water and low osmolality of the conjugates according to the invention makes it possible to produce highly concentrated solutions to keep the volume load of the circuit within reasonable limits and to compensate for the dilution by the body fluid, that is NMR diagnostics must be 100 to 1000 times better water soluble than for the NMR spectroscopy.
  • the conjugates according to the invention not only have a high stability in vitro, but also a surprisingly high stability in vivo, so that a release or an exchange of non-covalently bound in the complexes - in itself toxic - ions within the time in which the new contrast agent completely excreted, only extremely slowly.
  • the agents according to the invention are dosed for use as NMR diagnostic agents in amounts of 0.0001-5 mmol / kg, preferably 0.005-0.5 mmol / kg. Details of the application are e.g. in H.-J. Weinmann et al., Am. J. of Roentgenology 142, 619 (1984).
  • organ-specific NMR diagnostic agents can be used, for example, to detect tumors and myocardial infarction.
  • Particularly low dosages of the complexes according to the invention are suitable for use in radiotherapy and radiodiagnosis.
  • the therapeutic agents according to the invention may be administered together with a suitable carrier such as serum or saline and together with another protein such as human serum albumin.
  • a suitable carrier such as serum or saline and together with another protein such as human serum albumin.
  • the dosage depends on the type of cellular disorder, the metal ion used and the type of imaging method.
  • the therapeutic agents according to the invention are administered parenterally, preferably i. ., applied.
  • the complex compounds according to the invention can be used advantageously as susceptibility reagents and as shift reagents for in vivo NMR spectroscopy.
  • the conjugates according to the invention are also suitable as radiodiagnostic and radiotherapeutic agents. Details of their application and dosage will e.g. Radiotracers for Medical Applications, CRC Press, Boca Raton, Florida 1983, and Eur. J. Nucl. Med. 17 (1990) 346-364 and Chem. Rev. 93 (1993) 1137-1156.
  • Suitable for SPECT are the complexes with the isotopes 11 ln and 99m Tc.
  • positron emission tomography which uses positron-emitting isotopes such as 43 Sc, 44 Sc, 52 Fe, 55 Co, 68 Ga, ⁇ 4 Cu, 86 Y, and 9 Tc (Heiss, WD, Phelps, ME, Positron Emission Tomography of Brain, Springer Verlag Berlin, Heidelberg, New York 1983).
  • the conjugates according to the invention are also suitable for the differentiation of malignant and benign tumors in areas without a blood-brain barrier.
  • the conjugates according to the invention accumulate in malignant tumors (no diffusion into healthy tissue, but high permeability of tumor vessels), they can also support the radiotherapy of suspected tumors. This differs from the corresponding diagnosis only by the amount and type of isotope used.
  • the goal here is the destruction of tumor cells by high-energy short-wave radiation with the shortest possible range.
  • interactions of the in the Complex metals contained such as iron or gadolinium
  • ionizing radiation eg X-rays
  • neutron beams exploited with neutron beams. This effect significantly increases the local radiation dose at the site where the metal complex is located (eg in tumors).
  • the metal complex conjugates according to the invention are therefore also suitable as a radiosensitizing substance in the radiotherapy of malignant tumors (eg exploitation of Mössbauer effects or in neutron capture therapy).
  • Suitable .beta.-emitting ions are, for example, 46 Sc, 47 Sc, 48 Sc, 72 Ga, 73 Ga, 90 Y, 67 Cu, 109 Pd, 111 Ag, 1 9 Pm, 153 Sm, 16 ⁇ Ho, 177 Lu, 186 Re and 188 Re.
  • Suitable low-half-life ⁇ -emitting ions are for example 211 At, 211 Bi, 2i2 gj 213 ⁇ gj unc j 2 ⁇ gj WO b e j 2i2 gj is preferred.
  • a suitable photon and electron emitting ion is 1S8 Gd, which can be obtained from 157 Gd by neutron capture.
  • the conjugates according to the invention are for use in the method described by RL Mills et al. [Nature Vol. 336, (1988), p. 787], the central ion must be derived from a Mössbauer isotope such as 57 Fe or 151 Eu.
  • inorganic bases e.g., hydroxides, carbonates or bicarbonates
  • inorganic bases e.g. Sodium, potassium, lithium, magnesium or calcium
  • organic bases such as, but not limited to, primary, secondary and tertiary amines, e.g. Ethanolamine, morpholine, glucamine, N-methyl and N, N-dimethylglucamine, as well as basic amino acids, e.g. Lysine, arginine and ornithine or amides original neutral or acidic amino acids.
  • the neutral complex compounds it is possible to add, for example, in acidic complex salts in aqueous solution or suspension, so much of the desired base that the neutral point is reached.
  • the resulting solution can then be concentrated to dryness in vacuo.
  • water-miscible solvents such as, for example, lower alcohols (methanol, ethanol, isopropanol and others), lower ketones (acetone and others), polar ethers (tetrahydrofuran, dioxane, 1, 2). Dimethoxyethane and others) to precipitate and thus easy to isolate and easy to clean crystals. It has proven to be particularly advantageous already during the Add complex formation of the reaction mixture and thereby save a process step.
  • conjugates of the formula I according to the invention can be prepared by processes known to those skilled in the art.
  • the conjugates of formula I can be obtained by a process wherein a compound of formula II
  • Z, B, R and A are as defined above and X represents a group capable of reacting with a biomolecule, is reacted with a biomolecule and then, if desired, in a manner known per se with at least one metal oxide or metal salt of a desired element is reacted and optionally then in the complexes thus obtained still existing acidic hydrogen atoms are completely or partially substituted by cations of inorganic and / or organic bases, amino acids or amino acid amides.
  • the compounds of the formula II can be obtained, for example, by a process in which a compound of the formula III
  • B is as defined above, optionally after introducing protective groups for the nitrogen atoms with Nu-AX "and Nu-CH (R) -CO 2 Z ', where A and R are as above and Nu is a nucleofuge, X "is X or a protected form of X, and X is as defined above and Z 'is a hydrogen atom, a metal ion equivalent, preferably an alkali or alkaline earth metal such as especially sodium or potassium, or a
  • the optionally present protective groups can then be removed and the reaction can be carried out in a manner known per se with at least one metal oxide or metal salt of a desired element If appropriate, all or some of the acidic hydrogen atoms still present in the complexes obtained can be completely or partially replaced by cations of inorganic and / or organic bases, amino acids or amino acid amides.
  • the nitrogen-unsubstituted macrocycle is first reacted with the protected moiety AX ", leaving a Nocieofug as leaving group, and one of the four nitrogen atoms in the macrocycle undergoes stoichiometric reaction control to give group A leaving the leaving group in this way one obtains a monofunctionalized macrocycle which contains the radical X in protected form (X ").
  • the remaining three nucleophilic nitrogen atoms of the macrocycle are each reacted with a protected carboxylic acid, which carries a nucleofug in the ⁇ -position to the carboxyl group.
  • ⁇ Nu nucleofuges (eg Br, I, O-triflate, mer.ylate, tosylate, etc).
  • Z - Gd 3
  • the reactant used is a macrocycle which already carries suitable protective groups SG at three of the four nitrogen atoms.
  • protective groups which are suitable here are tert-butyl oxycarbonyl (t-BOC), COCF 3 , carbobenzoxy (Cbo) or fluorenylmethoxycarbonyl (FMOC), etc.
  • SG protecting group (eg BOC, Cbo, COCF 3 , FMOC, etc.)
  • one of the four nitrogen atoms of the macrocycle is initially blocked by an appropriate protecting group SG.
  • suitable protective groups are formyl, benzyl, boctrityl, etc.
  • the reaction takes place at the three remaining nucleophilic nitrogen atoms with appropriately protected carboxylic acid derivatives which carry a corresponding nucleofug in ⁇ -position.
  • the removal of the protective group SG initially introduced on the first nitrogen atom and derivatization with AX.sup.-, which in turn likewise carries a nucleofug, is carried out schematically, the third process variant being shown schematically below, where the radicals in the formulas are as defined above:
  • the reaction is carried out in a mixture of water and organic solvents such as: isopropanol, ethanol, methanol, butanol, dioxane, tetrahydrofuran, dimethylformamide, dimethylacetamide, formamide or dichloromethane.
  • organic solvents such as: isopropanol, ethanol, methanol, butanol, dioxane, tetrahydrofuran, dimethylformamide, dimethylacetamide, formamide or dichloromethane.
  • Ternary mixtures of water, isopropanol and dichloromethane are preferred.
  • the reaction is carried out in a temperature range between -10 ° C and 100 ° C, preferably between 0 ° C and 30 ° C.
  • Ci-C ⁇ alkyl C ⁇ -C arrive 10 aryl and C 6 -C 10 -Ar (dC) - alkyl groups and trialkylsilyl groups in question.
  • the methyl, ethyl, propyl, isopropyl, n-butyl, i-butyl and tert-butyl groups are preferred.
  • the NH groups can be protected in a variety of ways and released again.
  • the N-trifluoroacetyl derivative is replaced by potassium or sodium carbonate in water (H. Newman, J. Org. Chem., 30: 287 (1965), MA Schwartz et al., J. Am. Chem. Soc., 95 G12 (1973). ) or simply cleaved by ammonia solution (M. Imazama and F. Eckstein, J. Org. Chem., 44: 2039 (1979)).
  • the tert-butyloxycarbonyl derivative is also mildly cleavable: stirring with trifluoroacetic acid is sufficient (BF Lundt et al., J. Org.
  • the molecule Nu-AX is preferably first synthesized independently If the molecule contains an amide group, this is prepared, for example, by reacting an activated carboxylic acid with an amine
  • the activation of the carboxylic acid is carried out by conventional methods
  • suitable activating reagents are dicyclohexylcarbodiimide (DCC), 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride (EDC), benzotriazol-1-yloxytris (dimethylamino) phosphonium hexafluorophosphate (BOP), and O- (benzotriazoleM-yl) -1,3.3 , 3-tetramethyluronium hexafluorophosphate (HBTU), preferably DCC.
  • O-nucleophilic catalysts such as N-hydroxysuccinimide (NHS)
  • the deprotection can then be carried out by hydrogenolysis.
  • this carboxylic acid function to a suitable functional group of a suitable biomolecule, it should as a rule be activated first.
  • Activated esters are preferably generated intermediately, which are then attacked by a nucleophilic group of the biomolecule. In this way, a covalent linkage between the biomolecule and the compound of formula II.
  • Preferred activated esters are the esters of N-hydroxysuccinimide, the esters of paranitrophenol or the esters of pentafluorophenol.
  • the group X is to be linked to the biomolecule in the form of an isothiocyanate
  • the group X represents a maleimide which is e.g. can react selectively with thiol functions of the biomolecule.
  • the group X is a nucleophile (NH 2 , SH) which acts on a suitable functionality of the biomolecule (activated ester, maleimide, etc.). Numerous maleinimide functionalized biomolecules are commercially available.
  • the synthesis of the conjugates is usually carried out in such a way that first a derivatized and functionalized chelate complex is generated, which is then linked to the biomolecule.
  • the chelate complex according to the invention is incorporated during the synthesis of the biomolecule in this. This can be done, for example, during the sequential synthesis of oligopeptides on the synthesis robot.
  • the usual in the synthesis of the corresponding biomolecule protecting groups can be introduced into the compound of the invention. These are then split off again in the course of the usual synthesis algorithms on the synthesizer.
  • biomolecule is understood to mean any molecule which either naturally occurs, for example, in the body or has been prepared synthetically with an analogous structure.
  • these are understood as meaning those molecules which interact with a molecule which occurs biologically, for example in the body, or a structure occurring therein Interaction can occur, so that, for example, accumulate the conjugates at certain desired locations of the body.
  • body is understood to mean any plant or animal body, animal and especially human bodies being preferred.
  • Biomolecules are, in particular, the molecules occurring in living beings, which, as products of evolutionary selection through ordered and complex interaction, perform specific tasks for the organism and form the basis of its vital functions (metabolism and form change, reproduction, energy balance).
  • larger molecules proteins, nucleic acids, polysaccharides, lipids, etc.
  • simple building blocks amino acids, nucleobases, monosaccharides, fatty acids, etc.
  • Corresponding macromolecules are also referred to as biopolymers.
  • the biomolecule for example, have a polypeptide backbone of amino acids with side chains, which can enter into a reaction with the reactive group X of the compounds of the formula II according to the invention.
  • side chains include, for example, the carboxyl groups of aspartic and glutamic acid residues, the amino groups of lysine residues, the aromatic groups of tyrosine and histidine residues, and the sulfhydryl groups of cysteine residues.
  • biomolecules are particularly suitable for the formation of the conjugates according to the invention:
  • Biopolymers proteins, such as proteins that have a biological function, HSA, BSA, etc., proteins and peptides that accumulate in certain places in the organism (eg at receptors, cell membranes, channels, etc.), peptides that can be cleaved by proteases, peptides with synthetic breaking points (eg labile esters, amides, etc.), peptides cleaved by metalloproteases, peptides with photocleavable linkers, peptides with oxidative (oxydases) cleavable groups, peptides with natural and unnatural amino acids, glycoproteins (glycopeptides), signaling proteins, antiviral proteins and apoctosis, synthetically modified biopolymers such as linker-derivatized biopolymers, modified metalloproteases and derivatized oxidase, etc., carbohydrates (mono- to polysaccharides), such as derivatized sugars, cleavable in the
  • Antibody fragments polyclonal antibodies, minibodies, single chains (including those linked to multiple fragments by linkers), red blood cells and other blood components, cancer markers (eg, CAA), and cell adhesion substances (eg, Lewis X and anti-Lewis X).
  • cancer markers eg, CAA
  • cell adhesion substances eg, Lewis X and anti-Lewis X.
  • DNA and RNA fragments such as derivatized DNAs and RNAs (eg those found by the SELEX method), synthetic RNA and DNA (also with unnatural bases), PNAs (Hoechst) and antisense, ⁇ -amino acids (Seebach ), Vector amines for introduction into the cell, biogenic amines, pharmaceuticals, oncological preparations, synthetic polymers directed to a biological target (eg receptor), steroids (natural and modified), prostaglandins, taxol and its derivatives, endothelins, alkaloids, Folic acid and its derivatives, bioactive lipids, fats, fatty acid esters, synthetically modified mono-, di- and triglycerides, liposomes derivatized on the surface, micelles from natural fatty acids or from perfluoroalkyl compounds, porphyrins, texaphrins, extended porphyrins, cytochromes, inhibitors, neuramidases, neuropeptides, immuno
  • the number of compounds of formula II per biomolecule is in principle arbitrary, but is preferably a molecular ratio of 0.1: 1 to 10: 1, in particular from 0.5: 1 to 7: 1.
  • the compounds of formula II are suitable for conjugation to all those molecules which are reacted in the art with fluorescent dyes, for example, to determine their location by epifluorescence microscopy within the cell.
  • the compounds can be conjugated with any drugs in principle, and then after administration of the drug to track the transport within the organism by the NMR technique.
  • the conjugates of the compounds of the formula II according to the invention and the biomolecules contain further additional molecules which have been conjugated to the biomolecules.
  • biomolecule in the sense of the invention therefore includes all molecules which occur in biological systems and all molecules which are biocompatible.
  • Elemental analysis (based on the anhydrous substance): calc .: C, 49.30, H, 6.32, Gg, 17.93, N, 6.39, found: C, 49.56, H, 6.10, Gd, 17.52, N, 6.63
  • the acidic eluate is freeze-dried.
  • Gd complex of 10- [8 -> (N-maleimido) -1-methyl-2,5-dioxo-3,6-diazaoctyl] -1,4,7- ⁇ , ⁇ ', ⁇ "-tris- ( cyclohexyl) -1,4,7-tris (carboxymethyl) -1, 4,7,10-tetraazacyclododecane 2.63 g (3 mmol) of the Gd-complex acid described in Example 3 are dissolved in 15 ml of DMF, 380 ml (3.3 mmol) of N-hydroxysuccinimide and 681 mg (3.3 mmol) of dicyclohexylcarbodiimide are added, while cooling with ice and preactivated for 1 hour in the ice.
  • Elemental analysis (based on the anhydrous substance): calc .: C, 48.89, H, 6.03, Dy, 19.45, N, 8.38, F: C, 49.11, H, 6, 4, Dy, 19.22, N, 8.36
  • reaction mixture is now at 0 ° C to a solution of 400 ml of aqueous 32proz.
  • Sodium hydroxide and 2 g of tetrabutylammonium hydrogen carbonate are added dropwise (about 15 min) and stirred for 30 min.
  • the phases are separated, and the aqueous phase extracted three times with 200 ml of dichloromethane.
  • the organic phases are dried over sodium sulfate, the solution is evaporated to dryness and chromatographed on silica gel (methylene chloride). The fractions containing the product are combined and evaporated. Yield: 33.2 g (51% of theory)
  • the Dy complex of 10- [1- (carboxymethyl) -2 is obtained in an analogous manner -oxo-piperidin-3-yl] -1,4,7- ⁇ , ⁇ ', ⁇ "-tris (isopropyl) -1, 4, 7-tris (carboxymethyl) -1, 4,7,10-tetraazacyclododecane. Yield: 10.8 g (66% of theory) of a colorless powder Water content (Karl Fischer): 7.6%
  • Elemental analysis (based on the anhydrous substance): calc .: C, 49.80, H, 6.21, Gd, 18.63, N, 8.30, F: C, 49.99, H, 6.17, Gd, 18.51, N, 8.21
  • Examples 30-90 describe conjugates of the gadolinium complexes described above with biomolecules.
  • the conjugates were prepared according to the following general procedures L-IV. The results are summarized in Table 1.
  • AAV stands for general protocol
  • ACTH for adrenocorticotropic hormone
  • RP-18 denotes a reversed phase stationary chromatography phase.
  • the number of complexes per biomolecule was determined by inductively coupled plasma atomic emission spectroscopy (ICP).
  • bovine serum albumin (BSA)

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Radiology & Medical Imaging (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

Die Erfindung betrifft Konjugate aus makrocyclischen Metallkomplexen mit Biomolekülen und deren Herstellung. Die Konjugate eignen sich als Kontrastmittel in der NMR- und Radiodiagnostik sowie als Mittel für die Radiotherapie. Durch eine spezielle Ligandierung der Makrocyclen wird eine hohe Relaxivität erreicht und ein Feintuning der Relaxivität ermöglicht.

Description

Konjugate makrocyclischer Metallkomplexe mit Biomolekülen und deren Verwendung zur Herstellung von Mitteln für die NMR- und Radiodiagnostik sowie die
Radiotherapie
Die Erfindung betrifft den in den Patentansprüchen gekennzeichneten Gegenstand, d.h. Konjugate makrocyclischer Metallkomplexe. Die Konjugate eignen sich für die Herstellung von Mitteln, insbesondere Kontrastmitteln für die NMR- und Radiodiagnostik sowie von Mitteln für die Radiotherapie.
Voraussetzung für eine gezielte und erfolgreiche Therapie ist eine exakte Diagnose. Gerade auf dem diagnostischen Gebiet haben die Möglichkeiten in den vergangenen Jahren sehr stark zugenommen, wobei beispielsweise die NMR- und Röntgendiagnostik in der Lage sind, praktisch jedes anatomische Detail selektiv und mit großer Genauigkeit darzustellen. In vielen Fällen werden die entsprechenden Strukturen aber erst durch die Anwendung von Kontrastmitteln sichtbar. Darüber hinaus besteht die Möglichkeit, die Kontrastmittel so auszugestalten, daß sie sich selektiv in den gewünschten Zielstrukturen anreichern. Hierdurch läßt sich die Genauigkeit der Bildgebung bei gleichzeitiger Verringerung der benötigten Kontrastmittelmenge erhöhen.
Als Kontrastmittel für die NMR-Diagnostik eigenen sich Chelatkomplexe von paramagnetischen Metallen. Theorie und Anwendung von Gadolinium(lll) Chelaten als NMR-Kontrastmittel sind in einem Übersichtsartikel von P. Caravan et al. in Chem. Rev. 1999, 99, 2293-2352 ausführlich erläutert.
Die Bildintensität im Protonen-NMR wird im wesentlichen durch die Wasserprotonen bestimmt. Sie hängt von den Kernrelaxationszeiten ab. Komplexe von paramagnetischen Übergangsmetallen und Lanthanoiden verkürzen die Relaxationszeiten von benachbarten Protonen durch dipolare Wechselwirkungen. Die paramagnetischen Kontrastmittel werden nicht direkt detektiert, sondern es erfolgt eine indirekte Detektion auf der Grundlage der Tatsache, daß die Kontrastmittel Relaxationszeiten von benachbarten Protonen wie Wasserprotonen verändern können. Aufgrund ihrer hohen magnetischen Momente und Relaxationseffizienz sind Gd3\ Fe3+ und Mn2+ bevorzugte paramagnetische Metallkationen in der NMR-Diagnostik. Eine wichtige physikalische Größe, welche das Relaxationsverhalten von Protonen beschreibt, ist die longitudinale Relaxationszeit li. Gewebe mit kurzen Relaxationszeiten T liefern im allgemeinen Bilder höherer Intensität als solche mit längeren Relaxationszeiten. Trägt man für ein bestimmtes paramagnetisches Ion den Reziprokwert der gemessenen Relaxationszeit J^ in Abhängigkeit von der Konzentration c auf, so erhält man Geraden der Steigung R. Diese Steigung nennt man auch Relaxivitat, welche ein Maß für das Vermögen des entsprechenden paramagnetischen Ions ist, die Relaxationszeit der benachbarten Protonen zu verkürzen.
Die Anwendung von Radiopharmaka für diagnostische und therapeutische Zwecke ist ebenfalls seit langem im Bereich der biologischen und medizinischen Forschung bekannt. Insbesondere werden Radiopharmaka dazu benutzt, um bestimmte Strukturen wie beispielsweise das Skelett, Organe oder Gewebe darzustellen. Die diagnostische Anwendung setzt den Gebrauch solcher radioaktiver Mittel voraus, die sich nach Applikation spezifisch in den Strukturen im Patienten anreichern, die untersucht werden sollen. Diese sich lokal anreichernden radioaktiven Mittel können dann mittels geeigneter Detektoren, wie beispielsweise Szintilations-Kameras oder anderer geeigneter Aufnahmeverfahren, aufgespürt, geplottet oder szintigraphiert werden. Die Verteilung und relative Intensität des detektierten radioaktiven Mittels kennzeichnet den Ort einer Struktur, in dem sich das radioaktive Mittel befindet, und kann die Anwesenheit von Anomalien in Strukturen und Funktionen, pathologische Veränderungen etc. darstellen.
In ähnlicher Weise können Radiopharmaka als therapeutische Mittel angewendet werden, um bestimmte krankhafte Gewebe oder Bereiche zu bestrahlen. Solche Behandlung erfordert die Herstellung radioaktiver therapeutischer Mittel, die sich in bestimmten Strukturen, Organen oder Geweben anreichern.
Aufgrund ihrer zum Teil relativ hohen Giftigkeit werden die paramagnetischen Ionen im Regelfall nicht in Form von wasserlöslichen Salzen verabreicht, sondern in Form Chelatkomplexen. Diese können praktisch unverändert vom Körper ausgeschieden werden. Je kleine die Komplexe in Lösung sind, desto geringer ist ihr Trägheitsmoment und desto schnellen drehen sie sich in Lösung (Tumbling Motion Time). Je schneller ein Komplex rotiert, desto geringer ist seine Relaxivitat. Die Relaxivitat ist somit der Molekularmasse des gesamten Komplexes proportional. Ein gutes NMR-Kontrastmittel zeichnet sich unter anderem dadurch aus, daß es einen großen Wert für die Relaxivitat hat. Konjugate aus Gd-DTPA (Diethylentriaminpentaessigsäure) mit Albumin sind beispielsweise von M.D. Ogan et al. in Invest. Radiol. 1987, 22, 665-671 und U. Schmiedl et al. in Radiology 1987, 162, 205-210 beschrieben. Konjugate aus makrocyclischem Metallkomplexen und Biomolekülen sind in der WO 95/31444 offenbart. Zur Verbesserung der Selektivität von Kontrastmitteln schlägt die WO 01/08712 ein Kontrastmittel vor, das mindestens zwei Metallchelateinheiten als bildverbessernde Gruppen und mindestens zwei "Zielbindungseinheiten" zur Bindung des Kontrastmittelmoleküls an das gewünschte Zielmolekül oder Zielorgan im Körper umfaßt.
Große Kontrastmittelmoleküle mit hoher Molmasse werden gemäß der WO 97/02051 durch Einbau von makrocyclischen Metallkomplexen in Kaskadenpolymere erhalten.
Tetraazacyclododecantetraessigsäurederivate hoher Stabilität und guter Löslichkeit aufgrund fehlender Ladung, die sich zur Anbindung an Biomoleküle eignen, sind in dem EP- A-0 565 930 beschrieben.
Die vorstehend beschriebene Anbindung von makrocyclischen Metallkomplexen an Biomoleküle ermöglicht sowohl eine Erhöhung der Relaxivitat als auch der Selektivität des Kontrastmittels. Je höher die Relaxivitat des Kontrastmittels ist, desto weniger Kontrastmittel muß dem Patienten verabreicht werden und desto höher ist die Kontrastgebung im Bild. Aus diesem Grund ist es weiterhin wünschenswert, NMR- Kontrastmittel mit möglichst hoher Relaxivitat zur Verfügung zu stellen.
Eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung besteht somit darin, verbesserte Kontrastmittel für die NMR- und Radiodiagnostik sowie Mittel für die Radiotherapie zur Verfügung zu stellen. Insbesondere sollen diese NMR-Kontrastmittel eine möglichst hohe Relaxivitat aufweisen und sich möglichst selektiv an einem gewünschten Ort im Körper anreichern.
Es wurde nun gefunden, daß diese Aufgabe überraschend dadurch gelöst werden kann, daß ein 1 ,4,7,10-Tetraazacyclododecanmakrocyclus mit speziellen Liganden versehen wird und dieser so ligandierte Makrocyclus an ein Biomolekül angebunden wird. Durch die spezielle Ligandierung des Makrocyclus wird die Relaxivitat des erhaltenen Kontrastmittels erhöht und außerdem wird eine Feintuning der Relaxivitat für eine gewünschte Anwendung möglich. Die vorliegende Erfindung betrifft somit Konjugate der Formel I
worin
Z ein Wasserstoffatom darstellt oder mindestens zwei Z ein Metallionenäquivalent darstellen,
B ein Wasserstoffatom oder einen C^-Alkylrest darstellt,
R ein Wasserstoffatom oder einen geraden, verzweigten oder cyclischen, gesättigten oder ungesättigten Ci.io-Alkyl- oder Arylrest darstellt, der gegebenenfalls mit einer
Carboxylgruppe, -SO3H oder -PO3H2 substituiert ist, und wobei die Alkylkette des d.ι0-
Alkylrestes gegebenenfalls eine Arylgruppe und/oder 1-2 Sauerstoffatome enthält, mit der Maßgabe, daß die Reste B und R nicht beide gleichzeitig Wasserstoffatome darstellen,
A eine gerade oder verzweigte, gesättigte oder ungesättigte Cι.30-Kohlenwasserstoffkette darstellt, die gegebenenfalls 1-5 Sauerstoffatome, 1-5 Stickstoffatome und/oder 1-5 -NR'-
Reste, worin R' wie R definiert ist, aber unabhängig gewählt werden kann, enthält, die gegebenenfalls mit 1-3 Carboxylgruppen, 1-3 -SO3H, 1-3 -PO3H2 und/oder 1-3
Halogenatomen substituiert ist, bei der gegebenenfalls 1-3 Kohlenstoffatome als
Carbonylgruppen vorliegen, wobei die Kette oder ein Teil der Kette ringförmig angeordnet sein kann, und die so ausgestaltet ist, daß X' über mindestens 3 Atome mit dem
Stickstoffatom, an das A gebunden ist, verbunden ist,
X' den Rest einer Gruppe X darstellt, die mit einem Biomolekül eine Reaktion eingegangen ist, und Bio den Rest eines Biomoleküls darstellt, sowie deren Salze und deren
Verwendung zur Herstellung von Mitteln für die NMR- und Radiodiagnostik sowie die
Radiotherapie. Konjugate mit makrocyclischen Verbindungen, in denen A ein Rest -CH(R3)-C(O)-NH- (CH2)ι.6-NH-D- ist, waren aus der EP-A-0 565 930 bekannt. Diese Konjugate sind daher in Anspruch 1 ausgenommen.
Wenn nicht anders angegeben wird vorliegend unter "Alkylrest" ein gesättigter oder ungesättigter, gradkettiger oder verzweigter oder cyclischer Alkylrest mit der angegebenen Anzahl von Kohlenstoffatomen verstanden. Wenn dieser Rest weitere Gruppen oder Atome enthalten kann, wird darunter vorliegend verstanden, daß die weiteren Gruppen oder Atome zusätzlich zu den bereits vorhandenen Atomen des Restes vorliegen und an einer beliebigen Position des Restes einschließlich der terminalen Positionen eingefügt sein können.
Unter "Aryl" wird vorliegend vorzugsweise Phenyl, Bisphenyl, Pyridyl, Furanyl, Pyrrolyl und Imidazolyl verstanden. Besonders bevorzugt ist Phenyl.
Unter "Kohlenwasserstoffkette", die ganz oder teilweise ringförmig angeordnet sein kann, wird vorliegend vorzugsweise eine Kohlenwasserstoffkette wie beispielsweise eine Alkylkette verstanden, die beispielsweise einen aliphatischen oder aromatischen gegebenenfalls heterocyclischen 5- oder 6-Ring (z.B. Phenyl(en), Pyridyl(en) oder Cyclohexyl(en)) umfassen kann oder daraus besteht.
In den erfindungsgemäßen Konjugaten der Formel I sind drei der vier Stickstoffatome des makrocyclischen Rings mit gegebenenfalls substituierten Essigsäure- bzw. Carboxylatmethylresten substituiert. Diese Reste tragen zur Koordination bzw. zum Ladungsausgleich eines koordinierten Metallions bei. Daher steht Z entweder für ein Wasserstoffatom oder ein Metallionenäquivalent.
Die Essigsäure- bzw. Carboxylatmethylreste an drei der Stickstoffatome des makrocyclischen Rings können zusätzlich einen Substituenten R aufweisen. Darüber hinaus kann der makrocyclische Ring an vier seiner Kohlenstoffatome einen weiteren Substituenten B aufweisen. Eine Besonderheit der erfindungsgemäßen Konjugate besteht darin, daß B und R nicht beide gleichzeitig Wasserstoffatome darstellen können, d.h. daß der makrocyclische Ring entweder direkt an seinen Ringatomen und/oder an den Essigsäure- bzw. Carboxylatmethylsubstituenten seiner Stickstoffatome weitere Substituenten aufweisen muß. Durch die geeignete Wahl dieser zusätzlichen Substituenten erfolgt das gewünschte Feintuning der Relaxivitat eines unter Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindung hergestellten Kontrastmittels.
B kann ein Wasserstoffatom oder ein sind Methyl, Ethyl und iso-Propyl.
Falls in den erfindungsgemäßen Konjugaten der Formel I B ein Wasserstoffatom ist, steht R für einen geraden, verzweigten und/oder cyclischen, gesättigten oder ungesättigten CMO- Alkyl- (vorzugsweise C5-ι0-Alkyl-) oder Arylrest, der gegebenenfalls mit einer Carboxylgruppe, -SO3H oder -PO3H2 substituiert ist, und wobei die Alkylkette des C1-10- Alkylrestes gegebenenfalls eine Arylgruppe und/oder 1-2 Sauerstoffatome enthält. Als Alkylreste sind geradkettige oder verzweigte, vorzugsweise gesättigte C .10- und insbesondere d ^-Alkylreste, wie Methyl, Ethyl, n-Propyl, iso-Propyl, n-Butyl, iso-Butyl und tert.-Butyl, sowie Cyclohexyl bevorzugt. Alternativ sind geradkettige, verzweigte oder cyclische, vorzugsweise gesättigte C .ι0-Alkylreste wie Pentyl, Hexyl, Cyclohexyl, Heptyl, Octyl, Nonyl und Decyl bevorzugt. Der C1-10-Alkylrest für R kann gegebenenfalls mit einer Carboxylgruppe, -SO3H oder -PO3H2 substituiert sein. Bevorzugte Beispiele derartiger substituierter Alkylgruppen sind -CH2-COOH und -C(CH3)2-COOH. Darüber hinaus kann die Alkylkette des Cι-10-Alkylrestes eine Arylgruppe und/oder 1-2 Sauerstoffatome enthalten. Die Arylgruppe und die Sauerstoffatome können an beliebiger Stelle innerhalb der Alkylkette vorliegen. Die Arylgruppe kann zudem auch endständig an der Alkylkette angeordnet sein und zusammen mit einem Sauerstoffatom eine Aryloxygruppe bilden. Als Arylgruppe eignet sich insbesondere eine Phenylgruppe.
Eine bevorzugte Alkylkette für R, die gegebenenfalls eine Arylgruppe und 1-2 Sauerstoffatome enthält, ist ein Rest der Formel -(CH2)m-(O)n-(Phyenylen)p-Y, worin m eine ganze Zahl von 1-5 ist, n 0 oder 1 ist, p 0 oder 1 ist und Y ein Wasserstoffatom, ein Methoxyrest, eine Carboxylgruppe, -SO3H oder -PO3H2 ist. Der Substituent Y befindet sich dabei vorzugsweise in para-Position.
Der Arylrest für R ist vorzugsweise ein Phenylrest, der gegebenenfalls mit einer Carboxylgruppe, -SO3H oder -PO3H2 substituiert ist.
Vorzugsweise steht R, wenn B ein Wasserstoffatom ist, für Isopropyl, Isobutyl, tert.-Butyl, einen geradkettigen oder verzweigten C5.ι0-Alkylrest, Cyclohexyl, -CH2-COOH, -C(CH3)2- COOH, einen Phenylrest oder einen Rest der Formel -(CH2)m-(O)n-(Phenylen)p-Y, worin m eine ganze Zahl von 1 bis 5 ist, n 0 oder 1 ist, p 0 oder 1 ist und Y ein Wasserstoffatom, einen Methoxyrest, eine Carboxylgruppe, -SO3H oder -PO3H2 darstellt, und besonders bevorzugt für Isopropyl, Cyclohexyl oder Phenyl.
Der substituierte makrocyclische Ring des Konjugats der Formel I ist mittels einer Gruppe X, die mit einem Biomolekül eine Reaktion eingehen kann, über einen Spacer A an ein Biomolekül angebunden worden.
Der Spacer A stellt dabei eine gerade oder verzweigte, gesättigte oder ungesättigte Cι.30 Kohlenwasserstoffkette dar, die gegebenenfalls 1-5 Sauerstoffatome, 1-5 Stickstoffatome und/oder 1-5 -NR'-Reste, worin R' wie vorstehend R definiert ist, aber unabhängig gewählt werden kann, enthält, die gegebenenfalls mit 1-3 Carboxylgruppen, 1-3 -SO3H, 1-3 -PO3H2 und/oder 1-3 Halogenatomen substituiert ist, bei der gegebenenfalls 1-3 Kohlenstoffatome als Carbonylgruppen vorliegen, wobei die Kette oder ein Teil der Kette ringförmig angeordnet sein kann, und die so ausgestaltet ist, daß X' über mindestens 3 Atome mit dem Stickstoffatom, an das A gebunden ist, verbunden ist.
Der Spacer soll mindestens drei Atome und vorzugsweise mindestens vier Atome in einer Kette zwischen dem Stickstoffatom des makrocyclischen Rings und X' aufweisen. Als Kette von Atomen wird dabei die kürzeste Verbindung zwischen dem Stickstoffatom des makrocyclischen Rings und X' auch über einen Ring hinweg verstanden. Im Sinne dieser Definition würde beispielsweise eine para-Phenylengruppe als Spacer mit vier Atomen in einer Kette angesehen und eine meta-Phenylengruppe als Spacer mit drei Atomen in einer Kette. Bei der Bestimmung der Länge der Atomkette werden Kohlenstoff-, Stickstoff- und Sauerstoffatome gleichmäßig jeweils als ein Atom gerechnet. Substituenten an diesen Atomen oder Seitenketten gehören nicht zur Anzahl der Atome innerhalb der Kette.
Bevorzugt wird -A-X abweichend von den Substituenten -CH(R)-CO2Z gewählt.
Vorzugsweise läßt sich der Spacer A als ein Rest A'-U darstellen, worin A' an das Stickstoffatom des makrocyclischen Rings und U an X' gebunden ist. Hierin ist A' vorzugsweise
a) eine Bindung, b) -CH(CO2H)-, c) eine Gruppe der Formel
worin Q ein Wasserstoffatom, einen Ci.io-Alkylrest, der gegebenenfalls mit einer Carboxylgruppe substituiert ist, oder einen Arylrest darstellt, der gegebenenfalls mit einer Carboxylgruppe, einer d-15-Alkoxygruppe, einer Aryloxygruppe oder einem Halogenatom substituiert ist, und R' wie R definiert ist, aber unabhängig gewählt werden kann, oder d) eine Gruppe der Formel
worin o 0 oder 1 ist, und der Ring gegebenenfalls mit einem Benzolring anelliert ist, wobei dieser Benzolring, falls vorhanden, mit einer Methoxy- oder Carboxylgruppe, -SO3H oder -PO3H2 substituiert sein kann. In den vorstehenden Gruppen unter c) und d) sind die an den mit I gekennzeichneten Positionen an die benachbarten Gruppen gebunden und die Position α ist an ein Stickstoffatom des makrocyclischen Rings und die Position ß an U gebunden.
In der Gruppe der Formel
ist Q vorzugsweise ein linearer oder verzweigter d.10-, insbesondere C1- -Alkylrest, wie Methyl, Ethyl oder iso-Propyl, oder ein Cyclohexylrest. Diese Reste können gegebenenfalls mit einer Carboxylgruppe substituiert sein, wobei ein Carboxymethylrest bevorzugt wird. Der bevorzugte Arylrest für Q ist Phenyl. Dieser Arylrest kann mit einer Carboxylgruppe, einer d.ι5-Alkoxygruppe, einer Aryloxygruppe, wie insbesondere einer Phenoxygruppe oder einem Halogenatom, wie Fluor, Chlor, Brom oder lod und insbesondere Fluor oder Chlor substituiert sein. Wenn der Arylrest ein Phenylrest ist, ist dieser vorzugsweise in paraStellung mit einer der genannten Gruppen substituiert. Besonders bevorzugte Gruppen für Q sind Methyl, Phenyl und p-Dodecanoxyphenyl.
R' ist wie vorstehend R definiert, kann aber unabhängig von R gewählt werden. Besonders bevorzugt ist R' ein Wasserstoff atom.
Vorzugsweise ist A' ausgewählt aus einer Bindung, -CH(CO2H)-, -C(CH3)H-CO-NH-, -C(Phenyl)H-CO-NH-, -C(p-Dodecanoxyphenyl)H-CO-NH-,
worin R1 -OCH3, -CO2H, -SO3H oder -PO3H2 ist.
Wenn der Spacer A als ein Rest A'-U dargestellt wird und A' die vorstehend definierte Bedeutung hat, ist U vorzugsweise eine gerade oder verzweigte, gesättigte oder ungesättigte Cι.30-Kohlenwasserstoffkette, die gegebenenfalls 1-3 Sauerstoffatome, 1-3 Stickstoff atome und/oder 1-3 -NR"-Rest, worin R" wie vorstehend R definiert ist, aber unabhängig gewählt werden kann, enthält und bei der gegebenenfalls 1-3 Kohlenstoffatome als Carbonylgruppen vorliegen, wobei die Kette oder ein Teil der Kette ringförmig angeordnet sein kann. Besonders bevorzugt ist U ein Arylrest oder ein C1-20-Alkylrest (vorzugsweise geradlinig oder zumindest teilweise cyclisch und gesättigt) der gegebenenfalls 1-3 Sauerstoffatome, 1-3 -NR"-Reste, 1-2 Phenylenreste und/oder einen Pyridylenrest enthält, bei dem gegebenenfalls 1-3 Kohlenstoffatome als Carbonylgruppen vorliegen, und der gegebenenfalls mit einem Arylrest (z.B. Phenyl) substituiert ist. A' und U müssen zusammen so ausgestaltet sind, daß X' über mindestens drei Atome mit dem Stickstoffatom, an das A' gebunden ist, verbunden ist. Die Kette von mindestens drei Atomen ist wie vorstehend zu A definiert. Der Arylrest für U ist vorzugsweise ein Phenylrest. Der d.20-Alkylrest für U ist vorzugsweise ein linearer, gesättigter d-10-Alkylrest, Cyclohexylrest oder Cyclohexyl-d-5-alkylrest. Die Alkylreste dieser Reste können gegebenenfalls durch 1 Sauerstoff atom, 1 Phenylenrest und/oder 1 Pyridylenrest unterbrochen sein oder einen -CO-NR"-Rest enthalten oder mit Phenyl substituiert sein. Bevorzugt wird U ausgewählt aus -CH2-, -(CH2)5-, -(CH2)10-, -Phenylen-O-CH2-, -Phenylen-O-(CH2)3-, -Phenylen-O-(CH2)10-, -CH2-Phenylen-, -Cyclo- hexylen-O-CH2-, -Phenylen-, -C(Phenyl)H-, -CH2-Pyridylen-O-CH2-, -CH2-Pyridylen- und -CH2-CO-NH-CH2-CH2-. In den vorgenannten bevorzugten Gruppen für U sind die Phenylengruppen vorzugsweise in para-Stellung substituiert und bei den Pyridylengruppen handelt es sich vorzugsweise um Pyrid-2,5-ylen- oder Pyrid-2,4-ylen-Gruppen.
Bevorzugte Gruppen für den Spacer A sind:
Über den Spacer A ist eine Gruppe X' an den makrocyclischen Ring in dem Konjugat der Formel I angebunden. Bei dieser Gruppe X' handelt es sich um den Rest einer Gruppe X, die mit einem Biomolekül eine Reaktion eingegangen ist. Beispielsweise eignet sich für X Carboxyl (-COOH), aktiviertes Carboxyl, Amino (-NH2), Isocyanat (-NCO), Isothiocyanat (-NCS), Hydrazin (-NHNH2), Semicarbazid (-NHCONHNH2), Thiosemicarbazid (-NHCSNHNH2), Chloracetamid (-NHCOCH2CI), Bromacetamid (-NHCOCH2Br), lodacetamid (-NHCOCH2l), Acylamino, wie beispielsweise Acetylamino (-NHCOCH3), gemischte Anhydride, Azid, Hydroxid, Sulfonylchlorid, Carbodiimid oder eine Gruppe der Formeln
worin Hai ein Halogenatom darstellt.
Unter aktivierter Carboxylgruppe werden vorstehend solche Carboxylgruppen verstanden, die so derivatisiert sind, daß sie die Reaktion mit einem Biomolekül erleichtern. Welche Gruppen zur Aktivierung verwendet werden können, ist bekannt und es kann beispielsweise auf M. und A. Bodanszky, "The Practice of Peptide Synthesis", Springerverlag 1984 verwiesen werden. Beispiele sind Adukte der Carbonsäure mit Carbodiimiden oder aktivierter Ester wie z.B. Hydroxybenzotriazolester. Besonders bevorzugt wird die aktivierte Carboxylgruppe für X ausgewählt aus
In der Formel I steht Z für ein Wasserstoffatom oder ein Metallionäquivalent. Welches Metallion in dem erfindungsgemäßen Konjugat komplexiert vorliegen soll, hängt von der beabsichtigten Anwendung der Konjugate ab. Entsprechende Konjugate eignen sich beispielsweise für die NMR-Diagnostik, die Radiodiagnostik und Radiotherapie und die Neutroneneinfangtherapie. Besonders bevorzugt werden die Konjugate in der NMR- Diagnostik als Kontrastmittel eingesetzt.
Die Herstellung von Komplexen für die NMR-Diagnostik kann in der Weise erfolgen, wie sie in den Patentschriften EP 71564, EP 130934 und DE-OS 34 01 052 offenbart worden ist. Dazu wird das Metalloxid oder ein Metallsalz (beispielsweise ein Chlorid, Nitrat, Acetat, Carbonat oder Sulfat) des gewünschten Elements in Wasser und/oder einem niederen Alkohol (wie Methanol, Ethanol oder Isopropanol) gelöst oder suspendiert und mit der Lösung oder Suspension der äquivalenten Menge des erfindungsgemäßen Komplexbildners umgesetzt.
Sollen die Komplexbildner zur Herstellung von Radiodiagnostika oder -therapeutika Verwendung finden, kann die Herstellung der Komplexe aus den Komplexbildnern nach den in "Radiotracers for Medical Applications", Vol I, CRC Press, Boca Raton, Florida beschriebenen Methoden erfolgen.
Es kann wünschenswert sein, den Komplex erst kurz vor seiner Verwendung herzustellen, insbesondere, wenn er als Radiopharmakon eingesetzt werden soll. Daher umfaßt die Erfindung auch einen Kit zur Herstellung von Radiopharmaka, umfassend ein Konjugat der Formel I, worin Z Wasserstoff ist, und eine Verbindung eines gewünschten Metalls.
Gegenstand der Erfindung sind ferner pharmazeutische Mittel, die mindestens ein physiologisch verträgliches Konjugat der allgemeinen Formel I enthalten, gegebenenfalls mit den in der Galenik üblichen Zusätzen.
Die Herstellung der erfindungsgemäßen pharmazeutischen Mittel erfolgt in an sich bekannter Weise, indem man die erfindungsgemäßen Konjugate - gegebenenfalls unter Zugabe der in der Galenik üblichen Zusätze - in wäßrigem Medium suspendiert oder löst und anschließend die Suspension oder Lösung gegebenenfalls sterilisiert. Geeignete Zusätze sind beispielsweise physiologisch unbedenkliche Puffer (wie z.B. Tromethamin), Zusätze von Komplexbildnern oder schwachen Komplexen (wie z.B. Diethylentriaminpentaessigsäure oder die zu den erfindungsgemäßen Metallkomplexen korrespondierenden Ca-Ko plexe) oder - falls erforderlich - Elektrolyte wie z.B. Natriumchlorid oder - falls erforderlich - Antioxidantien wie z.B. Ascorbinsäure.
Sind für die enterale Verabreichung oder andere Zwecke Suspensionen oder Lösungen der erfindungsgemäßen Mittel in Wasser oder physiologischer Salzlösung erwünscht, werden sie mit einem oder mehreren in der Galenik üblichen Hilfsstoff(en) [z.B. Methylcellulose, Lactose, Mannit] und/oder Tensid(en) [z.B. Lecithine, Tween®, Myrj®] und/oder Aromastoff(en) zur Geschmackskorrektur [z.B. ätherischen ölen] gemischt.
Prinzipiell ist es auch möglich, die erfindungsgemäßen pharmazeutischen Mittel auch ohne Isolierung der Komplexsalze herzustellen. In jedem Fall muß besondere Sorgfalt darauf verwendet werden, die Chelatbildung so vorzunehmen, daß die erfindungsgemäßen Salze und Salzlösungen praktisch frei sind von nicht komplexierten toxisch wirkenden Metallionen.
Dies kann beispielsweise mit Hilfe von Farbindikatoren wie Xylenolorange durch Kontrolltitrationen während des Herstellungsprozesses gewährleistet werden. Die Erfindung betrifft daher auch Verfahren zur Herstellung der Komplexverbindungen und ihrer Salze. Als letzte Sicherheit bleibt eine Reinigung des isolierten Komplexsalzes.
Die erfindungsgemäßen pharmazeutischen Mittel enthalten vorzugsweise 1 fMol-1,3 Mol/I des Komplexsalzes und werden in der Regel in Mengen von 0,0001-5 mMol/kg dosiert. Sie sind zur enteralen und parenteralen Applikation bestimmt.
Die erfindungsgemäßen Konjugate kommen zur Anwendung
1. für die NMR-Diagnostik in Form ihrer Komplexe mit den Ionen der paramagnetischen Elemente mit den Ordnungszahlen 21-29, 42, 44 und 58-70. Geeignete Ionen sind beispielsweise das Chrom(lll)-, Eisen(ll)-, Cobalt(ll), Nickel(ll)- , Kupfer(ll)-, Praseodym(lll)-, Neodym(lll)-, Samarium(lll)- und Ytterbium(lll)-ion. Wegen ihres starken magnetischen Moments sind für die NMR-Diagnostik besonders bevorzugt das Gadolinium(lll)-, Terbium(lll)-, Dysprosium(lll)-, Holmium(lll)-, Erbium(lll)-, Mangan(ll)- und Eisen(lll)-ion.
2. für die Radiodiagnostik und Radiotherapie in Form ihrer Komplexe mit den Radioisotopen der Elemente mit den Ordnungszahlen 26, 27, 29, 31 , 32, 37-39, 43, 46, 47, 49, 61 , 62, 64, 67, 70, 71 , 75, 77, 82 und 83. Die erfindungsgemäßen Konjugate erfüllen die vielfältigen Voraussetzungen für die Eignung als Kontrastmittel für die Kernspintomographie. So sind sie hervorragend dazu geeignet, nach oraler oder parenteraler Applikation durch Erhöhung der Signalintensität das mit Hilfe des Kernspintomographen erhaltene Bild in seiner Aussagekraft zu verbessern. Ferner zeigen sie die hohe Wirksamkeit, die notwendig ist, um den Körper mit möglichst geringen Mengen an Fremdstoffen zu belasten, und die gute Verträglichkeit, die notwendig ist, um den nichtinvasiven Charakter der Untersuchungen aufrechtzuerhalten.
Die gute Wasserlöslichkeit und geringe Osmolalität der erfindungsgemäßen Konjugate erlaubt es, hochkonzentrierte Lösungen herzustellen, damit die Volumenbelastung des Kreislaufs in vertretbaren Grenzen zu halten und die Verdünnung durch die Körperflüssigkeit auszugleichen, das heißt NMR-Diagnostika müssen 100- bis 1000fach besser wasserlöslich sein als für die NMR-Spektroskopie. Weiterhin weisen die erfindungsgemäßen Konjugate nicht nur eine hohe Stabilität in vitro auf, sondern auch eine überraschend hohe Stabilität in vivo, so daß eine Freigabe oder ein Austausch der in den Komplexen nicht kovalent gebundenen - an sich giftigen - Ionen innerhalb der Zeit, in der die neuen Kontrastmittel vollständig wieder ausgeschieden werden, nur äußerst langsam erfolgt.
Im allgemeinen werden die erfindungsgemäßen Mittel für die Anwendung als NMR- Diagnostika in Mengen von 0,0001-5 mMol/kg, vorzugsweise 0,005-0,5 mMol/kg, dosiert. Details der Anwendung werden z.B. in H.-J. Weinmann et al., Am. J. of Roentgenology 142, 619 (1984) diskutiert.
Niedrige Dosierungen (unter 1 mg/kg Körpergewicht) von organspezifischen NMR- Diagnostika sind zum Beispiel zum Nachweis von Tumoren und von Herzinfarkt einsetzbar. Besonders niedrige Dosierungen der erfindungsgemäßen Komplexe sind für die Anwendung in der Radiotherapie und Radiodiagnostik geeignet.
Bei der in vivo-Applikation der erfindungsgemäßen therapeutischen Mittel können diese zusammen mit einem geeigneten Träger wie z.B. Serum oder physiologischer Kochsalzlösung und zusammen mit einem anderen Protein wie z.B. Human Serum Albumin verabreicht werden. Die Dosierung ist dabei abhängig von der Art der zellulären Störung, dem benutzten Metallion und der Art der bildgebenden Methode. Die erfindungsgemäßen therapeutischen Mittel werden parenteral, vorzugsweise i. ., appliziert.
Details der Anwendungen von Radiotherapeutika werden z.B. in R. W. Kozak et al. TIBTEC, Oktober 1986, 262, diskutiert (s. a. Bioconjugate Chem. 12 (2001) 7-34).
Ferner können die erfindungsgemäßen Komplexverbindungen vorteilhaft als Suszeptibilitäts-Reagenzien und als shift-Reagenzien für die in vivo-NMR-Spektroskopie verwendet werden.
Die erfindungsgemäßen Konjugate sind aufgrund ihrer günstigen radioaktiven Eigenschaften und der guten Stabilität der in ihnen enthaltenen Komplexverbindungen auch als Radiodiagnostika und Radiotherapeutika geeignet. Details ihrer Anwendung und Dosierung werden z.B. in "Radiotracers for Medical Applications", CRC-Press, Boca Raton, Florida 1983, sowie in Eur. J. Nucl. Med. 17 (1990) 346-364 und Chem. Rev. 93 (1993) 1137-1156 beschrieben.
Für SPECT geeignet sind die Komplexe mit den Isotopen 11ln und 99mTc.
Eine weitere bildgebende Methode mit Radioisotopen ist die Positronen-Emissions- Tomographie, die positronenemittierende Isotope wie z.B. 43Sc, 44Sc, 52Fe, 55Co, 68Ga, β4Cu, 86Y und 9 Tc verwendet (Heiss, W.D.; Phelps, M.E.; Positron Emission Tomography of Brain, Springer Verlag Berlin, Heidelberg, New York 1983).
Die erfindungsgemäßen Konjugate sind überraschenderweise auch zur Differenzierung von malignen und benignen Tumoren in Bereichen ohne Blut-Hirn-Schranke geeignet.
Sie zeichnen sich auch dadurch aus, daß sie vollständig aus dem Körper eliminiert werden und somit gut verträglich sind.
Da sich die erfindungsgemäßen Konjugate in malignen Tumoren anreichern (keine Diffusion in gesunde Gewebe, aber hohe Durchlässigkeit von Tumorgefäßen), können sie auch die Strahlentherapie von mahnen Tumoren unterstützen. Diese unterscheidet sich von der entsprechenden Diagnostik nur durch die Menge und Art des verwendeten Isotops. Ziel ist dabei, die Zerstörung von Tumorzellen durch energiereiche kurzwellige Strahlung mit einer möglichst geringen Reichweite. Hierzu werden Wechselwirkungen der in den Komplexen enthaltenen Metalle (wie z.B. Eisen oder Gadolinium) mit ionisierenden Strahlungen (z.B. Röntgenstrahlen) oder mit Neutronenstrahlen ausgenutzt. Durch diesen Effekt wird die lokale Strahlendosis am Ort, wo sich der Metallkomplex befindet (z.B. in Tumoren) signifikant erhöht. Um die gleiche Strahlendosis im malignen Gewebe zu erzeugen, kann bei Anwendung solcher Metallkomplexe die Strahlenbelastung für gesunde Gewebe erheblich reduziert und damit belastende Nebenwirkungen für die Patienten vermieden werden. Die erfindungsgemäßen Metallkomplex-Konjugate eignen sich deshalb auch als radiosensibilisierende Substanz bei der Strahlentherapie von malignen Tumoren (z.B. Ausnutzen von Mössbauer-Effekten oder bei Neutroneneinfangtherapie). Geeignete ß- emittierende Ionen sind z.B. 46Sc, 47Sc, 48Sc, 72Ga, 73Ga, 90Y, 67Cu, 109Pd, 111Ag, 1 9Pm, 153Sm, 16βHo, 177Lu, 186Re und 188Re. Bevorzugt werden 90Y, 177Lu, 72Ga, 1S3Sm und β7Cu. Geeignete geringe Halbwertzeiten aufweisende α-emittierende Ionen sind z.B. 211At, 211Bi, 2i2gj 213 ^ gj uncj 2ι gj WObej 2i2gj bevorzugt ist. Ein geeignetes Photonen- und Elektronenemittierendes Ion ist 1S8Gd, das aus 157Gd durch Neutroneneinfang erhalten werden kann.
Ist die erfindungsgemäße Konjugate zur Anwendung in der von R. L. Mills et al. [Nature Vol. 336, (1988), S. 787] vorgeschlagenen Variante der Strahlentherapie bestimmt, so muß sich das Zentralion von einem Mößbauer-Isotop wie beispielsweise 57Fe oder 151Eu ableiten.
Die Neutralisation eventuell noch vorhandener freier Carboxygruppen erfolgt mit Hilfe anorganischer Basen (z.B. Hydroxyden, Carbonaten oder Bicarbonaten) von z.B. Natrium, Kalium, Lithium, Magnesium oder Calcium und/oder organischer Basen wie unter anderem primärer, sekundärer und tertiärer Amine, wie z.B. Ethanolamin, Morpholin, Glucamin, N- Methyl- und N,N-Dimethylglucamin, sowie basischer Aminosäuren, wie z.B. Lysin, Arginin und Ornithin oder von Amiden ursprüngliche neutraler oder saurer Aminosäuren.
Zur Herstellung der neutralen Komplexverbindungen kann man beispielsweise in sauren Komplexsalzen in wäßriger Lösung oder Suspension soviel der gewünschten Base zusetzen, daß der Neutralpunkt erreicht wird. Die erhaltene Lösung kann anschließend im Vakuum zur Trockne eingeengt werden. Häufig ist es von Vorteil, die gebildeten Neutralsalze durch Zugabe von mit Wasser mischbaren Lösungsmitteln, wie z.B. niederen Alkoholen (Methanol, Ethanol, Isopropanol und andere), niederen Ketonen (Aceton und andere), polaren Ethern (Tetrahydrofuran, Dioxan, 1 ,2-Dimethoxyethan und andere) auszufällen und so leicht zu isolierende und gut zu reinigende Kristallisate zu erhalten. Als besonders vorteilhaft hat es sich erwiesen, die gewünschte Base bereits während der Komplexbildung der Reaktionsmischung zuzusetzen und dadurch einen Verfahrensschritt einzusparen.
Die erfindungsgemäßen Konjugate der Formel I lassen sich nach dem Fachmann bekannten Verfahren herstellen. Beispielsweise könne die Konjugate der Formel I durch ein Verfahren erhalten werden, worin eine Verbindung der Formel II
worin Z, B, R und A wie vorstehend definiert sind und X eine Gruppe darstellt, die mit einem Biomolekül eine Reaktion eingehen kann, mit einem Biomolekül umgesetzt wird und anschließend wenn gewünscht in an sich bekannter Weise mit mindestens einem Metalloxid oder Metallsalz eines gewünschten Elements umgesetzt wird und gegebenenfalls anschließend in den so erhaltenen Komplexen noch vorhandene acide Wasserstoffatome ganz oder teilweise durch Kationen von anorganischen und/oder organischen Basen, Aminosäuren oder Aminosäureamiden substituiert werden.
Die Verbindungen der Formel II können beispielsweise durch ein Verfahren erhalten werden, worin eine Verbindung der Formel III
worin B wie oben definiert ist gegebenenfalls nach Einführung von Schutzgruppen für die Stickstoffatome mit Nu-A-X" und Nu-CH(R)-CO2Z' umgesetzt wird, wobei A und R wie oben definiert sind und Nu ein Nucleofug ist, X" für X oder eine geschützte Form von X steht und X wie oben definiert ist und Z' für ein Wasserstoffatom, ein Metallionenäquivalent, vorzugsweise von einem Alkali- oder Erdalkalimetall wie insbesondere Natrium oder Kalium, oder eine Schutzgruppe für Carboxyl steht. Anschließend können die gegebenenfalls vorhandenen Schutzgruppen entfernt werden und es kann in an sich bekannter Weise mit mindestens einem Metalloxid oder Metallsalz eines gewünschten Elements umgesetzt werden. Gegebenenfalls können anschließend in den so erhaltenen Komplexen noch vorhandene acide Wasserstoffatome ganz oder teilweise durch Kationen von anorganischen und/oder organischen Basen, Aminosäuren oder Aminosäureamiden substituiert werden.
Drei bevorzugte Verfahrensvarianten für die Synthese der Verbindungen der Formel II werden nachfolgend näher beschrieben:
In der ersten Variante wird zunächst der an den Stickstoffen unsubstituierte Makrocyclus mit der geschützten Einheit AX" umgesetzt. Die Gruppe A trägt dabei als Abgangsgruppe ein Nocieofug. Durch stöchiometrische Reaktionskontrolle reagiert eines der vier Stickstoffatome im Makrocyclus mit der Gruppe A unter Austritt der Abgangsgruppe. Auf diese Weise erhält man einen monofunktionalisierten Makrocyclus, welcher den Rest X in geschützter Form (X") enthält. Im zweiten Reaktionsschritt werden die verbliebenen drei nukleophilen Stickstoffatome des Makrocyclus jeweils mit einer geschützten Carbonsäure umgesetzt, welche in α-Position zur Carboxylgruppe ein Nucleofug trägt. Nach Abspaltung der Schutzgruppen von den Carbonsäurefunktionalitäten wird der Komplex aus paramagnetischem Metallion und Chelatligand durch Zugabe von Metalloxid oder Metallsalz fertiggestellt. Diese Verfahrensvariante ist im folgenden schematisch wiedergegeben, wobei die Reste in den Formeln wie vorstehend definiert sind:
1 ,♦ Nu = Nucleofug (z.B. Br, I, O-Triflat, Mer.ylat, Tosylat, etc). Z = - Gd3
71 = Schutzgruppe der Carbonsäure In einer zweiten Variante kommt als Edukt ein Makrocyclus zum Einsatz, welcher an drei der vier Stickstoffatome bereits geeignete Schutzgruppen SG trägt. Als Schutzgruppen eignen sich hier z.B. tert-Butyl-oxycarbonyl (t-BOC), COCF3, Carbobenzoxy (Cbo) oder Fluorenyl-methoxycarbonyl (FMOC), etc. Durch die Anwesenheit der Schutzgruppen ist nur noch eines der vier Stickstoffatome nukleophil und kann mit A-X" reagieren, das seinerseits wie bei der vorstehenden Variante ein Nucleofug Nu trägt. Nach Verknüpfung beider Moleküle unter Austritt der Abgangsgruppe erfolgt eine Abspaltung der drei Schutzgruppen von den Stickstoff atomen. Es schließt sich die Derivatisierung mit Hilfe der Carbonsäurederivate an, wie sie bereits für die vorstehende Variante beschrieben wurde. Diese zweite Verfahrensvariante ist im folgenden schematisch wiedergegeben, wobei die Reste in den Formeln wie oben definiert sind:
SG = Schutzgruppe (z.B. BOC, Cbo, COCF3, FMOC, etc.)
In der dritten Variante wird zunächst eines der vier Stickstoffatome des Makrocyclus durch eine entsprechende Schutzgruppe SG blockiert. Beispiele für geeignete Schutzgruppen sind Formyl, Benzyl, Boctrityl, etc. Nun erfolgt die Umsetzung an den drei verbleibenden nukleophilen Stickstoffatomen mit entsprechend geschützten Carbonsäurederivaten, die in α-Position ein entsprechendes Nucleofug tragen. Anschließend erfolgt die Abspaltung der zunächst am ersten Stickstoffatom eingeführten Schutzgruppe SG und Derivatisierung mit AX", das seinerseits ebenfalls ein Nucleofug trägt. Diese dritte Verfahrensvariante ist im folgenden schematisch wiedergegeben, wobei die Reste in den Formeln wie oben definiert sind:
Als Nucleofug dienen vorteilhaft die Reste:
Cl, Br, I, O-Triflat, Mesylat und Tosylat.
Die Umsetzung wird im Gemisch von Wasser und organischen Lösungsmitteln wie: Isopropanol, Ethanol, Methanol, Butanol, Dioxan, Tetrahydrofuran, Dimethylformamid, Dimethylacetamid, Formamid oder Dichlormethan durchgeführt. Bevorzugt sind ternäre Gemische aus Wasser, Isopropanol und Dichlormethan.
Die Umsetzung wird in einem Temperaturbereich zwischen -10°C und 100°C, vorzugsweise zwischen 0°C und 30°C durchgeführt.
Der Schutz der vorstehend benannten Gruppen kann auf zahlreichen, dem Fachmann bekannten Möglichkeiten erfolgen. Die nachfolgend beschriebenen Ausführungsformen dienen zur Erläuterung dieser Schutzgruppentechniken ohne auf diese Synthesewege beschränkt zu sein.
Als Säureschutzgruppen kommen Ci-Cβ-Alkyl-, Cβ-C10-Aryl- und C6-C10-Ar(d-C )- alkylgruppen sowie Trialkylsilylgruppen in Frage. Bevorzugt werden die Methyl-, Ethyl-, Propyl-, Isopropyl, n-Butyl-, i-Butyl- und die tert-Butylgruppe.
Die Abspaltung dieser Säureschutzgruppen erfolgt nach den dem Fachmann bekannten Verfahren, beispielsweise durch Hydrolyse, Hydrogenolyse, alkalische Verseifung der Ester mit Alkali in wäßrig-alkoholischer Lösung bei Temperaturen von 0 bis 50°C, saure Verseifung mit Mineralsäuren oder im Fall von tert-Butylestern mit Hilfe von Trifluoressigsäure.
Die NH-Gruppen lassen sich in vielfältiger Weise schützen und wieder freilegen. Das N- Trifluoracetylderivat wir durch Kalium- oder Natriumcarbonat in Wasser (H. Newman, J. Org. Chem., 30: 287 (1965), M.A. Schwartz et al., J. Am. Chem. Soc, 95 G12 (1973)) oder einfach durch Ammoniaklösung gespalten (M. Imazama u. F. Eckstein, J. Org. Chem., 44: 2039 (1979)). Ebenfalls milde zu spalten ist das tert-Butyloxycarbonylderivat: es genügt Rühren mit Trifluoressigsäure (B.F. Lundt et al., J. Org. Chem., 43: 2285 (1978)). Sehr groß ist die Gruppe der hydrogenolytisch oder reduzierend zu spaltenden NH-Schutzgruppen: Die N-Benzylgruppe ist bequem mit Wasserstoff/Pd-C zu spalten (W. H. Härtung u. R. Rimonoff, Org. Reactions VII, 262 (1953)), was auch für die Tritylgruppe (L. Zervas et al., J. Am. Chem. Soc, 78: 1359 (1956)) und die Benzyloxycarbonylgruppe gilt (M. Bergmann u. L. Zervas Ber. 65: 1192 (1932)).
Die aktivierten Ester der vorstehend beschriebenen Verbindungen werden wie dem Fachmann bekannt hergestellt. Für den Fall von Isothiocyanaten oder α-Halogenacetaten werden die entsprechenden terminalen Aminvorstufen nach literaturbekannten Methoden mit Thiophosgen oder 2-Halo-Essigsäure-Halogeniden umgesetzt. Auch die Umsetzung mit entsprechend derivatisierten Estern von N-Hydroxysuccinimid wie beispielsweise:
ist möglich (Hai = Halogen).
Allgemein können für diesen Zweck alle üblichen Aktivierungsmethoden für Carbonsäuren verwendet werden, die im Stand der Technik bekannt sind. Das Molekül Nu-A-X" wird bevorzugt zunächst unabhängig synthetisiert. Enthält das Molekül eine Amidgruppe, so wird diese beispielsweise hergestellt, indem eine aktivierte Carbonsäure mit einem Amin umgesetzt wird. Die Aktivierung der Carbonsäure erfolgt nach den üblichen Methoden. Beispiele für geeignete Aktivierungsreagentien sind Dicyclohexylcarbodiimid (DCC), 1- Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)-carbodiimid-hydrochlorid (EDC), Benzotriazol-1 - yloxytris(dimethylamino)-phosphoniumhexafluorophosphat (BOP) und O-(BenzotriazoM-yl)- 1 ,1,3,3-tetramethyluroniumhexafluorophosphat (HBTU), vorzugsweise DCC. Auch der Zusatz von O-nukleophilen Katalysatoren, wie z.B. N-Hydroxysuccinimid (NHS) oder N- Hydroxybenzotriazol ist möglich.
Handelt es sich bei der Gruppe X um eine Carbonsäurefunktion, so kann diese in geschützter Form (z.B. in Form des Benzylesters) eingesetzt werden, die Abspaltung der Schutzgruppe kann dann hydrogenolytisch erfolgen. Um diese Carbonsäurefunktion an eine geeignete funktionelle Gruppe eines geeigneten Biomoleküls zu knüpfen, sollte diese im Regelfall zunächst aktiviert werden. Bevorzugt werden dazu aktivierte Ester intermediär erzeugt, welche dann von einer nukleophilen Gruppe des Biomoleküls angegriffen werden. Auf diese Weise entsteht eine kovalente Verknüpfung zwischen dem Biomolekül und der Verbindung der Formel II. Bevorzugte aktivierte Ester sind die Ester des N-Hydroxysuccinimids, die Ester des Paranitrophenols oder die Ester des Pentafluorphenols. Soll die Gruppe X in Form eines Isothiocyanats an das Biomolekül geknüpft werden, so wird bevorzugt zunächst ein terminales Amin verwendet, welches, wenn notwendig, mit einer geeigneten Schutzgruppe versehen sein kann. Geeignete Schutzgruppen sind aus der Peptidchemie bekannt. Nach Abspaltung der Schutzgruppe kann durch Umsetzung des primären terminalen Amins mit Thiophosgen das Isothiocyanat erzeugt werden. An dieses können nukleophile Gruppen des Biomoleküls addiert werden.
In einer Ausführungsform stellt die Gruppe X ein Maleinimid dar, welches z.B. selektiv mit Thiolfunktionen des Biomoleküls reagieren kann.
In einer anderen Ausführungsform ist die Gruppe X ein Nukleophil (NH2, SH), welches an einer geeigneten Funktionalität des Biomoleküls angreift (aktivierter Ester, Maleinimid, etc.). Zahlreiche mit Maleinimiden funktionalisierte Biomoleküle sind kommerziell erhältlich.
Die Synthese der Konjugate erfolgt in der Regel derart, daß zunächst ein derivatisierter und funktionalisierter Chelatkomplex erzeugt wird, welcher dann an das Biomolekül geknüpft wird. Es ist aber auch möglich, daß im Falle der Verwendung von synthetisch hergestellten Biomolekülen der erfindungsgemäße Chelatkomplex während der Synthese des Biomoleküls in dieses eingebaut wird. Dies kann beispielsweise während der sequentiellen Synthese von Oligopeptiden am Syntheseroboter erfolgen. Falls erforderlich, können dazu die in der Synthese des entsprechenden Biomoleküls üblichen Schutzgruppen in die erfindungsgemäße Verbindung eingeführt werden. Diese werden dann im Zuge der üblichen Synthesealgorithmen am Synthesizer wieder abgespalten.
Unter "Biomolekül" wird vorliegend jedes Molekül verstanden, das entweder natürlich beispielsweise im Körper auftritt oder mit analoger Struktur synthetisch hergestellt wurde. Darüber hinaus werden hierunter solche Moleküle verstanden, die mit einem biologisch, beispielsweise im Körper auftretenden Molekül oder einer dort auftretenden Struktur in Wechselwirkung treten können, so daß sich beispielsweise die Konjugate an bestimmten, gewünschten Stellen des Körpers anreichern. Unter "Körper" wird vorliegend jeder pflanzliche oder tierische Körper verstanden, wobei tierische und insbesondere menschliche Körper bevorzugt sind.
Biomoleküle sind insbesondere die in Lebewesen auftretenden Moleküle, die als Produkte einer evolutionären Selektion durch geordnetes und komplexes Zusammenwirken spezifische Aufgaben für den Organismus erfüllen und die Grundlage seiner Lebensfunktionen (Stoff- und Formwechsel, Fortpflanzung, Energiehaushalt) ausmachen. In Biomolekülen sind zumeist aus einfachen Bausteinen (Aminosäuren, Nucleobasen, Monosacchariden, Fettsäuren, etc.) größere Moleküle (Proteine, Nucleinsäuren, Polysaccharide, Lipide, etc.) aufgebaut. Entsprechende Makromoleküle werden auch als Biopolymere bezeichnet.
Vorteilhaft kann das Biomolekül beispielsweise ein Polypeptidgerüst aus Aminosäuren mit Seitenketten aufweisen, die mit der reaktiven Gruppe X der erfindungsgemäßen Verbindungen der Formel II eine Reaktion eingehen können. Solche Seitenketten schließen beispielsweise die Carboxylgruppen von Asparaginsäure- und Glutaminsäureresten, die Aminogruppen von Lysinresten, die aromatischen Gruppen von Tyrosin- und Histidinresten und die Sulphhydrylgruppen von Cysteinresten ein.
Eine Übersicht über Biomoleküle mit zahlreichen Beispielen findet sich in dem Skriptum "Chemie der Biomoleküle" der TU-Graz (H. Berthold et al., Institut für Organische Chemie, TU-Graz, 2001 ), das auch über das Internet unter www.orgc.tu-graz.ac.at eingesehen werden kann. Der Inhalt dieses Dokuments wird durch Bezugnahme in die vorliegende Beschreibung aufgenommen.
Zur Bildung der erfindungsgemäßen Konjugate sind folgende Biomoleküle besonders geeignet:
Biopolymere, Proteine, wie Proteine, die eine biologische Funktion haben, HSA, BSA, etc., Proteine und Peptide, die sich an bestimmten Stellen im Organismus anreichern (z.B. an Rezeptoren, Zellmembranen, Kanälen etc.), durch Proteasen spaltbare Peptide, Peptide mit synthetischen Sollbruchstellen (z.B. labile Ester, Amide etc.), Peptide, die durch Metalloprotheasen gespalten werden, Peptide mit photospaltbaren Linkern, Peptide mit oxydativen Mitteln (Oxydasen) spaltbaren Gruppen, Peptide mit natürlichen und unnatürlichen Aminosäuren, Glycoproteine (Glycopeptide), Signal-Proteine, antivirale Proteine und Apoktosis, synthetisch modifizierte Biopolymere, wie mit Linkern derivatisierte Biopolymere, modifizierte Metalloproteasen und derivatisierte Oxydase etc., Kohlenhydrate (Mono- bis Polysaccharide), wie derivatisierte Zucker, im Organismus spaltbare Zucker, Cyclodextrine und dessen Derivate, Aminozucker, Chitosan, Polysulfate und Acetylneuraminsäure-Derivate, Antikörper, wie monoklonale Antikörper,
Antikörperfragmente, polyklonale Antikörper, Minibodies, Single Chains (auch solche, die mit Linkern zu mehrfachen Fragmenten verknüpft sind), rote Blutkörperchen und andere Blutbestandteile, Cancermarker (z.B. CAA) und Zell-Adhäsions-Stoffe (z.B. Lewis X und Anti-Lewis X-Dehvate), DNA und RNA Fragmente, wie derivatisierte DNAs und RNAs (z.B. solche, die durch das SELEX-Verfahren gefunden wurden), synthetische RNA und DNA (auch mit unnatürlichen Basen), PNAs (Hoechst) und Antisense, ß-Aminosäuren (Seebach), Vektoramine zur Einschleusung in die Zelle, biogene Amine, Pharmazeutika, onkologische Präparate, synthetische Polymere, die auf ein biologisches Target (z.B. Rezeptor) gerichtet sind, Steroide (natürliche und modifizierte), Prostaglandine, Taxol und dessen Derivate, Endotheline, Alkaloide, Folsäure und deren Derivate, bioaktive Lipide, Fette, Fettsäureester, synthetisch modifizierte Mono-, Di- und Triglyceride, Liposome, die an der Oberfläche derivatisiert sind, Micellen aus natürlichen Fettsäuren oder aus Perfluoralkyl-Verbindungen, Porphyrine, Texaphrine, erweitere Porphyrine, Cytochrome, Inhibitoren, Neuramidasen, Neuropeptide, Immunomodulatoren, wie FK 506, CAPE und Gliotoxin, Endoglycosidasen, Substrate, die durch Enzyme aktiviert werden wie Calmodolin Kinase, Casein-Kinase II, Gluthathion-S-Transferase, Heparinase, Matrix-Metalloprotheasen, ß-lnsulin-Rezeptor- Kinase, UDP-Galactose 4-Epimerase, Fucosidasen, G-Proteine, Galactosidasen, Glycosidasen, Glycosyltransferasen und Xylosidase, Antibiotika, Vitamin und Vitamin- Analoga, Hormone, DNA-Interkalatoren, Nucleoside, Nucleotide, Lektine, Vitamin B12, Lewis-X und Verwandte, Psoralene, Dientrienantibiotika, Carbacycline, VEGF (vascular endothelial growth factor), Somatostatin und dessen Derivate, Biotin-Derivate, Antihormone, tumorspezifische Proteine und Synthetika, Polymere, die sich in sauren oder basischen Bereichen des Körpers anreichern (pH-gesteuerte Verteilung), Myoglobine, Apomyoglobine etc., Neurotransmitter-Peptide, Tumornecrosefaktoren, Peptide, die sich in entzündetem Gewebe anreichern, Bloodpool-Reagenzien, Anionen und Kationen-Transporterproteine, Polyester (z.B. der Milchsäure), Polyamide und Polyphosphate.
Die meisten der vorgenannten Biomoleküle sind kommerziell beispielsweise bei Merck, Alderich, Sigma, Calibochem oder Bachern erhältlich. Außerdem können als Biomoleküle alle in der WO 96/23526 und der WO 01/08712 offenbarten "Plasmaproteinbindungsgruppen" bzw. "Zielbindungsgruppen" eingesetzt werden. Der Inhalt dieser beiden Offenlegungsschriften wird daher durch Bezugnahme in die vorliegende Beschreibung aufgenommen.
Die Anzahl der Verbindungen der Formel II pro Biomolekül ist prinzipiell beliebig, bevorzugt ist jedoch ein molekulares Verhältnis 0,1 :1 bis 10:1 , insbesondere von 0,5:1 bis 7:1.
Ferner eignen sich die Verbindungen der Formel II zur Konjugation an all diejenigen Moleküle, welche im Stand der Technik mit Fluoreszenzfarbstoffen umgesetzt werden, um beispielsweise ihre Lokalisation durch Epifluoreszenzmikroskopie innerhalb der Zelle zu bestimmen. Auch können die Verbindungen mit prinzipiell beliebigen Medikamenten konjugiert werden, um dann nach Verabreichung des Medikaments den Transport innerhalb des Organismus durch die NMR-Technik zu verfolgen. Ferner ist es möglich, daß die erfindungsgemäßen Konjugate aus den Verbindungen der Formel II und den Biomolekülen weitere zusätzliche Moleküle enthalten, die an die Biomoleküle konjugiert worden sind. Mit dem Begriff "Biomolekül" im Sinne der Erfindung sind also alle Moleküle umfaßt, die in biologischen Systemen vorkommen und alle Moleküle, die biokompatibel sind.
Durch die nachfolgenden Beispiele wird die vorliegende Erfindung näher erläutert, ohne sie darauf einzuschränken.
Beispiele
Beispiel 1
a) 10-[4-(Benzyloxycarbonyl)-1-methyl-2-oxo-3-azabutyl]-1 ,4,7-α,α',α"-trimethyl-1 ,4,7-tris- (benzyloxycarbonylmethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclododecan
Zu 27,9 g (162,2 mmol) 1,4,7,10-Tetraazacyclododecan, gelöst in 300 mL Chloroform, gibt man 25 g (81 ,1 mmol) 2-Brompropionylglycin-benzylester (Beispiel 1e der WO 98/24774) und rührt über Nacht bei Raumtemperatur. Man gibt 250 mL Wasser zu, trennt die organische Phase ab und wäscht sie noch jeweils zweimal mit 200 mL Wasser. Man trocknet die organische Phase über Magnesiumsulfat und dampft im Vakuum zur Trockne ein. Der Rückstand wird an Kieselgel Chromatographien (Laufmittel: Chloro- form/Methanol/aqu. 25 % Ammoniak = 10/5/1). Das so erhaltene 1-[4-(Benzyloxycarbonyl)- 1-methyl-2-oxo-3-azabutyl]-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan (19,6 g; 50 mmol; 62 % d. Th.) und 60 mL (0,35 mol) N-Ethyldiisopropylamin in 200 mL Dichlormethan gibt man zu 62,45 g (0,2 mol) 2-(Trifluormethansulfonyloxy)propansäurebenzylester (Kitazaki et al., Chem. Pharm. Bull. (1999), 47(3), 360) in 400 mL Dichlormethan und rührt 6 Stunden unter Rückfluß und anschließend über Nacht bei Raumtemperatur. Es wird dreimal mit je 500 mL Wasser extrahiert, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol: 20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 32,0 g (73 % d. Th.) eines farblosen kristallinen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 68,39 H 7,23 N 7,98 gef.: C 67,95 H 7,41 N 8,22
b) 10-(4-Carboxy-1-methyl-2-oxo-3-azabutyl)-1 ,4,7-α,α',α"-trimethyl-1 ,4,7-tris(carboxy- methyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
26,3 g (30 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 1a werden in 400 mL Isopropanol gelöst, mit 40 mL Wasser versetzt und 3 g Palladiumkatalysator (10 % Pd/C) hinzugegeben. Man hydriert 8 Stunden bei 50° C. Es wird vom Katalysator abfiltriert, das Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft. Ausbeute: 15,7 g (quantitativ) eines farblosen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 51 ,05 H 7,60 N 13,53 gef.: C 50,71 H 7,83 N 13,25
c) Gd-Komplex des 10-(4-Carboxy-1-methyl-2-oxo-3-azabutyl)-1 ,4,7-α,α',α"-trimethyl- 1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans 10,4 g (20 mmol) des in Beispiel 1b beschriebenen Liganden werden in 200 mL Wasser und 80 mL Isopropanol gelöst und durch Zugabe von 5 mL Essigsäure angesäuert. Es werden 3,6 g (10 mmol) Gadoliniumoxid zugegeben und 3 h am Rückfluß erhitzt. Nach beendeter Komplexierung wird mit Ammoniak erneut auf pH 7,4 eingestellt und an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlor ethan/Methanol/Ammoniak: 20/20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und über eine IR-120®- Kationenaustauschersäule (H+-Form) gegeben. Das saure Eluat wird gefriergetrocknet. Ausbeute: 10,1 g (69 % d. Th.) eines farblosen Pulvers. Wassergehalt (Karl-Fischer): 8,3 % Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 39,33 H 5,40 Gd 23,41 N 10,42 gef.: C 39,21 H 5,88 Gd 22,93 N 10,11
Beispiel 2
a) 10-[4-(Benzyloxycarbonyl)-1-methyl-2-oxo-3-azabutyl]-1 ,4,7-α,α',α"-tris(isopropyl)-1 ,4,7- tris(benzyloxycarbonylmethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
19,6 g (50 mmol) des in Beispiel 1a als Zwischenprodukt beschriebenen 1-[4-(Benzyloxy- carbonyl)-1-methyl-2-oxo-3-azabutyl]-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans und 60 mL (0,35 mol) N-Ethyldiisopropylamin in 200 mL Dichlormethan gibt man zu 68,1 g (0,2 mol) 2- (Thfluormethansulfonyloxy)-isovaleriansäurebenzylester (Walker et al., Tetrahedron (1997), 53(43), 14591) in 400 mL Dichlormethan und rührt 6 Stunden unter Rückfluß und anschließend über Nacht bei Raumtemperatur. Es wird dreimal mit je 500 mL Wasser extrahiert, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol: 20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 33,7 g (70 % d. Th.) eines farblosen kristallinen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 69,90 H 7,86 : N 7,28 gef.: C 69,77 H 7,51 N 7,22 b) 10-(4-Carboxy-1 -methyl-2-oxo-3-azabutyl)-1 ,4,7-α,α',α"-tris(isopropyl)-1 ,4,7-tris(carb- oxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
28,9 g (30 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 2a werden in 400 mL Isopropanol gelöst, mit 40 mL Wasser versetzt und 3 g Palladiumkatalysator (10 % Pd/C) hinzugegeben. Man hydriert 8 Stunden bei 50° C. Es wird vom Katalysator abfiltriert, das Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft. Ausbeute: 18,0 g (quantitativ) eines farblosen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 55,89 H 8,54 N 11 ,64 gef.: C 55,63 H 8,83 N 11 ,31
c) Gd-Komplex des 10-(4-Carboxy-1-methyl-2-oxo-3-azabutyl)-1 ,4,7-α,α',α"- tris(isopropyl)-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans
12,0 g (20 mmol) des in Beispiel 2b beschriebenen Liganden werden in 200 mL Wasser und 80 mL Isopropanol gelöst und durch Zugabe von 5 mL Essigsäure angesäuert. Es werden 3,6 g (10 mmol) Gadoliniumoxid zugegeben und 3 h am Rückfluß erhitzt. Nach beendeter Komplexierung wird mit Ammoniak auf pH 7,4 eingestellt und an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol/Ammoniak: 20/20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und über eine IR-120®- Kationenaustauschersäule (H+-Form) gegeben. Das saure Eluat wird gefriergetrocknet. Ausbeute: 12,0 g (72 % d. Th.) eines farblosen Pulvers. Wassergehalt (Karl-Fischer): 9,1 %
Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 44,49 H 6,40 Gd 20,80 N 9,26 gef.: C 44,21 H 6,72 Gd 20,23 N 9,11
Beispiel 3
a) 10-[4-(Benzyloxycarbonyl)-1 -methyl-2-oxo-3-azabutyl]-1 ,4,7-α,α',α"-tris(cyclohexyl)- 1 ,4,7-tris(benzyloxycarbonylmethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan 19,6 g (50 mmol) des in Beispiel 1a als Zwischenprodukt beschriebenen 1 -[4-(Benzyloxy- carbonyl)-1-methyl-2-oxo-3-azabutyl]-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans und 60 mL (0,35 mol) N-Ethyldiisopropylamin in 200 mL Dichlormethan gibt man zu 76,1 g (0,2 mol) 2- (Trifluormethansulfonyloxy)-2-cyclohexylessigsäurebenzylester (Qabar et al., Tetrahedron Letters (1998), 39(33), 5895) in 400 mL Dichlormethan und rührt 6 Stunden unter Rückfluß und anschließend über Nacht bei Raumtemperatur. Es wird dreimal mit je 500 L Wasser extrahiert, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol: 20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 41,1 g (76 % d. Th.) eines farblosen kristallinen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 72,13 H 8.10 N 6,47 gef.: C 71 ,88 H 8,21 N 6,25
b) 10-(4-Carboxy-1 -methyl-2-oxo-3-azabutyl)-1 ,4,7-α,α',α"-tris(cyclohexyl)-1 ,4,7-tris(carb- oxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
32,5 g (30 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 3a werden in 400 mL Isopropanol gelöst, mit 40 mL Wasser versetzt und 3 g Palladiumkatalysator (10 % Pd/C) hinzugegeben. Man hydriert 8 Stunden bei 50° C. Es wird vom Katalysator abfiltriert, das Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft. Ausbeute: 22,0 g (quantitativ) eines farblosen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 61 ,56 H 8,80 N 9,70 gef.: C 61 ,17 H 8,98 N 9,41
c) Gd-Komplex des 10-(4-Carboxy-1-methyl-2-oxo-3-azabutyl)-1 ,4,7-α,α',α"-tris(cyclo- hexyl)-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans 14,4 g (20 mmol) des in Beispiel 3b beschriebenen Liganden werden in 150 mL Wasser und 150 mL Isopropanol gelöst und durch Zugabe von 5 mL Essigsäure angesäuert. Es werden 3,6 g (10 mmol) Gadoliniumoxid zugegeben und 8 h am Rückfluß erhitzt. Nach beendeter Komplexierung wird mit Ammoniak erneut auf pH 7,4 eingestellt und an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol/Ammoniak: 20/20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird mit Ameisensäure aufgenommen und mehrfach unter Zusatz von Dichlormethan zur Trockne eingedampft und anschließend bis zur Gewichtskonstanz im Vakuum getrocknet.
Ausbeute: 12,4 g (65 % d. Th.) eines farblosen Pulvers. Wassergehalt (Karl-Fischer): 8,0 %
Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 50,72 H 6,90 Gd 17,95 N 7,99 gef.: C 51 ,03 H 7,08 Gd 17,42 N 8.11
Beispiel 4
a) 10-[4-(t-Butoxycarbonyl)-1 -phenyl-2-oxo-3-azabutyl]-1 ,4,7-α,α',α"-trimethyl-1 ,4,7-tris- (benzyloxycarbonylmethyl)-l ,4,7,10-tetraazacyclododecan
Zu 27,9 g (162,2 mmol) 1 ,4,7,10-Tetraazacyclododecan, gelöst in 300 mL Chloroform, gibt man 26,6 g (81 ,1 mmol) N-[2-Brom-2-phenylacetyl]-glycin-t-butylester (Beispiel 6a der WO 98/24775) und rührt über Nacht bei Raumtemperatur. Man gibt 250 mL Wasser zu, trennt die organische Phase ab und wäscht sie noch jeweils zweimal mit 200 mL Wasser. Man trocknet die organische Phase über Magnesiumsulfat und dampft im Vakuum zur Trockne ein. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Chloro- form/Methanol/aqu. 25 % Ammoniak = 10/5/1). Das so erhaltene 1-[4-(t-Butoxycarbonyl)-1- phenyl-2-oxo-3-azabutyl]-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan (21 ,0 g; 50 mmol; 62 % d. Th.) und 60 mL (0,35 mol) N-Ethyldiisopropylamin in 200 mL Dichlormethan gibt man zu 62,45 g (0,2 mol) 2-(Trifluormethansulfonyloxy)propansäurebenzylester (Kitazaki et al., Chem. Pharm. Bull. (1999), 47(3), 3eθ) in 400 mL Dichlormethan und rührt 6 Stunden unter Rückfluß und anschließend über Nacht bei Raumtemperatur. Es wird dreimal mit je 500 mL Wasser extrahiert, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol: 20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft.
Ausbeute: 34,0 g (75 % d. Th.) eines farblosen kristallinen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 68,93 H 7,45 N 7,73 gef.: C 69,12 H 7,57 N 7,60
b) 10-(4-(f-Butoxycarbonyl-1-phenyl-2-oxo-3-azabutyl)-1 ,4,7-α,α',α"-trimethyl-1 ,4,7- tris(carb-oxy-methyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
27,2 g (30 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 4a werden in 400 mL Isopropanol gelöst, mit 40 mL Wasser versetzt und 3 g Palladiumkatalysator (10 % Pd/C) hinzugegeben. Man hydriert 8 Stunden bei 50° C. Es wird vom Katalysator abfiltriert, das Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft. Ausbeute: 17,5 g (quantitativ) eines farblosen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 55,95 H 7.13 N 12,08 gef.: C 56,21 H 6,99 N 11 ,83
c) Gd-Komplex des 10-(4-Carboxy-1-phenyl-2-oxo-3-azabutyl)-1 ,4,7-α,α',α"-trimethyl- 1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7, 10-tetraazacyclododecans
11 ,6 g (20 mmol) des in Beispiel 4b beschriebenen f-Butylesters werden in sehr wenig Trifluoressigsäure gelöst und 15 min bei Raumtemperatur gerührt. Nach Zugabe von 250 mL Diethylether wird 2 Stunden nachgerührt, der Niederschlag abgesaugt und im Vakuum getrocknet. Der so erhaltene freie Ligand wird in 200 mL Wasser und 80 mL Isopropanol gelöst, mit verdünntem Ammoniak auf pH 7 eingestellt und durch Zugabe von 5 mL Essigsäure angesäuert. Es werden 3,6 g (10 mmol) Gadoliniumoxid zugegeben und 3 h am Rückfluß erhitzt. Nach beendeter Komplexierung wird mit Ammoniak erneut auf pH 7,4 eingestellt und an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan/Metha- noI/Ammoniak: 20/20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und über eine IR-120®-Kationenaustauschersäule (H+-Form) gegeben. Das saure Eluat wird gefriergetrocknet.
Ausbeute: 11 ,6 g (72 % d. Th.) eines farblosen Pulvers.
Wassergehalt (Karl-Fischer): 9,0 %
Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 44,19 H 5,22 Gd 21 ,43 N 9,54 gef.: C 43,91 H 5,27 Gd 21 ,09 N 9,77
Beispiel 5
a) 4-(Ethoxycarbonylmethoxy)-phenylessigsäuremethylester
10 g (60,2 mmol) Hydroxyphenylessigsäuremethylester (Aldrich) werden in 75 mL Aceton gelöst. Es werden 18,4 g (133 mmol) festes Kaliumcarbonat zugegeben, 17,8 mL (123 mmol) Bromessigsäureethylester innerhalb 15 min unter Rückfluß zugetropft, weitere 4 Stunden bei dieser Temperatur gehalten und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Es wird vom Niederschlag abfiltriert, die Lösung zur Trockne eingedampft und an Kieselgel chromatographiert (Hexan/Essigester 3:1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 14,6 g (96 % d. Th.)
Elementaranalyse: ber.: C 61 ,90 H 6,39 gef.: C 61.67 H 6,50
b) α-Brom-4-(ethoxycarbonylmethoxy)-phenylessigsäuremethylester
13,5 g (53,5 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 5a werden in 75 mL Tetrachlorkohlenstoff gelöst. Es werden 9,52 g (53,5 mmol) N-Bromsuccinimid und 48 mg Dibenzoylperoxid zugegeben, 5 Stunden unter Rückfluß erhitzt und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Die Suspension wird zweimal mit Natriumhydrogencarbonat-Lösung und einmal mit Wasser gewaschen, die organische Phase mit Magnesiumsulfat getrocknet, vom Trocknungsmittel abfiltriert und das Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Hexan/Essigester 3:1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 15,4 g (87 % d. Th.)
Elementaranalyse: ber.: C 47,15 H 4,57 Br 24,13 gef.: C 47,01 H 4,76 Br 23,70
c) 10-[α-(4-(Ethoxycarbonylmethoxy)phenyl)-methoxycarbonylmethyl]-1 ,4,7-α,α',α"- trimethyl-1 ,4,7-tris(benzyloxycarbonylmethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
Zu 27,9 g (162,2 mmol) 1 ,4,7,10-Tetraazacyclododecan, gelöst in 300 mL Chloroform, gibt man 26,9 g (81 ,1 mmol) der im vorstehenden Beispiel 5b beschriebenen Bromverbindung und rührt über Nacht bei Raumtemperatur. Man gibt 250 mL Wasser zu, trennt die organische Phase ab und wäscht sie noch jeweils zweimal mit 200 mL Wasser. Man trocknet die organische Phase über Magnesiumsulfat und dampft im Vakuum zur Trockne ein. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlor- methan/Methanol/Triethylamin = 10/5/0,1). Das so erhaltene 1-[α-(4-(Ethoxy- carbonylmethoxy)phenyl)-methoxycarbonylmethyl]-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan (21 ,1 g; 50 mmol; 62 % d. Th.) und 60 mL (0,35 mol) N-Ethyldiisopropylamin in 200 mL Dichlormethan gibt man zu 62,45 g (0,2 mol) 2-(Trifluormethansulfonyloxy)propansäure- benzylester (Kitazaki et al., Chem. Pharm. Bull. (1999), 47(3), 360) in 400 mL Dichlormethan und rührt 6 Stunden unter Rückfluß und anschließend über Nacht bei Raumtemperatur. Es wird dreimal mit je 500 mL Wasser extrahiert, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol: 20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 34,1 g (75 % d. Th.) eines farblosen kristallinen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 67,38 H 7.10 N 6,16 gef.: C 67,20 B 7.33 N 6,31 d) 10-[α-(4-(Ethoxycarbonylmethoxy)phenyl)-methoxycarbonylmethyl]-1 ,4,7-α,α',α"-tri- methyl-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
27,3 g (30 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 5c werden in 400 mL Isopropanol gelöst, mit 40 mL Wasser versetzt und 3 g Palladiumkatalysator (10 % Pd/C) hinzugegeben. Man hydriert 8 Stunden bei 50° C. Es wird vom Katalysator abfiltriert, das Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft. Ausbeute: 19,3 g (quantitativ) eines farblosen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 56,42 H 7,26 N 8,77 gef.: C 56,21 H 7,56 N 8,47
e) Gd-Komplex des 10-[α-(4-Carboxymethoxyphenyl)-carboxymethyl]-1 ,4,7-α,α',α"-tri- methyl-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7, 10-tetraazacyclododecans
13,3 g (20 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 5d werden in 250 mL 2N Natronlauge und 250 mL Tetrahydrofuran aufgenommen und 5 Tage bei 40 °C gerührt. Anschließend wird die wäßrige Phase mit Amberlite IR-120® (H+-Form) auf pH 7 gestellt, es werden 80 mL Isopropanol zugefügt und durch Zugabe von 5 mL Essigsäure angesäuert. Es werden 3,6 g (10 mmol) Gadoliniumoxid zugegeben und 3 h am Rückfluß erhitzt. Nach beendeter Komplexierung wird mit Ammoniak erneut auf pH 7,4 eingestellt und an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol/Ammoniak: 20/20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und über eine IR-120®- Kationenaustauschersäule (H+-Form) gegeben. Das saure Eluat wird gefriergetrocknet. Ausbeute: 8,6 g (61 % d. Th.) eines farblosen Pulvers. Wassergehalt (Karl-Fischer): 9,3 %
Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 43,19 H 4,97 Gd 20,94 N 7,46 gef.: C 43,22 H 5,29 Gd 20,42 IM 7,11 Beispiel 6
a) 4-(Ethoxycarbonylpropoxy)-phenylessigsäuremethylester
10 g (60,2 mmol) Hydroxyphenylessigsäuremethylester (Aldrich) werden in 75 mL Aceton gelöst. Es werden 18,4 g (133 mmol) festes Kaliumcarbonat zugegeben, 17,8 mL (123 mmol) 4-Brombuttersäureethylester innerhalb 15 min unter Rückfluß zugetropft, weitere 4 Stunden bei dieser Temperatur gehalten und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Es wird vom Niederschlag abfiltriert, die Lösung zur Trockne eingedampft und an Kieselgel chromatographiert (Hexan/Essigester 3:1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 16,4 g (97 % d. Th.)
Elementaranalyse: ber.: C 64,27 H 7.19 gef.: C 64,41 H 6,92
b) -Brom-[4-(ethoxycarbonylpropoxy)-phenyl]-essigsäuremethylester
15,0 g (53,5 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 6a werden in 75 mL Tetrachlorkohlenstoff gelöst. Es werden 9,52 g (53,5 mmol) N-Bromsuccinimid und 48 mg Dibenzoylperoxid zugegeben, 5 Stunden unter Rückfluß erhitzt und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Die Suspension wird zweimal mit Natriumhydrogencarbonat-Lösung und einmal mit Wasser gewaschen, die organische Phase mit Magnesiumsulfat getrocknet, vom Trocknungsmittel abfiltriert und das Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Hexan/Essigester 3:1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 15,9 g (83 % d. Th.)
Elementaranalyse: ber.: C 50,16 H 5,33 Br 22,24 gef.: C 50,33 H 5,04 Br 21 ,94 c) 10-[α-(4-(Ethoxycarbonylpropoxy)phenyl)-methoxycarbonylmethyl]-1 ,4,7-α,α',α"- trimethyl-1 ,4,7-tris(benzyloxycarbonylmethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
Zu 27,9 g (162,2 mmol) 1 ,4,7,10-Tetraazacyclododecan, gelöst in 300 mL Chloroform, gibt man 29,1 g (81,1 mmol) der im vorstehenden Beispiel 6b beschriebenen Bromverbindung und rührt über Nacht bei Raumtemperatur. Man gibt 250 mL Wasser zu, trennt die organische Phase ab und wäscht sie noch jeweils zweimal mit 200 mL Wasser. Man trocknet die organische Phase über Magnesiumsulfat und dampft im Vakuum zur Trockne ein. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlor- methan/Methanol/Triethylamin = 10/5/0,1). Das so erhaltene 1-[α-(4-(Ethoxy- carbonylpropoxy)phenyl)methoxycarbonylmethyl]-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan (22,5 g; 50 mmol; 62 % d. Th.) und 60 mL (0,35 mol) N-Ethyldiisopropylamin in 200 mL Dichlormethan gibt man zu 62,45 g (0,2 mol) 2-(Trifluormethansulfonyloxy)propansäure- benzylester (Kitazaki et al., Chem. Pharm. Bull. (1999), 47(3), 360) in 400 mL Dichlormethan und rührt 6 Stunden unter Rückfluß und anschließend über Nacht bei Raumtemperatur. Es wird dreimal mit je 500 mL Wasser extrahiert, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol: 20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 30,5 g (65 % d. Th.) eines farblosen kristallinen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 67,93 H 7,31 N 5,98 gef.: C 67,95 H 7,22 N 6.13
d) 10-[α-(4-(Ethoxycarbonylpropoxy)phenyl)-methoxycarbonylmethyl]-1 ,4,7-α,α',α"-tri- methyl-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
28,1 g (30 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 6c werden in 400 mL Isopropanol gelöst, mit 40 mL Wasser versetzt und 3 g Palladiumkatalysator (10 % Pd/C) hinzugegeben. Man hydriert 8 Stunden bei 50° C. Es wird vom Katalysator abfiltriert, das Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft. Ausbeute: 20,0 g (quantitativ) eines farblosen Pulvers Elementaranalyse: ber.: C 57,64 H 7,56 N 8,40 gef.: C 57,43 H 7,77 N 8,69
e) Gd-Komplex des 10-[α-(4-Carboxypropoxyphenyl)-carboxymethyl]-1 ,4,7-α,α',α"-tri- methyl-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans
13,3 g (20 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 6d werden in 250 mL 2N Natronlauge und 250 mL Tetrahydrofuran aufgenommen und 5 Tage bei 40 °C gerührt. Anschließend wird die wäßrige Phase mit Amberlite IR-120® (H+-Form) auf pH 7 gestellt, es werden 80 mL Isopropanol zugefügt und durch Zugabe von 5 mL Essigsäure angesäuert. Es werden 3,6 g (10 mmol) Gadoliniumoxid zugegeben und 3 h am Rückfluß erhitzt. Nach beendeter Komplexierung wird mit Ammoniak erneut auf pH 7,4 eingestellt und an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol/Ammoniak: 20/20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und über eine IR-120®- Kationenaustauschersäule (H+-Form) gegeben. Das saure Eluat wird gefriergetrocknet. Ausbeute: 9,3 g (55 % d. Th.) eines farblosen Pulvers. Wassergehalt (Karl-Fischer): 8,0 %
Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 44,72 H 5,31 Gd 20,19 N 7.19 gef.: C 44,31 H 5,88 Gd 19,93 N 7.11
Beispiel 7
a) 4-(Ethoxycarbonyldecyloxy)-phenylessigsäuremethylester
10 g (60,2 mmol) Hydroxyphenylessigsäuremethylester (Aldrich) werden in 75 mL Aceton gelöst. Es werden 18,4 g (133 mmol) festes Kaliumcarbonat zugegeben, 36,1 g (123 mmol) ω-Bromundecansäureethylester in 50 mL Aceton zugetropft, 8 Stunden unter Rückfluß gekocht und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Es wird vom Ungelösten abfiltriert, die Lösung zur Trockne eingedampft und an Kieselgel chromatographiert (Hexan/Essigester 3:1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft.
Ausbeute: 20,3 g (89 % d. Th.)
Elementaranalyse: ber.: C 69,81 H 9,05 gef.: C 69,50 H 8,91
b) α-Brom-[4-(ethoxycarbonyldecyloxy)-phenyl]-essigsäuremethylester
20,2 g (53,5 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 7a werden in 75 mL Tetrachlorkohlenstoff gelöst. Es werden 9,52 g (53,5 mmol) N-Bromsuccinimid und 48 mg Dibenzoylperoxid zugegeben, 5 Stunden unter Rückfluß erhitzt und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Die Suspension wird zweimal mit Natriumhydrogencarbonat-Lösung und einmal mit Wasser gewaschen, die organische Phase mit Magnesiumsulfat getrocknet, vom Trocknungsmittel abfiltriert und das Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Hexan/Essigester 3:1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 21 ,0 g (86 % d. Th.)
Elementaranalyse: ber.: C 57,77 H 7,27 Br 17,47 gef.: C 57,95 H 7,41 Br 17,02
c) 10-[α-(4-(Ethoxycarbonyldecyloxy)phenyl)-methoxycarbonylmethyl]-1 ,4,7-α,α',α"- trimethyl-1 ,4,7-tris(benzyloxycarbonylmethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
Zu 27,9 g (162,2 mmol) 1 ,4,7,10-Tetraazacyclododecan, gelöst in 300 mL Chloroform, gibt man 37,1 g (81 ,1 mmol) der im vorstehenden Beispiel 7b beschriebenen Bromverbindung und rührt über Nacht bei Raumtemperatur. Man gibt 250 mL Wasser zu, trennt die organische Phase ab und wäscht sie noch jeweils zweimal mit 200 mL Wasser. Man trocknet die organische Phase über Magnesiumsulfat und dampft im Vakuum zur Trockne ein. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlor- methan/Methanol/Triethylamin = 10/5/0,1). Das so erhaltene 1-[α-(4-(Ethoxy- carbonyldecyloxy)phenyl)-methoxycarbonylmethyl]-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan (27,4 g; 50 mmol; 62 % d. Th.) und 60 mL (0,35 mol) N-Ethyldiisopropylamin in 200 mL Dichlormethan gibt man zu 62,45 g (0,2 mol) 2-(Trifluormethansulfonyloxy)propansäure- benzylester (Kitazaki et al., Chem. Pharm. Bull. (1999), 47(3), 360) in 400 mL Dichlormethan und rührt 6 Stunden unter Rückfluß und anschließend über Nacht bei Raumtemperatur. Es wird dreimal mit je 500 mL Wasser extrahiert, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol: 20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 33,6 g (65 % d. Th.) eines farblosen kristallinen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 69,61 H 7,98 N 5,41 gef.: C 69,75 H 7,88 5.12
d) 10-[α-(4-(Ethoxycarbonyldecyloxy)phenyl)-methoxycarbonylmethyl]-1 ,4,7-α,α',α"-tri- methyl-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7, 10-tetraazacyclododecan
31 ,1 g (30 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 7c werden in 400 mL Isopropanol gelöst, mit 40 mL Wasser versetzt und 3 g Palladiumkatalysator (10 % Pd/C) hinzugegeben. Man hydriert 8 Stunden bei 50° C. Es wird vom Katalysator abfiltriert, das Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft. Ausbeute: 23,0 g (quantitativ) eines farblosen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 61 ,24 H 8,43 N 7,32 gef.: C 60,96 H 8,61 N 7,22
e) Gd-Komplex des 10-[α-(4-Carboxydecyloxyphenyl)-carboxymethyl]-1 ,4,7-α,α',α"-tri- methyl-1 ,4,7-ths(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans
15,3 g (20 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 7d werden in 250 mL 2N Natronlauge und 250 mL Tetrahydrofuran aufgenommen und 5 Tage bei 40 °C gerührt. Anschließend wird die wäßrige Phase mit Amberlite IR-120® (H+-Form) auf pH 7 gestellt, es werden 80 mL Isopropanol zugefügt und durch Zugabe von 5 mL Essigsäure angesäuert. Es werden 3,6 g (10 mmol) Gadoliniumoxid zugegeben und 3 h am Rückfluß erhitzt. Nach beendeter Komplexierung wird mit Ammoniak erneut auf pH 7,4 eingestellt und an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol/Ammoniak: 20/20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und über eine IR-120®- Kationenaustauschersäule (H+-Form) gegeben. Das saure Eluat wird gefriergetrocknet. Ausbeute: 11 ,5 g (60 % d. Th.) eines farblosen Pulvers. Wassergehalt (Karl-Fischer): 8,5 %
Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 49,30 H 6,32 Gd 17,93 N 6,39 gef.: C 49,56 H 6.10 Gd 17,52 N 6,63
Beispiel 8
a) 10-(p-Methoxycarbonylbenzyl)-1 ,4,7-α,α',α"-trimethyl-1 ,4,7-tris(benzyloxycarbonyl- methyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
Zu 27,9 g (162,2 mmol) 1 ,4,7,10-Tetraazacyclododecan, gelöst in 300 mL Chloroform, gibt man 18,6 g (81 ,1 mmol) 4-Brommethyl-benzoesäuremethylester (Aldrich) in 150 mL Chloroform und rührt über Nacht bei Raumtemperatur. Man gibt 250 mL Wasser zu, trennt die organische Phase ab und wäscht sie noch jeweils zweimal mit 200 mL Wasser. Man trocknet die organische Phase über Magnesiumsulfat und dampft im Vakuum zur Trockne ein. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Methanol/aqu. 25 % Ammoniak = 8/1). Das so erhaltene 1-(p-Methoxycarbonylbenzyl)-1 , 4,7,10-tetraazacyclodo- decan (21,6 g; 67,3 mmol; 83 % d. Th.) und 60 mL (0,35 mol) N-Ethyldiisopropylamin in 200 mL Dichlormethan gibt man zu 62,45 g (0,2 mol) 2-(Trifluormethansulfonyloxy)propansäure- benzylester (Kitazaki et al., Chem. Pharm. Bull. (1999), 47(3), 360) in 400 mL Dichlormethan und rührt 6 Stunden unter Rückfluß und anschließend über Nacht bei Raumtemperatur. Es wird dreimal mit je 500 mL Wasser extrahiert, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol: 20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 41 ,8 g (77 % d. Th.) eines farblosen kristallinen Pulvers Elementaranalyse: ber.: C 69,95 H 7,24 N 6,94 gef.: C 69,57 H 7,39 N 7,12
b) 10-(p-Carboxybenzyl)-1,4,7-α,α',α"-trimethyl-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10- tetraazacyclododecan
24,2 g (30 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 8a werden in 400 mL Methanol gelöst, mit 100 mL 15 N Natronlauge versetzt, 6 Stunden unter Rückfluß gekocht und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Nach Eindampfen im Vakuum wird der Rückstand in 200 mL Wasser gelöst und durch Zugabe von IR-120®-Kationenaustauscher (H+-Form) auf pH 7 gestellt. Es wird vom Austauscher abfiltriert im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird ohne weitere Charakterisierung komplexiert. Dünnschicht-System: n-Butanol/aqu. Ammoniak/Ethanol/Wasser 12/6/3/3 Ausbeute: 16 g
c) Gd-Komplex des 10-(p-Carboxybenzyl)-1 ,4,7-α,α',α"-trimethyl-1 ,4,7-tris(carboxy- methyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans
11 g (20 mmol) des in Beispiel 8b beschriebenen Liganden werden in 200 mL Wasser und 80 mL Isopropanol gelöst und durch Zugabe von 5 mL Essigsäure angesäuert. Es werden 3,6 g (10 mmol) Gadoliniumoxid zugegeben und 3 h am Rückfluß erhitzt. Nach beendeter Komplexierung wird mit Ammoniak erneut auf pH 7,4 eingestellt und an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol/Ammoniak: 20/20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und über eine IR-120®- Kationenaustauschersäule (H+-Form) gegeben. Das saure Eluat wird gefriergetrocknet. Ausbeute: 8,9 g (61 % d. Th.) eines farblosen Pulvers. Wassergehalt (Karl-Fischer): 7,2 %
Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 44,37 H 5,21 Gd 23,23 N 8,28 gef.: C 44,12 H 5,46 Gd 22,93 N 8,51 Beispiel 9
a) 10-(p-Methoxycarbonylbenzyl)-1 ,4,7-α,α',α"-tris(isopropyl)-1 ,4,7-tris(benzyloxycarbonyl- methyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
21 ,6 g (67,3 mmol) des in Beispiel 8a als Zwischenprodukt beschriebenen 1-(p-Meth- oxycarbonylbenzyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans und 60 mL (0,35 mol) N-Ethyldiisopropylamin in 200 mL Dichlormethan gibt man zu 85,1 g (0,25 mol) 2-(Trifluormethan- sulfonyloxy)-isovaleriansäurebenzylester (Walker et al., Tetrahedron (1997), 53(43), 14591) in 400 mL Dichlormethan und rührt 6 Stunden unter Rückfluß und anschließend über Nacht bei Raumtemperatur. Es wird dreimal mit je 500 mL Wasser extrahiert, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol: 20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 48,5 g (81 % d. Th.) eines farblosen kristallinen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 71 ,43 H 7,92 N 6,29 gef.: C 71 ,12 H 7,79 N 6,55
b) 10-(p-Carboxybenzyl)-1 ,4,7-α,α',α"-tris(isopropyl)-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7, 10- tetraazacyclododecan
26,7 g (30 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 9a werden in 400 mL Methanol gelöst, mit 100 mL 15 N Natronlauge versetzt, 6 Stunden unter Rückfluß gekocht und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Nach Eindampfen im Vakuum wird der Rückstand in 200 mL Wasser gelöst und durch Zugabe von IR-120®-Kationenaustauscher (H+-Form) auf pH 7 gestellt. Es wird vom Austauscher abfiltriert im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird ohne weitere Charakterisierung komplexiert. Dünnschicht-System: n-Butanol/aqu. Ammoniak/Ethanol/Wasser 12/6/3/3 Ausbeute: 19 g c) Gd-Komplex des 10-(p-Carboxybenzyl)-1,4,7-α,α',α"-tris(isopropyl)-1 ,4,7-tris(carboxy- methyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans
12,6 g (20 mmol) des in Beispiel 9b beschriebenen Liganden werden in 200 mL Wasser und 80 mL Isopropanol gelöst und durch Zugabe von 5 mL Essigsäure angesäuert. Es werden 3,6 g (10 mmol) Gadoliniumoxid zugegeben und 3 h am Rückfluß erhitzt. Nach beendeter Komplexierung wird mit Ammoniak erneut auf pH 7,4 eingestellt und an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol/Ammoniak: 20/20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und über eine IR-120®- Kationenaustauschersäule (H+-Form) gegeben. Das saure Eluat wird gefriergetrocknet. Ausbeute: 10,9 g (65 % d. Th.) eines farblosen Pulvers. Wassergehalt (Karl-Fischer): 9,0 %
Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 48,93 H 6,23 Gd 20,66 N 7,36 gef.: C 48,87 H 6,01 Gd 20,22 N 7,59
Beispiel 10
a) 10-(p-Methoxycarbonylbenzyl)-1 ,4,7-α,α',α"-tris(cyclohexyl)-1 ,4,7- tris(benzyloxycarbonyl-methyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
21 ,6 g (67,3 mmol) des in Beispiel 8a als Zwischenprodukt beschriebenen 1-(p-Meth- oxycarbonylbenzyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans und 60 mL (0,35 mol) N-Ethyldiisopropylamin in 200 mL Dichlormethan gibt man zu 95,1 g (0,25 mol) 2-(Trifluormethan- sulfonyloxy)-2-cyclohexylessigsäurebenzylester (Qabar et al., Tetrahedron Letters (1998), 39(33), 5895) in 400 mL Dichlormethan und rührt 6 Stunden unter Rückfluß und anschließend über Nacht bei Raumtemperatur. Es wird dreimal mit je 500 mL Wasser extrahiert, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol: 20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 48,3 g (71 % d. Th.) eines farblosen kristallinen Pulvers Elementaranalyse: ber.: C 73,63 H 8,17 N 5,54 gef.: C 73,42 H 8,39 N 5,75
b) 10-(p-Carboxybenzyl)-1 ,4,7-α,α',α"-ths(cyclohexyl)-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7, 10- tetraazacyclododecan
30,3 g (30 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 10a werden in 400 mL Methanol gelöst, mit 100 mL 15 N Natronlauge versetzt, 6 Stunden unter Rückfluß gekocht und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Nach Eindampfen im Vakuum wird der Rückstand in 200 mL Wasser gelöst und durch Zugabe von IR-120®-Kationenaustauscher (H*-Form) auf pH 7 gestellt. Es wird vom Austauscher abfiltriert im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird ohne weitere Charakterisierung komplexiert. Dünnschicht-System: n-Butanol/aqu. Ammoniak/Ethanol Wasser 12/6/3/3 Ausbeute: 22,5 g
c) Gd-Komplex des 10-(p-Carboxybenzyl)-1 ,4,7-α,α',α"-tris(cyclohexyl)-1 ,4,7-tris(carboxy- methyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans
15,0 g (20 mmol) des in Beispiel 10b beschriebenen Liganden werden in 200 mL Wasser und 80 mL Isopropanol gelöst und durch Zugabe von 5 mL Essigsäure angesäuert. Es werden 3,6 g (10 mmol) Gadoliniumoxid zugegeben und 3 h am Rückfluß erhitzt. Nach beendeter Komplexierung wird mit Ammoniak erneut auf pH 7,4 eingestellt und an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol/Ammoniak: 20/20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird mit Ameisensäure aufgenommen und mehrfach unter Zusatz von Dichlormethan zur Trockne eingedampft und anschließend bis zur Gewichtskonstanz im Vakuum getrocknet.
Ausbeute: 11 ,9 g (63 % d. Th.) eines farblosen Pulvers. Wassergehalt (Karl-Fischer): 7,0 %
Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 54,52 H 6,75 Gd 17,85 N 6,36 gef.: C 54,19 H 6,83 Gd 17,61 N 6,69 Beispiel 11
a) 10-(p-Methoxycarbonylbenzyl)-1 ,4,7-α,α',α"-triphenyl-1 ,4,7-tris(benzyloxycarbonyl- methyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
21 ,6 g (67,3 mmol) des in Beispiel 8a als Zwischenprodukt beschriebenen 1-(p-Meth- oxycarbonylbenzyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans und 60 mL (0,35 mol) N-Ethyldiisopropylamin in 200 mL Dichlormethan gibt man zu 93,6 g (0,25 mol) 2-(Trifluormethan- sulfonyloxy)-2-phenylessigsäurebenzylester (Qabar et al., Tetrahedron Letters (1998), 39(33), 5895) in 400 mL Dichlormethan und rührt 6 Stunden unter Rückfluß und anschließend über Nacht bei Raumtemperatur. Es wird dreimal mit je 500 mL Wasser extrahiert, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol: 20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 50,8 g (76 % d. Th.) eines farblosen kristallinen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 74,98 H 6,49 N 5,64 gef.: C 75,22 H 6,61 N 5,47
b) 10-(p-Carboxybenzyl)-1 , 4, 7-α,α',α"-triphenyl-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 , 4,7,10- tetraazacyclododecan
29,8 g (30 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 11a werden in 400 mL Methanol gelöst, mit 100 mL 15 N Natronlauge versetzt, 6 Stunden unter Rückfluß gekocht und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Nach Eindampfen im Vakuum wird der Rückstand in 200 mL Wasser gelöst und durch Zugabe von IR-120®-Kationenaustauscher (H+-Form) auf pH 7 gestellt. Es wird vom Austauscher abfiltriert im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird ohne weitere Charakterisierung komplexiert. Dünnschicht-System: n-Butanol/aqu. Ammoniak/Ethanol/Wasser 12/6/3/3 Ausbeute: 22,0 g c) Gd-Komplex des 10-(p-Carboxybenzyl)-1 ,4,7-α,α',α"-triphenyl-1 ,4,7-tris(carboxy- methyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans
14,6 g (20 mmol) des in Beispiel 11b beschriebenen Liganden werden in 200 mL Wasser und 80 mL Isopropanol gelöst und durch Zugabe von 5 mL Essigsäure angesäuert. Es werden 3,6 g (10 mmol) Gadoliniumoxid zugegeben und 3 h am Rückfluß erhitzt. Nach beendeter Komplexierung wird mit Ammoniak erneut auf pH 7,4 eingestellt und an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol/Ammoniak: 20/20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird mit Ameisensäure aufgenommen und mehrfach unter Zusatz von Dichlormethan zur Trockne eingedampft und anschließend bis zur Gewichtskonstanz im Vakuum getrocknet.
Ausbeute: 13,1 g (70 % d. Th.) eines farblosen Pulvers. Wassergehalt (Karl-Fischer): 8,1 %
Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 55,67 H 4,79 Gd 18,22 N 6,49 gef.: C 55,33 H 4,97 Gd 17,92 N 6,54
Beispiel 12
a) 10-[4-(t-Butoxycarbonyl)-1-phenyl-2-oxo-3-azabutyl]-1,4,7-α,α',α"-triphenyl-1 ,4,7-tris- (benzyloxycarbonylmethyl)-l ,4,7,10-tetraazacyclododecan
Zu 27,9 g (162,2 mmol) 1 ,4,7,10-Tetraazacyclododecan, gelöst in 300 mL Chloroform, gibt man 26,6 g (81 ,1 mmol) N-[2-Brom-2-phenylacetyl]-glycin-t-butylester (Beispiel 6a der WO 98/24775) und rührt über Nacht bei Raumtemperatur. Man gibt 250 mL Wasser zu, trennt die organische Phase ab und wäscht sie noch jeweils zweimal mit 200 mL Wasser. Man trocknet die organische Phase über Magnesiumsulfat und dampft im Vakuum zur Trockne ein. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Chloro- form/Methanol/aqu. 25 % Ammoniak = 10/5/1). Das so erhaltene 1-[4-(t-Butoxycarbonyl)-1- phenyl-2-oxo-3-azabutyl]-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan (21 ,0 g; 50 mmol; 62 % d. Th.) und 60 mL (0,35 mol) N-Ethyldiisopropylamin in 200 mL Dichlormethan gibt man zu 74,9 g (0,2 mol) 2-(Trifluormethansulfonyloxy)-2-phenylessigsäurebenzylester (Qabar et al., Tetrahedron Letters (1998), 39(33), 5895) in 400 mL Dichlormethan und rührt 6 Stunden unter Rückfluß und anschließend über Nacht bei Raumtemperatur. Es wird dreimal mit je 500 mL Wasser extrahiert, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol: 30/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 37,7 g (69 % d. Th.) eines farblosen kristallinen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 73,67 H 6,74 N 6,41 gef.: C 73,44 H 6,43 N 6,79
b) 10-(4-(NButoxycarbonyl-1 -phenyl-2-oxo-3-azabutyl)-1 ,4,7-α,α',α"-triphenyl-1 ,4,7- tris(carb-oxy-methyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
32,8 g (30 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 12a werden in 400 mL Isopropanol gelöst, mit 40 mL Wasser versetzt und 3 g Palladiumkatalysator (10 % Pd/C) hinzugegeben. Man hydriert 8 Stunden bei 50° C. Es wird vom Katalysator abfiltriert, das Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft. Ausbeute: 24,8 g (quantitativ) eines farblosen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 67,22 H 6,74 N 8,52 gef.: C 67,00 H 6,85 N 8,23
c) Gd-Komplex des 10-(4-Carboxy-1-phenyl-2-oxo-3-azabutyl)-1 ,4,7-α,α',α"-triphenyl- 1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans
16,4 g (20 mmol) des in Beispiel 12b beschriebenen f-Butylesters werden in sehr wenig Trifluoressigsäure gelöst und 15 min bei Raumtemperatur gerührt. Nach Zugabe von 250 mL Diethylether wird 2 Stunden nachgerührt, der Niederschlag abgesaugt und im Vakuum getrocknet. Der so erhaltene frerj Ligand wird in 200 mL Wasser und 80 mL Isopropanol gelöst, mit verdünntem Ammoniak auf pH 7 eingestellt und durch Zugabe von 5 mL Essigsäure angesäuert. Es werden 3,6 g (10 mmol) Gadoliniumoxid zugegeben und 3 Stunden am Rückfluß erhitzt. Nach beendeter Komplexierung wird mit Ammoniak erneut auf pH 7,4 eingestellt und an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel:
Dichlormethan/Methanol/Ammoniak: 25/15/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und über eine IR-120®-Kationenaustauschersäule (H+-Form) gegeben.
Das saure Eluat wird gefriergetrocknet.
Ausbeute: 11 ,7 g (59 % d. Th.) eines farblosen Pulvers.
Wassergehalt (Karl-Fischer): 7,5 %
Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 54,83 H 4,82 Gd 17,09 N 7,61 gef.: C 54,91 H 4,67 Gd 16,62 N 7,33
Beispiel 13
a) 10-[4-(Benzyloxycarbonyl)-2-oxo-3-azabutyl]-1 ,4,7-α,α',α"-tris(isopropyl)-1 ,4,7- tris(benzyloxy-carbonylmethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
Zu 34,4 g (0,2 mol) 1,4,7,10-Tetraazacyclododecan, gelöst in 300 mL Chloroform, gibt man 23,2 g (81 ,1 mmol) 2-Bromacetylglycin-benzylester (Teger-Nilsson et al., WO 93/11152, Seite 38) und rührt über Nacht bei Raumtemperatur. Man gibt 250 mL Wasser zu, trennt die organische Phase ab und wäscht sie noch jeweils zweimal mit 200 mL Wasser. Man trocknet die organische Phase über Magnesiumsulfat und dampft im Vakuum zur Trockne ein. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Chloro- form/Methanol/aqu. 25 % Ammoniak = 10/5/1). Das so erhaltene 1-[4-(Benzyloxycarbonyl)- 2-oxo-3-azabutyl]-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan (19,6 g; 50 mmol; 62 % d. Th.) und 60 mL (0,35 mol) N-Ethyldiisopropylamin in 200 mL Dichlormethan gibt man zu 68,1 g (0,2 mol) 2- (Trifluormethansulfonyloxy)-isovaleriansäurebenzylester (Walker et al., Tetrahedron (1997), 53(43), 14591) in 400 mL Dichlormethan und rührt 6 Stunden unter Rückfluß und anschließend über Nacht bei Raumtemperatur. Es wird dreimal mit je 500 mL Wasser extrahiert, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol: 20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 37,0 g (78 % d. Th.) eines farblosen kristallinen Pulvers Elementaranalyse: ber.: C 69,67 H 7,76 N 7,39 gef.: C 69,51 H 7,88 N 7,39
b) 10-(4-Carboxy-2-oxo-3-azabutyl)-1 ,4,7-α,α',α"-tris(isopropyl)-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)- 1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
28,4 g (30 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 13a werden in 400 mL Isopropanol gelöst, mit 40 mL Wasser versetzt und 3 g Palladiumkatalysator (10 % Pd/C) hinzugegeben. Man hydriert 8 Stunden bei 50° C. Es wird vom Katalysator abfiltriert, das Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft. Ausbeute: 17,7 g (quantitativ) eines farblosen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 55,18 H 8,40 N 11,92 gef : C 54,97 H 8,70 N 11 ,88
c) Gd-Komplex des 10-(4-Carboxy-2-oxo-3-azabutyl)-1 ,4,7- ,α',α"-tris(isopropyl)-1 ,4,7- tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans
11 ,8 g (20 mmol) des in Beispiel 13b beschriebenen Liganden werden in 200 mL Wasser und 80 mL Isopropanol gelöst und durch Zugabe von 5 mL Essigsäure angesäuert. Es werden 3,6 g (10 mmol) Gadoliniumoxid zugegeben und 3 h am Rückfluß erhitzt. Nach beendeter Komplexierung wird mit Ammoniak auf pH 7,4 eingestellt und an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol/Ammoniak: 20/20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und über eine IR-120®- Kationenaustauschersäule (H+-Form) gegeben. Das saure Eluat wird gefriergetrocknet. Ausbeute: 12,1 g (75 % d. Th.) eines farblosen Pulvers. Wassergehalt (Karl-Fischer): 8,0 %
Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 43,71 H 6,25 Gd 21 ,19 N 9,44 gef: C 43,90 H 6,40 Gd 20,80 N 9,33 Beispiel 14
a) 10-[4-(Benzyloxycarbonyl)-2-oxo-3-azabutyl]-1 ,4,7-α,α',α"-tris(cyclohexyl)-1 ,4,7-tris- (benzyloxycarbonylmethyl)-l ,4,7,10-tetraazacyclododecan
18,9 g (50 mmol) des in Beispiel 13a als Zwischenprodukt beschriebenen 1-[4-(Benzyloxy- carbonyl)-2-oxo-3-azabutyl]-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans und 60 mL (0,35 mol) N- Ethyldiisopropylamin in 200 mL Dichlormethan gibt man zu 76,1 g (0,2 mol) 2- (Trifluormethansulfonyloxy)-2-cyclohexylessigsäurebenzylester (Qabar et al., Tetrahedron Letters (1998), 39(33), 5895) in 400 mL Dichlormethan und rührt 6 Stunden unter Rückfluß und anschließend über Nacht bei Raumtemperatur. Es wird dreimal mit je 500 mL Wasser extrahiert, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol: 20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 38,5 g (72 % d. Th.) eines farblosen kristallinen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 71 ,95 H 8,02 N 6,56 gef: C 71 ,90 H 8,21 N 6,73
b) 10-(4-Carboxy-2-oxo-3-azabutyl)-1 ,4,7-α,α',α"-tris(cyclohexyl)-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)- 1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
32,1 g (30 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 14a werden in 400 mL Isopropanol gelöst, mit 40 mL Wasser versetzt und 3 g Palladiumkatalysator (10 % Pd/C) hinzugegeben. Man hydriert 8 Stunden bei 50° C. Es wird vom Katalysator abfiltriert, das Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft. Ausbeute: 21 ,2 g (quantitativ) eines farblosen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 61.08 H 8,69 N 9,89 gef: C 61 ,27 H 8,55 N 9,41 c) Gd-Komplex des 10-(4-Carboxy-2-oxo-3-azabutyl)-1 ,4,7-α,α',α"-tris(cyclohexyl)-1 ,4,7- tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans
14,2 g (20 mmol) des in Beispiel 14b beschriebenen Liganden werden in 150 mL Wasser und 150 mL Isopropanol gelöst und durch Zugabe von 5 mL Essigsäure angesäuert. Es werden 3,6 g (10 mmol) Gadoliniumoxid zugegeben und 8 h am Rückfluß erhitzt. Nach beendeter Komplexierung wird mit Ammoniak erneut auf pH 7,4 eingestellt und an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol/Ammoniak: 20/20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird mit Ameisensäure aufgenommen und mehrfach unter Zusatz von Dichlormethan zur Trockne eingedampft und anschließend bis zur Gewichtskonstanz im Vakuum getrocknet.
Ausbeute: 13,5 g (71 % d. Th.) eines farblosen Pulvers. Wassergehalt (Karl-Fischer): 9,0 %
Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 50,15 H 6,78 Gd 18,24 N 8.12 gef: C 49,92 H 6,51 Gd 18,01 N 8,31
Beispiel 15
a) 10-[4-(Benzyloxycarbonyl)-1 -methyl-2-oxo-3-azabutyl]-2,5,8, 11 -tetramethyl-1 ,4,7,10- tetraazacyclododecan-1 ,4,7-triessigsäure-tri-t-butylester, Natriumbromid-Komplex
Zu 1 ,14 g (5 mmol) 2,5,8,11 -Tetramethyl-1 , 4,7, 10-tetraazacyclododecan (Petrov et al., DE 19608307; Ranganathan et al., WO 95/31444), gelöst in 10 mL Chloroform, gibt man 0,50 g (1 ,67 mmol) 2-Brompropionylglycin-benzylester (Beispiel 1e der WO 98/24774) und rührt über Nacht bei Raumtemperatur. Man gibt 250 mL Wasser zu, trennt die organische Phase ab und wäscht sie noch jeweils zweimal mit 200 mL Wasser. Man trocknet die organische Phase über Magnesiumsulfat und dampft im Vakuum zur Trockne ein. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Chloroform/Methanol/aqu. 25 % Ammoniak = 10/5/1). Zu dem so erhaltenen 1-[4-(Benzyloxycarbonyl)-1-methyl-2-oxo-3-azabuιyl]- 2,5,8, 11 -Tetramethyl-1 ,4,7, 10-tetraazacyclododecan (0,70 g; 1 ,27 mmol; 76 % d. Th.) und 541 mg (5,1 mmol) Natriumcarbonat in 5 mL Acetonitril gibt man 822 mg (4,2 mmol) Bromessigsäure-tert.-butylester und rührt 12 Stunden bei 60°C. Man kühlt auf 0°C und filtriert von den Salzen ab. Das Filtrat wird zur Trockne eingedampft und der Rückstand an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Methylenchlorid/Methanol= 20:1). Ausbeute: 964 mg (85 % d. Th.) eines farblosen Feststoffes
Elementaranalyse: ber.: C 56,49 H 8.01 N 7.84 Na 2,57 Br 8,95 gef: C 56,37 H 7.88 N 7.61 Na 2,33 Br 8,59
b) 10-(4-Carboxy-1-methyl-2-oxo-3-azabutyl)-2, 5,8, 11 -tetramethyl-1 ,4,7,10-tetraazacyclo- dodecan-1 ,4,7-triessigsäure-tri-tert-butylester (Natriumbromid-Komplex)
893 mg (1 ,0 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 15a löst man in 10 mL Isopropanol und gibt eine Spatelspitze Palladiumkatalysator (10 % Pd/C) zu. Man hydriert über Nacht bei Raumtemperatur. Es wird vom Katalysator abfiltriert und das Filtrat zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird aus Dioxan umkristallisiert. Ausbeute: 562 mg (70 % d. Th.) eines kristallinen Feststoffes
Elementaranalyse: ber.: C 52,36 H 8.16 N 8.72 Na 2,86 Br 9,95 gef: C 52,51 H 8.30 N 8.93 Na 2,71 Br 9,44
c) Gadolinium-Komplex der 10-(4-Carboxy-1-methyl-2-oxo-3-azabutyl)-2, 5,8,11-tetra- methyl-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan-1 ,4,7-triessigsäure
803 mg (1 ,0 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 15b werden in 5 mL Trifluoressigsäure gelöst und 3 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Man dampft zur Trockne ein, nimmt den Rückstand in 300 mL Wasser auf und gibt die Lösung auf eine Säule, gefüllt mit Reillex® 425 PVP. Man eluiert mit Wasser. Die produkthaltigen Fraktionen werden vereinigt und zur Trockne eingedampft (446 mg; 0,84 mmol) und erneut in 4 mL Wasser gelöst. Man gibt 152 mg (0,42 mmol) Gadoliniumoxid zu und erwärmt 3 h auf 90°C. Man dampft zur Trockne ein (Vakuum) und kristallisiert den Rückstand aus 90 % aqu. Ethanol um. Die Kristalle werden abgesaugt, einmal mit Ethanol, dann mit Aceton und zum Schluß mit Dimethylether gewaschen und im Vakuumofen bei 130°C getrocknet (24 Stunden). Ausbeute: 469 mg (65 % d. Th.) eines farblosen kristallinen Pulvers Wassergehalt: 5 %
Elementaranalyse (berechnet auf wasserfreie Substanz): ber.: C 40,28 H 5,58 N 10,21 Gd 22,93 gef: C 40,06 H 5,75 N 10,43 Gd 22,40
Beispiel 16
Gd-Komplex des 10-[8-(N-Maleimido)-1-methyl-2,5-dioxo-3,6-diazaoctyl]-1 ,4,7-α,α',α"-tris- (isopropyl)-l ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans
2,27 g (3 mmol) der in Beispiel 2 beschriebenen Gd-Komplexsäure werden in 15 mL DMF gelöst, unter Eiskühlung mit 380 mg (3,3 mmol) N-Hydroxysuccinimd und 681 mg (3,3 mmol) Dicyclo-hexylcarbodiimid versetzt und 1 Stunde im Eis voraktiviert. Anschließend wird eine Mischung aus 839 mg (3,3 mmol) N-(2-Aminoethyl)maleimid Trifluoracetatsalz (Arano et al., J. Med. Chem., 1996, 39, 3458) und 0,7 mL (4 mmol) N,N-Diisopropylethyl- amin in 10 mL DMF zugegeben und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionsmischung wird erneut im Eisbad gekühlt, filtriert und das Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol: 1/1). Ausbeute: 997 mg (35 % d. Th.) Wassergehalt (Karl-Fischer): 7,5 %
Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 46,51 H 6,20 Gd 17,91 N 11 ,17 gef: C 46,28 H 6,44 Gd 17,31 N 11,26
Beispiel 17
Gd-Komplex des 10-[8->(N-Maleimido)-1 -methyl-2,5-dioxo-3,6-diazaoctyl]-1 ,4,7-α,α',α"-tris- (cyclohexyl)-l ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans 2,63 g (3 mmol) der in Beispiel 3 beschriebenen Gd-komplexsäure werden in 15 mL DMF gelöst, unter Eiskühlung mit 380 mg (3,3 mmol) N-Hydroxysuccinimd und 681 mg (3,3 mmol) Dicyclo-hexylcarbodiimid versetzt und 1 Stunde im Eis voraktiviert. Anschließend wird eine Mischung aus 839 mg (3,3 mmol) N-(2-Aminoethyl)maleimid Trifluoracetatsalz (Arano et al., J. Med. Chem., 1996, 39, 3458) und 0,7 mL (4 mmol) N,N-Diisopropylethyl- amin in 10 mL DMF zugegeben und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionsmischung wird erneut im Eisbad gekühlt, filtriert und das Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan/Methanol: 1/1). Ausbeute: 1 ,24 g (39 % d. Th.) Wassergehalt (Karl-Fischer): 6,0 %
Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 51,74 H 6,66 Gd 15,75 N 9,82 gef: C 51 ,77 H 6,41 Gd 15,25 N 10,02
Beispiel 18
a) (3-Brom-2-oxo-pyrrolidin-1-yl)essigsäurebenzylester
67,7 g (0,2 mol) Glycinbenzylester Tosylat und 61 ,2 ml (0,44 mol) Triethylamin werden in 200 mL Methylenchlorid gelöst und bei 0 °C zu einer Lösung von 52,9 g (0,2 mol) 2,4- Dibrombuttersäurechlorid (Gramain et al. Synth. Commun. (1997), (27), 1827) in 200 ml Methylenchlorid innerhalb 45 min zugetropft und 18 h bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionsmischung wird nun bei 0 °C zu einer Lösung von 400 ml wässriger 32proz. Natriumhydroxid und 2 g Tetrabutylammoniumhydrogencarbonat getropft (ca. 15 min) und 30 min gerührt. Anschließend weden die Phasen getrennt, und die wäßrige Phase dreimal mit je 200 ml Dichlormethan extrahiert. Die organischen Phasen werden über Natriumsulfat getrocknet, die Lösung zur Trockne eingedampft und an Kieselgel chromatographiert (Methylenchlorid). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 29,3 g (47 % d. Th.) Elementaranalyse: ber.: C 50,02 H 4,52 N 4,49 gef: C 50,34 H 4,44 N 4,41
b) 10-[1 -(Benzyloxycarbonylmethyl)-2-oxo-pyrrolidin-3-yl]-1 ,4,7-α,α',α"-trimethyl-1 ,4,7-tris- (benzyloxycarbonylmethyl)-l ,4,7, 10-tetraazacyclododecan
Zu 28,7 g (165,8 mmol) 1 ,4,7,10-Tetraazacyclododecan, gelöst in 300 mL Chloroform, gibt man 20,7 g (66,3 mmol) (3-Brom-2-oxo-pyrrolidin-1-yl)essigsäurebenzylester und rührt über Nacht bei Raumtemperatur. Man gibt 250 mL Wasser zu, trennt die organische Phase ab und wäscht sie noch jeweils zweimal mit 200 mL Wasser. Man trocknet die organische Phase über Magnesiumsulfat und dampft im Vakuum zur Trockne ein. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Chloroform/Methanol/aqu. 25 % Ammoniak = 10/5/1). Das so erhaltene 1-[1-(Benzyloxycarbonylmethyl)-2-oxo-pyrrolidin-3-yl]-1 ,4,7,10- tetraazacyclododecan (20,9 g; 51 ,8 mmol; 78 % d. Th.) und 60 mL (0,35 mol) N-Ethyldiisopropylamin in 200 mL Dichlormethan gibt man zu 62,45 g (0,2 mol) 2-(Trifluormethan- sulfonyloxy)propansäurebenzylester (Kitazaki et al., Chem. Pharm. Bull. (1999), 47(3), 360) in 400 mL Dichlormethan und rührt 6 Stunden unter Rückfluß und anschließend über Nacht bei Raumtemperatur. Es wird dreimal mit je 500 mL Wasser extrahiert, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan /Methanol: 20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 32,7 g (71 % d. Th.) eines farblosen kristallinen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 68,82 H 7.13 N 7,87 gef : C 68,54 H 7,28 N 8,01
c) 10-[1-(Carboxymethyl)-2-oxo-pyrrolidin-3-yl]-1 ,4,7-α, α', α"-trimethyl-1,4,7-tris(carboxy- methyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
26,7 g (30 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 18b werden in 400 mL Isopropanol gelöst, mit 40 mL Wasser versetzt und 3 g Palladiumkatalysator (10 % Pd/C) hinzugegeben. Man hydriert 8 Stunden bei 50° C. Es wird vom Katalysator abfiltriert, das Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft. Ausbeute: 15,8 g (quantitativ) eines farblosen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 52,16 H 7,42 N 13,22 gef: C 52,32 H 7,35 N 13,11
d) Gd-Komplex des 10-[1-(Carboxymethyl)-2-oxo-pyrrolidin-3-yl]-1 ,4,7-α, α', α"-trimethyl- 1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans
10,6 g (20 mmol) des in Beispiel 18c beschriebenen Liganden werden in 200 mL Wasser und 80 mL Isopropanol gelöst und durch Zugabe von 5 mL Essigsäure angesäuert. Es werden 3,6 g (10 mmol) Gadoliniumoxid zugegeben und 3 h am Rückfluß erhitzt. Nach beendeter Komplexierung wird mit Ammoniak erneut auf pH 7,4 eingestellt und an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan /Methanol /Ammoniak: 20/20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und über eine IR-120®- Kationenaustauschersäule (H+-Form) gegeben. Das saure Eluat wird gefriergetrocknet. Ausbeute: 9,7 g (67 % d. Th.) eines farblosen Pulvers. Wassergehalt (Karl-Fischer): 8,3 %
Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 40,40 H 5,31 Gd 23,00 N 10,24 gef: C 39,99 H 5,55 Gd 22,93 N 10,45
Beispiel 19
a) 10-[1 -(Benzyloxycarbonylmethyl)-2-oxo-pyrrolidin-3-yl]-1 ,4,7-α,α',α"-tris(isopropyl)-1 ,4,7- tris(benzyloxycarbonylmethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
20,2 g (50 mmol) des in Bei piel 18b als Zwischenprodukt beschriebenen 1-[1- (Benzyloxycarbonylmethyl)-2-oxo-pyrrolidin-3-yl]-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans und 60 mL (0,35 mol) N-Ethyldiisopropylamin in 200 mL Dichlormethan gibt man zu 68,1 g (0,2 mol) 2-(Trifluormethansulfonyloxy)-isovaleriansäurebenzylester (Walker et al., Tetrahedron (1997), 53(43), 14591) in 400 mL Dichlormethan und rührt 6 Stunden unter Rückfluß und anschließend über Nacht bei Raumtemperatur. Es wird dreimal mit je 500 mL Wasser extrahiert, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan /Methanol: 20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 34,1 g (70 % d. Th.) eines farblosen kristallinen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 70,27 H 7,76 N 7.19 gef: C 70,45 H 7,61 N 7.11
b) 10-[1 -(Carboxymethyl)-2-oxo-pyrrolidin-3-yl]-1 ,4,7-α,α',α"-tris(isopropyl)-1 ,4,7-tris(carb- oxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
29,2 g (30 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 19a werden in 400 mL Isopropanol gelöst, mit 40 mL Wasser versetzt und 3 g Palladiumkatalysator (10 % Pd/C) hinzugegeben. Man hydriert 8 Stunden bei 50° C. Es wird vom Katalysator abfiltriert, das Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft. Ausbeute: 18,4 g (quantitativ) eines farblosen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 56,75 H 8,38 N 11 ,41 gef: C 56,89 H 8,31 N 11 ,37
c) Gd-Komplex des 10-[1-(Carboxymethyl)-2-oxo-pyrrolidin-3-yl]-1 ,4,7-α, α', α"-tris(iso- propyl)-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans
12,3 g (20 mmol) des in Beispiel 19b beschriebenen Liganden werden in 200 mL Wasser und 80 mL Isopropanol gelöst und durch Zugabe von 5 mL Essigsäure angesäuert Es werden 3,6 g (10 mmol) Gadoliniumoxid zugegeben und 3 h am Rückfluß erhitzt. Nach beendeter Komplexierung wird mit Ammoniak auf pH 7,4 eingestellt und an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan /Methanol /Ammoniak: 20/20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und über eine IR-120®- Kationenaustauschersäule (H+-Form) gegeben. Das saure Eluat wird gefriergetrocknet. Ausbeute: 11 ,9 g (75 % d. Th.) eines farblosen Pulvers. Wassergehalt (Karl-Fischer): 8,2 %
Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 45,36 H 6,30 Gd 20,48 N 9.12 gef: C 45,89 H 6,22 Gd 20,23 N 9,01
In analoger Weise erhält man unter Verwendung von 12,3 g (20 mmol) des in Beispiel 19b beschriebenen Liganden und 3,73 g (10 mmol) Dysprosiumoxid anstelle von Gadoliniumoxid den Dy-Komplex des 10-[1-(Carboxymethyl)-2-oxo-pyrrolidin-3-yl]-1 ,4,7-α, α', α"-tris(isopropyl)-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans.
Ausbeute: 11,4 g (71 % d. Th.) eines farblosen Pulvers. Wassergehalt (Karl-Fischer): 8,0 %
Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 45,05 H 6,26 Dy 21 ,02 N 9,06 gef: C 45,35 H 6,22 Dy 20,88 N 9,04
Beispiel 20
a) 10-[1 -(Benzyloxycarbonylmethyl)-2-oxo-pyrrolidin-3-yl]-1 ,4,7-α,α',α"-tris(cyclohexyl)- 1 ,4,7-tris(benzyloxycarbonylmethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
20,2 g (50 mmol) des in Beispiel 18b als Zwischenprodukt beschriebenen 1-[1- (Benzyloxycarbonylmethyl)-2-oxo-pyrrolidin-3-yl]-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans und 60 mL (0,35 mol) N-Ethyldiisopropylamin in 200 mL Dichlormethan gibt man zu 76,1 g (0,2 mol) 2-(Trifluormethansulfonyloxy)-2-cyclohexylessigsäurebenzylester (Qabar et al., Tetrahedron Letters (1998), 39(33), 5895) in 400 mL Dichlormethan und rührt 6 Stunden unter Rückfluß und anschließend über Nacht bei Raumtemperatur. Es wird dreimal mit je 500 mL Wasser extrahiert, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan /Methanol: 20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft.
Ausbeute: 37,2 g (68 % d. Th.) eines farblosen kristallinen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 72,43 H 8,01 N 6,40 gef: C 72,55 H 7,98 N 6,35
b) 10-[1 -(Carboxymethyl)-2-oxo-pyrrolidin-3-yl]-1 ,4,7-α,α',α"-tris(cyclohexyl)-1 ,4,7-tris(carb- oxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
32,8 g (30 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 20a werden in 400 mL Isopropanol gelöst, mit 40 mL Wasser versetzt und 3 g Palladiumkatalysator (10 % Pd/C) hinzugegeben. Man hydriert 8 Stunden bei 50° C. Es wird vom Katalysator abfiltriert, das Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft. Ausbeute: 22,0 g (quantitativ) eines farblosen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 62,19 H 8,65 N 9,54 gef: C 62,44 H 8,56 N 9,46
c) Gd-Komplex des 10-[1-(Carboxymethyl)-2-oxo-pyrrolidin-3-yl]-1 ,4,7-α,α',α"-tris(cyclo- hexyl)-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans
14,6 g (20 mmol) des in Beispiel 20b beschriebenen Liganden werden in 150 mL Wasser und 150 mL Isopropanol gelöst und durch Zugabe von 5 mL Essigsäure angesäuert. Es werden 3,6 g (10 mmol) Gadoliniumoxid zugegeben und 8 h am Rückfluß erhitzt. Nach beendeter Komplexierung wird mit Ammoniak erneut auf pH 7,4 eingestellt und an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan /Methanol /Ammoniak: 20/20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird mit Ameisensäure aufgenommen und mehrfach unter Zusatz von Dichlormethan zur Trockne eingedampft und anschließend bis zur Gewichtskonstanz im Vakuum getrocknet. Ausbeute: 12,1 g (65 % d. Th.) eines farblosen Pulvers. Wassergehalt (Karl-Fischer): 7,0 %
Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 51 ,39 H 6,81 Gd 17,70 N 7,89 gef: C 51 ,64 H 6,77 Gd 17,44 N 7,77
Beispiel 21
a) (3-Brom-2-oxo-pyrrolidin-1 -yl)benzoesäurebenzylester
45,5 g (0,2 mol) 4-Aminobenzoesäurebenzylester und 30,6 ml (0,22 mol) Triethylamin werden in 200 mL Methylenchlorid gelöst und bei 0 °C zu einer Lösung von 52,9 g (0,2 mol) 2,4-Dibrombuttersäurechlorid (Gramain et al. Synth. Commun. (1997), (27), 1827) in 200 ml Methylenchlorid innerhalb 45 min zugetropft und 18 h bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionsmischung wird nun bei 0 °C zu einer Lösung von 400 ml wässriger 32proz. Natriumhydroxid und 2 g Tetrabutylammoniumhydrogencarbonat getropft (ca. 15 min) und 30 min gerührt. Anschließend weden die Phasen getrennt, und die wäßrige Phase dreimal mit je 200 ml Dichlormethan extrahiert. Die organischen Phasen werden über Natriumsulfat getrocknet, die Lösung zur Trockne eingedampft und an Kieselgel chromatographiert (Methylenchlorid). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 38,2 g (51 % d. Th.)
Elementaranalyse: ber.: C 57,77 H 4,31 N 3,74 gef : C 57,99 H 4,27 N 3,66
b) 10-[1 -(4-Benzyloxycarbonylphenyl)-2-oxo-pyrrolidin-3-yl]-1 ,4,7-α,α',α"-trimethyl-1 ,4,7- tris(benzyloxycarbonylmethyl)-1 ,4,7, 10-tetraazacyclododecan
Zu 31 ,2 g (180 mmol) 1 ,4,7,10-Tetraazacyclododecan, gelöst in 300 mL Chloroform, gibt man 26,9 g (71 ,9 mmol) (3-Brom-2-oxo-pyrrolidin-1-yl)benzoesäurebenzylester und rührt über Nacht bei Raumtemperatur. Man gibt 250 mL Wasser zu, trennt die organische Phase ab und wäscht sie noch jeweils zweimal mit 200 mL Wasser. Man trocknet die organische Phase über Magnesiumsulfat und dampft im Vakuum zur Trockne ein. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Chloroform/Methanol/aqu. 25 % Ammoniak = 10/5/1). Das so erhaltene 1-[1-(4-Benzyloxycarbonylphenyl)-2-oxo-pyrrolidin-3-yl]-1 ,4,7,10- tetraazacyclododecan (26,1 g; 56,1 mmol; 78 % d. Th.) und 60 mL (0,35 mol) N-Ethyldiisopropylamin in 200 mL Dichlormethan gibt man zu 62,45 g (0,2 mol) 2-(Trifluormethan- sulfonyloxy)propansäurebenzylester (Kitazaki et al., Chem. Pharm. Bull. (1999), 47(3), 360) in 400 mL Dichlormethan und rührt 6 Stunden unter Rückfluß und anschließend über Nacht bei Raumtemperatur. Es wird dreimal mit je 500 mL Wasser extrahiert, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan /Methanol: 20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 36,3 g (68 % d. Th.) eines farblosen kristallinen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 70,64 H 6,88 N 7,36 gef: C 70,89 H 6,81 N 7,29
c) 10-[1-(4-Carboxyphenyl)-2-oxo-pyrrolidin-3-yl]-1 ,4,7-α, α', α"-trimethyl-1 ,4,7-tris(carboxy- methyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
28,6 g (30 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 21 b werden in 400 mL Isopropanol gelöst, mit 40 mL Wasser versetzt und 3 g Palladiumkatalysator (10 % Pd/C) hinzugegeben. Man hydriert 8 Stunden bei 50° C. Es wird vom Katalysator abfiltriert, das Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft. Ausbeute: 17,7 g (quantitativ) eines farblosen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 56,84 H 6,98 N 11 ,84 gef: C 57,04 H 6,91 N 11 ,79
d) Gd-Komplex des 10-[1-(4-Carboxyphenyl)-2-oxo-pyrrolidin-3-yl]-1,4,7-α, α', α" trimethyl-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans 11 ,8 g (20 mmol) des in Beispiel 21c beschriebenen Liganden werden in 200 mL Wasser und 80 mL Isopropanol gelöst und durch Zugabe von 5 mL Essigsäure angesäuert. Es werden 3,6 g (10 mmol) Gadoliniumoxid zugegeben und 3 h am Rückfluß erhitzt. Nach beendeter Komplexierung wird mit Ammoniak erneut auf pH 7,4 eingestellt und an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan /Methanol /Ammoniak: 20/20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und über eine IR-120®- Kationenaustauschersäule (H+-Form) gegeben. Das saure Eluat wird gefriergetrocknet. Ausbeute: 11 ,1 g (71 % d. Th.) eines farblosen Pulvers. Wassergehalt (Karl-Fischer): 7,5 %
Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 45,09 H 5.13 Gd 21 ,08 N 9,39 gef: C 45,45 H 5,11 Gd 20,78 N 9,40
Beispiel 22
a) 10-[1 -(4-Benzyloxycarbonylphenyl)-2-oxo-pyrrolidin-3-yl]-1 ,4,7-α,α',α"-tris(isopropyl)- 1 ,4,7-tris(benzyloxycarbonylmethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
23,3 g (50 mmol) des in Beispiel 21b als Zwischenprodukt beschriebenen 1-[1-(4- Benzyloxycarbonylphenyl)-2-oxo-pyrrolidin-3-yl]-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans und 60 mL (0,35 mol) N-Ethyldiisopropylamin in 200 mL Dichlormethan gibt man zu 68,1 g (0,2 mol) 2- (Trifluormethansulfonyloxy)-isovaleriansäurebenzylester (Walker et al., Tetrahedron (1997), 53(43), 14591) in 400 mL Dichlormethan und rührt 6 Stunden unter Rückfluß und anschließend über Nacht bei Raumtemperatur. Es wird dreimal mit je 500 mL Wasser extrahiert, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan /Methanol: 20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 35,3 g (68 % d. Th.) eines farblosen kristallinen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 71,86 H 7,49 N 6,76 gef: C 71,99 H 7,46 N 6,71 b) 10-[1-(4-Carboxyphenyl)-2-oxo-pyrrolidin-3-yl]-1 ,4,7-α,α',α"-tris(isopropyl)-1,4,7-tris- (carboxymethyl)-l ,4,7,10-tetraazacyclododecan
31,1 g (30 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 22a werden in 400 mL Isopropanol gelöst, mit 40 mL Wasser versetzt und 3 g Palladiumkatalysator (10 % Pd/C) hinzugegeben. Man hydriert 8 Stunden bei 50° C. Es wird vom Katalysator abfiltriert, das Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft. Ausbeute: 20,2 g (quantitativ) eines farblosen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 60,43 H 7,90 N 10,36 gef: C 60,59 H 7,82 N 10,31
c) Gd-Komplex des 10-[1-(4-Carboxyphenyl)-2-oxo-pyrrolidin-3-yl]-1 ,4,7-α, α', α"-tris(iso- propyl)-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans
13,5 g (20 mmol) des in Beispiel 22b beschriebenen Liganden werden in 200 mL Wasser und 80 mL Isopropanol gelöst und durch Zugabe von 5 mL Essigsäure angesäuert. Es werden 3,6 g (10 mmol) Gadoliniumoxid zugegeben und 3 h am Rückfluß erhitzt. Nach beendeter Komplexierung wird mit Ammoniak auf pH 7,4 eingestellt und an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan /Methanol /Ammoniak: 20/20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und über eine IR-120®- Kationenaustauschersäule (H+-Form) gegeben. Das saure Eluat wird gefriergetrocknet. Ausbeute: 12,4 g (72 % d. Th.) eines farblosen Pulvers. Wassergehalt (Karl-Fischer): 7,8 %
Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 49,20 H 6,07 Gd 18,94 N 8,44 gef: C 49,51 H 6,04 Gd 18,71 N 8,45
In analoger Weise erhält man unter Verwendung von 13,5 g (20 mmol) des in Seispiel 22b beschriebenen Liganden und 3,73 g (10 mmol) Dysprosiumoxid anstelle von Gadoliniumoxid den Dy-Komplex des 10-[1-(4-Carboxyphenyl)-2-oxo-pyrrolidin-3-yl]-1,4,7- α, α', α"-tris(isopropyl)-1 ,4,7-ths(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans
Ausbeute: 13,0 g (75 % d. Th.) eines farblosen Pulvers. Wassergehalt (Karl-Fischer): 7,5 %
Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 48,89 H 6,03 Dy 19,45 N 8,38 gef: C 49,11 H 6,04 Dy 19,22 N 8,36
Beispiel 23
a) 10-[1-(4-Benzyloxycarbonylphenyl)-2-oxo-pyrrolidin-3-yl]-1 ,4,7-α,α',α"-tris(cyclohexyl)- 1 ,4,7-tris(benzyloxycarbonylmethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
23,3 g (50 mmol) des in Beispiel 21b als Zwischenprodukt beschriebenen 1-[1-(4- Benzyloxycarbonylphenyl)-2-oxo-pyrrolidin-3-yl]-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans und 60 mL (0,35 mol) N-Ethyldiisopropylamin in 200 mL Dichlormethan gibt man zu 76,1 g (0,2 mol) 2- (Trifluormethansulfonyloxy)-2-cyclohexylessigsäurebenzylester (Qabar et al., Tetrahedron Letters (1998), 39(33), 5895) in 400 mL Dichlormethan und rührt 6 Stunden unter Rückfluß und anschließend über Nacht bei Raumtemperatur. Es wird dreimal mit je 500 mL Wasser extrahiert, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan /Methanol: 20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 41 ,1 g (71 % d. Th.) eines farblosen kristallinen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 73,74 H 7,76 N 6,06 gef: C 73,91 H 7,69 N 6,01
b) 10-[1 -(4-Carboxyphenyl)-2-oxo-pyrrolidin-3-yl]-1 ,4,7-α,α',α"-tris(cyclohexyl)-1 ,4,7-tris- (carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan 34,7 g (30 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 23a werden in 400 mL Isopropanol gelöst, mit 40 mL Wasser versetzt und 3 g Palladiumkatalysator (10 % Pd/C) hinzugegeben. Man hydriert 8 Stunden bei 50° C. Es wird vom Katalysator abfiltriert, das Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft. Ausbeute: 23,8 g (quantitativ) eines farblosen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 64,88 H 8,23 N 8,80 gef: C 65,04 H 8.19 N 8,70
c) Gd-Komplex des 10-[1-(4-Carboxyphenyl)-2-oxo-pyrrolidin-3-yl]-1 ,4,7-α,α',α"-tris(cyclo- hexyl)-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans
15,9 g (20 mmol) des in Beispiel 23b beschriebenen Liganden werden in 150 mL Wasser und 150 mL Isopropanol gelöst und durch Zugabe von 5 mL Essigsäure angesäuert. Es werden 3,6 g (10 mmol) Gadoliniumoxid zugegeben und 8 h am Rückfluß erhitzt. Nach beendeter Komplexierung wird mit Ammoniak erneut auf pH 7,4 eingestellt und an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan /Methanol /Ammoniak: 20/20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird mit Ameisensäure aufgenommen und mehrfach unter Zusatz von Dichlormethan zur Trockne eingedampft und anschließend bis zur Gewichtskonstanz im Vakuum getrocknet.
Ausbeute: 12,9 g (65 % d. Th.) eines farblosen Pulvers. Wassergehalt (Karl-Fischer): 7,0 %
Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 54,35 H 6,58 Gd 16,55 N 7,37 gef: C 54,66 H 6,57 Gd 16,32 N 7,32
Beispiel 24
a) (3-Brom-2-oxo-piperidin-1 -yl)essigsäurebenzylester 67,7 g (0.2 mol) Glycinbenzylester Tosylat und 61 ,2 ml (0,44 mol) Triethylamin werden in 200 mL Methylenchlorid gelöst und bei 0 °C zu einer Lösung von 55,7 g (0,2 mol) 2,5- Dibromvaleriansäurechlorid (Okawara et al. Chem. Pharm. Bull. (1982), (30), 1225) in 200 ml Methylenchlorid innerhalb 45 min zugetropft und 18 h bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionsmischung wird nun bei 0 °C zu einer Lösung von 400 ml wässriger 32proz. Natriumhydroxid und 2 g Tetrabutylammoniumhydrogencarbonat getropft (ca. 15 min) und 30 min gerührt. Anschließend weden die Phasen getrennt, und die wäßrige Phase dreimal mit je 200 ml Dichlormethan extrahiert. Die organischen Phasen werden über Natriumsulfat getrocknet, die Lösung zur Trockne eingedampft und an Kieselgel chromatographiert (Methylenchlorid). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 33,2 g (51 % d. Th.)
Elementaranalyse: ber.: C 51.55 H 4,94 N 4,29 gef: C 51.86 H 4,91 N 4.18
b) 10-[1 -(Benzyloxycarbonylmethyl)-2-oxo-piperidin-3-yl]-1 ,4,7-α,α',α"-trimethyl-1 ,4,7-tris- (benzyloxycarbonylmethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
Zu 30,3 g (175 mmol) 1 ,4,7,10-Tetraazacyclododecan, gelöst in 300 mL Chloroform, gibt man 18,9 g (58 mmol) (3-Brom-2-oxo-piperidin-1-yl)essigsäurebenzylester und rührt über Nacht bei Raumtemperatur. Man gibt 250 mL Wasser zu, trennt die organische Phase ab und wäscht sie noch jeweils zweimal mit 200 mL Wasser. Man trocknet die organische Phase über Magnesiumsulfat und dampft im Vakuum zur Trockne ein. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Chloroform/Methanol/aqu. 25 % Ammoniak = 10/5/1). Das so erhaltene 1-[1-(Benzyloxycarbonylmethyl)-2-oxo-piperidin-3-yl]-1 ,4,7,10- tetraazacyclododecan (20,3 g; 48,6 mmol; 84 % d. Th.) und 60 mL (0,35 mol) N-Ethyldiisopropylamin in 200 mL Dichlormethan gibt man zu 62,45 g (0,2 mol) 2-(Trifluormethan- sulfonyloxy)propansäurebenzylester (Kitazaki et al., Chem. Pharm. Bull. (1999), 47(3), 360) in 400 mL Dichlormethan und rührt 6 Stunden unter Rückfluß und anschließend über Nacht bei Raumtemperatur. Es wird dreimal mit je 500 mL Wasser extrahiert, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan /Methanol: 20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 32,5 g (74 % d. Th.) eines farblosen kristallinen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 69,08 H 7,25 N 7,75 gef : C 69,34 H 7.19 N 7,66
c) 10-[1-(Carboxymethyl)-2-oxo-piperidin-3-yl]-1 ,4,7-α, α', α"-trimethyl-1 ,4,7-tris(carboxy- methyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
27,1 g (30 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 24b werden in 400 mL Isopropanol gelöst, mit 40 mL Wasser versetzt und 3 g Palladiumkatalysator (10 % Pd/C) hinzugegeben. Man hydriert 8 Stunden bei 50° C. Es wird vom Katalysator abfiltriert, das Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft. Ausbeute: 16,3 g (quantitativ) eines farblosen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 53,03 H 7,60 N 12,88 gef: C 53,34 H 7,54 N 12,79
d) Gd-Komplex des 10-[1-(Carboxymethyl)-2-oxo-piperidin-3-yl]-1 ,4,7-α, α', α"-trimethyl- 1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans
10,9 g (20 mmol) des in Beispiel 24c beschriebenen Liganden werden in 200 mL Wasser und 80 mL Isopropanol gelöst und durch Zugabe von 5 mL Essigsäure angesäuert. Es werden 3,6 g (10 mmol) Gadoliniumoxid zugegeben und 3 h am Rückfluß erhitzt. Nach beendeter Komplexierung wird mit Ammoniak erneut auf pH 7,4 eingestellt und an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan /Methanol /Ammoniak: 20/20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und über eine IR-120®- Kationenaustauschersäule (H*-Form) gegeben. Das saure Eluat wird gefriergetrocknet. Ausbeute: 9,6 g (65 % d. Th.) eines farblosen Pulvers. Wassergehalt (Karl-Fischer): 7,2 % Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 41.31 H 5,49 Gd 22,53 N 10,04 gef: C 41 ,67 H 5,48 Gd 22,21 N 9,97
Beispiel 25
a) 10-[1-(Benzyloxycarbonylmethyl)-2-oxo-piperidin-3-yl]-1 ,4,7-α,α',α"-tris(isopropyl)-1 ,4,7- tris(benzyloxycarbonylmethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
20,9 g (50 mmol) des in Beispiel 24b als Zwischenprodukt beschriebenen 1-[1- (Benzyloxycarbonylmethyl)-2-oxo-piperidin-3-yl]-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans und 60 mL (0,35 mol) N-Ethyldiisopropylamin in 200 mL Dichlormethan gibt man zu 68,1 g (0,2 mol) 2- (Trifluormethansulfonyloxy)-isovaleriansäurebenzylester (Walker et al., Tetrahedron (1997), 53(43), 14591) in 400 mL Dichlormethan und rührt 6 Stunden unter Rückfluß und anschließend über Nacht bei Raumtemperatur. Es wird dreimal mit je 500 mL Wasser extrahiert, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan /Methanol: 20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 36,2 g (73 % d. Th.) eines farblosen kristallinen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 70,49 H 7,85 N 7,09 gef: C 70,61 H 7,83 N 7,01
b) 10-[1 -(Carboxymethyl)-2-oxo-piperidin-3-yl]-1 ,4,7-α,α',α"-tris(isopropyl)-1 ,4,7-tris(carb- oxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
29,6 g (30 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 25a werden in 400 mL Isopropanol gelöst, mit 40 mL Waεser versetzt und 3 g Palladiumkatalysator (10 % Pd/C) hinzugegeben. Man hydriert 8 Stunden bei 50° C. Es wird vom Katalysator abfiltriert, das Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft. Ausbeute: 18,8 g (quantitativ) eines farblosen Pulvers Elementaranalyse: ber.: C 57,40 H 8,51 N 11 ,16 gef: C 57,64 H 8,45 N 11 ,09
c) Gd-Komplex des 10-[1-(Carboxymethyl)-2-oxo-piperidin-3-yl]-1 ,4,7-α, α', α"-tris(iso- propyl)-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans
12,6 g (20 mmol) des in Beispiel 25b beschriebenen Liganden werden in 200 mL Wasser und 80 mL Isopropanol gelöst und durch Zugabe von 5 mL Essigsäure angesäuert. Es werden 3,6 g (10 mmol) Gadoliniumoxid zugegeben und 3 h am Rückfluß erhitzt. Nach beendeter Komplexierung wird mit Ammoniak auf pH 7,4 eingestellt und an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan /Methanol /Ammoniak: 20/20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und über eine IR-120®- Kationenaustauschersäule (H+-Form) gegeben. Das saure Eluat wird gefriergetrocknet. Ausbeute: 11 ,7 g (71 % d. Th.) eines farblosen Pulvers. Wassergehalt (Karl-Fischer): 8,1 %
Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 46,08 H 6,44 Gd 20,11 N 8,96 gef: C 46,34 H 6,41 Gd 19,99 N 8,91
In analoger Weise erhält man unter Verwendung von 12,6 g (20 mmol) des in Beispiel 25b beschriebenen Liganden und 3,73 g (10 mmol) Dysprosiumoxid anstelle von Gadoliniumoxid den Dy-Komplex des 10-[1-(Carboxymethyl)-2-oxo-piperidin-3-yl]-1,4,7-α, α', α"-tris(isopropyl)-1 , 4, 7-tris(carboxymethyl)-1 , 4,7,10-tetraazacyclododecans. Ausbeute: 10,8 g (66 % d. Th.) eines farblosen Pulvers. Wassergehalt (Karl-Fischer): 7,6 %
Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 45,77 H 6,40 Dy 20,64 N 8,90 gef: C 46,01 H 6,46 Dy 20,34 N 8,91 Beispiel 26
a) 10-[1 -(Benzyloxycarbonylmethyl)-2-oxo-piperidin-3-yl]-1 ,4,7-α,α',α"-tris(cyclohexyl)- 1 ,4,7-tris(benzyloxycarbonylmethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
20,9 g (50 mmol) des in Beispiel 24b als Zwischenprodukt beschriebenen 1-[1- (Benzyloxycarbonylmethyl)-2-oxo-piperidin-3-yl]-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans und 60 mL (0,35 mol) N-Ethyldiisopropylamin in 200 mL Dichlormethan gibt man zu 76,1 g (0,2 mol) 2- (Trifluormethansulfonyloxy)-2-cyclohexylessigsäurebenzylester (Qabar et al., Tetrahedron Letters (1998), 39(33), 5895) in 400 mL Dichlormethan und rührt 6 Stunden unter Rückfluß und anschließend über Nacht bei Raumtemperatur. Es wird dreimal mit je 500 mL Wasser extrahiert, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan /Methanol: 20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 39,8 g (72 % d. Th.) eines farblosen kristallinen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 72,60 H 8,09 N 6,32 gef : C 72,89 H 7,98 N 6,27
b) 10-[1 -(Carboxymethyl)-2-oxo-piperidin-3-yl]-1 ,4,7-α,α',α"-tris(cyclohexyl)-1 ,4,7-tris(carb- oxymethyl)-1 ,4,7, 10-tetraazacyclododecan
33,3 g (30 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 26a werden in 400 mL Isopropanol gelöst, mit 40 mL Wasser versetzt und 3 g Palladiumkatalysator (10 % Pd/C) hinzugegeben. Man hydriert 8 Stunden bei 50° C. Es wird vom Katalysator abfiltriert, das Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft. Ausbeute: 22,4 g (quantitativ) eines farblosen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 62,63 H 8,76 N 9,36 gef : C 62,77 H 8,71 N 9,29 c) Gd-Komplex des 10-[1-(Carboxymethyl)-2-oxo-piperidin-3-yl]-1 ,4,7-α,α',α"-tris(cyclo- hexyl)-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7, 10-tetraazacyclododecans
14,9 g (20 mmol) des in Beispiel 26b beschriebenen Liganden werden in 150 mL Wasser und 150 mL Isopropanol gelöst und durch Zugabe von 5 mL Essigsäure angesäuert. Es werden 3,6 g (10 mmol) Gadoliniumoxid zugegeben und 8 h am Rückfluß erhitzt. Nach beendeter Komplexierung wird mit Ammoniak erneut auf pH 7,4 eingestellt und an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan /Methanol /Ammoniak: 20/20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird mit Ameisensäure aufgenommen und mehrfach unter Zusatz von Dichlormethan zur Trockne eingedampft und anschließend bis zur Gewichtskonstanz im Vakuum getrocknet.
Ausbeute: 12,9 g (68 % d. Th.) eines farblosen Pulvers. Wassergehalt (Karl-Fischer): 7,6 %
Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 51 ,92 H 6,93 Gd 17,43 N 7,76 gef: C 52,09 H 6,88 Gd 17,21 N 7,77
Beispiel 27
a) (3-Brom-2-oxo-piperidin-1 -yl)benzoesäurebenzylester
45,5 g (0,2 mol) 4-Aminobenzoesäurebenzylester und 30,6 ml (0,22 mol) Triethylamin werden in 200 mL Methylenchlorid gelöst und bei 0 °C zu einer Lösung von 55,3 g (0,2 mol) 2,5-Dibromvaleriansäurechlorid (Okawara et al. Chem. Pharm. Bull. (1982), (30), 1225) in 200 ml Methylenchlorid innerhalb 45 min zugetropft und 18 h bei Raumtemperatur gerührt. Die Reaktionsmischung wird nun bei 0 °C zu einer Lösung von 400 ml wässriger 32proz. Natriumhydroxid und 2 g Tetrabutylammoniumhydrogencarbonat getropft (ca. 15 min) und 30 min gerührt.. Anschließend weden die Phasen getrennt, und die wäßrige Phase dreimal mit je 200 ml Dichlormethan extrahiert. Die organischen Phasen werden über Natriumsulfat getrocknet, die Lösung zur Trockne eingedampft und an Kieselgel chromatographiert (Methylenchlorid). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft.
Ausbeute: 38,8 g (50 % d. Th.)
Elementaranalyse: ber.: C 58,78 H 4,67 N 3,61 gef: C 59,01 H 4,50 N 3,59
b) 10-[1 -(4-Benzyloxycarbonylphenyl)-2-oxo-piperidin-3-yl]-1 ,4,7-α,α',α"-trimethyl-1 ,4,7-tris- (benzyloxycarbonylmethyl)-l ,4,7, 10-tetraazacyclododecan
Zu 31 ,2 g (180 mmol) 1 ,4,7,10-Tetraazacyclododecan, gelöst in 300 mL Chloroform, gibt man 26,6 g (68,5 mmol) (3-Brom-2-oxo-piperidin-1-yl)benzoesäurebenzylester und rührt über Nacht bei Raumtemperatur. Man gibt 250 mL Wasser zu, trennt die organische Phase ab und wäscht sie noch jeweils zweimal mit 200 mL Wasser. Man trocknet die organische Phase über Magnesiumsulfat und dampft im Vakuum zur Trockne ein. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Chloroform/Methanol/aqu. 25 % Ammoniak = 10/5/1). Das so erhaltene 1-[1-(4-Benzyloxycarbonylphenyl)-2-oxo-piperidin-3-yl]-1 ,4,7,10- tetraazacyclododecan (27,6 g; 57,5 mmol; 84 % d. Th.) und 60 mL (0,35 mol) N-Ethyldiisopropylamin in 200 mL Dichlormethan gibt man zu 62,45 g (0,2 mol) 2-(Trifluormethan- sulfonyloxy)propansäurebenzylester (Kitazaki et al., Chem. Pharm. Bull. (1999), 47(3), 360) in 400 mL Dichlormethan und rührt 6 Stunden unter Rückfluß und anschließend über Nacht bei Raumtemperatur. Es wird dreimal mit je 500 mL Wasser extrahiert, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan /Methanol: 20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 39,4 g (71 % d. Th.) eines farblosen kristallinen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 70,86 H 6,99 N 7,25 gef : C 71 ,1 1 H 6,81 N 7.17
c) 10-[1 -(4-Carboxyphenyl)-2-oxo-piperidin-3-yl]-1 ,4,7-α, α', α"-trimethyl-1 ,4,7-tris(carboxy- methyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan 29,0 g (30 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 27b werden in 400 mL Isopropanol gelöst, mit 40 mL Wasser versetzt und 3 g Palladiumkatalysator (10 % Pd/C) hinzugegeben. Man hydriert 8 Stunden bei 50° C. Es wird vom Katalysator abfiltriert, das Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft. Ausbeute: 18,1 g (quantitativ) eines farblosen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 57,51 H 7,16 N 11,56 gef: C 57,72 H 7.11 N 11 ,50
d) Gd-Komplex des 10-[1-(4-Carboxyphenyl)-2-oxo-piperidin-3-yl]-1 ,4,7-α, α', α"-trimethyl- 1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans
12,1 g (20 mmol) des in Beispiel 27c beschriebenen Liganden werden in 200 mL Wasser und 80 mL Isopropanol gelöst und durch Zugabe von 5 mL Essigsäure angesäuert. Es werden 3,6 g (10 mmol) Gadoliniumoxid zugegeben und 3 h am Rückfluß erhitzt. Nach beendeter Komplexierung wird mit Ammoniak erneut auf pH 7,4 eingestellt und an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan /Methanol /Ammoniak: 20/20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und über eine IR-120®- Kationenaustauschersäule (H+-Form) gegeben. Das saure Eluat wird gefriergetrocknet. Ausbeute: 11 ,4 g (72 % d. Th.) eines farblosen Pulvers. Wassergehalt (Karl-Fischer): 7,1 %
Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 45,84 H 5,31 Gd 20,69 N 9,22 gef: C 45,99 H 5,26 Gd 20,55 N 9,21
Beispiel 28
a) 10-[1 -(4-Benzyloxycarbonylphenyl)-2-oxo-piperidin-3-yl]-1 ,4,7-α,α',α"-tris(isopropyl)- 1 ,4,7-tris(benzyloxycarbonylmethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan 24,0 g (50 mmol) des in Beispiel 27b als Zwischenprodukt beschriebenen 1-[1-(4- Benzyloxycarbonylphenyl)-2-oxo-piperidin-3-yl]-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans und 60 mL (0,35 mol) N-Ethyldiisopropylamin in 200 mL Dichlormethan gibt man zu 68,1 g (0,2 mol) 2- (Trifluormethansulfonyloxy)-isovaleriansäurebenzylester (Walker et al., Tetrahedron (1997), 53(43), 14591) in 400 mL Dichlormethan und rührt 6 Stunden unter Rückfluß und anschließend über Nacht bei Raumtemperatur. Es wird dreimal mit je 500 mL Wasser extrahiert, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan /Methanol: 20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 37,8 g (72 % d. Th.) eines farblosen kristallinen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 72,04 H 7,58 N 6,67 gef: C 72,32 H 7,46 N 6,59
b) 10-[1-(4-Carboxyphenyl)-2-oxo-piperidin-3-yl]-1 ,4,7-α,α',α"-tris(isopropyl)-1 ,4,7-tris(carb- oxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
31 ,5 g (30 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 28a werden in 400 mL Isopropanol gelöst, mit 40 mL Wasser versetzt und 3 g Palladiumkatalysator (10 % Pd/C) hinzugegeben. Man hydriert 8 Stunden bei 50° C. Es wird vom Katalysator abfiltriert, das Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft. Ausbeute: 20,7 g (quantitativ) eines farblosen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 60,94 H 8,04 N 10,15 gef : C 60,87 H 8,05 N 10,11
c) Gd-Komplex des 10-[1-(4-Carboxyphenyl)-2-oxo-piperidin-3-yl]-1 ,4,7-α, α', α"-tris(iso- propyl)-1 , 4, 7-tris(carboxymethyl)-1 , 4, 7,10-tetraazacyclododecans
13,8 g (20 mmol) des in Beispiel 28b beschriebenen Liganden werden in 200 mL Wasser und 80 mL Isopropanol gelöst und durch Zugabe von 5 mL Essigsäure angesäuert. Es werden 3,6 g (10 mmol) Gadoliniumoxid zugegeben und 3 h am Rückfluß erhitzt. Nach beendeter Komplexierung wird mit Ammoniak auf pH 7,4 eingestellt und an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan /Methanol /Ammoniak: 20/20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und über eine IR-120®- Kationenaustauschersäule (H+-Form) gegeben. Das saure Eluat wird gefriergetrocknet. Ausbeute: 12,0 g (68 % d. Th.) eines farblosen Pulvers. Wassergehalt (Karl-Fischer): 7,5 %
Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 49,80 H 6,21 Gd 18,63 N 8,30 gef: C 49,99 H 6,17 Gd 18,51 N 8,21
In analoger Weise erhält man unter Verwendung von 13,8 g (20 mmol) des in Beispiel 28b beschriebenen Liganden und 3,73 g (10 mmol) Dysprosiumoxid anstelle von Gadoliniumoxid den Dy-Komplex des 10-[1-(4-Carboxyphenyl)-2-oxo-piperidin-3-yl]-1 ,4,7-α, α', α"-tris(isopropyl)-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans. Ausbeute: 12,4 g (70 % d. Th.) eines farblosen Pulvers. Wassergehalt (Karl-Fischer): 7,5 %
Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 49,50 H 6.17 Dy 19,13 N 8,25 gef: C 49,77 H 6.18 Dy 18,89 N 8,27
Beispiel 29
a) 10-[1-(4-Benzyloxycarbonylphenyl)-2-oxo-piperidin-3-yl]-1 ,4,7-α,α',α"-tris(cyclohexyl)- 1 ,4,7-ths(benzyloxycarbonylmethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan
24,0 g (50 mmol) des in Beispiel 27b als Zwischenprodukt beschriebenen 1-[1-(4- Benzyloxycarbonylphenyl)-2-oxo-piperidin-3-yl]-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans und 60 mL (0,35 mol) N-Ethyldiisopropylamin in 200 mL Dichlormethan gibt man zu 76,1 g (0,2 mol) 2- (Trifluormethansulfonyloxy)-2-cyclohexylessigsäurebenzylester (Qabarret al., Tetrahedron Letters (1998), 39(33), 5895) in 400 mL Dichlormethan und rührt 6 Stunden unter Rückfluß und anschließend über Nacht bei Raumtemperatur. Es wird dreimal mit je 500 mL Wasser extrahiert, die organische Phase über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan /Methanol: 20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und eingedampft. Ausbeute: 40,9 g (70 % d. Th.) eines farblosen kristallinen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 73,88 H 7,84 N 5,98 gef : C 74,12 H 7,69 N 5,89
b) 10-[1-(4-Carboxyphenyl)-2-oxo-piperidin-3-yl]-1 ,4,7-α,α',α"-tris(cyclohexyl)-1 ,4,7-ths- (carboxymethyl)-l ,4,7,10-tetraazacyclododecan
35,1 g (30 mmol) der Titelverbindung aus Beispiel 29a werden in 400 mL Isopropanol gelöst, mit 40 mL Wasser versetzt und 3 g Palladiumkatalysator (10 % Pd/C) hinzugegeben. Man hydriert 8 Stunden bei 50° C. Es wird vom Katalysator abfiltriert, das Filtrat im Vakuum zur Trockne eingedampft. Ausbeute: 24,3 g (quantitativ) eines farblosen Pulvers
Elementaranalyse: ber.: C 65,24 H 8,34 N 8,65 gef: C 65,48 H 8,22 N 8,60
c) Gd-Komplex des 10-[1-(4-Carboxyphenyl)-2-oxo-piperidin-3-yl]-1,4,7-α,α',α"-tris(cyclo- hexyl)-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecans
16,2 g (20 mmol) des in Beispiel 29b beschriebenen Liganden werden in 150 mL Wasser und 150 mL Isopropanol gelöst und durch Zugabe von 5 mL Essigsäure angesäuert. Es werden 3,6 g (10 mmol) Gadoliniumoxid zugegeben und 8 h am Rückfluß erhitzt. Nach beendeter Komplexierung wird mit Ammoniak erneut auf pH 7,4 eingestellt und an Kieselgel chromatographiert (Laufmittel: Dichlormethan /Methanol /Ammoniak: 20/20/1). Die das Produkt enthaltenden Fraktionen werden vereinigt und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird mit Ameisensäure aufgenommen und mehrfach unter Zusatz von Dichlormethan zur Trockne eingedampft und anschließend bis zur Gewichtskonstanz im
Vakuum getrocknet.
Ausbeute: 13,6 g (68 % d. Th.) eines farblosen Pulvers.
Wassergehalt (Karl-Fischer): 7,5 %
Elementaranalyse (bezogen auf die wasserfreie Substanz): ber.: C 54,81 H 6,69 Gd 16,31 N 7,26 gef: C 55,11 H 6,57 Gd 16,09 N 7,24
Beispiele 30-90
Die Beispiele 30-90 beschreiben Konjugate der vorstehend beschriebenen Gadoliniumkomplexe mit Biomolekülen. Die Konjugate wurden nach den folgenden allgemeinen Arbeitsvorschriften l-IV hergestellt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 zusammengefaßt. Hierin steht "AAV" für allgemeine Arbeitsvorschrift, "ACTH" für adrenocorticotropes Hormon, und "RP-18" bezeichnet eine "reversed phase" stationäre Chromatographiephase. Die Anzahl der Komplexe pro Biomolekül wurde mittels ICP (inductively coupled plasma atomic emission spectroscopy) bestimmt.
Allgemeine Arbeitsvorschrift (AAV) I: Albumin-Amid-Konjugate
3 mmol der Gd-komplexsäure werden in 15 mL DMF gelöst, unter Eiskühlung mit 380 mg (3,3 mmol) N-Hydroxysuccinimd und 681 mg Dicyclohexylcarbodiimid versetzt und 1 Stunde im Eis voraktiviert. Die Aktivestermischung wird innerhalb von 30 Minuten in eine Lösung von 16,75 g (0,25 mmol) Rinderserumalbumin (BSA) in 150 mL Phosphatpuffer (pH 7,4) eingetropft und 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Die Ansatzlösung wird filtriert, das Filtrat über eine AMICON® YM30 (cut off 30.000 Da) ultrafiltriert, das Retentat über eine Sephadex® G50 -Säule chromatographiert und die Produktfraktionen gefriergetrocknet.
Allgemeine Arbeitsvorschrift (AAV) II: Albumin-Maleimid-Konjugate
0,0438 mmol dos Gd-komplexmaleimids in 1 mL DMF werden zu 0,84 g (0,0125 mmol) Rinderserumalbumin (BSA), gelöst in 15 mL Phosphatpuffer (pH 7,4), gegeben und eine Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Die Ansatzlösung wird filtriert, das Filtrat über eine AMICON® YM30 (cut off 30.000 Da) ultrafiltriert, das Retentat über eine Sephadex® G50 - Säule chromatographiert und die Produktfraktionen gefriergetrocknet.
Allgemeine Arbeitsvorschrift (AAV) IM: Herstellung von Amid-Konjugaten
3 mmol der Gd-komplexsäure werden in 15 mL DMF gelöst, unter Eiskühlung mit 380 mg (3,3 mmol) N-Hydroxysuccinimd und 681 mg Dicyclohexylcarbodiimid versetzt und 1 Stunde im Eis voraktiviert. Die Aktivestermischung wird in eine Lösung von 2,5 mmol Aminkomponente in 15-150 mL DMF eingetropft und über Nacht bei Raumtemperatur gerührt. Die Ansatzlösung wird filtriert und an Kieselgel chromatographiert.
Allgemeine Arbeitsvorschrift (AAV) IV: Herstellung von aleimido-SH-Konjugaten
3 mmol des Gd-komplexmaleimids in 15 mL DMF werden zu 2,5 mmol SH-Komponente in 15-150 mL DMF eingetropft und eine Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Die Ansatzlösung wird an Kieselgel chromatographiert.
Tabelle 1
o
Fortsetzung Tabelle 1
co o
Fortsetzung Tabelle 1
Fortsetzung Tabelle 1
00
Beispiel 91
In diesem Beispiel wurden die Relaxivitäten der Konjugate aus den Beispielen 30-38 mit den Relaxivitäten von zwei Vergleichssubstanzen verglichen. Als Vergleichssubstanzen wurden Gd-DTPA (1) mit der Formel:
und Gd-GlyMeDOTA (2) mit der Formel:
die jeweils mit Rinderserumalbumin (BSA) umgesetzt waren, eingesetzt.
Die Messungen erfolgten jeweils in wäßriger Lösung und in Plasma bei +37°C und einer Frequenz von 20 MHz. Die Ergebnisse sind in der nachfolgenden Tabelle 2 zusammengefaßt, wobei die angegebenen Relaxivitäten pro Mol Gadolinium aus den Meßwerten berechnet wurden:
Tabelle 2
Dieses Beispiel zeigt, daß die erfindungsgemäßen Konjugate trotz ihrer geringen Anzahl an Gadoliniumatomen pro Biomolekül überraschend eine höhere Relaxivitat als die Vergleichssubstanzen aufweisen. Gegenüber Vergleichssubstanz 2 konnte die Relaxivitat durch die spezielle Ligandierung des makrocyclischen Rings gesteigert werden.

Claims

Patentansprüche
1. Konjugate der Formel I
worin
Z ein Wasserstoffatom darstellt oder mindestens zwei Z ein Metallionenäquivalent darstellen,
B ein Wasserstoffatom oder einen C1-4-Alkylrest darstellt,
R ein Wasserstoffatom oder einen geraden, verzweigten oder cyclischen, gesättigten oder ungesättigten Ci.io-Alkyl- oder Arylrest darstellt, der gegebenenfalls mit einer
Carboxylgruppe, -SO3H oder -PO3H2 substituiert ist, und wobei die Alkylkette des C,.10-
Alkylrestes gegebenenfalls eine Arylgruppe und/oder 1-2 Sauerstoffatome enthält, mit der Maßgabe, daß die Reste B und R nicht beide gleichzeitig Wasserstoffatome darstellen,
A eine gerade oder verzweigte, gesättigte oder ungesättigte Cι.30-Kohlenwasserstoffkette darstellt, die gegebenenfalls 1-5 Sauerstoffatome, 1-5 Stickstoffatome und/oder 1-5 -NR'-
Reste, worin R' wie R definiert ist, aber unabhängig gewählt werden kann, enthält, die gegebenenfalls mit 1-3 Carboxylgruppen, 1-3 -SO3H, 1-3 -PO3H2 und/oder 1-3
Halogenatomen substituiert ist, bei der gegebenenfalls 1-3 Kohlenstoffatome als
Carbonylgruppen vorliegen, wobei die Kette oder ein Teil der Kette ringförmig angeordnet sein kann, und die so ausgestaltet ist, daß X' über mindestens 3 Atome mit dem
Stickstoff atom, an das A gebunden ist, verbunden ist, X' den Rest einer Gruppe X darstellt, die mit einem Biomolekül eine Reaktion eingegangen ist und Bio den Rest eines Biomoleküls darstellt, sowie deren Salze, mit der Maßgabe, daß wenn B ein Wasserstoffatom ist und R ein C^-Alkyrest ist, A nicht den Rest
darstellt, worin R3 ein Wasserstoffatom oder ein Cι-4-Alkylrest ist, D eine gesättigte oder ungesättigte, geradkettige oder verzweigte C1-4-Alkylengruppe ist, die gegebenenfalls mit einer Carbonylgruppe unterbrochen oder substituiert sein kann, und D an X gebunden ist.
2. Konjugate nach Anspruch 1 , worin R ein Wasserstoff atom, ein geradkettiger oder verzweigter Ci.io-Alkylrest, ein Cyclohexylrest, -CH2-COOH, -C(CH3)2-COOH, ein Phenylrest oder ein Rest der Formel -(CH2)m-(O)n-(Phenylen)p-Y ist, worin m eine ganze Zahl von 1 bis 5 ist, n 0 oder 1 ist, p 0 oder 1 ist und Y ein Wasserstoffatom, einen Methoxyrest, eine Carboxylgruppe, -SO3H oder -PO3H2 darstellt.
3. Konjugate nach Anspruch 2, worin, wenn B ein Wasserstoffatom ist, R ein Isopropylrest, ein Isobutylrest, ein tert.-Butylrest, ein geradkettiger oder verzweigter C5-10- Alkylrest, ein Cyclohexylrest, -CH2-COOH, -C(CH3)2-COOH, ein Phenylrest oder ein Rest der Formel -(CH2)m-(O)π-(Phenylen)p-Y ist, worin m eine ganze Zahl von 1 bis 5 ist, n 0 oder 1 ist, p 0 oder 1 ist und Y ein Wasserstoff atom, einen Methoxyrest, eine Carboxylgruppe, -SO3H oder -PO3H2 darstellt.
4. Konjugate nach Anspruch 3, worin, wenn B ein Wasserstoffatom ist, R ein Iso- propyl-, Cyclohexyl- oder Phenylrest ist.
5. Konjugate nach einem der vorhergehenden Ansprüche, worin A einen Rest A'-U darstellt, worin A' an das Stickstoff atom des makrocyclischen Rings und U an X' gebunden ist, und wobei A' a) eine Bindung, b) -CH(CO2H)-, c) eine Gruppe der Formel
worin Q ein Wasserstoff atom, einen C1-10-Alkylrest, der gegebenenfalls mit einer
Carboxylgruppe substituiert ist, oder einen Arylrest darstellt, der gegebenenfalls mit einer
Carboxylgruppe, einer d.15-Alkoxygruppe, einer Aryloxygruppe oder einem Halogenatom substituiert ist, und R' wie R in Anspruch 1 definiert ist, aber unabhängig gewählt werden kann, oder d) eine Gruppe der Formel
worin o 0 oder 1 ist, und der Ring gegebenenfalls mit einem Benzolring anelliert ist, wobei dieser Benzolring, falls vorhanden, mit einer Methoxy- oder Carboxylgruppe, -SO3H oder -PO3H2 substituiert sein kann, darstellt, wobei in den Gruppen unter c) und d) die an den mit
I gekennzeichneten Positionen an die benachbarten Gruppen gebunden sind und worin die Position α an ein Stickstoffatom des makrocyclischen Rings und die Position ß an U gebunden ist und
U eine gerade oder verzweigte, gesättigte oder ungesättigte C^o-Kohlenwasserstoffkette darstellt, die gegebenenfalls 1-3 Sauerstoffatome, 1-3 Stickstoffatome und/oder 1-3 -NR"- Reste, worin R" wie R in Anspruch 1 definiert ist, aber unabhängig gewählt werden kann, enthält und bei der gegebenenfalls 1-3 Kohlenstoffatome als Carbonylgruppen vorliegen, wobei die Kette oder ein Teil der Kette ringförmig angeordnet sein kann mit der Maßgabe, daß A' und U zusammen so ausgestaltet sind, daß X' über mindestens 3 Atome mit dem Stickstoff atom, an das A' gebunden ist, verbunden ist.
6. Konjugate nach Anspruch 5, worin für A' die Gruppe der Formel ausgewählt ist aus -C(CH3)H-CO-NH-, -C(Phenyl)H-CO-NH- und -C(p-Dodecanoxy- phenyl)H-CO-NH-.
7. Konjugate nach Anspruch 5, worin für A' die Gruppe der Formel
ausgewählt ist aus:
wobei R1 -OCH3, -CO2H, -SO3H oder -PO3H2 ist.
8. Konjugate nach einem der Ansprüche 5-7, worin U ausgewählt ist aus -CH2-, -(CH2)5-, -(CH2)ιo-, -Phenylen-O-CHr, -Phenylen-O-(CH2)3-, -Phenylen-O-(CH2)10-, -CH2- Phenylen-, -Cyclohexylen-O-CH2-, -Phenylen-, -C(Phenyl)H-, -CH2-Pyridylen-O-CH2-, -CH2- Pyridylen- und -CH2-CO-NH-CH2-CH2-.
9. Konjugate nach einem der vorhergehenden Ansprüche, worin X' ein Rest einer Gruppe X ist und X ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Carboxyl, aktiviertes Carboxyl, Amino, Isocyanat, Isothiocyanat, Hydrazin, Semicarbazid, Thiosemibarbazid, Chloracetamid, Bromacetamid, lodacetamid, Acylamino, gemischten Anhydriden, Azid, Hydroxid, Salfonylchlorid, Carbodiimid und Resten der Formeln worin Hai ein Halogenatom ist.
10. Konjugate nach Anspruch 9, worin die aktivierte Carboxylgruppe ausgewählt ist aus
11. Konjugate nach Anspruch 1 , worin es sich um Konjugate von Biomolekülen mit einer der folgenden Verbindungen handelt:
10-(4-Carboxy-1 -methyl-2-oxo-3-azabutyl)-1 ,4,7-α,α',α"-trimethyl-1 ,4,7-tris(carboxy- methyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan, 10-(4-Carboxy-1 -methyl-2-oxo-3-azabutyl)-1 ,4,7- α,α',α"-tris(isopropyl)-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan, 10-(4-
Carboxy-1-methyl-2-oxo-3-azabutyl)-1 ,4,7-α,α',α"-tris(cyclohexyl)-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)- 1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan, 10-(4-(f-Butoxycarbonyl-1-phenyl-2-oxo-3-azabutyl)-1 ,4,7- α,α',α"-trimethyl-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan, 10-[α-(4-
(Ethoxycarbonylmethoxy)phenyl)-methoxycarbonylmethyl]-1 ,4,7-α,α',α"-trimethyl-1 ,4,7- ths(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan, 10-[α-(4-(Ethoxycarbonylpropoxy)phe- nyl)-methoxycarbonylmethyl]-1 ,4,7-α,α',α"-trimethyl-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10- etraazacyclododecan, 10-[α-(4-(Ethoxycarbonyldecyloxy)phenyl)-methoxycarbonylmethyl]- 1 ,4,7-α,α',α"-trimethyl-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan, 10-(p-
Carboxybenzyl)-1 ,4,7-α,α',α"-trimethyl-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1,4,7,10-tetraazacyclo- dodecan, 10-(p-Carboxybenzyl)-1 ,4,7-α,α',α"-tris(isopropyl)-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-
1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan, 10-(p-Carboxybenzyl)-1 ,4,7-α,α',α"-tris(cyclohexyl)-1 ,4,7- tris(carboxymethyl)-1, 4, 7,10-tetraazacyclododecan, 10-(p-Carboxybenzyl)-1,4,7-α,α',α"- triphenyl-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan, 10-(4-( Butoxycarbonyl- 1-phenyl-2-oxo-3-azabutyl)-1,4,7-α,α',α"-triphenyl-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1,4,7,10- tetraazacyclododecan, 10-(4-Carboxy-2-oxo-3-azabutyl)-1 ,4,7-α,α',α"-tris(isopropyl)-1 ,4,7- tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan, 10-(4-Carboxy-2-oxo-3-azabutyl)-1 ,4,7- α,α',α"-tris(cyclohexyl)-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan, 10-(4- Carboxy-1 -methyl-2-oxo-3-azabutyl)-2,5,8, 11 -tetramethyl-1 ,4,7,10-tetraazacyclododecan- 1 ,4,7-tήessigsäure-tri-tert-butylester, 10-[8-(N-Maleimido)-1 -methyl-2,5-dioxo-3,6- diazaoctyl]-1 ,4,7-α,α',α"-tris-(isopropyl)-1 ,4,7-tris(carboxymethyl)-1 ,4,7,10- tetraazacyclododecan oder 10-[8-(N-Maleimido)-1-methyl-2,5-dioxo-3,6-diazaoctyl]-1 ,4,7- α,α', α"-tris-(cyclohexyl)-1 , 4, 7-tris(carboxymethyl)-1 , 4,7,10-tetraazacyclododecan.
12. Konjugate nach einem der vorhergehenden Ansprüche, worin das Biomolekül ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Biopolymeren, Proteinen, synthetisch modifizierten Biopolymeren, Kohlenhydraten, Antikörpern, DNA und RNA Fragmenten, ß- Aminosäuren, Vektoraminen zur Einschleusung in die Zelle, biogenen Aminen, Pharmazeutika, onkologischen Präparaten, synthetischen Polymeren, die auf ein biologisches Target gerichtet sind, Steroiden, Prostaglandinen, Taxol und dessen Derivaten, Endothelinen, Alkaloiden, Folsäure und dessen Derivaten, bioaktiven Lipiden, Fetten, Fettsäureestern, synthetisch modifizierten Mono-, Di- und Triglyceriden, Liposomen, die an der Oberfläche derivatisiert sind, Micellen aus natürlichen Fettsäuren oder aus Perfluoralkyl-Verbindungen, Porphyrinen, Texaphrinen, erweiterten Porphyrinen, Cytochromen, Inhibitoren, Neuramidasen, Neuropeptiden, Immunomodulatoren, Endoglycosidasen, Substraten, die durch die Enzyme Calmodulin Kinase, Casein-Kinase II, Gluthathion-S-Transferase, Heparinase, Matrix Methalloprotheasen, ß-lnsulin-Receptor- Kinase, UDP-Galactose 4-Epimerase, Fucosidasen, G-Proteine, Galactosidasen, Glycosidasen, Glycosyltransferasen und Xylosidase attackiert werden, Antibiotika, Vitaminen und Vitamin-Analoga, Hormonen, DNA-Interkalatoren, Nucleosiden, Nucleotiden, Lektinen, Vitamin B12, Lewis-X und Verwandten, Psoralenen, Dientrienantibiotika, Carbacyclinen, VEGF, Somatostatin und dessen Derivaten, Biotin-Derivaten, Antihormonen, tumorspezifischen Proteinen und Synthetika, Polymeren, die sich in sauren oder basischen Bereichen des Körpers anreichern, Myoglobinen, Apomyoglobinen, Neurotransmitterpeptiden, Tumomekrose-Faktoren, Peptiden, die sich in entzündeten Geweben anreichern, Bloodpool-Reagentien, Anionen und Kationen-Transporter Proteinen, Polyestern, Polyamiden und Polyphosphaten.
13. Konjugate nach einem der vorhergehenden Ansprüche, worin mindestens zwei der Reste Z für ein Metallionenäquivalent eines radioaktiven oder paramagnetischen Elements der Ordnungszahlen 21-29, 31 , 32, 37-39, 42-44, 46, 47, 49, 58-71 , 75, 77, 82 oder 83 stehen.
14. Verfahren zur Herstellung eines Konjugats der Formel I
worin Z, B, R, A, X' und Bio wie in Anspruch 1 definiert sind, mit der Maßgabe, daß B und R nicht gleichzeitig Wasserstoffatome darstellen, und daß, wenn B ein Wasserstoffatom ist und R ein C -Alkyrest ist, A nicht den Rest
darstellt, worin R3 ein Wasserstoffatom oder ein d-4-Alkylrest ist, D eine gesättigte oder ungesättigte, geradkettige oder verzweigte Cι-4-Alkylengruppe ist, die gegebenenfalls mit einer Carbonylgruppe unterbrochen oder substituiert sein kann, und D an X gebunden ist, worin eine Verbindung der Formel II
worin Z, B, R und A wie vorstehend definiert sind und X eine Gruppe darstellt, die mit einem Biomolekül eine Reaktion eingehen kann, mit einem Biomolekül umgesetzt wird und anschließend wenn gewünscht in an sich bekannter Weise mit mindestens einem Metalloxid oder Metallsalz eines gewünschten Elements umgesetzt wird und gegebenenfalls anschließend in den so erhaltenen Komplexen noch vorhandene acide Wasserstoffatome ganz oder teilweise durch Kationen von anorganischen und/oder organischen Basen, Aminosäuren oder Aminosäureamiden substituiert werden.
15. Pharmazeutisches Mittel enthaltend mindestens ein physiologisch verträgliches Konjugat nach Anspruch 13 gegebenenfalls mit den in der Galenik üblichen Zusätzen.
16. Verwendung eines Konjugats nach Anspruch 13 zur Herstellung von Mitteln für die NMR- oder Radiodiagnostik oder die Radiotherapie.
17. Kit zur Herstellung von Radiopharmaka, umfassend a) ein Konjugat nach einem der Ansprüche 1-12, worin Z Wasserstoff ist und mit der Maßgabe, daß wenn B ein Wasserstoffatom ist und R ein d-4-Alkylrest ist, A auch den Rest
darstellen kann, wobei R3 und D wie in Anspruch 1 definiert sind, und b) eine Verbindung eines radioaktiven Elements der Ordnungszahlen 26, 27, 29, 31 , 32, 37-39, 43, 46, 47, 49, 61 , 62, 64, 67, 70, 71 , 75, 77, 82 und 83.
EP02794507A 2001-07-20 2002-07-18 Konjugate makrocyclischer metallkomplexe mit biomolekülen und deren verwendung zur herstellung von mitteln für nmr- und radiodiagnostik sowie die radiotherapie Withdrawn EP1450864A2 (de)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE10135355 2001-07-20
DE10135355A DE10135355C1 (de) 2001-07-20 2001-07-20 Konjugate makrocyclischer Metallkomplexe mit Biomolekülen und deren Verwendung zur Herstellung von Mitteln für die NMR- und Radiodiagnostik sowie die Radiotherapie
PCT/EP2002/008000 WO2003013617A2 (de) 2001-07-20 2002-07-18 Konjugate makrocyclischer metallkomplex mit biomolekülen und deren verwendung zur herstellung von mitteln für die nmr- und radiodiagnostik sowie die radiotherapie

Publications (1)

Publication Number Publication Date
EP1450864A2 true EP1450864A2 (de) 2004-09-01

Family

ID=7692470

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EP02794507A Withdrawn EP1450864A2 (de) 2001-07-20 2002-07-18 Konjugate makrocyclischer metallkomplexe mit biomolekülen und deren verwendung zur herstellung von mitteln für nmr- und radiodiagnostik sowie die radiotherapie

Country Status (19)

Country Link
US (2) US20030206865A1 (de)
EP (1) EP1450864A2 (de)
JP (1) JP2004536889A (de)
KR (1) KR20040030825A (de)
CN (1) CN1301750C (de)
AR (1) AR036182A1 (de)
AU (1) AU2002355333B2 (de)
BR (1) BR0211150A (de)
CA (1) CA2453214A1 (de)
DE (1) DE10135355C1 (de)
IL (1) IL159291A0 (de)
MX (1) MXPA04000400A (de)
NO (1) NO20040239L (de)
PE (1) PE20030190A1 (de)
PL (1) PL366421A1 (de)
RU (1) RU2004105262A (de)
TW (1) TWI238722B (de)
UY (1) UY27389A1 (de)
WO (1) WO2003013617A2 (de)

Families Citing this family (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7067111B1 (en) 1999-10-25 2006-06-27 Board Of Regents, University Of Texas System Ethylenedicysteine (EC)-drug conjugates, compositions and methods for tissue specific disease imaging
EP1286704B1 (de) * 2000-06-02 2014-07-23 Board of Regents, The University of Texas System ETHYLENEDICYSTEINE (EC)-Glucose Analoge KONJUGATE
DE10135356C1 (de) * 2001-07-20 2003-04-17 Schering Ag Makrocyclische Metallkomplexe und deren Verwendung zur Herstellung von Konjugaten mit Biomolekülen
EP1466629A1 (de) * 2003-04-11 2004-10-13 BRACCO IMAGING S.p.A. Adducte zwischen NMR Vershibungsreagenzen und Substraten mit austauschbaren Protonen für die "CEST" Anwendung
DE10325752A1 (de) * 2003-06-06 2004-12-30 Faustus Forschungs Cie. Translational Cancer Research Gmbh Lektin-Konjugate
US20060239913A1 (en) * 2003-06-25 2006-10-26 Marc Port Peptide conjugate for magnetic resonance imaging
FR2856689A1 (fr) * 2003-06-25 2004-12-31 Guerbet Sa Composes specifiques a forte relaxivite
CN1882364A (zh) * 2003-11-17 2006-12-20 皇家飞利浦电子股份有限公司 用于医学成像技术的造影剂及其应用
US9050378B2 (en) * 2003-12-10 2015-06-09 Board Of Regents, The University Of Texas System N2S2 chelate-targeting ligand conjugates
FR2868320B1 (fr) * 2004-03-31 2007-11-02 Centre Nat Rech Scient Cnrse Agent de contraste pour l'imagerie par resonance magnetique
CA2581639C (en) 2004-09-30 2016-07-26 Molecular Devices Corporation Luminescent lanthanide complexes
JP5638752B2 (ja) * 2005-04-26 2014-12-10 コーニンクレッカ フィリップス エヌ ヴェ Ｃｅｓｔ活性な常磁性の錯体を含むｍｒｉ造影剤
FI20055712A0 (fi) * 2005-12-29 2005-12-29 Wallac Oy Makrosykliset oligonukleotiidien leimausreagenssit ja niistä johdetut konjugaatit
US8758723B2 (en) * 2006-04-19 2014-06-24 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Compositions and methods for cellular imaging and therapy
US10925977B2 (en) 2006-10-05 2021-02-23 Ceil>Point, LLC Efficient synthesis of chelators for nuclear imaging and radiotherapy: compositions and applications
EP2240171B1 (de) 2008-01-09 2014-08-13 Molecular Insight Pharmaceuticals, Inc. Carboanhydrase-IX-Hemmer
US8211402B2 (en) 2008-12-05 2012-07-03 Molecular Insight Pharmaceuticals, Inc. CA-IX specific radiopharmaceuticals for the treatment and imaging of cancer
WO2010065899A2 (en) 2008-12-05 2010-06-10 Molecular Insight Pharmaceuticals, Inc. Technetium-and rhenium-bis(heteroaryl)complexes and methods of use thereof
WO2010065902A2 (en) 2008-12-05 2010-06-10 Molecular Insight Pharmaceuticals, Inc. Technetium- and rhenium-bis(heteroaryl) complexes and methods of use thereof for inhibiting psma
US8465725B2 (en) 2009-06-15 2013-06-18 Molecular Insight Pharmaceuticlas, Inc. Process for production of heterodimers of glutamic acid
CN101912623B (zh) * 2010-08-24 2012-06-06 上海师范大学 具有靶向功能铁-钆双模式磁共振造影剂的制备及应用
CN102136339B (zh) * 2011-01-24 2012-05-23 南开大学 一种具有铁磁、铁电双功能的镝单分子磁体及其制备方法
AU2013207486A1 (en) 2012-01-06 2014-08-21 Molecular Insight Pharmaceuticals Metal complexes of poly(carboxyl)amine-containing ligands having an affinity for carbonic anhydrase IX
JP6468602B2 (ja) 2013-01-14 2019-02-13 モレキュラ インサイト ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド トリアジン系放射性医薬品及び放射線造影剤
WO2015075699A1 (en) * 2013-11-25 2015-05-28 Sanofi Dotam derivatives for therapeutic use
EP3101012A1 (de) 2015-06-04 2016-12-07 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Neue gadoliniumchelat-verbindung zur verwendung in der magnetresonanzbildgebung
EP3544964B1 (de) 2016-11-28 2020-06-17 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Gadolinium-chelat-verbindung mit hoher relaxivität zur verwendung in der magnetresonanzbildgebung
US10093741B1 (en) 2017-05-05 2018-10-09 Fusion Pharmaceuticals Inc. IGF-1R monoclonal antibodies and uses thereof
EA201992595A1 (ru) 2017-05-05 2020-04-21 Фьюжн Фармасьютикалс Инк. Усиление фармакокинетики бифункциональных хелатов и их применения
KR20200004861A (ko) 2017-05-05 2020-01-14 퓨전 파마슈티칼즈 인크. Igf-1r 모노클로날 항체 및 그의 용도
AU2019382881A1 (en) 2018-11-23 2021-05-20 Bayer Aktiengesellschaft Formulation of contrast media and process of preparation thereof
FR3092580B1 (fr) * 2019-02-08 2021-03-19 Centre Nat Rech Scient Nouveaux dérivés azobenzènes, leur procédé de préparation et leur utilisation pour le traitement thérapeutique associé à des radiations ionisantes
EP3757098A1 (de) * 2019-06-25 2020-12-30 Ustav Organicke Chemie a Biochemie AV CR, v.v.i. Cyclenbasierte verbindungen, koordinationsverbindungen, peptide, pharmazeutische zubereitungen und deren verwendung
KR102203368B1 (ko) * 2020-10-30 2021-01-14 경북대학교 산학협력단 신규한 화합물 및 이를 함유하는 mri 조영제

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0565930A1 (de) * 1992-03-27 1993-10-20 Nihon Medi-Physics Co., Ltd. Tetracyclododecan-Tetraessigsäurederivate und ihre Verwendung als diagnostische Mittel
WO1995031444A1 (en) * 1994-05-11 1995-11-23 Bracco International B.V. Enhanced relaxivity monomeric and multimeric compounds

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5049667A (en) * 1987-04-14 1991-09-17 Guerbet S.A. Nitrogen-containing cyclic ligands
JPH04154729A (ja) * 1990-10-16 1992-05-27 Nippon Mejifuijitsukusu Kk 磁気共鳴造影剤
DE4115789A1 (de) * 1991-05-10 1992-11-12 Schering Ag Makrocyclische polymer-komplexbildner, deren komplexe, verfahren zu ihrer herstellung und diese enthaltende pharmazeutische mittel
WO1994013263A1 (en) * 1992-12-09 1994-06-23 Jager Paul D Stabilized medicinal aerosol solution formulations
US6045776A (en) * 1996-12-04 2000-04-04 Schering Aktiengesellschaft Process for the production of metal-complex carboxylic acid amides
US6113880A (en) * 1997-12-17 2000-09-05 Schering Aktiengesellschaft Polyrotaxane derivatives for x-ray and nuclear magnetic resonance imaging
DE19905094C1 (de) * 1999-02-01 2000-10-12 Schering Ag Gadolinium (III)-Komplexe sowie ihre Verwendung für Zweischritt Strahlentherapieformen und diese enthaltende pharmazeutische Mittel

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP0565930A1 (de) * 1992-03-27 1993-10-20 Nihon Medi-Physics Co., Ltd. Tetracyclododecan-Tetraessigsäurederivate und ihre Verwendung als diagnostische Mittel
WO1995031444A1 (en) * 1994-05-11 1995-11-23 Bracco International B.V. Enhanced relaxivity monomeric and multimeric compounds

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
WOODS ET AL: "Correlation of water exchange rate with isomeric composition in diastereoisomeric Gd complexes of tetra(carboxyethyl)dota and related macrocyclic ligands", JACS, vol. 122, no. 40, 2000, pages 9781 - 9792, XP009058154, DOI: doi:10.1021/ja994492v *

Also Published As

Publication number Publication date
UY27389A1 (es) 2003-02-28
PL366421A1 (en) 2005-01-24
AU2002355333B2 (en) 2007-01-04
WO2003013617A2 (de) 2003-02-20
US20030206865A1 (en) 2003-11-06
RU2004105262A (ru) 2005-07-10
WO2003013617A3 (de) 2004-06-10
MXPA04000400A (es) 2004-03-18
NO20040239L (no) 2004-01-19
KR20040030825A (ko) 2004-04-09
PE20030190A1 (es) 2003-03-22
IL159291A0 (en) 2004-06-01
AR036182A1 (es) 2004-08-18
CN1541114A (zh) 2004-10-27
DE10135355C1 (de) 2003-04-17
US20070014725A1 (en) 2007-01-18
CN1301750C (zh) 2007-02-28
CA2453214A1 (en) 2003-02-20
TWI238722B (en) 2005-09-01
BR0211150A (pt) 2004-06-29
JP2004536889A (ja) 2004-12-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DE10135355C1 (de) Konjugate makrocyclischer Metallkomplexe mit Biomolekülen und deren Verwendung zur Herstellung von Mitteln für die NMR- und Radiodiagnostik sowie die Radiotherapie
EP1409024B1 (de) Makrocyclische metallkomplexe und deren verwendung zur herstellung von konjugaten mit biomolekülen
EP0438206B1 (de) 6-Ring enthaltende makrocyclische Tetraaza-Verbindungen, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese enthaltende pharmazeutische Mittel
DE19525924A1 (de) Kaskaden-Polymer-Komplexe, Verfahren zu ihrer Herstellung und diese enthaltende pharmazeutische Mittel
EP1017684B1 (de) Kontrastmittel für das infarkt- und nekroseimaging
EP0277088A2 (de) Polymer-Komplexe, Verfahren zu deren Herstellung und diese enthaltende pharmazeutische Mittel
EP1307237B9 (de) Perfluoralkylhaltige komplexe mit polaren resten, verfahren zu deren herstellung und ihre verwendung
EP1590317B1 (de) Enantiomerenreines (4s,8s)- und (4r, 8r)-4-p-nitrobenzyl-8-methyl-3, 6, 9-triaza- sp 3 /sp n, sp 6 /sp n, sp 9 /sp n-tricarboxymethyl-1, 11-undecandisäure und deren abkömmlinge, verfahren zu deren herstellung und verwendung zur herstellung pharmazeutischer mittel
EP1828129A1 (de) Hydroxypyridinon-derivate, deren metallkomplexe und deren verwendung zur herstellung von konjugaten mit biomolek]len
DE102006049821A1 (de) Metallchelate mit perfluoriertem PEG-Rest, Verfahren zu deren Herstellung, sowie deren Verwendung
US20030194371A1 (en) (Ethylene)-(propylene) - triaminepentaacetic acid derivatives, process for their production, and their use for the production of pharmaceutical agents
EP1590005B1 (de) Konjugate enantiomerenreiner (4s,8s)- und (4r,8r)-4-p-benzyl--8-methyl-3,6,9-triaza- sp 3 /sp n, sp 6 /sp n, sp 9 /sp n-tricarboxymethyl-1,11-undecandisäure mit biomolekülen, verfahren zu deren herstellung und verwendung zur herstellung pharmazeutischer mittel
WO2004087656A1 (de) Konjugate 2,4-ethano- und 2,4-propano-überbrückter 3,6,9-triaza-nonansäure-3n, 6n, 9,9n-tetraessigsäure- und entsprechender phosphorsäuremethylen-derivate und deren abkömmlinge mit biomolekülen, verfahren zu deren herstellung und deren verwendung zur herstellung
US20040208828A1 (en) Enantiomer-pure (4S,8S)- and (4R,8R)-4-p-nitrobenzyl-8-methyl-3,6,9-triaza-3N,6N,9N-tricarboxymethyl-1,11-undecanedioic acid and derivatives thereof, process for their production and use for the production of pharmaceutical agents
EP1397339A1 (de) (ethylene)-(propylene)-triaminopentaessigsäure derivate, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung in der herstellung pharmazeutischer wirkstoffe
DE10133435A1 (de) (Ethylen)-(Propylen)-Triaminpentaessigsäure-Derivate, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung zur Herstellung pharmazeutischer Mittel
DE102004062250A1 (de) Konjugate von Hydroxypyridinonderivat-Metallkomplexen mit Biomolekülen und deren Verwendung zur Herstellung von Mitteln für die NMR-Diagnostik

Legal Events

Date Code Title Description
PUAI Public reference made under article 153(3) epc to a published international application that has entered the european phase

Free format text: ORIGINAL CODE: 0009012

17P Request for examination filed

Effective date: 20031203

AK Designated contracting states

Kind code of ref document: A2

Designated state(s): AT BE BG CH CY CZ DE DK EE ES FI FR GB GR IE IT LI LU MC NL PT SE SK TR

AX Request for extension of the european patent

Extension state: AL LT LV MK RO SI

REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1063745

Country of ref document: HK

RAP1 Party data changed (applicant data changed or rights of an application transferred)

Owner name: BAYER SCHERING PHARMA AG

RAP1 Party data changed (applicant data changed or rights of an application transferred)

Owner name: BAYER SCHERING PHARMA AKTIENGESELLSCHAFT

GRAP Despatch of communication of intention to grant a patent

Free format text: ORIGINAL CODE: EPIDOSNIGR1

GRAP Despatch of communication of intention to grant a patent

Free format text: ORIGINAL CODE: EPIDOSNIGR1

STAA Information on the status of an ep patent application or granted ep patent

Free format text: STATUS: THE APPLICATION IS DEEMED TO BE WITHDRAWN

18D Application deemed to be withdrawn

Effective date: 20090314

REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: WD

Ref document number: 1063745

Country of ref document: HK