EA045313B1 - Слитые белки интерлейкин-2/рецептор интерлейкина-2 альфа и способы применения - Google Patents
Слитые белки интерлейкин-2/рецептор интерлейкина-2 альфа и способы применения Download PDFInfo
- Publication number
- EA045313B1 EA045313B1 EA202091342 EA045313B1 EA 045313 B1 EA045313 B1 EA 045313B1 EA 202091342 EA202091342 EA 202091342 EA 045313 B1 EA045313 B1 EA 045313B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- fusion protein
- seq
- activity
- polypeptide
- sequence
- Prior art date
Links
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 title claims description 387
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 title claims description 385
- 108010032774 Interleukin-2 Receptor alpha Subunit Proteins 0.000 title claims description 237
- 102000007351 Interleukin-2 Receptor alpha Subunit Human genes 0.000 title claims description 235
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 title claims description 213
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 title claims description 213
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 36
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 119
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 69
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 65
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 65
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 65
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 63
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 62
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 49
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 44
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 40
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 37
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 27
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 25
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 20
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 19
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 18
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 17
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 17
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 13
- 238000012217 deletion Methods 0.000 claims description 11
- 230000037430 deletion Effects 0.000 claims description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 10
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims description 9
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 claims description 8
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 7
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 claims description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 5
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims description 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims description 4
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 claims description 4
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 claims description 3
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 claims description 3
- 208000003456 Juvenile Arthritis Diseases 0.000 claims description 3
- 206010059176 Juvenile idiopathic arthritis Diseases 0.000 claims description 3
- 201000009594 Systemic Scleroderma Diseases 0.000 claims description 3
- 206010042953 Systemic sclerosis Diseases 0.000 claims description 3
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 claims description 3
- 206010047115 Vasculitis Diseases 0.000 claims description 3
- 201000002215 juvenile rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 3
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 3
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 3
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 claims description 3
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 claims description 2
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims description 2
- 208000004631 alopecia areata Diseases 0.000 claims description 2
- 208000037902 enteropathy Diseases 0.000 claims description 2
- 208000028774 intestinal disease Diseases 0.000 claims description 2
- 108040006849 interleukin-2 receptor activity proteins Proteins 0.000 claims 1
- 102200079760 rs3824915 Human genes 0.000 claims 1
- 102220139548 rs61735306 Human genes 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 56
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 52
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 51
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 43
- 210000003289 regulatory T cell Anatomy 0.000 description 35
- 102220191892 rs199825512 Human genes 0.000 description 35
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 30
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 description 29
- 102220080600 rs797046116 Human genes 0.000 description 26
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 25
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 22
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 19
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 18
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 18
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 18
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 17
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 16
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 16
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 15
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 15
- 241000699667 Mus spretus Species 0.000 description 12
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 12
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 11
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 11
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 11
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 11
- 230000015654 memory Effects 0.000 description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 11
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 10
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 10
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 10
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 10
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 9
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 9
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 9
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 9
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 9
- 229920002704 polyhistidine Polymers 0.000 description 9
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 9
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 9
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 9
- 101001043827 Mus musculus Interleukin-2 Proteins 0.000 description 8
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108700025316 aldesleukin Proteins 0.000 description 8
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 8
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 8
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 8
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 7
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 7
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 7
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 7
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 7
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 7
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 7
- PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N Nickel Chemical compound [Ni] PXHVJJICTQNCMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 6
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 6
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 6
- 101100067721 Caenorhabditis elegans gly-3 gene Proteins 0.000 description 5
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 5
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 5
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 5
- 230000036541 health Effects 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 5
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 5
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 5
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 5
- 230000003614 tolerogenic effect Effects 0.000 description 5
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 5
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 5
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 5
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 4
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- 229960005310 aldesleukin Drugs 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 4
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 4
- 230000006054 immunological memory Effects 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 210000003071 memory t lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 229940087463 proleukin Drugs 0.000 description 4
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 4
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 4
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 4
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 4
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 4
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 3
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 3
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 3
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 3
- 102000010789 Interleukin-2 Receptors Human genes 0.000 description 3
- 108010038453 Interleukin-2 Receptors Proteins 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 3
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 3
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 3
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 3
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 3
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 3
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 3
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 3
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 3
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000037125 natural defense Effects 0.000 description 3
- 229910052759 nickel Inorganic materials 0.000 description 3
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 3
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 3
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 2
- AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N Doxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-TZSSRYMLSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 2
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 2
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 description 2
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001505332 Polyomavirus sp. Species 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N Tamoxifen Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(/CC)=C(C=1C=CC(OCCN(C)C)=CC=1)/C1=CC=CC=C1 NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N 0.000 description 2
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 2
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 2
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 2
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000001106 artificial yeast chromosome Anatomy 0.000 description 2
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 2
- 230000001363 autoimmune Effects 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 2
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000012707 chemical precursor Substances 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 2
- MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N ciprofloxacin Chemical compound C12=CC(N3CCNCC3)=C(F)C=C2C(=O)C(C(=O)O)=CN1C1CC1 MYSWGUAQZAJSOK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- -1 coatings Substances 0.000 description 2
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 2
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 2
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006028 immune-suppresssive effect Effects 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000009851 immunogenic response Effects 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000004952 protein activity Effects 0.000 description 2
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 150000005846 sugar alcohols Polymers 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 229940021747 therapeutic vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 2
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 1-prop-2-ynoxypropan-2-ol Chemical compound CC(O)COCC#C GZCWLCBFPRFLKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NDMPLJNOPCLANR-UHFFFAOYSA-N 3,4-dihydroxy-15-(4-hydroxy-18-methoxycarbonyl-5,18-seco-ibogamin-18-yl)-16-methoxy-1-methyl-6,7-didehydro-aspidospermidine-3-carboxylic acid methyl ester Natural products C1C(CC)(O)CC(CC2(C(=O)OC)C=3C(=CC4=C(C56C(C(C(O)C7(CC)C=CCN(C67)CC5)(O)C(=O)OC)N4C)C=3)OC)CN1CCC1=C2NC2=CC=CC=C12 NDMPLJNOPCLANR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 3-phospho-D-glyceric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)COP(O)(O)=O OSJPPGNTCRNQQC-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 4'-epidoxorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(=O)CO)[C@H]1C[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](C)O1 AOJJSUZBOXZQNB-VTZDEGQISA-N 0.000 description 1
- 102000013563 Acid Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108010051457 Acid Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000167883 Aotus lemurinus Species 0.000 description 1
- 241001502973 Aotus nancymaae Species 0.000 description 1
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000701822 Bovine papillomavirus Species 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N Camptothecin Natural products CCC1(O)C(=O)OCC2=C1C=C3C4Nc5ccccc5C=C4CN3C2=O KLWPJMFMVPTNCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282461 Canis lupus Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000283705 Capra hircus Species 0.000 description 1
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 208000015943 Coeliac disease Diseases 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 238000011537 Coomassie blue staining Methods 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 208000001490 Dengue Diseases 0.000 description 1
- 206010012310 Dengue fever Diseases 0.000 description 1
- 101100117236 Drosophila melanogaster speck gene Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000792859 Enema Species 0.000 description 1
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 1
- HTIJFSOGRVMCQR-UHFFFAOYSA-N Epirubicin Natural products COc1cccc2C(=O)c3c(O)c4CC(O)(CC(OC5CC(N)C(=O)C(C)O5)c4c(O)c3C(=O)c12)C(=O)CO HTIJFSOGRVMCQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 241000724791 Filamentous phage Species 0.000 description 1
- GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N Fluorouracil Chemical compound FC1=CNC(=O)NC1=O GHASVSINZRGABV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 206010071602 Genetic polymorphism Diseases 0.000 description 1
- 206010018429 Glucose tolerance impaired Diseases 0.000 description 1
- BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N Gly-Ser Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O BCCRXDTUTZHDEU-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 1
- 102000001398 Granzyme Human genes 0.000 description 1
- 108060005986 Granzyme Proteins 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 101001018097 Homo sapiens L-selectin Proteins 0.000 description 1
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N L-methotrexate Chemical compound C=1N=C2N=C(N)N=C(N)C2=NC=1CN(C)C1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 FBOZXECLQNJBKD-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- 102100033467 L-selectin Human genes 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 201000005505 Measles Diseases 0.000 description 1
- 244000062730 Melissa officinalis Species 0.000 description 1
- 235000010654 Melissa officinalis Nutrition 0.000 description 1
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 1
- 241000713869 Moloney murine leukemia virus Species 0.000 description 1
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 1
- 208000005647 Mumps Diseases 0.000 description 1
- ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N N-debenzoyl-N-(tert-butoxycarbonyl)-10-deacetyltaxol Chemical compound O([C@H]1[C@H]2[C@@](C([C@H](O)C3=C(C)[C@@H](OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C=4C=CC=CC=4)C[C@]1(O)C3(C)C)=O)(C)[C@@H](O)C[C@H]1OC[C@]12OC(=O)C)C(=O)C1=CC=CC=C1 ZDZOTLJHXYCWBA-VCVYQWHSSA-N 0.000 description 1
- 101150012394 PHO5 gene Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000004503 Perforin Human genes 0.000 description 1
- 108010056995 Perforin Proteins 0.000 description 1
- KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N Perforine Natural products COC1=C2CCC(O)C(CCC(C)(C)O)(OC)C2=NC2=C1C=CO2 KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000005702 Pertussis Diseases 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 208000000474 Poliomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 229920002732 Polyanhydride Polymers 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- 229920001710 Polyorthoester Polymers 0.000 description 1
- 241000077802 Procambarus troglodytes Species 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010038878 Retinal melanoma Diseases 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- 241000710961 Semliki Forest virus Species 0.000 description 1
- 241000702208 Shigella phage SfX Species 0.000 description 1
- DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M Sodium bisulfite Chemical compound [Na+].OS([O-])=O DWAQJAXMDSEUJJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 102100021696 Syncytin-1 Human genes 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 206010043376 Tetanus Diseases 0.000 description 1
- 108091005906 Type I transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N Vinblastine Natural products O=C(O[C@H]1[C@](O)(C(=O)OC)[C@@H]2N(C)c3c(cc(c(OC)c3)[C@]3(C(=O)OC)c4[nH]c5c(c4CCN4C[C@](O)(CC)C[C@H](C3)C4)cccc5)[C@@]32[C@H]2[C@@]1(CC)C=CCN2CC3)C JXLYSJRDGCGARV-WWYNWVTFSA-N 0.000 description 1
- 229940122803 Vinca alkaloid Drugs 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 150000001242 acetic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 238000009098 adjuvant therapy Methods 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 229940045799 anthracyclines and related substance Drugs 0.000 description 1
- 230000002280 anti-androgenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940046836 anti-estrogen Drugs 0.000 description 1
- 230000001833 anti-estrogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003432 anti-folate effect Effects 0.000 description 1
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 description 1
- 239000000051 antiandrogen Substances 0.000 description 1
- 229940127074 antifolate Drugs 0.000 description 1
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 description 1
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 230000003385 bacteriostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000003833 bile salt Substances 0.000 description 1
- 229940093761 bile salts Drugs 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 229920000249 biocompatible polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- DQXBYHZEEUGOBF-UHFFFAOYSA-N but-3-enoic acid;ethene Chemical compound C=C.OC(=O)CC=C DQXBYHZEEUGOBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 229940127093 camptothecin Drugs 0.000 description 1
- VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N camptothecin Chemical compound C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)[C@]5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-FQEVSTJZSA-N 0.000 description 1
- 229940022399 cancer vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000009566 cancer vaccine Methods 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 208000017760 chronic graft versus host disease Diseases 0.000 description 1
- 229960003405 ciprofloxacin Drugs 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- 150000001860 citric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 1
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 208000030381 cutaneous melanoma Diseases 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 208000025729 dengue disease Diseases 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 208000010643 digestive system disease Diseases 0.000 description 1
- UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K dihydroxy(stearato)aluminium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[Al](O)O UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 206010013023 diphtheria Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N dl-camptothecin Natural products C1=CC=C2C=C(CN3C4=CC5=C(C3=O)COC(=O)C5(O)CC)C4=NC2=C1 VSJKWCGYPAHWDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003534 dna topoisomerase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229960003668 docetaxel Drugs 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229960004679 doxorubicin Drugs 0.000 description 1
- 239000007920 enema Substances 0.000 description 1
- 229940095399 enema Drugs 0.000 description 1
- 229960001904 epirubicin Drugs 0.000 description 1
- 239000000328 estrogen antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000005038 ethylene vinyl acetate Substances 0.000 description 1
- VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N etoposide Chemical compound COC1=C(O)C(OC)=CC([C@@H]2C3=CC=4OCOC=4C=C3[C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@@H]4O[C@H](C)OC[C@H]4O3)O)[C@@H]3[C@@H]2C(OC3)=O)=C1 VJJPUSNTGOMMGY-MRVIYFEKSA-N 0.000 description 1
- 229960005420 etoposide Drugs 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 229940124307 fluoroquinolone Drugs 0.000 description 1
- 229960002949 fluorouracil Drugs 0.000 description 1
- MKXKFYHWDHIYRV-UHFFFAOYSA-N flutamide Chemical compound CC(C)C(=O)NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C(C(F)(F)F)=C1 MKXKFYHWDHIYRV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002074 flutamide Drugs 0.000 description 1
- 239000004052 folic acid antagonist Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- IECPWNUMDGFDKC-MZJAQBGESA-N fusidic acid Chemical class O[C@@H]([C@@H]12)C[C@H]3\C(=C(/CCC=C(C)C)C(O)=O)[C@@H](OC(C)=O)C[C@]3(C)[C@@]2(C)CC[C@@H]2[C@]1(C)CC[C@@H](O)[C@H]2C IECPWNUMDGFDKC-MZJAQBGESA-N 0.000 description 1
- 230000005021 gait Effects 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 1
- 150000002333 glycines Chemical class 0.000 description 1
- 230000002414 glycolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 108010033706 glycylserine Proteins 0.000 description 1
- 210000005255 gram-positive cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 201000010284 hepatitis E Diseases 0.000 description 1
- SPSXSWRZQFPVTJ-ZQQKUFEYSA-N hepatitis b vaccine Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1N=CN=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)OC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C1=CC=CC=C1 SPSXSWRZQFPVTJ-ZQQKUFEYSA-N 0.000 description 1
- 229940124736 hepatitis-B vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 229960001101 ifosfamide Drugs 0.000 description 1
- HOMGKSMUEGBAAB-UHFFFAOYSA-N ifosfamide Chemical compound ClCCNP1(=O)OCCCN1CCCl HOMGKSMUEGBAAB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001822 immobilized cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 description 1
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 1
- 230000008863 intramolecular interaction Effects 0.000 description 1
- 229960004768 irinotecan Drugs 0.000 description 1
- UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N irinotecan Chemical compound C1=C2C(CC)=C3CN(C(C4=C([C@@](C(=O)OC4)(O)CC)C=4)=O)C=4C3=NC2=CC=C1OC(=O)N(CC1)CCC1N1CCCCC1 UWKQSNNFCGGAFS-XIFFEERXSA-N 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 239000000865 liniment Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229960001924 melphalan Drugs 0.000 description 1
- SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N melphalan Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(N(CCCl)CCCl)C=C1 SGDBTWWWUNNDEQ-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 1
- 229960000485 methotrexate Drugs 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229950010913 mitolactol Drugs 0.000 description 1
- VFKZTMPDYBFSTM-GUCUJZIJSA-N mitolactol Chemical compound BrC[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CBr VFKZTMPDYBFSTM-GUCUJZIJSA-N 0.000 description 1
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 1
- 230000037230 mobility Effects 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 230000001459 mortal effect Effects 0.000 description 1
- 208000010805 mumps infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 231100000219 mutagenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 1
- 239000006218 nasal suppository Substances 0.000 description 1
- 239000000346 nonvolatile oil Substances 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229930192851 perforin Natural products 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 1
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 150000003058 platinum compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229920001200 poly(ethylene-vinyl acetate) Polymers 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 239000008389 polyethoxylated castor oil Substances 0.000 description 1
- 239000004633 polyglycolic acid Substances 0.000 description 1
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 description 1
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 1
- 230000002516 postimmunization Effects 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000001686 pro-survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 1
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000003340 retarding agent Substances 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 201000005404 rubella Diseases 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 229920000260 silastic Polymers 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 201000003708 skin melanoma Diseases 0.000 description 1
- 235000010267 sodium hydrogen sulphite Nutrition 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002511 suppository base Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 229960001603 tamoxifen Drugs 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960004906 thiomersal Drugs 0.000 description 1
- 229940044693 topoisomerase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 description 1
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 description 1
- 230000002477 vacuolizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 229960003048 vinblastine Drugs 0.000 description 1
- JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N vincaleukoblastine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](OC(C)=O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(=O)OC)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1NC1=CC=CC=C21 JXLYSJRDGCGARV-XQKSVPLYSA-N 0.000 description 1
- 229960004355 vindesine Drugs 0.000 description 1
- UGGWPQSBPIFKDZ-KOTLKJBCSA-N vindesine Chemical compound C([C@@H](C[C@]1(C(=O)OC)C=2C(=CC3=C([C@]45[C@H]([C@@]([C@H](O)[C@]6(CC)C=CCN([C@H]56)CC4)(O)C(N)=O)N3C)C=2)OC)C[C@@](C2)(O)CC)N2CCC2=C1N=C1[C]2C=CC=C1 UGGWPQSBPIFKDZ-KOTLKJBCSA-N 0.000 description 1
- GBABOYUKABKIAF-GHYRFKGUSA-N vinorelbine Chemical compound C1N(CC=2C3=CC=CC=C3NC=22)CC(CC)=C[C@H]1C[C@]2(C(=O)OC)C1=CC([C@]23[C@H]([C@]([C@H](OC(C)=O)[C@]4(CC)C=CCN([C@H]34)CC2)(O)C(=O)OC)N2C)=C2C=C1OC GBABOYUKABKIAF-GHYRFKGUSA-N 0.000 description 1
- 229960002066 vinorelbine Drugs 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Раскрытый в настоящем документе объект изобретения в общем относится к способам и композициям для модулирования иммунного ответа с использованием слитого белка интерлейкин-2/рецептор интерлейкина-2 альфа.
Ссылка на перечень последовательностей, поданный в виде текстового файла через EFS-Web
Официальная копия перечня последовательностей подана одновременно с описанием изобретения в виде текстового файла посредством EFS-Web, в соответствии с Американским стандартным кодом обмена информацией (ASCII) с именем файла 464173seqlist.txt, датой создания 30 июля 2015 г. и размером, составляющим 139 KB. Перечень последовательностей, поданный посредством EFS-Web, является частью настоящего описания изобретения, и тем самым полностью включен в настоящий документ посредством ссылки.
Заявление о финансируемом из федерального бюджета исследовании или разработке
Настоящее изобретение было осуществлено при государственной поддержке согласно гранту № RO I DK093866, присужденному Национальному институту здоровья (National Institute of Health, NIH), Национальному институту диабета, болезней пищеварительной системы и почек (National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases, NIDDK). Государство имеет определенные права на настоящее изобретение.
Предшествующий уровень техники изобретения
Интерлейкин-2 (IL-2) представляет собой биологическое средство, которое использовали в попытках стимулировать иммунные ответы у пациентов со злокачественными опухолями и ВИЧ/СПИД. В последнее время пониженные дозы IL-2 использовали для селективной стимуляции толерантности для подавления нежелательных иммунных ответов, связанных с атакой собственных тканей, похожей на аутоиммунную. Важно, что эти пониженные дозы IL-2 не продемонстрировали никаких признаков усиления или повторной активации аутореактивных Т-клеток. Тем не менее, IL-2 характеризуется важными недостатками в качестве терапевтического средства, включая в себя очень короткий период полужизни in vivo, который ограничивает его эффективность, и токсичность в высоких дозах. По этим причинам для применения необходимы новые биологические средства на основе IL-2, характеризующиеся улучшенной фармакокинетикой и продолжительностью ответов.
Краткое раскрытие изобретения
Предусмотрены различные способы и композиции, которые можно использовать для модулирования иммунной системы. Композиции включают в себя слитый белок, содержащий: (а) первый полипептид, содержащий интерлейкин-2 (TL-2) или его функциональный вариант или фрагмент; и (b) второй полипептид, слитый в пределах рамки считывания с первым полипептидом, причем второй полипептид содержит внеклеточный домен рецептора интерлейкина-2 альфа (IL-2Ra) или его функциональный вариант или фрагмент, и при этом слитый белок характеризуется активностью IL-2.
Предусмотрены различные способы уменьшения иммунного ответа у субъекта, предусматривающие введение субъекту, нуждающемуся в уменьшении иммунного ответа, терапевтически эффективного количества слитого белка IL-2/IL-2Ra, раскрытого в настоящем документе.
Дополнительно предусмотрены способы увеличения иммунного ответа у субъекта, предусматривающие введение субъекту, нуждающемуся в увеличении иммунного ответа, терапевтически эффективного количества слитого белка IL-2/IL-2Ra, раскрытого в настоящем документе. Дополнительно предусмотрены способы увеличения активности Т-регуляторных клеток.
Предусмотрены дополнительные способы, включая в себя усиление иммуногенности вакцины или преодоление подавленного иммунного ответа на вакцину у субъекта, предусматривающие следующее: (а) введение субъекту терапевтически эффективного количества слитого белка IL-2/IL-2Ra, раскрытого в настоящем документе; и (b) введение субъекту вакцины, причем слитый белок усиливает иммуногенность вакцины или преодолевает подавленный иммунный ответ на вакцину.
Краткое описание графических материалов
На фиг. 1 представлена схема слитого белка IL-2/IL-2Ra, где L=лидерный пептид, LK=линкерная область, G=глицин, Н=гистидин и Т=терминирующий кодон.
На фиг. 2А и 2В представлены предсказанные белковые последовательности неограничивающих примеров слитых белков IL-2/IL-2Ra. На фиг. 2А представлены предсказанные белковые последовательности неограничивающих примеров мышиных слитых белков IL-2/IL-2Ra. Последовательности мышиного IL-2 и IL-2Ra показаны выше и ниже слитых белков, соответственно. Последовательность, обозначенная как IL-2 представлена в SEQ ID NO: 3; последовательность, обозначенная как IL-2-(G4S)4-IL2Ra, представлена в SEQ ID NO: 54; последовательность, обозначенная как IL-2-(G4S)5-IL-2Ra, представлена в SEQ ID NO:55; последовательность, обозначенная как IL-2-(G35)4-IL-2Ra, представлена в SEQ ID NO:56; последовательность, обозначенная как IL-2-(G3S)3-IL-2Ra, представлена в SEQ ID NO: 57; и внеклеточный домен IL-2Ra представлен в SEQ ID NO: 10. На фиг. 2В представлены предсказанные белковые последовательности неограничивающих примеров слитых белков IL-2/IL-2Ra человека. Последовательности IL-2 и IL-2Ra человека показаны выше и ниже слитых белков, соответственно. По
- 1 045313 следовательность, обозначенная как IL-2, представлена в SEQ ID NO: 1; последовательность, обозначенная как IL-2-(G3S)2-IL-2Ra, представлена в SEQ ID NO: 58; последовательность, обозначенная как IL-2(G3S)3-IL-2Ra, представлена в SEQ ID NO:59; последовательность, обозначенная как IL-2-(G3S)4-IL-2Ra, представлена в SEQ ID NO:60; последовательность, обозначенная как IL-2-(G4S)4-IL-2Ra, представлена в SEQ ID NO: 61; и внеклеточный домен IL-2Ra представлен в SEQ ID NO: 7.
На фиг. 3 показана биоактивность слитых белков IL-2/IL-2Ra. Клетки COS-7 трансфектировали с помощью кДНК слияния IL-2/IL-2Ra с указанными линкерами. Супернатанты их указанных клеток культивировали с активированными Т-лимфобластами к CD3 для оценки активности IL-2. (А) Пролиферативные ответы Т-лимфобластов после разведений указанных слитых белков. (В) Эффект антитела к IL2 на пролиферацию, стимулированную 1:2 разведением супернатанта культуры, содержащего указанные слитые белки.
На фиг. 4 показана активность очищенных слитых белков IL-2/IL-2Ra. Супернатанты трансфектированных клеток СНО использовали для очистки IL-2/(G3S)3/IL-2Ra и IL-2/(Gly4Ser)4/IL-2Ra с помощью аффинной хроматографии с использованием никеля в отношении метки 6х-His. (А) Измерение биоактивности IL-2 с помощью пролиферации анти-CD3 Т-лимфобласта к указанному очищенному слитому белку. (В) Эффект каждого очищенного слитого белка на ингибирование связывания моноклональных антител к IL-2Ra PC61 и 7D4, направленных на нелигандный сайт связывания, с активированными Тлимфобластами к CD3.
На фиг. 5 показано, что моноклональное антитело к IL-2Ra, которое направлено на сайт связывания IL-2 IL-2Ra, не может связываться со слитым белком IL-2/IL-2Ra. Очищенные слитые белки с вариабельными линкерами, как указано, вначале инкубировали с моноклональным антителом к IL-2Ra 3C7, направленным на сайт связывания лиганда IL-2Ra, или моноклональным антителом 7D4, направленным на нелигандный сайт связывания IL-2Ra. Способность 3С7 или 7D4 в дальнейшем связываться с IL-2Ra клеточной поверхности оценивали с использованием IL-2Rα-трансфектированных клеток EL4.
На фиг. 6 показаны биохимические свойства очищенного IL-2/IL-2Ra. (A) Очищенный IL-2/IL-2Ra подвергали анализу SDS-PAGE при восстанавливающих и невосстанавливающих условиях; IL-2/IL-2Ra визуализировали с помощью анализ вестерн-блоттинга с использованием в качестве зонда антитело, направленно на метку 6x-His слитого белка. (В) Указанное количество очищенного IL-2/(Gly1Ser)3/IL-2Ra подвергали анализу SDS-PAGE при восстанавливающих условиях с последующим окрашиванием кумасси синим.
На фиг. 7 показан эффект слитого белка IL-2/IL-2Ra на IL-2-зависимую передачу сигнала in vivo. Мыши C57BL/6 получали однократную инъекцию i.p. (интраперитонеально) IL-2/(G3S)3/IL-2Ra (4000 единиц активности IL-2), и содержания pSTAT5 в указанных популяциях спленоцитов немедленно оценивали. Содержания pSTAT5 определяли через 0,5 ч после инъекции слитого белка IL-2/IL-2Ra. Для CD4+ Т-клеток клетки гейтировали по исключенным Foxp3+ Treg клеткам.
На фиг. 8 показан эффект слитого белка IL-2/IL-2Ra на Treg клетки in vivo. Мышам NOD 3 раза вводили i.p. инъекцию (1, 3, 5 день) указанного количества активности IL-2, ассоциированной с IL2/(G3S)3/IL-2Ra. Эффект на Treg оценивали в отношении селезенки, лимфатических узлов поджелудочной железы (PLN) и поджелудочной железы через 24 ч после последней инъекции. Оценивали соотношение Treg в CD4+ Т-клеток; среднюю интенсивность флуоресценции (MFI) в отношении экспрессии CD25 клетками Treg после нормирования к экспрессии CD25 клетками Treg от получивших лечение с помощью контроля мышей; пролиферативный статус Treg, оцениваемый по экспрессии пролиферативного маркера Ki67; и % Treg, которые экспрессировали Klrgl, который является маркером IL-2-зависимой терминально-дифференцированной субпопуляции.
На фиг. 9 показано сравнение слитого белка IL-2/IL-2Ra и рекомбинантного IL-2 в отношении индукции изменений в Treg клетках in vivo. Мыши C57BL/6 получали 3 раза (1, 3, 5 день) i.p. инъекцию IL2/(G3S)3/IL-2Ra (2000 единиц), рекомбинантного IL-2 человека (25000 единиц) или предварительно образованных комплексов антитела к IL-2 (Jes-6.1; 5 мкг) и мышиного IL-2 (10000 единиц) (IL2/IC). Эффект на Treg оценивали в отношении селезенки через 24, 72 ч и 1 неделю после последней инъекции. Treg оценивали, как описано на фиг. 8.
На фиг. 10 показало, что ограниченное применение низкодозового IL-2 замедляет сахарный диабет у мышей NOD. Мыши NOD (8 мышей/группа) получали IL-2/IL-2Ra, растворимый IL-2Ra или PBS согласно схеме в (А). Содержания глюкозы в моче и крови подвергали мониторингу, пока мыши не достигали возраста 40 недель. Мышей считали диабетическими после 2 последовательных определений содержаний глюкозы, составляющих >250 мг/дл.
На фиг. 11 продемонстрировано, что высокодозовый IL-2/IL-2Ra усиливает развитие CD8+ Тклеточной памяти. Мыши C57BL/6 получали конгенные специфические к рестриктированному I классом овалбумину (OVA) трансгенные в отношении OT-I Т-клеточного рецептора Т-клетки. Указанных мышей иммунизировали и лечили с помощью однократного нанесения слитого белка IL-2/(G3S)3/IL-2Ra, IL2/IC содержащего 15000 единиц IL-2, или рекомбинантного IL-2 (25000 единиц). В указанные временные
- 2 045313 точки оценивали относительную долю Т-клеток ОТ-1 в пределах общего CD8+ Т-клеточного компартмента в периферической крови.
На фиг. 12 показан тип персистирующих клеток памяти OT-I, поддерживаемый высокодозовым слитым белком IL-2/IL-2Ra: (А) Стратегия гейтирования для идентификации клеток эффекторной памяти (ЕМ) и центральной памяти (СМ). (В) Распределение клеток памяти ОТ-1 на 28 и 202 день после иммунизации мышей, которые также получали IL-2/IL-2Ra (12000 единиц).
На фиг. 13 показано определение характеристик слитых белков IL-2/IL-2Ra человека, содержащих глицин/сериновые линкеры изменяющейся длины, как это показано. (А) IL-2-биоактивность очищенного IL-2//IL-2Ra человека с использованием биоанализа CTLL. (В) Анализ вестерн-блоттинг слитых белков IL-2/IL-2Ra человека после SDS-PAGE при восстанавливающих условиях.
На фиг. 14 показано, что человека слитый белок IL-2/IL-2Ra связывает моноклональные антитела к IL-2Ra. Очищенные слитые белки с указанными линкерами вначале инкубировали с моноклональным антителом к IL-2Ra, BC96, направленным к лигандной области связывания IL-2Ra человека, или моноклональным антителом М-А257, направленным к нелигандной области связывания IL-2Ra человека. Способность ВС96 или М-А257 в дальнейшем связываться с IL-2Ra клеточной поверхности оценивали с использованием IL-2Rα-трансфектированных клеток СНО.
На фиг. 15 показано, что IL-2 взаимодействует с сайтом связывания IL-2 IL-2Ra в пределах слитых белков IL-2/IL-2Ra человека. IL-2-биоактивность указанных слитых белков с вариабельными глицин/сериновыми линкерами оценивали с использованием клеток CTLL. Mut относится к слитым белкам, в которых IL-2Ra содержал Arg3%Thr, Arg3%Ser мутации. Анализ вестерн-блоттинг подтвердил сходные количества всех слитых белков (не показано).
Подробное раскрытие изобретения
Настоящее изобретение далее будет более полно описано в настоящем документе со ссылкой на сопроводительные графические материалы, в которых показаны некоторые, но не все варианты осуществления настоящего изобретения. В действительности, настоящие изобретения можно осуществить во многих различных формах, и их не стоит рассматривать как ограниченные вариантами осуществления, представленными в настоящем документе; напротив, указанные варианты осуществления предусмотрены с тем, чтобы настоящее раскрытие удовлетворяло требованиям законодательства. Одинаковые числа относятся к одинаковым элементам во всем настоящем описании.
Многие характеризующиеся преимуществом идей, представленных в вышеизложенных описаниях и сопроводительных графических материалах, модификации и другие варианты осуществления настоящих изобретений, представленных в настоящем документе, станут очевидными специалисту в настоящей области техники, к которой относятся настоящие изобретения. Следовательно, следует понимать, что настоящие изобретения не следует ограничивать конкретными раскрытыми вариантами осуществления и что, как предусмотрено, модификации и другие варианты осуществления следует включать в объем прилагаемой формулы изобретения. Несмотря на то, что в настоящем документе используют специфические термины, их применяют исключительно в родовом и описательном смысле, а не с целью ограничения.
I. Обзор.
Современные технологии основаны на применении рекомбинантного интерлейкина-2 (IL-2), который характеризуется слабыми фармакологическими свойствами, особенно коротким периодом полужизни, что ограничивает его применимость. Предусмотренные в настоящем документе слитые белки интерлейкин-2/рецептор интерлейкина-2 альфа (IL-2/IL-2Ra) характеризуются присущими им свойствами, которые отличают их от рекомбинантного IL-2 и других слитых белков IL-2. Во-первых, размер слитого белка IL-2/IL-2Ra будет увеличивать его период полужизни in vivo. Во-вторых, слабое взаимодействие между IL-2 и IL-2Ra (одна субъединица IL-2R) в пределах слитого белка IL-2/IL-2Ra обеспечивает другой механизм для пролонгирования доступности IL-2. Не ограничиваясь конкретным механизмом действия, пролонгированная доступность активности IL-2 может быть обеспечена посредством конкурентного взаимодействия между фрагментом IL-2 с IL-2Ra слияния IL-2/IL-2Ra и с клетками, которые экспрессируют IL-2R.
II. Слитые белки интерлейкин-2/рецептор интерлейкина-2 альфа и кодирующие их полинуклеотиды.
Предусмотрен слитый белок, который содержит первый полипептид, содержащий интерлейкин-2 (IL-2) или его функциональный вариант или фрагмент, слитый в пределах рамки считывания со вторым полипептидом, содержащим или состоящим из внеклеточного домена полипептида рецептора интерлейкина-2 альфа (IL-2Ra) или его функционального варианта или фрагмента.
Используемый в настоящем документе термин слитый белок относится к генетической связи в пределах рамки считывания по меньшей мере двух гетерологичных полипептидов. При транскрипции/трансляции образуется один белок. Таким образом, множественные белки или их фрагменты можно встроить в один полипептид. Предусмотрено, что функционально связанный означает функциональную связь между двумя или больше элементами. Например, функциональная связь между двумя поли
- 3 045313 пептидами обеспечивает слияние обоих полипептидов вместе в пределах рамки считывания с получением отдельного полипептидного слитого белка. Согласно конкретному аспекту слитый белок дополнительно содержит третий полипептид, который, как обсуждается дополнительно подробно ниже, может содержать линкерную последовательность.
Слитый белок IL-2/IL-2Ra или его активный вариант или фрагмент может характеризоваться одним или несколькими следующими свойствами/активностями: (1) увеличение активности регуляторных Тклеток (Treg) и/или увеличение иммунной толерантности в видах терапии на основе низкой дозы IL-2; (2) увеличение иммунного ответа и памяти в высокодозовых видах терапии; (3) увеличение доступности IL-2 по сравнению с рекомбинантным IL-2; и/или (4) увеличение стойкой стимуляции IL-2 несущих IL2R лимфоцитов in vivo. Такая активность и способы анализа раскрыты боле подробно в других местах в настоящем документе; см., например, пример 1, предусмотренный в настоящем документе.
Согласно одному неограничивающему варианту осуществления увеличенную активность Treg, которая является результатом слитого белка IL-2/IL-2Ra или его активного варианта или фрагмента, можно оценить с помощью разнообразных путей, включая в себя, например, следующее: (1) увеличенная репрезентация и количество Treg в CD4+ Т-клеточном компартменте; (2) положительная регуляция IL-2зависимого CD25; (3) увеличенная пролиферация согласно оценке с помощью экспрессии пролиферативного маркера Ki67; и (4) увеличенная фракция IL-2-зависимого терминально-дифференцированного подкласса Klrgl+ Treg. Такие эффекты на Treg можно наблюдать, например, в селезенке и воспаленной поджелудочной железе.
Согласно одному неограничивающему варианту осуществления слитый белок IL-2/IL-2Ra или его активный вариант или фрагмент увеличивает толерогенные и подавляющие иммунный ответ Treg и иммунитет посредством увеличения ответов эффекторных Т-клеток памяти, и согласно дополнительным вариантам осуществления он проявляет улучшенную фармакокинетику путем доставки таких ответов (1) при пониженных эффективных уровнях активности IL-2 по сравнению с нативным или рекомбинантным IL-2; (2) проявляет более стойкие биологические ответы, чем нативный или рекомбинантный IL-2; и/или (3) сохраняет иерархию, при которой Treg реагируют на более низкие уровни дозы, чем эффекторные Тклетки памяти.
Согласно конкретным вариантам осуществления слитый белок характеризуется улучшенной активностью по сравнению с нативным или рекомбинантным IL-2. Например, эффект слитого белка IL-2/IL2Ra может увеличивать толерогенные Treg при уровне активности IL-2 приблизительно в 2 раза, 5 раз, 10 раз, 20 раз, 30 раз, 40 раз, 50 раз, 60 раз, 70 раз, 80 раз, 90 раз, 100 раз, 150 раз, 200 раз ниже или более низком уровне активности IL-2 по сравнению с нативным или рекомбинантным IL-2. Согласно другим вариантам осуществления слитый белок IL-2/IL-2Ra является более эффективным, чем нативный или рекомбинантный IL-2 в индукции стойкого усиления Treg и связанных свойств.
Различные фрагменты и варианты IL-2 и IL-2Ra из разнообразных организмов можно использовать для создания слитых белков IL-2/внеклеточный домен IL-2Ra, предусмотренных в настоящем документе. Такие компоненты обсуждают более подробно в других местах в настоящем документе. Примеры неограничивающих непроцессированных слитых белков IL-2/внеклеточный домен IL-2Ra представлены в SEQ ID NO: 17, 19, 21, 23, 25, 27, 36, 38, 44, 46, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60 и 61, при этом неограничивающие примеры зрелых форм слитых белков IL-2/внеклеточный домен IL-Ra представлены в SEQ ID NO: 16, 18, 20, 22, 24, 26, 37, 39, 43, 45, 62 и 64. Неограничивающие примеры полинуклеотидов, кодирующих такие слитые белки, представлены в SEQ ID NO:29, 30, 31, 32, 33, 34, 42, 47, 48, 49, 63 и 65.
Термин секреторная сигнальная последовательность обозначает полинуклеотидную последовательность, которая кодирует полипептид (секреторный полипептид), который, как компонент большего полипептида, направляет этот больший полипептид через секреторный путь клетки, в которой он синтезируется. Этот больший полипептид обычно расщепляется с удалением секреторного пептида во время прохождения через этот секреторный путь. Больший полипептид, как правило, расщепляется с удалением секреторного пептида во время транспортировки по секреторному пути. Используемый в настоящем документе термин зрелая форма слитого белка или полипептида предусматривает процессированную форму полипептида, из которой секреторный пептид был удален. Используемый в настоящем документе непроцессированная форма слитого белок сохраняет секреторную пептидную последовательность.
Кроме того, предусмотрены биологически активные фрагменты и варианты зрелой и непроцессированной формы слитых белков IL-2/внеклеточный домен IL-Ra и кодирующий их полинуклеотид. Такой функциональный полипептидный фрагмент может содержать по меньшей мере 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 30, 40, 50, 75, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 50θ или больше непрерывных аминокислот согласно одной из SEQ ID NO: 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 36, 37, 38, 39, 43, 44, 45, 46, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62 или 64. Альтернативно, функциональный полипептидный вариант может характеризоваться по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности относительно последовательности, представленной в SEQ ID NO: 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 36, 37, 38, 39, 43, 44, 45, 46, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62 или 64.
- 4 045313
Дополнительно предусмотрены активные варианты и фрагменты полинуклеотидов, кодирующих слитые белки IL-2/внеклеточный домен IL-Ra. Такой полинуклеотид может содержать по меньшей мере 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 1000, 1100, 1200, 1300, 1500, 1800, 2000 непрерывных нуклеотидов SEQ ID NO: 29, 30, 31, 32, 33, 34, 42, 47, 48, 49, 63 или 65, или полинуклеотид, кодирующий полипептиды, представленные в SEQ ID NO: 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 36, 37, 38, 39, 43, 44, 45, 46, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62 или 64, и продолжать кодировать функциональный слитый белок IL2/внеклеточный домен IL-Ra. Альтернативно, функциональный полинуклеотид может характеризоваться по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности относительно последовательности, представленной в SEQ ID NO: 29, 30, 31, 32, 33, 34, 42, 47, 48, 49, 63 или 65, или полинуклеотид, кодирующий полипептиды, представленные в SEQ ID NO: 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 36, 37, 38, 39, 43, 44, 45, 46, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 61, 62 или 64, и продолжать кодировать функциональные слитые белки IL-2/внеклеточный домен ILRa.
Следует дополнительно отметить, что компоненты слитого белка IL-2/IL-2Ra можно обнаружить в любом порядке. Согласно одному варианту осуществления полипептид IL-2 находится на N-конце, и внеклеточный домен IL-2Ra находится на С-конце слитого белка.
i. Интерлейкин-2.
Используемый в настоящем документе интерлейкин-2, или IL-2 относится к любому нативному или рекомбинантному IL-2 от любого позвоночного, включая в себя млекопитающих, таких как приматы (например, люди) и грызуны (например, мыши и крысы), и одомашненные или сельскохозяйственные млекопитающие, если не указано иное. Термин предусматривает непроцессированный IL-2, а также любую форму IL-2, которая является результатом процессирования в клетке (т.е. зрелая форма IL-2). Термин также предусматривает встречающиеся в природе варианты и фрагменты IL-2, например, сплайсварианты или аллельные варианты, и не встречающиеся в природе варианты. Аминокислотная последовательность иллюстративной зрелой формы IL-2 человека (характеризующейся сигнальной последовательностью из 20 аминокислот) показана в SEQ ID NO: 2. Непроцессированный IL-2 человека дополнительно содержит N-концевой сигнальный пептид из 20 аминокислот (SEQ ID NO: 1), который отсутствует в молекуле зрелого IL-2. Аминокислота последовательность иллюстративной зрелой формы мышиного IL-2 (характеризующейся сигнальной последовательностью из 20 аминокислот) показана в SEQ ID NO: 4. Непроцессированный мышиный IL-2 дополнительно содержит N-концевой сигнальный пептид из 20 аминокислот (SEQ ID NO: 3), который отсутствует в молекуле зрелого IL-2; см. также фиг. 2А и 2В. Под нативным IL-2, который также называют IL-2 дикого типа, подразумевают встречающийся в природе или рекомбинантный IL-2.
Известны дополнительные последовательности нуклеиновых кислот и аминокислот для IL-2; см., например, регистрационные номера GenBank: Q7JFM2 (Aotus lemurinus (панамская мирикина)); Q7JFM5 (Aotus nancymaae (западноамазонская мирикина)); Р05016 (Bos taurus (корова)); Q29416 (Canis familiaris (собака) (Canis lupus familiaris)); P36835 (Capra hircus (коза)) и Р37997 (Equus caballus (лошадь)).
Кроме того, предусмотрены биологически активные фрагменты и варианты IL-2. Такие активные варианты или фрагменты IL-2 будут сохранять активность IL-2. Фраза биологическая активность IL-2 относится к одной или нескольким биологическим активностям IL-2, включая в себя без ограничения способность стимулировать несущие рецептор IL-2 лимфоциты. Такую активность можно измерить как in vitro, так и in vivo. TL- представляет собой глобальный регулятор иммунной активности, и эффекты, наблюдаемые здесь, являются суммой таких активностей. Например, он регулирует активность выживаемости (Bc1-2), индуцирует активность Т-эффекторов (IFN-гамма, гранзим В и перфорин) и стимулирует Т-регуляторную активность (FoxP3); см., например, Malek et al. (2010) Immunity 33(2): 153-65, полностью включенную в настоящий документ посредством ссылки.
Известны биологически активные варианты IL-2; см., например, публикации заявок на выдачу патента США №№ 20060269515 и 20060160187 и международную патентную публикацию WO 99/60128, каждая из которых включена в настоящий документ посредством ссылки.
Биологически активные фрагменты и варианты IL-2 можно использовать в слитых белках, раскрытых в настоящем документе. Такой функциональный фрагмент может содержать по меньшей мере 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 30, 40, 50, 75, 100, 125, 150 или больше непрерывных аминокислот согласно SEQ ID NO: 1, 2, 3 или 4. Альтернативно, функциональный вариант может характеризоваться по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности относительно последовательности, представленной в SEQ ID NO: 1, 2, 3 или 4.
Кроме того, предусмотрены активные варианты и фрагменты полинуклеотидов, кодирующих белки IL-2. Такой полинуклеотид может содержать по меньшей мере 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700 непрерывных нуклеотидов полипептида, кодирующего SEQ ID NO: 1, 2, 3 или 4, и продолжать кодировать белок, характеризующийся активностью IL-2. Альтернативно, функциональный полинуклеотид может характеризоваться по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или
- 5 045313
99% идентичностью последовательности относительно полипептида, кодирующего аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1, 2, 3 или 4, и продолжать кодировать функциональный полипептид IL-2.
ii. Рецептор интерлейкина-2 альфа.
Используемый в настоящем документе термин CD25, или рецептор a IL-2, или IL-2Ra относится к любому нативному или рекомбинантному IL-2Ra из любого источника, относящегося к позвоночному животному, включая в себя млекопитающих, таких как приматы (например, люди) и грызуны (например, мыши и крысы), и одомашненных или сельскохозяйственных млекопитающих, если не указано иное. Термин также предусматривает встречающиеся в природе варианты IL-2Ra, например, сплайс-варианты или аллельные варианты, или не встречающиеся в природе варианты. IL-2 человека проявляют свои биологические эффекты посредством передачи сигнала через свою рецепторную систему, IL-2R. IL-2 и его рецептор (IL-2R) необходимы для Т-клеточной пролиферации и других фундаментальных функций, которые являются критически важными для иммунными ответа. IL-2R состоит из 3 нековалентно связанных трансмембранных белков I типа, которые представляют собой альфа (р55), бета (р'75) и гамма (р65) цепи. Альфа цепь IL-2R человека содержит внеклеточный домен из 219 аминокислот, трансмембранный домен из 19 аминокислот и внутриклеточный домен из 13 аминокислот. Секретированный внеклеточный домен IL-2R альфа (IL-2Ra) можно использовать в слитых белках, описанных в настоящем документе.
Аминокислотная последовательность иллюстративной зрелой формы IL-2Ra человека показана в SEQ ID NO: 6. Непроцессированный IL-2Ra человека показан в SEQ ID NO: 5. Внеклеточный домен SEQ ID NO: 6 представлен в SEQ ID NO: 7. Аминокислотная последовательность иллюстративной зрелой формы мышиного IL-2Ra показана в SEQ ID NO: 9. Непроцессированный мышиный IL-2Ra показан в SEQ ID NO: 8. Внеклеточный домен SEQ ID NO: 9 представлен в SEQ ID NO: 10. Под нативным IL2Ra, который также называется IL-2Ra дикого типа, подразумевают встречающийся в природе или рекомбинантный IL-2Ra. Последовательность нативной молекулы IL-2Ra человека показана в SEQ ID NO: 5 и 6.
Последовательности нуклеиновых кислот и аминокислотные последовательности для IL-2Ra являются известными; см., например, регистрационные номера GenBank: NP 001030597.1 (P.troglodytes); NP 001028089.1 (M.mulatta); NM 001003211.1 (C.lupus); NP 776783.1 (B. to/rasj;NP_032393.3 (M.muscuitts); HNP_037295.1 (Rnorvegicus), каждый из которых включен в настоящий документ посредством ссылки.
Также предусмотрены биологически активные фрагменты и варианты внеклеточного домена IL2Ra. Такие активные варианты или фрагменты внеклеточного домена IL-2Ra будут сохранять активность внеклеточного домена IL-2Ra. Фраза биологическая активность внеклеточного домена IL-2Ra относится к одной или нескольким биологическим активностям внеклеточного домена IL-2Ra, включая в себя без ограничения способность усиливать внутриклеточную передачу сигнала в реагирующих на рецептор IL-2 клетках. Неограничивающие примеры биологически активных фрагментов и вариантов IL2Ra раскрыты, например, в Robb et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85:5654-5658, 1988, которая включена в настоящий документ посредством ссылки.
Биологически активные фрагменты и варианты внеклеточного домена IL-2Ra можно использовать в слитых белках, раскрытых в настоящем документе. Такой функциональный фрагмент может содержать по меньшей мере 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 30, 40, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 215 или больше непрерывных аминокислот внеклеточного домена согласно любой из SEQ ID NO: 6, 9, 7, 10, 5 или 8. Альтернативно, функциональный вариант может характеризоваться по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности относительно последовательности, представленной в SEQ ID NO: 6, 9, 7, 10, 5 или 8.
Согласно одному варианту осуществления слитые белки, предусмотренные в настоящем документе, могут содержать по меньшей мере одну мутацию в пределах внеклеточного домена IL-2Ra. Согласно конкретному варианту осуществления аргинин в положении 35 IL-2Ra можно мутировать до треонина и/или аргинин в положении 36 IL-2Ra можно мутировать до серина. Такой слитый белок может характеризоваться увеличенной активностью IL-2 по сравнению со слитым белком, не содержащим указанные мутации во внеклеточном домене IL-2Ra, и/или по сравнению с нативным или рекомбинантным IL-2. Аминокислотные последовательности иллюстративных слитых белков, содержащих IL-2Ra с мутациями в пределах внеклеточного домена IL-2Ra, представлены в SEQ ID NOS: 62 и 64. Согласно одному варианту осуществления слитый белок содержит аминокислотную последовательность любой из SEQ ID NO: 62 или 64; или последовательность, характеризующуюся по меньшей мере 80%, 85%, 90% или 95% идентичностью относительно любой из SEQ ID NO: 62 или 64.
Кроме того, предусмотрены активные варианты и фрагменты полинуклеотидов, кодирующих внеклеточный домен IL-2Ra. Такой полинуклеотид может содержать по меньшей мере 100, 200, 300, 400, 500, 600 или больше непрерывных нуклеотидов полипептида, кодирующего SEQ ID NO: 6, 9, 7, 10, 5 или 8, и продолжать кодировать белок, характеризующийся активностью внеклеточного домена IL-2Ra. Аль
- 6 045313 тернативно, функциональный полинуклеотид может характеризоваться по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности относительно полипептида, кодирующего аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 6, 9, 7, 10, 5 или 8, и продолжать кодировать белок, характеризующийся активностью внеклеточного домена IL2Ra.
iii. Дополнительные компоненты.
Слитые белки IL-2/IL-2Ra могут дополнительно содержать дополнительные элементы. Такие элементы могут способствовать экспрессии слитого белка, способствовать секреции слитого белка, улучшать стабильность слитого белка, обеспечивать более эффективную очистку белка и/или модулировать активность слитого белка.
Гетерологичный со ссылкой на полипептид или полинуклеотид представляет собой полипептид или полинуклеотид, который происходит из отличающегося белка или полинуклеотида. Дополнительные компоненты слитого белка могут происходить из одного и того же организма, что и другие полипептидные компоненты слитого белка, или дополнительные компоненты могут происходить из другого организма, чем другие полипептидные компоненты слитого белка.
Согласно одному варианту осуществления слитый белок IL-2/IL-2Ra содержит линкерную последовательность, расположенную между полипептидом IL-2 и полипептидом IL-2Ra. Линкер может характеризоваться любой длиной и может содержать по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 50 или 60 или больше аминокислот. Согласно одному варианту осуществления линкерная последовательность содержит аминокислотные остатки глицина. В других случаях линкерная последовательность содержит комбинацию аминокислотных остатков глицина и серина. Такие глицин/сериновые линкеры могут содержать любую комбинацию аминокислотных остатков, включая в себя без ограничения пептид GGGS или GGGGS или их повторы, включая в себя 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или больше повторов указанных данных пептидов. Например, линкерные последовательности могут содержать GGGSGGGSGGGS (SEQ ID NO: 13) (также обозначенную как (Gly3Ser)3); GGGSGGGSGGGSGGGS (SEQ ID NO: 11) (также обозначенную как (Gly3Ser)4); или (Gly3Ser)5; (Gly3Ser)6; (Gly3Ser)7 и т.д. Линкерные последовательности могут дополнительно содержать (Gly4Ser)3, как представлено в SEQ ID NO: 50; GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 40) (также обозначенную как (Gly4Ser)4); GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS (SEQ ID NO: 41) (также обозначенную как (Gly4Ser)5); (Gly4Ser)2, (Gly4Ser)1, (Gly4Ser)6; (Gly4Ser)7; (Gly4Ser)8 и т.д. Кроме того, активные варианты и фрагменты любого линкера можно дополнительно использовать в слитом белке, раскрытом в настоящем документе.
Кроме того, следует отметить, что полинуклеотид, кодирующий слитый белок IL-2/IL-2Ra, может содержать дополнительные элементы, которые способствуют трансляции слитого белка. Такие последовательности включают в себя, например, последовательности Kozak, прикрепленные к 5' концу полинуклеотида, кодирующего слитый белок. Консенсусная последовательность Kozak представляет собой последовательность, которая встречается на эукариотической иРНК, которая играет роль в инициации процесса трансляции и содержит консенсус (gcc)gccRecAUGG (SEQ ID NO: 35); причем (1) строчная буква обозначает наиболее часто встречающееся основание в положении, где основание может, тем не менее, изменяться; (2) прописные буквы указывают на высококонсервативные основания, т.е. последовательность 'AUGG является постоянной или редко, если вообще меняется, при этом исключением является неоднозначный код IUPAC 'R', который указывает на то, что пурин (аденин или гуанин), как правило, наблюдается в этом положении; и (3) последовательность в скобках ((gee)) обладает неясным значением. Согласно одному варианту осуществления последовательность Kozak содержит последовательность, представленную в SEQ ID NO: 53.
Согласно одному неограничивающему варианту осуществления слитый белок IL-2/IL-2Ra содержит лидерную оптимизированную последовательность Kozak IL-2, как представлено в SEQ ID NO: 28, или ее функциональный вариант или фрагмент. Функциональный вариант или фрагмент последовательности Kozak будет сохранять способность увеличивать трансляцию белка по сравнению с уровнем трансляции из последовательности, в которой отсутствует лидерная последовательность. Такой функциональный фрагмент может содержать по меньшей мере 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 30, 40 непрерывных нуклеотидов последовательности Kozak или последовательности, представленной в SEQ ID NO: 28 или 53. Альтернативно, функциональный вариант может характеризоваться по меньшей мере 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности относительно последовательности Kozak или последовательности, представленной в SEQ ID NO: 28 или 53.
Согласно дополнительным вариантам осуществления слитый белок IL-2/IL-2Ra содержит одну или несколько меток на С-конце для содействия в очистке полипептида. Такие метки являются известными, и включают в себя, например, гистидиновую метку. Согласно конкретным вариантам осуществления используют метку 6Х His. Следует дополнительно отметить, что дополнительную линкерную последовательность можно использовать между слитым белком и меткой His.
- 7 045313
Неограничивающий вариант осуществления слитого белка IL-2/IL-2Ra представлен на фиг. 1, фиг. 2А и 2В. Такой слитый белок содержит лидерный пептид, IL-2 или его функциональный вариант или фрагмент, вариабельный линкер, IL-2Ra, глициновый линкер, метку 6х His и два терминирующих кодона.
iv. Варианты и фрагменты.
а. Полинуклеотиды.
Фрагменты и варианты полинуклеотидов, кодирующих слитый белок IL-2/внеклеточный домен IL2Ra или различные компоненты, содержащиеся в них (т.е. внеклеточный домен IL-2Ra, полипептиды IL-2Ra, линкерные последовательности и/или последовательности Kozak) можно использовать в различных способах и композициях согласно настоящему изобретению. Под фрагментом подразумевают часть полинуклеотида и, следовательно, белка, кодируемого им, или часть полипептида. Фрагменты полинуклеотида могут кодировать белковые фрагменты, которые сохраняют биологическую активность нативного белка и, следовательно, характеризуются активностью IL-2, активность внеклеточного домена IL-2Ra, активностью слитого белка IL-2/IL-2Ra, или если кодируют линкерную последовательность, обеспечивают требуемую активность слитого белка IL-2/IL-2Ra.
Биологически активную часть внеклеточного домена IL-2Ra, полипептида IL-2, слитого белка IL2/IL-2Ra, последовательности Kozak или линкерной последовательности можно получить путем выделения части одного из полинуклеотидов, кодирующих часть внеклеточного домена IL-2Ra или полипептида IL-2, и экспрессии кодируемой части полипептида (например, путем рекомбинантной экспрессии in vitro), и оценки активности части внеклеточного домена IL-2Ra и/или полипептида IL-2 или активности слитого белка IL-2/ILRa.
Вариантные последовательности характеризуются высокой степенью сходства последовательностей. Для полинуклеотидов консервативные варианты включают в себя такие последовательности, которые, вследствие вырожденности генетического кода, кодируют аминокислотную последовательность одного из полипептидов внеклеточного домена IL-2Ra, полипептидов IL-2, слитых белков IL-2/IL-2Ra или линкерных последовательностей. Такие варианты можно идентифицировать с использованием хорошо известных техник молекулярной биологии, как, например, техники полимеразной цепной реакции (ПЦР) и гибридизации. Вариантные полинуклеотиды также включают в себя синтетически полученные нуклеотидные последовательности, такие как последовательности, созданные, например, с использованием сайт-направленного мутагенеза, но которые все еще кодируют внеклеточный домен IL-2Ra, полипептид IL-2, слитый белок IL-2/IL-2Ra, последовательность Kozak или линкерную последовательность.
b. Полипептиды.
Под вариантным белком подразумевают белок, полученный из нативного белка путем делеции (так называемого усечения) или добавления одной или нескольких аминокислот к N-концу и/или Сконцу нативного белка; делеции или добавления одной или нескольких аминокислот на одном или нескольких сайтах в нативном белке; или замены одной или нескольких аминокислот на одном или нескольких сайтах в нативном белке. Вариантные белки являются биологически активными, иными словами, они продолжают обладать требуемой биологической активностью, а именно, активностью слитого белка IL-2/IL-2Ra, активностью IL-2 или активностью внеклеточного домена IL-2Ra. Такие варианты могут являться результатом, например, генетического полиморфизма или манипуляции человека. Биологически активные варианты слитого белка IL-2/IL-2Ra или любого из его компонентов (т.е. полипептид внеклеточного домена IL-2Ra, полипептид IL-2 или линкерная последовательность) будут характеризоваться по меньшей мере приблизительно 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или больше идентичностью последовательности относительно аминокислотной последовательности нативного белка, что определяли с помощью программ и параметров выравнивания последовательностей, описанных в другом месте в настоящем документе. Биологически активный вариант белка может отличаться от такого белка на не более чем 1-15 аминокислотных остатков, не более чем 1-10, например, 6-10, не более чем 5, не более чем 4, 3, 2 или даже 1 аминокислотный остаток.
Белки можно изменить различными путями, включая в себя аминокислотные замены, делеции, усечения и вставки. Способы таких манипуляций, как правило, известны в настоящей области техники. Например, варианты аминокислотной последовательности внеклеточного домена IL-2Ra, полипептида IL2, слитого белка IL-2/IL-2Ra или линкерные последовательности можно получить с помощью мутаций в ДНК. Способы мутагенеза и изменений нуклеотидных последовательностей хорошо известны в настоящей области техники; см., например, Kunkel (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:488-492; Kunkel et al. (1987) Methods in Enzymol. 154:367-382; патент США № 4873192; Walker and Gaastra, eds. (1983) Techniques in Molecular Biology (MacMillan Publishing Company, New York) и процитированные в них ссылки. Руководства в отношении соответствующих аминокислотных замен, которые не влияют на биологическую активность представляющего интерес белка, можно найти в модели Dayhoff et al. (1978) Atlas of Protein Sequence and Structure (Natl. Biomed. Res. Found., Washington, D.C.), включенный в настоящий
- 8 045313 документ посредством ссылки. Консервативные замены, такие как обмен одной аминокислоты на другую, характеризующуюся сходными свойствами, могут являться предпочтительными.
Таким образом, раскрытые в настоящем документе полинуклеотиды могут включать в себя встречающиеся в природе последовательности, нативные последовательности, а также мутантные формы. Аналогично, белки, используемые в способах согласно настоящему изобретению, включают в себя встречающиеся в природе белки, а также их вариации и модифицированные формы. Такие варианты будут продолжать обладать способностью осуществлять событие рекомбинации. Как правило, мутации, произведенные в полинуклеотиде, кодирующем вариантный полипептид, не должны помещать последовательность за пределы рамки считывания и/или создавать комплементарные области, которые могут производить вторичную структуру иРНК; см., публикацию заявки на выдачу европейского патента № 75444.
Вариантные полинуклеотиды и белки также включают в себя последовательности и белки, полученные из мутагенной и рекомбиногенной процедуры, такой как перестановка в ДНК. С помощью такой процедуры один или несколько различных кодирующих внеклеточных доменов IL-2Ra или IL-2 последовательностей можно подвергнуть манипуляции для создания новых полипептидов внеклеточного домена IL-2Ra или IL-2, обладающих требуемыми свойствами. Сходным образом, библиотеки рекомбинантных полинуклеотидов создают из популяции полинуклеотидов родственных последовательностей, содержащих области последовательностей, которые характеризуются существенной идентичностью последовательностей, и которые можно гомологично рекомбинировать in vitro или in vivo. Стратегии такой перестановки в ДНК известны в настоящей области техники; см., например, Stemmer (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:10747-10751; Stemmer (1994) Nature 370:389-391; Crameri et al. (1997) Nature Biotech. 15:436-438; Moore et al. (1997) J. Mol. Biol. 272:336-347; Zhang et al. (1997) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:4504-4509; Crameri et al. (1998) Nature 391:288-291; и патенты США №№ 5605793 и 5837458.
III. Полинуклеотиды, кодирующие слитые белки IL-2/IL-2Ra, и способы получения.
Композиции дополнительно включают в себя выделенные полинуклеотиды, который кодируют различные описанные в настоящем документе выше слитые белки и их варианты и фрагменты. Дополнительно раскрыты векторы и экспрессионные кассеты, содержащие полинуклеотиды, описанные в настоящем документе. Экспрессионные кассеты, как правило, будут включать в себя промотор, функционально связанный с полинуклеотидом и областью терминации транскрипции и трансляции.
Применение термина полинуклеотид не подразумевает ограничение настоящего изобретения полинуклеотидами, содержащими ДНК. Специалистам в настоящей области техники будет понятно, что полинуклеотиды могут содержать рибонуклеотиды и комбинации рибонуклеотидов и дезоксирибонуклеотидов. Такие дезоксирибонуклеотиды и рибонуклеотиды включают в себя как встречающиеся в природе молекулы, так и синтетические аналоги.
Выделенный или очищенный полинуклеотид или белок или его биологически активная часть по существу или главным образом не содержат компоненты, которые в норме сопровождают или взаимодействуют с полинуклеотидом или белком, обнаруженным в своем встречающемся в природе окружении. Таким образом, выделенный или очищенный полинуклеотид или белок по существу не содержит другой клеточный материал или среду культивирования, если он получен с помощью рекомбинантных техник, или по существу не содержит химические предшественники или другие химические средства, если его получают химически. Оптимально, если выделенный полинуклеотид не содержит последовательности (оптимально кодирующие белок последовательности), которые в природном состоянии фланкируют полинуклеотид (т.е. последовательности, расположенные на 5' и 3' концах полинуклеотида) в геномной ДНК организма, из которого получен полинуклеотид. Например, согласно различным вариантам осуществления выделенный полинуклеотид может содержать меньше чем приблизительно 5 т.п.н., 4 т.п.н., 3 т.п.н., 2 т.п.н., 1 т.п.н., 0.5 т.п.н. или 0.1 т.п.н. нуклеотидной последовательности, которая в природном состоянии фланкирует полинуклеотид в геномной ДНК клетки, из которой получен полинуклеотид. Белок, который по существу не содержит клеточный материал, включает в себя препараты белка, содержащие меньше чем приблизительно 30%, 20%, 10%, 5% или 1% (на сухую массу) белка-примеси. Если белок согласно настоящему изобретению или его биологически активная часть получены рекомбинантно, оптимально, чтобы среда культивирования представляла меньше чем приблизительно 30%, 20%, 10%, 5% или 1% (на сухую массу) химических предшественников или химических средств, не являющихся представляющим интерес белком.
Общепринятые техники молекулярной биологии, микробиологии и рекомбинантной ДНК, известные в настоящей области техники, можно использовать в настоящем документе. Такие техники в полной мере объяснены в литературе; см., например, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (1989); Current Protocols in Molecular Biology Volumes I-III [Ausubel, R. M., ed. (1994)]; Cell Biology: A Laboratory Handbook Volumes I-III [J. E. Celis, ed. (1994))]; Current Protocols in Immunology Volumes IIIT [Coligan, J. E., ed. (1994)]; Oligonucleotide Synthesis (MJ. Gait ed. 1984); Nucleic Acid Hybridization [B.D. Hames & SJ. Higgins eds. (1985)]; Transcription And Translation [B.D. Hames & S.J. Higgins, eds. (1984)]; Animal Cell Culture [R.I. Freshney, ed. (1986)]; Immobilized Cells And Enzymes [IRL Press, (1986)]; B. Perbal, A Practical Guide To Molecular Cloning (1984).
- 9 045313
Кроме того, в настоящем документе предусмотрен вектор, который содержит вышеописанные полинуклеотиды, функционально связанные с промотором. Нуклеотидная последовательность является функционально связанной в контролирующей экспрессию последовательностью (например, промотором), если контролирующая экспрессию последовательность контролирует и регулирует транскрипцию и трансляцию указанной последовательности. Термин функционально связанный при ссылке на нуклеотидную последовательность, включает в себя наличие соответствующего старт-сигнала (например, ATG) перед подлежащей экспрессии нуклеотидной последовательностью и поддержание правильной рамки считывания для обеспечения экспрессии последовательности под контролем контролирующей экспрессию последовательности и получение требуемого продукта, кодируемого последовательностью. Если ген, который необходимо вставить в рекомбинантную молекулу нуклеиновой кислоты, не содержит соответствующий старт-сигнал, такой старт-сигнал можно ввести перед геном. Вектор представляет собой репликон, такой как плазмида, фаг или космида, к которому можно прикрепить другой сегмент нуклеиновой кислоты так, чтобы привести к репликации прикрепленного сегмента. Промотор может представлять собой или может являться идентичным бактериальному, дрожжевому промотору, промотору насекомого или млекопитающего. Кроме того, вектор может представлять собой плазмиду, космиду, дрожжевую искусственную хромосому (YAC), бактериофаг или эукариотическую вирусную ДНК.
Можно использовать другие различные векторные остовы, известные в настоящей области техники как применимые для экспрессии белка. Такие векторы включают в себя без ограничения следующее: аденовирус, вакуолизирующий обезьяний вирус 40 (SV40), цитомегаловирус (CMV), вирус опухоли молочной железы мышей (MMTV), вирус мышиного лейкоза Молони, системы доставки ДНК, т.е. липосомы и системы доставки экспрессионных плазмид. Кроме того, один класс векторов содержит элементы ДНК, происходящие из таких вирусов, как вирус папилломы крупного рогатого скота, полиомавирус, бакуловирус, ретровирусы или вирус леса Семлики. Такие векторы можно получить коммерчески или осуществить их сборку из описанных последовательностей с помощью способов, хорошо известных в настоящей области техники.
В настоящем документе предусмотрена векторная система-хозяин для получения полипептида, которая содержит вектор подходящей клетки-хозяина. Подходящие клетки-хозяева включают в себя без ограничения прокариотические или эукариотические клетки, например, бактериальные клетки (включая в себя грамположительные клетки), дрожжевые клетки, грибковые клетки, клетки насекомых и клетки животных. Многочисленные клетки млекопитающих можно использовать в качестве хозяев, включая в себя без ограничения мышиные фибробласты NTH 3T3, клетки СНО, клетки HeLa, клетки Ltk. и т.д. Также можно использовать дополнительные клетки животных, такие как клетки R1.1, B-W и L-M, клетки почки африканской зеленой обезьяны (например, COS 1, COS 7, BSC1, BSC40 и ВМТ10), клетки насекомых (например, Sf9) и клетки человека и растительные клетки в тканевой культуре.
Широкое разнообразие комбинаций хозяев/экспрессионных векторов можно использовать в экспрессии полинуклеотидных последовательностей, представленных в настоящем документе. Применимые экспрессионные векторы, например, могут состоять из сегментов хромосомных, нехромосомных и синтетических последовательностей ДНК. Подходящие векторы включают в себя производные SV40 и известные бактериальные плазмиды, например, плазмиды is. coli col El, pCR1, pBR322, pMB9 и их производные, такие плазмиды, как RP4; фаговые ДНК, например, многочисленные производные фага X, например, NM989, и другие фаговые ДНК, например, ДНК М13 и одноцепочечная ДНК нитевидного фага; такие дрожжевые плазмиды, как плазмида 21А или ее производные; векторы, применимые в эукариотических клетках, такие как векторы, применимые в клетках насекомых или млекопитающих; векторы, полученные из комбинаций плазмид и фаговых ДНК, такие как плазмиды, которые были модифицированы для использования фаговой ДНК или других контролирующих экспрессию последовательностей; и подобное.
Любую из широкого разнообразия контролирующих экспрессию последовательностей (последовательностей, которые контролируют экспрессию нуклеотидной последовательности, функционально связанной с ней) можно использовать в указанных векторах для экспрессии полинуклеотидных последовательностей, предусмотренных в настоящем документе. Такие применимые контролирующие экспрессию последовательности включают в себя, например, ранние или поздние промоторы SV40, CMV, вируса осповакцины, полиомы или аденовируса, систему lac, систему tip, систему ТАС, систему TRC, систему LTR, главные операторные и промоторные области фага к, контролирующие области оболочечного белка fd, промотор для 3-фосфоглицераткиназы или других гликолитических ферментов, промоторы кислой фосфатазы (например, Pho5), промоторы дрожжевых факторов α-скрещивания и другие последовательности, которые, как известно, контролируют экспрессию генов прокариотических или эукариотических клеток или их вирусов, и различные их комбинации.
Следует понимать, что не все векторы, контролирующие экспрессию последовательности и хозяева, будут функционировать в равной степени хорошо для экспрессии полинуклеотидных последовательностей, предусмотренных в настоящем документе. Никогда все хозяева не будут функционировать в равной степени хорошо с одной и той же экспрессионной системой. Тем не менее, специалист в настоящей области техники сможет выбрать правильные векторы, контролирующие экспрессию последовательно
- 10 045313 сти и хозяев без чрезмерного экспериментирования для достижения требуемой экспрессии, не отклоняясь от объема настоящего изобретения. Например, в выборе вектора необходимо принимать во внимание хозяина, поскольку вектор должен в нем функционировать. Также необходимо учитывать число копий вектора, способность контролировать указанное число копий и экспрессию любых других белков, кодируемых вектором, таких как относящиеся к антибиотикам маркеры.
В выборе контролирующей экспрессию последовательности, как правило, будут учитывать разнообразные факторы. Они включают в себя, например, относительную эффективность системы, ее способность осуществлять контроль и ее совместимость с конкретной нуклеотидной последовательностью или геном, подлежащим экспрессии, в частности, в отношении потенциальных вторичных структур. Подходящих одноклеточных хозяев будут выбирать, принимая во внимание, например, их совместимость с выбранным вектором, их характеристики секреции, их способность к правильной укладке белков и их требования к ферментации, а также токсичность в отношении хозяина продукта, кодируемого нуклеотидными последовательностями, подлежащими экспрессии, и простоту очистки продуктов экспрессии.
В получении экспрессионной кассеты можно провести манипуляции с различными полинуклеотидами так, чтобы обеспечить полинуклеотидные последовательности в правильной ориентации и, в соответствующей ситуации, в правильной рамке считывания. Для достижения указанного можно использовать адаптеры или линкеры для соединения полинуклеотидов, или можно применять другие манипуляции для обеспечения удобных сайтов рестрикции, удаления излишней ДНК, удаления сайтов рестрикции или подобного. Например, такие линкеры, как два глицина, можно добавить между полипептидами. Остатки метионина, кодируемые нуклеотидными последовательностями atg, можно добавить для обеспечения инициации транскрипции гена. С этой целью можно использовать in vitro мутагенез, восстановление праймера, рестрикцию, отжиг, повторные замены, например, транзиции и трансверсии.
Дополнительно предусмотрен способ получения полипептида, который предусматривает экспрессию полинуклеотида, кодирующего слитый белок, раскрытый в настоящем документе, в клетке-хозяине при подходящих условиях, обеспечивающих возможность получения полипептида, и выделение полипептида, полученного таким образом.
IV. Способы применения.
Предусмотрены различные способы модулирования иммунного ответа. Используемый в настоящем документе термин модулирование включает в себя индукцию, ингибирование, потенцирования, повышения, увеличения или уменьшения данной активности или ответа.
Под субъектом подразумевают млекопитающих, например, приматов, людей, сельскохозяйственных и одомашненных животных, таких как без ограничения собаки, кошки, крупный рогатый скот, лошади, свиньи, овцы и подобное. Согласно одному варианту осуществления субъект, подвергающийся лечению с помощью фармацевтических составов, предусмотренных в настоящем документе, представляет собой человека.
Терапевтически эффективное количество слитого белка IL-2/IL-2Ra относится к количеству слитого белка IL-2/IL-2Ra, достаточному для того, чтобы вызвать требуемый биологический ответ. Специалисту в настоящей области техники будет понятно, что абсолютное количество конкретного слитого белка IL-2/IL-2Ra, которое является эффективным, может варьировать в зависимости от таких факторов, как требуемый биологический конечный результат, подлежащий доставке слитый белок IL-2/IL-2Ra, целевая клетка или ткань и подобное. Кроме того, специалисту в настоящей области техники будет понятно, что эффективное количество можно ввести в одной дозе или оно может быть достигнуто путем введения многократных доз (т.е. 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 или больше доз).
i. Способы увеличения иммунного ответа.
Предусмотрены различные способы увеличения иммунного ответа у субъекта. Такие способы предусматривают введение субъекту, нуждающемуся в увеличении иммунного ответа, терапевтически эффективного количества слитого белка IL-2/IL-2Ra. В связи с этим, согласно конкретным вариантам осуществления временное применение высоких доз IL-2 используют для стимуляции ответов иммунных эффекторов и клеток памяти.
Следует дополнительно отметить, что различные слитые белки IL-2/IL-2Ra можно использовать в комбинации с антигеном для усиления иммунного ответа на антиген. Таким образом, слитый белок IL2/IL-2Ra также можно использовать в качестве адъюванта вакцины для стимуляции клеточноопосредованной иммунной памяти.
Например, слитый белок IL-2/IL-2Ra можно использовать для улучшения препарата вакцины. Таким образом, различные слитые белки IL-2/IL-2Ra являются применимыми для увеличения эффективности противораковых вакцин или для вакцин, которые являются слабоиммуногенными. Дополнительно предусмотрены способы усиления эффективности или иммуногенности вакцины у субъекта или преодоления подавленного иммунного ответа на вакцину у субъекта, включая в себя (i) введение субъекту терапевтически эффективного количества слитого белка IL-2/IL-2Ra и (ii) введение субъекту вакцины.
Под вакциной подразумевают композицию, применимую для стимуляции специфического иммунного ответа (или иммуногенного ответа) у субъекта. Согласно некоторым вариантам осуществления
- 11 045313 иммуногенный ответ является защитным или обеспечивает защитный иммунитет. Например, в случае болезнетворного микроорганизма вакцина обеспечивает субъекту возможность лучше противостоять инфекции или прогрессированию заболевания, вызванного организмом, против которого направлена вакцина. Альтернативно, в случае злокачественной опухоли вакцина усиливает естественные защитные силы субъекта против злокачественных опухолей, которые уже развились. Указанные типы вакцин также могут предотвращать дальнейший рост существующих злокачественных опухолей, предотвращать рецидив получивших лечение злокачественных опухолей и/или устранять злокачественные клетки, не уничтоженные предыдущими видами лечения.
Репрезентативные вакцины включают в себя без ограничения вакцины против дифтерии, столбняка, коклюша, полиомиелита, кори, эпидемического паротита, краснухи, гепатита В, Haeinophilus influenzae типа b, ветряной оспы, менингита, вируса иммунодефицита человека, туберкулеза, вируса ЭпштейнаБарр, малярии, гепатита Е, лихорадки денге, ротавируса, герпеса, вируса папилломы человека и злокачественных опухолей. Представляющие интерес вакцины включают в себя две вакцины, которые получили лицензию Управления по контролю за качеством пищевых продуктов и лекарственных средств США для профилактики вирусных инфекций, которые могут привести к злокачественным опухолям: вакцина против гепатита В, которая предотвращает инфекцию вируса гепатита В, инфекционного агента, связанного со злокачественной опухолью печени (MMWR Morb. Mortal. Wkly. Rep. 46:107-09, 1997); и Gardasil™, который предотвращает инфекцию двух типов вируса папилломы человека, которые вместе вызывают 70 % злокачественных опухолей шейки матки во всем мире (Speck and Tyring, Skin Therapy Lett. 11:1-3, 2006). Другие представляющие интерес терапевтические вакцины включают в себя терапевтические вакцины для лечения злокачественной опухоли, злокачественной опухоли шейки матки, фолликулярной Вклеточной неходжкинской лимфомы, злокачественной опухоли почек, меланомы кожи, меланомы сетчатки глаза, злокачественной опухоли предстательной железы и множественной миеломы.
Под усилением эффективности или усилением иммуногенности в отношении вакцины подразумевают улучшение результата лечения, например, согласно измерению изменения конкретной величины, например, увеличение или уменьшение конкретного параметра активности вакцины, связанного с защитным иммунитетом. Согласно одному варианту осуществления усиление относится по меньшей мере к 5%, 10%, 25%, 50%, 100% или больше чем 100% увеличению конкретного параметра. Согласно другому варианту осуществления усиление относится по меньшей мере к 5%, 10%, 25%, 50%, 100% или больше чем 100% уменьшению конкретного параметра. Согласно одному примеру усиление эффективности/иммуногенности вакцины относится к увеличению способности вакцины ингибировать или лечить прогрессирование заболевания, такому как по меньшей мере 5%, 10%, 25%, 50%, 100% или больше чем 100% увеличению эффективности вакцины для указанной цели. Согласно дополнительному примеру усиление эффективности/иммуногенности вакцины относится к увеличению способности вакцины мобилизовать естественные защитные силы субъекта против злокачественных опухолей, которые уже развились, такому как по меньшей мере 5%, 10%, 25%, 50%, 100% или больше чем 100% увеличение эффективности вакцины для указанной цели.
Аналогично, под преодолением подавленного иммунного ответа в отношении вакцины подразумевают улучшение результата лечения, например, согласно измерению изменения конкретной величины, например, возвращение к ранее положительному значению конкретного параметра активности вакцины, связанного с защитным иммунитетом. Согласно одному варианту осуществления преодоление относится по меньшей мере к 5%, 10%, 25%, 50%, 100% или больше чем 100% увеличению конкретного параметра. Согласно одному примеру преодоление подавленного иммунного ответа на вакцину относится к возобновленной способности вакцины ингибировать или лечить прогрессирование заболевания, такой как по меньшей мере 5%, 10%, 25%, 50%, 100%, или больше чем 100% возобновление эффективности вакцины для указанной цели. Согласно дополнительному примеру преодоление подавленного иммунного ответа на вакцину относится к возобновленной способности вакцины мобилизовать естественные защитные силы субъекта против злокачественных опухолей, которые уже развились, такой как по меньшей мере 25%, 50%, 100% или больше чем 100% возобновление эффективности вакцины для указанной цели.
Под терапевтически эффективным количеством подразумевают количество, которое является применимым в лечении, профилактике или диагностике заболевания или состояния. Используемое в настоящем документе терапевтически эффективное количество слитого белка IL-2/IL-2Ra представляет собой количество, которое при введении субъекту является достаточным для достижения требуемого эффекта, такого как модулирование иммунного ответа у субъекта, не вызывая существенного цитотоксического эффекта у субъекта. Как указано выше, терапевтически эффективное количество слитого белка IL-2/IL-2Ra можно вводить субъекту для увеличения иммунного ответа, усиления иммунного ответа на антиген, усиления эффективности или иммуногенности вакцины у субъекта или преодоления подавленного иммунного ответа на вакцину. Эффективное количество слитого белка IL-2/IL-2Ra, применимого для модулирования таких функций, будет зависеть от подлежащего лечению субъекта, тяжести повреждения и способа введения слитого белка IL-2/IL-2Ra. Иллюстративные дозы включают в себя приблизительно 104 - приблизительно 107 ME (международных единиц) активности IL-2 на организм взрослого
- 12 045313 человека, приблизительно 104 - 105 ME активности IL-2 на организм взрослого человека, приблизительно 105 - приблизительно 106 ME активности IL-2 на организм взрослого человека, приблизительно 106 - приблизительно 107 ME активности IL-2 на организм взрослого человека. В других случаях терапевтически эффективная доза слитого белка IL-2/IL-2Ra составляет приблизительно 105 ME активности IL-2 ± 100кратная, составляет приблизительно 105 ME активности IL-2 ± 10-кратная, приблизительно 105 ME активности IL-2 ± 2-кратная, приблизительно 105 ME активности IL-2 ± 20-кратная, приблизительно 105 ME активности IL-2 ± 30-кратная, приблизительно 105 ME активности IL-2 + 40-кратная, приблизительно 105 ME активности IL-2 ± 50-кратная, приблизительно 105 ME активности IL-2 ± 60-кратная, приблизительно 105 ME активности IL-2 ± 70-кратная, приблизительно 105 ME активности IL-2 ± 80-кратная или приблизительно 105 ME активности IL-2 ± 90-кратная. Согласно конкретному неограничивающему варианту осуществления слитый белок IL-2 человека вводят в указанной дозировке.
Согласно одному варианту осуществления стандартный образец для мышиного слитого белка IL-2 представляет собой мышиный IL-2 от eBiosciences (№ по кат.: 14-8021).
Кратко, биоактивность мышиного IL-2 от eBioscience является следующей: значение ED50 указанного белка, измеряемое с помощью анализа клеточной пролиферации CTLL-2, меньше чем или равно 175 пг/мл. Это соответствует специфической активности, составляющей больше чем или равной 5,7 х 106 единиц/мг.
Согласно другому варианту осуществления стандартный образец для слитого белка IL-2 человека представляет собой лекарственное средство IL-2 человека, альдеслейкин (Пролейкин) Таким образом, раскрытые в настоящем документе слитые белки IL-2 напрямую сравнивают со слитым белком с лекарственным средством IL-2, которое используют в низкодозовой или высокодозовой терапии IL-2. В определении активности IL-2 для IL-2 мыши и человека используют одинаковый анализ, и их активность в единицах/мг является сходной. В отношении лекарственного средства IL-2 человека, т.е. альдеслейкина (Пролейкина), стандартная величина количества IL-2 представляет собой Международные Единицы (ME, или IU), которые технически не представляют собой фиксированное количество, а количество, которое производит фиксированный эффект в конкретном анализе биологической активности, т.е. анализе пролиферации CTLL. На практике производство IL-2 стандартизировано, и существует превращение массой лекарственного средства в международные единицы. Оно представляет собой следующее: 1,1 мг IL-2 =18 млн. ME (сокращенно 18 ММЕ).
Кроме того, следует понимать, что соответствующие дозы функционального средства зависят от эффективности активного средства в отношении активности, подлежащей модулированию. Такие соответствующие дозы можно определить с использованием анализов, описанных в настоящем документе. Кроме того, следует понимать, что конкретный уровень дозы для любого конкретного субъектаживотного будет зависеть от разнообразных факторов, включая в себя активность используемого конкретного соединения, возраст, масса тела, общее состояние здоровья, пол и диету субъекта, время введения, путь введения, скорость выведения и/или любую комбинацию лекарственных средств.
Если введение осуществляют с целью лечения, введение может происходить либо для профилактической, либо для терапевтической цели. Если предусмотрено профилактическое введение, вещество вводят до какого-либо симптома, профилактическое введение вещества служит для предотвращения или ослабления какого-либо последующего симптома. Если предусмотрено терапевтическое введение, вещество вводят при (или вскоре после) возникновения симптома. Терапевтическое введение вещества служит для ослабления любого существующего симптома.
Специалисту в настоящей области техники будет понятно, что определенные факторы могут влиять на дозировку, необходимую для эффективного лечения субъекта, включая в себя без ограничения тяжесть заболевания или нарушения, предыдущие виды лечения, общее состояние здоровья и/или возраст субъекта и другие присутствующие заболевания. Более того, лечение субъекта с помощью терапевтически эффективного количества слитого белка IL-2/IL-2Ra может предусматривать однократное лечение или предпочтительно может предусматривать серию введений. Также следует понимать, что эффективная дозировка слитого белка IL-2/IL-2Ra, используемого для лечения, может увеличиваться или уменьшаться с течением курса конкретного лечения. Изменения в дозировке могут являться результатом и становиться очевидными из результатов диагностических анализов, описанных в настоящем документе.
Терапевтически эффективные количества слитого белка IL-2/IL-2Ra можно определить с помощью исследований на животных. При использовании анализов на животных дозировку вводят для обеспечения целевой in vivo концентрации, аналогичной той, которая, как было показано, является эффективной в анализах на животных.
ii. Способы уменьшения иммунного ответа.
Предусмотрены различные способы уменьшения иммунного ответа у субъекта. Такие способы предусматривают введение субъекту, нуждающемуся в уменьшении иммунного ответа, терапевтически эффективного количества слитого белка IL-2/IL-2Ra.
Большой интерес уделяется тому, как использовать подавляющую силу Treg для ингибирования нежелательных иммунных ответов. Данные, полученные на мыши и человеке, показали, что усиление
- 13 045313 передачи сигнала IL-2R с помощью низкой дозы IL-2 селективно стимулирует Treg и усиливает иммунные толерогенные механизмы. Предусмотренные в настоящем документе слитые белки IL-2/IL-2Ra представляют новую и улучшенную форму IL-2, которая эффективнее усиливает Treg. Таким образом, слитые белки IL-2/IL-2Ra можно вводить пациентам с аутоиммунными заболеваниями, хронической реакцией трансплантат против хозяина, реакциями отторжения трансплантата и другими состояниями, в которых целью является подавить аутореактивность.
Например, терапевтически эффективное количество слитого белка IL-2/IL-2Ra, которое стимулирует иммунную толерантность, может найти применение, например, в лечении субъекта с аутоиммунным или воспалительным нарушением, включая в себя без ограничения отторжения трансплантатов и аллергии. Таким образом, согласно одному варианту осуществления предусмотрен способ лечения субъекта с аутоиммунным или воспалительным нарушением. Такой способ предусматривает введение субъекту терапевтически эффективного количества слитого белка IL-2/IL-2Ra.
Неограничивающие примеры аутоиммунных нарушений, которые можно лечить или предотвращать, включают в себя сахарный диабет I типа, рассеянный склероз, ревматоидный артрит, глютеновую энтеропатию, системную красную волчанку, ювенильный идиопатический артрит, болезнь Крона, неспецифический язвенный колит или системный склероз, реакцию трансплантат против хозяина, вызванный HCV (вирус гепатита С) васкулит, гнездную алопецию или псориаз.
Дополнительные аутоиммунные заболевания включают в себя те, при которых, как показано, могут быть поражены Treg, и будут иметь благоприятный эффект от IL-2-зависимой стимуляции Treg. В этой связи, установили корреляцию однонуклеотидных полиморфизмов (SNP) в IL-2, IL-2Ra или IL-2R13 в качестве фактора генетического риска сахарного диабета I типа, рассеянного склероза, ревматоидного артрита, глютеновой энтеропатии, системной красной волчанки, ювенильного идиопатического артрита, болезни Крона, неспецифического язвенного колита и системного склероза. Исследования позволяют предположить, что генетический риск связан с уменьшенным количеством и/или активностью Treg. Кроме того, было показано, что низкодозовая терапия IL-2 благоприятна для пациентов с хронической реакцией ТПХ и вызванным HCV васкулитом. Таким образом, таким популяциям пациентов также можно вводить терапевтически эффективное количество слитого белка IL-2/IL-2Ra.
Согласно другим вариантам осуществления слитый белок IL-2/IL-2Ra можно использовать в комбинации с терапевтическим средством для снижения иммунного ответа на указанное средство (т.е. белок). Например, слитый белок IL-2/IL-2Ra можно использовать в комбинации с терапевтическим белком, который необходимо хронически вводить субъекту. Таким образом, согласно конкретному варианту осуществления способ предусматривает введение субъекту по меньшей мере одного дополнительного терапевтического средства в комбинации со слитым белком IL-2/IL-2Ra. Такие терапевтические средства включают в себя без ограничения цитокин, глюкокортикоид, антрациклин (например, доксорубицин или эпирубицин), фторхинолон (например, ципрофлоксацин), антифолат (например, метотрексат), антиметаболит (например, фторурацил), ингибитор топоизомеразы (например, камптотецин, иринотекан или этопозид), алкилирующее средство (например, циклофосфамид, ифосфамид, митолактол или мелфалан), антиандроген (например, флутамид), антиэстроген (например, тамоксифен), соединение платины (например, цисплатин), алкалоид барвинка (например, винорелбин, винбластин или виндезин) или ингибитор митоза (например, паклитаксел или доцетаксел).
Более того, терапевтически эффективное количество слитого белка IL-2/IL-2Ra можно дополнительно вводить в комбинированных видах терапий для увеличения Treg и толерантности. Такие комбинированные виды терапии могут содержать терапевтически эффективное количество слитого белка IL2/IL-2Ra в комбинации с анти-TNFa или другими средствами для ингибирования воспалительных ответов.
Терапевтически эффективное количество слитого белка IL-2/IL-2Ra, применимое для уменьшения иммунного ответа, будет зависеть от подлежащего лечению субъекта, тяжести поражения и способа введения слитого белка IL-2/IL-2Ra. Иллюстративные дозы включают в себя приблизительно 103 ME - приблизительно 106 ME активности IL-2 на организм взрослого человека или приблизительно 104 ME - приблизительно 106 ME активности IL-2 на организм взрослого человека. Иллюстративные дозы включают в себя приблизительно 103 - приблизительно 106 ME активности IL-2 на организм взрослого человека, приблизительно 103 - приблизительно 104 ME активности IL-2 на организм взрослого человека, приблизительно 104 - приблизительно 106 ME активности IL-2 на организм взрослого человека, приблизительно 104 - 105 ME активности IL-2 на организм взрослого человека, или приблизительно 105 - приблизительно 106 ME активности IL-2 на организм взрослого человека. В других случаях терапевтически эффективная доза слитого белка IL-2/IL-2Ra составляет приблизительно 104 ME активности IL-2 ± 100-кратная, составляет приблизительно 104 ME активности IL-2 ± 10-кратная, приблизительно 104 ME активности IL-2 ± 2-кратная, приблизительно 104 ME активности IL-2 ± 20-кратная, приблизительно 104 ME активности IL-2 ± 30-кратная, приблизительно 104 ME активности IL-2 ± 40-кратная, приблизительно 104 ME активности IL-2 ± 50-кратная, приблизительно 104 ME активности IL-2 ± 60-кратная, приблизительно 104 ME
- 14 045313 активности IL-2 ± 70-кратная, приблизительно 104 ME активности IL-2 ± 80-кратная или приблизительно 104 ME активности IL-2 ± 90-кратная. Согласно конкретному неограничивающему варианту осуществления слитый белок IL-2 человека вводят в указанной дозировке.
Согласно одному варианту осуществления стандартный образец для мышиного слитого белка IL-2 представляет собой мышиный IL-2 от eBiosciences (№ по кат.: 14-8021). Кратко, биоактивность мышиного IL-2 от eBioscience является следующей: значение ED50 указанного белка, измеряемое с помощью анализа клеточной пролиферации CTLL-2, меньше чем или равно 175 пг/мл. Это соответствует специфической активности, составляющей больше чем или равной 5,7 х 106 единиц/мг.
Согласно другому варианту осуществления стандартный образец для слитого белка IL-2 человека представляет собой лекарственное средство IL-2 человека, альдеслейкин (Пролейкин) Таким образом, раскрытые в настоящем документе слитые белки IL-2 напрямую сравнивают со слитым белком с лекарственным средством IL-2, которое используют в низкодозовой или высокодозовой терапии IL-2. В определении активности IL-2 для IL-2 мыши и человека используют одинаковый анализ, и их активность в единицах/мг является сходной. В отношении лекарственного средства IL-2 человека, т.е. альдеслейкина (Пролейкина), стандартная величина количества IL-2 представляет собой Международные Единицы (ME, или IU), которые технически не представляют собой фиксированное количество, а количество, которое производит фиксированный эффект в конкретном анализе биологической активности, т.е. анализе пролиферации CTLL. На практике производство IL-2 стандартизировано, и существует превращение массой лекарственного средства в международные единицы. Оно представляет собой следующее: 1,1 мг IL-2 = 18 млн. ME (сокращенно 18 ММЕ).
Кроме того, следует понимать, что соответствующие дозы функционального средства зависят от эффективности активного средства в отношении активности, подлежащей модулированию экспрессии или активности. Такие соответствующие дозы можно определить с использованием анализов, описанных в настоящем документе. Кроме того, следует понимать, что конкретный уровень дозы для любого конкретного субъекта-животного будет зависеть от разнообразных факторов, включая в себя активность используемого конкретного соединения, возраст, масса тела, общее состояние здоровья, пол и диету субъекта, время введения, путь введения, скорость выведения и/или любую комбинацию лекарственных средств.
Если введение осуществляют с целью лечения, введение может происходить либо для профилактической, либо для терапевтической цели. Если предусмотрено профилактическое введение, вещество вводят до какого-либо симптома, профилактическое введение вещества служит для предотвращения или ослабления какого-либо возникающего впоследствии симптома. Если предусмотрено терапевтическое введение, вещество вводят при (или вскоре после) возникновения симптома. Терапевтическое введение вещества служит для ослабления любого существующего симптома.
Специалисту в настоящей области техники будет понятно, что определенные факторы могут влиять на дозировку, необходимую для эффективного лечения субъекта, включая в себя без ограничения тяжесть заболевания или нарушения, предыдущие виды лечения, общее состояние здоровья и/или возраст субъекта и другие присутствующие заболевания. Более того, лечение субъекта с помощью терапевтически эффективного количества слитого белка IL-2/IL-2Ra может предусматривать однократное лечение или предпочтительно может предусматривать серию введений. Также следует понимать, что эффективная дозировка слитого белка IL-2/IL-2Ra, используемого для лечения, может увеличиваться или уменьшаться с течением курса конкретного лечения. Изменения в дозировке могут являться результатом и становиться очевидными из результатов диагностических анализов, описанных в настоящем документе.
Терапевтически эффективные количества слитого белка IL-2/IL-2Ra можно определить с помощью исследований на животных. При использовании анализов на животных дозировку вводят для обеспечения целевой концентрации в ткани, аналогичной той, которая, как было показано, является эффективной в анализах на животных.
iii. Фармацевтическая композиция.
Различные слитые белки IL-2/IL-2Ra, раскрытые в настоящем документе (которые также в настоящем документе называют активные соединения) можно ввести в фармацевтические композиции, подходящие для введения. Такие композиции, как правило, содержат слитый белок и фармацевтически приемлемый носитель. Подразумевают, что используемый в настоящем документе термин фармацевтически приемлемый носитель включает в себя любой и все растворители, дисперсионные среды, оболочки, антибактериальные и противогрибковые средства, изотонические и замедляющие абсорбцию средства и подобное, совместимые с фармацевтическим введением. Применение таких сред и средств для фармацевтически активных веществ хорошо известно в настоящей области техники. За исключением случаев, когда какая-либо общепринятая среда или средство являются несовместимыми с активным соединением, предусмотрено их применение в композициях. Дополнительные активные соединения также могут быть введены в композиции.
Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению составлен так, чтобы являться совместимой со своим путем введения. Примеры путей введения включают в себя парентеральный, на
- 15 045313 пример, внутривенный, интрадермальный, подкожный, пероральный (например, ингаляция), трансдермальный (местный) и трансмукозальный. Кроме того, может являться желательным введение терапевтически эффективного количества фармацевтической композиции локально в область, нуждающуюся в лечении. Это можно достичь, например, путем локальной или региональной инфузии или перфузии во время операции, местного нанесения, инъекции, катетера, суппозитория или имплантата (например, имплантатов, образованных из пористых, непористых или гелеобразных материалов, включая в себя мембраны, такие как силастиковые мембраны или волокна), и подобное. Согласно другому варианту осуществления терапевтически эффективное количество фармацевтической композиция доставляют в такой везикуле, как липосомы (см., например, Langer, Science 249:1527-33, 1990 и Treat et al., в Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez Berestein and Fidler (eds.), Liss, N.Y., pp. 353-65, 1989).
Согласно другому варианту осуществления терапевтически эффективное количество фармацевтической композиции можно доставить в системе контролируемого высвобождения. Согласно одному примеру можно использовать насос (см., например, Langer, Science 249:1527-33, 1990; Sefton, Crit. Rev. Biotned. Eng. 14:201-40, 1987; Buchwald et al., Surgery 88:507-16, 1980; Saudek et al., N. Engl. J. Med. 321:574-79, 1989). Согласно другому примеру можно использовать полимерные материалы (см., например, Levy et al., Science 228:190-92, 1985; During et al., Ann. Neurol. 25:351-56, 1989; Howard et al., J. Neurosurg. 71:105-12, 1989). Также можно использовать другие системы контролируемого высвобождения, такие как обсуждаемые Langer (Science 249:1527-33, 1990).
Растворы или суспензии, используемые для парентерального, интрадермального или подкожного введения могут включать в себя следующие компоненты: такой стерильный разбавитель, как вода для инъекций, изотонический физиологический раствор, нелетучие масла, полиэтиленгликоли, глицерин, пропиленгликоль или другие синтетические растворители; такие антибактериальные средства, как бензиловый спирт или метилпарабены; такие антиоксиданты, как аскорбиновая кислота или бисульфит натрия; такие хелатирующие средства, как этилендиаминтетрауксусная кислота; такие буферы, как ацетаты, цитраты или фосфаты, и средства для регулирования тоничности, такие как хлорид натрия или декстроза. рН можно довести с помощью кислот или оснований, таких как соляная кислота или гидроксид натрия. Парентеральный препарат может содержаться в ампулах, одноразовых шприцах или содержащих многократные дозы флаконах, изготовленных из стекла или пластика.
Фармацевтические композиции, подходящие для инъекций, включают в себя стерильные водные растворы (если они растворимы в воде) или дисперсии и стерильные порошки для получения стерильных инъекционных растворов или дисперсий для немедленного приема. Для внутривенного введения подходящие носители включают в себя физиологический солевой раствор, бактериостатическую воду, Cremophor ETA(BASF; Parsippany, NJ) или фосфатно-солевой буфер (PBS). Во всех случаях композиция должна являться стерильной и должна быть жидкой до той степени, чтобы существовала возможность легкого введения через шприц. Она должна быть стабильной при условиях производства и хранения, и необходимо предохранить ее от загрязняющего действия таких микроорганизмов, как бактерии и грибы. Носитель может представлять собой растворитель или дисперсионную среду, содержащую, например, воду, этанол, многоатомный спирт (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль и подобное), и их подходящие смеси. Соответствующую текучесть можно поддержать, например, с использованием оболочки, такой как лецитин, путем поддержания требуемого размера частиц в случае дисперсии и с использованием поверхностно-активных веществ. Профилактику действия микроорганизмов можно достичь с помощью различных антибактериальных и противогрибковых средств, например, парабенов, хлорбутанола, фенола, аскорбиновой кислоты, тиомерсала и подобного. Во многих случаях предпочтительным является включение в композицию изотонических средств, например, Сахаров, многоатомных спиртов, таких как маннит, сорбит, хлорид натрия. Пролонгированную абсорбцию инъекционных композиций можно обеспечить путем включения в композицию средства, которое замедляет абсорбцию, например, моностеарата алюминия и желатина.
Стерильные инъекционные растворы можно получать путем введения активного соединения в требуемом количестве в соответствующий растворитель с одним или комбинацией ингредиентов, перечисленных выше, при необходимости, с последующей стерилизацией фильтрованием. Как правило, дисперсии получают с помощью введения активного соединения в стерильный носитель, который содержит основную дисперсионную среду и другие необходимые ингредиенты, из перечисленных выше. В случае стерильных порошков для получения стерильных инъекционных растворов предпочтительные способы получения представляют собой вакуумную сушку и лиофилизацию, что дает на выходе порошок активного ингредиента вместе с любым дополнительным требуемым ингредиентом из его ранее стерилизованного фильтрованием раствора.
Для введения с помощью ингаляции соединения доставляют в форме аэрозольного спрея из контейнера под давлением или дозатора, который содержит подходящий пропеллент, например, такой газ, как диоксид углерода, или ингалятор.
Системное введение можно осуществить с помощью трансмукозальных или трансдермальных средств. Для трансмукозального или трансдермального введения пенетранты, соответствующие тому барьеру, который необходимо преодолеть, используют в составе. Такие пенетранты, как правило, извест- 16 045313 ны в настоящей области техники, и включают в себя, например, для трансмукозального введения детергенты, соли желчных кислот и производные фузидовой кислоты. Трансмукозальное введение можно осуществить посредством применения назальных спреев или суппозиториев. Для трансдермального введения активные соединения вводят в состав мазей, бальзамов, гелей или кремов, как правило, известных в настоящей области техники. Соединения также можно получить в форме суппозиториев (например, с такими общепринятыми основами для суппозиториев, как масло какао и другие глицериды) или клизмы с удержанием для ректальной доставки.
Согласно одному варианту осуществления активные соединения получают вместе с носителями, которые будут защищать соединение от быстрого выведения из организма, такими как состав контролируемого высвобождения, включая в себя имплантаты и микроинкапсулированные системы доставки. Можно использовать биоразлагаемые, биосовместимые полимеры, такие как этиленвинилацетат, полиангидриды, полигликолевая кислота, коллаген, сложные полиортоэфиры и полимолочная кислота. Способы получения таких составов будут очевидны специалистам в настоящей области техники. Материалы также можно получить коммерчески от Alza Corporation и Nova Pharmaceuticals, Inc. Липосомные суспензии (включая в себя липосомы, нацеленные на инфицированные клетки с помощью моноклональных антител к вирусным антигенам) также можно использовать в качестве фармацевтически приемлемых носителей. Их можно получать согласно способам, известным специалистам в настоящей области техники, например, как описано в патенте США № 4522811.
Особенно предпочтительным является введение пероральных или парентеральных композиций в состав формы дозированных единиц для простоты введения и однородности дозировки. Форма дозированных единиц, используемая в настоящем документе, относится к физически дискретным единицам, приемлемым в качестве однократных дозировок для субъекта, подлежащего лечению с помощью каждой единицы, содержащей заданное количество активного соединения, рассчитанное так, чтобы производить требуемый терапевтический эффект, в сочетании с требуемым фармацевтическим носителем. Характеристики форм дозированных единиц согласно настоящему изобретению продиктованы и напрямую зависят от уникальных характеристик активного соединения и конкретного терапевтического эффекта, которого необходимо достичь, и ограничений, присущих области техники получения соединений, таких функциональное соединение для лечения индивидуумов.
Фармацевтические композиции могут содержаться в контейнере, упаковке или дозаторе вместе с инструкциями по введению.
iv. Наборы.
Используемый в настоящем документе набор содержит слитый белок IL-2/IL-2Ra для применения в модулировании иммунного ответа, согласно проведенному в другом месте в настоящем документе описанию. Предусмотрено, что используемые в настоящем документе термины набор и система относятся по меньшей мере к одному или нескольким слитым белкам IL-2/IL-2Ra, которые согласно конкретным вариантам осуществления находятся в комбинации с одним или несколькими типами элементов или компонентов (например, другие типы биохимических реагентов, контейнеры, упаковки, такие как упаковка, предусмотренная для коммерческого масштаба, инструкции по применению и подобное).
V. Идентичность последовательностей.
Как описано выше, предусмотрены активные варианты и фрагменты слитых белков IL-2/IL-2Ra или полинуклеотида, кодирующего их, включая в себя различные компоненты слитого белка IL-2/IL2Ra. Такие компоненты включают в себя IL-2, внеклеточный домен IL-2Ra, линкерные последовательности или последовательность Kozak. Активность, сохраняемую активным вариантом или фрагментом слитого белка или данного компонента слитого белка, обсуждают более подробно в другом месте в настоящем документе.
Такие варианты могут характеризоваться по меньшей мере 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью последовательности относительно данного эталонного полипептида или полинуклеотида. Фрагмент может содержать по меньшей мере 10, 20, 30, 50, 75, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1500, 2000 непрерывных нуклеотидов данной эталонной нуклеотидной последовательности или вплоть до полной длины данной нуклеотидной эталонной последовательности; или фрагмент может содержать по меньшей мере 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 75, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200 непрерывных аминокислот или вплоть до полной длины данной эталонной полипептидной последовательности.
Используемый в настоящем документе термин идентичность последовательности или идентичность в контексте двух полинуклеотидов или полипептидных последовательностей делает ссылку на остатки в двух последовательностях, которые являются одинаковыми при выравнивании для максимального соответствия в заданном окне сравнения. Если используют процентное отношение идентичности последовательностей со ссылкой на белки, принято, что положения остатков, которые не являются идентичными, часто отличаются на консервативные аминокислотные замены, при которых аминокислотные остатки заменены другими аминокислотными остатками со сходными химическими свойствами (например, заряд или гидрофобность), и, следовательно, они не изменяют функциональные свойства молекулы.
- 17 045313
Если последовательности отличаются на консервативные замены, процентное отношение идентичности последовательности можно увеличить, чтобы скорректировать относительно консервативной природы замены. Считают, что последовательности, которые отличаются на такие консервативные замены, характеризуются сходством последовательностей или сходством. Средства для осуществления такой корректировки хорошо известны специалистам в настоящей области техники. Как правило, они предусматривают присвоение балла консервативной замене как частичному несовпадению, а не полному, тем самым увеличивая процентное отношение идентичности последовательности. Таким образом, например, если идентичной аминокислоте присваивают балл 1, а неконервативной замене присваивают балл 0, консервативной замене присваивают балл от 0 до 1. Баллы консервативных замен рассчитывают, например, как предусмотрено в программе PC/GENE (Intelligenetics, Маунтин-Вью, Калифорния).
Используемый в настоящем документе термин процентное отношение идентичности последовательности означает величину, определяемую путем сравнения двух оптимально выровненных последовательностей в пределах окна сравнения, причем часть полинуклеотидной последовательности в окне сравнения может содержать вставки или делеции (т.е. пробелы) по сравнению с эталонной последовательностью (которая не содержит вставки или делеции) для оптимального выравнивания двух последовательностей. Процентное отношение рассчитывают путем определения числа положений, в которых идентичное нуклеиновокислотное основание или аминокислотный остаток присутствуют в обеих последовательностей для получения числа совпадающих положений, деля числа совпадающих положений на общее число положений в окне сравнения, и умножая результат на 100 для получения процентного отношения идентичности последовательностей.
Если не указано иное, предусмотренные в настоящем документе значения идентичности/сходства последовательностей относятся к значению, полученному с использованием GAP версии 10 с использованием следующих параметров: % идентичности и % сходства для нуклеотидной последовательности с использованием штрафа за открытие делеции, составляющим 50, и штрафа за удлинение делеции, составляющего 3, и матрицы замен nwsgapdna.cmp; % идентичности и % сходства для аминокислотной последовательности с использованием штрафа за открытие делеции, составляющим 8, и штрафа за удлинение делеции, составляющего 2, и матрицы замен BLOSUM62; или любой эквивалентной ей программы. Под эквивалентной программой подразумевают любую программу сравнения последовательностей, которая для любых двух исследуемых последовательностей образует выравнивание, характеризующееся идентичными совпадениями нуклеотидов или аминокислотных остатков и идентичным процентным отношением идентичности последовательности по сравнению с соответствующим выравниванием, созданным с помощью GAP версии 10.
Используемые в настоящем документе формы единственного числа включают в себя ссылки на формы множественного числа, если только в контексте ясно не указано иное. Аналогично, подразумевают, что слово или включает в себя и, если только в контексте ясно не указано иное. Кроме того, следует понимать, что все размеры оснований или размеры аминокислот и все значения молекулярного веса или молекулярной массы, приведенные для нуклеиновых кислот или полипептидов, являются приблизительными и предусмотрены для описания.
Объект настоящего раскрытия дополнительно проиллюстрирован следующими неограничивающими примерами.
Экспериментальная часть
IL-2 представляет собой биологическое средство, которое использовали в попытках стимулировать иммунные ответы у пациентов со злокачественными опухолями и ВИЧ/СПИД. В последнее время пониженные дозы IL-2 использовали для селективной стимуляции толерантности для подавления нежелательных иммунных ответов, связанных с похожей на аутоиммунную атакой собственных тканей. Важно, что эти пониженные дозы IL-2 не продемонстрировали никаких признаков усиления или повторной активации аутореактивных Т-клеток. Тем не менее, IL-2 характеризуется важными недостатками в качестве терапевтического средства, включая в себя очень короткий период полужизни in vivo, который ограничивает его эффективность, и токсичность в высоких дозах. По этим причинам необходимы новые биологические средства на основе IL-2, характеризующиеся улучшенной фармакокинетикой и продолжительностью ответов для применения 1) в терапии на основе низких доз IL-2 для стимуляции регуляторных Тклеток (Treg) и иммунной толерантности и 2) в адъювантной терапии с помощью повышенных доз для стимуляции иммунных ответов и памяти. Для достижения указанных целей разработали слитые белки IL-2/IL-2Ra, причем указанные слияния разработали для увеличения доступности IL-2 путем увеличения стойкой стимуляции IL-2 несущих IL-2R лимфоцитов in vivo. Указанные слияния состоят из следующих сконструированных белков (фиг. 1): 1) лидерная последовательность IL-2, которая содержит оптимизированную последовательность Kozak для эффективной трансляции; 2) полноразмерная последовательность IL-2; 3) глициновая или глицин/сериновая линкерная последовательность изменяющейся длины; 4) кодирующая последовательность экспрессированного внеклеточного домена IL-2Ra; 5) глициновый спейсер из 2 аминокислот; 6) полигистидиновая область из шести аминокислот для очистки; и 7) два терминирующих кодона. Расчетные белковые последовательности из указанных кДНК мыши и человека
- 18 045313 показаны для слитых белков IL-2/(GlySer)/IL-2Ra на фиг. 2А и 2В, соответственно. Указанные кДНК клонировали экспрессионный вектор в pClneo и использовали для экспрессии указанных слитых белков в клетках COST. Анализ культуральных супернатантов показал, что каждый мышиный слитый белок проявлял биоактивность IL-2 in vitro, при этом оптимальная активность связана со слитым белком IL2/(Gly3Ser)3/IL-2Ra (фиг. 3А). Соответственно, включение антитела к IL-2 в указанный биоанализ полностью ингибировало пролиферацию (фиг. 3В). Большие количества IL-2/(Gly3Ser)3/IL-2Ra и IL2/(Gly4Ser)4/IL-2Ra получали после экспрессии в клетках СНО и очищения с помощью аффинной хроматографии посредством связывания метки 6х His слитого белка с иммобилизированным никелем. Мышиный слитый белок IL-2/(Gly3Ser)3/IL-2Ra показал большую биоактивность IL-2, чем IL-2/(Gly4Ser)4/IL2Ra (фиг. 4А) даже несмотря на то, что оба слитых белка аналогично ингибировали связывание двух антител к IL2Ra (PC61 и 7D4) (фиг. 4В) с клетками, экспрессирующими IL-2Ra, подтверждая большую активность IL-2 в ассоциации с первым слитым белком. Ингибирование связывания РС61 и 7D4 также указывает на то, что часть IL-2Ra слитого белка сохраняла достаточную третичную структуру для связывания указанных антител. Тем не менее, указанные слитые белки не ингибировали связывание моноклонального антитела (3С7), направленно на сайт связывания IL-2 IL-2Ra, с клетками, экспрессирующими IL-2Ra. Этот результат показывает, что IL-2 в слитом белке IL-2/IL-2Ra находится пространственно близко к сайту связывания IL-2Ra (фиг. 5). Анализ вестерн-блоттинг указанных слитых белков показал, что IL-2/IL-2Ra составлял 55-65 кДа, с несколько большей подвижностью при невосстанавливающем условии, и что он являлся приблизительно на 15 кДа больше, чем наблюдалось для растворимого IL-2Ra (фиг. 6А). Соответственно, прямой анализ очищенного мышиного IL-2/(Gly3Ser)3/IL-2Ra с помощью SDS-PAGE соответствовал гетерогенному мономерному белку 55-65 кДа (фиг. 6В), что представляет собой расчетный размер для слитой молекулы IL-2 (15 кДа) и IL-2Ra (40-50 кДа) (фиг. 6), где IL-2Ra показывал гетерогенность размера вследствие обширного вариабельного гликозилирования (Malek and Korty, I Immunol. 136:4092-4098, 1986). Немедленное следствие IL-2-зависимой передачи сигнала представляет собой фосфорилирование тирозина STATS (pSTATS). Лечение мышей с помощью мышиного IL-2/(Gly3Ser)3/IL-2Ra привело к обширной и селективной активации pSTATS в Treg через 30 мин после лечения (фиг. 7). Исследования зависимости ответа от дозы показали, что мышиный IL-2/(Gly3Ser)3/IL2Ra влиял на число ключевых активностей Treg in vivo (фиг. 8). Указанные эффекты на Treg включали в себя следующее: увеличенная репрезентация (фиг. 8А) и количество (не показано) Treg в CD4+ Тклеточном компартменте; положительная регуляция IL-2-зависимого CD25 (фиг. 8В); увеличенная пролиферация, что оценивали по экспрессии пролиферативного маркера Ki67 (фиг. 8С); и увеличенная фракция IL-2-зависимого терминально-дифференцированного подкласса Treg Klrgl+ (фиг. 8D). Указанные эффекты являлись наиболее выраженными для Treg в селезенке и воспаленной поджелудочной железе не страдающих ожирением диабетических мышей (NOD). 1000 единиц активности IL-2 согласно измерению в стандартном биоанализе CTLL IL-2, ассоциированной с IL-2/(Gly3Ser)3/IL-2Ra, показали сниженные, но легко измеряемые эффекты на Treg (фиг. 8). Мышей C57/BL6, получивших лечение с помощью IL-2/(Gly3Ser)3/IL-2Ra (2000 единиц активности IL-2) сравнивали с мышами, которые получали рекомбинантный IL-2 (25000 единиц) или агонистические комплексы IL-2/антитело к IL-2 (IL2/IC) (10000 единиц активности IL-2) (фиг. 9). IL-2/(Gly3Ser)3/IL-2Ra являлся намного более эффективным, чем рекомбинантный IL-2, и немного более эффективным, чем IL2/IC в индукции стойкого усиления Treg и связанных свойств (фиг. 9). Указанные увеличения толерогенных Treg происходили при 5- и 12,5кратных пониженных уровнях активности IL-2 по сравнению с IL2/IC и рекомбинантным IL-2, соответственно. Рассматривая IL-2-зависимую активацию pSTAT5 в Treg напрямую ex vivo (фиг. 9), указанные данные позволяют предположить, что биологический период полужизни составлял приблизительно 72 ч для IL-2/IL-2Ra. Преддиабетических мышей NOD подвергали короткому курсу лечения с помощью низких количеств IL-2/IL-2Ra (фиг. 10). Отсрочку возникновения диабета наблюдали у тех мышей, которые получали лечение с помощью 800 Ед активности IL-2, связанной с IL-2/IL-2Ra. В отношении иммунитета применение однократной высокой дозы IL-2/(Gly3Ser)3/IL-2Ra (12000 Ед активности IL-2) также впоследствии стимулировало CD8+ Т-клеточные ответы, особенно длительно живущие клетки памяти (фиг. 11). Вначале после иммунизации (28 день) CD44hi CD621|0 CD127hi клетки эффекторной памяти (ЕМ) доминировали в пуле клеток памяти; тем не менее, с течением времени CD44hi CD62Lhi CD127hi клетки центральной памяти (СМ) увеличивались и клетки СМ доминировали в пуле памяти чрез 202 дней после иммунизации (фиг. 12). Таким образом, IL-2/(Gly3Ser)3/IL-2Ra функционирует аналогичным рекомбинантному IL-2 образом со стимуляцией толерогенных и подавляющих иммунитет Treg и иммунитета посредством увеличения ответов эффекторных Т-клеток памяти, но он проявляет улучшенную фармакокинетику путем доставки таких ответов: 1) при пониженных эффективных уровнях активности IL-2; 2) с более стойкими биологическими ответами; и 3) сохраняя иерархию с Treg, чувствительными к более низким дозам, чем эффекторные Т-клетки памяти. Указанные данные поддерживают представление о том, что слитые белки IL-2/IL-2Ra представляют улучшенный и новый класс лекарственных средств для доставки активности IL-2 для селективной стимуляции иммунной толерантности или иммунной памяти
- 19 045313 при введении в правильной дозе и согласно правильной схеме.
Кроме того, получают слитые белки IL-2/IL-2Ra, которые содержат IL-2 человека и IL-2Ra человека (фиг. 1, фиг. 2В). Указанные кДНК экспрессировали в клетках СНО и секретированные слитые белки очищали на аффинной хроматографии с использованием никеля на основе метки 6х-His. Слитые белки варьировали по длине глицин/сериновых линкеров аналогично тем, которые использовали для мышиных IL-2/IL-2Ra. Все 4 полученных слитых белка IL-2/IL-2Ra человека проявляли биоактивность IL-2 с использованием анализа мышиного CTLL (фиг. 13А). Анализ вестерн-блоттинг подтвердил, что IL-2/IL2Ra человека также показал гетерологичную полосу между 55-60 кДа (фиг. 13В), что согласуется с высокогликозилированными молекулами, предполагаемыми для IL-2, связанного с IL-2Ra. Слитые белки IL-2/IL-2Ra с (G3S)3 и особенно (G4S)4 линкерами могут характеризоваться большей активностью, поскольку наблюдалось меньше слитого белка, даже если эквивалентное количество активности IL-2 загружали на каждую дорожку (фиг. 13В). Способность слитого белка ингибировать связывание моноклональных антител к IL-2Ra, M-A257 и ВС96, с клетками, несущими IL-2Ra человека, указывает на то, что IL-2Ra слитого белка сохранял достаточную третичную структуру для связывания с указанными антителами (фиг. 14). Тем не менее, указанные слитые белки лишь частично ингибировали связывание моноклонального антитела (ВС96), направленного на сайт связывания IL-2 IL-2Ra, указывая на то, что IL-2 в слитом белке IL-2/IL-2Ra расположен пространственно близко к сайту связывания IL-2Ra. Более того, авторы настоящего изобретения оценили специфическую активность слитых белков IL-2/IL-2Ra мыши и человека, содержащих линкер (G3S)3, составляющую 80 и 2000 пМ, соответственно, для 1 Ед/мл биоактивности IL-2. Указанные значения намного превышают активность рекомбинантного IL-2, которая составляет 10 пМ для 1 Ед/мл. Различие в активностях между IL-2/IL-2Ra человека и мыши по меньшей мере частично объясняют относительной неэффективностью слитого белка человека в поддержании пролиферации мышиных клеток CTLL в биоанализе по сравнению с мышиными слитыми белками или рекомбинантным IL-2 мыши и человека (не показано). Указанные относительно низкие специфические активности и результаты блокирования антитела (фиг. 5 и 12) указывают на возможность существования специфического внутримолекулярного взаимодействия между IL-2 и IL-2Ra в пределах слитого белка, которое ограничивает количество IL-2 в слитом белке для стимуляции клеток, несущих IL-2R. Для прямого анализа этой точки зрения два остатка аргинина в сайте связывания IL-2 IL-2Ra человека (см. Robb et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85:5654-5658, 1988) подвергали мутации до треонина и серина. Авторы настоящего изобретения обнаружили намного большую биоактивность, связанную с указанными мутантными слитыми белками IL-2R (фиг. 15); оценили, что специфическая активность мутированных слитых белков IL-2/IL-2Ra составляла приблизительно 5 пМ для 1 Ед/мл активности IL-2, значения, очень сходного с рекомбинантным IL-2. Таким образом, эти данные указывают на то, что IL-2/IL-2Ra человека является биологически активным, и полагают, что одним специфическим механизмом действия, который обуславливает пролонгированную активность IL-2 в указанных слитых белках, является конкурентное взаимодействие между фрагментом IL-2 с областью связывания IL-2 IL-2Ra слитого белка и с клетками, которые экспрессируют IL-2R.
- 20 045313
Таблица 1
Краткое раскрытие последовательностей
SEQID NO 1 | АА/ NT АА | Источник Человек | Описание Непроцессированный [L-2- | Регистрационный номер GenBank ААВ46883 IL-2 myrmqllsci alslalvtns aptssstkkt qIqlehHid Iqmilnginn yknpkltrmltfkfympkka telkhlqcle eelkpleevl nlaqsknfh 1 rprdlisnin vivlelkgsettfmceyade tativeflnr witfcqsiis tit |
2 | АА | Человек | [L-2 - зрелая форма | GenBank AAB46883 с удаленными первыми 20 aa aptssstkkt qlqlehllld Iqmilnginn yknpkltrmltfkfympkka telkhIqcle eelkpleevl nlaqsknfh 1 rprdhsnm vivlelkgse ttfmceyade tativeflnr witfcqsiis tit |
3 | АА | Мышь | Непроцессированный Ш-2 | Регистрационный номер P04351 MYSMQLASCV TLTLVLLVNS APTSSSTSSS TAEAQQQQQQ QQQQQQHLEQ LLMDLQELLS RMENYRNLKL PRMLTFKFYL PKQATELKDL QCLEDELGPL RHVLDLTQSK SFQLEDAENF ISNIRVTVVK LKGSDNTFEC QFDDESATVV DFLRRWIAFC QSIISTSPQ |
4 | АА | Мышь | Зрелая форма IL-2 | Зрелая форма регистрационного номера Р04351 APTSSSTSSS TAEAQQQQQQ QQQQQQHLEQ LLMDLQELLS RMENYRNLKL PRMLTFKFYL PKQATELKDL QCLEDELGPL RHVLDLTQSK SFQLEDAENF ISNIRVTVVK LKGSDNTFEC QFDDESATVV DFLRRWIAFC QSIISTSPQ |
5 | АА | Человек | Непроцессированная форма IL-2Ra | Регистрационный номер Genebank NP_000408 1 mdsyllmwgl Itfimvpgcq aelcdddppe iphatfkama ykegtmlnce ckrgfmksgslymlctgn sshsswdnqc qctssatrnt tkqvtpqpee qkerkttemq spmqpvdqaslpghcreppp weneateriy hfvvgqmvyy qcvqgyralh rgpaesvckm thgktrwtqpqhctgemet sqfpgeekpq aspegrpese tsclvtttdf qiqtemaatm etsiftteyqvavagcvfll isvlllsglt wqrrqrksrr ti |
б | АА | Человек | Зрелая форма IL-2Ra | Первые 1-21 АА, удаленные из NP_000408 1 elcdddppe iphatfkama ykegtmlnce ckrgfmksgslymlctgn sshsswdnqc qctssatrnt tkqvtpqpee qkerkttemq spmqpvdqas Ipghcreppp weneateriy hfvvgqmvyy qcvqgyralh rgpaesvckm thgktrwtqpqhctgemet sqfpgeekpq aspegrpese tsclvtttdf qiqtemaatm etsiftteyqvavagcvfll isvlllsglt wqrrqrksrr ti |
7 | АА | Человек | Зрелая форма внеклеточного цомена IL-2Ra | ELCDDDPPEIPHATFKAMAYKEGTMLNCECKRGFRRIKSGSLYMLCTGN SSHSSWDNQCQCTSSATRNTTKQVTPQPEEQKERKTTEMQSPMQPVD QASLPGHCREPPPWENEATERIYHFVVGQMVYYQCVQGYRALHRGPA ESVCKMTHGKTRWTQPQLICTGEMETSQFPGEEKPQASPEGRPESETS CLVTTTD FQIQTE Μ AATM ETS1FTTEYQ |
8 | АА | Мышь | Непроцессированная форма IL-2Ra | Регистрационный номер NP_032393 3 meprllmlgf Isltivpscr aelclydppe vpnatfkals ykngtilnce ckrgfrrlkelvymrclgns wssncqctsn shdksrkqvt aqlehqkeqq tttdmqkptq smhqenltghcrepppwkhe dskriyhfve gqsvhyecip gykalqrgpa isickmkcgktgwtqpqltcvderehhrfl aseesqgsrn sspesetscp itttdfpqpt ettamtetfv Itmeykvavasclfllisil 1 Isgltwqhr wrksrrti |
9 | АА | Мышь | Зрелая форма IL-2Ra | aa 1-21, удаленные из регистрационного номера NP_032393 3 elclydppe vpnatfkals ykngtilnce ckrgfrrlke Ivymrclgns wssncqctsn shdksrkqvt aqlehqkeqq tttdmqkptq smhqenltgh crepppwkhe dskriyhfve gqsvhyecip gykalqrgpa isickmkcgk tgwtqpqltc vderehhrfl aseesqgsrn sspesetscp itttdfpqpt ettamtetfv Itmeykvava sclflhsil llsgltwqhr wrksrrti |
- 21 045313
10 | AA | Мышь | Зрелая форма внеклеточного домена IL-2Ra | elclydрре vpnatfkals ykngti 1 псе ckrgfrrlke Ivymrclgns wssncqctsn shdksrkqvt aqlehqkeqq tttdmqkptq smhqenltgh crepppwkhe dskriyhfve gqsvhyecip gykalqrgpa isickmkcgktgwtqpqltc vderehhrfl aseesqgsrn sspesetscp itttdfpqpt ettamtetfv Itmeyk |
11 | AA | линкер (Gly3Ser)4 | GGGSGGGSGGGSGGGS | |
12 | AA | линкер (Gly3Ser)2 | GGGSGGGS | |
13 | AA | линкер (Gly3Ser)3 | GGGSGGGSGGGS | |
14 | AA | (Gly3Ser)5 | GGGSGGGSGGGSGGGSGGGS | |
15 | AA | линкер Gly3 | GGG | |
16 | AA | Мышь | Зрелая форма IL-2 (Gly4Ser)4внеклеточный домен [L-2Ra | APTSSSTSSSTAEAQQQQQQQQQQQQH LEQLLM DLQELLSRM ENYRN LKLPRMLTFKFYLPKQATELKDLQCLEDELGPLRHVLDLTQSKSFQLEDAE NFISNIRVTVVKLKGSDNTFECQFDDESATVVDFLRRWIAFCQSIISTSPQ GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSELCLYDPPEVPNATFKALSYKNGTILNC ECKRGFRRLKELVYMRCLGNSWSSNCQCTSNSHDKSRKQVTAQLEHQK EQQTTTDMQKPTQSMHQENLTGHCREPPPWKHEDSKRIYHFVEGQSV HYECIPGYKALQRGPAISICKMKCGKTGWTQPQLTCVDEREHHRFLASE ESQGSRNSSPESETSCPITTTDFPQPTETTAMTETFVLTMEYK |
17 | AA | Мышь | Непроцессированная форма IL-2 (Gly4Ser)4внеклеточный домен [L-2Ra | MDSMQLASCVTLTLVLLVNSAPTSSSTSSSTAEAQQQQQQQQQQQQH LEQLLMDLQELLSRMENYRNLKLPRMLTFKFYLPKQATELKDLQCLEDEL GPLRHVLDLTQSKSFQLEDAENFISNIRVTVVKLKGSDNTFECQFDDESA FVVDFLRRWIAFCQSIISTSPQGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSELCLYDP PEVPNATFKALSYKNGTILNCECKRGFRRLKELVYMRCLGNSWSSNCQC FSNSHDKSRKQVTAQLEHQKEQQTTTDMQKPTQSMHQENLTGHCRE PPPWKHEDSKRIYHFVEGQSVHYECIPGYKALQRGPAISICKMKCGKTG WTQPQLTCVDEREH HRFLASE ESQGSRNSSPESETSCPITTTDFPQPTET FAMTETFVLTMEYK |
18 | AA | Мышь | Зрелая форма IL-2 (Gly4Ser)5внеклеточный домен IL-2 Ra | APTSSSTSSSTAEAQQQQQQQQQQQQH LEQLLM DLQELLSRM ENYRN LKLPRMLTFKFYLPKQATELKDLQCLEDELGPLRHVLDLTQSKSFQLEDAE NFISNIRVTVVKLKGSDNTFECQFDDESATVVDFLRRWIAFCQSIISTSPQ GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSELCLYDPPEVPNATFKALSYKN GTILNCECKRGFRRLKELVYMRCLGNSWSSNCQCTSNSHDKSRKQVTAQLE HQKEQQTTTDMQKPTQSMHQENLTGHCREPPPWKHEDSKRIYHF VEGQSVHYECIPGYKALQRGPAISICKMKCGKTGWTQPQLTCVDEREH HRFLASEESQGSRNSSPESETSCPITTTDFPQPTETTAMTETFVLTMEYK |
19 | AA | Мышь | Непроцессированная форма IL-2 (Gly4Ser)5внеклеточный домен [L-2Ra | MDSMQLASCVTLTLVLLVNSAPTSSSTSSSTAEAQQQQQQQQQQQQH LEQLLMDLQELLSRMENYRNLKLPRMLTFKFYLPKQATELKDLQCLEDEL GPLRHVLDLTQSKSFQLEDAENFISNIRVTVVKLKGSDNTFECQFDDESA FVVDFLRRWIAFCQSIISTSPQGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSE LCLYDPPEVPNATFKALSYKNGTILNCECKRGFRRLKELVYMRCLGNSWS SNCQCTSNSHDKSRKQVTAQLE HQKEQQTTTDMQKPTQSMHQENLT GHCREPPPWICHEDSKRIYHFVEGQSVHYECIPGYKALQRGPAISICKMKC GKTGWTQPQLTCVDEREHHRFLASEESQGSRNSSPESETSCPITTTDFPQ PTETTAMTETFVLTMEYK |
20 | AA | Мышь | Зрелая форма IL-2 (Gly3Scr)4внеклеточный домен [L-2Ra | APTSSSTSSSTAEAQQQQQQQQQQQQH LEQLLM DLQELLSRM ENYRN LKLPRMLTFKFYLPKQATELKDLQCLEDELGPLRHVLDLTQSKSFQLEDAE NFISNIRVIVVKLKGSDNTFECQFDDESATVVDFLRRWIAFCQSIISTSPQ GGGSGGGSGGGSGGGSELCLYDPPEVPNATFKALSYKNGTILNCECKRG FRRLKELVYMRCLGNSWSSNCQCTSNSHDKSRKQVTAQLEHQKEQQTT FDMQKPTQSMHQENLTGHCREPPPWKHEDSKRIYHFVEGQSVHYECIP GYKALQRGPAISICKMKCGKTGWTQPQLTCVDEREHHRFLASEESQGSR NSSPESETSCPITTTDFPQPTETTAMTETFVLTMEYK |
21 | AA | Мышь | Непроцессированная форма IL-2 (Gly3Ser)4внеклеточный домен [L-2Ra | MDSMQLASCVTLTLVLLVNSAPTSSSTSSSTAEAQQQQQQQQQQQQH LEQLLMDLQELLSRMENYRNLKLPRMLTFKFYLPKQATELKDLQCLEDEL GPLRHVLDLTQSKSFQLEDAENFISNIRVTVVKLKGSDNTFECQFDDESA FVVDFLRRWIAFCQSIISTSPQGGGSGGGSGGGSGGGSELCLYDPPEVP NATFKALSYKNGTILNCECKRGFRRLKELVYMRCLGNSWSSNCQCTSNS HDKSRKQVTAQLEHQKEQQTTTDMQKPTQSMHQENLTGHCREPPPW KHEDSKRIYHFVEGQSVHYECIPGYKALQRGPAISICKMKCGKTGWTQP |
- 22 045313
QLTCVDEREHHRFLASEESQGSRNSSPESETSCPITTTDFPQPTETTAMTE FFVLTMEYK | ||||
22 | AA | Человек | Зрелая форма [L-2 (Gly4Ser)4- внеклеточный домен [L-2Ra | APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKA FELKH LQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTF MCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLTGGGGSGGGGSGGGGSGGGG SELCDDDPPEIPHATFKAMAYKEGTMLNCECKRGFRRIKSGSLYMLCTG NSSHSSWDNQCQCTSSATRNTTKQVTPQPEEQKERKTTEMQSPMQPV DQASLPGHCREPPPWENEATERIYHFVVGQMVYYQCVQGYRALHRGP AESVCKMTHGKTRWTQPQLICTGEMETSQFPGEEKPQASPEGRPESET SCLVTITDFQ1QTEMAATMETSIFTTEYQ |
23 | AA | Человек | Непроцессированная форма IL-2 (Gly4Ser)4внеклеточный домен [L-2Ra | MDRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINN YKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHL RPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSELCDDDPPEIPHATFKAMAYKEGTML NCECKRGFRRIKSGSLYMLCTGNSSHSSWDNQCQCTSSATRNTTKQVT PQPEEQKERKTTEMQSPMQPVDQASLPGHCREPPPWENEATERIYHFV VGQMVYYQCVQGYRALHRGPAESVCKMTHGKTRWTQPQLICTGEME FSQFPGEEKPQASPEGRPESETSCLVTTTDFQIQTEMAATMETSIFTTEY Q |
24 | AA | Человек | Зрелая форма [L-2 (Gly3Ser)4- внеклеточный домен [L-2Ra | APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKA FELKH LQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTF MCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLTGGGSGGGSGGGSGGGSELCD DDPPEIPHATFKAMAYKEGTMLNCECKRGFRRIKSGSLYMLCTGNSSHS SWDNQCQCTSSATRNTTKQVTPQPEEQKERKTTEMQSPMQPVDQAS LPGHCREPPPWENEATERIYHFVVGQMVYYQCVQGYRALHRGPAESVC KMTHGKTRWTQPQLICTGEMETSQFPGEEKPQASPEGRPESETSCLVTT FDFQIQTEMAATMETSIFTTEYQ |
25 | AA | Человек | Непроцессированная форма IL-2 (Gly3Ser)4внеклеточный домен [L-2Ra | MDRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINN YKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHL RPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT GGGSGGGSGGGSGGGSELCDDDPPEIPHATFKAMAYKEGTMLNCECK RGFRRIKSGSLYMLCTGNSSHSSWDNQCQCTSSATRNTTKQVTPQPEE QKERKTTEMQSPMQPVDQASLPGHCREPPPWENEATERIYHFVVGQ MVYYQCVQGYRALHRGPAESVCKMTHGKTRWTQPQLICTGEMETSQF PGEEKPQASPEGRPESETSCLVTTTDFQIQTEMAATMETSIFTTEYQ |
26 | AA | Человек | Зрелая форма [L-2 (Gly3Ser)3внеклеточный домен IL-2Ra | APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKA FELKH LQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTF MCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLTGGGSGGGSGGGSELCDDDPP EIPHATFKAMAYKEGTMLNCECKRGFRRIKSGSLYMLCTGNSSHSSWD NQCQCTSSATRNTTKQVTPQPEEQKERKTTEMQSPMQPVDQASLPGH CREPPPWENEATERIYHFVVGQMVYYQCVQGYRALHRGPAESVCKMT HGKTRWTQPQLICTGEMETSQFPGEEKPQASPEGRPESETSCLVITTDF QIQTEMAATMETSIFTTEYQ |
27 | AA | Человек | Непроцессированная форма IL-2 (Gly3Ser)3внеклеточный домен IL-2Ra | MDRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINN YKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHL RPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT GGGSGGGSGGGSELCDDDPPEIPHATFKAMAYKEGTMLNCECKRGFRR 1 KSGSLYMLCTGNSSHSSWDNQCQCTSSATRNTTKQVTPQPEEQKE RKTTEMQSPMQPVDQASLPGHCREPPPWENEATERIYHFVVGQMVYYQC VQGYRALHRGPAESVCKMTHGKTRWTQPQLICTGEMETSQFPGEEKP QASPEGRPESETSCLVTTTDFQIQTEMAATMETSIFTTEYQ |
28 | NT | Человек | Лидерная оптимизированная последовательность Kozak IL-2 | gccaccATGGACAGGATGCAACTCCTGTCTTGCATTGCACTAAGTCTTG CACTTGTCACAAACAGT |
29 | NT | Мышь | Непроцессированная форма IL-2 (Gly4Ser)4внеклеточный домен IL-2Ra | ATGGACAGCATGCAGCTCGCATCCTGTGTCACATTGACACTTGTGCTC CTTGTCAACAGCGCACCCACTTCAAGCTCTACTTCAAGCTCTACAGCG GAAGCACAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCACCTGG AG CAGCTGTTGATGGACCTACAGGAGCTCCTGAGCAGGATGGAGAA nACAGGAACCTGAAACTCCCCAGGATGCTCACCTTCAAATTTTACTT GCCCAAGCAGGCCACAGAATTGAAAGATCTTCAGTGCCTAGAAGATG AACTTGGACCTCTGCGGCATGTTCTGGATTTGACTCAAAGCAAAAGC |
- 23 045313
rTTCAATTGGAAGATGCTGAGAATTTCATCAGCAATATCAGAGTAACT GTTGTAAAACTAAAGGGCTCTGACAACACATTTGAGTGCCAATTCGA TGATGAGTCAGCAACTGTGGTGGACnTCTGAGGAGATGGATAGCCT rCTGTCAAAGCATCATCTCAACAAGCCCTCAAggtggaggtggatctggtgg aggtggatcaggtggaggtggatccggtggaggtggatctGAACTGTGTCTGTATG ACCCACCCGAGGTCCCCAATGCCACATTCAAAGCCCTCTCCTACAAGA ACGGCACCATCCTAAACTGTGAATGCAAGAGAGGTTTCCGAAGACTA AAGGAATTGGTCTATATGCGTTGCTTAGGAAACTCCTGGAGCAGCAA CTGCCAGTGCACCAGCAACTCCCATGACAAATCGAGAAAGCAAGTTA CAGCTCAACTTGAACACCAGAAAGAGCAACAAACCACAACAGACATG CAGAAG CCAACACAGTCTATGCACCAAG AG AACCTTACAG GTCACTG CAG GGAGCCACCTCCTTGGAAACATGAAGATTCCAAGAGAATCTATC ATTTCGTGGAAGGACAGAGTGTTCACTACGAGTGTATTCCGGGATAC AAGGCTCACAGAGAGGTCCTGCTATTAGCATCTGCAAGATGAAGTG rGGGAAAACGGGGTGGACTCAGCCCCAGCTCACATGTGTAGATGAA AGAGAACACCACCGATTTCTGGCTAGTGAGGAATCTCAAGGAAGCA GAAATTCTTCTCCCGAGAGTGAGACTTCCTGCCCCATAACCACCACAG ACTTCCCACAACCCACAGAAACAACTGCAATGACGGAGACATTTGTG CTCACAATGGAGTATAAGGGTGGACATCACCATCACCATCACTAATA A | ||||
30 | NT | Мышь | Непроцессированная форма IL-2 (Gly3Ser)4внеклеточный домен IL-2 Ra | ATGGACAGCATGCAGCTCGCATCCTGTGTCACATTGACACTTGTGCTC CTTGTCAACAGCGCACCCACTTCAAGCTCTACTTCAAGCTCTACAGCG GAAGCACAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCACCTGG AGCAGCTGTTGATGGACCTACAGGAGCTCCTGAGCAGGATGGAGAA nACAGGAACCTGAAACTCCCCAGGATGCTCACCTTCAAATTTTACTT GCCCAAGCAGGCCACAGAATTGAAAGATCTTCAGTGCCTAGAAGATG AACTTGGACCTCTGCGGCATGTTCTGGATTTGACTCAAAGCAAAAGC rTTCAATTGGAAGATGCTGAGAATTTCATCAGCAATATCAGAGTAACT GTTGTAAAACTAAAGGGCTCTGACAACACATTTGAGTGCCAATTCGA rGATGAGTCAGCAACTGTGGTGGACTTTCTGAGGAGATGGATAGCCT rCTGTCAAAGCATCATCTCAACAAGCCCTCAAggtggaggttctggtggaggt tcaggtggaggttcgggtggaggttctGAACTGTGTCTGTATGACCCACCCGAG GTCCCCAATGCCACATTCAAAGCCCTCTCCTACAAGAACGGCACCATC CTAAACTGTGAATGCAAGAGAGGTTTCCGAAGACTAAAGGAATTGGT CTATATGCGTTGCTTAGGAAACTCCTGGAGCAGCAACTGCCAGTGCA CCAGCAACTCCCATGACAAATCGAGAAAGCAAGTTACAGCTCAACTT GAACACCAGAAAGAGCAACAAACCACAACAGACATGCAGAAGCCAA CACAGTCTATGCACCAAGAGAACCTTACAGGTCACTGCAGGGAGCCA CCTCCTTGGAAACATGAAGATTCCAAGAGAATCTATCATTTCGTGGAA GGACAGAGTGTTCACTACGAGTGTATTCCGGGATACAAGGCTCTACA GAGAGGTCCTGCTATTAGCATCTGCAAGATGAAGTGTGGGAAAACG GGGTGGACTCAGCCCCAGCTCACATGTGTAGATGAAAGAGAACACC ACCGATTTCTGGCTAGTGAGGAATCTCAAGGAAGCAGAAATTCTTCT CCCGAGAGTGAGACTTCCTGCCCCATAACCACCACAGACTTCCCACAA CCCACAGAAACAACTGCAATGACGGAGACATTTGTGCTCACAATGGA GTATAAGGGTGGACATCACCATCACCATCACTAATAA |
- 24 045313
31 | NT | Мышь | Непроцессированная форма IL-2 (Gly4Ser)5внеклеточный домен IL-2Ra | ATGGACAGCATGCAGCTCGCATCCTGTGTCACATTGACACTTGTGCTC CTTGTCAACAGCGCACCCACTTCAAGCTCTACTTCAAGCTCTACAGCG GAAGCACAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCACCTGG AGCAGCTGTTGATGGACCTACAGGAGCTCCTGAGCAGGATGGAGAA nACAGGAACCTGAAACTCCCCAGGATGCTCACCTTCAAATTTTACTT GCCCAAGCAGGCCACAGAATTGAAAGATCTTCAGTGCCTAGAAGATG AACTTGGACCTCTGCGGCATGTTCTGGATTTGACTCAAAGCAAAAGC nTCAATTGGAAGATGCTGAGAATTTCATCAGCAATATCAGAGTAACT GTTGTAAAACTAAAGGGCTCTGACAACACATTTGAGTGCCAATTCGA IGATGAGTCAGCAACTGTGGTGGACTTTCTGAGGAGATGGATAGCCT ICTGTCAAAGCATCATCTCAACAAGCCCTCAAggtggaggtggatcaggtgg aggtggatctggtggaggtggatcaggtggaggtggatccggtggaggtggatctGAAC 1GTGTCTGTATGACCCACCCGAGGTCCCCAATGCCACATTCAAAGCCC rCTCCTACAAGAACGGCACCATCCTAAACTGTGAATGCAAGAGAGGT nCCGAAGACTAAAGGAATTGGTCTATATGCGTTGCTTAGGAAACTC CTGGAGCAGCAACTGCCAGTGCACCAGCAACTCCCATGACAAATCGA GAAAGCAAGTTACAGCTCAACTTG AACACCAGAAAGAGCAACAAACC |
ACAACAGACATGCAGAAGCCAACACAGTCTATGCACCAAGAGAACCT lACAGGTCACTGCAGGGAGCCACCTCCTTGGAAACATGAAGATTCCA AGAGAATCTATCATTTCGTGGAAGGACAGAGTGTTCACTACGAGTGT ATTCCGGGATACAAGGCTCTACAGAGAGGTCCTGCTATTAGCATCTG CAAGATGAAGTGTGGGAAAACGGGGTGGACTCAGCCCCAGCTCACA 1GTGTAGATGAAAGAGAACACCACCGATTTCTGGCTAGTGAGGAATC rCAAGGAAGCAGAAATTCTTCTCCCGAGAGTGAGACTTCCTGCCCCA 1AACCACCACAGACTTCCCACAACCCACAGAAACAACTGCAATGACG GAGACATTTGTGCTCACAATGGAGTATAAGGGTGGACATCACCATCA CCATCACTAATAA | ||||
32 | NT | Человек | Непроцессированная форма IL-2 (Gly4Ser)4внеклеточный домен IL-2Ra | ATGGACAGGATGCAACTCCTGTCTTGCATTGCACTAAGTCTTGCACTT GTCACAAACAGTGCACCTACTTCAAGTTCTACAAAGAAAACACAGCT ACAACTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTGAATGGAAT lAATAATTACAAGAATCCCAAACTCACCAGGATGCTCACATTTAAGTT ITACATGCCCAAGAAGGCCACAGAACTGAAACATCTTCAGTGTCTAG AAGAAGAACTCAAACCTCTGGAGGAAGTGCTAAATTTAGCTCAAAGC AAAAACTTTCACTTAAGACCCAGGGACTTAATCAGCAATATCAACGTA ATAGTTCTGGAACTAAAGGGATCTGAAACAACATTCATGTGTGAATA rGCTGATGAGACAGCAACCATTGTAGAATTTCTGAACAGATGGATTA CCTTTTGTCAAAGCATCATCTCAACACTGACTggtggaggtggatctggtgga ggtggatcaggtggaggtggatccggtggaggtggatct GAGCTCTGTGACGATGACCCGCCAGAGATCCCACACGCCACATTCAA AGCCATGGCCTACAAGGAAGGAACCATGTTGAACTGTGAATGCAAGAG AGGTTTCCGCAGAATAAAAAGCGGGTCACTCTATATGCTCTGTAC AGGAAACTCTAGCCACTCGTCCTGGGACAACCAATGTCAATGCACAA GCTCTGCCACTCGGAACACAACGAAACAAGTGACACCTCAACCTGAA GAACAGAAAGAAAGGAAAACCACAGAAATGCAAAGTCCAATGCAGC CAGTGGACCAAGCGAGCCTTCCAGGTCACTGCAGGGAACCTCCACCA TGGGAAAATGAAGCCACAGAGAGAATTTATCATTTCGTGGTGGGGC AGATGGTTTATTATCAGTGCGTCCAGGGATACAGGGCTCTACACAGA GGTCCTGCTGAGAGCGTCTGCAAAATGACCCACGGGAAGACAAGGT GGACCCAGCCCCAGCTCATATGCACAGGTGAAATGGAGACCAGTCA GTTTCCAGGTGAAGAGAAGCCTCAGGCAAGCCCCGAAGGCCGTCCT GAGAGTGAGACTTCCTGCCTCGTCACAACAACAGATTTTCAAATACA GACAGAAATGGCTGCAACCATGGAGACGTCCATATTTACAACAGAGT ACCAGGGTGGACATCACCATCACCATCACTAATAA |
- 25 045313
33 | NT | Человек | Непроцессированная форма IL-2 (Gly3 Ser)4внеклеточный домен IL-2Ra | ATGGACAGGATGCAACTCCTGTCTTGCATTGCACTAAGTCTTGCACTT GTCACAAACAGTGCACCTACTTCAAGTTCTACAAAGAAAACACAGCT ACAACTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTGAATGGAAT FAATAATTACAAGAATCCCAAACTCACCAGGATGCTCACATTTAAGTT FTACATGCCCAAGAAGGCCACAGAACTGAAACATCTTCAGTGTCTAG AAGAAG AACTCAAACCTCTGGAGGAAGTGCTAAATTTAGCTCAAAGC AAAAACTTTCACTTAAGACCCAGGGACTTAATCAGCAATATCAACGTA ATAGTTCTGGAACTAAAGGGATCTGAAACAACATTCATGTGTGAATA FGCTGATGAGACAGCAACCATTGTAGAATTTCTGAACAGATGGATTA CCTTTTGTCAAAGCATCATCTCAACACTGACTggtggaggttctggtggaggt tcaggtggaggttcgggtggaggttctGAGCTCTGTGACGATGACCCGCCAGA GATCCCACACGCCACATTCAAAGCCATGGCCTACAAGGAAGGAACCA FGTTGAACTGTGAATGCAAGAGAGGTTTCCGCAGAATAAAAAGCGG GTCACTCTATATGCTCTGTACAGGAAACTCTAGCCACTCGTCCTGGGA CAACCAATGTCAATGCACAAGCTCTGCCACTCGGAACACAACGAAAC AAGTGACACCTCAACCTGAAGAACAGAAAGAAAGGAAAACCACAGA AATGCAAAGTCCAATGCAGCCAGTGGACCAAGCGAGCCTTCCAGGTC ACTGCAGGGAACCTCCACCATGGGAAAATGAAGCCACAGAGAGAAT FTATCATTTCGTGGTGGGGCAGATGGTTTATTATCAGTGCGTCCAGG GATACAGGGCTCTACACAGAGGTCCTGCTGAGAGCGTCTGCAAAATG ACCCACGGGAAGACAAGGTGGACCCAGCCCCAGCTCATATGCACAG GTGAAATGGAGACCAGTCAGTTTCCAGGTGAAGAGAAGCCTCAGGC AAGCCCCGAAGGCCGTCCTGAGAGTGAGACTTCCTGCCTCGTCACAA CAACAGATTTTCAAATACAGACAGAAATGGCTGCAACCATGGAGACG FCCATATTTACAACAGAGTACCAGGGTGGACATCACCATCACCATCAC ГААТАА |
34 | NT | Человек | Непроцессированная форма IL-2 (Gly3Ser)3внеклеточный домен IL-2Ra | ATGGACAGGATGCAACTCCTGTCTTGCATTGCACTAAGTCTTGCACTT GTCACAAACAGTGCACCTACTTCAAGTTCTACAAAGAAAACACAGCT ACAACTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTGAATGGAAT FAATAATTACAAGAATCCCAAACTCACCAGGATGCTCACATTTAAGTT FTACATGCCCAAGAAGGCCACAGAACTGAAACATCTTCAGTGTCTAG AAGAAGAACTCAAACCTCTGGAGGAAGTGCTAAATTTAGCTCAAAGC AAAAACTTTCACTTAAGACCCAGGGACTTAATCAGCAATATCAACGTA ATAGTTCTGGAACTAAAGGGATCTGAAACAACATTCATGTGTGAATA rGCTGATGAGACAGCAACCATTGTAGAATTTCTGAACAGATGGATTA CCTTTTGTCAAAGCATCATCTCAACACTGACTggtggaggttctggtggaggt tcaggtggaggttcgGAGCTCTGTGACGATGACCCGCCAGAGATCCCACA CGCCACATTCAAAGCCATGGCCTACAAGGAAGGAACCATGTTGAACT GTGAATGCAAGAGAGGTTTCCGCAGAATAAAAAGCGGGTCACTCTAT ATGCTCTGTACAGGAAACTCTAGCCACTCGTCCTGGGACAACCAATG TCAATGCACAAGCTCTGCCACTCGGAACACAACGAAACAAGTGACAC CTCAACCTGAAGAACAGAAAGAAAGGAAAACCACAGAAATGCAAAG rCCAATGCAGCCAGTGGACCAAGCGAGCCTTCCAGGTCACTGCAGGG AACCTCCACCATGGGAAAATGAAGCCACAGAGAGAATTTATCATTTC GTGGTGGGGCAGATGGTTTATTATCAGTGCGTCCAGGGATACAGGG CTCTACACAGAGGTCCTGCTGAGAGCGTCTGCAAAATGACCCACGGG AAGACAAGGTGGACCCAGCCCCAGCTCATATGCACAGGTGAAATGG AGACCAGTCAGTTTCCAGGTGAAGAGAAGCCTCAGGCAAGCCCCGA AGGCCGTCCTGAGAGTGAGACTTCCTGCCTCGTCACAACAACAGATT TTCAAATACAGACAGAAATGGCTGCAACCATGGAGACGTCCATATTT ACAACAGAGTACCAGGGTGGACATCACCATCACCATCACTAATAA |
35 | NT | Консенсус Kozak | (gcc)gccRccAUGG | |
36 | AA | Мышь | Непроцессированная форма IL-2 (Gly3Ser)3внеклеточный домен IL-2Ra | MYSMQLASCVTLTLVLLVNSAPTSSSTSSSTAEAQQQQQQQQQQQQH LEQLLMDLQELLSRMENYRNLKLPRMLTFKFYLPKQATELKDLQCLEDEL GPLRHVLDLTQSKSFQLEDAENFISNIRVTVVKLKGSDNTFECQFDDESA FVVDFLRRWIAFCQSIISTSPQGGGSGGGSGGGSELCLYDPPEVPNATFK ALSYKNGTILNCECKRGFRRLKELVYMRCLGNSWSSNCQCTSNSHDKSR KQVTAQLEHQKEQQTTTDMQKPTQSMHQENLTGHCREPPPWKHEDS KRIYHFVEGQSVHYECIPGYKALQRGPAISIC27KMKCGKTGWTQPQLTC VDEREHHRFLASEESQGSRNSSPESETSCPITTTDFPQPTETTAMTETFVL ΓΜΕΥΚ |
- 26 045313
37 | АА | Мышь | Зрелая форма IL-2 (Gly3Ser)3внеклеточный домен IL-2Ra | MDSMQLASCVTLTLVLLVNSAPTSSSTSSSTAEAQQQQQQQQQQQQH LEQLLMDLQELLSRMENYRNLKLPRMLTFKFYLPKQATELKDLQCLEDEL GPLRHVLDLTQSKSFQLEDAENFISNIRVTVVKLKGSDNTFECQFDDESA rVVDFLRRWIAFCQSIISTSPQGGGSGGGSGGGSELCLYDPPEVPNATFK ALSYKNGTILNCECKRGFRRLKELVYMRCLGNSWSSNCQCTSNSHDKSR KQVTAQLEHQKEQQTTTDMQKPTQSMHQENLTGHCREPPPWKHEDS KRIYHFVEGQSVHYECIPGYKALQRGPAISICKMKCGKTGWTQPQLTCV DEREHHRFLASEESQGSRNSSPESETSCPITTTDFPQPTETTAMTETFVLT MEYK |
38 | АА | Человек | Непроцессированная форма IL-2 (Gly4Ser)5внеклеточный домен IL-2Ra | MDRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINN YKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHL RPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSELCDDDPPEIPHATFKAMAYK EGTMLNCECKRGFRRIKSGSLYMLCTGNSSHSSWDNQCQCTSSATRNT rKQVTPQPEEQKERKTTEMQSPMQPVDQASLPGHCREPPPWENEATE RIYHFVVGQMVYYQCVQGYRALH RGPAESVCKMTH GKTRWTQPQLICTGE METSQFPGEEKPQASPEGRPESETSCLVTTTDFQIQTEMAATMETS IFTTEYQ |
39 | АА | Человек | Зрелая форма IL-2 (Gly4Ser)5внеклеточный домен IL-2Ra человека | APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKA rELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTF MCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLTGGGGSGGGGSGGGGSGGGG SGGGGSELCDDDPPEIPHATFKAMAYKEGTMLNCECKRGFRRIKSGSLY MLCTGNSSHSSWDNQCQCTSSATRNTTKQVTPQPEEQKERKTTEMQS PMQPVDQASLPGHCREPPPWENEATERIYHFVVGQMVYYQCVQGYR ALHRGPAESVCKMTHGKTRWTQPQLICTGEMETSQFPGEEKPQASPEG RPESETSCLVTTTDFQIQTEMAATMETSIFTTEYQ |
40 | АА | Линкерная последовательность (Gly4Ser)4 | GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS | |
41 | АА | Линкерная последовательность (Gly4Ser)5 | GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS | |
42 | NT | Мышь | Непроцессированная форма IL-2 (Gly3Ser)3внеклеточный домен IL-2Ra | ATGGACAGCATGCAGCTCGCATCCTGTGTCACATTGACACTTGTGCTC CTTGTCAACAGCGCACCCACTTCAAGCTCTACTTCAAGCTCTACAGCG GAAGCACAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCAGCACCTGG AGCAGCTGTTGATGGACCTACAGGAGCTCCTGAGCAGGATGGAGAA FTACAGGAACCTGAAACTCCCCAGGATGCTCACCTTCAAATTTTACTT GCCCAAGCAGGCCACAGAATTGAAAGATCTTCAGTGCCTAGAAGATG AACTTGGACCTCTGCGGCATGTTCTGGATTTGACTCAAAGCAAAAGC FTTCAATTGGAAGATGCTGAGAATTTCATCAGCAATATCAGAGTAACT GTTGTAAAACTAAAGGGCTCTGACAACACATTTGAGTGCCAATTCGA rGATGAGTCAGCAACTGTGGTGGACTTTCTGAGGAGATGGATAGCCT FCTGTCAAAGCATCATCTCAACAAGCCCTCAAGGTGGAGGTTCTGGT GGAGGTTCAGGTGGAGGTTCGGAACTGTGTCTGTATGACCCACCCG A GGTCCCCAATGCCACATTCAAAGCCCTCTCCTACAAGAACGGCACCAT CCTAAACTGTGAATGCAAGAGAGGTTTCCGAAGACTAAAGGAATTGG rCTATATGCGTTGCTTAGGAAACTCCTGGAGCAGCAACTGCCAGTGC ACCAGCAACTCCCATGACAAATCGAGAAAGCAAGTTACAGCTCAACT TGAACACCAGAAAGAGCAACAAACCACAACAGACATGCAGAAGCCA ACACAGTCTATGCACCAAGAGAACCTTACAGGTCACTGCAGGGAGCC ACCTCCTTGGAAACATGAAGATTCCAAGAGAATCTATCATTTCGTGGA AGGACAGAGTGTTCACTACGAGTGTATTCCGGGATACAAGGCTCTAC AGAGAGGTCCTGCTATTAGCATCTGCAAGATGAAGTGTGGGAAAAC GGGGTGGACTCAGCCCCAGCTCACATGTGTAGATGAAAGAGAACAC CACCGATTTCTGGCTAGTGAGGAATCTCAAGGAAGCAGAAATTCTTC rCCCGAGAGTGAGACTTCCTGCCCCATAACCACCACAGACTTCCCACA ACCCACAGAAACAACTGCAATGACGGAGACATTTGTGCTCACAATGG AGTATAAGGGTGGACATCACCATCACCATCACTAATAA |
- 27 045313
43 | AA | Человек | Зрелая форма IL-2 (Gly3Ser)2внеклеточный домен IL-2Ra | APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKA FELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTF MCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLTGGGSGGGSELCDDDPPEIPHA FFKAMAYKEGTMLNCECKRGFRR IKSGSLYMLCTGNSSHSSWDNQCQC FSSATRNTTKQVTPQPEEQKERKTTEMQSPMQPVDQASLPGHCREPPP WENEATERIYHFVVGQMVYYQCVQGYRALHRGPAESVCKMTHGKTR WTQPQLICTGEMETSQFPGEEKPQASPEGRPESETSCLVTTTDFQIQTE MAATMETSIFTTEYQ |
44 | AA | Человек | Непроцессированная форма IL-2 (Gly3Ser)2внеклеточный домен [L-2Ra | MDRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINN YKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHL RPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT GGGSGGGSELCDDDPPEIPHATFKAMAYKEGTMLNCECKRGFRRIKSGS LYMLCTGNSSHSSWDNQCQCTSSATRNTTKQVTPQPE EQKERKTTEM QSPMQPVDQASLPGHCREPPPWENEATERIYHFVVGQMVYYQCVQG YRALHRGPAESVCKMTHGKTRWTQPQLICTGEMETSQFPGEEKPQASP EG RP ESETSCLVTTTD FQIQTE Μ AATM ETSIFTTE YQ |
45 | AA | Человек | Зрелая форма IL-2 (Gly3)- внеклеточный домен IL-2Ra | APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKA rELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTF MCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLTGGGELCDDDPPEIPHATFKA MAYKEGTMLNCECKRGFRRIKSGSLYMLCTGNSSHSSWDNQCQCTSSA rRNTTKQVTPCIPE-EQKERKTTEMQISPMQPVDQASLPGHCREPPPWEN EATERIYHFVVGQMVYYQCVQGYRALHRGPAESVCKMTHGKTRWTQP QLICTGEMETSQFPGEEKPQASPEGRPESETSCLVTTTDFQIQTEMAAT METSIFTTEYQ |
46 | AA | Человек | Непроцессированная форма IL-2 (Gly3)- внеклеточный домен IL-2Ra | MDRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINN YKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHL RPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT GGGELCDDDPPEIPHATFKAMAYKEGTMLNCECKRGFRRIKSGSLYMLC FGNSSHSSWDNQCQCTSSATRNTTKQVTPQPEEQKERKTTEMQSPMQ PVDQASLPGHCREPPPWENEATERIYHFVVGQMVYYQCVQGYRALHR |
GPAESVCKMTHGKTRWTQPQLICTGEMETSQFPGEEKPQASPEGRPES ETSCLVTTTDFQIQTEMAATMETSIFTTEYQ | ||||
47 | NT | Человек | Непроцессированная форма IL-2 (Gly3Ser)2внеклеточный домен IL-2Ra | ATGGACAGGATGCAACTCCTGTCTTGCATTGCACTAAGTCTTGCACTT GTCACAAACAGTGCACCTACTTCAAGTTCTACAAAGAAAACACAGCT ACAACTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTGAATGGAAT rAATAATTACAAGAATCCCAAACTCACCAGGATGCTCACATTTAAGTT rTACATGCCCAAGAAGGCCACAGAACTGAAACATCTTCAGTGTCTAG AAGAAGAACTCAAACCTCTGGAGGAAGTGCTAAATTTAGCTCAAAGC AAAAACTTTCACTTAAGACCCAGGGACTTAATCAGCAATATCAACGTA ATAGTTCTGGAACTAAAGGGATCTGAAACAACATTCATGTGTGAATA FGCTGATGAGACAGCAACCATTGTAGAATTTCTGAACAGATGGATTA CCTTTTGTCAAAGCATCATCTCAACACTGACTggtggaggttctggtggaggt tcaGAGCTCTGTGACGATGACCCGCCAGAGATCCCACACGCCACATTC AAAGCCATGGCCTACAAGGAAGGAACCATGTTGAACTGTGAATGCA AGAGAGGTTTCCGCAGAATAAAAAGCGGGTCACTCTATATGCTCTGT ACAGGAAACTCTAGCCACTCGTCCTGGGACAACCAATGTCAATGCAC AAGCTCTGCCACTCGGAACACAACGAAACAAGTGACACCTCAACCTG AAGAACAGAAAGAAAGGAAAACCACAGAAATGCAAAGTCCAATGCA GCCAGTGGACCAAGCGAGCCTTCCAGGTCACTGCAGGGAACCTCCAC CATGGGAAAATGAAGCCACAGAGAGAATTTATCATTTCGTGGTGGG GCAGATGGTTTATTATCAGTGCGTCCAGGGATACAGGGCTCTACACA GAGGTCCTGCTGAGAGCGTCTGCAAAATGACCCACGGGAAGACAAG GTGGACCCAGCCCCAGCTCATATGCACAGGTGAAATGGAGACCAGTC AGTTTCCAGGTGAAGAGAAGCCTCAGGCAAGCCCCGAAGGCCGTCC rGAGAGTGAGACTTCCTGCCTCGTCACAACAACAGATTTTCAAATACA GACAGAAATGGCTGCAACCATGGAGACGTCCATATTTACAACAGAGT ACCAGGGTGGACATCACCATCACCATCACTAATAA |
- 28 045313
48 | NT | Человек | Непроцессированная форма IL-2 (Gly3)- внеклеточный домен IL-2Ra | ATGGACAGGATGCAACTCCTGTCTTGCATTGCACTAAGTCTTGCACTT GTCACAAACAGTGCACCTACTTCAAGTTCTACAAAGAAAACACAGCT ACAACTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTGAATGGAAT rAATAATTACAAGAATCCCAAACTCACCAGGATGCTCACATTTAAGTT rTACATGCCCAAGAAGGCCACAGAACTGAAACATCTTCAGTGTCTAG AAGAAGAACTCAAACCTCTGGAGGAAGTGCTAAATTTAGCTCAAAGC AAAAACTTTCACTTAAGACCCAGGGACTTAATCAGCAATATCAACGTA ATAGTTCTGGAACTAAAGGGATCTGAAACAACATTCATGTGTGAATA rGCTGATGAGACAGCAACCATTGTAGAATTTCTGAACAGATGGATTA CCTTTTGTCAAAGCATCATCTCAACACTGACTggtggaggtGAGCTCTGT GACGATGACCCGCCAGAGATCCCACACGCCACATTCAAAGCCATGGC CTACAAGGAAGGAACCATGTTGAACTGTGAATGCAAGAGAGGTTTCC GCAGAATAAAAAGCGGGTCACTCTATATGCTCTGTACAGGAAACTCT AGCCACTCGTCCTGGGACAACCAATGTCAATGCACAAGCTCTGCCAC rCGGAACACAACGAAACAAGTGACACCTCAACCTGAAGAACAGAAA GAAAGGAAAACCACAGAAATGCAAAGTCCAATGCAGCCAGTGGACC AAGCGAGCCTTCCAGGTCACTGCAGGGAACCTCCACCATGGGAAAAT GAAGCCACAGAGAGAATTTATCATTTCGTGGTGGGGCAGATGGTTTA rTATCAGTGCGTCCAGGGATACAGGGCTCTACACAGAGGTCCTGCTG AGAGCGTCTGCAAAATGACCCACGGGAAGACAAGGTGGACCCAGCC CCAGCTCATATGCACAGGTGAAATGGAGACCAGTCAGTTTCCAGGTG AAGAGAAGCCTCAGGCAAGCCCCGAAGGCCGTCCTGAGAGTGAGAC rTCCTGCCTCGTCACAACAACAGATTTTCAAATACAGACAGAAATGGC rGCAACCATGGAGACGTCCATATTTACAACAGAGTACCAGGGTGGAC ATCACCATCACCATCACTAATAA |
49 | NT | Человек | Непроцессированная форма IL-2 (Gly4Ser)5внеклеточный домен [L-2Ra | ATGGACAGGATGCAACTCCTGTCTTGCATTGCACTAAGTCTTGCACTT GTCACAAACAGTGCACCTACTTCAAGTTCTACAAAGAAAACACAGCT ACAACTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTGAATGGAAT rAATAATTACAAGAATCCCAAACTCACCAGGATGCTCACATTTAAGTT rTACATGCCCAAGAAGGCCACAGAACTGAAACATCTTCAGTGTCTAG AAGAAGAACTCAAACCTCTGGAGGAAGTGCTAAATTTAGCTCAAAGC AAAAACTTTCACTTAAGACCCAGGGACTTAATCAGCAATATCAACGTA ATAGTTCTGGAACTAAAGGGATCTGAAACAACATTCATGTGTGAATA rGCTGATGAGACAGCAACCATTGTAGAATTTCTGAACAGATGGATTA CCTTTTGTCAAAGCATCATCTCAACACTGACTggtggaggtggatcaggtgga ggiggatctggtggaggtggatcaggtggaggtggatccggtggaggtggatctGAGCT |
CTGTGACGATGACCCGCCAGAGATCCCACACGCCACATTCAAAGCCA rGGCCTACAAGGAAGGAACCATGTTGAACTGTGAATGCAAGAGAGG nTCCGCAGAATAAAAAGCGGGTCACTCTATATGCTCTGTACAGGAA ACTCTAGCCACTCGTCCTGGGACAACCAATGTCAATGCACAAGCTCTG CCACTCGGAACACAACGAAACAAGTGACACCTCAACCTGAAGAACAG AAAGAAAGGAAAACCACAGAAATGCAAAGTCCAATGCAGCCAGTGG ACCAAGCGAGCCTTCCAGGTCACTGCAGGGAACCTCCACCATGGGAA AATGAAGCCACAGAGAGAATTTATCATTTCGTGGTGGGGCAGATGGT nATTATCAGTGCGTCCAGGGATACAGGGCTCTACACAGAGGTCCTG CTGAGAGCGTCTGCAAAATGACCCACGGGAAGACAAGGTGGACCCA GCCCCAGCTCATATGCACAGGTGAAATGGAGACCAGTCAGTTTCCAG GTGAAGAGAAGCCTCAGGCAAGCCCCGAAGGCCGTCCTGAGAGTGA GACTTCCTGCCTCGTCACAACAACAGATTTTCAAATACAGACAGAAAT GGCTGCAACCATGGAGACGTCCATATTTACAACAGAGTACCAGGGTG GACATCACCATCACCATCACTAATAA | ||||
50 | AA | Линкер (Gly4Ser)3 | GGGGSGGGGSGGGGS | |
51 | AA | Линкер (Gly4Ser)2 | GGGGSGGGGS | |
52 | AA | Линкер (Gly4Ser)l | GGGGS | |
53 | NT | Последовательность Kozak | gccaccATGG |
- 29 045313
54 | AA | Мышь | Непроцессированная форма IL-2 (Gly4Ser)4внеклеточный домен IL-2Ra + глициновый спейсер и полигистидиновая область | MDSMQLASCVTLTLVLLVNSAPTSSSTSSSTAEAQQQQQQQQQQQQH LEQLLMDLQELLSRMENYRNLKLPRMLTFKFYLPKQATELKDLQCLEDEL GPLRHVLDLTQSKSFQLEDAENFISNIRVTVVKLKGSDNTFECQFDDESA FVVDFLRRWIAFCQSIISTSPQGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSELCLYDP PEVPNATFKALSYKNGTILNCECKRGFRRLKELVYMRCLGNSWSSNCQC FSNSHDKSRKQVTAQLEHQKEQQTTTDMQKPTQSMHQENLTGHCRE PPPWKHEDSKRIYHFVEGQSVHYECIPGYKALQRGPAISICKMKCGKTG WTQPQLTCVDEREHHRFLASEESQGSRNSSPESETSCPITTTDFPQPTET FAMTETFVLTMEYKGGHHHHHH |
55 | AA | Мышь | Непроцессированная форма IL-2 (Gly4Ser)5внеклеточный домен IL-2Ra + глициновый спейсер и полигистидиновая область | MDSMQLASCVTLTLVLLVNSAPTSSSTSSSTAEAQQQQQQQQQQQQH LEQLLMDLQELLSRMENYRNLKLPRMLTFKFYLPKQATELKDLQCLEDEL GPLRHVLDLTQSKSFQLEDAENFISNIRVTVVKLICGSDNTFECQFDDESA FVVDFLRRWIAFCQSIISTSPQGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSE LCLYDPPEVPNATFKALSYKNGTILNCECKRGFRRLKELVYMRCLGNSWS SNCQCTSNSHDKSRKQVTAQLEHQKEQQTTTDMQKPTQSMHQENLT GHCREPPPWKHEDSKRIYHFVEGQSVHYECIPGYKALQRGPAISICKMKC GKTGWTQPQLTCVDEREHHRFLASEESQGSRNSSPESETSCPITTTDFPQ PTETTAMTETFVLTMEYKGGHHHHHH |
56 | AA | Мышь | Непроцессированная форма IL-2 (Gly3Ser)4внеклеточный домен [L-2Ra + глициновый спейсер и полигистидиновая область | MDSMQLASCVTLTLVLLVNSAPTSSSTSSSTAEAQQQQQQQQQQQQH LEQLLMDLQELLSRMENYRNLKLPRMLTFKFYLPKQATELKDLQCLEDEL GPLRHVLDLTQSKSFQLEDAENFISNIRVTVVKLKGSDNTFECQFDDESA FVVDFLRRWIAFCQSIISTSPQGGGSGGGSGGGSGGGSELCLYDPPEVP NATFKALSYKNGTILNCECKRGFRRLKELVYMRCLGNSWSSNCQCTSNS HDKSRKQVTAQLEHQKEQQTTTDMQKPTQSMHQENLTGHCREPPPW KHEDSKRIYHFVEGQSVHYECIPGYKALQRGPAISICKMKCGKTGWTQP QLTCVDEREHHRFLASEESQGSRNSSPESETSCPITTTDFPQPTETTAMTE FFVLTMEYKGGHHHHHH |
57 | AA | Мышь | Непроцессированная форма IL-2 (Gly3Ser)3внеклеточный домен IL-2Ra + глициновый спейсер и полигистидиновая область | MDSMQLASCVTLTLVLLVNSAPTSSSTSSSTAEAQQQQQQQQQQQQH LEQLLMDLQELLSRMENYRNLKLPRMLTFKFYLPKQATELKDLQCLEDEL GPLRHVLDLTQSKSFQLEDAENFISNIRVTVVKLKGSDNTFECQFDDESA FVVDFLRRWIAFCQSIISTSPQGGGSGGGSGGGSELCLYDPPEVPNATFK ALSYKNGTILNCECKRGFRRLKELVYMRCLGNSWSSNCQCTSNSHDKSR KQVTAQLEHQKEQQTTTDMQKPTQSMHQENLTGHCREPPPWKHEDS KRIYHFVEGQSVHYECIPGYKALQRGPAISICKMKCGKTGWTQPQLTCV DEREHHRFLASEESQGSRNSSPESETSCPITTTDFPQPTETTAMTETFVLT MEYKGGHHHHHH |
58 | AA | Человек | Непроцессированная форма IL-2 (Gly3Ser)2внеклеточный домен [L-2Ra + глициновый спейсер и полигистидиновая область | MDRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINN YKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHL RPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT GGGSGGGSELCDDDPPEIPHATFKAMAYKEGTMLNCECKRGFRRIKSGS LYMLCTGNSSHSSWDNQCQCTSSATRNTTKQVTPQPEEQKERKTTEM QSPMQPVDQASLPGHCREPPPWENEATERIYHFVVGQMVYYQCVQG YRALHRGPAESVCKMTHGKTRWTQPQLICTGEMETSQFPGEEKPQASP EGRPESETSCLVTTTDFQIQTEMAATMETSIFTTEYQGGHHHHHH |
59 | AA | Человек | Непроцессированная форма IL-2 (Gly3Ser)3внеклеточный домен [L-2Ra + глициновый спейсер и полигистидиновая область | MDRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINN YKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHL RPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT GGGSGGGSGGGSELCDDDPPEIPHATFKAMAYKEGTMLNCECKRGFRR IKSGSLYMLCTGNSSHSSWDNQCQCTSSATRNπKQVTPQPEEQKERKT rEMQSPMQPVDQASLPGHCREPPPWENEATERlYHFVVGQMVYYQC VQGYRALHRGPAESVCKMTHGKTRWTQPQLICTGEMETSQFPGEEKP QASPEGRPESETSCLVTTTDFQIQTEMAATMETSIFTTEYQGGHHHHHH |
- 30 045313
60 | АА | Человек | Непроцессированная форма IL-2 (Gly3Ser)4внеклеточный домен [L-2 Ra+ глициновый спейсер и полигистидиновая область | MDRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINN YKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHL RPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT GGGSGGGSGGGSGGGSELCDDDPPEIPHATFKAMAYKEGTMLNCECK RGFRRIKSGSLYMLCTGNSSHSSWDNQCQCTSSATRNTTKQVTPQPEE QKERKTTEMQSPMQPVDQASLPGHCREPPPWENEATERIYHFVVGQ MVYYQCVQGYRALHRGPAESVCKMTHGKTRWTQPQLICTGEMETSQF PGEEKPQASPEGRPESETSCLVTTTDFQIQTEMAATMETSIFTTEYQGGH HHHHH | |
61 | АА | Человек | Непроцессированная форма IL-2 (Gly4Ser)4внеклеточный домен [L-2Ra + глициновый спейсер и полигистидиновая область | MDRMQLLSCIALSLALVTNSAPTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINN YKNPKLTRMLTFKFYMPKKATELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHL RPRDLISNINVIVLELKGSETTFMCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLT GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSELCDDDPPEIPHATFKAMAYKEGTML NCECKRGFRRIKSGSLYMLCTGNSSHSSWDNQCQCTSSATRNTTKQVT PQPEEQKERKTTEMQSPMQPVDQASLPGHCREPPPWENEATERIYHFV VGQMVYYQCVQGYRALHRGPAESVCKMTHGKTRWTQPQLICTGEME FSQFPGEEKPQASPEGRPESETSCLVTTTDFQIQTEMAATMETSIFTTEY QGGHHHHHH | |
62 | АА | Человек | Зрелая форма IL-2 (Gly3Ser)3внеклеточный домен mutIL-2 Ra | APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKA TELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTF MCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLTGGGSGGGSGGGSELCDDDPP EIPHATFKAMAYKEGTMLNCECKRGFTSIKSGSLYMLCTGNSSHSSWDN QCQCTSSATRNTTKQVTPQPEEQKERKTTEMQSPMQPVDQASLPGHC REPPPWENEATERIYHFVVGQMVYYQCVQGYRALHRGPAESVCKMTH GKTRWTQPQLICTGEMETSQFPGEEKPQASPEGRPESETSCLVTTTDFQI QTEMAATMETSIFTTEYQ | |
63 | NT | Человек | Непроцессированная форма IL-2 (Gly3Ser)3внеклеточный домен mutIL-2 Ra Mut | ATGGACAGGATGCAACTCCTGTCTTGCATTGCACTAAGTCTTGCACTT GTCACAAACAGTGCACCTACTTCAAGTTCTACAAAGAAAACACAGCT ACAACTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTGAATGGAAT FAATAATTACAAGAATCCCAAACTCACCAGGATGCTCACATTTAAGTT TTACATGCCCAAGAAGGCCACAGAACTGAAACATCTTCAGTGTCTAG AAGAAGAACTCAAACCTCTGGAGGAAGTGCTAAATTTAGCTCAAAGC AAAAACTTTCACTTAAGACCCAGGGACTTAATCAGCAATATCAACGTA ATAGTTCTGGAACTAAAGGGATCTGAAACAACATTCATGTGTGAATA TGCTGATGAGACAGCAACCATTGTAGAATTTCTGAACAGATGGATTA CCTTTTGTCAAAGCATCATCTCAACACTGACTggtggaggttctggtggaggt tcaggtggaggttcgGAGCTCTGTGACGATGACCCGCCAGAGATCCCACA CGCCACATTCAAAGCCATGGCCTACAAGGAAGGAACCATGTTGAACT GTGAATGCAAGAGAGGTTTCACCTCAATAAAAAGCGGGTCACTCTAT ATGCTCTGTACAGGAAACTCTAGCCACTCGTCCTGGGACAACCAATG FCAATGCACAAGCTCTGCCACTCGGAACACAACGAAACAAGTGACAC CTCAACCTGAAGAACAGAAAGAAAGGAAAACCACAGAAATGCAAAG FCCAATGCAGCCAGTGGACCAAGCGAGCCTTCCAGGTCACTGCAGGG AACCTCCACCATGGGAAAATGAAGCCACAGAGAGAATTTATCATTTC GTGGTGGGGCAGATGGTTTATTATCAGTGCGTCCAGGGATACAGGG CTCTACACAGAGGTCCTGCTGAGAGCGTCTGCAAAATGACCCACG GG AAGACAAGGTGGACCCAGCCCCAGCTCATATGCACAGGTGAAATGG AGACCAGTCAGTTTCCAGGTGAAGAGAAGCCTCAGGCAAGCCCCGA AGGCCGTCCTGAGAGTGAGACTTCCTGCCTCGTCACAACAACAGATT TTCAAATACAGACAGAAATGGCTGCAACCATGGAGACGTCCATATTT ACAACAGAGTACCAGGGTGGACATCACCATCACCATCACTAATAA | |
64 | АА | Человек | Зрелая форма IL-2 (Gly4Ser)4внеклеточный домен mutIL-2 Ra | APTSSSTKKTQLQLEHLLLDLQMILNGINNYKNPKLTRMLTFKFYMPKKA TELKHLQCLEEELKPLEEVLNLAQSKNFHLRPRDLISNINVIVLELKGSETTF MCEYADETATIVEFLNRWITFCQSIISTLTGGGGSGGGGSGGGGSGGGG SELCDDDPPEIPHATFKAMAYKEGTMLNCECKRGFTSIKSGSLYMLCTG NSSHSSWDNQCQCTSSATRNTTKQVTPQPEEQKE RKTTEMQSPMQPV DQASLPGHCREPPPWENEATERIYHFVVGQMVYYQCVQGYRALHRGP AESVCKMTHGKTRWTQPQLICTGEMETSQFPGEEKPQASPEGRPESET SCLVTTTDFQIQTEMAATMETSIFTTEYQ |
65 | NT | Человек | Непроцессированная форма IL-2 (Gly4Ser)4внеклеточный домен mutIL-2 Ra | ATGGACAGGATGCAACTCCTGTCTTGCATTGCACTAAGTCTTGCACTT GTCACAAACAGTGCACCTACTTCAAGTTCTACAAAGAAAACACAGCT ACAACTGGAGCATTTACTGCTGGATTTACAGATGATTTTGAATGGAAT FAATAATTACAAGAATCCCAAACTCACCAGGATGCTCACATTTAAGTT FTACATGCCCAAGAAGGCCACAGAACTGAAACATCTTCAGTGTCTAG AAGAAGAACTCAAACCTCTGGAGGAAGTGCTAAATTTAGCTCAAAGC AAAAACTTTCACTTAAGACCCAGGGACTTAATCAGCAATATCAACGTA ATAGTTCTGGAACTAAAGGGATCTGAAACAACATTCATGTGTGAATA FGCTGATGAGACAGCAACCATTGTAGAATTTCTGAACAGATGGATTA CCTTTTGTCAAAGCATCATCTCAACACTGACTggtggaggtggatctggtgga ggtggatcaggtgga ggtggatccggtggaggtggatct GAGCTCTGTGACGATGACCCGCCAGAGATCCCACACGCCACATTCAA AGCCATGGCCTACAAGGAAGGAACCATGTTGAACTGTGAATGCAAG AGAGGTTTCACCTCAATAAAAAGCGGGTCACTCTATATGCTCTGTACA GGAAACTCTAGCCACTCGTCCTGGGACAACCAATGTCAATGCACAAG CTCTGCCACTCGGAACACAACGAAACAAGTGACACCTCAACCTGAAG AACAGAAAGAAAGGAAAACCACAGAAATGCAAAGTCCAATGCAGCC AGTGGACCAAGCGAGCCTTCCAGGTCACTGCAGGGAACCTCCACCAT GGGAAAATGAAGCCACAGAGAGAATTTATCATTTCGTGGTGGGGCA G ATGGTTTATTATCAGTG CGTCCAGGG ATACAGGG CTCTACACAG AG GTCCTGCTGAGAGCGTCTGCAAAATGACCCACGGGAAGACAAGGTG GACCCAGCCCCAGCTCATATGCACAGGTGAAATGGAGACCAGTCAGT FTCCAGGTGAAGAGAAGCCTCAGGCAAGCCCCGAAGGCCGTCCTGA GAGTGAGACTTCCTGCCTCGTCACAACAACAG ATTTTCAAATACAGAC AGAAATGGCTGCAACCATGGAGACGTCCATATTTACAACAGAGTACC AGGGTGGACATCACCATCACCATCACTAATAA |
Все публикации и патентные заявки, упомянутые в настоящем описании изобретения, указывают на уровень специалистов в настоящей области техники, к которой принадлежит настоящее изобретение. Все публикации и патентные заявки включены в настоящий документ посредством ссылки в той же степени, как если бы было указано, что каждая отдельная публикация или патентная заявка специально и индивидуально включена посредством ссылки.
Несмотря на то что изложенное выше изобретение было описано более подробно с помощью иллюстрации и примера для целей ясности понимания, будет очевидно, что определенные изменения и модификации можно осуществить на практике в пределах объема прилагаемой формулы изобретения.
-
Claims (24)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Слитый белок, содержащий:(а) первый полипептид, содержащий интерлейкин-2 (IL-2) или его функциональный фрагмент; и (b) второй полипептид, слитый в пределах рамки считывания с первым полипептидом через линкер, причем второй полипептид содержит внеклеточный домен рецептора интерлейкина-2 альфа (IL-2Ra) или его функциональный фрагмент, который способен к связыванию с IL-2;где линкер имеет аминокислотную последовательность SEQ ID NO:13;второй полипептид содержит по меньшей мере 150 непрерывно следующих аминокислот из SEQ ID NO: 7; и причем слитый белок характеризуется активностью IL-2.
- 2. Слитый белок по п.1, где второй полипептид содержит по меньшей мере 155 непрерывно следующих аминокислот из SEQ ID NO: 7.
- 3. Слитый белок по п.2, где второй полипептид содержит по меньшей мере 160 непрерывно следующих аминокислот из SEQ ID NO: 7.
- 4. Слитый белок по п.3, где второй полипептид содержит по меньшей мере 165 непрерывно следующих аминокислот из SEQ ID NO: 7.
- 5. Слитый белок по любому из пп.1-4, причем указанный слитый белок характеризуется увеличенной активностью IL-2 по сравнению с нативным или рекомбинантным IL-2.
- 6. Слитый белок по любому из пп.1-5, причем указанный слитый белок характеризуется увеличенной стойкой стимуляцией IL-2 несущих IL-2R лимфоцитов in vivo по сравнению с нативным или рекомбинантным IL-2.
- 7. Слитый белок по любому из пп.1-6, в котором первый полипептид содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 70% идентичность последовательности относительно SEQ ID NO: 2.
- 8. Слитый белок по п.7, в котором первый полипептид содержит аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 75, 80, 85, 90, 95 или 99% идентичность последовательности относительно SEQ ID NO: 2.
- 9. Слитый белок по п.8, в котором первый полипептид содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2.
- 10. Слитый белок по любому из пп.1-9, причем слитый белок содержит одну или несколько замен, делеций, усечений и вставок во внеклеточном домене IL-2Ra или его фрагменте.
- 11. Слитый белок по п.10, в котором внеклеточный домен рецептора IL-2Ra или его фрагмент содержит замену Arg35Thr, соответствующую положению 35 SEQ ID NO: 7, и замену Arg36Ser, соответствующую положению 36 SEQ ID NO: 7.
- 12. Полинуклеотид, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую слитый белок по любому из пп.1-11.
- 13. Клетка-хозяин, содержащая полинуклеотид по п.12.
- 14. Клетка-хозяин по п.13, причем клетка-хозяин представляет собой клетку СНО или клетку COS.
- 15. Способ получения слитого белка по любому из пп.1-11, причем способ включает введение в клетку-хозяина полинуклеотида, кодирующего слитый белок по любому из пп.1-11, и экспрессию слитого белка в клетке-хозяине.
- 16. Способ по п.15, при котором полинуклеотид, кодирующий слитый белок, является функцио нально связанным с промотором, активным в клетке-хозяине.
- 17. Применение слитого белка по любому из пп.1-11 для изготовления лекарственного средства для уменьшения иммунного ответа у субъекта, нуждающегося в этом.
- 18. Применение по п.17, при котором указанный субъект характеризуется наличием аутоиммунного заболевания.
- 19. Применение по п.18, при котором аутоиммунное заболевание включает в себя сахарный диабет I типа, рассеянный склероз, ревматоидный артрит, глютеновую энтеропатию, системную красную волчанку, ювенильный идиопатический артрит, болезнь Крона, неспецифический язвенный колит или системный склероз, реакцию трансплантат против хозяина, псориаз, гнездную алопецию или индуцированный вирусом гепатита С (HCV) васкулит.
- 20. Применение по любому из пп.17-19, при котором терапевтически эффективное количество слитого белка содержит 103-106 ME активности IL-2 на организм взрослого или 104± 100-кратную активность IL-2 на субъекта.
- 21. Применение слитого белка по любому из пп.1-11 для изготовления лекарственного средства для усиления иммуногенности вакцины у субъекта, нуждающегося в этом.
- 22. Применение слитого белка по любому из пп.1-11 для изготовления лекарственного средства для преодоления подавленного иммунного ответа на вакцину у субъекта, нуждающегося в этом.
- 23. Применение по п.21 или 22, при котором слитый белок и вакцина предназначены для последовательного введения в любом порядке.
- 24. Применение по п.21 или 22, при котором слитый белок и вакцина предназначены для одновременного введения.-
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US62/033,726 | 2014-08-06 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA045313B1 true EA045313B1 (ru) | 2023-11-15 |
Family
ID=
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20230079120A1 (en) | Interleukin-2/interleukin-2 receptor alpha fusion proteins and methods of use | |
JP7087047B2 (ja) | 改変されたインターロイキン-7タンパク質およびその使用 | |
KR100689739B1 (ko) | 단백질 및 펩티드 항원의 면역원성을 증강시키는 Fc융합 단백질 | |
US20050137130A1 (en) | Medical treatment | |
KR102509444B1 (ko) | Wt1 백신 | |
JP2008500812A (ja) | 免疫抑制サイトカイン | |
AU2016280770A1 (en) | Mutated fragments of the RAS protein | |
US20120328640A1 (en) | Methods and compositions for the treatment and prevention of cancer | |
DE60128070T2 (de) | Impfstoff spezifisch gegen nierentumore, gerichtet gegen das antigen g-250 des nierentumors | |
US10653752B2 (en) | Methods and use of growth hormone supergene family protein analogs for treatment of radiation exposure | |
AU2018200638A1 (en) | Immunotherapeutic composition, therapeutic method and diagnostic method | |
EA045313B1 (ru) | Слитые белки интерлейкин-2/рецептор интерлейкина-2 альфа и способы применения | |
WO2007081301A2 (en) | Methods and compositions related to the identification of a novel il-12 inducing protein isolated from toxoplasma gondii | |
KR20210129282A (ko) | 변형된 인터루킨-7 단백질 및 이의 용도 | |
EP4186928A1 (en) | Fusion polypeptide and polypeptide dimer, and use thereof | |
MXPA04012750A (es) | Citocinas avicolas, tales como il-12, que comprenden una subunidad (es) p40 y/o p35. | |
KR20210129281A (ko) | 변형된 인터루킨-7 단백질 및 이의 용도 |