EA043345B1 - Антитела-агонисты btla и их применение - Google Patents
Антитела-агонисты btla и их применение Download PDFInfo
- Publication number
- EA043345B1 EA043345B1 EA201992460 EA043345B1 EA 043345 B1 EA043345 B1 EA 043345B1 EA 201992460 EA201992460 EA 201992460 EA 043345 B1 EA043345 B1 EA 043345B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- seq
- amino acid
- acid sequence
- antibody
- btla
- Prior art date
Links
- 101000864344 Homo sapiens B- and T-lymphocyte attenuator Proteins 0.000 title claims description 105
- 102100029822 B- and T-lymphocyte attenuator Human genes 0.000 title claims description 76
- 239000000556 agonist Substances 0.000 title description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 114
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 39
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 39
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 39
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 39
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 34
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 33
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 claims description 29
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 29
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims description 25
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 20
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 19
- 208000025747 Rheumatic disease Diseases 0.000 claims description 13
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 13
- 208000005777 Lupus Nephritis Diseases 0.000 claims description 9
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 9
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 claims description 9
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 claims description 8
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 6
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 claims description 5
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 claims description 5
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 5
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 5
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 47
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 38
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 38
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 38
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 38
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 31
- 102000053464 human BTLA Human genes 0.000 description 30
- 229940122494 BTLA agonist Drugs 0.000 description 29
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 27
- 102100028785 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14 Human genes 0.000 description 25
- 108010061593 Member 14 Tumor Necrosis Factor Receptors Proteins 0.000 description 24
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 19
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 17
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 14
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 14
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 13
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 12
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 12
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 11
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 9
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 9
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 9
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 9
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 7
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 7
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 7
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 7
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 7
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 7
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 7
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 7
- 206010001580 Albuminuria Diseases 0.000 description 6
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 6
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 6
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 6
- DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N creatinine Chemical compound CN1CC(=O)NC1=N DDRJAANPRJIHGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 5
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 5
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 5
- DOUYETYNHWVLEO-UHFFFAOYSA-N imiquimod Chemical compound C1=CC=CC2=C3N(CC(C)C)C=NC3=C(N)N=C21 DOUYETYNHWVLEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 229960002751 imiquimod Drugs 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 5
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 5
- 230000000552 rheumatic effect Effects 0.000 description 5
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 5
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101100058686 Mus musculus Btla gene Proteins 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 4
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 4
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 4
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 229940109239 creatinine Drugs 0.000 description 3
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 3
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 210000001503 joint Anatomy 0.000 description 3
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 3
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 3
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- 238000002424 x-ray crystallography Methods 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 102220470115 Amidophosphoribosyltransferase_H68A_mutation Human genes 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 2
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 2
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 2
- 101000648507 Homo sapiens Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14 Proteins 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 102220492635 Integrin alpha-3_D52Y_mutation Human genes 0.000 description 2
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 102220470557 Proteasome subunit beta type-3_E27R_mutation Human genes 0.000 description 2
- 102220467908 Protein Dok-7_S30W_mutation Human genes 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 102220488256 Uromodulin-like 1_R42D_mutation Human genes 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 102200002501 c.98G>A Human genes 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 102000005396 glutamine synthetase Human genes 0.000 description 2
- 108020002326 glutamine synthetase Proteins 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 2
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 2
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 2
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 2
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OZFAFGSSMRRTDW-UHFFFAOYSA-N (2,4-dichlorophenyl) benzenesulfonate Chemical compound ClC1=CC(Cl)=CC=C1OS(=O)(=O)C1=CC=CC=C1 OZFAFGSSMRRTDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- FBFJOZZTIXSPPR-UHFFFAOYSA-N 1-(4-aminobutyl)-2-(ethoxymethyl)imidazo[4,5-c]quinolin-4-amine Chemical compound C1=CC=CC2=C(N(C(COCC)=N3)CCCCN)C3=C(N)N=C21 FBFJOZZTIXSPPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102220496116 5-hydroxytryptamine receptor 3B_V80R_mutation Human genes 0.000 description 1
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 101710144268 B- and T-lymphocyte attenuator Proteins 0.000 description 1
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 1
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 1
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102220589483 DNA repair protein XRCC4_E55R_mutation Human genes 0.000 description 1
- 239000012591 Dulbecco’s Phosphate Buffered Saline Substances 0.000 description 1
- 102220523789 E3 ubiquitin-protein ligase NEDD4_E57R_mutation Human genes 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 208000009329 Graft vs Host Disease Diseases 0.000 description 1
- 102220604081 Homeobox protein SIX3_E45R_mutation Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 1
- 101000841411 Homo sapiens Protein ecdysoneless homolog Proteins 0.000 description 1
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 1
- 101150007193 IFNB1 gene Proteins 0.000 description 1
- -1 IL12p70 Proteins 0.000 description 1
- 108091008028 Immune checkpoint receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000037978 Immune checkpoint receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102220511586 Kappa-casein_D84R_mutation Human genes 0.000 description 1
- 206010062049 Lymphocytic infiltration Diseases 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 230000004988 N-glycosylation Effects 0.000 description 1
- 102220592449 Non-homologous end-joining factor 1_Q43A_mutation Human genes 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 101150058616 Oas2 gene Proteins 0.000 description 1
- 208000005775 Parakeratosis Diseases 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 102000002727 Protein Tyrosine Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 208000001647 Renal Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 229940124613 TLR 7/8 agonist Drugs 0.000 description 1
- 108700012920 TNF Proteins 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 102200087803 c.241A>G Human genes 0.000 description 1
- 235000011089 carbon dioxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 238000002447 crystallographic data Methods 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000030609 dephosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006209 dephosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L disodium;(2',7'-dibromo-3',6'-dioxido-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-4'-yl)mercury;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C([Hg])=C1OC1=C2C=C(Br)C([O-])=C1 BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 1
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000047791 human ECD Human genes 0.000 description 1
- 102000052793 human TNFRSF14 Human genes 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000005934 immune activation Effects 0.000 description 1
- 230000005931 immune cell recruitment Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000010468 interferon response Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 1
- 201000006370 kidney failure Diseases 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012516 mab select resin Substances 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 108700029353 mouse Ifna Proteins 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 230000003589 nefrotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000381 nephrotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 238000011176 pooling Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000009696 proliferative response Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 108020000494 protein-tyrosine phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 210000004994 reproductive system Anatomy 0.000 description 1
- 102220005392 rs34259907 Human genes 0.000 description 1
- 102200067572 rs41392146 Human genes 0.000 description 1
- 102220065834 rs794726905 Human genes 0.000 description 1
- 210000003079 salivary gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000013223 sprague-dawley female rat Methods 0.000 description 1
- 238000011272 standard treatment Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 229940114727 vet one Drugs 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Description
Данное изобретение относится к области медицины. Более конкретно, данное изобретение относится к антителам, направленным против В и Т лимфоцитарного аттенюатора (BTLA - В and T Lymphocyte
Attenuator), и их фармацевтическим композициям. Ожидается, что антитела по данному изобретению будут полезны при лечении аутоиммунных заболеваний, таких как волчанка.
Волчанка - это аутоиммунное заболевание с гетерогенными признаками, включая проявления на коже, ротовой полости, мышцах и суставах, сердце, периферической крови, легких, почках, репродуктивной системе и ЦНС. Пациенты с волчанкой подвержены риску серьезных и угрожающих жизни сердечно-сосудистых, почечных и психоневрологических заболеваний. Стандарт лечения включает в себя множество стероидов, которые имеют много неблагоприятных и/или опасных побочных эффектов. Существует необходимость в способах лечения для лечения заболеваний, позволяющих уменьшить или исключить использование стероидов.
Т и В лимфоцитарный аттенюатор (BTLA; CD272) является членом суперсемейства Ig и частью семейства рецепторов контрольных точек, которые отрицательно регулируют активацию иммунных клеток. BTLA в основном экспрессируется на В-клетках, Т-клетках и дендритных клетках. Природный лиганд для BTLA является членом суперсемейства рецепторов ФНО, медиатором проникновения вируса герпеса (HVEM; TNFRSF14).
Сообщалось, что человеческий HVEM-Fc связывается с человеческим BTLA, экспрессированным в клетках 293Т, с KD 112 нМ, как обнаружено с помощью проточной цитометрии. (Cheung et al., PNAS, 13 сентября 2005, 102:37, 13218-13223). Связывание HVEM с BTLA приводит к тирозин-фосфорилированию двух консервативных иммунорецепторных доменов ингибирующего мотива на основе тирозина в цитоплазматическом домене BTLA. Это фосфорилирование приводит к рекрутированию через два домена Src гомологии 2 протеинтирозинфосфатаз, которые придают ингибирующую активность BTLA путем дефосфорилирования и подавления положительного сигналинга клеточных рецепторов (например, трансдукционных сигнальных каскадов рецептора Т-клеток или рецептора В-клеток), таким образом приводя к подавлению активации иммунных клеток. В мышиной модели, склонной к самопроизвольному развитию волчанкоподобных заболеваний (мыши MRL-lpr), мыши с дефицитом BTLA имеют более выраженную лимфоцитарную инфильтрацию в слюнных железах, легких, поджелудочной железе, почках и суставах по сравнению с мышами, экспрессирующими BTLA. Следовательно, антитела-агонисты BTLA могут быть полезны для пациентов с аутоиммунными заболеваниями, такими как волчанка.
Антитела-агонисты к BTLA известны в данной области. Например, в патенте США № 8563694 (патент '694) описаны антитела-агонисты BTLA, которые либо блокируют (Mab21H6 и Mab19A7), либо не блокируют (Mab8D5 и МаЬ8АЗ) связывание HVEM с BTLA. Патент '694 описывает постоянную потребность в разработке методов лечения, которые используют ингибирующую роль BTLA в лимфоцитарных ответах, в то же время допуская связывание BTLA-HVEM. Однако не хватает антител-агонистов BTLA, которые имитируют связывание HVEM с BTLA для лечения аутоиммунных заболеваний. Антитело имитирует связывание HVEM с BTLA, если антитело имеет эпитоп, который значительно перекрывает сайт связывания HVEM, и существует структурное сходство между антителом и HVEM. Существует также недостаток антител-агонистов BTLA, которые связывают человеческие BTLA и пригодны для исследования на доклинических моделях аутоиммунных заболеваний in vivo, таких как мышиные модели и модели обезьян циномолгус. Таким образом, остается потребность в альтернативных антителахагонистах BTLA.
Антитела по данному изобретению стремятся предоставить альтернативные антитела-агонисты BTLA. Такие антитела-агонисты BTLA могут быть полезны при лечении аутоиммунных заболеваний, таких как волчанка. Такие антитела-агонисты BTLA способны связывать BTLA от множества видов, таких как человек, обезьяна циномолгус, и/или мышиные BTLA. Кроме того, такие антитела-агонисты BTLA демонстрируют повышенную активность in vitro по сравнению с антителом, имеющим такой же вариабельный участок тяжелой цепи и вариабельный участок легкой цепи, что и Mab8D5. Антитела по данному изобретению обладают по меньшей мере одной из этих желательных характеристик.
Одно такое антитело-агонист BTLA способно связывать BTLA человека, обезьяны циномолгус и мыши. Удивительно, но это антитело обладает желаемой перекрестной реактивностью, поскольку оно имитирует связывание HVEM с BTLA. Это антитело также имеет более высокую аффинность связывания с BTLA по сравнению с BTLA, связывающимся с HVEM. Это может принести пользу пациентам, имеющим состояния болезни с переходными уровнями HVEM, где может быть желательно иметь антитело-агонист, имитирующее BTLA, во время, когда у пациента наблюдается снижение HVEM.
Данные изобретения обеспечивают антитела, которые связываются с BTLA и активируют и/или усиливают BTLA-опосредованный сигналинг (антитело-агонист BTLA). Данное изобретение относится к антителу, которое содержит вариабельный участок легкой цепи (LCVR) и вариабельный участок тяжелой цепи (HCVR), где LCVR содержит определяющие комплементарность участки (CDR) LCDR1, LCDR2 и LCDR3, a HCVR содержит CDR HCDR1, HCDR2 и HCDR3, и где аминокислотная последовательность LCDR1 представляет собой SEQ ID NO: 22, аминокислотная последовательность LCDR2 представляет собой SEQ ID NO: 25, аминокислотная последовательность LCDR3 представляет собой SEQ ID NO: 28, аминокислотная последовательность HCDR1 представляет собой SEQ ID NO: 13, аминокислотная после- 1 043345 довательность HCDR2 представляет собой SEQ ID NO: 16, а аминокислотная последовательность HCDR3 представляет собой SEQ ID NO: 19. В одном варианте осуществления изобретения, антитело содержит LCVR и HCVR, и при этом аминокислотная последовательность LCVR представляет собой SEQ ID NO: 4, а аминокислотная последовательность HCVR представляет собой SEQ ID NO: 3. В другом варианте осуществления изобретения, антитело содержит легкую цепь (LC) и тяжелую цепь (НС), и при этом аминокислотная последовательность LC представляет собой SEQ ID NO: 2, а аминокислотная последовательность НС представляет собой SEQ ID NO: 1. В еще одном варианте осуществления изобретения, антитело содержит 2 LC и 2 НС, где аминокислотная последовательность каждой LC представляет собой SEQ ID NO: 2, а аминокислотная последовательность каждой НС представляет собой SEQ ID NO: 1.
Данное изобретение также обеспечивает антитело-агонист BTLA, в котором аминокислотная последовательность LCDR1 представляет собой SEQ ID NO: 23, аминокислотная последовательность LCDR2 представляет собой SEQ ID NO: 26, аминокислотная последовательность LCDR3 представляет собой SEQ ID NO: 29, аминокислотная последовательность HCDR1 представляет собой SEQ ID NO: 14, аминокислотная последовательность HCDR2 представляет собой SEQ ID NO: 17, а аминокислотная последовательность HCDR3 представляет собой SEQ ID NO: 20. В одном варианте осуществления изобретения, аминокислотная последовательность LCVR представляет собой SEQ ID NO: 8, а аминокислотная последовательность HCVR представляет собой SEQ ID NO: 7. В другом варианте осуществления изобретения, аминокислотная последовательность LC представляет собой SEQ ID NO: 6, а аминокислотная последовательность НС представляет собой SEQ ID NO: 5. В еще одном варианте осуществления изобретения, антитело содержит 2 LC и 2 НС, где аминокислотная последовательность каждой LC представляет собой SEQ ID NO: 6, а аминокислотная последовательность каждой НС представляет собой SEQ ID NO: 5.
Данное изобретение также обеспечивает антитело-агонист BTLA, в котором аминокислотная последовательность LCDR1 представляет собой SEQ ID NO: 24, аминокислотная последовательность LCDR2 представляет собой SEQ ID NO: 27, аминокислотная последовательность LCDR3 представляет собой SEQ ID NO: 30, аминокислотная последовательность HCDR1 представляет собой SEQ ID NO: 15, аминокислотная последовательность HCDR2 представляет собой SEQ ID NO: 18, а аминокислотная последовательность HCDR3 представляет собой SEQ ID NO: 21. В одном варианте осуществления изобретения, аминокислотная последовательность LCVR представляет собой SEQ ID NO: 12, а аминокислотная последовательность HCVR представляет собой SEQ ID NO: 11. В другом варианте осуществления изобретения, аминокислотная последовательность LC представляет собой SEQ ID NO: 10, а аминокислотная последовательность НС представляет собой SEQ ID NO: 9. В еще одном варианте осуществления изобретения, антитело содержит 2 LC и 2 НС, где аминокислотная последовательность каждой LC представляет собой SEQ ID NO: 10, а аминокислотная последовательность каждой НС представляет собой SEQ ID NO: 9.
Данное изобретение также относится к антителу, которое связывает BTLA, при этом антитело производится с помощью стадий, включающих иммунизацию кроликов Fc-меченным доменом внеклеточного домена (ECD) человеческого BTLA, и усиление белками, меченными BTLA-Fc человека и мыши. Аминокислотная последовательность ECD BTLA человека представляет собой аминокислоты 31-150 SEQ ID NO: 31.
Данное изобретение относится к антителу-агонисту BTLA, которое имитирует связывание HVEM с BTLA. Данное изобретение также относится к антителу-агонисту BTLA, которое способно связывать BTLA человека, обезьяны циномолгус и мыши.
Данное изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей антитело по данному изобретению и один или более фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или наполнителей. В некоторых вариантах осуществления изобретения фармацевтические композиции по данному изобретению можно использовать для лечения одного или более ревматических, нейронных и дерматологических заболеваний, причем такое лечение включает введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества фармацевтической композиции по данному изобретению. В некоторых конкретных вариантах осуществления изобретения, ревматическое заболевание представляет собой по меньшей мере одно из волчаночного нефрита, системной красной волчанки и ревматоидного артрита. В других конкретных вариантах осуществления изобретения дерматологическое заболевание представляет собой по меньшей мере одно из атопического дерматита и псориаза. В других конкретных вариантах осуществления изобретения нейрональное заболевание представляет собой рассеянный склероз.
Данное изобретение также относится к способу лечения пациента с одним или более ревматическим, нейронным и дерматологическим заболеванием, включающему введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества антитела по данному изобретению. В некоторых таких вариантах осуществления изобретения ревматическое заболевание представляет собой по меньшей мере одно из волчаночного нефрита, системной красной волчанки и ревматоидного артрита. В других конкретных вариантах осуществления изобретения дерматологическое заболевание представляет собой по меньшей мере одно из атопического дерматита и псориаза. В других конкретных вариантах осуществления изобретения нейрональное заболевание представляет собой рассеянный склероз.
В данном изобретении также предложено антитело по данному изобретению или его фармацевтическая композиция для применения в терапии. В некоторых вариантах осуществления изобретения дан
- 2 043345 ное изобретение относится к антителу по данному изобретению или его фармацевтической композиции для применения при лечении одного или более ревматических, нейрональных и дерматологических заболеваний. В некоторых таких вариантах осуществления изобретения ревматическое заболевание представляет собой по меньшей мере одно из волчаночного нефрита, системной красной волчанки и ревматоидного артрита. В других конкретных вариантах осуществления изобретения дерматологическое заболевание представляет собой по меньшей мере одно из атопического дерматита и псориаза. В других конкретных вариантах осуществления изобретения нейрональное заболевание представляет собой рассеянный склероз.
Данное изобретение также предусматривает применение антитела по данному изобретению или его фармацевтической композиции при изготовлении лекарственного средства для лечения одного или более ревматических, нейрональных и дерматологических заболеваний. В некоторых таких вариантах осуществления изобретения ревматическое заболевание представляет собой по меньшей мере одно из волчаночного нефрита, системной красной волчанки и ревматоидного артрита. В других конкретных вариантах осуществления изобретения дерматологическое заболевание представляет собой по меньшей мере одно из атопического дерматита и псориаза. В других конкретных вариантах осуществления изобретения нейрональное заболевание представляет собой рассеянный склероз.
Данное изобретение относится к молекуле ДНК, содержащей полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 5 или SEQ ID NO: 9. Данное изобретение также относится к молекуле ДНК, содержащей полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 6 или SEQ ID NO: 10.
Данное изобретение относится к молекуле ДНК, содержащей полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и содержащей полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. Данное изобретение также относится к молекуле ДНК, содержащей полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и молекулу ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В конкретном варианте осуществления изобретения, полинуклеотидная последовательность, кодирующая полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, представляет собой SEQ ID NO: 35, и полинуклеотидная последовательность, кодирующая полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, представляет собой SEQ ID NO: 36.
Данное изобретение также относится к молекуле ДНК, содержащей полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, и содержащей полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6. Данное изобретение также относится к молекуле ДНК, содержащей полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, и молекулу ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6. В конкретном варианте осуществления изобретения, полинуклеотидная последовательность, кодирующая полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, представляет собой SEQ ID NO: 37, и полинуклеотидная последовательность, кодирующая полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, представляет собой SEQ ID NO: 38.
Данное изобретение также относится к молекуле ДНК, содержащей полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, и содержащей полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10. Данное изобретение также относится к молекуле ДНК, содержащей полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, и молекулу ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10. В конкретном варианте осуществления изобретения, полинуклеотидная последовательность, кодирующая полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, представляет собой SEQ ID NO: 39, и полинуклеотидная последовательность, кодирующая полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10, представляет собой SEQ ID NO: 40.
Кроме того, данное изобретение относится к клетке млекопитающего, содержащей молекулу ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и молекулу ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. Данное изобретение также относится к клетке млекопитающего, содержащей молекулу ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, и полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6. Данное изобретение также относится к клетке млекопитающего, содержащей молекулу
- 3 043345
ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, и полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10. В одном варианте осуществления изобретения, клеточная линия млекопитающих представляет собой клеточную линию яичника китайского хомячка (CHO) или эмбриональной почки китайского хомячка (HEK).
Данное изобретение также относится к клетке млекопитающего, содержащей молекулу ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и/или молекулу ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, причем клетка способна экспрессировать антитело, содержащее НС, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и LC, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. Предпочтительно клетка млекопитающего содержит молекулу ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В одном варианте осуществления изобретения, клеточная линия млекопитающих представляет собой клеточную линию CHO или HEK.
Данное изобретение также относится к клетке млекопитающего, содержащей молекулу ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, и/или молекулу ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, причем клетка способна экспрессировать антитело, содержащее НС, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, и LC, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6. Предпочтительно клетка млекопитающего содержит молекулу ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, и полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6. В одном варианте осуществления изобретения, клеточная линия млекопитающих представляет собой клеточную линию СНО или HEK.
Данное изобретение также относится к клетке млекопитающего, содержащей молекулу ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, и/или молекулу ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10, где клетка способна экспрессировать антитело, содержащее НС, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, и LC, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10. Предпочтительно клетка млекопитающего содержит молекулу ДНК, содержащую полинуклеотидную последовательность, кодирующую полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, и полипептид, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10. В одном варианте осуществления изобретения, клеточная линия млекопитающих представляет собой клеточную линию СНО или HEK.
В другом варианте осуществления изобретения, данное изобретение относится к способу получения антитела, содержащего LC, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, и НС, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, причем способ включает культивирование клетки млекопитающего, содержащей ДНК, кодирующую LC, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, и/или НС, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, в условиях, при которых антитело экспрессируется, и восстанавливается экспрессированное антитело. Изобретение включает антитело, получаемое способом по изобретению, как описано непосредственно выше.
Данное изобретение также относится к способу получения антитела, содержащего LC, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, и НС, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, причем способ включает культивирование клетки млекопитающего, содержащей ДНК, кодирующую LC, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6, и/или НС, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, в условиях, при которых антитело экспрессируется, и восстанавливается экспрессированное антитело. Изобретение включает антитело, получаемое способом по изобретению, как описано непосредственно выше.
Данное изобретение также относится к способу получения антитела, содержащего LC, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10, и НС, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, причем способ включает культивирование клетки млекопитающего, содержащей ДНК, кодирующую LC, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10, и/или НС, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, в условиях, при которых антитело экспрессируется, и восстанавливается экспрессированное антитело. Изобретение включает антитело, получаемое способом по изобретению, как описано непосредственно выше.
Данное изобретение включает способ получения антитела, причем это антитело содержит две НС и две LC, в которых аминокислотная последовательность каждой из двух НС представляет собой SEQ ID NO: 1, а аминокислотная последовательность каждой из двух LC представляет собой SEQ ID NO: 2,
- 4 043345 и этот процесс включает
а) культивирование клетки млекопитающего по изобретению, как описано выше, в условиях, при которых антитело экспрессируется; и
b) восстановление экспрессированного антитела.
Изобретение включает антитело, получаемое способом по изобретению, как описано непосредственно выше.
Данное изобретение также включает способ получения антитела, причем это антитело содержит две НС и две LC, в которых аминокислотная последовательность каждой из двух НС представляет собой SEQ ID NO: 5, а аминокислотная последовательность каждой из двух LC представляет собой SEQ ID NO: 6, и этот процесс включает
a) культивирование клетки млекопитающего по изобретению, как описано выше, в условиях, при которых антитело экспрессируется; и
b) восстановление экспрессированного антитела.
Изобретение включает антитело, получаемое способом по изобретению, как описано непосредственно выше.
Данное изобретение также включает способ получения антитела, причем это антитело содержит две НС и две LC, в которых аминокислотная последовательность каждой из двух НС представляет собой SEQ ID NO: 9, а аминокислотная последовательность каждой из двух LC представляет собой SEQ ID NO: 10, и этот процесс включает
a) культивирование клетки млекопитающего по изобретению, как описано выше, в условиях, при которых антитело экспрессируется; и
b) восстановление экспрессированного антитела.
Изобретение включает антитело, получаемое способом по изобретению, как описано непосредственно выше.
Данное изобретение относится к антителу, которое находится в контакте с человеческим BTLA по структурному и функциональному эпитопу, имеющему следующие остатки SEQ ID NO: 31: Arg в положении 42 и His в положении 127. Данное изобретение также относится к антителу, которое находится в контакте с человеческим BTLA по структурному и функциональному эпитопу, содержащему Arg в положении 42 аминокислотной последовательности, заданной SEQ ID NO: 31.
Данное изобретение относится к антителу, которое находится в контакте с человеческим BTLA по новому структурному эпитопу, имеющему следующие остатки SEQ ID NO: 31: Asp в положении 35, Gln в положении 37, Arg в положении 42, Leu в положении 74, Gly в положении 76, Cys в положении 79, Arg в положении 114, Phe в положении 119, Gln в положении 120, Asn в положении 122, Ser в положении 128. В предпочтительном варианте осуществления изобретения, указанное антитело 22В3 имитирует связывание HVEM с BTLA, поскольку HCDR3 антитела 22В3 структурно сходно с HVEM. Предпочтительно, когда кристаллическая структура BTLA:антитело выровнена с кристаллической структурой BTLA:HVEM в программе, такой как PyMOL™, петля CDR антитела принимает конформацию, аналогичную петле HVEM, содержащей аминокислотные остатки 69-72 (аминокислоты ELTG из SEQ ID NO: 41).
Данное изобретение относится к антителу, которое находится в контакте с человеческим BTLA по функциональному эпитопу, имеющему Asp в положении 52 SEQ ID NO: 31. Антитело связывается с новым структурным эпитопом, имеющим следующие остатки SEQ ID NO: 31: His в положении 46, Glu в положении 55, Glu в положении 103, Pro в положении 104, Leu в положении 106, Pro в положении 107, Thr в позиция 134, Ala в позиции 139.
Данное изобретение относится к антителу, которое находится в контакте с человеческим BTLA по функциональному эпитопу, имеющему His в положении 68 и Lys в положении 81 SEQ ID NO: 31. В одном варианте осуществления изобретения, антитело связывается с новым структурным эпитопом, имеющим следующие остатки SEQ ID NO: 31: Tyr в положении 62, Ala в положении 64, His в положении 68, Arg в положении 85, Glu в положении 91, Phe в положении 98, Asn в положении 118.
Данное изобретение относится к антителу, которое находится в контакте с человеческим BTLA по новому структурному эпитопу, имеющему следующие остатки SEQ ID NO: 31: Asp в положении 35, Gln в положении 37, Arg в положении 42, Leu в положении 74, Gly в положении 76, Cys в положении 79, Arg в положении 114, Phe в положении 119, Gln в положении 120, Asn в положении 122, и Ile в положении 124, Ser в положении 128.
Используемый в данном документе термин антитело представляет собой молекулу иммуноглобулина, содержащую 2 НС и 2 LC, связанные дисульфидными связями. Аминоконцевая часть каждой LC и НС включает вариабельный участок, из около 100-120 аминокислот, в первую очередь ответственную за распознавание антигена через содержащиеся в нем CDR. CDR перемежаются с участками, которые являются более консервативными, называемыми каркасными участками (FR). Каждый LCVR и HCVR состоит из 3 CDR и 4 FR, расположенных от аминоконца до карбоксиконца в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. 3 CDR LC обозначаются как LCDR1, LCDR2 и LCDR3, а 3 CDR НС обозначаются как HCDR1, HCDR2 и HCDR3. CDR содержат большую часть остатков, которые образуют специфические взаимодействия с антигеном. Т.е. CDR содержат большую часть остатков, кото- 5 043345 рые находятся в контакте (в пределах 4,5 А) с остатками антигена. Таким образом, функциональная способность антитела связывать определенный антиген в значительной степени зависит от аминокислотных остатков в шести CDR. Назначение аминокислот доменам CDR в участках LCVR и HCVR антител по данному изобретению основано на хорошо известном соглашении нумерации по Кабат (Kabat et al., Ann. NY Acad. Sci., 190:382-93 (1971); Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication, № 91-3242 (1991)); и Chothia (Chothia C., Lesk A.M., Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins, J. Mol. Biol., 1987, 196:901-17; Chothia C., Lesk A.M., Tramontano A., Levitt M., Smith-Gill S.J., Air G., Sheriff S., Padlan E.A., Davies D., Tulip W.R. et al., Conformations of immunoglobulin hypervariable regions, Nature, 1989, 342:877-83). Начальный аминокислотный остаток HCDR1 определяется по Хотиа, а конечный аминокислотный остаток для HCDR1 определяется по Кабат. Начальные и конечные аминокислотные остатки для HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3 определены по Кабат.
Используемый в данном документе термин эпитоп может относиться к структурному эпитопу (сайтам антигена, которые находятся в контакте с вариабельным участком антитела) и/или функциональному эпитопу (сайтам антигена, которые могут или не могут быть в контакте с вариабельным участком антитела и необходимы для связывания антитела). Структурный эпитоп, определяемый с помощью рентгеновской кристаллографии, где любой остаток на BTLA человека в пределах 4,5 А от другого остатка на связанном Fab, считается сайтом контакта.
Антитела по данному изобретению могут быть получены и очищены с использованием известных способов. Например, последовательности к ДНК кодирующие НС (например, аминокислотную последовательность, заданную SEQ ID NO: 1) и LC (например, аминокислотную последовательность, заданную SEQ ID NO: 2), могут быть клонированы и встроены в вектор экспрессии GS (глютаминсинтетаза). Затем сконструированный вектор экспрессии иммуноглобулина может стабильно трансфицироваться в клетки СНО. Специалист в данной области поймет, что экспрессия антител у млекопитающих приводит к гликозилированию, как правило, в высоко консервативных сайтах N-гликозилирования в участке Fc. Стабильные клоны могут быть проверены на экспрессию антитела, специфически связывающегося с BTLA. Положительные клоны могут быть размножены в бессывороточной культуральной среде для производства антител в биореакторах. Среда, в которую было секретировано антитело, может быть очищена обычными методами. Например, среда может быть удобно нанесена на колонку с протеином А или G сефарозой FF, которая была уравновешена совместимым буфером, таким как фосфатно-солевой буферный раствор. Колонку промывают для удаления неспецифических связывающих компонентов. Связанное антитело элюируется, например, градиентом рН, и фракции антитела выявляются, например, с помощью SDS-PAGE, и затем объединяются. Антитело можно концентрировать и/или стерильно фильтровать, используя обычные методики. Растворимые агрегаты и мультимеры можно эффективно удалять обычными способами, включая эксклюзионную, с гидрофобным взаимодействием, ионообменную или гидроксиапатитную хроматографию. Продукт можно незамедлительно замораживать, например, при -70°C или можно лиофилизировать.
Антитело по данному изобретению может быть включено в фармацевтическую композицию, которая может быть получена способами, хорошо известными в данной области, и содержит антитело по данному изобретению и один или более фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или наполнителей.
Фармацевтическую композицию, содержащую эффективное количество антитело по данному изобретению, можно вводить пациенту с риском или проявлением заболеваний или расстройств, как описано в данном документе, первичными путями (например, подкожным, внутривенным, внутрибрюшинным, внутримышечным или трансдермальным). Эффективное количество относится к количеству, необходимому (в дозировках и в течение периодов времени и для средств введения) для достижения желаемого терапевтического результата. Эффективное количество антитела может варьироваться в зависимости от таких факторов, как состояние заболевания, возраст, пол и масса индивида, а также от способности антитела вызывать необходимый ответ у индивида. Эффективным количеством является также количество, при котором любые токсические или вредные эффекты антитела по данному изобретению перевешиваются терапевтически благоприятными эффектами.
Антитела по данному изобретению можно использовать при лечении пациентов. Более конкретно, ожидается, что антитела по данному изобретению будут лечить одно или более заболеваний, связанных с ревматическим, нейрональным и дерматологическим заболеванием. Ревматические заболевания характеризуются воспалением, которое может поражать суставы, мышцы и/или органы человека. Одним из таких ревматических заболеваний является системная красная волчанка (СКВ).
Используемые в данном документе взаимозаменяемо лечение и/или лечить и/или лечение предназначены для обозначения всех процессов, в которых может происходить замедление, прерывание, сдерживание, контроль, остановка или обращение прогрессирования расстройств, описанных в данном документе, но не обязательно указывают на полное устранение всех симптомов расстройства. Лечение включает введение антитела по данному изобретению для лечения заболевания или состояния у человека, на которое благоприятно влияет увеличение активности BTLA, и включает
- 6 043345 (а) ингибирование дальнейшего развития заболевания; и (b) облегчение заболевания, т.е. вызывание регрессии заболевания или расстройства или облегчение симптомов или их осложнений.
Конструирование антитела.
Антитела по данному изобретению были получены путем иммунизации кроликов Fc-меченым доменом внеклеточного домена (ECD) человеческого BTLA и усиления с помощью мышиного BTLA-Fcмеченного белка (25F7) или поочередно человеческими и мышиными меченными BTLA-Fc белками (22В3 и 23С8). Для выявления перекрестной реактивности проводили скрининг BTLA человека, мыши и обезьяны циномолгус, меченных гистидином. Аминокислотная последовательность BTLA человека задана SEQ ID NO: 31, аминокислотная последовательность BTLA мыши Balbc задана SEQ ID NO: 32, аминокислотная последовательность C57BL6 задана SEQ ID NO: 33, и аминокислотная последовательность BTLA обезьяны циномолгус задана SEQ ID NO: 34. Затем антитела были гуманизированы и аффинность созрела.
Примеры
Экспрессия и очистка сконструированных антител-агонистов BTLA.
Антитела-агонисты BTLA по данному изобретению могут быть экспрессированы и очищены по существу следующим образом. Соответствующую клетку-хозяина, такую как FIEK 293 или СНО, можно временно или стабильно трансфицировать экспрессионной системой для секреции антител, используя оптимальное предварительно определенное отношение векторов HC:LC (например, 1:3 или 1:2) или один вектор системы кодирования как НС, так и LC. Осветленную среду, в которую происходила секреция антитела, можно очищать, используя любой из многих обычно применяемых способов. Например, в случае фрагмента Fab среду удобно наносить на колонку MabSelect (GE Healthcare) или колонку KappaSelect (GE Healthcare), уравновешенную совместимым буфером, таким как фосфатно-солевой буферный раствор (рН 7,4). Колонку можно промывать для удаления неспецифических связывающих компонентов. Связанное антитело можно элюировать, например, градиентом рН (например, от 20 мМ Трис-буфера, рН 7,0, до 10 мМ цитратного натриевого буфера, рН 3,0, или от фосфатно-солевого буферного раствора, рН от 7,4, до 100 мМ глицинового буфера, рН 3,0). Обнаружение фракций антител можно проводить, например, с помощью SDS-PAGE, а затем проводить их объединение. Дальнейшая очистка является необязательной, в зависимости от предполагаемого использования. Антитело можно концентрировать и/или стерильно фильтровать, используя обычные методики. Растворимые агрегаты и мультимеры можно эффективно удалять обычными способами, включая эксклюзионную, с гидрофобным взаимодействием, ионообменную, мультимодальную или гидроксиапатитную хроматографию. Чистота антитела после этих стадий хроматографии составляет между от около 95% до около 99%. Продукт можно хранить в холодильнике, незамедлительно замораживать при -70°C или можно лиофилизировать. Аминокислотные SEQ ID NO: для приведенных в качестве примеров антител по данному изобретению показаны ниже.
Таблица 1 Аминокислотные последовательности приведенных ___________в качестве примеров антител-агонистов BTLA___________
| SEQ ID NO антитела | ||||||
| Антитело | HCDR1 | HCDR2 | HCDR3 | LCDR1 | LCDR2 | LCDR3 |
| 22ВЗ | 13 | 16 | 19 | 22 | 25 | 28 |
| 23С8 | 14 | 17 | 20 | 23 | 26 | 29 |
| 25F7 | 15 | 18 | 21 | 24 | 27 | 30 |
Аффинность и кинетика связывания.
Аффинность и кинетику связывания антител-агонистов BTLA по данному изобретению (22В3, 23С8 и 25F7) с BTLA измеряют с помощью поверхностного плазмонного резонанса с использованием Biacore® 3000 (GE Healthcare). Аффинность связывания измеряют путем иммобилизации BTLA-белка около 120 RU (человека, крысы, мыши (Balbc или C57BL6) или BTLA обезьяны циномолгус) посредством аминного связывания на чипе Biacore® CM5, и протекающего антитела-агониста BTLA, начиная с 500 нМ в 2-кратного серийного разведения до 15,6 нМ. Эксперименты проводят при 25°C в буфере HBSEP (GE Healthcare BR100669; 10 мМ HEPES, 150 мМ NaCl, 3 мМ ЭДТА, 0,05% поверхностно-активного вещества Р20, рН 7,4). Для каждого цикла, 250 мкл образца антитела пропускают через ячейку потока 1 и 2 при 50 мкл/мин, а затем диссоциируют в течение 10 мин. Поверхность чипа регенерируют с 5 мкл инъекции глицинового буфера при рН 1,5 при 10 мкл/мл потока. Данные соответствуют модели связывания Ленгмюра 1: 1 для получения kon, kf и для вычисления KD. Следуя процедурам, по существу, как описано выше, были соблюдены следующие параметры (показанные в табл. 2). Данные, представленные ниже, представляют собой среднее из трех экспериментов для человека, цино, крысы и мыши для 22В3.
- 7 043345
Таблица 2
Аффинность и кинетика связывания
| Антитело | Антиген (BTLA) | коп (1/Мс) | kOff (1/с) | KD (нМ) |
| 22ВЗ | Человек | 5,87Е + 06 | 2Д9Е-03 | 0,365 |
| Цино | 2,45Е + 06 | 6,47Е-04 | 0,27 | |
| Мышиные (balbc) | 2,60Е + 06 | 8,58Е-02 | 32,5 | |
| Мышиные (C57BL6) | 1,89Е + 06 | 2,65Е-01 | 147 | |
| Крыса | 2,10Е + 06 | 4,62Е-02 | 24,1 | |
| 23С8 | Человек | 1,59Е + 05 | 2,93Е-04 | 1,93 (п = 3) |
| Цино | 8,71Е + 04 | 3,09Е-03 | 35,35 (п = 2) | |
| Мышиные (balbc) | Без связывания | Без связывания | Без связывания | |
| Мышиные (C57BL6) | Без связывания | Без связывания | Без связывания | |
| Крыса | Не тестировано | Не тестировано | Не тестировано | |
| 25F7 | Человек | 6,8622Е + 04 | 1Д2Е-О2 | 206,2 (п = 2) |
| Цино | Не тестировано | Не тестировано | Не тестировано | |
| Мышиные (balbc) | Не тестировано | Не тестировано | Не тестировано | |
| Мышиные (C57BL6) | 7,70Е + 04 | 3,50Е-04 | 4,63 (п=1) | |
| Крыса | Не тестировано | Не тестировано | Не тестировано |
Как показано выше в табл. 2, антитела-агонисты BTLA по данному изобретению связывают BTLA. В частности, антитело 22В3 способно связывать BTLA человека, мыши и макаки циномолгус.
Связывание с первичными клетками.
Способность антител BTLA по данному изобретению (22В3, 23С8 и 25F7) связывать первичные клетки разных видов определяют с помощью FACS. Мононуклеарные клетки периферической крови человека (РВМС) выделяют из образца донорской крови (Банк крови Сан-Диего, # LRS-WBC) с использованием пробирок Ficoll (GE # 17-1440-02) и SepMate (STEMCELL # 15450) в соответствии с протоколом производителя. РВМС цино (Worldwide Primates # CA-10) оттаивают после жидкого азота и промывают один раз буфером FACS (таким же, как указано выше).
Селезенки самцов мышей C57BL6 (JAX) или самок крыс Sprague Dawley (Harlan) собирают, объединяют и диссоциируют на суспензии отдельных клеток с использованием клеточного сита и поршня шприца через коническую пробирку объемом 50 мл, промытую RPMI 1640, дополненной 10% инактивированной теплом FBS и 2 мМ ЭДТА. Клетки осаждают, среду удаляют, и эритроциты лизируют путем ресуспендирования осадка в 2 мл лизирующего буфера ACK (gibco # A10492-01) в течение приблизительно 2 мин перед гашением полной RPMI. Лизированные клетки можно осадить и промыть один раз в буфере FACS (DPBS 1X, содержащий 3% FBS, 20 мМ HEPES и 2 мМ ЭДТА).
Выделенные первичные клетки определяют количественно с использованием счетчика клеток Countess, и ресуспендируют при 2х106 клеток на мл в буфере FACS. Эксперименты с проточной цитометрией проводят в тот же день, что и выделение клеток, с помощью высева 50 мкл (~0,1х106) клеток в 96-луночный планшет (Greiner # 650101). Неспецифическое связывание антител предотвращают добавлением 1 мкл Fc-блокатора (например, из BD # 553142) в течение 15 мин при 4°C без промывания.
Связывание с антителами BTLA тестируют в различных концентрациях путем серийного разведения в буфере FACS. Например, очищенное антитело и контроли, начиная с разных концентраций, сначала разбавляют до 30 мкг/мл, а серийные разведения 1:3 исходного материала проводят в общей сложности до 10 титрований (плюс необработанный контроль). Титры антител инкубируют с клетками в течение 20 мин при 4°C и промывают буфером FACS до окрашивания. Клетки окрашивают с использованием антител, конъюгированных с флуорохромом, для идентификации конкретных типов клеток (например, CD19 В-клеток, CD4 Т-клеток или CD8 Т-клеток) или с использованием вторичного антитела для выявления наличия или отсутствия связывания антител с этим подмножеством. Окрашивание проводят в течение 20 мин при 4°C и промывают 3 раза буфером FACS перед анализом на проточном цитометре. Результаты анализируют с использованием стандартного программного обеспечения для анализа FACS (например, FACSDiva) и сообщают как среднюю интенсивность флуоресценции вторичного антитела для каждого титрования. Положительный результат, который указывает на связывание, определяется средней интенсивностью флуоресцентного окрашивания выше фона.
Следуя процедурам, в основном, как описано выше, антитело 22В3 связывается с BTLA-экспрессирующими клетками человека, обезьяны циномолгус, крысы и мыши, антитело 23С8 связывается с BTLA-экспрессирующими клетками человека и Cynomolgus, a антитело 25F7 связывается с
- 8 043345
BTLA-экспрессирующими клетками человека, обезьяны циномолгус и мыши.
Антитело-агонист BTLA индуцированное фосфорилирование.
Для определения способности антител-агонистов BTLA по данному изобретению (22В3 и 25F7) индуцировать фосфорилирование тирозина в линии В-клеток человека антитело BTLA связывают с 24-луночным культуральным планшетом при 10 мкг/мл в течение одного часа при 37°C час. Планшет промывают ФСБ для удаления любого несвязанного антитела. Линию В-клеток, экспрессирующих BTLA человека, такую как Ramos.2G6.4C10 клеточную линию В-лимфоцита человека (АТСС), можно добавлять в лунки при 10x106 клеток/мл и инкубировать при 37°C в течение 30 мин. Клетки удаляют и лизируют в буфере для полного лизиса (MSD) и замораживают при -80°C в течение по меньшей мере 30 мин.
Фосфорилированный-BTLA обнаруживают при помощи Meso Sector S 600. Планшеты для определения стрептавидина готовят путем инкубации в блокирующем растворе (MSD) в течение одного часа при комнатной температуре. Биотинилированное антитело для захвата BTLA (5A5) наносят на планшет в течение одного часа при комнатной температуре с последующими тремя или более стадиями триспромывки. Клеточные лизаты инкубируют в течение 2 ч при комнатной температуре. Общий BTLA детектируют с помощью антитела SULFO-TAG против BTLA (ANC6E9), а фосфорилированный BTLA измеряют с помощью антифосфотриозинового антитела SULFO-TAG (PY20; MSD) с последующими тремя или более этапами трис-промывки. Добавление 2x Read Buffer T (MSD) затем добавляют в лунки непосредственно перед анализом с использованием Meso Sector S 600.
Следуя процедурам, в основном, как описано выше, антитело 22В3 приводило к 2,44-кратному увеличению фосфорилирования тирозина BTLA по сравнению с фоном по сравнению с отрицательным контролем, а антитело 25F7 приводило к 1,47-кратному увеличению фосфорилирования тирозина BTLA по сравнению с фоном по сравнению с отрицательным контролем. Эти данные демонстрируют, что антитела-агонисты BTLA 22B3 и 25F7 способны индуцировать фосфорилирование BTLA в линии В-клеток человека.
Ингибирование пролиферации первичных В-клеток человека.
Активность антител-агонистов BTLA по данному изобретению in vitro оценивают по способности ингибировать пролиферацию первичных В-клеток человека. Первичные В-клетки человека выделяют из мононуклеарных клеток периферической крови здорового человека с использованием набора для выделения В-клеток человека (EasySep) и ресуспендируют в соответствующих средах первичных клеток человека. Анти-IgM наносят на планшеты вместе с титрами изотипического контроля или антителом BTLA и инкубируют в течение одного часа при 37°C с последующей стадией промывки ФСБ. Изолированные человеческие В-клетки добавляют в каждую лунку и инкубируют в течение 72 ч при 37°C с 5% СО2 с последующим импульсом [3Н]-тимидина в течение последних 18 ч. После инкубации планшеты извлекают и помещают на сухой лед на 30 мин, а затем хранят при -20°C до готовности к сбору. Клетки лизируют путем оттаивания и собирают с помощью Harvester 9600 (Tomtec). Пролиферацию оценивают путем измерения включения [3Н]-тимидина с помощью микропланшетного счетчика MicroBeta2 2450 (Perkin Elmer).
Подсчеты используются для оценки относительного пролиферативного ответа в этом анализе, а процент ингибирования рассчитывается с использованием уравнения
[% ингибирования=(AVGmaxsignal-signalample)/AVGmaxsignalχ 100], которое можно использовать для определения значения IC50 с помощью графического программного обеспечения (GraphPad Prism).
Следуя процедурам, в основном, как описано выше, антитело-агонист BTLA22B3 было способно ингибировать первичную пролиферацию В-клеток in vitro с рассчитанной IC50 0,32±0,1 нМ, антитело 23С8 было способно ингибировать первичную пролиферацию В-клеток in vitro с рассчитанной IC50 0,14 нМ, и антитело 25F7 было способно ингибировать первичную пролиферацию В-клеток in vitro с рассчитанной IC50 0,17 нМ. В аналогичном эксперименте антитело 22В3 было способно ингибировать первичную пролиферацию В-клеток с рассчитанной IC50 0,32 нМ, и антитело, имеющее тот же HCVR и LCVR, что и Mab8D5 (SEQ ID NO: 11 и 18 в патенте '694 соответственно) ингибировало первичную пролиферацию Вклеток с рассчитанной IC50 6,38 нМ. Эти данные демонстрируют, что антитела-агонисты BTLA 22B3, 23С8 и 25F7 способны ингибировать пролиферацию В-клеток in vitro, и что антитело 22В3 обладает большей активностью in vitro по сравнению с Mab8D5.
Гуманизированная NSG модель мыши GvHD.
Предотвращение заболевания трансплантат против хозяина, вызванного РВМС человека, определяется in vivo.
Вкратце, самок мышей NSG (JAX Labs, Stock # 05557), возрастом приблизительно 8-10 недель, нормализуют и делят на группы лечения (n=8 мышей на группу лечения) на основании базовых измерений массы тела. Мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) выделяют из программы доноров крови (Банк крови Сан-Диего, # LRS-WBC) с использованием пробирок Ficoll (GE # 17-1440-02) и SepMate (STEMCELL # 15450) в соответствии с протоколом производителя. РВМС ресуспендируют в количестве примерно 150x106 клеток на мл ФСБ. Группы лечения ослеплены по отношению к дозирова
- 9 043345 нию.
В день 1 100 мкл (15х106 клеток) РВМС, суспендированных в ФСБ (как описано выше) (или 100 мкл ФСБ для не приживленных контролей), вводят внутривенно (в/в) в хвост каждой мыши. Мышам еженедельно (QW) вводят антитело по данному изобретению (22В3 или 23С8) или контроли в различных концентрациях в носителе ФСБ путем подкожных (п/к) инъекций. Три независимых исследования выполняются по существу, как описано в данном документе. Дозирующие концентрации для каждого исследования составляют [исследование 1 (антитело 22В3): 0,1, 1,0, 5,0, 10,0 и 20,0 мг/кг; исследование 2 (антитело 22В3 или 23С8): 0,001, 0,01, 10,0 и 100 мпк; и исследование 3: 0,001, 0,005, 0,01, 0,1, 0,5 и 1,0 мпк].
Исследование прекращают, и мышей умерщвляют до того, как животные изотипического контроля теряют 20% от исходной массы тела (исследования 1 и 2) или день 28 (исследование 3). Массу записывают (исследование 1 и исследование 2), сыворотку собирают для анализа цитокинов (исследование 1; анализ проводят с помощью MSD ИФА; анализируются цитокины ФНОа, ИЛ-10, ИЛ-6, ИЛ-4, ИЛ12р70, ИЛ-13, ИЛ-2 и ИЛ-8) и селезенки собирают для фенотипирования/фармакодинамического анализа (измеренного по уменьшению популяции CD 8 Т-клеток; исследование 1 и исследование 3).
Следуя процедурам, по существу, как описано выше, были получены следующие данные.
Животные, обработанные антителом 22В3 в исследовании 1, продемонстрировали следующее (в дозах 0,1, 1,0, 5,0, 10,0 или 20,0 мг/кг антитела):
(i) схожую массу тела в конце исследования по сравнению с массой тела контрольных животных без трансплантации;
(ii) снижение цитокинов ФНОа, ИЛ-10, ИЛ-6, ИЛ-4 и ИЛ-12р70 по сравнению с животными изотипического контроля; и (iii) снижение популяции CD8 Т-клеток по сравнению с животными изотипического контроля (фенотипирование/фармакодинамический анализ).
Данные исследования 2 демонстрируют, что мыши, получавшие 0,01 мг/кг антитела 22В3, или 1,0, 5,0 или 10,0 мг/кг антитела 23С8, имели сходные массы тела в конце исследования по сравнению с массами тела контрольных животных без трансплантации. Исследование 2 не продемонстрировало активность 22В3 в отношении массы тела при 10,0 мг/кг, что может отражать естественную изменчивость доноров этой модели. В исследовании 3 антитело 22В3 продемонстрировало фармакодинамическую активность in vivo при следующих дозах антитела: 0,01, 0,1, 0,5 и 1,0 мг/кг. Взятые вместе, эти данные демонстрируют, что антитело 22В3 и антитело 23С8 были эффективными в предотвращении GvHD in vivo.
MIFNa-индуцированный волчаночный нефрит.
Модель интерферона-альфа (ИФНа)-индуцированного волчаночного нефрита представляет собой мышиную модель системной красной волчанки (СКВ), в которой ИФНа используется для синхронизации начала и ускорения прогрессирования заболевания при скрещивании с новозеландским черным и новозеландским белым (NZB/W) мышами. Мышиная модель NZB/W является классической моделью спонтанного волчаночного нефрита. Прогрессирование заболевания у этих мышей может быть ускорено с помощью экзогенного введения ИФНа с использованием аденовирусных векторов. Эта модель волчаночного нефрита используется для демонстрации активности антител-агонистов BTLA по данному изобретению.
За один день до начала исследования одиннадцатинедельных самок мышей NZB/W сортируют случайным образом в зависимости от массы тела. Мышей распределяют по следующим группам лечения:
(1) аденоассоциированный вирус LacZ (AAV+10 мг/кг РАА изотипического контроля человеческого IgG4 (РАА представляет собой мутации S228P, F234A и L235A);
(2) ИФНа AAV+10 мг/кг РАА изотипического контроля человеческого IgG4;
(3) ИФНа AAV+3 мг/кг 22В3 антитела;
(4) ИФНа AAV+10 мг/кг 22В3 антитела; или (5) ИФНа AAV+50 мг/кг циклофосфамида.
В день начала исследования (день 0) мышам вводят один раз 1011 копий генома (GC) AAV, экспрессирующего ген LacZ (не больного), или мышиный ИФНа (больного) в ФСБ внутривенно. В группах 1-4 мыши получали изотипический контроль или антитела к антителу 22В3 в ФСБ подкожно один раз в неделю, начиная с дня 0. В группе 5 мыши получали циклофосфамид в ФСБ внутрибрюшинно каждые 10 дней. Образцы мочи отбирают у мышей каждые 2 недели до окончания исследования через 6 недель после начала лечения. ИФА для мышиного микроальбумина Kamiya Biomedical™ используют для количественного определения уровня альбумина в моче. Креатинин мочи измеряется с помощью ферментативного анализа креатинина (Roche Diagnostics). Альбуминурия, биомаркер почечной функции, определяется как более чем 300 мкг альбумина на мг креатинина, обнаруженного в моче.
Следуя процедурам, в основном, как описано выше, к 4-й неделе заболеваемость альбуминурией в группе с болезнью, получавшей изотип (ИФНа AAV+hIgG4 РАА), достигла 100% и оставалась повышенной до конца исследования, в то время как мыши, не обработанные LacZ AAV (не больные), не проявляли каких-либо случаев альбуминурии. Циклофосфамид, который может быть остро нефротоксичным, вызывал кратковременное увеличение альбуминурии у больных мышей, но частота альбуминурии в
- 10 043345 группе циклофосфамида была снижена до нуля к концу исследования. Антитело 22В3 в дозе 3 и 10 мг/кг было в состоянии снизить заболеваемость альбуминурией до 50 и 20% соответственно на 28-й день и на и 70% соответственно на 42-й день. Эти результаты показали, что антитело 22В3 способно сохранять почечную функцию в модели.
График Каплана-Мейера (данные не показаны) процентной выживаемости во время исследования показал, что почечная недостаточность в группе лечения, получавшей изотип, приводила к смерти, начиная с 28-го дня. К концу исследования выживаемость в группе лечения, получавшей изотип, составляла 60%. Не больные и получавшие циклофосфамид группы имели 100% выживаемость. Мыши, получавшие 10 мг/кг антитела 22В3, также показали 100% выживаемость в конце исследования, тогда как мыши, получавшие 3 мг/кг, показали 80% выживаемость. Эти результаты показали, что антитело 22В3 способно предотвратить смертельные исходы, связанные с заболеванием, в этой модели.
Имиквимод-индуцированная модель псориаза.
Протестирована способность антитела по данному изобретению ограничивать тяжесть псориазоподобного дерматита, индуцированного применением агониста TLR7/8 имиквимода (IMQ). Семинедельным самкам мышей B6.SJL-Ptprca Pepcb/BoyJ (инвентарный номер JAX: 002014) или мышей HVEM’/’ (описано в Wang et al., J. Clin. Invest., 115:3, 711-717, March 2005) внутрибрюшинно вводят 3 или 1 мг/кг антитела 22В3 или антитела 25F7, соответственно, в день 0, и спины мышей выбривают. Животные, которым вводили изотипический контроль hIgG4, служили в качестве контроля. В дни 1-3 мышей анестезируют ингаляционным изофлюраном (VetOne), а затем наносят 5% крем IMQ (50 мг, Fougera) на определенную область выбритой кожи. На 4-й день обработанный участок кожи иссекают и анализируют на предмет тяжести заболевания и экспрессии генов, связанных с воспалением.
Следуя процедурам, в основном, как описано выше, гистологический анализ продемонстрировал утолщение эпидермального слоя с паракератозом и гиперкератозом в группах, обработанных изотипическим контролем hIgG4 или антителом 22В3 1 мг/кг. У мышей, получавших 3 мг/кг антитела 22В3 или 3 мг/кг антитела 25F7, наблюдалось значительное уменьшение толщины эпидермиса, при этом некоторые участки выглядели гистологически нормальными. Экспрессию генов в коже анализировали с помощью кПЦР с использованием iTaq Universal SYBR Green Supermix (Bio-Rad). У мышей, получавших 3 мг/кг антитела 22В3, наблюдалось значительное снижение экспрессии ИФН типа I (ИФНа, ИФНв) и ИФНу, а также генов ИФН-ответа (Isg15, Mx1, Mx2, Oas2). Анализ цитокинов, участвующих в установлении IMQ-индуцированного дерматита, также продемонстрировал значительное снижение экспрессии ИЛ-22 и ИЛ-23 в группе лечения антителом 22В3 3 мг/кг. Эти данные демонстрируют, что антителаагонисты BTLA 22B3 и 25F7 способны уменьшать толщину эпидермиса в мышиной модели псориазоподобного дерматита.
Определение эпитопа.
Функциональные эпитопы антител-агонистов BTLA по данному изобретению определяют с помощью ИФА, а структурные эпитопы определяют с помощью рентгеновской кристаллографии.
Методы.
ИФА: функциональный эпитоп.
Следующий набор поверхностных мутаций BTLA был введен индивидуально в человеческий белок BTLA, слитый с (человеческим) Fc: D35R, Q37R, Y39E, R42D, Q43A, E45R, S47H, L49R, D52R, E55R, E57R, D84R, N65R, Н68А, V80R, K81E, E83R, S88H, K90H, Е91Н, I95R, Е103Н, L106R, N108R, R114V, S121Y, N122R, Е125Н, Н127Е, T130R, Y132R и Т134Н.
Связывание 22В3 и 23С8 определяли с использованием ИФА, в котором антитело для картирования эпитопа захватывали иммобилизованным антителом против кролика и после промывки каждого мутанта BTLA инкубировали в виде 4-точечной 4-кратной серии разведений с захваченным антителом и детектировали с ферментом связанным с античеловеческим Fc реагентом. Полученный сигнал сравнивали среди антител и контрольных антител. Функциональный эпитоп обычно указывал на себя резким снижением сигнала для одного или двух мутантов. Для антитела 25F7 проводили сэндвич-ИФА, в котором гуманизированный 22В3 был иммобилизован, мутанты BTLA были захвачены и связаны кроличьим 25F7. Это дало намного более сильный сигнал, и эпитоп 25F7 мог быть идентифицирован после удаления эпитопа 22В3.
Рентгеновская кристаллография: структурный эпитоп.
Чтобы определить взаимодействующие интерфейсы и, следовательно, физический эпитоп на BTLA различных антител, человеческий BTLA совместно кристаллизовали с Fab-частью антитела по данному изобретению и определяли кристаллическую структуру. Из полученной кристаллической структуры остатки BTLA в пределах 4,5 А от любого атома антитела были подсчитаны как часть эпитопа (с использованием программного обеспечения Pymol для визуализации). 4,5 А измеряется от центра атома до центра атома. Любой остаток по меньшей мере с одним атомом, который на 4,5 А близок к любому атому в антителе, является частью эпитопа.
Две структуры 22В3 были определены в комплексе с BTLA человека. В первой использовалось исходное кроличье антитело 22В3 Fab, меченное гистидином и очищенное мутантом S47H (стабилизи
- 11 043345 рующая мутация) человеческого BTLA, экспрессированного в виде слияния Fc, а затем расщепленного и очищенного. Эти два белка были смешаны в приблизительно эквимолярном соотношении и скринированы на коммерчески доступных экранах для кристаллизации. Кристаллы были получены и дифракционные данные были собраны в Advanced Photon Source. Эти данные были уменьшены и решены путем молекулярной замены и уточнены, чтобы получить структуру комплекса с высоким разрешением между 22В3 и BTLA. Второй комплекс находился между аффинно-зрелой версией (с мутациями НС I56Q/T57H/G98A и LC S95H) гуманизированного 22В3 (Fab-часть) и BTLA человека. Они были совместно экспрессированы, очищены как комплекс и подвергнуты аналогичному скринингу. Полученная структура и эпитоп были аналогичны первой структуре.
Структура 23С8 в комплексе была получена так же, как и первый комплекс 22В3, а именно путем очистки His-меченого исходного Fab кролика, смешивания с мономерным S47H человеческого BTLA и кристаллизации.
Структура 25F7 в комплексе с BTLA человека была получена в соответствии со вторым комплексом 22В3, а именно путем совместной экспрессии, совместной очистки и кристаллизации. Был использован двойной мутант гуманизированного 25F7 с улучшенным связыванием с человеческим BTLA (гуманизированный 25F7, используемый для определения эпитопа, имеет мутации в НС S30W/LC E27R).
Результаты.
Антитело 22В3. Среди ряда поверхностных мутантов BTLA, R42D и Н127Е оказали значительное негативное влияние на связывание с антителом 22В3 кролика (содержащее те же CDR, что и 22В3, но с каркасом кролика). Функциональный эпитоп содержит Arg в положении 42 и His в положении 127 BTLA человека (SEQ ID NO: 31). Остатки BTLA, которые находятся в пределах 4,5 А от 22В3 в комплексе кристаллической структуры между BTLA человека и Fab 22B3 кролика, и являются структурным эпитопом, представляют собой следующие остатки SEQ ID NO: 31. Asp в положении 35, Gln в положении 37 до Arg в положении 42, Leu в положении 74, Gly в положении 76 до Cys в положении 79, Arg в положении 114, Phe в положении 119, Gln в положении 120 и Asn в положении 122 до Ser в положении 128. Остатки BTLA, которые находятся в пределах 4,5 А от 22В3 в комплексе кристаллической структуры между BTLA человека и вариантом 22В3 человека (НС I56Q/T57H/G98A LC S95H), представляют собой Asp в положении 35, Gln в положении 37 и Arg в положении 42, Leu в положении 74, Gly в положении 76 и Cys в положении 79, Arg в положении 114, Phe в положении 119, Gln в положении 120, Asn в положении 122, и Ile в положении 124 до Ser в положении 128 SEQ ID NO: 31.
В аналогичном исследовании структурным эпитопом для связывания HVEM с BTLA были следующие аминокислоты BTLA: Gln в положении 37 до Arg в положении 42, Leu в положении 74, Gly в положении 76, Thr в положении 77, Ser в положении 112, Arg в положении 114, Asn в положении 118, Ser в положении 121 до Ser в положении 128, и Thr в положении 130. Структурное сходство между антителом 22В3 и HVEM оценивали путем наложения кристаллической структуры антитело:ВТЕА на кристаллическую структуру HVEM:BTLA, выравнивая молекулы BTLA. Среднеквадратичное отклонение остова в участке HVEM, содержащем аминокислотные остатки 69-72 и соответствующем участке антитела, было определено как 1,4 А.
Антитело 23С8. D52R блокирует связывание 23С8 кролика (содержащего тот же HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1 и LCDR2, что и 23С8, имеющий LCDR3 QCTYGGVVGSTSDDNP и имеющий каркас кролика) с человеческим BTLA в ИФА. Функциональный эпитоп содержит Asp в положении 52 BTLA человека (SEQ ID NO: 31). Остатки BTLA, которые находятся в пределах 4,5 А от 23С8 в комплексе кристаллической структуры между BTLA человека (S47H) и Fab 23C8 кролика, и является структурным эпитопом, представляют собой His в положении 46 до Glu в положении 55, Glu в положении 103, Pro в положении 104, Leu в положении 106, Pro в положении 107, Thr в положении 134 до Ala в положении 139 SEQ ID NO: 31. Антитело 23С8 не имитирует связывание HVEM.
Антитело 25F7. Среди ряда поверхностных мутантов BTLA, H68A и K61E оказали значительное негативное влияние на связывание с антителом 25F7 кролика (содержащее те же CDR, что и 25F7, но с каркасом кролика). Функциональный эпитоп содержит His в положении 68 и Lys в положении 81 BTLA человека (SEQ ID NO: 31). Остатки BTLA, которые находятся в пределах 4,5 А от 25F7 в комплексе кристаллической структуры между BTLA человека и вариантом Fab гуманизированного 25F7 (НС S30W, LC E27R), и является структурным эпитопом, представляют собой Tyr в положении 62, Ala в положении 64 до His в положении 68, Arg в положении 85 до Glu в положении 91, Phe в положении 98 и Asn в положении 118 SEQ ID NO: 31. Антитело 25F7 не имитирует связывание HVEM.
- 12 043345
Последовательности.
НС антитела 22ВЗ (SEQ ID NO: 1)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFSLSSYGVSWVRQAPGQGLEWMGAISYDGITYY ASWAKSRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGDYYDDYVYVYALDIWGQGTL VTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVL QSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPS VFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNST YRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTK NQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEG NVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
LC антитела 22B3 (SEQ ID NO: 2)
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCQASQSISTALAWYQQKPGQAPRLLIYAASTLASGIPDRFS GSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQGYSSSNLDNVFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDE QLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSK ADYEKHK VYACEVTHQGLS SP VTKSFNRGEC
HCVR антитела 22B3 (SEQ ID NO: 3)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFSLSSYGVSWVRQAPGQGLEWMGAISYDGITYY ASWAKSRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARGDYYDDYVYVYALDIWGQGTL VTVSS
LCVR антитела 22B3 (SEQ ID NO: 4)
EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCQASQSISTALAWYQQKPGQAPRLLIYAASTLASGIPDRFS GSGSGTDFTLTISRLEPEDF AVYYCQQGYS S SNLDNVFGGGTKVEIK
НС антитела 23C8 (SEQ ID NO: 5)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFDISKYNIQWVRQAPGKGLEWVGFINYGGSAYYA SRAKGRFTISRDDSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCARGLSNSDLWGQGTLVTVSSASTKG PSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSS VVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPK DTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTV LHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLV KGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMH EALHNHYTQKSLSLSLG
LC антитела 23C8 (SEQ ID NO: 6)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSISSWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRF SGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQSTYGGVVGSTSDDNPFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIF
- 13 043345
PPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTL TLSKAD YEKHK VYACEVTHQGLS SP VTKSFNRGEC
HCVR антитела 23C8 (SEQ ID NO: 7)
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFDISKYNIQWVRQAPGKGLEWVGFINYGGSAYYA SRAKGRFTISRDDSKNSLYLQMNSLKTEDTAVYYCARGLSNSDLWGQGTLVTVSS
LCVR антитела 23C8 (SEQ ID NO: 8)
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCQASQSISSWLSWYQQKPGKAPKLLIYRASTLASGVPSRF SGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQSTYGGVVGSTSDDNPFGGGTKVEIK
НС антитела 25F7 (SEQ ID NO: 9)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFSLSTYAMNWVRQAPGQGLEWMGIISDDGTTYY ATWAKGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDAGAGGVQDYLTLWGQGTLV TVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQ SSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSV FLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTY RVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKN QVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGN VFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG
LC антитела 25F7 (SEQ ID NO: 10)
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCQASENIYNFLAWYQQKPGQPPKLLIYSASTLASGVPDRF SGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQGSSNSNIDNPFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSD EQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLS К AD YEKHK VYACEVTHQGLS SP VTKSFNRGEC
HCVR антитела 25F7 (SEQ ID NO: 11)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGFSLSTYAMNWVRQAPGQGLEWMGIISDDGTTYY ATWAKGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCARDAGAGGVQDYLTLWGQGTLV TVSS
LCVR антитела 25F7 (SEQ ID NO: 12)
DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCQASENIYNFLAWYQQKPGQPPKLLIYSASTLASGVPDRF SGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQGSSNSNIDNPFGGGTKVEIK
HCDR1 антитела 22B3 (SEQ ID NO: 13)
GFSLSSYGVS
HCDR1 антитела 23C8 (SEQ ID NO: 14)
GFDISKYNIQ
HCDR1 антитела 25F7 (SEQ ID NO: 15)
GFSLSTYAMN
- 14 043345
HCDR2 антитела 22ВЗ (SEQ ID NO: 16)
AISYDGITYYASWAKS
HCDR2 антитела 23C8 (SEQ ID NO: 17)
FINYGGSAYYASRAKG
HCDR2 антитела 25F7 (SEQ ID NO: 18)
IISDDGTTYYATWAKG
HCDR3 антитела 22B3 (SEQ ID NO: 19)
GDYYDDYVYVYALDI
HCDR3 антитела 23C8 (SEQ ID NO: 20)
GLSNSDL
HCDR3 антитела 25F7 (SEQ ID NO: 21)
DAGAGGVQDYLTL
LCDR1 антитела 22B3 (SEQ ID NO: 22)
QASQSISTALA
LCDR1 антитела 23C8 (SEQ ID NO: 23)
QASQSISSWLS
LCDR1 антитела 25F7 (SEQ ID NO: 24)
QASENIYNFLA
LCDR2 антитела 22B3 (SEQ ID NO: 25)
AASTLAS
LCDR2 антитела 23C8 (SEQ ID NO: 26)
RASTLAS
LCDR2 антитела 25F7 (SEQ ID NO: 27)
SASTLAS
LCDR3 антитела 22B3 (SEQ ID NO: 28)
QQGYSSSNLDNV
LCDR3 антитела 23C8 (SEQ ID NO: 29)
QSTYGGVVGSTSDDNP
LCDR3 антитела 25F7 (SEQ ID NO: 30)
QQGSSNSNIDNP
BTLA человека (SEQ ID NO: 31)
MKTLPAMLGTGKLFWVFFLIPYLDIWNIHGKESCDVQLYIKRQSEHSILAGDPFELECPVKY CANRPHVTWCKLNGTTCVKLEDRQTSWKEEKNISFFILHFEPVLPNDNGSYRCSANFQSNL IESHSTTLYVTDVKSASERPSKDEMASRPWLLYRLLPLGGLPLLITTCFCLFCCLRRHQGKQ
- 15 043345
NELSDTAGREINLVDAHLKSEQTEASTRQNSQVLLSETGIYDNDPDLCFRMQEGSEVYSNP CLEENKPGIVYASLNHSVIGPNSRLARNVKEAPTEYASICVRS
BTLA мыши Balbc (SEQ ID NO: 32)
MKTVPAMLGTPRLFREFFILHLGLWSILCEKATKRNDEECEVQLNIKRNSKHSAWTGELFK IECPVKYCVHRPNVTWCKHNGTIWVPLEVGPQLYTSWEENRSVPVFVLHFKPIHLSDNGSY SCSTNFNSQVINSHSVTIHVRERTQNSSEHPLITVSDIPDATNASGPSTMEERPGRTWLLYTL LPLGALLLLLACVCLLCFLKRIQGKEKKPSDLAGRDTNLVDIPASSRTNHQALPSGTGIYDN DPWSSMQDESELTISLQSERNNQGIVYASLNHCVIGRNPRQENNMQEAPTEYASICVRS
BTLA мыши C57BL6 (SEQ ID NO: 33)
MKTVPAMLGTPRLFREFFILHLGLWSILCEKATKRNDEECPVQLTITRNSKQSARTGELFKI QCPVKYCVHRPNVTWCKHNGTICVPLEVSPQLYTSWEENQSVPVFVLHFKPIHLSDNGSYS CSTNFNSQVINSHSVTIHVTERTQNSSEHPLITVSDIPDATNASGPSTMEERPGRTWLLYTLL PLGALLLLLACVCLLCFLKRIQGK
EKKPSDLAGRDTNLVDIPASSRTNHQALPSGTGIYDNDPWSSMQDESELTISLQSERNNQGI VYASLNHCVIGRNPRQENNMQEAPTEYASICVRS
BTLA обезьяны циномолгус (SEQ ID NO: 34)
MKTLPAMLGSGRLFWVVFLIPYLDIWNIHGKESCDVQLYIKRQSYHSIFAGDPFKLECPVK YCAHRPQVTWCKLNGTTCVKLEGRHTSWKQEKNLSFFILHFEPVLPSDNGSYRCSANFLSA IIESHSTTLYVTDVKSASERPSKDEMASRPWLLYSLLPLGGLPLLITTCFCLFCFLRRHQGKQ NELSDTTGREITLVDVPFKSEQTEASTRQNSQVLLSETGIYDNEPDFCFRMQEGSEVYSNPC LEENKPGIIYASLNHSIIGLNSRQARNVKEAPTEYASICVRS
Иллюстративная ДНК для экспрессии тяжелой цепи антитела 22ВЗ с SEQ ID NO: 1 (SEQ ID NO: 35) caggtgcagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtttcctgcaaggcatctggattctccctcagtagct atggagtgagctgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggagccattagttatgatggtattacatactacgcgagctggg cgaaaagcagagtcaccatgaccagggacacgtccacgagcacagtctacatggagctgagcagcctgagatctgaggacacggccgtgta ttactgtgcgagaggggactactacgatgattatgtttatgtttatgctttagacatctggggccagggcaccctggtcaccgtctcctcagcttcta ccaagggcccatcggtcttcccgctagcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagccgccctgggctgcctggtcaaggactacttc cccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactcc ctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacgaagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtgg acaagagagttgagtccaaatatggtcccccatgcccaccctgcccagcacctgaggccgccgggggaccatcagtcttcctgttccccccaa aacccaaggacactctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccaggaagaccccgaggtccagttcaac tggtacgtggatggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagttcaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcac cgtcctgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccgtcctccatcgagaaaaccatctccaa agccaaagggcagccccgagagccacaggtgtacaccctgcccccatcccaggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcct
- 16 043345 ggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggaaagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctg gactccgacggctccttcttcctctacagcaggctaaccgtggacaagagcaggtggcaggaggggaatgtcttctcatgctccgtgatgcatg aggctctgcacaaccactacacacagaagagcctctccctgtctctgggt
Иллюстративная ДНК для экспрессии легкой цепи антитела 22ВЗ с SEQ ID NO: 2 (SEQ ID NO: 36)
Gaaattgtgttgacgcagtctccaggcaccctgtctttgtctccaggggaaagagccaccctctcctgccaggccagtcagagcattagtactgc attagcctggtaccagcagaaacctggccaggctcccaggctcctcatctatgctgcatccactctggcatctggcatcccagacaggttcagtg gcagtgggtctgggacagacttcactctcaccatcagcagactggagcctgaagattttgcagtgtattactgtcaacagggttatagtagtagta atcttgataatgttttcggcggagggaccaaggtggagatcaaacggaccgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagt tgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcg ggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactac gagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgc
Иллюстративная ДНК для экспрессии тяжелой цепи антитела 23С8 с SEQ ID NO: 5 (SEQ ID NO: 37) gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcttggtccagcctggagggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcgacatcagtaagt acaacatccaatgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggttggcttcattaattatggtggtagcgcatactacgcgagccggg cgaaaggcagattcaccatctcaagagatgattcaaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgaaaaccgaggacacggccgtgtatta ctgtgctagaggactaagtaatagcgacctctggggccagggcaccctggtcaccgtctcctcagcttctaccaagggcccatcggtcttcccg ctagcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagccgccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtg gaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgcc ctccagcagcttgggcacgaagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagagagttgagtccaaatatg gtcccccatgcccaccctgcccagcacctgaggccgccgggggaccatcagtcttcctgttccccccaaaacccaaggacactctcatgatctc ccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccaggaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggatggcgtggaggtg cataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagttcaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcctgcaccaggactggctgaa cggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccgtcctccatcgagaaaaccatctccaaagccaaagggcagccccgagag ccacaggtgtacaccctgcccccatcccaggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcga catcgccgtggagtgggaaagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgacggctccttcttcctcta cagcaggctaaccgtggacaagagcaggtggcaggaggggaatgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacac agaagagcctctccctgtctctgggt
Иллюстративная ДНК для экспрессии легкой цепи антитела 23С8 с SEQ ID NO: 6 (SEQ ID NO: 38)
- 17 043345 gacatccagatgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtaggagacagagtcaccatcacttgccaggccagtcagagcattagtagttg gttatcctggtatcagcagaaaccagggaaagcccctaagctcctgatctacagggcatccactctggcatctggggtcccatcaaggttcagtg gaagtggatctgggacagattttactttcaccatcagcagcctgcagcctgaagatattgcaacatattactgtcaatccacttatggtggtgttgttg gcagtactagtgatgataatcctttcggcggagggaccaaggtggagatcaaacggaccgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatct gatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgc cctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaa gcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagt gc
Иллюстративная ДНК для экспрессии тяжелой цепи антитела 25F7 с SEQ ID NO: 9 (SEQ
ID NO: 39) caggtgcagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtttcctgcaaggcatctggattctccctcagtacct atgcaatgaactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggaatcattagtgatgatggtaccacatactacgcgacctggg cgaaaggcagagtcaccatgaccagggacacgtccacgagcacagtctacatggagctgagcagcctgagatctgaggacacggccgtgta ttactgtgcgagagatgctggtgctggtggtgtccaagactacttaaccttgtggggccagggcaccctggtcaccgtctcctcagcttctaccaa gggcccatcggtcttcccgctagcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagccgccctgggctgcctggtcaaggactacttccccg aaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgccctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcag cagcgtggtgaccgtgccctccagcagcttgggcacgaagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaag agagttgagtccaaatatggtcccccatgcccaccctgcccagcacctgaggccgccgggggaccatcagtcttcctgttccccccaaaaccc aaggacactctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccaggaagaccccgaggtccagttcaactggtac gtggatggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccgcgggaggagcagttcaacagcacgtaccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcct gcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccgtcctccatcgagaaaaccatctccaaagcca aagggcagccccgagagccacaggtgtacaccctgcccccatcccaggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaa aggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggaaagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacgcctcccgtgctggactcc gacggctccttcttcctctacagcaggctaaccgtggacaagagcaggtggcaggaggggaatgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctc tgcacaaccactacacacagaagagcctctccctgtctctgggt
Иллюстративная ДНК для экспрессии легкой цепи антитела 25F7 с SEQ ID NO: 10 (SEQ
ID NO: 40)
Gacatcgtgatgacccagtctccagactccctggctgtgtctctgggcgagagggccaccatcaactgccaggccagtgagaatatttacaact ttttggcctggtaccagcagaaaccaggacagcctcctaagctgctcatttactctgcatccactctggcatctggggtccctgaccgattcagtg gcagcgggtctgggacagatttcactctcaccatcagcagcctgcaggctgaagatgtggcagtttattactgtcaacagggttctagtaatagta atattgataatcctttcggcggagggaccaaggtggagatcaaacggaccgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagt tgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcg ggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactac gagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgc
HVEM человека (SEQ ID NO: 41)
MEPPGDWGPPPWRSTPKTDVLRLVLYLTFLGAPCYAPALPSCKEDEYPVGSECCPKCSPGY RVKEACGELTGTVCEPCPPGTYIAHLNGLSKCLQCQMCDPAMGLRASRNCSRTENAVCGC SPGHFCIVQDGDHCAACRAYATSSPGQRVQKGGTESQDTLCQNCPPGTFSPNGTLEECQHQ TKC SWLVTKAGAGTS S SHWVWWFLSGSLVIVIVC STVGLIICVKRRKPRGD VVKVIVS VQR KRQEAEGEATVIEALQAPPDVTTVAVEETIPSFTGRSPNH
Claims (27)
1. Антитело, которое связывает BTLA, содержащее HCDR1, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13, HCDR2, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16, HCDR3, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 19, LCDR1, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 22, LCDR2, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 25, и LCDR3, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 28.
2. Антитело по п.1, содержащее вариабельный участок тяжелой цепи (HCVR), имеющий аминокис-
- 18 043345 лотную последовательность SEQ ID NO: 3, и вариабельный участок легкой цепи (LCVR), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4.
3. Антитело по п.1 или 2, содержащее тяжелую цепь (НС), имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и легкую цепь (LC), имеющую аминокислотную последовательность
SEQ ID NO: 2.
4. Антитело, которое связывает BTLA, содержащее HCDR1, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14, HCDR2, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17, HCDR3, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 20, LCDR1, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 23, LCDR2, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26, и LCDR3, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 29.
5. Антитело по п.4, содержащее вариабельный участок тяжелой цепи (HCVR), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7, и вариабельный участок легкой цепи (LCVR), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 8.
6. Антитело по п.4 или 5, содержащее тяжелую цепь (НС), имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, и легкую цепь (LC), имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6.
7. Антитело, которое связывает BTLA, содержащее HCDR1, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 15, HCDR2, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 18, HCDR3, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 21, LCDR1, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 24, LCDR2, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27, и LCDR3, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 30.
8. Антитело по п.7, содержащее вариабельный участок тяжелой цепи (HCVR), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11, и вариабельный участок легкой цепи (LCVR), имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 12.
9. Антитело по п.7 или 8, содержащее тяжелую цепь (НС), имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, и легкую цепь (LC), имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10.
10. Фармацевтическая композиция, содержащая антитело по любому из пп.1-9 и один или более фармацевтически приемлемых носителей, разбавителей или наполнителей.
11. Применение антитела по любому из пп.1-9 или фармацевтической композиции по п.10 для лечения ревматического заболевания.
12. Применение по п.11, отличающееся тем, что ревматическим заболеванием является волчаночный нефрит, системная красная волчанка или ревматоидный артрит.
13. Применение антитела по любому из пп.1-9 или фармацевтической композиции по п.10 для лечения дерматологического заболевания.
14. Применение по п.13, отличающееся тем, что дерматологическим заболеванием является атопический дерматит или псориаз.
15. Применение антитела по любому из пп.1-9 или фармацевтической композиции по п.10 для лечения рассеянного склероза.
16. Молекула ДНК, содержащая полинуклеотидную последовательность, которая кодирует тяжелую цепь антитела, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, и полинуклеотидную последовательность, которая кодирует легкую цепь антитела, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2.
17. Клетка млекопитающего, содержащая молекулу ДНК по п.16, причем клетка способна экспрессировать антитело, содержащее две тяжелые цепи и две легкие цепи, где аминокислотная последовательность каждой тяжелой цепи задана SEQ ID NO: 1 и аминокислотная последовательность каждой легкой цепи задана SEQ ID NO: 2.
18. Способ получения антитела, причем аминокислотная последовательность каждой из двух НС представляет собой SEQ ID NO: 1, а аминокислотная последовательность каждой из двух LC представляет собой SEQ ID NO: 2, и причем указанный способ включает
a) культивирование клетки млекопитающего по п.17 в условиях, при которых антитело экспрессируется; и
b) восстановление экспрессированного антитела.
19. Антитело, которое связывает BTLA, полученное способом по п.18.
20. Молекула ДНК, содержащая полинуклеотидную последовательность, которая кодирует тяжелую цепь антитела, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 5, и полинуклеотидную последовательность, которая кодирует легкую цепь антитела, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 6.
21. Клетка млекопитающего, содержащая молекулу ДНК по п.20, причем клетка способна экспрессировать антитело, содержащее две тяжелые цепи и две легкие цепи, где аминокислотная последовательность каждой тяжелой цепи задана SEQ ID NO: 5 и аминокислотная последовательность каждой легкой
- 19 043345 цепи задана SEQ ID NO: 6.
22. Способ получения антитела, причем аминокислотная последовательность каждой из двух НС представляет собой SEQ ID NO: 5, а аминокислотная последовательность каждой из двух LC представляет собой SEQ ID NO: 6, и причем указанный способ включает
а) культивирование клетки млекопитающего по п.21 в условиях, при которых антитело экспрессируется; и
Ь) восстановление экспрессированного антитела.
23. Антитело, которое связывает BTLA, полученное способом по п.22.
24. Молекула ДНК, содержащая полинуклеотидную последовательность, которая кодирует тяжелую цепь антитела, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 9, и полинуклеотидную последовательность, которая кодирует легкую цепь антитела, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 10.
25. Клетка млекопитающего, содержащая (ii) молекулу ДНК по п.24, причем клетка способна экспрессировать антитело, содержащее две тяжелые цепи и две легкие цепи, где аминокислотная последовательность каждой тяжелой цепи задана SEQ ID NO: 9 и аминокислотная последовательность каждой легкой цепи задана SEQ ID NO: 10.
26. Способ получения антитела, причем аминокислотная последовательность каждой из двух НС представляет собой SEQ ID NO: 9, а аминокислотная последовательность каждой из двух LC представляет собой SEQ ID NO: 10, и причем указанный способ включает
а) культивирование клетки млекопитающего по п.25 в условиях, при которых антитело экспрессируется; и
Ь) восстановление экспрессированного антитела.
27. Антитело, которое связывает BTLA, полученное способом по п.26.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US62/508,510 | 2017-05-19 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA043345B1 true EA043345B1 (ru) | 2023-05-16 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US11396545B2 (en) | BTLA agonist antibodies and uses thereof | |
| US10493148B2 (en) | PD-1 agonist antibodies and uses thereof | |
| JP6830533B2 (ja) | 抗ｉｌ−３３抗体およびその使用 | |
| KR101584416B1 (ko) | 인간 tweak에 대한 항체 및 그의 용도 | |
| JP7490025B2 (ja) | Ｃｄ２００ｒアゴニスト抗体およびそれらの使用 | |
| KR20170106476A (ko) | Cd154 항체를 이용한 자가면역 질환의 치료 | |
| KR20230004659A (ko) | 항-인간 신경 성장 인자 항체 | |
| EA043345B1 (ru) | Антитела-агонисты btla и их применение | |
| WO2024108088A1 (en) | Lag-3 and pd-1/lag-3-antibodies |