EA039788B1 - Производные [1,2,4]триазоло[1,5-a]пиримидина в качестве ингибиторов pde2 - Google Patents

Производные [1,2,4]триазоло[1,5-a]пиримидина в качестве ингибиторов pde2 Download PDF

Info

Publication number
EA039788B1
EA039788B1 EA201991109A EA201991109A EA039788B1 EA 039788 B1 EA039788 B1 EA 039788B1 EA 201991109 A EA201991109 A EA 201991109A EA 201991109 A EA201991109 A EA 201991109A EA 039788 B1 EA039788 B1 EA 039788B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
independently selected
optionally substituted
group
mmol
disorder
Prior art date
Application number
EA201991109A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201991109A1 (ru
Inventor
Ив Эмиль Мария Ван Росбрук
Франс Альфонс Мария Ван Ден Кейбюс
Гэри Джон Тресадерн
Петер Якобус Йоханнес Антониус Бейнстерс
Адриана Ингрид Велтер
Эдгар Якоби
Грегор Джеймс Макдональд
Хенрикус Якобус Мария Гейсен
Абделлах Ахнау
Вильхельмус Хелена Игнатиус Мария Дринкенбург
Original Assignee
Янссен Фармацевтика Нв
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Янссен Фармацевтика Нв filed Critical Янссен Фармацевтика Нв
Publication of EA201991109A1 publication Critical patent/EA201991109A1/ru
Publication of EA039788B1 publication Critical patent/EA039788B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/22—Anxiolytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/24—Antidepressants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A61P25/32—Alcohol-abuse
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A61P25/34—Tobacco-abuse
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A61P25/36—Opioid-abuse
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D513/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00
    • C07D513/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D513/08—Bridged systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00

Abstract

Настоящее изобретение относится к новым производным [1,2,4]триазоло[1,5-a]пиримидинила, характеризующимся формулой (I), в качестве ингибиторов фосфодиэстеразы 2 (PDE2). Настоящее изобретение также направлено на фармацевтические композиции, содержащие соединения, на способы получения таких соединений и композиций и на применение таких соединений и композиций для предупреждения и лечения расстройств, в которые вовлечена PDE2, таких как неврологические и психические расстройства.

Description

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к новым производным [1,2,4]триазоло[1,5-а]пиримидинила в качестве ингибиторов фосфодиэстеразы 2 (PDE2). Настоящее изобретение также направлено на фармацевтические композиции, содержащие соединения, на способы получения таких соединений и композиций и на применение таких соединений и композиций для предупреждения и лечения расстройств, в которые вовлечена PDE2, таких как неврологические и психические расстройства.
Предпосылки изобретения
Фосфодиэстеразы (PDE) представляют собой семейство ферментов, кодируемых 21 геном и подразделенных на 11 отдельных семейств в соответствии со структурными и функциональными свойствами. Эти ферменты осуществляют метаболическую инактивацию широко распространенных внутриклеточных вторичных мессенджеров, циклического 3',5'-аденозинмонофосфата (сАМР) и циклического 3',5'гуанозинмонофосфата (cGMP). Эти два мессенджера регулируют большое разнообразие биологических процессов, в том числе продуцирование и действие провоспалительных медиаторов, функционирование ионных каналов, сокращение мышц, коммитирование, дифференцировку, апоптоз, липогенез, гликогенолиз и глюконеогенез. Они осуществляют это посредством активации протеинкиназы A (PKA) и протеинкиназы G (PKG), которые, в свою очередь, фосфорилируют большое разнообразие субстратов, в том числе факторы транскрипции и ионные каналы, которые регулируют многочисленные физиологические реакции. В случае нейронов предусматриваются активация cAMP- и cGMP-зависимых киназ и последующее фосфорилирование белков, вовлеченных в быструю регуляцию синаптической передачи, а также в дифференцировку и выживаемость нейронов. Внутриклеточные концентрации cAMP и cGMP строго регулируются скоростью биосинтеза с помощью циклаз и скоростью отщепления с помощью PDE. PDE представляют собой гидролазы, которые инактивируют cAMP и cGMP посредством каталитического гидролиза 3'-сложноэфирной связи с образованием неактивного 5'-монофосфата (схема A).
Схема A:
сАМР X = NH2, Y = Н cGMP X = О, Y = NH2
На основании субстратной специфичности семейства PDE можно разделить на три группы: i) cAMP-специфические PDE, которые включают PDE4, 7 и 8; ii) cGMP-селективные ферменты PDE5, 6 и 9 и iii) PDE, действующие на два субстрата, PDE1, 2 и 3, а также PDE10 и 11.
Более того, для PDE характерна дифференциальная экспрессия во всем организме, в том числе в центральной нервной системе. Вследствие этого разные изоферменты PDE могут иметь разные физиологические функции. Соединения, которые селективно ингибируют семейства или изоферменты PDE, могут проявлять особую терапевтическую активность, меньшее количество побочных эффектов или и то, и другое.
Фосфодиэстераза 2A (PDE2A) инактивирует внутриклеточные механизмы передачи сигналов, которые зависят от передачи сигналов с помощью циклических нуклеотидов, опосредованной cAMP и cGMP, путем их расщепления (путем гидролиза важных с биологической точки зрения вторичных мессенджеров cAMP и cGMP с получением не передающих сигналы AMP и GMP соответственно). Такие сигнальные пути, как известно, играют роль в регуляции генов, вовлеченных в индукцию синаптической пластичности. Фармакологическое ингибирование PDE2, таким образом, обуславливает повышение уровней синаптической пластичности (коррелята, лежащего в основе обучения и формирования памяти), что указывает на то, что модуляция PDE2A может представлять собой цель для облегчения нарушений познавательных способностей, наблюдаемых у людей, страдающих такими расстройствами, как, например, шизофрения, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона и другие расстройства ЦНС, ассоциированные с когнитивной дисфункцией.
Фосфодиэстераза 2A (PDE2A) экспрессируется в головном мозге в большем количестве по сравнению с периферическими тканями. Высокий уровень экспрессии PDE2 в лимбической системе (изокортексе, гиппокампе, миндалевидном теле, поводке эпиталамуса, базальном ядре) указывает на то, что PDE2 может модулировать передачу сигнала между нейронами, связанную с эмоцией, восприятием, вниманием, обучением и памятью. Кроме того, PDE2 экспрессируется в прилежащем ядре, обонятельной луковице, обонятельном бугорке и миндалевидном теле, что подтверждает предположение, что PDE2 может также быть вовлеченной в тревожность и депрессию, (см., например, Lakics, V. et al. (2010) Quanti- 1 039788 tative comparison of phosphodiesterase mRNA distribution in human brain and peripheral tissues. Neuropharmacol. 59, 367-374).
Кроме того, было показано, что ингибиторы PDE2 являются эффективными в отношении ослабления тревожности, индуцированной окислительным стрессом, что свидетельствует в пользу их применения в лечении тревожности при психоневрологических и нейродегенеративных расстройствах, в которые вовлечен окислительный стресс, таких как болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона и рассеянный склероз.
Было показано, что ингибиторы PDE2 усиливают долговременную потенциацию синаптической передачи и улучшают запоминание и консолидацию памяти в тестах распознавания объекта и социальной ориентации у крыс. Более того, было показано, что ингибиторы PDE2 устраняют ослабление кратковременной памяти, индуцированное МК-801, в Т-образном лабиринте у мышей. Также было показано, что ингибиторы PDE2 проявляют активность в тесте принудительного плавания и в моделях со светлой/темной камерой; а также демонстрируют эффекты, аналогичные анксиолитикам, в тестах с приподнятым крестообразным лабиринтом, с платформой с отверстиями и в тесте открытого поля и предотвращают вызванные стрессом изменения в отношении апоптоза и поведения.
Таким образом, ингибиторы PDE2 могут применяться в лечении ослабления памяти, нарушений познавательных способностей, тревожности, биполярного расстройства и депрессии.
В WO 2015/164508 (Dart Neuroscience, LLC) раскрыты замещенные [1,2,4]триазоло[1,5a]пиримидинuльные соединения в качестве ингибиторов PDE2. В WO 2017/076900 (Janssen Pharmaceutica NV) раскрывается [(3S,4R)-3-[5-(дифторметил)-[ 1,2,4]триазоло[ 1,5-a]пиримидин-7-ил]-4-метил-1 -пиперидил]-(2,6-диметил-4-пиридил)метанон.
Все еще существует необходимость в соединениях, представляющих собой ингибиторы PDE2, с преимущественным сочетанием свойств, например с улучшенной эффективностью, лучшей селективностью в отношении PDE3 и/или PDE10 и/или лучшей химической или метаболической стабильностью.
Краткое описание изобретения
Целью настоящего изобретения является обеспечение новых ингибиторов PDE2, которые могут быть потенциально применимыми в лечении заболеваний, связанных с активностью фермента PDE2.
Таким образом, настоящее изобретение направлено на соединения формулы (I)
и их стереоизомерные формы, где
Ra выбран из группы, состоящей из H, CH3, CN и CHF2;
RB представляет собой радикал, выбранный из группы, состоящей из (a) и (c)
(а) , (с), где
R1 представляет собой H, F или CH3;
R2 представляет собой H, метил или н-бутил;
при условии, что если R2 представляет собой H, то R1 представляет собой F или CH3;
R3 представляет собой Ar, Het или Ar-C2-4αлкенил; где
Ar представляет собой фенил или нафтил, каждый из которых необязательно замещен 1, 2 или 3 заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена; CN;
NR2AR2B, где каждый из R2A и R2B независимо выбран из H и CH3; OH; C1-6aлкuла, необязательно замещенного 1, 2 или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена;
C1-6aлкила, замещенного CN; C3-6циклоaлкила;
C1-6aлкилокси, необязательно замещенного 1, 2 или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена; и пиразолила;
Het представляет собой (i) 5-членный гетероарил, выбранный из группы, состоящей из 1H-пирролuла; тиенила; фуранила; Ш-пиразолила; Ш-имидазолила; 1,2-оксазолила; 1,3-оксазолила и тиазолила; каждый из которых может быть необязательно замещен 1, 2 или 3 заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена; C1-4aлкила, необязательно замещенного 1, 2, или 3 независимо выбранными
- 2 039788 заместителями, представляющими собой атом галогена; NR3AR3B, где каждый из R3A и R3B независимо выбран из H и CH3; и фуран-2-ила; или (ii) 6-членный гетероарил, выбранный из группы, состоящей из пиридила, пиримидинила, пиразинила и пиридазинила; каждый из которых может быть необязательно замещен 1, 2 или 3 заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена; OH; CN; NR4AR4B, где каждый из R4A и R4B независимо выбран из H и CH3; C1_4αлкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена; C1_4алкила, замещенного OH; C3_6циклоαлкила; C3_6циклоалкилокси; C1_4αлкилокси; C1_4алкилоксиС1_4алкила; или (iii) 8-10-членный бициклический частично ненасыщенный гетероциклил, выбранный из группы, состоящей из 2,3-дигидро-1-бензофуранила; 2H-хроменила; 3,4-дигидро-2H-хроменила; 2,3-дигидро-Шиндолила, необязательно замещенного в положении 1 1-ацетилом; 2,2-дифтор-1,3-бензодиоксолила; 1,3бензодиоксолила, необязательно замещенного заместителем, представляющим собой метил; 3,4-дигидро2H-1,4-бензоксазинила, необязательно замещенного C1_4алкилом; 5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2а]пиридинила; 5,6,7,8-тетрагидрохинолинила, необязательно замещенного заместителем, представляющим собой атом галогена; и 2,3-дигидропиразоло[5,1-b][1,3]оксазолила; или (iv) 9-10-членный бициклический гетероарил, выбранный из группы, состоящей из 1-бензофуранила; 1-бензотиофенила; 1H-индолила; 1,3-бензоксазолила; 1,3-бензотиазолила; индолизинила; 1Hбензимидазолила; имидазо[1,2-а]пиридинила; пиразоло[1,5-a]пиридинила; 1Н-тиено[2,3-e]пиразолила; имидазо[2,1-b]тиазолила; пирроло[2,3-e]пиридинuла; тиено[3,2-b]пиридинила; хинолинила; изохинолинила; хиноксалинила; 1,8-нафтиридинила и 1,6-нафтиридинила; каждый из которых может быть необязательно замещен 1 или 2 заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена; OH; NR5AR5B, где каждый из R5A и R5B независимо выбран из H и СН3; C1_4αлкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена; и C1_4алкилокси;
при условии, что соединение не является
или его N-оксид, или фармацевтически приемлемая соль, и N-оксиды, и их фармацевтически приемлемые соли. Иллюстрацией настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель и соединение формулы (I), описанное в данном документе, или его фармацевтически приемлемые соль или сольват. Иллюстрацией настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, полученная путем смешивания соединения формулы (I), описанного в данном документе, или его фармацевтически приемлемых соли или сольвата и фармацевтически приемлемого носителя. Иллюстрацией настоящего изобретения является способ получения фармацевтической композиции, предусматривающий смешивание соединения формулы (I), описанного в данном документе, или его фармацевтически приемлемых соли или сольвата и фармацевтически приемлемого носителя.
Примером настоящего изобретения являются способы лечения расстройства, опосредованного ферментом PDE2, предусматривающие введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I), описанного в данном документе, или его фармацевтически приемлемых соли или сольвата, или фармацевтических композиций, описанных в данном документе.
Примером настоящего изобретения является способ лечения расстройства, выбранного из группы, состоящей из неврологических и психических расстройств, предусматривающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I), описанного в данном документе, или его фармацевтически приемлемых соли или сольвата, или фармацевтических композиций, описанных в данном документе.
Примером настоящего изобретения является способ лечения расстройства, выбранного из группы неврологических и психических расстройств, выбранных из психотических расстройств и состояний; тревожных расстройств; двигательных расстройств; наркотической зависимости; аффективных расстройств; нейродегенеративных расстройств; расстройств или состояний, включающих в качестве симптома синдром дефицита внимания и/или нарушение познавательной деятельности; инсульта и аутических расстройств, предусматривающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I), описанного в данном документе, или его фармацевтиче- 3 039788 ски приемлемых соли или сольвата, или его фармацевтически приемлемых соли или сольвата, или фармацевтических композиций, описанных в данном документе.
Примером настоящего изобретения является способ лечения расстройства, выбранного из группы, состоящей из неврологических и психических расстройств, предусматривающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I), описанного в данном документе, или его фармацевтически приемлемых соли или сольвата, или фармацевтических композиций, описанных в данном документе.
Примером настоящего изобретения является способ лечения расстройства, выбранного из группы неврологических и психических расстройств, выбранных из психотических расстройств и состояний; тревожных расстройств; двигательных расстройств; наркотической зависимости; аффективных расстройств; нейродегенеративных расстройств; расстройств или состояний, включающих в качестве симптома синдром дефицита внимания и/или нарушение познавательной деятельности; расстройств, связанных с запоминанием и консолидацией памяти; инсульта и аутических расстройств, предусматривающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I), или его соли или сольвата, или фармацевтических композиций, описанных в данном документе.
Также примером настоящего изобретения является соединение формулы (I), или его соль или сольват, или фармацевтическая композиция, описанные в данном документе, для применения в качестве лекарственного препарата.
Дополнительным примером настоящего изобретения является соединение формулы (I), или его соль или сольват, или фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению для применения в лечении, предупреждении, уменьшении интенсивности проявления, в контроле или в снижении риска возникновения различных неврологических и психических расстройств, ассоциированных с нарушением функции фосфодиэстеразы 2 у млекопитающего, в том числе у человека, лечение или предупреждение которых зависит от ингибирования фосфодиэстеразы 2 или облегчается им.
Примером настоящего изобретения является соединение формулы (I), или его фармацевтически приемлемые соль или сольват согласно настоящему изобретению, или фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению для применения в лечении, предупреждении, уменьшении интенсивности проявления, в контроле или в снижении риска возникновения различных расстройств, выбранных из психотических расстройств и состояний; тревожных расстройств; двигательных расстройств; наркотической зависимости; аффективных расстройств; нейродегенеративных расстройств; расстройств или состояний, включающих в качестве симптома синдром дефицита внимания и/или нарушение познавательной деятельности; расстройств, связанных с запоминанием и консолидацией памяти; инсульта и аутического расстройства.
Примером настоящего изобретения является способ лечения расстройства, выбранного из группы, состоящей из болезни Альцгеймера, умеренного когнитивного нарушения, старческого слабоумия, деменции, деменции с тельцами Леви, синдрома Дауна, деменции, ассоциированной с инсультом, деменции, ассоциированной с болезнью Паркинсона, и деменции, ассоциированной с отложением бетаамилоида, предпочтительно болезни Альцгеймера, предусматривающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I), или его фармацевтически приемлемых соли или сольвата, или фармацевтических композиций, описанных в данном документе.
Другим примером настоящего изобретения является соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемые соль или сольват, описанные в данном документе, для применения в лечении: (a) болезни Альцгеймера, (b) умеренного когнитивного нарушения, (c) старческого слабоумия, (d) деменции, (e) деменции с тельцами Леви, (f) синдрома Дауна, (g) деменции, ассоциированной с инсультом, (h) деменции, ассоциированной с болезнью Паркинсона, (i) деменции, ассоциированной с отложением бетаамилоида, (j) депрессивных расстройств и (k) тревожных расстройств у субъекта, нуждающегося в этом.
Описание графических материалов
На фиг. 1 показан эффект соединения 110 в отношении индукции с помощью слабой HFS долговременной потенциации (LTP) в синапсе мшистых волокон.
На фиг. 2 показан план эксперимента для тета-импульсной стимуляции.
На фиг. 3 показан эффект соединения 70 в отношении индукции с помощью слабой HFS долговременной потенциации (LTP) в синапсе мшистых волокон.
На фиг. 4 показан эффект соединения 25a в отношении индукции с помощью слабой HFS долговременной потенциации (LTP) в синапсе мшистых волокон.
На фиг. 5 показан эффект соединения 220 в отношении индукции с помощью слабой HFS долговременной потенциации (LTP) в синапсе мшистых волокон.
На фиг. 6-15 (соединения 220, 110, 93, 32, 70, 25a, 281, 295, 356 и 335 соответственно) показано измерение уровней cGMP в CSF у собак породы Marshall Beagle. На фиг. 6-15 различные дозы тестовых соединений представлены следующим образом: 0 мг/кг; • 0,5 мг/кг; ♦ 0,75 мг/кг; ▲ 1 мг/кг; ▼ 1,25 мг/кг; X 1,5 мг/кг; V 2,5 мг/кг.
На фиг. 16 показаны кратковременные эффекты соединения 110 в отношении синаптической функции in vivo в синапсе коллатералей Шаффера (SC)-CA1. На фиг. 16a показано схематическое представ- 4 039788 ление о расположении биполярного стимулирующего электрода в пути коллатералей Шаффера и монополярного регистрирующего электрода в stratum radiatum области Cornu Ammonis CA1 гиппокампа; на фиг. 16b показано краткое описание кривых I/O, полученных с помощью применения стимулов увеличивающейся интенсивности и измерения исходных наклонов полученного fEPSP, которые указывают на отсутствие отличий в основной возбудимости пути SC-CA1; на фиг. 16c показаны параметры морфологии ответа во время исходного уровня, через 30 мин после обработки и 30 мин после протокола тетанической HFS. Следует отметить сходство величины ответов fEPSP во время регистрации исходных уровней между группами обработки, которые увеличивались выше исходного уровня, и условия применения среды-носителя в группе, обрабатываемой соединением 110; на фиг. 16d показана зависимость от времени наклона fEPSP через 30 мин после регистрации исходного уровня, через 30 мин после введения соединения 110, и при этом применяли протокол тетанического HFS и записывали наклон fEPSP в течение еще 2 ч. Следует отметить, что соединение 110 в дозе 20 и 40 мг/кг усиливало базальную синаптическую передачу перед проведением протокола тетанического HFS и увеличивало наклон fEPSP на протяжении 2 ч после протокола HFS (вставленный график); на фиг. 16e показано, что при усреднении fEPSP в 30 мин периодах соединение 110 (40 мг/кг) обеспечивало повышение величины синаптической передачи, и различие с группой, обработанной средой-носителем, оставалось значительным. Значения выражены в виде процента от значений, зарегистрированных до HFS, и результаты представлены в виде средних значений ±SEM. Для сравнения групп применяли тесты с однофакторным дисперсионным анализом (ANOVA) и апостериорным анализом с наименьшей достоверной разностью (LSD).
На фиг. 16b и с диаграммы имеют следующие обозначения:
носитель (n=10); соединение 110 (мг/кг) (20) n=9; соединение 110 (мг/кг) (40) n=8.
На фиг. 16d и 16e диаграммы имеют следующие обозначения:
носитель (n=10); й соединение 110 (мг/кг), (20) n=9; соединение 110 (мг/кг) (40) n=8.
Подробное описание изобретения определения
C1.4αлкил, применяемый в данном документе отдельно или как часть другой группы, означает насыщенный, прямой или разветвленный углеводородный радикал, содержащий 1, 2, 3 или 4 атома углерода, такой как метил, этил, 1-пропил, 1-метил, бутил, 1-метилпропил, 2-метил-1-пропил, 1,1-диметилэтил и т.п. Термин C1.6aлкил, применяемый в данном документе в качестве группы или части группы, означает насыщенный углеводородный радикал с прямой или разветвленной цепью, содержащий от 1 до 6 атомов углерода, такой как группы, определенные для C1.4алкила, и н-пентил, н-гексил, 2-метилбутил и т.п. C1.4алкилокси будет означать эфирный радикал, где О^алкил является таким, как определено в данном документе. C1.6αлкилокси будет означать эфирный радикал, где C1.6алкил является таким, как определено в данном документе. Галоген будет обозначать фтор, хлор или бром. C3.6циклоалкил будет означать циклопропил, циклобутил, циклопентил и циклогексил. C3.6циклоалкилокси будет означать эфирный радикал, где C3.6циклоалкил является таким, как определено в данном документе.
Предполагается, что термин замещенный во всех случаях использования в настоящем изобретении означает, если иное не указано или четко не следует из контекста, что один или несколько атомов водорода, предпочтительно от 1 до 3 атомов водорода, или от 1 до 2 атомов водорода, или 1 атом водорода, при атоме или радикале, обозначенном с использованием выражения замещенный, замещены выбранным из указанной группы, при условии, что не превышается нормальная валентность, и что замещение в результате дает химически стабильное соединение, т.е. соединение, которое является достаточно устойчивым, чтобы выдержать выделение из реакционной смеси до пригодной степени чистоты и составление в терапевтическое средство.
Предполагается, что формы N-оксидов соединений формулы (I) предполагают включение таких соединений формулы (I), в которых один или несколько атомов азота окислены до так называемого Nоксида, в частности, такие N-оксиды, в которых окислен атом азота в пиридинильном радикале. Nоксиды можно получать согласно процедурам, известным специалисту в данной области техники. Реакцию N-окисления, как правило, можно проводить путем осуществления реакции исходного вещества формулы (I) с соответствующим органическим или неорганическим пероксидом. Подходящие неорганические пероксиды включают, например, пероксид водорода, пероксиды щелочных и щелочноземельных металлов, например, пероксид натрия, пероксид калия; подходящие органические пероксиды могут включать пероксикислоты, такие как, например, бензолкарбопероксикислоты или галогензамещенные бензолкарбопероксикислоты, например, 3-хлорпероксибензойная кислота (или 3-хлорпербензойная кислота), пероксиалкановые кислоты, например пероксиуксусная кислота, алкилгидропероксиды, например трет-бутилгидропероксид. Подходящими растворителями например являются, например, вода, низшие алканолы, например, этанол и т.п., углеводороды, например, толуол, кетоны, например, 2-бутанон, галогенированные углеводороды, например, дихлорметан, и смеси таких растворителей.
Таким образом, в конкретном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы (I), где R3 представляет собой Het, и Het представляет собой оксид необязательно замещенного пиридильного радикала, описанного в данном документе, т.е. необязательно замещенный радикал в виде оксида пиридиния.
- 5 039788
Термин субъект, применяемый в данном документе, относится к животному, предпочтительно к млекопитающему, наиболее предпочтительно к человеку, которое является или являлось объектом лечения, наблюдения или эксперимента.
Термин терапевтически эффективное количество, применяемый в данном документе, означает такое количество активного соединения или фармацевтического средства, которое вызывает биологический или медицинский ответ в системе тканей, у животного или человека, который стремится получить исследователь, ветеринар, врач или другой клиницист, что включает облегчение симптомов заболевания или расстройства, лечение которого осуществляют.
Подразумевается, что применяемый в данном документе термин композиция охватывает продукт, содержащий определенные ингредиенты в определенных количествах, а также любой продукт, который получают непосредственно или опосредованно из комбинаций определенных ингредиентов в определенных количествах.
Ранее и далее в данном документе термин соединение формулы (I) следует понимать как включающее его соли присоединения, сольваты и стереоизомеры.
Термины стереоизомеры или стереохимически изомерные формы ранее и далее в данном документе используются взаимозаменяемо.
Настоящее изобретение включает все стереоизомеры соединения формулы (I) либо в виде чистого стереоизомера, либо в виде смеси двух или более стереоизомеров.
Энантиомеры представляют собой стереоизомеры, которые являются не совпадающими при наложении зеркальными отображениями друг друга. Смесь 1: 1 пары энантиомеров представляет собой рацемат или рацемическую смесь. Диастереомеры (или диастереоизомеры) представляют собой стереоизомеры, которые не являются энантиомерами, т.е. они не соотносятся как зеркальные отображения. Следовательно, настоящее изобретение включает энантиомеры, диастереомеры, рацематы.
В соединениях согласно настоящему изобретению связи, показанные в виде клина из параллельных линий ( 11), представляют собой связи, проецируемые под плоскостью графического изображения, тогда как связи, показанные жирной клиновидной связью (—«), представляют собой связи, проецируемые над плоскостью графического изображения.
Абсолютная конфигурация указана в соответствии с системой Кана-Ингольда-Прелога. Конфигурация при асимметричном атоме указывается как R или как S. Разделенные соединения, абсолютная конфигурация которых неизвестна, могут быть обозначены как (+) или (-), в зависимости от направления, в котором они вращают плоскополяризованный свет.
Если указан конкретный стереоизомер, это означает, что указанный стереоизомер практически не содержит других изомеров, т.е. связан с менее 50%, предпочтительно с менее 20%, более предпочтительно с менее 10%, еще более предпочтительно с менее 5%, в частности с менее 2% и наиболее предпочтительно с менее 1% других изомеров. Таким образом, если соединение формулы (I) указано, например, как (R), это означает, что соединение практически не содержит (S)-изомера.
Кроме того, некоторые кристаллические формы соединений по настоящему изобретению могут существовать в виде полиморфов, и предполагается их включение как таковых в настоящее изобретение.
В дополнение, некоторые из соединений по настоящему изобретению могут образовывать сольваты с водой (т.е. гидраты) или обычными органическими растворителями, и подразумевается, что такие сольваты также охватываются объемом настоящего изобретения.
Что касается применения в медицине, соли соединений по настоящему изобретению относятся к нетоксичным фармацевтически приемлемым солям. Однако при получении соединений согласно настоящему изобретению или их фармацевтически приемлемых солей могут быть применимыми другие соли. Подходящие фармацевтически приемлемые соли соединений включают соли присоединения кислоты, которые могут быть образованы, например, путем смешивания раствора соединения с раствором фармацевтически приемлемой кислоты, такой как хлористоводородная кислота, серная кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, янтарная кислота, уксусная кислота, бензойная кислота, лимонная кислота, винная кислота, угольная кислота или фосфорная кислота. Кроме того, если соединения по настоящему изобретению имеют кислотный фрагмент, то их подходящие фармацевтически приемлемые соли могут включать соли щелочных металлов, например, соли натрия или калия; соли щелочноземельных металлов, например, соли кальция или магния; и соли, образованные с помощью пригодных органических лигандов, например, соли четвертичного аммония.
Типичные кислоты, которые можно применять при получении фармацевтически приемлемых солей, включают без ограничения следующие: уксусную кислоту, 2,2-дихлор уксусную кислоту, ацилированные аминокислоты, адипиновую кислоту, альгиновую кислоту, аскорбиновую кислоту, Lаспарагиновую кислоту, бензолсульфоновую кислоту, бензойную кислоту, 4-ацетамидобензойную кислоту, (+)-камфорную кислоту, камфорсульфоновую кислоту, капроновую кислоту, капроевую кислоту, каприловую кислоту, коричную кислоту, лимонную кислоту, цикламовую кислоту, этан-1,2дисульфоновую кислоту, этансульфоновую кислоту, 2-гидроксиэтансульфоновую кислоту, муравьиную кислоту, фумаровую кислоту, галактаровую кислоту, гентизиновую кислоту, глюкогептоновую кислоту, D-глюконовую кислоту, D-глюкуроновую кислоту, L-глутаминовую кислоту, бета-оксоглутаровую ки- 6 039788 слоту, гликолевую кислоту, гиппуровую кислоту, бромистоводородную кислоту, хлористоводородную кислоту, (+)-Ь-молочную кислоту, (±)-DL-молочную кислоту, лактобионовую кислоту, малеиновую кислоту, (-)Н-яблочную кислоту, малоновую кислоту, (±)-DL-миндальную кислоту, метансульфоновую кислоту, нафталин-2-сульфоновую кислоту, нафталин-1,5-дисульфоновую кислоту, 1-гидрокси-2нафтойную кислоту, никотиновую кислоту, азотную кислоту, олеиновую кислоту, оротовую кислоту, щавелевую кислоту, пальмитиновую кислоту, памоевую кислоту, фосфорную кислоту, Lпироглутаминовую кислоту, салициловую кислоту, 4-аминосалициловую кислоту, себациновую кислоту, стеариновую кислоту, янтарную кислоту, серную кислоту, дубильную кислоту, (+)-Ь-винную кислоту, тиоциановую кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту, трифторметилсульфоновую кислоту и ундециленовую кислоту. Характерные основания, которые можно использовать при получении фармацевтически приемлемых солей, включают без ограничения следующие: аммиак, L-аргинин, бенетамин, бензатин, гидроксид кальция, холин, диметилэтаноламин, диэтаноламин, диэтиламин, 2-(диэтиламино)этанол, этаноламин, этилендиамин, N-метилглюкамин, гидрабамин, Ш-имидазол, L-лизин, гидроксид магния, 4-(2гидроксиэтил)морфолин, пиперазин, гидроксид калия, 1-(2-гидроксиэтил)пирролидин, вторичный амин, гидроксид натрия, триэтаноламин, трометамин и гидроксид цинка.
Названия соединений по настоящему изобретению составляли согласно правилам номенклатуры, согласованным Химической реферативной службой (CAS), с применением программного обеспечения от Advanced Chemical Development, Inc. (ACD/Name: версия продукта 10.01, сборка 15494, 1 декабря 2006 года; или ACD/ChemSketch: версия продукта 12.5, сборка 47877, 20 апреля 2011 года) или согласно правилам номенклатуры, согласованным Международным союзом теоретической и прикладной химии (IUPAC), с применением программного обеспечения от Advanced Chemical Development, Inc. (ACD/Name: версия продукта 10.01.0.14105, октябрь 2006 года). В случае таутомерных форм составляли название изображенной таутомерной формы структуры. Другая, не изображенная таутомерная форма также включена в объем настоящего изобретения.
Настоящее изобретение направлено на соединения формулы (I), определенные в данном документе выше, и на их фармацевтически приемлемые соли и сольваты.
В одном варианте осуществления настоящее изобретение направлено на соединения формулы (I), к. „А
RB (I) , и их стереоизомерные формы, где
Ra выбран из группы, состоящей из H, СН3, CN и CHF2; RB представляет собой радикал, выбранный из группы, состоящей из (a), (b) и (c):
где
R1 представляет собой H, F или СН3;
R2 представляет собой H или C1.4алкил, в частности, метил или н-бутил; при условии, что если R2 представляет собой H, то R1 представляет собой F или CH3;
R3 представляет собой Ar или Het; где
Ar представляет собой фенил, необязательно замещенный 1, 2 или 3 заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена; CN; OH; C1.6алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена; C1.6αлкила, замещенного CN; C3.6циклоалкила и C1.6алкилокси, необязательно замещенного 1, 2 или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена;
Het представляет собой (i) 5-членный гетероарил, выбранный из группы, состоящей из 1Нпирролила; тиенила; фуранила; 1H-пиразолила; 1H-имидазолила; 1,2-оксазолила; 1,3-оксазолила и тиазолила; каждый из которых может быть необязательно замещен 1, 2 или 3 заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена; C1.4алкила, необязательно замещенного 1, 2, или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена; NR3AR3B, где каждый из R3A и R3B независимо выбран из H и CH3; и фуран-2-ила; или
- 7 039788 (ii) 6-членный гетероарил, выбранный из группы, состоящей из пиридила, пиримидинила, пиразинила и пиридазинила; каждый из которых может быть необязательно замещен 1, 2 или 3 заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена; OH; CN; NR4AR4B, где каждый из R4A и R4b независимо выбран из H и CH3; C1.4алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена; C3.6циклоалкила; C3_ 6циклоалкилокси и C1.4алкилокси, необязательно замещенного 1, 2 или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена; или (iii) 8-10-членный бициклический частично ненасыщенный гетероциклил, выбранный из группы, состоящей из 2,3-дигидро-1-бензофуранила; 2H-хроменила; 3,4-дигидро-2H-хроменила; 2,3-дигидро-Шиндолила, необязательно замещенного в положении 1 C1-4алкилом, метилсульфонилом, 1-ацетилом или фторацетилом; 2,2-дифтор-1,3-бензодиоксолила; 1,3-бензодиоксолила, необязательно замещенного заместителем, представляющим собой метил; 5,6,7,8-тетрагидроимидазо[1,2-а]пиридинила; 5,6,7,8тетрагидрохинолинила, необязательно замещенного заместителем, представляющим собой атом галогена; и 2,3-дигидропиразоло[5,1-b][1,3]оксазолила; или (iv) 9-10-членный бициклический гетероарил, выбранный из группы, состоящей из 1бензофуранила; 1-бензотиофенила; 1H-индолила; 1,3-бензоксазолила; 1,3-бензотиазолила; индолизинила; 1H-бензимидазолила; имидазо[1,2-а]пиридинила; пиразоло[1,5-a]пиридинила; 1H-тиено[2,3-c]пиразолила; тиено[3,2-b]пиридинила; хинолинила; 1,8-нафтиридинила и 1,6-нафтиридинила; каждый из которых может быть необязательно замещен 1 или 2 заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена; OH; NR5AR5B, где каждый из R5A и R5B независимо выбран из H и СН3; C1.4αлкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена; и C1.4алкилокси, необязательно замещенного 1, 2 или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена;
при условии, что соединение не является и их фармацевтически приемлемые соли и сольваты.
В конкретном варианте осуществления RA представляет собой CH3 или CHF2; и остальные переменные определены в данном документе.
В конкретном варианте осуществления RB выбран из группы, состоящей из (a) и (c), и остальные переменные определены в данном документе.
В конкретном варианте осуществления RA представляет собой СН3 или CHF2; RB выбран из группы, состоящей из (a) и (c), и остальные переменные определены в данном документе.
В конкретном варианте осуществления R1 представляет собой H, и R2 представляет собой C1.4αлкил, в частности метил или н-бутил; и остальные переменные определены в данном документе.
В конкретном варианте осуществления R3 представляет собой Het, и остальные переменные определены в данном документе.
В конкретном варианте осуществления R3 представляет собой (i) 6-членный гетероарил, выбранный из группы, состоящей из пиридила, пиримидинила, пиразинила и пиридазинила; каждый из которых может быть необязательно замещен 1, 2 или 3 заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена; OH; CN; NR4AR4B, где каждый из R4A и R4B независимо выбран из H и СН3;
C1.4алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена; C3.6циклоалкила; C3.6циклоалкилокси и C1.4αлкилокси, необязательно замещенного 1, 2 или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена; или (ii) 9-10-членный бициклический гетероарил, выбранный из группы, состоящей из 1бензофуранила; 1-бензотиофенила; 1H-индолила; 1,3-бензоксазолила; 1,3-бензотиазолила; индолизинила; 1H-бензимидазолила; имидазо[1,2-а]пиридинила; пиразоло[1,5-a]пиридинила;
1Н-тиено[2,3-c]пиразолила; тиено[3,2-b]пиридинила;
хинолинила; 1,8-нафтиридинила и 1,6-нафтиридинила; каждый из которых может быть необязательно замещен 1 или 2 заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из
- 8 039788 галогена; OH; NR5AR5B, где каждый из R5A и R5B независимо выбран из H и СН3;
С1-4алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена; и C1-4алкилокси, необязательно замещенного 1, 2 или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена; и остальные переменные определены в данном документе.
В дополнительном варианте осуществления R3 представляет собой (i) 6-членный гетероарил, выбранный из группы, состоящей из пиридила, пиримидинила, пиразинила и пиридазинила; каждый из которых может быть необязательно замещен 1, 2 или 3 заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена; NR4AR4B, где каждый из R4A и R4B независимо выбран из H и СН3;
C1-4алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена; C3-6циклоалкила; C3-6циклоалкилокси и C1-4алкилокси, необязательно замещенного 1, 2 или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена;
или (ii) 9-10-членный бициклический гетероарил, выбранный из группы, состоящей из 1бензофуранила; 1-бензотиофенила; 1H-индолила; 1,3-бензоксазолила; 1,3-бензотиазолила; индолизинила; 1 H-бензимидазолила; имидазо[1,2-а]пиридинила; пиразоло[1,5-а]пиридинила;
Н-тиено [2,3-c]пиразолила; тиено[3,2-b]пиридинила;
хинолинила; 1,8-нафтиридинила; и 1,6-нафтиридинила; каждый из которых может быть необязательно замещен 1 или 2 заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена; NR5AR5B, где каждый из R5A и R5B независимо выбран из H и СН3;
C1-4алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена; и C1-4алкилокси, необязательно замещенного 1, 2 или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена;
и остальные переменные определены в данном документе.
В одном варианте осуществления соединение формулы (I), определенное представляет собой, в частности, соединение формулы (I-а) или (I-b), в данном документе,
где все переменные определены в данном документе. Более конкретно соединение формулы (I), определенное в данном документе, характеризуется формулой (I-b1),
где все переменные определены в данном документе. В конкретном варианте осуществления R3 представляет собой радикал, выбранный из группы, состоящей из (3-a), (3-b) и (3-c):
где
- 9 039788 каждый из R3a и R3b независимо выбран из группы, состоящей из водорода; галогена; CN; NR4aR4b, где каждый из R4a и R4b независимо выбран из H и СН3; C1-4алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена; C3-6циклоалкила и C1-4αлкилокси, необязательно замещенного 1, 2 или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена; и
R3c выбран из группы, состоящей из F, Cl, C1-3aлкила, циклопропила, C1-3aлкилокси, циклопропилокси и CF3; и каждый из R3d и R3e независимо выбран из группы, состоящей из водорода, Cl, CN, C13алкила, циклопропила, C1-3aлкилокси, циклопропилокси, CHF2, CF3, OCHF2 и OCF3; при условии, что R3d и R3e не являются водородом одновременно.
В частности, каждый из R3a и R3b независимо выбран из группы, состоящей из водорода; хлора; -NH2; C1-4aлкила; -CF3; циклопропила; -OCH3; -ОСН(СНз)2; -OCHF2 и -OCF3.
Более конкретно, каждый из R3a и R3b независимо выбран из группы, состоящей из хлора; C14алкила; -CF3; циклопропила; -OCH3; -OCH(CH3)2; -OCHF2 и -OCF3.
В частности, R3a представляет собой Cl или CH3, и R3b выбран из группы, состоящей из CH3, -OCH3, -CF3 и циклопропила.
В дополнительном варианте осуществления R3a представляет собой Cl или CH3, и R3b представляет собой CH3 или -OCH3.
В частности, R3c выбран из группы, состоящей из F, CH3 и -OCH3; R3d выбран из группы, состоящей из водорода, CH3, циклопропила и -OCH3; и R3e выбран из группы, состоящей из Cl, CH3, циклопропила, -OCH3; -OCH(CH3)2; циклопропилокси; CHF2 и OCHF2. В дополнительном варианте осуществления R3c представляет собой F.
В дополнительном варианте осуществления соединение в соответствии с настоящим изобретением представляет собой соединение, характеризующееся формулой (I-а), где R2 представляет собой C1-4αлкил, в частности, метил или н-бутил.
Получение соединений
Экспериментальная процедура 1:
Схема реакции 1a:
Схема реакции 1b.
A: сочетание с образованием амидной связи.
Конечные соединения, где RB представляет собой радикал формулы (a) или формул (b) или (с), называемые в данном документе соединениями формулы (I-А) и формулы (I-BC), где----представляет собой CH2 или CH2CH2 соответственно, могут быть легко получены путем проведения реакции с подходящей карбоновой кислотой (III) с помощью следующих процедур сочетания, известных из уровня техники (стадия реакции A). Указанное превращение может быть легко осуществлено с помощью обработки функциональной группы пиперидинового типа в промежуточных соединениях формулы (II-a) или (II-b) с помощью средства для реакции сочетания, такого как HBTU или EDCI, в присутствии основания, такого как DIPEA и триэтиламин, в подходящем реакционно-инертном растворителе, таком как, например, DCM или DMF и т.п., при подходящей температуре, например при комнатной температуре; в качестве альтернативы можно проводить реакцию промежуточных соединений формулы (II-a) или (II-b) с фосфоновым ангидридом, таким как 1-пропанфосфоновый ангидрид, в присутствии подходящего основания, такого как триэтиламин, в подходящем реакционно-инертном растворителе, таком как, например, сухой ACN. Карбоновые кислоты формулы (III) либо являются коммерчески доступными, либо могут быть получены в соответствии с известными в данной области техники процедурами.
Экспериментальная процедура 2.
- 10 039788
Схема реакции 2.
B: реакция с диметилацеталем Ν,Ν-диметилацетамида.
C, F: реакция с гидрохлоридом 1Н-1,2,4-триазол-3-амина.
D: отщепление защитной группы.
E: реакция со сложным этиловым эфиром 2,2-дифторуксусной кислоты.
Получение промежуточных соединений формулы (II-a), например, где RA представляет собой метил или CHF2, называемых в данном документе промежуточными соединениями формулы (II-a1) и (II-a2) соответственно, может быть обеспечено из промежуточных соединений формулы (IV-a), где PG представляет собой подходящую защитную группу для аминогруппы, такую как, например, третбутилоксикарбонил (Boc).
Реакцию с чистым диметилацеталем N,N-диметилацетамида можно проводить при температурных условиях, таких как, например, нагревание при 100°C.
Реакцию со сложным этиловым эфиром 2,2-дифторуксусной кислоты можно проводить в присутствии основания, такого как KOtBu, в реакционно-инертном растворителе, таком как толуол, при подходящей температуре, такой как 0-5°C, затем при к.т.
Бициклическое ядро может быть образовано путем проведения реакции промежуточных соединений (V-a) или (V-b) с гидрохлоридом 1H-1,2,4-триазол-3-амина в реакционно-инертном растворителе, таком как, например, DMF, при температурных условиях, таких как, например, нагревание при 80°C. В случае (V-b)-(VI-b) защитная группа может быть неустойчивой, и может потребоваться последующая стадия введения защитных групп.
Отщепление защитной группы в промежуточных соединениях (VI-a) или (VI-b) можно проводить в соответствии с процедурами, известными из уровня техники, например, если защитная группа представляет собой Boc, отщепление можно проводить в кислотных условиях, таких как, например, HCl в MeOH при к.т. или TFA в DCM.
Экспериментальная процедура 3.
- 11 039788
Реакционная схема 3.
G: реакция с дисульфидом углерода и метилйодидом.
H, L: реакция с гидрохлоридом 1H-1,2,4-триазол-3-амина.
I: окисление.
J: реакция с NaCN.
K: реакция с диметилацеталем N,N-диметилформамида.
L: метилирование.
D: отщепление защитной группы.
Промежуточные соединения формулы (II-a), где RA представляет собой циано, называемые в данном документе (II-a3), или где RA представляет собой водород и R1 представляет собой метил, называемые в данном документе (II-a4), могут быть получены согласно сериям стадий синтеза из промежуточных соединений формулы (IV-b), которые либо являются коммерчески доступными, либо получены в соответствии с процедурами, известными в данной области техники (например, R2=H или метил, PG=Boc).
Таким образом, реакция с дисульфидом углерода, а затем с метилйодидом в присутствии основания, такого как NaH, и реакционно-инертного растворителя, такого как THF, при 0°C обеспечивает получение (V-c), которое затем можно подвергать реакции с гидрохлоридом 1H-1,2,4-триазол-5-амина при условиях, описанных в данном документе, с получением тем самым (VI-c, n=0), с последующим окисле- 12 039788 нием с помощью подходящей пероксикислоты, такой как, например, mCPBA, в присутствии реакционноинертного растворителя, такого как, например, DCM или CHCl3, с получением (VI-e, n=2). Замещение метилсульфоновой группы источником цианида, таким как, например, NaCN в DMSO, обеспечивает получение (VII-c), который можно подвергать отщеплению защитной группы при условиях, описанных в данном документе.
Реакцию чистого (IV-b) с диметилацеталем N,N-диметилформамида можно осуществлять при температурных условиях, таких как нагревание с обратным холодильником. Реакция с гидрохлоридом 1H1,2,4-триазол-3-амина при условиях, описанных в данном документе, обеспечивает получение (VI-d), которое может быть метилировано в условиях, известных из уровня техники, таких как, например, с помощью подвергания его реакции с метилйодидом в присутствии основания, такого как NaH, в реакционно-инертном растворителе, таком как DMF. Последующее отщепление защитной группы при условиях, описанных в данном документе, обеспечивает получение промежуточного соединения (II-a4).
Экспериментальная процедура 4.
Схема реакции 4.
M: фторирование.
N: метилирование и/или омыление.
X: восстановление.
O: реакция Судзуки (алкилирование) и омыление.
P: гидрогенизация.
Q: омыление.
R: образование амида Вайнреба.
S: превращение амида в кетон (например, реакция Гриньяра).
Образование промежуточных соединений (IV-a) или (IV-b) можно проводить с помощью ряда взаимопревращений функциональных групп, исходя из промежуточных соединений (VIII), (IX) или (X), которые либо являются коммерчески доступными, либо могут быть получены, например, в соответствии с процедурами, такими как описанные в данном документе.
Соединения формулы (VIII), где R2a представляет собой водород или метил, и PG представляет собой Boc, либо являются коммерчески доступными, либо получены в соответствии с рядом известных процедур, таких как описанные в данном документе. Их можно фторировать или алкилировать в соответствии с процедурами, известными из уровня техники, например с помощью реакции с Nфторбензолсульфонимидом в присутствии основания, такого как LDA, в реакционно-инертном растворителе, таком как THF, или путем алкилирования с помощью алкилйодида после обработки основанием, таким как LiHMDS; при этом необязательно последующее омыление при условиях, известных из уровня техники, обеспечивает получение (XI).
Соединения формулы (IX) также являются известными из уровня техники и их можно алкилировать посредством процедур типа реакции Судзуки, с применением условий, известных специалисту в данной области техники, таких как применение бороновой кислоты/сложного эфира, в присутствии катализатора, такого как Pd(PPh3)4, в реакционно-инертном растворителе, таком как 1,4-диоксан, при температур- 13 039788 ных условиях, таких как нагревание. Последующее омыление и гидрогенизация в условиях, аналогичных описанным в данном документе, обеспечивают получение промежуточных соединений формулы (XI).
Последующее образование амида Вайнреба и превращение амида в кетон согласно реакции за Гриньяром, как описано в данном документе, обеспечивают получение необходимых промежуточных соединений (IV-a) или (IV-b).
Экспериментальная процедура 5.
Схема реакции 5.
T: реакция с метилцианоформиатом.
U: восстановление.
V: дегидратация.
W: гидрогенизация.
X: сочетание.
Y: декарбоксилирование и отщепление защитной группы.
Образование промежуточных соединений формулы (II-bc), где----представляет собой CH2 или CH2CH2, может быть получено с помощью серий стадий синтеза, исходя из коммерчески доступных исходных веществ формулы (XIV), таких как N-Boc-нортропинон [185099-67-6] или 6-Вос-3-оксо-6азабицикло[3.1.1]гептан [1246281-86-6]. Реакция с метилцианоформиатом в присутствии основания, такого как nBuLi и NHiPr2, в реакционно-инертном растворителе, таком как THF, при подходящей температуре, такой как при -78°C, обеспечивает получение сложного кетоэфира (XV), который затем можно восстанавливать с помощью NaBH4 при условиях, известных из уровня техники, например в MeOH при приблизительно 0°C, и затем дегидратировать, например трифторуксусным ангидридом, в присутствии основания, такого как триэтиламин и DMAP, в реакционно-инертном растворителе, таком как DCM, с поддержанием температуры ниже 60°C. Гидрогенизация при условиях, известных из уровня техники, таких как, например, в присутствии палладия на угле в MeOH как катализатора, обеспечивает получение промежуточного соединения (XVIII), которое затем можно подвергать реакции с промежуточными соединениями формулы (XIX), которые либо являются коммерчески доступными, либо получены в соот ветствии с процедурами, известными из уровня техники, в присутствии основания, такого как, например, LDA, в реакционно-инертном растворителе, таком как THF, при температуре от -78 до -60°C. Реакция с концентрированным HCl при температурных условиях, таких как, например, нагревание при 150°C, обеспечивает получение промежуточного соединения (II-bc) с одновременным отщеплением защитной группы, если она является кислотонеустойчивой, такой как, например, Boc. Альтернативный путь получения промежуточного соединения формулы (II-bc), где RA представляет собой CHF2, и---представляет собой CH2CH2, из коммерчески доступного исходного вещества описан в данном документе в примерах.
Фармакология
Соединения в соответствии с настоящим изобретением ингибируют активность фермента PDE2, в частности PDE2A, и, следовательно, повышают уровни сАМР или cGMP в клетках, которые экспрессируют PDE2. Соответственно ингибирование активности фермента PDE2 может быть применимым в лечении заболеваний, обусловленных недостаточными количествами cAMP или cGMP в клетках. Ингибиторы PDE2 также могут быть полезны в тех случаях, когда повышение количества cAMP или cGMP выше нормальных уровней обеспечивает терапевтический эффект. Ингибиторы PDE2 можно применять для лечения неврологических и психических расстройств.
Следовательно, настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) или к его фармацевтически приемлемым соли или сольвату согласно настоящему изобретению для применения в качестве лекарственного препарата, а также к применению соединения формулы (I), или его фармацевтически приемлемых соли или сольвата согласно настоящему изобретению, или фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению для изготовления лекарственного препарата. Настоящее изобретение также относится к соединению формулы (I), или к его фармацевтически приемлемым соли или сольвату согласно настоящему изобретению, или к фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению для применения в лечении или предупреждении, в частности в лечении, состояния у млекопитающего, в том числе у человека, лечение или предупреждение которого зависит от ингибирования фермента фосфодиэстеразы 2 или облегчается им. Настоящее изобретение также относится к применению
- 14 039788 соединения формулы (I), или его фармацевтически приемлемых соли или сольвата согласно настоящему изобретению, или фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению для изготовления лекарственного препарата для лечения или предупреждения, в частности лечения, состояния у млекопитающего, в том числе у человека, лечение или предупреждение которого зависит от ингибирования фермента фосфодиэстеразы 2 или облегчается им.
Настоящее изобретение также относится к соединению формулы (I), или к его фармацевтически приемлемым соли или сольвату согласно настоящему изобретению, или к фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению для применения в лечении, предупреждении, уменьшении интенсивности проявления, в контроле или снижении риска возникновения различных неврологических и психических расстройств, ассоциированных с нарушением функции фосфодиэстеразы 2, у млекопитающего, в том числе у человека, лечение или предупреждение которых зависит от ингибирования фосфодиэстеразы 2 или облегчается им.
Кроме того, настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I), или его фармацевтически приемлемых соли или сольвата согласно настоящему изобретению, или фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению для изготовления лекарственного препарата для лечения, предупреждения, уменьшения интенсивности проявления, контроля или снижения риска развития различных неврологических и психических расстройств, ассоциированных с нарушением функции фосфодиэстеразы 2, у млекопитающего, в том числе у человека, лечение или предупреждение которых зависит от ингибирования фосфодиэстеразы 2 или облегчается им.
Если говорится, что настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I), или его фармацевтически приемлемых соли или сольвата, или композиции согласно настоящему изобретению для изготовления лекарственного препарата, например, для лечения субъекта, например млекопитающего, то подразумевается, что в определенных сферах такое применение следует понимать как способ, например, лечения субъекта, предусматривающий введение субъекту, нуждающемуся в таком, например, лечении, эффективного количества соединения формулы (I), или его фармацевтически приемлемых соли или сольвата, или композиции согласно настоящему изобретению.
В частности, показания, которые можно лечить с помощью ингибиторов PDE2 в отдельности либо в комбинации с другими лекарственными средствами, включают без ограничения такие заболевания, которые, как полагают, частично опосредованы базальными ганглиями, префронтальной корой и гиппокампом.
Эти показания включают неврологические и психические расстройства, выбранные из психотических расстройств и состояний; тревожных расстройств; двигательных расстройств; наркотической зависимости; аффективных расстройств; нейродегенеративных расстройств; расстройств или состояний, включающих в качестве симптома синдром дефицита внимания и/или нарушение познавательной деятельности; расстройств, связанных с запоминанием и консолидацией памяти; инсульта и аутического расстройства или аутизма.
В частности, психотические расстройства и состояния, ассоциированные с нарушением функции PDE2, включают одно или несколько из следующих состояний или заболеваний: шизофрения, например параноидального, дезорганизованного, кататонического, недифференцированного или резидуального типа; шизофреноформное расстройство; шизоаффективное расстройство, такое как, например, бредового или депрессивного типа; бредовое расстройство; психотическое расстройство, вызванное употреблением определенных веществ, такое как психоз, вызванный употреблением алкоголя, амфетамина, марихуаны, кокаина, галлюциногенных веществ, летучих веществ наркотического действия, опиоидов или фенциклидина; расстройства личности параноидального типа и расстройство личности шизоидного типа.
В частности, тревожные расстройства включают паническое расстройство; агорафобию; специфическую фобию, социофобию; обсессивно-компульсивное расстройство; посттравматическое стрессовое расстройство, острое стрессовое расстройство и генерализованное тревожное расстройство.
В частности, двигательные расстройства включают болезнь Хантингтона и дискинезию; болезнь Паркинсона; синдром усталых ног и эссенциальный тремор. Кроме того, могут быть включены синдром Туретта и другие тиковые расстройства.
В частности, расстройство центральной нервной системы представляет собой расстройство, связанное с употреблением определенных веществ, выбранное из группы злоупотребления алкоголем; алкогольной зависимости; алкогольного абстинентного синдрома; алкогольного абстинентного синдрома с делирием; психотического расстройства, вызванного употреблением алкоголя; амфетаминовой зависимости; амфетаминового абстинентного синдрома; кокаиновой зависимости; кокаинового абстинентного синдрома; никотиновой зависимости; никотинового абстинентного синдрома; опиоидной зависимости и опиоидного абстинентного синдрома.
В частности, аффективные расстройства и аффективные эпизоды включают депрессию, манию и биполярные расстройства. Предпочтительно, аффективное расстройство выбрано из группы биполярных расстройств (I и II типа); циклотимического расстройства; депрессии; дистимического расстройства; большого депрессивного расстройства; терапевтически резистентной депрессии и аффективного расстройства, вызванного употреблением определенных веществ.
В частности, нейродегенеративные расстройства включают болезнь Паркинсона; болезнь Хантинг- 15 039788 тона; деменцию, такую как, например, болезнь Альцгеймера; мультиинфарктную деменцию; СПИДассоциированную деменцию или лобно-височную деменцию. Нейродегенеративное расстройство или состояние включает дисфункцию реакций стриарных средних шипиковых нейронов.
В частности, расстройства или состояния, включающие в качестве симптома синдром дефицита внимания и/или нарушение познавательной деятельности, включают деменцию, такую как болезнь Альцгеймера; мультиинфарктную деменцию; деменцию, обусловленную болезнью с тельцами Леви; алкогольную деменцию или персистирующую деменцию, вызванную употреблением определенных веществ; деменцию, ассоциированную с внутричерепными опухолями или черепно-мозговой травмой; деменцию, ассоциированную с болезнью Хантингтона; деменцию, ассоциированную с болезнью Паркинсона; СПИД-ассоциированную деменцию; деменцию, обусловленную болезнью Пика; деменцию, обусловленную болезнью Крейтцфельдта-Якоба; другие заболевания, включающие делирий; амнестическое расстройство; посттравматическое стрессовое расстройство; инсульт; прогрессирующий надъядерный паралич; олигофрению; нарушение способности к обучению; синдром дефицита внимания/гиперактивности (ADHD); умеренное когнитивное расстройство; синдром Аспергера; возрастное когнитивное нарушение и когнитивное нарушение, связанное с восприятием, вниманием, обучением или памятью.
В частности, расстройства, связанные с запоминанием и консолидацией памяти, включают расстройства памяти, такие как, например, возрастная потеря памяти, амнезия.
Предпочтительно, психотическое расстройство выбрано из группы шизофрении, бредового расстройства, шизоаффективного расстройства, шизофреноформного расстройства и психотического расстройства, вызванного употреблением определенных веществ.
Предпочтительно расстройство центральной нервной системы представляет собой расстройство личности, выбранное из группы обсессивно-компульсивного расстройства личности и шизоидного, шизотипического расстройства.
Предпочтительно расстройство центральной нервной системы представляет собой аффективное расстройство, выбранное из группы биполярных расстройств (I и II типа), циклотимического расстройства, депрессии, дистимического расстройства, большого депрессивного расстройства; терапевтически резистентной депрессии и аффективного расстройства, вызванного употреблением определенных веществ.
Предпочтительно расстройство центральной нервной системы представляет собой синдром дефицита внимания/гиперактивности.
Предпочтительно расстройство центральной нервной системы представляет собой когнитивное расстройство, выбранное из группы делирия, персистирующего делирия, вызванного употреблением определенных веществ, деменции, деменции, обусловленной ВИЧ-заболеванием, деменции, обусловленной болезнью Хантингтона, деменции, обусловленной болезнью Паркинсона, деменции альцгеймеровского типа, персистирующей деменции, вызванной употреблением определенных веществ, и умеренного когнитивного нарушения.
Предпочтительно расстройства, подлежащие лечению с помощью соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемых соли или сольвата по настоящему изобретению, выбраны из шизофрении; обсессивно-компульсивного расстройства; генерализованного тревожного расстройства; болезни Хантингтона; дискинезии; болезни Паркинсона; депрессии; биполярных расстройств; деменции, такой как болезнь Альцгеймера; синдрома дефицита внимания/гиперактивности; наркотической зависимости; инсульта и аутизма.
Предпочтительно расстройства, подлежащие лечению с помощью соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемых соли или сольвата по настоящему изобретению, представляют собой шизофрению, в том числе ее положительные и отрицательные симптомы, а также нарушения познавательных способностей, такие как ухудшение внимания или памяти.
Среди упомянутых выше расстройств особое значение имеет лечение тревожности, обсессивнокомпульсивного расстройства, посттравматического стрессового расстройства; генерализованного тревожного расстройства, шизофрении, депрессии, синдрома дефицита внимания/гиперактивности, болезни Альцгеймера, деменции, обусловленной болезнью Хантингтона, деменции, обусловленной болезнью Паркинсона, деменции альцгеймеровского типа, персистирующей деменции, вызванной употреблением определенных веществ, и умеренного когнитивного нарушения.
Среди упомянутых выше расстройств особое значение имеет лечение тревожности, обсессивнокомпульсивного расстройства, шизофрении, депрессии, синдрома дефицита внимания/гиперактивности и болезни Альцгеймера.
Другие расстройства центральной нервной системы включают тревожное расстройство, ассоциированное с шизофренией, и коморбидные депрессию и тревожность, в частности, большое депрессивное расстройство с коморбидным генерализованным тревожным расстройством, социальным тревожным расстройством или паническим расстройством; при этом следует понимать, что коморбидные депрессия и тревожность также могут обозначаться терминами депрессия, сопровождающаяся тревожностью, смешанные тревожность и депрессия, смешанное тревожное и депрессивное расстройство или большое депрессивное расстройство с симптомами тревожности, которые используются в данном документе без разграничения.
- 16 039788
В настоящее время в четвертом издании Руководства по диагностике и статистике психических расстройств (DSM-IV) Американской психиатрической ассоциации представлен способ диагностики для идентификации расстройств, описанных в данном документе. Специалисту в данной области техники будет понятно, что для неврологических и психических расстройств, описанных в данном документе, существуют альтернативные системы номенклатуры, нозологические подходы и системы классификации, и что они видоизменяются вместе с прогрессом в области медицины и научным прогрессом. Например, в American Psychiatric Association: Diagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders, Fifth Edition. Arlington, VA, American Psychiatric Association, 2013 (DSM-5™) используются термины, такие как депрессивные расстройства, в частности большое депрессивное расстройство, персистирующее депрессивное расстройство (дистимия), депрессивное расстройство, вызванное употреблением определенных веществ/лекарственных препаратов; нейрокогнитивные расстройства (NCD) (как тяжелые, так и легкие), в частности, нейрокогнитивные расстройства, обусловленные болезнью Альцгеймера, сосудистое NCD (такое как сосудистое NCD, проявляющееся в виде множественных инфарктов), NCD, обусловленное ВИЧ-инфекцией, NCD, обусловленное травматическим повреждением головного мозга (TBI), NCD, обусловленное болезнью Паркинсона, NCD, обусловленное болезнью Хантингтона, лобно-височное NCD, NCD, обусловленное прионной болезнью, и NCD, вызванное употреблением определенных веществ/лекарственных препаратов; нарушения нервно-психического развития, в частности, интеллектуальное нарушение, специфическое нарушение способности к обучению, нарушение нервно-психического развития двигательных функций, коммуникативное расстройство и синдром дефицита внимания/гиперактивности (ADHD); расстройства, связанные с употреблением определенных веществ, и аддиктивные расстройства, в частности расстройство, связанное с употреблением алкоголя, расстройство, связанное с употреблением амфетаминов, расстройство, связанное с употреблением марихуаны, расстройство, связанное с употреблением кокаина, расстройство, связанное с употреблением других галлюциногенных веществ, расстройство, связанное с употреблением табака, расстройство, связанное с употреблением опиоидов, и расстройство, связанное с употреблением фенциклидина; расстройства шизофренического спектра и другие психотические расстройства, в частности шизофрения, шизофреноформное расстройство, шизоаффективное расстройство, бредовое расстройство, кратковременное психотическое расстройство, психотическое расстройство, вызванное употреблением определенных веществ/лекарственных препаратов; и циклотимическое расстройство (которое согласно DSM-5™ подпадает под категорию биполярных и родственных им расстройств). Такие термины могут применяться специалистом в данной области в качестве альтернативной номенклатуры для некоторых заболеваний или состояний, упоминаемых в данном документе. Дополнительное нарушение нервно-психического развития включает расстройство аутистического спектра (ASD), которое согласно DSM-5™, охватывает расстройства, ранее известные под терминами ранний детский аутизм, детский аутизм, аутизм Каннера, высокофункциональный аутизм, атипичный аутизм, первазивное расстройство развития без дополнительных уточнений, дезинтегративное расстройство детского возраста и синдром Аспергера.
Следовательно, настоящее изобретение также относится к соединению формулы (I) или к его фармацевтически приемлемым соли или сольвату согласно настоящему изобретению для применения в лечении любого из вышеупомянутых в данном документе заболеваний.
Настоящее изобретение также относится к соединению формулы (I) или к его фармацевтически приемлемым соли или сольвату согласно настоящему изобретению для применения в лечении любого из вышеупомянутых в данном документе заболеваний.
Настоящее изобретение также относится к соединению формулы (I) или к его фармацевтически приемлемым соли или сольвату согласно настоящему изобретению для лечения или предупреждения, в частности лечения, любого из вышеупомянутых в данном документе заболеваний.
Настоящее изобретение также относится к применению соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемых соли или сольвата согласно настоящему изобретению для изготовления лекарственного препарата для лечения или предупреждения любого из болезненных состояний, упомянутых в данном документе выше.
Настоящее изобретение также относится к применению соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемых соли или сольвата согласно настоящему изобретению для изготовления лекарственного препарата для лечения любого из болезненных состояний, упомянутых в данном документе выше.
Соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемые соль или сольват по настоящему изобретению можно вводить млекопитающим, предпочтительно людям, для лечения или предупреждения любого из заболеваний, упомянутых в данном документе выше.
Принимая во внимание полезность соединений формулы (I) и их фармацевтически приемлемых солей и сольватов согласно настоящему изобретению, предусмотрен способ лечения вышеупомянутого в данном документе расстройства или заболевания, предусматривающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I), или его фармацевтически приемлемых соли или сольвата, или фармацевтических композиций, описанных в данном документе.
Указанные способы предусматривают введение, т.е. системное или местное введение, предпочти- 17 039788 тельно пероральное введение, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемых соли или сольвата согласно настоящему изобретению теплокровным животным, в том числе людям.
Следовательно, настоящее изобретение также относится к способу предупреждения и/или лечения любого из вышеупомянутых в данном документе заболеваний, предусматривающему введение терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемых соли или сольвата согласно настоящему изобретению пациенту, нуждающемуся в этом.
Описанный в данном документе ингибитор PDE2 можно применять отдельно, в комбинации или в комбинации с другими фармацевтическими средствами, такими как другие средства, применяемые в лечении психозов, таких как шизофрения и биполярное расстройство, обсессивно-компульсивное расстройство, болезнь Паркинсона, когнитивное нарушение и/или потеря памяти, например агонисты никотиновых ацетилхолиновых рецепторов α-7, ингибиторы PDE4 (ролипрам, GEBR-7b, GSK356278, GSK256066, апремиласт, МК-0952, рофлумиласт, AN2898, AN2728, Ariflo (циломиласт), дотраверин, рономиласт (элбимиласт), ревамиласт, тетомиласт, Е6005, GDP-1116, HT0712, МК-0873), ингибиторы PDE5 (силденафил, варденафил, тадалафил, уденафил, аванафил, мироденафил, лоденафил, дазантафил, PF-00489791), PDE9 (PF-04447943), другие ингибиторы PDE2 (Bay 60-7550, PF-999, ND-7001), ингибиторы PDE10 (PF-02545920, AMG579), ингибиторы PDE2 и 10, блокаторы кальциевых каналов, модуляторы мускариновых ацетилхолиновых рецепторов m1 и m2, модуляторы аденозиновых рецепторов, ампакины, модуляторы NMDA-R, модуляторы mGluR, модуляторы дофаминовых рецепторов, модуляторы серотониновых рецепторов, модуляторы каннабиноидных рецепторов, ингибиторы HDAC (вориностат (SAHA), панобиностат, квизиностат, вальпроевая кислота) и ингибиторы холинэстеразы (например, донепезил, ривастигмин и галантамин). В случае таких комбинаций соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемые соль или сольват по настоящему изобретению можно использовать в комбинации с одним или несколькими другими лекарственными средствами в лечении, предупреждении, контроле, уменьшении интенсивности проявления или в снижении риска развития заболеваний или состояний, в отношении которых соединение формулы (I) или другие лекарственные средства могут быть полезными, при этом комбинация лекарственных средств, взятых вместе, является более безопасной или более эффективной, чем каждое из лекарственных средств отдельно.
Специалисту в данной области техники будет понятно, что терапевтически эффективным количеством ингибитора PDE2 по настоящему изобретению является количество, достаточное для ингибирования фермента PDE2, и что это количество варьируется, помимо прочего, в зависимости от типа заболевания, концентрации соединения в терапевтическом составе и состояния пациента. Обычно количество ингибитора PDE2, подлежащего введению в качестве терапевтического средства для лечения заболеваний, при которых ингибирование фермента PDE2 является полезным, таких как расстройства, описанные в данном документе, будет определяться в каждом конкретном случае лечащим врачом.
Подходящей дозой обычно является доза, которая дает в результате концентрацию ингибитора PDE2 в обрабатываемом участке в диапазоне от 0,5 нМ до 200 мкМ и в более типичном случае от 5 нМ до 50 мкМ. Для достижения этих лечебных концентраций пациенту, нуждающемуся в лечении, вероятно, будут вводить от 0,001 до 15 мг/кг веса тела, в частности от 0,01 до 2,50 мг/кг веса тела, в частности от 0,01 до 1,5 мг/кг веса тела, в частности от 0,1 до 0,50 мг/кг веса тела. Количество соединения согласно настоящему изобретению, также называемого в данном документе активным ингредиентом, необходимое для достижения терапевтического эффекта, будет, конечно же, изменяться в каждом конкретном случае, изменяться в зависимости от конкретного соединения, пути введения, возраста и состояния пациента, получающего лечение, и конкретного расстройства или заболевания, подлежащего лечению. Способ лечения может также включать введение активного ингредиента согласно схеме от одного до четырех введений в сутки. В таких способах лечения соединение согласно настоящему изобретению предпочтительно составляют перед введением. Как описано в данном документе ниже, подходящие фармацевтические составы получают с помощью известных процедур с применением хорошо известных и общедоступных ингредиентов.
Фармацевтические композиции
В настоящем изобретении также предусмотрены композиции для предупреждения или лечения заболеваний, при которых ингибирование PDE2 является полезным, таких как неврологические и психические расстройства. Указанные композиции содержат терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) и фармацевтически приемлемые носитель или разбавитель.
Хотя активный ингредиент можно вводить отдельно, предпочтительно, если он представлен в виде фармацевтической композиции. Следовательно, в настоящем изобретении дополнительно предусмотрена фармацевтическая композиция, содержащая соединение согласно настоящему изобретению вместе с фармацевтически приемлемыми носителем или разбавителем. Носитель или разбавитель должны быть приемлемыми с точки зрения совместимости с другими ингредиентами композиции и не должны являться вредными для получающих их пациентов.
Фармацевтические композиции по настоящему изобретению могут быть получены любыми способами, хорошо известными в области фармацевтики. Терапевтически эффективное количество конкретно- 18 039788 го соединения, в форме основания или в форме соли присоединения, в качестве активного ингредиента объединяют в однородную смесь с фармацевтически приемлемым носителем, который может принимать ряд форм в зависимости от формы препарата, необходимого для введения. Желательно, чтобы данные фармацевтические композиции находились в стандартной лекарственной форме, предпочтительно подходящей для системного введения, такого как пероральное, чрескожное или парентеральное введение; или для местного введения, как, например, с помощью ингаляции, назального спрея, глазных капель или с помощью крема, геля, шампуня и т.п. Например, при получении композиций в виде лекарственной формы для перорального введения можно использовать любые обычные фармацевтические среды, такие как, например, вода, гликоли, масла, спирты и т.п., в случае жидких препаратов для перорального введения, таких как суспензии, сиропы, настойки и растворы; или твердые носители, такие как крахмалы, сахара, каолин, смазывающие вещества, связующие вещества, разрыхлители и т.п., в случае порошков, пилюль, капсул и таблеток. Вследствие простоты их введения таблетки и капсулы представляют собой наиболее преимущественные стандартные лекарственные формы для перорального введения, в случае которых, несомненно, используют твердые фармацевтические носители. В случае композиций для парентерального введения носитель, как правило, по меньшей мере в значительной степени будет содержать стерильную воду, хотя может включать и другие ингредиенты, например, для улучшения растворимости. Например, можно получать растворы для инъекций, в которых носитель содержит физиологический раствор, раствор глюкозы или смесь физиологического раствора и раствора глюкозы. Также можно получать суспензии для инъекций, в случае которых можно использовать соответствующие жидкие носители, суспендирующие средства и т.п. В композициях, подходящих для чрескожного введения, носитель необязательно содержит средство, улучшающее проникновение, и/или подходящее смачивающее средство, необязательно в комбинации с подходящими добавками любой природы в минимальных пропорциях, при этом добавки не оказывают никаких существенных вредных воздействий на кожу. Указанные добавки могут облегчать введение через кожу и/или могут быть полезными при получении необходимых композиций. Данные композиции можно вводить различными путями, например, посредством трансдермального пластыря, путем точечного нанесения или в виде мази.
Особенно предпочтительным является составление вышеупомянутых фармацевтических композиций в виде стандартной лекарственной формы для простоты введения и равномерности дозирования. Стандартные лекарственные формы в контексте данного описания и формулы изобретения относятся к физически дискретным единицам, подходящим в качестве единиц дозирования, при этом каждая единица содержит заранее определенное количество активного ингредиента, рассчитанное для получения необходимого терапевтического эффекта, совместно с требуемым фармацевтическим носителем. Примерами таких стандартных лекарственных форм являются таблетки (в том числе делимые таблетки или таблетки, покрытые оболочкой), капсулы, пилюли, пакеты с порошкообразным продуктом, пластинки, растворы или суспензии для инъекций, чайные ложки с верхом, столовые ложки с верхом и т.п., а также их отдельные кратные количества.
В зависимости от способа введения фармацевтическая композиция будет содержать от 0,05% до 99% по весу, предпочтительно от 0,1% до 70% по весу, более предпочтительно от 0,1% до 50% по весу активного ингредиента и от 1% до 99,95% по весу, предпочтительно от 30% до 99, 9% по весу, более предпочтительно от 50% до 99,9% по весу фармацевтически приемлемого носителя, при этом все процентные значения приводятся в пересчете на общий вес композиции.
Соединение по настоящему изобретению можно применять для системного введения, такого как пероральное, чрескожное или парентеральное введение; или для местного введения, как, например, с помощью ингаляции, назального спрея, глазных капель или с помощью крема, геля, шампуня или т.п. Соединение предпочтительно вводят перорально.
Точная дозировка и частота введения зависят от соединения, конкретного состояния, подлежащего лечению, тяжести состояния, подлежащего лечению, возраста, веса, пола, степени выраженности расстройства и общего физического состояния конкретного пациента, а также от другого медикаментозного лечения, которое индивидуум может получать, что хорошо известно специалистам в данной области техники. Более того, очевидно, что указанное эффективное суточное количество может быть снижено или увеличено в зависимости от реакции подвергаемого лечению субъекта и/или в зависимости от оценки врача, назначающего соединение по настоящему изобретению.
Количество соединения формулы (I), которое можно объединять с материалом носителя для получения лекарственной формы с однократной дозировкой, будет варьироваться в зависимости от заболевания, подвергаемого лечению, вида млекопитающего и конкретного способа введения. Однако в качестве общего руководства, подходящие стандартные дозы соединения по настоящему изобретению могут, например, предпочтительно содержать от 0,1 мг до приблизительно 1000 мг активного соединения. Предпочтительная стандартная доза составляет от 1 мг до приблизительно 500 мг. Более предпочтительная стандартная доза составляет от 1 мг до приблизительно 300 мг. Еще более предпочтительная стандартная доза составляет от 1 мг до приблизительно 100 мг. Такие стандартные дозы можно вводить более одного раза в сутки, например, 2, 3, 4, 5 или 6 раз в сутки, но предпочтительно 1 или 2 раза в сутки, с тем, чтобы общая дозировка для взрослого человека весом 70 кг находилась в диапазоне от 0,001 до приблизительно
- 19 039788 мг на кг веса субъекта в расчете на одно введение. Предпочтительная доза составляет от 0,01 до приблизительно 1,5 мг на кг веса субъекта в расчете на одно введение, и такая терапия может продолжаться в течение нескольких недель или месяцев, а в некоторых случаях в течение нескольких лет. Однако следует понимать, что определенный уровень дозы для любого конкретного пациента будет зависеть от ряда факторов, в том числе активности определенного используемого соединения; возраста, веса тела, общего состояния здоровья, пола и режима питания индивидуума, подлежащего лечению; времени и пути введения; скорости выведения; других лекарственных средств, которые были введены ранее; и тяжести конкретного заболевания, подвергаемого терапии, что хорошо понятно специалистам в данной области.
Типичной дозировкой может быть одна таблетка, содержащая от 1 мг до приблизительно 100 мг или от 1 мг до приблизительно 300 мг, принимаемая один раз в сутки или несколько раз в сутки, или одна капсула или таблетка с медленным высвобождением, принимаемая один раз в сутки и характеризующаяся пропорционально более высоким содержанием активного ингредиента. Эффекта медленного высвобождения можно достигать с помощью материалов капсулы, которые растворяются при различных значениях pH, с помощью капсул с медленным высвобождением при осмотическом давлении или с помощью любых других известных средств, обеспечивающих контролируемое высвобождение.
В некоторых случаях может понадобиться применение дозировок вне этих диапазонов, что будет очевидно специалистам в данной области. Кроме того, следует отметить, что клиницист или лечащий врач будут знать, как и когда начинать, прерывать, корректировать или завершать терапию в соответствии с реакцией отдельного пациента.
В отношении композиций, способов и наборов, приведенных выше, специалисту в данной области техники будет понятно, что предпочтительным соединением для применения в каждом из них является соединение, указанное в данном документе.
Экспериментальная часть
Применяемый в данном документе термин ACN означает ацетонитрил, AcOH или TFA означает уксусную кислоту, Boc означает трет-бутилоксикарбонил, Boc2O означает ди-третбутилдикарбонат, д. означает день(дни), DMAP - 4-диметиламинопиридин, DSC означает дифференциальную сканирующую калориметрию, LCMS означает жидкостную хроматографию/массспектрометрию, HPLC означает высокоэффективную жидкостную хроматографию, RP HPLC означает высокоэффективную жидкостную хроматографию с обращенными фазами, водн. означает водный, DCM означает дихлорметан, DIPE означает диизопропиловый эфир, DIPEA означает диизопропилэтиламин, DMF означает N,N-диметилформамид, DMSO означает диметилсульфоксид, EDCI означает 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид, EtOH означает этанол, Et2O означает диэтиловый эфир, EtOAc означает этилацетат, Et3N или TEA означает триэтиламин, HATU означает гексафторфосфат 1-[бис(диметиламино)метилен]-1H-1,2,3-триазоло[4,5-b]пиридиний-3-оксида, HBTU означает гексафторфосфат O-(бензотриазол-1-ил)-N,N,NN,'-тетраметилурония, LiHMDS означает бис(триметилсилил)амид лития, THF означает тетрагидрофуран, мин означает минуты, ч. означает часы, mCPBA означает 3-хлорпербензойную кислоту, MeOH означает метанол, MTBE означает метил-трет-бутиловый эфир, Pd/C означает палладий на угле, Pd(PPh3)4 означает тетракис(трифенилфосфин)палладий(0), iPrOH означает 2-пропанол, RM или реакц. см. означает реакционную смесь, К.Т или к.т. означает комнатную температуру, OL означает органический слой, Rt означает время удерживания (в минутах), колич. означает количественный, насыщ. означает насыщенный, SFC означает сверхкритическую флюидную хроматографию, раст. означает раствор, т. пл. означает точку плавления, q. s. означает достаточное количество.
Тонкослойную хроматографию (TLC) проводили на пластинах со слоем силикагеля 60 F254 (Merck) с применением химически чистых растворителей. Хроматографию на открытых колонках проводили на силикагеле с размером частиц 230-400 меш и размером пор 60 A (Merck) в соответствии со стандартными методиками.
Автоматизированную колоночную флэш-хроматографию осуществляли с применением готовых к подключению картриджей от Merck на силикагеле с частицами неправильной формы с размером частиц, составляющим 15-40 мкм (одноразовые колонки для нормально-фазовой флэш-хроматографии), в системе SPOT или LAFLASH от Armen Instrument.
Если стереоцентр обозначается RS, то это означает, что получали рацемическую смесь с указанным центром, если не указано иное. Стереохимическую конфигурацию центров для ряда соединений могли обозначать как R или S, если смесь(смеси) была(были) разделена(разделены); для некоторых соединений стереохимическую конфигурацию в указанных центрах обозначали как *R или *S, если абсолютная стереохимическая конфигурация не определена, хотя само соединение было выделено в виде отдельного стереоизомера и является энантиомерно/диастереомерно чистым.
Абсолютную стереохимическую конфигурацию для некоторых соединений определяли с помощью колебательного кругового дихроизма (VCD). Их измеряли на Bruker Equinox 55, оснащенном PMA 37, в жидкостной кювете с окном из KBr с применением CD2C12 в качестве растворителя (РЕМ: 1350 см-1, LIA: 1 мВ, разрешение: 4 см-1). Описание применения VCD для определения абсолютной конфигурации можно найти в Dyatkin А.В. et. al., Chirality, 14:215-219 (2002). Расчеты ab initio: тщательный поиск в отно
- 20 039788 шении конформации выполняли на уровне молекулярной механики с применением Macromodel для осуществления отбора образцов при смешанном торсионном/низкочастотном режиме с применением силового поля OPLS-2005. Локализованные минимумы оптимизировали с применением Jaguar на уровне B3LYP/6-31G** в рамках континуальной модели сольватации Пуассона-Больцмана для имитации растворителя дихлорметана. Все конформации внутри интервала 10 кДж/моль применяли для моделирования спектра VCD и IR-спектра. Дипольные силы и силы вращения рассчитывали на том же уровне B3LYP/6-31G** с применением Jaguar. Рассчитанные спектры VCD, полученные после масштабирования частот в 0,97 раза, с преобразованием Лоренца в форму полос и суммированием вклада каждого конформера, учитывая ансамбль Больцмана, визуально сравнивали с экспериментальными спектрами для определения точной стереохимии.
Специалисту в данной области техники будет понятно, что соединения, синтезируемые с использованием указанных протоколов, могут существовать в виде сольвата, например гидрата, и/или могут содержать остаточный растворитель или незначительные примеси. Соединения, выделяемые в форме соли, могут характеризоваться целочисленным стехиометрическим индексом, т.е. представлять собой моноили дисоли, или промежуточным стехиометрическим индексом.
Следующие примеры предназначены для иллюстрации, но не для ограничения объема настоящего изобретения. Если не указано иное, то все исходные вещества получали от коммерческих поставщиков и применяли без дополнительной очистки.
A. Синтез промежуточных соединений.
Промежуточное соединение 1.
Процедура a. Добавляли гидрохлорид 4-метил-3-пиридинкарбоновой кислоты (1:1) (40 г, 230,4 ммоль) в нагреваемую с обратным холодильником смесь серной кислоты (20 мл) и MeOH (400 мл). Смесь нагревали с обратным холодильником в течение ночи, затем ее выпаривали и полученную взвесь добавляли в холодный раствор NaHCO3 (64 г) в воде (360 мл). Продукт экстрагировали с помощью DCM и OL высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали с получением промежуточного соединения 1 (28,70 г, 83%).
Процедура b. В металлический реактор загружали 3-бром-4-метилпиридин (200 г, 0,116 моль) и смесь DMF/MeOH (1 л/1 л). В полученное добавляли Et3N (400 г, 0,395 моль), ацетат палладия (II) (8 г, 0,036 моль) и 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен (16 г, 0,029 моль). Реактор закрывали и подавали газообразный CO (3 МПа), и реакционную смесь перемешивали и нагревали в течение ночи при 140°C. Реакц. см. охлаждали, фильтровали и концентрировали in vacuo. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиент элюирования: EtOAc/петролейный эфир, от 1/1 до 1/0). Фракции с продуктом собирали и растворитель выпаривали с получением необходимого промежуточного соединения 1 (90 г, 51%).
Промежуточное соединение 2.
Процедура a. В колбу для гидрогенизации загружали АсОН (50 0 мл) и затем добавляли PtO2 (15,02 г, 66,2 ммоль). Добавляли промежуточное соединение 1 (50 г, 330,8 ммоль) и смесь гидрогенизировали при 50°C в течение 7 дней. Реакц. см. фильтровали через dicalite® и фильтрат выпаривали с получением промежуточного соединения 2 (52 г), которое применяли на следующей стадии без дополнительной очистки.
Процедура b. Добавляли оксид платины (5 г, 0,022 моль) в раствор промежуточного соединения 1 (90 г, 0,595 моль) и АсОН (1 л). Реакц. см. перемешивали и гидрогенизировали в течение 5 дней при 50°C при давлении, составляющем 3,5 кПа. Охлажденную реакц. см. концентрировали in vacuo с получением промежуточного соединения 2 в виде соли уксусной кислоты (140 г, 97%, чистота 90%, определенная с помощью 1H ЯМР).
- 21 039788
Промежуточное соединение 3.
О
О I
Процедура а. В раствор промежуточного соединения 2 (52 г, 330,8 ммоль) в DCM (869 мл) добавляли DIPEA (85,5 г, 661,5 ммоль) и DMAP (4,04 г, 33,08 ммоль). Затем в данный раствор маленькими порциями добавляли ди-трет-бутилдикарбонат (72,19 г, 330,8 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение 1 ч. Реакц. см. промывали водой и солевым раствором и органический слой высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали. Продукт очищали с помощью колоночной хроматографии (силикагель, элюент: DCM, 1% МеОН в DCM, 2%, 4%). Необходимые фракции выпаривали с получением промежуточного соединения 3 (64,1 г, 75%).
Процедура Ь. В перемешанный и охлажденный (0°С) раствор промежуточного соединения 2 (140 г, 0,595 моль) в DCM (1,5 л) последовательно добавляли ди-трет-бутилдикарбонат (130 г, 0,596 моль), Et3N (225 г, 1,74 моль) и DMAP (10 г, 0,082 моль) и перемешивание продолжали при к.т. в течение 2 ч. Реакционную смесь выливали в Н2О (500 мл) и экстрагировали с помощью DCM (2x100 мл). Органические слои отделяли, высушивали (Na2SO4) и растворитель выпаривали с получением неочищенного промежуточного соединения 3 (150 г, 90%, чистота 90%, определенная с помощью 1Н ЯМР), которое применяли далее как таковое.
Промежуточное соединение 4.
0 I
НО
Процедура а. Промежуточное соединение 3 (64,1 г, 249,1 ммоль) перемешивали в МеОН (500 мл) при к.т. Добавляли NaOH (2 М, 747,3 мл) и смесь перемешивали в течение 2 ч при к.т. Реакц. см. подкисляли с помощью 1 и. НС1 и продукт экстрагировали с помощью Et2O. OL промывали солевым раствором и высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали с получением промежуточного соединения 4 (59,70 г) в виде белого твердого вещества.
Процедура Ь. В перемешанный раствор промежуточного соединения 3 (150 г, чистота 90%, 0,524 моль) в МеОН (0,9 л) добавляли 2 М раствор NaOH (1,8 моль). Через 14 ч реакц. см. экстрагировали при к.т. с помощью МТВЕ (2x0,8 л). Водный слой подкисляли 10% лимонной кислотой и затем экстрагировали с помощью EtOAc (4x1 л). Объединенные органические слои высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали in vacuo с получением неочищенного промежуточного соединения 4 (142 г, чистота 90%, определенная с помощью 1Н ЯМР, 100%), которое применяли как таковое на следующей стадии.
Промежуточное соединение 5.
Процедура а. В раствор промежуточного соединения 4 (59,7 г, 0,25 моль) в THF (800 мл) добавляли ди-1Н-имидазол-1-илметанон (54 г, 0,33 моль) и смесь перемешивали при к.т. в течение 1 ч. В другой колбе в суспензию гидрохлорида N-метоксиметанамина (1:1) (32,93 г, 0,34 моль) в ACN (500 мл) добавляли триметиламин (35,75 г, 0,35 моль). Обе смеси объединяли и перемешивали при 50°С, осуществляя при этом контроль. Промежуточный продукт кристаллизовали из реакц. см., и он не вступал в реакцию с N-метоксиметанамином для образования необходимого продукта. Добавляли DCM до тех пор, пока промежуточное соединение не растворялось. Реакционную смесь оставляли перемешиваться в течение 1 недели при 80°С. Растворители выпаривали. Остаток растворяли в DCM и промывали водой, 20% раствором АсОН и наконец насыщенным раствором NaHCO3. OL высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали. Продукт очищали с помощью колоночной хроматографии (силикагель, элюент: 2% МеОН в
-22039788
DCM, 4%). Очищенные фракции выпаривали с получением промежуточного соединения 5 (70 г, количественно).
Процедура b. В перемешанный и охлажденный льдом раствор промежуточного соединения 4 (140 г, 0,518 моль) в DCM (2 л) добавляли ^О-диметилгидроксиламин (113 г, 1,16 моль) и Et3N (113 г, 1,79 моль). Затем добавляли HATU (235 г, 0,618 моль) и перемешивание продолжали в течение 14 ч. Растворитель выпаривали и добавляли раствор NaHCO3 (0,5 л) и затем экстрагировали с помощью DCM (3x1 л). Объединенные органические слои отделяли, высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали in vacuo. Остаток очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле, с элюированием от 1 до 10% EtOAc в петролейном эфире, с получением промежуточного соединения 5 (152 г, 100%).
Промежуточное соединение 6.
Процедура а. Загружали промежуточное соединение 5 (70 г, 244,4 ммоль) в THF (250 мл) в колбу в атмосфере N2 и охлаждали до -15°C. Добавляли по каплям метилмагнийбромид (1,4 М в смеси толуол/THF, 75/25, 206 мл) при температуре, не превышающей 0°C. После добавления реакц. см. перемешивали при к.т. в течение 1 ч. Затем реакц. см. выливали на лед с 20 мл АсОН. Продукт экстрагировали с помощью Et2O и OL промывали 5% раствором NaHCO3. OL высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали с получением промежуточного соединения 6 (53,35 г, 90%).
Процедура b. В перемешанный и охлажденный раствор (0°C) промежуточного соединения 5 (150 г, 0,524 моль) в THF (2 л) добавляли по каплям 3 М раствор метилмагнийбромида в THF (0,75 л, 2,25 моль) и перемешивание продолжали при к.т. в течение 2 ч. Реакционную смесь выливали в водный раствор NH4Cl и экстрагировали с помощью DCM. Объединенные органические слои высушивали над Na2SO4, фильтровали и концентрировали in vacuo. Остаток очищали с помощью хроматографии на силикагеле, с элюированием 1-5% EtOAc в петролейном эфире, с получением промежуточного соединения 6 (120 г, 95%).
Промежуточное соединение 7.
Промежуточное соединение 6 (53,35 г, 0,22 моль) перемешивали в толуоле (1500 мл) при 0°C в атмосфере N2. Добавляли трет-бутоксид калия (34,14 г) при 0-5°C и добавляли по каплям сложный этиловый эфир 2,2-дифторуксусной кислоты (33,01 г, 0,27 моль) при 0-5°C. Реакц. см. перемешивали при к.т. в течение 2 ч, затем промывали с помощью 10% H2SO4 в воде и OL высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали с получением промежуточного соединения 7 (70,50 г, количественно).
Промежуточное соединение 8.
Перемешивали промежуточное соединение 7 (70,5 г, 220,8 ммоль), гидрохлорид 1H-1,2,4-триазол-5амина (1:1) (53,22 г, 441,52 ммоль) и DMF (1500 мл) при 80°C в течение 24 ч. Добавляли Et3N (20 г) и ди
- 23 039788 трет-бутилдикарбонат (20 г). Смесь перемешивали в течение 30 мин, выпаривали и затем растворяли в EtOAc, промывали водой и солевым раствором. OL высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали. Наблюдали четыре изомера. Первую фракцию кристаллизовали из Et2O. Кристаллы отфильтровывали и высушивали с получением промежуточного соединения 8 (24,60 г, 30%). Из маточного раствора получали вторую фракцию соединения. Кристаллы отфильтровывали и высушивали с получением промежуточного соединения 8 (2,53 г, 3%).
Примечание: RS означает, что промежуточное соединение представляет собой рацемическую смесь двух энантиомеров с относительной транс-конфигурацией.
Промежуточные соединения 9, 9a и 9b.
В раствор промежуточного соединения 8 (24,6 г, 67 ммоль) в MeOH (350 мл) добавляли HCl-iPrOH (350 мл) и реакц. см. перемешивали в течение 2 ч при к.т. Реакц. см. выпаривали и продукт кристаллизовали из EtOH. Кристаллы отфильтровывали и высушивали с получением 20,33 г неочищенного вещества, к которому добавляли воду, Na2CO3 и DCM. OL высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали с получением 12,80 г промежуточного соединения 9. Данное свободное основание разделяли на энантиомеры 9a и 9b путем очистки с помощью препаративной SFC (неподвижная фаза: Chiralpak Diacel AD 30x250 мм; подвижная фаза: CO2, ((MeOH - iPrOH 50/50) с 0,4% iPrNH2) с получением промежуточного соединения 9а (5 г, 19%, Rt=7,57 мин) и промежуточного соединения 9b (5,13 г, 19%, Rt=9,36 мин).
Промежуточные соединения 9a и 9b выделяли в виде свободных оснований или, в качестве альтернативы, их растворяли в MeOH с последующим добавлением HCl/i-PrOH и смесь выпаривали. Гидрохлоридные соли (в каждом случае .HCl) кристаллизовали из ACN, отфильтровывали и высушивали.
Промежуточное соединение 10.
Перемешанную смесь I-6 (7,3 г, 0,03 моль) в диметилацетале N,N-диметилацетамида (20 мл, 0,91 г/мл, 0,14 моль) нагревали при 100°C в течение 4 ч. Реакц. см. концентрировали in vacuo, выпаривали совмест но с толуолом (2x20 мл) с получением I-7 в виде коричневого остатка (9,4 г, выход 100,1%), который применяли как таковой на следующей стадии.
Промежуточное соединение 11 (I-11).
В смесь I-10 (9,4 г, 0,03 моль) в АсОН (50 мл, 1,05 г/мл, 1,75 моль) добавляли смесь 3-амино-1,2,4триазола (2,68 г, 0,03 моль) в НОАс (50 мл, 1,05 г/мл, 1,75 моль) и обеспечивали нагревание реакц. см. на металлическом нагревательном блоке Drysyn® при температуре 130°C в течение 15 мин Реакц. см. охлаждали, концентрировали in vacuo, разбавляли с помощью DCM (0,2 л) и обрабатывали с помощью 1 NaOH до рН~8. Слои разделяли и водный слой экстрагировали с помощью DCM (2x50 мл). Объединенные органические слои высушивали (MgSO4), фильтровали и концентрировали in vacuo с получением темно-коричневого масла, которое очищали с помощью хроматографии на силикагеле с применением колонки для флэш-хроматографии Redisep® 120 г, с элюированием градиентом от 0 до 3% 7 н. NH3/MeOH в DCM, с получением промежуточного соединения 11 в виде бежевого масла в виде смеси цис:транс-изомеров = ~1:4 (2,15 г, выход 21,42%).
- 24 039788
Промежуточное соединение 12.
Перемешанную смесь I-11 (2,15 г, 0,0065 моль) в MeOH (50 мл, 0,79 г/мл, 1,2 3 моль) обрабатывали с помощью HCl (6 М в iPrOH) (50 мл, 6 М, 0,3 моль) и через 16 ч при к.т. реакц. см. концентрировали in vacuo с получением грязно-белого твердого вещества. Полученное растирали со смесью Et2O (200 мл) и ACN (30 мл) в течение 16 ч. Твердое вещество собирали посредством фильтрации и высушивали с получением промежуточного соединения 12 в виде грязно-белого твердого вещества в виде смеси цис/трансизомеров (18%/82%) (1,7 г, выход 97,87%).
Промежуточное соединение 12a и промежуточное соединение 12b.
2HCI
1-12а
1-12Ь
Перемешанную смесь I-11 (23 г, 0,0694 моль) в MeOH (165 мл) обрабатывали с помощью HCl (6 М в iPrOH) (165 мл, 6 М, 0,986 моль) и через 16 ч при к.т. реакц. см. концентрировали in vacuo с получением грязно-белого твердого вещества. Полученное разбавляли водой и DCM и обрабатывали с помощью Na2CO3. OL высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали in vacuo с получением остатка, который очищали с применением SCF (неподвижная фаза: Chiralpak® Diacel AD 20x250 мм, подвижная фаза: CO2, MeOH-iPrOH (50-50)+0,4% iPrNH2) с получением промежуточных соединений 12a и 12b и. Их растворяли в MeOH (100 мл) и обрабатывали с помощью HCl (6 М в iPrOH) (100 мл) при 0°C в течение 2 ч. Летучие вещества выпаривали при пониженном давлении и полученные остатки перемешивали при 0°C в Et2O с получением промежуточного соединения 12а (9,25 г, 43%, Rt=3,54 мин, [a]20D=-17,47° (с 0,54, DMF)) и промежуточного соединения 12Ь (8,8 г, 42%, Rt=3,24 мин, [a]20D=+16,5 °(с 0,52, DMF)).
Промежуточное соединение 13.
В раствор LDA (2 M в смеси THF/гептан/этилбензол, 42,7 мл, 2 М, 85,493 ммоль) в 100 мл THF (245 мл) добавляли по каплям раствор промежуточного соединения 3 (20 г, 77,721 ммоль) в THF (50 мл) при 0°C. Раствор перемешивали в течение 30 мин и затем переносили в раствор Nфторбензолсульфонимида (30,6 г, 97,1 ммоль) в 100 мл THF при 0°C. Реакц. см. перемешивали в течение 15 мин при 0°C и затем при к.т. в течение ночи. Реакц. см. выпаривали, добавляли EtOAc и реакц. см. промывали последовательно водой, 0,1 н. раствором HCl, насыщенным раствором NaHCO3 и солевым раствором. OL высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали. Продукт очищали на силикагеле, элюент: DCM^1% MeOH в DCM. Очищенные фракции выпаривали с получением промежуточного соединения 13 (21,4 г, количественно).
Промежуточное соединение 14.
Раствор промежуточного соединения 13 (21,4 г, 77,728 ммоль) перемешивали в MeOH (500 мл) при к.т. Добавляли NaOH (486 мл, 2 М, 973 ммоль) и смесь перемешивали в течение 2 ч. при к.т. Реакц. см. подкисляли с помощью 1 н. HCl и продукт экстрагировали с помощью Et2O. OL промывали солевым раствором и высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали. Продукт очищали на силикагеле, элюент: DCM ^ 5% MeOH в DCM. Очищенные фракции выпаривали с получением 14 (15 г, 74%).
- 25 039788
Промежуточное соединение 15.
Промежуточное соединение 14 (15 г, 57,407 ммоль) растворяли в DCM (1000 мл). Затем добавляли гидрохлорид N,O-диметилгидроксиламина (11,2 г, 114,8 ммоль) и Et3N (17,4 г, 172 ммоль). Реакционную смесь охлаждали до 0°C. Затем добавляли HATU (24,0 г, 63,1 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение 2 ч. Реакц. см. выливали в водн. раствор NaHCO3 (100 мл). OL отделяли, высушивали с помощью MgSO4 и растворитель выпаривали. Остаток очищали с помощью колоночной флэшхроматографии на силикагеле, элюент: DCM^1% MeOH в DCM. Фракции с продуктом собирали и растворитель выпаривали с получением необходимого продукта 15 (8,49 г, 49%).
Промежуточное соединение 16.
Промежуточное соединение 15 (8,49, 27,9 ммоль) в THF (60 мл) помещали в колбу в атмосфере N2 и охлаждали до -15°C. Добавляли по каплям метилмагнийбромид (16,3 мл, 3 М, 48,8 ммоль), при этом температура не превышала 0°C. После добавления реакц. см. перемешивали в течение 1 ч при к.т. Затем реакц. см. выливали на лед с 20 мл АсОН. Продукт экстрагировали с помощью Et2O и OL промывали 5% раствором NaHCO3. OL высушивали над MgSO4, фильтровали, и выпаривали, и очищали на силикагеле, элюент:
DCM. Очищенные фракции выпаривали с получением промежуточного соединения 16 (3,20 г, 44%). Промежуточное соединение 17.
Промежуточное соединение 16 (3,2 г, 0,0123 моль) перемешивали в толуоле (150 мл) при 0°C в атмосфере N2. Добавляли трет-бутоксид калия (1,94 г, 17,3 ммоль) при 0-5°C, добавляли по каплям этилдифторацетат (1,84 г, 0,0149 моль) при 0-5°C. Реакц. см. перемешивали при к.т. в течение 2 ч. Реакц. см. промывали с помощью 10% H2SO4 в воде и OL высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали с получением промежуточного соединения 17 (4,16 г, 99%).
Промежуточное соединение 18.
Промежуточное соединение 17 (4,16 г, 12,3 ммоль) и гидрохлорид 1H-1,2,4-триазол-5-амина (2,97 г, 24,7 ммоль) в DMF (40 мл) перемешивали при 80°C в течение 16 ч. Реакц. см. выпаривали, добавляли DCM и добавляли 2 г (Вос)2О и 2 мл Et3N.
Смесь перемешивали в течение 30 мин, промывали водой, OL высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали. Продукт (4 изомера) очищали на силикагеле, элюент: DCM^2% MeOH в DCM. Фрак- 26 039788 ции выпаривали с получением 3,55 г неочищенного вещества, которое очищали с помощью препаративной HPLC (неподвижная фаза: Uptisphere® C18 ODB - 10 мкм, 200 г, 5 см, подвижная фаза: 0,25% раствор NH4HCO3 в воде, CH3CN) с получением промежуточного соединения 18 (730 мг, 15%).
Промежуточное соединение 19.
F
К промежуточному соединению 18 (0,73 г, 1,894 ммоль) в МеОН (20 мл) добавляли HCl (6 М в iPrOH) (20 мл, 6 М, 120 ммоль) и полученное перемешивали при к.т. в течение ночи. Растворители выпаривали с получением промежуточного соединения 19 (600 мг, 99%).
Альтернативная процедура получения промежуточного соединения 19 и разделение на промежуточные оединения 19a и 19b.
Промежуточное соединение Промежуточное соединение Промежуточное соединение
19а 19в
К промежуточному соединению 18 (4,5 г, 11,7 ммоль) в DCM (52 мл) добавляли трифторуксусную кислоту (TFA) (6 М в iPrOH) (5,4 мл, 6 М, 70 ммоль) и полученное перемешивали при к.т. в течение 1 ч. Растворители выпаривали и полученный остаток растворяли в DCM и промывали с помощью насыщенного водного раствора NaHCO3. OL отделяли и водный слой повторно экстрагировали 2 х DCM. Объединенные OL высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с применением в качестве элюента градиента DCM/NH3(MeOH) от 99/1 до 93/7 с получением промежуточного соединения 19 (2,2 г, выход 66%) в виде рацемической смеси. Полученное разделяли на энантиомеры с помощью препаративной SFC (неподвижная фаза: Chiralpak Diacel AD 20x250 мм, подвижная фаза: CO2, EtOH+0,4% iPrNH2) с получением промежуточных соединений 19a (955 мг, 29%, Rt=2,36 мин) и 19b (970 мг, 29%, Rt=2,99 мин).
Промежуточное соединение 20.
Сложный 8-(1,1-диметилэтил)-2-метиловый эфир 8-азабицикло[3.2.1]октан-2,8-дикарбоновой кислоты [1033820-28-8] (4,77 г, 17,71 ммоль) перемешивали в MeOH (41,608 мл) при к.т. Добавляли NaOH (106 мл, 1 М, 106 ммоль) и смесь перемешивали в течение ночи при к.т. Выпаривали МеОН. Реакц. см. подкисляли с помощью 1 н. HCl и продукт экстрагировали с помощью хлороформа. OL высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали с получением промежуточного соединения 20 (4,52 г, 100%).
Промежуточное соединение 21.
О О
Промежуточное соединение 20 (4,52 г, 17,704 ммоль) растворяли в DCM (200 мл). Затем добавляли гидрохлорид N,O-диметилгидроксиламина (3,454 г, 35,407 ммоль) и Et3N (5,37 г, 53,1 ммоль). Реакционную смесь охлаждали до 0°C. Затем добавляли HATU (7,41 г, 19,5 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение 2 ч. Реакционную смесь выливали в водн. раствор NaHCO3 (100 мл). OL отделяли, высушивали с помощью MgSO4 и растворитель выпаривали. Остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле, элюент: DCM^1% MeOH в DCM.
Собирали фракции с продуктом и выпаривали растворитель с получением промежуточного соединения 21 (3,03 г, 57%).
- 27 039788
Промежуточное соединение 22.
Промежуточное соединение 21 (3,03 г, 10,2 ммоль) в THF (50 мл) помещали в колбу в атмосфере N2 и охлаждали до -15°C. Добавляли по каплям метилмагнийбромид (12,7 мл, 1,4 М, 17,8 ммоль), при этом температура не превышала 0°C. После добавления реакц. см. перемешивали в течение 1 ч при к.т. Затем реакц. см. выливали на лед с АсОН (20 мл). Продукт экстрагировали с помощью Et2O и OL промывали 5% раствором NaHCO3. OL высушивали над MgSO4, фильтровали, и выпаривали, и очищали на силикагеле, элюент: DCM. Очищенные фракции выпаривали с получением промежуточного соединения 22 (2,57 г, 100%).
Промежуточное соединение 23.
Промежуточное соединение 22 (2,57 г, 0,0101 моль) перемешивали в толуоле (150 мл) при 0°C в атмосфере N2. Добавляли трет-бутоксид калия (1,59 г, 14,2 ммоль) при 0-5°C, добавляли по каплям этилдифторацетат (1,52 г, 0,0122 моль) при 0-5°C. Реакц. см. перемешивали при к.т. в течение 2 ч. Реакц. см. промывали с помощью 10% H2SO4 в воде и OL высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали с получением промежуточного соединения 23 (3,34 г, 99%).
Промежуточное соединение 24.
Промежуточное соединение 23 (3,34 г, 10,1 ммоль) и гидрохлорид 1Н-1,2,4-триазол-5-амина (2,43 г, 20,2 ммоль) в DMF (30 мл) перемешивали при 80°C в течение 16 ч. Реакц. см. выпаривали, добавляли DCM и добавляли 2 г (Вос)2О и Et3N (2 мл). Смесь перемешивали в течение 30 мин, промывали водой, OL высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали. Продукт (4 изомера) очищали на силикагеле, элюент: DCM^2% MeOH в DCM. Фракции выпаривали с получением 3,07 г неочищенного вещества, которое очищали с помощью препаративной HPLC (неподвижная фаза: Uptisphere® C18 ODB - 10 мкм, 200 г, I.D. 5 см, подвижная фаза: 0,25% раствор NH4HCO3 в воде, МеОН) с получением промежуточного соединения 24 (1,07 г, 28%).
Промежуточное соединение 25.
К промежуточному соединению 24 (1,07 г, 2,82 ммоль) в MeOH (30 мл) добавляли HCl (6 М в iPrOH, 30 мл, 6 М, 179 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение ночи. Растворители выпаривали и продукт кристаллизовали из простого эфира. Кристаллы отфильтровывали и высушивали с получением промежуточного соединения 25 в виде соли хлористоводородной кислоты (1,12 г, 112%).
Альтернативная процедура получения промежуточного соединения 25.
Стадия 1. Промежуточное соединение 43.
Добавляли н-бутиллитий (nBuLi, 106,5 мл, 266,3 ммоль, 2,5 М в гексанах) при 0°C в раствор диизопропиламина (26,95 г, 266,3 ммоль) в THF (500 мл). Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 30 мин, затем ее охлаждали до -78°C и обрабатывали раствором N-Boc-нортропинона (50 г, 221,9 ммоль) в THF (75 мл). Полученную смесь перемешивали при -78°C в течение 90 мин, затем добавляли метилцианоформиат (22,9 мл, 288,5 ммоль). Обеспечивали нагревание реакц. см. до к.т. и ее перемешивали в
- 28 039788 течение ночи.
Реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором NH4Cl, затем ее разбавляли с помощью EtOAc. Органический слой отделяли, затем промывали водой и солевым раствором, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с применением в качестве элюента градиента от 100% DCM до 1% MeOH в DCM, с получением промежуточного соединения 43 (60,25 г, 95,8%).
Стадия 2. Промежуточное соединение 44.
Добавляли борогидрид натрия (16,02 г, 423,5 ммоль) в холодный (ледяная баня) раствор промежуточного соединения 43 (60 г, 211,8 ммоль) в метаноле (700 мл) и обеспечивали перемешивание реакционной смеси в течение 5 ч. Завершенную реакцию гасили насыщенным водным раствором NH4Cl, затем растворитель выпаривали до сухого состояния при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в воде и экстрагировали с помощью 3 х DCM. Объединенные органические слои высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали in vacuo с получением промежуточного соединения 44 (59 г, 97,6%), которое применяли как таковое без дополнительной очистки.
Стадия 3. Промежуточное соединение 45.
Очень медленно добавляли по каплям трифторуксусный ангидрид (57,5 мл, 413,5 ммоль) (ВНИМАНИЕ! экзотермическая реакция) в раствор промежуточного соединения 44 (59 г, 206,8 ммоль), триэтиламина (115 мл, 827,1 ммоль) и 4-(диметиламино)пиридина (2,52 г, 20,7 ммоль) в DCM (800 мл), с поддержанием температуры ниже 60°C. Реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение ночи, затем ее охлаждали на ледяной бане и гасили водой.
Регулировали рН полученного раствора до 8-8,5 с применением насыщенного водного раствора NaHCO3 и обеспечивали его перемешивание при к.т. в течение 1 ч. Затем водный слой экстрагировали с помощью 3 х DCM, затем объединенные органические слои высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали in vacuo. Полученный остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с применением в качестве элюента градиента от 100% DCM до 2% MeOH в DCM с получением промежуточного соединения 45 (33,7 г, 61%).
Стадия 4. Промежуточное соединение 46.
Добавляли MeOH (59 мл) в колбу, содержащую промежуточное соединение 45 (2,44 г, 9,13 ммоль) и Pd/C (10%) (0,971 г, 0,913 ммоль) в атмосфере азота. В полученном создавали вакуум и заполняли газообразным водородом и его перемешивали при к.т. в течение ночи. Реакционную смесь фильтровали через подушку из Celite®, затем растворитель удаляли in vacuo. Полученный остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с применением в качестве элюента градиента от 100% DCM до 2% MeOH в DCM с получением промежуточного соединения 46 (2 г, 81%).
Стадия 5. Промежуточное соединение 47.
Добавляли по каплям LDA (54,3 мл, 108,7 ммоль, 2 M в смеси циклогексан/этилбензол/THF) при температуре от -78°C до -60°C к раствору промежуточного соединения 46 (24,4 г, 90,6 ммоль) в безводном THF (363 мл) в атмосфере азота. После добавления реакционную смесь нагревали до -30°C и перемешивали в течение 10 мин, после чего охлаждали обратно до -78°C. Растворяли 7-хлор-5(дифторметил)-[1,2,4]триазоло[1,5-a]пиримидин([1340394-63-9], 18,5 г, 90,6 ммоль) в минимальном количестве THF и добавляли по каплям с помощью шприца. Реакционную смесь перемешивали при -60°C в течение 1 ч, затем температуру повышали до к.т. и реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором NH4Cl. Летучие вещества выпаривали in vacuo и полученный остаток разделяли между EtOAc и
- 29 039788 водой. Слои разделяли, затем водный слой экстрагировали с помощью 2 х EtOAc. Объединенные OL промывали солевым раствором, высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток кристаллизовали из диэтилового эфира с получением промежуточного соединения 47 (23,8 г, 60%). Фильтрат выпаривали и полученный остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с применением в качестве элюента градиента от 100% DCM до 2% MeOH в DCM с получением промежуточного соединения 47 (2 г, 5%) после перекристаллизации из диэтилового эфира.
Стадия 6. Промежуточное соединение 25, промежуточное соединение 25a и промежуточное соединение 25b.
Перемешивали промежуточное соединение 47 (25,8 г, 58,9 ммоль) в концентрированном растворе HCl (266 мл, 3,19 моль, 37% в Н2О) при 150°C в течение ночи. Летучие вещества выпаривали in vacuo и полученный остаток дважды выпаривали совместно с толуолом. Продукт обрабатывали насыщенным водным раствором NaHCO3 до достижения основного рН. Водный слой экстрагировали с помощью DCM, затем органический слой высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с применением в качестве элюента градиента от 100% DCM до 8% MeOH/NH3 в DCM с получением промежуточного соединения 25 в виде рацемической смеси (13 г, 79%). Данное вещество очищали с помощью препаративной SFC (неподвижная фаза: Chiralpak Diacel AD 20x250 мм, подвижная фаза: CO2, EtOH+0,4 iPrNH2). Преобразовывали 1S,4S,5S-энантиомер в его соль HCl и перекристаллизовывали из CH3CN с получением промежуточного соединения 25а (5,58 г, 30%, Rt=2,91 мин, [a]20 D = -66, 6 (с=0,48, DMF)).
Промежуточное соединение 26.
Перемешивали смесь 1-трет-бутил-3-метил-4-(((трифторметил)сульфонил)окси)-5,6-дигидропиридин-1,3(2Н)-дикарбоксилата [161491-25-4] (15 г, 38,53 ммоль, получен в соответствии с Angew. Chem. Int. Ed. 2015, 54, 12942-12946), N-бутилбороновой кислоты [4426-47-5] (5,89 г, 57,8 ммоль), Pd(PPh3)4 [14221-01-3] (1,78 г, 1,54 ммоль) и Na2CO3 [497-19-8] (8,167 г, 77,052 ммоль) в 1,4-диоксане [123-91-1] (300 мл) и нагревали при 90°C в течение ночи. Летучие вещества выпаривали in vacuo и полученный остаток обрабатывали с помощью 1 н. водного раствора HCl. Водный слой экстрагировали с помощью DCM, затем объединенные OL высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали in vacuo. Полученный остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с применением в качестве элюента градиента DCM-MeOH (9:1, o6./o6.)/DCM от 0/100 до 30/70). Таким образом получали 3,65 г 1-трет-бутил-5-метил-4-бутил-3,6-дигидро-2H-пиридин-1,5-дикарбоксилата, который растворяли в смеси метанола и 1 н. водного раствора NaOH (1:1, об./об., 200 мл) и перемешивали в течение ночи при к.т. Летучие вещества выпаривали при пониженном давлении и полученный остаток помещали на лед и подкисляли 1 н. водным раствором HCl. Водный слой экстрагировали хлороформом, затем объединенные OL высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с применением в качестве элюента градиента от 1% MeOH в DCM до 2% MeOH в DCM с получением промежуточного соединения 26 (1,69 г, выход 15,5%).
Промежуточное соединение 27.
- 30 039788
Промежуточное соединение 26 (1,47 г, 5,188 ммоль) добавляли к суспензии Pd/C (10%) (668 мг,
0,63 ммоль) в MeOH [67-56-1] (134 мл). Затем смесь помещали в атмосферу H2 и перемешивали в течение 36 ч. По истечении этого времени катализатор фильтровали через подушку из Celite и выпаривали растворитель при пониженном давлении с получением промежуточного соединения 27 (1,45 г, 98%).
Промежуточное соединение 28.
Согласно процедуре, подобной приведенной для синтеза промежуточного соединения 8, синтезировали промежуточное соединение 28, исходя из промежуточного соединения 27, с получением промежуточного соединения 28 (200 мг).
Промежуточные соединения 29, 29a и 29b.
NaH (60% дисперсия в минеральном масле, 1,5 г, 39,05 ммоль) добавляли к раствору трет-бутил-3[5-(дифторметил)-[1,2,4]триазоло[1,5-a]пиримидин-7-ил]пиперидин-1-карбоксилата, который получали аналогично промежуточному соединению 8 и 11, начиная из 3-пиридинкарбоновой кислоты (11,5 г, 32,54 ммоль) в DMF (500 мл) при к.т. и в потоке N2. Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин при к.т, затем добавляли по каплям метилйодид (5,54 г, 39,05 ммоль) и смесь перемешивали в течение ночи при к.т. Добавляли воду и продукт экстрагировали с помощью EtOAc. OL промывали солевым раствором, высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали. Полученный остаток очищали с помощью препаративной HPLC (неподвижная фаза: Uptisphere® C18 ODB - 10 мкм, 200 г, I.D. 5 см, подвижная фаза: 0,25% раствор NH4HCO3 в воде, МеОН) с получением промежуточного соединения 29 (4,32 г, 36%) в виде рацемической смеси. Полученное разделяли на энантиомеры с помощью препаративной SFC (неподвижная фаза: Chiralcel Diacel OJ 20x250 мм), подвижная фаза: CO2, iPrOH+0,2% iPrNH2) с получением промежуточных соединений 29а (2 г, 17%) и 29b (2 г, 17%).
Промежуточное соединение 30a.
К промежуточному соединению 29a (500 мг, 1,36 ммоль) в МеОН (20 мл) добавляли HCl (6 М в iPrOH, 20 мл, 6 М, 120 ммоль) и реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение ночи. Растворители выпаривали с получением промежуточного соединения 30а в виде соли хлористоводородной кислоты (400 мг, 97%).
Промежуточное соединение 30b.
Промежуточное соединение 30b получали таким же образом, как описано для промежуточного соединения 30a, исходя из 29b (400 мг, 97%).
- 31 039788
Альтернативная процедура получения промежуточного соединения 29. Стадия 1. Промежуточное соединение 31.
K2CO3 (33,15 г, 0,24 моль) добавляли к перемешанному раствору 1-(трет-бутоксикарбонил)пиперидин-3-карбоновой кислоты [84358-12-3] (50,0 г, 0,22 моль) в DMF (600 мл) при к.т. Через 30 мин добавляли метилйодид (34,05 г, 0,24 моль) и реакционную смесь перемешивали еще в течение 2,5 ч при к.т. Летучие вещества выпаривали in vacuo и полученный остаток помещали в воду и экстрагировали с помощью DIPE. Объединенные OL высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали с получением 54,75 г промежуточного соединения 31, которое применяли как таковое на следующей стадии.
Стадия 2. Промежуточное соединение 32.
Добавляли по каплям LiHMDS (450 мл, 0,45 моль, 1 М) к раствору промежуточного соединения 31 (54,75 г, 0,22 ммоль) в THF (1 л) при -78°C и в атмосфере N2. Раствор перемешивали при -78°C в течение 1 ч и затем добавляли по каплям метилйодид (63,9 г, 0,45 ммоль) при данной температуре. После завершения добавления обеспечивали нагревание реакционной смеси до к.т. Затем реакц. см. обрабатывали насыщенным водным раствором NH4Cl. Водный слой экстрагировали с помощью Et2O. Объединенные OL высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали. Полученный остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии с применением в качестве элюента 20% раствора EtOAc в гептане с получением промежуточного соединения 32 (55,5 г, выход 96%).
Промежуточное соединение 29.
Согласно процедуре синтеза, подобной приведенной для синтеза промежуточного соединения 8, исходя из промежуточного соединения 32 получали промежуточное соединение 29 (36,7 г, выход 4 3,5%).
Промежуточное соединение 33.
NaH (60% дисперсия в минеральном масле, 0,97 г, 24,2 ммоль) добавляли к промежуточному соединению 6 (5 г, 20,7 ммоль) в безводном THF (35 мл), в 250 мл четырехгорлой RBF, при 0°C в потоке N2. Через 10 мин добавляли по каплям дисульфид углерода (1,46 мл, 24,1 ммоль) и затем добавляли по каплям метилйодид (2,71 мл, 43,5 ммоль). Смесь перемешивали в течение ночи при к.т. Добавляли воду и продукт экстрагировали с помощью EtOAc. OL промывали солевым раствором, высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали с получением промежуточного соединения 33 (8,2 г, 92%), которое применяли как таковое на следующей стадии.
- 32 039788
Промежуточное соединение 34.
Промежуточное соединение 33 (1 г, 2,89 ммоль) и гидрохлорид 1Н-1,2,4-триазол-5-амина (0,35 г, 2,89 ммоль) перемешивали при 150°C в течение 3 ч для прохождения реакции плавления. Реакц. см. охлаждали до к.т. и растворяли в DCM. OL промывали с помощью насыщ. водн. раств. NaHCO3, воды, солевого раствора, высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали. Продукт очищали на силикагеле, элюент DCM/MeOH от 100/0 до 98/2, с получением промежуточного соединения 34 (200 мг, 26%).
Промежуточное соединение 35.
К промежуточному соединению 34 (200 мг, 0,76 ммоль) в DCM (3,3 мл) добавляли (Boc)2O (199 мг, 0,91 ммоль), Et3N (127 мкл, 0,91 ммоль) и реакц. см. перемешивали при к.т. в течение ночи. Выпаривали растворитель, затем остаток помещали в DCM и промывали водой (3х), затем солевым раствором. OL отделяли, высушивали (MgSO4), фильтровали и выпаривали с получением промежуточного соединения 35 (199 мг, 72%), которое применяли без дополнительной очистки на следующей стадии.
Промежуточное соединение 36.
К промежуточному соединению 35 (347 мг, 0,95 ммоль) в CCl3 (12 мл) добавляли mCPBA (659 мг, 3,82 ммоль) и реакц. см. нагревали с обратным холодильником в течение 2 ч. Реакц. см. разбавляли CHCl3, промывали с помощью 1 н. NaOH, высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали с получением промежуточного соединения 36 (301 мг, 79%), которое применяли как таковое на следующей стадии.
Промежуточное соединение 37.
Промежуточное соединение 36 (799 мг, 2,02 ммоль) и цианид натрия (202 мг, 4,04 ммоль) перемешивали в DMSO (5 мл) при к.т. в течение 30 мин. Реакц. см. выливали в воду и экстрагировали с помощью EtOAc. OL промывали солевым раствором, высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали с получением промежуточного соединения 37 (550 мг, 80%), которое применяли как таковое на следующей стадии.
Промежуточное соединение 38.
К промежуточному соединению 37 (520 мг, 1,52 ммоль) в DCM (3,0 мл) добавляли TFA (6 мл) и реакц. см. перемешивали в течение 1 ч при 0°C. Реакц. см. выливали в насыщенный раствор Na2CO3, затем
- 33 039788
OL снова промывали с помощью насыщенного Na2CO3, солевого раствора, высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали с получением промежуточного соединения 38 (273 мг, 73%).
Промежуточное соединение 39.
Промежуточное соединение 6' (полученное из промежуточного соединения 31 согласно тем же преобразованиям, что и для промежуточных соединений 3-6) (50 г, 0,22) добавляли к диметилацеталю N,Nдиметилформамида (110 мл) и смесь нагревали с обратным холодильником в течение 4 дней. Реакционную смесь выпаривали и добавляли дополнительное количество диметилацеталя N,N-диметилформамида и смесь нагревали с обратным холодильником в течение дополнительных 4 ч. Растворитель выпаривали и очищали продукт на силикагеле, элюент: 1% MeOH в DCM, 2%. Очищенные фракции выпаривали с получением промежуточного соединения 39 (60 г, 97%).
Промежуточное соединение 40.
Раствор промежуточного соединения 39 (60 г, 0,21 моль) и гидрохлорид 1H-1,2,4-триазол-5-амина (22,3 г, 0,27 моль) в уксусной кислоте (53 мл) перемешивали с нагреванием с обратным холодильником в течение 1 ч. Добавляли воду и продукт экстрагировали с помощью простого эфира. OL промывали солевым раствором и высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали с получением промежуточного соединения 40 (62 г, 9 6%).
Промежуточное соединение 41.
Промежуточное соединение 40 (500 мг, 1,65 ммоль) перемешивали в DMF (50 мл) при к.т. в потоке N2. Добавляли NaH (60% дисперсия в минеральном масле, 72 мг, 1,8 ммоль) и смесь перемешивали в течение 30 мин Добавляли метилйодид (2,57 мг, 1,8 ммоль) и смесь перемешивали в течение 2 ч при к.т. Реакционную смесь гасили водой и выпаривали. Добавляли воду и продукт экстрагировали с помощью EtOAc. OL промывали солевым раствором, высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали. Полученное очищали с помощью препаративной HPLC на (RP Vydac Denali C18-10 мкм, 200 г, 5 см; подвижная фаза (0,25% раствор NH4HCO3 в воде, МеОН) с получением промежуточного соединения 41 (250 мг, 48%).
Промежуточное соединение 42.
Промежуточное соединение 41 (200 мг, 0,85 ммоль) перемешивали в MeOH (20 мл) и добавляли 6 н. HCl в i-PrOH (23 мл). Смесь перемешивали в течение 1 ч. Реакц. см. выпаривали с получением промежу точного соединения 42 (250 мг, 100%).
Промежуточное соединение 48.
- 34 039788
Стадия 1. Промежуточное соединение 49.
О^О
X JTX
NaH (1,37 г, 34,4 ммоль, 60% дисперсия в минеральном масле) добавляли во взвесь метил-2гидрокси-6-метилизоникотината (2,3 г, 13,76 ммоль) в ACN (150 мл) при 0°C и в атмосфере N2. Обеспечивали достижение реакц. см. к.т. и перемешивали в течение 45 мин. Затем добавляли по каплям 2,2дифтор-2-(фторсульфонил)уксусную кислоту (3,16 г, 17,76 ммоль) в реакционную смесь, которую дополнительно перемешивали при к.т. в течение 15 ч. По истечении этого времени ее гасили насыщенным водным раствором NH4Cl и полученную смесь экстрагировали с помощью DCM (100 мл х3). Объединенные органические экстракты высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии с применением в качестве элюента градиента гептан/EtOAc от 100/0 до 50/50 с получением промежуточного соединения 49 (2,21 г, 73,9%).
Стадия 2. Промежуточное соединение 48.
Водный раствор NaOH (15 мл, 15 ммоль, 1 М) добавляли в раствор промежуточного соединения 49 (2,11 г, 9,72 ммоль) в этаноле (15 мл). Полученную смесь перемешивали в течение 1 ч, затем ее обрабатывали водным раствором HCl (15 мл, 15 ммоль, 1 н.). Образовывался белый осадок и его фильтровали, промывали холодной водой, затем высушивали в вакуумной печи в течение ночи с получением промежуточного соединения 48 (1,75 г, 88,6%).
Промежуточное соединение 50.
0^0 И
Стадия 1. Промежуточное соединение 51.
Концентрированную H2SO4 (0,791 мл, 4,85 ммоль, 1,84 г/мл) добавляли к раствору 2,6-дихлор-3фторизоникотиновой кислоты ([149468-00-8], 5,5 г, 26,19 ммоль) в MeOH (99 мл) и полученную смесь нагревали до 85°C в течение 12 ч. По истечении этого времени добавляли дополнительное количество H2SO4 (0,791 мл, 14,846 ммоль, 1,84 г/мл) и реакц. см. перемешивали при 90°C в течение 24 ч. Реакционную смесь охлаждали до к.т., выпаривали растворитель и добавляли лед к полученному остатку. Образовывался осадок и его фильтровали, промывали ледяной водой и высушивали в вакуумной печи в течение 2 дней с получением промежуточного соединения 51 (4,35 г, 19,4 ммоль) в виде бежевого твердого вещества.
Стадия 2. Промежуточные соединения 52a и 52b.
Промежуточное соединение 52а Промежуточное соединение 52в
Раствор промежуточного соединения 51 (3,95 г, 17,6 ммоль) и триметилбороксина (1,66 мл, 5,82 ммоль, 3,5 М в THF) в безводном 1,4-диоксане (128 мл) дегазировали в течение 15 мин. Последовательно добавляли ацетат палладия(П) (198 мг, 0,88 ммоль), трициклофенилфосфин (494 мг, 1,76 ммоль) и трехосновный фосфат калия (11,23 г, 53,0 ммоль) и полученную смесь дегазировали, затем перемешивали и нагревали при 110°C в течение 18 ч в пробирке для проведения реакций под давлением. Реакц. см. охлаждали до к.т. и выпаривали растворитель in vacuo. Полученный остаток разделяли между водой и EtOAc. Полученную двухфазную смесь разделяли и водный слой экстрагировали с помощью EtOAc (3х). Объединенные органические слои промывали солевым раствором (1 х), высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали растворитель in vacuo. Полученный остаток очищали с помощью колоночной флэшхроматографии на силикагеле с применением в качестве элюента градиента гептан/EtOAc от 100/0 до 90/10 с получением промежуточного соединения 52a (980 мг, 27%) и его региоизомера 52b (460 мг, 12,8%).
- 35 039788
Стадия 3. Промежуточное соединение 50.
К перемешиваемому раствору промежуточного соединения 52a (785 мг, 3,85 ммоль) в THF (10 мл) добавляли раствор LiOH (277 мг, 11,5 ммоль) в воде (10 мл). Реакц. см. перемешивали при к.т. в течение 1,5 ч, затем выпаривали летучие вещества in vacuo. рН полученного водного остатка доводили до ~2 за счет обработки водным раствором HCl (1 М). Образовывался белый осадок и его фильтровали, промывали ледяной водой и высушивали в вакуумной печи в течение 2 дней с получением промежуточного соединения 50 (491 мг, 67%) в виде белого твердого вещества.
Промежуточное соединение 53.
К холодному (0°C) раствору метил-5-фтор-2-метоксиизоникотината (4 г, 21,6 ммоль) в DCM (71 мл) добавляли одной порцией метилтриоксорений(УП) (0,443 г, 1,78 ммоль) с последующим добавлением по каплям пероксида водорода (64,3 мл, 0,735 моль, 35% в воде). Реакц. см. оставляли нагреваться до к.т. и затем нагревали до 35°C. Через 24 ч добавляли дополнительное количество метилтриоксорения(УП) (0,2 г, 0,80 ммоль) и реакц. см. оставляли перемешиваться при 35°C на 2 дня.
Порциями, 3х за 8 ч, добавляли метилтриоксорений(УП) (0,2 г, 0,802 ммоль) и пероксид водорода (30 мл, 0,343 моль, 35% в воде) и реакц. см. перемешивали при 27°C в течение 16 ч. Реакц. см. охлаждали на ледяной бане, затем ее гасили путем добавления порциями диоксида марганца (ВНИМАНИЕ! Сильное выделение газа и тепла) до прекращения выделения газа с получением черной смеси. Полученное объединяли с другой партией реакционной смеси, полученной в результате реакции, начинающейся с 1 г метил-5-фтор-2-метоксиизоникотината. Объединенные реакционные смеси фильтровали через пробку из Celite®, который промывали с помощью DCM. Двухфазный фильтрат разделяли и водную фазу экстрагировали с помощью DCM (3x20 мл). Объединенные органические слои высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали in vacuo. Полученный остаток (4,9 г) очищали с помощью колоночной флэшхроматографии на силикагеле с применением в качестве элюента градиента гептан/EtOAc от 100/0 до 0/100 с получением промежуточного соединения 54 (585 мг).
Стадия 2. Промежуточное соединение 55.
Суспензию промежуточного соединения 54 (585 мг, 2,91 ммоль) в оксихлориде фосфора (4,1 мл, 43,6 ммоль) перемешивали и нагревали до 105°C на масляной бане. Через 1,5 ч растворитель удаляли in vacuo. К полученному остатку добавляли лед (10 мл) и водную смесь экстрагировали с помощью DCM (3x20 мл). Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над MgSO4 и выпаривали in vacuo. Полученный остаток (580 мг) очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле с применением в качестве элюента градиента гептан/DCM от 100/0 до 50/50 с получением промежуточного соединения 55 (522 мг, 72,7%).
Стадия 3. Промежуточное соединение 53.
Раствор LiOH (152 мг мг, 6,35 ммоль) в воде (5,7 мл) добавляли к перемешиваемому раствору промежуточного соединения 55 (522 мг, 2,12 ммоль) в THF (5,7 мл). Реакц. см. перемешивали при к.т. в течение 1,5 ч, затем выпаривали летучие вещества in vacuo. pH полученного водного остатка доводили до ~3 за счет обработки водным раствором HCl (1 М). Образовывался белый осадок и его фильтровали, промывали ледяной водой и высушивали в вакуумной печи с получением промежуточного соединения 53 (172 мг, 39%) в виде белого твердого вещества. Фильтрат выпаривали до сухого состояния при пониженном давлении с получением литиевой соли соединения 53 (366 мг).
- 36 039788
B. Синтез конечных соединений. Соединение 1a и соединение 1b.
Соед. № 1а Соед. № 1Ь
Смесь I-12 (0,27 г, 0,001 моль) и 2,6-диметилизоникотиновой кислоты (0,16 г, 0,001 моль) в DCM (10 мл) обрабатывали с помощью DIPEA (0,69 мл, 0,75 г/мл, 0,004 моль) и HBTU (0,38 г, 0,001 моль). Перемешивание продолжали в течение 16 ч. Реакц. см. разбавляли водой (5 мл), подкисляли с помощью 1 М HCl до рН~3, и слои разделяли, и OL промывали с помощью 1 М NaOH до достижения рН~9, водой, затем высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали in vacuo с получением масла (0,8 г). Очистку проводили с помощью препаративной HPLC (неподвижная фаза: RP XBridge® Prep C18 OBD10 мкм, 50x150 мм, подвижная фаза: 0,25% раствор NH4HCO3 в воде, МеОН) с получением двух фракций. Очистку проводили с применением Prep SFC (неподвижная фаза: Chiralpak® Diacel AD 20x250 мм, подвижная фаза: CO2, EtOH с 0,4% iPrNH2) с получением 4 фракций, две из которых обеспечивали получение соединения 1b (64 мг, 18%) и 1a (70 мг, 19%).
Соединения 2a-3b получали аналогичным путем, что и соединения 1a и 1b, из указанного исходного вещества.
1-12а
Соединение 4.
2-Метил-6-(трифторметил)изоникотиновую кислоту (101 мг, 0,493 ммоль) перемешивали в DCM (20 мл). Добавляли DIPEA (0,34 мл, 0,75 г/мл, 1,97 ммоль) и HBTU (206 мг, 0,542 ммоль), перемешивание продолжали в течение 20 мин при к.т. Добавляли I-13a (150 мг, 0,493 ммоль) и перемешивание продолжали в течение ночи при к.т. Реакц. см. гасили водой, перемешивали 20 мин, затем отделяли OL. Водный слой повторно экстрагировали с помощью 2 х DCM. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, затем разделяли и высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали in vacuo. Данное вещество очищали с помощью флэш-хроматографии на силикагеле с элюированием от 0 до 5% MeOH в DCM с получением неочищенного соединения 4 (120 мг, выход 52,931%). Очистку прово- 37 039788 дили с помощью препаративной HPLC (неподвижная фаза: RP Vydac Denali C18-10 мкм, 200 г, I.D. 5 см., подвижная фаза: 0,25% раствор NH4HCO3 в воде, МеОН) с получением после выпаривания совместно с
MeOH и высушивания в вакуумной печи в течение ночи соединения 4 (74 мг, 36%).
Соединения 5-23 получали подобно соединению 6 с применением энантиомерно чистого промежуточного соединения I-13а.
№ соед. Структура Выход (%)
- 38 039788
- 39 039788
Соединение 24a и соединение 24b.
К перемешанной смеси 2-циклопропил-6-метилпиридин-4-карбоновой кислоты (0,16 г, 0,00075 моль) в DCM (20 мл, 1,33 г/мл, 0,31 моль) добавляли HBTU (0,28 г, 0,00075 моль) и DIPEA (0,54 мл, 0,75 г/мл, 0,0031 моль). После перемешивания смеси в течение 30 мин добавляли одной порцией I-19 (0,2 г, 0,00062 моль). Реакц. см. оставляли перемешиваться на 1 ч и затем добавляли 1 М NaOH (5 мл), слои разделяли и OL промывали водой (10 мл), высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали in vacuo с получением масла. Полученное очищали с помощью флэш-хроматографии с применением ко лонки для флэш-хроматографии Redisep® 24 г с элюированием градиентом от 0 до 5% MeOH в DCM с получением масла, которое подвергали кристаллизации из DIPE (10 мл) с получением белого твердого вещества (0,23 г, выход 83,2%). Очистку проводили с помощью препаративной SFC (неподвижная фаза: Chiralpak® Diacel AD 30x250 мм, подвижная фаза: CO2, iPrOH с 0,2% iPrNH2) с получением двух фракций. Обе фракции переносили в пробирки и высушивали в вакуумной печи (45°C, 16 ч.) с получением таким образом аморфных твердых веществ соед. № 24a (0,11 г, выход 39,7%) и соед. № 24b (0,11 г, выход 38,3%).
Соединения 25a и 25b.
Соед. № 25а Соед. № 25Ь
Бензотиазол-6-карбоновую кислоту (142 мг, 0,792 ммоль) перемешивали в DCM (15 мл), добавляли DIPEA (0,82 мл, 4,8 ммоль) и HBTU (300 мг, 0,792 ммоль). Перемешивание продолжали в течение 0,5 ч при к.т. К раствору добавляли промежуточное соединение 25 (250 мг, 0,792 ммоль) и перемешивание продолжали в течение 2 ч при к.т. Добавляли раствор NaOH (1 н., 1 мл) и перемешивали в течение 5 мин. Продукт фильтровали через фильтр Extrelute и выпаривали фильтрат. Продукт очищали на силикагеле, элюент: DCM^4% MeOH в DCM. Очищенные фракции выпаривали с получением смеси соединений 25a и 25b (340 мг). Полученное очищали с помощью препаративной SFC (неподвижная фаза: Chiralcel® Diacel OD 20x250 мм, подвижная фаза: CO2, EtOH+0,4 iPrNH2) с получением двух продуктов, оба из которых кристаллизовали из Et2O и получали соед. № 25a (121 мг, 35%) и соед. № 25b (128 мг, 37%).
- 40 039788
Соединения 26a и 26b.
о
Соед. № 26а
Соед. № 26b
2,6-Диметилизоникотиновую кислоту (154,845 мг, 1,0 ммоль) перемешивали в DCM (10 мл). Добавляли DIPEA (0,53 мл, 3,1 ммоль) и HBTU (427 мг, 1,1 ммоль), перемешивание продолжали в течение 0,5 ч при к.т. Промежуточное соединение 38 (273 мг, 1,1 ммоль) растворяли в DCM (5 мл) и данную смесь добавляли к раствору, причем перемешивание продолжали в течение 3,5 ч при комнатной температуре. Реакц. см. гасили водой, затем два слоя разделяли и водн. сл. повторно экстрагировали с помощью DCM. OL высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали. Продукт очищали на силикагеле, элюент: DCM/MeOH от 100/0 до 97/3 до 94/6, что обеспечило получение двух пар диастереомеров в виде смеси. Очистку проводили с помощью препаративной SFC (неподвижная фаза: Chiralcel® Diacel OD 20x250 мм, подвижная фаза: CO2, EtOH+0,4 iPrNH2), в результате которой получили два транс-энантиомера. Очистку проводили с помощью препаративной HPLC (неподвижная фаза: RP XBridge Prep C18 ODB - 5 мкм, 30x250 мм, подвижная фаза: 0,25% раствор NH4HCO3 в воде, CH3CN) с получением соединения 26a (26 мг, выход 6,761%) и 26b (20 мг, выход 5,201%).
Соединение 321.
Промежуточное соединение 9b (.2HCl, 1,2 г, 3,527 ммоль), 2-(дифторметил)-6-метил-4-пиридинкарбоновую кислоту (660 мг, 3,527 ммоль), EDCI (1,352 г, 7,053 ммоль) и DIPEA (1,823 г, 14,107 ммоль) в DCM (71,4 мл) перемешивали при к.т. в течение 4 ч. Реакц. см. промывали с помощью 1 н. NaOH, OL высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали. Продукт очищали на силикагеле, элюент MeOH/DCM от 0/100 до 3/97. Очищенные фракции выпаривали и кристаллизовали из DIPE. Кристаллы отфильтровывали и высушивали с получением соединения 321 (920 мг, 60%).
Соединение 333.
К перемешанному раствору промежуточного соединения 25a (100 мг, 0,317 ммоль) в сухом ACN (5 мл) добавляли 3,5-дихлорбензойную кислоту (72,593 мг, 0,38 ммоль). Добавляли TEA (0,22 мл, 1,58 ммоль) с последующим добавлением 1-пропанфосфонового ангидрида ([68957-94-8], 0,28 мл, 0,48 ммоль) и смесь перемешивали при к.т. в течение 3 ч с получением белого осадка в коричневом растворе. Растворитель удаляли in vacuo и неочищенное вещество разделяли между DCM (10 мл) и насыщенным водным раствором NaHCO3 (10 мл). OL промывали насыщенным водным раствором Na2CO3 (1x15 мл), высушивали (MgSO4), фильтровали, удаляли растворитель in vacuo и выпаривали совместно с толуолом (1x20 мл) с получением белого осадка в коричневом растворе, который высушивали в течение ночи с получением коричневых и белых кристаллов. В результате перекристаллизации из Et2O получали грязно-белые кристаллы, которые высушивали в печи в течение ночи в вакуумной печи при 40°C с получением соединения 333 (88 мг, 61%) в виде грязно-белых кристаллов.
В табл. 1 ниже перечислены дополнительные соединения, которые получали по аналогии с вышеприведенными примерами. В случае, если не указана солевая форма, соединение получали в виде свободного основания. № соед. означает номер соединения. Применяемые в синтезе соединений реагенты были либо коммерчески доступными, либо же были получены посредством процедур, известных специа- 41 039788 листу в данной области техники. В колонке с реагентом указаны соединения, полученные по аналогии с соединением 321 (примечание: сочетание с помощью EDCI); указаны соединения, полученные по аналогии с соединением 333 (примечание: ангидрид фосфоновой кислоты).
Таблица 1
№ соед. Структура Получен из Выход (%)
27 CI l\L N О 1 x > N-У I-9b 78
28 hi N О V N-/ 1-25 35
29 Ϊ Iх?1 Λϊ N. .N О X //N N-if 1-25 39
30 w&A N. N О //N N-У 1-25 38
31 i Г?1 ifS X N О ,Ν N-У Рацемический, эндо-изомер 1-25 26
32 F A---S fi N AVAV X N 0 1 n!/ I-9b 55
33 1 ΙίΑ') N. N О Ύ,ν N-i/ 1-19 44
34 F XXX XXN । fj ' π ϊ N. N О 1-19 41
35 JL JL J! A F Tl о I-9b 68
36 Α^θνΦ NL JM О F Ύ ;n N-У I-9b 73
- 42 039788
37 °Fv N-У I-12a 52
38 г “Ч/Х NH2 1 I 1 f| Ί F η 'ί π τ N. JJ О О I-9b 41
39 Cl Ν. Ν Ο CF3 χ ;ν 3 N-V I-9b 21
40 Ν. Ν 0 X > Ν—V I-9b 78
41 F (Αν VAW 14 Ν Ο CF3 U1 I-9b 38
42 CI F ί|^Ν 14 -Ν Ο χ ;.ν N-V I-9b 60
43 CI Ww Ν. .Ν Ο CI χ ;ν Ν-Ι/ I-9b 55
44 L rs* 1 Τ RS Π Ν. -Ν Ο χ ;,ν Ν-ί/ Смесь транс-изомеров 1-28 29
- 43 039788
45 L ru 1 II S* Π О x ;n N-if Чистый транс-энантиомер 1-28 12
46 ΧΦΆ Ν. -Ν Ο X > N-V Чистый транс-энантиомер 1-28 12
47 VeyP I-9b 44
48 АРУЯ * s I-9b 77
49 ϊ ‘Ό i|V F Xu π NL Ν О I-9b 62
50 X X пХ> l\L Ν О o-if X ;.N \ N-if I-9b 68
51 F ------r^N hl -Ν О Cl XN I-9b 31
52 CF3 лсМ Ν. .Ν 0 1 1/ I-9b 6
- 44 039788
53 OMe N. N 0 1 I/ I-9b 17
54 Cl F (YN N. -N OF x ;n N-V I-9b 53
55 Cl f Fy^N N. -N О x > N-У I-9b 63
56 F ρΧ5ίΧΐΐτ — N. -N О x N-Z< I-9b 51
57 F ''-г----S Г a jCn F N. _N O’ Ъм I-9b 61
58 / F -X^s ^-N hL N О YN I-9b 75
59 .+xmY N. 0 I? I-9b 72
60 ΐ P (|Л F II 'л П 1 N. -N О I x ;.n N-V I-9b 64
61 H F ^-N p^-Ox^xJQn F H 'п П \ N. _N О >— Ύ,ν z N-V I-9b 73
- 45 039788
62 Ν. .Ν Ο F 1-25 42
63 л Ч: у— Ζ7 у—ζ I-9b 40
64 Cl F Да’ l | 1 H Л F H 4 Π Ν. Ή О 1/ I-9b 60
65 аДОд^ Ν. Ν θ' 1/ I-9b 49
66 Ν. JM Ο 1/ I-9b 57
67 F -Ο r=^ рД/АЖД^- F Τι 'ί Π Ν. .Ν 0 ъ~ I-9b 63
68 ; ΥΊ ιΠ A^Q^/A Ν. Ν OF χ ;.ν N-V I-9b 48
69 η3~ ΛΆ Ζ—' Η Ц) I-9b 78
70 F ίί*^Ν Α^^ΑνίίΑ Ν- Μ OF N-V I-9b 58
- 46 039788
71 Cl F 'кЗ A 1 JL j< JI kL ΊΐΓ cl Ν. -Ν О F x ;n N-V I-9b 73
72 i Ό iY n! ή ο v kJ1 I-9b 38
73 лЖ Ύ> ° I-9b 39
74 I 1 F Az° Ν. Ν О Ύ/Ν Ν-σ 1-19 30
75 1 1 F A< Ν. .Ν О Ύ ,Ν Ν—V 1-19 32
76 F XXX AZ’ ,Α^^ψίΧ Ν. .Ν Ο Ύ ,ν N-У I-9b 36
77 1 1 Ν. _Ν Ο Λί ,Ν N-У I-9b 42
78 люЖ Ν. Ν Ο 1/ I-9b 58
79 1 Гд, F^Y^r Э1 ° Ν. Ν О 1/ I-9b 74
- 47 039788
80 1 VO ίΓΪ Ν. -Ν Ο χ ;ν Ν-7 I-9b 54
81 I VO Ρϊ Ν. Ν Ο X ,Ν N-V 1-19 30
82 ί fVO Ρϊ Ν. Ν Ο X ,Ν N-V 1-19 31
83 F (Αν JL JL JL F X Ν. Ν Ο X Ζ/Ν N-V I-9b 81
84 Λν\4 hi Ν Ο F ri/ I-9b 30
85 J^QXXjTX Ν. .Ν Ο χ ;.ν Ν-ί/ I-9b 22
86 ^ΑτνΦγφ l\L Ν Ο F Ύ/ 1-25 41
87 /ГК . ΧΝ'^^Ν Ο/^Χ^° \^Ν I-9b 65
-48039788
- 49 039788
98 Ν. JM О ' x > N-У I-9b [859851-00-6] 60
99 Η 'ί Π Ν Ν Ο X > Ν—U I-9b [139022-25-6] 24
100 f Υ> ίί№\ Ν. Ν Ο Χ,,Ν N-V I-9b [1372924-05-4] 53
101 ί 'Ό ρϊ АрАьА^ Ν. _Ν Ο χ ;.ν N-У I-9b [1011264-07-5] 28
102 CI ϊ 'П Λ Ν. Ή 0 χ ,} Ν—У I-9b [1427392-05-9] 61
103 hi Ο nJ^ I-9b [1247451-23-5] 48
104 ϊ Υ^1 Ν. -Ν Ο χ ;ν N-У I-9b [154235-77-5] 21
105 ϊ γ> rQ Ν. Ν Ο ου I-9b [4790-79-8] 60
106 ϊ ίίΥΛ ρΑ,ζ^Αχ^ΑΑν II Ί Π Η Ν- W Ο Χ,Ν N-V I-9b [1670-82-2] 76
- 50 039788
107 ΐ ‘Ό ιίι Ν. 0 Υ/ I-9b [1011264-06-4] 47
108 χο f Υ> А 1 _____ j< JI ><JL F---TiY^------ N. -N О x ;n N-У I-9b [15855-06-8] 49
109 О / “<7 / ° y—z' Vz I-9b [90649-78-8] 21
110 f v> A N. _N О x ;n N-У I-9b [1803602-19-8] 51
111 Cl fatJOvu M -N О Ύ ;n N-У I-9b [51-44-5] 9
112 F F ‘S'---Ί \sSX pa^^LAJ^nh F u'η Π l\L N О x ;n N-if I-9b [23077-43-2] 41
113 14___O^4 ri/ I-9b [1256820-02-6] 42
114 i Y> irO О ' Ν-α I-9b [16136-58-6] 64
- 51 039788
115 ί Χ Ν. .Ν Ο Ύ ,Ν N-V I-9b [120512-59-6] 64
116 F Χ/Χ ΖΜ 1^X7 XX> Ν. Ν Ο Χ/Ν Ν-ί/ I-9b [15112-41-1] 73
117 Χ^χ Ху x^xzx^N'sXXx и 'ί Π Ν. Ν Ο Т/ I-12a [120512-59-6] 27
118 χ χχ χχΑ Ν. Ν Ο I/ I-9b [1248462-73-8] 46
119 ϊ ν> νθ 1 JL Ν AL ΕΊΓί^Γ ' Ίτ s Ν. ^4 Ο X > н-ί/ I-9b [3133-78-6] 67
120 .ΜΧά Ν. Ν 0 I/ I-9b 45
121 F F^O Ν. Ή Ο Ύ )Ν N-if I-9b [1427355-37-0] 65
122 F -------j ff^N Ν. -Ν Ο χ ;ν Ν-Ζ< I-9b [1256790-25-6] 36
123 “Ο y° I-9b [6613-44-1] 38
- 52 039788
124 Ν. _Ν 0 1 χ ;ν Ν—ν I-9b [470702-35-3] 60
125 чо Λ/ύΟυόο Ν. Ο χ ;ν N-# I-9b [15733-83-2] 74
126 F [0 ν! .ν ο Ύ/ I-9b [14282-78-1] 35
127 f |< Π ηΓ ^- Ν. Ο χ > N-# I-9b [13452-14-7] 29
128 4 -π Ο— I-9b [319-60-8] 63
129 ι irV JL ___ JL J! ^<L F^X^r— Ν. Ν Ο Ύ/ I-9b [1427392-05-9] 44
130 Ι ΊΟ jOfcl F0ix^NV^°x Ν. _Ν Ο X //Ν N-V I-9b [85740-98-3] 63
131 луо-Л Ν. Ο X //Ν N-V I-9b [78621-81-5] 46
132 F ЛЦС1Д Ν. .Ν Ο χ ;ν N-V I-9b [1211590-99-6] 45
- 53 039788
133 1 ί ίίΎοϊ JL J. JL —’F Ν. Ο X ΛΝ Ν—У I-9b [162401-65-2] 61
134 1 F --ΥΥ Ν. Ν Ο X //Ν Ν—U I-9b [884494-85-3] 59
135 -ν№% I-9b 53
136 Ν. Л Ο 1/ I-9b [56311-39-8] 53
137 ο X ,γ Ν—V I-9b 4, 6- Диме тилпиридин— 2-карбоновая кислота [18088-10-3] 34
138 f< Л 0 χ> Ν-7 1-19 Бензофуран-5карбоновая кислота [90721-27-0] 25 (сочетание 63%, 40% SFC)
139 ΛΥΨ» Ν. .Ν. 0 χ> Ν—U 1-9Ь 1-Метил-1Нпиразол-3карбоновая кислота [25016-20-0] 67
-54039788
140 И JL 0 1-25 3- Метилбензофуран2-карбонилхлорид [2256-86-2] 36
141 МЛ Ύ> 0 N-£f I-9b 2, 6- Диме тилпиримидин -4-карбоновая кислота [54198-74-2] 14
142 •УМ» Ν..Ν о Ъ 1-9Ь З-Аминопиридин4-карбоновая кислота [7529-20-6] 59
143 0 1 . HCl 1-9Ь 2, 6- Диметилникотинов ая кислота [5860-71-9] 44
144 Λίν^/Χν vs ° Ν-ί< 1-9Ь 5- (третБутил) изоксазол3-карбоновая кислота [90607-21-9] 52
145 ν! ή о 1 Ύ/ 1-9Ь 4-Метил-2Н-1,3бензодиоксол-5карбоновая кислота [162506-58-3] 60
- 55 039788
146 Ж?? N. JN О Ύ/ I-9b 4Гидроксихинолин3-карбоновая кислота [34785-11-0] 19
147 АкДгк n! ч о ci I-9b З-Хлор-4метилтиофен-2карбоновая кислота [229342-86-3] 52
148 кк^к-к' N. N OFF 1/ 1-9Ь 2-Фтор-З(трифторметил)бе нзойная кислота [115029-22-6] 63
149 n! n о f В > N-^ 1-9Ь 2, 6Дифторбензойная кислота [385-00-2] 54
150 дкДД Ν. N 0 NH2 1/ 1-9Ь 2- Аминоникотиповая кислота [5345-47-1] 67
151 жк N. J* 0 1 Ύ/ 1-9Ь 2-Метил-1,6нафтиридин-3карбоновая кислота [387350-63-2] 75
- 56 039788
152 I-9b 3- Метилизоксазол- 5-карбоновая кислота [4857-42-5] 63
153 I-9b 5-Бромпиридин-2карбоновая кислота [30766-11-1] 45
154 .Cl ιYOYY Yrr 1/ 1-9Ь 5-Хлорпиридин-2карбоновая кислота [36070-80-1] 65
155 ι ίΓ^ΐ XrvXrV Ν. .Ν 0 F X > N-^y 1-9Ь З-Фтор-4пиридинкарбонова я кислота [131307-35-2] 60
156 гА^О<у' Ν. Ν 0 1 Ύ> Ν—U 1-9Ь 4-Метилоксазол5-карбоновая кислота [2510-32-9] 65
157 Ν. .Ν 0 X > N-V 1-9Ь 5- Метилизоксазол3-карбоновая кислота [3405-77-4] 65
- 57 039788
158 nh2 зДОД Ν. Λ 0 Ν-^ I-9b 2-Аминотиазол-4карбоновая кислота [112539-08-9] 68
159 аДДД Ύ/ I-9b 2-Хлор-Зметилизоникотино вая кислота [133928-73-1] 54
160 ДАД 1-9Ь 4- Метилизоксазол- 5-карбоновая кислота [261350-46-3] 52
161 F 'Ύ 1 1Д JM Ο F—V X/ ' 1-9Ь 2-Метил-5(трифторметил)ок сазол-4карбоновая кислота [18955-88-9] 68
162 4> 0 Ν—V 1-9Ь 6-Аминопиридин2-карбоновая кислота [23628-31-1] 53
163 N .vA Ν. N 0 X/ 1-9Ь 4-Цианопиридин2-карбоновая кислота [640296-19-1] 67
- 58 039788
164 Ν. 0 Ъ I-9b 1-Метил-1Нимидазол-5карбоновая кислота [41806-40-0] 69
165 AbJ NL -N 0 0. Ύ/ I-9b 5-трет-Бутил-2метоксибензойная кислота [73469-54-2] 61
166 AjOySJ hi n о VN 1-9Ь 2Н,ЗНПиразоло[3,2В] [1,3]оксазол6-карбоновая кислота [1239722-75-8] 62
167 •AAA® Ь<>1 0 Ъ 1-9Ь 6- (Трифторметил)ни котиковая кислота [231291-22-8] 48
168 I Y> rrOH N. N О 1-9Ь [350-29-8] 25
169 nL ή о f nJ 1-9Ь [1737-36-6] 67
170 %_____ Ck. N. N О 1/ 1-9Ь [99058-34-1] 69
- 59 039788
171 о woA N. N О N—У I-9b [946-13-4] 40
172 \ О ϊ rO 1 JL n J4 F WY ' A Ύ,Ν N-У I-9b [59908-54-2] 58
173 .N.___,O H ACOuCC X Xv о x ;n N-У I-9b [54127-63-8] 31
174 F --XX i I'M F Η 'ί Π χ N О Ъ I-9b [180283-66-3] 64
175 χ υύ ха hL -N О ' N-/ I-9b [872091-00-4] 59
176 ί Ά FAiY^NYrjN χ _N О О-У x ;.n N—У I-9b [208772-24-1] 59
177 / F -------S ^-N F η Ύ n χ -N О Ύ ;n N-У I-9b [5952-92-1] 75
178 ϊ 'ϊ 1 ίΑ FA^r^N ΎΎγ χ JSI 0 №/ Ύ/ I-9b [1187732-69-9] 66
179 ρΛτΧθΧΧ χ -N Ο X-Z Ύ,Ν N-У I-9b [55365-04-3] 68
- 60 039788
180 Cl F Υ**4) s-^ nL _n о Y/ I-9b [24065-33-6] 66
181 F 4/\ NH2 Ν. hl О I-9b [3167-49-5] 63
182 лесу® N. h| О 1/ I-9b [54045-76-0] 65
183 Ϊ П П F Ίι^Γ^ ПТ? N. hl О N=/ x z> N-У I-9b [208772-23-0] 48
184 UM· N. J\l 0 ' Ъм I-9b [17153-20-7] 67
185 F Y> V\ , YU/F1 Ν. Ν О 1/ I-9b [126909-38-4] 56
186 ЛАПдХ Ν. hl О χ ;.ν N-У I-9b [51446-31-2] 24
187 F ΥΧ Ν'°\ ΑρΑυΑ) Ν. .Ν Ο ^==/ χ ;.ν Ν—У I-9b [28691-47-6] 58
188 аАС%ХХ?- Ν. Ο X № n-dj I-9b [90322-32-0] 58
189 ι I-9b [1017778-60-7] 26
- 61 039788
190 F r Η 1 If =$N Ν. Λ О Ύ > N-V I-9b [327056-74-6] 62
191 Ν. .Ν Ο F I-9b 60
192 FyF hi. _ν о Ύ/ I-9b [886496-49-7] 21
193 ЛХОиССХ N. J4 О ЪР I-9b [1214383-15-9] 57
194 f XXX kwCMX< Μ Ν Ο F M<N I-9b [67515-55-3] 25
195 F XXX ZX^F A/COjCX Ν. Ν О x ,> N-У I-9b [82846-18-2] 76
196 1 f 'Mb /М i Γ i ii xr γ^ΧΧΧ-Ζ*χΜ^^Χ£·ν F η n X θ //N N-y I-9b [26218-80-4] 45
197 N РЛбХ+'>Л^ Ν. Ν О Ύ ,N N-V I-9b [1877-72-1] 22
198 F --------> ^NZ pA^JQXQn F Η π Π \ Ν. N 0 ' Y/ .HCl I-9b [113100-61-1] 49
- 62 039788
199 N\^N 1-42 8,7
200 F V2 0 / *s 1 Vk L N—\ \—F 1-30 54
201 F 4¼ 1-30 30
202 Vco 1-42 31
203 F \—F N=\ 1 N—/ N' Si o' I-30a 87
204 F \--F N^=( f Ν—X у--^mz Vs \ О I-30b 89
- 63 039788
205 1-12 22
206 1-ЗОЬ 60
207 ддд. \ X*s 1-ЗОЬ 40
208 Ν О Ц %--N F ТДД 'Х/ ν-\=/ 'F \ Xs 1-ЗОЬ 75
209 л.о 1 Лж F 1-ЗОЬ 57
210 F 1 ° Xik. X 1 Д Nk?r ХУ О'- 1-ЗОЬ 65
211 ДД 1-ЗОЬ 25
- 64 039788
212 F\ 7 1 °v\ 7 <Ν N^N^7*S 7 \=Ν * 1-12 14
213 Ν π —Ν F W \\^ )=/ F θ 7----< \\ / R\ у—Ν S/— -Λ S I-9a 61
214 Ν ίΐ —N F \W )=/ F °w Л\ V—N s\— I-9a 55
215 n .К = 'n^n JL .F L У f соЛ0 F I-9a 54
216 N >=N £>a VnH \=/ -Щ У \ 7— O '----' I-9a 29
-65 039788
- 66 039788
221 X Μ / ω\__/ \ \ζ_/ν/ °^\ / / 41 / ° 41 I-9a 58
222 Ν μ —ν f N-N /=^ F Ο , k \—Ν r\ Ν=/ ' ' Xu F I-9b 24
223 Ν ί| 'Ί---Ν F ν-ν ν_ζ /=/ F ο ,—4 χ—Ν r\ Μ F X .1,30 HC1 . Η2Ο I-9b 37
224 Ν. 0 F Ύ ;ν n~U I-12a 55
225 a' OCM? Ν. JM OF Ύ ;n N-У I-12a 58
- 67 039788
226 Ν (| %—N F W \\^ й ’ \—N \=O I-9b 14
227 N . 4N^^N 0iMr jCj ° \=N I-9b 49
228 /Tu N Jv , 4N/^'N Qvy Гд0 Vj I-9b 50
229 N ίι —N F n—n \V^ ° у—4 Ч у—N r\ О I-9b 83
230 h'r 1-25 32
- 68 039788
231 n d,vv jAj ° ΗΟ®γ II N I-9b 29
232 N 0 J--N F N-/ -ζ /=/ F О у—Zs у—N ) / \ /R iJ \l I-9b 65
233 N J--N F N^/ -ζ A \--N y=° N--/ C ,/nh2 I-9b 57
234 N ii A—N F nJ/ \\^ J '--N \=° Cy I-9b 63
-69039788
235 Ν Π --N F N-/ --ζ Ь ' '---N \=O {УС| N— I-9b 62
236 N 0 --N F N-/ Ь-( 8’ ' '---N \=° Ζ N Д HO I-9b 2
237 N f| Ь—N F к/ \\Д й ’ '—Ν \=Ο Ν=Ζ 4 ж ν—Ν I-9b 54
238 Μ 0 --Ν F '---Ν /=° Ν=\ I-9b 49
- 70 039788
239 Ν Ц --N F Υ/ \W Ϋ ' \--Ν 2=° Ν---' F I-9b 45
240 .Ν ίι 5—Ν F NY Η ’ >—Ν \=0 Ν=/ I-9b 59
241 “Π Ο I-9b 66
242 ζΎ>Ί ο ο I-9b 67
- 71 039788
243 Ν ίι 2—N F \=° А о I-9b 44
244 N (1 2—N F N-/ У-( )=/ F о /--V У—N r\ ^=n I-9b 53
245 /Г8 N 32 . 4N^^N ό·^' £2° F I-9b 62
246 N f| —N F n-V /=/ F ---ν 0 у--- \—0 у—N R>...... tr I-9b 58
247 N 32 . tW F О =4° I-9b 53
- 72 039788
248 N Jk 4N'/X'N Ж ГД0 N Д rr I-9b 63
249 /П N Jk c%y N^ky^^O [1 J I-9b 53
250 N 0 --N F N-N W % ’ '---N /=O F<JN I-9b 66
251 /Tu N >k , 4N^^N Дг^0 I-9b 70
- 73 039788
- 74 039788
257 ν όΛν Μ I-9b 59
258 Μϊ фру ~4~€/ι ° 1 Ο-Ν I-9b 53
259 >ΤΚ Ν Jy ό^· / MqAc I-9b 63
260 Ν ίι —Ν F Ν-V \\^ /=/ F ° у--- \)^Νννκ Ν I-9b 40
261 /Τϊ Ν 3κ , ΧΝ'Χ^Ν ό^' 0х ^ьг Хн2 I-9b 64
- 75 039788
262 /О Ν Jk όΑΥ γΟ° ^N-^^F I-9b 68
263 Ν ίι —Ν F W \\^ /=/ F ο ,—φ \J0nvJ4 /А F\/ zu F I-9b 27
264 Ν (ι —Ν F Ν-/ \\^/ /=/ F О >----(s хО I-9b 58
265 N η 9—N F N-V /=/ F 0 /—V y—N >...... / \ /R n^O О \ I-9b 62
- 76 039788
266 N к Ν АД] ° Ν. А I-9b 72
267 Ν Ν 0 X? I-9b 57
268 Ν А 0:VV Cl Ι\Γ Ν AL 4α I-9b 61
269 ν ίι —Ν F W Α-ζ \ /=/ F )-----i's /R \ '---Ν /=° АЙД-F Ν—J I-9b 61
270 / \ Ο F qA' N=/ Cl I-9b 45
- 77 039788
- 78 039788
277 рАг%РМА Ν. _Ν Ο F Χ,Ν N-У I-19a 71
278 hL -Ν 0 F ν ύ ;ν Ν—V I-9b 14
279 υαΑ Ν. .Ν Ο F ύ Ν—V I-9b 11
280 αυΑα Ν. .Ν 0 0. ν χ ζ> Ν—V I-9b 3
281 f fT^N F JL JL χ JL AL JL F^ll^l^X —F l\L N О y ;.n N-V I-9b 30
282 F ^AA rf^N Fx A^l4”^ Yl ° l\L J4 О F « //N N-V I-9b 24
283 NX> ° f^f N-V I-12a 48
- 79 039788
- 80 039788
290 fYvCy1^ |\L N 0 1-2 5a 40 .
291 n! X 0 Ν—V I-25a 65
292 hL N 0 Ъм 1-2 5a 59
293 Ν. .N 0 Ν—V 1-2 5a 65
294 |\L .N 0 F X > N—'J 1-2 5a 60
295 hL .Ν О Ύ/ 1-2 5a 94
-81 039788
296 Ϋ ° 1-2 5a 39
297 Ν. Ν o X ,/ N—U I-25a 61
298 N. J4 0 1 Ύ/ 1-2 5a 56
299 N. .N 0 Ύ> N—U 1-2 5a 54
300 ν' A 0 Ν—V 1-2 5a 22
301 OX fAY^Y^0'' Ν. .Ν О X/ 1-2 5a 60
- 82 039788
302 KL JM 0 Ъм 1-2 5a 61
303 дА/Д' N. .N О N—U 1-2 5a 41
304 λΥ ν' A 0 N-У 1-2 5a 56
305 ν' h 0 о-У Ύ> \ N-У 1-2 5a 64
306 N. J+ ° Ύ/ 1-2 5a 68
307 aW NL -N О Ύ> N—У I-25a 55
- 83 039788
308 Μ Ν 0 Ν—U 1-2 5а 48
309 Ν. .Ν 0 N-U 1-2 5а 65
310 CI ΡΑΊΊ^ζψΟ0 Ν. .Ν 0 Ν—V 1-2 5а 52
311 va-co 14 Ν 0 Ν—V 1-2 5а 62
312 VA-OA Ύ> ” 1-2 5а 63
313 l\L Ν 0 N-U 1-2 5а 63
314 X F Μ. .Ν Ο Υ),Ν Ν—U 1-2 5а 64
- 84 039788
315 N—U 1-2 5а 63
316 N—U 1-2 5а 100
317 AqAV6 N—U 1-2 5а 61
318 Ύ> Ν—U 1-2 5а 86
319 ν' A 0 Ύ> Ν-ΖΖ 1-2 5а 57
320 ΑοΑνΑ Ύ> Ν—U 1-2 5а 50
- 85 039788
321 2=0 у—ζ \щ / )—χ ζ. / ω\ / 7—Ζ I-9b (Примечание : сочетание с помощью EDCI) 60
322 ΜΙ ч F 1 ίΐ Ί 1 si i 1J Ν. Ν 0 ύ> Ν—V I-9b (Примечание: сочетание с помощью EDCI) 69
323 F Ύ> νΧζ 1 si ! JU Д Ν. .Ν 0 Ύ> 1-9Ь (Примечание: сочетание с помощью EDCI) 59
324 ΐ sPI ί|Ί 1 SI Ν II Ν π Ν. .Ν 0 Ύ> Ν-Ζ< I-9b (Примечание: сочетание с помощью EDCI) 79
325 χί L ζ—ч « 1^. / \ ω ? ζ /“Κ / π\ ζ—' °Ж I-9b (Примечание: сочетание с помощью EDCI) 62
- 86 039788
326 F р > ί| ίΓ V NL .N 0 Ύ> Ν—V I-9b (Примечание : сочетание с помощью EDCI) 66
327 N. N О Ύ/ I-9b (Примечание : сочетание с помощью EDCI) 73
328 : О 1 si A jLn— F i/ 1-9Ь (Примечание: сочетание с помощью EDCI) 56
329 о J=o У—-z. 4a V- zz I-9b (Примечание: сочетание с помощью EDCI) 71
331 /¼ /К f η <= X Ji J Π l\L .N 0 Ύ> N—U I-9b (Примечание: сочетание с помощью EDCI) 66
- 87 039788
332 F mi Ч f Yr η if Μ X Ji J NL Ν О dq Ν—V I-9b 32
333 Cl f/yv^V^01 Ν. Ν О Ύ/ 1-2 5a (Примечание : ангидрид фосфоновой кислоты) 61
334 Cl дЦ&Д Ν. Ν О Y /Г Ν—V I-9b (Примечание : ангидрид фосфоновой кислоты) 66
335 ___yA^N ЛчФ-М N. Xv ° X/ 1-2 5а 71
336 луСмх hL N 0 Y//N Ν—V 1-2 5а (Примечание: ангидрид фосфоновой кислоты) 52
337 F^vCM^ Ύ> ° 1-2 5а 62
- 88 039788
338 AY |\L -Ν 0 Ύ /Ζ Ν Ν—U 1-2 5а 33
339 Κ Ν 0 1-2 5а 69
340 W4, Ν. Ν 0 Ύ ν Ν—У 1-2 5а 38
341 F Ν. Ν 0 X № Ν—У 1-2 5а 72
342 F F^^F К Ν 0 X if Ν—У 1-2 5а 42
343 К AL 0 х> N—У 1-2 5а (Примечание: ангидрид фосфоновой кислоты) 58
- 89 039788
344 Ν. .Ν 0 1-2 5а 64
345 0 1-2 5а (Примечание : ангидрид фосфоновой кислоты) 42
346 Ν. .Ν. 0 Ύ/ 1-2 5а 41
347 Ν. Ν 0 Ύ> Ν—U 1-25а 52
348 рУ^СМ^ Ν. Ν 0 1/ 1-2 5а 51
349 Ν JM 0 Ύ/ 1-25 46
350 Ν. Ν 0 ν > Ν—U 1-2 5а 55
- 90 039788
351 Ν. .Ν 0 1-2 5a
352 F F'^O N. N 0 v Ν—V 1-2 5a 67
353 N. .N 0 Ύ> Ν—V 1-2 5a 66
354 дДО-Д- N N 0 Ύ 3 Ν—V 1-2 5a 59
355 N. .N 0 Ύ> N—U 1-2 5a (Примечание : ангидрид фосфоновой кислоты) 34
356 ЛАД N. Л 0 1/ 1-2 5а 78
357 A^CvCQ ν' X 0 F Ъы 1-2 5а 65
- 91 039788
358 N. .N 0 ' 1-2 5a 17
359 AaCv^f N. M О 1-2 5a 58
360 sx N. .N О Ύ я N—U 1-2 5a 43
361 VAX hL N О I-9b 15
362 XaCvY l\L N 0 Ύ> N—U 1-2 5a 47
363 KL Al 0 X > N—У 1-2 5a 49
- 92 039788
364 Ν. Ν 0 1-2 5a 68
365 KL Ν 0 Ъм 1-2 5a 13
366 KL Ν 0 Ъм 1-2 5a 59
367 Ν. ΚΙ О 1/ 1-2 5a 68
368 s-^ hL Ν О V ff N—U 1-2 5a 50
369 Cl l\L N 0 V ,γ N—U 1-2 5a 26
- 93 039788
370 К N 0 Ύ/ 1-2 5а 60
371 Ν. Ν 0 Ύ> N-V 1-2 5а 34
372 Ατν^Μ^ Ν. Ν 0 Ν—U I-25a 37
373 К Ν Ο X ρ Ν—V 1-2 5a 63
374 ρΑϊ^Φ'ι/Χ Ν. .Ν Ο Ύ> Ν—V 1-2 5a 53
375 Ν. .Ν 0 Ύ> Ν—ν 1-2 5a 71
376 Κ Ν 0 Ύ> Ν—ν I-25a 57
- 94 039788
377 Κ X О Ъм 1-25 41
378 М JM 0 Ъм 1-25 58
379 / Η Ί s П Ν. Л О N—U 1-2 5а 63
380 ДАД К Ν О N—U 1-2 5а 68
381 К Ν О Ύ> N—V 1-2 5а 59
382 l\L Л О 1/ 1-2 5а 54
383 ν' А О Ъ 1-25а 55
- 95 039788
384 -J \ ч. г—ζ' /1 \ω ζ ω yr 1-2 5a 22
385 Ν. Ν О N-У 1-2 5a 72
403 / N__ f (7^Ί3 ίι χΓ fZI|Ns nJr Ν. Ν О F Ύ if N—U 1-2 5a 57,7
404 N. Λ ° Ύ if n-Lf 1-2 5a 67
405 .L N-- F ίΐΎ F li^is N—U 1-25 68, 7
406 0 1-25 71,5
Превращения и синтез конечных соединении с помощью других путей Соединение 386 и соединение 282/387.
Соед. № 386 Соед. № 387/282
Стадия 1. Соединение 388 и соединение 389.
CI
Соед. № 388
К раствору соединения 71 (654 мг, 1,42 ммоль) в МеОН (13 мл) добавляли NaOMe (10,5 мл, 56,7 ммоль, 30% в МеОН) и полученную смесь перемешивали при 0°С в течение 1 ч. Реакц. см. гасили насыщенным водным раствором NH4C1. Летучие вещества удаляли под вакуумом и оставшийся водный остаток разделяли с помощью DCM. Водный слой экстрагировали с помощью DCM (2x10 мл). Объединенные органические слои высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали in vacuo с получением смеси соедине-96039788 ний 388 и 389 в виде белой пены (656 мг), которую применяли как таковую на следующей стадии.
Стадия 2. Соединение 386 и соединение 282/387.
Смесь из предыдущей стадии растворяли в 1,4-диоксане (10 мл), полученный раствор помещали в пробирку для проведения реакций с обработкой микроволновым излучением и дегазировали в течение 5 мин. Затем добавляли K2CO3 (668 мг, 4,83 ммоль) с последующим добавлением триметилбороксина (0,789 мл, 2,76 ммоль, 3,5 М в THF) и Pd(PPh3)4 (159,5 мг, 0,14 ммоль). Реакционную смесь затем нагревали при 100°C в течение 2,5 ч под действием микроволнового излучения. Добавляли дополнительное количество триметилбороксина (0,394 мл, 1,38 ммоль, 3,5 М в THF) и реакционную смесь нагревали при 100°C под действием микроволнового излучения еще в течение часа. Выпаривали растворитель in vacuo и полученный остаток растворяли в смеси DCM/вода 1:1 (40 мл). Двухфазную смесь разделяли и водную фазу экстрагировали с помощью DCM (2x10 мл). Объединенные органические слои высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток (843 мг) очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с применением в качестве элюента градиента DCM/MeOH от 100/0 до 97/3. Собирали фракции, соответствующие указанным в заголовке соединениям. Одну фракцию перекристаллизовывали из DIPE с получением соединения 282/387 (146 мг, 24%). Вторую фракцию очищали с помощью препаративной HPLC с применением в качестве неподвижной фазы: RP XBridge Prep C18 OBD-10 мкм, 30x150 мм, и в качестве подвижной фазы: 0,25% раствор NH4HCO3 в воде, CH3CN с получением соединения 386 в виде белого твердого вещества (82 мг, 13,8%).
Соединение 390 и соединение 391.
Соед. № 390 Соед. № 391
В пробирку для проведения реакций под давлением загружали соединение 271 (150 мг, 0,37 ммоль), циклопропилбороновую кислоту (127,2 мг, 1,48 ммоль) и толуол (3,0 мл) и полученное дегазировали в течение 15 мин перед последовательным добавлением ацетата палладия(П) (4,1 мг, 0,0185 ммоль), трициклогексилфосфина (10,4 мг, 0,037 ммоль), дистиллированной воды (0,734 мл, 40,65 ммоль) и трехосновного фосфата калия (235,7 мг, 1,11 ммоль). Пробирку закупоривали, реакц. см. помещали на масляную баню с температурой 100°C и перемешивали в течение 16 ч. Полученный раствор охлаждали до к.т. и фильтровали через подушку из Celite®, которую промывали толуолом и EtOAc. Фильтрат выпаривали до сухого состояния при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в EtOAc и промывали водой и солевым раствором, затем высушивали над MgSO4, фильтровали и выпаривали in vacuo. Полученный остаток (155 мг) очищали с помощью препаративной HPLC с применением в качестве неподвижной фазы: RP XBridge Prep C18 OBD-10 мкм, 30x150 мм, и в качестве подвижной фазы: 0,5% раствор NH4Ac в воде+10% CH3CN, МеОН, с получением соединения 390 (18 мг, 11,7%) и соединения 391 (бб мг, 43,4%) после растирания с гептаном.
Соединение 392.
Стадия 1. Соединение 393.
CI
К раствору соединения 71 (436 мг, 0,95 ммоль) в DMF (7,35 мл) добавляли фторид цезия (577 мг, 3,8 ммоль) и полученную смесь перемешивали и дегазировали в течение 15 мин. Добавляли циклопропанол (0,072 мл, 1,14 ммоль) и реакц. см. нагревали при 110°C в течение 2 ч под действием микроволнового излучения. Растворитель удаляли in vacuo, затем полученный остаток растворяли в смеси DCM/вода 1: 1
- 97 039788 (20 мл). Полученную двухфазную смесь разделяли, затем экстрагировали водный слой с помощью DCM (2x10 мл). Объединенные органические слои высушивали над MgSO4, фильтровали и удаляли растворитель при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью колоночной флэшхроматографии на силикагеле, с применением в качестве элюента градиента DCM/MeOH от 100/0 до 99/1 с получением соединения 393 (308 мг) в виде вещества с примесями, которое применяли как таковое на следующей стадии.
Стадия 2. Соединение 392.
Раствор соединения 393 (30 8 мг, 0,64 ммоль) в 1,4-диоксане (4,6 мл) дегазировали в течение 15 мин, затем последовательно добавляли K2CO3 (310 мг, 2,24 ммоль), триметилбороксин (0,550 мл, 1,92 ммоль, 3,5 М в THF) и Pd(PPh3)4 (74,015 мг, 0,064 ммоль) и полученную смесь нагревали при 100°C в течение 2,5 ч в пробирке для проведения реакций под давлением. Растворитель удаляли in vacuo и полученный остаток разделяли между DCM (10 мл) и водой (10 мл). Полученную двухфазную смесь разделяли и экстрагировали водный слой с помощью DCM (3x10 мл). Объединенные органические слои высушивали над MgSO4, фильтровали и удаляли растворитель при пониженном давлении. Полученный остаток (340 мг) очищали с помощью препаративной HPLC с применением в качестве неподвижной фазы: RP Vydac® Denali® C18-10 мкм, 200 г, I.D. 5 см, и в качестве подвижной фазы: МеОН, с получением соединения 392 (55 мг, 18,6%) в виде белых кристаллов после перекристаллизации из DIPE.
Соединение 394.
Стадия 1. Соединение 395.
К перемешанной суспензии промежуточного соединения 9-b (750 мг, 2,47 ммоль) в DCM (20 мл) последовательно добавляли EDCI (993 мг, 5,2 ммоль) и 6-хлор-3-фтор-2-метилизоникотиновую кислоту (промежуточное соединение 50, 492 мг, 2,6 ммоль). Затем к смеси добавляли DIPEA (1,78 мл, 10,4 ммоль) и полученный желтый раствор перемешивали при к.т. в течение 5 ч. Реакц. см. гасили водным раствором NaOH (20 мл, 1 М). Водный слой экстрагировали с помощью DCM (3x10 мл) и объединенные органические слои высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали in vacuo. Полученный остаток (1,5 г) очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с применением в качестве элюента градиента DCM/MeOH от 100/0 до 99/1 с получением соединения 395 (720 мг, 62%) в виде белой пены.
Стадия 2. Промежуточное соединение 56.
Йодтриметилсилан (0,065 мл, 0,46 ммоль) добавляли к раствору соединения 395 (200 мг, 0,46 ммоль) в пропионитриле (0,8 мл) в атмосфере азота. Затем добавляли йодид натрия (205 мг, 1,37 ммоль) и полученный раствор нагревали до 80°C. Через 5 ч результаты анализа LCMS показали лишь 15% превращения, поэтому добавляли еще одну порцию йодтриметилсилана (0,065 мл, 0,456 ммоль) и реакц. см. перемешивали при 80°C в течение 22 ч. По истечении этого времени добавляли еще одну порцию йодтриметилсилана (0,065 мл, 0,456 ммоль) и йодида натрия (205 мг, 1,37 ммоль) и реакц. см. перемешивали в течение 12 ч. Удаляли растворитель in vacuo, затем полученный остаток разделяли между водой и DCM. Полученную двухфазную смесь разделяли и водный слой экстрагировали с помощью DCM (3x20 мл). Объединенные органические слои высушивали над MgSO4, фильтровали и растворитель удаляли in vacuo. Полученный остаток (1,5 г) очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле
- 98 039788 с применением в качестве элюента градиента DCM/MeOH от 100/0 до 97,5/2,5 с получением промежуточного соединения 56 (162 мг) в виде вещества с примесями, применяемого как таковое на следующей стадии.
Стадия 3. Соединение 394.
Метил-2,2-дифтор-2-(фторсульфонил)ацетат (0,192 мл, 1,51 ммоль) добавляли к смеси промежуточного соединения 56 (160 мг, 0,3 ммоль) и йодида меди (75 мг, 0,39 ммоль) в безводном DMF (0,958 мл) в пробирке для проведения реакций под давлением. Полученную смесь нагревали до 80°C в течение 2 ч на масляной бане. Реакц. см. охлаждали до к.т., затем гасили насыщенным водным раствором NH4Cl. Полученную смесь экстрагировали с помощью EtOAc (3x15 мл). Объединенные органические слои высушивали над MgSO4, фильтровали и растворитель удаляли in vacuo. Полученный остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии с применением в качестве элюента градиента гептан/EtOAc от 100/0 до 60/40 с получением соединения 394 (17,5 мг, 12%).
Соединение 396.
Стадия 1. Соединение 397.
К перемешанной суспензии промежуточного соединения 9-b (740,1 мг, 2,44 ммоль) в DCM (18,5 мл) добавляли EDCI (934 мг, 4,87 ммоль) и 2-хлор-3-фтор-6-метилизоникотиновую кислоту (485 мг, 2,56 ммоль). Добавляли DIPEA (1,68 мл, 9,74 ммоль) и реакц. см. перемешивали в течение 2 ч при к.т. Реакц. см. гасили водным раствором NaOH (30 мл, 1 М). Водный слой экстрагировали с помощью DCM (3x15 мл) и объединенные органические слои высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали in vacuo. Полученный остаток (1,5 г) очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с применением в качестве элюента градиента DCM/MeOH от 100/0 до 99/1 с получением соединения 397 (854 мг, 80%) в виде белого порошка.
Стадия 2. Промежуточное соединение 57.
Йодтриметилсилан (0,26 мл, 1,82 ммоль) добавляли к раствору соединения 397 (400 мг, 0,91 ммоль) в пропионитриле (1,6 мл) в атмосфере азота. Затем добавляли йодид натрия (410 мг, 2,73 ммоль) и полученный раствор нагревали до 80°C в течение 1,5 ч. Удаляли растворитель in vacuo, затем полученный остаток разделяли между водой и EtOAc. Полученную двухфазную смесь разделяли и водный слой экстрагировали с помощью EtOAc (3x20 мл). Объединенные органические слои высушивали над MgSO4, фильтровали и удаляли растворитель при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с применением в качестве элюента градиента DCM/MeOH от 100/0 до 97,5/2,5 с получением промежуточного соединения 57 (197 мг) в виде вещества с примесями, которое применяли как таковое на следующей стадии.
Стадия 3. Соединение 396.
К раствору промежуточного соединения 57 (197 мг, 0,37 ммоль) в безводном DMF (1,18 мл) добавляли йодид меди (92 мг, 0,48 ммоль) и полученную смесь дегазировали с помощью азота в течение 10 мин. Затем добавляли метил-2,2-дифтор-2-(фторсульфонил)ацетат (0,236 мл, 1,86 ммоль) и реакц. см. перемешивали и нагревали при 80°C в течение 2 ч, по истечении которых ее оставляли охлаждаться до к.т. в течение ночи. Реакц. см. гасили насыщенным водным раствором NH4Cl. Полученную смесь экстрагировали с помощью EtOAc (6x20 мл). Объединенные органические слои высушивали над MgSO4, фильтровали и растворитель удаляли in vacuo. Полученный остаток (550 мг) очищали с помощью препаратив- 99 039788 ной HPLC с применением в качестве неподвижной фазы: RP XBridge Prep C18 OBD-10 мкм, 50x150 мм, и в качестве подвижной фазы: CH3CN, с получением соединения 396 (7,4 мг, 4%).
Соединение 398.
Стадия 1. Соединение 399.
К перемешанному раствору промежуточного соединения 9-b (242 мг, 0,8 ммоль) и 2-хлор-3-фтор-6метоксиизоникотиновой кислоты (промежуточного соединения 53, 172 мг, 0,84 ммоль) в DCM (6,35 мл) добавляли EDCI (320,5 мг, 1,67 ммоль), с последующим добавлением DIPEA (0,57 мл, 3,34 ммоль). Реакц. см. перемешивали при к.т. в течение ночи. Добавляли другую порцию EDCI (80 мг, 0,417 ммоль) и DIPEA (0,1 мл, 0,75 г/мл, 0,58 ммоль) и реакц. см. перемешивали в течение 12 ч, затем ее гасили водным раствором NaOH (20 мл, 1 М). Водный слой экстрагировали с помощью DCM (3x20 мл) и объединенные органические слои высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали in vacuo. Полученный остаток (600 мг) очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с применением в качестве элюента градиента DCM/MeOH от 100/0 до 98,5/1,5 с получением соединения 399 (136 мг, 80%) в виде белой пены.
Стадия 2. Соединение 398.
Раствор соединения 399 (136 мг, 0,299 ммоль) в 1,4-диоксане (2,17 мл) дегазировали в течение 15 мин в пробирке для проведения реакций под давлением. Последовательно добавляли K2CO3 (144,6 мг, 1,05 ммоль), триметилбороксин (0,256 мл, 0,897 ммоль, 3,5 М в THF) и Pd(PPh3)4 (34,5 мг, 0,03 ммоль) и полученную смесь нагревали при 100°C в течение 2 ч. Удаляли растворитель in vacuo и полученный остаток разделяли между DCM и водой. Полученную двухфазную смесь разделяли и водный слой экстрагировали с помощью DCM (3x15 мл). Объединенные органические слои высушивали над MgSO4, фильтровали и удаляли растворитель при пониженном давлении. Полученный остаток (220 мг) очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с применением в качестве элюента градиента DCM/MeOH от 100/0 до 96/4 с получением соединения 398 (88 мг, 68%).
Соединение 400.
Стадия 1. Соединение 401.
К раствору 6-хлор-3-фтор-2-метилизоникотиновой кислоты (промежуточного соединения 50, 150 мг, 0,79 ммоль) в DCM (30 мл) добавляли DIPEA (0,65 мл, 3,77 ммоль) и HBTU (300 мг, 0,79 ммоль). Затем добавляли промежуточное соединение 25-а (238 мг, 0,7 5 ммоль) и реакц. см. перемешивали в течение ~1,5 ч при к.т. Реакц. см. гасили водным раствором NaOH (1 мл, 1 М) и затем фильтровали через фильтр
- 100 039788
Extrelute®. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с применением в качестве элюента градиента
DCM/MeOH от 100/0 до 98/2 с получением соединения 401 (320,5 мг, 83%) в виде бесцветного масла.
Стадия 2. Соединение 400.
Раствор соединения 401 (320 мг, 0,71 ммоль) в 1,4-диоксане (5,1 мл) дегазировали в течение 15 мин. Последовательно добавляли K2CO3 (343,3 мг, 2,45 ммоль), триметилбороксин (0,608 мл, 2,129 ммоль, 3,5 М в THF) и Pd(PPh3)4 (82,0 мг, 0,071 ммоль) и полученную смесь нагревали при 100°C в течение 2 ч в пробирке для проведения реакций под давлением. Растворитель удаляли in vacuo и полученный остаток разделяли между DCM (20 мл) и водой (20 мл). Двухфазную смесь разделяли и водный слой экстрагировали с помощью DCM (3x15 мл). Объединенные органические слои высушивали над MgSO4, фильтровали и удаляли растворитель при пониженном давлении. Полученный остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с применением в качестве элюента градиента DCM/MeOH от 100/0 до 95/5. В результате этого получали смесь эндо-/экзоизомеров (230 мг), которую разделяли с помощью препаративной HPLC с применением в качестве неподвижной фазы: RP XBridge® Prep C18 OBD-10 мкм, 50x150 мм, и в качестве подвижной фазы: МеОН. Фракции, содержащие продукт, выпаривали и полученный остаток перекристаллизовывали из Et2O с получением соединения 400 (57 мг, 18,6%).
Соединение 402.
К раствору соединения 1 из WO 2017/076900 (250 мг, 0,624 ммоль) в DCM (1,6 мл) добавляли mCPBA (307,825 мг, 1,25 ммоль) при 10°C и полученную смесь перемешивали в Easymax® в течение 3 дней. По истечении этого времени реакц. см. гасили насыщенным водным раствором NaHCO3 (1,5 мл). Двухфазную смесь разделяли и водный слой экстрагировали с помощью DCM (3x5 мл). Объединенные органические слои высушивали над MgSO4, фильтровали и концентрировали in vacuo. Полученный остаток очищали с помощью колоночной флэш-хроматографии на силикагеле, с применением в качестве элюента градиента DCM/MeOH от 100/0 до 96/4, с получением соединения 402 (250 мг, 96%) в виде белого порошка.
Аналитическая часть
Значения температуры плавления.
Значения представляют собой либо максимальные значения, либо диапазоны значений температуры плавления, и их получают с экспериментальными погрешностями, которые обычно связаны с данным аналитическим способом.
Температуру плавления определяли с помощью DSC823e (Mettler-Toledo). Температуру плавления измеряли при температурном градиенте 10°С/мин. Максимальная температура составляла 300°C.
- 101 039788
Таблица 2
№ соед. Т. пл. (°C)
22 217,82
23 169,13
25а 240,33
2 5b 239,55
29 176, 52
31 190,16
40 181,11
49 263,81
52 228,39
69 209,73
72 177,60
77 177,37
79 227,10
93 201,12
102 215,44
106 273,02
108 151,39
111 188,75
116 192,09
118 179,82
120 173,99
122 160,20
123 203,87
126 114,32
127 139,13
129 140,78
130 193,85
131 224,39
132 116,57
133 152,33
137 229,91
189 152,03
191 162,07
192 110, 16
194 167,52
201 140,14
202 78, 65
203 204,03
204 205,47
Способы LC/MS.
Измерения в ходе осуществления высокоэффективной жидкостной хроматографии (HPLC) проводили с помощью насоса для LC, детектора на диодной матрице (DAD) или УФ-детектора, и колонки, как
- 102 039788 описано в соответствующих способах. При необходимости включали дополнительные детекторы (см.
приведенную ниже таблицу способов).
Поток из колонки направляли в масс-спектрометр (MS), который был оснащен источником ионизации при атмосферном давлении. В компетенции специалиста в данной области техники находится установка настраиваемых параметров (например, диапазона сканирования, времени выдержки и т.п.) с целью получения ионов, позволяющих определить номинальную моноизотопную молекулярную массу (MW) соединения. Сбор и обработку данных проводили с помощью соответствующего программного обеспечения. Соединения описывали с помощью их экспериментальных значений времени удерживания (Rt) и ионов. Если не указано иное, то в таблице данных указанный молекулярный ион представляет собой [M+H]+ (протонированную молекулу) и/или [M-H]-(депротонированную молекулу). В случае если соединение не было непосредственно способно к ионизации, указывают тип аддукта (т.е. [M+NH4]+, [M+HCOO]- и т.д.). Для молекул со сложными изотопными распределениями (Br, Cl) сообщаемое значение представляет собой значение, которое получали для наименьшей массы изотопа. Все результаты получали с экспериментальными погрешностями, которые обычно связаны с применяемым способом.
Далее в данном документе SQD означает одиночный квадрупольный детектор, MSD означает масс-селективный детектор, к.т. означает комнатную температуру, ВЕН означает мостиковый гибрид этилсилоксана/диоксида кремния, DAD означает детектор на диодной матрице, HSS означает диоксид кремния повышенной прочности.
Таблица 3A. Коды способов LCMS (скорость потока выражена в мл/мин;
температура колонки (Т) в °C; время анализа в мин)
КОД СПОСОБА Прибор Колонка Подвижная фаза Градиент Скорость потока Т колонки Время анализа (мин. )
А Waters: Acquity® UPLC® - DAD/SQD Waters : ВЕН C18 (1,7 мкм, 2,1 * 50 mm) A: 10 мМ CH3COONH4 в 95% H2O+5% CH3CN B: CH3CN От 95% А до 5% А за 1,3 мин, удерживание в течение 0,7 мин. 0, 8 55 2
В Waters : Acquity® UPLC® - DAD и SQD Waters : ВЕН C18 (1,7 мкм, 2,1 * 50 mm) A: 25 мм CH3COONH4 в 95% H2O+5% CH3CN B: CH3CN От 95% А до 5% А за 1,3 мин, удерживание в течение 0,7 мин. 0, 8 55 2
С Waters : Acquity® UPLC® - DAD и SQD Waters : HSS T3 (1,8 мкм, 2,1 * 100 mm) A: 10 мМ CH3COONH4 в 95% H2O+5% CH3CN B: CH3CN От 100% А ДО 5% А за 2,10 мин., до 0% А за 0,90 мин., до 5% А за 0,5 мин. 0,7 55 3,5
D Waters : Alliance® -DAD - ZQ и ELSD 2000 Колонка Xterra MS C18 (3,5 мкм, 4,6x100 A: 10 мМ CH3COONH4 в 95% H2O+5% CH3CN От 100% А до 1% А, 49% В и 50% С за 6,5 мин., до 1% 1, 6 40 11
- 103 039788
Alltech mm) B: CH3CN С: CH3OH D: (40% CH3CN, и 40% CH3OH, и 20% H2O с 0,25% СНЗСООН А и 99% В за 0,5 мин., до 100% D за 1 мин. с удерживание м в течение 1,0 мин. до 100% А за 0,5 мин. и с удерживание м в течение 1,5 мин.
Е Waters : Acquity® UPLC® DAD- ELSD и SQD Waters : ВЕН C18 (1,7 мкм, 2,1 * 50 mm) А: 0,1% НСООН+5% СНЗОН в Н2О В: CH3CN От 95% А до 0% А за 2,50 мин., до 5% А за 0,5 мин. 0,7 55 3
Таблица 3B. Данные анализа LCMS-Rt означает время удерживания (в минутах), [M+H]+ означает массу протонированного соединения, способ означает способ, применяемый для анализа (LC)MS
№ СОЕД. Rt (мин.) [М+Н] + [М+Н] - Способ
1а 1,33 365 363 С
1Ь 1,33 365 363 С
2а 1,38 393 391 С
2Ь 1,38 393 391 С
За 1,43 365 363 С
ЗЬ 1,43 365 363 С
4 0, 82 419 417 А
5 0, 87 390 388 А
6 0, 8 376 374 А
- 104 039788
7 0, 94 390 388 A
8 0, 87 376 374 A
9 0, 96 382 380 A
10 0, 99 443 441 A
11 0,76 389 387 A
12 0, 84 425 423 A
13 0,7 456 514 [M+CH3COO]- A
14 0, 66 339 337 A
15 0, 69 371 369 A
16 0, 85 370 428 A
17 0, 82 405 403 A
18 0,72 385 383 A
19 0, 68 391 389 A
20 0, 84 444 442 A
21 0, 82 377 375 A
22 0, 84 401 459 [M+CH3COO]- A
23 1,57 391 389 C
24a 1,85 445 503 [M+CH3COO]- C
24b 1,86 445 443 C
25a 1,54 441 439 C
2 5b 1,55 441 439 C
26a 1,46 376 374 C
2 6b 1,46 376 374 C
27 1, 65 421 419 C
28 1,73 439 437 C
29 0,72 413 411 A
30 0,72 413 411 A
31 0,72 413 411 A
32 0,74 401 399 A
33 1, 66 447 445 C
34 1, 66 447 445 C
- 105 039788
35 1,59 492 490 С
36 0, 85 421 419 А
37 1, 68 435 433 С
38 1,36 419 417 С
39 1, 84 475 473 С
40 0, 69 412 410 А
41 0, 85 455 453 А
42 1, 6 407 405 С
43 0, 9 441 439 А
44 0, 96 443 441 А
45 0, 98 443 441 А
46 0, 98 443 441 А
47 1,79 413 411 С
48 1, 03 426 424 А
49 0, 88 401 399 А
50 1,58 427 425 С
51 0, 81 421 419 А
52 0, 9 455 453 А
53 0, 82 417 415 А
54 0, 87 425 423 А
55 1,7 425 423 С
56 1, 64 434 432 С
57 1,45 376 374 С
58 1,31 376 374 С
59 1, 8 480 478 С
60 1,74 451 449 С
61 0,74 404 402 А
62 1,50 417 415 С
63 1, 88 452 450 С
64 1, 8 441 439 С
65 1, 84 406 404 С
66 1,53 403 401 С
67 1,53 375 373 С
68 0,78 405 403 А
- 106 039788
69 0, 96 412 410 А
70 0, 81 419 417 А
71 0, 99 459 457 А
72 2,02 446 444 С
73 0, 95 443 441 А
74 1,97 448 446 С
75 1,97 448 506 [М+СНзСОО]- С
76 1, 1 434 432 А
77 0, 97 430 428 А
78 0, 94 425 423 А
79 0, 82 432 430 А
80 1, 6 415 413 С
81 1,57 419 417 С
82 1,58 419 417 С
83 0, 9 421 419 А
84 0,78 405 403 А
85 1, 63 401 399 С
86 1,5 417 415 С
87 0, 68 363 361 А
88 0,71 444 442 А
89 0, 91 457 455 А
90 0, 9 411 409 А
91 1, 05 478 476 А
92 1, 85 426 424 С
93 1,77 427 425 С
94 1,99 479 477 С
95 1,37 405 403 С
96 1,77 428 426 С
97 0, 88 412 470 [М+СНзСОО]- А
98 1,7 442 440 С
99 1,2 376 374 С
100 1,72 443 441 С
- 107 039788
101 0, 99 429 427 A
102 1, 01 420 418 A
103 1, 03 430 428 A
104 1,52 413 411 C
105 1,86 442 440 C
106 1, 67 411 409 C
107 1, 04 445 443 A
108 0, 95 437 435 A
109 1,9 398 396 C
110 0,86 417 415 A
111 1, 04 440 438 A
112 1, 67 429 427 C
113 1, 03 443 441 A
114 1 425 423 A
115 1, 02 418 416 A
116 0,76 413 411 A
117 1,79 382 380 C
118 1, 01 442 440 A
119 1,96 442 440 C
120 1,78 431 429 C
121 1 472 470 A
122 2 445 443 C
123 1 400 398 A
124 0,78 415 413 A
125 1,78 453 451 C
126 0, 95 392 390 A
127 1, 61 427 425 C
128 1, 8 438 436 C
129 1,95 438 436 C
130 0, 94 436 434 A
131 0, 88 411 409 A
132 0, 93 455 453 A
133 0, 93 468 466 A
134 1,78 437 435 C
- 108 039788
135 1, 03 430 428 А
136 1,99 418 416 С
137 0, 93 401 399 А
138 0, 88 416 474 [М+СНзСОО]~ А
139 1,43 376 374 С
140 1,98 438 436 С
141 0, 81 402 400 А
142 1,32 388 386 С
143 0,77 401 — А
144 1,94 472 470 С
145 0, 89 430 428 А
146 1,32 439 437 С
147 1, 88 426 424 С
148 1, 89 458 456 С
149 1,72 408 406 С
150 1,38 388 386 С
151 1,41 438 436 С
152 1,56 377 375 С
153 1,70 451 449 С
154 1, 67 407 405 С
155 1,47 391 389 С
156 1,46 377 375 С
157 1, 60 377 375 С
158 1,33 394 392 С
159 1, 65 421 419 С
160 1,57 377 375 С
161 1,76 445 443 С
162 1,36 388 386 С
163 1,52 398 396 С
164 1,32 376 374 С
165 2,04 459 456 С
166 1,43 404 402 С
167 1,73 441 439 С
- 109039788
168 0,75 406 404 A
169 1,98 474 472 С
170 1, 83 461 459 С
171 1,96 459 457 С
172 1,86 455 453 С
173 1,35 423 421 С
174 1,58 417 415 С
175 1,77 439 437 С
176 1,52 413 411 С
177 1,36 376 374 С
178 1,45 426 424 С
179 1,46 416 414 С
180 1,88 412 410 С
181 1,32 388 386 С
182 1,73 459 457 С
183 1,54 413 411 С
184 1,50 377 375 С
185 0, 83 423 421 А
186 0,76 406 404 А
187 1,79 413 411 С
188 1, 62 427 425 С
189 1, 00 422 420 А
190 0, 87 415 413 А
191 0, 93 440 438 А
192 0, 96 456 454 А
193 0, 96 456 454 А
194 1,93 458 456 С
195 0, 88 420 418 А
196 0, 81 403 401 А
197 0,86 397 395 А
198 0, 69 390 388 А
199 0, 66 405 405 В
200 0, 88 457 А
- 110 039788
201 0, 92 412 470 [M+CH3COO]- A
202 0,76 362 A
203 0,76 455 455 A
204 0,76 455 A
205 0, 89 412 A
206 1, 00 400 A
207 0, 65 390 448 [M+CH3COO]- A
208 0, 93 392 A
209 0, 91 412 A
210 0,75 401 A
211 0,75 401 A
212 0, 69 412 A
213 0, 91 392 390 A
214 0, 99 400 398 A
215 0, 92 457 A
216 1,20 376 374 C
217 1,79 382 380 C
218 1,90 398 396 C
219 0, 94 443 441 A
220 (.HCl) 0,78 401 A
221 0, 89 412 410 A
222 0, 90 405 403 A
223 0, 94 405 403 A
224 0,79 395 393 A
225 1,52 385 383 C
226 1, 11 452 450 A
227 1, 60 429 427 C
228 0, 92 429 427 A
229 0, 87 387 385 A
230 1,37 405 403 C
231 0, 64 413 411 A
- 111 039788
232 1,46 388 386 С
233 1,37 388 386 С
234 1,51 398 396 С
235 1,53 407 405 С
236 1,25 390 388 С
237 1,54 408 406 С
238 1, 62 432 430 С
239 1, 63 441 439 С
240 1,38 362 360 С
241 1,93 474 472 С
242 1, 85 475 473 С
243 1,49 363 361 С
244 1,36 388 386 С
245 1, 81 426 424 С
246 1, 65 431 429 С
247 1,90 470 468 С
248 1,28 374 372 С
249 1,32 374 372 С
250 1,53 391 389 С
251 1,55 391 389 С
252 1,57 391 389 С
253 1, 65 441 439 С
254 1,53 391 389 С
255 1,51 406 404 С
256 1,34 374 372 С
257 1,38 374 372 С
258 1,93 419 417 с
259 2,35 484 482 с
260 1,51 377 375 с
261 1,36 389 387 с
262 1,51 391 389 с
263 1,78 455 453 с
264 1,54 407 405 с
265 1, 65 427 425 с
- 112 039788
266 2,41 485 483 С
267 0, 91 456 454 А
268 1, 67 441 439 С
269 0, 90 431 429 А
270 0, 85 439 437 А
271 0,78 405 403 А
272 0,73 417 415 А
273 1,98 438 436 С
274 1,73 439 437 С
275 1,73 417 415 С
276 1, 06 461 459 А
277 0, 97 449 507 [М+СНзСОО]- А
278 1,01 445 443 А
279 0, 97 445 443 А
280 1,16 483 481 А
281 1,89 453 451 С
282/387 0, 93 435 433 А
283 1,75 445 443 С
284 5, 27 433 431 А
285 1,76 467 465 С
286 1,76 467 465 С
287 1,79 453 451 С
288 0,78 431 429 А
289 1, 01 425 423 А
290 0, 87 429 427 А
291 0, 92 423 421 А
292 442., 83 440 42 С
293 0, 95 465 463 А
294 0, 82 449 447 А
295 0, 9 437 435 А
296 0, 94 468 466 А
297 0, 91 437 435 А
298 0,86 463 461 А
- 113 039788
299 0,92 437 435 А
300 0,98 437 435 А
301 0, 89 445 443 А
302 0,98 412 410 А
303 0,79 439 437 А
304 0,92 425 423 А
305 0,76 439 437 А
306 0,79 439 437 А
307 0,99 437 435 А
308 0, 87 435 433 А
309 0, 81 453 451 А
310 0, 87 469 467 А
311 0,75 435 433 А
312 0, 82 453 431 А
313 0, 8 435 433 А
314 0,75 435 433 А
315 0,76 435 433 А
316 1, 08 435 - Е
317 0,76 435 433 А
318 1,15 435 - Е
319 0,97 434 432 А
320 0,94 434 432 А
321 0, 88 437 435 А
322 0,75 423 421 А
323 0, 87 423 421 А
324 0, 81 423 481 [М+СНзСОСГ] А
325 0, 82 441 439 А
326 0, 75 423 421 А
327 0, 9 425 423 А
328 0,91 425 483 [М+СНзСОО^] А
329 0, 88 457 515 [М+СНзСОСГ] А
- 114 039788
331 0, 98 422 480 [М+СНзСОО^] А
332 0, 83 441 499 [М+СНзСОСУ] А
333 1,01 452 450 А
334 1, 03 440 438 А
335 1,7 458 456 С
336 0, 93 448 446 А
337 0, 9 420 418 А
338 1, 00 470 468 А
339 0, 99 432 430 А
340 0, 98 452 450 А
341 0, 9 420 418 А
342 1, 02 486 484 А
343 1,72 432 430 С
344 1, 87 434 432 С
345 1,8 935 [2M+1] 466 С
346 1 430 428 А
347 0, 9 404 402 А
348 1, 04 430 428 А
349 0, 91 404 402 А
350 0, 98 464 462 А
351 0, 97 424 422 А
352 1,02 490 488 А
353 1,74 424 422 С
354 0, 83 388 386 А
355 1,96 465 463 С
356 1, 01 452 450 А
357 1,91 470 468
358 1, 83 418 416 С
359 1, 81 450 448 С
360 0,74 430 428 А
361 0, 68 417 415 А
-115 039788
362 1,79 427 425 С
363 1, 84 451 449 С
364 0, 8 444 442 А
365 1, 64 413 411 С
366 0,75 413 411 А
367 0,7 416 414 А
368 0, 82 455 453 А
369 1 432 430 А
370 0, 97 442 440 А
371 0, 96 424 422 А
372 0, 94 440 438 А
373 1, 8 451 449 С
374 0, 94 455 453 А
375 1, 01 432 430 А
376 0, 92 448 446 А
377 0, 95 436 434 А
378 0, 88 455 453 А
379 0,7 438 436 А
380 0,78 438 436 А
381 0,71 436 434 А
382 0,74 438 436 А
383 0, 85 450 448 А
384 0, 88 457 455 А
385 0, 9 455 453 А
386 1,55 431 429 С
282/387 0, 93 435 433 А
390 0, 99 417 415 Е
391 1,25 411 409 Е
392 1, 01 461 459 А
394 1, 01 473 471 А
396 1, 88 473 471 С
398 0, 99 435 433 А
400 0,78 431 429 А
402 0, 62 417 415 А
403 0, 9 455 453 А
404 0, 93 451 449 А
405 0, 91 451 449 А
406 0,75 438 436 А
Способы SFC-MS.
Измерения в ходе SFC проводили с применением аналитической системы сверхкритической флюидной хроматографии (SFC), укомплектованной насосом для двухкомпонентных смесей для доставки диоксида углерода (СО2) и модификатора, автоматическим дозатором, термостатом для колонок, детектором на диодной матрице, оснащенным проточной кюветой для работы под высоким давлением, выдерживающей значения не более 400 бар. При оснащении масс-спектрометром (MS) поток из колонки направлялся в (MS). В компетенции специалиста в данной области техники находится установка настраиваемых параметров (например, диапазона сканирования, времени выдержки и т.п.) с целью получе- 116039788 ния ионов, позволяющих определить номинальную моноизотопную молекулярную массу (MW) соединения. Сбор и обработку данных проводили с помощью соответствующего программного обеспечения.
Таблица 4A. Аналитические способы SFC-MS (скорость потока выражена в мл/мин;
температура колонки (Т) в °C; время анализа в мин, противодавление (BPR) в барах)
код СПОСОБА Колонка Подвижная фаза Градиент Скорость потока Т колонки Время анализа BPR
1 Колонка Daicel Chiralpak® AD-H (5,0 мкм, 250 χ 4,6 мм) А: СО2 В: EtOH+0,2% iPrNH2 40% В, удерживание 4 мин., до 50% за 1 мин. , удерживание 2 мин. 5 7
40 110
- 117 039788
2 Колонка Daicel Chiralpak® AD-3 (3,0 мкм, 150 x 4,6 мм) A: CO2 В: EtOH+O,2% iPrNH2 от 10% до 50% В за 6 мин. , удерживание 3,5 мин. 2,5 9, 5
40 110
3 Колонка Daicel Chiralpak® AD-H (5,0 мкм, 250 χ 4,6 мм) A: C02 B: (EtOHiPrOH)+0,2% iPrNH2 35% В, удерживание 4 мин., до 50% за 1 мин. , удерживание 2 мин. 5 7
40 110
4 Колонка Daicel Chiralpak® AD-H (5,0 мкм, 250 χ 4,6 мм) A: C02 B: iPrOH+0,2% iPrNH2 25% В, удерживание 4 мин., до 50% за 1 мин. , удерживание 2 мин. 5 7
40 110
5 Колонка Daicel Chiralpak® AD-H (5,0 мкм, 250 χ 4,6 мм) A: CO2 B: iPrOH+0,2% iPrNH2 30% В, удерживание 4 мин., до 50% за 1 мин. , удерживание 2 мин. 5 7
40 110
6 Колонка Daicel Chiralpak® AD-H (5,0 мкм, 250 χ 4,6 мм) A: CO2 B: iPrOH+0,2% iPrNH2 40% В, удерживание 4 мин., до 50% за 1 мин. , удерживание 2 мин. 5 7
40 110
- 118 039788
7 Колонка Daicel Chiralpak® AD-3 (3,0 мкм, 150 χ 4,6 мм) A: C02 B: iPrOH+0,2% iPrNH2 от 10% до 50% В за 6 мин. , удерживание 3,5 мин. 2,5 9, 5
40 110
8 Колонка Daicel Chiralpak® AD-H (5,0 мкм, 250 χ 4,6 мм) A: CO2 B: (MeOHiPrOH)+0,2% iPrNH2 25% В, удерживание 4 мин., до 50% за 1 мин. , удерживание 2 мин. 5 7
40 110
9 Колонка Daicel Chiralpak® AD-H (5,0 мкм, 250 χ 4,6 мм) A: CO2 B: (MeOHiPrOH)+0,2% iPrNH2 30% В, удерживание 4 мин., до 50% за 1 мин. , удерживание 2 мин. 5 7
40 110
10 Колонка Daicel (AD, OD, OJ, AS,)-H (5,0 мкм, 250 χ 4,6 mm) A: CO2 В: 3 разных растворителя Λ применяемых для В: (МеОН, EtOH, iPrOH) +0,2% iPrNH2 от 10% до 40% В за 19,4 мин., от 40 до 50% за 2,00 мин. , удерживание 3,6 мин. 3 25
30 110
- 119 039788
13 Колонка Daicel AS-H (5,0 мкм, 500χ4,6 мм) А: СО2 В: 3 разных растворителя Л применяемых для В: (МеОН, EtOH, iPrOH) +0,2% iPrNH2 от 10% до 40% В за 19,4 мин., от 40 до 50% за 2,00 мин. , удерживание 3,6 мин. 3 25
50 110
12 Колонка Daicel AS-H (5,0 мкм, 500χ4,6 мм) А: СО2 В: 3 разных растворителя Л применяемых для В: (МеОН, EtOH, iPrOH) +0,2% iPrNH2 20% В, удерживание 17,5 мин., от 20 до 50% за 3,00 мин. , удерживание 4,1 мин. 3 25
50 110
13 Колонка Daicel OJ-H (5,0 мкм, 250x4,6 мм) А: СО2 В: 3 разных растворителя Л применяемых для В: МеОН+0,2% iPrNH2 12% В, удерживание 10 мин. 3 10
30 110
14 Колонка Daicel Chiralpak® AD-H (5,0 мкм, 250 χ 4,6 мм) А: СО2 В: МеОН+0,2% iPrNH2 20% В, удерживание 4 мин., до 50% за 1 мин. , удерживание 2 мин. 5 7
40 110
- 120 039788
15 Колонка Daicel Chiralpak® OD-H (5,0 мкм, 250 χ 4,6 мм) А: СО2 В: EtOH+O,2% iPrNH2 30% В, удерживание 4 мин., до 50% за 1 мин. , удерживание 2 мин. 5 7
40 110
16 Колонка Daicel Chiralpak® OD-3 (3,0 мкм, 150 х 4,6 мм) А: СО2 В: EtOH+O,2% iPrNH2 от 10% до 50% В за 6 мин. , удерживание 3,5 мин. 2,5 9, 5
40 110
17 Колонка Daicel Chiralpak® AD3 (3,0 мкм, 150x4,6 мм) А: СО2 В: EtOH+O,2% iPrNH2 от 10% до 50% В за 6 мин. , удерживание 3,5 мин. 2,5 9, 5
40 130
18 Колонка Daicel Chiralpak® IC3 (3,0 мкм, 150x4,6 мм) А: СО2 В: EtOH+O,2% iPrNH2 от 10% до 50% В за 6 мин. , удерживание 3,5 мин. 2,5 9, 5
40 130
Таблица 4B. Аналитические данные SFC-Rt означает время удерживания (в минутах), [M+H]+ означает массу протонированного соединения, способ означает способ, применяемый для анализа энантиомерно чистых соединений с помощью (SFC)MS
№ СОЕД. RT (мин. ) [М+Н] + Способ Порядок элюирования
1а 3, 66 365 14 Энантиомер 2
1Ь 2,51 365 14 Энантиомер 1
За 3 365 8 Энантиомер 1
- 121 039788
зь 2,11 365 8 Энантиомер 2
24а 1,05 445 6 Энантиомер 1
24b 1,52 445 6 Энантиомер 2
25а 4,79 441 16 Энантиомер 1
2 5b 5,48 отсутстви е ответа 16 Энантиомер 1
28 3, 95 439 2 Энантиомер 2
29 1,33 413 15 Энантиомер 2
30 2,54 413 15 Энантиомер 1
33 5, 45 447 7 Энантиомер 1
34 4, 85 447 7 Энантиомер 2
45 1,2 443 4 Энантиомер 2
46 1,56 443 4 Энантиомер 1
62 3,42 417 2
73 2,47 448 5 Энантиомер 1
75 1,42 448 5 Энантиомер 2
81 2,81 419 2 Энантиомер 1
82 3,25 419 2 Энантиомер 2
86 3, 09 417 2 Энантиомер 2
95 6, 8 405 7 Энантиомер 2
97 5, 22 412 13 Н. д.
99 3,33 376 3 Энантиомер 2
104 1, 67 413 1 Энантиомер 2
109 2,54 398 1 Н. д.
116 2,12 382 9 Энантиомер 2
123 5, 72 400 10 Н. д.
140 4, 67 438 2 Энантиомер 2
201 8,79 412 11 Энантиомер 1
203 9, 22 455 12 Энантиомер 1
204 7,53 455 12 Энантиомер 1
216 2,2 376 3 Энантиомер 1
217 1,29 382 9 Энантиомер 1
218 1,33 398 1 Энантиомер 1
230 6, 35 405 7 Энантиомер 2
273 4,21 438 2 Энантиомер 2
274 4,5 439 2
285 6, 81 467 18 Диастереомер 4
286 4,95 467 18 Диастереомер 3
392 2, 64 461 17 Энантиомер 1
Ядерный магнитный резонанс (ЯМР).
!Н ЯМР-спектры записывали либо на спектрометре Bruker DPX-400 со стандартными последовательностями импульсов, работающем при 400 МГц, либо на Bruker DPX-360, работающем при 360 МГц, с применением DMSO-dg (дейтерированный DMSO, диметил-бб-сульфоксид) в качестве растворителя.
- 122039788
Значения химического сдвига (δ) указаны в частях на миллион (ppm) относительно тетраметилсилана (TMS), который применяли в качестве внутреннего стандарта.
Соед. № 25a: 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6 при 100 ГРАДУСАХ ЦЕЛЬСИЯ) δ ppm 1,74-1,93 (m, 4H), 1,97-2,11 (m, 3H), 2,31-2,45 (m, 1H), 4,06-4,23 (m, 1H), 4,61 (br s, 1H), 4,82 (br s, 1H), 7,02 (t, J=54,2 Гц, 1H), 7,50 (s, 1H), 7,78 (dd, J=8,4, 1,8 Гц, 1H), 8,17 (d, J=8,4 Гц, 1H), 8,44 (br s, 1H), 8,47 (d, J=1,2 Гц, 1H), 9,45 (s, 1H).
Соед. № 93: 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6 при 100 ГРАДУСАХ ЦЕЛЬСИЯ) δ ppm 0,84 (d, J=6,6 Гц, 3H), 0,88-0,98 (m, 4H), 1,45 (qd, J=12,4, 4,4 Гц, 1H), 1,91 (br dd, J=13,4, 2,6 Гц, 1H), 2,06-2,14 (m, 1H), 2,42 (s, 3H), 2,45-2,49 (m, 1H), 3,13 (br t, J=11,6 Гц, 1H), 3,37 (dd, J=12,9, 11,1 Гц, 1H), 3,60 (td, J=10,9, 4,0 Гц, 1H), 4,17 (br s, 2H), 6,79-7,23 (m, 3H), 7,57 (s, 1H), 8,72 (s, 1H);
Соед. № 108: 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ ppm 0,77 (d, J=6,4 Гц, 3H), 1,34-1,56 (m, 1H), 1,68-2,00 (m, 1H), 2,43 (br s, 1H), 2,76-3,28 (m, 2H), 3,49-3,74 (m, 2H), 3,87 (s, 3H), 4,46-4,76 (m, 1H), 6,81-7,33 (m, 3 H), 7,65 (s, 1H), 8,80 (s, 1H);
Соед. № 110: 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6 при 100 ГРАДУСАХ ЦЕЛЬСИЯ) δ ppm 0,83 (d, J=6,6 Гц, 3H), 1,39-1,50 (m, 1H), 1,85-1,95 (m, 1H), 2,43 (s, 3H), 2,44-2,48 (m, 1H), 3,13 (br t, J=12,3 Гц, 1H), 3,37 (dd, J=13,0, 11,2 Гц, 1H), 3,58 (td,
J=10,9, 4,0 Гц, 1H), 3,88 (s, 3H), 4,13 (br s, 2H), 6,58 (s, 1H), 6,82 (s, 1H), 7,01 (t, J=54,2 Гц, 1H), 7,56 (s, 1H), 8,71 (s, 1H);
Соед. № 132: 1Н ЯМР (360 МГц, DMSO-d6) δ ppm 0,78 (d, J=6,6 Гц, 3H), 1,38-1,61 (m, 1H), 1,67-2,01 (m, 1H), 2,60 (s, 3H), 2,86-3,30 (m, 2H), 3,49 (br d, J=14,6 Гц, 1H), 3,59-3,72 (m, 2H), 4,48-4,79 (m, 1H), 6,877,35 (m, 1H), 7,54-7,89 (m, 3H), 8,79 (s, 1H);
Соед. № 228: 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6 при 100 ГРАДУСАХ ЦЕЛЬСИЯ) δ ppm 0,85 (d, J=6,6 Гц, 4H), 1,43-1,56 (m, 1H), 1,86-1,99 (m, 1H), 3,19 (td, J=12,9, 2,8 Гц, 1H), 3,42 (dd, J=13,0, 11,2 Гц, 1H), 3,64 (td, J=10,9, 4,0 Гц, 1H), 4,15-4,26 (m, 1H), 4,28-4,38 (m, 1H), 7,01 (t, J=54,2 Гц, 1H), 7,58 (br s, 1H), 7,61 (dd, J=8,4, 1,5 Гц, 1H), 8,11 (d, J=7,9 Гц, 1H), 8,27 (d, J=1,3 Гц, 1H), 8,70 (s, 1H), 9,40 (s, 1H);
Соед. № 281: 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6 при 120 ГРАДУСАХ ЦЕЛЬСИЯ) δ ppm 0,82 (d, J=6,40 Гц, 3H), 1,46 (qd, J=12,47, 4,40 Гц, 1H), 1,84-1,93 (m, 1H), 2,41-2,53 (m, 1H), 2,84 (s, 3H), 3,07-3,18 (m, 1H), 3,35 (dd, J=12,98, 11,22 Гц, 1H), 3,58 (td, J=10,95, 3,85 Гц, 1H), 3,88-4,33 (m, 2H), 6,85 (s, 1H), 6,98 (t, J=54,36 Гц, 1H), 7,12 (s, 1H), 7,53 (s, 1H), 7,55 (t, J=73,07 Гц, 1H), 7,74 (s, 1H), 8,67 (s, 1H);
Соед. № 295: 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6 при 100 ГРАДУСАХ ЦЕЛЬСИЯ) δ ppm 1,67-1,87 (m, 4H), 1,89-2,10 (m, 3H), 2,26-2,38 (m, 1H), 3,82 (s, 3H), 4,13 (br d, J=12,10 Гц, 1H), 4,56 (br s, 1H), 4,86 (br s, 1H), 6,55 (d, J=2,64 Гц, 1H), 7,02 (t, J=55,00 Гц, 1H), 7,35 (d, J=3,08 Гц, 1H), 7,41-7,49 (m, 3H), 7,90 (s, 1H), 8,59 (s, 1H);
Соед. № 321: 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6 при 100 ГРАДУСАХ ЦЕЛЬСИЯ) δ ppm 0,81 (d, J=6,60 Гц, 3H), 1,47 (qd, J=12,43, 4,29 Гц, 1H), 1,85-1,93 (m, 1H), 2,39-2,46 (m, 1H), 2,94 (s, 3H), 3,09-3,18 (m, 1H), 3,33-3,40 (m, 1H), 3,57-3,64 (m, 1H), 3,83-4,52 (m, 2H), 6,82 (m, 1H), 7,00 (m, 1H), 7,43 (s, 1H), 7,46 (s, 1H), 7,55 (s, 1H), 8,69 (s, 1H);
Соед. № 335: 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6 при 100 ГРАДУСАХ ЦЕЛЬСИЯ) δ ppm 1,74-2,00 (m, 6H), 2,02-2,08 (m, 1H), 2,36-2,41 (m, 1H), 2,42 (s, 3H), 3,84 (s, 3H), 4,08-4,14 (m, 1H), 4,81-4,85 (m, 1H), 5,135,17 (m, 1H), 7,05 (t, J=54,40 Гц, 1H), 7,56 (s, 1H), 7,89 (s, 1H), 8,69 (s, 1H);
Соед. № 356: 1Н ЯМР (400 МГц, DMSO-d6 при 100 ГРАДУСАХ ЦЕЛЬСИЯ) δ ppm 1,68-1,89 (m, 4H), 1,92-2,04 (m, 3H), 2,30-2,45 (m, 1H), 4,01-4,07 (m, 1H), 4,39-4,84 (m, 2H), 7,01 (t, J=52,80 Гц, 1H), 7,49 (s, 1H), 7,58 (dd, J=8,25, 1,87 Гц, 1H), 7,71 (d, J=8,14 Гц, 1H), 7,83 (d, J=1,54 Гц, 1H), 8,58 (br s, 1H).
Фармакологические примеры
Соединения, предусмотренные в настоящем изобретении, являются ингибиторами PDE2, в частности PDE2A. Результаты тестирования соединений в нескольких фармакологических анализах показаны ниже.
Анализ PDE2A in vitro
Рекомбинантную PDE2A (hPDE2A) человека экспрессировали в клетках Sf9 с применением рекомбинантной конструкции rPDElOA на основе бакуловируса. Клетки собирали через 48 ч после инфицирования и белок hPDE2A очищали с помощью металл-хелатной хроматографии на Ni-сефарозе 6FF. Тестируемые соединения растворяли и разбавляли в 100% DMSO до 100-кратной концентрации относительно конечной концентрации в анализе. Разбавления соединения (0,4 мкл) добавляли в 384-луночные планшеты к 20 мкл буфера для инкубации (50 мм Tris, рН 7,8, 8,3 мМ MgCl2, 1,7 мМ EGTA). В буфер для инкубации добавляли 10 мкл фермента hPDE2A и реакцию начинали путем добавления 10 мкл субстрата до конечной концентрации, составляющей 10 мкМ cGMP и 0,01 мкКи 3H-cGMP. Реакционную смесь инкубировали в течение 45 мин при комнатной температуре. После инкубации реакцию останавливали с помощью 20 мкл стоп-реагента, состоящего из гранул с PDE для SPA (сцинтилляционного анализа сближения) при концентрации 17,8 мг/мл, дополненных 200 мМ ZnCl2. После осаждения гранул в течение 30 мин измеряли радиоактивность с помощью сцинтилляционного счетчика Perkin Elmer Topcount, и результаты выражали в имп./мин. Для получения значений для холостой пробы фермент не включали в реакционную смесь и замещали буфером для инкубации. Контрольные значения получали путем добавления
- 123 039788
DMSO в конечной концентрации 1% вместо соединения. Кривую наилучшего приближения подбирали по точкам с помощью способа наименьшей суммы квадратов на графике зависимости % контрольного значения с вычтенным значением для холостой пробы от концентрации соединения, и на основании этой кривой получали значение концентрации полумаксимального ингибирования (IC50).
Анализ PDE3A in vitro
Рекомбинантную PDE3A (hPDE3A) человека приобретали в виде частично очищенного лизата клеток насекомых от Scottish Biomedical, ее клонировали из головного мозга человека и экспрессировали в клетках Sf9. Тестируемые соединения растворяли и разбавляли в 100% DMSO до 100-кратной концентрации относительно конечной концентрации в анализе. Разбавления соединения (0,4 мкл) добавляли в 384-луночные планшеты к 20 мкл буфера для инкубации (50 мм Tris, рН 7,8, 8,3 мМ MgCl2, 1,7 мМ EGTA). В буфер для инкубации добавляли 10 мкл фермента hPDE3A и реакцию начинали путем добавления 10 мкл субстрата до конечной концентрации, составляющей 0,4 мкМ cAMP и 2,4 мкКи/мл [3Н]-сАМР. Реакционную смесь инкубировали в течение 60 мин при комнатной температуре. После инкубации реакцию останавливали с помощью 20 мкл стоп-реагента, состоящего из гранул с PDE для SPA (сцинтилляционного анализа сближения) при концентрации 17,8 мг/мл, дополненных 200 мМ ZnCl2. После осаждения гранул в течение 30 мин измеряли радиоактивность с помощью сцинтилляционного счетчика Perkin Elmer Topcount, и результаты выражали в имп./мин Для получения значений для холостой пробы фермент не включали в реакционную смесь и замещали буфером для инкубации. Контрольные значения получали путем добавления DMSO в конечной концентрации 1% вместо соединения. Кривую наилучшего приближения подбирали по точкам с помощью способа наименьшей суммы квадратов на графике зависимости % контрольного значения с вычтенным значением для холостой пробы от концентрации соединения, и на основании этой кривой получали значение концентрации полумаксимального ингибирования (IC50).
Анализ PDE10A in vitro
Рекомбинантную PDE10A крысы (rPDE10A2) экспрессировали в клетках Sf9 с применением рекомбинантной конструкции rPDElOA на основе бакуловируса. Клетки собирали через 48 ч после инфицирования и белок rPDElOA очищали с помощью металл-хелатной хроматографии на Ni-сефарозе 6FF. Тестируемые соединения растворяли и разбавляли в 100% DMSO до 100-кратной концентрации относительно конечной концентрации в анализе. Рекомбинантную PDE10A (hPDE2A) человека экспрессировали в клетках Sf9 с применением рекомбинантной конструкции hPDElOA на основе бакуловируса, которую получали и амплифицировали в лаборатории. Клетки собирали через 72 ч после инфицирования и белок hPDElOA очищали с помощью металл-хелатной хроматографии на Ni-сефарозе. Разбавления соединения (0,4 мкл) добавляли в 384-луночные планшеты к 20 мкл буфера для инкубации (50 мм Tris, pH 7,8, 8,3 мМ MgCl2, 1,7 мМ EGTA). В буфер для инкубации добавляли 10 мкл фермента rPDElOA или hPDElOA и реакцию начинали посредством добавления 10 мкл субстрата до конечной концентрации, составляющей 60 нМ cAMP и 0,008 мкКи 3Н-сАМР. Реакционную смесь инкубировали в течение 60 мин при комнатной температуре. После инкубации реакцию останавливали с помощью 20 мкл стоп-реагента, состоящего из гранул с PDE для SPA (сцинтилляционного анализа сближения) при концентрации 17,8 мг/мл. После осаждения гранул в течение 30 мин измеряли радиоактивность с помощью сцинтилляционного счетчика Perkin Elmer Topcount, и результаты выражали в имп./мин Для получения значений для холостой пробы фермент не включали в реакционную смесь и замещали буфером для инкубации. Контрольные значения получали путем добавления DMSO в конечной концентрации 1% вместо соединения. Кривую наилучшего приближения подбирали по точкам с помощью способа наименьшей суммы квадратов на графике зависимости % контрольного значения с вычтенным значением для холостой пробы от концентрации соединения, и на основании этой кривой получали значение концентрации полумаксимального ингибирования (IC50).
Табл. 5: данные in vitro для соединений по настоящему изобретению. По умолчанию данные в отношении ингибирования PDE10A относятся к человеческому клону (также обозначенному (h)), если не указано (r), относящееся к крысиному клону.
- 124 039788
Таблица 5
№ соед. pIC50 hPDE2A p ьшах hPDE2A pIC50 hPDE3B π1 ьшах hPDE3 В pIC50 hPDE10A2 или rPDE10A2 π1 ьтах hPDE10A2 или rPDE10A2
1b 5, 96 88 <5 13 5, 01 50
la 9, 1 100 5, 68 65 7, 89 98
2b 7,72 100 <5 31 6, 57 95
2a 9, 23 101 6, 11 98 8,14 101
3b 5, 25 64 <5 14 <5 19
3a 8,24 97 5,46 77 6, 57 93
4 8, 84 100 5, 24 70 7 , 62 99
5 9, 02 100 6, 23 97 8, 05 100
6 8,79 99 6, 17 97 7,75 100
7 9, 1 100 7 , 12 100 7,77 101
8 8,96 100 6, 56 97 7,95 100
9 7,86 101 5, 37 74 7 , 13 100
10 8,96 100 7 , 14 101 8,34 100
11 7 , 64 100 5, 32 69 6, 43 95
12 7 , 67 101 5, 96 94 6, 44 97
13 7,98 100 <5 38 6,46 95
14 8,22 99 5, 33 70 7 , 05 99
15 8,49 100 5, 09 54 7 , 14 97
16 8,21 100 5,78 88 7,2 98
17 8,31 99 5, 37 74 7 , 09 97
18 8,33 100 5, 19 65 6,71 97
19 7,98 101 5, 51 79 6, 89 96
20 7,92 101 5, 37 74 6, 88 98
21 8,34 99 5, 82 89 6, 88 97
22 8, 63 100 5, 82 87 7, 8 99
23 9, 33 101 5, 98 90 8,15 100
24a 5, 59 80 <5 31 <5 23
24b 8,19 98 <5 28 5, 13 60
25a 9, 15 100 5, 04 57 6,41 96
2 5b 5, 96 92 <5 37 <5 28
- 125 039788
26a <5 21 <5 0 <5 7
2 6b 8, 17 98 <5 41 6, 63 95
27 9, 04 100 <5 37 5, 96 88
28 9, 02 101 <5 17 6, 35 95
29 8, 82 101 <5 18 6,16 90
30 5, 45 77 <5 8 <5 32
31 8, 6 100 <5 8 5, 95 84
32 8,46 100 <5 31 5, 84 81
33 7,83 99 <5 25 5,21 67
34 5,71 88 <5 31 <5 28
35 8, 17 100 <5 1 5, 59 76
38 8,21 100 <5 43 5, 64 80
39 8, 08 98 <5 16 5, 51 75
40 9, 45 101 5, 15 58 6,91 (h) 7,1 (r) 97 (h) 96 (r)
41 7,86 99 <5 17 5, 38 72
42 8,94 100 <5 48 6, 5 95
43 8,3 99 <5 29 5, 88 88
44 8, 02 100 <5 39 5, 59 79
45 <5 37 <5 1 <5 24
46 7,82 100 <5 5 5, 65 86
47 8, 6 99 5, 47 80 6, 19 92
48 9,76 100 7 , 06 99 7,36 100
49 8, 68 99 5, 24 42 6,29 95
50 8,51 100 <5 61 6, 14 93
51 8,26 101 <5 44 5, 9 86
52 7,86 101 <5 22 5, 52 76
53 8,25 100 5, 17 62 6, 11 89
54 8,38 100 5, 02 51 6, 18 89
55 7,9 101 <5 41 5, 75 83
56 7,3 101 <5 38 5, 25 63
57 7,56 100 <5 21 5, 5 78
58 7 , 61 99 <5 18 5, 35 69
59 8,43 98 5, 07 56 6, 23 95
- 126 039788
60 9, 07 100 5, 96 92 6, 82 97
61 8,36 101 <5 45 6, 34 92
63 8, 14 100 5,16 60 6, 06 89
64 8, 8 99 5, 17 62 6, 45 96
65 8,9 100 5, 17 70 6, 6 95
66 7,76 99 <5 48 5, 64 79
67 8,59 99 <5 49 6, 54 94
68 8,2 99 5 50 5,86 85
69 9, 39 102 6, 42 95 7,34 100
70 8,76 102 5,21 63 6, 42 95
71 8,73 98 <6 32 6, 47 94
72 8,99 100 <6 46 6, 98 92
73 8,71 101 5, 58 83 6, 66 98
74 7,52 101 <5 30 <5 36
75 5, 53 81 <5 22 <5 27
76 9, 64 99 5, 91 91 7,5 101
77 9, 34 101 6, 17 96 7,08 98
78 9 102 5, 8 87 6, 98 98
79 8,76 99 6, 04 93 6, 72 97
80 9, 1 100 5, 38 71 7,09 98
81 5, 15 59 <5 17 <5 1
82 7,47 101 <5 9 <5 18
83 9, 03 100 5, 1 58 7,01 98
84 8,5 101 5, 13 30 6, 15 89
85 8, 19 100 5, 11 37 5, 92 88
87 6, 67 98 <5 11 5, 34 69
88 9, 68 101 6,41 97 8,4 99
89 9, 64 104 6, 84 96 7,68 (h) 7,92 (г) 101 (h) 98 (г)
90 9, 45 101 6, 67 98 7,71 102
91 9, 43 100 6, 15 61 7 , 65 94
92 9, 4 100 5, 88 88 7 , 61 98
93 9, 4 101 5, 61 84 7,44 99
94 9, 3 101 6, 98 99 7,93 97
- 127 039788
95 9,29 100 5 55 7,32 98
96 9,26 100 6, 4 73 7,48 95
97 9, 24 101 5, 89 93 7,27 (h) 7,46 (r) 101 (h) 99 (r)
98 9, 22 100 6, 22 94 7,4 98
99 9, 22 100 5, 68 87 8, 02 100
100 9, 18 101 6, 57 99 7,79 100
101 9, 18 101 5, 32 70 7,24 98
102 9, 17 100 <6 44 7,58 95
103 9, 15 99 7 , 06 100 7,74 100
104 9, 09 100 6,29 92 7 , 13 98
105 9, 06 101 5, 87 90 7,53 101
106 9, 05 100 6,41 98 7 , 67 99
107 9, 04 100 5, 38 61 7 , 09 99
108 9, 04 100 5, 57 80 7,28 99
109 9, 03 101 6, 34 98 8, 18 99
110 9, 02 101 5, 58 78 7 , 14 98
111 9, 01 100 5, 98 92 7,42 99
112 9 101 5, 75 84 7,32 99
113 9 99 5, 95 88 7,42 99
114 8,98 100 7 , 05 98 7,34 101
115 8,98 100 5,71 87 7 , 11 99
116 8,94 100 6, 07 97 8, 01 99
116 8,95 101 5, 66 82 7, 1 98
118 8,78 101 6, 02 92 7 , 13 99
119 8,76 100 7,21 101 7 , 11 99
120 8,76 100 6, 15 95 6, 7 96
121 8,75 99 6,29 95 7,23 96
122 8,73 100 5, 74 86 7 , 13 100
123 8,71 99 5,79 87 7 , 04 99
124 8, 69 99 6, 38 98 7,44 98
125 8, 68 100 6, 23 96 6, 23 96
126 8, 68 101 5, 22 65 6, 95 97
127 8, 65 99 6,36 94 7,59 99
- 128 039788
128 8, 64 100 6, 03 90 6, 81 98
129 8, 64 101 5,71 85 7 , 04 99
130 8, 61 100 5,76 87 6, 87 96
131 8, 61 98 5, 11 61 7,39 99
132 8, 6 101 <5 46 6, 7 98
133 8,53 100 5,79 85 6, 87 98
134 8,5 101 5, 65 84 6, 8 100
135 8,48 100 5, 58 81 6, 72 97
136 8,47 101 <5 51 6, 54 97
137 7,55 100 <5 35 5, 87 84
139 7,54 99 <5 20 5, 62 78
140 7,53 100 5, 05 57 5, 51 83
141 7,53 100 <5 12 5, 69 81
142 7,52 100 <5 35 5, 59 79
143 7,48 97 5, 1 58 5, 62 77
144 7,46 100 5, 62 86 6, 33 96
145 7,44 99 5, 69 86 6, 19 93
147 7,42 100 5, 65 81 6, 06 90
148 7,41 101 5, 25 67 6, 04 89
149 7,41 99 5,29 66 5, 74 83
150 7,4 100 <5 22 5, 45 72
152 7,38 99 <5 30 5, 69 80
153 7,36 100 5, 51 76 5, 97 89
154 7,29 100 <5 50 5, 56 79
155 7,27 98 <5 37 5, 53 72
156 7,23 100 <5 19 5, 7 81
157 7,22 99 <5 33 5, 59 75
158 7,19 100 <5 19 5, 67 78
159 7 , 14 100 <5 42 5,49 75
160 7 , 14 99 <5 34 5, 99 88
161 7 , 13 98 <5 11 5, 51 74
162 7,13 97 <5 26 5, 37 72
163 7 , 05 98 <5 12 5,49 74
164 7 , 05 100 <5 22 5,71 82
- 129 039788
165 7, 03 100 <5 36 5,46 78
166 7,03 98 <5 32 5, 65 81
167 7 , 01 97 5, 27 64 5, 7 81
168 8,4 98 5,29 66 7,27 99
169 8,43 98 5, 75 82 6, 75 98
170 8,34 100 5, 67 84 5, 89 84
171 7,93 99 5, 94 93 6, 45 97
172 8,34 101 6, 57 98 7,49 100
173 7,86 101 <5 31 6, 52 96
174 8,28 99 5, 88 85 6, 24 88
175 8,31 100 5, 22 71 6, 85 98
176 8, 04 100 5, 06 56 6, 05 88
177 8,02 99 <5 21 6, 34 93
178 7 , 87 101 5, 13 62 6, 1 92
179 7 , 67 100 <5 32 6, 27 90
180 8,3 100 5,29 66 6,76 97
181 8,34 98 <5 52 6, 51 94
182 7, 6 100 <5 44 6, 38 95
183 7,58 99 <5 36 5, 64 79
184 7,55 100 <5 17 5, 56 75
186 7,97 100 5, 22 69 6, 47 95
187 7,75 99 5,46 74 6, 37 95
188 8, 07 99 5, 81 87 6, 68 98
189 8,29 100 5, 56 80 6, 73 96
190 7,99 100 <5 39 6, 8 96
191 7 , 89 100 5,41 74 6, 65 97
192 8, 03 99 6, 14 95 7 , 14 99
193 8,23 100 5,46 76 6,86 98
194 7,73 99 5, 34 57 6, 58 97
195 8,35 98 5, 25 70 6, 43 93
196 7 , 63 99 5, 31 68 6, 25 92
197 7,99 98 <5 42 6, 68 96
198 8,25 98 <5 35 6, 38 91
199 7,27 92 5, 08 62 5,23 (h) 62 (h)
- 130 039788
5,32 (г) 21 (г)
200 7, 01 91 <5 35 <5 13
201 6, 19 61 <5 24 5,51 (г) -1 (г)
202 5, 57 30 <5 18 <5 (h) <5 (г) 38 (h) 4 (г)
203 6, 02 48 <5 41 <5 (г) 14 (г)
204 6,79 88 5, 13 48 <5 (г) 13 (г)
205 8,94 99 5, 65 83 7, 01 98
206 5,78 39 <5 -1 <5 16
207 5, 1 21 <5 2 <5 -5
208 6, 23 62 <5 30 <5 4
209 6, 14 57 <5 25 <5 7
210 6,21 56 <5 5 <5 16
211 <5 3 <5 13 <5 10
212 6, 24 61 <5 7 <5 8
213 5, 63 28 <5 11 <5 23
214 5, 2 9 <5 9 <5 30
215 6, 58 82 5 45 5, 13 63
216 6,36 98 <5 26 5, 35 67
217 6, 25 99 <5 37 5, 32 72
218 6,69 100 <5 51 5, 65 85
219 6,86 100 <5 18 5, 04 45
220 (.HCl) 6, 01 54 <5 7 <5 27
221 5, 92 45 <5 4 <5 26
222 6, 55 98 <5 13 5, 17 59
223 6,71 98 <5 19 5,46 71
226 9, 06 100 6, 89 100 7, 09 100
227 8, 66 101 6, 42 95 7,34 98
228 9, 65 100 5, 92 91 7,77 100
229 6, 25 95 <5 18 <5 33
230 5, 99 93 <5 40 5, 27 65
231 8, 87 97 5, 04 57 7,71 100
232 6, 67 99 <5 31 <5 48
- 131 039788
233 6, 24 94 <5 10 <5 26
234 6,29 96 <5 22 5, 06 59
235 6, 91 98 <5 32 5,26 67
236 6, 68 100 <5 18 5, 11 58
237 6, 73 97 <5 20 5, 09 51
238 6, 42 94 <5 35 5 48
239 6, 72 96 <5 16 <5 43
240 5, 81 90 <5 9 5, 04 51
241 7 , 68 97 5,76 88 6, 57 94
242 6, 87 97 5,21 67 5, 09 56
243 6, 88 99 <5 13 5, 44 70
244 6, 17 92 <5 12 5, 03 54
245 6, 91 99 5, 23 62 5, 66 79
246 6, 9 98 <5 25 <5 44
247 6, 81 98 5, 69 85 5, 54 77
248 6,46 95 <5 2 4,98 49
249 6, 43 95 <5 10 <5 45
250 6, 88 99 <5 28 5, 31 64
251 6, 55 98 <5 17 5, 06 53
252 6, 15 96 <5 17 5, 17 66
253 6, 34 95 <5 17 <5 39
254 6, 97 99 <5 25 5, 42 70
255 6, 57 95 <5 28 5, 11 58
256 6,49 97 <5 12 5 48
257 6, 58 95 <5 15 <5 45
258 6, 82 99 5, 81 89 5, 9 90
259 6, 37 99 5, 45 82 5, 77 92
260 6,86 97 <5 23 5, 53 74
261 6, 44 95 <5 19 <5 45
262 6, 81 101 <5 37 5,49 74
263 6, 89 99 5, 31 65 5,29 64
264 6, 98 100 4,98 47 5,48 74
265 8, 62 102 5, 2 55 7,43 98
266 6, 38 100 5, 27 74 5, 58 89
- 132 039788
267 9, 4 102 7,21 100 7,95 99
268 5, 72 82 <5 13 <5 39
269 9, 15 101 5, 43 78 6,16 93
270 8, 63 100 <5 29 6, 57 96
271 8,53 99 5, 13 61 6,79 95
272 8, 66 102 5, 05 54 6, 1 93
273 8, 63 100 6, 09 96 6, 01 96
274 6, 54 97 <5 7 5, 22 63
la 9, 1 100 5, 68 65 7 , 89 98
lb 5, 96 88 <5 13 5, 01 50
2a 9, 23 101 6, 11 98 8, 14 101
2b 7,72 100 <5 31 6, 57 95
3a 8,24 97 5,46 77 6, 57 93
3b 5, 25 64 <5 14 <5 19
4 8,84 100 5, 24 70 7 , 62 99
5 9, 02 100 6, 23 97 8, 05 100
6 8,79 99 6, 17 97 7,75 100
7 9, 1 100 7 , 12 100 7,77 101
8 8,96 100 6, 56 97 7,95 100
9 7,86 101 5, 37 74 7 , 13 100
10 8,96 100 7 , 14 101 8,34 100
11 7 , 64 100 5, 32 69 6, 43 95
12 7 , 67 101 5, 96 94 6, 44 97
13 7,98 100 <5 38 6,46 95
14 8,22 99 5, 33 70 7 , 05 99
15 8,49 100 5, 09 54 7 , 14 97
16 8,21 100 5,78 88 7,2 98
17 8,31 99 5, 37 74 7 , 09 97
18 8,33 100 5, 19 65 6,71 97
19 7,98 101 5, 51 79 6, 89 96
20 7,92 101 5, 37 74 6, 88 98
21 8,34 99 5, 82 89 6, 88 97
22 8, 63 100 5, 82 87 7,8 99
23 9, 33 101 5, 98 90 8,15 100
- 133 039788
24a 5, 59 80 <5 31 <5 23
24b 8, 19 98 <5 28 5, 13 60
25a 8,97 100 5, 06 54 6, 23 94
2 5b 5, 96 92 <5 37 <5 28
26a <5 21 <5 0 <5 7
2 6b 8, 17 98 <5 41 6, 63 95
27 9, 04 100 <5 37 5, 96 88
28 9, 02 101 <5 17 6, 35 95
29 8, 82 101 <5 18 6,16 90
30 5, 45 77 <5 8 <5 32
31 8, 6 100 <5 8 5, 95 84
32 8,46 100 <5 31 5, 84 81
33 7 , 83 99 <5 25 5,21 67
34 5,71 88 <5 31 <5 28
35 8,17 100 <5 1 5, 59 76
36 8,56 100 5, 4 64 6, 33 93
37 7,76 100 5, 05 52 6, 37 93
38 8,21 100 <5 43 5, 64 80
39 8, 08 98 <5 16 5, 51 75
40 9, 45 101 5, 15 58 6,91 (h) 7,1 (r) 97 (h) 96 (r)
41 7,86 99 <5 17 5, 38 72
42 8,94 100 <5 48 6, 5 95
43 8,3 99 <5 29 5, 88 88
44 8, 02 100 <5 39 5, 59 79
45 <5 37 <5 1 <5 24
46 7 , 82 100 <5 5 5, 65 86
47 8, 6 99 5, 47 80 6, 19 92
48 9,76 100 7 , 06 99 7,36 100
49 8, 68 99 5, 24 42 6,29 95
50 8,51 100 <5 61 6, 14 93
51 8,26 101 <5 44 5, 9 86
52 7,86 101 <5 22 5, 52 76
53 8,25 100 5, 17 62 6, 11 89
- 134 039788
54 8,38 100 5, 02 51 6, 18 89
55 7,9 101 <5 41 5, 75 83
56 7,3 101 <5 38 5, 25 63
57 7,56 100 <5 21 5, 5 78
58 7 , 61 99 <5 18 5, 35 69
59 8,43 98 5, 07 56 6, 23 95
60 9, 07 100 5, 96 92 6, 82 97
61 8,36 101 <5 45 6, 34 92
62 5, 52 77 <5 8 <5 36
63 8, 14 100 5,16 60 6, 06 89
64 8, 8 99 5, 17 62 6, 45 96
65 8,9 100 5, 17 70 6, 6 95
66 7,76 99 <5 48 5, 64 79
67 8,59 99 <5 49 6, 54 94
68 8,2 99 5 50 5,86 85
69 9, 39 102 6, 42 95 7,34 100
70 8,71 102 5,29 66 6,48 93
71 8,73 98 <6 32 6, 47 94
72 8,99 100 <6 46 6, 98 92
73 8,71 101 5, 58 83 6,66 98
74 7,52 101 <5 30 <5 36
75 5, 53 81 <5 22 <5 27
76 9, 64 99 5, 91 91 7,5 101
77 9, 34 101 6, 17 96 7 , 08 98
78 9 102 5, 8 87 6, 98 98
79 8,76 99 6, 04 93 6, 72 97
80 9, 1 100 5, 38 71 7 , 09 98
81 5, 15 59 <5 17 <5 1
82 7 , 47 101 <5 9 <5 18
83 9, 03 100 5, 1 58 7 , 01 98
84 8,5 101 5, 13 30 6, 15 89
85 8, 19 100 5, 11 37 5, 92 88
86 7,3 100 <5 34 <5 40
87 6, 67 98 <5 11 5, 34 69
- 135 039788
88 9, 68 101 6,41 97 8,4 99
89 9, 64 104 6, 84 96 7,68 (h) 7,92 (r) 101 (h) 98 (r)
90 9, 45 101 6, 67 98 7,71 102
91 9, 43 100 6, 15 61 7 , 65 94
92 9, 4 100 5, 88 88 7 , 61 98
93 9, 34 101 5, 59 84 7,4 99
94 9, 3 101 6, 98 99 7,93 97
95 9,29 100 5 55 7,32 98
96 9,26 100 6, 4 73 7,48 95
97 9, 24 101 5, 89 93 7,27 (h) 7,46 (r) 101 (h) 99 (r)
98 9, 22 100 6, 22 94 7,4 98
99 9, 22 100 5, 68 87 8, 02 100
100 9, 18 101 6, 57 99 7,79 100
101 9, 18 101 5, 32 70 7,24 98
102 9, 17 100 <6 44 7,58 95
103 9, 15 99 7 , 06 100 7,74 100
104 9, 09 100 6,29 92 7 , 13 98
105 9, 06 101 5, 87 90 7,53 101
106 9, 05 100 6,41 98 7 , 67 99
107 9, 04 100 5, 38 61 7 , 09 99
108 9, 04 100 5, 57 80 7,28 99
109 9, 03 101 6, 34 98 8, 18 99
110 8, 88 100 5, 47 76 6, 95 98
111 9, 01 100 5, 98 92 7,42 99
112 9 101 5, 75 84 7,32 99
113 9 99 5, 95 88 7,42 99
114 8,98 100 7 , 05 98 7,34 101
115 8,98 100 5,71 87 7,11 99
117 8,94 100 6, 07 97 8, 01 99
116 8,95 101 5, 66 82 7,1 98
118 8,78 101 6, 02 92 7 , 13 99
119 8,76 100 7,21 101 7 , 11 99
- 136 039788
120 8,76 100 6, 15 95 6, 7 96
121 8,75 99 6,29 95 7,23 96
122 8,73 100 5, 74 86 7 , 13 100
123 8,71 99 5,79 87 7 , 04 99
124 8, 69 99 6, 38 98 7,44 98
125 8, 68 100 6, 23 96 6, 23 96
126 8, 68 101 5, 22 65 6, 95 97
127 8, 65 99 6,36 94 7,59 99
128 8, 64 100 6, 03 90 6, 81 98
129 8, 64 101 5,71 85 7 , 04 99
130 8, 61 100 5,76 87 6, 87 96
131 8, 61 98 5, 11 61 7,39 99
132 8, 6 101 <5 46 6, 7 98
133 8,53 100 5,79 85 6, 87 98
134 8,5 101 5, 65 84 6, 8 100
135 8,48 100 5, 58 81 6, 72 97
136 8,47 101 <5 51 6, 54 97
137 7,55 100 <5 35 5, 87 84
138 7,55 93 5, 31 64 <5 24
139 7,54 99 <5 20 5, 62 78
140 7,53 100 5, 05 57 5, 51 83
141 7,53 100 <5 12 5, 69 81
142 7,52 100 <5 35 5, 59 79
143 7,48 97 5, 1 58 5, 62 77
144 7,46 100 5, 62 86 6, 33 96
145 7,44 99 5, 69 86 6, 19 93
146 7,43 100 5,78 85 5,48 76
147 7,42 100 5, 65 81 6, 06 90
148 7,41 101 5, 25 67 6, 04 89
149 7,41 99 5,29 66 5, 74 83
150 7,4 100 <5 22 5, 45 72
151 7,39 100 <5 11 5,86 85
152 7,38 99 <5 30 5, 69 80
153 7,36 100 5, 51 76 5, 97 89
- 137 039788
154 7,29 100 <5 50 5, 56 79
155 7,27 98 <5 37 5, 53 72
156 7,23 100 <5 19 5, 7 81
157 7,22 99 <5 33 5, 59 75
158 7 , 19 100 <5 19 5, 67 78
159 7 , 14 100 <5 42 5,49 75
160 7,14 99 <5 34 5, 99 88
161 7 , 13 98 <5 11 5, 51 74
162 7 , 13 97 <5 26 5, 37 72
163 7,05 98 <5 12 5,49 74
164 7 , 05 100 <5 22 5,71 82
165 7 , 03 100 <5 36 5,46 78
166 7 , 03 98 <5 32 5, 65 81
167 7,01 97 5, 27 64 5, 7 81
168 8,4 98 5,29 66 7,27 99
169 8,43 98 5, 75 82 6, 75 98
170 8,34 100 5, 67 84 5, 89 84
171 7, 93 99 5, 94 93 6, 45 97
172 8,34 101 6, 57 98 7,49 100
173 7,86 101 <5 31 6, 52 96
174 8,28 99 5, 88 85 6, 24 88
175 8,31 100 5, 22 71 6, 85 98
176 8, 04 100 5, 06 56 6, 05 88
177 8, 02 99 <5 21 6, 34 93
178 7 , 87 101 5, 13 62 6, 1 92
179 7 , 67 100 <5 32 6, 27 90
180 8,3 100 5,29 66 6,76 97
181 8,34 98 <5 52 6, 51 94
182 7, 6 100 <5 44 6, 38 95
183 7,58 99 <5 36 5, 64 79
184 7,55 100 <5 17 5, 56 75
185 7 , 66 98 5,48 79 5, 92 87
186 7,97 100 5, 22 69 6, 47 95
187 7,75 99 5,46 74 6, 37 95
- 138 039788
188 8, 07 99 5, 81 87 6, 68 98
189 8,29 100 5, 56 80 6, 73 96
190 7, 99 100 <5 39 6, 8 96
191 7 , 89 100 5,41 74 6, 65 97
192 8, 03 99 6, 14 95 7 , 14 99
193 8,23 100 5,46 76 6,86 98
194 7,73 99 5, 34 57 6, 58 97
195 8,35 98 5, 25 70 6, 43 93
196 7 , 63 99 5, 31 68 6, 25 92
197 7, 99 98 <5 42 6, 68 96
198 8,25 98 <5 35 6, 38 91
199 7,27 92 5, 08 62 5,23 (h) 5,32 (г) 62 (h) 21 (г)
200 7 , 01 91 <5 35 <5 13
201 6, 19 61 <5 24 5,51 (г) -1 (г)
202 5, 57 30 <5 18 <5 (h) <5 (г) 38 (h) 4 (г)
203 6, 02 48 <5 41 <5 (г) 14 (г)
204 6,79 88 5, 13 48 <5 (г) 13 (г)
205 8,94 99 5, 65 83 7, 01 98
206 5,78 39 <5 -1 <5 16
207 5, 1 21 <5 2 <5 -5
208 6, 23 62 <5 30 <5 4
209 6, 14 57 <5 25 <5 7
210 6,21 56 <5 5 <5 16
211 <5 3 <5 13 <5 10
212 6, 24 61 <5 7 <5 8
213 5, 63 28 <5 11 <5 23
214 5, 2 9 <5 9 <5 30
215 6, 58 82 5 45 5, 13 63
216 6,36 98 <5 26 5, 35 67
217 6, 25 99 <5 37 5, 32 72
218 6,69 100 <5 51 5, 65 85
219 6,86 100 <5 18 5, 04 45
- 139 039788
220 6, 52 54 <5 8 <5 41
220 ( .HCl) 6, 52 54 <5 8 <5 41
221 5, 92 45 <5 4 <5 26
222 6, 55 98 <5 13 5, 17 59
223 6,71 98 <5 19 5,46 71
224 8,52 100 5, 98 87 7 , 15 99
225 7,94 99 5, 75 83 7 , 03 98
226 9, 06 100 6, 89 100 7 , 09 100
227 8, 66 101 6, 42 95 7,34 98
228 9, 65 100 5, 92 91 7,77 100
229 6, 25 95 <5 18 <5 33
230 5, 99 93 <5 40 5, 27 65
231 8, 87 97 5, 04 57 7,71 100
232 6, 67 99 <5 31 <5 48
233 6, 24 94 <5 10 <5 26
234 6,29 96 <5 22 5, 06 59
235 6, 91 98 <5 32 5,26 67
236 6, 68 100 <5 18 5, 11 58
237 6, 73 97 <5 20 5, 09 51
238 6, 42 94 <5 35 5 48
239 6, 72 96 <5 16 <5 43
240 5, 81 90 <5 9 5, 04 51
241 7 , 68 97 5,76 88 6, 57 94
242 6, 87 97 5,21 67 5, 09 56
243 6, 88 99 <5 13 5, 44 70
244 6, 17 92 <5 12 5, 03 54
245 6, 91 99 5, 23 62 5, 66 79
246 6, 9 98 <5 25 <5 44
247 6, 81 98 5, 69 85 5, 54 77
248 6,46 95 <5 2 4,98 49
249 6, 43 95 <5 10 <5 45
250 6, 88 99 <5 28 5, 31 64
251 6, 55 98 <5 17 5, 06 53
- 140039788
252 6, 15 96 <5 17 5, 17 66
253 6, 34 95 <5 17 <5 39
254 6, 97 99 <5 25 5, 42 70
255 6, 57 95 <5 28 5, 11 58
256 6,49 97 <5 12 5 48
257 6, 58 95 <5 15 <5 45
258 6, 82 99 5, 81 89 5, 9 90
259 6, 37 99 5, 45 82 5, 77 92
260 6,86 97 <5 23 5, 53 74
261 6, 44 95 <5 19 <5 45
262 6, 81 101 <5 37 5,49 74
263 6, 89 99 5, 31 65 5,29 64
264 6, 98 100 4,98 47 5,48 74
265 8, 62 102 5, 2 55 7,43 98
266 6, 38 100 5, 27 74 5, 58 89
267 9, 4 102 7,21 100 7,95 99
268 5, 72 82 <5 13 <5 39
269 8,93 99 5, 43 78 6, 25 93
270 8,34 99 <5 29 6,48 96
271 8, 66 99 5, 13 61 6,78 95
272 8, 81 97 5, 05 54 6,28 93
273 8, 63 100 6, 09 96 6, 01 96
274 6, 54 97 <5 7 5, 22 63
275 8,55 100 6, 01 92 7,54 100
276 8, 65 100 5, 89 93 6,78 98
277 7 , 12 99 <5 14 <5 27
278 9, 03 99 6, 15 97 6, 84 99
279 8, 65 99 5, 55 86 6, 5 96
280 8, 6 100 6, 03 96 6, 61 99
281 8,78 100 5, 65 87 6,96 99
282 8,54 100 5, 77 88 6, 56 98
283 8,07 100 <5 38 6, 75 98
284 8,77 101 5, 9 89 7,26 98
285 5,16 65 <5 21 <5 37
- 141 039788
286 8,16 101 <5 14 5, 65 79
287 8,42 100 5, 2 61 6,76 98
288 8,57 101 <5 44 6, 38 93
289 8, 62 100 6, 75 98 7,2 99
290 8,23 98 5,16 53 5, 85 89
291 8,57 101 5, 58 86 6,29 95
292 8, 6 100 5, 33 73 6, 14 94
293 7,95 100 5,46 80 5, 99 90
294 7,97 99 <5 14 5, 68 81
295 9, 31 101 6, 01 94 6, 61 98
296 9, 34 99 6, 1 93 6, 92 100
297 8, 63 97 5, 23 62 6, 23 96
298 7,73 99 <5 25 <5 47
299 8, 11 99 <5 40 5, 67 84
300 8,19 100 5, 7 88 5, 54 80
301 8, 09 100 5, 2 62 5, 9 89
302 8, 19 101 5, 1 59 6, 05 93
303 8, 15 99 5, 18 57 6, 27 95
304 7,4 100 5, 04 48 <5 45
305 7 , 06 100 <5 7 5, 15 57
306 7,35 100 5, 35 71 5, 44 74
307 8,04 99 5, 83 88 6, 22 97
308 7,76 98 5, 34 72 5, 17 66
309 8,53 100 5, 12 53 5, 82 86
310 8, 85 100 5,41 78 6, 4 95
311 8,96 96 5, 13 62 6, 37 96
312 7 , 66 99 <5 37 6,21 93
313 8, 87 97 5, 22 61 5, 91 86
314 8,24 100 5, 45 73 6, 03 91
315 6, 95 98 <5 20 5, 01 47
316 6, 59 94 <5 5 <5 14
317 7,07 99 <5 15 <5 34
318 5, 82 89 <5 11 <5 13
319 8,95 100 5, 99 95 6, 58 99
- 142 039788
320 7,27 100 <5 47 5, 15 62
321 8, 66 101 5, 09 45 6, 51 97
322 9, 3 100 6, 32 95 7,73 99
323 8,41 100 6, 14 95 6, 65 97
324 9, 07 100 6, 58 97 7,18 100
325 8,94 100 6, 51 98 7 , 19 98
326 8, 67 100 6, 59 97 7,22 99
327 9, 38 101 7 , 11 99 7 , 69 100
328 9, 2 100 5, 83 90 7,21 100
329 9,26 100 6,69 95 7 , 67 100
331 9, 32 98 7,3 99 7 , 84 100
332 8,32 99 5, 92 90 7,51 98
333 8,09 99 5,16 63 6, 15 93
334 8, 61 100 5, 63 84 7 98
335 9, 02 102 5, 14 52 7,06 98
336 7,73 101 5,49 78 5, 72 87
337 6,78 99 <5 43 5, 34 71
338 7 , 04 99 5,26 62 5, 51 70
339 8,18 101 5, 32 69 6,21 95
340 7 , 15 100 5, 37 69 5,48 72
341 6, 85 97 <5 33 5, 3 63
342 7,49 100 5, 35 69 5, 57 77
343 7 , 17 102 <5 44 5, 34 68
344 7,53 99 5, 14 61 5, 59 80
345 7 , 12 99 5, 08 48 5, 43 72
346 8,28 100 5, 22 68 6, 14 92
347 8,27 101 5, 14 63 6 91
348 7,47 99 5, 35 70 5, 89 92
349 7 , 65 102 5, 32 64 5, 75 86
350 7, 6 100 5, 31 74 5, 68 85
351 7,29 99 5, 2 69 5, 67 83
352 8,12 100 5, 74 89 6, 32 99
353 8,47 99 5, 32 69 6, 01 94
354 7 , 05 100 5, 01 45 5, 35 70
- 143 039788
355 9, 03 99 6, 14 98 6, 63 98
356 8,27 99 5, 23 65 6, 03 92
357 7, 11 98 <5 34 5, 47 73
358 7,57 102 <5 40 5, 1 58
359 7,92 99 5, 4 71 5, 67 86
360 7,39 97 5, 07 50 5,16 55
361 8,56 100 <5 37 6, 45 92
362 8,77 99 6, 06 88 6, 1 93
363 9, 56 99 6,21 97 6, 75 98
364 8,41 101 5, 5 75 5, 74 85
365 7,2 99 <5 24 <5 33
366 7,99 99 <5 22 5, 24 64
367 6,36 97 <5 21 <5 44
368 8,21 101 5, 19 61 6, 6 99
369 8,31 100 5, 43 72 6, 14 93
370 7,47 100 5, 84 87 6, 18 94
371 7,86 101 6,41 96 6,41 98
372 8,99 100 5, 87 90 6, 6 96
373 8,57 100 6, 27 97 6, 5 99
374 9, 13 100 6, 13 97 6, 74 98
375 8,45 101 5, 35 73 6, 09 94
376 8,37 101 5, 47 79 6, 51 97
377 7,75 99 5, 01 47 5, 89 89
378 8,77 99 6, 12 96 6, 39 97
379 7,95 102 5,28 67 5,79 87
380 8,26 101 5, 4 72 6, 44 96
381 8,12 99 5 48 5, 88 88
382 7,99 99 <5 37 5, 4 75
386 8, 62 98 5, 6 79 6,26 93
387 8,54 100 5, 77 88 6, 56 98
390 8, 68 98 5, 59 84 7,21 99
391 8, 62 99 5, 65 81 7,2 97
392 8,95 99 6, 35 97 6, 58 93
394 8, 03 99 <5 27 5, 65 76
396 7, 82 98 <5 56 5, 83 84
398 8,31 99 5,28 67 6, 23 95
400 7, 65 99 <5 16 <5 41
402 7,58 100 <5 28 5, 83 87
Занятость PDE2 тестируемыми соединениями
Способы.
Занятость PDE2A оценивали с помощью авторадиографии ex-vivo с применением [3Н]В-17а (описан в WO 2013/000924) в качестве радиолиганда (соединение 12 в Buijnsters et al., (2014). Structure-Based Design of a Potent, Selective, and Brain Penetrating PDE2 Inhibitor with Demonstrated Target Engagement. ACS Med Chem Lett. 5(9):1049-53.)
Самцов крыс Wistar (200-250 г) обрабатывали посредством перорального введения среды-носителя
- 144039788 или возрастающих доз [3Н]В-17а и умерщвляли через 1 ч. Головной мозг сразу же удаляли из черепа и подвергали быстрой заморозке в охлажденном сухим льдом 2-метилбутане (-40°С). Срезы полосатого тела толщиной 20 мкм нарезали с помощью криостатного микротома Leica СМ 3050 (van Hopplynus,
Бельгия), помещали в размороженном состоянии на предметные стекла (SuperFrost Plus Slides, LaboNord,
Франция) и хранили при -20°С до применения.
После размораживания срезы высушивали в холодном потоке воздуха и инкубировали в течение 1 мин с 30 нМ [3Н]В-17а в Tris-HCl (50 мМ, pH 7,4), содержащем 0,3% BSA. Срезы головного мозга от обработанных лекарственным средством и обработанных средой-носителем животных инкубировали одновременно.
Неспецифическое связывание измеряли на срезах мозжечка, области головного мозга, которая не содержит фермента PDE2A. После инкубации избыток [3Н]В-17а смывали ледяным буфером 2 раза по 10 мин с последующим быстрым погружением в дистиллированную воду. Затем срезы высушивали в потоке холодного воздуха.
Срезы головного мозга помещали в β-imager (Biospace, Париж) на 4 ч и радиоактивность, исходящую от срезанных областей головного мозга, количественно определяли с применением программы Beta vision (Biospace, Париж). Специфическое связывание определяли как разницу между общим связыванием в полосатом теле и неспецифическим связыванием в мозжечке. Процент занятости рецептора лекарственным средством, которое вводили животному, соответствовал 100% минус процент меченного рецептора у обработанного животного. Для определения значений ED50 значения процента занятости рецептора наносили на график в зависимости от дозы и рассчитывали уравнение наиболее соответствующей сигмоидальной логарифмической кривой доза-эффект с помощью нелинейного регрессионного анализа с применением программы Prism от GraphPad. Значения ED50 (доза лекарственного средства, обеспечивающая 50% занятость рецептора) при доверительных интервалах с надежностью 95% рассчитывали на основании кривых доза-ответ.
Табл. 6: РО=псроралыю; 8С=подкожно.
Таблица 6
№ соед. Занятость PDE2 при 10 мг/кг Путь введения при определении занятости PDE2 при 10 мг/кг ED50 для занятости PDE Путь введения при определении ED50 Для занятости
1а 37 РО
2Ь 3 SC
2а 70 SC
За 0 РО
4 9 РО
6 67 РО
13 2 РО
18 4 РО
22 18 30 РО РО
24b 0 SC
25а 66 SC 4 РО
2 5b -9 РО
27 34 РО
28 49 SC 25 РО
- 145 039788
29 31 SC
30 0 SC
32 -6 PO
33 -7 PO
35 -3 PO
36 32 PO 45, 2 PO
37 -13 PO
38 1 PO
39 -8 PO
41 8 PO
42 54 PO
43 2 PO
46 -9 PO
47 5 PO
48 96 sc
49 12 sc
50 -30 PO
51 20 PO
52 2 PO
53 22 PO
54 39 PO
59 7 PO
60 32 PO
64 7 PO
65 -23 -9 PO PO
66 -14 PO
68 31 sc
69 0 PO
70 65 sc 6, 4 PO
71 49 sc
72 0 PO
73 0 PO
74 14 sc
- 146039788
76 17 PO
77 54 54 PO PO 5, 67 PO
78 77 SC
79 15 0 PO PO
80 52 SC 8, 63 PO
82 28 PO
83 82 PO
84 45 PO 14, 13 PO
85 1 SC
89 88 SC
90 73 sc
91 -7 PO
93 85 PO 7, 8 PO
95 27 sc
96 1 PO
97 92 PO
99 1 PO
101 43 sc
102 -4 PO
103 42 sc
106 -0 PO
107 29 PO
108 65 PO 4, 8 PO
109 43 PO
110 75 PO 8,3 PO
115 23 PO
117 8 PO
116 3 sc
120 12 PO
121 -15 PO
122 0 PO
123 4 PO
- 147 039788
125 -16 PO
126 31 PO
127 34 53 PO SC
129 21 PO
130 0 PO
131 -0 PO
132 76 SC 5 PO
133 -19 PO
134 21 PO
139 -11 PO
169 3 PO
170 1 PO
184 -2 PO
186 8 sc
187 0 sc
188 2 sc
189 9 PO
190 1 PO
191 -18 PO
192 -13 PO
193 -11 -3 PO sc
195 -7 -13 PO sc
196 0 PO
197 8 PO
220 -8 PO >80 PO
223 19 PO
224 -6 PO
225 -6 PO
227 18 sc
228 92 sc 1,5 PO
231 -13 sc
- 148 039788
267 59 PO 11 PO
269 22 PO 24,2 PO
270 6 PO
272 3 PO
273 65 SC
275 23 PO
277 -4 PO
278 30 PO
281 57 PO 4,2 PO
282 47 47 PO PO 11,8 PO
283 -12 PO
284 16 PO
286 5 PO
287 43 PO
290 -3 PO
291 38 PO
292 23 PO
293 6 PO
294 17 PO
295 71 PO 5, 63 PO
296 88 PO
297 -2 PO
299 31 PO
300 -11 PO
301 -7 PO
302 1 PO
303 17 PO
307 8 PO
308 18 PO
309 12 PO
310 52 PO 9, 6 PO
311 -1 PO
312 -16 PO
- 149 039788
313 28 РО
314 5 РО
319 37 РО
321 73 РО 3,37 РО
328 -18 РО
332 8 РО
334 17 РО
335 88 РО 0, 985 РО
339 -1 РО
346 19 РО
347 11 РО
352 16 РО
353 15 РО
356 51 РО 5, 55 РО
362 3 РО
363 -11 РО
364 -5 РО
366 18 РО
368 11 РО
369 9 РО
386 23 РО
387 47 47 РО РО 11, 8 РО
391 3 РО
392 46 РО
398 29 РО
Эффект соединения 110 в отношении синаптической передачи
Важные реагенты.
Сахарозный буфер для препарирования, содержащий (в мМ) сахарозу (150), NaCl (40), КС1 (4), NaH2PO4.H2O (0,3), MgC1.6H2O (7), NaHCO3 (26), СаС12.2Н2О (0,5), D-глюкозу (10), уравновешенный газовой смесью 95% О2 и 5% СО2. Искусственная цереброспинальная жидкость (ACSF), применяемая в ходе уравновешивания и регистрации, содержала (в мМ): NaCl (124), КС1 (2,7), NaH2PO4.H2O (1,25), MgSO4.7H2O (1,3), NaHCO3 (26), СаС12.2Н2О (2), D-глюкозу (10), аскорбиновую кислоту (2), уравновешенную газовой смесью 95% О2 и 5% СО2. ACSF получали с CNQX и кинуреновой кислотой в концентрации 50 мкМ и 1 мМ соответственно. Тестируемые соединения получали непосредственно перед применением из исходного раствора (с помощью DMSO) в ACSF и с конечной концентрацией DMSO, которая не превышала 0,1%. Все реагенты были от Sigma-Aldrich, если не указано иное.
Животные (вид, вес и пол).
Используемыми животными были самцы крыс Спраг-Доули с весом в диапазоне 145-200 г, приобретенные у Charles River, Германия.
Получение срезов гиппокампа.
Горизонтальные срезы головного мозга (300 мкм) получали из средней-вентральной части гиппокампа самцов крыс Спраг-Доули, которых анестезировали изофлураном согласно стандартному протоколу. Срезы нарезали с помощью вибрационного микротома для тканей (Leica VT1200S) в холодном (4°С) сахарозном буфере для препарирования со скоростью 0,1 мм/с. После нарезания срезы оставляли для уравновешивания при 35°C в течение 20 мин, а затем обеспечивали восстановление при к.т. в течение по меньшей мере одного часа в искусственной цереброспинальной жидкости (ACSF). Из одного головного мозга получали от трех до четырех срезов.
Система тестирования.
Все данные регистрировали с помощью установки МЕА, коммерчески доступной от Multichannel
- 150039788
Systems MCS GmbH (Ройтлинген, Германия), состоящей из 4-канального генератора импульсов и 60канального основного модуля с усилителем, присоединенного к 60-канальной плате A/D. Программное обеспечение для стимуляции, регистрации данных и анализа представляло собой коммерчески доступное от Multi Channel Systems: MC Stim (II версия 2.0.0) и МС Rack (версия 3.8.1.0) соответственно. Все эксперименты проводили с применением 3-мерной МЕА (Ayanda Biosystems, S.A., СН-1015, Лозанна, Швейцария), которая состояла из 60 электродов с заостренной формой и высотой 60 мкм, расстояние между которыми составляло 100 мкм. Электроды МЕА изготовлены из платины с сопротивлением в диапазоне 600-900 кОм.
Схема эксперимента.
Эффект тестируемых соединений в отношении синаптической передачи исследовали путем регистрации внеклеточных полевых потенциалов в срезах гиппокампа. Хорошо известно, что синаптическая передача может обеспечивать отклонение внеклеточного полевого потенциала, что отражает синхронную синаптическую активность в популяции нейронов, окружающих регистрирующий электрод.
Регистрация данных внеклеточного полевого потенциала.
После получения срезы головного мозга помещали на чип МЕА под микроскопом и размещали 60 регистрирующих электродов в области синапса мшистых волокон (зубчатая извилина - САЗ) гиппокампа. Растворы ACSF непрерывно перфузировали со скоростью потока 2 мл/мин Температуру в камере МЕА поддерживали на уровне 32±0,1°C, при этом элемент Пельтье был расположен на основном модуле с усилителем МЕА. Все данные регистрировали с помощью установки МЕА, коммерчески доступной от Multichannel Systems MCS GmbH (Ройтлинген, Германия). Два соседних электрода в чипе выбирали для стимуляции мшистых волокон в области хилуса зубчатой извилины и fEPSP регистрировали в терминальной зоне области САЗ гиппокампа. Полевые внеклеточные постсинаптические потенциалы (fEPSP) вызывали путем стимуляции входного сигнала на мшистых волокнах с помощью двух последовательных электрических импульсов с интервалом 30 мс и повторяли каждые 60 с (длительность импульса составляла 100 мкс, и сила стимулирующего тока (мкА) составляла 40% относительно максимальной амплитуды). Контрольные эксперименты проводили одновременно со срезами, которые произвольным образом относили к обрабатываемым с помощью среды-носителя (DMSO). N обозначает число срезов, и, как правило, 3-4 среза использовали из расчета на каждое животное. Вызванные ответы на уровне постсинаптических нейронов (fEPSP) регистрировали, если они удовлетворяли определенным критериям качества, в том числе: правильное расположение, стабильный фон (отклонение в пределах ±10% в течение десяти последовательных минут, амплитуда >100 мкВ). Данные fEPSP от выбранных электродов собирали при 5 кГц и записывали на жесткий диск ПК для осуществления анализа в режиме офлайн. Одновременно значения амплитуды fEPSP от выбранных электродов собирали в режиме реального времени (с помощью программы МС Rack) для контроля и отслеживания качества эксперимента. Данные наносили на график в файле электронной таблицы для осуществления анализа в режиме офлайн.
Слабую долговременную потенциацию (LTP) вызывали с помощью однократного высокочастотного стимула (HFS) с обеспечением потенциации fEPSP, меньше максимальной.
Результаты этого теста показаны на фиг. 1, что касается эффекта соединения 110 в качестве ингибитора PDE2 в отношении содействия индукции LTP с помощью протокола слабой долговременной потенциации.
Эффект соединений 70, 25а и 220 (свободное основание) в отношении синаптической передачи
Важные реагенты.
Сахарозный буфер для препарирования, содержащий (в мМ) NaCl (124), KCl (4,4), NaH2PO4.H2O (1,2), MgCl.6Н2О (2), NaHCO3 (26), СаС12.2Н2О (2), D-глюкозу (10), уравновешенный газовой смесью 95% О2 и 5% СО2. Искусственная цереброспинальная жидкость (ACSF), применяемая в ходе уравновешивания и регистрации, содержала (в мМ): NaCl (124), KCl (4,4), NaH2PO4.H2O (1,2), MgSO4.7H2O (2), NaHCO3 (26), СаС12.2Н2О (2), D-глюкозу (10), аскорбиновую кислоту (2), уравновешенные газовой смесью 95% О2 и 5% СО2. Соединения 1, 2 и 3 получали непосредственно перед применением из исходного раствора (с DMSO) в ACSF и с конечной концентрацией DMSO, которая не превышала 0,1%. Все реагенты были от Sigma-Aldrich, если не указано иное.
Животные (вид, вес и пол).
Используемыми животными были самцы крыс Спраг-Доули с весом в диапазоне 145-200 г, приобретенные у Charles River, Германия.
Получение срезов гиппокампа.
Крыс подвергали анестезии с помощью изофлурана и немедленно подвергали декапитации. Головной мозг помещали вблизи агарозного блока и разрезали горизонтально с помощью лезвия, двигающегося от передней к задней части. Срезы нарезали при толщине 350 мкм с применением вибрационного микротома для тканей (Leica VT1200S) в холодной (4°C) насыщенной диоксидом углерода искусственной спинномозговой жидкости (ACSF) со скоростью 0,08 мм/с и амплитудой колебаний 0,75 мм. После нарезания срезы уравновешивали при 35°C в течение 20 мин, а затем обеспечивали восстановление при
- 151 039788 комнатной температуре в течение по меньшей мере одного часа в ACSF. Обычно получали шесть-восемь срезов из каждого головного мозга и применяли три-четыре на эксперимент.
Система тестирования.
Все данные регистрировали с помощью системы Slicemaster, коммерчески доступной от Scientifica (UK), состоящей 4 регистрирующих станций. Стимулирующий электрод из платины, покрытый Isonel, помещали в область САЗ гиппокампа крысы. Регистрирующие микроэлектроды (сопротивление приблизительно 5 МОм) заполняли ACSF и помещали в СА1 гиппокампа крысы. Расположение стимулирующих и регистрирующих электродов подтверждали с помощью применения стимуляции током 20 с. Применяли предварительную регистрацию 20 мин, чтобы удостовериться в стабилизации ответов от срезов. Стимуляцию током применяли с помощью разъединителя тока A365 (World Precision Instruments). Данные получали с помощью pClamp 10, связанного с платой сбора данных Digidata 1440A (Molecular Devices, Саннивейл, Калифорния, США), при частоте регистрации сигналов от образцов 10 кГц с фильтрацией низких частот при 1 кГц и фильтрацией высоких частот при 3 Гц. Применяли стимулы в одну сотню мкс в диапазоне 0-100 мкА для вызова fEPSP и величину fEPSP определяли путем измерения максимальной отрицательной амплитуды или 20-80% наклона восходящей фазы. Данные анализировали в режиме офлайн с применением специально разработанных алгоритмов в IGORpro (Wavemetrics).
Схема эксперимента.
Эффект соединений 70, 25а и 220 (свободное основание) в отношении синаптической передачи исследовали путем регистрации внеклеточных полевых потенциалов в срезах гиппокампа. Хорошо известно, что синаптическая передача может обеспечивать отклонение внеклеточного полевого потенциала, что отражает синхронную синаптическую активность в популяции нейронов, окружающих регистрирующий электрод.
Регистрация данных внеклеточного полевого потенциала.
После восстановления срезы непрерывно перфузировали с помощью обогащенной кислородом ACSF (2,5 мл/мин). Раствор предварительно нагревали на водяной бане перед закачиванием в регистрирующую камеру. Регистрацию данных проводили при 32°C. Регистрировали одновременно fEPSP от четырех независимых срезов головного мозга. N обозначает число срезов, и, как правило, 3-4 среза использовали из расчета на каждое животное. Вызванные ответы на уровне пост-синаптических нейронов (fEPSP) регистрировали, если они удовлетворяли определенным критериям качества, в том числе: правильное расположение, стабильный фон (отклонение в пределах ±10% в течение десяти последовательных минут, амплитуда >100 мкВ). Данные fEPSP от выбранных электродов собирали при 5 кГц и записывали на жесткий диск ПК для осуществления анализа в режиме офлайн. Одновременно значения амплитуды fEPSP собирали в режиме реального времени (с помощью Pclamp) для контроля и отслеживания качества эксперимента. Данные наносили на график в файле электронной таблицы для осуществления анализа в режиме офлайн.
Получали кривые ввода-вывода и интенсивность стимуляции устанавливали при 50% от диапазона между минимальным и максимальным fEPSP (определенным с помощью либо силы стимуляции, достаточной для получения популяционного спайка, либо плато амплитуды fEPSP). В случае экспериментов LTP срезы затем стимулировали каждые 60 с в течение 20 мин исходного периода (среда-носитель с соединением или без него) и последующей немедленной тета-импульсной стимуляцией (показано на фиг. 2). После тета-импульсной стимуляции срезы затем стимулировали каждые 60 с в течение 60 мин для измерения уровня LTP.
Результаты данного теста показаны на фиг. 3 в отношении эффекта соединения 70, на фиг. 4 в отношении эффекта соединения 25а и на фиг. 5 в отношении эффекта соединения 220 (свободное основание) в отношении содействия индукции LTP с помощью протокола слабой долговременной потенциации.
Исследование PK/PD однократной дозы PDE2i на собаках
В этих исследованиях использовали самок и самцов собак породы Marshall Beagle (1-6 лет): 2 самца и 2 самки из расчета на каждую группу обработки. Цереброспинальную жидкость (CSF) отбирали с помощью канюли с направляющей иглой из бокового желудочка головного мозга находящихся в сознании животных, подключенных к аппарату.
Образцы CSF и крови на исходном уровне отбирали за 2-5 дней перед введением дозы. Животным не давали пищи в течение ночи и на следующее утро вводили дозу натощак (перорально с помощью зонда). В предварительно определенные периоды времени после введения дозы собирали кровь и/или CSF для измерения уровней соединения и cGMP. Анализ cGMP выполняли с помощью LC-MS/MS: 25 мкл CSF разбавляли с помощью 125 мкл искусственной CSF (STIL (20 нг/мл)), центрифугировали и вводили в колонку 25 мкл. Применяемые системы представляли собой: систему для UPLC Shimadzu SIL-30 (колонка Hypercarb (50x1 мм (3 мкм)), градиент: водный раствор основания (10 мМ карбоната аммония)ацетонитрил (от 5% до 98% за 5,5 мин) при скорости потока 250 мкл/мин) и систему API Sciex 5500, оснащенную источником ESI (селективный MRM переход (масса/заряд 346,1^152,1 (время выдержки 75 мс)). Результаты этого исследования обобщены на фиг. 6-15.
- 152 039788
Повышение синаптической пластичности с помощью ингибирования PDE2 в цепи коллатералей шаффера-СА1 гиппокампа у подвергнутых анестезии крыс: ситуационное исследование с применением соединения 110
Введение.
Синаптическая пластичность является основополагающим механизмом многих нейробиологических функций. Долговременная потенциация (LTP), продолжительное строго локализированное увеличение силы синаптической связи в гиппокампе, а также коре головного мозга, представляет собой синаптическую основу памяти и обучения (Cooke and Bliss, Curr Opin Investig Drugs. 2005, 6(1):25-34). Увеличение и уменьшение силы синаптической связи зависит от активности пресинаптических и постсинаптических нейронов, от того, как нейронные сети головного мозга функционируют при создании чувственного представления множества объектов в памяти и получения двигательного ответа. Разные признаки этих синаптических изменений в интактном головном мозге являются критически важными в функционировании разных типов нейронных сетей и функционировании нескольких разных нейронных цепей головного мозга. Следовательно, ожидается, что LTP будет ослабленной при возрастных психических и нейродегенеративных расстройствах, как, например, болезнь Альцгеймера (Bergado and Almaguer, Neural Plast. 2002;9(4):217-32; Rowan et al., Biochem Soc Trans. 2005; 33: 563-7). Процедура, проводимая в тесно связанных участках интактного головного мозга животных, находящихся под анестезией, является эффективным способом изучения устойчивых изменений в отношении эффективной плотности и пластичности в цепи гиппокамп-кора головного мозга после тетанической электрической стимуляции с низкой и высокой частотой, доставляемой за одиночные или двойные импульсы (Albensi et al., Exp Neurol. 2007; 204А:1-13). Исследования помогают расширить понимание нейронных цепей, лежащих в основе развития нарушения силы синаптической связи, т.е. определить прямой путь в цепи и роль конкретной биологической мишени, охваченной конкретными участками, в опосредовании ослабления синаптической связи. Процедура позволяет тестировать фармакологические средства, нацеленные на восстановление патологической нейропластичности, например, на обращение дефектов LTP и плотности нейронных сетей путем повышения эффективности синаптической передачи, что, как ожидается, имеет благоприятные эффекты в отношении связанных когнитивных и обучающих способностей (Cooke and Bliss, 2005; Albensi et al., 2007).
Фосфодиэстеразы (PDE) представляют собой класс ферментов, отвечающих за метаболическую инактивацию вторичных мессенджеров, циклического 3',5'-аденозинмонофосфата (сАМР) и циклического 3',5'-гуанозинмонофосфата (cGMP) (Francis et al. Physiol Rev. 2011, 9: 651-90). Классифицировали 11 семейств PDE включительно на основании их структуры, ферментативной активности и распространения (Omori and Kotera Circ Res. 2007; 100:309-27). Роль PDE в усилении передачи сигнала с помощью циклических нуклеотидов делает эти ферменты привлекательными мишенями для регуляции возбудимости и повышения эффектов взаимодействия нейронов. В головном мозге PDE2 в основном экспрессируется в коре головного мозга, гиппокампе и полосатом теле, где он контролирует гидролиз cAMP. За последние несколько лет исследовательские группы сосредоточились на разработке ингибиторов PDE2, нацеленных на изменение активности внутриклеточных вторичных мессенджеров, cGMP и cAMP, с оказанием влияния на пластичность и когнитивные процессы (Duinen et al., Curr Pharm Des. 2015; 21:3813-28; Gomez and Breitenbucher, Bioorg Med Chem Lett. 2013; 23: 6522-7; Xu et al., Neurobiol Aging. 2015; 36:955-70; Barco et al., Expert Opin Ther Targets 2003; 7: 101-114).
В данном исследовании изучали, приводит ли ингибирование PDE2 с помощью соединения 110 к изменениям в возбудимости или в способности проявления синаптической потенциации в синапсах коллатералей Шаффера-CA1 гиппокампа у подвергнутых анестезии с помощью уретана крыс Спраг-Доули.
Материалы и способы
Животные.
Данные эксперименты проводили в строгом соответствии с руководствами Международной ассоциации по аттестации и аккредитации содержания лабораторных животных (AAALAC) и директивой Совета Европейских Сообществ (86/609/ЕЕС) от 24 ноября 1986 г., и их утверждал локальный этический комитет. Крыс Спраг-Доули с весом 170-200 г на момент проведения хирургического вмешательства содержали группой в вентилируемых клетках с установленным 12 ч циклом света/темноты (включение света в 07:00 утра) после их доставки в виварии и содержали в контролируемых условиях окружающей среды.
Хирургическое вмешательство и электрофизиология.
Крыс подвергали анестезии с помощью внутрибрюшинной инъекции уретана в дозе 1,5 г/кг веса тела. Животным надевали стереотаксическую раму для вживления электродов, и температуру их тела постоянно контролировали с помощью ректального зонда и поддерживали на уровне 37°C с помощью электрической грелки. Дополнительное введение уретана (0,2-0,5 г/кг) проводили при необходимости обеспечения полной анестезии. Два небольших отверстия (диаметром 1 мм) просверливали в черепе в месте расположения структур левого гиппокампа для стимулирующего и регистрирующего электродов. Биполярный стимулирующий электрод; пара скрученных проводов из вольфрама (75 мкм) с наконечниками, отделенными в горизонтальном направлении на расстоянии 0,125 мкм друг от друга, располагали на пути коллатералей Шаффера коммисуральных нервных волокон (SC) (АР -3,4, ML -2,5, DV -1,9-2,4), и
- 153 039788 регистрирующий электрод из вольфрама располагали в Stratum Radiatum области Cornu Ammonis (CA1) дорсальной части гиппокампа (АР -4,2, ML -4,0, DV -2,5-3,4) (фиг. 16а). Твердую оболочку головного мозга прокалывали через оба отверстия и стимулирующий и регистрирующий электроды опускали очень медленно (0,2 мм/мин) через кору головного мозга и верхние слои гиппокампа в mPP и DG дорсального отдела гиппокампа. В ходе хирургического вмешательства прилагали все усилия, чтобы минимизировать страдание животного.
Наклон полевого возбуждающего постсинаптического потенциала (fEPSP) использовали в качестве меры возбуждающей синаптической передачи. Одиночные монофазные прямоуголные импульсы длительностью 0,1 или 0,2 мс, генерируемые блоком питания постоянного тока (МС, Германия), применяли, например, по отношению к SC и вызванные ответы возникали в СА1. Сигналы внеклеточного полевого потенциала усиливали; фильтровали с помощью фильтра с полосой пропускания от 1 Гц до 2 кГц, преобразовывали в цифровую форму и осуществляли анализ с помощью заказного программного обеспечения. Электроды опускали до тех пор, пока не наблюдали отрицательное отклонение fEPSP с максимальным ответом. Для обеспечения стабилизации возбудимости перед измерениями предоставлялось не менее 30 мин. Затем подавали монофазные импульсы постоянного тока при значениях интенсивности стимула в диапазоне от 1 до 12 В для получения кривых ввода/вывода (I/O) и определения максимальных значений наклона fEPSP, и затем интенсивность стимула, которая обеспечивала 50% от максимального ответа (т.е. контрольный импульс), применяли в следующих экспериментах.
Индукция LTP.
После определения кривых I/O затем применяли тестовую стимуляцию каждые 30 с до и после тетанической стимуляции. Для каждой временной точки, для которой проводились измерения во время экспериментов, усредняли пять зарегистрированных значений вызванных ответов при частоте 0,033 Гц. Исходный уровень активности измеряли каждые 5 мин в течение по меньшей мере 1 ч для обеспечения устойчивого исходного уровня. Последние 30 мин регистрации исходного уровня (6 моментов времени) непосредственно после применения лекарственного средства усредняли и применяли в качестве контроля для индукции LTP. Тетанизацию индуцировали с помощью протокола высокочастотной стимуляции (HFS) 200-Гц, состоящего из прямоугольных импульсов (продолжительность стимула 0,2 мс, 10 импульсов для 20 стимулов, интервал между импульсами 2 с), при интенсивности стимула, который вызывал получение наклона fEPSP, который составлял примерно 50% от максимального ответа. fEPSP регистрировали в течение 120 мин после HFS для определения возможных изменений в синаптическом ответе нейронов SC-CA1. Измерения LTP получали из соотношений полевого EPSP из нормализованного среднего наклона, полученного через 120 мин после HFS, деленного на нормализованный средний наклон, собранный за 30 мин перед HFS. Наклон предполагаемого fEPSP измеряли от окончания артефакта, вызванного стимулом, и до минимальной точки отрицательного пика. В 80% интервале между этими точками применяли анализ с применением линейного приближения с помощью метода наименьших квадратов для расчета наклона EPSP.
Гистология.
В конце электрофизиологического исследования проводили электрическую стимуляцию с силой тока 500 мкА в течение 30 с с получением очага поражения в зоне наконечников стимулирующего и регистрирующего электродов и головные мозги собирали для гистологического подтверждения правильности размещения электродов. Срезы головного мозга (20 мкм) изучали с помощью светового микроскопа. Животных с неправильным размещением электродов исключали из исследования.
Соединение 110 растворяли в 20% циклодекстрине (CD) + 1HCl. Для подкожного введения соединение 110 растворяли в 20% CD +1HCl с достижением конечных концентраций 2 и 4 мг/мл.
Статистический анализ.
Для каждого животного стабильные ответы на исходном уровне (до тетануса) в течение 30 мин усредняли и среднее значение нормализовали, принимая за 100%, и данные ответа после тетануса выражали относительно среднего значения на исходном уровне. Сравнение эффектов среды-носителя и соединения 110 после тетануса проводили в интервалах 30 мин с применением однофакторного дисперсионного анализа (ANOVA), и применяли апостериорный анализ наименьшего значимого отличия (LSD) для групповых сравнений.
Результаты.
В наклоне fEPSP пути SC-CA1 среди I/O исследуемых групп различий обнаружено не было, что дает основания предполагать, что возбудимость клеток СА1 являлась сходной у всех животных (фиг. 16b, c). Базальная синаптическая передача усиливалась, поскольку были обнаружены значительные изменения при сравнении соединения 110 (20 и 40 мг/кг) и контроля, обработанного средой-носителем во время исходного уровня до тетануса (+8 и 9% соответственно) (фиг. 16d, e). В рамках парадигмы индукции LTP подкожное введение соединения 110 (20 и 40 мг/кг) повышало устойчивую (>2 ч.) синаптическую потенциацию (137±8% и 142±5% по сравнению с уровнем для среды-носителя 119±4% соответственно) (фиг. 16d, диаграмма на вставке). Через 0-30 мин после завершения тетанизации наклоны fEPSP составляли 153±5% и 155±4% по сравнению с уровнем для среды-носителя, составляющим 139±1%, р<0,05). В по- 154 039788 следующих интервалах 30 мин анализ кривых стимул-ответ выявил значительное устойчивое увеличение в fEPSP при дозе 40 мг/кг (30-60 мин: 146±6%, 60-90 мин: 137±5% и 90-120 мин: 129±5% по сравнению с уровнем для среды-носителя 125±6, 116±9 и 106±13%, р<0,05 соответственно). В целом соединение 110 способствует базальной синаптической передаче и LTP in vivo.
Допустимые варианты не следует рассматривать как отклонение от объема настоящего изобретения. Будет очевидно, что специалисты в данной области техники могут изменять описанное таким образом изобретение различными способами.
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Claims (15)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Соединение, характеризующееся формулой (I),
    или его стереоизомерная форма, где
    Ra выбран из группы, состоящей из H, CH3, CN и CHF2;
    RB представляет собой радикал, выбранный из группы, состоящей из (a) и (c)
    (а) , (с), где
    R1 представляет собой H, F или CH3;
    R2 представляет собой H, метил или н-бутил; при условии, что если R2 представляет собой H, то R1 представляет собой F или CH3;
    R3 представляет собой Ar, Het или Ar-C2-4алкенил; где
    Ar представляет собой фенил или нафтил, каждый из которых необязательно замещен 1, 2 или 3 заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена; CN; NR2AR2B, где каждый из R2A и R2B независимо выбран из H и CH3; OH; C1-6алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена; C1-6алкила, замещенного CN; C3-6циклоалкила; C1-6алкилокси, необязательно замещенного 1, 2 или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена; и пиразолила;
    Het представляет собой:
    (i) 5-членный гетероарил, выбранный из группы, состоящей из 1H-пирролила; тиенила; фуранила; 1H-пиразолила; 1H-имидазолила; 1,2-оксазолила; 1,3-оксазолила и тиазолила; каждый из которых может быть необязательно замещен 1, 2 или 3 заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена; C1-4алкила, необязательно замещенного 1, 2, или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена; NR3AR3B, где каждый из R3A и R3B независимо выбран из H и CH3; и фуран-2-ила; или (ii) 6-членный гетероарил, выбранный из группы, состоящей из пиридила, пиримидинила, пиразинила и пиридазинила; каждый из которых может быть необязательно замещен 1, 2 или 3 заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена; OH; CN; NR4AR4B, где каждый из R4A и R4B независимо выбран из H и CH3; C1-4алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена; C1-4алкила, замещенного OH; О3-6циклоалкила; C3-6циклоалкилокси; C1-4алкилокси; и C1-4алкилоксиС1-4алкила; или (iii) 8-10-членный бициклический частично ненасыщенный гетероциклил, выбранный из группы, состоящей из 2,3-дигидро-1-бензофуранила; 2H-хроменила; 3,4-дигидро-2H-хроменила; 2,3-дигидро-Шиндолила, необязательно замещенного в положении 1 1-ацетилом; 2,2-дифтор-1,3-бензодиоксолила; 1,3бензодиоксолила, необязательно замещенного заместителем, представляющим собой метил; 3,4-дигидро2H-1,4-бензоксазинила, необязательно замещенного C1-4алкилом; 5,6,7,8-тетрагидроимидазо [1,2а]пиридинила; 5,6,7,8-тетрагидрохинолинила, необязательно замещенного заместителем, представляющим собой атом галогена; и 2,3-дигидропиразоло[5,1-b][1,3]оксазолила; или (iv) 9-10-членный бициклический гетероарил, выбранный из группы, состоящей из 1бензофуранила; 1-бензотиофенила; 1H-индолила; 1,3-бензоксазолила; 1,3-бензотиазолила; индолизинила; 1H-бензимидазолила; имидазо[1,2-а]пиридинила; пиразоло[1,5-а]пиридинила; 1H-тиено[2,3c]пиразолила; имидазо[2,1-5]тиазолила; пирроло[2,3-c]пиридинила; тиено[3,2-5]пиридинила; хинолини-
    - 155 039788 ла; изохинолинила; хиноксалинила; 1,8-нафтиридинила и 1,6-нафтиридинила; каждый из которых может быть необязательно замещен 1 или 2 заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена; OH; NR5AR5B, где каждый из R5A и R5B независимо выбран из H и CH3; C1.4αлкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена; и C1.4алкилокси;
    при условии, что соединение не является
    или его N-оксид, или фармацевтически приемлемая соль.
  2. 2. Соединение по п.1, где
    R3 представляет собой Ar или Het; где
    Ar представляет собой фенил, необязательно замещенный 1, 2 или 3 заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена; CN; OH; C1.6αлкuлα, необязательно замещенного 1, 2 или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена; C1.6aлкила, замещенного CN; C3.6циклоалкила и C1.6алкилокси, необязательно замещенного 1, 2 или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена;
    Het представляет собой:
    (i) 5-членный гетероарил, выбранный из группы, состоящей из Ш-пирролила; тиенила; фуранила; 1H-пиразолила; 1H-имидазолила; 1,2-оксазолила; 1,3-оксазолила и тиазолила; каждый из которых может быть необязательно замещен 1, 2 или 3 заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена; C1.4αлкила, необязательно замещенного 1, 2, или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена; NR3aR3b, где каждый из R3a и R3b независимо выбран из H и CH3; и фуран-2-ила; или (ii) 6-членный гетероарил, выбранный из группы, состоящей из пиридила, пиримидинила, пиразинила и пиридазинила; каждый из которых может быть необязательно замещен 1, 2 или 3 заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена; OH; CN; NR4aR4b, где каждый из R4a и R4b независимо выбран из H и CH3; C1.4алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена; C3.6циклоалкила; C3.6циклоалкилокси и C1.4αлкилокси; или (iii) 8-10-членный бициклический частично ненасыщенный гетероциклил, выбранный из группы, состоящей из 2,3-дигидро-1-бензофуранила; 2H-хроменила; 3,4-дигидро-2H-хроменила; 2,3-дигидро-Шиндолила, необязательно замещенного в положении 1 1-ацетилом; 2,2,-дифтор-1,3-бензодиоксолила; 1,3бензодиоксолила, необязательно замещенного заместителем, представляющим собой метил; 5,6,7,8тетрагидроимидазо[1,2-а]пиридинила; 5,6,7,8-тетрагидрохинолинила, необязательно замещенного заместителем, представляющим собой атом галогена; и 2,3-дигидропиразоло[5,1-b][1,3]оксазолила; или (iv) 9-10-членный бициклический гетероарил, выбранный из группы, состоящей из 1бензофуранила; 1-бензотиофенила; 1H-индолила; 1,3-бензоксазолила; 1,3-бензотиазолила; индолизинила; 1H-бензимидазолила; имидазо[1,2-а]пиридинила; пиразоло[1,5-а]пиридинила; 1H-тиено[2,3c]пиразолила; тиено[3,2-b]пиридинила; хинолинила; 1,8-нафтиридинила и 1,6-нафтиридинила; каждый из которых может быть необязательно замещен 1 или 2 заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена; OH; NR5aR5b, где каждый из R5a и R5b независимо выбран из H и CH3; C1.4αлкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена; и C1.4алкилокси;
    или его фармацевтически приемлемая соль.
  3. 3. Соединение по п.1 или 2, где RA представляет собой CH3 или CHF2.
  4. 4. Соединение по любому из пп.1-3, где R3 представляет собой Het.
  5. 5. Соединение по любому из пп.1-4, где R3 представляет собой:
    (i) 6-членный гетероарил, выбранный из группы, состоящей из пиридила, пиримидинила, пиразинила и пиридазинила; каждый из которых может быть необязательно замещен 1, 2 или 3 заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена; OH; CN; NR4aR4b, где каждый из R4a и R4b независимо выбран из H и CH3; C1.4алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена; C3.6циклоалкила;
    - 156 039788
    C3.6циклоалкилокси и С1-4алкилокси; или (ii) 9-10-членный бициклический гетероарил, выбранный из группы, состоящей из 1бензофуранила; 1-бензотиофенила; 1H-индолила; 1,3-бензоксазолила; 1,3-бензотиазолила; индолизинила; 1H-бензимидазолила; имидазо[1,2-а]пиридинила; пиразоло[1,5-а]пиридинила; 1И-тиено[2,3c]пиразолила; тиено[3,2-Ь]пиридинила; хинолинила; 1,8-нафтиридинила и 1,6-нафтиридинила; каждый из которых может быть необязательно замещен 1 или 2 заместителями, каждый из которых независимо выбран из группы, состоящей из галогена; OH; NR5aR5b, где каждый из R5a и R5b независимо выбран из H и СН3; C1.4алкила, необязательно замещенного 1, 2 или 3 независимо выбранными заместителями, представляющими собой атом галогена; и C1.4алкилокси.
  6. 6. Соединение по любому из пп.1-5, характеризующееся формулой (I-а) или (I-c),
    (Ι-a), (1-с) где Ra, R2 и R3 определены в любом из пп.1-5.
  7. 7. Соединение по любому из пп.1-6, где соединение представляет собой
  8. 8. Фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество соединения по любому из пп.1-7 и фармацевтически приемлемый носитель.
  9. 9. Применение соединения по любому из пп.1-7 в качестве лекарственного препарата для лечения или предупреждения расстройства центральной нервной системы.
  10. 10. Применение соединения по любому из пп.1-7 для лечения или предупреждения расстройства центральной нервной системы, выбранного из болезни Альцгеймера; инсульта; нарушения обучаемости; расстройства или состояния, включающего в качестве симптома синдром дефицита внимания и/или нарушение познавательной деятельности; легкого когнитивного нарушения; возрастного когнитивного нарушения; когнитивного нарушения, связанного с восприятием, вниманием, обучением или памятью; и нарушений памяти.
  11. 11. Применение по п. 10, где расстройство центральной нервной системы представляет собой болезнь Альцгеймера.
  12. 12. Способ получения фармацевтической композиции по п.8, отличающийся тем, что фармацевтически приемлемый носитель тщательно смешивают с терапевтически эффективным количеством соединения по пп.1-7.
  13. 13. Применение соединения по любому из пп.1-7 в комбинации с дополнительным фармацевтическим средством для лечения или предупреждения состояния, приведенного в любом из пп.10, 11.
  14. 14. Продукт, содержащий:
    (a) соединение по любому из пп. 1-7 и (Ь) дополнительное фармацевтическое средство в виде комбинированного препарата для одновременного, раздельного или последовательного применения в лечении или предупреждении состояния, приведенного в любом из пп.10, 11.
  15. 15. Способ лечения расстройства, выбранного из болезни Альцгеймера; инсульта; нарушения обучаемости; расстройства или состояния, включающего в качестве симптома синдром дефицита внимания и/или нарушение познавательной деятельности; легкого когнитивного нарушения; возрастного когнитивного нарушения; когнитивного нарушения, связанного с восприятием, вниманием, обучением или памятью; и нарушений памяти, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп.1-7.
EA201991109A 2016-11-02 2017-10-31 Производные [1,2,4]триазоло[1,5-a]пиримидина в качестве ингибиторов pde2 EA039788B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP16196924 2016-11-02
PCT/EP2017/077910 WO2018083098A1 (en) 2016-11-02 2017-10-31 [1,2,4]triazolo[1,5-a]pyrimidine derivatives as pde2 inhibitors

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201991109A1 EA201991109A1 (ru) 2019-09-30
EA039788B1 true EA039788B1 (ru) 2022-03-14

Family

ID=57240919

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201991109A EA039788B1 (ru) 2016-11-02 2017-10-31 Производные [1,2,4]триазоло[1,5-a]пиримидина в качестве ингибиторов pde2

Country Status (18)

Country Link
US (1) US10947242B2 (ru)
EP (1) EP3535267B1 (ru)
JP (1) JP7076441B2 (ru)
KR (1) KR20190070972A (ru)
CN (1) CN109923116B (ru)
AR (1) AR110026A1 (ru)
AU (1) AU2017353310B2 (ru)
BR (1) BR112019008404A2 (ru)
CA (1) CA3041412A1 (ru)
EA (1) EA039788B1 (ru)
ES (1) ES2864131T3 (ru)
IL (1) IL266305B (ru)
MX (1) MX2019005154A (ru)
MY (1) MY193511A (ru)
SG (1) SG11201903892UA (ru)
TW (1) TWI764950B (ru)
UA (1) UA125302C2 (ru)
WO (1) WO2018083098A1 (ru)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10947239B2 (en) 2015-11-02 2021-03-16 Janssen Pharmaceutica Nv [1,2,4]triazolo[1,5-a]pyrimidin-7-yl compound
BR112019008404A2 (pt) 2016-11-02 2019-09-17 Janssen Pharmaceutica Nv derivados de [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidina como inibidores da pde2
BR112019008163A2 (pt) 2016-11-02 2019-07-09 Janssen Pharmaceutica Nv compostos de [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidina como inibidores de pde2
US11319321B2 (en) 2016-11-02 2022-05-03 Janssen Pharmaceutica Nv [1,2,4]triazolo[1,5-a]pyrimidine compounds as PDE2 inhibitors
US11691971B2 (en) 2020-06-19 2023-07-04 Incyte Corporation Naphthyridinone compounds as JAK2 V617F inhibitors
WO2021257863A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 Incyte Corporation Pyrrolotriazine compounds as jak2 v617f inhibitors
US11767323B2 (en) 2020-07-02 2023-09-26 Incyte Corporation Tricyclic pyridone compounds as JAK2 V617F inhibitors
PE20231739A1 (es) 2020-07-02 2023-10-31 Incyte Corp Compuestos triciclicos de urea como inhibidores de jak2 v617f
US11661422B2 (en) 2020-08-27 2023-05-30 Incyte Corporation Tricyclic urea compounds as JAK2 V617F inhibitors
US11919908B2 (en) 2020-12-21 2024-03-05 Incyte Corporation Substituted pyrrolo[2,3-d]pyrimidine compounds as JAK2 V617F inhibitors
EP4298099A1 (en) 2021-02-25 2024-01-03 Incyte Corporation Spirocyclic lactams as jak2 v617f inhibitors

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015164508A1 (en) * 2014-04-23 2015-10-29 Dart Neuroscience, Llc Substituted [1,2,4] triazolo [1,5-a] pyrimidin-7-yl compounds as pde2 inhibitors
WO2017076900A1 (en) * 2015-11-02 2017-05-11 Janssen Pharmaceutica Nv [1,2,4]TRIAZOLO[1,5-a]PYRIMIDIN-7-YL COMPOUND

Family Cites Families (42)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PT100639A (pt) 1991-06-27 1993-09-30 Univ Virginia Commonwealth Metodo para o tratamento terapeutico com compostos que sao ligandos ao receptor sigma e compostos ai utilizados, nomeadamente derivados fenilalquil-amina, aminotetralina,piperazina e piperidina
DE69934093T2 (de) 1998-01-27 2007-06-21 Aventis Pharmaceuticals Inc. SUBSTITUIERTE OXOAZAHETEROCYCLYL FAKTOR Xa HEMMER
US6194410B1 (en) 1998-03-11 2001-02-27 Hoffman-La Roche Inc. Pyrazolopyrimidine and pyrazolines and process for preparation thereof
US20040014744A1 (en) 2002-04-05 2004-01-22 Fortuna Haviv Substituted pyridines having antiangiogenic activity
ATE425967T1 (de) 2002-10-03 2009-04-15 Vertex Pharma Piperazin und piperadin-derivate fur die behandlung von neurologischen krankheiten
US20070275961A1 (en) 2003-06-04 2007-11-29 Vernalis (Cambridge) Limited. Triazolo ' 1, 5-A ! Pyrimidines and Their Use in Medicine
EP1781659B1 (en) 2003-07-16 2008-11-05 Janssen Pharmaceutica N.V. Triazolopyrimidine derivatives as glycogen synthase kinase 3 inhibitors
US7728025B2 (en) 2003-12-29 2010-06-01 Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. 2-heteroaryl-substituted benzimidazole derivative
AU2005286647A1 (en) 2004-09-20 2006-03-30 Xenon Pharmaceuticals Inc. Heterocyclic derivatives and their use as stearoyl-CoA desaturase inhibitors
TW200626155A (en) 2004-09-20 2006-08-01 Xenon Pharmaceuticals Inc Heterocyclic derivatives and their use as therapeutic agents
WO2006044687A2 (en) 2004-10-15 2006-04-27 Takeda San Diego, Inc. Kinase inhibitors
US7507842B2 (en) 2005-08-12 2009-03-24 Radiorx, Inc. Cyclic nitro compounds, pharmaceutical compositions thereof and uses thereof
WO2007113136A1 (de) 2006-03-30 2007-10-11 Basf Aktiengesellschaft Verwendung von substituierten riazolopyrimidinen zur bekämpfung von phyto pathogenen schadpilzen
JP2007332061A (ja) 2006-06-14 2007-12-27 Nippon Kayaku Co Ltd 新規ピラゾロ［１，５−ａ］ピリミジン誘導体及びその用途
US8153803B2 (en) 2006-07-18 2012-04-10 The General Hospital Corporation Compositions and methods for modulating sirtuin activity
US7928103B2 (en) 2006-10-17 2011-04-19 Boehringer Ingelheim International Gmbh Compounds which modulate the CB2 receptor
US8138168B1 (en) 2007-09-26 2012-03-20 Takeda Pharmaceutical Company Limited Renin inhibitors
GB0719803D0 (en) 2007-10-10 2007-11-21 Cancer Rec Tech Ltd Therapeutic compounds and their use
TWI481607B (zh) * 2009-12-17 2015-04-21 Lundbeck & Co As H 作為ｐｄｅ１０ａ酵素抑制劑的２－芳基咪唑衍生物
US20140018540A1 (en) * 2010-12-14 2014-01-16 Electrophoretics Limited Casein kinase 1delta (ck 1delta) inhibitors
JP5543039B2 (ja) 2011-02-23 2014-07-09 ファイザー・インク 神経障害治療のためのイミダゾ［５，１−ｆ］［１，２，４］トリアジン
BR112013033375B1 (pt) 2011-06-27 2022-05-10 Janssen Pharmaceutica N.V Derivados de 1-aril-4-metil-[1,2,4]triazolo[4,3-a]quinoxa-lina, seu uso, composição farmacêutica que os compreende, processo de preparação dos mesmos, solução estéril e composto intermediário
EP2758375A1 (en) 2011-09-23 2014-07-30 Advinus Therapeutics Limited Amide compounds, compositions and applications thereof
US9034882B2 (en) 2012-03-05 2015-05-19 Bristol-Myers Squibb Company Inhibitors of human immunodeficiency virus replication
SG11201405561RA (en) * 2012-03-09 2014-10-30 Lexicon Pharmaceuticals Inc PYRAZOLO[1,5-a]PYRIMIDINE-BASED COMPOUNDS, COMPOSITIONS COMPRISING THEM, AND METHODS OF THEIR USE
AU2015223049B2 (en) 2014-02-27 2019-03-21 Merck Patent Gmbh Heterocyclic compounds as NaV channel inhibitors and uses thereof
DK3119772T3 (da) 2014-03-19 2019-08-26 Boehringer Ingelheim Int Heteroaryl syk-hæmmere
CR20160493A (es) * 2014-04-25 2016-12-16 Pfizer Compuestos heteroaromáticos y su uso como ligandos de dopamina d1
CN105566321B (zh) 2014-10-29 2020-04-21 广东东阳光药业有限公司 杂芳化合物及其在药物中的应用
US10239882B2 (en) 2014-11-05 2019-03-26 Dart Neuroscience (Cayman) Ltd. Substituted 5-methyl-[1,2,4]triazolo[1,5-a]pyrimidin-2-amine compounds as PDE2 inhibitors
TWI530688B (zh) * 2014-11-18 2016-04-21 彭顯智 製備微奈米探針設備及方法
WO2016107602A1 (zh) 2015-01-01 2016-07-07 成都贝斯凯瑞生物科技有限公司 一类取代氮杂环衍生物及其应用
WO2016145614A1 (en) 2015-03-17 2016-09-22 Merck Sharp & Dohme Corp. Triazolyl pyrimidinone compounds as pde2 inhibitors
WO2017000276A1 (en) 2015-07-01 2017-01-05 Merck Sharp & Dohme Corp. Bicyclic heterocyclic compounds as pde2 inhibitors
WO2017000277A1 (en) 2015-07-01 2017-01-05 Merck Sharp & Dohme Corp. Substituted triazolo bicycliccompounds as pde2 inhibitors
WO2017066705A1 (en) 2015-10-14 2017-04-20 Aquinnah Pharmaceuticals, Inc. Compounds, compositions and methods of use against stress granules
CN105898377A (zh) 2015-12-11 2016-08-24 乐视网信息技术（北京）股份有限公司 用户终端、服务器及弹幕加载方法、系统
WO2017157882A1 (en) 2016-03-14 2017-09-21 Université Catholique de Louvain Serine biosynthetic pathway inhibitors
BR112019008404A2 (pt) 2016-11-02 2019-09-17 Janssen Pharmaceutica Nv derivados de [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidina como inibidores da pde2
BR112019008163A2 (pt) 2016-11-02 2019-07-09 Janssen Pharmaceutica Nv compostos de [1,2,4]triazolo[1,5-a]pirimidina como inibidores de pde2
US11319321B2 (en) 2016-11-02 2022-05-03 Janssen Pharmaceutica Nv [1,2,4]triazolo[1,5-a]pyrimidine compounds as PDE2 inhibitors
US20190359609A1 (en) 2016-12-16 2019-11-28 Janssen Pharmaceutica Nv Bicyclic oga inhibitor compounds

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2015164508A1 (en) * 2014-04-23 2015-10-29 Dart Neuroscience, Llc Substituted [1,2,4] triazolo [1,5-a] pyrimidin-7-yl compounds as pde2 inhibitors
WO2017076900A1 (en) * 2015-11-02 2017-05-11 Janssen Pharmaceutica Nv [1,2,4]TRIAZOLO[1,5-a]PYRIMIDIN-7-YL COMPOUND

Also Published As

Publication number Publication date
IL266305A (en) 2019-06-30
SG11201903892UA (en) 2019-05-30
US20190276462A1 (en) 2019-09-12
BR112019008404A2 (pt) 2019-09-17
EP3535267A1 (en) 2019-09-11
UA125302C2 (uk) 2022-02-16
EP3535267B1 (en) 2020-12-30
JP7076441B2 (ja) 2022-05-27
CN109923116B (zh) 2022-12-06
MY193511A (en) 2022-10-17
AU2017353310A1 (en) 2019-05-16
ES2864131T3 (es) 2021-10-13
WO2018083098A1 (en) 2018-05-11
EA201991109A1 (ru) 2019-09-30
TWI764950B (zh) 2022-05-21
CA3041412A1 (en) 2018-05-11
CN109923116A (zh) 2019-06-21
TW201831486A (zh) 2018-09-01
MX2019005154A (es) 2019-06-20
IL266305B (en) 2021-10-31
KR20190070972A (ko) 2019-06-21
AU2017353310B2 (en) 2021-08-12
JP2019532985A (ja) 2019-11-14
AR110026A1 (es) 2019-02-13
US10947242B2 (en) 2021-03-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA039788B1 (ru) Производные [1,2,4]триазоло[1,5-a]пиримидина в качестве ингибиторов pde2
AU2016348549B2 (en) [1,2,4]triazolo[1,5-a]pyrimidin-7-yl compound
CA2811714A1 (en) Imidazotriazinone compounds
EP3535269B1 (en) [1,2,4]triazolo[1,5-a]pyrimidine compounds as pde2 inhibitors
AU2017353313B2 (en) (1,2,4)triazolo(1,5-a)pyrimidine compounds as PDE2 inhibitors
CN107108608B (zh) 1,2,4-三唑并[4,3-a]吡啶化合物及其作为mGluR2受体的正向别构调节剂的用途