EA038192B1 - Фармацевтические композиции, содержащие диастереомеры макролида, способы их синтезирования и терапевтическое применение - Google Patents

Фармацевтические композиции, содержащие диастереомеры макролида, способы их синтезирования и терапевтическое применение Download PDF

Info

Publication number
EA038192B1
EA038192B1 EA201600191A EA201600191A EA038192B1 EA 038192 B1 EA038192 B1 EA 038192B1 EA 201600191 A EA201600191 A EA 201600191A EA 201600191 A EA201600191 A EA 201600191A EA 038192 B1 EA038192 B1 EA 038192B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
formula
compound
mage
proteins
iib
Prior art date
Application number
EA201600191A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201600191A1 (ru
EA201600191A8 (ru
Inventor
Томас Ниттоли
Нарешкумар Ф. Джаин
Томас Патрик Маркотан
Original Assignee
Регенерон Фармасьютикалз, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Регенерон Фармасьютикалз, Инк. filed Critical Регенерон Фармасьютикалз, Инк.
Publication of EA201600191A1 publication Critical patent/EA201600191A1/ru
Publication of EA201600191A8 publication Critical patent/EA201600191A8/ru
Publication of EA038192B1 publication Critical patent/EA038192B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/537—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines spiro-condensed or forming part of bridged ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5365—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
    • A61K47/6809—Antibiotics, e.g. antitumor antibiotics anthracyclins, adriamycin, doxorubicin or daunomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/12—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D498/18—Bridged systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/07—Optical isomers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

Изобретение касается композиций, включающих диастереомерные соединения с формулой I, формулой IIa, формулой IIb, демонстрирующих улучшенный терапевтический профиль в контексте ингибированной пролиферации клеток, по сравнению с соответствующими композициями, включающими смесь диастереомеров. Изобретение далее описывает конъюгат лиганда с лекарственным препаратом, сформированным с использованием диастереомера макролида. Изобретение также описывает новый способ получения диастереомеров макролида и их терапевтическое применение.

Description

Пролиферативные заболевания характеризуются неконтролируемым ростом и распространением аномальных клеток. Если распространение этих клеток не контролируется, заболевание может привести к смерти. Пролиферативные заболевания, например рак, могут лечиться хирургическим путем, радиотерапией, химиотерапией, гормонотерапией и/или иммунотерапией. Многие такие стратегии лечения, особенно химиотерапия, основываются на использовании антипролиферативных препаратов, ограничивающих распространение аномальных клеток. Антипролиферативные препараты, однако, как правило, неразборчивы в способности уничтожать клетки, поражая нормальные и аномальные клетки, основываясь только на том, реплицируется ли клетка. Тем не менее, большинство антипролиферативных препаратов требует относительно высокой концентрации в месте действия пролиферации аномальной клетки для эффективного воздействия. Именно такой комбинации обеспечения достаточного антипролиферативного лекарственного препарата на месте роста аномальных клеток, также не вызывая значительную гибель нормальных клеток системно или вблизи таких клеток, касается настоящее изобретение.
Различные подходы к целенаправленной доставке лекарственных средств были опробованы, включая использование конъюгатов для доставки препарата в область опухоли (таких как антитела или факторы роста) с токсинами, такими как Pseudomonas, или токсины дифтерии. Конъюгаты для использования в лечении рака, таким образом, доставляют антипролиферативное лекарственный препарат к популяции аномальных клеток. С недавних пор конъюгаты, которые включают токсин майтанзин, используются для лечения рака. Майтанзин продемонстрировал большую эффективность как антипролиферативный агент, но токсичность казалась проблемой для нормальных клеток. Существует необходимость в разработке конъюгатов на основе майтанзина, которые имеют достаточную активность для использования в терапии рака. Чем более активный или эффективный конъюгат на основе майтанзина при ингибировании или уничтожении популяции аномальных клеток, тем ниже концентрация конъюгата требуется, при этом преимущество состоит в снижении общего риска повреждения нормальных клеток.
Многие антипролиферативные композиции имеют асимметричные структуры, такие как семья майтанзиноидов макролидов, и может существовать в форме рацемической смеси, в форме отдельных энантиомеров с конфигурацией R и S или (+) и (-) на стереогенный центр, и различных диастереомеров. Настоящее изобретение показывает, что целенаправленная доставка единственного диастереомера майтанзиноида усиливает ингибирование пролиферации клеток по сравнению с доставкой соответствующей смеси диастереомеров. Поэтому диастереомеры в соответствии с вариантами, описанными в настоящем документе, могут использоваться для подготовки лекарственных препаратов с улучшенным терапевтическим профилем, который может быть полезен для лечения определенных заболеваний и состояний, в частности рака.
Настоящее изобретение касается смеси диастереомеров соединения формулы I
Y 1 представляет собой где X представляет собой
- 1 038192 или Н;
R1 и R2 независимо выбираются из Н или С1-С10-алкила и n равен 1;
где соединение формулы I представлено в диастереомерном избытке, превышающем 50%, при этом диастереомерный избыток основан на количествах по меньшей мере двух диастереомеров, имеющих разные стереохимические конфигурации хирального углерода, который связан с атомом серы в формуле I.
В варианте осуществления изобретения Y1 представляет собой
В варианте осуществления изобретения R1 и R2 представляют собой Н.
В варианте осуществления изобретения соединение формулы I представляет собой
или
В варианте осуществления изобретения соединение формулы I представляет собой
В варианте осуществления изобретения соединение формулы I представляет собой
Н он.РСНз
О
ОСН3
О
О .
В варианте осуществления изобретения диастереомерный избыток в смеси составляет не менее 95%, при этом диастереомерный избыток основан на количествах по меньшей мере двух диастереомеров, имеющих разные стереохимические конфигурации хирального углерода, который связан с атомом серы формулы I.
Настоящее изобретение также относится к диастереомеру соединения формулы I
- 2 038192
Y 1 представляет собой где X представляет собой
или Н;
R1 и R2 независимо выбираются из Н или С1-С10-алкила и n равняется 1.
Настоящее изобретение также относится к соединению формулы (i)
где соединение является стереомерно чистым.
Настоящее изобретение касается композиций, включающих множество молекул лекарственного препарата с формулой I, где молекулы лекарственного препарата, существующие в композиции, включают смесь, как минимум, двух диастереомеров, первого диастереомера и второго диастереомера, далее где указанный первый диастереомер и второй диастереомер являются идентичными, за исключением того, что указанные первый и второй диастереомеры имеют различную стереохимическую конфигурацию в хиральном углероде, и указанный первый или второй диастереомер присутствует в диастереомерном избытке в количестве, превышающем 50%.
В одном варианте изобретение описывает композиции, включающие множество молекул лекарственного препарата с формулой I, где n равняется 1, a R1 и R2, каждый независимо, является водородом.
В другом варианте композиция, включающая множество молекул лекарственного препарата с формулой I, присутствует в композиции в диастереомерном избытке приблизительно 60, 70, 80%, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более.
В определенных вариантах молекулы лекарственного препарата с формулой I присутствуют в композиции в диастереомерном избытке приблизительно от 90% приблизительно до 100%, или приблизительно от 95% приблизительно до 100%, или приблизительно от 98% приблизительно до 100%.
В другом варианте композиция включает множество молекул лекарственного препарата с формулой I, где один по крайней мере из двух диастереомеров характеризуется спектром 1Н NMR на фиг. 1.
- 3 038192
Как используется здесь, термин приблизительно, когда используется в отношении определенного числового обозначения, означает, что значение может изменяться от указанного значения не более чем на 1%. Например, как используется в настоящем документе, выражение приблизительно 100 включает и 101 и все промежуточные значения (например, 99,1; 99,2; 99,3; 99,4 и т.д.).
В другом варианте изобретение предусматривает композиции, включающие множество молекул лекарственного препарата с формулой I, где молекулы лекарственного препарата присутствуют в композиции в диастереомерном избытке больше чем 50% и демонстрируют большую антипролиферативную активность, чем соответствующая композиция, включающая молекулы лекарственного препарата с формулой I, которые не присутствуют в диастереомерном избытке больше чем 50%.
Далее изобретение предусматривает композиции, включающие множество молекул лекарственного препарата с формулой I, далее включающие терапевтически эффективное количество второго или дополнительного агента, включая, например, химиотерапевтического агента, противовоспалительного агента, антибиотика и т.п.
Вариант изобретения предусматривает композиции, включающие множество молекул лекарственного препарата с формулой I, представленные следующей структурой:
или или их смеси в диастереомерном избытке больше чем 50%.
В одном варианте изобретения один по крайней мере из двух диастереомеров является соединением с формулой (i)
В другом варианте один по крайней мере из двух диастереомеров является соединением с формулой (ii)
Настоящее изобретение также описывает соединение с формулой (i) или (ii)
- 4 038192
где соединение является стереомерно чистым.
Настоящее изобретение также описывает диастереомерную смесь, включающую соединение формулы IIa и IIb
где L представляет собой антитело или его антиген-связывающий фрагмент; и где соединение формулы IIa или IIb представлено в диастереомерном избытке, превышающем 50%, при этом диастереомерный избыток основан на количествах по меньшей мере двух диастереомеров, имеющих разные стереохимические конфигурации хирального углерода, который связан с атомом серы в формуле IIa или IIb.
В варианте изобретения L представляет собой антитело или его антиген-связывающий фрагмент, которые связывают опухоль-ассоциированный антиген, выбранный из группы, содержащей AFP, ALK, BAGE белки, β-катенин, brc-abl, BRCA1, BORIS, CA9, карбоангидразу IX, каспазу-8, CD20, CD40, CDK4, СЕА, CLEC12A, сМЕТ, CTLA4, циклин-В1, CYP1B1, EGFR, EGFRvIII, ErbB2/Her2, ErbB3, ErbB4, ETV6-AML, EphA2, Fra-1, FOLR1, GAGE белки, GD2, GD3, GloboH, глипикан-3, GM3, gp100, Her2, HLA/B-raf, HLA/k-ras, HLA/MAGE-A3, hTERT, IGF1R, LGR5, LMP2, MAGE белки, MART-1, мезотелин, ML-IAP, Muc1, Muc16 или CA-125, MUM1, NA17, NY-BR1, NY-BR62, NY-BR85, NY-ESO1, OX40, p15, p53, PAP, РАХ3, РАХ5, PCTA-1, PDGFR-α, PDGFR-β, PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C, PDGF-D, PLAC1, PRLR, PRAME, PSMA, OLH1, RAGE белки, Ras, RGS5, Rho, SART-1, SART-3, Steap-1, Steap-2, сурвивин, TAG-72, TGF-β, TMPRSS2, Tn, TNFRSF17, TRP-1, TRP-2, тирозиназу и уроплакин-3.
В варианте изобретения опухоль-ассоциированный антиген выбирается из группы, содержащей EGFRvIII, Her2, и Muc16.
- 5 038192
В варианте изобретения соединение формулы IIa или IIb представлено в диастереомерном избытке, превышающем 95%, при этом диастереомерный избыток основан на количествах по меньшей мере двух диастереомеров, имеющих разные стереохимические конфигурации хирального углерода, который связан с атомом серы в формуле IIa или IIb. В варианте изобретения соединение формулы IIa представляет собой
В варианте изобретения соединение формулы IIb представляет собой л нонРснз сн'
ОСНз о
Настоящее изобретение также относится к антипролиферативной фармацевтической композиции, содержащей смесь диастереомерных соединений формулы IIa или IIb Л н он ,РСНз
осн3 о
1з
ИЬ и фармацевтически приемлемый наполнитель, где L является антителом или его антиген-связывающим фрагментом и соединение формулы IIa или IIb представлено в диастереомерном избытке, превышающем 50%, при этом диастереомерный избыток основан на количествах по меньшей мере двух диастереомеров, имеющих разные стереохимические конфигурации хирального углерода, который связан с атомом серы в формуле IIa или IIb.
В варианте изобретения соединение формулы IIa или IIb представляет собой
- 6 038192 или
В варианте изобретения соединение формулы IIa или IIb представлено в диастереомерном избытке, превышающем 95%, при этом диастереомерный избыток основан на количествах по меньшей мере двух диастереомеров, имеющих разные стереохимические конфигурации хирального углерода, который связан с атомом серы в формуле IIa или IIb.
Настоящее изобретение также описывает способ лечения заболевания или расстройства, связанного с опухоль-ассоциированным антигеном, который выбирается из группы, содержащей AFP, ALK, BAGE белки, β-катенин, brc-abl, BRCA1, BORIS, CA9, карбоангидразу IX, каспазу-8, CD20, CD40, CDK4, СЕА, CLEC12A, сМЕТ, CTLA4, циклин-В1, CYP1B1, EGFR, EGFRvIII, ErbB2/Her2, ErbB3, ErbB4, ETV6-AML, EphA2, Fra-1, FOLR1, GAGE белки, GD2, GD3, GloboH, глипикан-3, GM3, gp100, Her2, HLA/B-raf, HLA/k-ras, HLA/MAGE-A3, hTERT, IGF1R, LGR5, LMP2, MAGE белки, MART-1, мезотелин, ML-IAP, Mucl, Muc16 или CA-125, MUM1, NA17, NY-BR1, NY-BR62, NY-BR85, NY-ESO1, OX40, p15, p53, PAP, PAX3, PAX5, PCTA-1, PDGFR-α, PDGFR-β, PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C, PDGF-D, PLAC1, PRLR, PRAME, PSMA, FOLH1, RAGE белки, Ras, RGS5, Rho, SART-1, SART-3, Steap-1, Steap-2, сурвивин, TAG-72, TGF-β, TMPRSS2, Tn, TNFRSF17, TRP-1, TRP-2, тирозиназу, и уроплакин-3; где способ заключается в введении терапевтически эффективного количества диастереомерной смеси соединений формулы IIa или IIb
где L является антителом или его антиген-связывающим фрагментом, связывающим указанный опухоль-ассоциированный антиген, и где соединение представлено в диастереомерном избытке, превышающем 50%, при этом диастереомерный избыток основан на количествах по меньшей мере двух диастереомеров, имеющих разные стереохимические конфигурации хирального углерода, который связан с атомом серы в формуле IIa или IIb.
В некоторых вариантах антитело или антиген-связывающий фрагмент имеет последовательности аминокислот, отличающиеся от вышеупомянутых антител, но сохраняющие способность к связыванию соответствующего опухоль-ассоциированного антигена. Такие различные антитела и фрагменты антитела могут включать одно или несколько дополнений, делеций или замен аминокислот по сравнению с родительской последовательностью, но демонстрируют биологическую активность, которая по сути эквивалентна активности описанных антител.
Два конъюгата считаются биоэквивалентными, если, например, они являются фармацевтическими эквивалентами или фармацевтическими альтернативами, уровень и степень поглощения которых не де
- 7 038192 монстрируют значительную разницу при введении в той же молярной дозе при подобных экспериментальных условиях, как при однократной так и при многократной дозе. Некоторые конъюгаты считаются эквивалентами или фармацевтическими альтернативами, если они будут эквивалентны в степени поглощения, но не в темпе поглощения, и все же смогут считаться биоэквивалентными, потому что такие различия в темпе поглощения являются намеренными и отражены в маркировке, не являются важными для достижения эффективных концентраций лекарственного средства в организме, например, при длительном использовании и считаются с медицинской точки зрения незначительными для определенного изученного фармацевтического продукта.
В одном варианте два конъюгата являются биоэквивалентными при отсутствии клинически значимых различий в безопасности, чистоте и эффективности.
В одном варианте изобретения два конъюгата являются биоэквивалентными, если пациент может один или несколько раз переключаться между исходным продуктом и биологическим продуктом без ожидаемого увеличения риска неблагоприятных последствий, включая клинически существенное изменение в иммуногенности или уменьшенную эффективность, по сравнению с продолжительной терапией без такого переключения.
В одном варианте изобретения два конъюгата являются биоэквивалентными, если они оба имеют одинаковый механизм действия или механизм действия является таковым, что условия использования таких механизмов известны.
Биоэквивалентность может быть продемонстрирована in vivo и in vitro способами. Меры по биоэквивалентности включают, например, (a) in vivo анализ у людей или других млекопитающий, у которых концентрация конъюгатов или их метаболитов измеряется в крови, плазме, сыворотке или другой биологической жидкости как функция времени; (b) in vitro анализ, который был скоррелирован и является довольно прогнозируемым по данным о биодоступности in vivo у человека; (с) in vivo анализ у людей или других млекопитающих, у которых надлежащий острый фармакологический эффект конъюгата (или его мишень) измеряется как функция времени; и (d) в хорошо контролируемом клиническом исследовании, устанавливающем безопасность, эффективность, биодоступность или биоэквивалентность конъюгата.
Настоящее изобретение также описывает новый способ приготовления смеси диастереомеров соединения с формулой (I)
нонРснз 9Нз о Т СН3 У г 11 1 о< /—х L II н3с'ЧЛу сн3 о* н3с ci О сн3 I где X представляет собой 0 \ \ / о > NyJ R! R2 О Y 1 представляет собой F F О. ЕЛ/ A^F rv0 I Jl IJ z ° > F F F zz N N VA l| Г 'N l| Г > J >=O или Н; R1 и R2 независимо выбираются из Н или C1-С10-αлкила и n равен 1; сн3 η O‘Na+ О‘К+ ./ 0- / s=o xs=o >=0 i>=0 L 0 > 9 9 Vy,
- 8 038192 процесс, включающий этапы:
(а) обеспечение взаимодействия (i) соединения формулы III (ii) соединения формулы IV
(iii) силикагеля и (iv) растворителя, включающего органический растворитель и воду; и (b) выделение соединения формулы I, представленного в диастереомерном избытке, превышающем 50%, где диастереомерный избыток основан на количествах по меньшей мере двух диастереомеров, имеющих разные стереохимические конфигурации хирального углерода, который связан с атомом серы в формуле I.
В варианте изобретения органический растворитель содержит полярный апротонный растворитель. В варианте изобретения полярный апротонный растворитель содержит ацетонитрил. В варианте изобретения органический растворитель и вода присутствуют в объемной пропорции от приблизительно 1:1 до приблизительно 4:1 или от приблизительно 1:1 до приблизительно 10:1.
В варианте изобретения молярная пропорция соединения с формулой III и соединения с формулой IV составляет от приблизительно 1:1 до приблизительно 1:3.
В варианте изобретения n равен 1, и R1 и R2, каждый независимо, представляет собой водород. В варианте изобретения соединение формулы III представляет собой
О где процесс включает на этапе (а) обеспечение взаимодействия в атмосфере аргона.
В варианте изобретения процесс включает на этапе (а) перемешивание соединения формулы III, соединения формулы IV; силикагеля, растворителя, включающего органический растворитель, и воды.
В варианте изобретения процесс после этапа (а) и перед этапом (b) включает (с) добавление (i) соединения формулы III
III:
(ii) соединения формулы IV
- 9 038192
IV (iii) силикагеля и (iv) растворителя, включающего органический растворитель и воду; и (d) обеспечение взаимодействия соединения формулы III, соединения формулы IV, силикагеля и растворителя, включающего органический растворитель и воду; при этом R1 и R2 независимо выбраны из Н или C1-С10-αлкила и n равен 1.
В варианте изобретения процесс включает в себя на этапе (с) выделение соединения с формулой I путем фильтрации. В варианте изобретения фильтрация производится посредством целита.
В варианте изобретения процесс дополнительно включает очистку соединения с формулой I посредством колоночной хроматографии на силикагеле. В варианте изобретения процесс дополнительно включает высушивание соединения с формулой I.
В определенных вариантах изобретение описывает способ приготовления композиции, включающей множество молекул лекарственного препарата с формулой I, где способ далее включает этап (d), где далее этап (d) включает очищение соединения с формулой I, полученного на этапе (с), как описано выше.
В определенных вариантах изобретение описывает способ приготовления композиции, включающей множество молекул лекарственного препарата с формулой I, где твердый субстрат выбирается из группы, состоящей из силикатного геля, целита, глинозема, цеолита и измельченных молекулярных сит. Другие подобные твердые субстраты могут также использоваться, если твердый субстрат допускает надлежащее расположение макролида III для осуществления стереоселективного дополнения из малеимида IV.
В определенных вариантах изобретение описывает способ приготовления композиции, включающей множество молекул лекарственного препарата с формулой I, где n равняется 1 и R1 и R2, каждый, является независимо водородом.
В определенных вариантах изобретение описывает способ приготовления композиции, включающей множество молекул лекарственного препарата с формулой I, где органический растворитель включает полярный апротонный растворитель, такой как DMF, DMA, HMPT, NMP, ацетонитрил, диоксан, ацетон, DMSO, THF, этилацетат, метилацетат, метиленхлорид, пропилен карбонат или их смеси.
В определенных вариантах изобретение описывает способ приготовления композиции, включающей множество молекул лекарственного препарата с формулой I, где полярный апротонный растворитель включает ацетонитрил.
В определенных вариантах изобретение описывает способ приготовления композиции, включающей множество молекул лекарственного препарата с формулой I, где органический растворитель и вода присутствуют в прямой пропорции от приблизительно 1:1 до приблизительно 4:1 или от приблизительно 1:1 до приблизительно 10:1.
В определенных вариантах изобретение описывает способ приготовления композиции, включающей множество молекул лекарственного препарата с формулой I, где молярная пропорция исходного материала, имеющего формулу III, и соединения с формулой IV составляет от приблизительно 1:1 до приблизительно 1:3.
В определенных вариантах изобретение описывает способ приготовления композиции, включающей множество молекул лекарственного препарата с формулой I, далее включающее объединение соединения с формулой I с антителом или антиген-связывающим фрагментом, для создания конъюгата антитела с лекарственным препаратом.
В определенных вариантах изобретение описывает способ приготовления композиции, включающей множество молекул лекарственного препарата с формулой I, где соединение с формулой I привязано к антителу или антиген-связывающему фрагменту через S, О или NR3.
В варианте изобретения описан способ приготовления композиции, включающей множество молекул лекарственного препарата с формулой I, где молекулы лекарственного препарата с формулой I присутствуют в композиции в диастереомерном избытке приблизительно 60, 70, 80, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99% или более.
В варианте изобретения описан способ приготовления композиции, включающей множество молекул лекарственного препарата с формулой I, представленной следующей структурой:
- 10 038192 или
О
О в диастереоселективном избытке больше чем 50%. Несмотря на то, что определенные примерные способы приготовления композиций согласно настоящему изобретению сформулированы в рабочих примерах в настоящем документе, в рамках настоящего изобретения рассматриваются другие способы, например хроматографическое разделение рацемической смеси или смеси диастереомеров (например, ВЭЖХ на нормальной, обратной или хиральной постоянной фазе с использованием полярных смесей апротонного растворителя и т.д.).
Настоящее изобретение также раскрывает процесс получения конъюгата соединения по формуле I нон.осн= ?Нз
О Ъ/НМ JOL н3с'члу Ν^γ40 СН3 О* Н3С CI Ϋγ4 О сн3 I где X представляет собой Ч р yJ Ri R2 О Y1 представляет собой чАд Ад оХу0 F-y? 0Xn А V\ c l| [ ν 1 Γ “n 1 /=0 N4 или Н; R1 и R2 независимо выбираются из Н или C1-С10-αлкила и n равен 1; с антителом или его антиген-связывающим фрагментом, при этом процесс включает следующие этапы: сн3 )п ) ONa+ О-К+ 1 0.1 S=O S=0 )=О Г/=О ΐ J
- 11 038192 (а) взаимодействие (i) соединения формулы III (ii) соединения формулы IV
(iii) силикагеля и (iv) растворителя, включающего органический растворитель и воду;
(b) обеспечение реакции между соединением формулы III с соединением формулы IV;
(c) выделение соединения формулы I, представленного в диастереомерном избытке, превышающем 50%, где диастереомерный избыток основан на количествах по меньшей мере двух диастереомеров, имеющих разные стереохимические конфигурации хирального углерода, который связан с атомом серы в формуле I; и (d) сочетание соединения формулы I и антитела или его антиген-связывающего фрагмента для создания антительного лекарственного конъюгата.
В варианте изобретения соединение формулы I прикреплено к антителу или антиген-связывающему фрагменту посредством S, О или NR3, при этом R3 является Н или C1-С10-αлкилом.
Настоящее изобретение также относится к способу приготовления смеси диастереомерных соединений с формулой IIa и IIb
где L является антителом или его антиген-связывающим фрагментом; и где соединение формулы IIa или IIb представлено в диастереомерном избытке, превышающем 50%, при этом диастереомерный избыток основан на смеси, содержащей по меньшей мере два диастереомера, имеющих разные стереохимические конфигурации хирального углерода, который связан с атомом серы в формуле IIa или IIb, при этом процесс включает (а) реакцию Лиганда, L, с соединением формулы I, где соединение представляет собой
- 12 038192
где соединение формулы I представлено в диастереомерном избытке, превышающем 50%, при этом диастереомерный избыток основан на количествах по меньшей мере двух диастереомеров, имеющих разные стереохимические конфигурации хирального углерода, который связан с атомом серы в формуле I; и (b) очищение соединения формулы IIa или IIb.
Настоящее изобретение также касается композиций, где множество молекул лекарственного препарата с формулой I или конъюгаты лиганда с лекарственным препаратом с формулой II содержатся в композиции в терапевтически эффективном количестве и дополнительно включает фармацевтически приемлемый разжижитель, носитель или наполнитель.
В варианте изобретения описаны композиции, включающие множество молекул лекарственного препарата с формулой II, далее включающие терапевтически эффективное количество второго химиоте рапевтического агента.
В многочисленных вариантах изобретения композиции включают соединение с формулой I и/или II из настоящего изобретения, которое может использоваться в сочетании с одним или несколькими дополнительными соединениями или способами лечения. Совместное введение и комбинированная терапия не ограничиваются одновременным введением, отдельно или вместе, но также включают и последовательные введения.
Комбинированная терапия включает введение однократной дозы фармацевтической лекарственной формы, содержащей композицию, включающую одно или несколько соединений с формулой I и/или формулой IIa и/или формулой IIb и один или несколько других терапевтических агентов; а также введение композиции, включающей соединение с формулой I и/или формулой IIa и/или формулой IIb из настоящего изобретения, и один или несколько дополнительных агентов в собственной отдельной фармацевтической дозированной лекарственной форме. Например, композиция, включающая соединение с формулой I и/или формулой IIa и/или формулой IIb и, цитотоксический агент, химиотерапевтический агент или агент, ингибирующий рост, которые могут быть введены пациенту вместе в одной дозе композиции, например комбинированной форме, или каждый агент может быть введен по отдельности. В последнем случае композиция, включающая соединение с формулой I и/или формулой IIa и/или формулой IIb и один или несколько дополнительных агентов, может быть введена одновременно, или отдельно по этапам, т.е. последовательно.
Неограничивающие примеры таких дополнительных терапевтических агентов включают ингибиторы цитокина (например, интерлейкин-1 (IL-1) ингибитор (такие как рилонацепт или анакинра, антагонист малых молекул IL-1 или анти-IL-1 антитело); ингибитор IL-18 (такой как антагонист малых молекул IL-18 или анти-IL-18 антитело); ингибитор IL-4 (такой как антагонист малых молекул IL-4, анти-IL-4 антитело или анти-IL-4 антитело рецептора); ингибитор IL-6 (такой как антагонист малых молекул IL-6, анти-IL-6 антитело или антитело рецептора анти-IL-6); аспирин; NSAID; стероиды (например, преднизон, метотрексат и т.д.); циклоспорин А низкой дозы; ингибиторы фактора некроза опухоли (TNF) или рецептора TNF (например, антагонист малых молекул TNF или TNFR или анти-TNF или TNFR антитело); ингибиторы синтеза мочевой кислоты (например, аллопуринол); промоутеры экскреции мочевой кислоты (например, пробенецид, сульфинпиразон, бензбромарон и т.д.); другие ингибиторы воспаления (например, ингибиторы каспазы-1, р38, IKK1/2, CTLA-4Ig и т.д.); и/или кортикостероиды. Дополнительный терапевтический агент(ы) может быть введен до, одновременно или после введения одного или более соединений с формулой I и/или формулой IIa и/или формулой IIb (в целях настоящего изобретения такие режимы введения считаются введением одного или нескольких соединений с формулой I и/или формулой IIa и/или формулой IIb в комбинации с терапевтическим агентом).
- 13 038192
Термин цитотоксический агент, как используется в настоящем документе, относится к веществу, ингибирующему или предотвращающему функцию клеток и/или вызывающему деструкцию клеток.
Термин охватывает радиоактивные изотопы (например, I131, I125, Y90 и Re186), химиотерапевтические агенты и токсины, такие как ферментативно активные токсины бактериального, грибкового, растительного или животного происхождения, или их фрагменты.
Химиотерапевтическое вещество является химическим соединением, используемым в лечении рака. Примеры химиотерапевтических агентов включают алкилирующие агенты, такие как тиотепа и циклофосфамид (Cytoxan®); алкильные сульфонаты, такие как бусульфан, импросульфан и пипосульфан; азиридины, такие как бензодопа, карбоквон, метуредопа, и уредопа; этиленимины и метиламеламины, включая альтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфорамид и триметиломеламин; хлорметины, например хлорамбуцил, хлорнафазин, хлорфосфамид, эстрамустин, ифосфамид, мехлорэтамин, мехлорэтамин оксид гидрохлорид, мелфалан, новембицин, фенестерин, преднимустин, трофосфамид, урамустин; нитромочевина, такая как кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин, ранимустин; антибиотики, такие как аклациномицины, актиномицин, отрамицин, азасерин, блеомицины, кактиномицин, калихеамицин, карабицин, карминомицин, карцинофилин, хромомицины, дактиномицин, даунорубицин, деторубицин, 6-диазо-5-оксо-Ь-норлейцин, доксорубицин, эпирубицин, эзорубицин, идарубицин, марцелломицин, митомицины, микофеноловая кислота, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, порфиромицин, пуромицин, квеламицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, циностатин, зорубицин; антиметаболиты, такие как метотрексат и 5-фторурацил (5-FU); аналоги фолиевой кислоты, такие как деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; пуриновые аналоги, такие как флударабин, 6-меркаптопурин, триамиприн, тиогуанин; пиримидиновые аналоги, такие как анцитабин, азацитидин, 6-азауридин, кармофур, цитарабин, дидезоксиуридин, доксифлуридин, эноцитабин, флоксуридин; андрогены, такие как калустерон, дромостанолона пропионат, эпитиостанол, мепитиостан, тестолактон; антиадреналы, такие как аминоглютетимид, митотан, трилостан; средства, восполняющие недостаток фолиевой кислоты, такие как фолиновая кислота; ацеглатон; гликозид альдофосфамида; аминолевулиновая кислота; амсакрин; бестрабуцил; бисантрен; эдатраксат; дефофамин; демеколцин; диазиквон; элфорнитин; ацетат эллиптиния; этоглюцид; нитрат галлия; гидроксимочевина; лентинан; лонидамин; митогуазон; митоксантрон; мопидамол; нитракрин; пентостатин; фенамет; пирарубицин; подофиллиновая кислота; 2-этилгидразид; прокарбазин; PSK®; разоксан; сизофиран; спирогерманий; тенуазоновая кислота; триазиквон; 2,2',2-трихлортриэтиламин; уретан; виндезин; дакарбазин; манномустин; митобронитол; митолактол; пипоброман; гацитозин; арабинозид; (Ara-C); циклофосфамид; тиотепа; таксаны, например паклитаксел (TAXOL®, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, NJ) и доцетаксел (TAXOTER®, Aventis Antony, France); хлорамбуцил; гемцитабин; 6-тиогуанин; меркаптопурин; метотрексат; аналоги платины, такие как цисплатин и карбоплатин; винбластин; платина; этопозид (VP-16); ифосфамид; митомицин С; митоксантрон; винкристин; винорелбин; навелбин; новантрон; тенипозид; дауномицин; аминоптерин; кселода; ибандронат; СРТ-11; ингибитор топоизомеразы RFS2000; дифторметилорнитин (DMFO); ретиноевая кислота; эсперамицины; капецитабин; и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из вышеуказанного. Также в настоящее определение включают антигормональные агенты, которые действуют, регулируя или ингибируя действие гормонов на опухоли, такие как антиэстрогены, включая, например, тамоксифен, ралоксифен, 4(5)-имидазолы, ингибирующие ароматазу, 4-гидрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, LY 117018, онапристон и торемифен (Fareston); и антиандрогены, такие как флутамид, нилутамид, бикалутамид, лейпролид и гозерелин; и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из вышеуказанного.
Ингибирующий рост агент, когда используется в настоящем документе, относится к соединению или композиции, ингибирующей рост клеток, особенно раковых клеток, in vitro или in vivo. Примеры ингибирующих рост агентов включают агенты, блокирующие прогрессию клеточного цикла (в месте, не являющемся фазой S), например, агенты, вызывающие блокировку G1 и блокировку М-фазы. Классические блокаторы М-фазы включают барвинки (винкристин и винбластин), TAXOL® и топо II ингибиторы, такие как доксорубицин, эпирубицин, даунорубицин, этопозид и блеомицин. Такие агенты, которые блокируют G1, также влияют на блокирование S-фазы, например алкилирующие агенты ДНК, такие как тамоксифен, преднизон, дакарбазин, мехлорэтамин, цисплатин, метотрексат, 5-фтороурацил и ara-С.
Настоящее изобретение также описывает фармацевтические композиции. Такие композиции включают терапевтически эффективное количество активного вещества и фармацевтически приемлемый носитель. Термин фармацевтически приемлемый означает утвержденный контролирующим органом Федерального правительства США или правительства штата, или перечисленный в Фармакопее США или другой признанной фармакопее, для использования у животных и, в частности, у людей. Термин носитель относится к разжижителю, вспомогательному веществу, наполнителю или лекарственной среде, с которой вводится лекарственный препарат. Такие фармацевтические носители могут быть стерильными жидкостями, такими как вода и масла, включая масла животного, растительного или синтетического происхождения, например арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, кунжутное масло и т.п.
- 14 038192
Подходящие фармацевтические наполнители включают крахмал, глюкозу, лактозу, сахарозу, желатин, солод, рис, муку, мел, силикатный гель, стеарат натрия, глицеринмоностеарат, тальк, хлорид натрия, сухое обезжиренное молоко, глицерин, пропилен, гликоль, вода, этанол и т.п. Композиция при желании может также содержать незначительное количество смачивающих или эмульгирующих веществ или буферных веществ рН фактора. Такие композиции могут иметь форму растворов, суспензий, эмульсий, таблеток, пилюль, капсул, порошков, лекарственных форм с контролируемым высвобождением и т.п. Композиция может быть в форме суппозитория, с традиционными связующими веществами и носителями, такими как триглицериды. Форма для орального применения может включать стандартные носители, такие как фармацевтические сорта маннитола, лактозы, крахмала, стеарат магния, сахарин натрия, целлюлоза, карбонат магния и т.д. Примеры подходящих фармацевтических носителей описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences, Э.В. Мартин.
В варианте изобретения композиция формулируется в соответствии с обычными практиками как фармацевтическая композиция, адаптированная к внутривенному введению человеку. При необходимости, состав может также включать агенты растворения и локальное анестезирующее средство, такое как лидокаин, для снятия боли в месте инъекции. Если композиция вводится инфузионно, она может поставляться из флакона для инфузии, содержащего стерильную воду фармацевтического сорта или солевой раствор. Если композиция вводится инъекционно, ампула со стерилизованной водой для инъекции или солевым раствором может быть предусмотрена, чтобы компоненты могли быть смешаны до введения.
Активные вещества согласно настоящему изобретению могут быть нейтральными или иметь форму солей. Фармацевтически приемлемые соли включают соли, сформированные со свободными аминогруппами, например, полученными из соляных, фосфорических, уксусных, щавелевых, виннокаменных кислот и т.д., и соли, сформированные со свободными карбоксильными группами, например, полученными из натрия, калия, аммония, кальция, гидроксидов железа, изопропиламина, триэтиламина, 2-этиламино этанола, гистидина, прокаина и т.д.
Количество активного вещества согласно настоящему изобретению, который будет эффективным при лечении заболевания, может быть определен стандартными клиническими способами на основе настоящего описания. Кроме того, анализы in vitro могут произвольно применяться, чтобы идентифицировать оптимальные диапазоны дозировки. Точная доза, которая будет использоваться в лекарственной форме, будет также зависеть от пути введения и степени тяжести и определяется согласно суждению врача и обстоятельствам каждого пациента. Однако подходящие диапазоны дозировки для внутривенного введения обычно приблизительно от 0,5 до 20 мг активного соединения на 1 кг массы тела. Подходящие диапазоны дозировки для интраназального введения являются приблизительно от 0,01 пг/кг на 1 кг массы тела до 1 мг/кг массы тела. Эффективные дозы могут экстраполироваться из кривых доза-эффект, полученных из испытаний in vitro или тестовых систем животных моделей.
В одном варианте изобретения описан способ лечения заболевания у пациента, страдающего от заболевания, включающий введение пациенту эффективного количества композиции, включающей соединение с формулой (I) и/или (II), и далее включающий введение поэтапно или последовательно дополнительной терапии или введение по крайней мере одного дополнительного терапевтического агента.
В другом варианте изобретения раскрывается способ лечения заболевания, чувствительного к воздействию указанным способом, причем указанный способ включает парентеральное введение нуждающемуся в этом пациенту терапевтически эффективного количества композиции, включающей соединение с формулой I и/или формулой IIa и/или формулой IIb.
Настоящее изобретение далее предусматривает использование любой из композиций, содержащих соединения с формулой I и/или формулой IIa и/или формулой IIb, формулой (i), формулой (ii) или их комбинации, и/или их фармацевтические лекарственные формы при изготовлении препарата для лечения, профилактики и/или уменьшения интенсивности заболевания.
Заявленное изобретение далее предусматривает использование любой из композиций, содержащих соединения с формулой I, и/или формулой IIa, и/или формулой IIb, формулой (i), формулой (ii) или их комбинации и/или их фармацевтические лекарственные формы, при изготовлении препарата для лечения, профилактики и/или уменьшения интенсивности опухоли.
В то время как варианты, описанные в настоящем документе, были преобладающе описаны в отношении антипролиферативных нарушений, таких как рак, предполагается, что композиции могут также использоваться при лечении заболевания, выбранного из ряда аутоиммунных заболеваний и других иммунологических расстройств и дисфункций, воспалительных заболеваний, инфекционных заболеваний, нейродегенеративных заболеваний, заболеваний костей и сердечно-сосудистых заболеваний. Кроме того, любое нарушение, которое может извлечь выгоду из предназначенной доставки токсичного вещества к определенным клеткам, типам клеток, тканей и/или органов в рамках данного изобретения.
Наконец, варианты, описанные в настоящем документе, могут включать композиции, включающие смеси соединений, представленных формулой I, и/или формулой IIa, и/или формулой IIb.
Ссылки на определенные варианты, сделанные в следующем описании, приведены только для иллюстрации принципов настоящего изрбретения. Кроме того, поскольку многочисленные модификации и изменения легко очевидны для специалистов в отрасли, настоящее изобретение не ограничено описани- 15 038192 ем конкретных структур и процессов, как описано в настоящем документе. Соответственно, все подходящие модификации и эквиваленты могут рассматриваться в рамках настоящего изобретения и как определено прилагаемой формулой изобретения.
Слова включают, включение, в том числе и включая, когда используется в настоящей спецификации и в прилагаемой формуле изобретения, определяют наличие установленных свойств, целых чисел, компонентов или этапов, но не устраняют наличие или добавление одной или нескольких дополнительных свойств, целых чисел, компонентов или этапов.
Общие термины, использованные в любом из вариантов, описанных в настоящем документе, могут быть определены соответствующим образом; однако заявленное значение не должно интерпретироваться как ограничение объема термина по сути.
Термин конъюгат, как используется в настоящем документе, относится к соединению, имеющему лиганд, линкер и биологически активную молекулу. Иллюстративные примеры включают композиции с формулой (II).
Термин спейсер, как используется в настоящем документе, относится к химическим элементарным звеньям линкера, используемым для пространственного разделения лиганда от биологически активной молекулы и для обеспечения катаболизма линкера в клетках.
Термин макролид, как используется в настоящем документе, относится к любой биологически активной молекуле, имеющей кольцо макролида.
Символ обозначает точки крепления.
Термин алкил, как используется в настоящем документе, относится к радикалу углеводорода, имеющему нормальную или разветвленную цепь или их комбинацию. Алкильные радикалы могут быть одновалентным, бивалентным или циклическими радикалами. Примеры одновалентных алкильных радикалов: метил, этил, 1-пропил, 2-пропил, n-бутил, изобутил, sec-бутил, t-бутил, пентил, неопентил, гексил, изогексил и т.п. Для примера, бивалентный алкильный радикал включает
Примеры циклических алкильных радикалов включают циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и т.п. Типичные алкильные радикалы имеют от одного до десяти атомов углерода, одногодевяти атомов углерода, одного-восьми атомов углерода, одного-семи атомов углерода, одного-шести атомов углерода, одного-пяти атомов углерода, одного-четырех атомов углерода, одного-трех атомов углерода, одного-двух атомов углерода или одного атома углерода. Типичный циклоалкил имеет от 3 до 7 радикалов моноциклического ядра.
Фраза фармацевтически приемлемая соль, как используется в настоящем документе, относится к органическим и неорганическим солям соединений конъюгатов, описанных здесь, например соединений с формулой (I) и (II). Соли фармацевтически приемлемы и включают сульфат, цитрат, нитрат, фосфат, аскорбат, бромид, глюконат, бензоат, оксалат, пантотенат и т.д. Обратите внимание на то, что фармацевтически приемлемые соли, описанные в настоящем документе, могут включать больше одного заряженного атома в структуре, а также один или несколько противоположно заряженных ионов. Приготовление соединений конъюгатов, как фармацевтически приемлемых солей, известно специалистам в отрасли.
Термин лиганд, как используется в настоящем документе, означает любую молекулу или соединение, которое в частности или выборочно взаимодействует и/или связывается со второй молекулой или соединением. В определенных вариантах лиганд является антителом или частью антитела, связанной антигеном. Другие примеры лигандов, подходящих для использования в контексте настоящего изобретения, включают, например, аптамеры, пептиды, в частности, взаимодействующие с определенным антигеном (например, пептид-ассоциированное антитело), молекулы рецептора и антигенсвязывающие матрицы (например, DARPin, повторы HEAT, повторы ARM, тетратрикопептидные повторы и другие матрицы на основе естественных повторов и т.д. [см., например, Boersma и Pluckthun, 2011, Curr. Opin. Biotechnol. 22:849-857 и ссылки, процитированные там]).
Антитела существуют как интактные иммуноглобулины или как ряд хорошо охарактеризованных фрагментов, произведенных гликозированием различных пептидаз. Например, пепсин гликолизирует антитело ниже двусернистых связей в шарнирной области для производства F(ab)'2, димера Fab, который сам является легкой цепью, соединенной с VH-CH через дисульфидную связь. F(ab)'2 может быть уменьшен при умеренных условиях, чтобы нарушить двусернистую связь в шарнирной области, таким образом преобразовав F(ab)'2 димер в Fab' мономер. Fab' мономер по сути является Fab с частью шарнирной области. В то время как различные фрагменты антитела определяются с точки зрения гликолизирования интактного антитела, специалисту в отрасли очевидно, что такие фрагменты могут быть синтезированы заново, химически или при помощи рекомбинантных методов ДНК. Таким образом, термин антитело, как используется в настоящем документе, также включает фрагменты антитела, произведенные модификацией целых антител или синтезируемых заново с использованием рекомбинантных методов ДНК (например, одинарные участки вариабельности (Dab) отдельной цепи Fv (scFv)), или фрагменты, идентифицированные с использованием библиотеки данных, таких как бибилиотеки бактериофагов, Е. coli или
- 16 038192 дрожжей (см., например, McCafferty и др. (1990) Nature 348:552-554).
Способы получения антител известны из уровня техники. См., например, Kohler & Milstein (1975) Nature 256:495-497; Harlow & Lane (1988) Antibodies: a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Lab., Колд Спринг Харбор, Нью-Йорк). Антитела, изолированные из организмов, кроме человеческих, таких как мыши, крысы, кролики, коровы, могут быть сделаны более схожими с человеческими антителам путем химеризации или гуманизации.
Термин человеческое антитело, как используется в настоящем документе, включает антитела, имеющие вариабельные и константные участки, полученные из последовательностей человеческого иммуноглобулина. Человеческие mAbs согласно изобретению могут включать остатки аминокислот, не закодированные последовательностями человеческого иммуноглобулина (например, мутации, инициированные случайным или сайт-специфическим мутагенезом in vitro или соматической мутацией in vivo), например, в CDR и, в частности, CDR3. Однако термин человеческое антитело, как используется в настоящем документе, не включает mAbs, в которых последовательности CDR, полученные из зародышевой линии других видов млекопитающих, были трансплантированы на человеческие последовательности FR.
Термин терапевтически эффективное количество, как используется в настоящем документе, относится к количеству, оказывающему желаемое влияние, для которого такое количество было введено. Точное количество будет зависеть от цели лечения и определяется специалистом в отрасли с помощью известных способов (см., например, Lloyd (1999) The Art, Science and Technology of Pharmaceutical Compounding).
Термин рацемат, как используется в настоящем документе, означает эквимолекулярную смесь пары энантиомеров. Термин рацемат также относится к рацемической смеси.
Термин энантиомер, как используется в настоящем документе, относится к соединениям, не совпадающим при наложении зеркальными отображениями друг друга. Энантиомеры могут существовать в конфигурации (R) или (S).
Термин стереоселективный синтез относится к химической реакции, которая приводит к формированию единственного стереоизомера или смеси изомеров, обогащенной энантиомерами, из двух или большего количества возможных стереоизомеров.
Термин диастереомерный избыток относится к различию между мольной фракцией желаемого единственного диастереомера в сравнении с остающимися диастереомерами в композиции. Диастереомерный избыток вычисляется следующим образом:
(Количество единственного диастереомера) - (Количество других диастереомеров)/1.
Например, композиция, содержащая 90% от 1 и 10% от 2, 3, 4 или их смеси, имеет диастереомерный избыток 80% [(90-10)/1]. Композиция, содержащая 95% от 1 и 5% от 2, 3, 4 или их смеси, имеет диастереомерный избыток 90% [(95-5)/1]. Композиция, содержащая 99% от 1 и 1% от 2, 3, 4 или их смесь, имеет диастереомерный избыток 98% [(99-1)/1]. Диастереомерный избыток может так же быть рассчитан для любого из компонентов 1, 2, 3, или 4.
Термин стереоизомерически чистый, как используется в настоящем документе, относится к соединению, где указанный стереоизомер присутствует в большей степени, чем другие стереоизомеры этого соединения, например, соединение присутствует в диастереомерном избытке. В некоторых вариантах стереоизомерически чистые композиции, описанные здесь, включают 80% или больше, 85% или больше, 90% или больше, 95% или больше или 97% или больше в развес одного стереоизомера соединения.
Конъюгаты в соответствии с различными вариантами, описанными в настоящем документе, могут быть подготовлены любым способом, известным из уровня техники. Иллюстративный протокол производства конъюгатов приведен в примерах ниже.
В одном варианте конъюгаты могут быть подготовлены i) путем реакции лиганда с молекулами лекарственного препарата с формулой (I) для формирования конъюгата с формулой (II), и ii) очищением конъюгата.
В альтернативном варианте конъюгат подготовлен путем реакции лиганда, линкера и биологически активного макролида в единственной реакции. После подготовки конъюгата в соответствии с изобретением они могут быть очищены.
В одном варианте композиции, включающие молекулы лекарственного препарата с формулой (I), и/или композиции, включающие конъюгированные соединения с формулой (II), описанные в настоящем документе, могут быть оценены на способность подавлять пролиферацию различных линий раковых клеток in vitro. Например, композиции, включающие молекулы лекарственного препарата с формулой (I), и/или композиции, включающие конъюгированные соединения с формулой (II), могут применяться in vitro к раковым клеткам в течение определенного количества дней и выжившие клетки, измеряются в количественном анализе известным способом.
Вышеупомянутая спецификация, примеры и данные предоставляют полное описание изготовления и использования композиции согласно изобретению. Начиная со многих вариантов изобретение может быть осуществлено, не отступая от духа и объема изобретения, как подробно изложено в прилагаемой формуле изобретения.
- 17 038192
Все ссылки, процитированные в настоящем документе и в дальнейших примерах, включая патенты, изданные заявки на патент и литературные ссылки, явно включены полной ссылкой.
Описание и примеры, представленные ниже, предоставлены для иллюстрирования предмета изобретения. Для специалиста в отрасли очевидно, что эти примеры приведены только для иллюстрации и не включены в целях ограничения изобретения.
Варианты, раскрытые здесь, проиллюстрированы более подробно посредством неограничивающих примеров, приведенных ниже.
Краткое описание иллюстраций
Фиг. 1 иллюстрирует 'H-ЯМР спектр Майтанзин-3-N-метил-L-аланин-пропанамидил-3-тио-3сукцинимuдил-N-метилцикллогексил-4-транс-карбоксисукцинат (5). 1Н-ЯМР спектр соответствует единственному диастереомеру, присутствующему по крайней мере в 95% диастереомерном избытке, так как спектр не осложнен резонансами, относящимися к другому диастереомеру. (Для сравнения пример 2 дает 1Н-ЯМР спектр смеси диастереомеров).
Фиг. 2 иллюстрирует 1Н-ЯМР спектр смеси диастереомеров Майтанзин-3-N-метил-L-аланинпропанамuдил-3-тио-3-сукцинимидил-N-метилцикллогексил-4-транс-карбоксисукцинат (6).
Фиг. 3 иллюстрирует, что в клетках SKBR3 единственный конъюгат соединения диастереомеров HER2-5 (партии in vitro и in vivo) имеет значение IC50 = 0,3 нм по сравнению с 0,9 нМ для смеси конъюгата диастереомера HER2-6.
Фиг. 4 иллюстрирует, что в клетках ВТ474 единственный конъюгат соединения диастереомеров HER2-5 (in vitro) имеет значение IC50 = 4,6 нм, в то время как партия HER2-5 (in vivo) имела значение IC50 = 4,0 нм, по сравнению с 11,6 нм для смеси конъюгата диастереомера HER2-6.
Фиг. 5 иллюстрирует, что в клетках NCI-N87 единственный конъюгат соединения диастереомеров HER2-5 (in vitro) имеет значение IC50 = 0,6 нм, в то время как партия HER2-5 (in vivo) имела значение IC50 = 0,4 нм по сравнению с 1,0 нм для смеси конъюгата диастереомера HER2-6.
Фиг. 6 иллюстрирует, что в клетках HEK293/hEGFRvIII единственный конъюгат соединения диастереомеров EGFRvIII-5 имеет значение IC50=0,4 нм, в то время как смесь конъюгата диастереомера EGFRvIII-6 имеет значение IC50 = 0,5 нм.
Фиг. 7 иллюстрирует, что в клетках MMT/hEGFRvIII единственный конъюгат соединения диастереомеров EGFRvIII-5 имеет значением IC50=0,5 нм, в то время как смесь конъюгата диастереомера EGFRvIII-6 имеет значение IC50 почти в 20 раз выше = 9,8 нм.
Фиг. 8 иллюстрирует, что в клетках U251/hEGFRvIII единственный конъюгат соединения диастереомеров EGFRvIII-5 имеет значение IC50=2,4 нм, в то время как смесь конъюгата диастереомера EGFRvIII-6 имеет значение IC50 = 3,3 нм.
Фиг. 9 иллюстрирует, что в клетках Ovcar-3 единственный конъюгат соединения диастереомеров MUC16-5 имеет значение IC50 = 6,3 нм, в то время как смесь конъюгата диастереомера MUC16-6 имеет значение IC50 16,0 нм.
Фиг. 10 иллюстрирует, что в клетках PC3/MUC16long единственный конъюгат соединения диастереомеров MUC16-5 имеет значение IC50 = 0,34 нм, в то время как смесь конъюгата диастереомера MUC16-6 имеет значение IC50 = 0,80 нм.
Фиг. 11 иллюстрирует кривые роста опухоли у мышей после введения HER2-5 и реактивов контроля. Мыши получали лекарственную среду PBS (), 300 мг/кг DM1-SMe (·) и изотип контроль mAb при 15 мг/кг (▼). Мыши также получили HER2 mAb (A), HER2-5 (Δ) и изотип контроль 5 (V) в дозе 1 мг/кг (А), 5 мг/кг (В) и 15 мг/кг (С). Мыши получали 3 однократные еженедельные дозы конъюгатов и агентов контроля, как обозначено черными стрелками (Т). Группы N = 8, среднее значение ± SE.).
Фиг. 12 иллюстрирует изменение в объеме опухоли после введения HER2-5 и реактивов контроля после завершения дачи контрольной группе лекарственной среды PBS в день 79 после имплантации опухоли. Отдельные размеры опухоли показаны для каждой группы введения. Мыши получали лекарственную среду PBS (), 300 мг/кг DMl-SMe (·) и изотип контроль mAb при 15 мг/кг (▼). Мыши также получили HER2mAb (A), HER2-5(A) и изотип контроль-5 (V) в дозе 1 мг/кг (А), 5 мг/кг (В) и 15 мг/кг (С). Группы N= 8, среднее значение ± SE.
Фиг. 13 иллюстрирует процентное изменение веса животных после введения HER2-5 и реактивов контроля. Мыши получали лекарственную среду PBS (), 300 мг/кг DMl-SMe (·) и изотип контроль mAb при 15 мг/кг (▼). Мыши также получили HER2 mAb (A), HER2-5 (Δ) и изотип контроль 5 (V) в дозе 1 мг/кг (А), 5 мг/кг (В) и 15 мг/кг (С). Мыши получали 3 однократные еженедельные дозы конъюгатов и агентов контроля, как обозначено черными стрелками (Т). Группы N=8, среднее значение ± SE).
Примеры
Экспериментальные данные.
Протон-спектры ЯМР (для соединений, которые не могли быть обнаружены УФ) были полученны на аппарате Varian Inova 300 МГц, в то время как масс-спектры были получены на аппарате Agilent 1100, LC/MSD источником ионизации электроспрея и квадрупольной ионной ловушкой. Все конъюгаты были проанализированы с помощью масс-спектрометра Bruker ultraFleXtreme MALDI-TOF-TOF. Все исходные
- 18 038192 материалы и растворители были приобретены коммерчески и использовались без очистки, если не указано иное.
Пример 1. Синтез малеимидилметил-4-транс-циклогексилкарбоксисукцинат (3).
Малеимидилметил-4-транс-циклогексанкарбоновая кислота (2): титульное соединение было подготовлено на двух этапах (этап А и этап В) с использованием модифицированных версий способов, описанных Marnett и др. (J. Med. Chem., 1996, 39, 1692-1670).
Этап А: раствор транс-4-аминометилциклогексанкарбоновой кислоты (7,00 г, 44,5 ммоль) в 1,4диоксане (70 мл) обработали малеиновым ангидридом (4,89 г, 49,9 ммоль) и размешивали при температуре окружающей среды в течение 48 ч. Реакцию выпарили в вакууме до получения белой твердой фазы, которую можно было сохранить или использовать на следующем этапе без дальнейшей очистки.
Ή ЯМР (300 МГц, DMSO-d6) δ 9.11 (m, 1Н), 6.44 (d, 1H, J = 13 Гц), 6.24 (d, 1H, J = 13 Гц), 3.05 (t, 2H, J = 6 Гц), 2.13 (tt, 1H, J = 12 Гц, 4 Гц), 1.90 (m, 2H), 1.75 (m, 2H), 1.44 (m, 1H), 1.28 (m, 2H), 0.96 (m, 2H).
Этап В: малеминовая кислота с этапа А (36,8 г, 144 ммоль) и натрия ацетат (13,6 г, 165 ммоль) растворили в уксусном ангидриде (368 мл), изолировали в стеклянном сосуде с реагентом и нагревали до 120°С в течение 3 ч. Охлажденную реакционную смесь (черный сироп) вылили на воду (3 л), размешали и экстрагировали дихлорметаном. Органический слой высушили над Na2SO4, отфильтровали через воронку из пористого стекла и очищенный фильтрат выпаривали и высушивали под высоким вакуумом, получив титульное соединение в виде желтой твердой фазы (7,00 г, 20%).
1H ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ 6.73 (s, 2H), 3.40 (d, 2H, J = 7 Гц), 2.28 (m, 1Н), 2.06 (m, 2H), 1.75 (m, 3Н), 1.42 (m, 2H), 1.03 (m, 2H).
Малеимидилметил-4-транс-циклогексанкарбоксисукцинат (3): продукт предыдущего этапа В (10,0 г, 42,1 ммоль) растворили в дихлорметане (50 мл) в среде Ar, обработали N-гидросукцинимидом (7,27 г, 63,2 ммоль) и 1-(3-диметиламинпропил)-3-этилкарбодиимид гидрохлоридом (EDAC, 12,4 г, 64,5 ммоль), реакцию быстро размешивали при температуре окружающей среды. Полученный коричневый раствор разбавили дихлорметаном, промыли водой и солевым раствором, высушили над Na2SO4, отфильтровали через воронку из пористого стекла, а фильтрат сконцентрировали и высушили в вакууме. Этот продукт далее растворили в горячем этилацетате, обработали активированным древесным углем (1,5 г), отфильтровали и охладили фильтрат. Фильтрат кристаллического продукта промыли холодным этилацетатом и высушили в вакууме, получив титульное соединение в виде коричневой твердой фазы (5,52 г, 39%).
1H ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ 6.72 (s, 2H), 3.42 (m, 2H), 2.85 (br s, 4-й), 2.56 (tt, 1H, J = 12 Гц, 4 Гц), 2.18 (m, 2H), 1.80 (m, 2H), 1.70 (m, 1H), 1.56 (m, 2H), 1.09 (m, 2H).
1) Maleic anhyd.,I/
A diox., r.t. НО2С-СН о ON’°\ /А
Δ η Μ ΛΔ * -AN~f DCM, r.t.5 o^'
2) Ac2O, NaOAc,
CO2H 120°CОма 23
Пример 2. Майтанзин-3-N-метил-L-аланин-пропанамид-3-тиол (4): титульное соединение, известное из уровня техники как DMl, подготовили с помощью модифицированной версии способа, описанного Whitesides и др. (J. Org. Chem., 1991, 56, 2648-2650). Майтанзин-3-N-метил-L-ала-(3-метилдисульфанил)пропанамид (DMI-SMe, 2,42 г, 3,09 ммоль, подготовленный способом, подобным Но и Carrozzella, США, заявка на патент 2007/0037972 A1) растворили в ацетонитриле (30 мл), обработали раствором трис-(2-карбоксиэтил)фосфин гидрохлорид (8,23 г, 28,7 ммоль) в воде (30 мл), рН фактор откорректировали приблизительно до 3 добавлением насыщенной водной NaHCO3 (5 мл), колбу очистили Ar и реакцию размешивали при температуре окружающей среды под резиновой септой (вентилируемой из-за пенообразования). После 2 ч реакцию обработали солевым раствором (приблизительно 100 мл), подвергли воздействию Ar в течение 5 мин (для удаления свободного метилмеркаптана) и выделили фазу. Водную фазу дважды экстрагировали этилацетатом (EtOAc), насытили NaCl и экстрагировали еще два раза EtOAc. Объединенные органические слои высушили над Na2SO4, отфильтровали и фильтрат сконцентрировали и высушили в вакууме для получения титутльного соединения в виде белой твердой фазы (2,24 г, 98%).
1H ЯМР (300 МГц, CDCl3/CD3OD) δ 6.76 (d, 1H, J=1,5 Гц), 6.63 (d, 1H, J = 11 Гц), 6.59 (d, 1H, J = 1,5 Гц), 6.35 (m, 2H), 5.59 (dd, 1H, J = 15 Гц, 9 Гц), 5.36 (q, 1H, J = 6,5 Гц), 4.68 (dd, 1H, J=12 Гц, 3 Гц), 4.21 (t, 1H, J=10 Гц), 3.92 (s, 3H), 3.60 (d, 1H, J = 13 Гц), 3.42 (d, 1H, J = 9 Гц), 3.29 (s, 3H), 3.14 (s, 3H), 3.05 (d, 1H, J=13 Гц), 2.95 (d, 1H, J = 10 Гц), 2.77 (s, 3H), 2.75-2.47 (m, 6H), 2.11 (dd, 1H, J= 14 Гц, 3 Гц), 1.58 (s, 3H), 1.47 (d, 1H, J=14 Гц), 1.40 (m, 1H), 1.22 (m, 6H), 0.73 (s, 3H). MS (ESI, pos): calc'd для C35H48ClN3O10S, 737.3; найденый 738.3 (M+H), 720.3 (M-H2O+H).
Майтанзин-3 -N-метил-L-аланин-nропанамидил-3 -тио-3 -сукцинимидил-N-метилциклогексил-4 транс-карбоксисукцинат (5): следующая процедура описывает новый способ, не известный из уровня техники. Продукт предыдущего этапа (4, 2,23 г, 3,02 ммоль) и малеимидилметил-4- 19 038192 циклогексанкарбоксисукцинат (3, 1,50 г, 4,49 ммоль) растворили в растворе 4:1 ацетонитрил/вода (75 мл), обработали гелем мелкодисперсного кремнезема, выскобленным с подготовительной пластины TLC (11,2 г), колбу очистили в среде Ar и смесь размешивали при температуре окружающей среды под резиновой септой. Спустя 18 ч еще 3 (0,77 г, 2,3 ммоль) и ацетонитрила (MeCN, 10 мл) было добавлено, реакцию размешивали еще 6 ч. Смесь отфильтровали над целитом, твердые фазы промыли MeCN и этилацетатом (EtOAc) и фильтрат сконцетрировали в вакууме до чистой твердой фазы, очистили колоночной хроматографией для отгона легких фракций на 120-граммовом кардриже из силикатного геля (50-100% 1:1 EtOAc/MeCN в дихлорметане более чем 33 мин, 75 мл/мин). Испарение и высушивание чистых фракций колонки в вакууме привели к получению титульного соединения в виде кремовой твердой фазы (2,09 г). Концентрация неочищенных фракций и повторная очистка на 80-граммовом картридже из силикатного геля, как описано выше, привели к получению дополнительной партии кремовой твердой фазы (0,22 г) и общая выработка соединения составила 2,31 г (71%).
1H ЯМР (300 МГц, CDCl3) δ 6.85 (d, 1H, J = 4 Гц), 6.72 (m, 1H), 6.65 (d, 1H, J = 4 Гц), 6.44 (dd, 1H, J= 15 Гц, 11 Гц), 6.25 (s, 1H), 5.67 (dd, 1H, J = 16 Гц, 9 Гц), 5.41 (m, 1h), 4.79 (d, 1Н, J = 11 Гц), 4.30 (t, 1Н, J= 11 Гц), 3.72 (m, 2H), 3.51 (d, 1Н, J = 9 Гц), 3.37 (m, 4H), 3.27 (m, 1H), 3.23 (s, 3H), 3.16-2.99 (m, 4H), 2.85 (m, 7H), 2.62 (m, 3H), 2.39 (ddd, 1H, J = 19 Гц, 12 Гц, 4 Гц), 2.18 (br m, 2H), 1.77 (br m, 3H), 1.66 (s, 3H), 1.60 - 1.47 (m, 4H), 1.31 (m, 6H), 1.05 (m, 2H), 0.82 (s, 3H). MS (ESI, pos): вычислено для C5iH66C1N50i6S, 1071.4; найдено 1072.4 (М+Н), 1054.9 (М-Н2О+Н); 20589 нм = -52.4 (с = 0.00301, МеОН). См. фиг. 1 для 1Н-ЯМР единственного диастереомера.
4(DM1) °
Пример 3. Смесь диастереомеров майтанзин-3-N-метил-L-αланин-пропанамидил-3-тио-3 сукцинимидил-N-метилциклогексил-4-транс-карбоксисукцинат (6): образец смешанных стереоизомеров 5 синтезировали согласно заявке на патент 20100129314 США, пример XI.
1H ЯМР (300 МГц, CDC13) δ 6.85-6.6 (m), 6.4 (m), 6.1 (m), 5.8-5.4 (m), 5.2 (m), 4.92-4.79 (m), 4.4-4.1 (m), 4.03 (s), 3.82 (m), 3.8-2.2 (m), 2.1 (m), 2.07 (s), 2.0-0.8 (m). MS (ESI, pos): вычислено для C51H66ClN5O16S, 1071.4; найдено 1072.4 (М+Н). См. фиг. 2 для 1Н-ЯМР смеси диастереомеров.
Пример 4. Рацемическая майтанзин-3-N-метил-L-αланин-пропанамидил-3-тио-3-сукцинимидил-Nметилциклогексил-4-транс-карбоновая кислота (8): раствор транс-1,4-(малеимидометил)циклогексан-1карбоновой кислоты 7 (167 мг, 0,701 ммоль) в 1,2-диметоксиэтане (8 мл) добавили к раствору 4 (340 мг, 0,461 ммоль) в 1,2-диметоксиэтане (15 мл). Далее смесь обработали буфером с рН фактором 7,5 (20 мл) и добавили несколько капель насыщенной водной NaHCO3 для поддержания рН фактора. Реакционную смесь размешивали быстро при комнатной температуре под аргоном и затем сконцентрировали под сниженным давлением. Сырой остаток очистили хроматографией обращенной фазы с помощью колонки С18, колонки на 20-40 мкм (100 г), элюировав с градиентом (10 95% более 25 мин) ацетонитрила (АсОН 0,1%) в воде (АсОН0,1%), и лиофилизировали для получения 8 (330 мг, 0,338 ммоль, 73%-я выработка) в виде белой твердой фазы. MS m/z: 977.2 [MH+], 957.2 [М-18], 999.2 [М+На]; чистота: >98% (LC/MS).
(DM1) '
Пример 5. Хиральное разделение 8 к единственному диастереомеру (R*)-майтанзин-3-N-метил-Lαланин-пропанамидил-3-тио-3-сукцинимидил-N-метилциклогексил-4-транс-карбоновая кислота (9) и (S*)-майтанзин-3-N-метил-L-αланин-пропанамидил-3-тио-3-сукцинимидил-N-метилциклогексил-4транс-карбоновая кислота (10) (S* и R* представляют единственный стереоизомер неизвестной хиральности): диастереомерную смесь соединений 8 (20 мг) растворили в 0,5 мл ацетонитрила и разделили с использованием полуподготовленной хиральной колонки (Chirlacel OJ, Система раствора, 6:1:1 гексаны: IPA:этанол) для получения 3,5 мг 10 в виде подвижного соединения, MS m/z: 977.2 [МН+], 957.2 [М-18], 999.2 [М+На]; чистота:>95% (LC/MS), RT = 32 мин и 4,6 мг 9 в виде неподвижного соединения, MS m/z: 977.2 [МН+], 957.2 [М-18], 999.2 [М+На]; чистота: >95% (LC/MS), Rf=48 мин.
- 20 038192
Пример 6. Синтез (S*)-майтанзин-3-N-метил-L-αланин-пропанамидил-3-тио-3-сукцинимидил-Nметилциклогексил-4-транс-карбоновой кислоты (11): раствор 10 (2,5 мг, 0,0026 ммоль) растворили в дихлорметане (1 мл), затем обработали N-гидросукцинимидом (NHS, 6,0 мг, 0,052 ммоль) и 1-[3(диметиламино)пропил]-3-этилкарбодиимид гидрохлоридом (EDCI, 13 мг, 0,065 ммоль). Реакционную смесь быстро размешивали при комнатной температуре в среде аргона, промыли водой с последующей промывкой солевым раствором, высушили над безводным сульфатом натрия и отфильтровали. Растворитель выпарили под сниженным давлением для получения сырого остатка, очищенного хроматографией обращенной фазы с помощью С18, колонка на 20-40 мкм (30 г), элюировав с градиентом (10-95% более чем 18 мин) ацетонитрила (0,1% АсОН) в воде (0,1% АсОН) и лиофилизировали для получения 11. MS m/z: 1073.2 [МН+], 1054.4 [М-18]; чистота: 95% (LC/MS).
Пример 7. (R*)-майтанзин-3-N-метил-L-αланин-пропанамидил-3-тио-3-сукцинимидил-N-метилциклогексил-4-транс-карбоновая кислота (12): раствор 9 (3, мг, 0,003 ммоль) растворили в дихлорметане (1 мл), затем обработали с N-гидросукцинимидом (NHS, 3,0 мг, 0.026 ммоль) и 1-[3(диметиламино)пропил]-3-этилкарбодиимид гидрохлоридом (EDCI, 7 мг, 0,036 ммоль). Реакционную смесь быстро размешивали при комнатной температуре в среде аргона, промыли водой с последующей промывкой солевым раствором, высушили над безводным сульфатом натрия и отфильтровали. Растворитель выпарили под сниженным давлением для получения сырого остатка, очищенного хроматографией обращенной фазы с помощью С18, колонка на 20-40 мкм (15 г), элюировав с градиентом (10-95% более чем 18 мин) ацетонитрила (АсОН 0,1%) в воде (АсОН 0,1%), лиофилизировали для получения 12. MS m/z: 1073.2 [МН+], 1054.4 [М-18]; чистота: 95% (LC/MS).
Пример 8. Подготовка и характеристика конъюгата.
Два различных состава майтанзин-линкера, подготовленные согласно предыдущим примерам (соединения 5 и 6), конъюгировали с различными моноклональными антителами антигена антиопухоли. Соединение 5 включает преобладающе единственный диастереомер цитотоксического соединения линкера-DM1, тогда как соединение 6 включает смесь различных диастереомеров линкера-DM1. Антителами, используемыми в этом примере, были анти-HER2 антитело, получившее вариабельные области из humAb4D5-8 согласно Carter и др., PNAS 1992 89 4285, анти-EGFRvШ антитело, получившее вариабельные области от клона 131 согласно WO 2013075048 А1, и анти-MUC16 антитело, получившее вариабельности области от клона 3А5 согласно WO 2007001851.
- 21 038192
Антитела были выражены в клетках СНО и очищены протеином А. Антитело контроля изотипа, не участвующее в связывании, полученное из антигена инфекционного заболевания, имеющего отношение к онкологии, также использовалось в этом примере.
Антитела (10 мг/мл) в 50 мм HEPES, 150 мм NaCl, pH фактор 8.0 и 10% (v/v) DMA конъюгировали с 6-кратным избытком соединения 5 или 6 в течение 1 ч при температуре окружающей среды. Конъюгат очищали гель-фильтрационной хроматографией и стерильно отфильтровали. Полезные концентрации протеина и линкера определяли спектральным анализом УФ и масс-спектрометрией MALDI-TOF. Гельфильтрационная ВЭЖХ показала, что все используемые конъюгаты были мономерными >95%, и RPВЭЖХ показала наличие <0,5% неконъюгированных полезным грузом линкеров. Результаты приведены в табл. 1 на основе протеина. Все конъюгированные антитела были проанализированы УФ для значений полезного груза линкера согласно Hamblett и др., Cancer Res 2004 10 7063 и разностью масс, начальной по сравнению с массой конъюгата. Результаты приведены в табл. 1.
Таблица 1
L/I^^AlieHlie ε252 нм (см1 Μ'1) с280 им (см-1 М1)
5 26790 5700
6* 26790 5700
Ашитело «252 нм (см1 Μ'1) ε280 нм (см1 М’1)
HER2 81847 215388
EGFRvIII 79579 209420
MUC16 88671 248380
Изотип контроль 81718 233480
..............
I кыезная Полезная Выход %
Ιχΐχί АН II нагрузка: нагрузка:
Антитело (УФ) Ан in тело (МС)
........................ -С
HER2-5 (in vivo) 2.7 2.7 66
HER2-5 (in vitro) 3.1 2.4 75
HER2-6 {in vitro) 2.9 2.4 70
EGFRvIII-5 2.8 2.3 56
EGFRvIII-6 2.9 2.2 56
MUC16-5 2.4 2.0 76
MUC16-6 2.3 2.1 96
Изотип контроль-5 3.3 3.3 67
* Коэффициенты ослабления использовались из соединения 5.
Пример 9. Пробы цитотоксичности in vitro.
Клетки были засеяны в 96-луночный планшет, покрытый PDL по 10000 (SK-BR-3 и NCI-N87), 15000 (ВТ-474), 3000 (Ovcar-3 и PC3/Muc16), 2000 (HEK293/hEGFRvIII), 1500 (U251/hEGFRvIII) или 400 клеток (MMT/hEGFRvIII) на лунку в полной питательной среде, и быстро выращены. Для кривых жизнеспособности клетки конъюгаты антитела с лекарственным препаратом, последовательно разбавленные, или без полезной нагрузки, были добавлены к клеткам в заключительных концентрациях в пределах от 1 гм до 1 пм и выдерживались в течение 3 дней. Каждая концентрация была повторена дважды, принимая во внимание соответствующее среднеквадратичное отклонение. Клетки были засеяны CCK8 (Dojindo) в течение последних 1-3 ч, и спектральная поглощательная способность 450 нм (OD450) была определена на аппарате Flexstation3 (Molecular Devices). Фоновые уровни OD450 клеток, обработанных дигитонином (40 нм), были вычтены из всех клеток, и жизнеспособность была выражена как процент необработанных контрольных групп. Значения IC50 были определены из логистического уравнения с четырьмя парамет- 22 038192 рами с использованием динамической характеристики на 10 точек (GraphPad Prism). Все кривые и значения IC50 были скорректированы для эквивалентов полезного груза на основе данных эксперимента
MALDI-TOF.
В клетках SKBR3 (линия рака молочной железы), изначально экспрессирующих HER2 в 607 раз выше связывающего изотипа контроля, единственный конъюгат соединения диастереомера HER2-5 (партии in vitro и in vivo) имел значение IC50=0,3 нм, по сравнению с 0,9 нм для смеси конъюгата соединения диастереомера HER2-6 (табл. 2, фиг. 3). Небольшая партия in vitro была конъюгирована первой и использовалась только для анализа пролиферации клеток, в то время как большая партия in vivo была конъюгирована позже и использовалась для экспериментов in vitro и для in vivo. Оголенное антитело HER2 имело мало свойств антипролиферации.
В клетках ВТ474 (линия рака молочной железы), изначально экспрессирующих HER2 в 426 раз выше связывающего изотипа контроля, единственный конъюгат соединения диастереомера (in vitro) имел значение IC50 = 4,6 нм, в то время как партия HER2-5 (in vivo) имела значение IC50=4,0 нм, по сравнению с 11,6 нм для смеси конъюгата соединения диастереомера HER2-6 (табл. 2, фиг. 4). Оголенное антитело HER2 имело мало свойств антипролиферации.
В клетках NCI-N87 (линия рака молочной железы), изначально экспрессирующих HER2 в 869 раз выше связывающего изотипа контроля, единственный конъюгат соединения диастереомера (in vitro) имел значение IC50 = 0,6 нм, в то время как партия HER2-5 (in vivo) имела значение IC50 = 0,4 нм, по сравнению с 1,0 нм для смеси конъюгата соединения диастереомера HER2-6 (табл. 2, фиг. 5). Оголенное антитело HER2 имело мало свойств антипролиферации.
В клетках HEK293/hEGFRvIII, экспрессирующих hEGFRvIII в 360 раз выше связывающего изотипа контроля, оба конъюгата (единственный и смесь диастереомеров) имели значение IC50=0,4 нм (табл. 3, фиг. 6). Оголенное антитело hEGFRvIII имело мало свойств антипролиферации.
В клетках MMT/hEGFRvIII, экспрессирующих hEGFRvIII в 280 раз выше связывающего изотипа контроля, единственный конъюгат соединения диастереомера EGFRvIII-5 имел значение IC50=0,5 нм, в то время как смесь конъюгатов соединения диастереомера EGFRvIII-6 имела значение IC50 = 9,8 нм (табл. 2, фиг. 7). Оголенное антитело EGFRvIII имело мало свойств антипролиферации.
В клетках U251/hEGFRvIII, экспрессирующих hEGFRvIII в 165 раз выше связывающего изотипа контроля, единственный конъюгат соединения диастереомера EGFRvIII-5 имел значение IC50 = 2,4 нм, в то время как смесь конъюгатов соединения диастереомера EGFRvIII-6 имела значение IC50 = 3,3 нм (табл. 3, фиг. 7). Оголенное антитело EGFRvIII имело мало свойств антипролиферации.
В клетках Ovcar-3 (линия рака яичников), изначально экспрессирующих MUC16 в 373 раз выше связывающего изотипа контроля, единственный конъюгат соединения диастереомера MUC16-5 имел значение IC50 = 6,3 нм, в то время как смесь конъюгатов соединения диастереомера MUC16-6 имела значение IC50=16,0 нм (табл. 4, фиг. 8). Оголенное антитело Muc16 имело мало свойств антипролиферации.
В клетках PC3/MUC16, экспрессирующих MUC16 в 105 раз выше связывающего изотипа контроля, единственный конъюгат соединения диастереомера MUC16-5 имел значение IC50 = 0,34 нм, в то время как смесь конъюгатов соединения диастереомера MUC16-6 имела значение IC50 = 0,8 нм (табл. 4, фиг. 9). Оголенное антитело Muc16 имело мало свойств антипролиферации.
На фиг. 3, 4, и 5 майтанзин-3-N-метил-L-ала-(3-метилдисульфанил)пропанамид (DM1-SMe, подготовленный согласно Но и Carrozella, заявка на патент США 2007/0037972 А1) был выбран для придания полезного груза в этих исследованиях. Соединение 4 было бы слишком реактивными для использования in vitro или in vivo, таким образом, обеспечивая ненадежные результаты.
Результаты in vitro приведены в табл. 2-4 на основании целевого воздействия. Этот пример демонстрирует, что конъюгаты антитела с лекарственным препаратом против опухоли, включающий лекарственный препарат из одного диастереомера, описанного в настоящем изобретении, в большинстве случаев демонстрировал больший уровень потенции к уничтожению in vitro, чем соответствующие конъюгаты антитела с лекарственным препаратом, включающие смеси диастереомеров. Для проанализированных мишеней конъюгаты единственного диастереомера антитела с лекарственным препаратом, как правило, были на порядок в 2-3 раз мощнее, чем соответствующая смесь конъюгатов, в зависимости от определенных клеточных линий.
Таблица 2
Конъюгат антитела SKBR3 IC50 (нМ) BT474 IC50 (нМ) N87 IC50 (нМ)
HER2-5 (in vivo) 0.3 4.0 0.4
HER2-5 (in vitro) 0.3 4.6 0.6
HER2-6 (in vitro) 0.9 11.6 1.0
- 23 038192
Таблица 3
Конъюгат антитела HEK293/hEGFRvHI IC50 (нМ) MMT/hEGFRvIII IC50 (нМ) U251/hEGFRvIII IC50 (нМ)
EGFRvIII-5 0.4 0.5 2.4
EGFRvIII-6 0.5 9.8 3.3
Конъюгат антитела Ovcar-3 IC50 (нМ) PC3/MUC16 IC50 (нМ)
MUC16-5 6.3 0.34
MUC16-6 16.0 0.80
Таблица 4
Пример 10. Исследования in vivo.
Чтобы определить in vivo эффективность конъюгата анти-HER2 единственного диастереомера (HER2-5), исследования были проведены на мышах, которым вживили ксенотрансплантаты рака желудка HER2+, поскольку об эффективности в этой модели ранее сообщал Barok и др. (Barok М. и др., Can Letters 2011). В частности, 5х106 клеток NCI-N87 (АТСС CRL-5822) были внедрены подкожно в нижний правый фланг мышей СВ-17 SCID (Taconic). Как только опухоли достигли среднего объема 150 мм3, мышей рандомизировали по группам из восьми особей, которым вводили реактивы контроля или HER25. Реактивы контроля включали лекарственную среду PBS, без DM1-SMe, изотип контроль, изотип контроль-5 или HER2. Мыши получали еженедельные дозы один раз в течение трех недель, и объемы опухоли и масса тела проверялись дважды в неделю в течение всего исследования. Конъюгаты вводили в дозах 1, 5 и 15 мг/кг, поскольку эти дозы, как оказалось, были эффективными в предыдущем эксперименте in vivo Lewis-Phillips и др. (Lewis-PhillipsG и др., Can Res 2008).
В текущей модели опухоли N87, HER2-5 продемонстрировали четкую эффективность против опухоли, при этом дозы 5 и 15 мг/кг привели к значительным уменьшениям в начальном объеме опухоли и уничтожениям некоторых опухолей при более высокой дозе (фиг. 11 и 12). Значительная задержка роста опухоли относительно агентов контроля также наблюдалась на уровне дозы 1 мг/кг. Нежелательные явления не наблюдались после введения мышам HER2-5, демонстрируя стабильный привес в течение всего исследования (фиг. 13).

Claims (78)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Смесь диастереомерных соединений формулы IIa и IIb
    где L является антителом или его антиген-связывающим фрагментом; и где соединение формулы IIa или IIb представлено в диастереомерном избытке, превышающем 50%, при этом диастереомерный избыток основан на количествах по меньшей мере двух диастереомеров, имеющих разные стереохимические конфигурации хирального углерода, который связан с атомом серы в
    - 24 038192 формуле IIa или IIb.
  2. 2. Смесь по п.1, где L является антителом или его антиген-связывающим фрагментом, которые связывают опухоль-ассоциированный антиген, выбранный из группы, содержащей AFP, ALK, BAGE белки, β-катенин, brc-abl, BRCA1, BORIS, CA9, карбоангидразу IX, каспазу-8, CD20, CD40, CDK4, СЕА, CLEC12A, сМЕТ, CTLA4, циклин-В1, CYP1B1, EGFR, EGFRvIII, ErbB2/Her2, ErbB3, ErbB4, ETV6-AML, EphA2, Fra-1, FOLR1, GAGE белки, GD2, GD3, GloboH, глипикан-3, GM3, gp100, Her2, HLA/B-raf, HLA/k-ras, HLA/MAGE-A3, hTERT, IGF1R, LGR5, LMP2, MAGE белки, MART-1, мезотелин, ML-IAP, Muc1, Muc16 или СА-125, MUM1, NA17, NY-BR1, NY-BR62, NY-BR85, NY-ESO1, OX40, p15, p53, PAP, РАХ3, РАХ5, PCTA-1, PDGFR-α, PDGFR-β, PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C, PDGF-D, PLAC1, PRLR, PRAME, PSMA, FOLH1, RAGE белки, Ras, RGS5, Rho, SART-1, SART-3, Steap-1, Steap-2, сурвивин, TAG-72, TGF-β, TMPRSS2, Tn, TNFRSF17, TRP-1, TRP-2, тирозиназу и уроплакин-3.
  3. 3. Смесь по п.2, где опухоль-ассоциированный антиген выбирается из группы, содержащей EGFRvIII, Her2 и Muc16.
  4. 4. Смесь по п.3, где соединение формулы IIa или IIb представлено в диастереомерном избытке, превышающем 95%, при этом диастереомерный избыток основан на количествах по меньшей мере двух диастереомеров, имеющих разные стереохимические конфигурации хирального углерода, который связан с атомом серы в формуле IIa или IIb.
  5. 5. Смесь по любому из пп.1-4, где соединение формулы IIa представлено в диастереомерном избытке, превышающем 50%.
  6. 6. Смесь по п.1, где соединение с формулой IIb представлено в диастереомерном избытке, превышающем 50%.
  7. 7. Антипролиферативная фармацевтическая композиция, содержащая смесь диастереомерных соединений формулы IIa или IIb
    о
    На
    о нь и фармацевтически приемлемый наполнитель, где L является антителом или его антиген-связывающим фрагментом и соединение формулы IIa или IIb представлено в диастереомерном избытке, превышающем 50%, при этом диастереомерный избыток основан на количествах по меньшей мере двух диастереомеров, имеющих разные стереохимические конфигурации хирального углерода, который связан с атомом серы в формуле IIa или IIb.
  8. 8. Фармацевтическая композиция по п.7, где соединение формулы IIa или IIb представляет собой
    о или
    - 25 038192
    О
  9. 9. Фармацевтическая композиция по п.8, где соединение формулы IIa или IIb представлено в диастереомерном избытке, превышающем 95%, при этом диастереомерный избыток основан на количествах по меньшей мере двух диастереомеров, имеющих разные стереохимические конфигурации хирального углерода, который связан с атомом серы в формуле IIa или IIb.
  10. 10. Способ лечения заболевания или расстройства, связанного с опухоль-ассоциированным антигеном, который выбирается из группы, содержащей AFP, ALK, BAGE белки, β-катенин, brc-abl, BRCA1, BORIS, CA9, карбоангидразу IX, каспазу-8, CD20, CD40, CDK4, СЕА, CLEC12A, сМЕТ, CTLA4, циклинBI, CYP1B1, EGFR, EGFRvIII, ErbB2/Her2, ErbB3, ErbB4, ETV6-AML, EphA2, Fra-1, FOLR1, GAGE белки, GD2, GD3, GloboH, глипикан-3, GM3, gp100, Her2, HLA/B-raf, HLA/k-ras, HLA/MAGE-A3, hTERT, IGF1R, LGR5, LMP2, MAGE белки, MART-1, мезотелин, ML-IAP, Muc1, Muc16 или CA-125, MUM1, NA17, NY-BR1, NY-BR62, NY-BR85, NY-ESO1, OX40, p15, p53, PAP, РАХ3, РАХ5, PCTA-1, PDGFR-α, PDGFR-β, PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C, PDGF-D, PLAC1, PRLR, PRAME, PSMA FOLH1, RAGE белки, Ras, RGS5, Rho, SART-1, SART-3, Steap-1, Steap-2, сурвивин, TAG-72, TGF-β, TMPRSS2, Tn, TNFRSF17, TRP-1, TRP-2, тирозиназу и уроплакин-3; где способ заключается в введении терапевтически эффективного количества смеси диастереомерных соединений формулы IIa или IIb
    О
    На
    о нь где L является антителом или его антиген-связывающим фрагментом, которые связывают указанный опухоль-ассоциированный антиген, и где соединение представлено в диастереомерном избытке, превышающем 50%, при этом диастереомерный избыток основан на количествах по меньшей мере двух диастереомеров, имеющих разные стереохимические конфигурации хирального углерода, который связан с атомом серы в формуле IIa или IIb.
  11. 11. Смесь диастереомеров соединения формулы I
    - 26 038192 где X представляет собой
    Y 1 представляет собой
    или Н;
    R1 и R2 независимо выбираются из Н или C1-С10-алкила и n равен 1;
    где соединение формулы I представлено в диастереомерном избытке, превышающем 50%, при этом диастереомерный избыток основан на количествах по меньшей мере двух диастереомеров, имеющих разные стереохимические конфигурации хирального углерода, который связан с атомом серы в формуле I.
    Гуо
  12. 12. Смесь по п.11, где Y 1 представляет собой ·
  13. 13. Смесь по п.11, где R1 и R2 представляют собой Н.
  14. 14. Смесь по п.11, где соединение формулы I представляет собой
  15. 15. Смесь по п.14, где соединение формулы I представляет собой или
    - 27 038192
    О
  16. 16. Смесь по п.14, где соединение формулы I представляет собой
    О где X представляет собой
    Y1 представляет собой
  17. 17. Смесь по любому из пп.11-16, где диастереомерный избыток превышает 95%, при этом диастереомерный избыток основан на количествах по меньшей мере двух диастереомеров, имеющих разные стереохимические конфигурации хирального углерода, который связан с атомом серы в формуле I.
  18. 18. Способ получения смеси диастереомеров соединения формулы I
    или Н;
    R1 и R2 независимо выбираются из Н или C1-С10-αлкила и nравен 1;
    включающий в себя этапы:
    (а) обеспечение взаимодействия (i) соединения формулы III
    - 28 038192
    III (ii) соединения формулы IV
    о
    IV (iii) силикагеля и (iv) растворителя, включающего органический растворитель и воду; и (b) выделение соединения формулы I, представленного в диастереомерном избытке, превышающем 50%, где диастереомерный избыток основан на количествах по меньшей мере двух диастереомеров, имеющих разные стереохимические конфигурации хирального углерода, который связан с атомом серы в формуле I.
  19. 19. Способ по п.18, где органический растворитель содержит полярный апротонный растворитель.
  20. 20. Способ по п. 19, где полярный апротонный растворитель содержит ацетонитрил.
  21. 21. Способ по п.20, где органический растворитель и вода присутствуют в объемной пропорции от 1:1 до 4:1 или от 1:1 до 10:1.
  22. 22. Способ по п.18, где молярная пропорция соединения с формулой III и соединения с формулой IV составляет от 1:1 до 1:3.
  23. 23. Способ по п.18, где n равен 1 и R1 и R2, каждый независимо, представляют собой водород.
  24. 24. Способ по п.18, где соединение формулы I представляет собой
    О
  25. 25. Способ по п.18, включающий на этапе (а) обеспечение взаимодействия в атмосфере аргона.
  26. 26. Способ по п.18, включающий на этапе (а) перемешивание соединения формулы III, соединения формулы IV; силикагеля, растворителя, включающего органический растворитель, и воды.
  27. 27. Способ по любому из пп.19-26, где после этапа (а) и перед этапом (b) производится (с) добавление (i) соединения формулы III
    III (ii) соединения формулы IV
    - 29 038192
    IV (iii) силикагеля и (iv) растворителя, включающего органический растворитель и воду;
    (d) обеспечение взаимодействия соединения формулы III, соединения формулы IV, силикагеля и растворителя, включающего органический растворитель и воду; при этом
    R1 и R2 независимо выбраны из Н или C1-С10-αлкила; и n равен 1.
  28. 28. Способ по п.18, включающий в себя на этапе (с) выделение соединения с формулой I путем фильтрации.
  29. 29. Способ по п.28, где фильтрация производится посредством целита.
  30. 30. Способ по п.18, дополнительно включающий в себя очистку соединения с формулой I посредством колоночной хроматографии на силикагеле.
  31. 31. Способ по п.30, дополнительно включающий в себя высушивание соединения с формулой I.
  32. 32. Способ получения конъюгата соединения по формуле I
    НОН.ОСН= ?Нз 0^ Ν Οχ___' о Ъ L1 Н3С'\Гу сн3 d н3с CI ΫΥ^Ο О СН3 1 , где X представляет собой \ о 0 \ \ / о > Λ N^J R, R2 О Y 1 представляет собой ONa+ kJ^F X.F F~° . jOL· JOG J7Y° JL 0^N F γ / F / >· F F . J J Ϊ 1 JL м 0¼ , ЬЦ или Н; R1 и R2 независимо выбираются из Н или C1-С10-αлкила и n равен 1; с антителом или его антиген-связывающим фрагментом, включающий следующие этапы: (а) взаимодействие (i) соединения формулы III )СН3 'п О'К+ / s=o )=о l I ''N [1 I L
    - 30 038192 (ii) соединения формулы IV
    (iii) силикагеля и (iv) растворителя, включающего органический растворитель и воду;
    (b) обеспечение реакции между соединением формулы III с соединением формулы IV;
    (c) выделение соединения формулы I, представленного в диастереомерном избытке, превышающем 50%, где диастереомерный избыток основан на количествах по меньшей мере двух диастереомеров, имеющих разные стереохимические конфигурации хирального углерода, который связан с атомом серы в формуле I; и (d) сочетание соединения формулы I и антитела или его антиген-связывающего фрагмента для создания антительного лекарственного конъюгата.
  33. 33. Способ по п.32, где соединение формулы I прикреплено к антителу или антиген-связывающему фрагменту посредством S, О или NR3, при этом R3 является Н или C1-С10-алкилом.
  34. 34. Способ по п.18, где соединение формулы I представляет собой
  35. 35. Способ по п.18, где соединение формулы I представляет собой или
    О
  36. 36. Способ по п.18, где соединение формулы I представляет собой
    - 31 038192
    О
  37. 37. Способ по п.32 или 33, где антитело или его антиген-связывающий фрагмент связывают опухоль-ассоциированный антиген, который выбирается из группы, содержащей AFP, ALK, BAGE белки, βкатенин, brc-abl, BRCA1, BORIS, CA9, карбоангидразу IX, каспазу-8, CD20, CD40, CDK4, СЕА, CLEC12A, сМЕТ, CTLA4, циклин-В1, CYP1B1, EGFR, EGFRvIII, ErbB2/Her2, ErbB3, ErbB4, ETV6-AML, EphA2, Fra-1, FOLR1, GAGE белки, GD2, GD3, GloboH, глипикан-3, GM3, gp100, Her2, HLA/B-raf, HLA/k-ras, HLA/MAGE-A3, hTERT, IGF1R, LGR5, LMP2, MAGE белки, MART-1, мезотелин, ML-IAP, Muc1, Muc16 или СА-125, MUM1, NA17, NY-BR1, NY-BR62, NY-BR85, NY-ESO1, OX40, p15, p53, PAP, PAX3, PAX5, PCTA-1, PDGFR-α, PDGFR-β, PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C, PDGF-D, PLAC1, PRLR, PRAME, PSMA, FOLH1, RAGE белки, Ras, RGS5, Rho, SART-1, SART-3, Steap-1, Steap-2, сурвивин, TAG-72, TGF-β, TMPRSS2, Tn, TNFRSF17, TRP-1, TRP-2, тирозиназу и уроплакин-3.
  38. 38. Способ по п.36, где опухоль-ассоциированный антиген выбирается из группы, содержащей EGFRvIII, Her2 и Muc16.
  39. 39. Способ получения смеси диастереомерных соединений формулы IIa и IIb
    о
    Па
    о пь где L является антителом или его антиген-связывающим фрагментом; и где соединение формулы IIa или IIb представлено в диастереомерном избытке, превышающем 50%, при этом диастереомерный избыток основан на смеси, содержащей по меньшей мере два диастереомера, имеющих разные стереохимические конфигурации хирального углерода, который связан с атомом серы в формуле IIa или IIb, включающий:
    (а) реакцию антитела или его антиген-связывающего фрагмента L с соединением формулы I, где соединение представляет собой
    о
    - 32 038192 или
    о где соединение формулы I представлено в диастереомерном избытке, превышающем 50%, при этом диастереомерный избыток основан на количествах по меньшей мере двух диастереомеров, имеющих разные стереохимические конфигурации хирального углерода, который связан с атомом серы в формуле
    I; и (b) очищение соединения формулы IIa или IIb.
  40. 40. Способ по п.39, где L представляет собой антитело или его антиген-связывающий фрагмент, который связывает опухоль-ассоциированный антиген, который выбирается из группы, содержащей AFP, ALK, BAGE белки, β-катенин, brc-abl, BRCA1, BORIS, CA9, карбоангидразу IX, каспазу-8, CD20, CD40, CDK4, СЕА, CLEC12A, сМЕТ, CTLA4, циклин-В1, CYP1B1, EGFR, EGFRvIII, ErbB2/Her2, ErbB3, ErbB4, ETV6-AML, EphA2, Fra-1, FOLR1, GAGE белки, GD2, GD3, GloboH, глипикан-3, GM3, gp100, Her2, HLA/B-raf, HLA/k-ras, HLA/MAGE-A3, hTERT, IGF1R, LGR5, LMP2, MAGE белки, MART-1, мезотелин, ML-IAP, Muc1, Muc16 или CA-125, MUM1, NA17, NY-BR1, NY-BR62, NY-BR85, NY-ESO1, OX40, p15, p53, PAP, РАХ3, РАХ5, PCTA-1, PDGFR-α, PDGFR-β, PDGF-A, PDGF-B, PDGF-C, PDGF-D, PLAC1, PRLR, PRAME, PSMA, FOLH1, RAGE белки, Ras, RGS5, Rho, SART-1, SART-3, Steap-1, Steap-2, сурвивин, TAG-72, TGF-β, TMPRSS2, Tn, TNFRSF17, TRP-1, TRP-2, тирозиназу и уроплакин-3.
  41. 41. Способ по п.40, где опухоль-ассоциированный антиген выбирается из группы, содержащей EGFRvIII, Her2 и Muc16.
  42. 42. Способ по п.39, где соединение формулы IIa или IIb представлено в диастереомерном избытке, превышающем 95%, при этом диастереомерный избыток основан на количествах по меньшей мере двух диастереомеров, имеющих разные стереохимические конфигурации хирального углерода, который связан с атомом серы в формуле IIa или IIb.
  43. 43. Способ по п.39, где соединение формулы I представлено в диастереомерном избытке, превышающем 95%, при этом диастереомерный избыток основан на количествах по меньшей мере двух диастереомеров, имеющих разные стереохимические конфигурации хирального углерода, который связан с атомом серы в формуле I.
  44. 44. Способ по п.39, где соединение формулы IIa представляет собой
    о
  45. 45. Способ по п.39, где соединение формулы IIb представляет собой
  46. 46. Способ по п.39, где соединение формулы IIa представляет собой
    - 33 038192 или
  47. 47. Способ по п.39, где соединение формулы IIb представляет собой
  48. 48. Способ по п.39, где соединение формулы I представляет собой
  49. 49. Способ по п.39, где соединение формулы I представляет собой
  50. 50. Способ по п.18, где соединение формулы I представляет собой
    - 34 038192
  51. 51. Способ по п.18, где соединение формулы I представляет собой
    где X представляет собой или
    Y1 представляет собой
  52. 52. Способ по п.18, где соединение формулы I представляет собой _ н онРСНз СНч
    или Н;
    R1 и R2 независимо выбираются из Н или C1-С10-αлкила и n равняется 1.
  53. 53. Диастереомер соединения формулы I
    - 35 038192
    I Уо
  54. 54. Диастереомер по п.53, где Y1 представляет собой
  55. 55. Диастереомер по п.53, где R1 и R2 представляют собой Н.
  56. 56. Диастереомер по п.53, где диастереомер представляет собой
    или
    О
  57. 57. Диастереомер по п.53, где диастереомер представляет собой
    О
  58. 58. Диастереомер по п.53, где диастереомер представляет собой
    О
  59. 59. Диастереомер по п.53, где диастереомер представляет собой
    О
  60. 60. Диастереомер по п.53, где диастереомер представляет собой
    - 36 038192
    где соединение является стереомерно чистым.
  61. 63. Смесь по п.2, в которой белки GAGE выбирают из группы, состоящей из белков GAGE-1 и GAGE-2.
  62. 64. Смесь по п.2, в которой белки MAGE выбирают из группы, состоящей из белков MAGE-1, MAGE-2, MAGE-3, MAGE-4, MAGE-6 и MAGE-12.
  63. 65. Способ по п.10, где белки GAGE выбирают из группы, состоящей из белков GAGE-1 и GAGE-2.
  64. 66. Способ по п.10, где белки MAGE выбирают из группы, состоящей из белков MAGE-1, MAGE-2, MAGE-3, MAGE-4, MAGE-6 и MAGE-12.
  65. 67. Способ по п.37, где белки GAGE выбирают из группы, состоящей из белков GAGE-1 и GAGE-2.
  66. 68. Способ по п.37, где белки MAGE выбирают из группы, состоящей из белков MAGE-1, MAGE-2, MAGE-3, MAGE-4, MAGE-6 и MAGE-12.
  67. 69. Способ по п.40, где белки GAGE выбирают из группы, состоящей из белков GAGE-1 и GAGE-2.
  68. 70. Способ по п.40, где белки MAGE выбирают из группы, состоящей из белков MAGE-1, MAGE-2, MAGE-3, MAGE-4, MAGE-6 и MAGE-12.
  69. 71. Способ по любому из пп.18-27, где на этапе (а) приведение в контакт длится в течение 18 ч.
  70. 72. Способ по любому из пп.18-27, где соединение формулы IV находится в избытке против стехиометрии соединения формулы III.
  71. 73. Способ по любому из пп.18-27, который также включает приведение в контакт с дополнительным количеством соединения формулы IV после этапа (а).
  72. 74. Способ по любому из пп.18-27, где молярное отношение соединения формулы IV к соединению формулы III составляет 2,3:1 на этапе (а).
  73. 75. Способ по п.18, в котором молярное отношение соединения формулы IV к соединению формулы III составляет 1,5:1 на этапе (а).
  74. 76. Композиция для лечения пролиферативных расстройств, содержащая конъюгат антитела после реакции с соединением формулы I
    (I) характеризуемый 1Н ЯМР спектром, указанным на фиг. 1, и фармацевтически приемлемый носитель.
    - 37 038192
  75. 77. Смесь диастереомеров, полученных способом по п.18.
  76. 78. Смесь диастереомеров, полученных способом по п.18, где R1 представляет собой Н, R2 пред- ставляет собой Н и Y1 представляет собой
  77. 79. Конъюгат, полученный способом по п.32.
  78. 80. Конъюгат, полученный способом по п.32, где R1 представляет собой Н, R2 представляет собой Н и Y 1 представляет собой
EA201600191A 2013-08-26 2014-08-26 Фармацевтические композиции, содержащие диастереомеры макролида, способы их синтезирования и терапевтическое применение EA038192B1 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361869954P 2013-08-26 2013-08-26
US201461934313P 2014-01-31 2014-01-31
PCT/US2014/052757 WO2015031396A1 (en) 2013-08-26 2014-08-26 Pharmaceutical compositions comprising macrolide diastereomers, methods of their synthesis and therapeutic uses

Publications (3)

Publication Number Publication Date
EA201600191A1 EA201600191A1 (ru) 2016-07-29
EA201600191A8 EA201600191A8 (ru) 2018-04-30
EA038192B1 true EA038192B1 (ru) 2021-07-21

Family

ID=51542449

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201600191A EA038192B1 (ru) 2013-08-26 2014-08-26 Фармацевтические композиции, содержащие диастереомеры макролида, способы их синтезирования и терапевтическое применение

Country Status (17)

Country Link
US (3) US20160354482A1 (ru)
EP (1) EP3038624A1 (ru)
JP (1) JP6608823B2 (ru)
KR (1) KR102252925B1 (ru)
CN (1) CN105530942B (ru)
AU (1) AU2014311361B2 (ru)
BR (1) BR112016004023A2 (ru)
CA (1) CA2921412A1 (ru)
CL (1) CL2016000408A1 (ru)
EA (1) EA038192B1 (ru)
HK (1) HK1220115A1 (ru)
IL (1) IL244203B (ru)
MX (1) MX2016002149A (ru)
PH (1) PH12016500380A1 (ru)
SG (1) SG11201601230RA (ru)
WO (1) WO2015031396A1 (ru)
ZA (1) ZA201601534B (ru)

Families Citing this family (24)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6847388B2 (ja) 2013-03-15 2021-03-31 レゲネロン ファーマシューティカルス，インコーポレーテッド 生物活性分子、そのコンジュゲート、及び治療用途
AU2014311361B2 (en) 2013-08-26 2018-11-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions comprising macrolide diastereomers, methods of their synthesis and therapeutic uses
WO2016160615A1 (en) * 2015-03-27 2016-10-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Maytansinoid derivatives, conjugates thereof, and methods of use
SG10202112460VA (en) 2015-07-06 2021-12-30 Regeneron Pharma Multispecific antigen-binding molecules and uses thereof
JP6934010B2 (ja) 2016-01-25 2021-09-08 レゲネロン ファーマシューティカルス，インコーポレーテッド メイタンシノイド誘導体、そのコンジュゲート、及び使用方法
WO2017190079A1 (en) 2016-04-28 2017-11-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of making multispecific antigen-binding molecules
DK3515487T3 (da) 2016-09-23 2023-08-28 Regeneron Pharma Bispecifikke anti-MUC16-CD3-antistoffer og anti-MUC16-lægemiddelkonjugater
IL295509A (en) 2016-09-23 2022-10-01 Regeneron Pharma Steap2 Antibodies, Antibody-Drug Conjugates, and Bispecific Antigen-Binding Compounds That Bind Steap2 and CD3, and Their Uses
TWI782930B (zh) 2016-11-16 2022-11-11 美商再生元醫藥公司 抗ｍｅｔ抗體，結合ｍｅｔ之雙特異性抗原結合分子及其使用方法
IL266917B2 (en) 2016-11-29 2023-10-01 Regeneron Pharma Conjugates of a drug and an antibody to the human prolactin receptor (PRLR) and their use in the combined treatment of PRLR-positive breast cancer
KR20200007905A (ko) 2017-05-18 2020-01-22 리제너론 파마슈티칼스 인코포레이티드 사이클로덱스트린 단백질 약물 접합체
SG11202004151YA (en) 2017-11-07 2020-06-29 Regeneron Pharma Hydrophilic linkers for antibody drug conjugates
CA3097711A1 (en) 2018-04-30 2019-11-07 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Antibodies, and bispecific antigen-binding molecules that bind her2 and/or aplp2, conjugates, and uses thereof
MX2020012350A (es) 2018-05-17 2021-01-29 Regeneron Pharma Anticuerpos anti-cd63, conjugados y usos de estos.
EP3927435A1 (en) 2019-02-21 2021-12-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of treating ocular cancer using anti-met antibodies and bispecific antigen binding molecules that bind met
US11896682B2 (en) 2019-09-16 2024-02-13 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Radiolabeled MET binding proteins for immuno-PET imaging and methods of use thereof
US11814428B2 (en) 2019-09-19 2023-11-14 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-PTCRA antibody-drug conjugates and uses thereof
JP2023502929A (ja) 2019-11-15 2023-01-26 シージェン インコーポレイテッド Ｈｅｒ２陽性乳がんを抗ｈｅｒ２抗体－薬物コンジュゲートと併用してツカチニブで治療する方法
MX2022010599A (es) 2020-02-28 2022-09-09 Regeneron Pharma Moleculas biespecificas de union al antigeno que se unen a her2, y metodos de uso de los mismos.
MX2022012821A (es) 2020-04-16 2022-11-07 Regeneron Pharma Metodos de conjugacion de diels-alder.
AU2021308190A1 (en) 2020-07-13 2023-02-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Camptothecin analogs conjugated to a glutamine residue in a protein, and their use
JP2023547323A (ja) 2020-10-22 2023-11-10 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド 抗ｆｇｆｒ２抗体及びその使用方法
WO2022103724A1 (en) 2020-11-10 2022-05-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Selenium antibody conjugates
CN115215780B (zh) * 2022-04-22 2023-08-08 上海格苓凯生物科技有限公司 一种利用n,n-二琥珀酰亚胺基碳酸酯制备异双功能交联剂smcc的方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090068178A1 (en) * 2002-05-08 2009-03-12 Genentech, Inc. Compositions and Methods for the Treatment of Tumor of Hematopoietic Origin
WO2009117277A2 (en) * 2008-03-18 2009-09-24 Genentech, Inc. Combinations of an anti-her2 antibody-drug conjugate and chemotherapeutic agents, and methods of use
WO2010126551A1 (en) * 2009-04-30 2010-11-04 Immunogen, Inc. Potent conjugates and hydrophilic linkers
CN103254311A (zh) * 2013-05-09 2013-08-21 齐鲁制药有限公司 一种制备抗体-美登素类生物碱药物偶联物的方法
WO2014089335A2 (en) * 2012-12-07 2014-06-12 Amgen Inc. Bcma antigen binding proteins

Family Cites Families (64)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4307016A (en) 1978-03-24 1981-12-22 Takeda Chemical Industries, Ltd. Demethyl maytansinoids
JPS5566585A (en) 1978-11-14 1980-05-20 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid compound and its preparation
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
CA2026147C (en) 1989-10-25 2006-02-07 Ravi J. Chari Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
US5714586A (en) 1995-06-07 1998-02-03 American Cyanamid Company Methods for the preparation of monomeric calicheamicin derivative/carrier conjugates
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
US20070258987A1 (en) 2000-11-28 2007-11-08 Seattle Genetics, Inc. Recombinant Anti-Cd30 Antibodies and Uses Thereof
EP1258255A1 (en) 2001-05-18 2002-11-20 Boehringer Ingelheim International GmbH Conjugates of an antibody to CD44 and a maytansinoid
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
US7276497B2 (en) 2003-05-20 2007-10-02 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising new maytansinoids
EP1638606B1 (en) 2003-06-27 2016-01-06 Amgen Fremont Inc. Antibodies directed to the deletion mutants of epidermal growth factor receptor and uses thereof
GB0316294D0 (en) 2003-07-11 2003-08-13 Polytherics Ltd Conjugated biological molecules and their preparation
TW200539855A (en) 2004-03-15 2005-12-16 Wyeth Corp Calicheamicin conjugates
JP5234734B2 (ja) 2004-06-01 2013-07-10 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗体−薬物結合体および方法
CA2587589A1 (en) 2004-11-29 2006-06-22 Seattle Genetics, Inc. Engineered antibodies and immunoconjugates
MX2007007011A (es) 2004-12-09 2007-09-21 Johnson & Johnson Inmunoconjugados anti-integrina, metodos y usos.
US7750116B1 (en) 2006-02-18 2010-07-06 Seattle Genetics, Inc. Antibody drug conjugate metabolites
RU2483080C2 (ru) 2006-10-27 2013-05-27 Дженентек, Инк. Антитела и иммуноконъюгаты и их применение
WO2008122039A2 (en) 2007-04-02 2008-10-09 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Selenocysteine mediated hybrid antibody molecules
US7723485B2 (en) 2007-05-08 2010-05-25 Genentech, Inc. Cysteine engineered anti-MUC16 antibodies and antibody drug conjugates
WO2008153744A2 (en) 2007-05-23 2008-12-18 Ventana Medical Systems, Inc. Polymeric carriers for immunohistochemistry and in situ hybridization
UA108598C2 (xx) 2008-04-30 2015-05-25 Високоефективні кон'югати та гідрофільні зшиваючі агенти (лінкери)
EP2326349B1 (en) 2008-07-21 2015-02-25 Polytherics Limited Novel reagents and method for conjugating biological molecules
EP2403538B1 (en) 2009-03-04 2017-10-04 Polytherics Limited Conjugated proteins and peptides
WO2011018611A1 (en) 2009-08-10 2011-02-17 Ucl Business Plc Reversible covalent linkage of functional molecules
UY32914A (es) 2009-10-02 2011-04-29 Sanofi Aventis Anticuerpos que se usan específicamente al receptor epha2
UY32913A (es) 2009-10-02 2011-04-29 Sanofi Aventis Nuevos maitansinoides y el uso de dichos maitansinoides para preparar conjugados con un anticuero
WO2011081928A2 (en) 2009-12-14 2011-07-07 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods for altering cocaine esterase activity
EA024730B1 (ru) 2010-04-15 2016-10-31 Медимьюн Лимитед Пирролбензодиазепиновые соединения, их конъюгаты, фармацевтические композиции, содержащие указанные конъюгаты, и применение указанных конъюгатов
US20130244905A1 (en) 2010-07-06 2013-09-19 Ed Grabczyk Reporter for RNA Polymerase II Termination
EP3960865A1 (en) 2010-08-02 2022-03-02 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Mice that make binding proteins comprising vl domains
PL2611785T3 (pl) 2010-09-01 2014-10-31 Bayer Ip Gmbh Amidy kwasu N-(tetrazol-5-ilo)- i N-(triazol-5-ilo)arylokarboksylowego i ich zastosowanie jako środki chwastobójcze
BR112013010569A2 (pt) 2010-10-29 2017-07-04 Immunogen Inc moléculas de ligação de egfr não antagonísticas e imunoconjugados das mesma
CN106349254A (zh) 2010-11-03 2017-01-25 伊缪诺金公司 包含新型安丝菌素衍生物的细胞毒性剂
CA2836361C (en) 2011-05-16 2020-11-10 Koninklijke Philips N.V. Bio-orthogonal drug activation
EP3170821B1 (en) 2011-05-27 2021-09-15 Ambrx, Inc. Compositions containing, methods involving, and uses of non-natural amino acid linked dolastatin derivatives
US8815226B2 (en) 2011-06-10 2014-08-26 Mersana Therapeutics, Inc. Protein-polymer-drug conjugates
BR112013032928A2 (pt) 2011-06-21 2017-01-24 Immunogen Inc "derivados de maitansinoide com ligante de peptídeo e conjugados dos mesmos, composição farmacêutica que os compreende e uso dos mesmos"
CN103987384A (zh) 2011-10-14 2014-08-13 西雅图基因公司 吡咯并苯并二氮杂卓和靶向结合物
EA028457B1 (ru) 2011-10-14 2017-11-30 Медимьюн Лимитед Пирролобензодиазепины
WO2013053872A1 (en) 2011-10-14 2013-04-18 Spirogen Sàrl Synthesis method and intermediates useful in the preparation of pyrrolobenzodiazepines
US9387259B2 (en) 2011-10-14 2016-07-12 Seattle Genetics, Inc. Pyrrolobenzodiazepines and targeted conjugates
WO2013068874A1 (en) 2011-11-11 2013-05-16 Pfizer Inc. Antibody-drug conjugates
WO2013085925A1 (en) 2011-12-05 2013-06-13 Igenica, Inc. Antibody-drug conjugates and related compounds, compositions, and methods
GB201210770D0 (en) 2012-06-18 2012-08-01 Polytherics Ltd Novel conjugation reagents
CA2876365A1 (en) 2012-06-19 2013-12-27 Polytherics Limited Novel process for preparation of antibody conjugates and novel antibody conjugates
HUE038285T2 (hu) 2012-10-23 2018-10-29 Synaffix Bv Módosított antitest, antitest-konjugátum és eljárás ezek elõállítására
NO2789793T3 (ru) 2012-10-24 2018-01-27
WO2014080251A1 (en) 2012-11-24 2014-05-30 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Hydrophilic linkers and their uses for conjugation of drugs to cell binding molecules
CN103333179B (zh) 2012-12-21 2017-06-16 百奥泰生物科技(广州)有限公司 类美登素衍生物及其制备方法和用途
CN103254213B (zh) 2012-12-21 2015-02-25 百奥泰生物科技(广州)有限公司 类美登素酯的制备方法及用于所述方法的组合物
JP6847388B2 (ja) 2013-03-15 2021-03-31 レゲネロン ファーマシューティカルス，インコーポレーテッド 生物活性分子、そのコンジュゲート、及び治療用途
WO2014194030A2 (en) 2013-05-31 2014-12-04 Immunogen, Inc. Conjugates comprising cell-binding agents and cytotoxic agents
WO2014197854A1 (en) 2013-06-06 2014-12-11 Igenica Biotherapeutics, Inc. Novel linkers for antibody-drug conjugates and related compounds, compositions, and methods of use
NZ714765A (en) 2013-06-06 2021-12-24 Pf Medicament Anti-c10orf54 antibodies and uses thereof
WO2014197871A2 (en) 2013-06-06 2014-12-11 Igenica Biotherapeutics, Inc. Antibody-drug conjugates, compositions and methods of use
WO2014197866A1 (en) 2013-06-06 2014-12-11 Igenica Biotherapeutics, Inc. Modified antibodies and related compounds, compositions, and methods of use
US9545451B2 (en) 2013-08-21 2017-01-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Anti-PRLR antibodies and methods for killing PRLR-expressing cells
AU2014311361B2 (en) 2013-08-26 2018-11-29 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical compositions comprising macrolide diastereomers, methods of their synthesis and therapeutic uses
US9493413B2 (en) 2013-11-27 2016-11-15 Redwood Bioscience, Inc. Hydrazinyl-pyrrolo compounds and methods for producing a conjugate
CN105793268B (zh) 2013-12-02 2019-03-15 香港浸会大学 具有两个稠合大环的抗癌性美登木素类化合物
CN106573074B (zh) 2014-06-02 2022-04-12 里珍纳龙药品有限公司 生物活性分子偶联物、试剂和制备方法及其治疗用途
WO2016160615A1 (en) 2015-03-27 2016-10-06 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Maytansinoid derivatives, conjugates thereof, and methods of use
JP6934010B2 (ja) 2016-01-25 2021-09-08 レゲネロン ファーマシューティカルス，インコーポレーテッド メイタンシノイド誘導体、そのコンジュゲート、及び使用方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090068178A1 (en) * 2002-05-08 2009-03-12 Genentech, Inc. Compositions and Methods for the Treatment of Tumor of Hematopoietic Origin
WO2009117277A2 (en) * 2008-03-18 2009-09-24 Genentech, Inc. Combinations of an anti-her2 antibody-drug conjugate and chemotherapeutic agents, and methods of use
WO2010126551A1 (en) * 2009-04-30 2010-11-04 Immunogen, Inc. Potent conjugates and hydrophilic linkers
WO2014089335A2 (en) * 2012-12-07 2014-06-12 Amgen Inc. Bcma antigen binding proteins
CN103254311A (zh) * 2013-05-09 2013-08-21 齐鲁制药有限公司 一种制备抗体-美登素类生物碱药物偶联物的方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ERICKSON HANS K; PARK PETER U; WIDDISON WAYNE C; KOVTUN YELENA V; GARRETT LISA M; HOFFMAN KAREN; LUTZ ROBERT J; GOLDMACHER VICTOR : "ANTIBODY- MAYTANSINOID CONJUGATES ARE ACTIVATED IN TARGETED CANCER CELLS BY LYSOSOMAL DEGRADATION AND LINKER-DEPENDENT INTRACELLULAR PROCESSING", CANCER RESEARCH, AMERICAN ASSOCIATION FOR CANCER RESEARCH, vol. 66, no. 8, 15 April 2006 (2006-04-15), pages 4426 - 4433, XP008074767, ISSN: 0008-5472, DOI: 10.1158/0008-5472.CAN-05-4489 *
NATHAN FISHKIN, ERIN K. MALONEY, RAVI V. J. CHARI, RAJEEVA SINGH: "A novel pathway for maytansinoid release from thioether linked antibody–drug conjugates (ADCs) under oxidative conditions", CHEMICAL COMMUNICATIONS, ROYAL SOCIETY OF CHEMISTRY, vol. 47, no. 38, 1 January 2011 (2011-01-01), pages 10752, XP055152687, ISSN: 13597345, DOI: 10.1039/c1cc14164c *
ROBERT Y. ZHAO, SHARON D. WILHELM, CHARLENE AUDETTE, GREGORY JONES, BARBARA A. LEECE, ALEXANDRU C. LAZAR, VICTOR S. GOLDMACHER, RA: "Synthesis and Evaluation of Hydrophilic Linkers for Antibody–Maytansinoid Conjugates", JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, vol. 54, no. 10, 26 May 2011 (2011-05-26), pages 3606 - 3623, XP055046274, ISSN: 00222623, DOI: 10.1021/jm2002958 *
WAYNE C. WIDDISON, SHARON D. WILHELM, EMILY E. CAVANAGH, KATHLEEN R. WHITEMAN, BARBARA A. LEECE, YELENA KOVTUN, VICTOR S. GOLDMACH: "Semisynthetic Maytansine analogues for the targeted treatment of cancer", JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, vol. 49, no. 14, 13 July 2006 (2006-07-13), pages 4392 - 4408, XP002679529, ISSN: 0022-2623, DOI: 10.1021/JM060319F *
XIUXIA SUN, WAYNE WIDDISON, MICHELE MAYO, SHARON WILHELM, BARBARA LEECE, RAVI CHARI, RAJEEVA SINGH, HANS ERICKSON: "Design of Antibody−Maytansinoid Conjugates Allows for Efficient Detoxification via Liver Metabolism", BIOCONJUGATE CHEMISTRY, AMERICAN CHEMICAL SOCIETY, vol. 22, no. 4, 20 April 2011 (2011-04-20), pages 728 - 735, XP055096244, ISSN: 10431802, DOI: 10.1021/bc100498q *

Also Published As

Publication number Publication date
US20190151323A1 (en) 2019-05-23
WO2015031396A1 (en) 2015-03-05
NZ716768A (en) 2021-10-29
CA2921412A1 (en) 2015-03-05
CN105530942A (zh) 2016-04-27
KR20160045146A (ko) 2016-04-26
NZ756518A (en) 2021-10-29
HK1220115A1 (zh) 2017-04-28
US20230321109A1 (en) 2023-10-12
BR112016004023A2 (pt) 2022-11-16
US20160354482A1 (en) 2016-12-08
EA201600191A1 (ru) 2016-07-29
ZA201601534B (en) 2023-11-29
IL244203B (en) 2018-12-31
US11596635B2 (en) 2023-03-07
AU2014311361A1 (en) 2016-03-03
JP2016528304A (ja) 2016-09-15
KR102252925B1 (ko) 2021-05-18
EA201600191A8 (ru) 2018-04-30
JP6608823B2 (ja) 2019-11-20
IL244203A0 (en) 2016-04-21
AU2014311361B2 (en) 2018-11-29
PH12016500380A1 (en) 2016-05-16
SG11201601230RA (en) 2016-03-30
EP3038624A1 (en) 2016-07-06
CL2016000408A1 (es) 2017-02-24
CN105530942B (zh) 2019-10-11
MX2016002149A (es) 2016-10-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20230321109A1 (en) Pharmaceutical compositions comprising macrolide diastereomers, methods of their synthesis and therapeutic uses
AU2023216777B2 (en) Compounds comprising cleavable linker and uses thereof
KR20200067132A (ko) 프로그램가능한 중합체성 약물
KR20200083605A (ko) 프로그램가능한 중합체성 약물
KR20200064059A (ko) 프로그램가능한 수지상 약물
CN105899515B (zh) uncialamycin的衍生物、合成方法及其作为抗肿瘤剂的用途
TW202122115A (zh) 包含抗人類ｒｏｒ１抗體之抗體—藥物結合物及其用途
EP2858673A2 (en) Binding agents that modulate the hippo pathway and uses thereof
CN115210227A (zh) 作为tead抑制剂的异双功能分子
CN110256522B (zh) 雷公藤红素肉桂酸酯类衍生物及其制备方法与用途
CN111629759A (zh) 可释放的抗体结合物
NZ756914A (en) Printing-fluid cartridge, set of printing-fluid cartridges, and system including the printing-fluid cartridge and printing-fluid consuming apparatus
TW202216207A (zh) 抗體-藥物結合物及cdk9抑制劑之組合
CA2921412C (en) Pharmaceutical compositions comprising macrolide diastereomers, methods of their synthesis and therapeutic uses
NZ757070B2 (en) Printing-fluid cartridge, set of printing-fluid cartridges, and system including the printing-fluid cartridge and printing-fluid consuming apparatus
JP2018532780A (ja) 二官能性プロドラッグ
NZ756518B2 (en) Pharmaceutical compositions comprising macrolide diastereomers, methods of their synthesis and therapeutic uses
NZ757070A (en) Fire extinguisher with internal mixing and gas cartridge
NZ716768B2 (en) Pharmaceutical compositions comprising macrolide diastereomers, methods of their synthesis and therapeutic uses
NZ756914B2 (en) Pharmaceutical compositions comprising macrolide diastereomers, methods of their synthesis and therapeutic uses
CN116284054B (zh) 一种海鞘素类化合物、其抗体药物偶联物及其应用
WO2015017113A9 (en) Tumor selective antibodies specific to oncofetal antigen / immature laminin receptor protein
RU2801630C2 (ru) Коньюгаты антитело-лекарственное средство, включающие антитело против человеческого dlk1, и их применение
WO2024017229A1 (zh) 一种吡咯并三嗪类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用
CN115845080A (zh) 艾日布林衍生物-抗叶酸受体抗体偶联物