EA038178B1 - СПОСОБЫ УМЕНЬШЕНИЯ УРОВНЯ Fc-СОДЕРЖАЩИХ АГЕНТОВ В СЫВОРОТКЕ С ПРИМЕНЕНИЕМ FcRn-АНТАГОНИСТОВ - Google Patents

СПОСОБЫ УМЕНЬШЕНИЯ УРОВНЯ Fc-СОДЕРЖАЩИХ АГЕНТОВ В СЫВОРОТКЕ С ПРИМЕНЕНИЕМ FcRn-АНТАГОНИСТОВ Download PDF

Info

Publication number
EA038178B1
EA038178B1 EA201791984A EA201791984A EA038178B1 EA 038178 B1 EA038178 B1 EA 038178B1 EA 201791984 A EA201791984 A EA 201791984A EA 201791984 A EA201791984 A EA 201791984A EA 038178 B1 EA038178 B1 EA 038178B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
region
fcrn
fcrn antagonist
abdeg
variant
Prior art date
Application number
EA201791984A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201791984A1 (ru
Inventor
Николас Г.Х. Онгена
Торстен Драйер
Петер Ульрихтс
Йоханнес Де Хард
Кристоф Бланшето
Original Assignee
Ардженкс Бвба
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ардженкс Бвба filed Critical Ардженкс Бвба
Publication of EA201791984A1 publication Critical patent/EA201791984A1/ru
Publication of EA038178B1 publication Critical patent/EA038178B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/04—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system for myasthenia gravis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/283—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against Fc-receptors, e.g. CD16, CD32, CD64
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2875—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF/TNF superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2887—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD20
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/524—CH2 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/526—CH3 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Предлагаются новые способы уменьшения уровня Fc-содержащих агентов (например, антител и иммуноадгезинов) в сыворотке объекта. Эти способы в целом включают введение объекту эффективного количества выделенного FcRn-антагониста, который специфично связывается с FcRn с повышенной аффинностью и уменьшенной зависимостью от pH относительно нативной Fc-области. Раскрытые способы особенно полезны для лечения расстройств, опосредованных антителами (например, аутоиммунных заболеваний).

Description

Родственные заявки
Настоящая заявка заявляет приоритет в отношении предварительной заявки США № 62/130076, поданной 9 марта 2015 г., которая включена в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.
Уровень техники
Антитела иммуноглобулина гамма (IgG) играют ключевую роль в патологии многих расстройств, таких как аутоиммунные заболевания, воспалительные заболевания и расстройства, при которых патология характеризуется сверхэкспрессией IgG-антител (например, гипергаммаглобулинемия) (см., например, Junghans, Immunologic Research 16 (1):29(1997)).
Период полужизни IgG в сыворотке пролонгирован относительно периода полужизни в сыворотке других белков плазмы (Roopenian et al., J. Immunology 170: 3528 (2003), Junghans and Anderson, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:5512 (1996)). Этот длительный период полужизни обусловлен, в частности, связыванием Fc-области IgG с Fc-рецептором, FcRn. Хотя FcRn первоначально характеризовали как неонатальный транспортный рецептор для материнского IgG, при этом он также функционирует у взрослых для защиты IgG от деградации. FcRn связывается с пиноцитированным IgG и защищает IgG от транспорта в деградирующие лизосомы путем возвращения его обратно во внеклеточный компартмент. Эта рециркуляция облегчается pH-зависимым связыванием IgG с FcRn, где взаимодействие IgG/FcRn сильнее при кислом эндосомном pH, чем при физиологическом pH.
Когда концентрация IgG в сыворотке достигает уровня, который превышает уровень доступных молекул FcRn, тогда несвязанный IgG будет не защищен от механизмов деградации и, следовательно, будет иметь уменьшенный период полужизни в сыворотке. Таким образом, ингибирование связывания IgG с FcRn снижает период полжизни IgG в сыворотке крови путем предотвращения эндосомной рециркуляции IgG. Соответственно агенты, которые противодействуют связыванию IgG с FcRn, могут быть полезны для регуляции, лечения или профилактики расстройств, опосредованных антителами, таких как аутоиммунные заболевания, воспалительные заболевания и т.д. Один из примеров способов противодействия связыванию Fc IgG с FcRn включает в себя генерацию блокирующих антител к FcRn (см., например, WO 2002/43658). Также были идентифицированы пептиды, которые связываются с FcRn и противодействуют его функции (см., например, US 2622022 и US 10101186). Кроме того, были идентифицированы полноразмерные антитела IgG, содержащие варианты Fc-рецепторов с усиленным связыванием с FcRn и уменьшенной pH-зависимостью, которые препятствуют связыванию FcRn с IgG (см., например, 8163881). Однако в данной области существует потребность в улучшенных способах лечения расстройств, опосредованных антителами.
Сущность изобретения
В настоящем изобретении предлагаются новые способы уменьшения уровня Fc-содержащих агентов (например, антител и иммуноадгезинов) в сыворотке объекта. Эти способы в целом включают введение объекту эффективного количества выделенного FcRn-антагониста, который специфично связывается с FcRn с повышенной аффинностью и уменьшенной pH-зависимостью относительно нативной Fcобласти. Раскрытые способы особенно полезны для лечения расстройств, опосредованных антителами (например, аутоиммунных заболеваний).
Соответственно в одном аспекте в настоящем изобретении предлагается способ уменьшения уровня Fc-содержащего агента в сыворотке объекта, причем способ включает введение объекту эффективного количества выделенного FcRn-антагониста, содержащего вариант Fc-области или FcRn-связывающий фрагмент, где Fc-домены варианта Fc-области содержат аминокислоты Y, T, E, K, F и Y в EUположениях 252, 254, 256, 433, 434 и 436 соответственно и где FcRn-антагонист вводят объекту в дозе примерно от 0,2 примерно до 200 мг/кг.
В другом аспекте в настоящем изобретении предлагается способ уменьшения уровня Fcсодержащего агента в сыворотке объекта, причем способ включает введение объекту эффективного количества выделенного FcRn-антагониста, содержащего вариант Fc-области или его FcRn-связывающий фрагмент, где Fc-домены варианта Fc-области содержат аминокислоты Y, T, E, K, F и Y в EUположениях 252, 254, 256, 433, 434 и 436 соответственно и где FcRn-антагонист вводят объекту по меньшей мере дважды в течение 20 дней.
Следующие воплощения применимы ко всем аспектам настоящего изобретения.
В некоторых воплощениях FcRn-антагонист вводят объекту с частотой, составляющей один раз каждые 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 дней. В некоторых воплощениях FcRn-антагонист вводят объекту с частотой один раз в 4 дня. В некоторых воплощениях FcRn-антагонист вводят объекту с частотой, составляющей один раз в 7 дней. В некоторых воплощениях FcRn-антагонист вводят объекту 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 раз в течение 20 дней.
В другом аспекте в настоящем изобретении предлагается способ уменьшения уровня Fcсодержащего агента в сыворотке объекта, причем способ включает введение объекту эффективного количества выделенного FcRn-антагониста, содержащего вариант Fc-области или его FcRn-связывающий фрагмент, где Fc-домены варианта Fc-области содержат аминокислоты Y, T, E, K, F и Y в EUположениях 252, 254, 256, 433, 434 и 436 соответственно и где FcRn-антагонист вводят объекту с частотой, составляющей один раз каждые 48 ч в течение четырех недель.
- 1 038178
В некоторых воплощениях FcRn-антагонист вводят объекту в дозе, составляющей примерно от 0,2 примерно до 200 мг/кг. В некоторых воплощениях FcRn-антагонист вводят объекту в дозе, составляющей примерно 0,2, 1, 2, 3, 5, 10, 20, 25, 30, 50, 70, 100 или 200 мг/кг. В некоторых воплощениях FcRnантагонист вводят объекту в дозе, составляющей примерно 10 мг/кг. В некоторых воплощениях FcRnантагонист вводят объекту в дозе, составляющей примерно 20 мг/кг. В некоторых воплощениях FcRnантагонист вводят объекту в дозе, составляющей примерно 25 мг/кг.
В другом аспекте настоящее раскрытие представляет способ уменьшения уровня Fc-содержащего агента в сыворотке объекта, причем способ включает введение объекту эффективного количества выделенного FcRn-антагониста, содержащего вариант Fc-области или его FcRn-связывающий фрагмент, где Fc-домены варианта Fc-области содержат аминокислоты Y, T, E, K, F и Y в EU-положениях 252, 254, 256, 433, 434 и 436 соответственно и где FcRn-антагонист вводят объекту в дозе примерно 25 мг/кг с частотой, составляющей один раз в четыре дня.
В другом аспекте в настоящем изобретении предлагается способ уменьшения уровня Fcсодержащего агента в сыворотке объекта, причем способ включает введение объекту эффективного количества выделенного FcRn-антагониста, содержащего вариант Fc-области или его FcRn-связывающий фрагмент, где Fc-домены варианта Fc-области содержат аминокислоты Y, T, E, K, F и Y в EUположениях 252, 254, 256, 433, 434 и 436 соответственно и где FcRn-антагонист вводят объекту в дозе примерно 25 мг/кг с частотой, составляющей один раз в семь дней.
В некоторых воплощениях FcRn-антагонист вводят внутривенно. В некоторых воплощениях FcRnантагонист вводят подкожно. В некоторых воплощениях FcRn-антагонист вводят объекту в более чем одной дозе, где первая доза, вводимая объекту, вводится внутривенно и где одна или несколько из второй или последующих доз вводятся подкожно.
В некоторых воплощениях FcRn-антагонист не содержит вариабельную область антитела. В некоторых воплощениях FcRn-антагонист не содержит домен CH1. В некоторых воплощениях FcRnантагонист не содержит свободный остаток цистеина. В некоторых воплощениях вариант Fc-области представляет собой Fc-область IgG. В некоторых воплощениях вариант Fc-области представляет собой Fc-область IgG1. В некоторых воплощениях аминокислотная последовательность Fc-доменов варианта Fc-области содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1, 2 или 3. В некоторых воплощениях аминокислотная последовательность Fc-доменов вариантов Fc-области состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 1. В некоторых воплощениях FcRn-антагонист состоит из варианта Fc-области, где аминокислотная последовательность Fc-доменов варианта Fc-области состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 1, 2 или 3.
В некоторых воплощениях вариант Fc-области обладает повышенной аффинностью к рецептору Fcгамма относительно аффинности Fc-области IgG1 для рецептора Fc-гамма дикого типа. В некоторых воплощениях вариант Fc-области обладает повышенной аффинностью к CD16a. В некоторых воплощениях Fc-домены варианта Fc-области не содержат N-связанного гликана в EU-положении 297. В некоторых воплощениях FcRn-антагонист содержит множество молекул FcRn-антагонистов, где по меньшей мере 50% (необязательно, по меньшей мере 60, 70, 80, 90, 95 или 99%) из множества молекул FcRnантагонистов содержат вариант Fc-области или его FcRn-связывающий фрагмент, содержащий афукозилированный N-связанный гликан в EU-положении 297. В некоторых воплощениях FcRn-антагонист содержит множество молекул FcRn-антагонистов, где по меньшей мере 50% (необязательно, по меньшей мере 60, 70, 80, 90, 95 или 99%) из множества молекул FcRn-антагонистов содержат вариант Fc-области или ее FcRn-связывающий фрагмент, содержащий N-связанный гликан, содержащий дополнительный остаток GlcNac в точке ветвления в EU-положении 297.
В некоторых воплощениях вариант Fc-области связан с веществом, увеличивающим период полужизни. В некоторых воплощениях вещество, увеличивающее период полужизни, представляет собой полиэтиленгликоль или человеческий сывороточный альбумин.
В некоторых воплощениях Fc-содержащий агент представляет собой антитело или иммуноадгезин. В некоторых воплощениях Fc-содержащий агент представляет собой терапевтический или диагностический агент. В некоторых воплощениях Fc-содержащий агент представляет собой агент визуализации. В некоторых воплощениях Fc-содержащий агент представляет собой конъюгат антитела и лекарственного средства. В некоторых воплощениях Fc-содержащий агент представляет собой патогенное антитело. В некоторых воплощениях Fc-содержащий агент представляет собой аутоантитело.
В некоторых воплощениях объект имеет заболевание или расстройство, опосредованное антителом, где введение FcRn-антагониста объекту облегчает заболевание или расстройство. В некоторых воплощениях заболевание или расстройство можно лечить с использованием внутривенного иммуноглобулина (IVIG), плазмафереза и/или иммуноадсорбции. В некоторых воплощениях заболевание или расстройство, опосредованное антителом, представляет собой аутоиммунное заболевание. В некоторых воплощениях аутоиммунное заболевание выбрано из группы, состоящей из отторжения аллогенного островкового трансплантата, гнездной алопеции, анкилозирующего спондилита, антифосфолипидного синдрома, аутоиммунной болезни Аддисона, болезни Альцгеймера, антинейтрофильных цитоплазматических аутоанти
- 2 038178 тел (ANCA), аутоиммунного заболевания надпочечной железы, аутоиммунной гемолитической анемии, аутоиммунного гепатита, аутоиммунного миокардита, аутоиммунной нейтропении, аутоиммунного оофорита и орхита, аутоиммунной тромбоцитопении, аутоиммунной крапивницы, болезни Бехчета, буллезного пемфигоида, кардиомиопатии, синдрома Кастлемана, дерматита, вызванного целиакия-спру, иммунной дисфункции - синдрома хронической усталости, хронической воспалительной демиелинизирующей полинейропатии (CIDP), синдрома Чарга-Стросса, рубцового пемфигоида, синдрома CREST, болезни холодового агглютинина, болезни Крона, дерматомиозита, расширенной кардиомиопатии, дискоидной волчанки, приобретенного буллезного эпидермолиза, эссенциальной смешанной криоглобулинемии, дефицита фактора VIII, фибромиалгии-фибромиозита, гломерулонефрита, болезни Грейвса, синдрома Гийена-Барре, синдрома Гудпасчера, реакции трансплантата против хозяина (РТПХ), тиреоидита Хашимото, гемофилии A, идиопатической мембранозной нефропатии, идиопатического фиброза легких, идиопатической тромбоцитопенической пурпуры (ITP), невропатии IgA, полиневропатии IgM, иммунной опосредованной тромбоцитопении, ювенильного артрита, болезни Кавасаки, плоского лишая, склеротического лишая, волчанки, болезни Меньера, смешанной болезни соединительной ткани, пемфигоида слизистой оболочки, рассеянного склероза, сахарного диабета 1-го типа, мультифокальной моторной невропатии (MMN), миастении гравис, паранеопластического буллезного пемфигоида, пемфигоида беременных, пузырчатки обыкновенной, листовидной пузырчатки, пернициозной анемии, узелкового полиартериита, полихондрита, полигландулярных синдромов, ревматической полимиалгии, полимиозита и дерматомиозита, первичной агаммаглобулинемии, первичного билиарного цирроза, псориаза, псориатического артрита, рецидивирующего полихондрита, феномена Рейно, синдрома Рейтера, ревматоидного артрита, саркоидоза, склеродермии, синдрома Шегрена, отторжения трансплантатов твердых органов, синдрома мышечной скованности, системной красной волчанки, артериита Такаясу, токсического эпидермального некролиза (TEN), синдрома Стивенса-Джонсона (SJS), темпорального артериита/гигантоклеточного артериита, тромботической тромбоцитопенической пурпуры, язвенного колита, увеита, герпетиформного дерматита, васкулита, васкулитов, ассоциированных с антинейтрофильными цитоплазматическими антителами, витилиго и гранулематоза Вегенера.
В некоторых воплощениях аутоиммунное заболевание представляет собой аутоиммунную каналопатию. В некоторых воплощениях каналопатия выбрана из группы, состоящей из аутоиммунного лимбического энцефалита, эпилепсии, оптикомиелита, миастенического синдрома Ламберт-Итона, миастении гравис, энцефалита с антителами к рецептору N-метил-D-аспартата, энцефалита с антителами к рецептору альфа-амино-3-гидрокси-5-метил-4-изоксазолпропионовой кислоты (AMPA), синдрома Морвана, нейромиотонии, педиатрических аутоиммунных нейропсихиатрических расстройств, связанных со стрептококковой инфекцией (PANDAS), и расстройства, ассоциированного с антителом к глициновому рецептору. В некоторых воплощениях расстройство, опосредованное антителом, представляет собой гиперглобулинемию.
В некоторых воплощениях FcRn-антагонист вводят объекту одновременно или последовательно с дополнительным терапевтическим агентом. В некоторых воплощениях дополнительный терапевтический агент представляет собой противовоспалительный агент. В некоторых воплощениях дополнительный терапевтический агент представляет собой агент, обедняющий фракцию лейкоцитов. В некоторых воплощениях агент, обедняющий фракцию лейкоцитов, представляет собой агент, обедняющий фракцию B-клеток. В некоторых воплощениях агент, обедняющий фракцию B-клеток, представляет собой антитело. В некоторых воплощениях агент, обедняющий фракцию B-клеток, представляет собой антитело, которое специфично связывается с CD10, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD37, CD53, CD70, CD72, CD74, CD75, CD77, CD79a, CD79b, CD80, CD81, CD82, CD83, CD84, CD85 или CD86. В некоторых воплощениях дополнительный терапевтический агент представляет собой ритуксимаб, даклизумаб, базиликсимаб, мурономаб-CD3, инфликсимаб, адалимумаб, омализумаб, эфализумаб, натализумаб, тоцилизумаб, экулизумаб, голимумаб, канакинумаб, устекинумаб, белимумаб или их комбинацию.
В некоторых воплощениях объект представляет собой человека или яванскую макаку.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 представлены результаты экспериментов по определению влияния Fc-Abdeg и HEL-Abdeg на уровень меченного антитела (FR70-hIgG1) в сыворотке яванской макаки.
На фиг. 2 представлены результаты экспериментов по определению влияния Fc-Abdeg и HEL-Abdeg на общий уровень IgG в сыворотке яванской макаки.
На фиг. 3 представлены результаты экспериментов по определению влияния Fc-Abdeg и HEL-Abdeg на уровень альбумина у яванской макаки.
На фиг. 4 представлены результаты экспериментов по определению влияния Fc-Abdeg и IVIG на уровень меченого антитела (FR70-hIgG1) в сыворотке яванской макаки.
На фиг. 5 представлены результаты ИФА-анализов, сравнивающих аффинность Fc-Abdeg, FcAbdeg-POT и Fc-Abdeg-S239D/I332E к человеческому CD16a.
На фиг. 6 представлены результаты ИФА-анализов, сравнивающих аффинность Fc-Abdeg, FcAbdeg-POT и Fc-Abdeg-S239D/I332E к мышиному CD16-2.
На фиг. 7 представлены результаты экспериментов по определению влияния Fc-Abdeg, Abdeg-POT
- 3 038178 и Fc-AbdegS239D/I332E на ADCC-сигнал, индуцированный антителом к CD20, с использованием репортерного биоанализа ADCC на основе клеток Raji от Promega.
На фиг. 8 представлены результаты экспериментов по определению влияния Fc-Abdeg и Abdeg-POT на лизис клеток CD70+ U266, индуцированный антителом к CD70, in vitro.
На фиг. 9 представлены результаты экспериментов по определению влияния Fc-Abdeg, Fc-AbdegPOT, Fc-Abdeg-S239D/I332E и IVIG на уровень тромбоцитов в мышиной модели острой иммунной тромбоцитопении.
На фиг. 10 представлен результат иллюстративной очистки Fc-Abdeg гель-фильтрацией.
На фиг. 11 представлены результаты исследования эскалации дозы, измеряющего влияние различных однократных доз Fc-Abdeg на уровень меченого антитела (FR70-hIgG1) в сыворотке яванской макаки.
На фиг. 12 представлены результаты исследования эскалации дозы, измеряющего влияние различных однократных доз Fc-Abdeg на уровень меченого антитела (FR70-hIgG1) в сыворотке яванской макаки.
На фиг. 13 представлены результаты экспериментов по определению влияния 200 мг/кг Fc-Abdeg на уровень cIgA у яванской макаки.
На фиг. 14 представлены результаты экспериментов по определению влияния 200 мг/кг Fc-Abdeg на уровень cIgM у яванской макаки.
На фиг. 15 представлен фармакокинетический профиль различных однократных доз Fc-Abdeg у яванской макаки.
На фиг. 16 представлены результаты экспериментов по определению влияния повторяющихся многократных доз 20 мг/кг Fc-Abdeg на уровень cIgG у яванской макаки.
На фиг. 17 представлен фармакокинетический профиль Fc-Abdeg у яванской макаки, получавшей повторяющиеся многократные дозы 20 мг/кг Fc-Abdeg.
На фиг. 18 представлены результаты исследования эскалации дозы, измеряющего влияние различных однократных доз Fc-Abdeg на уровень эндогенного IgG в сыворотке яванской макаки.
На фиг. 19 представлен фармакокинетический профиль различных однократных доз Fc-Abdeg у яванской макаки.
На фиг. 20 представлены результаты исследования повторяющегося дозирования, измеряющего влияние различных повторяющихся доз Fc-Abdeg на уровень эндогенного IgG в сыворотке яванской макаки.
На фиг. 21 представлен фармакокинетический профиль различных повторяющихся доз Fc-Abdeg у яванской макаки.
На фиг. 22 представлены результаты исследования непрерывного дозирования, измеряющего влияние различных доз Fc-Abdeg на уровень эндогенного IgG в сыворотке яванской макаки.
На фиг. 23 представлены результаты исследования непрерывного дозирования, измеряющего влияние внутривенной загрузочной дозы 20 мг/кг Fc-Abdeg через 24 ч после ежедневного подкожного введения Fc-Abdeg в количестве 3 мг/кг в течение 28 дней, и последующего периода без лечения, составляющего 32 дня, у объекта - яванской макаки.
Подробное описание
В настоящем изобретении предлагаются новые способы уменьшения уровня Fc-содержащих агентов (например, антител и иммуноадгезинов) в сыворотке объекта. Эти способы в целом включают введение объекту эффективного количества выделенного FcRn-антагониста, который специфично связывается с FcRn с повышенной аффинностью и уменьшенной pH-зависимостью относительно нативной Fcобласти. Раскрытые способы особенно полезны для лечения расстройств, опосредованных антителами (например, аутоиммунных заболеваний).
I. Определения.
Если в настоящем документе не указано иное, научные и технические термины, используемые в связи с настоящим изобретением, будут иметь значения, которые обычно понимаются специалистами в данной области техники. Смысл и границы терминов должны быть четкими, однако, в случае какой-либо скрытой двусмысленности приведенные здесь определения имеют преимущество над любым словарным или внешним определением. Кроме того, если иное не требуется по контексту, термины в единственном числе будут включать в себя множественное число, и термины во множественном числе будут включать термины в единственном числе. Как правило, номенклатура, используемая в связи с этим, и методы клеточной и тканевой культур, молекулярной биологии, иммунологии, микробиологии, генетики и белковой химии и химии нуклеиновых кислот и гибридизации, описанные в настоящем документе, хорошо известны и широко используются в данной области.
Для того чтобы настоящее изобретение было более понятным, некоторым терминам сначала даются определения.
Используемый в настоящем документе термин FcRn-антагонист относится к любому агенту, содержащему Fc-область (например, вариант Fc-области, раскрытый в настоящем документе), который специфично связывается с FcRn через Fc-область и ингибирует связывание иммуноглобулина с FcRn при
- 4 038178 условии, что агент не является полноразмерным IgG-антителом.
Используемый в настоящем документе термин Fc-область относится к части нативного иммуноглобулина, образованного Fc-доменами двух его тяжелых цепей. Нативная Fc-область является гомодимерной.
Используемый в настоящем документе термин вариант Fc-области относится к Fc-области с одним или несколькими изменениями относительно нативной Fc-области. Изменение может включать аминокислотные замены, добавления и/или делеции, связывание дополнительных компонентов и/или изменение нативных гликанов. Этот термин охватывает гетеродимерные Fc-области, где каждый из составляющих Fc-доменов отличается. Примеры таких гетеродимерных Fc-областей включают, без ограничения, Fc-области, полученные с использованием технологии выступов и впадин, как описано, например, в US 8216805, который включен в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме. Термин также охватывает одноцепочечные Fc-области, где составляющие Fc-домены соединены вместе с помощью линкерного компонента, как описано, например, в US 20090252729 A1 и US 20110081345 A1, каждый из которых включен в настоящее описание посредством ссылки в полном объеме.
Используемый в настоящем документе термин Fc-домен относится к части одной тяжелой цепи иммуноглобулина, начинающейся в шарнирной области, расположенной непосредственно перед сайтом расщепления папаина и заканчивающейся на C-конце антитела. Соответственно полный Fc-домен содержит по меньшей мере часть шарнирного домена (например, верхнюю, среднюю и/или нижнюю шарнирную область), домена CH2 и домена CH3.
Используемый в настоящем документе термин FcRn-связывающий фрагмент относится к части Fc-области, которой достаточно для связывания FcRn.
Используемый в настоящем документе термин EU-положение относится к положению аминокислоты в EU-нумерации для Fc-области, описанной в Edelman, G.M. et al., Proc. Natl. Acad. USA, 63, 78-85 (1969) и в Kabat et al, в Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Dept. Health and Human Services, 5th edition, 1991.
Используемый в настоящем документе термин домен CH1 относится к первому (самому аминоконцевому) домену константной области тяжелой цепи иммуноглобулина, которая простирается от EUположений 118-215. CH1-домен находится рядом с VH-доменом и аминоконцевым участком шарнирной области тяжелой цепи молекулы иммуноглобулина и не является частью Fc-области тяжелой цепи иммуноглобулина.
Используемый в настоящем документе термин шарнирная область относится к части молекулы тяжелой цепи, которая соединяет CH1-домен с CH2-доменом. Эта шарнирная область содержит приблизительно 25 остатков и является гибкой, что позволяет двум N-концевым антигенсвязывающим областям перемещаться независимо друг от друга. Шарнирные области можно разделить на три отдельные области: верхние, средние и нижние шарнирные домены (Roux et al. J. Immunol. 161: 4083 (1998)). FcRnантагонисты настоящего изобретения могут включать всю или часть шарнирной области.
Используемый в настоящем документе термин CH2-домен относится к части молекулы тяжелой цепи иммуноглобулина, которая протягивается примерно от EU-положений 231-340.
Используемый в настоящем документе термин CH3-домен включает часть молекулы тяжелой цепи иммуноглобулина, которая содержит приблизительно 110 остатков из N-конца CH2-домена, например, примерно от положений 341-446 (система нумерации EU).
Используемый в настоящем документе термин FcRn относится к неонатальному рецептору Fc. Иллюстративные молекулы FcRn включают человеческий FcRn, кодируемый геном FCGRT, представленным в RefSeq NM_004107.
Используемый в настоящем документе термин CD16 относится к FcyRIII Fc-рецепторам, которые необходимы для антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (ADCC). Иллюстративные молекулы CD16 включают человеческий CD16a, представленный в RefSeq NM_000569.
Используемый в настоящем документе термин свободный цистеин относится к нативному или сконструированному аминокислотному остатку цистеина, который присутствует, по существу, в восстановленной форме в зрелом FcRn-антагонисте.
Используемый в настоящем документе термин антитело относится к молекулам иммуноглобулина, содержащим четыре полипептидные цепи, две тяжелые (H) цепи и две легкие цепи (L), связанные между собой дисульфидными связями, а также к их мультимерам (например, IgM). Каждая тяжелая цепь содержит вариабельную область тяжелой цепи (сокращенно VH) и константную область тяжелой цепи. Константная область тяжелой цепи содержит три домена: CH1, CH2 и CH3. Каждая легкая цепь содержит вариабельную область легкой цепи (сокращенно VL) и константную область легкой цепи. Константная область легкой цепи содержит один домен (CL). Области VH и VL могут дополнительно подразделяться на области гипервариабельности, называемые областями, определяющими комплементарность (CDR), чередующиеся с более консервативными областями, называемыми каркасными областями (FR).
Используемый в настоящем документе термин N-связанный гликан относится к N-связанному гликану, присоединенному к азоту (N) в боковой цепи аспарагина в секвоне (то есть в последовательности Asn-X-Ser или Asn-X-Thr, где X - любая аминокислота, кроме пролина), присутствующем в CH2- 5 038178 домене Fc-области. Такие N-гликаны полностью описаны, например, в Drickamer K., Taylor M.E. (2006).
Introduction to Glycobiology, 2nd ed., которая включена в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме.
Используемый в настоящем документе термин афукозилированный относится к N-связанному гликану, который не содержит коровую молекулу фукозы, как описано в US 8067232, содержание которого включено в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме.
Используемый в настоящем документе термин дополнительный остаток GlcNac в точке ветвления относится к N-связанному гликану, содержащему молекулу N-ацетилглюкозамина (GlcNAc), связанную с коровой молекулой маннозы, как описано в US 8021856, содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме.
Используемый в настоящем документе термин расстройство, опосредованное антителом, относится к любому заболеванию или расстройству, вызванному или усугубляемому наличием антитела у объекта.
Используемый в настоящем документе термин Fc-содержащий агент представляет собой любую молекулу, которая содержит Fc-область.
Используемый в настоящем документе термин агент, обедняющий фракцию лейкоцитов относится к агенту, который при введении уменьшает количество лейкоцитов у объекта.
Используемый в настоящем документе термин агент, обедняющий фракцию B-клеток относится к агенту, который при введении уменьшает количество B-клеток у объекта.
Используемый в настоящем документе термин агент, обедняющий фракцию T-клеток относится к агенту, который при введении уменьшает количество T-клеток у объекта.
Используемый в настоящем документе термин аутоиммунная каналопатия относится к заболеваниям, вызванным аутоантителами к субъединице ионного канала или молекуле, которая регулирует канал.
Используемый в настоящем документе термин лечить и лечение (treating) и (treatment) относится к терапевтическим или профилактическим мерам, описанным в настоящем документе. В способах лечения применяют введение объекту антитела или его антигенсвязывающего фрагмента по настоящему изобретению, например объекту, имеющему заболевание или расстройство, ассоциированное с IL-6 (например, воспаление и злокачественное новообразование), или предрасположенному к такому заболеванию или расстройству, для предотвращения, излечения, задержки, уменьшения тяжести или ослабления одного или нескольких симптомов заболевания или расстройства или рецидивирующего заболевания или расстройства, или с целью продления выживания объекта, превышающего ожидаемое в отсутствии такого лечения. Используемый в настоящем документе термин объект включает любое животное, включая человека.
Используемый в настоящем документе термин иммуноадгезин относится к антителоподобной молекуле, которая содержит функциональный домен связывающего белка (например, рецептора, лиганда или молекулы клеточной адгезии) с Fc-областью.
II. Способы уменьшения уровня Fc-содержащих агентов в сыворотке.
В одном аспекте в настоящем изобретении предлагаются способы уменьшения уровня Fcсодержащих агентов (например, антител и иммуноадгезинов) в сыворотке объекта, причем способы включают введение объекту эффективного количества выделенного FcRn-антагониста, который специфично связывается с FcRn с повышенной аффинностью и уменьшенной pH-зависимостью относительно нативной Fc-области (например, описанные в настоящем документе FcRn-антагонисты).
Как показано в настоящем документе, введение FcRn-антагониста объекту в дозе примерно от 0,2 примерно до 200 мг/кг неожиданно является эффективным. Соответственно в некоторых воплощениях FcRn-антагонист вводят объекту в дозе, составляющей примерно от 0,2 примерно до 200 мг/кг (например, от 0,2 до 200 мг/кг). В некоторых воплощениях FcRn-антагонист вводят объекту в дозе, составляющей примерно 0,2, 2, 20, 70 или 200 мг/кг (например, 0,2, 2, 20, 70 или 200 мг/кг). В некоторых воплощениях FcRn-антагонист вводят объекту в дозе, составляющей примерно 20 мг/кг (например, 20 мг/кг).
Как показано в настоящем документе, схема многократного повторяющегося дозирования неожиданно превосходит однократную дозу. Соответственно в некоторых воплощениях FcRn-антагонист вводят объекту по меньшей мере дважды в течение 20 дней. В некоторых воплощениях FcRn-антагонист вводят объекту с частотой, составляющей один раз каждые 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 дней. В некоторых воплощениях FcRn-антагонист вводят объекту 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 раз в течение 20 дней. В некоторых воплощениях FcRn-антагонист вводят объекту с частотой, составляющей один раз в 4 дня. В некоторых воплощениях FcRn-антагонист вводят объекту каждые 4 дня в течение 13 дней (то есть в дни 1, 5, 9 и 13). В некоторых воплощениях 20 мг/кг FcRn-антагониста вводят объекту каждые 4 дня в течение 13 дней (то есть в дни 1, 5, 9 и 13).
FcRn-антагонист можно вводить объекту любым способом. Способы введения включают, но не ограничиваются ими, внутрикожные, внутримышечные, внутрибрюшинные, внутривенные, подкожные, интраназальные, эпидуральные и пероральные пути введения. Композицию может быть введена, например, путем инфузии или болюсной инъекции. В некоторых воплощениях FcRn-антагонист вводят с по- 6 038178 мощью внутривенной инфузии.
С помощью способов, раскрытых в настоящем документе, может быть уменьшен уровень любого Fc-содержащего агента в сыворотке. В некоторых воплощениях Fc-содержащий агент представляет собой антитело или иммуноадгезин. В некоторых воплощениях Fc-содержащий агент представляет собой терапевтический или диагностический агент. В некоторых воплощениях Fc-содержащий агент представляет собой агент визуализации. В некоторых воплощениях Fc-содержащий агент представляет собой конъюгат антитело-лекарственное средство. В некоторых воплощениях Fc-содержащий агент представляет собой патогенное антитело, например аутоантитело. В некоторых воплощениях объект имеет опосредованное антителом заболевание или расстройство. В некоторых воплощениях заболевание или расстройство, опосредованное антителом, ассоциировано с аутоантителом.
Уменьшение уровня Fc-содержащих агентов (например, антител и иммуноадгезинов) в сыворотке особенно применимо для лечения опосредованных антителами расстройств (например, аутоиммунных заболеваний). Соответственно в одном аспекте в настоящем изобретении предлагаются способы лечения объекта, имеющего опосредованное антителом расстройство (например, аутоиммунное заболевание), причем способ включает введение объекту эффективного количества композиции FcRn-антагониста, раскрытой в настоящем документе.
Любое опосредованное антителом расстройство может быть подвергнуто лечению с применением способов, описанных в настоящем документе. В некоторых воплощениях опосредованное антителом расстройство представляет собой такое расстройство, которое поддается лечению с помощью IVIG. В некоторых воплощениях опосредованное антителом расстройство представляет собой аутоиммунное заболевание. Неограничивающие аутоиммунные заболевания включают отторжение аллогенного островкового трансплантата, гнездную алопецию, анкилозирующий спондилит, антифосфолипидный синдром, аутоиммунную болезнь Аддисона, болезнь Альцгеймера, антинейтрофильные цитоплазматические аутоантитела (ANCA), аутоиммунное заболевание надпочечной железы, аутоиммунную гемолитическую анемию, аутоиммунный гепатит, аутоиммунный миокардит, аутоиммунную нейтропению, аутоиммунный оофорит и орхит, аутоиммунную тромбоцитопению, аутоиммунную крапивницу, болезнь Бехчета, буллезный пемфигоид, кардиомиопатию, синдром Кастлемана, дерматит, связанный с целиакией-спру, иммунную дисфункцию - синдром хронической усталости, хроническую воспалительную демиелинизирующую полинейропатию (CIDP), синдром Чарга-Стросса, рубцовый пемфигоид, синдром CREST, болезнь холодового агглютинина, болезнь Крона, дерматомиозит, расширенную кардиомиопатию, дискоидную волчанку, приобретенный буллезный эпидермолиз, эссенциальную смешанную криоглобулинемию, дефицит фактора VIII, фибромиалгию-фибромиозит, гломерулонефрит, болезнь Грейвса, синдром Гийена-Барре, синдром Гудпасчера, реакцию трансплантата против хозяина (РТПХ), тиреоидит Хашимото, гемофилию A, идиопатическую мембранозную нефропатию, идиопатический фиброз легких, идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру (ITP), нейропатию IgA, полинейропатии IgM, иммунную опосредованную тромбоцитопению, ювенильный артрит, болезнь Кавасаки, плоский лишай, склеротический лишай, волчанку, болезнь Меньера, смешанную болезнь соединительной ткани, пемфигоид слизистой оболочки, рассеянный склероз, сахарный диабет 1-го типа, мультифокальную моторную нейропатию (MMN), миастению гравис, паранеопластический буллезный пемфигоид, пузырчатку обыкновенную, листовидную пузырчатку, пернициозную анемию, узелковый полиартериит, полихондрит, полигландулярные синдромы, ревматическую полимиалгию, полимиозит и дерматомиозит, первичную агаммаглобулинемию, первичный билиарный цирроз, псориаз, псориатический артрит, феномен Рейно, синдром Рейтера, ревматоидный артрит, саркоидоз, склеродермию, синдром Шегрена, отторжение трансплантатов твердых органов, синдром мышечной скованности, системную красную волчанку, артериит Такаясу, токсический эпидермальный некролиз (TEN), синдром Стивенса-Джонсона (SJS), темпоральный артериит/гигантоклеточный артериит, тромботическую тромбоцитопеническую пурпуру, язвенный колит, увеит, герпетиформный дерматит, васкулит, васкулиты, ассоциированные с антинейтрофильными цитоплазматическими антителами, витилиго и гранулематоз Вегенера.
В некоторых воплощениях аутоиммунное заболевание представляет собой аутоиммунную каналопатию. Неограничивающие каналопатии включают оптикомиелит, миастенический синдром ЛамбертИтона, миастению гравис, энцефалит с антителами к рецептору N-метил-D-аспартата (NMDA), энцефалит с антителами к рецептору альфа-амино-3-гидрокси-5-метил-4-изоксазолпропионовой кислоты (AMPA), синдром Морвана и расстройство, ассоциированное с антителом к глициновому рецептору.
Способы настоящего изобретения особенно подходят для лечения опосредованных антителом расстройств, характеризующихся сверхпродуцированием сывороточного иммуноглобулина. Соответственно в некоторых воплощениях композиции FcRn-антагонистов используют для лечения гипергаммаглобулинемии.
Способы настоящего изобретения могут также использоваться в комбинации с одним или несколькими дополнительными терапевтическими агентами. В некоторых воплощениях дополнительный терапевтический агент представляет собой противовоспалительное средство. Любой воспалительный агент можно использовать в комбинации с композициями, описанными в настоящем документе. В некоторых воплощениях терапевтический агент представляет собой ритуксимаб, даклизумаб, базиликсимаб, муро
- 7 038178
HOMa6-cd3, инфликсимаб, адалимумаб, омализумаб, эфализумаб, натализумаб, тоцилизумаб, экулизумаб, голимумаб, канакинумаб, устекинумаб или белимумаб. В некоторых воплощениях дополнительным терапевтическим агентом является агент, обедняющий фракцию лейкоцитов (например, агент обеднения фракции B-клеток или T-клеток). Любой агент, обедняющий фракцию лейкоцитов, можно использовать в комбинации с композициями FcRn-антагонистов, описанными в настоящем документе. В некоторых воплощениях агент, обедняющий фракцию лейкоцитов, представляет собой агент, обедняющий фракцию B-клеток. В некоторых воплощениях агент, обедняющий фракцию лейкоцитов, представляет собой антитело против маркера клеточной поверхности. Подходящие маркеры клеточной поверхности включают, без ограничения, CD10, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD37, CD53, CD70, CD72, CD74, CD75, CD77, CD79a, CD79b, CD80, CD81, CD82, CD83, CD84, CD85 или CD86. FcRn-антагонист и дополнительный терапевтический агент(ы) могут быть введены объекту одновременно или последовательно посредством одного или нескольких путей введения.
Способы настоящего изобретения также хорошо подходят для быстрого уменьшения уровня Fcсодержащего агента в сыворотке объекта. Такой быстрый клиренс предпочтителен в тех случаях, где Fcсодержащий агент является токсичным (например, конъюгат антитело-лекарственное средство или агент, который является иммуногенным), поскольку это уменьшает воздействие лекарственного средства на объект. Быстрый клиренс также является предпочтительным в случаях, когда Fc-содержащий агент представляет собой агент визуализации, для которого требуется низкий уровень агента в сыворотке для облегчения визуализации. Соответственно в некоторых воплощениях композиции FcRn-антагонистов используют для уменьшения уровня Fc-содержащего агента (например, агента визуализации) в сыворотке объекта, которому вводили Fc-содержащий агент. Уровень любого Fc-содержащего агента (например, терапевтического или диагностического агента) в сыворотке может быть уменьшен с использованием описанных в настоящем документе FcRn-антагонистов. Неограничивающие примеры Fc-содержащих агентов включают агенты визуализации (например, меченые антитела), конъюгаты антителолекарственное средство или иммуногенные агенты (например, антитела животного, но не человека, иммуноадгезины). FcRn-антагонист можно вводить одновременно с Fc-содержащим агентом или последовательно (например, до или после Fc-содержащего агента).
Кроме того, при заболеваниях или состояниях, требующих введения терапевтического агента, объект часто вырабатывает антитела (например, антитела против лекарственных средств) против терапевтического агента, которые, в свою очередь, не позволяют терапевтическому агенту быть доступным по назначению для терапевтических целей или вызывают побочную реакцию у объекта. Соответственно описанные в настоящем документе способы также могут быть использованы для удаления антител (например, антител против лекарственных средств) против терапевтического агента, которые вырабатываются у объекта.
Способы, раскрытые в настоящем документе, также могут быть использованы в комбинации с терапевтическим белком для повышения эффективности терапевтического белка путем уменьшения уровня IgG; где IgG-антитела ответственны за уменьшенную биодоступность терапевтического белка. В некоторых воплощениях в настоящем изобретении предлагается способ лечения объекта, имеющего расстройство, являющегося результатом иммунного ответа на фактор свертывания крови, причем способ включает введение объекту терапевтически эффективного количества FcRn-антагонистов, описанных в настоящем документе. Подходящие факторы свертывания включают, без ограничения, фибриноген, протромбин, фактор V, фактор VII, фактор VIII, фактор IX, фактор X, фактор XI, фактор XII, фактор XIII или фактор фон Виллебранда. Этот метод может быть использован для регуляции или лечения или предотвращения иммунного ответа на фактор свертывания у пациента, страдающего, например, от гемофилии A или гемофилии B. В некоторых воплощениях способ может быть использован для регуляции или лечения иммунного ответа, например, на терапевтический эритропоэтин у пациента, страдающего истинной эритроцитарной аплазией (PRCA).
FcRn отвечает за транспорт материнских антител через плаценту к плоду у беременной женщины. Соответственно, если беременной особи женского пола вводят Fc-содержащий агент (например, терапевтическое антитело), агент может контактировать с плодом в результате FcRn-опосредованного транспорта через плаценту. Чтобы избежать любого потенциального вредного эффекта Fc-содержащего агента в отношении развития плода, было бы предпочтительно блокировать функцию FcRn. Соответственно в настоящем изобретении предлагается способ предотвращения плацентарного переноса Fc-содержащего агента (например, терапевтического антитела) плоду у беременной женщины, причем способ включает введение женщине композиций FcRn-антагонистов, описанных в настоящем документе, либо одновременно, либо последовательно (до или после) с Fc-содержащим агентом.
Способы, описанные в настоящем документе, также могут быть использованы для лечения воспалительных заболеваний, включая, но не ограничиваясь ими, астму, язвенный колит и синдром воспаленного кишечника, аллергию, включающую аллергический ринит/синусит, кожные аллергии (уртикария/ крапивница, ангиодистрофия, атопический дерматит), пищевую аллергию, аллергию на лекарства, аллергию на насекомых, мастоцитоз, артрит, включая остеоартрит, ревматоидный артрит и спондилоартропатии.
- 8 038178
Успешная реализация генной терапии для лечения заболевания или состояния может быть затруднена выработкой антител, специфичных к терапевтическому белку, кодируемому трансгеном, а также, возможно, к вектору, используемому для доставки трансгена. Соответственно композиции FcRnантагонистов, раскрытые в настоящем документе, могут быть введены в комбинации с генной терапией для усиления пользы кодируемого терапевтического белка за счет уменьшения уровня IgG. Эти способы особенно полезны в ситуациях, когда IgG-антитела ответственны за уменьшенную биодоступность вектора генной терапии или кодируемого терапевтического белка. Вектор генной терапии может быть, например, вирусным вектором, таким как аденовирус и адено-ассоциированный вирус. Заболевания, которые могут подвергаться лечению с помощью генной терапии, включают, но не ограничиваются ими, кистозный фиброз, гемофилию, PRCA, мышечную дистрофию или лизосомные болезни накопления, такие как, например, болезнь Гоше и болезнь Фабри.
Любой объект можно лечить с использованием способов, описанных в настоящем документе. В некоторых воплощениях объект представляет собой человека или яванскую макаку.
III. FcRn-антагонисты.
Способы, раскрытые в настоящем документе, в целом включают введение объекту эффективного количества выделенного FcRn-антагониста, где FcRn-антагонист специфично связывается с FcRn с повышенной аффинностью и уменьшенной pH-зависимостью относительно нативной Fc-области. В общем, эти FcRn-антагонисты содержат вариант Fc-области или ее FcRn-связывающий фрагмент, который специфично связывается с FcRn с повышенной аффинностью и уменьшенной pH-зависимостью относительно нативной Fc-области. FcRn-антагонисты ингибируют связывание Fc-содержащих агентов (например, антител и иммуноадгезинов) с FcRn in vivo, что приводит к повышенной скорости деградации Fcсодержащих агентов и, вместе с тем, к уменьшенному уровню этих агентов в сыворотке.
Как показано в настоящем документе, выделенный вариант Fc-области (например, вариант Fcобласти, содержащий аминокислоты Y, T, E, K, F и Y в EU-положениях 252, 254, 256, 433, 434 и 436 соответственно) является более эффективным FcRn-антагонистом in vivo, чем полноразмерное антитело, содержащее тот же вариант Fc-области. Соответственно в некоторых воплощениях композиции FcRnантагонистов не являются полноразмерными антителами. В некоторых воплощениях композиции FcRnантагонистов не содержат вариабельный домен антитела. В некоторых воплощениях композиции FcRnантагонистов не содержат вариабельный домен антитела или CH1-домен. Однако в некоторых воплощениях композиции FcRn-антагонистов могут содержать вариант Fc-области, связанный с одним или несколькими дополнительными связывающими доменами или компонентами, включая вариабельные домены антител.
Любая Fc-область может быть изменена с получением варианта Fc-области для использования в композициях FcRn-антагонистов, описанных в настоящем документе. В общем, Fc-область или ее FcRnсвязывающий фрагмент имеет происхождение из иммуноглобулина человека. Однако следует понимать, что Fc-область может быть получена из иммуноглобулинов любых других видов млекопитающих, включая, например, виды верблюдовых, грызунов (например, мыши, крысы, кролика, морской свинки) или приматов, не относящихся к человеку (например, шимпанзе, макаки). Кроме того, Fc-область или ее часть могут быть получены из иммуноглобулина любого класса, включая IgM, IgG, IgD, IgA и IgE, и иммуноглобулина любого изотипа, включая IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4. В некоторых воплощениях Fc-область представляет собой Fc-область IgG (например, область IgG человека). В некоторых воплощениях Fcобласть представляет собой Fc-область IgG1 (например, область IgG1 человека). В некоторых воплощениях Fc-область представляет собой химерную Fc-область, содержащую части нескольких различных Fcобластей. Подходящие примеры химерных Fc-областей приведены в US 20110243966 A1, который включен в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме. Различные последовательности генов Fc-области (например, последовательности генов константной области человека) доступны в виде общедоступных депонированных последовательностей. Понятно, что объем настоящего изобретения охватывает аллели, варианты и мутации Fc-областей.
Fc-область может быть дополнительно укорочена или может содержать внутренние делеции для получения ее минимального FcRn-связывающего фрагмента. Способность фрагмента Fc-области связываться с FcRn может быть определена с использованием любого анализа связывания, известного в данной области, например ИФА.
Чтобы повысить возможности производства FcRn-антагонистов, раскрытых в настоящем документе, предпочтительно, чтобы составляющие Fc-области не содержали никаких остатков цистеина, не связанных в виде дисульфидов. Соответственно в некоторых воплощениях Fc-области не содержат свободный остаток цистеина.
Любой Fc-вариант или его FcRn-связывающий фрагмент, который специфично связывается с FcRn с повышенной аффинностью и уменьшенной pH-зависимостью относительно нативной Fc-области, может быть использован в композициях FcRn-антагонистов, раскрытых в настоящем документе. В некоторых воплощениях вариант Fc-области содержит аминокислотные изменения, замены, вставки и/или делеции, которые придают желаемые характеристики. В некоторых воплощениях вариант Fc-области или фрагмент содержит аминокислоты Y, T, E, K, F и Y в EU-положениях 252, 254, 256, 433, 434 и 436 соот
- 9 038178 ветственно. Неограничивающие примеры аминокислотных последовательностей, которые могут быть использованы в вариантах Fc-областей, приведены в табл. 1 настоящего документе. В некоторых воплощениях аминокислотная последовательность Fc-доменов варианта Fc-области содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1. В некоторых воплощениях аминокислотная последовательность Fc-доменов варианта Fc-области состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 1, 2 или 3. В некоторых воплощениях FcRn-антагонист состоит из варианта Fc-области, где аминокислотная последовательность Fc-доменов варианта Fc-области состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 1, 2 или 3.
Таблица 1 Аминокислотные последовательности неограничивающих примеров вариантов Fc-областей
SEQ ID NO Аминокислотная последовательность
1 CPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDG VEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTIS KAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKT TPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALKFHYTQKSLSLSPG
2 DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVWDVSHEDPEVKFN WYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPI EKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPE NNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALKFHYTQKSLSLS PGK
3 DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVWDVSHEDPEVKFN WYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPI EKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPE NNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALKFHYTQKSLSLS PG
Аминокислоты в EU-положениях 252, 254, 256, 433 и 434 подчеркнуты
В некоторых воплощениях вариант Fc-области имеет измененную (например, увеличенную или уменьшенную) аффинность связывания для дополнительного Fc-рецептора. Вариант Fc-области может иметь измененную (например, увеличенную или уменьшенную) аффинность связывания для одного или нескольких рецепторов Fcy, например FcyRI (CD64), FcyRIIA (CD32), FcyRIIB (CD32), FcyRIIIA (CD16a) и FcyRIIIB (CD16b). Можно использовать любые известные в данной области способы изменения аффинности к дополнительному рецептору Fc. В некоторых воплощениях изменяют аминокислотную последовательность варианта Fc-области.
В некоторых воплощениях вариант Fc-области содержит неприродный аминокислотный остаток в одном или нескольких положениях, выбранных из группы, состоящей из 234, 235, 236, 239, 240, 241, 243, 244, 245, 247, 252, 254, 256, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 269, 296, 297, 298, 299, 313, 325, 326, 327, 328, 329, 330, 332, 333 и 334, согласно нумерации EU-индекса, как указано у Kabat. Необязательно, Fcобласть может содержать неприродный аминокислотный остаток в дополнительных и/или альтернативных положениях, известных специалисту в данной области (см., например, патенты США №№ 5624821, 6277375, 6377056, патентные публикации PCT WO 01/58957, WO 02/06919, WO 04/016750, WO 04/029207, WO 04/035752 и WO 05/040217, содержание которых включено в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме).
В некоторых воплощениях вариант Fc-области содержит по меньшей мере один неприродный аминокислотный остаток, выбранный из группы, состоящей из 234D, 234E, 234N, 234Q, 234T, 234H, 234Y, 234I, 234V, 234F, 235A, 235D, 235R, 235 Вт, 235P, 235S, 235N, 235Q, 235Т, 235H, 235Y, 235I, 235V, 235F, 236E, 239D, 239E, 239N, 239Q, 239F, 239T, 239H, 239Y, 240I, 240A, 240T, 240M, 241W, 241L, 241Y, 241E, 241R. 243W, 243L 243Y, 243R, 243Q, 244H, 245A, 247V, 247G, 252Y, 254T, 256E, 262I, 262A, 262T, 262E, 263I, 263A, 263T, 263M, 264L, 264I, 264W, 264T, 264R, 264F, 264M, 264Y, 264E, 265G, 265N, 265Q, 265Y, 265F, 265V, 265I, 265L, 265H, 265T, 266I, 266A, 266T, 266M, 267Q, 267L, 269H, 269Y, 269F, 269R, 296E, 296Q, 296D, 296N, 296S, 296T, 296L, 296I, 296H, 269G, 297S, 297D, 297E, 298H, 298I, 298T, 298F, 299I, 299L, 299A, 299S, 299V, 299H, 299F, 299E, 313F, 325Q, 325L, 325I, 325D, 325E, 325A, 325T, 325V, 325H, 327G, 327W, 327N, 327L, 328S, 328M, 328D, 328E, 328N, 328Q, 328F, 328I, 328V, 328T, 328H, 328A, 329F, 329H, 329Q, 330K, 330G, 330T, 330C, 330L, 330Y, 330V, 330I, 330F, 330R, 330H, 332D, 332S, 332W, 332F, 332E, 332N, 332Q, 332T, 332H, 332Y и 332A согласно нумерации с использованием EU-индекса, как указано у Kabat. Необязательно, Fc-область может содержать дополнительные и/или альтернативные неприродные аминокислотные остатки, известные специалистам в данной области (см., например, патенты США № 5624821, 6277375, 6377056, публикации патентных заявок PCT WO 01/58957; WO 02/06919, WO 04/016750, WO 04/029207, WO 04/035752 и WO 05/040217, содержание которых включено в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме).
Другие известные Fc-варианты, которые могут быть использованы в FcRn-антагонистах, раскрытых в настоящем документе, включают без ограничений те, которые описаны в Ghetie et al., 1997, Nat. Bio
- 10 038178 tech. 15:637-40; Duncan et al., 1988, Nature 332:563-564; Lund et al., 1991, J. Immunol., 147:2657-2662; Lund et al., 1992, Mol. Immunol., 29:53-59; Alegre et al., 1994, Transplantation 57:1537-1543; Hutchins et al., 1995, Proc Natl. Acad Sci USA, 92:11980-11984; Jefferis et al., 1995, Immunol Lett., 44:111-117; Lund et al., 1995, Faseb J., 9:115-119; Jefferis et al., 1996, Immunol Lett., 54:101-104; Lund et al., 1996, J. Immunol., 157:49634969; Armour et al., 1999, Eur J Immunol 29:2613-2624; Idusogie et al., 2000, J. Immunol., 164:4178-4184; Reddy et al., 2000, J. Immunol., 164:1925-1933; Xu et al., 2000, Cell Immunol., 200:16-26; Idusogie et al., 2001, J. Immunol., 166:2571-2575; Shields et al., 2001, J Biol. Chem., 276: 6591-6604; Jefferis et al., 2002, Immunol Lett., 82: 57-65; Presta et al., 2002, Biochem Soc Trans., 30: 487-490); патентах США №№ 5624821; 5885573; 5677425; 6165745; 6277375; 5869046; 6121022; 5624821; 5648260; 6528624; 6194551; 6737056; 6821505; 6277375; патентных публикациях США № 2004/0002587 и в патентных публикациях PCT WO 94/29351; WO 99/58572; WO 00/42072; WO 02/060919; WO 04/029207; WO 04/099249; WO 04/063351, содержание которых включено в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме.
В некоторых воплощениях вариант Fc-области представляет собой гетеродимер, где составляющие Fc-домены отличаются друг от друга. Способы получения гетеродимеров Fc известны в данной области (см., например, US 8216805, который включен в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме). В некоторых воплощениях вариант Fc-области представляет собой одноцепочечную Fc-область, где составляющие Fc-домены соединены вместе линкером. Способы получения одноцепочечных Fcобластей известны в данной области (см., например, US 20090252729 A1 и US 20110081345 A1, которые включены в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме).
Считается, что патогенные IgG-антитела, наблюдаемые при аутоиммунных заболеваниях, являются либо патогенными триггерами для этих заболеваний, либо способствуют прогрессированию заболевания и опосредуют заболевание посредством ненадлежащей активации клеточных Fc-рецепторов. Агрегированные аутоантитела и/или аутоантитела, образующие комплекс с собственными антигенами (иммунные комплексы), связываются с активирующими Fc-рецепторами, вызывая многочисленные аутоиммунные заболевания (которые частично возникают из-за иммунологически опосредуемого воспаления против собственных тканей) (см., например, Clarkson et al., NEJM 314 ( 9), 1236-1239 (2013)); US 20040010124 A1; US 20040047862 A1 и US 2004/0265321 A1, которые включены в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме). Соответственно для лечения опосредованных антителами расстройств (например, аутоиммунных заболеваний) было бы предпочтительно как удаление вредных аутоантител, так и блокировка взаимодействия иммунных комплексов этих антител с использованием активации Fcрецепторов (например, FcY-рецепторов, таких как CD16a).
Соответственно в некоторых воплощениях вариант Fc-области FcRn-антагониста демонстрирует повышенное связывание с CD16a (например, CD16a человека). Это особенно предпочтительно тем, что позволяет FcRn-антагонисту дополнительно выступать антагонистом индуцированного иммунным комплексом воспалительного ответа аутоантител, предназначенных для удаления путем ингибирования FcRn. Могут быть использованы любые известные в данной области способы увеличения аффинности к CD16a (например, человеческому CD16a). В некоторых воплощениях FcRn-антагонист содержит вариант Fc-области, содержащей N-связанный гликан (например, в EU-положении 297). В этом случае возможно увеличение аффинности связывания FcRn-антагониста с CD16a путем изменения структуры гликанов. Изменения N-связанного гликана Fc-областей хорошо известны в данной области. Например, было показано, что афукозилированные N-связанные гликаны или N-гликаны, имеющие структуру с дополнительным остатком GlcNac в точке ветвления, демонстрируют повышенную аффинность к CD16a. Соответственно в некоторых воплощениях N-связанный гликан афукозилирован. Афукозилирование может быть достигнуто с использованием любых способов, известных в данной области. Например, FcRn-антагонист может экспрессироваться в клетках, лишенных фукозилтрансферазы, так что фукоза не добавляется к Nсвязанному гликану в EU-положении 297 варианта Fc-области (см., например, US 0867232, содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме). В некоторых воплощениях N-связанный гликан имеет структуру с дополнительным остатком GlcNAc в точке ветвления. Структура с дополнительным остатком GlcNAc в точке ветвления может быть получена с использованием любых известных в данной области средств. Например, FcRn-антагонист может экспрессироваться в клетках, экспрессирующих β1-4-N-ацетилглюкозаминилтрансферазу III (GnTIII), так что дополнительный остаток GlcNac в точке ветвления добавляется к N-связанному гликану в EU-положении 297 варианта Fc-области (см., например, US 8021856, содержание которого включено в настоящий документ посредством ссылки в полном объеме). Дополнительно или альтернативно, изменения N-связанной структуры гликана также могут быть достигнуты с помощью ферментативных средств in vitro.
В некоторых воплощениях FcRn-антагонист содержит множество молекул FcRn-антагонистов, где по меньшей мере 50% (необязательно, по меньшей мере 60, 70, 80, 90, 95 или 99%) из множества молекул FcRn-антагонистов включают вариант Fc-области или его FcRn-связывающий фрагмент, содержащий афукозилированный N-связанный гликан в EU-положении 297.
В некоторых воплощениях FcRn-антагонист содержит множество молекул FcRn-антагонистов, где по меньшей мере 50% (необязательно, по меньшей мере 60, 70, 80, 90, 95 или 99%) из множества моле- 11 038178 кул FcRn-антагонистов включают вариант Fc-области или ее FcRn-связывающий фрагмент, содержащий
N-связанный гликан, содержащий дополнительный остаток GlcNac в точке ветвления в EU-положении
297.
В некоторых воплощениях вариант Fc-области не содержит N-связанного гликана. Это может быть достигнуто с использованием любых известных в данной области методов. Например, Fc-вариант может быть экспрессирован в клетке, которая не способна к N-связанному гликозилированию. Дополнительно или альтернативно, аминокислотная последовательность Fc-варианта может быть изменена для предотвращения или ингибирования N-связанного гликозилирования (например, путем мутации секвона NXT). Альтернативно, Fc-вариант может быть синтезирован в бесклеточной системе (например, с помощью химического синтеза).
В некоторых воплощениях молекулы FcRn-антагонистов могут быть модифицированы, например, путем ковалентного присоединения молекулы (например, связывающего или визуализирующего компонента) к FcRn-антагонисту, так что ковалентное присоединение не предотвращает специфичного связывания FcRn-антагониста с FcRn. Например, но не в качестве ограничения, FcRn-антагонист может быть модифицирован гликозилированием, ацетилированием, пэгилированием, фосфорилированием, амидированием, модификацией известными защищающими блокирующими группами, протеолитическим расщеплением, связыванием с клеточным лигандом или другим белком и т.д.
В некоторых воплощениях FcRn-антагонист содержит вариант Fc-области, связанной с веществом, увеличивающим период полужизни. Используемый в настоящем документе термин вещество, увеличивающее период полужизни относится к любой молекуле, которая при соединении с FcRn-антагонистом, раскрытым в настоящем документе, увеличивает период полужизни FcRn-антагониста. Любое вещество, увеличивающее период полужизни, может быть связано (ковалентно или нековалентно) с FcRnантагонистом. В некоторых воплощениях вещество, увеличивающее период полужизни, представляет собой полиэтиленгликоль или человеческий сывороточный альбумин. В некоторых воплощениях FcRnантагонист связан со связывающей молекулой, которая специфично связывается с увеличивающим период полужизни веществом, присутствующим у объекта, таким как молекула или клетка, переносимая кровью, как например, сывороточный альбумин (например, человеческий сывороточный альбумин), IgG, эритроциты и т.д.
IV. Фармацевтические композиции.
В некоторых воплощениях в способах применяют фармацевтические композиции, содержащие FcRn-антагонист или композицию FcRn-антагониста, раскрытую в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель или вспомогательное вещество. Примеры подходящих фармацевтических носителей описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences, E.W. Martin. Примеры вспомогательных веществ могут включать крахмал, глюкозу, лактозу, сахарозу, желатин, солод, рис, муку, мел, силикагель, стеарат натрия, моностеарат глицерина, тальк, хлорид натрия, сухое обезжиренное молоко, глицерин, пропилен, гликоль, воду, этанол и тому подобное. Композиция также может содержать реагенты для буферизации pH и смачивающие или эмульгирующие агенты.
Фармацевтическая композиция может быть приготовлена для парентерального введения (например, внутривенного или внутримышечного) с помощью болюсной инъекции. Составы для инъекций могут быть представлены в стандартной лекарственной форме, например в ампулах или в мультидозовых контейнерах с добавлением консерванта. Композиции могут принимать такие формы, как суспензии, растворы или эмульсии в масляных или водных носителях, и содержат составляющие агенты, такие как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие агенты. Альтернативно, активный ингредиент может быть представлен в виде порошка для восстановления с использованием подходящего носителя, например воды, свободной от пирогена.
В раскрытых способах FcRn-антагонисты могут быть связаны с хелаторами, такими как те, которые описаны в патенте США № 5326856. Затем пептид-хелаторный комплекс может быть радиоактивно помечен для обеспечения агента визуализации для диагностики или лечения заболеваний или состояний, связанных с регуляцией уровня IgG.
V. Примеры.
Настоящее изобретение дополнительно проиллюстрировано следующими примерами, которые не следует рассматривать как дополнительное ограничение. Содержание списка последовательностей, фигуры и все ссылки, патенты и опубликованные патентные заявки, которые цитируются в этой заявке, определенно включены в настоящий документ с помощью ссылки.
Пример 1. Влияние Fc-Abdeg на уровень IgG в сыворотке у яванской макаки.
Влияние человеческого IgG-антитела к лизоциму (HEL-Abdeg) и Fc-области человеческого IgG (FcAbdeg), содержащей аминокислоты Y, T, E, K, F и Y в EU-положениях 252, 254, 256, 433, 434 и 436 соответственно (Fc-Abdeg; SEQ ID NO: 2), на уровень меченого IgG-антитела в сыворотке определяли у яванской макаки. В частности, яванским макакам вводили 1 мг/кг антитела против мышиного CD70 hIgG1 (FR70-hIgG1, Oshima et al., Int Immunol 10(4): 517-26 (1998)) путем внутривенной болюсной инъекции. Через 5 мин животным вливали либо 7 мг/кг Fc-Abdeg, 20 мг/кг HEL-Abdeg, либо PBS (2 обезьяны на группу). Инфузию проводили в течение 1 ч, и животным вводили объем 10 мл/кг. Образцы крови (3x150
- 12 038178 мкл) брали за 5 мин до дозирования (пре-доза) и через 5 мин, 2, 6, 24, 48, 72, 96 и 120 ч после завершения инфузии. Уровни индикатора определяли, выполняя ИФА mCD70-связывания, и данные наносили на график относительно уровня индикатора в конце дозирования (фиг. 1). Также определяли суммарный уровень IgG у макак (фиг. 2). Результаты этих экспериментов демонстрируют, что Fc-Abdeg уменьшает меченое антитело более эффективно, чем эквимолярные количества HEL-Abdeg.
В дополнение к своей ключевой роли в пути реутилизации IgG FcRn также участвует в гомеостазе альбумина (Chaudhury et al., J Exp Med. 197 (3): 315-22 (2003). FcRn взаимодействует с IgG-Fc и альбумином в различных сайтах, причем связывание может происходить одновременно (Andersen et al., Nat Commun. 3:610 (2012)). Понятно, что блокировка рециркуляции IgG с использованием Abdegмодифицированных молекул не должно мешать взаимодействию альбумина и FcRn. Эта гипотеза была подтверждена в исследовании на мышах in vivo, где авторы показали отсутствие влияния Abdeg-несущей молекулы hIgG1 на уровень альбумина (Patel et al., J Immunol 187 (2): 1015-22 (2011)). В описанном выше эксперименте уровень альбумина также определяли в день -3, день 3 и день 17 после завершения инфузии. Аналогично исследованию на мышах не наблюдали значительных изменений уровня альбумина после обработки с помощью Fc-Abdeg или HEL-Abdeg (см. фиг. 3).
В последующем эксперименте эффективность Fc-Abdeg в отношении обеднения антител сравнивали с IVIG. В частности, яванским макакам вводили меченое антитело 1 мг/кг (FR70-hIgG1) за 2 дня до введения 70 мг/кг Fc-Abdeg или 2 г/кг IVIG (2 обезьяны на группу). Инфузию Fc-Abdeg и IVIG проводили в течение 4 ч и животным вводили объем 20 мл/кг. Образцы крови (3x150 мкл) брали за 5 мин до введения дозы (пре-доза) и через 5 мин, 2, 6, 24, 48, 72, 96, 120 и 168 ч после завершения инфузии. Уровни индикатора определяли с помощью ИФА mCD70-связывания и наносили на график относительно уровня пре-дозы (фиг. 4). По сравнению с обработкой IVIG в клинической дозе (2 г/кг) 70 мг/кг Fc-Abdeg показал значительно улучшенную кинетику клиренса индикатора, а также был способен к клиренсу с большей эффективностью (>95% клиренса индикатора за 4 дня для Abdeg против ~75% за 7 дней для IVIG).
Пример 2. Влияние афукозилирования на аффинность Fc-Abdeg к человеческому CD16a и мышиному CD16-2.
Определяли аффинность связывания Fc-Abdeg с hCD16a и сравнивали с афукозилированной формой (Fc-Abdeg-POT). В тот же эксперимент был включен вариант Fc-Abdeg, демонстрирующий улучшенную аффинность для всех FcyR (Fc-Abdeg-S239D/I332E). В частности, планшет Maxisorp покрывали 100 нг/на лунку нейтравидин биотинсвязывающим белком (ThermoScientific, 31000) и инкубировали в течение ночи при 4°C. На следующий день планшет блокировали PBS+1% казеин течение 2 ч при комнатной температуре. Затем в планшет добавляли 100 мкл/на лунку раствора 250 нг/мл (разведение в PBS+0,1% казеин) биотинилированного hCD16a (Sino Biological Inc., 10389-H27H1-B) и инкубировали в течение 1 ч при комнатной температуре до применения градиента концентрации молекул Fc-Abdeg или Fc-Abdeg-POT (1 мкМ-0,005 нМ) еще в течение часа. Связывание с hCD16a детектировали с использованием конъюгированного с HRP поликлонального козьего антитела против человеческого Fc (Jackson ImmunoResearch, 109-035-008) (инкубация 1 ч при КТ, разбавление 1/50000 в PBS+0,1% казеин) с последующим добавлением 100 мкл уравновешенного при комнатной температуре TMB (SDT-реагенты № TMB). Планшеты инкубировали в течение 10 мин перед добавлением 100 мкл 0,5N H2SO4 и измерением OD450 нм. Значения EC50 определяли с использованием программного обеспечения GraphPad Prism. Результаты этих экспериментов, приведенные на фиг. 5, демонстрируют, что дефукозилирование молекулы Fc-Abdeg приводит к >30-кратному увеличению аффинности к hCD16a (EC50=13 нм для Fc-AbdegPOT против EC50>0,4 мкМ для фукозилированного Fc-Abdeg). Как и ожидалось, аффинность связывания варианта Fc-Abdeg-S239D/I332E для hCD16a была увеличена по сравнению с Fc-Abdeg дикого типа (EC50=6 нМ).
Используя аналогичную экспериментальную процедуру, описанную выше, определяли аффинность связывания для мышиного CD16-2 (Sino Biological Inc., 50036-M27H-B). Результаты этих экспериментов, приведенные на фиг. 6, снова демонстрируют повышенную аффинность афукозилированного варианта по сравнению с Fc-Abdeg дикого типа (EC50=11 нМ против EC50>100 нМ). Кратное увеличение аффинности к mCD16-2 варианта Fc-Abdeg-POT по сравнению с Fc-Abdeg дикого типа ниже по сравнению с наблюдаемой аффинностью связывания с человеческим CD16a. Этот эффект не наблюдали для варианта Fc-Abdeg-S239D/I332E (EC50=2nM), который имеет сходное кратное увеличение аффинности по сравнению с диким типом Fc-Abdeg для обоих, человеческого и мышиного CD16 (ЕС50=2нМ).
Аутоантитела, образующие комплекс с собственными антигенами, связываются с активирующими FcyR и тем самым вызывают аутоиммунные заболевания, которые частично возникают из-за иммунологически опосредованного воспаления против собственной ткани. Способность Fc-Abdeg антагонизировать взаимодействие аутоиммунных антител и рецепторов FcyRIII на NK-клетках оценивали в двух тестах на основе ADCC.
Первоначально репортерный биоанализ ADCC (Promega, G7016) использовали для анализа конкурентной эффективности связывания hCD16a Fc-Abdeg, Fc-Abdeg-POT и Fc-Abdeg-S239D/I332E. Конкретно, 10000 CD20-экспрессирующих клеток Raji (клетки-мишени) инкубировали с 60000 клеток Jurkat,
- 13 038178 экспрессирующих hCD16a (эффекторные клетки) в присутствии 100 нг/мл антитела к CD20 и при увеличивающейся концентрации конкурента. Клетки инкубировали в течение 6 ч при 37°C перед измерением сигнала биолюминесценции, что является мерой активности ADCC. Сигнал люциферазы наносили на график по отношению к сигналу, полученному с помощью 100 г/мл антитела к CD20 в отсутствие конкурента (см. фиг. 7). Эти эксперименты демонстрируют, что и Fc-Abdeg-POT, и Fc-Abdeg-S239D/I332E эффективно блокируют сигнал ADCC, индуцированный антителом к CD20, в то время как инкубация с FcAbdeg дикого типа не приводит к конкурентному связыванию hCD16a, экспрессируемому на клетках Jurkat.
В следующем анализе ADCC ингибирование литической активности антитела к hCD70 (27B3hIgG1) с помощью Fc-Abdeg и Fc-Abdeg-POT тестировали как показатель конкурентного связывания hCD16. Конкретно, примерно 50000 hCD70-экспрессирующих клеток U266 пикировали примерно в 300000 свежеочищенных PBMC от здорового донора в присутствии 50 нг/мл антитела против hCD70 и при градиенте концентрации Fc-Abdeg, Fc-Abdeg-POT и IVIG. Клетки U266 инкубировали в течение двух дней, и последующий лизис клеток анализировали с помощью FACS с использованием маркера, специфичного для клеток U266 (CD28). Результаты этих экспериментов, представленные на фиг. 8, демонстрируют, что антитело к CD70 эффективно лизирует клетки U266 и что это обеднение клеток может быть ослаблено дозозависимым образом путем добавления Fc-Abdeg-POT, но не Fc-Abdeg дикого типа и не IVIG. Эти данные демонстрируют, что Fc-Abdeg POT обладает улучшенными конкурентными свойствами связывания CD16a относительно Fc-Abdeg дикого типа и IVIG.
Пример 3. Мышиная модель острой ITP.
Терапевтическую эффективность молекул Fc-Abdeg, Fc-Abdeg-POT, Fc-Abdeg-S239D/I332E тестировали на мышиной модели острой иммунной тромбоцитопении. Конкретно, мышей C57BL/6 обрабатывали с помощью IVIG (20 мг/на животное), Fc-Abdeg (1 мг/на животное), Fc-Abdeg-POT (1 мг/на животное), Fc-Abdeg-S239D/I332E (1 мг/на животное) или физиологическим раствором посредством внутрибрюшинной инфузии (5 животных/на группу). Перед обработкой образец крови отбирали для базового измерения количества тромбоцитов. Через час мышей обрабатывали 5 мкг/на животное антителами против мышиных тромбоцитов MWReg30 (Nieswandt et al., Blood 94: 684-93 (1999)). Количество тромбоцитов контролировали в течение 24 ч. Количество тромбоцитов нормализовали относительно исходного количества для каждой мыши и количество тромбоцитов определяли с использованием проточной цитометрии путем окрашивания с антителом к CD61. Результаты этих экспериментов, представленные на фиг. 9, демонстрируют, что предварительная обработка с использованием Fc-Abdeg снижает MWReg30индуцированную тромбоцитопению с аналогичной эффективностью по сравнению с 7-кратно более высокой молярной дозой IVIG, и, кроме того, что блокада FcyR с помощью Fc-Abdeg POT и Fc-AbdegS239D/I332E имела синергетический полезный эффект в этой модели, как видно из повышенного количества тромбоцитов в моменты времени 180 и 1440 мин.
Пример 4. Возможность производства Fc-Abdeg.
Fc-Abdeg (содержащий Fc-домены, имеющие SEQ ID NO: 2), продуцировали в клетках CHO (Evitria, Switzerland) с помощью транзиторной трансфекции. После трансфекции в супернатантах детектировали высокий титр Fc-Abdeg (от 200 до 400 мг/мл). Аналогичный благоприятный профиль продуцирования наблюдали, когда Fc-Abdeg был экспрессирован из экспрессирующего конструкта, стабильно интегрированного в клеточную линию CHO GS-XCEED (Lonza, Great Britain). В среднем стабильные трансфектанты давали 3 г/л, и идентифицировали несколько клонов, которые продуцировали до 6 г/л FcAbdeg в 10-литровом биореакторе с мешалкой.
Возможность производства Fc-Abdeg дополнительно исследовали путем анализа агрегатов и продуктов деградации после очистки с использованием протеина A вышеупомянутых продуцированных FcAbdeg. Конкретно, 137 мкг Fc-Abdeg загружали на гель-фильтрационную колонку Superdex 200 10/300 GL (GE Healthcare), соединенную с системой хроматографии AktaPurifier. Результаты этого эксперимента, представленные на фиг. 10, продемонстрировали, что наблюдался только очень небольшой процент агрегатов Fc-Abdeg (~0,5%), в то время не детектировали никаких продуктов деградации Fc-Abdeg. Кроме того, применение различных стрессовых условий (замораживание-оттаивание, вращательный или температурный стресс) в отношении очищенного с использованием протеина A Fc-Abdeg не приводило к какому-либо явному изменению физико-химических и функциональных свойств. В совокупности эти данные демонстрируют превосходную возможность производства Fc-Abdeg.
Пример 5. Исследование эскалации дозы Fc-Abdeg у яванских макак.
Исследование эскалации дозы Fc-Abdeg проводили у яванских макак, чтобы определить начало проявления фармакодинамического эффекта, а также насыщающую дозу. С этой целью яванским макакам вводили 1 мг/кг антитела против мышиного CD70 hIgG1 (FR70-hIgG1) путем внутривенной болюсной инъекции. Животным вводили через 48 ч различные дозы FC-Abdeg (0,2, 2, 20 или 200 мг/кг) или носитель (PBS). Инфузию проводили в течение 3 ч и животным вводили объем 36,36 мл/кг. Каждая тестовая группа состояла из 2 животных. Образцы крови (3x150 мкл) отбирали за 5 мин до дозирования (пре-доза) и через 5 мин, 2, 6, 24, 48, 72 ч, 5, 7, 10 и 14 дней после окончания инфузии. Как уровень меченого IgG (см. фиг. 11), так и эндогенного IgG (см. фиг. 12) определяли с помощью ИФА и строили график относительно уровней пре-дозы. Данные от доз 70 мг/кг накладывали на эксперименты, представленные на фиг. 4 настоящего документа. Дозирование животным 0,2 мг/кг FC-Abdeg не оказывало
- 14 038178 существенного влияния на скорость выведения индикатора и не влияло на эндогенный уровень IgG. Явный фармакодинамический эффект наблюдали при 2 мг/кг, и уровень этого эффекта снижался при дозах от 20 мг/кг. Однократное введение Fc-Abdeg снижает IgG яванских макак максимально на 55% в течение
3-4 дней.
Связывание FcRn ограничено гамма-подтипом иммуноглобулинов и отвечает за их гораздо более длительный период полужизни по сравнению с другими подтипами иммуноглобулинов. Поэтому блокирование функции FcRn по рециркуляции IgG с помощью Fc-Abdeg не должно мешать эндогенному уровню иммуноглобулинов, не относящихся к IgG, что было продемонстрировано путем измерения уровней эндогенных IgA и IgM в образцах сыворотки животных, получавших 200 мг/кг Fc-Abdeg (см. фиг. 13 и 14). Вместе с наблюдением, представленным в примере 1, демонстрирующим, что обработка Fc-Abdeg не влияет на уровень альбумина, эти данные демонстрируют специфический фармакодинамический эффект Fc-Abdeg.
Затем фармакокинетический профиль Fc-Abdeg определяли с помощью ИФА. Fc-Abdeg имеет короткий период полужизни (расчетный период полужизни ~1,5 дня), как было рассчитано по его PKпрофилю (см. фиг. 5). На уровнях насыщения не связывающий FcRn Fc-Abdeg будет эффективно выводиться благодаря его собственному способу действия. Кроме того, молекулярный размер Fc-Abdeg близок к пороговому для почечного клиренса (~60 кДа).
Пример 6. Повторное исследование дозирования Fc-Abdeg у яванских макак.
Однократная инфузия Fc-Abdeg в дозе 20 мг/кг снижает уровень эндогенного IgG на 55% у яванских макак примерно через 3-4 дня. В последующем эксперименте было проанализировано, будет ли повторное дозирование Fc-Abdeg еще более снижать этот уровень. Были выполнены две стратегии: одна группа обезьян получала инфузию тестируемого компонента каждые 24 ч в течение первых 4 дней (дни 1, 2, 3, 4), в то время как другая группа получала лекарственное средство каждые четыре дня (дни 1, 5, 9, 13). Для каждого индивидуального введения Fc-Abdeg вводили в дозе 20 мг/кг. Каждая тестовая группа состояла из 2 животных. Процедура инфузии была идентична процедуре, описанной в примере 1. Четкую фармакодинамическую разницу между двумя различными группами наблюдали на 7-й день (см. фиг. 16). Дозирование Fc-Abdeg каждый день в течение первых 4 дней продемонстрировало аналогичное снижение уровня IgG как при однократной инфузии в той же дозе (пунктирная линия, данные примера 1, наложенные в качестве эталона). Дозирование Fc-Abdeg раз в четыре дня приводит к более глубокому и более продолжительному снижению этих уровней. Максимальное снижение до 25% от исходного уровня наблюдали в этой группе обработки.
Определяли фармакокинетический профиль Fc-Abdeg (см. фиг. 7), который соответствовал результатам исследования эскалации дозы, представленного в примере 5.
Пример 7. Дополнительное исследование эскалации дозы Fc-Abdeg у яванских макак.
Последующее исследование эскалации дозы Fc-Abdeg было выполнено на яванских макаках для дополнительного изучения начала и насыщения фармакодинамических эффектов. С этой целью животным вводили различные дозы FC-Abdeg (10, 30, 50 и 100 мг/кг) или носитель (PBS). Инфузию проводили в течение двух часов, и каждая группа состояла из четырех животных (двух самцов и двух самок). Уровень эндогенного IgG определяли с помощью ИФА и строили график относительно уровня пре-дозы (см. фиг. 18). Промежуточный фармакодинамический эффект наблюдали при дозе 10 мг/кг, и этот эффект выравнивался при дозах от 30 мг/кг. Скорость истощения IgG, начало действия и фармакокинетический профиль (см. фиг. 19, см. табл. 2) были аналогичны результатам, представленным в примере 5.
Таблица 2
Фармакокинетические свойства Fc-Abdeg у яванских макак
Некомпартментный анализ Fc-Abdeg
Доза [мг/кг ] Стах* [мкг/м л] tmax # [Ч] tl/2 [ч] т --пос ледне θ# [Ч] CL [мл/ч/ кг] ппк0_ Дпоследнее [мкг*ч/м л] ППКо-» [мкг*ч/м л] ППКо-» / доза [мкг*ч*кг / мл/мг] кпд
САМЦЫ
10 179,1 2 22,8 672 1,95 5138 5138 514 -
30 512,3 2 24,7 672 1,99 15317 15317 511 0,99
50 850,7 2 26, 0 672 1,93 26025 26025 521 1,01
100 1414,9 2 28,2 540 2,28 43865 43865 439 0,85
САМКИ
10 188,3 2 21,3 672 1,80 5573 5573 557 -
30 447,6 2 34,5 672 2,13 14094 14094 470 0,84
50 978,9 2 27,5 456 1,78 28101 28104 562 1,01
100 1586,8 2 28,1 576 2,02 49553 49553 496 0,89
# - значения, полученные из сывороточного анализа Fc-Abdeg, все остальные значения рассчитаны с помощью токсикокинетического анализа;
- - невозможно вычислить или нет приемлемого объяснения из имеющихся данных; КПД - коэффициент пропорциональности дозы=
[ППК0-tпоследнее (х Mг/кг)/ППК0-tпоследнее (10 Мг/кг)]/[(х мг/кг)/(10 мг/кг)].
- 15 038178
Пример 8. Дополнительное исследование повторного дозирования Fc-Abdeg на яванских макаках.
Последующее исследование повторного дозирования Fc-Abdeg было выполнено на яванских макаках для дополнительного изучения фармакодинамического эффекта при хроническом введении FcAbdeg. С этой целью животным вливали каждые 48 ч различные дозы FC-Abdeg (3, 30 и 100 мг/кг) или носитель (PBS), в общей сложности 15 инфузий. После периода обработки был включен период восстановления, составляющий 30 дней. Каждая группа состояла из четырех животных, за исключением группы 100 мг/кг (которая состояла из трех животных). Уровни эндогенного IgG определяли с помощью ИФА и строили график относительно уровня пре-дозы (см. фиг. 20, среднее±SEM). Четкое падение уровня IgG наблюдали для всех тестируемых доз, и этот фармакодинамический эффект сохранялся до конца периода обработки. После периода обработки уровень IgG восстанавливался до исходного уровня в течение 10 дней. Фармакокинетический профиль представлен на фиг. 21.
Пример 9. Исследование хронического дозирования Fc-Abdeg на яванских макаках.
Яванским макакам вливали внутривенно загрузочную дозу 20 мг/кг FC-Abdeg, и далее они получали ежедневное подкожное введение Fc-Abdeg в количестве 1, 3 или 5 мг/кг, начинающееся через 24 ч после исходной дозы и продолжающееся в течение 12 дней. Каждая тестовая группа состояла из двух животных. Уровень IgG определяли с помощью ИФА и строили график относительно уровня пре-дозы (см. фиг. 22). Данные также представлены для одной яванской макаки из группы введения 3 мг/кг, в которой обработка продолжалось более 12 дней. Этой обезьяне внутривенно вливали загрузочную дозу 20 мг/кг FC-Abdeg и обезьяне ежедневно подкожно вводили Fc-Abdeg в дозе 3 мг/кг, начиная через 24 ч после начальной дозы и продолжая в течение 28 дней, и продолжая до следующего периода без обработки, составляющего 32 дня (см. фиг. 23). Уровень IgG был снижен до 60% от исходного уровня и оставался неизменно низким на протяжении всего периода обработки. После периода обработки уровень IgG восстанавливался до базового уровня в течение двух недель.

Claims (19)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Способ уменьшения уровня IgG-антитела в сыворотке пациента, включающий введение пациенту эффективного количества выделенного FcRn-антагониста, состоящего из варианта Fc-области IgG1, где Fc-домены варианта Fc-области содержат аминокислоты Y, T, E, K, F и Y в EU положениях 252, 254, 256, 433, 434 и 436 соответственно, где FcRn-антагонист вводят пациенту по меньшей мере дважды в течение 20 дней, где FcRn-антагонист вводят внутривенно, где FcRn-антагонист вводят пациенту в дозе, составляющей 2, 3, 5, 10, 20, 25, 30, 50, 70, 100 или 200 мг/кг, и где FcRn-антагонист вводят пациенту с частотой, составляющей один раз каждые 7 дней.
  2. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что FcRn-антагонист вводят пациенту в дозе, составляющей примерно 10 мг/кг.
  3. 3. Способ по п.1, отличающийся тем, что FcRn-антагонист вводят пациенту в дозе, составляющей примерно 20 мг/кг.
  4. 4. Способ по п.1, отличающийся тем, что FcRn-антагонист вводят пациенту в дозе, составляющей примерно 25 мг/кг.
  5. 5. Способ по любому из пп.1-4, отличающийся тем, что аминокислотная последовательность Fcдоменов варианта Fc-области содержит аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 1.
  6. 6. Способ по любому из пп.1-5, отличающийся тем, что аминокислотная последовательность Fcдоменов варианта Fc-области состоит из аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 1, 2 или 3.
  7. 7. Способ по любому из пп.1-6, отличающийся тем, что вариант Fc-области имеет повышенную аффинность к CD16a по сравнению с нативной Fc-областью IgG1.
  8. 8. Способ по любому из пп.1-7, отличающийся тем, что Fc-домены варианта Fc-области не содержат N-связанного гликана в EU-положении 297.
  9. 9. Способ по любому из пп.1-7, отличающийся тем, что FcRn-антагонист содержит множество молекул FcRn-антагонистов, где по меньшей мере 50, 60, 70, 80, 90, 95 или 99% множества молекул FcRnантагонистов состоят из варианта Fc-области, содержащего афукозилированный N-связанный гликан в EU-положении 297.
  10. 10. Способ по любому из пп.1-7, отличающийся тем, что FcRn-антагонист содержит множество молекул FcRn-антагонистов, где по меньшей мере 50, 60, 70, 80, 90, 95 или 99% множества молекул FcRnантагонистов состоят из варианта Fc-области, содержащего N-связанный гликан, имеющий дополнительный GlcNac в точке ветвления в EU-положении 297.
  11. 11. Способ по любому из пп.1-10, отличающийся тем, что вариант Fc-области связан с веществом, увеличивающим период полужизни.
  12. 12. Способ по любому пп.1-11, отличающийся тем, что вещество, увеличивающее период полужиз-
    - 16 038178 ни, представляет собой полиэтиленгликоль или человеческий сывороточный альбумин.
  13. 13. Способ по любому из пп.1-12, отличающийся тем, что IgG-антитело представляет собой патогенное антитело.
  14. 14. Способ по любому из пп.1-13, отличающийся тем, что IgG-антитело представляет собой аутоантитело.
  15. 15. Способ по любому из пп.1-14, отличающийся тем, что пациент имеет заболевание или расстройство, опосредованное антителом, и где введение FcRn-антагониста пациенту ослабляет заболевание или расстройство.
  16. 16. Способ по п.15, отличающийся тем, что заболевание или расстройство, опосредованное антителом, представляет собой аутоиммунное заболевание.
  17. 17. Способ по п.16, отличающийся тем, что аутоиммунное заболевание представляет собой аутоиммунную тромбоцитопению или иммунную опосредованную тромбоцитопению.
  18. 18. Способ по любому из пп.1-17, отличающийся тем, что FcRn-антагонист вводят пациенту одновременно или последовательно с дополнительным терапевтическим агентом, выбранным из антитела, которое специфично связывается с CD10, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD37, CD53, CD70, CD72, CD74, CD75, CD77, CD79a, CD79b, CD80, CD81, CD82, CD83, CD84, CD85 или CD86, или выбранным из ритуксимаба, даклизумаба, базиликсимаба, мурономаба-CD3, инфликсимаба, адалимумаба, омализумаба, эфализумаба, натализумаба, тоцилизумаба, экулизумаба, голимумаба, канакинумаба, устекинумаба, белимумаба или их комбинации.
  19. 19. Способ по любому из пп.1-18, отличающийся тем, что пациент представляет собой человека или яванскую макаку.
EA201791984A 2015-03-09 2016-03-08 СПОСОБЫ УМЕНЬШЕНИЯ УРОВНЯ Fc-СОДЕРЖАЩИХ АГЕНТОВ В СЫВОРОТКЕ С ПРИМЕНЕНИЕМ FcRn-АНТАГОНИСТОВ EA038178B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201562130076P 2015-03-09 2015-03-09
PCT/IB2016/000398 WO2016142782A1 (en) 2015-03-09 2016-03-08 Methods of reducing serum levels of fc-containing agents using fcrn antagonsits

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201791984A1 EA201791984A1 (ru) 2017-12-29
EA038178B1 true EA038178B1 (ru) 2021-07-20

Family

ID=55863122

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201791984A EA038178B1 (ru) 2015-03-09 2016-03-08 СПОСОБЫ УМЕНЬШЕНИЯ УРОВНЯ Fc-СОДЕРЖАЩИХ АГЕНТОВ В СЫВОРОТКЕ С ПРИМЕНЕНИЕМ FcRn-АНТАГОНИСТОВ

Country Status (19)

Country Link
US (1) US20160264669A1 (ru)
EP (2) EP4006051A1 (ru)
JP (5) JP2018509413A (ru)
KR (1) KR20170131463A (ru)
AU (2) AU2016230827B2 (ru)
BR (1) BR112017019191A2 (ru)
CA (1) CA2978253A1 (ru)
DK (1) DK3268391T3 (ru)
EA (1) EA038178B1 (ru)
ES (1) ES2882999T3 (ru)
HU (1) HUE056775T2 (ru)
IL (2) IL295425A (ru)
LT (1) LT3268391T (ru)
MX (2) MX2017011534A (ru)
MY (1) MY188761A (ru)
PL (1) PL3268391T3 (ru)
PT (1) PT3268391T (ru)
SG (2) SG10201908259WA (ru)
WO (1) WO2016142782A1 (ru)

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SG10202009832XA (en) 2013-12-24 2020-11-27 Argenx Bvba Fcrn antagonists and methods of use
FI3250610T3 (fi) * 2015-01-30 2023-11-01 Momenta Pharmaceuticals Inc Fcrn-vasta-aineita ja menetelmiä niiden käyttämiseksi
ES2882999T3 (es) * 2015-03-09 2021-12-03 Argenx Bvba Métodos para reducir los niveles séricos de agentes que contienen Fc mediante el uso de antagonistas de FcRn
MA45602A (fr) 2016-07-08 2019-05-15 Staten Biotechnology B V Anticorps anti-apoc3 et leurs méthodes d'utilisation
GB201618424D0 (en) * 2016-11-01 2016-12-14 Argenix Bvba Treatment of antibody mediated disease
AU2018255938A1 (en) 2017-04-21 2019-10-31 Staten Biotechnology B.V. Anti-ApoC3 antibodies and methods of use thereof
US10538583B2 (en) 2017-10-31 2020-01-21 Staten Biotechnology B.V. Anti-APOC3 antibodies and compositions thereof
JP7039694B2 (ja) 2017-10-31 2022-03-22 スターテン・バイオテクノロジー・ベー・フェー 抗ａｐｏｃ３抗体およびその使用方法
EP3720877A1 (en) * 2017-12-08 2020-10-14 Argenx BVBA Use of fcrn antagonists for treatment of generalized myasthenia gravis
JOP20210298A1 (ar) 2019-05-14 2023-01-30 Provention Bio Inc طرق وتركيبات للوقاية من مرض السكري من النوع الأول
JP2022535908A (ja) * 2019-06-07 2022-08-10 アルジェニクス ビーブイ 皮下投与に好適なＦｃＲｎインヒビターの医薬製剤
MX2022001038A (es) * 2019-07-25 2022-04-26 Genzyme Corp Métodos para tratar trastornos mediados por anticuerpos con antagonistas de fcrn.
WO2021160116A1 (zh) * 2020-02-10 2021-08-19 北京拓界生物医药科技有限公司 抗FcRn抗体、其抗原结合片段及其医药用途
US20230220069A1 (en) * 2020-06-17 2023-07-13 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Compositions and methods for treatment of gene therapy patients
CN117693523A (zh) * 2021-08-13 2024-03-12 舒泰神（北京）生物制药股份有限公司 特异性识别fcrn的抗体及其用途

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006130834A2 (en) * 2005-05-31 2006-12-07 Board Of Regents, The University Of Texas System IGGl ANTIBODIES WITH MUTATED FC PORTION FOR INCREASED BINDING TO FCRN RECEPTOR AND USES THEREOF
WO2013063186A2 (en) * 2011-10-26 2013-05-02 Novartis Animal Health Us, Inc. Monoclonal antibodies and methods of use
WO2013074598A1 (en) * 2011-11-18 2013-05-23 Merck Sharp & Dohme Corp. Fc CONTAINING POLYPEPTIDES HAVING INCREASED ANTI-INFLAMMATORY PROPERTIES AND INCREASED FcRN BINDING
WO2015100299A1 (en) * 2013-12-24 2015-07-02 Argen-X N.V. Fcrn antagonists and methods of use

Family Cites Families (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP3101690B2 (ja) 1987-03-18 2000-10-23 エス・ビィ・２・インコーポレイテッド 変性抗体の、または変性抗体に関する改良
US5677425A (en) 1987-09-04 1997-10-14 Celltech Therapeutics Limited Recombinant antibody
US5326856A (en) 1992-04-09 1994-07-05 Cytogen Corporation Bifunctional isothiocyanate derived thiocarbonyls as ligands for metal binding
CA2118508A1 (en) 1992-04-24 1993-11-11 Elizabeth S. Ward Recombinant production of immunoglobulin-like domains in prokaryotic cells
US5885573A (en) 1993-06-01 1999-03-23 Arch Development Corporation Methods and materials for modulation of the immunosuppressive activity and toxicity of monoclonal antibodies
AU691811B2 (en) 1993-06-16 1998-05-28 Celltech Therapeutics Limited Antibodies
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US6121022A (en) 1995-04-14 2000-09-19 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6128119A (en) 1997-01-10 2000-10-03 Asahi Kogaku Kogyo Kabushiki Kaisha Beam shaping optical system
US6277375B1 (en) 1997-03-03 2001-08-21 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobulin-like domains with increased half-lives
US6528624B1 (en) 1998-04-02 2003-03-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
GB9809951D0 (en) 1998-05-08 1998-07-08 Univ Cambridge Tech Binding molecules
CA2359067C (en) 1999-01-15 2017-03-14 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US6737056B1 (en) * 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
CN1406249B (zh) 2000-02-11 2010-06-16 默克专利股份有限公司 增加基于抗体的融合蛋白的循环半衰期
US6725230B2 (en) 2000-07-18 2004-04-20 Aegis Analytical Corporation System, method and computer program for assembling process data of multi-database origins using a hierarchical display
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
US6992234B2 (en) * 2000-11-06 2006-01-31 The Jackson Laboratory FcRn-based therapeutics for the treatment of auto-immune disorders
ATE540694T1 (de) 2000-11-20 2012-01-15 Canadian Blood Services Verfahren zur behandlung der thrombozytopenie mit monoklonalem ivig
US7083784B2 (en) 2000-12-12 2006-08-01 Medimmune, Inc. Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof
HUP0700103A3 (en) 2001-08-03 2012-09-28 Glycart Biotechnology Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity
US20040002587A1 (en) 2002-02-20 2004-01-01 Watkins Jeffry D. Fc region variants
US20040132101A1 (en) 2002-09-27 2004-07-08 Xencor Optimized Fc variants and methods for their generation
ATE483472T1 (de) 2002-05-30 2010-10-15 Macrogenics Inc Cd16a bindungsproteine und verwendung zur behandlung von immunkrankheiten
AU2003262650B2 (en) 2002-08-14 2009-10-29 Macrogenics, Inc. FcgammaRIIB-specific antibodies and methods of use thereof
DK2345671T3 (en) 2002-09-27 2016-02-15 Xencor Inc Optimized Fc variants and methods for their formation
EP1562972B1 (en) 2002-10-15 2010-09-08 Facet Biotech Corporation ALTERATION OF FcRn BINDING AFFINITIES OR SERUM HALF-LIVES OF ANTIBODIES BY MUTAGENESIS
AU2004204494B2 (en) 2003-01-09 2011-09-29 Macrogenics, Inc. Identification and engineering of antibodies with variant Fc regions and methods of using same
EP2272533A1 (en) 2003-01-13 2011-01-12 MacroGenics, Inc. Soluble FcyR fusion proteins and methods of use thereof
GB0324368D0 (en) 2003-10-17 2003-11-19 Univ Cambridge Tech Polypeptides including modified constant regions
TW200745163A (en) 2006-02-17 2007-12-16 Syntonix Pharmaceuticals Inc Peptides that block the binding of IgG to FcRn
WO2008131242A1 (en) 2007-04-18 2008-10-30 Zymogenetics, Inc. Single chain fc, methods of making and methods of treatment
MX2009012343A (es) 2007-05-14 2010-02-10 Biogen Idec Inc Regiones fc (sc fc) de cadena sencilla, polipeptidos de enlace que comprenden las mismas, y metodos relacionados con ello.
TWI504409B (zh) * 2009-03-25 2015-10-21 Genentech Inc 新穎抗－α５β１抗體及其用途
ES2882999T3 (es) 2015-03-09 2021-12-03 Argenx Bvba Métodos para reducir los niveles séricos de agentes que contienen Fc mediante el uso de antagonistas de FcRn

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006130834A2 (en) * 2005-05-31 2006-12-07 Board Of Regents, The University Of Texas System IGGl ANTIBODIES WITH MUTATED FC PORTION FOR INCREASED BINDING TO FCRN RECEPTOR AND USES THEREOF
WO2013063186A2 (en) * 2011-10-26 2013-05-02 Novartis Animal Health Us, Inc. Monoclonal antibodies and methods of use
WO2013074598A1 (en) * 2011-11-18 2013-05-23 Merck Sharp & Dohme Corp. Fc CONTAINING POLYPEPTIDES HAVING INCREASED ANTI-INFLAMMATORY PROPERTIES AND INCREASED FcRN BINDING
WO2015100299A1 (en) * 2013-12-24 2015-07-02 Argen-X N.V. Fcrn antagonists and methods of use

Non-Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Anonymous: "arGEN-X advances ARGX-113 into preclinical development for autoimmune disorders - Argenx", 24 April 2014 (2014-04-24), XP055292450, Retrieved from the Internet: URL:http://www.argen-x.com/en-GB/news-internal/argen-x-advances-argx-113-into-preclinical-development-for-autoimmune-disorders/60/[retrieved on 2016-08-01] the whole document *
Anonymous: "arGEN-X announces positive preclinical results for ARGX-113 Euronext", 19 August 2014 (2014-08-19), XP055292448, Retrieved from the Internet: URL:https://www.euronext.com/nl/node/506652[retrieved on 2016-08-01] the whole document *
Argen-X: "arGEN-X N.V.", 20 June 2014 (2014-06-20), XP055292474, Retrieved from the Internet: URL:https://www.afm.nl/registers/emissies_documents/14414.pdf [retrieved on 2016-08-01] pages 80-84 *
CARLOS VACCARO, JINCHUN ZHOU, RAIMUND J OBER, E SALLY WARD: "Engineering the Fc region of immunoglobulin G to modulate in vivo antibody levels", NATURE BIOTECHNOLOGY, GALE GROUP INC., vol. 23, no. 10, 1 October 2005 (2005-10-01), pages 1283 - 1288, XP055049342, ISSN: 10870156, DOI: 10.1038/nbt1143 *
D. A. PATEL, A. PUIG-CANTO, D. K. CHALLA, H. P. MONTOYO, R. J. OBER, E. S. WARD: "Neonatal Fc Receptor Blockade by Fc Engineering Ameliorates Arthritis in a Murine Model", THE JOURNAL OF IMMUNOLOGY, WILLIAMS & WILKINS CO., US, vol. 187, no. 2, 15 July 2011 (2011-07-15), US, pages 1015 - 1022, XP055292443, ISSN: 0022-1767, DOI: 10.4049/jimmunol.1003780 *
DILIP K. CHALLA, UTA BUSSMEYER, TARIQUE KHAN, H�CTOR P. MONTOYO, PANKAJ BANSAL, RAIMUND J. OBER, E SALLY WARD: "Autoantibody depletion ameliorates disease in murine experimental autoimmune encephalomyelitis", MABS, LANDES BIOSCIENCE, US, vol. 5, no. 5, 1 September 2013 (2013-09-01), US, pages 655 - 659, XP055292468, ISSN: 1942-0862, DOI: 10.4161/mabs.25439 *
QUINLIN HANSON: "The role of the Immunoglobulin G1 Fc N-glycan in FcγRIIIa affinity", PROQUEST DISSERTATIONS PUBLISHING, 1 January 2014 (2014-01-01), XP055292649, ISBN: 978-1-321-59176-7, Retrieved from the Internet <URL:http://lib.dr.iastate.edu/cgi/viewcontent.cgi?article=5142&context=etd> *
Sandra Grau ET AL.: "IgG core a-fucosylation and its impact on FcgRIIIa binding", 21 September 2011 (2011-09-21), XP055292648, Retrieved from the Internet: URL:http://www.cisbio.com/sites/default/files/ressources/cisbio-pr-igg-core-a-fucosylation-and-its-impact-on-fc-gamma-riiia-binding.pdf[retrieved on 2016-08-01] the whole document *
YUTAKA KANDA, TSUYOSHI YAMADA, KATSUHIRO MORI, AKIRA OKAZAKI, MIHO INOUE, KAZUKO KITAJIMA-MIYAMA, REIKO KUNI-KAMOCHI, RYOSUKE NAKA: "Comparison of biological activity among nonfucosylated therapeutic IgG1 antibodies with three different N-linked Fc oligosaccharides: the high-mannose, hybrid, and complex types", GLYCOBIOLOGY, OXFORD UNIVERSITY PRESS, US, vol. 17, no. 1, 1 January 2007 (2007-01-01), US, pages 104 - 118, XP002696785, ISSN: 0959-6658, DOI: 10.1093/GLYCOB/CWL057 *

Also Published As

Publication number Publication date
JP2022084868A (ja) 2022-06-07
LT3268391T (lt) 2021-09-10
MX2021011633A (es) 2021-10-22
JP2022105084A (ja) 2022-07-12
EP3268391A1 (en) 2018-01-17
EP4006051A1 (en) 2022-06-01
BR112017019191A2 (pt) 2018-05-02
SG11201707053SA (en) 2017-09-28
EP3268391B1 (en) 2021-08-11
IL295425A (en) 2022-10-01
AU2016230827A1 (en) 2017-08-24
MY188761A (en) 2021-12-29
MX2017011534A (es) 2018-04-10
ES2882999T3 (es) 2021-12-03
KR20170131463A (ko) 2017-11-29
US20160264669A1 (en) 2016-09-15
AU2021277720A1 (en) 2021-12-23
AU2016230827B2 (en) 2021-10-28
JP2018509413A (ja) 2018-04-05
CA2978253A1 (en) 2016-09-15
JP2024037846A (ja) 2024-03-19
PT3268391T (pt) 2021-08-19
JP2021073282A (ja) 2021-05-13
IL254403A0 (en) 2017-11-30
IL254403B (en) 2022-09-01
EA201791984A1 (ru) 2017-12-29
WO2016142782A1 (en) 2016-09-15
DK3268391T3 (da) 2021-09-13
JP7050191B2 (ja) 2022-04-07
JP7391132B2 (ja) 2023-12-04
PL3268391T3 (pl) 2022-01-03
JP7403575B2 (ja) 2023-12-22
HUE056775T2 (hu) 2022-03-28
SG10201908259WA (en) 2019-10-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7391132B2 (ja) ＦｃＲｎアンタゴニストを用いてＦｃ含有剤の血清レベルを低下させる方法
US20220275035A1 (en) Fcrn antagonists and methods of use
CA3163172A1 (en) Methods for treating pemphigus disorders