EA035338B1 - Композиция гемопоэтических стволовых клеток с пониженной воспалительной активностью, ее получение и применение - Google Patents
Композиция гемопоэтических стволовых клеток с пониженной воспалительной активностью, ее получение и применение Download PDFInfo
- Publication number
- EA035338B1 EA035338B1 EA201690838A EA201690838A EA035338B1 EA 035338 B1 EA035338 B1 EA 035338B1 EA 201690838 A EA201690838 A EA 201690838A EA 201690838 A EA201690838 A EA 201690838A EA 035338 B1 EA035338 B1 EA 035338B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- cells
- composition
- stem cell
- plasma
- fibrinogen
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 78
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 title claims abstract description 24
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 title claims description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 47
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 claims abstract description 35
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 claims abstract description 35
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 claims abstract description 35
- 108010074051 C-Reactive Protein Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 102100032752 C-reactive protein Human genes 0.000 claims abstract description 25
- 238000011476 stem cell transplantation Methods 0.000 claims abstract description 17
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims abstract description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 87
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 45
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 claims description 28
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 25
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 25
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 25
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 claims description 20
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 claims description 20
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims description 16
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 claims description 15
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 10
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 claims description 8
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 claims description 7
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims description 7
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 claims description 7
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 claims description 7
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 210000000944 nerve tissue Anatomy 0.000 claims description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 5
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 5
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 claims description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 2
- 230000002792 vascular Effects 0.000 claims description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 claims 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 abstract description 113
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 abstract description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 18
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 14
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 13
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 12
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 12
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 11
- 239000000463 material Substances 0.000 description 11
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 10
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 10
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 8
- 102100035716 Glycophorin-A Human genes 0.000 description 8
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 8
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 8
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 8
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 7
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 7
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 description 7
- 208000020431 spinal cord injury Diseases 0.000 description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 7
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 6
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 6
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 6
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 6
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 6
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 6
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 description 6
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 5
- 108050005493 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Proteins 0.000 description 5
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 5
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 5
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 5
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 5
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 4
- 108091005250 Glycophorins Proteins 0.000 description 4
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 4
- 101001074244 Homo sapiens Glycophorin-A Proteins 0.000 description 4
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 4
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 description 4
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000011316 allogeneic transplantation Methods 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 3
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 3
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 3
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 3
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 3
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 3
- 230000004766 neurogenesis Effects 0.000 description 3
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 102100031585 ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Human genes 0.000 description 2
- 102100035248 Alpha-(1,3)-fucosyltransferase 4 Human genes 0.000 description 2
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100025470 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 8 Human genes 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 101000777636 Homo sapiens ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Proteins 0.000 description 2
- 101001022185 Homo sapiens Alpha-(1,3)-fucosyltransferase 4 Proteins 0.000 description 2
- 101000914320 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 8 Proteins 0.000 description 2
- 101001046686 Homo sapiens Integrin alpha-M Proteins 0.000 description 2
- 101000581981 Homo sapiens Neural cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000716102 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD4 Proteins 0.000 description 2
- 102100022338 Integrin alpha-M Human genes 0.000 description 2
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 2
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 2
- 208000032382 Ischaemic stroke Diseases 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 2
- 102100027347 Neural cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 2
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 2
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 2
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 2
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 2
- 208000037765 diseases and disorders Diseases 0.000 description 2
- BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L disodium;(2',7'-dibromo-3',6'-dioxido-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-4'-yl)mercury;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Na+].O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C([Hg])=C1OC1=C2C=C(Br)C([O-])=C1 BFMYDTVEBKDAKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 229940044627 gamma-interferon Drugs 0.000 description 2
- 208000024908 graft versus host disease Diseases 0.000 description 2
- 238000010562 histological examination Methods 0.000 description 2
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 2
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 2
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 description 2
- 102100032814 ATP-dependent zinc metalloprotease YME1L1 Human genes 0.000 description 1
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 1
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 102100032768 Complement receptor type 2 Human genes 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 description 1
- 101000941929 Homo sapiens Complement receptor type 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 1
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 description 1
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 1
- 101000884271 Homo sapiens Signal transducer CD24 Proteins 0.000 description 1
- 101000934346 Homo sapiens T-cell surface antigen CD2 Proteins 0.000 description 1
- 101000934341 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD5 Proteins 0.000 description 1
- 101000946843 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Proteins 0.000 description 1
- 208000023105 Huntington disease Diseases 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 1
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 description 1
- 102000003729 Neprilysin Human genes 0.000 description 1
- 108090000028 Neprilysin Proteins 0.000 description 1
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 101800000795 Proadrenomedullin N-20 terminal peptide Proteins 0.000 description 1
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010045362 Serum Globulins Proteins 0.000 description 1
- 102100038081 Signal transducer CD24 Human genes 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 1
- 102100025237 T-cell surface antigen CD2 Human genes 0.000 description 1
- 102100025244 T-cell surface glycoprotein CD5 Human genes 0.000 description 1
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 206010043276 Teratoma Diseases 0.000 description 1
- 206010052779 Transplant rejections Diseases 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 210000004504 adult stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 210000000576 arachnoid Anatomy 0.000 description 1
- 238000013528 artificial neural network Methods 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 229940019700 blood coagulation factors Drugs 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 238000009583 bone marrow aspiration Methods 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 230000011748 cell maturation Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000013043 chemical agent Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 230000003021 clonogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 239000003792 electrolyte Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 210000000267 erythroid cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000925 erythroid effect Effects 0.000 description 1
- 210000003722 extracellular fluid Anatomy 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000011134 hematopoietic stem cell transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000002439 hemostatic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 208000023589 ischemic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000002894 multi-fate stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003924 normoblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- PIRWNASAJNPKHT-SHZATDIYSA-N pamp Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](C)N)C(C)C)C1=CC=CC=C1 PIRWNASAJNPKHT-SHZATDIYSA-N 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 230000007505 plaque formation Effects 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 238000010825 rotarod performance test Methods 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 230000007727 signaling mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000002636 symptomatic treatment Methods 0.000 description 1
- 230000000946 synaptic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009772 tissue formation Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
- A01K67/0271—Chimeric vertebrates, e.g. comprising exogenous cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/16—Blood plasma; Blood serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- A61K38/1722—Plasma globulins, lactoglobulins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0081—Purging biological preparations of unwanted cells
- C12N5/0087—Purging against subsets of blood cells, e.g. purging alloreactive T cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
- C12N5/0647—Haematopoietic stem cells; Uncommitted or multipotent progenitors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0662—Stem cells
- C12N5/0663—Bone marrow mesenchymal stem cells (BM-MSC)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2207/00—Modified animals
- A01K2207/30—Animals modified by surgical methods
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
- A01K2227/105—Murine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
- A01K2267/035—Animal model for multifactorial diseases
- A01K2267/0356—Animal model for processes and diseases of the central nervous system, e.g. stress, learning, schizophrenia, pain, epilepsy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
- A01K2267/035—Animal model for multifactorial diseases
- A01K2267/0368—Animal model for inflammation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K2035/124—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells the cells being hematopoietic, bone marrow derived or blood cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/50—Proteins
- C12N2533/56—Fibrin; Thrombin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
Данное изобретение относится к области клеточной терапии, конкретнее - к терапии с трансплантацией стволовых клеток. Предлагаются способы и композиции для повышения эффективности терапии с трансплантацией стволовых клеток путем снижения воспалительной активности трансплантата стволовых клеток. В частности, предлагается способ получения трансплантата стволовых клеток с пониженной воспалительной активностью, включающий этап суспендирования композиции, содержащей стволовые клетки, в плазме, из которой удален фибриноген, и/или в плазме, из которой удалены фибриноген и С-реактивный белок.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Данное изобретение относится к области клеточной терапии, конкретнее - к терапии путем трансплантации стволовых клеток. Предлагаются способы и композиции для повышения эффективности терапии путем трансплантации стволовых клеток, а именно предлагаются средства и способы снижения воспалительной активности трансплантатов стволовых клеток. Также предлагаются средства и способы получения трансплантата стволовых клеток с пониженной воспалительной активностью.
Уровень техники
Способность тканей и органов к регенерации на протяжении жизни организма обеспечивается присутствием в тканях стволовых клеток. В процессе гомеостаза изношенные клетки претерпевают запрограммированную смерть (апоптоз) и замещаются клетками, происходящими от стволовых клеток. В результате деления стволовых клеток образуются новые стволовые клетки и клетки, которые, получив соответствующие молекулярные сигналы, дифференцируются в зрелые клетки данной ткани.
Однако после повреждения или инфекции клетки в поврежденной или инфицированной ткани претерпевают некроз и высвобождаются вещества, сигнализирующие об опасности или присутствии патогенного агента (DAMP или PAMP, соответственно). Эти сигнальные механизмы вызывают воспалительную реакцию в месте повреждения или инфекции. В процессе воспалительной реакции ткани в печени образуются белки острой фазы воспаления, которые поступают в плазму крови.
Белки острой фазы воспаления, включая фибриноген и С-реактивный белок, активируют систему комплемента, макрофаги и клетки приобретенного (адаптивного) иммунитета. Воспаление стимулирует систему гемостаза, мобилизует и активирует клетки, обеспечивающие врожденный и приобретенный иммунитет; в результате инициируется свертывание крови, ликвидируются поврежденные и зараженные инфекционными агентами клетки. В итоге воспаление прекращается, восстанавливается гомеостаз, в претерпевшей повреждение ткани клеточный ущерб компенсируется клетками - потомками стволовых клеток. Если повреждение клеток превысило некоторые пределы или если инфекция стала хронической, уровень белков острой фазы воспаления в плазме крови остается повышенным и воспаление усугубляется, что приводит к избыточному отложению амилоида (образованию бляшек) и коллагена (образованию рубцовой ткани), из-за чего существенно ухудшается функционирование пораженной ткани/органа.
Больным с некоторыми раковыми заболеваниями крови или костного мозга, например с множественной миеломой или лейкозом, помогает лечение путем трансплантации гемопоэтических стволовых клеток.
При аллогенной трансплантации, то есть когда гемопоэтические стволовые клетки берут у донора, иммунную систему реципиента предварительно разрушают путем лучевой или химиотерапии. Пересадка чужих (донорских) гемопоэтических клеток для восстановления кроветворения у реципиента остается потенциально опасной процедурой из-за реакции трансплантат против хозяина, ведущей к тяжелым осложнениям. Реакция трансплантат против хозяина представляет собой воспалительный процесс, при котором присутствующие в трансплантате провоспалительные клетки и агенты, например лимфоциты и белки острой фазы воспаления, атакуют клетки реципиента. Это происходит даже в тех случаях, когда донор и реципиент имеют одинаковые белки главного комплекса гистосовместимости (MHC), поскольку иммунная система распознает также другие, минорные различия между белками клеточной поверхности донора и реципиента. Кроме того, в результате воздействия на иммунную систему реципиента излучением или химиотерапевтическими препаратами перед трансплантацией стволовых клеток в костном мозге скапливается много омертвевших клеток, что усиливает реакцию трансплантат против хозяина.
Г ибель клеток и воспаление - основные движущие факторы повреждения тканей после таких поражений центральной нервной системы, как, например, инсульт, и при нейродегенеративных заболеваниях. Повреждения центральной нервной системы, в том числе ишемический инсульт, травмы головного и спинного мозга, представляют серьезную проблему здравоохранения во всем мире. Как ишемические, так и травматические поражения центральной нервной системы приводят к хронической недееспособности и снижению ожидаемой продолжительности жизни. На сегодняшний день посттравматические дефекты центральной нервной системы, например, после повреждений спинного и/или головного мозга по существу не лечатся и лежащие в их основе гистологические нарушения не ликвидируются.
Большинство нейродегенеративных заболеваний - это спорадические состояния, характеризующиеся прогрессирующей утратой клеток в нервной системе. Примерами нейродегенеративных заболеваний являются болезнь Паркинсона, болезнь Альцгеймера, болезнь Хантингтона, боковой амиотрофический склероз и рассеянный склероз. По оценкам Всемирной организации здравоохранения нейродегенеративные заболевания станут второй из ведущих причин смерти, опередив раковые заболевания. Существующие в настоящее время методы лечения нейродегенеративных заболеваний направлены на ослабление симптомов, облегчение боли и улучшение двигательной способности. Однако до сих пор доступные больным с нейродегенеративными расстройствами терапевтические подходы дают лишь симптоматическое лечение, ослабляя проявления заболевания и отсрочивая наступление стадий тяжелой недееспособности.
Привлекательным подходом к лечению заболеваний и расстройств нервной системы представляются терапевтические методы, основанные на трансплантации стволовых клеток, для восстановления ней- 1 035338 рогенеза и функционального выздоровления. Также многообещающими являются терапевтические методы, основанные на трансплантации стволовых клеток, для восстановления васкуляризации при лечении ишемических заболеваний и расстройств.
Стволовые клетки, взятые у плода, например эмбриональные стволовые клетки, обладают огромным регенеративным потенциалом (Hentze H. et al., Trends in Biotechnology 25: 24-32, 2007). Однако их использование имеет и ряд существенных недостатков, в том числе возможность отторжения трансплантата из-за аллогенной природы его клеток-потомков и возможность образования тератом в тех случаях, когда перед трансплантацией предназначенные для нее клетки должным образом не отдифференцированы.
Эмбриональные стволовые клетки нужно выращивать в культуре и, следовательно они подвержены риску контакта с ксеногенным материалом или загрязнения преждевременно истощенными клетками (Mannello F. and Tonti GA, Stem Cells 25: 1603-1609, 2007). Кроме того, биология стволовых клеток и закономерности их развития изучены еще слабо, и это не позволяет считать их достаточно безопасными для применения в медицинских целях.
Для лечения раковых заболеваний крови или костного мозга наиболее эффективна аллогенная трансплантация стволовых, происходящих из костного мозга или периферической крови. Для лечения заболеваний и расстройств центральной нервной системы наиболее многообещающей считается аутологичная трансплантация стволовых клеток взрослого организма, преимущественно гемопоэтических стволовых клеток и мезенхимальных стволовых клеток, происходящих из костного мозга или периферической крови (Sykova E. et al., Cell Transplant 15: 675-687, 2006).
В строме костного мозга имеются гетерогенные популяции мультипотентных клеток, включая гемопоэтические стволовые клетки и мезенхимальные стволовые клетки, способные к самообновлению и дифференцировке в клетки различных типов и тканей гемопоэтического и мезенхимального ростков дифференцировки, соответственно.
Недавно проведенные доклинические исследования возможности терапевтического использования трансплантации стволовых клеток для лечения больных с ишемическим инсультом, а также с травматическими поражениями головного или спинного мозга показали, что введенные интратекально гемопоэтические стволовые клетки, и/или мезенхимальные стволовые клетки, или их клетки-потомки, по всей видимости, проникают в поврежденную нервную ткань и в образуемую глиальными клетками рубцовую ткань (Alison M.R., Journal of Pathology 217: 141-143, 2009), выделяют трофические факторы (Caplan A.I. and Dennis J.E., Journal of Cellular Biochemistry 98: 1076-1084, 2006), способны дифференцироваться в функциональные нейроны (Zeng R. et al., Spine 36: 997-1005, 2011), способствуют формированию синаптических связей (Bareyre F.M., Journal of Neurological Sciences 265: 63-72, 2008) и в результате участвуют в перестройке нервных сетей, ведущей к функциональному улучшению состояния больного (Kwon B.K. et al., Experimental Neurology 248C: 30-44, 2013).
В ранних работах по пересадке стволовых клеток использовались трансплантаты костного мозга, которые получали путем одно- или двукратного центрифугирования материала, извлекаемого при биопсии костного мозга (WO2007125420), после центрифугирования брали желтовато-серый слой между эритроцитами и плазмой (BC-слой). Этот слой содержит гетерогенные популяции клеток, имеющих ядро, значительную часть которых составляют участвующие в работе иммунной системы клетки, способствующие воспалительной реакции. При аллогенной трансплантации таких провоспалительных клеток для восстановления кроветворения нередко развивается реакция трансплантат против хозяина, о которой говорилось выше. При аутологичной трансплантации таких клеток в поврежденную ткань центральной нервной системы тоже возможны негативные или даже катастрофические для ожидаемого результата эффекты (Le Blanc K.L. et al., Scandinavian Journal of Immunology 57: 11-20, 2003; Spaggiari G.M. et al., Blood 107:1484-1490, 2006; Adams R.A. et al., Journal of Experimental Medicine 204: 571-582, 2007; Assmus B. et al., Journal of the American College of Cardiology 55: 1385-1394, 2010; Beck K.D. et al., Brain 133: 433447, 2010). Кроме того, при центрифугировании в градиенте плотности используются химические агенты, которые нужно удалять из предназначенного к трансплантации материала, то есть необходим дополнительный этап промывания, чтобы получить конечный продукт, пригодный для трансплантации.
Отделение стволовых клеток и клеток-предшественников от клеток других типов, содержащихся в материале, получаемом при биопсии тканей, по их физическим свойствам, например плотности и скорости седиментации, технически весьма трудно. Ограничения в отделении стволовых клеток и клетокпредшественников от клеток других типов преодолеваются путем применения моноклональных антител, специфично связывающихся с белками клеточной поверхности, например белками кластера дифференцировки (CD-белками). В настоящее время для отбора (как положительного, так и отрицательного) клеток определенных типов из гетерогенных клеточных популяций применяются методы иммуноадсорбции и проточной цитометрии с использованием указанных моноклональных антител на магнитных частицах или меченных флуоресцентными агентами.
Для положительного отбора желаемых клеток применяют методы с использованием меченых антител, специфично связывающихся с этими клетками. Ненужные клетки остаются не мечеными, и их удаляют. Когда такой отбор проведен, от выявленных клеток надо отсоединить антитела с помощью под- 2 035338 ходящего растворителя. В связи с этим стволовые клетки, предназначенные для трансплантации, подвергаются воздействию сред, которые могут негативно влиять на клеточную дифференцировку и в результате на эффективность трансплантата.
В последнее время трансплантаты стволовых клеток, используемые в исследованиях на животных и людях с целью улучшения нервной ткани и сосудов, в большинстве случаев получали путем положительного отбора клеток, несущих на своей поверхности специфические белки, с последующим культивированием отобранных клеток для увеличения их количества. Однако нет надежных доказательств того, что прошедшие положительный отбор клетки на деле обладают способностью дифференцироваться в функциональные нейроны и что они выделяют трофические факторы, необходимые для полного восстановления нервной системы.
Результаты интратекальной или интрацеребральной трансплантации стволовых клеток, полученных путем положительного отбора, весьма различны, и положительные их эффекты ограничены. Причины такой ненадежности главным образом в том, что остается неизвестным, действительно ли в получаемом трансплантате присутствуют нужные стволовые клетки, способные оказать благотворное действие, или же нужные стволовые клетки теряют свой терапевтический потенциал в процессе предшествующей трансплантации обработки и культивирования, которые занимают, как правило, более 72 ч после биопсии костного мозга.
Для отрицательного отбора используются меченые антитела, специфично связывающиеся с ненужными для предстоящей трансплантации клетками в составе материала, полученного при биопсии. Нужные клетки остаются не мечеными, и их собирают.
В работе Moviglia G.A. et al. (Cytotherapy 8: 196-201, 2006) предлагается комбинация антител против CD3, CD4, CD19, CD38, CD66b и гликофорина-А для избирательного обогащения мезенхимальных стволовых клеток, а также комбинация антител против CD14, CD16, CD19, CD56 и гликофорина-А для отбора ОЭ3+-клеток методом розеткообразования для экспериментов in vitro.
В заявке на патент США № 2002058289 описывается обработка суспензий клеток, происходящих из костного мозга, антителами, специфичными в отношении CD2, CD3, CD4, CD5, CD8, CD11b, CD15, CD16, CD19, CD20, CD21, CD22, CD24, CD33, CD38, CD56, CD66b и гликофорина-А для избирательного обогащения материала, получаемого при биопсии костного мозга, мезенхимальными клеткамипредшественниками.
В патентной публикации WO02089726 описывается способ получения гомогенных препаратов гемопоэтических стволовых клеток с использованием сочетания проточной элютриации и мечения ненужных клеток антителами на магнитных частицах. В этом способе предполагается культивирование получаемых обогащенных клеточных популяций и использование красителей, связывающихся с клеточной мембраной, для подтверждения типа клеток; из-за этого способ нельзя использовать для терапевтических применений.
В патенте США № 5087570 описывается способ получения композиции гемопоэтических клеток путем комбинирования положительного и отрицательного отбора. Этот способ базируется на использовании антител к антигену Sca-1, который свойствен клоногенным клеткам - предшественникам тимоцитов и Т-клеток костного мозга у мышей. Но для выделения человеческих гемопоэтических клеток антитела против Sca-1 бесполезны.
В патенте США № 5137809 описывается способ и набор для идентификации и анализа ростков дифференцировки и стадий созревания гемопоэтических клеток. В этом способе используются сперва моноклональные антитела (CD45), меченные флюорохромом, которые связываются со всеми лейкоцитами в образце, а затем вторые моноклональные антитела (CD15, CD16, CD10, CD34, CD20, CD19, CD14, CD3, CD11b), меченные вторым флюорохромом, которые связываются с субпопуляциями лейкоцитов. Отбор клеток ведется путем проточной цитометрии.
В исследованиях аутологичной трансплантации у животных и человека использовались стволовые клетки, полученные путем отрицательного отбора, при котором удаляли клетки типов, участвующих во врожденном и приобретенном иммунитетах (макрофаги, лимфоциты, гранулоциты и др.) и клетки эритроидного ряда (эритробласты, эритроциты). Как показали исследования, в которых использовались такие трансплантаты стволовых клеток, благотворный эффект их все еще ограничен, что препятствует дальнейшему клиническому применению.
Используя животные модели, а именно мышей с экспериментально вызванным повреждением спинного мозга, авторы данного изобретения подтвердили, что трансплантаты стволовых клеток, полученные путем отрицательного отбора для удаления клеток иммунной системы и эритроидного ряда, при интратекальной трансплантации обладают ограниченной эффективностью. Терапевтическая эффективность этих трансплантатов стволовых клеток невысока из-за присутствия в них таких типов клеток или компонентов, которые обладают провоспалительной способностью.
По указанным выше причинам существует неудовлетворенная на сегодняшний день потребность в трансплантатах стволовых клеток, не имеющих провоспалительной способности при аллогенной или аутологичной трансплантации, что в итоге повысило бы эффективность терапии путем трансплантации стволовых клеток.
- 3 035338
Раскрытие изобретения
Указанные выше задачи решаются данным изобретением, предлагающим способ получения трансплантатов стволовых клеток, например, из таких тканевых образцов, как материал, получаемый при биопсии, с пониженной воспалительной активностью. Этот способ включает этап суспендирования стволовых клеток в плазме крови, из которой удалены провоспалительные белки, например фибриноген и Среактивный белок.
В одном из более предпочтительных воплощений данного изобретения предлагаемый способ включает дополнительный этап удаления провоспалительных клеток из трансплантата стволовых клеток. Стволовые клетки получают предпочтительно из костного мозга, периферической крови и/или пуповинной крови
В другом своем воплощении данное изобретение относится к композиции, содержащей стволовые клетки, для использования в качестве трансплантата с пониженной воспалительной активностью, из которой удалены провоспалительные белки. В одном из более предпочтительных своих воплощений данное изобретение относится к композиции, содержащей стволовые клетки, для использования в качестве трансплантата, из которого также удалены клетки, обладающие провоспалительной способностью. Композиции, содержащие стволовые клетки, по данному изобретению пригодны для регенерации нервной ткани и сосудов и для восстановления кроветворения.
Данное изобретение относится также к способу для восстановления или улучшения нервной ткани, сосудов и кроветворной ткани у индивида путем введения ему трансплантата, содержащего композицию со стволовыми клетками по данному изобретению. Применение этого способа предполагает аутологичную либо аллогенную трансплантация стволовых клеток.
Данным изобретением также предлагаются способы и композиции для повышения эффективности терапии, включающей трансплантацию стволовых клеток, путем снижения воспалительной активности трансплантата, содержащего композицию со стволовыми клетками по данному изобретению. Говоря конкретнее, данным изобретением предлагается способ получения трансплантата стволовых клеток с пониженной воспалительной активностью, включающий этап суспендирования композиции, содержащей стволовые клетки, в плазме крови, лишенной фибриногена, и/или в плазме крови, лишенной фибриногена и С-реактивного белка.
Осуществление изобретения
Используя животную модель повреждения спинного мозга, авторы данного изобретения обнаружили, что определенные белки, присутствующие в плазме костного мозга, отрицательно влияют на эффективность стволовых клеток, получаемых из костного мозга, при использовании их в качестве трансплантата, в частности при аутологичной интратекальной трансплантации у животных.
Это отрицательное влияние, по-видимому, обусловлено присутствием в плазме костного мозга белков острой фазы воспаления - фибриногена и С-реактивного белка. Удаление этих двух белков путем фильтрации с последующим (при необходимости) удалением клеток, обладающих провоспалительной способностью, приводит к значительному повышению эффективности получаемого трансплантата стволовых клеток по сравнению с эффективностью трансплантата стволовых клеток, при получении которого удаляли только клетки с провоспалительной способностью.
На основании эти результатов был сделан вывод, что использование трансплантатов стволовых клеток, из которых удалены провоспалительные клетки (например, макрофаги, дендритные клетки, лимфоциты и гранулоциты) и белки острой фазы воспаления (например, фибриноген и С-реактивный белок), превосходят по эффективности трансплантации использование известных в данной области техники трансплантатов стволовых клеток.
В одном из своих предпочтительных воплощений данное изобретение относится к способу повышения эффективности трансплантатов стволовых клеток, в котором из трансплантата стволовых клеток удаляют фибриноген и С-реактивный белок. При необходимости из трансплантата удаляют также провоспалительные клетки.
Термин повышенная эффективность трансплантата относится к способности трансплантата, в частности трансплантата стволовых клеток, восстанавливать поврежденную ткань, в частности нервную ткань.
В настоящем документе термин трансплантат стволовых клеток относится к композиции, содержащей стволовые клетки и пригодной для введения индивиду путем трансплантации.
Трансплантат стволовых клеток по данному изобретению предпочтительно получают из материала, извлекаемого при биопсии тканей, например из периферической крови, пуповинной крови или костного мозга. Забор костного мозга или периферической крови для использования в терапии, включающей аутологичную или аллогенную трансплантацию стволовых клеток, является обычной практикой, и способы забора биоптатов костного мозга или периферической крови хорошо известны в данной области техники.
Термин интратекальный в настоящем документе используется как определение к объектам, вводимым в пространство под паутинной оболочкой головного или спинного мозга или присутствующим в нем, или к действиям, совершаемым в этом пространстве.
Термин провоспалительная активность/способность означает способность клеток или иных аген- 4 035338 тов вызывать процесс воспаления in vivo, что характеризуется накоплением провоспалительных цитокинов. Возможности определения провоспалительной способности какого-либо агента хорошо известны специалистам в данной области техники.
В настоящем документе термин пониженная воспалительная активность подразумевает, что воспалительная активность данной композиции сравнивается с таковой другой композиции, взятой в качестве референсной. В контексте одного из предпочтительных воплощений данного изобретения пригодной референсной композицией по отношению к композиции, содержащей стволовые клетки в плазме, из которой удалены фибриноген и/или С-реактивный белок, будет композиция, содержащая стволовые клетки, суспендированные в нормальной плазме или в плазме, из которой не удалены фибриноген и/или С-реактивный белок.
Термин плазма в настоящем документе относится к жидкому компоненту крови желтоватого цвета, в котором в норме находятся во взвешенном состоянии клетки крови. Плазма составляет до около 55% от суммарного объема крови. Плазма является внутрисосудистой жидкой частью внеклеточной жидкости тела. В состав плазмы входит в основном вода (до 95% объема), в которой содержатся растворенные белки (6-8%) (например, сывороточный альбумин, глобулины и фибриноген), глюкоза, факторы свертывания крови, электролиты (Na+, Ca2+, Mg2+, HCO3 -, Cl-, etc.), гормоны и диоксид углерода (плазма служит основной средой для транспорта экскретируемых продуктов). Сыворотка - это плазма без факторов свертывания крови. В настоящем документе термины сыворотка и плазма употребляются взаимозаменяемо, то есть если что-либо сказано о сыворотке, то это относится также к плазме и наоборот.
Воспалительную активность композиции можно определить обычными аналитическими методами, доступными специалистам в данной области техники, например иммунологическими и гистохимическими методами. Также воспалительную активность можно оценить количественно с помощью иммунологических методов в образцах, взятых в месте трансплантации; при этом определяют присутствие таких маркеров воспаления, как цитокины интерлейкин-1 и гамма-интерферон.
В одном из предпочтительных воплощений данного изобретения предлагаемая композиция обладает воспалительной активностью, меньшей, чем воспалительная активность композиции, содержащей такие же клетки в плазме или сыворотке, но не лишенной фибриногена и/или С-реактивного белка. В данном контексте меньше означает по меньшей мере на 10% меньше, например на 20, 30 или 50% меньше. Предпочтительно воспалительная активность композиции по данному изобретению меньше таковой референсной композиции не менее чем на 40%, например на 30, 20 или 10%, или менее. Наиболее предпочтительно, чтобы воспалительная активность композиции по данному изобретению была близка к нулю или не определялась.
Таким образом, данное изобретение относится также к способу уменьшения воспалительной активности трансплантата стволовых клеток, включающему этап удаления фибриногена и С-реактивного белка из этого трансплантата. Композицию, содержащую стволовые клетки, для использования в качестве трансплантата можно также получить путем ресуспендирования стволовых клеток в сыворотке или плазме, из которых удалены фибриноген и/или С-реактивный белок.
Удаление фибриногена и/или С-реактивного белка можно успешно осуществить путем фильтрации. Таким образом, данное изобретение относится к указанному выше способу, в котором фибриноген и Среактивный белок удаляют путем фильтрации. В другом воплощении данного изобретения фибриноген и С-реактивный белок удаляют путем центрифугирования в градиенте плотности. В еще одном воплощении данного изобретения фибриноген и С-реактивный белок удаляют путем хроматографии.
Способ по данному изобретению особенно полезен, когда трансплантат стволовых клеток не содержит провоспалительных клеток. Таким образом, данное изобретение относится также к указанному выше способу, включающему дополнительный этап удаления клеток, обладающих провоспалительной активностью, например макрофагов, дендритных клеток, лимфоцитов и гранулоцитов.
Указанные клетки можно удалять путем отрицательного отбора или любым другим методом, известным в данной области техники. Различные этапы способа по данному изобретению можно проводить в любом порядке.
Отрицательный отбор клеток может включать этап контактирования трансплантата стволовых клеток, содержащего множество клеток различных ростков дифференцировки, с антительной композицией, включающей антитела, специфично связывающиеся с антигенами CD235a (гликофорином-А), CD2 и/или CD3, CD14 и/или CD16 и CD19 и/или CD20, для избирательного удаления соответствующих клетокмишеней - эритроцитов, лимфоцитов, макрофагов, дендритных клеток и гранулоцитов. Указанная антительная композиция включает суспензионную среду, в которой находятся антитела - в основном это забуференный солевой раствор для каждого из антител.
Антитела в составе указанной антительной композиции могут быть помечены магнитным агентом, что обеспечивает избирательное мечение клеток-мишеней, присутствующих в трансплантате стволовых клеток, позволяющее удалить эти клетки, воздействуя на образец магнитным полем.
В настоящем документе предлагается способ избирательного удаления из трансплантата стволовых клеток, полученного из человеческого организма (предпочтительно, но не ограничиваясь указанным здесь, из костного мозга человека) клеток определенных ростков дифференцировки, идентифицируемых
- 5 035338 путем распознавания соответствующими антителами специфических эпитопов, предпочтительно (не ограничиваясь перечисленным здесь) эритроцитов, лимфоцитов, макрофагов, дендритных клеток и гранулоцитов.
В одном из более предпочтительных воплощений данного изобретения трансплантат стволовых клеток обрабатывают антительной композицией, содержащей антитела, способные связываться с антигенами CD3, CD14, CD19 и CD235a. Эти антитела могут быть помечены магнитным агентом, что обеспечивает избирательное мечение клеток-мишеней, присутствующих в трансплантате стволовых клеток, позволяющее удалить эти клетки, воздействуя на образец магнитным полем.
В одном из предпочтительных воплощений способа по данному изобретению нежелательные клеточные популяции удаляют из всего объема трансплантата стволовых клеток с помощью специфичных магнитно меченных антител. В одном из еще более предпочтительных воплощений данного изобретения эти антитела включают (не ограничиваясь перечисленным здесь) антитела, специфичные к CD2 и/или CD3, - для удаления Т-лимфоцитов; антитела, специфичные к CD19 и/или CD20, - для удаления Bлимфоцитов; антитела, специфичные к CD14 и/или CD16, - для удаления гранулоцитов, моноцитов, дендритных клеток и макрофагов. В другом воплощении данного изобретения используются антитела, специфичные к CD235a и/или гликофорину-А, - для удаления эритроцитов.
Данное изобретение также относится к трансплантату стволовых клеток, получаемому описанным выше способом. Этим способом получаются трансплантаты стволовых клеток, не содержащие фибриногена и С-реактивного белка. Данное изобретение, в частности, относится к описанному выше трансплантату стволовых клеток, из которого удалены клетки с провоспалительной активностью.
В настоящем документе выражения удаление, лишенный, не содержащий, в котором нет/отсутствуют относятся к снижению количества белка или количества клеток в трансплантате стволовых клеток по данному изобретению по меньшей мере на 90% или 99% по сравнению с количеством белка или клеток в биоптате ткани, например костного мозга. В плазме крови концентрация фибриногена составляет от 1,5 до 4 г/л. В одном из предпочтительных воплощений данного изобретения предлагаемый трансплантат содержит менее 0,4 г/л фибриногена. В одном из более предпочтительных воплощений данного изобретения препарат плазмы, пригодный для использования по данному изобретению, содержит менее 40 мг/л фибриногена, например менее 4 мг/л. В одном из еще более предпочтительных воплощений данного изобретения препарат, содержащий стволовые клетки, для использования по данному изобретению содержит менее 0,4 г/л фибриногена, например менее 40 мг/л или менее 4 мг/л.
В плазме крови концентрация С-реактивного белка у разных индивидов может быть различной, варьируя, как правило, в пределах от 10 до 100 мг/л. В одном из предпочтительных воплощений данного изобретения предлагаемые трансплантаты содержат менее 10 мг/л С-реактивного белка. В одном из более предпочтительных воплощений данного изобретения предлагаемые трансплантаты содержат менее 1 мг/л С-реактивного белка.
В плазме крови содержание лимфоцитов составляет от 1000 до 4000 клеток в 1 микролитре. В одном из предпочтительных воплощений данного изобретения предлагаемые трансплантаты содержат менее 400 лимфоцитов в 1 микролитре. В одном из более предпочтительных воплощений данного изобретения предлагаемые трансплантаты содержат менее 40 лимфоцитов в 1 микролитре. В плазме крови содержание гранулоцитов составляет от 2500 до 7500 клеток в 1 микролитре. В одном из предпочтительных воплощений данного изобретения предлагаемые трансплантаты содержат менее 750 гранулоцитов в 1 микролитре. В одном из более предпочтительных воплощений данного изобретения предлагаемые трансплантаты содержат менее 75 гранулоцитов в 1 микролитре. В плазме крови содержание дендритных клеток и макрофагов составляет от 10 до 800 клеток в 1 микролитре. В одном из предпочтительных воплощений данного изобретения предлагаемые трансплантаты содержат в итоге менее 80 дендритных клеток или макрофагов в 1 микролитре. В одном из более предпочтительных воплощений данного изобретения предлагаемые трансплантаты содержат менее 8 дендритных клеток или макрофагов в 1 микролитре.
В одном из своих предпочтительных воплощений данное изобретение относится к описанному выше способу, которым получают трансплантат стволовых клеток, пригодный для регенерации кроветворной ткани. Такой трансплантат стволовых клеток, в частности, пригоден для восстановления кроветворения. Таким образом, данным изобретением также предлагается способ восстановления кроветворения у индивида с помощью описанного в настоящем документе трансплантата стволовых клеток.
В другом своем предпочтительном воплощении данное изобретение относится к описанному выше способу, которым получают трансплантат стволовых клеток, пригодный для регенерации ткани сосудов. Такой трансплантат стволовых клеток, в частности, пригоден для восстановления васкуляризации. Таким образом, данным изобретением также предлагается способ восстановления васкуляризации у индивида с помощью описанного в настоящем документе трансплантата стволовых клеток.
В одном из особенно предпочтительных своих воплощений данное изобретение относится к описанному выше способу, которым получают трансплантат, пригодный для регенерации нервной ткани. Такой трансплантат стволовых клеток, в частности, пригоден для восстановления нейрогенеза. Таким образом, данным изобретением также предлагается способ восстановления нейрогенеза у индивида с
- 6 035338 помощью описанного в настоящем документе трансплантата стволовых клеток.
Трансплантация стволовых клеток по данному изобретению может быть аутологичной (реципиенту вводят его собственные клетки) или аллогенной (реципиенту вводят клетки донора). В одном из предпочтительных воплощений данного изобретения предлагаемый клеточный трансплантат является аутологичным. В другом воплощении данного изобретения предлагаемый трансплантат стволовых клеток является аллогенным.
Данное изобретение в широком смысле охватывает процесс обогащения и выделения человеческих стволовых клеток и клеток-предшественников для терапевтического использования по различным показаниям, предпочтительно включающий создание композиции, пригодной для введения путем инъекции и содержащей клетки, происходящие из крови, пуповинной крови или костного мозга. Специалисту в данной области техники известны пределы возможностей таких композиций или способов в отношении объема продукта, количества и качества содержащихся в нем клеток.
Примеры
Пример 1. Получение трансплантата человеческих стволовых клеток.
Костный мозг брали у здоровых добровольцев путем аспирации, используя шприц с иглой для аспирации костного мозга с пятью отверстиями; при этом делали два прокола кости и после каждого заполнения шприца иглу перемещали. Всего брали 50 мл костномозговой ткани. Полученный материал центрифугировали, используя автоматический сепаратор клеток Sepax II (Biosafe) при низкой скорости и, соответственно, малой центробежной силе, следуя рекомендациям производителя. В результате получали три фракции. Первая - это плазма, содержащая все растворимые белки, присутствующие в биопсийном материале. Вторая - фракция эритроцитов и тромбоцитов. Третья фракция (BC-слой) содержала ядерные клетки костного мозга, включая гемопоэтические и мезенхимальные стволовые клетки; далее в настоящем документе эта фракция называется композиция стволовых клеток А.
Из фракции плазмы удаляли фибриноген и С-реактивный белок путем фильтрации, используя сорбционную колонку Therasorb (Miltenyi), действующую как специфичный к фибриногену фильтр. Полученную в результате плазму, не содержащую фибриногена и С-реактивного белка, затем использовали для ресуспендирования ядерных клеток костного мозга третьей фракции (композиции стволовых клеток А) в мешках для получения клеток производства компании Miltenyi. Таким образом получали композицию стволовых клеток, которая в настоящем документе называется композицией стволовых клеток B.
На композицию стволовых клеток В воздействовали магнитно меченными антителами против CD3, CD14, CD19 и CD235a (Miltenyi). Затем мешок с клетками подсоединяли к магнитному сепаратору клеток (CliniMACS plus System, Miltenyi), чтобы получить композицию стволовых клеток, не содержащую эритроцитов, тромбоцитов, лимфоцитов, гранулоцитов, дендритных клеток, макрофагов, фибриногена и C-реактивного белка. Эта композиция стволовых клеток в настоящем документе называется композицией стволовых клеток C.
Композиция стволовых клеток D состоял из композиции стволовых клеток A, ресуспендированного во фракции плазмы, полученной от того же индивида, не подвергавшейся удалению фибриногена и Cреактивного белка. Эта композиция служила в качестве референсной композиции.
Пример 2. Эксперимент по аллогенной трансплантации.
Чтобы сравнить эффективность различных композиций стволовых клеток мы использовали животную модель - крыс с экспериментальным повреждением спинного мозга. Для этой модели брали крыс с дефицитом T-лимфоцитов. Травматическое компрессионное повреждение спинного мозга вызывали путем раздувания баллонного катетера. Через трое суток животным рядом с этим повреждением спинного мозга вводили интратекально ту или иную композицию стволовых клеток. За подопытными особями наблюдали в течение 35 суток. В этот период у них измеряли массу тела и проводили оценку неврологической патологии в тестах с ходьбой по вращающемуся стержню (RotaRod, Panlab) и по дорожке в системе CatWalk. По истечении 35-дневного периода животных умерщвляли и проводили гистологическое исследование области повреждения спинного мозга.
На начальной фазе эксперимента крысы получали трансплантаты стволовых клеток, содержавшие композиции стволовых клеток A, B, C и D; контролями служили животные, получавшие нормальную плазму, и интактные особи. Оценивали способность указанных четырех композиций стволовых клеток обеспечить купирование неврологических нарушений после травматического повреждения спинного мозга.
По истечении указанного 35-дневного периода было обнаружено, что степень улучшения неврологических показателей у крыс с экспериментальным повреждением спинного мозга в результате трансплантации стволовых клеток по данному изобретению (композиции стволовых клеток B и C) была гораздо выше, чем у интактных животных и у особей, получавших нормальную плазму или у получавших композиции стволовых клеток A и D. Также у крыс, получавших композицию стволовых клеток C, неврологические показатели улучшились значительно больше, чем у особей, получавших композицию стволовых клеток B.
- 7 035338
Таблица 1
| Способ оценки | Препарат стволовых клеток(*) | Отрицательный контроль (плазма) | Отрицательный контроль (крысы с повреждением спинного мозга) | Положительный контроль (интактные особи) | |||
| Ф А | В В | С с | D D | ||||
| По походке (система Catwalk) | +/- | + | ++ | +/- | - | - | +++ |
| По координации (тест Rotated) | +/- | + | ++ | +/- | - | - | +++ |
| Масса тела | +/- | + | ++ | +/- | - | - | +++ |
| Г истологические данные | +/- | + | ++ | +/- | - | - | +++ |
Выполнение теста или состояние у животных с повреждением спинного мозга, служивших отрицательным контролем, брали за 0% (нулевой уровень); у интактных особей - за 100%.
(-) - такое же или худшее выполнение/состояние (от -15 до 5% по сравнению с нулевым уровнем) (+/-) - почти такое же или несколько лучшее выполнение/состояние (от -15 до 10% по сравнению с нулевым уровнем) (+) - небольшое улучшение выполнения/состояния (от 5 до 10% по сравнению с нулевым уровнем) (++) - значительное улучшение выполнения/состояния (от 10 до 40% по сравнению с нулевым уровнем) (+++) - нормальное выполнение/состояние, как у интаткных крыс (от 90 до 100% по сравнению с нулевым уровнем)
Пример 3. Получение трансплантата крысиных стволовых клеток.
Композиции стволовых клеток E, F, G и H получали из материала, взятого у здоровых крыс линии Wistar способом, аналогичным описанному в примере 1 для человеческих клеток. Образец E содержал ядерные клетки костного мозга без плазмы; образец F представлял собой ядерные клетки костного мозга в плазме без фибриногена и С-реактивного белка; образец G - это композиция F, из которого дополнительно удалены эритроциты, тромбоциты, лимфоциты, гранулоциты, дендритные клетки и макрофаги. Образец H - контрольный, соответствующий композиции D человеческих клеток; в нем клетки образца E ресуспендированы в нормальной крысиной плазме, содержащей фибриноген и C-реактивный белок.
Пример 4. Эксперимент по аутологичной трансплантации.
В этом примере мы использовали такую же начальную фазу эксперимента, как описано в примере 2, чтобы сравнить эффективность различных полученных в примере 3 композиций, содержащих крысиные стволовые клетки. В качестве животной модели использовали здоровых иммунологически нормальных крыс линии Wistar. У них вызывали травматическое компрессионное повреждение спинного мозга путем раздувания баллонного катетера. Через трое суток крысам рядом с этим повреждением спинного мозга вводили интратекально ту или иную композицию стволовых клеток. За подопытными особями наблюдали в течение 35 суток. В этот период у них измеряли массу тела и проводили оценку неврологической патологии в тестах с ходьбой по вращающемуся стержню (RotaRod, Panlab) и по дорожке в системе CatWalk. По истечении 35-дневного периода животных умерщвляли и проводили гистологическое исследование области повреждения спинного мозга.
На начальной фазе этого эксперимента крысы получали трансплантаты стволовых клеток, содержавшие композиции стволовых клеток E, F, G и H; контролями служили животные, получавшие нормальную плазму, и интактные особи. Оценивали способность указанных четырех композиций стволовых клеток обеспечить купирование неврологических нарушений после травматического повреждения спинного мозга.
По истечении указанного 35-дневного периода было обнаружено, что степень улучшения неврологических показателей у крыс с экспериментальным повреждением спинного мозга в результате трансплантации стволовых клеток по данному изобретению (композиции стволовых клеток F и G) была гораздо выше, чем у интактных животных или у особей, получавших нормальную плазму, или у получавших композиции стволовых клеток E и H. Также у крыс, получавших композицию стволовых клеток G, неврологические показатели улучшились значительно больше, чем у особей, получавших композицию стволовых клеток F.
Через трое суток после трансплантации брали интратекально спинномозговую жидкость из места повреждения и исследовали ее на присутствие маркеров воспаления, например гамма-интерферона (γIFN), используя набор для твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) с крысиным γ-IFN (Pierce Protein Biology Products). Было обнаружено, что у крыс, получавших композиции стволовых клеток E и H, уровень γ-IFN в спинномозговой жидкости был высоким. А у животных, получавших композиции стволовых клеток F и G, он был значительно ниже, чем у особей, получавших композицию стволовых клеток H, - на 30 и 10% соответственно.
- 8 035338
Таблица 2
| Способ оценки | Препарат стволовых клеток(*) | Отрицательный контроль(плазма) | Отрицательный контроль (крысы с повреждением спинного мозга) | Положительный контроль (интактные особи) | |||
| Ф А | В В | сс | DD | ||||
| По походке (система Catwalk) | +/- | + | ++ | +/- | - | - | +++ |
| По координации (тест Rotarod) | +/- | + | ++ | +/- | - | - | +++ |
| Масса тела | +/- | + | ++ | +/- | - | - | +++ |
| Г истологические данные | +/- | + | ++ | +/- | - | - | +++ |
Выполнение теста или состояние у животных с повреждением спинного мозга, служивших отрицательным контролем, брали за 0% (нулевой уровень); у интактных особей - за 100%.
(-) - такое же или худшее выполнение/состояние (от -15 до 5% по сравнению с нулевым уровнем) (+/-) - почти такое же или несколько лучшее выполнение/состояние (от -15 до 10% по сравнению с нулевым уровнем) (+) - небольшое улучшение выполнения/состояния (от 5 до 10% по сравнению с нулевым уровнем) (++) - значительное улучшение выполнения/состояния (от 10 до 40% по сравнению с нулевым уровнем) (+++) - нормальное выполнение/состояние, как у интаткных крыс (от 90 до 100% по сравнению с нулевым уровнем)
Claims (12)
1. Композиция гемопоэтических стволовых клеток с пониженной воспалительной активностью для трансплантации стволовых клеток, включающая ядросодержащие клетки, включая гемопоэтические и мезенхимальные стволовые клетки и плазму или сыворотку, из которой удалены фибриноген и Среактивный белок, причем указанные ядросодержащие клетки и сыворотка или плазма получены от одного и того же субъекта.
2. Композиция по п.1, из которой дополнительно удалены провоспалительные клетки.
3. Композиция по п.1 или 2, где субъект является человеком.
4. Способ получения in vitro композиции гемопоэтических стволовых клеток с пониженной воспалительной активностью по п.1, включающий:
a) получение ядросодержащих клеток, включающих гемопоэтические и мезенхимальные стволовые клетки, из образца ткани, взятого у субъекта, где ткань выбирают из группы, состоящей из костного мозга, периферической крови и пуповинной крови;
b) суспендирование указанных ядросодержащих клеток в плазме или сыворотке, из которой удалены фибриноген и С-реактивный белок с получением композиции гемопоэтических стволовых клеток с пониженной воспалительной активностью, где воспалительная активность данной композиции как минимум на 10% ниже чем воспалительная активность композиции, полученной суспендированием ядросодержащих клеток в нормальной плазме, содержащей фибриноген и С-реактивный белок, причем плазму или сыворотку и образец ткани, получают от одного и того же субъекта.
5. Способ по п.4, в котором субъект является человеком.
6. Способ по п.4 или 5, включающий дополнительный этап удаления провоспалительных клеток из композиции, содержащей ядросодержащие клетки.
7. Способ по любому из пп.4-6, в котором плазму или сыворотку, не содержащую фибриноген и Среактивный белок, получают путем фильтрации и/или хроматографии.
8. Применение композиция согласно любому из пунктов пп.1-3 в качестве лекарственного средства для регенерации нервной ткани.
9. Применение по п.8, в котором регенерация ткани направлена на лечение повреждения спинного мозга.
10. Применение по п.9, в котором лекарственное средство предназначено для терапии с аутологичной трансплантацией.
11. Применение композиции согласно любому из пп.1-3 в качестве лекарственного средства для регенерации ткани сосудов.
12. Применение композиции согласно любому из пп.1-3 в качестве лекарственного средства для регенерации гемопоэтической ткани.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP13190120 | 2013-10-24 | ||
| PCT/EP2014/072911 WO2015059300A1 (en) | 2013-10-24 | 2014-10-24 | Method for reducing the inflammatory activity of a stem cell transplant and use thereof |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201690838A1 EA201690838A1 (ru) | 2016-08-31 |
| EA035338B1 true EA035338B1 (ru) | 2020-05-29 |
Family
ID=49474298
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201690838A EA035338B1 (ru) | 2013-10-24 | 2014-10-24 | Композиция гемопоэтических стволовых клеток с пониженной воспалительной активностью, ее получение и применение |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US9839653B2 (ru) |
| EP (1) | EP3060653B1 (ru) |
| DK (1) | DK3060653T3 (ru) |
| EA (1) | EA035338B1 (ru) |
| ES (1) | ES2729640T3 (ru) |
| WO (1) | WO2015059300A1 (ru) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9839653B2 (en) | 2013-10-24 | 2017-12-12 | Neuroplast Beheer B.V. | Method for reducing the inflammatory activity of a stem cell transplant and use thereof |
| US20180271908A1 (en) * | 2015-05-01 | 2018-09-27 | Cesca Therapeutics, Inc. | Intramuscular administraton of autologous bone marrow for treatment |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2343679A (en) * | 1998-11-16 | 2000-05-17 | Alison Miriam Davies | Autologous transplantation and method for making cells dormant |
| US20020058289A1 (en) * | 2000-05-26 | 2002-05-16 | Thomas Terry E. | Novel antibody compositions for preparing enriched mesenchymal progenitor preparations |
| WO2007085210A2 (en) * | 2006-01-25 | 2007-08-02 | Univerzita Karlova V Praze | Method of cultivation of human mesenchymal stem cells, particularly for the treatment of non-healing fractures, and bioreactor for carrying out this cultivation method |
| WO2008036374A2 (en) * | 2006-09-21 | 2008-03-27 | Medistem Laboratories, Inc. | Allogeneic stem cell transplants in non-conditioned recipients |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2035317T5 (es) | 1987-11-09 | 1998-03-16 | Becton Dickinson Co | Metodo para analizar celulas hematopoyeticas en una muestra. |
| US5087570A (en) | 1988-05-10 | 1992-02-11 | Weissman Irving L | Homogeneous mammalian hematopoietic stem cell composition |
| US20030032185A1 (en) | 2001-05-03 | 2003-02-13 | Sharkis Saul J. | Method of making a homogeneous preparation of hematopoietic stem cells |
| EP1852500A1 (en) | 2006-05-02 | 2007-11-07 | Stemwell LLC | Stem cells derived from bone marrow for tissue regeneration |
| US9839653B2 (en) | 2013-10-24 | 2017-12-12 | Neuroplast Beheer B.V. | Method for reducing the inflammatory activity of a stem cell transplant and use thereof |
-
2014
- 2014-10-24 US US15/029,206 patent/US9839653B2/en active Active
- 2014-10-24 ES ES14789278T patent/ES2729640T3/es active Active
- 2014-10-24 WO PCT/EP2014/072911 patent/WO2015059300A1/en active Application Filing
- 2014-10-24 EP EP14789278.0A patent/EP3060653B1/en active Active
- 2014-10-24 DK DK14789278.0T patent/DK3060653T3/da active
- 2014-10-24 EA EA201690838A patent/EA035338B1/ru unknown
-
2017
- 2017-10-24 US US15/791,638 patent/US10406181B2/en active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2343679A (en) * | 1998-11-16 | 2000-05-17 | Alison Miriam Davies | Autologous transplantation and method for making cells dormant |
| US20020058289A1 (en) * | 2000-05-26 | 2002-05-16 | Thomas Terry E. | Novel antibody compositions for preparing enriched mesenchymal progenitor preparations |
| WO2007085210A2 (en) * | 2006-01-25 | 2007-08-02 | Univerzita Karlova V Praze | Method of cultivation of human mesenchymal stem cells, particularly for the treatment of non-healing fractures, and bioreactor for carrying out this cultivation method |
| WO2008036374A2 (en) * | 2006-09-21 | 2008-03-27 | Medistem Laboratories, Inc. | Allogeneic stem cell transplants in non-conditioned recipients |
Non-Patent Citations (7)
| Title |
|---|
| C F HIRST, K J STEVENSON: "Production of plasma selectively depleted in fibrinogen by affinity chromatography", JOURNAL OF CLINICAL PATHOLOGY, BMJ PUBLISHING GROUP, GB, vol. 44, no. 4, 1 April 1991 (1991-04-01), GB, pages 306 - 308, XP008145410, ISSN: 0021-9746, DOI: 10.1136/jcp.44.4.306 * |
| DIMITRIOS DAVALOS; KATERINA AKASSOGLOU: "Fibrinogen as a key regulator of inflammation in disease", SEMINARS IN IMMUNOPATHOLOGY, SPRINGER, BERLIN, DE, vol. 34, no. 1, 31 October 2011 (2011-10-31), Berlin, DE, pages 43 - 62, XP019988748, ISSN: 1863-2300, DOI: 10.1007/s00281-011-0290-8 * |
| JOHANNES P. J. M. DE MUNTER; ERIK C. WOLTERS: "Autologous stem cells in neurology: is there a future?", JOURNAL OF NEURAL TRANSMISSION ; BASIC NEUROSCIENCES, GENETICS AND IMMUNOLOGY, PARKINSON'S DISEASE AND ALLIED CONDITIONS, ALZHEIMER'S DISEASE AND ADOLESCENT PSYCHIATRY RELATED DISORDERS, BIOLOGICAL PSYCHIATRY, BIOLOGICAL CHILD AND ADOLESCEN, vol. 120, no. 1, 23 November 2012 (2012-11-23), Vi, pages 65 - 73, XP035157329, ISSN: 1435-1463, DOI: 10.1007/s00702-012-0913-9 * |
| KARINA T. WRIGHT, WAGIH EL MASRI, AHEED OSMAN, JOY CHOWDHURY, WILLIAM E. B. JOHNSON: "Concise Review: Bone Marrow for the Treatment of Spinal Cord Injury: Mechanisms and Clinical Applications", STEM CELLS, ALPHAMED PRESS, vol. 29, no. 2, 24 February 2011 (2011-02-24), pages 169 - 178, XP055103329, ISSN: 10665099, DOI: 10.1002/stem.570 * |
| MOVIGLIA G A; VARELA G; GAETA C A; BRIZUELA J A; BASTOS F; SASLAVSKY J: "Autoreactive T cells induce in vitro BM mesenchymal stem cell transdifferentiation to neural stem cells", CYTOTHERAPY, ISIS MEDICAL MEDIA, OXFORD,, GB, vol. 8, no. 3, 1 May 2006 (2006-05-01), GB, pages 196 - 201, XP009088084, ISSN: 1465-3249, DOI: 10.1080/14653240600735958 * |
| R.A. KOLL, J. KLINKMANN, W.O. RICHTER: "RheoSorb: A Specific Adsorber for Fibrinogen Elimination in Clinical Situations with Impaired Rheology", ARTIFICIAL ORGANS, BLACKWELL SCIENCE, vol. 26, no. 2, 1 February 2002 (2002-02-01), pages 145 - 151, XP055105535, ISSN: 0160564X, DOI: 10.1046/j.1525-1594.2002.06880.x * |
| RIORDAN NEIL H; CHAN KYLE; MARLEAU ANNETTE M; ICHIM THOMAS E: "Cord blood in regenerative medicine: do we need immune suppression?", JOURNAL OF TRANSLATIONAL MEDICINE, BIOMED CENTRAL, vol. 5, no. 1, 30 January 2007 (2007-01-30), pages 8, XP021024939, ISSN: 1479-5876, DOI: 10.1186/1479-5876-5-8 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20160228468A1 (en) | 2016-08-11 |
| WO2015059300A1 (en) | 2015-04-30 |
| US10406181B2 (en) | 2019-09-10 |
| DK3060653T3 (da) | 2019-06-11 |
| EA201690838A1 (ru) | 2016-08-31 |
| EP3060653A1 (en) | 2016-08-31 |
| US20180042967A1 (en) | 2018-02-15 |
| US9839653B2 (en) | 2017-12-12 |
| ES2729640T3 (es) | 2019-11-05 |
| EP3060653B1 (en) | 2019-03-27 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US9877989B2 (en) | Use of preparations comprising exosomes derived from mesenchymal stem cells (MSCs) in the prevention and therapy of inflammatory conditions | |
| CN109310712A (zh) | 用于医学的人血小板裂解物来源细胞外囊泡 | |
| JPWO2009020201A1 (ja) | 単離された細胞集団 | |
| CN113164517A (zh) | 源自死亡供体的用于促进移植物耐受性的细胞组合物及其制造和用途 | |
| Després et al. | CD34+ cell enrichment for autologous peripheral blood stem cell transplantation by use of the CliniMACs device | |
| AU2017258058A1 (en) | Synapse formation agent | |
| US20150328260A1 (en) | Blood cell preparations and related methods (gen 8) | |
| US10406181B2 (en) | Method for reducing the inflammatory activity of a stem cell transplant and use thereof | |
| CA2726341C (en) | Human facilitating cells | |
| MX2010010251A (es) | Kit para extraer sangre, de preferencia sangre periferica, para la produccion de citoblastos. | |
| JP2012518407A (ja) | 単離された単球集団及び関連した治療応用 | |
| JP3917652B2 (ja) | 造血促進細胞及びその使用 | |
| US20190183938A1 (en) | Provision of a Therapeutically Active Cell Product | |
| WO2006085612A1 (ja) | 神経幹細胞の調製法 | |
| JP2005505261A (ja) | 樹状細胞単離法 | |
| CN110402286B (zh) | 自周边血液制备间质干细胞群的方法及其用途 | |
| WO2001088099A1 (en) | Cells, culture methods and their uses | |
| CN113827615A (zh) | 囊泡在制备治疗自身免疫性疾病药物中的应用 | |
| Nguyen et al. | SAFETY AND EFFICACY OF STEM CELL THERAPY FOR TREATMENT SEVERE TRAUMATIC BRAIN INJURY | |
| CN117202903A (zh) | 用于增加干细胞功能的尿石素 | |
| US20200289574A1 (en) | Augmentation of fertility by platelet rich plasma | |
| Rodriguez | Immunosuppressive properties of Wharton's jelly derived mesenchymal stromal cells in the treatment of graft versus host disease in rat model | |
| WO2015198149A1 (en) | Substance and method for modulating proliferation and differentiation of regulatory, stem and other somatic cells | |
| AU2015213389A1 (en) | Human facilitating cells |