EA032512B1

EA032512B1 - Лечение боли

Info

Publication number: EA032512B1
Application number: EA201792123A
Authority: EA
Inventors: Изабель Гонсалес; Мартин Притчард; Питер Ричардсон
Original assignee: Беневолентай Кембридж Лимитед
Priority date: 2015-04-24
Filing date: 2016-04-22
Publication date: 2019-06-28
Also published as: HK1249865B; AU2016252237A1; US20180104223A1; EA201792123A1; HUE043871T2; MX2017013047A; PT3285767T; DK3285767T3; SG11201707870SA; IL254155A0; JP2021073257A; GB201507048D0; CN107530330A; JP2018520984A; TR201905392T4; KR20170139047A; WO2016170353A1; EP3285767A1; IL254155B; CA2979160A1

Abstract

В изобретении представлены (3S)-тетрагидрофуран-3-ил-(4S)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-c]пиридин-5-карбоксилат и его соли для применения при лечении боли.

Description

Настоящее изобретение относится к применению ингибитора 88АО (38)-тетрагидрофуран-3-ил(48)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата и его солей при лечении боли.

Предпосылки создания изобретения

Активность семикарбазидчувствительной аминоксидазы (88АО) является ферментативной активностью, выражаемой белком сосудистой адгезии-1 (УАР-1) или медьсодержащей аминоксидазой 3 (АОС3), принадлежащей к семейству ферментов медьсодержащих аминоксидаз (ЕС.1.4.3.6). Поэтому ингибиторы фермента 88АО могут также модулировать биологические функции белка УАР-1.

Активность 88АО обнаружена в различных тканях, включая ткань сосудистых и несосудистых гладких мышц, эндотелий и жировую ткань [ЕеМпкойп, Вгах. 1. Меб. ΒίοΙ. Век., 1984, 17, 223-256; Ыакок & Соккгаи, ЕоНа Н1к!осЬет. Су!оЬю1., 1994, 32, 3-10; Уи е! а1., Вюсйет. РЬагтасо1., 1994, 47, 1055-1059; Сак!111о е! а1., №игосйет. 1п!., 1998, 33, 415-423; Ьу1ек & Ршо, I. №ига1. Тгапкт. 8ирр1., 1998, 52, 239-250; 1аакко1а е! а1., Ат. I. Ра11юк 1999, 155, 1953-1965; Могт е! а1., I. РЬагтасо1. Ехр. ТЬег., 2001, 297, 563572; 8а1т1 & 1а1капеп, Тгепбк 1ттиио1., 2001, 22, 211-216]. Кроме того, белок 88АО обнаружен в плазме крови, и оказывается, что такая растворимая форма имеет свойства, схожие с формой, связанной с тканью [Уи е! а1., Вюсйет. РЬагтасо1., 1994, 47, 1055-1059; Кигкуагу1 е! а1., I. 1ттипо1., 1998, 161, 15491557].

Точная физиологическая роль этого распространенного фермента пока не определена полностью, но оказывается, что 88АО и продукты ее взаимодействия могут иметь некоторые функции в регуляции и передаче сигнала клеткой. Например, последние исследования предполагают, что 88АО играет роль как в опосредуемом СЬиТ4 поглощении глюкозы [Еппдие-Тагапсоп е! а1., 1. Вю1. СЬет., 1998, 273, 80258032; Могт е! а1., I. РЬагтасо1. Ехр. ТЬег., 2001, 297, 563-572], так и в дифференцировке адипоцитов [БоЫапа е! а1., Вюсйет. I., 2001, 356, 769-777; Мегшег е! а1., Вюсйет. I., 2001, 358, 335-342]. Кроме того, показано, что 88АО вовлекается в воспалительные процессы, где она действует как адгезивный белок для лейкоцитов [8а1т1 & Ы1капеп, Тгепбк 1ттипо1., 2001, 22, 211-216; 8а1т1 & 1а1капеи, в Абйекюп Мо1еси1ек: Бипсбопк апб 1пЫЬйюп К. Ьеу (Еб.), 2007, р. 237-251], и также может играть роль в развитии и сохранении матрикса соединительной ткани [Ьапдйгб е! а1., Сагбюуакс. Тох1со1., 2002, 2(2), 141-150; Сбк!йгк е! а1., Ат. I. Ра!Ьо1., 2003, 163(5), 1921-1928]. Более того, недавно обнаружена связь между 88АО и ангиогенезом [Ыоба е! а1., БА8ЕВ I., 2008, 22(8), 2928-2935], и на основании этой связи ожидается, что ингибиторы 88АО имеют антиангиогенное действие.

Некоторые исследования на людях показали, что активность 88АО в плазме крови повышается при состояниях, таких как застойная сердечная недостаточность, сахарный диабет, болезнь Альцгеймера и воспаление [ЬеМпкойп, Вгах. I. Меб. Вю1. Век., 1984, 17, 223-256; Вооткта е! а1., Сагбюуакс. Век., 1997, 33, 387-391; ЕкЬ1от, РЬагтасо1. Век., 1998, 37, 87-92; Кигкуагу1 е! а1., I. 1ттипо1., 1998, 161, 1549-1557; Вооткта е! а1., П1аЬе!о1од1а, 1999, 42, 233-237; Мекхагок е! а1., Еиг. I. Эгид Ме!аЬ. РЬагтасокте!., 1999, 24, 299-302; Уи е! а1., ВюсЫт. Вюрйук. Ас!а, 2003, 1647(1-2), 193-199; Ма1уик е! а1., Сигг. Меб. СЬет., 2004, 11(10), 1285-1298; О'8иШуап е! а1., №иго!ох1со1оду, 2004, 25(1-2), 303-315; бе1 Маг Негпапбех е! а1., №игокск Ье!!., 2005, 384(1-2), 183-187]. Предполагается, что реакционноспособные альдегиды и пероксид водорода, выработанные эндогенными аминоксидазами, вносят вклад в развитие сердечнососудистых заболеваний, диабетических осложнений и болезни Альцгеймера [СаШпдйат е! а1., Ргод. Вгат Век., 1995, 106, 305-321; ЕкЬ1от, Рйагтасо1. Век., 1998, 37, 87-92; Уи е! а1., ВюсЫт. Вюрйук. Ас!а, 2003, 1647(1-2), 193-199; Лапд е! а1., №игора!йо1 Арр1 №игоЬю1., 2008, 34(2), 194-204]. Кроме того, ферментативная активность 88АО вовлекается в процесс экстравазации лейкоцитов в местах воспаления, где, как показано, 88АО в значительной степени экспрессируется на эндотелии сосудов [8а1ш1 е! а1., 1ттипйу, 2001, 14(3), 265-276; 8а1т1 & Ы1капеп, в Абйекюп Мо1еси1ек: Бипсбопк апб 1пЫЬйюп, К. Ьеу (Еб.), 2007, р. 237-251]. Соответственно, предполагается, что ингибирование 88АО имеет терапевтическую ценность при предупреждении диабетических осложнений и при воспалительных заболеваниях [ЕкЬ1от, РЬагтасо1. Век., 1998, 37, 87-92; 8а1т1 е! а1., 1ттипйу, 2001, 14(3), 265-276; 8а1!ег-С1б е! а1., I. РЬагтасо1. Ехр. ТЬег., 2005, 315(2), 553-562].

В \УО 2007/146188 утверждается, что блокада активности 88АО ингибирует рекрутмент лейкоцитов, ослабляет воспалительную реакцию и ожидается, будет благоприятной при предупреждении и лечении пароксизмов, например, при эпилепсии.

О'Воигке е! а1. (I. №ига1. Тгапкт., 2007; 114(6): 845-9) проверяли потенциальные ингибиторы 88АО при неврологических заболеваниях, причем предварительно показали эффективность ингибирования 88АО на крысиной модели удара. Ингибитор 88АО проверяли на рецидивирующем-ремиттирующем экспериментальном аутоиммунном энцефаломиелите (ЕАЕ), мышиная модель которого разделят многие характеристики рассеянного склероза человека. Результаты показывают возможное клиническое благоприятное действие терапии низкомолекулярными веществами против 88АО на такой модели и, следовательно, при лечении рассеянного склероза человека.

Нокаутированные для 88АО животные фенотипично явно нормальные, но проявляют заметное ослабление воспалительных реакций, вызванных в ответ на различные воспалительные раздражители [8!о

- 1 032512

1еп е! а1., 1ттиш!у, 2005, 22(1), 105-115]. Кроме того, показано с использованием антител и/или небольших молекул, что противодействие ее функции у животных дикого типа на многих животных моделях болезни человека (например, вызванного каррагинаном воспаления конечностей, вызванного оксазоолоном колита, вызванного липополисахаридом воспаления легких, вызванного коллагеном артрита, вызванного эндотоксином увеита) является защитным при снижении инфильтрации лейкоцитов, уменьшении тяжести фенотипа заболевания и снижении уровней воспалительных цитокинов и хемокинов [Κίτίοη е! а1., Еиг. 1. 1ттипо1., 2005, 35(11), 3119-3130; 8а1!ег-С1й е! а1., 1. РЬагтасо1. Ехр. Тйег., 2005, 315(2), 553562; МсБопа1й е! а1., Аппиа1 Керойз ίη Мей1ста1 Сйет1з!гу, 2007, 42, 229-243; 8а1т1 & 1а1капеп, в Аййеδίοη Мо1еси1ез: Еипсйопз апй 1пЫЬ1!юп, К. Ееу (Ей.), 2007, р. 237-251; Хойа е! а1., ЕА8ЕВ 1., 2008 22(4), 1094-1103; Хойа е! а1., ЕА8ЕВ 1., 2008, 22(8), 2928-2935]. Оказывается, что такая противовоспалительная защита предоставляется в широком ряду моделей воспаления у всех независимо от причинных механизмов, а не ограничивается одним определенным заболеванием или моделью заболевания. Это позволяет предположить, что 88АО может являться ключевой центральной точкой для регуляции воспалительной реакции, и следовательно вероятно, что ингибиторы 88АО будут эффективными противовоспалительными лекарственными средствами при широком ряде заболеваний человека. УАР-1 также вовлечен в развитие и поддержание фиброзных заболеваний, включая болезни печени и легких. \¥езЮп апй Айатз (1. №ига1. Тгапзт., 2011, 118(7), 1055-64) суммировали экспериментальные данные о вовлечении УАР-1 в фиброз печени, и ^ез!оп е! а1. (ЕА8Б Роз!ег, 2010) сообщают, что блокада УАР-1 ускоряет рассасывание фиброза, вызванного четыреххлористым углеродом. Кроме того, УАР-1 вовлекается в воспаление легких (например, см. 8ίπ§Ιι е! а1., 2003, Уис1ю\уз АгсЬ., 442: 491-495), что предполагает, что блокаторы УАР-1 могут ослаблять воспаление легких и таким образом благоприятны для лечения мусковисцидоза путем лечения как профиброзного, так и провоспалительного аспектов заболевания.

88АО (УАР-1) апрегулируется при раке желудка и идентифицирована в сосудистой сети опухоли меланомы, гепатомы и опухолях головы и шеи человека (Уоопд КЕ, МсХаЬ О., НиЬзсйег 80, Айатз ЭН (1998), 1. 1ттипо1., 160, 3978-88; 1ца1а Н., 8а1т1 М., А1апеп К., Оге'птап К., 1а1капеп 8 (2001), 1ттипо1., 166, 6937-6943; Еогз!ег-Ногуа!й С., Боте В., Раки 8. е! а1. (2004), Ме1апота Кез., 14, 135-40). В одном сообщении (МагШ1а-1с1и11ага Е., Саз!егтапз К., Аиутеп К., Оийе ЕдЬппк МО, 1а1капеп 8., ОпШоеп А\¥, 8а1т1 М. (2010), 1. 1ттипо1., 184, 3164-3173) показано, что у мышей с ферментативно неактивным УАР-1 меланомы растут медленнее, и у них уменьшенные число и диаметр кровеносных сосудов опухоли. Уменьшенный рост таких опухолей также отражается в меньшей (на 60-70%) инфильтрации миелоидных супрессорных клеток. Обнадеживает, что дефицит УАР-1 не влияет на образование сосудов или лимфососудов в нормальной ткани.

В силу указанных выше доводов ожидается, что ингибирование 88АО будет снижать уровни продуктов провоспалительных ферментов (альдегидов, пероксида водорода и аммиака), и причем в то же время уменьшается адгезивная способность иммунных клеток и соответственно их активация и конечная экстравазация. Заболевания, при которых ожидается, что такая активность является терапевтически благоприятной, включают все заболевания, где иммунные клетки играют заметную роль в инициации, поддержании или рассасывании патологии таких воспалительных заболеваний и иммунных/аутоиммунных заболеваний. Примеры таких заболеваний включают рассеянный склероз, артрит и васкулит.

В XV О 2010/031789 (включенной в настоящее описание в качестве ссылки) раскрывается перспективный класс соединений ингибиторов 88АО, причем особенно перспективным является соединение примера 16, которое представляет собой свободное основание (38)-тетрагидрофуран-3-ил-(48)-4изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилат и имеет следующую структуру:

Боль является неприятным состоянием, которое может нанести вред качеству жизни индивидуума. Существует неудовлетворенная потребность в новых средствах для лечения боли.

Сущность изобретения

После широких исследований обнаружено, что (38)-тетрагидрофуран-3-ил-(48)-4-изопропил1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилат неожиданно эффективен при лечении боли.

Краткое описание чертежей

Фигура показывает действие (38)-тетрагидрофуран-3-ил-(48)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Нимидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата на модели термической гиперальгезии (боли), вызванной СЕА.

Определения

Термин боль, используемый в настоящем описании, включает воспалительную боль. В одном воплощении боль является воспалительной болью.

Лечение при использовании в настоящем описании включает профилактику названного расстройства или состояния или облегчение или устранение расстройства как только оно установлено.

- 2 032512

Термин эффективное количество относится к количеству соединения, которое дает терапевтический эффект субъекту, которого лечат. Терапевтический эффект может быть объективным (т.е. который можно измерить с помощью некоторого теста или маркера) или субъективным (т.е. субъект показывает или ощущает действие).

Фармацевтически приемлемый означает применимость при получении фармацевтической композиции, которая вообще безопасна, нетоксична и ни биологически, ни как-то иначе не является нежелательной, и включает применимость для применения в ветеринарии, а также фармацевтическое применение человеком.

Если не указано иное, термин (38)-тетрагидрофуран-3-ил-(48)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Нимидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилат, используемый в связи с кристаллической формой соли, описанной в настоящем описании, включает смесь энантиомеров (38,48) и (3Е.4Е). В одном воплощении (38)тетрагидрофуран-3-ил-(48)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилат и его соли имеют абсолютную чистоту >95%, предпочтительно >99%, предпочтительнее >99,5%. В одном воплощении (38)-тетрагидрофуран-3-ил-(48)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин5-карбоксилат обозначает (38,48) энантиомер, имеющий энантиомерную чистоту >95%, предпочтительно >99%, предпочтительнее >99,5%. В одном воплощении (38)-тетрагидрофуран-3-ил-(48)-4-изопропил1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилат имеет диастереоизомерную чистоту >95%, предпочтительно >99%, предпочтительнее >99,5%.

Подробное описание изобретения (38)-Тетрагидрофуран-3-ил-(48)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5карбоксилат можно использовать как таковой или в форме его фармацевтически приемлемой соли. Соли включают фармацевтически приемлемые соли, например соли присоединения кислот, образованные с неорганическими или органическими кислотами, такие как гидрохлориды, гидробромиды, птолуолсульфонаты, фосфаты, сульфаты, перхлораты, ацетаты, трифторацетаты, пропионаты, цитраты, малонаты, сукцинаты, лактаты, оксалаты, тартраты и бензоаты. Для общего представления о солях см. НаибЬоок о£ Рйаттасеи11са1 8а11§: Рторетбек, 8е1ес1юп, апб Ике, 81аЫ апб \Устш111 (^йеу-УСН, ^етйе1т, Сегтапу, 2002).

Соли также могут быть образованы с основаниями. Такие соли включают соли, полученные с неорганическими или органическими основаниями, например соли щелочноземельных металлов, такие как магниевые и кальциевые соли, и соли органических аминов, такие как соли морфолина, пиперидина, диметиламина или диэтиламина. Особой солью является мезилат. Другой солью является сульфат, который существует в виде гидрата. В одном воплощении гидрат представляет собой сульфат (38)тетрагидрофуран-3-ил-(48)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5карбоксилата.1,5Н₂О.

Типичная дозировка составляет 2-20 мг/кг, вводимая один или несколько раз в день или непрерывной инфузией. Типичная общая суточная дозировка для человека составляет 1-2000 мг/сутки, предпочтительно от 200 до 2000 мг/сутки, предпочтительнее от 500 до 2000 мг/сутки.

(38)-Тетрагидрофуран-3-ил-(48)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5карбоксилат можно вводить в различных лекарственных формах. Так, его можно вводить перорально, например, в виде таблетки, капсулы, пастилки, лепешки, водной или масляной суспензии, диспергируемого порошка или гранулы. Лекарственное средство предпочтительно вводят пероральным путем. Однако следует иметь в виду, что конкретный уровень дозы для определенного пациента будет зависеть от ряда факторов, включая возраст, массу тела, состояние здоровья, пол, питание пациента, время введения, комбинацию лекарственных средств и тяжесть определенного состояния, от которого лечат.

Фармацевтическая композиция, содержащая активный ингредиент, может находиться в любой подходящей форме, например, водных или неводных растворов или суспензий, диспергируемых порошков или гранул, трансдермальных или трансмукозальных пэтчей, кремов, мазей или эмульсий.

Фармацевтическая композиция может находиться в форме стерильного водного или неводного (например, масляного) раствора или суспензии для инъекции. Стерильный препарат для инъекции также может находиться в виде стерильного раствора или суспензии для инъекции в нетоксичном парентерально приемлемом разбавителе или растворителе, например, в 1,3-бутандиоле. К числу приемлемых сред и растворителей, которые можно использовать, относятся вода, забуференный фосфатом физиологический раствор, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, в качестве растворителя или суспензионной среды традиционно используют нелетучие масла. Для такой цели можно использовать любое смешанное нелетучее масло, включая синтетические моно- или диглицериды. Кроме того, при получении инъекции находят применение жирные кислоты, такие как олеиновая кислота. Суспензии можно получить согласно способам, известным в технике, с использованием подходящих диспергирующих или смачивающих агентов и суспендирующих агентов.

Водные суспензии содержат активный ингредиент в смеси с эксципиентами, подходящими для изготовления водных суспензий. Такими эксципиентами являются суспендирующие агенты, например натрий карбоксиметилцеллюлоза, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, альгинат натрия, поливинилпирролидон, трагакантовая камедь и аравийская камедь; диспергирующие или смачивающие

- 3 032512 агенты, такие как встречающийся в природе фосфатид, например лецитин, или продукты конденсации алкиленоксида с жирными кислотами, например полиоксиэтиленстеарат, или продукты конденсации этиленоксида с длинноцепными алифатическими спиртами, например гептадекаэтиленоксицетанол, или продукты конденсации этиленоксида с неполными эфирами, полученными из жирных кислот и гексита, например полиоксиэтилена с неполными эфирами, полученными из жирных кислот и ангидридов гексита, например моноолеат полиоксиэтиленсорбитана. Водные суспензии также могут содержать один или несколько консервантов, например этил- или н-пропил-п-гидроксибензоат, один или несколько красителей, один или несколько корригентов и один или несколько подслащивающих агентов, таких как сахароза или сахарин.

Неводные (т.е. масляные) суспензии можно получить суспендированием активного ингредиента в растительном масле, например, арахисовом масле, оливковом масле, сезамовом масле или кокосовом масле, или в минеральном масле, таком как жидкий парафин. Масляные суспензии могут содержать загуститель, например, пчелиный воск, твердый парафин или цетиловый спирт. Такие композиции можно сохранять, добавляя антиоксидант, такой как аскорбиновая кислота.

Диспергируемые порошки и гранулы, подходящие для получения водной суспензии путем добавления воды, предоставляют активный ингредиент в смеси с диспергирующим или смачивающим агентом, суспендирующим агентом и одним или несколькими консервантами. Подходящие диспергирующие или смачивающие агенты и суспендирующие агенты известны.

Активный агент также можно вводить в форме суппозиториев для ректального введения лекарственного средства. Такие композиции можно получить, смешивая лекарственное средство с подходящим нераздражающим эксципиентом, который является твердым при обычных температурах, но жидким при ректальной температуре, и поэтому будет плавиться в прямой кишке, высвобождая лекарственное средство. Такими материалами являются масло какао и полиэтиленгликоли.

Для топической доставки можно использовать трансдермальные и трансмукозальные пэтчи, кремы, мази, желе, растворы или суспензии. Для сублингвальной доставки можно использовать композиции быстрорастворимых таблеток, а также ряд представленных выше композиций. В случае перорального введения лекарственное средство можно вводить в таблетках, капсулах или жидкостях.

Следующее далее исследование предоставляет данные, на которых основано настоящее изобретение.

(3§)-Тетрагидрофуран-3-ил-(4§)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5карбоксилат исследовали (фигура 1) на модели тепловой анальгезии, вызванной СТА, которая является признанной моделью воспалительной боли. Обнаружено, что (3§)-тетрагидрофуран-3-ил-(4§)-4изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилат эффективен в зависимости от дозы и сравним по эффективности с золотым стандартом эталонным индометацином. Подробнее далее.

Оценка соли мезилата (3§)-тетрагидрофуран-3-ил-(48)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Нимидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата по гиперчувствительности у крысы, вызванной СТА (полный адъювант Фрейнда).

Оценку антигиперальгизивных свойств соли мезилата (3§)-тетрагидрофуран-3-ил-(4§)-4изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата проводят через измерение весовой нагрузки на конечности после гиперчувствительности, вызванной СТА. У наивных крыс их масса тела распределяется равномерно на обе задние лапы. Однако, когда инъецированная (левая) задняя лапа является болезненной, масса перераспределяется так, что на пораженную лапу приходится меньший вес (уменьшение весовой нагрузки на поврежденную лапу). Весовую нагрузку на каждую заднюю конечность измеряют с использованием прибора для теста инвадилизации у крыс (ЫпЮп 1п51гитсп15. иК). Крыс помещают в прибор для теста инвадилизации задними лапами на отдельные сенсоры, и регистрируют среднее усилие, прилагаемое обеими задними конечностями, в течение 4 секунд. Инъекция СТА также вызывает отек, который можно оценить по объему лапы; объем измеряют с использованием плетизмометра. Заднюю лапу крысы помещают в цилиндр, содержащий раствор, и объем вытесненной жидкости определяет объем лапы.

Самцов наивных крыс Зргадие ИаМу акклиматизируют при доступе к корму и воде аб НЬйит. Вырабатывают привычку к прибору для теста инвадилизации. Перед вызыванием повреждения снимают показания исходной весовой нагрузки и объема лап. Воспалительную гиперчувствительность вызывают интраплантарной инъекцией СТА (100 мкл 1 мг/мл раствора) в левую заднюю лапу. Измерения весовой нагрузки и объема лапы перед обработкой для оценки гиперчувствительности проводят через 23 ч после СТА. Затем животных классифицируют и рандомизируют согласно окну СТА в плане на латинском квадрате. Дают соль мезилат (3§)-тетрагидрофуран-3-ил-(48)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Нимидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата по 150, 200 и 500 мг/кг, р.о. (дозируют в воде по 2 мл/кг, рН ~56), дополнительно среду и индометацин группе для сравнения, п=9-10 на группу. Весовую нагрузку оценивают во всех группах через 1, 2 и 4 ч после введения соединения. Объем лапы оценивают через 4 ч после введения соединения. Данные анализируют, сравнивая группы обработки с контрольной группой в каждый момент времени.

Показания весовой нагрузки (г) снимают как для правой, так и левой задних лап, и вычисляют раз

- 4 032512 личие. Данные выражают в виде % обращения чувствительности к боли (показание после дозы - показание перед дозой)/(исходное показание - показание перед дозой)х100, где разницу различие исходной весовой нагрузки - различие исходной нагрузки перед дозой определяют как обратную окну СЕЛ. Статистический анализ проводят с помощью ΑΝΟνΑ повторных измерений и затем теста плановых сравнений с использованием ΙηνίνοδΙαΙ (ίηνίνοδΙαΙ.οοτιΚ) (р<0,05 считают значимым).

Соль мезилат (38)-тетрагидрофуран-3-ил-(48)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5с]пиридин-5-карбоксилата при 150 мг/кг не показывает значимого обращения гиперчувствительности в любой момент времени, 250 мг/кг показывают значимое обращение в момент 4 ч, однако 500 мг/кг являются эффективными во все моменты времени с максимальным эффектом, видимым через 4 ч после дозы. Не отмечается действия соли мезилата (38)-тетрагидрофуран-3-ил-(48)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата на объем лапы.

Синтез.

Используют следующие аббревиатуры:

Ад -	водный,
ИСМ -	дихлорметан,
И1РЕА -	диизопропилэтиламин,
Ее -	энантиомерный избыток,
Е8⁺ -	электрораспыление,
Е1ОАс -	этилацетат,
час -	час(ы),
ВЭЖХ -	высокоэффективная жидкостная хроматография,
МСВР -	масс-спектрометрия высокого разрешения,
ЖХМС -	жидкостная хроматография/масс-спектрометрия,
М -	молярный,
МеОН -	метанол,
[МН⁺] -	протонированный молекулярный ион,
мин -	минуты,
ОФ -	обращенная фаза,
МС -	масс-спектрометрия,
Кт -	время удерживания,
насыщ. -	насыщенный,
ТГФ -	тетрагидрофуран,
ТФК -	трифторуксусная кислота.

Экспериментальные методы.

Все реагенты технической чистоты и используются как получены без дополнительной очистки, если не указано иное. Во всех случаях используют растворители химически чистые.

Аналитическую ЖХМС выполняют на масс-спектрометре \Уа1сг5 Ζρ. соединенным с системой ВЭЖХ Адйеп! 1100. Аналитическую ВЭЖХ выполняют на системе Адйеп! 1100. Масс-спектры высокого разрешения (МСВР) получают на Адйеи! Μ8Ό-ΤΟΕ, соединенном с системой ВЭЖХ Адйеи! 1100. Во время анализов калибровку проверяют с помощью двух масс и при необходимости автоматически корректируют. Спектры получают положительной ионизацией электрораспылением. Полученный диапазон массы составляет т/ζ 100-1100. Используют детекцию по профилю пиков масс-спектра. Флэшхроматографию выполняют или на системе СошЫЕ1а8Й Сотрапюи, снабженной колонками с диоксидом кремния Кей18ер, или на системе Е1азН Майет Рет8оиа1, снабженной гигатрубками (щдаЮЬер с диоксидом кремния 8!та!а 8Ι-1. ВЭЖХ с обращенной фазой выполняют на системе Сйкоп (насос Сйкоп 322 с насосом С1коп 321 для уравновешивания и автоматическим пробоотборником Сйкоп 215), снабженной колонками Рйепотепех 8упетд1 Нуйго КР, 150x10 мм, УМС ΟΌ8-Α 100/150x20 мм или СЫтоЫойс Τ 250x10 мм. Колоночную хроматографию с обращенной фазой выполняют на системе Кеуегае Сйкоп (насос Сйкоп 321 и сборник фракций Сйкоп ЕС204), снабженной колонками с диоксидом кремния Мегск ЫСктортер® КР-18 (40-63 мкм). Соединения называют автоматически с использованием АСИ 6.0. Все соединения сушат в вакууме в течение ночи.

Данные аналитической ВЭЖХ и ЖХМС получают с помощью системы А: Рйепотепех 8упетд1 Нуйго КР (С18, 30x4,6 мм, 4 мкм), градиент 5-100% ΟΗ₃ΟΝ (+0,085% ТФК) в воде (+0,1% ТЕА), 1,5 мл/мин, со временем градиента 1,75 мин, 200 нм, 30°С; или системы В: Рйепотепех 8упетд1 Нуйго КР (С18, 150x4,6 мм, 4 мкм), градиент 5-100% ΟΗ₃ΟΝ (+0,085% ТФК) в воде (+0,1% ТЕА), 1,5 мл/мин со временем градиента 7 мин, 200 нм, 30°С.

Данные хиральной ВЭЖХ получают с помощью системы С: СЫтоЫойс V полярно-ионного типа (150x4,6 мм), 70% МеОН в 10 мМ водн. аммонийформиатном буфере, 1,0 мл/мин в течение 10 мин, 200 нм, 30°С.

- 5 032512

Промежуточное соединение 1.

Гидрохлорид 4-изопропил-4,5,6,7-тетрагидро-1Н-имидазо[4,5-с]пиридина

Гидрохлорид гистамина (61,9 г, 336 ммоль) растворяют в растворе ХаОН (33,6 г. 841 ммоль) в воде (125 мл) и МеОН (500 мл), и добавляют изобутиральдегид (61,4 мл, 672 ммоль). Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником при 80°С в течение 24 ч, охлаждают до комнатной температуры, рН доводят до 7 1 М водн. раствором НС1 (250 мл) и растворители удаляют в вакууме. Остаток растворяют в теплом МеОН (300 мл), оставляют на 1 ч, фильтруют и растворители удаляют в вакууме. Остаток перемешивают в МеОН (50 мл) и ацетоне (400 мл) в течение 2 час и охлаждают до 4°С в течение 2 ч. Полученное выпавшее в осадок вещество промывают ацетоном (100 мл) и получают гидрохлорид 4изопропил-4,5,6,7-тетрагидро-1Н-имидазо[4,5-с]пиридина (33,0 г, 48,7%) в виде белого твердого вещест ва.

Аналитическая ЖХМС: чистота >90% (система А, К_т=0,51 мин), Е8⁺: 166,4 [МН]⁺. Промежуточное соединение 2.

4-Нитрофенил-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилат

Промежуточное соединение 1 (2,78 г, 8,28 ммоль, чистота 60%) и ΏΙΡΕΑ (5,27 мл, 30,3 ммоль) растворяют в ЭСМ (100 мл). Реакционную смесь охлаждают до 0°С и добавляют 4нитрофенилхлорформиат (4,07 г, 20,2 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 18 ч. Реакционную смесь промывают насыщ. водн. раствором ХаНСО₃ (5x100 мл), сушат (Мд8О₄), растворители удаляют в вакууме и получают 4-нитрофенил-4-изопропил-1,4,6,7тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилат (5,28 г, неочищенный) в виде желтой смолы.

Аналитическая ВЭЖХ: чистота 41% (система В, К_т=4,70 мин). Аналитическая ЖХМС: чистота 86% (система А, К_т=1,70 мин), Е8⁺: 331,0 [МН]⁺.

(38)-Тетрагидрофуран-3-ил-(48)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5карбоксилат

ХаН (0,40 г, 10,0 ммоль, 60% дисперсия в минеральном масле) суспендируют в безводном ТГФ (20 мл), охлаждают до 0°С и добавляют (8)-3-гидрокситетрагидрофуран (0,88 г, 0,68 мл, 10,0 ммоль). Суспензию перемешивают при 0°С в течение 30 мин, затем добавляют к раствору промежуточного соединения 2 (3,30 г, 10,0 ммоль, чистота 70%) в ТГФ (60 мл) и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре. Добавляют еще две дополнительные порции ХаН и (8)-3гидрокситетрагидрофурана в ТГФ через 5 и 29 ч соответственно. Через 2 суток реакцию гасят водой (10 мл) и растворители удаляют в вакууме. Остаток растворяют в Е1ОАс (100 мл), промывают 1 М водн. раствором Ха₂СО₃ (4x100 мл), сушат (Мд8О₄) и растворители удаляют в вакууме. Остаток очищают колоночной хроматографией (нормальная фаза, 20 г 81га1а 81-1, гигатрубка с диоксидом кремния, ЭСМ (200 мл), затем 2, 4 и 5% МеОН в ЭСМ (каждый раз 200 мл)) и ВЭЖХ с обращенной фазой (УМС ОЭ8-А 100x20 мм, 5 мкм, 25 мл/мин, градиент 30-60% (в течение 7 мин), затем 100% (3 мин) МеОН в смеси 10% МеОН/вода), и получают (38)-тетрагидрофуран-3-ил-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5с]пиридин-5-карбоксилат (34,8 мг, 1,1%) в виде белого твердого вещества.

Аналитическая ВЭЖХ: чистота 100% (система В, К_т=3,63 мин). Аналитическая ЖХМС: чистота 100% (система В, К_т=4,01 мин), Е8⁺: 280,1 [МН]⁺.

(38)-Тетрагидрофуран-3-ил-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5карбоксилат (39,91 мг) растворяют в 10 мМ аммонийформиатном буфере и МеОН (2 мл, 1:1) и дважды очищают хиральной ВЭЖХ с обращенной фазой (СЫгоЬюЕс т, 250x10 мм, 3 мл/мин, изократное элюирование 70% МеОН в 10 мМ аммонийформиатном буфере (40 мин), рН 7,4), получают отдельный диастереоизомер (38)-тетрагидрофуран-3-ил-(48)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5с]пиридин-5-карбоксилат (6,90 мг, ее 99%).

Аналитическая ВЭЖХ: чистота 100% (система В, К_т=3,63 мин); хиральная ВЭЖХ: чистота 99,5% (система С, К_т=2,22 мин); аналитическая ЖХМС: чистота 100% (система В, К_т=3,90 мин), Е8⁺: 280,1 [МН]⁺; МСВР вычислено для С₁₄Н₂₁Х₃О₃ 279,1583, найдено 279,1571.

- 6 032512

Соль метансульфоновой кислоты (38)-тетрагидрофуран-3-ил-(48)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата (пример 1).

Свободное основание (38)-тетрагидрофуран-3-ил-(48)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Нимидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилат (460 мг, 1,65 ммоль) растворяют в ЕЮАс (10 мл) при комнатной температуре и получают прозрачный бесцветный раствор. Добавляют по частям метансульфоновую кислоту (107 мкл) при слабом нагревании. Раствор охлаждают до комнатной температуры в течение ночи. Полученные кристаллы собирают фильтрацией, промывают ЕЮАс (2x10 мл) и сушат в течение ночи при 40°С в вакууме. Соль мезилат (38)-тетрагидрофуран-3-ил-(48)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5-карбоксилата получают с выходом 99% (615 мг) в виде белого кристаллического твердого вещества. ВЭЖХ: время удерживания 2,27 мин, чистота 99,5%. Температура плавления 189°С. ЖХМС: время удерживания 4,19 мин, Е8⁺ 280,0 [МН]⁺, чистота 100%. Хиральная ВЭЖХ: время удерживания 3,70 мин, 4е >99,5%.

¹Н ЯМР (400 МГц, СЭС13): 5н 8,72 (1Н, м, N 1С'1 ΙΝΙI). 5,29 (1Н, м, ОСН), 5,05 (0,5Н, д, 1=8,4 Гц, ССНХ), 4,89 (0,5Н, д, 1=7,6 Гц, ССНЯ), 4,59 (0,5Н, м, ЖЩСНв), 4,39 (0,5Н, м, ЖЩСНв), 3,97-3,85 (4Н, м, СН2ОСН2), 3,20 (1Н, м, ЖНАСНВ), 2,89 (3Н, с, СН38О3^-), 2,89-2,72 (2Н, м, ССН2СН₂К), 2,23-2,07 (3Н, м, СН(СН3)2, ОСН2СН2), 1,16 (3Н, д, 1=6,4 Гц, СН3) и 1,06-0,96 (3Н, м, СН₃).

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Применение (38)-тетрагидрофуран-3-ил-(48)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5с]пиридин-5-карбоксилата, или его гидрата, или его фармацевтически приемлемой соли для лечения боли.
2. Способ лечения боли, включающий введение субъекту, страдающему от боли, эффективного количества (38)-тетрагидрофуран-3-ил-(48)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5-с]пиридин-5карбоксилата, или его гидрата, или его фармацевтически приемлемой соли.
3. Применение (38)-тетрагидрофуран-3-ил-(48)-4-изопропил-1,4,6,7-тетрагидро-5Н-имидазо[4,5с]пиридин-5-карбоксилата, или его гидрата, или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для лечения боли.
4. Применение по п.1, где боль является воспалительной болью.
5. Применение по п.1, где фармацевтически приемлемой солью является мезилат.
6. Применение по п.1, где фармацевтически приемлемой солью является сульфат или его гидрат.
7. Способ по п.2, где боль является воспалительной болью.
8. Применение по п.3, где боль является воспалительной болью.

Действие соединения примера 1 на вызванную СЕА гиперальгезию у крыс

Ш СРЕДА

Ш ПРИМЕР 1 150 г/кг

И ПРИМЕР 1 250 г/кг

ЕЗ ПРИМЕР 1 500 г/кг га ИНДОМЕТАЦИН 10 мг/кг

Статистический анализ - АNОVА с последующим тестом плановых сравнений с использованием ШУ1УО8ТАТ * Р<0.05, ** Р<0.01, *** Р<0.001 значимое обращение гиперальгезии при сравнении со средой в каждый момент времени