EA032454B1 - Противогрибковый 4-(4-(4-(((3r,5r)-5-((1h-1,2,4-триазол-1-ил)метил)-5-(2,4-дифторфенил)тетрагидрофуран-3-ил)метокси)-3-метилфенил)пиперазин-1-ил)-n-(2-гидроксициклогексил)бензамид или его фармацевтически приемлемая соль - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к соединениям, как определено в описании, полезным при лечении микозов, к композициям, содержащим их, и их использованию в терапии.

Description

Изобретение относится к соединениям, как определено в описании, полезным при лечении микозов, к композициям, содержащим их, и их использованию в терапии.

032454 Β1

Область техники, к которой относится изобретение

Это изобретение относится к соединениям, полезным при лечении микозов, содержащим их композициям и их применению в терапии.

Уровень техники изобретения

За последние два десятилетия заболеваемость грибковыми инфекциями значительно возросла, а инвазивные формы являются ведущими причинами заболеваемости и смертности, особенно среди пациентов с ослабленным иммунитетом или иммуносупрессией. Диссеминированный кандидоз, аспергиллез легких и возникающие оппортунистические грибы являются наиболее распространенными агентами, вызывающими эти серьезные микозы. Особенностью грибов является то, что они способны генерировать внеклеточный матрикс (ЕСМ), который связывает их вместе и позволяет им прикрепляться к их субстратам ίη νίίτο или ίη νίνο. Эти биопленки служат для их защиты от враждебных сред иммунной системы хозяина и для сопротивления антимикробному уничтожению (Каиг апб 8шд11. 2013).

Аспергиллез легких может быть разделен на аспергиллез у пациентов, страдающих неинвазивным заболеванием в противоположность пациентам с инвазивным патологическим состоянием. Дополнительное подразделение используется для характеризации пациентов, которые демонстрируют аллергический компонент на аспергиллез (известный как АВРА; аллергический бронхоаспергиллез легких) по сравнению с пациентами, которые не демонстрируют. Факторы, провоцирующие аспергиллез легких, могут быть острыми, такими как воздействие высоких доз иммуносупрессивных лекарств или интубация в отделении интенсивной терапии. В качестве альтернативы, они могут быть хроническими, такие как предшествующая инфекция ТВ (Эсшипд е! а1. 2011а). Хронические аспергилловые легочные инфекции могут оставлять пациентов с обширным и долговременным повреждением легких, требуя лечения пероральными азоловыми лекарственные препаратами на протяжении всей жизни (Б1трег е! а1. 2011).

Растущий объем исследований показывает, что аспергиллез может играть важную роль в клинической астме (СЫкЫтЬа е! а1. 2012; Ракциа1оЦо е! а1. 2009). Более того, недавно опубликованная работа скоррелировала аспергиллез с более неблагоприятными клиническими исходами у пациентов с ХОБЛ (ВаГаб11е1 е! а1. 2013). Аналогичным образом поперечные исследования показали связь между наличием АкрегдШик крр. и Сапб1ба крр. в мокроте и ухудшением функции легких (Сйобгта11 е! а1. 2010; АдЬеШе е! а1. 2012).

Инвазивный аспергиллез (1А) демонстрирует высокую смертность у пациентов с ослабленным иммунитетом, например, у тех, кто подвергается трансплантации аллогенных стволовых клеток или трансплантации паренхиматозных органов (такой как трансплантация легких). Первый случай 1А, зарегистрированный у пациента с ослабленным иммунитетом, произошел в 1953 году. Это событие произошло одновременно с введением в схемы лечения кортикостероидов и цитотоксической химиотерапии (К.апкш, 1953). Инвазивный аспергиллез является является основной причиной для серьезной обеспокоенности при лечении лейкоза и других гематологических злокачественных заболеваний, учитывая высокую заболеваемость и связанную с ним смертность. Смертность обычно превышает 50% (Бш е! а1. 2001), а долгосрочные показатели могут достигать 90% у реципиентов трансплантированных аллогенных гемопоэтических стволовых клеток, несмотря на доступность пероральных леркственных препаратов триазолового ряда (8а1тегоп е! а1. 2012). У пациентов, перенесших трансплантацию паренхиматозных органов (особенно легких), использование высоких доз стероидов делает пациентов уязвимыми к инфекции (Тйотркоп и Рабегкоп, 2008), что является серьезной проблемой. Заболевание также возникает в популяциях пациентов с менее тяжело ослабленным иммунитетом. К ним относятся пациенты, страдающие основной ХОБЛ или циррозом, пациенты, получающие высокие дозы стероидов, и лица с центральными венозными катетерами или поддерживаемые аппаратной вентиляцией легких (ЭипороЫок е! а1. 2012).

Существующие противогрибковые лекарства преимущественно вводят в виде доз либо перорально, либо системно. Эти обычно используемые пути доставки недостаточны для лечения инфекций легких и дыхательных путей, поскольку концентрации лекарств, достигаемые в зоне инфекции, как правило, ниже, чем в органах. Это особенно важно для печени, которая представляет собой зону токсического действия: вплоть до 15% пациентов, лечащихся вориконазолом, страдают повышенными уровнями трансаминаз (Беуш с! а1. 2007; Ба1 и Тйотркоп, 2011). Воздействие на печень также приводит к значительными лекарственным взаимодействиям, возникающим в результате ингибирования печеночных ферментов Р450 (1еопд, е! а1. 2009; \Уех1ег е! а1. 2004).

Более того, широкое использование триазолов как в медицине, так и в сельском хозяйстве привело к растущему и проблематичному появлению резистентных микозов в некоторых локализациях (Оеппшд е! а1. 2011Ь; Во\\уег и Эеппшд, 2014).

Очевидно, что существует срочная медицинская потребность в новых противогрибковых лекарственных препаратах, которые обеспечивают улучшенную эффективность и лучшие профили общей переносимости.

- 1 032454

Сущность изобретения

В первом аспекте изобретение предоставляет соединение (I)

которое представляет собой 4-(4-(4-(((ЗВ,5В)-5-((1Н-1,2,4-триазол-1-ил)метил)-5-(2,4-дифторфенил)тетрагидрофуран-3-ил)метокси)-3-метилфенил)пиперазин-1-ил)-Ы-(2-гидроксициклогексил)бензамид, или его фармацевтически приемлемую соль (соединение изобретения).

Соединение (I) содержит два стереогенных центра в пределах 2-аминоциклогексанолового радикала и предоставлено в виде любого из его четырех возможных стереоизомеров, либо в виде единственного стереоизомера, либо в виде смеси стереоизомеров в любом соотношении (включая рацемические смеси).

В предпочтительном аспекте изобретение предоставляет соединение (I) в виде стереоизомера, выбранного из соединений (1а) и (1Ь), проиллюстрированных ниже, которые представляют собой два стереоизомера, полученных из энантиомеров транс-2-аминоциклогексанола, и его фармацевтически приемлемых солей

соединение к

В более предпочтительном аспекте изобретение предоставляет соединение (1а), изображенное ниже

которое представляет собой 4-(4-(4-(((ЗВ,5В)-5-((1Н-1,2,4-триазол-1-ил)метил)-5-(2,4-дифторфенил)тетрагидрофуран-3-ил)метокси)-3-метилфенил)пиперазин-1-ил)-Ы-((1К,2К.)-2гидроксициклогексил)бензамид или его фармацевтически приемлемую соль.

Соответственно, соединение (I), такое как соединение (1а), предоставлено в виде единственного стереоизомера.

Биологические данные, раскрытые в данном документе ниже, показывают, что соединение (I) и его стереоизомерное соединение (1а), в частности, являются мощными ингибиторами роста АвретдШив ГшшдаШв в анализах ίη νίίτο. У мышей с иммуносупрессией соединение (1а) продемонстрировало мощное подавление инфекций, вызванных АвретдШив ШпидаШв.

Краткое описание фигур

Фиг. 1 демонстрирует действие терапевтической обработки соединением (1а) на СБСГ в легких мышей в нейтропении с ослабленным иммунитетом, инфицированных АвретдШив ГигшдаШв.

Фиг. 2 показывает действие терапевтической обработки соединением (1а) на концентрации галактоманнана в сыворотке у мышей в нейтропении с ослабленным иммунитетом, инфицированных АвретдШив ГшшдаШв.

Фиг. 3 показывает действие терапевтической обработки соединением (1а) на содержание ДНК АвретдШив ГшшдаШв в легких мышей в нейтропении с ослабленным иммунитетом, инфицированных АвретдШив ГшшдаШв.

Подробное описание изобретения

Соединение изобретения может быть получено из коммерчески доступных исходных материалов посредством методики синтеза, представленной ниже (схема 1). Бухвальдская связь защищенного подходящим образом производного пиперазина с 4-бром-2-метилфенолом в условиях, обычно используемых для таких реакций, обеспечивает Ν-арилированный продукт 1. Подходящая аминозащитная группа (Р) для таких трансформаций представляет собой уретановую группу, такую как Вос группа (Р^С^Ви). Специалистам в данной области должно быть ясно, что для воздействия на трансформации такого рода могут быть использованы самые разнообразные условия. В частности,

-2032454 обычно в присутствии основания, например карбоната цезия или гексаметилдисилазида лития, используют палладиевые катализаторы и фосфиновые лиганды, такие как КиРЬобСЗ и КиР1ю5.

Не

Схема 1

I |к Ν-Ρ \ /

Мь

Бухвальдская связь

ОТ —НС1

Амидная связь

Реакция полученного в результате фенола 1 с соответствующим электронакцепторным производным ((ЗК,5К)-5-((1Н-1,2,4-триазол-1-ил)метил)-5-(2,4-дифторфенил)тетрагидрофуран-3ил)метанола (2, Х=ОН) в щелочных условиях приводит к образованию эфира 3. Примером такого соединения является соответствующий тозилат (2, Х=ОТ§), который легко доступен с высокой энантиомерной чистотой из коммерческих источников. Хотя тозилат является иллюстративным, X также может быть альтернативной уходящей группой, такой как галоген, обычно хлор. Селективное удаление аминозащитной группы открывает монозамещенный пиперазин 4. В случае производного Вос (Р^ССЬВи). стадию снятия защиты обычно проводят путем воздействия карбамата на сильную минеральную кислоту или сильную органическую кислоту, такую как ТРА, либо неразбавленную, либо в присутствии растворителя, такого как БСМ.

Вторая Бухвальдская связь амина 4 с алкил 4-бромбензоатом в щелочных условиях и содействии катализатора приводит к образованию Ν, Ν'-бисарилированного продукта 5, в котором В' представляет низший алкил, такой как алкил С] .5, например, метил или этил. Омыление эфира 5 обычно проводят путем обработки основанием, таким как гидроксид щелочного металла, в смеси воды и подходящего смешивающегося с водой растворителя. Реакция кислотного продукта 6 с 2-аминоциклогексанолом в стандартных условиях соединения амидов, широко доступных в данной области, предоставляет соединение (I). Каждый из четырех отдельных стереоизомеров соединения (I) может быть получен с использованием соответствующего единственного стереоизомера 2-аминоциклогексанола. Каждый из соответствующих стереоизомеров 2-аминоциклогексанола коммерчески доступен с высокой стереоизомерной чистотой.

Защитные группы и средства для их удаления описаны в Рго1ссН\ с Сгоирк ίη Огдашс 8уШ11С515 Тйсобога XV. Огеепе и Рс1сг 6. М. \Уи15. опубликованной ίοΐιη XVИсу & 80115 1ис; 4ί1ι Кс\ Еб. 2006,18ΒΝ10: 0471697540. Обзор методологий получения амидов описан в Апйбе Ьоиб Ропиабои апб рерббе соирйпд Моп1а1ЬсШ. Ο.Α.Ο.Ν. и Ракре, V. Тс1га11сбгоп. 2005, 61, 10827-10852.

Фармацевтически приемлемые соли соединений формулы (I) включают, в частности, фармацевтически приемлемые соли присоединения кислот указанных соединений. Фармацевтически приемлемые соли присоединения кислот соединений формулы (I) включают терапевтически активные нетоксичные соли присоединения кислот, которые могут образовывать соединения формулы (I). Эти фармацевтически приемлемые соли присоединения кислот могут быть легко получены путем обработки формы свободного основания такими подходящими кислотами в подходящем растворителе или смеси растворителей. Соответствующие кислоты включают, например, неорганические кислоты, такие как галогеноводородные кислоты, например, соляная или бромистоводородная кислота, серная, азотная, фосфорная кислоты и т.п.; или органические кислоты, такие как, например, уксусная, пропановая, гидроксиуксусная, молочная, пировиноградная, малоновая, янтарная, малеиновая, фумаровая, яблочная, винная, лимонная, метансульфоновая, этансульфоновая, бензолсульфоновая, п-толуолсульфоновая, цикламовая, салициловая, п-аминосалициловая, памовая кислота и т.п.

И наоборот, указанные солевые формы могут быть превращены путем обработки подходящим основанием в форму свободного основания.

Определение соединения (I) подразумевает включение всех таутомеров указанного соединения.

Как термин используется в данном документе, единственный стереоизомер соединения (I) представляет собой стереоизомер, предоставленный в форме как высокой диастереомерной, так и высокой энантиомерной чистоты, т.е. по существу не содержащий другие три стереоизомера соединения (I), которые возникают в результате присутствия в них 2-аминоциклогексанолового радикала. Обычно единственный стереоизомер составляет по меньшей мере 98, 99, 99,5 или 99,9% м/м содержания соединения (I) (т.е. другие стереоизомеры составляют менее чем 2, 1, 0,5 или 0,1% м/м содержания соединения (I).

Определение соединения (I) имеет в виду, что оно включает все сольваты указанного соединения (включая сольваты солей указанного соединения) если контекст конкретно не указывает на иное. Примеры сольватов включают гидраты.

Соединение раскрытия включает варианты осуществления, в которых один или более определенных атомов являются изотопами природного происхождения или неприродного происхождения. В одном варианте осуществления изотоп представляет собой стабильный изотоп. Таким образом, соединения раскрытия включают, например, содержащие дейтерий соединения и т.п.

Раскрытие также распространяется на все полиморфные формы соединения, определенного в данном документе.

Новые промежуточные продукты, как описано в данном документе, такие как соединения формулы (3), (4), (5) и (6) и их соли, составляют дополнительный аспект изобретения. Соли включают фармацевтически приемлемые соли (такие как соли, упомянутые выше) и соли, не являющиеся фармацевтически приемлемыми. Соли кислот (например, карбоновых кислот) включают соли металлов первой и второй группы, включая соли натрия, калия, магния и кальция.

В варианте осуществления предоставлена фармацевтическая композиция, содержащая соединение изобретения необязательно в комбинации с одним или более фармацевтически приемлемыми разбавителями или носителями.

Соответственно соединение изобретения вводят местно в легкие или нос, в частности местно в легкие. Таким образом, в варианте осуществления предоставлена фармацевтическая композиция, содержащая соединение изобретения необязательно в комбинации с одним или более местно приемлемыми разбавителями или носителями.

Подходящие композиции для легочного или интраназального введения включают порошки, жидкие растворы, жидкие суспензии, капли в нос, содержащие растворы или суспензии или аэрозоли под давлением или не под давлением.

Композиции можно удобно вводить в стандартной лекарственной форме и можно получать любыми способами, хорошо известными в фармацевтической области, например, как описано в КстшдЮпБ Рйаттасеи11са1 8аспсс5. 17(Н ед., Маск РиЫЫппд Сотрапу, ЕаЧоп. РА. (1985). Композиции также можно удобно вводить в лекарственной форме со структурно обособленными единицами.

Местное введение в нос или в легкие можно обеспечить посредством использования готовой формы не под давлением, такой как водный раствор или суспензия. Такие готовые формы можно вводить посредством небулайзера, например небулайзера, который может быть переносным и портативным или для применения дома или в больнице (т.е. непортативным). Примером устройства является ингалятор КЕ8РГМАТ. Готовая форма может содержать эксципиенты, такие как вода, буферы, регулирующие тоничность агенты, регулирующие рН агенты, модификаторы вязкости, поверхностно-активные вещества и сорастворители (такие как этанол). Суспензионные жидкие и аэрозольные готовые формы (под давлением ли или не под давлением) будут обычно содержать соединение изобретения в мелко измельченной форме, например с Ό₅₀, составляющим 0,5-10 мкм, например приблизительно 1-5 мкм. Распределение частиц по размеру может быть представлено с применением значений ϋ₁₀, О₅₀ и Ό₉₀. Срединное значение распределения частиц по размеру Ό₅₀ определяется как размер частиц в микрометрах, который делит распределение пополам. Измерение, полученное с помощью лазерной дифракции, более точно описывается как распределение объема и, следовательно, значение Ό₅₀, полученное с использованием этой процедуры, более содержательно называется значение Όν₅₀ (срединное для объема распределения). Как используется в данном документе, значения Όν относятся к распределению частиц по размеру, измеренному с применением лазерной дифракции. Аналогичным образом, значения ϋ₁₀ и Ό₉₀, используемые в контексте лазерной дифракции, взяты для обозначения значений Όνι₀ и Όν₉₀ и относятся к размеру частиц, когда 10% распределения лежит ниже значения ϋ₁₀, и 90% распределения лежит ниже значения Ό₉₀ соответственно.

Согласно одному конкретному аспекту изобретения, предоставлена фармацевтическая композиция, содержащая соединение изобретения в форме частиц, суспендированных в водной среде. Водная среда обычно содержит воду и один или более эксципиентов, выбранных из буферов, регулирующих

- 4 032454 тоничность агентов, регулирующих рН агентов, модификаторов вязкости и поверхностно-активных веществ.

Местное введение в нос или легкие также можно обеспечить посредством использования аэрозольной готовой формы. Аэрозольные готовые формы обычно содержат активный ингредиент, суспендированный или растворенный в подходящем аэрозольном пропелленте, таком как хлорфторуглерод (СЕС) или гидрофторуглерод (НЕС). Подходящие СЕС пропелленты включают трихлормонофторметан (пропеллент 11), дихлортетрафторметан (пропеллент 114) и дихлордифторметан (пропеллент 12). Подходящие НЕС пропелленты включают тетрафторэтан (НЕС-13 4а) и гептафторпропан (НЕС-227). Пропеллент обычно составляет 40-99,5%, например 40-90% от веса общей композиции для ингаляций. Готовая форма может содержать эксципиенты, включая сорастворители (например, этанол) и поверхностно-активные вещества (например, лецитин, сорбитан триолеат и т.п.). Другие возможные эксципиенты включают полиэтиленгликоль, поливинилпирролидон, глицерин и т.п. Аэрозольные готовые формы упаковываются в канистры, и подходящая доза доставляется с помощью дозирующего клапана (например, как поставляется Векрак, Уа1о18 или 3М или в качестве альтернативы Ар1ат, С’оЫег или Уап).

Местное введение в легкие также можно обеспечить посредством использования готовой формы в виде сухого порошка. Готовая форма в виде сухого порошка будет содержать соединение раскрытия в мелко измельченной форме, обычно с ММЭ, составляющим 1-10 мкм или Ό₅₀, составляющим 0,5-10 мкм, например приблизительно 1-5 мкм. Порошки соединения изобретения в мелко измельченной форме могут быть получены посредством способа микронизации или аналогичным способом уменьшения размера. Микронизация может быть выполнена с применением струйной мельницы, такой как струйная мельница, произведенная Нококатеа А1рше. Полученное в итоге распределение частиц по размерам может быть измерено с применением лазерной дифракции (например, инструментом Макет Ма81ег81/ег 20008). Готовая форма будет обычно содержать приемлемый в большинстве случаев разбавитель, такой как лактоза, глюкоза или маннитол (предпочтительно лактоза), обычно со сравнительно большим размером частиц, например, ММЭ, составляющим 50 мкм или более, например, 100 мкм или более или Ό₅₀, составляющим 40-150 мкм. Как используется в данном документе, термин лактоза относится к содержащему лактозу компоненту, включая моногидрат а-лактозы, моногидрат β-лактозы, безводную галактозу, безводную β-лактозу и аморфную лактозу. Компоненты лактозы могут быть обработаны посредством микронизации, просеивания, размалывания, прессования, агломерирования или сушки распылением. Коммерчески доступные формы лактозы в различных формах также включают, например, продукты Ьас!ойа1е® (лактоза категории для ингаляций; ЭЕЕ Рйатта), 1ийаЕас®70 (просеянная лактоза для ингалятора сухого порошка; Медд1е), РйагтаЮке® (ЭЕЕ Рйатта) и Кекрйоке® (просеянная лактоза категории для ингаляций; ЭЕЕ Рйатта). В одном варианте осуществления лактозный компонент выбирают из группы, состоящей из моногидрата а-лактозы, безводной а-лактозы и аморфной лактозы. Предпочтительно, лактоза представляет собой моногидрат а-лактозы.

Готовые формы в виде сухого порошка также могут содержать другие эксципиенты, такие как стеарат натрия, стеарат кальция или стеарат магния.

Готовая форма в виде сухого порошка обычно доставляется с применением устройства ингалятора сухого порошка (ИР1). Иллюстративные системы доставки сухого порошка включают ^РГПНАЬЕК, 1)18КНАЕЕ1С ТиВВОНАЬЕК, ΌΙ8Κυ8, 8КУЕНАЬЕК, АССиНАЬЕК. и СЫСКНАЬЕВ. Дополнительные примеры систем доставки сухого порошка включают ЕСЫР8Е, ЕСЫР8Е, ΝΞΧΤ. ЕОТАНАГЕР. НАПШНАЬЕК, АЕВОЬ18ЕВ, СУСЬОНАЬЕК, ВНЕЕ/НАЬЕКЫЕОНАВЕН, МО^ПО8Е, ЕЬОАСАР8, ТАШСАР8, Х-САР8, ТиКВО8РПУ ЕЬРЕ1\1НАЕЕК, М1АТНАЬЕВ, ТА18ТНАЬЕВ, ТС)СС)В1/Е1Г РКЕ88А1В, ЕЬЫРТА, ингалятор сухого порошка ОКГЕЬ, М1СНОПО8Е, РиЬУШАЬ, ЕА8УНАЬЕК, иЬТКАНАЬЕК, ТА1ЕиН РиЬМОЕЕТ, ОММНАЬЕК, СУКОНАЬЕВ, ТАРЕН, СОМХ, ХСЕВОСА1Н и РВОНАЬЕВ.

Соединение изобретения полезно при лечении микозов и для предотвращения или лечения заболевания, ассоциированного с микозами.

В аспекте изобретения предоставлено применение соединения изобретения в производстве лекарственного средства для лечения микозов и для предотвращения или лечения заболевания, ассоциированного с микозами.

В другом аспекте изобретения предоставлен способ лечения пациента с микозом, который включает введение указанному пациенту эффективного количества соединения изобретения.

В другом аспекте изобретения предоставлен способ предотвращения или лечения заболевания, ассоциированного с микозами, у больного, который включает введение указанному пациенту эффективного количества соединения изобретения.

В частности, микозы могут быть вызваны АкретдШик крр., такими как АкретдШик ГишщаШк.

Заболеванием, ассоциированным с микозом, является, например, аспергиллез легких.

Соединение изобретения можно использовать с профилактической целью посредством введения указанного соединения до начала микоза.

- 5 032454

Больные включают больных людей и животных, главным образом больных людей.

Соединение изобретения особенно полезно для лечения микозов, таких как инфекция АкретдШик £иш1даки8, и для предотвращения или лечения заболевания, ассоциированного с микозами, такого как инфекция ЛкрегдШик ГитфаШх у людей с риском развития. Люди с риском развития включают недоношенных новорожденных, детей с врожденными пороками развития легких или сердца, людей с ослабленным иммунитетом (например, людей, страдающих ВИЧ-инфекцией), астматиков, людей с кистозным фиброзом, пожилых людей и людей, страдающих от хронических сердечных патологических состояний, поражающих сердце или легкие (например, застойную сердечную недостаточность или хроническое обструктивное заболевание легких).

Соединение изобретения полезно для лечения других микозов (и предотвращения или лечения заболевания, ассоциированного с ними), включая микозы, вызванные АигеоЬаДдшт ри11и1ап8, Βΐιίζορι.15 огухас. Стур1ососси8 пеоГоттапк, Сйае1от1тит ДоЬошт. РешсШшт сйтукодеиит, Ршагшт дгаттсгагит. С1адо8рогшт йегЬагит, Тпс1юр11у1оп гиЬгит, СапдЛа §рр., например, СапФда а1Ь1сап§, СапФда ДаЬга1а и СапдЛа кги5С1 и другими АкретдШш §рр. напр., АкретдШш Г1ауи5.

Ожидается, что соединение изобретения будет полезно при лечении азолорезистентных микозов (и профилактики или лечения ассоциированных с ним заболеваний), например, вызванных азолорезистентными АкретдШш §рр. напр., АкретдШш £ит1да1и8.

Соединение изобретения можно вводить в комбинации со вторым или дополнительным активным ингредиентом. Второй или дополнительные активные ингредиенты могут, например, быть выбраны из других противогрибковых агентов, включая азоловые противогрибковые агенты (такие как вориконазол или позаконазол), амфотерицин В, эхинокандин (такой как каспофунгин) и ингибитор 3-гидрокси-3метил-глютарил-СоА редуктазы (такой как ловастатин, правастатин или флувастатин). Другие примеры подходящих азоловых противогрибковых агентов включают итраконазол и изавуконазол.

Второй или дополнительно активный ингредиент, например, может быть выбран из вориконазола, позаконазола, итраконазола и каспофунгина.

Второй или дополнительные активные ингредиенты включают активные ингредиенты, подходящие для лечения или предотвращения микоза, такого как инфекция АкретдШик ГитфаШх или заболевание, ассоциированное с микозом, такое как инфекция АкретдШик ГшшдаШх или состояния, сопутствующие микозу, такому как инфекция АкретдШик Гшпщаи.15.

Соединение изобретения может быть составлено совместно со вторым или дополнительным активным ингредиентом, или второй или дополнительный активный ингредиент может быть составлен для раздельного введения одним или различными путями.

Например, соединение изобретения можно вводить пациентам, уже системно лечившимся противогрибковым препаратом, таким как вориконазол или позаконазол или, в качестве альтернативы, итраконазол или изавуконазол.

Например, соединение изобретения может быть составлено совместно с одним или более агентами, выбранными из амфотерицина В, эхинокандина, такими как каспофунгин, и ингибитором 3-гидрокси-3метил-глютарил-СоА редуктазы, таким как ловастатин, правастатин или флувастатин.

Согласно аспекту изобретения, предоставлен набор частей, содержащий (а) фармацевтическую композицию, содержащую соединение изобретения необязательно в комбинации с одним или более разбавителями или носителями; (Ь) фармацевтическую композицию, содержащую второй активный ингредиент необязательно в комбинации с одним или более разбавителями или носителями; (с) необязательно одну или более дополнительных фармацевтических композиций, каждая из которых содержит третий или дополнительный активный ингредиент необязательно в комбинации с одним или более разбавителями или носителями; и (д) инструкции для введения фармацевтических композиций нуждающемуся в них пациенту. Нуждающийся в них пациент может страдать или у него может подозреваться микоз, такой как инфекция АкретдШик Гшпщаи.15.

Соединение изобретения можно вводить с подходящим интервалом, например один раз в день, дважды в день, три раза в день или в четыре раза в день.

Ожидается, что подходящая величина дозы для человека среднего веса (50-70 кг) составляет приблизительно от 50 мкг до 10 мг/день, например от 500 мкг до 5 мг/день, хотя точную дозу, подлежащую введению, может определить специалист в данной области.

Ожидается, что соединение изобретения имеет один или более из следующих благоприятных качеств:

мощная противогрибковая активность, особенно активность против АкретдШик §рр., например, АкретдШик 1ит1да1е8, особенно после местного введения в легкие или нос;

большая продолжительность действия в легких, предпочтительно соответствующая одному введению дозы в сутки;

незначительное системное воздействие после местного введения в легкие или нос; и приемлемый профиль безопасности, особенно после местного введения в легкие или нос.

- 6 032454

Экспериментальный раздел

Сокращения, используемые в данном документе, определены ниже (табл. 1). Любые не определенные сокращения предназначены для передачи их общепринятого значения.

АВРА	Таблица 1 Сокращения аллергический бронхоаспергиллез легких
	водный
АТСС	американская коллекция типовых культур
ВАЬР	бронхоальвелолярная промывная жидкость
ВЕА82В	эпителий бронхов+гибрид аденовируса 12-8У40, линия 2В
Вос	трет-бутилоксикарбонил
Ьг	широкий
В8А	бычий сывороточный альбумин
СС50	концентрация цитотоксичности 50% клеток
сри	колониеобразующая единица (единицы)
СЬ81	Институт клинических и лабораторных стандартов
СО1	индекс отсечки
сопс	концентрация
б	двойная частица
ЭСМ	дихлорметан
ЭМАР	4-диметиламинопиридин
ЭМЕМ	среда Игла, модифицированная по способу Дульбекко
ЭМР	Ν,Ν-диметилформамид
ЭМ8О	диметилсульфоксид
ΩΝΛ	дезоксирибонуклеиновая кислота
Ό88	декстрансульфат натрия
ЕВМ	базовая среда для эндотелиальных клеток
ЕСМ	экстрацеллюлярный матрикс
ЕЭС1	1-этил-3 -(З-диметиламинопропил)карбодиимид
ее	энантиомерный избыток
ЕСМ	ростовая среда для эндотелиальных клеток
ЕИСА8Т	Европейский комитет по тестированию чувствительности к антимикробным препаратам
(Е8+)	электрораспылительная ионизация, положительный режим
ЕЮАс	этилацетат
РАМ	6-флуоресцеин амидит
РВ8	фетальная бычья сыворотка
СМ	галактоманнан
ч	час (часы)

- 7 032454

НРАЕС	первичные эндотелиальные клетки легочной артерии человека
ΙΑ	инвазивный аспергиллез
ί.η. ί.ί.	интраназальный интратрахеальный
ЬС- Μ8/Μ8	жидкостная хроматография-масс-спектрометрия
Ь1 Нер	литий-гепарин
ΕίΗΜΌδ	бис-(триметилсилил)амид лития
(Μ+Η)+	протонированный молекулярный ион
ΜΌΑ	малондиальдегид
Μе	метил
ΜеСN	ацетонитрил
ΜеΟΗ	метанол
ΜΗζ	мегагерц
Μ^50	50% минимальной подавляющей концентрации
Μ^75	75% минимальной подавляющей концентрации
ΜΙΟχ)	90% минимальной подавляющей концентрации
мин	минута (минуты)
ΜΜΌ	средний массовый диаметр
ΜΟΙ	множественное заражение
ΜΘΡ8	3-(№морфолино)пропансульфоновая кислота
т/ζ	отношение массы к заряду
ΝΕΤΕ	национальная коллекция патогенных грибов
ЯМР	ядерно-магнитный резонанс (спектроскопия)
ΝΤ	не протестирован
ΟΌ	оптическая плотность
ΡΒ8	фосфатно-буферный солевой раствор
РСК	полимеразная цепная реакция
Ρ	защитная группа
α	квартет
ΒΤ	комнатная температура
ВР НРЬС	обращенно-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография
ΒΡΜΙ	среда Ко8ме11 Рагк Актона! ИиШик
ВиРЙО8	2-дициклогексилфосфино-2',6'-диизопропоксибифенил
ВиРйозб 3	(2-дициклогексилфосфино-2',6'-диизопропоксибифенил) [2-(2'-амино-1,1'-бифенил)]- палладий (II) метансульфонат
8	синглет
за!	насыщенный

- 8 032454

8С	подкожный
δϋδ	додецилсульфат натрия
1	триплет
ТАМПА.	тетраметил-6-карбоксиродамин
ТЕ	трис-ΕϋΤΑ (этилендиаминтетрауксусная кислота)
ТЕА	трифторуксусная кислота
ТНЕ	тетрагидро фуран
ТК34/Ь 98Н	штамм А. ГшшдаШк, содержащий замещение лейцина на гистидин в кодоне 98 и 34Ьр тандемных повторов
ΤΚ46/Υ 121Е/Т 289А	штамм А. ГшшдаШк, содержащий замещение тирозина на фенилаланин в кодоне 121, замещение треонина на аланин в кодоне 289 и тандемных повторов 46 пар оснований
νοί	объем (объемы)

Общие процедуры

Все реагенты и растворители были получены либо из коммерческих источников, либо получены согласно литературным ссылкам. Если не указано иное, все реакции проходили при перемешивании. Органические растворы обычно сушили над безводным сульфатом магния.

Аналитические методы

Методы обращенно-фазовой ВЭЖХ.

Колонку \Уа1сг5 Х§е1ес1 С8Н С18 ХР, 2,5 мкМ (4,6x30 мм) при 40°С; скорость потока 2,5-4,5 мл-мин'¹ элюировали с градиентом Н2О-МеС1\Г, содержащим либо 0,1% о/о муравьиной кислоты, (способ 1а), либо 10 мм ИНдНСОз в воде (способ 1Ь) в течение 4 мин с использованием УФ-детектирования при 254 нм. Информация о градиенте: 0-3,00 мин, линейно изменялся от 95% Н2О-5% ΜεΟΝ до 5% Н2О-95% Μο6Ν: 3,00-3,01 мин, сохранялся при 5% Н2О-95% МсСН скорость потока увеличивалась до 4,5 мл-мин 3,01-3,50 мин, сохранялся при 5% Н2О-95% Μο6Ν: 3,50-3,60 мин, возвращался к 95% Н2О-5% Μο6Ν. скорость потока снизилась до 3,50 мл-мин'¹; 3,60-3,90 мин, сохранялся при 95% Н2О-5% ΜοΕ’Ν: 3,90-4,00 мин, сохранялся при 95% Н₂О-5% МсСН скорость потока снизилась до 2,5 мл-мин'¹.

¹Н ЯМР-спектроскопия.

Ή Спектры ЯМР были получены на спектрометре Вгикег Аскапсс III при 400 МГц с использованием в качестве эталона остаточного недейтеринизированного растворителя и, если не указано иное, проводили в ΟΜδΟ-ά₆·

Получение соединений (1а-<1): стереоизомеры соединения (I).

Ранее сообщалось о синтезах оптически чистых цис- и транс-2-аминогексинолов ЦасоЬкеи с1 а1. 1997). Эти материалы доступны в высокой энантиомерной чистоте из многочисленных коммерческих источников и используются в поставляемом виде.

трет-Бутил 4-(4-гидро кси-3 -метилфенил)пиперазин-1 -карбоксилат.

Колбу, наполненную трет-бутилпиперазин-1-карбоксилатом (19,1 г, 103 ммоль), 4-бром-2метилфенол (16,0 г, 86,0 ммоль), КиРйок (798 мг, 1,71 ммоль) и КиРйок 63 (1,43 г, 1,71 ммоль) три раза опорожняли и вновь заполняли азотом. Через канюлю добавляли раствор Ь1НМО8 (1 М в ТНЕ, 257 мл, 257 ммоль) и реакционную смесь нагревали при 70°С в течение 3 ч. После охлаждения до КТ реакцию в смеси останавливали посредством добавления 1 М водного раствора соляной кислоты (400 мл) при 0°С, а затем нейтрализовали насыщенным водным раствором ХаНСО₃ (400 мл). Слой ад экстрагировали ЕЮАс (1x400 мл, затем 2x200 мл) и объединенные органические экстракты промывали солевым раствором (500 мл) и сушили. Летучие вещества удаляли в вакууме с получением неочищенного продукта, который растирали в диэтиловом эфире: гексане (2:1) (750 мл) и собирали посредством фильтрования с получением указанного в заголовке соединения, промежуточного соединения 1, в виде розового твердого вещества (20,7 г, 76%); К¹2,07 мин (способ 1Ь); ш/ζ 293 (М+Н)⁺ (Е8⁺);

-9032454 ^!Н ЯМР δ: 1,41 (9Н, 8), 2,07 (ЗН, δ), 2,86-2,88 (4Н, ш), 3,41-3,43 (4Н, ш), 6,58-6,66 (2Н, ш), 6,71 (1Н, б) и 8,73 (1Н, 8).

1-(4-(((ЗК,5К)-5-((1Н-1,2,4-Триазол-1-ил)метил)-5-(2,4-дифторфенил)тетрагидрофуран-3ил)метокси)-3-метилфенил)пиперазин.

К раствору промежуточного соединения 1 (21,5 г, 66,1 ммоль) в ЭМ8О (408 мл) добавляли водный раствор гидроксида натрия (28,3 мл, 3,5 М, 99,0 ммоль). Смесь перемешивали при КТ в течение 30 мин, а затем частями обрабатывали ((3§,5К)-5-((1Н-1,2,4-триазол-1-ил)метил-5-(2,4-дифторфенил)тетрагидрофуран-3-ил)метил4-метилбензолсульфонатом 2 (ех АРКйст. номер по каталогу: АС-8330, 32,7 г, 72,7 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 30°С в течение 18 ч, охлаждали до КТ и добавляли воду (600 мл). Полученную в результате смесь экстрагировали ЕЮАс (3x500 мл) и объединенные органические экстракты промывали за! ас| ΝηΗΕΌ;, (2x500 мл) и солевым раствором (500 мл), а затем сушили и выпаривали в вакууме, получая коричневое масло (приблизительно 41 г). Анализ неочищенного, Ν-Вос-защищенного продукта 3 с помощью 'Н ЯМР показал, что он содержит приблизительно 10 мол.% продукта элиминирования алкена: (К)-1-((2-(2,4-дифторфенил)-4метилентетрагидрофуран-2-ил)метил)-1Н-1,2,4-триазол [А], вместе с некоторыми не участвовавшими в реакции исходными материалами. Этот неочищенный продукт использовали в последующей стадии без очистки.

Неочищенный уретан 3 переносили в ЭСМ (260 мл) и обрабатывали ТЕ А (76,0 мл, 991 ммоль). Через 2 ч при КТ реакционную смесь концентрировали в вакууме для удаления большей части летучих веществ, а затем разбавляли ЭСМ (200 мл) и тщательно нейтрализовали за! ас, ЫаНСОз (500 мл) до рН 7, что приводило к образованию эмульсии. Смесь подкисляли до рН 1 добавлением 1 М хлористоводородной кислоты (250 мл) и добавляли ЭСМ (350 мл) с образованием двухфазной смеси (два слоя), ас| фазу отделяли и сохраняли, а органическую фазу экстрагировали 1 М соляной кислотой (800 мл). Объединенные ас| слои подщелачивали добавлением 2 М водного раствора гидроксида натрия (500 мл) до рН 14, а затем экстрагировали ЕЮАс (3x500 мл). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором (2000 мл), а затем сушили и выпаривали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения 4 в виде вязкого коричневого масла (24,6 7г, 78%); К¹ 1,46 мин (способ 1а); ш/ζ 470 (М+Н)⁺ (Е§⁺);

^!Н ЯМР δ: 2,07 (ЗН, δ), 2,15 (1Н, бб), 2,36-2,42 (1Н, ш), 2,52-2,56 (1Н, ш), 2,79-2,81 (4Н, ш), 2,87-2,90 (4Н, ш), 3,66 (1Н, бб), 3,73-3,77 (2Н, ш), 4,04 (1Н, !), 4,57 (2Н, бб), 6,64 (1Н, бб), 6,70-6,75 (2Н, ш), 6,99 (1Н, !б), 7,25-7,33 (2Н, ш), 7,76 (ΙΗ, δ) и 8,34 (ΙΗ, δ).

Метил 4-(4-(4-(((ЗК,5К)-5-((1Н-1,2,4-триазол-1-ил)метил)-5-(2,4-дифторфенил)тетрагидрофуран-3ил)метокси)-3 -метилфенил)пиперазин-1 -ил)бензоат.

Колбу, наполненную промежуточным соединением 4 (19,1 г, 40,7 ммоль), метил-4-бромбензоатом (10,5 г, 48,8 ммоль), КиРйоз (0,38 г, 0,81 ммоль, 2 моль%), КиРйозСЗ (0,68 д, 0,81 ммоль, 2 моль%) и карбонатом цезия (21,2 г, 65,1 ммоль), три раза опорожняли и вновь заполняли азотом перед добавлением ЭМЕ (500 мл). Смесь нагревали при 90°С в течение 18 ч, охлаждали до КТ и вливали в воду (300 мл). Полученное в результате твердое вещество собирали посредством фильтрования и промывали водой (3x100 мл) и этиловым эфиром (3x75 мл), а затем сушили в вакууме при 50°С для получения указанного в заголовке соединения 5 в виде твердого вещества бежевого цвета (22,8 г, 89%); К¹ 2,56 мин (способ 1а); ш/ζ 604 (М+Н)⁺ (Е§⁺);

-10032454 ^!Н ЯМР δ: 2,09 (ЗН, 8), 2,16 (ΙΗ, 66), 2,36-2,42 (1Н, ш), 2,53-2,57 (1Н, ш), 3,11-3,13 (4Н, ш), 3,43-3,46 (4Н, ш), 3,67 (ΙΗ, 66), 3,74-3,79 (5Н, 8 наложение на ш), 4,04 (ΙΗ, 66), 4,58 (2Н, 66), 6,75 (2Н, Ьг 8), 6,85 (1Н, Ьг б), 7,00 (1Н, 46), 7,04 (2Н, б), 7,27-7,34 (2Н, ш), 7,77 (1Н, 8), 7,81 (2Н, б) и 8,35 (1Н, з).

4-(4-(4-(((ЗК,5К)-5-((1Н-1,2,4-Триазол-1-ил)метил)-5-(2,4-дифторфенил)тетрагидрофуран-3ил)метокси)-3 -метилфенил)пиперазин-1 -ил)бензойная кислота.

К суспензии промежуточного соединения 5 (22,8 г, 37,8 ммоль) в БМ8О (1000 мл) добавляли раствор гидроксида лития (4,52 г, 188 ммоль) в воде (100 мл). Смесь нагревали при 70°С в течение 22 ч, а затем охлаждали до КТ, вливали в воду (1000 мл) и подкисляли до рН 2 посредством добавления 1 М соляной кислоты (300 мл). Смесь охлаждали в ванной со льдом в течение 2 ч, а полученный в результате осадок собирали посредством фильтрации. Отфильтрованный осадок промывали водой (2x200 мл) и диэтиловым эфиром (4x200 мл). Неочищенное твердое вещество растирали с ТНР (150 мл), собирали посредством фильтрования, а затем промывали диэтиловым эфиром (3x100 мл) и сушили в вакууме при 50°С для получения указанного в заголовке соединения 6 в виде почти белого твердого вещества (19,7 г, 88%); К¹2,28 мин (способ 1а); ш/ζ 590 (М+Н)⁺ (Е8Ц;

^!Н ЯМР δ: 2,09 (ЗН, 8), 2,16 (1Н, 66), 2,36-2,42 (1Н, ш), 2,52-2,58 (1Н, ш), 3,11-3,14 (4Н, ш), 3,41-3,44 (4Н, ш), 3,67 (1Н, 66), 3,74-3,79 (2Н, ш), 4,04 (1Н, 66), 4,58 (2Н, 66), 6,75 (2Н, Ьг в), 6,85 (1Н, Ьг 6), 6,977,03 (ЗН, ш), 7,26-7,34 (2Н, ш), 7,77-7,80 (ЗН, ш), 8,34 (1Н, в) и 12,32 (1Н, в).

Соединение (1а): 4-(4-(4-(((ЗК,5К)-5-((1Н-1,2,4-триазол-1-ил)метил)-5-(2,4-дифторфенил)тетрагидрофуран-3 -ил)метокси)-3 -метилфенил)пиперазин-1 -ил)-Ы-(( 1δ,28)-2-гидроксицикло гексил)бензамид.

К смеси промежуточного соединения 6 (100 мг, 0,17 ммоль), ЕОС1 (65 мг, 0,34 ммоль) и БМАР (2,07 мг, 0,017 ммоль) в пиридине (1,0 мл) добавляли (18,28)-2-аминоциклогексанола гидрохлорид (51,4 мг, 0,34 ммоль). Реакционную смесь взбалтывали при комнатной температуре в течение 16 ч, а затем разбавляли БСМ (8,0 мл) и промывали 1 М соляной кислотой (2,0 мл). Смесь пропускали через фазовый сепаратор и органические вещества выпаривали в вакууме. Полученный таким образом неочищенный продукт очищали посредством колоночной флэш-хроматографии (δίθ₂, 12 г, 0-5% МеОН в ЕЮАс, градиентное элюирование) с получением указанного в заголовке соединения (1а) в виде белого твердого вещества (75 мг, 64%).

Получение соединений (1Ь-16).

Остальные примеры соединений изобретения получали аналогичным образом путем соединения промежуточного соединения 6 бензойной кислоты с соответствующим единственным стереоизомером 2аминоциклогексанола. Эти соединения легко доступны из коммерческих источников. Материалы, полученные от 8щта А16пс11. поставлялись в виде гидрохлоридных солей, для которых были указаны следующие энантиомеры: (18,28) транс-изомер, >98% ее; (1К,2К) транс-изомер, >98% ее; (1Κ,2δ) цисизомер>97% ее; (1δ,2К) цис-изомер, >97% ее.

Спектральные данные ЬСМ8 и 'Н ЯМР для примеров соединений (1а-16) представлены ниже (табл. 2).

-11 032454

Таблица 2 Аналитические и спектральные данные для соединений изобретения

К	№ примера, наименование, данные ЬСМ8 и ЯМР
но гО	1а: 4-(4-(4-(((ЗК,5К)-5-((1Н-1,2,4-триазол-1-ил)метил)-5-(2,4- дифторфенил)тетрагидрофуран-3 -ил)метокси) -3 -метилфенил)пиперазин-1 ил)-М-((18,28)-2-гидроксициклогексил)бензамид. К12,15 мин (способ 1а); ш/ζ 687 (М+Н)+ (Е8+); Ή ЯМР 5:1,15-1,28 (4Н, ш), 1,61-1,65 (2Н, ш), 1,82-1,92 (2Н, ш), 2,10 (ЗН, 8), 2,16 (ΙΗ, άά), 2,37-2,43 (1Н, ш), 2,52-2,58 (1Н, ш), 3,12-3,15 (4Н, ш), 3,36-3,43 (5Н, ш), 3,55-3,62 (1Н, ш), 3,68 (ΙΗ, άά), 3,74-3,79 (2Н, ш), 4,05 (ΙΗ, άά), 4,53-4,62 (ЗН, ш), 6,75 (2Н, Ьг з), 6,85 (1Н, Ьг δ), 6,97-7,02 (ЗН, ш), 7,25-7,34 (2Н, ш), 7,76-7,82 (4Н, ш), 8,34 (1Н, δ).
но гЬ	1Ь: 4-(4-(4-(((ЗК,5К)-5-((1Н-1,2,4-триазол-1-ил)метил)-5-(2,4- дифторфенил)тетрагидрофуран-3 -ил)метокси) -3 -метилфенил)пиперазин-1 ил)-М-((1К,2К)-2-гидроксициклогексил)бензамид. К12,14 мин (способ 1а); ш/ζ 687 (М+Н)+ (Е8+); Ή ЯМР 5:1,15-1,28 (4Н, ш), 1,61-1,65 (2Н, ш), 1,82-1,92 (2Н, ш), 2,10 (ЗН, 8), 2,16 (ΙΗ, άά), 2,37-2,43 (1Н, ш), 2,52-2,58 (1Н, ш), 3,12-3,15 (4Н, ш), 3,36-3,43 (5Н, ш), 3,55-3,62 (1Н, ш), 3,68 (ΙΗ, άά), 3,74-3,79 (2Н, ш), 4,05 (ΙΗ, άά), 4,53-4,62 (ЗН, ш), 6,75 (2Н, Ьг б), 6,85 (1Н, Ьг б), 6,97-7,02 (ЗН, ш), 7,25-7,34 (2Н, ш), 7,76-7,82 (4Н, ш), 8,34 (1Н, б).
но гО	1С: 4-(4-(4-(((ЗК,5К)-5-((1Н-1,2,4-триазол-1-ил)метил)-5-(2,4- дифторфенил)тетрагидрофуран-3 -ил)метокси) -3 -метилфенил)пиперазин-1 ил)-Ы-(( 18,2Я)-2-гидроксициклогексил)бензамид. К12,46 мин (способ 1Ь); ш/ζ 687 (М+Н)+ (Е8+); Ή ЯМР 5: 1,23-1,34 (2Н, ш), 1,41-1,74 (6Н, ш), 2,10 (ЗН, δ), 2,16 (1Н, άά), 2,37-2,42 (1Н, ш), 2,52-2,58 (1Н, ш), 3,12-3,14 (4Н, ш), 3,36-3,38 (4Н, ш), 3,68 (ΙΗ, άά), 3,74-3,82 (4Н, ш), 4,05 (ΙΗ, άά), 4,58 (2Н, άά), 4,68 (ΙΗ, ά), 6,75 (2Н, Ьг 8), 6,85 (1Н, Ьг з), 6,98-7,02 (ЗН, ш), 7,26-7,34 (2Н, ш), 7,51 (1Н, б), 7,75-7,77 (ЗН, ш), 8,34 (1Н, δ).
но гО	16: 4-(4-(4-(((ЗК,5К)-5-((1Н-1,2,4-триазол-1-ил)метил)-5-(2,4- дифторфенил)тетрагидрофуран-3 -ил)метокси) -3 -метилфенил)пиперазин-1 ιυι)-Ν-((1Κ, 28)-2 -гидроксициклогексил)бензамид. К12,46 мин (способ 1Ь); ш/ζ 687 (М+Н)+ (Е8+); Ή ЯМР 5: 1,23-1,34 (2Н, ш), 1,41-1,74 (6Н, ш), 2,10 (ЗН, δ), 2,16 (1Н, 66), 2,37-2,42 (1Н, ш), 2,52-2,58 (1Н, ш), 3,12-3,14 (4Н, ш), 3,36-3,38 (4Н, ш), 3,68 (1Н, 66), 3,74-3,82 (4Н, ш), 4,05 (1Н, 66), 4,58 (2Н, 66), 4,68 (1Н, б), 6,75 (2Н, Ьг 8), 6,85 (1Н, Ьг δ), 6,97-7,02 (ЗН, ш), 7,25-7,34 (2Н, ш), 7,50 (1Н, б), 7,75-7,77 (ЗН, ш), 8,34 (1Н, з).

-12032454

Биологическое тестирование: экспериментальные методы

Оценка планктонного роста грибов: Анализ микроразведений в бульоне

Этот анализ проводили с применением модифицированного способа, опубликованного ЕИСА8Т (Водпдие7-Тиде1а, е1 а1. 2008). Споры АкретдШик ГиаидаШк (ЯСРЕ2010, ЫСРЕ7010 [метионин 220 мутация], ЫСРЕ7099 [Глицин 654 мутация]) от РиЬНс НеаДЕ Епд1апд, АШкЫге; мутанты ТВ34/Ь98Н от 8Г Ьошк НокркаГ Рапк, Е га псе; мутанты ТВ46/У121Е/Т289А от ишуегкПу оГ Эе1Ы, Эе1Ы, [пд1а) культивировали в сабуро-декстрозном агаре в течение 3 дней. Маточную суспензию спор получали из культуры сабуро-декстрозного агара путем промывания РВ8-1\хееп (10 мл; фосфатно-буферный солевой раствор, содержащий 0,05% Т^ееп-20, 100 ЕД./мл пенициллина и 100 ЕД./мл стрептомицина). Количество спор оценивали с применением гемоцитометра ЫеиЬаиег, а затем доводили до 10⁶ спор/мл с помощью РВ8. Рабочую суспензию спор (2х10⁵ спор/мл) получали в стерилизованном посредством фильтрации, В8А МОР8 ВРМЕ1640 (50 мл; ВРМЕ1640, содержащий 2 мм Ь-глютамина, 0,5% В8А, 2% глюкозы, 0,165 М МОР8, забуференного до рН 7 с ЫаОН).

Для анализа сперва В8А МОР8 РРМ[-1640 (50 мкл/лунку) добавляли по всему 384-луночному планшету (номер по каталогу 353962, ВЭ Ра1соп, ОхГогд, иК). Затем тестируемые соединения (0,5 мкл ЭМ8О раствор) добавляли в четырех повторениях с применением ^Гедта УТАЕЬО 96 (^Гедта, 217етк, 8\\'Цхег1апд) и тщательно смешивали с применением пластинчатого миксера. Впоследствии 50 мкл рабочей суспензии спор, приготовленной ранее, добавляли во все лунки за исключением контрольных лунок без спор. В контрольные лунки без спор вместо этого добавляли раствор В8А МОР8-ВРМI (50 мкл/лунку). Планшет закрывали пластмассовой крышкой и инкубировали (35°С с атмосферным воздухом) в течение 48 ч. ОЭ каждой лунки при 530 нм определяли с применением мультисканера (С1апокГат: ВМ6, ВисктдЬаткЫге, ИК). Для каждой лунки рассчитывали процент ингибирования, а из кривой концентрация-ответ, созданной для каждого тестируемого соединения, рассчитывали значения МПС, МПС , и МПС..

Скрининг панелей грибов проводили посредством ЕигоГшк Рап1аЬк Пчс. Значения МК’ и МIС5₀ испытываемых образцов определяли в соответствии с рекомендациями СЬ8Е способы микроразведения в бульоне для дрожжей (СЕМ М27-А2), (СЕБЕ 2002) и для нитчатых грибов (С^8I М38-А), (СЕ8Е 2008).

Инфекция АкретдШик ГитэдаГик эпителиальных клеток бронхов.

Клетки ВЕА82В засевали в 96-луночные планшеты (100 мкл; 3х10⁴ клеток/лунку; СаГа1одие Ыо 3596, 81дта А1дпск ЭоткеГ, ИК) в 10% ЕВ8 ВРМI-1640, а затем инкубировали (37°С, 5% СО2) в течение одного дня перед проведением эксперимента. В каждую лунку добавляли тестируемые соединения (0,5 мкл раствора ЭМ8О) или несущую среду (ЭМ8О), чтобы получить итоговую концентрацию ЭМ8О, составляющую 0,5%. Клетки ВЕА82В инкубировали с тестируемыми соединениями в течение 1 ч (35°С, 5% СО2) до инфицирования суспензией конидий (0,5х10⁵/мл в 10% ЕВ8 ВРМЫ640) АкретдШик ГитэдаГик (20 мкл; РпЬПс Неа1Гй Епд1апд). Планшет инкубировали в течение 24 ч (35°С, 5% СО2). Супернатант (50 мкл) собирали и переносили на планшет для ПЦР (СаГа1одие Ыо Ы402-9700, 8Гат1аЬ, М11Гоп Кеупек, ИК), который замораживали (-20°С) до использования. После оттаивания супернатант (5 мкл) разводили 1:20, добавляя раствор В7-РВ8 (95 мкл; 1:4 Р7 к РВ8; Вю-Вад ЬаЬогаГопек, Ведтопд, АА, И8А). Уровни галактоманнана в этих образцах (50 мкл) измеряли с применением наборов Р1аГе11а 6М-ЕМ (Вю-Вад ЬаЬогаГопек, Ведтопд, АА, И8А). Для каждой лунки рассчитывали процент ингибирования, а значение К', рассчитывали из кривой концентрация-ответ, созданной для каждого тестируемого соединения.

Инфекция АкретдШик ГитэдаГик бислоев альвеол человека.

Модели альвеол человека ш νίΡΌ, состоящие из бислоя альвеолярных эпителиальных клеток и эндотелиальных клеток человека, получали, как описано ранее (Норе еГ а1. 2007). Эта система делает возможным введение тестируемого соединения в верхний (воздушное пространство) и/или нижний (системное пространство) отделы. Такая использовали гибкость в изучении действия комбинированной обработки путем дозирования в верхнюю камеру соединения (I), а в нижнюю камеру позаконазола или других противогрибковых агентов. Первичные эндотелиальные клетки легочной артерии человека (НРАЕС) собирали и разбавляли до 10⁶ клеток/мл в средах Е6М-2 (Ьопга, Ваке1, 8\\'Цхег1апд). Камеры Трансвелл переворачивали и на основание каждого трансвела наносили клеточную суспензию (100 мкл/лунку). Перевернутые камеры Трансвелл инкубировали при ВТ в шкафу в течение 2 ч, после чего их поворачивали вертикально. Среду Е6М-2 добавляли в нижний (700 мкл/лунку) и верхний (100 мкл/лунку) отделы и камеры Трансвелл инкубировали в течение 48 ч (37°С, 5% СО2). Затем среду Е6М-2 в нижнем отделе заменяли на свежую среду Е6М-2. Клетки А549 собирали и разбавляли до 5х10⁵ клеток/мл в 10% ЕВМ, затем добавляли в верхней отдел (100 мкл/лунку) всех камер Трансвелл и планшеты инкубировали в течение 72 ч (37°С, 5% СО2). Конидии чувствительного к итраконазолу (ЫСРЕ2010) и резистентного к итраконазолу (ТВ34-Ь98Н) штаммов АкретдШик ГитэдаГик культивировали отдельно в сабуро-декстрозном агаре в течение 3 дней. Маточную суспензию конидий каждого штамма получали из культуры сабуро-декстрозного агара путем промывания РВ8-1\\'ееп (10 мл; РВ8, содержащий 0,05% Т^ееи-20, 100 ЕД./мл пенициллина и 100 ЕД./мл стрептомицина). Количество

- 13 032454 конидий оценивали, используя гемоцитометр №иЬаиег, и доводили до 10⁶ конидий/мл с помощью РВ8. Рабочий запас конидий готовили в ЕВМ (10⁵ конидий/мл) непосредственно перед использованием.

Тестируемые и эталонные соединения (или неразбавленный ИМ8О в качестве несущей среды) добавляли в соответствующие лунки 24-луночных планшетов (3 мкл/лунку, содержащую 600 мкл 2% ЕВ8 ЕВМ) для обработки нижнего отдела и 96-луночных планшетов (1 мкл/лунку, содержащую 200 мкл 2% ЕВ 8 ЕВМ) для обработки верхнего отдела, чтобы обеспечить итоговую концентрацию ИМ8О, составляющую 0,5%. Среду в верхнем отделе аспирировали и добавляли среду, содержащую соответствующие тестируемые и эталонные соединения или несущую среду (100 мкл/лунку). Затем камеры Трансвелл переносили в 24-луночный планшет, содержащий тестируемые и эталонные соединения или несущую среду ИМ8О. После инкубации в течение 1 ч (35°С, 5% СО₂) в верхний отдел каждой камеры Трансвелл добавляли суспензию конидий (10 мкл/лунку). Затем планшеты инкубировали в течение 24 ч (35°С, 5% СО₂). Супернатанты из каждого отдела (5 мкл/отдел) собирали и хранили (20°С). Среду заменяли ежедневно после сбора супернатантов и все лунки обрабатывали тестовыми и эталонными соединениями или ДМСО, как описано выше, в течение 3 дней. Образцы продолжали собирать до тех пор, пока рост грибов был заметен глазом во всех камерах Трансвелл. Уровни СМ в супернатанте в нижнем отделе затем измеряли посредством ЕЬ18А (ВюВаб, СА, И8А) в виде индекса внедрения АкрегдШик ГшшдаШк.

Жизнеспособность клеток: анализ с резазурином.

За один день перед проведением эксперимента клетки ВЕА82В засеяли в 384-луночные планшеты (100 мкл; 3000/лунку/; ВБ Еа1соп, Са1а1одие Νο 353962) в ВРМ1-ЬНС8 (среды ВРМ1-1640 и ЬНС8, объединенные в равных пропорциях). В контрольные лунки, не содержащие клетки, добавляли ВРМ1ЬНС8 (100 мкл). Добавляли тестируемые соединения (0,5 мкл раствора ИМ8О), чтобы получить итоговую концентрацию ИМ8О, составляющую 0,5%, с применением 1п!едга У1АЕЬО 96 (1п!едга, 2|/ег5. 8\\'Цхег1апб). Клетки ВЕА82В инкубировали с каждым тестируемым соединением в течение 1 дня (37°С/5% СО₂ в РРМ1-ЬНС8). После добавления маточного раствора резазурина (5 мкл, 0,04%) планшеты дополнительно инкубировали в течение 4 ч (37°С/5% СО₂). Флуоресценцию каждой лунки при 545 нм (возбуждение) и 590 нм (эмиссия) определяли с применением мультисканера (С1апок1аг: ВМС ЬаЫесй). Процент потери жизнеспособности клеток рассчитывали для каждой лунки относительно несущей среды (0,5% ИМ8О) обработки. При необходимости, значение СС₅₀ рассчитывали из кривой концентрация-ответ, созданной для каждого тестируемого соединения.

Противогрибковая активность ίη νίνο.

АкрегдШик ГшшдаШк (АТСС 13073 [штамм: ΝΙΗ 5233], Американская коллекция типовых культур, Мапаккак, УА, И8А) выращивали планшетах на солодовом агаре (Νίκκυί РНагтасеийсаР Токуо, 1арап) в течение 6-7 дней при ВТ (24±1°С). Споры асептически отделяли от агаровых планшетов и суспендировали в стерильной дистиллированной воде с 0,05% Тетееп 80 и 0,1% агаром. В день инфицирования количество спор оценивали с помощью гемоцитометра и инокулят доводили до получения концентрации 1,67х10⁸ спор мл^-1 физиологического солевого раствора. Для индуцирования иммуносупрессии и нейтропении АЛ мышам (самцам, в возрасте 5 недель) ввели дозы гидрокортизона (81дта Н4881; 125 мг/кг, п/к) в дни 3, 2 и 1 до инфицирования и циклофосфамида (81дта С0768; 250 мг/кг, в/б) за 2 дня до инфицирования. В день 0 животных инфицировали суспензией спор (30 мкл интраназально).

Тестируемые вещества вводили интраназально (35 мкл суспензии (0,0032-10,0 мг/мл лекарственного вещества в физиологическом солевом растворе) один раз в сутки, только в дни 1, 2 и 3 (тем самым представляя схему терапевтической обработки). Для продолжительной профилактической обработки тестируемые соединения (35 мкл суспензии 0,0032 или 0,016 мг/мл в физиологическом солевом растворе) вводили интраназально один раз в сутки в течение семи дней. Одной группе дозу вводили за 30 мин до инфицирования на день 0, но не впоследующем, тогда как второй группе дозы дополнительно вводили в дни 1, 2 и 3 после инфицирования. Действие этих парадигм лечения сравнивали с результатами, полученными, когда лечение ограничивалось в других группах до одного дня или 30 минут до инокуляции, а затем в дни 1, 2 и 3 после инфицирования в обоих случаях. В последней группе введение дозы еще дополнительно ограничивали животными, которым дважды вводили дозу, только за один день и за 30 мин до инфицирования.

Массу тела животных контролировали ежедневно и через 6 ч после введения последней дозы лекарственного средства на день 3 животных анестезировали, канюлировали трахею и получали ВАТЕ, кровь и легочную ткань. Уровни 1Ь-6 и Т№а в сыворотке определяли с применением набора для ЕЫ8А мышиных 1Ь-6 или ΕΝΕ-α ОнапЦкше® (В&И кук1етк, 1пс., Мшпеаройк, М^ И8А) соответственно. СМ АкрегдШик в сыворотке определяли с применением наборов Р1а1е11а СМ-Е1А (Вю-Ваб ЕаЬогаЮпек, Вебтопб, ^А, И8А). Индекс отсечки (СО1) рассчитывали по формуле: индекс отсечки=ОИ образца/ОИ контроля отсечки, предоставленном в наборе. Для анализов микотической нагрузки на ткань 100 мг легочной ткани асептически извлекали и гомогенизировали в 0,2 мл 0,1% агара в стерильной дистиллированной воде. Серийно разведенные гомогенаты легких наносили на планшеты с солодовым

- 14 032454 агаром (50 мкл/планшет) и инкубировали при 24±1°С в течение 72-96 ч. На каждом планшете подсчитывали колонии А. ЕниидаШк и титр грибка представили в данном документе в виде СРИ на грамм легочной ткани.

Для определения содержания ДНК АкрегдШик ГипндаШк. ДНК экстрагировали либо из инфицированных легких, либо АкрегдШик ГииидаШк с помощью 1кор1ап1 (№рроп Сепе) согласно инструкции изготовителя. Ткани, срезанные до <3 мм любой длины, смешивали с раствором I (буфер для экстракции: 300 мкл). Затем к смесям добавляли раствор II (буфер для лизиса, бензилхлорид: 150 мкл) с последующим перемешиванием вихревым смесителем в течение 5 секунд. После инкубирования при 50°С в течение 15 мин добавляли раствор III (натрий ацетат, рН 5,2: 150 мкл), смеси интенсивно перемешивали в течение 1-3 секунд, а затем инкубировали на льду в течение 15 мин. После инкубирования смеси центрифугировали при 12000 г в течение 15 мин при 4°С. ДНК в верхних ад фазах супернатантов осаждали 100% этанолом (х 2,5 уо1), промывали 70% этанолом и растворяли в 5-10 мкл буфера ТЕ.

Амплификацию ДНК проводили с помощью Ргет1х Ех Тад^ТМ (Такага В1о) на 96-луночном оптическом реакционном планшете. Фрагменты гена 188 рРНК АкрегдШик ГииидаШк амплифицировали с парой праймеров; 5'-СССССТТАА АТАССССССТ-3' (8 ЕС) II) Ыо. 1) и 5'ТСАССССАТАСТСССССТАА-3' (8ЕО Ю Ыо. 2) и гибридизационным зондом; 5'-РАМАСССАСССССССССАААТС-ТАМКА-3' (8ЕО Ю Ыо. 3). ПЦР в реальном времени проводили (25 мкл, содержащих 50 нг мышиной ДНК с 200 нм зонда) при следующих условиях: начальная инкубация в течение 2 мин при 50°С, начальная денатурация в течение 10 мин при 95°С, с последующими 55 циклами из 15 с при 95°С и 1 мин при 65°С. Количества ДНК АкрегдШик Гит1да1ик в 50 нг ДНК мышиных легких оценивали по стандартной кривой с 0,05-50000 пг ДНК АкрегдШик Еит1даШк.

Краткое изложение результатов скрининга

Соединение (I) демонстрирует мощную ингибирующую активность на планктонный рост грибов, как оценено при анализе микроразведений в бульоне (табл. 3).

Таблица 3

Влияние обработки вориконазолом, позаконазолом, амфотерицином В и соединениями Да-б) на планктонный рост грибов изолятов АкрегдШик ГниидаШк

Обр_аб_отка Значения М1С₇₅ (нМ) против указанных изолятов АкрегдШик ГитщаШк^{* 1} (тестируемое

соединение)	ЫСРР2010	Ь98И	ТК46	ЫСРР7099	ЫСРР7100
Вориконазол	511	2585	>2860	113	543
Позаконазол	10,9	98,3	414	167	59,7
Амфотерицин В	407	195	187	248	523
Соединение Да)	2,81	12,7	93	10,0	12,7
Соединение ДЬ)	8,02	303	334	86,2	87,3
Соединение Дс)	2,27	54,9	164	11,5	10,9
Соединение Дб)	8,51	70,0	316	11,7	25,2

Примечания:

¹ Анализ микроразведений в бульоне; п=2-3.

В этих анализах соединение Да) особенно показало значительно большую мощность как в отношении резистентных к позаконазолу штаммов (ЫСРР7099, ЫСРР7100, ТК34/Б98Н и

ТК46/У121Р/Т289А), а также чувствительных к позаконазолу штаммов (ЫСРР2010), чем позаконазол, вориконазол и амфотерицин В.

Соединения Да и Σο) также демонстрируют мощную ингибирующую активность против грибковой инфекции эпителиальных клеток бронхов (табл. 4). В этой системе анализа соединения Да и к) показали значительно большую мощность, чем вориконазол, и большую мощность, чем позаконазол.

- 15 032454

Инкубирование с соединениями (1а, 1Ь, 1с и И) не оказывало или оказывало небольшое влияние на жизнеспособность эпителиальных клеток бронхов ΒΕΑ82Β при концентрациях, показанных ниже.

Таблица 4 Влияние обработки вориконазолом, позаконазолом, амфотерицином Β и соединениями (1а-4) на планктонный рост грибов АзрегдШиз £цт1да!из ЩСРЕ2010), на грибковую инфекцию эпителиальных клеток бронхов ΒΕΑ82Β и на жизнеспособность клеток ΒΕΑ82Β

Значения М1С₅₀/СС₅₀ для указанной обработки (нМ)

Обработка (тестируемое соединение)	Инфекция клеток ВЕА82В1	Жизнеспособность клеток ВЕА82В2
М1С50	СС50
Вориконазол	154	>28600
Позаконазол	11,6	>14300
Амфотерицин Β	п!	2343
Соединение (1а)	6,35	>14600
Соединение (1Ь)	п!	>14600
Соединение (1с)	1,86	>14600
Соединение (И)	п!	>14600

Примечание:

¹ Эпителиальные клетки бронхов; п=1-3;

² п=3;

п!: не протестированы.

Влияние соединения (I) на рост широкого диапазона грибковых патогенов оценили с применением способов микроразведения в бульоне СЬ81. Было обнаружено, что соединение (1а) является мощным ингибитором роста Αи^еοЬаз^ά^ит ри11и1апз, Βΐιίζοριίδ огу^ае. Сгур!ососсиз пеоГогтапз, СНаеЮтттт д1оЬозит, РешсШшт сЬгузодепит, Ризалит дгаттегагит, С1айозролит БегЬагит и ТпсНорНуЮп гиЬги, а также некоторых Сапйка зрр. (а именно СапШДа а1Ь1сапз, СапШДа §1аЬга1а и СапШДа кгизе1) и некоторых Α^Γ§ί11ι.ΐ5 зрр. (а именно Αзре^д^11из Дауиз) (табл. 5).

Таблица 5 Ингибирующее действие соединения (1а) на рост ряда видов грибов

	Соединение (1а)	Вориконазол	Позаконазол
М1С50	М1С100	М1С50	М1С100	М1С50	М1С100
Грибковый Агент	Штамм	(мкг/мл)	(мкг/мл)	(мкг/мл)
Αзре^д^11из Дауиз	ΑΤ№'.'204304	0,13	0,13	1,0	2,0	0,063	0,13
Αи^еοЬаз^ά^ит ри11и1апз	ΑΤ№'.’9348	0,25	1,0	>8,0	>8,0	0,25	1,0
Сапйка а1Ь1сапз	20240,047	0,016	>2,0	0,031	>8,0	0,031	>8,0
	ΑΤ№’10231	0,25	>2,0	0,25	>8,0	0,13	>8,0

- 16 032454

	20183,073	0,125	>2,0	4,0	>8,0	0,25	>8,0
СапФба	АТСС36583	0,25	>2,0	0,25	>8,0	0,5	>8,0
§1аЬга1а	20197,1	0,0078	>2,0	0,031	>8,0	0,031	>8,0
СапФба кгиве1	АТСС6258	0,25	0,25	0,25	1,0	0,13	0,25
Ρΐιίζοριιβ огу^ае	АТСС11145	0,25	0,5	8,0	>8,0	0,13	>8,0
Стуркососсив пеоГогтапв	АТСС24067	0,016	0,063	0,016	1,0	0,016	0,25
Скаескотшт ДоЬоыип	АТСС44699	0,031	0,13	0,5	1,0	0,13	0,25
Ривапит дгатшегагит	АТСС16106	0,13	0,5	>8,0	>8,0	>8,0	>8,0
РешсШшт сйтуводепит	АТСС9480	0,063	0,13	1,0	2,0	0,063	0,13
С1абоврогшт кегЬатит	№РР2564	0,016	0,016	ΝΏ	ΝΌ	ΝΏ	ΝΏ
Тпс1юр11у1оп гиЬгит	АТСС10218	ΝΏ	0,031	<0,008	0,063	<0,008	0,031

Примечания:

М1С5о/М1С1оо⁼концентрация, требуемая для 50 и 100% торможения роста грибов путем визуального контроля (СЬ81);

ΝΌ: не определено.

Ингибирующую активность на внедрение АвретдШив ГнтщаШв в альвеолы (чувствительный к азолу штамм: NСРР2010; и резистентный к азолу штамм ТК.34/Ь98Н) определяли посредством измерения галактоманнана (СМ) в нижней камере бислоев альвеол человека на 1 день после инфицирования. Введение соединения (1а) в апикальную камеру вызывало зависимое от концентрации ингибирование уровней СМ в нижней камере, с максимальным действием, превышающим 90% для обоих штаммов (табл. 6 и 7).

Таблица 6 Влияние соединения (1а) и позаконазола на внедрение ЛвретдШив Гит1да1и5 (чувствительного к азолу штамма: NСΡΡ2010) в нижнюю камеру бислоев альвеол человека (камеры Трансвелл)

Значения М1С для указанной обработки (нМ)

Обработка (тестируемое соединение)

Позаконазол

М1С50

155

М1С90

212

Соединение (1а)

Примечание: п=3.

154

185

- 17 032454

Таблица 7

Влияние соединения (1а) и позаконазола на внедрение АкретдШик £ит1да1и8 (резистентного к азолу штамма: ТК34/Ь98Н) в нижнюю камеру бислоев альвеол человека (камеры Трансвелл)

Обработка Значения М1С для указанной обработки (нМ)

Тестируемое соединение	М1С50	М1С90
Позаконазол	315		793
Соединение (1а)	261		417
Примечание: п=1. Когда проводили мониторинг ингибирующей активности в течение нескольких дней после инфицирования, были обнаружено, что раннее ингибирующее действие монотерапии либо соединением (1а) (0,1 мкг/мл в верхней камере) или позаконазолом (0,01 мкг/мл в нижней камере) быстро исчезает (табл. 8). И наоборот, комбинированная обработка соединением (1а) в верхней камере и позаконазолом в нижней камере (как приведено выше) привела к долговременному ингибированию внедрения после инфицирования. Вследствие этого, ΌΡΒ50 для комбинированной обработки составило 3,63 дней, гораздо дольше, чем значения для одного соединения (табл. 8). Это синергетическое или по меньшей мере аддитивное влияние комбинированной обработки также возникало, когда обработку соединением (1а) комбинировали с обработкой итраконазолом, вориконазолом или каспофунгином (результаты не показаны). Таблица 8 Влияние соединения (1а), позаконазола и комбинированной обработки на внедрение АкретдШик 1ит1да1и8 (Ν0ΡΡ2010) в нижнюю камеру бислоев альвеол человека (камеры Трансвелл)
	Уровни СМ в нижней камере для указанных видов обработки Значение Οϋ (% ингибирования по сравнению с контролем)
День обработки	Несущая среда	Соединение (1а)1 Верхняя камера	Позаконазол2 Нижняя камера	Комбинированная обработка
0	0	0	0	0
1	0,73	0,24 (66)	0,074 (89)	0,019 (97)
2	1,73	1,71 (1,5)	1,71 (1,5)	0,11 (94)
3	1,82	1,67 (8,6)	1,70 (7,1)	0,18 (90)
4	1,65	1,68 (-1,6)	1,70 (-3,0)	1,34 (19)
5	1,64	1,63 (0,2)	1,69 (-3,6)	1,72 (-5,3)
6	1,55	1,57 (-1,8)	1,59 (-3,0)	1,62 (-4,6)
7	1,66	1,54 (7,1)	1,62 (2,5)	1,59 (4,4)
Значения ΌΡΒ50 для указанных видов обработки	1,04	1,16	3,63

Примечания:

¹ Дозы вводили с 0,1 мкг/мл.

² Дозы вводили с 0,01 мкг/мл.

ΌΡΒ₅₀: дни, взятые для достижения микотической нагрузки, составляющей 50% контроля.

В дополнение, эту комбинированную обработку протестировали в бислоях, инфицированных резистентным к азолу штаммом АкретдШик 1ит1да1и8: ТП34-Ь98Н (табл. 9). Монотерапия соединением

- 18 032454 (1а) (0,3 мкг/мл) в верхней камере или позаконазолом (0,1 мкг/мл) в нижней камере показала ограниченную пользу. В отличие от этого, комбинация соединения (1а) и позаконазола показала значительное ингибирующее действие на внедрение грибка в нижнюю камеру.

Таблица 9 Влияние соединения (1а), позаконазола и комбинированной обработки на внедрение АкрегдШик Гит1§а1и5 (резистентный к азолу штамм: ТК34-Ь98Н) в нижнюю камеру в альвеолярной двухслойной клеточной системе (камеры Трансвелл)

Уровни СМ в нижней камере для указанных видов обработки Значение Οϋ (% ингибирования по сравнению с контролем несущей средой)

День обработки	Несущая среда	Соединение (I)* 1 Верхняя камера	Позаконазол2 Нижняя камера	Комбинированна я обработка
0	0	0	0	0
1	0,63	0,016 (98)	0,016 (98)	0,014 (98)
2	1,11	0,84 (24)	0,73 (35)	0,015 (99)

1,06 1,01 (4,6) 1,16 (-10) 0,020 (98)

Значения ΌΤΒ₅₀ для указанных видов обработки

1,53

1,94

Примечания:

¹ Вводили дозы с 0,3 мкг/мл.

² Вводили дозы с 0,1 мкг/мл.

ΌΤΒ₅₀: дни, взятые для достижения микотической нагрузки, составляющей 50% контроля.

При интраназальном введении мышам в нейтропении с ослабленным иммунитетом, в дни 1, 2 и 3 после заражения (терапевтическая обработка), соединение (1а) показало некоторую защиту от потери массы тела, измеренное в течение 3 дней, вызванное инфекцией АкретдШик ГииидаШх при более низких дозах, чем требовались для позаконазола (табл. 10).

Таблица 10 Влияние обработки соединением (1а) или позаконазолом на потерю массы тела, вызванную инфекцией А. Еитздакик, у мышей в нейтропении с ослабленным иммунитетом

Схема обработки2	Концентрация лекарственного средства (мг/мл)	Потеря массы тела1, 2 (% торможения потери массы)
День 2	День 3
Несущая среда плюс споры	нет	5,5±1,5	10,7±1,8
	0,0032	4,2±1,2 (24)	9,7±2,1 (9)
Соединение (1а)	0,016	3,6±1,2 (35)	9,7±3,2 (9)

	0,08	2,8±2,4 (49)	8,3±6,7 (22)
Несущая среда плюс споры	нет	4,7±2,1	9,3±2,7
	0,4	5,4±0,4 (-15)	9,2±4,0 (1)
Позаконазол	2	3,9±1,3 (17)	7,1±1,9 (24)

3,9±1,3 (17)

4,3±1,8 (54)

Примечание:

¹ % потеря массы, вызванная инфекцией А. ГнтщаШх по сравнению с массой животного на день 1, когда началась обработка.

² Два проводимых отдельных исследования.

- 19 032454

Более того, терапевтическая обработка соединением (1а), показала влияние, превосходящее позаконазол, на микотическую нагрузку в легких, на концентрации галактоманнана в сыворотке и содержание ДНК АкрегдШик £цт1да!ик в легких. Эти данные для соединения (I) показаны в табл. 11 и фиг. 1-3.

Таблица 11 Действие профилактической и терапевтической обработки соединением (1а) на СЕи в легких, на концентрации галактоманнана в сыворотке и на ДНК АкрегдШик в легких мышей в нейтропении с ослабленным иммунитетом, инфицированных АкрегдШик ГшшдаШк

Схема обработки	Концентрация лекарственного средства (мкг/мл)	% ингибирования ответа
КОЕ (/мг легкого)	СМ в сыворотке (СО1)	ДНК в легких (пг/50нг мышиной ДНК)
Несущая среда плюс споры	нет	31,7±17,4	3,38±2,02	70,7±41,3
	3,2	25,8±20,8 (19)	2,85±2,76 (16)	41,7±29,0 (41)
Соединение (1а)	16	24,2±15,8 (24)	3,01±2,14 (11)	56,1±53,4 (21)
	80	9,30±5,20 (71)	0,53±0,38 (84)	4,10±4,60 (94)

Примечание: данные для микотической нагрузки показаны как среднее ± стандартная ошибка среднего (8ЕМ; п=6).

Значения ГО₅₀ для позаконазола и соединения (1а), вводимого терапевтически в независимых экспериментах, также представлены ниже (табл. 12).

Таблица 12 Значения ГО₅₀ для терапевтической обработки позаконазолом и соединением (1а) по микотической нагрузке в легких по концентрации галактоманнана в сыворотке и по содержанию ДНК АкрегдШик ГшшдаШк в легочной ткани у мышей в нейтропении с ослабленным иммунитетом, инфицированных АкрегдШик ГшшдаШк

Лекарственная субстанция (Терапевтическая схема)	Значения Ιϋ50 для указанного ответа (мг/мл)
Микотическая нагрузка на легкие	СМ в сыворотке	ДНК А. Гиш1даШз в легких
Соединение (1а)	0,051	0,047	0,050
Позаконазол	0,39	0,59	N1

Примечание: п1: не протестированы.

Также обнаружено, что терапевтическая обработка соединением (1а) подавляет концентрации цитокинов в сыворотке у мышей в нейтропении с ослабленным иммунитетом, инфицированных АкрегдШик ГшшдаШк. (табл. 13 и 14; фиг. 1, 2 и 3). Рассчитанные значения ΙΌ₅₀ для подавления уровней цитокинов сыворотки (табл. 14) весьма сходны со значениями, наблюдаемыми для микотической нагрузки на легкие, концентраций галактоманнана в сыворотке и для содержания ДНК АкрегдШик ГшшдаШк в легких (выше).

Таблица 13 Влияние терапевтической обработки соединением (1а) на уровни 1Ь-6 и Т№а в сыворотке мышей в нейтропении с ослабленным иммунитетом, инфицированных АкрегдШик ГшшдаШк.

Концентрация биомаркеров (пг/мл)

Схема обработки	Концентрация лекарственного средства (мкг/мл)	(% ингибирования)
1Ь-б	ΤΝΕσ
Несущая среда плюс споры	нет	298±142 35,3±10,1

- 20 032454

3,2

247±185 (17)

28,1±13,8 )20)

Соединение (1а)

262±185 (12)

21,8±14,6 (38)

66,5±32,9 (78) 4,7±1,0 (87)

Примечания: данные для концентраций биормакеров показаны как среднее ± стандартная ошибка среднего (8ЕМ), N=6.

Таблица 14 Значения ГО₅₀ для терапевтической обработки соединением (1а) при уровнях 1Ь-6 и ΤΝΕα в сыворотке у мышей в нейтропении с ослабленным иммунитетом, инфицированных ЛзрсгдШиз ГшшдаШз

Лекарственная субстанция (Профилактическая схема)

Значения Ιϋ50 для указанных биомаркеров (мг/мл) 1Б-6 ΤΝΕα

Соединение (1а)

0,050

0,027

Также было оценено действие продолжительного профилактического введения доз соединения (1а) у мышей в нейтропении с ослабленным иммунитетом, инфицированных ЛзрсгдШиз ГшшдаШз. Было обнаружено, что продолжительная профилактика соединением (1а) подавляет микотическую нагрузку в легких, а также концентрации СМ как в ВАЕБ, так и в сыворотке, при дозах, в 25 раз более низких, чем дозы, используемые в предыдущем исследовании (табл. 15). Более того, данные свидетельствуют о накоплении противогрибкового действия в легких при повторном введении доз, поскольку семь дней профилактики вызывали более высокое противогрибковое действие, чем профилактическое лечение в течение одного дня. О стойкости действия соединения в легких свидетельствуют данные, что лечение в дни с -7 до дня 0 вызывало превосходное противогрибковое действие на день 3, чем противогрибковое действие, полученное в результате лечения только в дни -1 и 0.

Таблица 15

Действие продолжительного профилактического введения доз соединения (1а) на микотическую нагрузку (КОЕ) в легких и на концентрации СМ в ВАЕБ и сыворотке у мышей в нейтропении с ослабленным иммунитетом, инфицированных АзретдШиз ГишфаШз

Схема Доза обработки¹ соединения (Дни введения (1а) доз) (мкг/мл)

Значения КОЕ, значения СО1 для СМ в БАБЕ и сыворотке и % ингибирования ответов²

Несущая среда плюс споры	нет
с -7 до +3	0,64
с -1 до +3	0,64
с -7 до +3	3,2
с -1 до +3	3,2
с -7 до 0	3,2
-1, 0	3,2

КОЕ (/мг легкого)	СМ в БАБЕ (СО1)	СМ в сыворотке (СО1)
9,2±4,9	4,1±0,7	3,9 ±0,7
2,0±3,6 (78)	3,1 ±0,85 (24)	2,6±0,82 (33)
4,0±5,2 (57)	3,9±0,59 (5)	3,6±0,52 (8)
0,04±0,08 (99,6)	1,5±0,59 (63)	1,5±0,85 (62)
1,0±1,4 (89)	3,4±0,46 (17)	2,8±0,24 (28)
0,9±1,1 (90)	2,9±0,97 (29)	2,6±0,48 (33)
20,4±15,7 (-222)	4,5±0,63 (-10)	4,7±0,65 (-21)

Примечания:

¹ Значение N составило пять для всех групп, обработанных несущей средой и лекарственным средством;

² Данные для микотической нагрузки и уровней СМ показаны как среднее ± стандартная ошибка среднего и процент ингибирования, по отношению к несущей среде.

- 21 032454

Фармакокинетика ΐη νΐνο

Это широко используемая процедура для легочных, терапевтических агентов, подлежащих введению в легкие животных, например, мышей. Для того чтобы охарактеризовать полученное в результате системное воздействие вводимого соединения, в разные моменты времени после введения дозы собирают плазму.

Соединение изобретения может быть протестировано в таких выше упомянутых системах ίη νΐνο.

Краткое изложение биологического профиля соединения (I)

Было обнаружено, что соединение (I) в виде всех четырех стереоизомеров является мощным ингибитором планктонного роста АврегдШив йпшдаШв и инфекции эпителиальных клеток бронхов. Соединение (1а) ингибирует рост резистентных к позаконазолу и резистентных к вориконазолу изолятов АврегдШив Гит1да!ив, демонстрируя большую мощность, чем позаконазол, вориконазол и амфотерицин В, по отношению к данным штаммам. Также было обнаружено, что к соединению (1а) чувствителен широкий диапазон других патогенных грибов. Синергетическое или по меньшей мере аддитивное действие было продемонстрировано для соединения (1а) в комбинации с позаконазолом, итраконазолом, вориконазолом и каспофунгином. Ιη νΐνο, у мышей в нейтропении с ослабленным иммунитетом, инфицированных Аврегдб1ив 1ит1да!ив, соединение (1а), продемонстрировало мощное торможение инфекции Аврегдб1ив Гит1да!ив, а также ассоциированного иммунного ответа в легких при терапевтическом или профилактическом введении доз. Соединение (1а) также было эффективно для уменьшения зависящей от инфекции потери массы тела. Эти ингибирующие влияния превосходили таковые позаконазола. Клинически важно, что благотворные противогрибковые эффекты соединения (I) наблюдаются с терапевтической целью.

Ссылки

АдЬей1е, I., Райв, А., Бекар Б., Нагдабоп, В., Войте, М., Ми!а1ййа8, К., Еб^атбв, К., Мог1еу, 1.Р., Моп!ейо, У.К., Ки1катш, N.8., Стееп, КН, Ратогб, Ι.Ό., Втаббшд, Р., ВпдЬШпд, С.Е., Уатб1ате, А.1. апб РавЬ1еу, С.Н. 1во1а!юп оГ й1атеп!оив Гипд1 Ггот ври!ит т ав!11та ιβ аввоаа!еб \νί!1ι гебисеб ров!ЬгопсЬоб11а!ог ЕЕУ1. Сйп. Ехр. А11егду, 2012, 42, 782-91.

ВаГабЬе1 М., МсКеппа 8., Ас.|Ье!Пе 1., Еайв А., Бева1 Б., М1в!гу V., Мог1еу 1.Р., РапсЬой М., Ратогб Ι.Ό., Уатб1ате А.1., РавЬ1еу С.Н. апб ВпдЬШпд С.Е. АврегдШив Гит1да!ив бштпд в1аЬ1е в1а1е апб ехасетЬайопв оГ СОРБ. Еиг. Кеврп. 1., 2014, 43, 64-71.

Ворует Р. апб Бепптд Б.\У. Епу|гоптеп!а1 ГипдШбев апб !пахо1е гев1в!апсе т АврегдШив. Рев! Мападетеп! 8с1епсе, 2014, 70, 173-178.

СЫвЫтЬа Ь., №уеп К.М., Еот М., Соо1еу 1. апб Бепптд БАУ. Vο^^сοηаζο1е апб Рοвасοηаζο1е 1тргоуе Ав!11та 8есеп!у т А11егдю ВгопсЬори1топагу АвретдШов1в апб 8етеге Ав!Ьта \νί!1ι Еипда1 8епвШха!юп. РЬагтасо!Ьегару, 2012, 49, 423-433.

СЬойтта11 8.Н., О'БоподЬие Е., Веппе!! К., Сипата!пат С., ОАеШ 8.1. апб МсЕ1уапеу N.0. 8ри!ит Сапб1ба а1Ь1сапв ргевадев БЕV1 бесйпе апб Ьовр1!а1-!геа!еб ехасетЬайопв ш сувйс йЬтов1в. СЬев!, 2010, 138, 1186-95.

СЬ81 М27-А2: КеГегепсе те!Ьоб Гог Ьго!Ь бШШоп апйГипда1 вивсерйЬбйу !евйпд оГ уеав!в; Аррготеб в!апбагб, 2пб еб, Νί.’ί.Έ8 боситеп! М27-А2, Сйшса1 апб ЬаЬога!огу 8!апбагбв 1пвй!и!е, Уаупе, РА, 2002.

СЬ81 М38-А2: КеГегепсе те!Ьоб Гог Ьго!Ь бШШоп апйГипда1 вивсерйЬбйу !ев!тд оГ Й1атеп!оив Гипдр Аррготеб в!апбагб, 2пб еб, СЬ81 боситеп! М38-А2, Сйшса1 апб ЬаЬога!огу 8!апбагбв 1пвй!и!е, Уаупе, РА, 2008.

Бепптд БАУ., Р1еиугу А. апб Со1е Б.С. О1оЬа1 Ьигбеп оГ сЬгошс ри1топагу аврегдб1ов1в ав а вес.|ие1 !о ри1топагу !иЬегси1ов1в. Ви11ейп оГ !Ье \Уог1б Неа1!Ь Ордай/аиот 2011а, 89, 864-872.

Бепптд БАУ., Рагк 8., Ьавв-Б1оп С., Егасхек М.О., Ктпгап М., Ооге К., 8тйЬ 1., Вие1б А., Мооге С.В., Во\\уег Р. апб Ретйп Б.8. Н1дЬ Ггециепсу !г1ах.о1е гев1в!апсе Гоипб ш попси1!игаЬ1е аврегдб1ив Гит1да!ив Ггот 1ипдв оГ райеп!в \νί!1ι сЬгошс Гипда1 б1веаве. Сйп. 1пГес!. Б1в., 2011Ь, 52, 1123-1129.

Б1торои1ов О., Егап!хевкак| Е., Рои1акои О. апб Агтадап1б1в А. 1пуав1уе аврегд111ов1в т !Ье т!епвй^ге саге иш!. Апп. ΝΥ Асаб. 8сг, 2012, 1272, 31-39.

Ое1в! М.1.Р., Едегег О., ВигЬеппе 1., К1ебе1 К-Б. апб М1кив О. 1пбисйоп оГ уопсопахо1е те!аЬойвт Ьу пГатрш т а райеп! \νί!1ι аси!е туе1о1б 1еикет1а: 1трог!апсе оГ т!егб1вар1тагу соттишсайоп !о ргетеп! !геа!теп! еггогв \νί!1ι сотр1ех тебюайопв. АпйткгоЬ. Адеп!в СЬето!Ьег., 2007, 51, 3455-3456.

Норе У.У., КгиЬ1ак М.1., Ьутап С.А., Рейшйепе К., Ре!га1йв V., Егапсевсош А., Кава1 М., Мюк1епе Б., 8еш Т., Ре!ег 1., Ке1аЬег А.М., НидЬев 1.Е., Со!!оп М.Р., Со!!еп С.1., ВасЬег 1., Тпра!1и 8., Вегтибех Ь., Маиде1 Т.К., 2етГав Р.М., ХУшдагб 1.К., Бтивапо О.Ь. апб Уа1вЬ Т.1. Ра!Ьодепев1в оГ Авретд111ив Гит1да!ив апб !Ье кшейсв оГ да1ас!отаппап ш ап ш уйго тобе1 оГ еаг1у туавйе ри1топагу аврегдШов1в: 1трйсайопв Гог апйГипда1 !Ьегару. 1. 1пГес!. Б1в., 2007, 195(3), 455-466.

- 22 032454 .копд 8., Ыдиуеп Р.Э. апб Эек1а Ζ. СотргеИепкгуе т у11го апа1ук1к оГ гопсопахо1е 1пЫЬШоп оГ е1дИЕ суЕосИготе Р450 (СУР) епхутек: та)ог еГГес! оп СУРк 2В6, 2С9, 2С19, апб 3А. АпЕтсгоЬ. АдепЕк СИетоШег., 2009, 53, 541-551.

Каиг 8. апб 8тдИ 8. Вюй1т ГогтаЬоп Ьу АкрегдШик ГипидаШк. Меб. Мусо1., 2014, 52, 2-9.

К1тига С., Иеба К., Ею 8., \Уа1апаЬе Υ., Макико Т., Киката Т., Вагпек Р.1, Ио К. апб Клха\\'а Υ. То1111ке гесерЮг 3 кИти1аИоп саикек согисоЧегснб-геГгасЮгу а1г\гау пеиЕгорИШа апб Иурег-гекропкгуепекк ш тюе. СИекЕ. 2013, 144, 99-105.

Ба1 А. апб ТИотркоп С.К. ИрбаЕе оп Ше орИта1 ике оГ гопсопахо1е Гог туакгуе Гипда1 1пГесИопк. ШесЕ. Эгид КеДк!., 2011, 4, 43-53.

Ытрег А.Н., Кпох К.8., 8агок1 С.А., Атре1 Ы.М., ВеппеИ ЕЕ., Са1апхаго А., Оа\тек 8.Р., О1ктикек ^.Е., Наде С.А., Магг К.А., Мобу С.Н., РегГесЕ ЕК. апб 8Ееуепк О.А. Ап ОГйс1а1 Атепсап ТИогасю 8ос1еГу 81а1етепЕ ТгеаЕтепЕ оГ Рипда1 ШесИопк ш АбиИ Ри1топагу апб СгШса1 Саге РайепЕк. Ат. Е КекрИ. СпЕ Саге Меб., 2011, 183, 96-128.

Беут М-Ό., беп Но11апбег ЕС., уап бег НоИ В., Купбегк В.Е, уап УИе! М., 8оппеуе1б Р. апб уап 8сИа1к К.Н. НераЕоЕохюИу оГ ога1 апб тЕгауепоик уопсопахо1е ш ге1аИоп Ео суЕосИготе Р450 ро1утогрЫктк. Е АпИтюгоЬ. СИетоШег., 2007, 60, 1104-1107.

Бт 8-1, 8сгапх Σ апб ТеиЕксИ 8.М. АкрегдШик саке-ГаЕаШу гаЕе: кукЕетайс геу1е\у оГ Ше ШегаЕиге. СИп. ШесЕ ϋΐδ., 2001, 32, 358-366.

МопЕеИо М.С., бе 1а Сгпх М, СапЕхаш Е, Могепо С., Тогто ЕК., Ме11або Е, Эе Ьисак ЕК., Акепкю Р., УайапЕе V., ВгакИаде А.А., БаЕде ЕР, СепШоиб О., УкепЕе Р. А пе\у арргоасИ Ео бгид бИсоуегу: ЫдИЕИгоидИриЕ ксгеешпд оГ тюгоЫа1 паЕига1 ехЕгасЕк адатк! АкрегдШик ГииидаЮк иктд гекахипп. Е ВютоЕ 8сгееп. 2012, 17, 542-549.

Ракс.|иа1оио А.С., Ро\уе11 С., Ыгуеп К. апб ПепШпд Ό.ν. ТИе еГГесБ оГ апШипда1 Шегару оп кеуеге акЕИта \\тШ Гипда1 кепкЮхаРоп апб аПегдю ЬгопсИори1топагу акрегдШоДк. КекриШоду, 2009, 14, 1121-127.

Р1егсе С.С., ИррШип Р., ТпкЕап А.К., ’№огт1еу Р.Ь. И., Мота! Е., Катаде С., Борех-К|Ьо1 ЕБ. А к1тр1е апб гергобис1Ь1е 96-\уе11 р1а!е-Ьакеб теШоб Бог Ше ГогтаИоп оГ Гипда1 Ьюй1тк апб Ик аррИсайоп Ео апШипда1 киксерНЬШГу Еекйпд. ЫаЕ. РгоЕос., 2008, 3, 1494-500.

Капкт, N. П1ккетта!еб акрегдШокИ апб топШакИ аккоШаЕеб \\тШ дгапШосуЕокИ апб апйЬюйс Шегару. Вг. Меб. I, 1953, 183, 918-9.

Кобпдиех-Тибе1а ЕБ., Агепбгир М.С., Апкап 8., ВагсЫек1 Р., В111е I, СИуккапШои Е., Сиепса-ЕкГге11а М., Эаппаош Е., Оепптд Ό.ν., Эоппе11у ЕР., Реде1ег V., Бакк-Р1бг1 С., Мооге С., КюИагбкоп М., СаикЕаб Р., 8сЬта1геск А., Уе1едгак1 А. апб Уег\уеу Р. 8иЬсоттШее оГ АпШипда1 8иксер!1ЬШГу Текйпд (АР8Т) оГ ЕИе Е8СМЮ Еигореап СоттШее Гог АпГ1тюгоЫа1 8иксер!1ЬШГу Еекйпд (ЕИСА8Т). ЕИСА8Т ОЕРЮТТГУЕ ООСБМЕЫТ Е.ЭЕЕ 9.1: МеЕИоб Гог ЕИе беЕегттаЕюп оГ ЬгоШ бИиГюп тштит шШЬИогу сопсепГгаГюпк оГ апНГипда1 адепЕк Гог сошб1а Готипд тои1бк. Е.ЭЕР 9.1 2008, 1-13.

8а1тегоп С., РогсИег К., Вегдегоп А., КоЬт М., РеЕЕаи1Е бе БаЕоиг К., Репу С., КосИа V., РеГгороШои А., ХИаагб А., Басго1х С., 8и1аЫап А., 8оае С., апб К1Ьаиб Р. РегкИЕеп! роог 1опд-Еегт ргодпоДк оГ а1одепею ИетаЕоро1еЕю кЕет се11 Ггапкр1ап! гес1р1еп!к кигуМпд туакгуе акрегд11ок1к. Наета!о1о1одюа, 2012, 97, 1357-1363.

8Иаик 8.Е., Баггов ЕР. апб ЕюоЬкеп Е.Ы. Ргасйса1 8уп!Иек1к оГ ЕпапЕюриге СусИс 1,2-Атто А1соИо1к νίη Са!а1уйс АкуттеЕпс Ктд Орешпд оГ Меко Ерох1бек. Е Огд. СИет., 1997, 62, 4197-4199.

ТИотркоп С.К. апб РаЕЕегкоп Т.Р. Ри1топагу акрегдШокИ. 8еттагк ш КекрИаЕогу апб Спйса1 Саге Мебюте, 2008, 29, 103-110.

Vеx1е^ Ό., СошЕпеу К., КюИагбк V., Вапйе1б С., Б1т Е апб БаидЫт М. ЕЕЕесЕ оГ рокасопахо1е оп суЕосЬготе Р450 епхутек: а гапбот1хеб, ореп-1аЬе1 Е^о-^ау сгоккоуег кЕибу. Еиг. Е РИагт. 8сг, 2004, 21, 65-653.

- 23 032454

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ <110> Ри1тос1Де Ь1т1ЬеД <120> Соединения <130> РиЬ-Р1873РСТ <140> ЕР15168637.5 <141> 2015-05-21 <160> 3 <170> Б155АР 1.3 <210> 1 <211> 19 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Первый праймер <400> 1 ддсссббааа бадсссддб 19 <210> 2 <211> 20 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Второй праймер <400> 2 бдадссдаба дбсссссбаа 20 <210> 3 <211> 19 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Область ДНК гибридизационного зонда <400> 3 адссадсддс ссдсааабд 19

- 24 032454

Claims (23)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Соединение формулы (I) дифторфенил)тетрагидрофуран-3-ил)метокси)-3-метилфенил)пиперазин-1-ил)-^(2гидроксициклогексил)бензамид или его фармацевтически приемлемую соль.
2. 2. Соединение по п.1 в виде стереоизомера, выбранного из соединений (1а) и (1Ь) или фармацевтически приемлемой соли любого одного из них.
3. 3. Соединение по п.2, которое представляет собой соединение (1а) дифторфенил)тетрагидрофуран-3-ил)метокси)-3-метилфенил)пиперазин-1-ил)-^((18,28)-2гидроксициклогексил)бензамид или его фармацевтически приемлемую соль.
4. 4. Применение соединения по любому одному из пп.1-3 в производстве лекарственного средства для лечения микозов или для предотвращения или лечения заболевания, ассоциированного с микозами.
5. 5. Применение по п.4, где микоз вызван Азрег§111из зрр.
6. 6. Применение по п.5, где АзрегдлИиз зрр. представляет собой Азрег§111из £иш1§а!из или Азрег§111из Дауиз.
7. 7. Применение по п.6, где АзрегдШиз зрр. представляет собой АзрегдШиз £иш1§а!из.
8. 8. Применение по п.4, где микоз вызван АигеоЬаз1Дшт ри11и1апз, К^ориз огхъае, Сгур!ососсиз пео£огтапз, СЬае!от1шит ДоЬозит, РетсШшт сЬгузодепит, Гизагшт дгаттегагит, СЫозропит ЬегЬагит, гиЬгит или СапФДа зрр.
9. 9. Применение по п.8, где СапФДа зрр. представляет собой СапФДа а1Ысапз, СапФДа д1аЬга!а или СапД1Да кгизет
10. 10. Применение по п.4, где микоз представляет собой азолорезистентный микоз.
11. 11. Применение соединения по любому из пп.1-3 в качестве лекарственного препарата для лечения микозов или для предотвращения или лечения заболевания, ассоциированного с микозами в комбинации со вторым или дополнительным активным ингредиентом, где второй или дополнительный активный ингредиент представляет собой противогрибковый агент.
12. 12. Применение по п.11, где противогрибковый агент представляет собой азоловый противогрибковый агент.
13. 13. Применение по п.12, где азоловый противогрибковый агент представляет собой вориконазол, позаконазол, итраконазол или изавуконазол.
14. 14. Применение по п.11, где противогрибковый агент выбирают из вориконазола, позаконазола, итраконазола и каспофунгина.
15. 15. Фармацевтическая композиция, обладающая противогрибковой активностью, содержащая соединение по любому из пп.1-3 в комбинации с одним или более фармацевтически приемлемыми разбавителями или носителями.

    - 25 032454
16. 16. Фармацевтическая композиция по п.15, которая содержит второй или дополнительный активный ингредиент, где второй или дополнительный активный ингредиент представляет собой противогрибковый агент.
17. 17. Фармацевтическая композиция по п.16, где противогрибковый агент представляет собой азоловый противогрибковый агент.
18. 18. Фармацевтическая композиция по п.17, где азоловый противогрибковый агент представляет собой вориконазол, позаконазол, итраконазол или изавуконазол.
19. 19. Фармацевтическая композиция по п.16, где второй или дополнительный активный ингредиент выбирают из вориконазола, позаконазола, итраконазола и каспофунгина.
20. 20. Способ лечения пациента с микозом, который включает введение указанному пациенту эффективного количества соединения по любому одному из пп.1-3.
21. 21. Способ по п.20, где микоз вызван АзрегдШиз зрр.
22. 22. Способ по п.20, где микоз вызван АигеоЬазМшт ри11и1апз, КЫ/ориз огу/ае, Сгур1ососсиз пеоГогтапз, СЬае1от1тит д1оЬозит, РетсШшт сЬгузодепит, Ризапит дгаттегагит, С1а0озропит ЬегЬагит, ТпсЬорЬу1оп гиЬгит или СапдМа зрр.
23. 23. Способ по п.20, где микоз представляет собой азолорезистентный микоз.

    Соединение (1а) - 0.0032 0.016 0.08 (мкг/мл, интраназально)