EA031997B1 - Способ получения агрохимической композиции со сниженной токсичностью путем измельчения предварительно приготовленной смеси пестицида и гидрофобина - Google Patents

Способ получения агрохимической композиции со сниженной токсичностью путем измельчения предварительно приготовленной смеси пестицида и гидрофобина Download PDF

Info

Publication number
EA031997B1
EA031997B1 EA201790980A EA201790980A EA031997B1 EA 031997 B1 EA031997 B1 EA 031997B1 EA 201790980 A EA201790980 A EA 201790980A EA 201790980 A EA201790980 A EA 201790980A EA 031997 B1 EA031997 B1 EA 031997B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
hydrophobin
pesticide
composition
water
suspension
Prior art date
Application number
EA201790980A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201790980A1 (ru
Inventor
Винфрид Майер
Штеффен Кун
Томас Оттиллингер
Эльке Виттмер
Томас Зубковски
Original Assignee
Басф Се
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Басф Се filed Critical Басф Се
Publication of EA201790980A1 publication Critical patent/EA201790980A1/ru
Publication of EA031997B1 publication Critical patent/EA031997B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N25/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests
    • A01N25/32—Ingredients for reducing the noxious effect of the active substances to organisms other than pests, e.g. toxicity reducing compositions, self-destructing compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N25/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests
    • A01N25/02—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators, characterised by their forms, or by their non-active ingredients or by their methods of application, e.g. seed treatment or sequential application; Substances for reducing the noxious effect of the active ingredients to organisms other than pests containing liquids as carriers, diluents or solvents
    • A01N25/04—Dispersions, emulsions, suspoemulsions, suspension concentrates or gels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N37/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing organic compounds containing a carbon atom having three bonds to hetero atoms with at the most two bonds to halogen, e.g. carboxylic acids
    • A01N37/34—Nitriles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N43/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds
    • A01N43/48—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing heterocyclic compounds having rings with two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
    • A01N43/56—1,2-Diazoles; Hydrogenated 1,2-diazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/30—Microbial fungi; Substances produced thereby or obtained therefrom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
    • A01N63/50—Isolated enzymes; Isolated proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Dentistry (AREA)
  • Agronomy & Crop Science (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Pretreatment Of Seeds And Plants (AREA)

Abstract

Изобретение касается способа получения агрохимической композиции, который включает этапы: а) получение предварительно приготовленной смеси путем приведения в контакт твердого не растворимого в воде пестицида и гидрофобина и б) приготовление необработанной суспензии путем измельчения предварительно приготовленной смеси; причем не растворимым в воде пестицидом является пестицид, выбранный из хлороталонила и флуксапироксада; агрохимической композиции, которую получают вышеупомянутым способом; применения гидрофобина и способа снижения токсичности твердого не растворимого в воде пестицида; способа борьбы с ростом фитопатогенных грибов и/или нежелательных растений и/или инвазией нежелательных насекомых или клещей, и/или регулирования роста растений и семян, включающих вышеупомянутую суспензию.

Description

Настоящее изобретение касается способа получения агрохимической композиции, который включает этапы: а) получение предварительно приготовленной смеси путем приведения в контакт твердого не растворимого в воде пестицида и гидрофобина и б) приготовление необработанной суспензии путем измельчения предварительно приготовленной смеси; причем нерастворимым в воде пестицидом является пестицид, выбранный из хлороталонила и флуксапироксада. Кроме того, изобретение касается агрохимической композиции, включающей твердый нерастворимый в воде пестицид и гидрофобии, причем композицию получают вышеупомянутым способом. Также изобретение касается применения гидрофобина для снижения токсичности твердого нерастворимого в воде пестицида. Другим предметом изобретения являются способ борьбы с ростом фитопатогенных грибов и/или нежелательных растений и/или инвазией нежелательных насекомых или клещей и/или регулирования роста растений, который заключается в том, что композиция воздействует на соответствующих вредителей, среду их обитания или культурные растения, которые подлежат защите от соответствующих вредителей, на почву и/или на нежелательные растения и/или на культурные растения и/или на среду их произрастания; способ снижения токсичности твердого нерастворимого в воде пестицида, включающий этап контактирования нерастворимого в воде пестицида с гидрофобином; семена, включающие вышеупомянутую суспензию.
Были разработаны различные способы снижения токсичности пестицидов, например, для фермеров, имеющих дело с агрохимическими композициями. Рекомендуется уменьшить время контакта с ними, пользоваться защитными перчатками или защитными очками. Концентрация пестицида в композиции может быть снижена, или пестициды могут быть инкапсулированы в капсулы из поли(мет)акрилатов или полимочевины.
Цель настоящего изобретения состоит в обеспечении способа снижения токсичности пестицидов в агрохимических композициях.
Цель достигалась благодаря способу получения агрохимической композиции, который включает этапы
а) получения предварительно приготовленной смеси путем приведения в контакт твердого нерастворимого в воде пестицида и гидрофобина, и
б) приготовления необработанной суспензии путем измельчения предварительно приготовленной смеси;
причем нерастворимым в воде пестицидом является пестицид, выбранный из хлороталонила и флуксапироксада.
Объем данной заявки также охватывает комбинации вариантов осуществления, комбинации предпочтительных вариантов осуществления и комбинации предпочтительных форм, в каждом случае - независимо от степени предпочтения.
На этапе а) приведение в контакт осуществляют путем смешивания (например, путем перемешивания, взбалтывания, выливания) пестицида, гидрофобина и, необязательно, воды и диспергирующего агента. Компоненты на этапе а) могут смешиваться в любом порядке. Как правило, гидрофобии добавляют последним сразу после пестицидов. Контакт на этапе а) осуществляют при температуре от -20 до 100°С, предпочтительно от 5 до 80°С, в частности, от 10 до 50°С.
Предпочтительно этап а) включает получение предварительно приготовленной смеси путем приведения в контакт пестицида, гидрофобина и воды.
В другой предпочтительной форме этап а) включает получение предварительно приготовленной смеси путем приведения в контакт пестицида, гидрофобина и диспергирующего агента.
В более предпочтительном варианте этап а) включает получение предварительно приготовленной смеси путем приведения в контакт пестицида, гидрофобина, воды и диспергирующего агента.
Предварительно приготовленная смесь или необработанная суспензия может включать по меньшей мере 100 г/л, предпочтительно по меньшей мере 200 г/л, более предпочтительно по меньшей мере 300 г/л пестицида. Предварительно приготовленная смесь может включать до 999 г/л, предпочтительно до 950 г/л, в частности до 900 г/л пестицида.
Предварительно приготовленная смесь или необработанная суспензия может включать по меньшей мере 0,1 г/л, предпочтительно по меньшей мере 0,5 г/л гидрофобина. Предварительно приготовленная смесь может включать до 50 г/л, предпочтительно до 20 г/л, в частности, до 10 г/л гидрофобина.
Предварительно приготовленная смесь или необработанная суспензия может включать по меньшей мере 10 мас. %, предпочтительно по меньшей мере 20 мас. %, в частности, по меньшей мере 30 мас. % воды. Предварительно приготовленная смесь может включать до 90 мас. %, предпочтительно до 70 мас. %, в частности, до 60 мас. % воды.
Предварительно приготовленная смесь или необработанная суспензия может включать по меньшей мере 1 г/л, предпочтительно по меньшей мере 5 г/л, в частности по меньшей мере 10 г/л диспергирующего агента. Предварительно приготовленная смесь может включать до 250 г/л, предпочтительно до 100 г/л, в частности до 50 г/л диспергирующего агента.
В предпочтительном варианте осуществления предварительно приготовленная смесь содержит по меньшей мере 100 г/л по меньшей мере одного пестицида, по меньшей мере 1 г/л гидрофобина, по меньшей мере 20% воды и по меньшей мере 5 г/л диспергирующего агента.
- 1 031997
В более предпочтительном варианте осуществления предварительно приготовленная смесь содержит по меньшей мере 300 г/л по меньшей мере одного пестицида, по меньшей мере 1 г/л гидрофобина, по меньшей мере 20% воды и по меньшей мере 5 г/л диспергирующего агента.
Также в предпочтительном варианте осуществления предварительно приготовленная смесь содержит до 900 г/л по меньшей мере одного пестицида, до 20 г/л гидрофобина, до 90 мас.% воды и до 100 г/л диспергирующего агента.
Также в более предпочтительном варианте осуществления предварительно приготовленная смесь содержит до 900 г/л по меньшей мере одного пестицида, до 20 г/л гидрофобина, до 90 мас.% воды и до 50 г/л диспергирующего агента.
На этапе б) измельчение осуществляют в типичных измельчающих устройствах, таких как шаровые мельницы, прутковые мельницы, полу- и аутогенные мельницы, галечные мельницы, вальцовые мельницы, жерновые мельницы, башенные мельницы, молотковые дробилки, планетарные мельницы, ударные дробилки с вертикальным валом, коллоидные мельницы, конические мельницы, дисковые мельницы, бегуны, струйные мельницы, грануляторы, перемешивающие мельницы, трехвалковые мельницы, вибрационные мельницы, мельницы Уайли или другие подобные устройства для перемалывания и измельчения, известные специалистам в данной области.
Пестицид может присутствовать в предварительно приготовленной смеси в форме частиц. Размер частиц пестицида в предварительно приготовленной смеси может быть большим чем 100 мкм, предпочтительно большим чем 50 мкм, наиболее предпочтительно - от 50 до 100 мкм.
Пестицид может присутствовать в необработанной суспензии в форме частиц. Размер частиц пестицида в необработанной суспензии может быть меньшим чем 100 мкм, предпочтительно меньшим чем 50 мкм, более предпочтительно меньшим чем 10 мкм, особенно предпочтительно меньшим чем 5 мкм. В частности, размер частиц пестицида является меньшим чем 3 мкм. В данном случае частицы пестицида обычно имеют определенный гранулометрический состав и вышеуказанные значения означают стохастическое значение d50, являющееся типичной единицей характеризации, известной специалистам в данной области.
Гранулометрический состав определяют по дифракции лазерного излучения водной суспензии, включающей частицы. Приготовление образца, например, разведение до измеряемой концентрации, согласно этому способу измерения, зависит, в частности, от тонкости измельчения и концентрации активных веществ в образце суспензии и от применяемого устройства (например, Malvern Mastersizer). Процедура должна разрабатываться для конкретной системы и, как правило, известна специалистам в данной области.
Термин пестицид касается по меньшей мере одного, нерастворимого в воде, активного вещества, выбранного хлороталонила и флуксапироксада. В одном варианте осуществления пестицидом является хлороталонил. В другом варианте осуществления пестицидом является флуксапироксад. Специалистам в данной области известны такие пестициды, которые упоминаются, например, в справочнике Pesticide Manual, 16th Ed. (2013), The British Crop Protection Council, London.
Нерастворимые в воде пестициды могут обладать водорастворимостью до 10 г/л, предпочтительно до 1 г/л, в частности до 0,5 г/л при 20°С.
Пестицид, такой как не растворимый в воде пестицид, обычно имеет точку плавления свыше 30°С, предпочтительно свыше 50°С, в частности свыше 70°С.
Гидрофобины в соответствии с изобретением могут быть описаны общей формулой (I) Xn-C1-X1.5o-C2-Xo.5-C3-X1.1oo-C4-X1.ioo-C5-X1.5o-C6-Xo.5-C7-X1.5o-C8-Xm (I) где X означает любую из 20 природных аминокислот (Phe, Leu, Ser, Tyr, Cys, Trp, Pro, His, Gln, Arg, Ile, Met, Thr, Asn, Lys, Val, Ala, Asp, Glu, Gly) и присвоенные им указатели означают количество аминокислот. В данном случае указатели n и m означают числа от 0 до 500, предпочтительно от 15 до 300, С означает цистеин, и по меньшей мере одна из полипептидных последовательностей Xm или Xn означает пептидную последовательность из по меньшей мере 20 аминокислот, которые в природе не связаны с гидрофобином. В данном случае гидрофобии вызывает сдвиг угла контакта после покрытия поверхности стекла по меньшей мере на 20°.
Цистеины с С1 по С8 в соответствии с изобретением могут присутствовать в восстановленной или окисленной форме или образовывать дисульфидные мостики. Особенно предпочтительным является межмолекулярное образование дисульфидных мостиков, в частности, с одним, предпочтительно двумя, более предпочтительно 3, особенно предпочтительно 4 межмолекулярными дисульфидными мостиками, выбранными из следующей группы: С1 с С2; С3 с С4; С5 с С6; С7 с С8.
В случае использования Cys в позициях X присвоенные номера различных позиций цистеина в общих формулах изменяются соответствующим образом.
Предпочтительными полипептидами являются полипептиды общей формулы (II)
Χη-C1 -Хз.25-С2-Хо.2-С3-Х5.5о-С4-Х2.з5-С5-Х2.15-С6-Хо.2-С7-Хз.з5-С8-Хт (II), где X означает любую из 20 природных аминокислот (Phe, Leu, Ser, Tyr, Cys, Trp, Pro, His, Gln, Arg, Ile Met, Thr, Asn, Lys, Val, Ala, Asp, Glu, Gly), и присвоенные им указатели означают количество аминокислот. В данном случае указатели n и m означают числа от 2 до 300, С означает цистеин, и по меньшей
- 2 031997 мере одна из полипептидных последовательностей Xm или Xn означает пептидную последовательность из по меньшей мере 35 аминокислот, которые в природе не связаны с гидрофобином. В данном случае гидрофобии вызывает сдвиг угла контакта после покрытия поверхности стекла по меньшей мере на 20°.
Особенно предпочтительными полипептидами являются полипептиды общей формулы (III)
Xn-C1-X5.9-C2-C3-X11.39-C4-X2.23-C5-X5.9-C6-C7-X6.18-C8-Xm (III), где X означает любую из 20 природных аминокислот (Phe, Leu, Ser, Tyr, Cys, Trp, Pro, His, Gln, Arg, Ile Met, Thr, Asn, Lys, Val, Ala, Asp, Glu, Gly), и присвоенные им указатели означают количество аминокислот. В данном случае указатели n и m означают числа от 0 до 200, С означает цистеин, и по меньшей мере одна из полипептидных последовательностей Xm или Xn означает пептидную последовательность из по меньшей мере 40 аминокислот, которые в природе не связаны с гидрофобином. В данном случае гидрофобии вызывает сдвиг угла контакта после покрытия поверхности стекла по меньшей мере на 20°.
Особенно предпочтительными являются полипептиды формул (I), (II) или (III), причем соответствующая формула включает по меньшей мере один гидрофобии, выбранный из dewA, rodA, hypA, hypB, sc3, basf1, basf2; предпочтительно dewA, rodA, basf1, basf2; наиболее предпочтительно - из dewA, rodA. В одном варианте осуществления гидрофобии представляет собой dewA. В другом варианте осуществления гидрофобии представляет собой rodA. В другом варианте осуществления гидрофобии представляет собой hypA. В другом варианте осуществления гидрофобии представляет собой hypB. В другом варианте осуществления гидрофобии представляет собой sc3. В другом варианте осуществления гидрофобии представляет собой basf1. В другом варианте осуществления гидрофобии представляет собой basf2. Последовательности вышеупомянутых гидрофобинов раскрываются в документе WO 2006/082251, SEQ ID NO 1-14.
Белки в соответствии с настоящим изобретением по меньшей мере в одной позиции Xn или Xm включают полимерную последовательность из по меньшей мере 20, предпочтительно 35, особенно предпочтительно 50 в частности, 100 аминокислот (в дальнейшем указываемую как партнер по связыванию), который в природе не связывается с гидрофобином. Таким образом, следует заметить, что белки состоят из гидрофобиновой части и партнера по связыванию и как таковые в природе не встречаются.
Партнер по связыванию может быть выбран из различных белков. Также несколько партнеров по связыванию могут быть связаны с гидрофобином, например, на аминоконце (Xn) и на карбоксиконце (Xm) гидрофобинового компонента. Также возможно связывание двух партнеров по связыванию с одной позицией (Xn или Xm) белка в соответствии с изобретением.
Предпочтительными партнерами по связыванию являются полипептиды, встречающиеся в природе в микроорганизмах, в частности, в Е. coli или Bacillus subtilis. Примерами таких партнеров по связыванию могут быть последовательности yyad, yyae и тиоредоксин, которые раскрываются в документе WO 2006/082251, SEQ ID NO 15-18. В одном варианте осуществления партнером по связыванию является. В другом варианте осуществления партнером по связыванию является уаае. В другом варианте осуществления партнером по связыванию является тиоредоксин.
Подходящими партнерами по связыванию также являются фрагменты или производные вышеупомянутых последовательностей, включающие лишь часть, предпочтительно от 70 до 99%, более предпочтительно - от 80 до 98%, этих последовательностей или последовательностей, в которых отдельные аминокислоты или нуклеотиды являются измененными. Примерами могут быть другие аминокислоты на Сконце последовательностей yyad и уаае, в частности, две аминокислоты, предпочтительно аминокислоты Arg и Ser. Кроме того, в последовательность уаае могут быть вставлены другие аминокислоты, например, аминокислота № 2 (Gly) в соответствии с документом WO 2006/131564, SEQ ID NO 17-18.
Получение гидрофобинов может быть достигнуто при помощи химических процессов синтеза пептидов, например, твердофазного синтеза, которые известны специалистам в данной области.
Однако особенно предпочтительными являются процессы, в которых задействованы генетически модифицированные организмы или линии клеток в качестве продуктивных систем, в которых последовательности генов, кодирующие партнер по связыванию и гидрофобиновую часть, комбинируются в экспрессионный конструкт. Затем нужный белок вырабатывается в продуктивной системе после переноса экспрессионного конструкта в вышеупомянутую продуктивную систему в виде продукта экспрессии гена комбинированных генных последовательностей.
Подходящие конструкты экспрессии генов известны из литературы (например, документ WO 2006/082251) и могут быть легко получены специалистами в данной области. Соответствующий полипептидный конструкт может нести дополнительные аминокислоты на обоих концах в результате генетического конструкта, а также дополнительные аминокислоты между слитым белком и гидрофобином.
Возможные модификации молекул гидрофобина могут включать гликозилирование, ацетилирование или химическое сшивание, например, с глютаральдегидом.
Одна особенность гидрофобинов в соответствии с изобретением состоит в изменении характеристик поверхности, если эти поверхности покрыты белками. Это изменение экспериментально может определяться путем измерения угла контакта капельки воды до и после покрытия поверхности белком и вычисления разницы между двумя значениями.
Экспериментальные условия измерения угла контакта описываются следующей процедурой:
- 3 031997
Свойства покрытия гидрофобином или слитыми с гидрофобином белками предпочтительно измеряют на стекле или тефлоне в качестве моделей гидрофобных и гидрофильных поверхностей.
Если измерения осуществляют на стекле, стеклянную пластинку инкубируют в растворе 1-100 мкг/мл гидрофобина в 50 мМ ацетата натрия, рН 4 и 0,1% Tween 20 при 80°С в течение суток, затем промывают H2Odd, инкубируют в 1% SDS в течение 10 мин при 80°С и промывают H2Odd.
Если их осуществляют на тефлоне, тефлоновую пластинку инкубируют в растворе 1-100 мкг/мл гидрофобина в 10 мМ Tris, рН 8, при 80°С в течение суток, затем промывают H2Odd, инкубируют в 1% SDS в течение 10 мин при 80°С и промывают H2Odd.
Затем образцы высушивают на воздухе и угол контакта капельки 5 мкл воды измеряют на системе для измерения угла контакта Dataphysics OCA 15+, программа SCA 20.2.0 (ноябрь 2002 г.). Измерение выполняли согласно инструкциям производителя.
В этих условиях белки согласно настоящему изобретению увеличивают угол контакта по меньшей мере на 20, предпочтительно на 25, особенно предпочтительно - на 30°.
Подходящими продуктивными системами могут быть прокариоты (включая археобактерии) или эукариоты, предпочтительно бактерии, к которым относятся галобактерии и метанококки, грибы, клетки насекомых, клетки растений, клетки млекопитающих, особенно предпочтительно - Escherichia coli, Bacillus subtilis, Bacillus megaterium, Aspergillus oryzea, Aspergillus nidulans, Aspergillus niger, Pichia pastoris, Pseudomonas spec, Lactobacillus, Hansenula polymorpha, Trichoderma reesei или клетки SF9 (и подобные линии клеток).
Предпочтительными продуктивными системами являются генетически модифицированные организмы или линии клеток, предпочтительно Escherichia coli, Bacillus subtilis и клетки SF9, особенно предпочтительно - Escherichia coli.
В зависимости от продуктивной системы, используемой в соответствии с изобретением, их выращивают или культивируют с применением способов, известных специалистам в данной области. Микроорганизмы обычно выращивают в жидкой среде, содержащей источник углерода, как правило, в форме Сахаров, источник азота, как правило, в форме органических источников азота, таких, как экстракт дрожжей, или солей, таких, как сульфат аммония, микроэлементы, такие как соли железа, марганца, магния, и, необязательно, витамины. Их обычно выращивают при температуре от 0 до 100°С, предпочтительно от 10 до 60°С, при дополнительном газировании кислородом. В данном случае уровень рН питательного раствора поддерживают при определенном значении, то есть, он может регулироваться или не регулироваться во время ферментации. Ферментацию осуществляют как периодический процесс, как полунепрерывный процесс или непрерывно. Питательный материал подают в начале ферментации; его добавляют в полунепрерывном или непрерывном режиме. Белки могут быть выделены из организмов или могут использоваться в виде необработанного экстракта для описанной цели в соответствии с изобретением.
Получение гидрофобинов может быть достигнуто путем культивирования продуцирующего полипептид микроорганизма, необязательно вызывающего экспрессию полипептидов, и выделения белка из жидкой культуры.
Генетически модифицированный организм или линию клеток культивируют и ферментируют. Бактерии выращивают, например, в ТВ- или LB-среде или при температуре от 20 до 40°С и рН от 6 до 9. Подходящие условия культивирования описываются в публикации Т. Maniatis, E. F. Fritsch and J. Sambrook, Molecular Cloning : A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY (1989).
Если полипептиды не секретируются в культуральную среду, клетки разрушают и продукт выделяют из лизата с применением способов, известных специалистам в данной области. Клетки могут быть разрушены при помощи ультразвука высокой частоты, под высоким давлением, например, при помощи пресса Френча, путем осмолиза, пут ем применения детергентов, лизирующих ферментов или органических растворителей, путем гомогенизации или сочетания вышеупомянутых способов. При этом не имеет значения, пребывает ли белок в природной форме или в форме тел включений. Целевой белок высвобождают из клеток среди других растворимых белков.
Очистки полипептидов достигают с применением способов, известных специалистам в данной области. На первом этапе продукт отделяют от клеточного дебриса, например, путем осаждения в центрифуге, путем фильтрации или путем фракционированного осаждения. Особенно успешным этот способ является в случаях, когда целевой белок пребывает в форме тел включений. В этом случае он может быть выборочно отделен от клеточного дебриса путем центрифугирования при помощи сепаратора или соплового сепаратора. После ренатурации белка (например, способами, описанными в документе WO 2008/019964) очистки белка достигают известными способами хроматографии, например, путем гельфильтрации, ионообменной хроматографии и хроматографии гидрофобного взаимодействия, а также другими общепринятыми способами, такими, как ультрафильтрация, кристаллизация, высаливание, диализ или природный гель-электрофорез. Подходящие способы описываются в публикациях Cooper, F. G., Biochemische Arbeitsmethoden, Verlag Water de Gruyter, Berlin, New York, или Scopes, R., Protein Purification, Springer Verlag, New York, Heidelberg, Berlin.
- 4 031997
После этого приготавливают композицию белка путем высушивания раствора белка, например, путем сублимационной сушки, распылительной сушки, грануляции распылением или испарения воды и с использованием белка в виде порошка или гранулята.
Например, распылительная сушка и грануляции распылением могут достигаться, как описывается в документе WO 2008/019964.
Целесообразным может быть использование векторных систем или олигонуклеотидов для выделения рекомбинантного белка, которые удлиняют кДНК для кодирования некоторых нуклеотидных последовательностей для измененных полипептидов или слитых белков, которые способствуют выделению. Подходящими модификациями могут быть, например, так называемые метки, такие, как гексагистидиновая метка (His6), или эпитопы, которые могут быть распознаны антителами как антигены (описываются в публикации Harlow, E. and Lane, D., 1988, Antibodies: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor (N. Y.) Press).
Другими подходящими метками могут быть, например, НА-метки, кальмодулин-BD, GST, MBD, хитин-BD, стрептавидин-BD-Avi-метка, Flag-метка, Т7 и т.п. Эти метки могут использоваться для прикрепления белков к твердой поверхности, например, полимерной матрице, которая может быть включена в хроматографическую колонку, или к микротитровальному планшету или к любой другой поверхности. Соответствующие протоколы очистки можно получить от коммерческих поставщиков аффинных меток.
В одном варианте осуществления меткой является His6-метка. В другом варианте осуществления меткой является НА-метка. В еще одном варианте осуществления меткой является кальмодулин-BDметка. В другом варианте осуществления меткой является GST-метка. В другом варианте осуществления меткой является MBD-метка. В другом варианте осуществления меткой является хитин-BD-метка. В другом варианте осуществления меткой является стрептавидин-BD-Avi-метка. В другом варианте осуществления меткой является Flag-метка.
Гидрофобиновые белки в соответствии с изобретением обладают свойствами, требуемыми от гидрофобинов как в форме слитых белков, так и в их выделенной форме. Таким образом, они могут применяться непосредственно или после расщепления и отделения партнера по связыванию в качестве чистых гидрофобинов.
Если предусмотрено отделение партнера по связыванию, соответствующий сайт расщепления (специфический сайт распознавания для протеаз) вставляют в слитый белок между гидрофобиновым белком и партнером по связыванию. Подходящими сайтами расщепления предпочтительно являются те, которые не встречаются ни в гидрофобиновом компоненте, ни в слитом белке, что может быть легко определено при помощи биоинформатических средств. Особенно подходящими являются, например, расщепления BrCN в метионине или опосредованное протеазой расщепление фактором Ха, энтерокиназой, тромбином, TEV (протеазой вируса гравировки табака).
Настоящее изобретение также касается агрохимической композиции, включающей твердый нерастворимый в воде пестицид и гидрофобии, причем композицию предпочтительно получают с применением способа в соответствии с изобретением. В одной форме агрохимическую композицию, включающую пестицид и гидрофобии, получают способом, включающим этапы: а) получения предварительно приготовленной смеси путем приведения в контакт пестицида и гидрофобина и б) приготовления необработанной суспензии путем измельчения предварительно приготовленной смеси.
Агрохимическая композиция может присутствовать в различных типах композиции, таких как суспензии (например, SC, OD, FS, ZC), смачиваемые порошки или дусты (например, WP, SP, WS, DP, DS), гранулы (например, WG, SG, GR, FG, GG, MG). Эти и другие типы композиций определяются в публикации Catalogue of pesticide formulation types and international coding system, Technical Monograph No. 2, 6th Ed. May 2008, CropLife International.
В одной форме агрохимическая композиция представляет собой водную суспензию. Суспензия включает пестицид в форме частиц пестицида, которые обычно являются суспендированными в непрерывной водной фазе. Частицы пестицида могут присутствовать в форме кристаллических или аморфных частиц, которые являются твердыми при 20°С.
Агрохимическая композиция в форме концентрата суспензии может включать от 0,1 до 50 г/л гидрофобина, предпочтительно от 0,1 до 10 г/л, более предпочтительно от 0,5 до 10 г/л гидрофобина, в частности от 1 до 10 г/л гидрофобина.
В одной форме изобретения агрохимическая композиция в форме суспензии может включать по меньшей мере 100 г/л пестицида, от 0,1 до 10 г/л гидрофобина и по меньшей мере 1 г/л диспергирующего агента.
Предпочтительно агрохимическая композиция в форме концентрата суспензии может включать по меньшей мере 100 г/л пестицида, от 0,5 до 10 г/л гидрофобина и по меньшей мере 5 г/л диспергирующего агента.
Более предпочтительно агрохимическая композиция в форме концентрата суспензии может включать по меньшей мере 200 г/л пестицида, от 0,5 до 5 г/л гидрофобина и по меньшей мере 10 г/л диспергирующего агента.
Агрохимическая композиция в форме концентрата суспензии может включать до 900 г/л пестицида,
- 5 031997 до 10 г/л гидрофобина и до 100 г/л диспергирующего агента.
Предпочтительно агрохимическая композиция в форме концентрата суспензии может включать до
900 г/л пестицида, до 10 г/л гидрофобина и до 50 г/л диспергирующего агента.
Суспензия может включать еще один пестицид, дополнительно к пестицидам в форме частиц пестицида, причем дополнительный пестицид растворяют в водной фазе суспензии.
Агрохимическая композиция предпочтительно представляет собой водную суспензию, что означает, что суспензия включает воду. Суспензия может включать по меньшей мере 15 мас.%, предпочтительно по меньшей мере 30 мас.%, особенно предпочтительно по меньшей мере 40 мас.% воды от общей массы суспензии. Суспензия может включать от 20 до 85 мас.%, предпочтительно от 30 до 75 мас.%, особенно предпочтительно от 35 до 70 мас.% воды от общей массы суспензии.
В еще одной форме агрохимическая композиция представляет собой композицию твердого типа, такую как смачиваемый порошок или дуст (например, WP, SP, WS, DP, DS) или гранулы (например, WG, SG, GR, FG, GG, MG). Композиции твердого типа приготавливают с применением способа в соответствии с изобретением, который включает дополнительно к этапам а) и б) этап в), который состоит в высушивании необработанной суспензии. Высушивания достигают традиционными способами, например путем выпаривания любых жидкостей, таких как вода, путем применения повышенных температур и/или вакуума.
В еще одной форме агрохимическая композиция представляет собой композицию твердого типа, выбранную из диспергируемых в воде гранул или водорастворимых гранул, которая может включать 5080 мас.% пестицида и до 100 мас.% диспергаторов и увлажняющих агентов (например, лигносульфоната натрия и этоксилата спирта).
В еще одной форме агрохимическая композиция представляет собой композицию твердого типа, выбранную из диспергируемых в воде порошков и водорастворимых порошков, которая может включать 50-80 мас.% пестицида, 1-5 мас.% диспергаторов (например, лигносульфоната натрия), 1-3 мас.% увлажняющих агентов (например, этоксилата спирта) и до 100 мас.% твердого носителя, например силикагеля.
Агрохимическая композиция может включать вспомогательные вещества для агрохимических композиций. Примерами подходящих вспомогательных веществ могут быть твердые носители или наполнители, поверхностно-активные вещества, диспергирующие агенты, эмульгаторы, увлажнители, адъюванты, солюбилизаторы, средства, улучшающие проникновение, защитные коллоиды, добавки, повышающие адгезию, загустители, смачивающие вещества, водоотталкивающие средства, аттрактанты, стимуляторы поедания, агенты, улучшающие совместимость, бактерициды, вещества, понижающие температуру замерзания, противовспениватели, красители, агенты, придающие липкость и связующие.
Подходящими твердыми носителями или наполнителями являются минералы, например, силикаты, силикагели, тальк, каолины, известняк, известь, мел, глины, доломит, диатомовая земля, бентонит, сульфат кальция, сульфат магния, оксид магния; полисахаридные порошки, например, целлюлоза, крахмал; удобрения, например, сульфат аммония, фосфат аммония, нитрат аммония, мочевины; продукты растительного происхождения, например, зерновая мука, мука из древесной коры, древесная мука, мука из ореховой скорлупы и их смеси.
Подходящими диспергирующими агентами являются поверхностно-активные соединения, такие как анионные, катионные, неионные и амфотерные поверхностно-активные вещества, блок-полимеры, полиэлектролиты и их смеси. Такие поверхностно-активные вещества могут применяться в качестве эмульгатора, солюбилизатора, увлажнителя, вещества, способствующего проникновению, защитного коллоида или адъюванта. Примеры поверхностно-активных вещества перечислены в публикации McCutcheon's, Vol. 1: Emulsifiers & Detergents, McCutcheon's Directories, Glen Rock, USA, 2008 (International Ed. or North American Ed.).
Подходящими анионными поверхностно-активными веществами являются щелочи, щелочноземельные или аммониевые соли сульфонатов, сульфатов, фосфатов, карбоксилатов и их смеси. Примерами сульфонатов могут быть алкиларилсульфонаты, дифенилсульфонаты, альфа-олефинсульфонаты, лигнинсульфонаты, сульфонаты жирных кислот и масел, сульфонаты этоксилированных алкилфенолов, сульфонаты алкоксилированных арилфенолов, сульфонаты конденсированных нафталинов, сульфонаты додецил- и тридецилбензолов, сульфонаты нафталинов и алкилнафталинов, сульфосукцинаты или сульфосукцинаматы. Примерами сульфатов могут быть сульфаты жирных кислот и масел, этоксилированных алкилфенолов, спиртов, этоксилированных спиртов или сложных эфиров жирных кислот. Примерами фосфатов могут быть фосфатные сложные эфиры. Примерами карбоксилатов могут быть алкилкарбоксилаты и карбоксилированный спирт или алкилфенолэтоксилаты.
Суспензия предпочтительно включает анионное поверхностно-активное вещество. Предпочтительными анионными поверхностно-активными веществами являются сульфонаты, причем большее предпочтение отдается сульфонатам конденсированных нафталинов. Суспензия может включать от 0,1 до 12 мас.%, предпочтительно от 0,5 до 7 мас.%, в частности от 1 до 4 мас.% анионного поверхностноактивного вещества (например, сульфоната).
Подходящими неионными поверхностно-активными веществами являются алкоксилаты, Nзамещенные амиды жирных кислот, аминоксиды, сложные эфиры, поверхностно-активные вещества на
- 6 031997 основе Сахаров, полимерные поверхностно-активные вещества и их смеси. Примерами алкоксилатов могут быть такие соединения, как спирты, алкилфенолы, амины, амиды, арилфенолы, жирные кислоты или сложные эфиры жирных кислот, алкоксилированные 1-50 эквивалентами. Для алкоксилирования применяют этиленоксид и/или пропиленоксид, предпочтительно этиленоксид. Примерами Nзамещенных амидов жирных кислот могут быть глюкамиды жирных кислот или алканоламиды жирных кислот. Примерами сложных эфиров могут быть сложные эфиры жирных кислот, сложные эфиры глицерина или моноглицириды.
Примерами поверхностно-активных веществ на основе Сахаров могут быть сорбиты, этоксилированные сорбиты, сложные эфиры сахарозы и глюкозы или алкилполиглюкозиды. Примерами полимерных поверхностно-активных веществ могут быть гомо- или сополимерами винилпирролидона, виниловых спиртов или винилацетата.
Подходящими катионными поверхностно-активные веществами являются четвертичные поверхностно-активные вещества, например, четвертичные аммониевые соединения с одной или двумя гидрофобными группами, или соли длинноцепочечных первичных аминов. Подходящими амфотерными поверхностно-активными веществами являются алкилбетаины и имидазолины. Подходящими блок-полимерами являются блок-полимеры А-В или А-В-А типа, включающие блоки полиэтиленоксида и полипропиленоксида, или А-В-С типа, включающие алканол, полиэтиленоксид и полипропиленоксид.
Подходящими адъювантами являются соединения, которые сами обладают незначительной пестицидной активностью или совсем ею не обладают, и которые улучшают биологическое воздействие соединения I на объект. Примерами могут быть поверхностно-активные вещества, минералы или растительные масла и другие вспомогательные вещества. Другие примеры перечислены в публикации Knowles, Adjuvants and additives, Agrow Reports DS256, T&F Informa UK, 2006, chapter 5.
Подходящими загустителями являются полисахариды (например, ксантановая камедь, карбоксиметилцеллюлоза), неорганические глины (органически модифицированные или немодифицированные), поликарбоксилаты и силикаты.
Подходящими бактерицидами являются производные бронопола и изотиазолинона, такие, как алкилизотиазолиноны и бензизотиазолиноны.
Подходящими веществами, понижающими температуру замерзания, являются этиленгликоль, пропиленгликоль, мочевина и глицерин.
Подходящими противовспенивателями являются силиконы, длинноцепочечные спирты и соли жирных кислот.
Подходящими красителями (например, красными, синими или зелеными) являются пигменты с низкой растворимостью в воде и водорастворимые красители. Примерами могут быть неорганические красители (например, оксид железа, оксид титана, гексацианоферрат железа) и органические красители (например, ализарин-, азо- и фталоцианиновые красители).
Подходящими агентами, придающими липкость, или связующими являются поливинилпирролидоны, поливинилацетаты, поливиниловые спирты, полиакрилаты, биологические или синтетические воски и эфиры целлюлозы.
Агрохимическая композиция может применяться с целью обработки материала для размножения растений, в частности семян. Данные композиции, после разведения, от двух- до десятикратного, обеспечивают концентрацию активного вещества от 0,01 до 60 мас.%, предпочтительно от 0,1 до 40 мас.%, в готовых для применения композициях. Композиция может применяться до или во время сева. Способы применения агрохимической композиции или обработки ею материала для размножения, в частности, семян, включают способы протравливания, покрытия, гранулирования, опудривания, пропитывания материала для размножения и внесение в борозду. Предпочтительно агрохимическую композицию применяют для растительного материала для размножения таким образом, чтобы применение не вызывало проращивания, например, путем протравливания, гранулирования, покрытия и опудривания.
При применении для защиты растений количество применяемых активных веществ, в зависимости от типа желаемого эффекта, составляет от 0,001 до 2 кг/га, предпочтительно от 0,005 до 2 кг/га, более предпочтительно от 0,05 до 0,9 кг/га, в частности от 0,1 до 0,75 кг/га. При обработке материала для размножения растений, такого как семена, например, путем опудривания, покрытия или пропитывания, как правило, требуется количество активного вещества от 0,1 до 1000 г, предпочтительно от 1 до 1000 г, более предпочтительно от 1 до 100 г, наиболее предпочтительно от 5 до 100 г на 100 кг растительного материала для размножения (предпочтительно семян). При применении для защиты материалов или хранящихся продуктов количество применяемого активного вещества зависит от типа площади применения и от желаемого эффекта. Количество, традиционно применяемое для защиты материалов, составляет от 0,001 г до 2 кг, предпочтительно от 0,005 г до 1 кг, активного вещества на кубический метр обрабатываемого материала.
Различные типы масел, увлажнителей, адъювантов, удобрений или питательных микроэлементов и других пестицидов (например, гербицидов, инсектицидов, фунгицидов, регуляторов роста, антидотов) добавляют к суспензии в виде предварительно приготовленной смеси или, в соответствующих случаях, непосредственно перед применением (баковая смесь). Эти агенты примешивают к суспензиям в соответ- 7 031997 ствии с изобретением в весовом соотношении от 1:100 до 100:1, предпочтительно от 1:10 до 10:1.
Пользователь вносит агрохимическую композицию или баковую смесь, приготовленную из агрохимической композиции, как правило, из распределительного устройства, такого, как ранцевый опрыскиватель, распылительный бак, распыляющий самолет или ирригационная система. Как правило, агрохимическая композиция состоит из воды, буфера и/или других вспомогательных веществ, добавляемых до нужной для применения концентрации, и, таким образом, получают готовую для применения распыляемую жидкость или агрохимическую композицию. Как правило, вносят от 20 до 2000 л, предпочтительно от 50 до 400 л готовой для применения распыляемой жидкости на гектар сельскохозяйственной площади.
Настоящее изобретение также касается способа борьбы с фитопатогенными грибами и/или ростом нежелательных растений и/или инвазией нежелательных насекомых или клещей, и/или для регулирования роста растений, причем агрохимическая композиция воздействует на соответствующих вредителей, среду их обитания, или на культурные растения, подлежащие защите от соответствующих вредителей, на почву и/или на нежелательные растения и/или на культурные растения и/или на среду их произрастания.
Примерами подходящих культурных растений являются злаковые, например, пшеница, рожь, ячмень, тритикале, овес или рис; свекла, например, сахарная или кормовая свекла; семечковые плоды, косточковые плоды и ягоды, например, яблоки, груши, сливы, персики, миндаль, вишни, клубника, малина, смородина или крыжовник; бобовые, например, фасоль, чечевица, горох, люцерна или соя; масличные культуры, например, масличный рапс, горчица, оливки, подсолнечник, кокос, какао, клещевина, масличная пальма, арахис или соя; тыквенные, например, кабачки/тыквы, огурцы или дыни; волокнистые культуры, например, хлопчатник, лен, конопля или джут; цитрусовые, например апельсины, лимоны, грейпфруты или мандарины; овощи, например шпинат, салат, спаржа, капуста, морковь, лук, томаты, картофель, кабачки/тыквы или стручковый перец; растения семейства лавровых, например авокадо, корица или камфора; энергетические культуры и промышленные сырьевые культуры, например кукуруза, соя, пшеница, масличный рапс, сахарный тростник или масличная пальма; кукуруза; табак; орехи; кофе; чай; бананы; виноград (десертные и винодельческие сорта); хмель; травяные культуры, например дерн; медовая трава (Stevia rebaudania); каучуконосы и лесные растения, например цветы, кустарники, лиственные деревья и хвойные деревья, а также материал для размножения, например, семена, и урожай этих растений.
Термин культурные растения также охватывает растения, модифицированные путем селекции, мутагенеза или применения рекомбинантных способов, включая биотехнологические сельскохозяйственные продукты, присутствующие на рынке или пребывающие в процессе разработки. Генетически модифицированными растениями являются растения, генетический материал которых был модифицирован с применением способа, который не встречается в природных условиях: путем гибридизации, мутации или природной рекомбинации (т. е., рекомбинации генетического материала). В данном случае один или несколько генов, как правило, включают в генетический материал растения с целью улучшения свойств растения. Такие рекомбинантные модификации также включают посттрансляционные модификации белков, олиго- или полипептидов, например, путем гликозилирования или связывания полимеров, таких, как, например, пренилированные, ацетилированные или фарнесилированные остатки или PEG-остатки.
Настоящее изобретение также касается семян, содержащих агрохимическую композицию.
Настоящее изобретение также касается применения и способа применения гидрофобина для снижения токсичности (предпочтительно токсичности для органов дыхания) твердого нерастворимого в воде пестицида.
Токсичность композиций испытывают в соответствии с утвержденными ОЭСР Указаниями по испытанию химических веществ № 403 и соответствующим методическим документом GD 39, которые касаются оценки острой токсичности для органов дыхания.
Преимущества настоящего изобретения состоят в том, что агрохимическая композиция обладает сниженной токсичностью, в частности сниженной токсичностью для органов дыхания; другими преимуществами являются уменьшение содержания тенсидов, используемых в композиции, и ее повышенная устойчивость при хранении.
Представленные ниже примеры поясняют изобретение, не ограничивая его объема.
Примеры
Противовспениватель: силиконовый противовспениватель.
Увлажняющий агент: полимер гидроксибензолсульфоновой кислоты, формальдегида, фенола и мочевины.
Ионное поверхностно-активное вещество А: конденсат алкилнафталинсульфонат-формальдегида, натриевая соль.
Неионное поверхностно-активное вещество А: фосфатный эфир тристирилфенилэтоксилата, триэтиламиновая соль, рН (5%, водн.) 7,5, точка кипения свыше 100°С.
Бактерицид: водная смесь 2-метил-4-изотиазолин-3-она и 1,2-бензизотиазолин-3-она.
Гидрофобии А: гранулированный распылением белок yyad-гидрофобин DewA-His6. Клонирование, ферментацию и очистку выполняли в соответствии с документом WO 2006/131564, примеры 1, 2, 7 и 8.
- 8 031997
Пример 1. Приготовление концентрата суспензии флуксапироксада и хлороталонила
Концентрат суспензии флуксапироксада и хлороталонила приготавливали путем смешивания воды, адъюванта А, ионного поверхностно-активного вещества А, увлажняющего агента, пестицидов, гидрофобина А и противовспенивателя. Эту смесь подвергали мокрому измельчению с применением шаровой мельницы до размера частиц 2 мкм.
Добавляли пропиленгликоль, бактерицид, ксантановую камедь и воду и смешивали, получая в результате однородную суспензию, рН от 7,5 до 8,5. Конечная концентрация компонентов представлена в таблице.
Компонент Концентрация в г/л
Флуксапироксад 37,5
Хлороталонил 375
Гидрофобин А 2,2
1,2-пропиленгликоль 50
Ионное поверхностно-активное вещество А 18
Неионное поверхностно-активное вещество А 9,0
Ксантановая камедь з,о
Бактерицид 2,0
Противовспениватель 5,0
Увлажняющий агент 5,0
Вода До 1 литра
Пример 2. Оценка острой токсичности для дыхательных путей
Два концентрата суспензии приготавливали в соответствии с примером 1, причем в одном из них домешивание гидрофобина А не выполняли. Впоследствии их использовали для определения острой токсичности для дыхательных путей в соответствии с утвержденными ОЭСР Указаниями по испытанию химических веществ № 403 (утвержденная версия от 7 сентября 2009 г.) и соответствующим методическим документом GD 39 (дата вступления в силу 21 июля 2009 г.). В соответствии с Директивой 67/548/EWG (исправленная версия, действующая с 20 января 2009 г.), по результатам этого исследования была присвоена классификация Т/Т+ для концентрата суспензии без Гидрофобина А, тогда как концентрат суспензии с добавлением Гидрофобина А был классифицирован как Xn.
Таким образом, добавление Гидрофобина А явно снижает токсичность агрохимической композиции.

Claims (15)

1. Способ получения агрохимической композиции, который включает этапы:
а) получение предварительно приготовленной смеси путем приведения в контакт твердого нерастворимого в воде пестицида и гидрофобина и
б) приготовление необработанной суспензии путем измельчения предварительно приготовленной смеси;
причем нерастворимым в воде пестицидом является пестицид, выбранный из хлороталонила и флуксапироксада.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что на этапе а) дополнительно приводят в контакт воду.
3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что на этапе а) дополнительно приводят в контакт диспергирующий агент.
4. Способ по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что пестицид в необработанной суспензии имеет средний размер частиц меньше 10 мкм.
5. Способ по любому из пп.1-4, отличающийся тем, что предварительно приготовленная смесь содержит по меньшей мере 200 г/л пестицида.
6. Способ по любому из пп.1-5, отличающийся тем, что гидрофобином является полипептид общей формулы (III)
Хп-С1-Х5-9-С2-С3-Х11.39-С4-Х2.23-С5-Х5.9-Сб-С7-Х6.18-С8-Хт (III), в которой X означает любую из 20 природных аминокислот (Phe, Leu, Ser, Tyr, Cys, Trp, Pro, His, Gln, Arg, Ile Met, Thr, Asn, Lys, Val, Ala, Asp, Glu, Gly) и в которой присвоенные им указатели означают количество аминокислот, в которой указатели n и m означают числа от 0 до 200, С означает цистеин и по меньшей мере одна из полипептидных последовательностей Xm или Xn означает пептидную последовательность по меньшей мере из 40 аминокислот, которые в природе не связаны с гидрофобином, и в которой гидрофобин вызывает сдвиг угла контакта после покрытия поверхности стекла по меньшей мере на 20°.
7. Способ по любому из пп.1-6, отличающийся тем, что гидрофобин формулы (III) включает по меньшей мере один гидрофобин, выбранный из dewA, rodA, hypA, hypB, sc3, basf1, basf2.
8. Агрохимическая композиция, включающая твердый нерастворимый в воде пестицид в форме частиц пестицида, которые суспендированы в непрерывной водной фазе, где частицы имеют размер частиц
- 9 031997 меньше чем 10 мкм, причем пестицид выбран из хлороталонила и флуксапироксада, и гидрофобии, причем композицию получают способом, определенным в любом из пп.1-7.
9. Композиция по п.8, отличающаяся тем, что композиция включает от 0,1 до 10 г/л гидрофобина.
10. Композиция по пп.8, 9 в форме водного концентрата суспензии, которая включает от 30 до 75 мас.% воды.
11. Композиция по п.10, отличающаяся тем, что концентрат суспензии включает по меньшей мере 100 г/л пестицида, от 0,5 до 10 г/л гидрофобина и по меньшей мере 5 г/л диспергирующего агента.
12. Применение гидрофобина для снижения токсичности твердого нерастворимого в воде пестицида, выбранного из хлороталонила и флуксапироксада.
13. Способ борьбы с фитопатогенными грибами, и/или ростом нежелательных растений, и/или инвазией нежелательных насекомых или клещей, и/или для регулирования роста растений, в котором композиция, определенная в любом из пп.8-11, воздействует на соответствующих вредителей, среду их обитания или на культурные растения, подлежащие защите от соответствующих вредителей, на почву и/или на нежелательные растения, и/или на культурные растения, и/или на среду их произрастания.
14. Способ снижения токсичности твердого нерастворимого в воде пестицида, выбранного из хлороталонила и флуксапироксада, включающий этап контактироваиия нерастворимого в воде пестицида с гидрофобином.
15. Семена, включающие композицию, определенную в любом из пп.8-11.
EA201790980A 2014-11-05 2015-10-26 Способ получения агрохимической композиции со сниженной токсичностью путем измельчения предварительно приготовленной смеси пестицида и гидрофобина EA031997B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP14191919 2014-11-05
PCT/EP2015/074716 WO2016071136A1 (en) 2014-11-05 2015-10-26 A method of preparing an agrochemical composition with reduced toxicity by milling a premix of a pesticide and a hydrophobin

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201790980A1 EA201790980A1 (ru) 2017-10-31
EA031997B1 true EA031997B1 (ru) 2019-03-29

Family

ID=51870885

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201790980A EA031997B1 (ru) 2014-11-05 2015-10-26 Способ получения агрохимической композиции со сниженной токсичностью путем измельчения предварительно приготовленной смеси пестицида и гидрофобина

Country Status (8)

Country Link
US (1) US20170318805A1 (ru)
EP (1) EP3214932A1 (ru)
CN (1) CN107072199A (ru)
AR (1) AR102535A1 (ru)
BR (1) BR112017008447A2 (ru)
EA (1) EA031997B1 (ru)
UA (1) UA119797C2 (ru)
WO (1) WO2016071136A1 (ru)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019084246A1 (en) * 2017-10-25 2019-05-02 Advanced Biological Marketing, Inc. COMBINED MICROBIAL AND AGRICULTURAL CHEMISTRY FORMULATION PROCESS, COMPOSITION DERIVED FROM MICROBE, AND USE THEREOF
WO2019084608A1 (en) * 2017-10-31 2019-05-09 The University Of Sydney Novel polymer coated chlorothalonil particles
WO2020005678A1 (en) * 2018-06-25 2020-01-02 Bayer Cropscience Lp Seed treatment method

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009037061A2 (de) * 2007-09-13 2009-03-26 Basf Se Verwendung von hydrophobin-polypeptiden als penetrationsverstärker
WO2010003811A1 (en) * 2008-07-11 2010-01-14 Basf Se Amphiphilic proteins as morphology modifiers
WO2010092088A2 (de) * 2009-02-10 2010-08-19 Basf Se Verwendung von hydrophobin als spreitmittel

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2596661C (en) 2005-02-07 2013-12-10 Basf Aktiengesellschaft Novel hydrophobin fusion products, production and use thereof
DE102005027139A1 (de) 2005-06-10 2006-12-28 Basf Ag Neue Cystein-verarmte Hydrophobinfusionsproteine, deren Herstellung und Verwendung
JP2010500042A (ja) 2006-08-15 2010-01-07 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 産生細胞からのタンパク質単離方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009037061A2 (de) * 2007-09-13 2009-03-26 Basf Se Verwendung von hydrophobin-polypeptiden als penetrationsverstärker
WO2010003811A1 (en) * 2008-07-11 2010-01-14 Basf Se Amphiphilic proteins as morphology modifiers
WO2010092088A2 (de) * 2009-02-10 2010-08-19 Basf Se Verwendung von hydrophobin als spreitmittel

Also Published As

Publication number Publication date
WO2016071136A1 (en) 2016-05-12
EP3214932A1 (en) 2017-09-13
AR102535A1 (es) 2017-03-08
EA201790980A1 (ru) 2017-10-31
BR112017008447A2 (pt) 2018-02-14
CN107072199A (zh) 2017-08-18
US20170318805A1 (en) 2017-11-09
UA119797C2 (uk) 2019-08-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6902351B2 (ja) 作物保護用アジュバントとしてのアルコールアルコキシレートカーボネート
CN111491654A (zh) 用于改善植物的保护、生长和生产力的生物活性多肽
RU2704450C2 (ru) Композиция, содержащая пестицид и гидроксиалкиловый простой эфир полиоксиленгликоля
EA023113B1 (ru) Применение агрохимических смесей для увеличения жизнеспособности растения
UA119672C2 (uk) Пестицидні композиції
CA2958157C (en) An agrochemical suspension concentrate comprising an alkoxylated alcohol dissolved in the aqueous phase
KR20170080579A (ko) 파괴된 과민성 반응 박스를 갖는 유발제 펩티드 및 그의 용도
KR20000070963A (ko) 자엽 식물의 처리 방법
CN113825401A (zh) 用于害虫防治和植物健康的融合蛋白、重组细菌和孢子外壁片段
EA031997B1 (ru) Способ получения агрохимической композиции со сниженной токсичностью путем измельчения предварительно приготовленной смеси пестицида и гидрофобина
EA033871B1 (ru) Пендиметалиновые микрокапсулы с оболочкой, изготовленной из тетраметилксилилен диизоцианата и полиамина по меньшей мере с тремя аминогруппами
US20220169999A1 (en) Fusion proteins, recombinant bacteria, and exosporium fragements for plant health
EP2943065B1 (en) Agrochemical compositions for inducing abiotic stress tolerance
US20160286822A1 (en) Molluscicidal Agents and Uses Thereof
UA119652C2 (uk) Пестицидна суміш
US20230116634A1 (en) New agrochemical formulations
UA127807C2 (uk) Спосіб підвищення стійкості злакової рослини
TWI735502B (zh) 雙氯磺草胺之新穎結晶形式、其製備方法及用途
CN115190760B (zh) 作物栽培组合物及其用途
RU2798880C2 (ru) Способ повышения стойкости злакового растения
EA041806B1 (ru) Пестицидный состав, содержащий карбонаты алкоксилатов спиртов, его способ изготовления, способ борьбы, семена и применение указанных алкоксилатов для улучшения эффективности пестицида

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM

MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): RU