EA031106B1

EA031106B1 - Диоксолановые аналоги уридина для лечения рака

Info

Publication number: EA031106B1
Application number: EA201790328A
Authority: EA
Inventors: Рикард Бетель; Андеш Энерот; Бьерн Классон; Фредрик Эберг
Original assignee: Медивир Аб
Priority date: 2014-08-25
Filing date: 2015-08-24
Publication date: 2018-11-30
Also published as: ZA201802864B; HRP20201023T1; JP2017526677A; WO2016030335A1; PH12017500184A1; KR102398714B1; IL250344B; BR112017003898B1; US20190389890A1; HUE050705T2; US20210054008A1; SG11201701172SA; AU2015308988A1; JP6905609B2; KR20170046736A; EP3186244B1; DK3186244T3; KR102396905B1; US10822360B2; NZ762628A

Abstract

В изобретении предложены соединения формулыгде Rпредставляет собой ORили NRR; Rпредставляет собой H или F; Rпредставляет собой H, C-C-алкил, OH, C(=O)R, O(C=O)Rили O(C=O)OR; Rпредставляет собой H или C-C-алкил; Rпредставляет собой C-C-алкил или C-C-циклоалкил; Rпредставляет собой H, фенил, пиридил, бензил, индолил или нафтил, где фенил, пиридил, бензил, индолил и нафтил возможно замещены 1, 2 или 3 R; и где другие переменные являются такими, как определено в формуле изобретения, которые являются полезными в лечении рака, а также связанные с ними аспекты.

Description

Настоящее изобретение относится к фосфорным пролекарствам троксацитабина и к их производным, которые являются полезными в лечении раковых заболеваний, в частности рака печени, такого как гепатоклеточная карцинома (HCC), и вторичных раковых заболеваний печени. Изобретение также относится к композициям и комбинациям, содержащим эти соединения, и к способам их применения в лечении раковых заболеваний, в частности рака печени, такого как HCC.

Предшествующий уровень техники

Первичный рак печени является шестым по частоте возникновения раком в мире и второй ведущей причиной смертности от рака. Наиболее частым раком печени, составляющим приблизительно 85% от всех первичных злокачественных раковых заболеваний печени и имеющим возрастающую распространенность, является гепатоклеточная карцинома (HCC), которая формируется гепатоцитами, которые стали злокачественными. Другой тип рака, формируемый гепатоцитами, представляет собой гепатобластому, редкую злокачественную опухоль, которая в основном развивается у детей и составляет приблизительно 1% всех раковых заболеваний у детей и 79% всех первичных раковых заболеваний печени до 15 лет. Вторичный рак печени или метастазирование в печени представляет собой рак, который начинается где-либо в другом месте в организме и затем распространяется в печень. Примеры вторичного рака печени включают многие распространенные типы рака, такие как рак толстой кишки, рак прямой кишки, рак легкого и рак молочной железы. Рак печени также может формироваться из других структур в печени, таких как желчный проток, кровеносные сосуды и иммунные клетки. Рак желчного протока (холангиокарцинома и холангиоцеллюлярная цистаденокарцинома) составляет приблизительно 6% первичных раковых заболеваний печени.

В то время как хирургическая резекция и трансплантация печени потенциально являются радикальным излечением для ранней стадии HCC, более чем 20% пациентов испытывают рецидивы или сталкиваются с другими проблемами, и большинство диагнозов HCC ставят на стадии, которая является слишком поздней для этого лечения. Регионарные терапии, такие как радиочастотная абляция, связаны с частотой ответа более 60%, но они подходят только для определенной доли пациентов и не всегда способствуют излечению. Химиотерапия, которую применяют до настоящего времени, минимально эффективна при HCC, и до настоящего времени частота ответов не превышала 25%. В настоящее время сорафениб является единственным эффективным лекарственным средством на рынке для лечения запущенной или нерезектабельной HCC, следовательно, существует большая потребность в дальнейших методах лечения HCC для уменьшения частоты рецидивов и увеличения общей выживаемости.

Было обнаружено, что многие нуклеозидные аналоги обладают противораковой активностью, и они составляют большой класс химиотерапевтических агентов, которые широко применяют для лечения пациентов с раком. Эта группа агентов, известных как антиметаболиты, включает разнообразные пиримидиновые и пуриновые нуклеозидные производные с цитотоксической активностью.

Клеточные нуклеотидкиназы фосфорилируют нуклеозиды до соответствующих им 5'монофосфатов, которые далее превращаются в дифосфаты и затем в фармакологически активные трифосфаты. Известно, что некоторые нуклеозиды являются слабоактивными, потому что они не могут быть эффективно фосфорилированы киназами или вообще не являются субстратами для киназ. В последовательности фосфорилирований первое фосфорилирование нуклеозидных аналогов является лимитирующим скорость, в то время как второе и третье фосфорилирования являются менее чувствительными к модификациям нуклеозида. Монофосфаты нуклеозидов (нуклеотиды) per se обычно являются нестабильными в крови и проявляют плохую мембранную проницаемость и поэтому не являются подходящими для использования в качестве лекарственных средств. Вследствие высокой нестабильности и плохой клеточной проницаемости трифосфата нуклеозидов и нуклеозидных аналогов они также не могут считаться возможными кандидатами на роль лекарственного средства.

Троксацитабин (бета-Б-диоксоналцитидин) представляет собой цитотоксический аналог дезоксицитидина с неприродной L-конфигурацией, который продемонстрировал широкую активность против как солидных, так и гематопоэтических злокачественных опухолей in vitro и in vivo. В частности, наблюдали значительную активность в отношении человеческих раковых клеточных линий и ксенографтов гепатоклеточного, простатического и почечного происхождения (Cancer Res., 55, 3008-3011, 1995). Было показано, что троксацитабин дает начало мутации киназы дезоксицитидинкиназы (dCK), которая обычно несет ответственность за первую стадию фосфорилирования нуклеозида, что приводит к отсутствию или низким количествам троксацитабина монофосфата, что таким образом приводит к резистентности.

Троксацитабин вошел в III фазу клинических исследований острой миелогенной лейкемии в 2008 г., но не дошел до этапа регистрации. Прерванные исследования фазы II с троксацитабином включают рак молочной железы, колоректальный рак, рак поджелудочной железы, меланому, NSCLC (немелкоклеточный рак легкого), почечные опухоли, простатические опухоли и опухоли яичников. Троксацитабин обычно вводили в виде внутривенной инфузии, таким образом подвергая действию лекарственного средства многие ткани вне зависимости от локализации ракового заболевания.

Было показано, что троксацитабин, несмотря на его гидрофильный характер, транспортируется в клетки путем пассивной диффузии, но очень медленно аккумулируется в раковых клетках по сравнению

- 1 031106 с другими нуклеозидами, транспортируемыми носителями.

В WO2008/030373 раскрыты производные троксацитабина, несущие группу пролекарства на группировке цитозинового основания, и оценивается соотношение между липофильностью пролекарств и их противоопухолевой активностью. В этом патенте указано, что модификация основания является желательной во избежание затруднений эстеразы с модификацией 5'-OH.

Фосфорамидатные пролекарства 5' гидроксильной группы D-нуклеозидов успешно применялись в качестве противовирусных лекарственных средств, например софосбувир, применяемый в лечении инфекции вирусом гепатита C (HCV). Демаскирование пролекарства софосбувира с получением монофосфата внутри клетки представляет собой сложный многостадийный процесс, в который вовлечены несколько ферментов гидролаз в определенной последовательности.

Применение фосфорамидатных пролекарств нуклеозидов при раке было менее успешным. Nucana разрабатывает Acelerin (Nuc-1031), фосфорамидатное пролекарство D-нуклеозида гемцитабина для лечения рака поджелудочной железы (для структуры: см. с. 71 в WO2005012327). Однако даже хотя этот фосфорамидат, как предполагают, усиливает липофильность и клеточную проницаемость соединения, пролекарство Acelarin все же должно вводиться в виде внутривенной инфузии, за счет этого подвергая многие здоровые ткани цитотоксическому метаболиту.

Существует еще меньше опыта с монофосфатными пролекарствами L-нуклеозидов, такими как троксацитабин. В WO2008048128 раскрыто небольшое количество монофосфатных пролекарств троксацитабина, включая соединение из примера 14:

Не раскрыто противораковой или другой биологической активности для любого из соединений ни в описании WO2008048128, ни где-либо еще в академической литературе. Нет сведений о том, что начато клиническое исследование такого пролекарства. Однако авторы WO2008048128 опубликовали сведения о явно похожих пролекарствах D-нуклеозида гемцитабина (Baraniak et al. Biorg Med Chem, 2014, 21332040), где пролекарственный подход, по-видимому, работает на определенных тканях, и D-нуклеозида азидотимидина (Kulic et al. Antivir Chem Chemother, 2011, 21(3), 143-150), где пролекарства были в 2-20 раз менее сильнодействующими, чем соответствующий родительский нуклеозид. Kulic предполагает, что пролекарства азидотимидина сначала дефосфорилируются до нуклеозида и только затем фосфорилируются до активных трифосфатных соединений. Поскольку пролекарственный подход работает для гемцитабина (который напоминает РНК за счет замещенной 2' группы) и не работает для азидотимидина (который представляет собой 2'-дезокси и потому напоминает ДНК), предполагают, что в WO2008048128 пролекарства троксацитабина (который представляет собой аналог ДНК, хотя и L-ДНК) вероятно явля ются неактивными так же, как и пролекарства азидотимидина.

Balzarini et al. в Biochem Biophys Res Comm, 225, 363-369 (1996) описывают активность в отношении вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) и вируса гепатита B (HBV) соединения CF 1109, фосфорамидатного пролекарства L-нуклеозида ламивудина/3ТС, имеющего структуру:

Balzarini утверждает, что фосфорамидатное пролекарство было примерно в ~250 раз менее активно в отношении ВИЧ, чем его родительский нуклеозид 3TC, но что пролекарство является практически одинаково эффективным в отношении HBV в клетках Hep G2.2.15. Другими словами, добавление этой большой фосфорамидатной метиловой сложноэфирной пролекарственной группы не улучшало противовирусную активность в линии клеток печени. Balzarini не проверял, метаболизируется ли пролекарство в 3TC прежде, чем быть фосфорилированным в активный трифосфат.

В настоящем изобретении предложены фосфорные пролекарства троксацитабина, в частности нацеленные на печень пролекарства, такие как фосфорамидаты, которые являются подходящими для перорального введения. Эти пролекарства обладают преимуществом, заключающимся в улучшенной клеточной проницаемости вследствие увеличенной липофильности по сравнению с троксацитабином самим по себе, и более эффективно образуют активный трифосфат вследствие избежания лимитирующей скорость стадии первого фосфорилирования. Также соединения по изобретению в основном метаболизируются в активный трифосфат в печени, за счет этого обеспечивая высокую концентрацию активного соединения в целевом органе, в то же время поддерживая на минимуме побочные эффекты вследствие токсичности в других органах.

- 2 031106

Описание изобретения

В одном из аспектов в настоящем изобретении предложены соединения, представленные формулой (I)

где R¹ представляет собой OR¹¹ или NR⁵R⁵;

R² представляет собой H или F;

R⁵ представляет собой H, С1-С₆-алкил, OH, C(=O)R⁶, O(C=O)R⁶ или O(C=O)OR⁶;

R⁵ представляет собой Н или С₁-С₆-алкил;

R⁶ представляет собой С₁-С₂₂-алкил или С₃-С₇-циклоалкил;

R¹¹ представляет собой H или С₁-С₆-алкил;

R¹³ представляет собой H, фенил, пиридил, бензил, индолил или нафтил, где фенил, пиридил, бензил, индолил и нафтил возможно замещены 1, 2 или 3 R²²;

R¹⁵ представляет собой H, С₁-С₆-алкил, С₃-С₇-циклоалкил,

С₃-С₇-циклоалкил-С₁-С₃-алкил, фенил, бензил или индолил;

R¹⁵ представляет собой H или С1-С6-алкил или R¹⁵ и R¹⁵ вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют С3-С₇-циклоалкиленовую группу, где каждый С₁-С₆-алкил возможно замещен группой, выбранной из галогена, OR¹⁸ и SR¹⁸, и каждый С₃-С₇-циклоалкил, С₃-С₇-циклоалкилен, фенил и бензил возможно замещены одной или двумя группами, независимо выбранными из С₁-С₃-алкила, галогена и OR¹⁸;

R¹⁶ представляет собой H, С1-С10-алккил, С2-С10-алкенил, С3-С7-циклоалкил, С3-С7-циклоалкил-С1С3-алкил, бензил или фенил, любой из которых возможно замещен одной, двумя или тремя группами, каждая из которых независимо выбрана из галогена, OR¹⁸ и N(R¹⁸)2;

каждый R¹⁸ независимо представляет собой H, С₁-С₆-алкил, С₁-С₆-галогеноалкил или С₃-С₇циклоалкил;

каждый R²² независимо выбран из галогена, С1-С6-алкила, С2-С6-алкенила, С1-С6-галогеноалкила, С1-С6-алкокси, С1-С6-галогеноалкокси, фенила, гидрокси-С1-С6-алкила, С3-С6-циклоалкила, С1-С6алкилкарбонила, С3-С6-циклоалкилкарбонила, карбокси-С1-С6-алкила, гидрокси, амино, CN и NO2, или любые две группы R²², присоединенные к соседним кольцевым атомам углерода, могут объединяться с образованием -O-(CR²³R²³)1-6-O-;

R²³ и R²³ независимо представляют собой H или С₁-С₃-алкил, или их фармацевтически приемлемая(ый) соль и/или сольват.

В одном из воплощений в изобретении предложены соединения, представленные формулой (I)

где R¹ представляет собой OR¹¹ или NR⁵R⁵;

R² представляет собой H или F;

R⁵ представляет собой H, С₁-С₆-алкил, OH, C(=O)R⁶, OC(=O)R⁶ или OC(=O)OR⁶;

R⁵ представляет собой H или С₁-С₆-алкил;

R¹¹ представляет собой H или С₁-С₆-алкил;

R¹⁵ представляет собой H, С₁-С₆-алкил, С₃-С₇-циклоалкил, С₃-С₇-циклоалкил-С₁-С₃-алкил, фенил, бензил или индолил;

каждый R²² независимо выбран из галогена, С₁-С₆-алкила, С₂-С₆-алкенила, С₁-С₆-галогеноалкила, С₁-С₆-алкокси, С₁-С₆-галогеноалкокси, фенила, гидрокси-С₁-С₆-алкила, С₃-С₆-циклоалкила, С₁-С₆

- 3 031106 алкилкарбонила, С₃-С₆-циклоалкилкарбонила, карбокси-С1-С₆-алкила, гидрокси, амино, CN, NO₂ и триметилсилила, или любые две группы R²², присоединенные к соседним кольцевым атомам углерода, могут объединяться с образованием -O-(CR²³R²³)_1-6-O-;

R²³ и R²³ независимо представляют собой H или Q-Q-алкил, или их фармацевтически приемлемая(ый) соль и/или сольват.

Соединения формулы (I) возможно могут находиться в форме фармацевтически приемлемой соли и/или сольвата. В одном из воплощений соединение по изобретению находится в форме фармацевтически приемлемой соли. Во втором воплощении соединение по изобретению находится в форме фармацевтически приемлемого сольвата. В третьем воплощении соединение по изобретению находится в своей свободной форме.

В типичных воплощениях изобретения R¹ представляет собой NR⁵R⁵, такой как NH₂ или NHC(=O)C ₁ ^б-алкил.

R² обычно представляет собой H.

В предпочтительных воплощениях R¹ представляет собой NH₂ и R² представляет собой H.

В альтернативных воплощениях R¹ представляет собой NH₂ и R² представляет собой F.

Обычно в соединениях формулы (I) группировка -NHC(R¹⁵)(R¹⁵)-C(=O)OR¹⁶ образует остаток сложного эфира аминокислоты, в том числе остатки природных и неприродных аминокислот. Особенный интерес вызывают аминокислотные остатки, где R¹⁵ представляет собой водород и R¹⁵ представляет собой метил, изопропил, изобутил или бензил. В типичной конфигурации R¹⁵ представляет собой H и R¹⁵представляет собой CrQ-алкил, такой как метил, этил, пропил, изопропил.

В соединениях, где R¹⁵ представляет собой водород и R¹⁵ является отличным от водорода, конфигурация асимметрического атома углерода обычно представляет собой конфигурацию L-аминокислоты, за счет этого обеспечивая соединения, имеющие стереохимию, указанную в формуле (Ia)

R¹

R¹⁵ _о R² /'Г о ^МО V.A.aN N ^κ ° о (^|a)

В предпочтительной конфигурации соединений формулы (Ia) R¹⁵ представляет собой метил.

В другой конфигурации соединений формулы (Ia) R¹⁵ представляет собой бензил.

В репрезентативной конфигурации соединений формулы (Ia) R¹ представляет собой NH2; R² представляет собой H; R¹³ представляет собой фенил, нафтил или индолил, любой из которых возможно замещен галогеном, например бромом, или О₃-С₄-циклоалкилом, например циклопропилом; R¹⁵ представляет собой Q-Q-алкил; R¹⁶ представляет собой CrCs-алкил.

В другой репрезентативной конфигурации соединений формулы (Ia) R¹ представляет собой NH2; R²представляет собой H; R¹³ представляет собой нафтил; R¹⁵ представляет собой CrQ-алкил; R¹⁶ представляет собой Q-Cs-алкил или бензил.

В другой репрезентативной конфигурации соединений формулы (Ia) R¹ представляет собой NH₂; R²представляет собой H; R¹³ представляет собой фенил, который возможно замещен в 4-м положении галогеном, например бромом, или Q-Q-циклоалкилом, например циклопропилом; R¹⁵ представляет собой метил; R¹⁶ представляет собой ^-С^алкил.

В другой репрезентативной конфигурации соединений формулы (Ia) R¹ представляет собой NH2; R²представляет собой H; R¹³ представляет собой фенил; R¹⁵ представляет собой метил; R¹⁶ представляет собой О3-С₈-алкил.

В другой репрезентативной конфигурации соединений формулы (Ia) R¹ представляет собой NH₂; R²представляет собой F; R¹³ представляет собой фенил, нафтил или индолил, любой из которых возможно замещен галогеном, например бромом, или Q-Q-циклоалкилом, например циклопропилом; R¹⁵ представляет собой CrQ-алкил; R¹⁶ представляет собой ^-Сз-алкил.

В другой репрезентативной конфигурации соединений формулы (Ia) R¹ представляет собой NH₂; R²представляет собой F; R¹³ представляет собой нафтил; R¹⁵ представляет собой Q-Q-алкил; R¹⁶ представляет собой ^-Сз-алкил или бензил.

В другой репрезентативной конфигурации соединений формулы (Ia) R¹ представляет собой NH2; R²представляет собой F; R¹³ представляет собой фенил, который возможно замещен в 4-м положении галогеном, например бромом, или Q-Q-циклоалкилом, например циклопропилом; R¹⁵ представляет собой метил; R¹⁶ представляет собой Q-Cs-алкил.

В другой репрезентативной конфигурации соединений формулы (Ia) R¹ представляет собой NH₂; R²представляет собой F; R¹³ представляет собой фенил; R¹⁵ представляет собой метил; R¹⁶ представляет собой Q-Cg-алкил.

В другой конфигурации R¹⁵ и R¹⁵ вместе с атомов углерода, к которому они присоединены, образуют Q-Cy-циклоалкил, например циклопропил или циклобутил.

R¹⁶ обычно представляет собой Q-C^-алкил или C₃-C7-циклоалкил.

Репрезентативные значения R¹⁶ включают CpQ-алкил, такой как метил, этил, пропил, изопропил.

- 4 031106

Предпочтительным значением R¹⁶ является метил, еще одним предпочтительным значением R¹⁶ является изопропил.

В одном из воплощений R¹⁶ представляет собой Cз-C₁o-алкил.

Репрезентативные значения R¹⁶ согласно этому воплощению включают разветвленный C5-C8-алкил. В одном из воплощений точка разветвления R¹⁶ находится на C1. В альтернативном воплощении точка разветвления R¹⁶ находится на C₂. Обычно согласно этим воплощениям R¹⁵ представляет собой H и стереохимия на атоме углерода, к которому присоединен R¹⁵, является такой, как стереохимия Lаминокислоты, что обеспечивает соединения общих формул

(la¹) (1а) где R¹⁶¹ и R¹⁶² являются одинаковыми или различными C₁-Cз-алкилами и R¹⁶³ и R¹⁶⁴ являются одинаковыми или различными Q-Q-алкилами.

Обычно в соединениях формулы (Ia') R¹⁶ представляет собой 2-пентил, т.е. R¹⁶¹ представляет собой пропил и R¹⁶² представляет собой метил.

В другой типичной конфигурации соединений формулы (Ia') R¹⁶ представляет собой 2-бутил, т.е. R¹⁶¹ представляет собой этил и R¹⁶² представляет собой метил.

Обычно в соединениях формулы (Ia) R¹⁶ представляет собой 2-пропилпентил или 2-этилбутил, т.е. оба из R¹⁶³ и R¹⁶⁴ представляют собой пропил или этил соответственно.

Другие репрезентативные значения R¹⁶ включают C₃-C7-циклоалкил, такой как циклогексил.

Другим репрезентативным значением R¹⁶ является циклопентил.

Другим репрезентативным значением R¹⁶ является бензил.

R¹³ обычно представляет собой фенил, нафтил или индолил, любой из которых возможно замещен одним или двумя R .

В одном из воплощений изобретения R¹³ представляет собой фенил или нафтил, любой из которых возможно замещен.

В одном из воплощений изобретения R¹³ представляет собой нафтил.

В предпочтительном воплощении изобретения R¹³ представляет собой фенил.

Репрезентативные примеры R¹³ включают фенил, который возможно замещен одним, двумя или тремя R²², что обеспечивает соединения формулы (II-aa)

где каждый R²², при наличии, независимо выбран из галогена, Cr^-алкила, C^^-алкенила и C₁^-алкокси. Обычно фенильное кольцо является незамещенным или замещенным одним R²².

В одной из конфигураций соединений формулы (II-aa) фенильное кольцо является незамещенным.

В другой конфигурации соединений формулы (II-aa) фенильное кольцо замещено одним R²². Обычно в этой конфигурации заместитель R²² расположен в 4-положении фенильного кольца.

В одном из воплощений соединений по изобретению R¹³ представляет собой фенил, который замещен в 4-положении галогеном, например бромом, или Q-Q-циклоалкилом, например циклопропилом.

В одной из конфигураций соединений формулы (II-aa) фенильное кольцо замещено карбокси-Q-C^ алкилом. Репрезентативный пример этой конфигурации проиллюстрирован в частичной формуле

В другой конфигурации соединений формулы (II-aa) фенильное кольцо замещено двумя R²², расположенными на соседних атомах углерода, и два R²² объединены с образованием -O-CH₂-O-, таким образом образуя подструктуру

Другие репрезентативные значения R¹³ включают возможно замещенный пиридил. Обычно пири- 5 031106 дильная группировка является незамещенной или замещенной одним или двумя заместителями, каждый из которых независимо выбран из галогена, Cl-C6-галогеноалкила, С-О-алкила, О-О-алкенила, C₁-C₆алкокси, гидрокси, амино.

В типичном воплощении соединений формулы (I) R¹ представляет собой NH2 или NHC(=O)C1-C6алкил; R¹³ представляет собой фенил, нафтил или индолил, любой из которых возможно замещен галогеном,C1-Cз-алкилом,C₁-Cз-алкокси, C₃-C_б-циклоалкилом или Q-C/алогеноалкилом; R¹⁵ представляет собой H, и R¹⁵ представляет собой Q-O-алкил или бензил; R¹⁶ представляет собой Q-Qo-алкил или C₃C7-циклоалкил.

В типичном воплощении соединений формулы (I) или (Ia) R¹ представляет собой NH2 или NHC^O^-Cs^rm; R¹³ представляет собой фенил или нафтил, любой из которых возможно замещен галогеном^-О-алкилом^-О-алкокси, ^-О-циклоалкилом или Q-Q-галогеноалкилом; R¹⁵ представляет собой H, и R¹⁵ представляет собой Q-Q-алкил или бензил; R¹⁶ представляет собой Q-Cw-алкил или C3-C₇ -циклоалкил.

В другом типичном воплощении соединений формулы (I) R¹ представляет собой NH2; R² представляет собой H; R¹³ представляет собой фенил; R¹⁵' представляет собой H и R¹⁵ представляет собой C1-C₃алкил; R¹⁶ представляет собой Q-Q-алкил или циклогексил.

В другом типичном воплощении соединений формулы (I) или (Ia) Rⁱ представляет собой NH₂; R²представляет собой H; R¹³ представляет собой фенил; R¹⁵ представляет собой H и R¹⁵ представляет собой Q-O-алкил или бензил; R¹⁶ представляет собой Q-Cg-алкил, циклопентил или циклогексил.

Соединения по настоящему изобретению демонстрируют активность против рака, в особенности рака печени, такого как HCC, и могут быть использованы в качестве лекарственного средства в лечении теплокровных животных, в частности людей, имеющих рак. В особенности соединения могут быть использованы в качестве лекарственного средства в лечении людей, имеющих рак печени, такой как HCC.

Во избежание нежелательных побочных эффектов, в особенности токсичности в других органах, доставка лекарственного средства в место опухоли при уменьшении воздействия на нормальную ткань имеет важнейшее значение. Соединения по изобретению являются стабильными в желудочной жидкости, но легко метаболизируются ферментами печени, следовательно, они могут быть поглощены в желудке и транспортированы в виде скрытого цитотоксического агента в печень, где происходит поглощение, метаболизм и образование активного цитотоксического трифосфата. Соответственно в изобретении предложены соединения, которые поглощаются и перерабатываются в основном в печени, что таким образом минимизирует воздействие на другие органы в организме и токсические побочные эффекты.

Не желая быть связанными теорией, антионкогенная активность соединений по изобретению может оказываться непосредственно в отношении клеточных процессов быстродействующих канцерогенных клеток рака, но дополнительно или альтернативно может оказывать свое влияние через модулирование микросреды опухоли, такое как ингибирование ангиогенеза, за счет этого ограничивая питание опухоли и приводя к ингибированию роста опухоли.

Соединения по настоящему изобретению также являются полезными в лечении вторичных раковых заболеваний печени, метастаз в печени, т.е. рака, который происходит из органов в другом месте организма, таком как толстая кишка, легкое или молочная железа, и мигрирует в печень.

Настоящее изобретение также относится к способу лечения теплокровных животных, в частности людей, имеющих рак, в особенности рак печени, такой как HCC, где указанный способ включает введение эффективного количества соединения формулы (I) или любой его подгруппы.

Настоящее изобретение также относится к способу лечения теплокровных животных, в частности людей, имеющих вторичный рак печени, где указанный способ включает введение эффективного количества соединения формулы (I) или любой его подгруппы.

Указанное применение в качестве лекарственного средства или способ лечения включает системное введение субъекту, имеющему рак, эффективного количества соединения формулы (I).

В одном из аспектов в изобретении предложена фармацевтическая композиция, содержащая соединение формулы (I) в сочетании с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем, эксципиентом или носителем.

В другом аспекте в изобретении предложена фармацевтическая композиция для использования в лечении рака, содержащая соединение формулы (I) в сочетании с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем, эксципиентом или носителем.

В другом аспекте в изобретении предложена фармацевтическая композиция для использования в лечении рака печени, такого как HCC, содержащая соединение формулы (I) в сочетании с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем, эксципиентом или носителем.

В другом аспекте в изобретении предложена фармацевтическая композиция для использования в лечении вторичного рака печени, содержащая соединение формулы (I) в сочетании с фармацевтически приемлемым адъювантом, разбавителем, эксципиентом или носителем.

В другом аспекте изобретение относится к способу изготовления фармацевтической композиции, как указано в данной заявке, который включает тщательное смешивание фармацевтически приемлемого адъюванта, разбавителя, эксципиента и/или носителя с терапевтически эффективным количеством со единения формулы (I).

В другом аспекте в изобретении предложена фармацевтическая композиция для использования в лечении или ингибировании, как упомянуто выше, которая дополнительно содержит один или более дополнительных терапевтических агентов.

Фармацевтические композиции, упомянутые выше, обычно содержат эффективное количество (например, для людей) соединения формулы (I), хотя субтерапевтические количества соединения формулы (I), тем не менее, могут представлять ценность, когда они предназначены для использования в комбинации с другими агентами или в виде многократных доз.

В этом контексте терапевтически эффективное количество представляет собой количество, достаточное для получения целевого результата. Терапевтически эффективное количество будет варьировать в зависимости от индивидуальных требований в каждом конкретном случае. Свойствами, которые влияют на дозу, являются, например, тяжесть заболевания, которое необходимо лечить, возраст, масса тела, общее состояние здоровья и т.д. субъекта, которого необходимо лечить. В отношении противоракового эффекта таким эффектом может являться ингибирование дальнейшего роста опухоли, снижение вероятности или исключение метастазирования или вызывание гибели клеток опухоли, что приводит к уменьшению размеров опухоли, или предотвращение повторного роста опухоли после того, как опухоль пациента перешла в ремиссию.

В другом аспекте в настоящем изобретении предложено соединение формулы (I) для использования в качестве лекарственного средства.

В другом аспекте в настоящем изобретении предложено соединение формулы (I) для использования в лечении рака.

В другом аспекте в настоящем изобретении предложено соединение формулы (I) для использования в лечении рака печени, такого как НСС.

В другом аспекте в настоящем изобретении предложено соединение формулы (I) для использования в лечении вторичного рака печени.

В другом аспекте в настоящем изобретении предложено соединение формулы (I) для применения в лечении, как описано выше, в комбинации с одним или более чем одним дополнительным средством для лечения рака, таким как противораковое лекарственное средство, хирургия, иммунотерапия и/или регионарные терапии, такие как радиочастотная абляция.

В другом воплощении дополнительным противораковым лечением является радиотерапия.

В одном из воплощений дополнительным противораковым лечением является один или более чем один другой нуклеозидный аналог, который проявляет сильную противоопухолевую активность.

В одном из аспектов в настоящем изобретении предложена фармацевтическая комбинация, содержащая терапевтически эффективное количество соединения формулы и один или более чем один дополнительный терапевтический агент, выбранный из группы, состоящей из химиотерапевтического агента, агента, реверсирующего множественную лекарственную устойчивость, и модификатора биологического ответа.

В одном из воплощений этого аспекта другой терапевтический агент представляет собой химиотерапевтический агент.

В другом аспекте в настоящем изобретении предложено соединение формулы (I) для использования в изготовлении лекарственного средства.

В другом аспекте в настоящем изобретении предложено соединение формулы (I) для использования в изготовлении лекарственного средства для лечения рака.

В другом аспекте в настоящем изобретении предложено соединение формулы (I) для использования в изготовлении лекарственного средства для лечения рака печени, такого как HCC.

В другом аспекте в настоящем изобретении предложено соединение формулы (I) для использования в изготовлении лекарственного средства для лечения вторичного рака печени.

В другом аспекте в настоящем изобретении предложен способ лечения рака, включающий введение терапевтически эффективного количества соединения формулы (I), субъекту, например человеку, нуждающемуся в этом.

В другом аспекте в настоящем изобретении предложен способ лечения рака печени, такого как HCC, включающий введение терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) субъекту, например человеку, нуждающемуся в этом.

В другом аспекте в настоящем изобретении предложен способ лечения вторичного рака печени, включающий введение терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) субъекту, например человеку, нуждающемуся в этом.

В другом аспекте в настоящем изобретении предложен способ лечения, как описано выше, в комбинации с дополнительными лечениями рака, такими как другие противораковые лекарственные средства, хирургия, иммунотерапия и/или регионарные терапии, такие как радиочастотная абляция.

В одном из аспектов в настоящем изобретении предложен способ лечения первичного или вторичного рака печени, включающий введение фармацевтической комбинации, содержащей терапевтически эффективное количество соединения формулы I, дополнительно содержащей один или более чем один

- 7 031106 дополнительный терапевтический агент, выбранный из группы, состоящей из химиотерапевтического агента, агента, реверсирующего множественную лекарственную устойчивость, и модификатора биологического ответа.

В одном из воплощений этого аспекта дополнительный терапевтический агент представляет собой химиотерапевтический агент.

В одном из аспектов в изобретении предложено соединение формулы (I), которое выбрано из соединений, изображенных ниже:

или его фармацевтически приемлемая соль.

Кроме того, изобретение относится к способу получения соединения формулы (I), к новым промежуточным соединениям для использования в получении соединений формулы (I) и к получению таких промежуточных соединений.

Всякий раз, когда термин соединения формулы (I), соединения по изобретению, соединения по

- 8 031106 настоящему изобретению или сходные термины используют выше и ниже в данной заявке, он означает соединения формулы (I) и любую подгруппу соединений формулы (I), включая все возможные стереохимически изомерные формы, их фармацевтически приемлемые соли, сольваты, четвертичные амины и комплексы с металлами.

Соединения по настоящему изобретению могут быть изготовлены в виде различных фармацевтических форм для целей введения. В качестве подходящих композиций можно упомянуть все композиции, которые обычно применяют для перорального введения лекарственных средств. Для получения фармацевтических композиций по изобретению, эффективное количество конкретного соединений, возможно в форме соли присоединения или сольвата, в качестве активного ингредиента объединяют в однородную смесь с фармацевтически приемлемым носителем, где носитель может принимать широкое разнообразие форм в зависимости от требуемой для введения формы изготовления. Эти фармацевтические композиции являются подходящими в единичных лекарственных формах, подходящих для перорального введения. Например, при получении композиций в пероральной лекарственной форме могут быть использованы любые из обычных фармацевтических сред, такие как, например, вода, гликоли, масла, спирты и тому подобное в случае пероральных жидких препаратов, таких как суспензии, сиропы, эликсиры, эмульсии и растворы; или твердые носители, такие как крахмалы, сахара, каолин, смазывающие вещества, связующие вещества, разрыхлители и тому подобное в случае порошков, пилюль, капсул и таблеток. Из-за легкости их введения таблетки и капсулы представляют собой наиболее предпочтительные стандартные лекарственные формы, в случае которых, очевидно, используют твердые фармацевтические носители. Также включены препараты в твердой форме, предназначенные быть превращенными в препараты в жидкой форме непосредственно перед применением.

Особенно предпочтительно изготавливать вышеуказанные фармацевтические композиции в виде стандартной лекарственной формы для легкости введения и однородности дозировки. Стандартная лекарственная форма, как использовано в данной заявке, относится к физически отдельным единицам, подходящим в качестве однократных доз, где каждая единица содержит предварительно определенное количество активного ингредиента, рассчитанное так, чтобы произвести желаемый терапевтический эффект, в сочетании с требуемым фармацевтическим носителем. Примерами таких стандартных лекарственных форм являются таблетки (включая таблетки с риской или покрытые таблетки), капсулы, пилюли, пакетики порошка, облатки и тому подобное, и их отделенные множества.

Обычно предполагают, что суточное количество, эффективное против рака, составляет от примерно 0,01 до примерно 700 мг/кг, или от примерно 0,5 до примерно 400 мг/кг, или от примерно 1 до примерно 250 мг/кг, или от примерно 2 до примерно 200 мг/кг, или от примерно 10 до примерно 150 мг/кг массы тела. Может быть подходящим вводить требуемую дозу в виде двух, трех, четырех или более субдоз через подходящие интервалы на протяжении суток. Указанные субдозы могут быть изготовлены в виде стандартных лекарственных форм, например, содержащих от примерно 1 до примерно 5000 мг, или от примерно 50 до примерно 3000 мг, или от примерно 100 до примерно 1000 мг, или от примерно 200 до примерно 600 мг, или от примерно 100 до примерно 400 мг активного ингредиента на стандартную лекарственную форму.

Соединения по настоящему изобретению могут оказывать противораковый эффект отдельно и/или усиливать способность других противораковых агентов оказывать противораковый эффект.

Соединения по изобретению представлены в виде определенного стереоизомера. Абсолютная конфигурация таких соединений может быть определена с использованием известных в данной области техники способов, таких как, например, рентгеновская дифракция или ЯМР, и/или являться следствием исходных веществ с известной стереохимией. Фармацевтические композиции согласно изобретению предпочтительно будут содержать, по существу, стереоизомерно чистые препараты указанного стереоизомера.

Чистые стереоизомерные формы соединений и промежуточных соединений, как указано в данной заявке, определены в виде изомеров, по существу, свободных от других энантиомерных или диастереомерных форм той же основной молекулярной структуры указанных соединений или промежуточных соединений. В частности, термин стереоизомерно чистый относится к соединениям или промежуточным соединениям, имеющим энантиомерный избыток по меньшей мере от 80% (т.е. минимум 90% одного изомера и максимум 10% других возможных изомеров) вплоть до стереоизомерного избытка 100% (т.е. 100% одного изомера и отсутствие другого изомера), более конкретно, к соединениям или промежуточным соединениям, имеющим стереоизомерный избыток от 90 вплоть до 100%, еще более конкретно имеющим стереоизомерный избыток от 94 вплоть до 100% и наиболее конкретно имеющим стереоизомерный избыток от 97 вплоть до 100%. Термины энантиомерно чистый и диастереомерно чистый следует понимать схожим образом, но тогда исходя из энантиомерного избытка и диастереомерного избытка рассматриваемой смеси соответственно.

Чистые стереоизомерные формы соединений и промежуточных соединений по данному изобретению могут быть получены путем применения процедур, известных в области техники. Например, энантиомеры могут быть отделены друг от друга путем селективной кристаллизации их диастереомерных солей с оптически активными кислотами или основаниями. Примерами последних являются винная ки

- 9 031106 слота, дибензоилвинная кислота, дитолуоилвинная кислота и камфорсульфоновая кислота. Альтернативно, энантиомеры могут быть разделены посредством хроматографических методик с использованием хиральных неподвижных фаз. Указанные чистые стереохимически изомерные формы также могут быть получены из соответствующих чистых стереохимически изомерных форм подходящих исходных веществ, при условии, что реакция протекает стереоспецифично. Предпочтительно, если требуется конкретный стереоизомер, указанное соединение синтезируют стереоспецифическими способами получения. В этих способах будут преимущественно использовать энантиомерно чистые исходные вещества.

Диастереомерные рацематы соединений по изобретению могут быть получены отдельно традиционными способами. Подходящие способы физического разделения, которые могут быть преимущественно использованы, представляют собой, например, селективную кристаллизацию и хроматографию, например колоночную хроматографию.

Когда атом фосфора присутствует в соединении по изобретению, атом фосфора может представлять собой хиральный центр. Хиральность в этом центре обозначают R или S согласно правилам приоритета Кана-Ингольда-Прелога. Когда хиральность не указана, предполагают, что должны быть включены и R-, и S-изомеры, а также смесь обоих, т.е. диастереомерная смесь.

В предпочтительных воплощениях изобретения включены стереоизомеры, имеющие Sконфигурацию на атоме фосфора. Эти стереоизомеры обозначены S_P.

В других воплощениях изобретения включены стереоизомеры, имеющие R-конфигурацию на атоме фосфора. Эти стереоизомеры обозначены R_P.

В других воплощениях изобретения включены диастереомерные смеси, т.е. смеси соединений, имеющие R- или S-конфигурацию на атоме фосфора.

Настоящее изобретение также включает изотопно меченные соединения формулы (I), где один или более атомов заменен изотопом этого атома, т.е. атомом, имеющим такой же атомный номер, но атомное число отличное от обычно встречающихся в природе. Примеры изотопов, которые могут быть включены в соединения формулы (I), включают, но не ограничиваются этим, изотопы водорода, такие как ²H и ³H (также обозначаемые D для дейтерия и T для трития соответственно), углерода, такие как C. ¹³C и ¹⁴C, азота, такие как N и N, кислорода, такие как O, O и O, фосфора, такие как P и P, серы, такие ОС 1 О ОС О С ОС 77 QO как S, фтора, такие как F, хлора, такие как Cl, брома, такие как Br, °Br, Br и Br, и йода, такие как I, I, I и I. Выбор изотопа, включенного в изотопно меченное соединение, будет зависеть от конкретного применения этого соединения. Например, для исследований распределения лекарственного средства или субстрата в ткани, как правило, наиболее полезными будут являться соединения, в которые включен радиоактивный изотоп, такой как ³Н или ¹⁴C. Для визуализации с помощью радиоизотопов, например позитронно-эмиссионной томографии (PET), полезным будет изотоп, излучающий позитроны, такой как C, F, N или O. Включение более тяжелого изотопа, такого как дейтерий, т.е. Н, может обеспечить большую метаболическую стабильность соединению формулы (I), которая может привести, например, к увеличенному времени полувыведения соединения in vivo или к пониженным требованиям дозировки.

Изотопно меченные соединения по изобретению могут быть получены способами, которые аналогичны способам, описанным в схемах и/или примерах в данной заявке ниже, путем использования подходящего изотопно меченного реагента или исходного вещества вместо соответствующего реагента или исходного вещества, не меченного изотопом, или путем традиционных методик, известных специалистам в данной области.

Фармацевтически приемлемые соли добавления включают солевые формы добавления терапевтически активной кислоты и основания соединений формулы (I). Интерес представляют свободные, т.е. несолевые формы соединений формулы (I) или любая их подгруппа.

Фармацевтически приемлемые соли добавления кислоты могут быть с легкостью получены путем обработки основной формы такой подходящей кислотой. Подходящие кислоты включают, например, неорганические кислоты, такие как галогенводородные кислоты, например соляная или бромистоводородная кислота, серная, азотная, фосфорная и подобные кислоты; или органические кислоты, такие как, например, уксусная, пропионовая, гидроксиуксусная, молочная, пировиноградная, щавелевая (т.е. этандиовая), малоновая, янтарная (т.е. бутандиовая кислота), малеиновая, фумаровая, яблочная (т.е. гидроксилбутандиовая кислота), винная, лимонная, метансульфоновая, этансульфоновая, бензолсульфоновая, п-толуолсульфоновая, цикламовая, салициловая, п-аминосалициловая, памовая и подобные кислоты. В свою очередь указанные солевые формы могут быть превращены в свободную основную форму путем обработки подходящим основанием.

Соединения формулы (I), содержащие кислотный протон, также могут быть превращены в их нетоксичные солевые формы добавления металла или амина путем обработки подходящими органическими и неорганическими основаниями. Подходящие основные солевые формы включают, например, аммонийные соли, соли щелочных и щелочно-земельных металлов, например соли лития, натрия, калия, магния, кальция и тому подобное, соли с органическими основаниями, например соли с бензатином, Nметил^-глюкамином, гидрабамином, и соли с аминокислотами, такими как, например, аргинин, лизин и тому подобные.

- 10 031106

Некоторые из соединений формулы (I) также могут существовать в их таутомерной форме. Например, таутомерными формами амидных групп (-C(=O)-NH-) являются иминоспирты (-C(OH)=N-), которые могут быть стабилизированы в кольцах с ароматической природой. Предполагается, что такие формы, хотя и не обозначены явно в структурных формулах, представленных в настоящей заявке, включены в объем настоящего изобретения.

Термины и выражения, использованные в настоящей заявке в реферате, описании и формуле изобретения, должны быть интерпретированы, как указано ниже, если не указано иное. Значение каждого термина является независимым при каждом употреблении. Эти определения действуют вне зависимости от того, используется ли термин отдельно или в комбинации с другими терминами, если не указано иное. Термин или выражение, использованное в настоящей заявке, которое не определено явно, должно быть интерпретировано как имеющее свое традиционное значение, используемое в данной области.

Химические названия, тривиальные названия и химические структуры могут использоваться взаимозаменяемо для описания одной и той же структуры. Если на химическое соединение ссылаются с использованием и химической структуры, и химического названия, и существует неоднозначность между структурой и названием, преобладает структура.

Cm-Cn-Алкил самостоятельно или в составных выражениях, таких как C_m-C,-галогеналкил. C_m-C_nалкилкарбонил, C_m-C_n-алкиламин и т.д. представляет собой прямоцепочечный или разветвленный алифатический углеводородный радикал, имеющий указанное число атомов углерода, например Q-U-алкил означает алкильный радикал, имеющий от 1 до 4 атомов углерода. C_| -C^-алкил имеет соответствующее значение, также включая все прямоцепочечные и разветвленные изомеры пентила и гексила. Предпочтительные алкильные радикалы для использования в настоящем изобретении представляют собой C₁-C₆алкил, включая метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, н-пентил и н-гексил, особенно Q-Q-алкил, такой как метил, этил, н-пропил, изопропил, трет-бутил, н-бутил и изобутил. Метил и изопропил обычно являются предпочтительными. Алкильная группа может быть незамещенной или замещенной одним или более заместителями, которые могут быть одинаковыми или различными, где каждый заместитель независимо выбран из группы, состоящей из галогена, алкенила, алкинила, арила, циклоалкила, циано, гидрокси, -O-алкила, -O-арила, -алкилен-О-алкила, алкилтио, -NH₂, группы -ИЩалкил), группы -К(алкил)₂, группы -МН(циклоалкил), -O-C(=O)алкила, -O-C(=O)арила, -OC(=O)циклоалкила, -C(=O)OH и -C(=O)O-алкила. Обычно предпочитают, чтобы алкильная группа являлась незамещенной, если не указано иное.

C₂-C_n-Алкенил представляет собой прямоцепочечный или разветвленный алифатический углеводородный радикал, содержащий по меньшей мере одну углерод-углеродную двойную связь и имеющий обозначенное число атомов углерода, например Q-Q-алкенил означает алкенильный радикал, имеющий от 2 до 4 атомов углерода; Q-Ce-алкенил означает алкенильный радикал, имеющий от 2 до 6 атомов углерода. Неограничивающие алкенильные группы включают этенил, пропенил, н-бутенил, 3-метилбут-2енил, н-пентенил и гексенил. Алкенильная группа может быть незамещенной или замещенной одним или более заместителей, которые могут быть одинаковыми или различными, где каждый заместитель независимо выбран из группы, состоящей из галогена, алкенила, алкинила, арила, циклоалкила, циано, гидрокси, -O-алкила, -O-арила, -алкилен^-алкила, алкилтио, -NH₂, группы -ИЩалкил), группы -^алкил)₂, группы -МЩциклоалкил), -O-C(=O)алкила, -O-C(=O)арила, -O-C(=O)циклоалкила, -C(=O)OH и -C(=O)O-алкила. Обычно предпочитают, чтобы алкенильная группа являлась незамещенной, если не указано иное.

U-ОгАлкинил представляет собой прямоцепочечный или разветвленный алифатический углеводородный радикал, содержащий по меньшей мере одну углерод-углеродную тройную связь и имеющий обозначенное число атомов углерода, например Q-Q-алкинил означает алкинильный радикал, имеющий от 2 до 4 атомов углерода; ^-Оз-алкинил означает алкинильный радикал, имеющий от 2 до 6 атомов углерода. Неограничивающие алкенильные группы включают этинил, пропинил, 2-бутинил и 3метилбутинил, пентинил и гексинил. Алкинильные группы могут быть незамещенными или замещенными одним или более заместителей, которые могут быть одинаковыми или различными, где каждый заместитель независимо выбран из группы, состоящей из галогена, алкенила, алкинила, арила, циклоалкила, циано, гидрокси, -O-алкила, -O-арила, -алкилен^-алкила, алкилтио, -NH₂, группы -ИЩалкил), группы -К(алкил)₂, группы ^Щциклоалкил), -O-C(=O)алкила, -O-C(=O)арила, -O-C(=O)циклоалкила, C(O)OH и -C(O)O-алкила. Обычно предпочитают, чтобы алкинильная группа являлась незамещенной, если не указано иное.

Термин C_m-C_n-галогеналкил, как использовано в настоящей заявке, представляет собой C_m-C_nалкил, где по меньшей мере один атом C замещен галогеном (например, C_m-C_n-галогеналкильная группа может содержать от одного до трех атомов галогена), предпочтительно хлором или фтором. Типичные галогеналкильные группы представляют собой Q-Q-галогеналкил, в котором галоген соответственно представляет собой фтор. Иллюстративные галогеналкильные группы включают фторметил, дифторметил и трифторметил.

Термин C^Cu-гидроксиалкил, как использовано в настоящей заявке, представляет собой C_m-C_nалкил, где по меньшей мере один атом C замещен одной группой гидрокси. Типичные C_m-C_n

- 11 031106 гидроксиалкильные группы представляют собой Cm-Cn-алкил, где один атом C замещен одной группой гидрокси. Иллюстративные гидроксиалкильные группы включают гидроксиметил и гидроксиэтил.

Термин Cm-Cn-аминоалкил, как использовано в настоящей заявке, представляет собой C_m-C_nалкил, где по меньшей мере один атом C замещен одной группой амино. Типичные C_m-C_nаминоалкильные группы представляют собой C^Cn-алкил, где один атом C замещен одной группой амино. Иллюстративные аминоалкильные группы включают аминометил и аминоэтил.

Термин C_m-C_n-алкилен, как использовано в настоящей заявке, представляет собой прямоцепочечный или разветвленный двухвалентный алкильный радикал, имеющий указанное число атомов углерода. Предпочтительными C_m-C_n-алкиленовыми радикалами для использования в настоящем изобретении являются Cl-Cз-алкилены. Неограничивающие примеры алкиленовых групп включают -CH₂-, -CH₂CH₂-, -CH₂CH₂CH₂-, -CH(CH₃)CH2CH2-, -CH(CH₃)- и -CH(CH(CH₃)2)-.

Термин Me означает метил и MeO означает метокси.

Термин C_m-C_n-алкилкарбонил представляет собой радикал формулы C^^^km-C^O)-, где C_mC_n-алкильная группировка является такой, как определено выше. Обычно C_m-C_n-алкилкарбонил представляет собой Cl-C₆-алкил-C(=O)-.

C_m-C_n-Алкокси представляет собой радикал C_m-C_n^K^-O-, где О^О^алкил является таким, как определено выше. Особый интерес представляет собой Ci-C.-i-алкокси. который включает метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, трет-бутокси, н-бутокси и изобутокси. Метокси и изопропокси обычно являются предпочтительными. Ci-Cg-алкокси имеет соответствующее значение, расширенное включением всех прямоцепочечных и разветвленных изомеров пентокси и гексокси.

Термин C_m-C_n-алкоксикарбонил представляет собой радикал формулы C_m-C_n-алкокси-C(=O)-, где группировка Оп-^-алкокси является такой, как определено выше. Обычно C_m-C_n-алкоксикарбонил представляет собой C₁-C6-алкокси-C(=O)-.

Термин амино представляет собой радикал -NH₂.

Термин галоген представляет собой галогеновый радикал, такой как фтор, хлор, бром или йод. Обычно группы галоген представляют собой фтор или хлор.

Термин арил означает фенильную, бифенильную или нафтильную группу.

Термин гетероциклоалкил представляет собой стабильное насыщенное моноциклическое 3-7членное кольцо, содержащее 1-3 гетероатома, независимо выбранных из O, S и N. В одном из воплощений стабильное насыщенное 3-7-членное кольцо содержит 1 гетероатом, выбранный из O, S и N. Во втором воплощении стабильное насыщенное моноциклическое 3-7-членное кольцо содержит 2 гетероатома, независимо выбранных из O, S и N. В третьем воплощении стабильное насыщенное моноциклическое 37-членное кольцо содержит 3 гетероатома, независимо выбранных из O, S и N. Стабильное насыщенное моноциклическое 3-7-членное кольцо, содержащее 1-3 гетероатома, независимо выбранные из O, S и N, обычно может представлять собой 5-7-членное кольцо, такое как 5 или 6-членное кольцо. Гетероциклоалкильная группа может быть незамещенной или замещенной одним или более заместителями, которые могут быть одинаковыми или различными, где каждый заместитель независимо выбран из группы, состоящей из галогена, алкенила, алкинила, арила, циклоалкила, циано, гидрокси, -O-алкила, -O-арила, -алкиленЮ-алкила, алкилтио, -NH₂, группы -МЩалкил), группы -Ы(алкил)₂, группы -МЩциклоалкил), -O-C(=O)алкила, -O-C(=O)арила, -O-C(=O)циклоалкила, -C(=O)OH и -Ц^^-алкила. Обычно предпочитают, чтобы гетероциклоалкильная группа являлась незамещенной, если не указано иное.

Термин гетероарил представляет собой, стабильную моно- или бициклическую ароматическую кольцевую систему, содержащую 1-4 гетероатома, независимо выбранных из O, S и N, где каждое кольцо имеет 5 или 6 кольцевых атомов. В одном из воплощений изобретения стабильная моно- или бициклическая ароматическая кольцевая система содержит один гетероатом, выбранный из O, S и N, где каждое кольцо имеет 5 или 6 кольцевых атомов. Во втором воплощении изобретения стабильная моно- или бициклическая ароматическая кольцевая система содержит два гетероатома, независимо выбранных из O, S и N, где каждое кольцо имеет 5 или 6 кольцевых атомов. В третьем воплощении стабильная моно- или бициклическая ароматическая кольцевая система содержит три гетероатома, независимо выбранных из O, S и N, где каждое кольцо имеет 5 или 6 кольцевых атомов. В четвертом воплощении стабильная моноили бициклическая ароматическая кольцевая система содержит четыре гетероатома, независимо выбранных из O, S и N, где каждое кольцо имеет 5 или 6 кольцевых атомов.

Одно из воплощений гетероарила включает флавон.

Термин C₃-C_n-циклоалкил представляет собой циклический одновалентный алкильный радикал, имеющий указанное число атомов углерода, например C₃-C7-циклоалкил означает циклический одновалентный алкильный радикал, имеющий от 3 до 7 атомов углерода. Предпочтительные циклоалкильные радикалы для использования в настоящем изобретении представляют собой C₃-C₄-алкил, т.е. циклопропил и циклобутил. Циклоалкильная группа может быть незамещенной или замещенной одним или более заместителями, которые могут быть одинаковыми или различными, где каждый заместитель независимо выбран из группы, состоящей из галогена, алкенила, алкинила, арила, циклоалкила, циано, гидрокси, -Oалкила, -O-арила, -алкиленЮ-алкила, алкилтио, -NH₂, группы -МЩалкил), группы -Ы(алкил)₂, группы -МЩциклоалкил), -O-C(=O)алкила, -O-C(=O)арила, -O-C(=O)циклоалкила, -C(=O)OH и -Ц^^-алкила.

- 12 031106

Обычно предпочитают, чтобы циклоалкильная группа являлась незамещенной, если не указано иное.

Термин амино-С_т-С_п-алкил представляет собой С_т-С_п-алкильный радикал, как определено выше, который замещен группой амино, т.е. один атом водорода алкильной группировки заменен КН₂-группой. Обычно, амино-С_т-С_п-алкил представляет собой амино-С1-С₆-алкил.

Термин амино-С_т-С_п-алкилкарбонил представляет собой С_т-С_п-алкилкарбонильный радикал, как определено выше, где один атом водорода алкильной группировки заменен группой NH₂. Обычно амино-С_т-С_п-алкилкарбонил представляет собой амино-С₁-С₆-алкилкарбонил. Примеры амино-С_т-С_палкилкарбонила включают, но не ограничиваются этим, глицил: С(=О)СЩЛН₂, аланил: С(=О)СН^Н₂)СН₃, валинил: С=ОСН(КН₂)СН(СН₃)₂, лейцинил: С(=О)СН(КН₂)(СН₂)₃СН₃, изолейцинил: С(=О)СН^Н₂)СН(СН₃)(СН₂СН₃) и норлейцинил: С(=О)СН^Н₂)(СН₂)₃СН₃ и тому подобное. Это определение не ограничено встречающимися в природе аминокислотами.

Как использовано в данной заявке, термин (=О) образует карбонильную группировку при присоединении к атому углерода. Следует отметить, что атом может нести группу оксо только тогда, когда валентность атома это позволяет.

Термин монофосфатный, дифосфатный и трифосфатный сложный эфир относится к группам

О О О ООО

II . II II . II IIII I

HO-р-!- НО-Р-О-Р-!- и HO-P-O-P-O-P-II ’ II* I I I ¹ он он он он он он.

Как использовано в настоящей заявке, положения радикалов в любой молекулярной группировке, использованной в определениях, может быть где угодно в такой группировке до тех пор, пока она является химически стабильной. Когда любая присутствующая переменная встречается более чем один раз в любой группировке, каждое определение является независимым.

Термин сольваты покрывает любые фармацевтически приемлемые сольваты, которые способны образовывать соединения формулы (I), а также их соли. Такие сольваты представляют собой, например, гидраты, алкоголяты, например этаноляты, пропаноляты, и тому подобное, в особенности гидраты.

Термин пролекарство, как использовано в настоящей заявке, означает соединение, которое представляет собой предшественник лекарственного средства, которое при введении субъекту легко конвертируется in vivo посредством метаболических и/или химических процессов с получением активного соединения.

Выражение пролекарство, нацеленное на печень, как использовано в настоящей заявке, означает пролекарство, которое метаболизируется до его активных соединений преимущественно в печени.

Выражение рак печени, как использовано в настоящей заявке, включает и первичный, и вторичный рак печени, т.е. рак, который происходит из печени, и метастазирование в печени от рака в другом органе соответственно.

Родственные термины следует интерпретировать в соответствии с определениями, приведенными выше, и обычным применением в области техники.

Обычно названия соединений, используемые в данной заявке, генерированы с использованием ChemDraw Ultra 12.0. Кроме того, если стереохимия структуры или части структуры не указана, например, посредством жирной или пунктирной линий, структуру или часть этой структуры следует интерпре тировать как включающую все ее стереоизомеры.

Общие синтетические способы

Соединения по настоящему изобретению могут быть получены различными способами, например, как изображено на иллюстративных синтетических схемах, показанных и описанных ниже. Используемые исходные вещества и реагенты доступны от коммерческих поставщиков или могут быть получены согласно процедурам, известным из литературы, приведенной в ссылках, с использованием способов, хорошо известных специалистам в данной области.

На схеме 1 проиллюстрирован общий способ получения соединений формулы (I).

Схема 1

R²

1а

R¹³R¹⁵' _о

R¹⁶°Y^N—P-Lg

О R³ OR¹³

1b основание

1с

Lg - уходящая группа, например галоген или пентафторфенол

Конденсация коммерчески доступного производного троксацитабина (1a), полученного, как описано выше, с требуемым фосфорамидатным реагентом (1b), где Lg представляет собой подходящую уходящую группу, такую как галоген, например хлорид, или активированный фенол, например пентахлорфенол, п-нитрофенол, пентафторфенол или тому подобное, в инертном растворителе, таком как простой эфир, например диэтиловый эфир или ТНТ, или галогенированный углеводород, например дихлорметан, в присутствии основания, такого как N-метилимидазол (NMI) или реагент Гриньяра, например трет

- 13 031106 бутилмагния хлорид или тому подобное, фосфорамидатное производное (1c).

Фосфорамидатные реагенты (1b), используемые в вышеуказанной схеме, где Lg представляет собой хлор, т.е. фосфорамидохлоридаты, могут быть получены путем двухстадийной реакции, начиная с оксихлорида фосфора (POCl₃), как показано на схеме 2.

Схема 2

Cl—P-CI ^r13qh>. ci—р—ci Cl OR¹³

2a

Конденсация POCl₃ с целевым спиртом R¹³OH в инертном растворителе, например Et₂O, обеспечи вает алкокси- или арилоксифосфордихлоридат (2a). Последующая реакция с производным аминокислоты (2b) обеспечивает фосфорамидохлоридаты, где R³ представляет собой H (2c).

Если необходимо, полученные фосфорамидохлоридаты (2c) могут быть превращены в соответствующий фосфорилирующий агент, имеющий в качестве уходящей группы активированный фенол, например пентафторфенол или п-ЖЕ-фенол. как в общих чертах показано на схеме 3.

Это превращение с легкостью осуществляют путем реакции хлоропроизводного (2c) с требуемым активированным фенолом в присутствии основания, такого как триэтиламин или схожего, что таким образом обеспечивает фосфорилирующие агенты (3a) и (3b).

Использование различных защитных групп (PG), используемых на схемах выше, известно специалисту в данной области, и их применение и другие альтернативы подробно описаны в литературе, см., например, Greene T.W., Wuts P.G.M. Protective groups in organic synthesis, 2nd ed. New York: Wiley; 1995.

Термин N-защитная группа или N-защищенный, как использовано в данной заявке, относится к группам, которые предназначены защищать N-конец аминокислоты или пептида или защищать группу амино от нежелательных реакций в ходе синтетических процедур. Часто используемые N-защитные группы раскрыты у Greene. N-защитные группы включают ацильные группы, такие как формил, ацетил, пропионил, пивалоил, трет-бутилацетил, 2-хлорацетил, 2-бромацетил, трифторацетил, трихлорацетил, фталил, о-нитрофеноксиацетил, α-хлорбутирил, бензоил, 4-хлорбензоил, 4-бромбензоил, 4-нитробензоил и тому подобное; сульфонильные группы, такие как бензолсульфонил, п-толуолсульфонил и тому подобное; карбамат-образующие группы, такие как бензилоксикарбонил, п-хлорбензилоксикарбонил, пметоксибензилоксикарбонил, п-нитробензилоксикарбонил, 2-нитробензилоксикарбонил, п-бромбензилоксикарбонил, 3,4-диметоксибензилоксикарбонил, 4-метоксибензилоксикарбонил, 2-нитро-4,5диметоксибензилоксикарбонил, 3,4,5-триметоксибензилоксикарбонил, 1-(п-бифенил)-1-метилэтоксикарбонил, а,а-диметил-3,5-диметоксибензилоксикарбонил, бензгидрилоксикарбонил, трет-бутоксикарбонил, диизопропилметоксикарбонил, изопропилоксикарбонил, этоксикарбонил, метоксикарбонил, аллилоксикарбонил, 2,2,2-трихлорэтоксикарбонил, феноксикарбонил, 4-нитрофеноксикарбонил, флуоренил-9-метоксикарбонил, циклопентилоксикарбонил, адамантилоксикарбонил, циклогексилоксикарбонил, фенилтиокарбонил и тому подобное; алкильные группы, такие как бензил, трифенилметил, бензилоксиметил и тому подобное; и силильные группы, такие как триметилсилил и тому подобное. Предпочтительные N-защитные группы включают формил, ацетил, бензоил, пивалоил, трет-бутилацетил, фенилсульфонил, бензил (Bz), трет-бутоксикарбонил (BOC) и бензилоксикарбонил (Cbz).

Защитные группы гидрокси и/или карбокси подробно рассмотрены там же в Greene и включают простые эфиры, такие как метиловый, замещенные метиловые простые эфиры, такие как метоксиметил, метилтиометил, бензилоксиметил, трет-бутоксиметил, 2-метоксиэтоксиметил и тому подобное, силильные простые эфиры, такие как триметилсилил (TMS), трет-бутилдиметилсилил (TBDMS) трибензилсилил, трифенилсилил, трет-бутилдифенилсилил, триизопропилсилил и тому подобное, замещенные этиловые простые эфиры, такие как 1-этоксиметил, 1-метил-1-метоксиэтил, трет-бутил, аллил, бензил, пметоксибензил, дифенилметил, трифенилметил и тому подобное, аралкильные группы, такие как тритил и пиксил (9-гидрокси-9-фенилксантеновые производные, в особенности хлорид). Сложноэфирные защитные группы гидрокси включают сложные эфиры, такие как формиат, бензилформиат, хлорацетат, метоксиацетат, феноксиацетат, пивалоат, адамантоат, мезитоат, бензоат и тому подобное. Карбонатные защитные группы гидрокси включают метил винил, аллил, циннамил, бензил и тому подобное.

- 14 031106

Подробное описание воплощений

Таким образом, различные воплощения изобретения и промежуточные соединения будут проиллюстрированы посредством следующих примеров. Примеры предназначены исключительно для последующей иллюстрации изобретения и никаким образом не ограничивают объем изобретения. Названия соединений генерировали с помощью программного обеспечения ChemDraw Ultra, Cambridgesoft, версия 12.0.2.

В дополнение к определениям выше в синтетических схемах выше и примерах ниже используют следующие сокращения. Если сокращение, использованное в данной заявке, не определено, оно имеет общеупотребимое значение:

Bn - бензил,

BOP-Cl - бис-(2-оксо-3-оксазолидинил)фосфина хлорид,

DCC - дициклогексилкарбодиимид,

DCM - дихлорметан,

DIEA - диизопропилэтиламин,

DMAP - 4-диметиламинопиридин,

DMF - Н^диметилформамид,

EtOAc - этилацетат,

Et₃N - триэтиламин,

EtOH - этанол,

Et₂O - диэтиловый эфир,

LC - жидкостная хроматография,

HOAc - уксусная кислота,

HPLC - высокоэффективная жидкостная хроматография,

MeCN - ацетонитрил,

MeOH - метанол,

NT - 3-нитро-1,2,4-триазол,

On - в течение ночи,

Pg - защитная группа,

Ph - фенил,

к.т. - комнатная температура,

TEST - бис-(триэтоксисилил)пропил-тетрасульфид,

THF - тетрагидрофуран,

TFA - трифторуксусная кислота,

TFAA - трифторуксусный ангидрид,

TIPS - триизопропилсилил.

Получение троксацитабина.

Стадия 1. ((2,2-Диметоксиэтокси)метил)бензол (Tr-1).

К перемешиваемому раствору 2,2-диметоксиэтанола (50 г, 0,471 моль) в DMF (200 мл) добавляли бензилбромид (56,03 мл, 0,471 моль) и NaOH (20,7 г, 0,518 моль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После завершения реакции (TLC) добавляли насыщенный раствор хлорида натрия (500 мл), и реакционную смесь экстрагировали DCM (1 л), органическую фазу сушили (Na₂SO₄) и концентрировали, и полученное неочищенное вещество очищали посред

- 15 031106 ством колоночной хроматографии на силикагеле на 60-120 меш с помощью 4-6% EtOAc в гексане с получением указанного в заголовке соединения (60 г, 60%) в виде жидкости.

Стадия 2. (5S)-5-((4S)-2-((Бензилокси)метил)-1,3-диоксолан-4-ил)-3,4-дигидроксифуран-2(5H)-он (Tr-2).

L-Аскорбиновую кислоту (44,9 г, 0,255 моль) добавляли к раствору соединения Tr-1 (60 г, 0,306 моль) в безводном ацетонитриле (898 мл) с последующим добавлением pTSA моногидрата (15,5 г, 0,076 моль), и реакционную смесь нагревали при 90°C в течение 1 ч. После завершения реакции (TLC) половину объема ацетонитрила отгоняли и процесс повторяли дважды. Растворитель полностью удаляли и получали указанное в заголовке соединение в виде смеси стереоизомеров (91 г). Продукт непосредственно использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки.

Стадия 3. (2R)-2-((4S)-2-((Бензилокси)метил)-1,3-диоксолан-4-ил)-2-гидроксиуксусная кислота (Tr3).

Соединение Tr-2 (91,7 г, 0,297 моль) добавляли к перемешиваемому раствору K₂CO₃ (86,3 г, 0,625 моль) в H₂O (509 мл) при комнатной температуре. Медленно добавляли H₂O₂ (80 мл, 0,71 моль, 30% об./об.). и раствор охлаждали до 0°C и затем перемешивали в течение 24 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении, добавляли EtOH (100 мл) и смесь нагревали с обратным холодильником в течение 30 мин, затем фильтровали. К полученному твердому остатку добавляли EtOH (100 мл) и смесь нагревали с обратным холодильником в течение 30 мин (дважды). Собранные фильтраты концентрировали в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (90 г) в виде твердого вещества.

Стадия 4. ^^)-2-((Бензилокси)метил)-1,3-диоксолан-4-карбоновая кислота (Tr-4a) и (2R,4S)-2((бензилокси)метил)-1,3-диоксолан-4-карбоновая кислота (Tr-4b).

Гипохлорит натрия (650 мл, 0,881 моль, 9-10% в воде) по каплям добавляли в течение периода 30 мин к интенсивно перемешиваемому раствору соединения Tr-3 (90 г, 0,294 моль) и RuCl₃-H₂O (1,22 г, 0,0058 моль) в воде (мл pH 8, комнатная температура). pH поддерживали при 8 путем добавления 1 М раствора NaOH. Реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч при комнатной температуре, затем нагревали при 35°C в течение 12 ч. После завершения реакции (TLC) 1,5н. HCl добавляли к реакционной смеси при 0°C до достижения pH 6, затем добавляли EtOAc (1 л). Органическую фазу промывали рассолом (2x100 мл), сушили (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали. Полученное неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле на 230-400 меш с помощью 20% EtOAc в петролиевом эфире с получением соединений 4a+4b в виде смеси изомеров. Затем изомеры разделяли посредством колоночной хроматографии на силикагеле 230-400 меш с использованием 0,9% MeOH в DCM и 0,1% AcOH в качестве элюента, что обеспечивало 2R изомер (20 г, 28%).

Стадия 5. (2S)-2-((Бензилокси)метил)-1,3-диоксолан-4-ила ацетат (Tr-5).

К раствору соединения Tr-4a (33 г, 0138 моль) в ацетонитриле (660 мл) добавляли пиридин (13,2 мл) и ацетат свинца (79,8 г, 0,180 моль), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После завершения реакции (TLC) реакционную смесь фильтровали, фильтрат концентрировали и остаток помещали в EtOAc (500 мл), промывали водой (100 мл) и насыщенным раствором хлорида натрия (100 мл) и сушили над Na2SO4. После удаления растворителя неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле на 60-120 меш с помощью 12-15% градиента EtOAc/петролейный эфир с получением указанного в заголовке соединения (16 г, 47%) в виде жидкости.

Стадия 6. (2S)-2-(Гидроксиметил)-1,3-диоксолан-4-ил ацетат (Tr-6).

К перемешиваемому раствору соединения Tr-5 (16 г) в безводном метаноле (160 мл) добавляли Pd/C (3,2 г, 20% мас./мас.), и реакционную смесь гидрировали в течение 3 ч. После завершения реакции (TLC) реакционную смесь фильтровали через целит. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении и полученное неочищенное указанное в заголовке соединение (10 г, 97%) использовали непосредственно на следующей стадии.

Стадия 7. ((2S)-4-Ацетокси-1,3-диоксолан-2-ил)метил ацетат (Tr-7).

К перемешиваемому раствору соединения Tr-6 (5,74 г, 0,0354 моль) в пиридине (107 мл), добавляли уксусный ангидрид (8,22 мл, 0,080 моль) при 0°C и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. После завершения реакции (TLC) реакционную смесь гасили разбавленной HCl (10 мл) и экстрагировали EtOAc (100 мл). Органическую фазу отделяли, сушили (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали. Полученное неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле на 230-400 меш, элюируя градиентом 10-15% EtOAc/петролейный эфир, с получением указанного в заголовке соединения (4,97 г, 68%) в виде жидкости.

Стадия 8. ((2S,4S)-4-(4-(Бензиламино)-2-оксопиримидин-1(2H)-ил)-1,3-диоксолан-2-ил)метилацетат (Tr-8a).

Смесь N-бензоилцитозина (12,1 г, 56,3 ммоль), сульфата аммония (каталитическое количество) и гексаметилдисилазана (HMDS) (67,4 мл, 418 ммоль) нагревали с обратным холодильником в течение 1 ч. HMDS удаляли при пониженном давлении при 40°C и остаток помещали в безводный 1,2-дихлорэтан (57 мл) и добавляли раствор соединения Tr-7 (5,7 г, 27,9 ммоль) в безводном 1,2-дихлорэтане (57 мл) с последующим добавлением по каплям TMSOTf (10,2 мл, 45,7 ммоль). Реакционную смесь перемешивали

- 16 031106 при комнатной температуре в течение 1 ч, затем добавляли водный раствор NaHCO₃ и смесь перемешивали в течение 30 мин. Полученное твердое вещество фильтровали через целит, и фильтрат помещали в EtOAc (200 мл), промывали водой (50 мл) и сушили (Na₂SO₄). После удаления растворителя при пониженном давлении неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле на 230-400 меш с использованием градиента 10-15% EtOAc/петролейный эфир с получением смеси аномеров, которую далее разделяли посредством SFC (сверхкритическая флюидная хроматография) очистки с получением указанного в заголовке соединения (3 г, 30%) в виде белого твердого вещества.

Стадия 9. 4-Амино-1-((2S,4S)-2-(гидроксиметил)-1,3-диоксолан-4-ил)пиримидин-2(1H)-он (Tr-9).

Смесь соединения Tr-8a (3 г), насыщенного метанольного раствора аммиака (180 мл) перемешивали при комнатной температуре в запаянной пробирке в течение 16 ч. После завершения реакции (TLC) растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле на 230-400 меш, элюировали градиентом 10-13% MeOH в DCM с получением указанного в заголовке соединения (1,5 г, 85%) в виде твердого вещества. ¹Н-ЯМР 400 МГц DMSO-d₆ δ: 3.63-3.65 (2H), 4.04-4.07 (2H), 4.92-4.94 (1H), 5.18-5.21 (1H), 5.72-5.74 (1H), 6.16-6.18 (1H), 7.14 (1H), 7.26 (1H), 7.80-7.82 (1Н).

Получение 5^-троксацитабина.

5-Р-Троксацитабин (5-F-Tr)

Стадия 1. ((2S,4R)-4-(4-бензамидо-5-фтор-2-оксопиримидин-1 (2H)-ил)-1,3-диоксолан-2ил)метилбензоат (5-F-Tr-1a) и ((2S,4S)-4-(4-бензамидо-5-фтор-2-оксопиримидин-1(2H)-ил)-1,3диоксолан-2-ил)метилбензоат (5-F-Tr-1b).

Смесь 5-фторбензоилцитозина (9,1 г, 39,5 ммоль), сульфата аммония (каталитическое количество) и гексаметилдисилазана (140 мл) нагревали с обратным холодильником в течение 14 ч. HMDS удаляли при пониженном давлении при 40°C и остаток помещали в безводный 1,2-дихлорэтан (50 мл) и добавляли раствор соединения ((2S)-4-ацетокси-1,3-диоксолан-2-ил)метилбензоата (7 г, 26,30 ммоль) в безводном 1,2-дихлорэтане (50 мл) с последующем добавлением по каплям TMS-OTf (11,6 г, 52,6 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, затем к реакционной смеси добавляли водный раствор NaHCO3 и смесь перемешивали в течение последующих 30 мин. Полученное твердое вещество фильтровали через целит и фильтрат помещали в EtOAc (500 мл), промывали водой (50 мл) и сушили (Na₂SO₄). Растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле на 230-400 меш при градиенте 50-60% EtOAc/петролейный эфир с получением чистого указанного в заголовке соединения (1,7 г, 18%) в виде твердого вещества.

Стадия 2. 4-Амино-5-фтор-1-((2S,4S)-2-(гидроксиметил)-1,3-диоксолан-4-ил)пиримидин-2(1H)-он (5-F-Tr).

Смесь соединения 5-F-Tr-1b (1,7 г), насыщенного метанольного раствора аммиака (34 мл) перемешивали при комнатной температуре в запаянной пробирке в течение 16 ч, затем растворитель удаляли при пониженном давлении и неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле на 230-400 меш при градиенте 5% MeOH в DCM с получением указанного в заголовке соединения (0,8 г, 68%) в виде твердого вещества.

Следующие фенолы получали и использовали в получении промежуточных соединений к соединениям по изобретению.

Фенол 1

Стадия a. 1-(3-((трет-Бутилдиметилсилил)окси)фенил)этанон (Ph1-a).

Имидазол (4,46 г, 65,5 ммоль) добавляли к раствору 3-гидроксиацетофенона (4,46 г, 32,8 ммоль) в DMF (6 мл). По прошествии 5 мин добавляли раствор TBDMS-Cl (4,69 г, 31,1 ммоль) в DMF (4 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 90 мин, затем выливали в гексан, содержащий 5% EtOAc (200 мл) и промывали 1 М HCl (60 мл), водой (60 мл), насыщенным бикарбонатом натрия (2x60 мл), водой (60 мл) и рассолом (60 мл). Органический слой сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали и полученный остаток очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле, элюируя гексаном/EtOAc, с получением указанного в заголовке соединения (5,7 г, 69%).

- 17 031106

Стадия b. трет-Бутилдиметил(3-(проп-1-ен-2-ил)фенокси)силан (Ph1-b).

Метил(трифенилфосфоний)бромид (10,2 г, 28,4 ммоль) суспендировали в безводном THF (30 мл) в атмосфере азота, и суспензию охлаждали до 0°C. К смеси по каплям добавляли н-бутиллитий (17,8 мл, 28,4 ммоль) и полученныйраствор перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. К смеси добавляли Ph1-a (5,7 г, 22,8 ммоль) и реакцию оставляли протекать при комнатной температуре в течение 60 мин. Реакционную смесь гасили водным бикарбонатом натрия и экстрагировали диэтиловым эфиром (50 мл). Органический слой промывали раствором бикарбоната натрия, сушили (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали. Полученный остаток очищали через набивку силикагеля, элюируя гексаном, с получением указанного в заголовке соединения (3,9 г, 69%).

Стадия c. трет-Бутилдиметил(3-(1-метилциклопропил)фенокси)силан (Ph1-c).

Диэтилцинк в гексане (439,2 ммоль) по каплям добавляли в атмосфере азота в течение 10 мин к охлажденному (0°C) раствору олефина Ph1-b (3,9 г, 15,7 ммоль) в 1,2-дихлорэтане (60 мл). По каплям добавляли дийодметан (6,32 мл, 78,5 ммоль) и полученную смесь перемешивали при 0°C в течение 30 мин и затем оставляли нагреваться до комнатной температуры в течение ночи. Смесь выливали в ледяной раствор хлорида аммония и экстрагировали диэтиловым эфиром. Органический слой промывали насыщенным бикарбонатом натрия, сушили (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали. Неочищенное вещество помещали в гексан и оставшийся дийодметан отбрасывали. Гексановый слой концентрировали с получением неочищенного вещества, которое брали на следующую стадию без дальнейшей очистки.

Стадия d. 3-(1-Метилциклопропил)фенол (фенол 1).

Ph1-c (3,45 г, 13,1 ммоль) помещали в 1 М раствор тетрабутиламмония фторида в THF (20 мл, 20 ммоль) и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь гасили 1 М HCl (50 мл) и экстрагировали этилацетатом (100 мл). Органический слой промывали рассолом (2x50 мл), сушили (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали. Остаток очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле, элюируя смесью 2-пропанола, EtOAc и гексана, с получением указанного в заголовке соединения (0,56 г, 29%). MS 147,1 [М-Н]^-.

Фенол 2

Указанное в заголовке соединение получали из 4-гидроксиацетофенона (6,0 г, 44,1 ммоль) с использованием способа, описанного для получения фенола 1. Выход 53%.

Фенол 3

Стадия a. 1-(3-(бензилокси)фенил)циклопентанол (Ph3-a)

Йод, нагретый с магнием, добавляли к суспензии магниевой стружки (1,29 г, 52,8 ммоль) в безводном THF (50 мл). Смесь нагревали с обратным холодильником и добавляли примерно 5% раствора 3бромфенола (13,9 г, 52,8 ммоль). Когда реакция начиналась, по каплям добавляли раствор бромида и затем смесь нагревали с обратным холодильником в течение одного последующего 1 ч. Смесь охлаждали до примерно 5°C, и по каплям добавляли раствор циклопентанона (4,44 г, 52,8 ммоль) в THF (50 мл). Смесь перемешивали при к.т. в течение 72 ч, затем реакцию гасили охлажденным насыщенным раствором хлорида аммония и экстрагировали диэтиловым эфиром (x3). Органическую фазу промывали рассолом, сушили (Na2SO4), фильтровали и концентрировали. Продукт очищали посредством хроматографии на силикагеле (изогексан/EtOAc) с получением указанного в заголовке соединения (8,5 г, 54%).

Стадия b. 1-(Бензилокси)-3-(циклопент-1-ен-1-ил)бензол (Ph3-b).

п-Толуолсульфоновую кислоту добавляли к раствору Ph3-a (8,4 г, 28,2 ммоль) в бензоле (100 мл). Смесь нагревали с обратным холодильником в течение 3 ч с DMF ловушкой, затем охлаждали до к.т., разбавляли диэтиловым эфиром и промывали насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и рассолом. Органическую фазу сушили (Na2SO4), фильтровали и концентрировали. Продукт очищали посредством хроматографии на силикагеле (изогексан/EtOAc) с получением указанного в заголовке соединения (6,45 г, 91%). MS 249,4 [M-H]^-.

Стадия с. 3-Циклопентилфенол (фенол 3).

Раствор Ph3-b (6,4 г, 26 ммоль) в EtOAc (75 мл) и EtOH (75 мл) гидрировали при 22°C и давлении 40 фунтов на кв.дюйм (275,8 кПа) в присутствии 10% Pd на углероде (1,5 г) в аппарате Парра в течение ночи. Катализатор отфильтровывали и промывали EtOAc и EtOH. Растворитель выпаривали при пониженном давлении и продукт выделяли посредством хроматографии на силикагеле (изогексан/EtOAc), с получением указанного в заголовке соединения (3,6 г, 82%). MS 161,2 [M-H]^-.

- 18 031106

Фенол 4

Ph4-a

Стадия а. трет-Бутил(3-циклопропилфенокси)диметилсилан (Ph4-a).

Суспензию (3-бромфенокси)(трет-бутил)диметилсилана (5,46 г, 19 ммоль), циклопропилбороновой кислоты (2,12 г, 24,7 ммоль), трехосновного фосфата калия (14,1 г, 66,5 ммоль), трициклогексилфосфина (0,53 г, 1,9 ммоль) и Pd(OAc)₂ (0,21 г, 0,95 ммоль) в толуоле (80 мл) и воде (4 мл) перемешивали при 110°С в течение ночи. Суспензию разбавляли диэтиловым эфиром и промывали водой и рассолом. Органическую фазу сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали. Неочищенное вещество очищали посредством флэш-колоночной хроматографии (EtOAc/гексан) с получением указанного в заголовке соединения (1,94 г, 41%).

Стадия b. 3-Циклопропилфенол (фенол 4).

М тетрабутиламмония фторид (10,1 мл, 10,1 ммоль) добавляли к раствору Ph4-a (1,94 г, 7,81 ммоль) в THF (25 мл). Раствор перемешивали в течение 2 ч, затем растворитель выпаривали, и остаток растворяли в EtOAc и дважды промывали концентрированным NH₄Cl (водн.) и один раз рассолом. Органическую фазу сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали. Неочищенное вещество очищали посредством флэш-колоночной хроматографии (гексан/этилацетат 9:1 с 1% изопропанола) с получением указанного в заголовке соединения с незначительными примесями (1,24 г, 119%).

Фенол 5 .он

Стадия а. 2-(4-Бромофенокси)тетрагидро-2H-пиран (Ph5-a)

4-Бромфенол (3,75 г, 21,7 ммоль) растворяли в 3,4-дигидро-2Н-пиране (16 мл, 175 ммоль), добавляли каталитическое количество п-толуолсульфоновой кислоты (15 мг, 0,09 ммоль) и смесь перемешивали при 22°С в течение 45 мин. Смесь разбавляли диэтиловым эфиром и промывали 1 М NaOH (водн.) х2, водой, сушили (Na₂SO₄) и концентрировали с получением указанного в заголовке соединения (5,57 г, 99%).

Стадия b. 2-(4-Циклопропилфенокси)тетрагидро-2H-пиран (Ph5-b)

Раствор 0,5 М циклопропилмагния бромида в THF (6,5 мл, 3,25 ммоль) добавляли в течение 15 мин к раствору Ph5-a (552,5 мг, 2,15 ммоль), ZnBr (144 мг, 0,64 ммоль), три-трет-бутилфосфина тетрафторбората (35,6 мг, 0,12 ммоль) и Pd(OAc)2 (29,5 мг, 0,13 ммоль) в THF (4 мл). Смесь перемешивали при 22°С в течение 90 мин, затем охлаждали на ледяной бане и добавляли ледяную воду (10 мл). Смесь экстрагировали EtOAc х3, и экстракты промывали рассолом и затем сушили (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на диоксиде кремния (петролейный эфир/EtOAc) с получением указанного в заголовке соединения (292 мг, 62%).

Стадия с. 4-Циклопропилфенол (фенол 5).

п-Толуолсульфоновой кислоты моногидрат (18,9 мг, 0,1 ммоль) добавляли к раствору Ph5-b (2,28 г, 10,45 ммоль) в MeOH (15 мл). Смесь нагревали при 120°С в течение 5 мин в микроволновом реакторе, затем концентрировали и очищали посредством колоночной хроматографии на диоксиде кремния (петролейный эфир/EtOAc). Полученные твердые соединения кристаллизовали из петролейного эфира с получением указанного в заголовке соединения (1,08 г, 77%).

Фенол 6

МдВг

Ph6-a

OR

Стадия a. 1-(3-Метоксифенил)циклобутанол (Ph6-a).

М раствор 3-метоксифенилмагния бромида в THF (2,11 г, 99,8 ммоль) по каплям добавляли между 0 и 10°С к перемешиваемому раствору циклобутанона (6,66 г, 95 ммоль) в диэтиловом эфире (65 мл). Смесь перемешивали в течение 3 ч при 0-10°С, затем смесь добавляли к охлажденному на льду раствору насыщенного NH₄Cl (300 мл) и воды (300 мл). Смесь перемешивали в течение 10 мин, затем трижды экстрагировали диэтиловым эфиром. Органическую фазу сушили (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали. Полученный неочищенный продукт очищали посредством хроматографии на силикагеле (изогексан/EtOAc) с получением указанного в заголовке соединения (16,9 г, 86%).

Стадия b. 1-Циклобутил-3-метоксибензол (Ph6-b) 10% Pd на углероде (2,5 г) добавляли к раствору Ph6-a (15,4 г, 86,1 ммоль) в этаноле (200 мл) и смесь гидрировали в аппарате Парра при давлении 60

- 19 031106 фунтов на кв.дюйм (413,7 кПа). По прошествии 18 ч, добавляли дополнительное количество 10% Pd на углероде (1,5 г) и смесь гидрировали в течение последующих 18 ч при 60 фунтов на кв.дюйм (413,7 кПа). Катализатор отфильтровывали и промывали EtOH и EtOAc. Раствор концентрировали при пониженном давлении, и неочищенный продукт выделяли посредством хроматографии на силикагеле (изогексан/EtOAc) с получением указанного в заголовке соединения (14,0 г, 77%).

Стадия с. 3-Циклобутилфенол (фенол 6).

Раствор 1 М трибромида бора (18,1 г, 72,2 ммоль) в DCM по каплям добавляли при 0°C к раствору Ph6-b (10,6 г, 65,6 ммоль) в безводном DCM (65 мл). Смесь перемешивали в течение 2,5 ч при -5°C, затем реакцию гасили охлажденным насыщенным раствором NH₄Cl и трижды экстрагировали DCM. Органическую фазу сушили (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали. Полученный неочищенный продукт очищали посредством хроматографии на силикагеле (изогексан/EtOAc) с получением указанного в заголовке соединения (9,73 г, 88%).

Фенол 7

о мд /xPVa ^Н2’^Pd/C /А ОВп ---► \ / ^0Вп ----\/—\ / ^Он

Стадия a ^V \=/ Стадия b ^V \=/

Ph7-a Фенол 7

Стадия a. 1-(4-(Бензилокси)фенил)циклобутанол (Ph7-a).

Раствор 1-(бензилокси)-4-бромобензола (2,63 г, 100 ммоль) в смеси диэтиловый эфир/ПП·' 1:1 (100 мл) по каплям добавляли при температуре флегмообразования в течение приблизительно 1 ч к суспензии магниевой стружки (2,43 г) и следовому количеству йода в диэтиловом эфире (50 мл). Когда добавление было завершено, смесь нагревали с обратным холодильником в течение 4 ч, затем охлаждали до приблизительно 0°C. Добавляли безводный THF (50 мл), затем медленно добавляли раствор циклобутанона (7,01 г, 100 ммоль) в диэтиловом эфире (50 мл), и смесь оставляли достигать к.т. После перемешивания в течение 2 ч добавляли прохладный насыщенный раствор NH4Cl (500 мл), и смесь перемешивали в течение 15 мин, затем дважды экстрагировали EtOAc. Органическую фазу промывали рассолом, сушили с сульфатом натрия и упаривали при пониженном давлении. Продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле с получением указанного в заголовке соединения (12,5 г, 42%).

Стадия b. 4-Циклобутилфенол (фенол 7).

Pd 10% на углероде (2,55 г, 21,5 ммоль) добавляли в атмосфере аргона к раствору Ph7-a (12,4 г, 41,4 ммоль) в абсолютном EtOH (110 мл) и смесь гидрировали при давлении 45 фунтов на кв.дюйм (310,3 кПа) при к.т. в течение 18 ч. Катализатор отфильтровывали, промывали этанолом и раствор концентрировали. Продукт очищали посредством хроматографии на силикагеле (изогексан-EtOAc). Подходящие фракции объединяли и концентрировали и остаток кристаллизовали из петролейного эфира с получением указанного в заголовке соединения (3,15 г, 51%).

Фенол 8

4-(1-Метилциклопентил)фенол (фенол 8).

Раствор 1-метилциклопентанола (2,00 г, 20,0 ммоль) и фенола (2,07 г, 22,0 ммоль) в пентане (50 мл) по каплям добавляли в течение 30 мин к суспензии свежего AlCl₃ (1,33 г, 10 ммоль) в пентане (100 мл). Полученную смесь перемешивали в атмосфере N₂ при к.т. в течение 72 ч, затем реакционную смесь выливали в смесь вода/лед и HCl (12 М, 20 ммоль, 1,66 мл). Органическую фазу промывали водой (50 мл) и рассолом (50 мл), сушили (Na₂SO₄) фильтровали и концентрировали. Неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии на диоксиде кремния (MeOH-DCM) с получением указанного в заголовке соединения (426 мг, 12%).

Фенол 9

Ph9-a

Стадия a. 2-(4-Бром-3-метилфенокси)тетрагидро-2H-пиран (Ph9-a).

pTs (16 мг, 0,086 ммоль) добавляли к раствору 4-бром-3-метилфенола (4,0 г, 21,4 ммоль) в 3,4дигидро-2-11-ниране (16 мл, 175 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч, затем разбавляли диэтиловым эфиром и промывали 1 М NaOH (водн.) и водой. Органическую фазу сушили (Na₂SO₄) фильтровали и концентрировали. Неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии на диоксиде кремния (EtOAc/гептан) с получением указанного в заголовке соединения (3,32 г, 57%).

- 20 031106

Стадия b. 2-(4-Циклопропил-3-метилфенокси)тетрагидро-2H-пиран (Ph9-b).

Ph9-a (3,12 г, 11,5 ммоль), ZnBr₂ (2,59 г, 11,5 ммоль), три-трет-бутилфосфина тетрафторборат (0,2 г, 0,69 ммоль) и Pd(OAc)₂ (258 мг, 1,15 ммоль) помещали в колбу и эту колбу пару раз продували N₂. При перемешивании добавляли THF (10 мл), затем по каплям добавляли 0,5 М циклопропилмагния бромид в THF (35 мл, 17,4 ммоль) в течение 5 мин.

Смесь перемешивали при к.т., затем фильтровали через набивку из целита, элюируя MeOH. Раствор концентрировали и неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии на диоксиде кремния (EtOAc/гептан) с получением указанного в заголовке соединения (1,69 г, 57%).

Стадия с. 4-Циклопропил-3-метилфенол (фенол 9).

Ph9-b (1,70 г, 7,30 ммоль) растворяли в MeOH (20 мл) и добавляли pTs x H₂O (318 мг, 1,67 ммоль). Смесь перемешивали при 22°C в течение 30 мин, затем концентрировали. Неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии (EtOAc/гептан) с получением указанного в заголовке соединения (704 мг, 65%).

Фенол 10

Стадия a. 4-Циклопропил-1-метокси-2-метилбензол (Ph10-a).

4-Бром-1-метокси-2-метилбензол (4,39 г, 21,9 ммоль) приводили во взаимодействие с циклопропилмагния бромидом согласно процедуре, описанной в Ph9 стадии b, с получением указанного в заголовке соединения (1,54 г, 43%).

Стадия b. 4-Циклопропил-2-метилфенол (фенол 10).

BBr₃ (5 мл, 5 ммоль) добавляли в атмосфере азота N₂ при 0°C к раствору Ph10-a (1,54 г, 9,49 ммоль) в DCM (7,5 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч, затем гасили MeOH (3 мл) и концентрировали. Неочищенное вещество растворяли в EtOAc и промывали рассолом. Органическую фазу сушили (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на диоксиде кремния с получением указанного в заголовке соединения (826 мг, 59%). MS 147,11 [M-H]^-.

Фенол 11

4-Циклопропил-3-метоксифенол (фенол 11).

Указанное в заголовке соединение получали из 4-бром-3-метоксифенола (1,11 г, 5,49 ммоль) согласно процедуре, описанной для получения фенола 9. Выход 40%.

Фенол 12

Стадия a. 3-(Диметиламино)-1-(3-гидроксифенил)пропан-1-он (Ph12-a).

Несколько капель HCl добавляли к раствору 3-гидроксиацетофенона (4,08 г, 30 ммоль), параформальдегида (4,05 г, 45 ммоль) и диметиламина гидрохлорида (2,69 г, 33 ммоль) в абсолютном EtOH (100 мл) и реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 18 ч. Добавляли дополнительное количество диметиламина гидрохлорида (0,55 экв., 1,22 г), параформальдегида (0,5 экв., 1,35 г) и HCl (0,5 мл), и реакционную смесь нагревали с обратным холодильником в течение последующих 4 ч, затем охлаждали до к.т. Осажденное белое твердое вещество собирали и промывали холодным EtOH (50 мл) и холодным ацетоном (10 мл) и затем лиофилизировали с получением указанного в заголовке соединения (2,59 г, 38%), которое использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки.

Стадия b. Циклопропил(3-гидроксифенил)метанон (фенол 12).

NaH (60% дисперсия в минеральном масле) (1,13 г, 28,2 ммоль) порциями добавляли при к.т. к перемешиваемой суспензии триметилсульфоксония йодида (6,20 г, 28,2 ммоль) в DMSO (100 мл). По прошествии 1 ч порциями добавляли твердый Ph12-a (2,59 г, 11,3 ммоль) при перемешивании и охлаждении. Реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение 40 ч, затем выливали в холодную воду (200 мл) и экстрагировали DCM (3x100 мл). Органическую фазу промывали насыщенным водным раствором NH₄Cl (2x100 мл), сушили (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали. Полученное неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии на диоксиде кремния (MeOH/DCM) с получением указанного в заголовке соединения (883 мг, 48%).

- 21 031106

Фенол 13

Стадия a. Циклопропил(4-гидроксифенил)метанон (Ph13).

п-Гидрокси-у-хлорбутирофенон (4,95 г) порциями добавляли в течение приблизительно 30 мин к раствору NaOH (8 мл, водн., 50% мас./мас.), затем добавляли NaOH (35 мл, водн., 25% мас./мас.), затем одной порцией добавляли п-гидрокси-у-хлорбутирофенон (4,95 г). Температуру снижали до 140°C и добавляли NaOH (8 г). По прошествии 90 мин добавляли H₂O (10 мл), и по прошествии последующих 60 мин реакционную смесь охлаждали, разбавляли H₂O и нейтрализовали HOAc (-27-30 мл) до рН -7. Образованный остаток фильтровали, промывали H₂O и сушили в вакууме. Твердое вещество растирали в CHCl₃ (200 мл) при 40°C в течение 10 мин, затем при к.т. в течение ночи. Суспензию нагревали до 40°C в течение 30 мин, затем фильтровали. Фильтрат сушили (MgSO₄), фильтровали и концентрировали до -70 мл. Добавляли гексан и образовывалось масло, которое с течением времени становилось кристаллами. Суспензию фильтровали, твердые вещества промывали CHCl₃/гексаном и сушили с получением указанного в заголовке соединения (4,15 г, 51%).

Фенол 14

Ph14-a Фенол 14

Стадия a. 3-(1-Гидрокси-2,2-диметилпропил)фенол (Ph14-a).

t-Bu-MgBr (1,5 экв.) по каплям добавляли в течение 30 мин к холодной (-10°C) смеси 3гидроксибензальдегида (2,00 г, 16,4 ммоль) в диэтиловом эфире (20 мл). Во время добавления добавляли THF (20 мл). Смесь оставляли достигать 23°C и перемешивали в течение 6 ч. Добавляли большее количество t-Bu-MgBr (0,7 экв.) и смесь оставляли перемешиваться в течение ночи, затем охлаждали и реакцию гасили водным насыщенным NH₄Cl с получением. К смеси добавляли EtOAc с последующим добавлением 1 М водного HCl до получения однородной смеси. Фазы разделяли и органическую фазу промывали рассолом, сушили (Na2SO4), фильтровали и концентрировали. Полученное неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии с получением указанного в заголовке соединения (1,1 г, 37%).

Стадия b. 1-(3-Гидроксифенил)-2,2-диметилпропан-1-он (Ph14).

В высушенную в печи круглодонную колбу добавляли 3А молекулярные сита (MS) и пиридиния хлорхромат (PCC) (1,97 г, 9,15 ммоль), затем добавляли сухой DCM (5 мл). Смесь перемешивали при 20°C в течение 5 мин, после чего медленно добавляли смесь AA8019 (1,10 г, 6,10 ммоль) в DCM (5 мл). После полного окисления смесь фильтровали через набивку целита, промывая набивку диэтиловым эфиром. Фильтрат концентрировали. Неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии с получением указанного в заголовке соединения (402 мг, 37%). MS 179,25 [M+H]⁺.

Фенол 15

-(4-Г идроксифенил)-2,2-диметилпропан-1 -он (Ph15).

4-Гидроксибензальдегид (3 г, 24,6 ммоль) подвергали взаимодействию согласно процедуре, описанной для получения фенола 14, с получением указанного в заголовке соединения (538 мг, 17%).

Аминокислота 1 ^ΗΟχ||^ΝΗΒοο ₊ DMAP _г

О i EDCxHCI 1 О

Стадия a z АА-1а, R = Вос

Стадия b;_AA._{1b R=H}

Стадия a. ^)-^)-втор-Бутил 2-((трет-бутоксикарбонил)амино)пропаноат (AA1-a).

L-Boc-аланин (2,18 г, 11,5 ммоль) растворяли в безводном DCM (40 мл) и добавляли спирт (R)бутан-2-ол (938 мг, 12,6 ммоль). Смесь охлаждали до примерно 5°C и одной порцией добавляли EDC (3,31 г, 17,2 ммоль), затем порциями добавляли DMAP (140 мг, 1,15 ммоль). Смесь оставляли достигать комнатной температуры и перемешивали в течение ночи, затем разбавляли этилацетатом (~300 мл) и органическую фазу трижды промывали насыщенным раствором гидрокарбоната натрия и один раз рассолом. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Продукт выделяли посредством хроматографии на силикагеле, элюируя изогексаном и 10% этилацетата,

- 22 031106 с получением указанного в заголовке соединения (2,78 г, 98%).

Стадия b. ^)-^)-втор-Бутил 2-аминопропаноат (AA1-b).

Смесь AA1-a (2,77 г, 11,3 ммоль) и моногидрата п-толуолсульфоновой кислоты (2,15 г, 11,3 ммоль) в EtOAc (45 мл) перемешивали в течение 16 ч при 65°C, затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток кристаллизовали из диэтилового эфира с получением указанного в заголовке соединения (3,20 г, 89%).

Аминокислота 2

NHBoc + .он DMAP

EDCxHCI

^)-(Я)-Пентан-2-ил 2-аминопропаноат (AA2).

Следовали процедуре, описанной для получения AA1, но с использованием (Я)-пентан-2-ола вместо (Я)-бутан-2-ола, с получением указанного в заголовке соединения (4,6 г).

Аминокислота 3

^)-^)-Пентан-2-ил 2-аминопропаноат (AA3).

Следовали процедуре, описанной для получения AA1, но с использованием ^)-пентан-2-ола вместо (Я)-бутан-2-ола, с получением указанного в заголовке соединения (8,3 г).

Следующие промежуточные соединения были получены и они могут быть использованы в получении соединений по изобретению.

Промежуточное соединение 1

Стадия a. (Я)-4-Фторбензил 2-((трет-бутоксикарбонил)амино)пропаноат (I-1a).

Boc-L-AlaOH (19,92 ммоль), DMAP (1,99 ммоль) и (4-фторфенил)метанол (23,9 ммоль) растворяли в CH₂Cl₂ (100 мл). К этому раствору добавляли триэтиламин (23,9 ммоль), затем добавляли EDCl (23,9 ммоль) и полученную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре в атмосфере N₂. Реакционную смесь разбавляли CH₂Cl₂ (100 мл), промывали насыщенным водным раствором NaHCO₃(2x50 мл), насыщенным водным раствором NaCl (2x50 мл), сушили (Na₂SO₄) и концентрировали. Полученный остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле, элюируя смесью нгексан-EtOAc (от 95:5 до 60:40), с получением указанного в заголовке соединения (4,44 г) в виде белого воскообразного твердого вещества. MS: 296 [M-H]^-.

Стадия b. (Я)-4-Фторбензил 2-аминопропаноат (I-1b).

Соединение I-1a (14,93 ммоль) растворяли в смеси 4М HCl/диоксан (40 мл), перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин и выпаривали досуха с получением гидрохлоридной соли указанного в заголовке соединения (3,4 г) в виде белого порошка. MS: 198 [M+H]⁺.

Стадия с. (2Я)-4-Фторбензил 2-((хлор(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (I-1).

PhOPOCl₂ (4,28 ммоль) по каплям добавляли при -78°C к раствору соединения I-5b (4,28 ммоль) в CH₂Cl₂. Затем по каплям добавляли триэтиламин (8,56 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при -78°C в атмосфере Ar и оставляли достигать комнатной температуры в течение ночи. Реакционную смесь упаривали на силикагеле и очищали посредством хроматографии (н-гексан/EtOAc (88:12)-(0:100)) с получением указанного в заголовке соединения (769 мг). ³¹Р-ЯМР (CDCl₃) δ: 7.85 (s) и 7.54 (s) (диастереомеры R_P и S_P).

Промежуточное соединение 2

NHBoc ₊

1) Фенилфосфордихлоридат Et₃N

2) 4-1М0₂-фенол Et₃N

Стадия с

-ОН DMAP

EDCxHCI

Стадия а

Стадия a. ^)-^)-втор-Бутил 2-((трет-бутоксикарбонил)амино)пропаноат (Б2а).

L-Boc-аланин (2,18 г, 11.5 ммоль) растворяли в безводном DCM (40 мл) и добавляли спирт (R)бутан-2-ол (938 мг, 12,6 ммоль). Смесь охлаждали до примерно 5°C и одной порцией добавляли EDC (3.31 г, 17.2 ммоль), затем порциями добавляли DMAP (140 мг, 1,15 ммоль). Смесь оставляли достигать

- 23 031106 комнатной температуры и перемешивали в течение ночи, затем разбавляли этилацетатом (~300 мл) и органическую фазу трижды промывали насыщенным раствором бикарбоната натрия и один раз рассолом. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Продукт выделяли посредством хроматографии на силикагеле, элюируя изогексаном и 10% этилацетата, с получением указанного в заголовке соединения (2,78 г, 98 %).

Стадия b. ^)-(Н)-втор-Бутил 2-аминопропаноат (I-2b).

Смесь I-10a (2,77 г, 11,3 ммоль) и п-толуолсульфоновой кислоты моногидрата (2,15 г, 11,3 ммоль) в EtOAc (45 мл) перемешивали в течение 16 ч при 65°C, затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток кристаллизовали из диэтилового эфира с получением указанного в заголовке соединения (3,20 г, 89%).

Стадия с. ^)-да-втор-Бутил-2-(((4-нитрофенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (I-2).

Фенилдихлорфосфат (1 экв.) добавляли в атмосфере азота при -30°C к раствору соединения I-10b (3,15 г, 9,92 ммоль) в DCM (75 мл), затем по каплям добавляли триэтиламин (2 экв.). Смесь оставляли достигать комнатной температуры и перемешивали в течение ночи, затем охлаждали до примерно 5°C и добавляли 4-нитрофенол (1 экв., 15 ммоль) в виде твердого вещества, затем по каплям добавляли триэтиламин (1 экв., 15 ммоль) и смесь перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре, затем концентрировали при пониженном давлении, разбавляли этилацетатом (40 мл) и эфиром (40 мл) и оставляли при комнатной температуре в течение ночи. Соль триэтиламин-HCl отфильтровывали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле, элюируя смесью изогексан-этилацетат, с получением указанного в заголовке соединения (4,19 г, 79%).

Следующие соединения получали согласно процедуре, описанной для получения I-2, с использова нием подходящего спирта.

I-#	Структура	Спирт
1-3	Ν-Ρ-Ο—/ Α^ν°2 О ^н 0. >> Ph	циклопропилметанол
1-4	ΑΊ f о N-p-o—{ Λ— νο₂ π Η _ά ² Ph	Циклопентилметанол
1-5	_ ϊ 0 ζ=\ O' ^ν°²	пентан-3-ол
1-6	Ί _ο ί ο νο₂ο ^Η ό. Ph	2-пропилпентан-1 -ол

Промежуточное соединение 6, диастереомер-1 и -2.

Два диастереомера соединения I-6 разделяли посредством SFC с получением Г6-диа-1 и Г6-диа-2.

Промежуточное соединение 7

о

1-7а

2)4-Ы0₂-фенол

Et₃N Стадия b

1) Фенилфосфордихлоридат Et₃N

Стадия а. ^)-Циклооктил-2-аминопропаноат (I-7a).

К суспензии L-аланина (1,7 г, 19,1 ммоль) и циклооктанола (25 мл, 191 ммоль) в толуоле (100 мл) добавляли моногидрат п-толуолсульфоновой кислоты (3,6 г, 19,1 ммоль). Реакционную смесь нагревали при температуре флегмообразования в течение 25 ч и из реакции удаляли воду с использованием ловушки Дина-Старка. Смесь концентрировали при пониженном давлении, и остаток оставляли в вакууме в течение ночи. К остатку (27 г) добавляли диэтиловый эфир (100 мл). Белый осадок собирали фильтрацией, промывали диэтиловым эфиром (3x50 мл) и сушили в вакууме с получением указанного в заголовке соединения (4,84 г, 68%).

Стадия b. ^)-Циклооктил-2-(((4-нитрофенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (I-7).

Соединение I-7a подвергали взаимодействию согласно способу, описанному для получения I-2 ста- 24 031106 дии с, с получением указанного в заголовке соединения (4,7 г, 76%). Промежуточное соединение 8

1-8

^)-Циклогептил-2-(((4-нитрофенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (I-22).

Следовали процедуре, описанной для получения соединения I-7, но с использованием циклогептанола (27 мл, 224 ммоль) вместо циклооктанола, с получением указанного в заголовке соединения (5,72 г, 55%).

Промежуточное соединение 9

(2S)-I Циклогексил 2-(((4-нитрофенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (I-23).

Следовали процедуре, описанной для получения I-2 стадии с, но с использованием ^)-циклогексил2-аминопропаноата вместо ^)-3,3-диметилбутил-2-аминопропаноата, с получением указанного в заголовке соединения (10,6 г, 82%).

Промежуточное соединение 10

^)-2-Этилбутил 2-((бис-(4-нитрофенокси)фосфорил)амино)пропаноат (I-10).

^)-2-Этилбутил-2-аминопропаноат (5 г, 14,49 ммоль) добавляли к раствору бис-(4нитрофенил)фосфорохлоридата (6,14 г, 17,1 ммоль) в DCM (50 мл), смесь охлаждали на ледяной бане и по каплям добавляли Et₃N (4,77 мл, 34,2 ммоль). Охлаждение удаляли по прошествии 15 мин, и реакционную смесь перемешивали при 23°C до завершения реакции согласно TLC. Затем добавляли диэтиловый эфир, смесь фильтровали и фильтрат концентрировали и очищали посредством колоночной хроматографии на диоксиде кремния с получением указанного в заголовке соединения (2,05 г, 82%).

Промежуточное соединение 11

Стадия а. ^)-Изопропил 2-аминопропаноат (I-11a).

SOCl₂ (29 мл, 400 ммоль) по каплям добавляли при 0°C к суспензии HCl соли L-аланина (17,8 г, 200 ммоль) в изопропаноле (700 мл). Суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, затем концентрировали с получением указанного в заголовке соединения (29,2 г, 87%).

Стадия b. ^)-Изопропил-2-((((^)-1-изопропокси-1-оксопропан-2-ил)амино)(4-нитрофенокси)фосфорил)амино)пропаноат (I-11).

Раствор 4-нитрофенилдихлорфосфата (1,8 г, 7 ммоль) в DCM по каплям добавляли при -60°C к раствору амина I-На (2,35 г, 14 ммоль) и триэтиламина (7,7 мл, 56 ммоль) в DCM. Реакционную смесь оставляли достигать комнатной температуры, перемешивали в течение ночи, концентрировали и затем разбавляли этилацетатом и эфиром и оставляли при комнатной температуре в течение ночи. Соль триэтиламин-HCl отфильтровывали, фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и полученный остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле, элюируя смесью изогексан-этилацетат, с получением указанного в заголовке соединения (1,6 г, 50%).

Промежуточное соединение 12

Стадия а. ^)-Неопентил-2-((трет-бутоксикарбонил)амино)пропаноат (I-12a).

EDAC и DMAP порциями добавляли при -5°C к раствору Boc-аланина (18,9 г, 100 ммоль) и неопентилового спирта (13,0 мл, 120 ммоль) в DCM (200 мл). Реакционную смесь оставляли достигать комнатной температуры и перемешивали в течение 72 ч. Добавляли EtOAc (700 мл) и органическую фазу трижды промывали насыщенным раствором NaHCO₃ и один раз рассолом, затем концентрировали. Получен

- 25 031106 ный остаток очищали посредством колоночной хроматографии, элюируя смесью гексан-EtOAc от 90/10 до 80/20, с получением указанного в заголовке соединения (21 г, 81%).

Стадия b. (8)-Неопентил-2-аминопропаноат (I-12b).

п-Толуолсульфоновую кислоту (15,6 г, 82,0 ммоль) добавляли при -65°C к раствору защищенного Boc амина I-12a (21,1 г, 82,0 ммоль) в EtOAc (330 мл). Реакционную смесь перемешивали при -65°C в течение 8 ч, затем оставляли достигать комнатной температуры в течение ночи. Затем смесь фильтровали и концентрировали с получением указанного в заголовке соединения (21 г, 78%).

(28)-Неопентил-2-(((((8)-1 -(неопентилокси)-1 -оксопропан-2-ил)амино)(4нитрофенокси)фосфорил)амино)пропаноат (I-12).

4-Нитрофенолдихлорфосфат по каплям добавляли в течение 1 ч при -50°C к раствору амина I-12b (3,90 г, 24,5 ммоль) в DCM (100 мл). Реакционную смесь оставляли достигать комнатной температуры, перемешивали в течение ночи, концентрировали и затем разбавляли диэтиловым эфиром и оставляли при комнатной температуре в течение ночи. Смесь фильтровали, фильтрат концентрировали при пониженном давлении, и полученный остаток очищали посредством хроматографии на силикагеле, элюируя смесью изогексан-этилацетат, с получением указанного в заголовке соединения (4,8 г, 77%).

Промежуточное соединение 32 ^Y^OxUnh₂ = о

1-32

(28)-да-втор-Бутил-2-(((перфторфенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (I-32).

Et₃N (10,9 мл, 78,1 ммоль) по каплям добавляли при -70°C в атмосфере азота в течение 15 мин к перемешиваемому раствору pTs соли ^)-^)-втор-бутил-2-аминопропаноата (12,0 г, 37,7 ммоль) в DCM (50 мл). К этой смеси добавляли раствор фенилдихлорфосфата (5,61 мл, 37,7 ммоль) в DCM (50 мл) в течение 1 ч. Реакционную смесь перемешивали при -70°C в течение последующих 30 мин, затем оставляли нагреваться до 0°C в течение 2 ч и перемешивали в течение 1 ч. К смеси добавляли раствор пентафторфенола (б,94 г, 37,7 ммоль) и Et₃N (5,73 мл, 41,1 ммоль) в DCM (30 мл) в течение 20 мин. Неочищенную смесь оставляли перемешиваться при 0°C в течение 18 ч и затем концентрировали. Остаток помещали в THF (100 мл), нерастворимые вещества отфильтровывали и несколько раз промывали THF. Растворитель выпаривали и остаток растирали с трет-бутил метиловым эфиром. Нерастворимые вещества отфильтровывали и промывали трет-бутилметиловым эфиром. Объединенный фильтрат концентрировали, и неочищенное твердое вещество обрабатывали ультразвуком со смесью н-гексан/EtOAc (80:20; 100 мл). Твердое вещество фильтровали, промывали смесью н-гексан/EtOAc (80:20) с получением чистого фосфорного стереоизомера указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (2,3 г, 13%).

Промежуточное соединение 33

(28)-Этил-2-(((перфторфенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (I-33).

Чистый фосфорный стереоизомер указанного в заголовке соединения получали согласно способу, описанному для I-32, но начиная с HCl соли (8)-этил-2-аминопропаноата (11,0 г, 71,1 ммоль). Выход 8,56 г, 27%.

Промежуточное соединение 34

(28)-2-Этилбутил-2-(((перфторфенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (I-34).

Чистый фосфорный стереоизомер указанного в заголовке соединения получали согласно способу, описанному для I-32, но начиная с pTs соли (8)-2-этилбутил-2-аминопропаноата (18,8 г, 54,4 ммоль). Выход 27,0 г, 99%. LC-MS 496.44 [M+H]⁺.

Промежуточное соединение 35

Et₃N перфторфенол

1-35

ДО)-Бутил-2-(((перфторфенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (I-35).

Фенилдихлорфосфат (12,4 мл, 83,1 ммоль) добавляли к охлажденной (-20°C) суспензии ^)-бутил-2аминопропаноата (26,4 г, 83,1 ммоль) в дихлорметане (200 мл). Смесь перемешивали в течение 10 мин,

- 26 031106 затем по каплям добавляли Et₃N (25,5 мл, 183 ммоль) в течение 15 мин. Смесь перемешивали при -20°C в течение 1 ч, затем при 0°C в течение 30 мин. Смесь поддерживали охлажденной на ледяной бане и добавляли перфторфенол (15,3 г, 0,08 моль), затем по каплям добавляли Et₃N (11,6 мл, 0,08 моль). Смесь перемешивали в течение ночи и медленно доводили до 20°C. Добавляли диэтиловый эфир и смесь фильтровали через целит, концентрировали и очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле, элюируя смесью петролейный эфир/EtOAc (9:1 —>8:2). Подходящие фракции объединяли, концентрировали и кристаллизовали из смеси петролейный эфир/EtOAc (9:1) с получением чистого фосфорного стереоизомера указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (2,23 г, 5,8%).

Промежуточное соединение 36 о _Ξ ~ Ai-i S o χ HCl ⁺ 5 °гм k Стадия а θ

I-36 а

F

О ^c'i?^oph _СЛОН

Et₃N Et₃N i,_{h F F} ^{СТЭДИЯ Ь} 1-36

Стадия a. Гидрохлорид сложного эфира L-аланина и изопропила (I-36a).

Тионилхлорид (80,2 г, 0,674 моль, 1,5 экв.) добавляли при охлаждении к 2-пропанолу (400 мл) при температуре от -7 до 0°C в течение периода 30 мин с последующим добавлением L-аланина (40,0 г, 0,449 моль) при 0°C. К выходу был присоединен расходомер и скруббер со смесью 27,65% гидроксида натрия (228 г) и воды (225 г). Реакционную смесь перемешивали при 67°C в течение 2 ч, затем при 70°C в течение 1 ч и при 20-25°C в течение ночи. Реакционную смесь отгоняли при 47-50°C при пониженном давлении (250-50 мбар) из бани 60°C. Когда отгонка становилась очень медленной, к оставшемуся маслу добавляли толуол (100 мл) и отгонку из бани 60°C продолжали при 48-51°C при пониженном давлении (150-50 мбар) до тех пор, пока она не становилась очень медленной. К оставшемуся маслу добавляли трет-бутилметиловый эфир (tBME) (400 мл) и в двухфазную систему вносили затравку при эффективном перемешивании при 34-35°C. Когда наблюдали кристаллизацию, смесь охлаждали до 23°C в течение периода 1 ч и осадок выделяли путем фильтрации. Осадок на фильтре промывали tBME (100 мл) и сушили до постоянной массы при пониженном давлении без нагревания с получением указанного в заголовке соединения (67,7 г, 90%) в виде белого твердого вещества.

Стадия b. ^)-Изопропил-2-((^)-(перфторфенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (I-36).

Фенилдихлорфосфат (62,88 г, 0,298 моль, 1,0 экв.) добавляли в атмосфере азота к раствору гидрохлорида изопропилового сложного эфира L-аланина (50,0 г, 0,298 моль) в DCM (310 мл) при 0°C - добавление завершали путем промывки DCM (39 мл). Смесь охлаждали и добавляли триэтиламин (63,35 г, 0,626 моль, 2,1 экв.) в течение периода 70 мин при охлаждении, поддерживая температуру не выше чем -14°C, добавление завершали путем промывки DCM (39 мл). Смесь перемешивали в течение 1 ч при от -15 до -20°C, затем нагревали до -8°C и добавляли раствор пентафторфенола (60,38 г, 0,328 моль, 1,1 экв.) и триэтиламина (33,19 г, 0,328 моль, 1,1 экв.) в DCM (78 мл) в течение периода 42 мин при охлаждении, поддерживая температуру не выше чем 0°C - добавление завершали путем промывки DCM (39 мл). Смесь перемешивали в течение 1 ч при 0°C и затем в течение ночи при +5°C. Образованный осадок удаляли путем фильтрации, и осадок на фильтре промывали DCM (95 мл). Объединенные фильтраты промывали при 5°C водой (2x190 мл). Органическую фазу отгоняли при 32-38°C при пониженном давлении (650-600 мбар), отгонку продолжали до тех пор пока не получали остаточный объем приблизительно 170 мл частично кристаллизованной массы. Добавляли этилацетат (385 мл) и полученный прозрачный раствор отгоняли при 43-45°C при пониженном давлении (300-250 мбар). Отгонку продолжали до получения остаточного объема приблизительно 345 мл. Прозрачный раствор охлаждали до 36°C и вызывали кристаллизацию путем добавления затравочных кристаллов ^)-изопропил-2-((^)(перфторфенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноата (20 мг), полученного, как описано в J. Org. Chem., 2011, 76, 8311-8319. Смесь охлаждали до 27°C в течение периода 1 ч, затем добавляли н-гептан (770 мл) в течение периода 47 мин, и смесь перемешивали в течение последующего периода 37 мин. Добавляли триэтиламин (6,03 г, 0,2 экв.) добавляли и смесь перемешивали при 23-25°C в течение ночи. Осадок выделяли путем фильтрации. Осадок на фильтре промывали смесью этилацетат:н-гептан (1:9, 80 мл) и сушили до постоянной массы при пониженном давлении (менее 0,1 мбар) без нагревания с получением указанного в заголовке соединения (75,64 г, 56%) в виде белого кристаллического вещества.

¹Н-ЯМР (CDCI3, 300 МГц) δ 7.38-7.32 (m, 2H), 7.27-7.24 (m, 2H), 7.23-7.19 (m, 1 H), 5.10-4.98 (m, 1H), 4.20-4.08 (m, 1H), 4.03-3.96 (m, 1H), 1.46 (dd, 7.2, 0.6 Hz, 3 H), 1.26-1.23 (2xd, 6H);

¹³С-ЯМР (CDCl₃, 100 МГц) δ 172.7 (d, J=8.8 Hz), 150.4 (d, J=7.1 Hz), 143.4-143.0 (m), 141.0-140.2 (m), 140.0-139.8 (m), 137.6-137.2 (m), 136.8-136.2 (m), 130.0 (d, J=0.82 Hz), 125.8 (d, J=1.4 Hz), 120.3 (d, J=5.0 Hz), 69.8, 50.6, (d, J=1.9 Hz), 21.8 (d, J=1.9 Hz), 21.2 (d, J=4.4 Hz);

Свойства кристаллизации и спектральные данные ЯМР указанного в заголовке соединения находятся в соответствии с опубликованными данными (J. Org. Chem., 2011, 76, 8311-8319), что таким образом подтверждает S-стереохимию атома фосфора указанного в заголовке соединения.

- 27 031106

Промежуточное соединение 37

Стадия a. (Б)-Циклогексил-2-аминопропаноат (I-37a).

Ацетилхлорид (4,2 мл, 59,3 ммоль) по каплям добавляли к перемешиваемому раствору циклогексанола (50 мл), затем добавляли L-фенилаланин (4,0 г, 24,2 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 100°C в течение 1б ч, затем концентрировали при пониженном давлении, растирали со смесью диэтиловый эфир/гексан (1:1) и сушили с получением указанного в заголовке соединения (б г, 88%) в виде белого твердого вещества, которое использовали на следующей стадии без дополнитнльной очистки.

Стадия b. (Б)-Циклогексил-2-(((Б)-(перфторфенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (I-37).

К перемешиваемому раствору соединения I-37a (7,0 г, 24,б ммоль) в безводном DCM (42 мл) по каплям добавляли триэтиламин (7,17 мл, 51,5 ммоль) при -70°C в течение 30 мин с последующим добавлением раствора фенилдихлорфосфата (5,15 г, 34,5 ммоль) в безводном DCM (21 мл) в течение 1 ч. Реакционную смесь перемешивали при -70°C в течение последующих 30 мин и затем оставляли нагреваться до 0°C в течение 2 ч и перемешивали в течение 1 ч. К этой смеси добавляли раствор пентафторфенола (4,94 г, 2б,8 ммоль) и триэтиламина (3,74 мл, 2б,8 ммоль) в безводном DCM (28 мл) в течение 1 ч. Смесь оставляли перемешиваться при 0°C в течение 4 ч, и затем оставляли при 5°C в течение 1б ч. Реакционную смесь фильтровали, и фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Неочищенное твердое вещество растворяли в EtOAc (300 мл), промывали водой (50 мл), сушили и растворитель удаляли при пониженном давлении. Полученное твердое вещество растирали с 20% EtOAc в гексане, фильтровали, промывали гексаном и сушили с получением указанного в заголовке соединения в виде отдельного диастереомера (3,0 г, 21%) в виде твердого вещества.

Промежуточное соединение 38

1-38 (2Б)-Изопропил-2-(((4-нитрофенокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (I-38).

К перемешиваемому раствору 4-нитрофенилдихлорфосфата (5 г, 19,8 ммоль) в безводном DCM (40 мл) добавляли раствор фенола (1,8б г, 19,8 ммоль) и триэтиламина (3 мл, 21,8 ммоль) в безводном DCM (50 мл) при -78°C в течение периода 30 мин. Смесь перемешивали при этой температуре в течение б0 мин, затем переносили в другую колбу, содержащую раствор соединения (Б)-изопропил-2аминопропаноата (3,3 г, 19,8 ммоль) в безводном DCM (40 мл) при -5°C в течение периода 15 мин. К этой смеси добавляли вторую порцию TEA (б мл, 43,3 ммоль) при -5°C в течение периода 20 мин. Смесь перемешивали при 0°C в течение 3 ч, затем растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток помещали в EtOAc (200 мл) и промывали водой (50 мл), сушили над Na₂SO₄ и растворители удаляли при пониженном давлении с получением неочищенного продукта в виде масла, которое очищали посредством колоночной хроматографии с использованием градиента 0-20% EtOAc/гексан и силикагеля на 230400 меш с получением смеси диастереомеров в соотношении примерно 1:1. Два диастереомера разделяли посредством SFC с получением указанного в заголовке соединения, изомера 1 (1,5 г, 20%) и изомера 2 (1,5 г, 18%) в виде твердых веществ.

Получали соединения, перечисленные в табл. 1, и диастереомеры разделяли согласно процедуре, описанной для получения промежуточного соединения I-38, с использованием подходящего сложного эфира аминокислоты и фенола.

- 28 031106

Таблица 1

1-60, диа-1 и -2

- 29 031106

Пример 1 h₂o/dme

Стадия а

t-BuMgCI, DMPU

Стадия

Стадия а. ((2S,4S)-4-(2,4-Диоксо-3,4-дигидропиримидин-1(2H)-ил)-1,3-диоксолан-2-ил)метилацетат (1a).

Смесь соединения Tr-8 (0,15 г, 0,41 ммоль), 1,2-диметоксиэтана (1,5 мл) и воды (0,96 мл) нагревали в запаянной пробирке при 125°C в течение 48 ч. После завершения реакции (TLC) реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и растворители удаляли при пониженном давлении. Неочищенный остаток очищали посредством колоночной хроматографии на диоксиде кремния на 230-400 меш с помощью градиента 3-7% MeOH/DCM с получением соединения 1а (0,08 г, 80%) в виде твердого вещества и соединения 1b (0,02 г) в виде твердого вещества.

Стадия b. 1-((2S,4S)-2-(Гидроксиметил)-1,3-диоксолан-4-ил)пиримидин-2,4(1H,3H)-дион(1b).

Соединение 1a (0,08 г, 0,31 ммоль) в насыщенном растворе NH₃ в MeOH (1,6 мл) перемешивали в запаянной пробирке при комнатной температуре в течение 4 ч. После завершения реакции (TLC) растворители удаляли при пониженном давлении и остаток очищали посредством колоночной хроматографии на диоксиде кремния на 60-120 меш с использованием 5-7% MeOH/DCM с получением указанного в заголовке соединения (0,06 г, 90%) в виде твердого вещества.

Стадия с. (2S)-Изопропил-2-(((((2S,4S)-4-(2,4-диоксо-3,4-дигидропиримидин-1(2H)-ил)-1,3диоксолан-2-ил)метокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (1c).

К перемешиваемому раствору соединения 1b (60 мг, 0,28 ммоль) в DMPU (0,6 мл) по каплям добавляли трет-бутилмагния хлорид (0,57 мл, 0,98 ммоль, 1,7 М в THF) при -5°C. Смесь перемешивали при -5°C в течение 30 мин, затем при комнатной температуре в течение 30 мин. Добавляли раствор изопропил-((перфторфенокси)(фенокси)фосфорил)^-аланината (0,25 г, 0,56 ммоль) в безводном THF (2.5 мл) при -5°C и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 8 ч. После завершения реакции (TLC) добавляли воду (15 мл) и смесь экстрагировали EtOAc (30 мл). Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия (10 мл), сушили (Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали, и полученное неочищенное вещество очищали посредством колоночной хроматографии на диоксиде кремния на 230-400 меш с помощью градиента 4-5% MeOH/DCM с получением указанного в заголовке соединения (55 мг, 38%) в виде твердого вещества. MS (ES⁺) [484,0]⁺.

'Н-ЯМР (DMSO-d₆, 400 МГц) δ 1.15-1.20 (10H), 3.73-3.75 (1H), 4.11-4.27 (4H), 4.84-4.90 (1H), 5.14 (1H), 5.51-5.53 (1H), 6.06-6.12 (1H), 6.26-6.27 (1H), 7.17-7.23 (3H), 7.36-7.40 (2H), 7.57-7.60 (1H), 11.37 (1Н).

Пример 2 о

(2S)-Изопропил-2-(((((2S,4S)-4-(4-амино-2-оксопиримидин-1(2H)-ил)-1,3-диоксолан-2-ил)метокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (2).

Троксацитабин (TR-9) (50 мг, 0,23 ммоль) приводили во взаимодействие с фосфорилирующим агентом I-36 (0,26 г, 0,58 ммоль) согласно процедуре, описанной в примере 1 стадии c, с получением указанного в заголовке соединения (30 мг, 26%) в виде твердого вещества. MS (ES+) 483,34 [M+H]⁺. ¹Н-ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 1.14-1.24 (9H), 3.32-3.38 (1H), 4.05-4.21 (4H), 4.84-4.26 (1H), 5.14 (1H), 5.68-5.70 (1H), 6.07-6.13 (1H), 6.23-6.25 (1H), 7.16-7.24 (5Н), 7.34-7.39 (2H), 7.59-7.61 (1Н).

Пример 3

(2S)-Изопропил-2-(((((2S,4S)-4-(4-амино-2-оксопиримидин-1(2H)-ил)-1,3-диоксолан-2-ил)метокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (3).

Троксацитабин (50 мг, 0,23 ммоль) приводили во взаимодействие с фосфорилирующим агентом I38 (0,24 г, 0,58 ммоль) согласно процедуре, описанной в примере 1 стадии c, с получением указанного в заголовке соединения (40 мг, 35%) в виде твердого вещества. MS (APCI) 481,0 [M-H]'. ¹Н-ЯМР (DMSO- 30 031106 d₆, 400 МГц) δ 1.14-1.20 (9H), 3.76-3.77 (1H), 4.10-4.18 (2H), 4.22-4.25 (2H), 4.84-4.87 (1H), 5.17-5.186 (1H), 5.69-5.70 (1H), 6.03-6.08 (1H), 6.24-6.26 (1H), 7.17-7.25 (5Н), 7.36-7.40 (2H), 7.62-7.64 (1Н).

Пример 4

Тг-9

1-37 t-BuMgCI DMPU _г

(2S)-Изопропил-2-(((((2S,4S)-4-(4-амино-2-оксопиримидин-1(2H)-ил)-1,3-диоксолан-2-ил)метокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (4).

Троксацитабин (50 мг, 0,23 ммоль) приводили во взаимодействие с фосфорилирующим агентом I37 (0,33 г, 0,58 ммоль) согласно процедуре, описанной в примере 1 стадии с, с получением указанного в заголовке соединения (30 мг, 22%) в виде твердого вещества. MS (APCI) 599.47 [M+H]⁺.

Соединения, перечисленные в табл. 2, получали в виде чистых диастереомеров согласно процедуре, описанной в примере 1 стадии с, с использованием подходящего промежуточного соединения, I-# диа-1 или I-# диа-2.

Таблица 2

R¹⁵ Q но °V^NY^NHz ΛΑ °V^NV^NH2 /°х χΝ J t-BuMgCI H н о \„ .О J ( J'^N^ DMPU , ° A_r Tr-9 Пр. # диа-1 или -2
Пр.	Промеж.	R¹⁵	R¹⁶	Аг	диастереомер 1	диастереомер 2
Выход	MS [М+Н]⁺	Выход	MS [M+Hf
5	I-40	метил	2-пропил	1-нафтил	25%	533,40	33%	533,36
6	I-39	метил	циклогексил	1-нафтил	19%	573,35	22%	573,2
7	1-41	бензил	циклогексил	4-Вг-фенил	18%	н.д.	18%	н.Д.
8	I-6	метил	2-пропилпентил	фенил	37%	553,2	35%	553,2
9	I-44	метил	бензил	1-нафтил	25%	581,2	30%	581,2
10	I-42	метил	2-пропил	2циклопропилфенил	34%	523,2	27%	523,2
11	I-43	метил	2-бутил	4-(триметилсилил)-фенил	37%	569,2	37%	569,2

Аналогично, соединения, перечисленные в табл. 3, получали в виде чистых диастереомеров согласно процедуре, описанной в примере 1 стадии с, с использованием подходящих промежуточных соединений.

- 31 031106

Таблица 3

а. °γ^Νγ^ΝΗ2 ό^ΓΧ0^ν 12 диа-1 V 12 диа-2	ς а _о СГф...._Л ⁰1У^Н2 4:1 смесь диастереомеров	гАчАДо о n nh₂ ^r Yrt^v UJ ^14диа-¹ 14 диа-2
АлАЛо w^nH2 YY L Ι\| 15 диа-1 15 диа-2	<V°Y^N'?->O °γ^Νγ^ΝΗ2 М I н о о XJ А \=J 16 диа-1 / 16 диа-2	vvM-ό °yv^nh2Ύ Г-. L J 17 диа-1 17 диа-2
/vVnIo W”² LI] 18 диа-1 18 диа-2	аАЛ> °γ^Νγ^ΝΗ2II но ₍,_Ύο U Α-J А\| ° 19диа-1 19 диа-2	<VVM-~o °yV^{NH2 r T} ° ^H ϊ?Ά 0 ^O 20 диа-1 20 диа-2
WA °ν^Νγ^ΝΗ2 YrY^T LJJ 21 диа-1 21 диа-2	\^Νγ^ΝΗ= Ст I ^н о \ о XJ ЧАА ²² Д^иа·¹ 22 диа-2	°yⁿ _v ^nh2 О °^J \=/ 23 диа-1 Br 23 диа-2
/ΥθγΜ'ο °_Ύ ^Ν _ν ^ΝΗ2 Y Ц1\| 24 диа-2 Br	YsAnAo °yⁿy^NH2 Υ,’Υ LIJ 25 диа-2 Br	ΑΑνΛο °Yⁿy^NH2 I J 26 диа-1 26 диа-2
°_Y ^N _Y ^NH= rt Ύ у // 27 диа-1 в/ 27 диа-2	О., . ала, °γ^Νγ^ΝΗ2rt''⁰ \__7 28 диа-2	ArVVA °vⁿy^{NH2 г} ‘ S Л° < АЛД >АЭ ° 29 диа-2
yY\A_nAo °yⁿ _v ^NH2 __// 30 диа-2	ΎΥΆ °yV^H2dY YZ 31 диа-2	^°Α_Ν\|ο °γ^Νγ^{ΝΗ2 L r}rt Ύ

Ξ О		Ξ О	Ο 0
^yAAnAo i I _Α>	°Υ^νΥ^νη2 33 диа-1 33 диа-2	ΑΑΑο °γ^Νγ^{ΝΗ2 r}rt Ύ Υ' 34 диа-2	Υ^ν _υ ^νη2 О—' Сравнительный пример

Данные ЯМР и MS регистрировали для всех проиллюстрированных соединений, подтверждая их структуры.

Пример 35

ДО)-Изопропил-2-((((ДО^)-4-(2-оксо-4-пальмитамидопиримидин-1 (2Щ-ил)-1,3-диоксолан-2ил)метокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (35 диа-1 и 35 диа-2).

Каждое из соединений 2 и 3 ацилировали пальмитиновым ангидридом согласно способу, описанному в WO2008/030373, с получением указанного в заголовке соединения.

- 32 031106

Пример 36 о

о (2S)-Метил-2-(((((2S,4S)-4-(2-оксо-4-пальмитамидопиримидин-1(2H)-ил)-1,3-диоксолан-2-ил)метокси)(фенокси)фосфорил)амино)пропаноат (36).

Соединение 27 диа-2 ацилировали пальмитиновым ангидридом согласно способу, описанному в WO2008/030373, с получением указанного в заголовке соединения.

Сравнительный пример.

Тг-9

Стадия b . p-MeO-Ph с ^Η2^ΝχΑχ N^-Ph + L /^Р_С' ---”

J нТмеО-Ph ^{СТЭДИЯ 9} _o Η = p-MeO-Ph

Vo О ^H P-MeO-Ph

Стадия a. ^)-2-((бис-(4-Метоксифенил)(фенил)метил)амино)-П-(2-оксидо-1,3,2-оксатиафосфолан2-ил)пропанамид.

К ледяному раствору ^)-2-((бис-(4-метоксифенил)(фенил)метил)амино)пропанамида (1,40 г, 3,58 ммоль) и триэтиламина (0,60 мл, 4,30 моль) в дихлорметане (8 мл) в атмосфере азота по каплям добавляли раствор 2-хлор-1,3,2-оксатиафосфолана (0,542 г, 3,80 ммоль). Реакционную смесь оставляли достигать комнатной температуры и перемешивали в течение выходных. Раствор охлаждали до 0°С и медленно добавляли раствор (трет-бутилперокси)триметилсилана (1,16 г, 7,17 ммоль) в гептане. Реакционную смесь перемешивали в течение 90 мин, затем концентрировали в вакууме. Остаток суспендировали в этилацетате (10 мл), гидрохлоридные соли удаляли путем фильтрации и растворитель удаляли в вакууме. Остаток растворяли в безводном ацетонитриле (10 мл) и полученный раствор использовали на следующей стадии без дальнейшей очистки. Предполагали количественный выход и 80% чистоту на основании ³¹Р-ЯМР.

Стадия b. (^^)-4-(4-Лмино-2-оксопиримидин-1(2П)-ил)-1,3-диоксолан-2-ил)метил-водород-(^)2-((бис-(4-метоксифенил)(фенил)метил)амино)пропаноил)фосфорамидат.

DMAP (229 мг, 1.88 ммоль) добавляли в атмосфере азота к раствору соединения Tr-9 (100 мг, 0.469 ммоль) в безводном пиридине (5 мл), затем медленно добавляли раствор ^)-2-((бис-(4метоксифенил)(фенил)метил)амино)-П-(2-оксо-1,3,2-оксатиафосфоланил)пропанамида (361 мг, 0,563 ммоль) в безводном ацетонитриле (2 мл). Полученный раствор перемешивали при к.т. в атмосфере азота в течение 46 ч, затем концентрировали. Остаток очищали посредством препаративной HPLC на GeminiNX 5m С₁₈ (100x30 мм) с использованием градиента от 20 до 80% B в течение 17 мин и потока 35 мл/мин. Растворитель A: 95% воды, 5% ацетонитрила (10 мМ ацетат аммония); растворитель B: 10% воды, 90% ацетонитрила (10 мМ ацетат аммония). Фракции, содержавшие продукт, объединяли и лиофилизировали с получением указанного в заголовке соединения (80 мг, 26%). MS (ES⁺) 664,26 [M+H]⁺.

Стадия с. ((2S,4S)-4-(4-Лмино-2-оксопиримидин-1(2H)-ил)-1,3-диоксолан-2-ил)метил-водород-((S)2-аминопропаноил)фосфорамидат.

Воду (50 мл) добавляли к раствору соединения из предыдущей стадии (80,5 мг, 0,121 ммоль) в дихлорметане с последующим добавлением уксусной кислоты (500 мл). Раствор перемешивали при к.т. в течение 12 мин, затем добавляли TFA (75 мл) и полученный раствор перемешивали при к.т. в течение 5 мин, разбавляли толуолом (10 мл), концентрировали досуха и сушили в вакууме. Остаток помещали в воду, содержащую 10% ацетонитрила, (10 мл) и промывали трет-бутилметиловым эфиром, содержащим 10% гексанов, (2x10 мл). Водный слой собирали и лиофилизировали в течение ночи с получением целевого продукта в виде бис-TFA-соли (80 мг), имеющей чистоту ~75% согласно LC-MS. Полученный остаток далее очищали посредством препаративной HPLC на Hypercarb (21,2x100 мм, 1=271 нм), с использованием градиента от 0% до 35% ацетонитрила в воде. Фракции, содержавшие продукт, объединяли и лиофилизировали. MS (ES⁺) 364,10 [M+H]⁺.

Структуру подтверждали посредством ¹Н- и ¹³С-ЯМР.

Данные ЯМР для некоторых проиллюстрированных соединений.

Соединение 8 диа-1.

¹Н-ЯМР (DMSO-d6, 400 МГц) δ 0.81-0.84 (6Н), 1.20-1.22 (11H), 1.59 (1H), 3.82-3.97 (3H), 4.08-4.16 (2H), 4.22-4.23 (2H), 5.16 (1H), 5.67-5.69 (1H), 6.05-6.10 (1H), 6.23-6.24 (1H),7.16-7.23 (m, 5Н), 7.34-7.38 (m, 2Н), 7.60-7.62 (m, 1Н).

- 33 031106

Соединение 8 диа-2.

Ή-ЯМР (ПМ8О-а₆, 400 МГц) δ 0.81-0.84 (6Н), 1.22-1.27 (11Н), 1.57 (1Н), 3.81-3.89 (2Н), 3.95-3.98 (1Н), 4.05-4.07 (1Н), 4.10-4.20 (3Н), 5.128 (1Н), 5.68-5.69 (1Н), 6.13-6.14 (1Н), 6.22-6.24 (1Н), 7.16-7.21 (5Н), 7.34-7.38 (2Н), 7.58-7.60 (1Н). Соединение 9 диа-1 ³¹Р-ЯМР (ϋΜβΘ-άβ) δ 4.354.

Ή-ЯМР (ПМ8О-а₆, 400 МГц) δ 1.24-1.26 (3Н), 3.98-4.01 (1Н), 4.12-4.14 (2Н), 4.27-4.29 (2Н), 5.005.08 (2Н), 5.16-5.18 (1Н), 5.64-5.66 (2Н), 6.25-6.27 (1Н), 6.34 (1Н), 7.17-7.22 (2Н), 7.31-7.33 (5Н), 7.45-7.46 (2Н), 7.55-7.59 (2Н), 7.63-7.64 (1Н), 7.74-7.77 (1Н), 7.95-7.97 (1Н), 8.08-8.11 (1Н).

Соединение 9 диа-2.

³¹Р-ЯМР (ПМ8О-а₆) δ 4.159.

Ή-ЯМР (ПМ8О-а₆, 400 МГц) δ 1.25-1.26 (3Н), 3.97-4.01 (1Н), 4.08-4.16 (2Н), 4.23-4.29 (2Н), 5.045.16 (3Н), 5.65-5.66 (1Н), 6.26 (1Н), 6.36-6.42 (1Н), 7.17-7.24 (2Н), 7.326 (5Н), 7.41-7.49 (2Н),7.57-7.64 (3Н), 7.74-7.76 (1Н), 7.95-7.97 (1Н), 8.10-8.12 (1Н).

Соединение 11-диа-1.

Ή-ЯМР (ПМ8О-а₆, 400 МГц) δ 0.23 (9Н), 0.78-0.82 (3Н), 1.08-1.12 (3Н), 1.20-1.22 (3Н), 1.44-1.49 (2Н), 3.77-3.79 (1Н), 4.09-4.23 (4Н), 4.67-4.72 (1Н), 5.16-5.16 (1Н), 5.69-5.70 (1Н), 6.04-6.10 (1Н), 6.23-6.25 (1Н), 7.15-7.24 (4Н), 7.48-7.50 (2Н), 7.61-7.63 (1Н).

Соединение 11 диа-2.

Ή-ЯМР (ПМ8О-а₆, 400 МГц) δ 0.22-0.24 (9Н), 0.78-0.82 (3Н), 1.10-1.11 (3Н), 1.22-1.24 (3Н), 1.461.50 (2Н), 4.05-4.07 (1Н), 4.11-4.22 (4Н), 4.70-4.71 (1Н), 5.14 (1Н), 5.69-5.71 (1Н), 6.07-6.11 (1Н), 6.23-6.25 (1Н), 7.16-7.24 (4Н), 7.49-7.51 (2Н), 7.60-7.62 (1Н).

Для того чтобы пролекарство было нацелено на печень, важнейшим является правильная обработка пролекарства. Пролекарство должно быть стабильным в кишечной жидкости и должно подвергаться обработке в печени печеночными ферментами в пресистемном метаболизме с образованием монофосфата. Образованный монофосфат затем анаболизируется клеточными киназами в гепатоцитах до активных трифосфатных соединений. Кроме того, противораковое лекарственное средство должно быть токсичным в отношении пролиферирующих клеток. Подходящие способы для оценки соединений на эти свойства являются такими, как, например, приведено ниже.

Стабильность во фракции кишечника человека S9 (fflS9) и во фракции печени человека S9 (KLS9).

Матричные растворы каждого тестового соединения (10 мМ) получали в DMSΘ и хранили при -20°С. Перед началом эксперимента тестовые соединения разбавляли до 500 мкМ в 50% ацетонитриле в воде. Реакционную смесь получали в общем объеме 250 мкл, содержащем 5 мМ МдС1₂, 1 мМ NADPH и 5 мкМ тестируемого соединения в 50 мМ фосфатно-калиевом буфере (рН 7,4). Реакцию начинали путем добавления фракции печени или кишечника человека S9 с конечной концентрацией 0,4 мг белка/мл (Xeno Tech). Реакционную смесь инкубировали на орбитальном шейкере при 37°С. В требуемые моменты времени (0, 10, 30 и 60 мин) отбирали аликвоты по 50 мкл и реакцию останавливали путем смешивания со 150 мкл внутреннего стандарта, содержащего ацетонитрил. Стандартные растворы каждого тестируемого соединения получали из 500 мкМ раствора путем разбавления раствора до конечной концентрации 5 мкМ в кипяченной человеческой S9 (0,4 мг белка/мл), 5 мМ МдС1₂ и 50 мМ фосфатно-калиевом буфере (рН 7,4). Стандарты и образцы выдерживали на льду в течение 30 мин, затем центрифугировали при 3000 g в течение 20 мин при 10°С, после чего 10 мкл надосадочной жидкости смешивали с 200 мкл 50% ацетонитрила в воде. 0,5 мкМ каждого тестируемого соединения в 50% ацетонитриле в воде инъецировали в LC/MS-MS для определения дочернего иона, потенциала декластеризации (DP), энергии столкновений (СЕ) и напряжения в ячейке соударений (СХР) с целью разработки способа LC/MS-MS. Соединения разделяли с использованием колонки С₁₈ с системой QTRAP5500. Подвижная фаза состояла из растворителя A (98% воды, 2% ацетонитрила, 0,1% уксусной кислоты или 10 мМ ацетата аммония) и растворителя B (80% ацетонитрила, 20% воды, 0,1% уксусной кислоты или 10 мМ ацетата аммония). Элюирование соединений осуществляли с использованием градиента растворителя B от 0 до 100%. 5 мкл стандартных точек и образцов впрыскивали в ходе анализа посредством QTRAP5500.

Количество исходного соединения определяли на основании площади пика для каждого момента времени по сравнению со стандартом, который имел значение 5 мкМ. Собственный клиренс (GL_mt) и время полувыведения (t_1/2) определяли из кривых исчезновения тестируемого соединения с использованием программного обеспечения Excel.

Исследования на клеточную цитотоксичность.

Клетки высевали за 24 ч перед добавлением соединения. Каждое тестируемое соединение (серийно разбавленное из 100 мкМ) добавляли к Ни117 (1,5х10⁴ клеток/лунка) или НерО2 (1,5х10⁴ клеток/лунка) и оставляли инкубировать в течение 5 суток при 37°С. Для определения значения минимальной абсорбции и значения необработанных клеток использовали только контроль средой. По окончании периода роста к каждой лунке добавляли краситель ХТТ от Polysciences Europe ОтЬН. Поглощение при 450 нм с опорной длиной волны 600 нм регистрировали посредством Sunrise (Tecan) с использованием контрольных лунок, содержавших только среду, в качестве холостых лунок. Значение 50% ингибирования (СС₅₀) определяли путем сравнения степени ингибирования (по сравнению с клеточным контролем), отложенной

- 34 031106 относительно концентрации соединения. Результаты из серий разбавления аппроксимировали сигмоидальной кривой доза-ответ.

В этих исследованиях исследовали соединения по изобретению для оценки стабильности в человеческой кишечной фракции S9 (HIS9) и человеческой печеночной фракции S9 (HLS9), и на цитотоксичность клеток на клетках HUH7, HEP3P и HEPG2. Результаты сведены в табл. B1.

Таблица B1

Пример	HUH7 СС₅о	НЕРЗВ СС₅о	HEPG2 СС₅0	CL_int Печень	CLjnt Кишечник
S9 (мкл/мин/мг)	S9 (мкл/мин/мг)
(мкМ)	(мкМ)	(мкМ)

1	>100	н.д.	>100	12	6
2	1,75	н.д.	0,248	13	6
3	3,28	Н.д.	0,371	8	6
4	12,0	Н.д.	0,936	84	123
4 диа-2	1,55	Н.д.	0,093	38	18
5 диа-1	0,465	Н.д.	0,107	32	21
5 диа-2	0,602	Н.д.	0,114	31	13
6 диа-1	0,258	Н.д.	0,092	91	36
6 диа-2	0,316	Н.д.	0,048	61	25
7 диа-1	1,02	Н.д.	0,24	148	147
7 диа-2	0,134	Н.д.	0,058	60	27
8 диа-1	0,123	Н.д.	0,007	130	86
8 диа-2	0,074	0,035	0,017	143	25
9 диа-1	0,164	Н.д.	0,023	133	171
9 диа-2	0,158	Н.д.	0,016	94	127

- 35 031106

10 диа-1	0,392	н.Д.	0,062	26	12
10 диа-2	0,556	н.Д.	0,051	22	14
11 диа-1	0,026	0,018	0,054	51	6
11 диа-2	н.Д.	0,031	0,054	81	28
12 диа-1	4,33	н.Д.	0,481	182	300
12 диа-2	5,02	н.Д.	1,09	97	300
13 смесь диэстере омеров 4:1	0,663	н.Д.	0,163	85	27
14 диа-1	0,216	н.Д.	0,016	88	30
14 диа-2	0,200	н.Д.	0,012	159	59
15 диа-1	0,025	н.Д.	0,037	167	87
15 диа-2	0,026	н.Д.	0,019	95	36
16 диа-1	1,20	0,106	0,151	50	8
16 диа-2	0,152	0,053	0,130	59	8
17 диа-1	50,0	н.Д.	50,0	6	6
17 диа-2	50,0	н.Д.	50,0	6	6
18 диа-1	0,461	0,228	0,248	21	6
18 диа-2	0,076	0,113	0,065	30	7
19 диа-1	0,091	н.Д.	0,018	19	26
19 диа-2	0,071	0,058	0,014	24	17
20 диа-1	0,216	н.Д.	0,074	45	21
20 диа-2	0,073	0,078	0,060	25	6
21 диа-1	0,574	н.Д.	0,163	61	29
21 диа-2	0,070	н.Д.	0,048	22	10

- 36 031106

22 диа-1	0,033	н.Д.	0,012	49	52
22 диа-2	0,040	н.Д.	0,011	43	34
23 диа-1	н.д.	0,01	0,0086	186	32
23 диа-2	н.д.	н.Д.	н.Д.	300	20
24 диа-1	н.д.	н.Д.	н.Д.	н.Д.	н.Д.
24 диа-2	н.д.	н.Д.	н.Д.	н.Д.	н.Д.
25 диа-1	н.д.	н.Д.	н.Д.	н.Д.	н.Д.
25 диа-2	н.д.	н.Д.	н.Д.	н.Д.	н.Д.
26 диа-1	н.д.	4,34	1,21	7	6
26 диа-2	4,73	4,02	1,06	10	6
Т гохаcitabine	0,646	0,279	0,218	н.Д.	н.Д.
27 диа-1	1,44	н.Д.	0,151	38	11
27 диа-2	1,02	0,348	0,223	57	6
28 диа-2	15,6	н.д.	2,72	20	40
29 диа-2	0,495	0,075	н.Д.	36	18
30 диа-2	н.д.	н.д.	н.Д.	120	11
31 диа-2	н.Д.	н.Д.	н.Д.	8	6
32 диа-2	н.д.	н.д.	н.д.	27	8
33 диа-1	н.д.	н.д.	н.д.	180	27
33 диа-2	н.д.	н.д.	н.д.	230	75
34 диа-2	0,524	0,210	0,236	64	6
35 диа-2	0,011	н.д.	0,007	34	51
36	0,009	0,019	н.Д.	н.Д.

н.д. = Не доступно.

Исследование на образование трифосфата.

Каждое соединение тестировали трижды в исследовании.

Использовали свежие человеческие гепатоциты (Biopredic, France), которые высевали в 12луночных планшетах. В каждую лунку высевали 0,7бх 10^б клеток и инкубировали с 10 мкМ раствором соединения в DMSO (0,1% DMSO) в 1 мл среды для инкубирования в инкубаторе с CO₂ при 37°C в течение 8 ч. Клетки Huh7, выращенные в DMEM с антибиотиками и 10% фетальной бычьей сывороткой, высевали в 12-луночные планшеты, 2х10⁵ клеток/ленка. По прошествии 24 ч добавляли 1 мл 10 мкМ соединения в среде и клетки инкубировали в течение последующих б-8 ч.

Инкубирование останавливали путем промывки каждой лунки 1 мл ледяного сбалансированного раствора Хэнка, pH 7,2, дважды, с последующим добавлением 0,5 мл ледяного 70% метанола. Сразу после добавления метанола клеточный слой отделяли от нижней части лунки скребком для клеток и пипетировали вверх и вниз 5-б раз автоматической пипеткой. Суспензию клеток переносили в стеклянный сосуд и хранили в течение ночи при -20°C.

Образцы, каждый из которых состоит из различных уровней пролекарства, свободного нуклеозида, а также моно-, ди- и трифосфата, затем перемешивали вихревым способом и центрифугировали при 10°C в течение 10 мин при 14000 об/мин в центрифуге Eppendorf 5417R. Надосадочные жидкости переносили в 2 мл стеклянные сосуды с пробкой и подвергали биологическому анализу следующим образом.

Внутренний стандарт (Индинавир) добавляли к каждому образцу и образцы (объем инъецирования 10 мкл) анализировали на двухколоночной системе, сопряженной с масс-спектрометром QTRAP 5000. Двухколоночная система состояла из двух бинарных насосов, X и Y, двух переключающих клапанов и автосемплера. Две использованные колонки HPLC представляли собой Synergy POLAR-RP 50х4,б мм, частицы 4 мкм, и BioBasic AX 50х2,1 мм, частицы 5 мкм. Скорости потока LC составляли 0,4-0,6 мл/мин (наибольшую скорость потока использовали на стадии восстановления).

Подвижные фазы HPLC для колонки POLAR-RP состояли из 10 ммоль/л ацетата аммония в 2% ацетонитриле (подвижная фаза A) и 10 ммоль/л ацетата аммония в 90% ацетонитриле (подвижная фаза B), и для колонки BioBasic AX из 10 ммоль/л ацетата аммония в 2% ацетонитриле (подвижная фаза C) и 1% гидроксида аммония в 2% ацетонитриле (подвижная фаза D). Градиент HPLC для насоса Y начинался при 0% подвижной фазы B, и его выдерживали в течение 2 мин.

- 37 031106

В течение фазы загрузки подвижная фаза проходила через колонку POLAR-RP и BioBasic AX, и пролекарство, нуклеозид и внутренний стандарт задерживались на колонке POLAR-RP; при этом нуклеотиды (моно-, ди- и трифосфаты) элюировали на колонке BioBasic АХ, и они захватывались там.

На следующей стадии поток переключали с колонки POLAR-RP на MS и подвижную фазу C переключали с насоса X на колонку BioBasic AX. Соединения на колонке POLAR-RP элюировали градиентом от 0 вплоть до 100% В в течение примерно 2 мин и анализировали в положительном или отрицательном режиме с использованием режима мониторинга множественных реакций (MRM).

На последней стадии поток из колонки BioBasic AX переключали на MS и фосфаты элюировали в течение примерно 7 мин градиентом вплоть до 50% D и анализировали в положительном или отрицательном режиме с использованием MRM. В течение последней стадии обе колонки приводят в исправное состояние.

Затем определяли концентрацию трифосфата для каждого соединения путем сравнения со стандартными кривыми, которые получали путем анализа стандартных образцов с известными концентрациями трифосфата. Стандарты испытывали по тем же шаблонам, что и тестируемые образцы. Вследствие вариаций в уровнях фосфорилирования между донорами гепатоцитов внутреннее референсное соединение требуется в каждом опыте для того, чтобы обеспечить ранжирование результатов из различных опытов друг относительно друга.

Повсеместно в описании и формуле изобретения, которая последует далее, если контекст не требует иного, слово содержать и его вариации, такие как содержит и содержащий, будут пониматься как подразумевающие включение указанного целого числа, стадии, группы целых чисел или группы стадий, а не исключение любого другого целого числа, стадии, группы целых чисел или группы стадий.

Все документы, упомянутые в данной заявке, включая патенты и патентные заявки, включены посредством ссылки в своей полноте.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Соединение, представленное формулой (I) где R¹ представляет собой OR¹¹ или NR⁵R⁵;

R² представляет собой H;

R⁵ представляет собой H или C(=O)R⁶;

R⁵ представляет собой H;

R⁶ представляет собой Q-C^-алкил;

R¹¹ представляет собой H;

R¹³ представляет собой фенил или нафтил, где фенил возможно замещен одним R²²;

R¹⁵ представляет собой C₁-C₆-алкил или бензил;

R¹⁵ представляет собой H, где конфигурация соседнего асимметрического атома углерода представляет собой конфигурацию L-аминокислоты;

R¹⁶ представляет собой Q-C^-алккил, C3-C7-циклоалкил или бензил; каждый R²² независимо выбран из галогена и C3-C6-циклоалкила, или его фармацевтически приемлемая соль.
2. Соединение по п.1, где R¹ представляет собой NH₂ или NHC(=O)C₁-C₆-алкил.
3. Соединение по п.1, где R¹ представляет собой NH₂.
4. Соединение по любому из пп.1-3, где R¹⁵ представляет собой CrQ-алкил.
5. Соединение по п.4, где R¹⁵ представляет собой метил.
6. Соединение по любому из пп.1-5, где R¹⁶ представляет собой Q-C^-алкил.
7. Соединение по любому из пп.1-6, где R¹⁶ представляет собой 2-пропилпентил или 2-этилбутил.
8. Соединение по любому из пп.1-5, где R¹⁶ представляет собой бензил.
9. Соединение по любому из пп.1-5, где R¹⁶ представляет собой ^^-циклоалкил.
10. Соединение по любому из пп.1-9, где R¹³ представляет собой фенил.
11. Соединение по п.1, представляющее собой
12. Соединение по п.1, представляющее собой

- 38 031106
13. Соединение по п.1, представляющее собой
14. Соединение по п.1, представляющее собой
15. Применение соединения по любому из пп.1-14 в лечении рака, где рак представляет собой рак печени.