EA028611B1

EA028611B1 - Азаиндольные соединения, их получение и способы их применения

Info

Publication number: EA028611B1
Application number: EA201690227A
Authority: EA
Inventors: Правин С. Шируде; Марути Н. Наик; Викас Нараян Шинде; Шахул Хамид Пир Мохамед; Моналиса Чаттерджи; Радха К. Шандил
Original assignee: Глоубал Элаенс Фор Тб Драг Дивелопмент; Фаундейшн Фор Ниглектид Дизиз Рисерч
Priority date: 2013-07-17
Filing date: 2014-07-10
Publication date: 2017-12-29
Also published as: AU2014290598B2; AU2014290598A1; ES2644025T3; US9163020B2; BR112016000712A2; WO2015009525A1; EP3021947B1; CN105636646A; CA2918487A1; KR20160058757A; CA2918487C; EP3021947A1; CN105636646B; KR102301753B1; JP2016530242A; JP6366709B2; EA201690227A1; US20150025087A1

Abstract

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I), где все значения заместителей раскрыты в формуле изобретения, и способам лечения микобактериальной инфекции или туберкулеза или ингибирования ими DprE1.

Description

(57) Настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I), где все значения заместителей раскрыты в формуле изобретения, и способам лечения микобактериальной инфекции или туберкулеза или ингибирования ими ОргЕЕ

Уровень техники настоящего изобретения

Заявка на настоящий патент испрашивает приоритет индийской предварительной патентной заявки № 3196/СНЕ/2013, поданной 17 июля 2013 г., озаглавленной азаиндольные соединения, их получение и способы их применения, и также испрашивается приоритет второй и обновленной предварительной заявки, имеющей тот же серийный номер (3196/СНЕ/2013) и дату подачи 30 апреля 2014 г., полное содержание обеих из которых включено в настоящее изобретение посредством ссылки.

Туберкулез (ТБ) продолжает быть причиной значительного количества случаев заболеваемости и смертности по всему миру, несмотря на наличие эффективного и экономичного режима четырехкомпонентной терапии, внедренной 40 лет назад (Кау1дйопе, М. е! а1. Бапее! 379, 1902-1913 (2012); Могй! Неа1!й Огдаш/айоп. О1оЬа1 ТиЬегеи1о818 Керог! (2012)). Отрадно видеть недавнее ускоренное одобрение управлением по контролю за продуктами питания и лекарственными средствами США (ΕΌΑ) сиртуро (бедаквилин) компании 1ап88еп для полирезистентного туберкулеза (МОК-ТВ), положившее конец затишью в течение четырех десятилетий в разработке нового лекарственного средства против ТБ с новым механизмом действия (Сойеп, 1. 8е1епее 339, 130-131 (2013)). Однако необходимо показать влияние сиртуро на направление развития заболевания и жизнь пациента; в контексте связанной с ним угрозы безопасности и проблем, выявленных в постмаркетинговых исследованиях.

Известно, что нитробензотиазиноны (ΒΤΖ) и родственные соединения ингибируют декапренилфосфорил-З-О-рибоза 2'-эпимеразу (ОргЕ1), участвующую в превращении декапренилфосфорил 1-β-ϋрибозы (ОРК) в декапренилфосфорил 1-З-О-арабинофуранозу (ΏΡΑ), предшественник арабинана микобактериальной клеточной стенки (ТгеГ/ег, С. е! а1. 1. Ат. Сйет. 8ос. 132, 13663-13665). Данная реакция катализируется гетеромерным ферментом, декапренилфорсфорибоза 2'-эпимеразой (ОргЕ), и протекает по механизму многостадийного окисления/восстановления, включающему промежуточное соединение (декапренилфосфорил 1-2-кето-З-О-эритропентофуранозу, ΌΡΧ).

Данный фермент состоит из двух белков, кодируемых генами йргЕ1 и йргЕ2. ОргЕ1 фермент представляет собой содержащую РАО оксидоредуктазу, тогда как ОргЕ2 представляет собой ΝΑΟΗзависимую редуктазу (М1ки8оуа, К. е! а1. 1. Вае!епо1. 187, 8020-8025 (2005); Макагоу, V. е! а1. 8е1епее 324, 801-804 (2009)).

Обнаружение ΒΤΖ043 в качестве ковалентного ингибитора ОргЕ1 с эффективной антимикобактериальной активностью подтверждает применимость данной мишени для новой терапии ТБ (8е1епее 324, 801-804 (2009)). Однако остается понять, будут ли ингибиторы ОргЕ1, не содержащие нитрогруппы, обеспечивать эффективность ίπ у1уо? Кроме того, существенна ли для ίπ у1уо эффективности наномолярная клеточная концентрация? Лучшее понимание данных аспектов ингибирования ОргЕ1 будет значительно влиять на будующие попытки изыскания лекарственных средств против ТБ, направленных на данную мишень. Таким образом, существует необходимость в данной области техники в дополнительных соединениях, мишенью которых является ОргЕ1.

Сущность настоящего изобретения

В некоторых аспектах настоящее изобретение относится, по меньшей мере, частично к соединению формулы (I)

в которой К¹ выбран из водорода, фтора, брома, -ОСН₃ и метила;

К² представляет собой водород или метил;

К³ представляет собой водород или метил;

X представляет собой N или СК⁴;

К⁴ выбран из водорода, фтора и -ОСН3;

К⁵ выбран из водорода, фтора, -СР₃ и -ΌΝ;

Υ представляет собой N или СК⁶;

К⁶ представляет собой водород или метил;

Ζ представляет собой N или СК⁷;

К⁷ выбран из водорода, фтора, -ОСН₃, -ОСНР₂, -ОСН₂СР₃ и -Ν(ΟΗ₃)₂;

К⁸ выбран из водорода, фтора, метила и -ОСН₃;

η равен 1 или 2;

К⁹ выбран из фтора, циклопропила, -ОСН₃, -ОН, -ОСР₃, -СНР₂, -СН(Р)СН₃ и -СН(ОН)СН₃, или его фармацевтически приемлемой соли.

- 1 028611

В некоторых аспектах настоящее изобретение относится, по меньшей мере, частично к фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли для применения в лечении туберкулеза или микобактериальной инфекции.

В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) для применения в получении лекарственного средства для лечения туберкулеза или микобактериальной инфекции.

В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к способу лечения туберкулеза или микобактериальной инфекции, включающему введение нуждающемуся в лечении пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.

В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль, для применения в лечении туберкулеза или микобактериальной инфекции.

В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли для применения в ингибировании ΌρτΕ1.

В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) для применения в получении лекарственного средства для ингибирования ΌρτΕΙ.

В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к способу ингибирования ΌρτΕΙ, включающему введение терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.

В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль для ингибирования ΌρτΕΙ.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1 показывает ίη νίΐτο бактерицидный эффект и ίη νίνο эффективность (а) кинетики бактерицидного эффекта для соединения 3, (Ъ) кинетики бактерицидного эффекта для соединения 4, (с) кратковременную эффективность в мышиной модели ТВ, (ά) продолжительную эффективность в мышиной модели ТВ.

Фиг. 2 показывает внутриклеточную активность соединений 3 и 4 в модели ТНР1.

Фиг. 3 показывает (а) профили зависимости концентрации от времени соединения 3 и 4 для мышей после пероральное введение при 100 мг/кг (с АВТ), (Ъ) профили зависимости концентрации от времени соединения 3 и 4 для крыс после перорального введения при 30 мг/кг (с) профили зависимости концентрации от времени соединения 3 и 17 для крыс после внутривенного болюсного введения при 0,5 и мг/кг соответственно.

Фиг. 4 показывает (а) профиль зависимости концентрации от времени соединения 3 для мышей после многократного перорального введения при 30 и 100 мг/кг хронически зараженным мышам (с АВТ), (Ъ) профиль зависимости концентрации от времени соединения 4 для мышей после многократного перорального введения при 30 и 100 мг/кг хронически зараженным мышам (с АВТ), (с) ФК ЖЭВ соединения для здоровых мышей при 100 мг/кг, (ά) ФК ЖЭВ соединения 4 для здоровых мышей при 100 мг/кг.

Фиг. 5 показывает (а) профили зависимости концентрации от времени 1,4-азаиндольных соединения после многократного перорального введения при 100 мг/кг хронически зараженным МТБ крысам, (Ъ) сводка результатов по эффективности 1,4-азаиндольных соединений в модели хронической ТБ инфекции для крыс породы Вистар после 6 дней в неделю перорального дозирования в течение четырех недель. Суммарное 1од10 КОЕ снижение/левая доля легких получали вычитанием количества бактерий в легком из контролей, обработанных средой. Все соединения показывали статистически значимый эффект относительно необработанных контролей (*р<0,05).

Фиг. 6 показывает схему получения 1 для получения промежуточных соединений 3-9.

Фиг. 7 показывает схему получения 2 для получения промежуточных соединений 11-15.

Фиг. 8 показывает схему получения 3 для получения промежуточных соединений 17-21.

Фиг. 9 показывает схему получения 4 для получения промежуточных соединений 23-25.

Фиг. 10 показывает схему получения 5 для получения промежуточных соединений 27-30.

Фиг. 11 показывает схему получения 6 для получения промежуточных соединений 32-33.

Фиг. 12 показывает схему получения 7 для получения промежуточных соединений 35-37.

Фиг. 13 показывает схему получения 8 для получения промежуточных соединений 39-44.

Фиг. 14 показывает схему получения 9 для получения промежуточных соединений 41-47.

Фиг. 15 показывает схему получения 10 для получения промежуточных соединений 48а и 48Ъ-50.

Фиг. 16 показывает получение соединений (а)-(ф) в примерах 1-4.

Фиг. 17 показывает получение соединений в (а)-(ф) примерах 5-8.

Фиг. 18 показывает получение соединений в (а)-(ф) примерах 9-12.

Фиг. 19 показывает получение соединений в (а)-(ф) примерах 13-16.

Фиг. 20 показывает получение соединений в (а)-(ф) примерах 17-20.

Фиг. 21 показывает получение соединений в (а)-(ф) примерах 21-24.

Фиг. 22 показывает получение соединений в примере 25.

- 2 028611

Фиг. 23 показывает получение соединений в (а)-(б) примерах 26-29.

Фиг. 24 показывает получение соединений в (а)-(с) примерах 30-32.

Фиг. 25 показывает табл. 2, патогенная специфичность.

Фиг. 26 показывает табл. 3, активность относительно чувствительной и резистентной к лекарственным средствам МТБ.

Подробное описание настоящего изобретения

Соединения.

В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I).

К³ представляет собой водород или метил;

X представляет собой N или СК⁴;

К⁴ выбран из водорода, фтора и -ОСН₃;

К⁵ выбран из водорода, фтора, -СТ₃ и -С^

Υ представляет собой N или СК⁶;

К⁶ представляет собой водород или метил;

Ζ представляет собой N или СК⁷;

К⁷ выбран из водорода, фтора, -ОСН₃, -ОСНТ₂, -ОСН₂СТ₃ и -Л(СН₃)₂;

К⁸ выбран из водорода, фтора, метила и -ОСН₃; η равен 1 или 2;

К⁹ выбран из фтора, циклопропила, -ОСН₃, -ОН, -ОСТ₃, СНТ₂, -СН(Т)СН₃ и -СН(ОН)СН₃, или его фармацевтически приемлемой соли.

В некоторых аспектах каждый К¹ и К² представляет собой водород.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой водород и К² представляет собой метил.

В некоторых аспектах К¹ выбран из фтора, брома и метила и К² представляет собой водород.

В некоторых аспектах каждый К¹, К² и К³ представляет собой водород.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой метил и каждый К² и К³ представляет собой водород.

В некоторых аспектах η равен 1 и К⁹ представляет собой циклопропил.

В некоторых аспектах η равен 1 и К⁹ представляет собой -СН(Т)СН₃.

В некоторых аспектах η равен 1 и К⁹ представляет собой -СНТ₂.

В некоторых аспектах η равен 1 и К⁹ представляет собой -СН(ОН)СН₃.

В некоторых аспектах η равен 2 и К⁹ представляет собой фтор.

В некоторых аспектах η равен 2 и К⁹ представляет собой -ОМе.

В некоторых аспектах η равен 2 и К⁹ представляет собой -ОН.

В некоторых аспектах η равен 2 и К⁹ представляет собой -ОСТ₃.

В некоторых аспектах X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой Ν, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -ОМе и К⁸ представляет собой метил.

В некоторых аспектах X представляет собой СК⁴, К⁴ представляет собой водород, К⁵ выбран из фтора, ^Ν и -СТ₃, Υ представляет собой СК⁶, К⁶ представляет собой водород, Ζ представляет собой N и К⁸ представляет собой -ОМе.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой водород, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой N К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой N Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -ОМе и К⁸ представляет собой метил.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой метил, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой N К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой N Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -ОМе и К⁸ представляет собой метил.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой фтор, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой N К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой N Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -ОМе и К⁸ представляет собой метил.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой бром, К² представляет собой водород, К³ представляет

- 3 028611 собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой Ν, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -ОМе и К⁸ представляет собой метил.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой водород, К² представляет собой водород, К³ представляет собой метил, X представляет собой СК⁴, К⁴ представляет собой фтор, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой СК⁶, К⁶ представляет собой водород, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой водород, К⁸ представляет собой фтор, η равен 2 и К⁹ представляет собой фтор.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой водород, К² представляет собой метил, К³ представляет собой водород, X представляет собой СК⁴, К⁴ представляет собой -ОМе, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой СК⁶, К⁶ представляет собой водород, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой фтор, К⁸ представляет собой водород, η равен 1 и К⁹ представляет собой циклопропил.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой водород, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой Ν, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -ОМе, К⁸ представляет собой метил, η равен 2 и К⁹ представляет собой фтор.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой водород, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой Ν, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -ОМе, К⁸ представляет собой метил, η равен 1 и К⁹ представляет собой циклопропил.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой водород, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой СК⁴, К⁴ представляет собой -ОМе, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой СК⁶, К⁶ представляет собой водород, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой фтор, К⁸ представляет собой фтор, η равен 2 и К⁹ представляет собой фтор.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой водород, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой СК⁴, К⁴ представляет собой водород, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой СК⁶, К⁶ представляет собой водород, Ζ представляет собой Ν, К⁸ представляет собой -ОМе, η равен 2 и К⁹ представляет собой -ОМе.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой водород, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой Ν, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -ОМе, К⁸ представляет собой метил, η равен 2 и К⁹ представляет собой -ОМе.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой метил, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой Ν, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -ОМе, К⁸ представляет собой метил, η равен 2 и К⁹ представляет собой фтор.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой водород, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой Ν, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -ОМе, К⁸ представляет собой метил, η равен 2 и К⁹ представляет собой -ОН.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой метил, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой Ν, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -ОМе, К⁸ представляет собой метил, η равен 1 и К⁹ представляет собой циклопропил.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой метил, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой Ν, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -ОМе, К⁸ представляет собой метил, η равен 2 и К⁹ представляет собой -ОМе.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой водород, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой СК⁶, К⁶ представляет собой водород, Ζ представляет собой СК⁷ и К⁷ представляет собой -ОСН₂СР₃, К⁸ представляет собой метил, η равен 2 и К⁹ представляет собой фтор.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой водород, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой СК⁴, К⁴ представляет собой водород, К⁵ представляет собой СР₃, Υ представляет собой СК⁶, К⁶ представляет собой водород, Ζ представляет собой Ν, К⁸ представляет собой -ОМе, η равен 2 и К⁹ представляет собой фтор.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой водород, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой СК⁴, К⁴ представляет собой водород, К⁵ представляет собой ΟΝ, Υ представляет собой СК⁶, К⁶ представляет собой водород, Ζ представляет собой Ν, К⁸ представляет собой -ОМе, η равен 2 и К⁹ представляет собой фтор.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой метил, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой СК⁴, К⁴ представляет собой водород, К⁵ представляет собой фтор, Υ представляет собой СК⁶, К⁶ представляет собой водород, Ζ представляет собой Ν, К⁸ представляет собой -ОМе, η равен 2 и К⁹ представляет собой фтор.

- 4 028611

В некоторых аспектах К¹ представляет собой метил, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой Ν, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -ОМе, К⁸ представляет собой метил, η равен 1 и К⁹ представляет собой СН(Р)СН₃.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой метил, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой Ν, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -ОМе, К⁸ представляет собой метил, η равен 2 и К⁹ представляет собой -ОН.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой водород, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой СК⁴, К⁴ представляет собой водород, К⁵ представляет собой фтор, Υ представляет собой СК⁶, К⁶ представляет собой метил, Ζ представляет собой Ν, К⁸ представляет собой -ОМе, η равен 2 и К⁹ представляет собой фтор.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой фтор, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой Ν, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -ОМе, К⁸ представляет собой метил, η равен 2 и К⁹ представляет собой фтор.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой бром, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой Ν, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -ОМе, К⁸ представляет собой метил, η равен 2 и К⁹ представляет собой фтор.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой метил, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой СК⁶, К⁶представляет собой водород, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -ОСН₂СР₃, К⁸ представляет собой метил, η равен 2 и К⁹ представляет собой фтор.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой метил, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой СК⁴, К⁴ представляет собой водород, К⁵ представляет собой СР3, Υ представляет собой СК⁶, К⁶ представляет собой водород, Ζ представляет собой Ν, К⁸ представляет собой -ОМе, η равен 1 и К⁹ представляет собой СН(Р)СН3.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой водород, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой Ν, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -ОМе, К⁸ представляет собой метил, η равен 2 и К⁹ представляет собой -ОСР₃.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой метил, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой СК⁴, К⁴ представляет собой водород, К⁵ представляет собой фтор, Υ представляет собой СК⁶, К⁶ представляет собой водород, Ζ представляет собой Ν, К⁸ представляет собой -ОМе, η равен 1 и К⁹ представляет собой -СН(Р)СН₃.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой метил, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой СК⁴, К⁴ представляет собой водород, К⁵ представляет собой фтор, Υ представляет собой СК⁶, К⁶ представляет собой метил, Ζ представляет собой Ν, К⁸ представляет собой метил, η равен 2 и К⁹ представляет собой фтор.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой метил, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой СК⁶, К⁶представляет собой водород, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -ОСН₂СР₃, К⁸ представляет собой метил, η равен 2 и К⁹ представляет собой -ОН.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой метил, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой Ν, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -ОМе, К⁸ представляет собой метил, η равен 1 и К⁹ представляет собой -СН(ОН)СН₃.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой метил, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой Ν, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -Ы(СН₃)₂, К⁸ представляет собой метил, η равен 2 и К⁹представляет собой фтор.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой метил, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой Ν, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -ОМе, К⁸ представляет собой метил, η равен 1 и К⁹ представляет собой СНР₂.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой водород, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой СК⁴, К⁴ представляет собой водород, К⁵ представляет собой

- 5 028611 водород, Υ представляет собой СК⁶, К⁶ представляет собой метил, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой водород, К⁸ представляет собой метил, η равен 2 и К⁹ представляет собой фтор.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой водород, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой СК⁴, К⁴ представляет собой фтор, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой СК⁶, К⁶ представляет собой водород, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой водород, К⁸ представляет собой -ОМе, η равен 1 и К⁹ представляет собой циклопропил.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой метил, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой Ν, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -ОСН3, К⁸ представляет собой метил, η равен 1 и К⁹представляет собой -СНР2.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой метил, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой Ν, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -Ы(СН₃)₂, К⁸ представляет собой метил, η равен 2 и К⁹представляет собой -ОН.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой метил, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой Ν, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -ОСНР₂, К⁸ представляет собой метил, η равен 2 и К⁹представляет собой -ОН.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой -ОСН₃, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой Ν, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -ОСН3, К⁸ представляет собой метил, η равен 2 и К⁹представляет собой -ОН.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой -ОСН3, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой Ν, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -ОСН3, К⁸ представляет собой метил, η равен 1 и К⁹представляет собой -СНР₂.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой -ОСН3, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой Ν, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -ОСН3, К⁸ представляет собой метил, η равен 2 и К⁹представляет собой -ОН. В некоторых аспектах К¹ представляет собой -ОСН3, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой Ν, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -Ы(СН3)₂, К⁸ представляет собой метил, η равен 2 и К⁹ представляет собой Р.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой -ОСН³, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой Ν, Ζ представляет собой СК7, К⁷ представляет собой -Ы(СН₃)₂, К⁸ представляет собой метил, η равен 1 и К⁹представляет собой -СНР2.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой -ОСН3, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой Ν, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -Ы(СН3)₂, К⁸ представляет собой метил, η равен 2 и К⁹представляет собой -ОН.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой -ОСН₃, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой Ν, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -ОСНР2, К⁸ представляет собой метил, η равен 2 и К⁹представляет собой Р.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой -ОСН₃, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой Ν, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -ОСНР2, К⁸ представляет собой метил, η равен 1 и К⁹представляет собой -СНР2.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой -ОСН3, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой Ν, Ζ представляет собой СК⁷, К⁷ представляет собой -ОСНР2, К⁸ представляет собой метил, η равен 2 и К⁹представляет собой -ОН.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой метил, К² представляет собой водород, К³ представляет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой СК⁶, К⁶представляет собой метил, Ζ представляет собой Ν, К⁸ представляет собой метил, η равен 2 и К⁹ представляет собой Р.

В некоторых аспектах К¹ представляет собой метил, К² представляет собой водород, К³ представля- 6 028611 ет собой водород, X представляет собой Ν, К⁵ представляет собой водород, Υ представляет собой СК⁶, К⁶представляет собой метил, Ζ представляет собой Ν, К⁸ представляет собой метил, η равен 1 и К⁹ представляет собой СНТ₂.

В некоторых аспектах соединения формулы (I) включают соединения в табл. 1 или их фармацевтически приемлемые соли.

Таблица 1

Соединение Νο.	Соединение	МИК МТБ (мкМ)
1	р Ай ° А^ Р 1- (1- (2,б-дифторфенил)этил)-Ν-(2- фторэтил)-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3- карбоксамид	12,5
2	/ О 1 ,-У У-Ν ⁰ А Ν-(циклопропилметил)-1-(5-фтор-2- метоксибензил)-7-метил-1Н-пирроло[3,2- Ь]пиридин-3-карбоксамид	б, 25
3	\ о мАч м Ν' \ / γ \ н ζ/~~Ν ° Δ Р Ν- (2-фторэтил)-1-( (б-метокси-5- метилпиримидин-4-ил)метил)-ΙΗ- пирроло [3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид	1,56

- 7 028611

4	\ р / +,/-+ 0 Н Ν-(циклопропилметил)-1-((б-метокси-5- метилпиримидин-4-ил)метил)-ΙΗ- пирроло [3,2-Ъ]пиридин-3-карбоксамид	<0,781
5	~О СО ^р N Д Фн //Ν ⁰ с Р 1-(2,3-дифтор-б-метоксибензил)-Ν-(2- фторэтил)-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3- карбоксамид	<0, бб
б	_γ--ν / /Г V⁰ (¥¥> о н 1-((5-фтор-2-метоксипиридин-3- ил)метил)-Ν-(2-метоксиэтил)-ΙΗ- пирроло [3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид	1,3

- 8 028611

7	\ 0 Ν-'Α А А ; /Αν Ο^Ζ Η 1-((б-метокси-5-метилпиримидин-4- ил)метил)-Ν-(2-метоксиэтил)-ΙΗ- пирроло [3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид	<1,33
8	\ о А А О Н Ν- (2-фторэтил)-1-( (б-метокси-5- метилпиримидин-4-ил)метил)-б-метил-1Н- пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид	<0,53
9	\ 0 N А А N4 ААА _Ν<ΑΑ А н /Αν ° '^А он Ν-(2-гидроксиэтил)-1-((б-метокси-5- метилпиримидин-4-ил)метил)-ΙΗ- пирроло [3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид	13,9

- 9 028611

10	У 0 0 А ВЫ 0 Н Ν-(циклопропилметил)-1-((б-метокси-5- метилпиримидин-4-ил)метил)-6-метил-ΙΗ- пирроло [3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид	1,56
	\ 0
	Ν-Α С г


11	Ν Д	о·^	0,781
	о⁷	~Ν Н
	1-((б-метокси-5-метилпиримидин-4-
	ил)метил)-Ν-(2-метоксиэтил)-б-метил-
	1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид
	Р
	0 /
	00 Ν'''”/
12	/		6, 25
		—/^Р
	с>	N Н
	Ν-(2-фторэтил)-1-(	3-метил-4-(2,2,2-
	трифторэтокси)пиридин-2-ил)метил)-1Н-
	пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид

- 10 028611

13	-ЗЙЗ- 1X? ρ^ρ ^Ν кН Άν ⁰ X Ρ Ν-(2-фторэтил)-1-((2-метокси-5- (трифторметил)пиридин-3-ил)метил)-ΙΗ- пирроло [3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид	<0,53
14	Г ф\ χχ.^ к'-Ν 0 Η 1-((5-циано-2-метоксипиридин-3- ил)метил)-Ν-(2-фторэтил)-ΙΗ- пирроло [3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид	3, 12
15	—0 V—N νν\ ^р кк^к X н ⁰ 'к 5 1-((5-фтор-2-метоксипиридин-3- ил)метил)-Ν-(2-фторэтил)-6-метил-1Н- пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид	1,56

- 11 028611

16	\ 0 Ν^Ύ н у/ ΥζΥΥ ^ί^Ν^ΐίί^0^> /—--/ Υ~·Ν 1 0 Η Ρ (5)-Ν-(2-фторпропил)-1-((6-метокси-5- метилпиримидин-4-ил)метил)-6-метил-ΙΗ- пирроло [3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид	0, 156
17	\ 0 Ν·Υ\ м Ν-~\ γζγζ ΥΝ о Η Ν-(2-гидроксиэтил)-1-((6-метокси-5- метилпиримидин-4-ил)метил)-6-метил-ΙΗ- пирроло [3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид	1,56
18	У N / 4У ру Ры 0 Н 1-((5-фтор-2-метокси-6-метилпиридин-З- ил)метил)-Ν-(2-фторэтил)-ΙΗ- пирроло [3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид	0,781

- 12 028611

19	О V ! к’· N \ ⁰ \ Р б-φτορ-Ν-(2-фторэтил)-1-((б-метокси-5- метилпиримидин-4-ил)метил)-ΙΗ- пирроло [3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид	6,25
20	__(/ N ^Вгккк ⁷ ° ^Ν РТ ‘ Υ-Ν ° к Р б-бром-Ν-(2-фторэтил)-1-((б-метокси-5- метилпиримидин-4-ил)метил)-ΙΗ- пирроло [3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид	0,781
21	р _Р-2у-Р 0 /V Ν-—Ч 0 Н Ν-(2-фторэтил)-б-метил-1-((З-метил-4- (2,2,2-трифторэтокси)пиридин-2- ил)метил)-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3- карбоксамид	1,56

- 13 028611

22	Ρ р-Υ ОДр / Υ^Ν ΎΥΛ <( 1 Η /7 Ν ο Υγ	<0,	391
	Ρ (3)-Ν-(2-фторпропил)-1-((2-метокси-5- (трифторметил)пиридин-3-ил)метил)-6- метил-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3- карбоксамид
	КОД // к
23	Υ'Ν Ρ 0 Η	3,	12
	1-((б-метокси-5-метилпиримидин-4- ил)метил)-Ν-(2-(трифторметокси) этил)- 1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид
	од 1 ^РОД}°
	^Ν
24	,γ~~ 0 Н ^р (3)-1- ( (5-фтор-2-метоксипиридин-3- ил)метил)-Ν-(2-фторпропил)-б-метил-1Н- пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид	<0,	391

- 14 028611

25	3 Ν (рХЛ 0 Υ \ 0 ⁵% 2-циклопропил-Ы-(1-((6-метокси-5- метилпиримидин-4-ил)метил)-ΙΗ- пирроло [3,2-Ь]пиридин-3-ил)ацетамид	25
26	р ί}- /0 о \ Λ Р 1-((5-фтор-2,6-диметилпиридин-З- ил)метил)-Ν-(2-фторэтил)-6-метил-1Н- пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид	3, 12
27	0 00 N \ -И—Й о \ он Ν- (2-гидроксиэтил)-6-метил-1-( (3- метил-4-(2,2,2-трифторэтокси)пиридин- 2-ил)метил)-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин- 3-карбоксамид	3, 12

- 15 028611

28	\ 0 Ν \\ Μ _Ζ__/^ΟΗ ,0~Ν 0 Η (Η)-Ν-(2-гидроксипропил)-1-((6- метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)- 6-метил-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3- карбоксамид	6, 25
29	\ Ν' ( и Ν\ Ν О Н 1-((6-(диметиламино)-5-метилпиримидин- 4-ил)метил)-Ν-(2-фторэтил)-6-метил-1Н- пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид	1,56
30	\ о ( 7 оЮ Ν- (2,2-дифторэтил)-1-( (6-метокси-5- метилпиримидин-4-ил)метил)-6-метил-ΙΗ- пирроло [3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид	<0,391

- 16 028611

31	Αν о н 1-(2,4-диметилбензил)-Ν-(2-фторэтил)- 1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид	1,56
32	АА-ο Г ^х У\ Р / /Αν ¹¹ X/ Д-ы 0 Η Ν-(циклопропилметил)-1-(2-фтор-б- метоксибензил)-1Н-пирроло[3,2- Ь]пиридин-3-карбоксамид	1,56
33	\ ν4 м ΝΑ ^1Ν У- д^г ₀Д у Ν-(2,2-дифторэтил)-1-((б-метокси-5- метилпиримидин-4-ил)метил)-6-метил-ΙΗ- пирроло [3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид	<0,39

- 17 028611

34	\ Ν ν-Α Μ ΝΛ £0+ он _/__у^0Н 0Ы 0 Η 1-((6-(диметиламино)-5-метилпиримидин- 4-ил)метил)-Ν-(2-гидроксиэтил)-6- метил-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3- карбоксамид	<0,39
35	Р Л О N0 м Ν-Α 00 ,_,он 0~-Ν 0 Η 1-((6-(дифторметокси)-5- метилпиримидин-4-ил)метил)-Ν-(2- гидроксиэтил) - 6-метил-1Н-пирроло[3,2- Ь]пиридин-3-карбоксамид	<0,39
36	\ О N0 м 1 / ^О\/ЛЛ 0 Η Ν- (2-фторэтил)-6-метокси-1-( (6- метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)- 1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид	<0,39

- 18 028611

37	\ ρ Ν< μ I / 100 Ν Д ο⁷ Ν-(2,2-дифторэтил)- метокси-5-метилпирик 1Н-пирроло[3,2-Ь]пир]	Ν \ Н Р б-метокси-1-((6- 1идин-4-ил) метил) - лдин-3-карбоксамид	<0,39
	\ О
	0
	1 Ν-Α

38	N Д		0,78
	о⁷	Ν Н
	Ν-(2-гидроксиэтил)-	б-метокси-1-((б-
	метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-
	1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид
	\ Ν-
	N-4 с г
	ι ^Νϊ/

39	А Д0 N Д		<0,39
	о⁷	Ν Н
	1-((б-(диметиламино)	-5-ме тилпиримидин-
	4-ил)метил)-Ν-(2-фторэтил)-б-метокси-
	1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид

- 19 028611

40	\ Μ νΎ I ^Ν~/ ^Ν к. Л 0 Η Ρ Ν- (2,2-дифторэтил)-1-( (6- (диметиламино)-5-метилпиримидин-4- ил)метил)-б-метокси-1Н-пирроло[3,2— Ь]пиридин-3-карбоксамид	<0,39
41	\ Ν- м 1 ^Ν^\ XX? ^°^н Л-Ν 0 Н 1-((б-(диметиламино)-5-метилпиримидин- 4-ил)метил)-Ν-(2-гидроксиэтил)-6- метокси-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3- карбоксамид	<0,39
42	Р Л 0 νΎ I ρ Υ~Ν Ο Η 1-((6-(дифторметокси)-5- метилпиримидин-4-ил)метил)-Ν-(2- фторэтил)-6-метокси-1Н-пирроло[3,2- Ь]пиридин-3-карбоксамид	<0,39

- 20 028611

43	Р л_о N А ¥ ι 1X? _Р ^Ν + 0 0 V Ν-(2,2-дифторэтил)-1-((6- (дифторметокси) -5-метилпиримидин-4- ил)метил)-б-метокси-1Н-пирроло[3,2— Ь]пиридин-3-карбоксамид	<0,39
44	Р Л о νΑ ¥ 1 / ^Ογ+γΝ +АА ^_он Αν о н 1-((6-(дифторметокси)-5- метилпиримидин-4-ил)метил)-Ν-(2- гидроксиэтил)-б-метокси-1Н- пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид	0,78
45	¥ν^/ О н 1-((3,5-диметилпиразин-2-ил)метил)-Ν- (2-фторэтил)- 6-метил-1Н-пирроло[3,2- Ь]пиридин-3-карбоксамид	<0,39

Ν-(2,2-дифторэтил)-1-((3,5диметилпиразин-2-ил)метил)-б-метил-1Н· пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид

Фармацевтические композиции.

В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель.

Формулировка фармацевтически приемлемый включает соединения, материалы, композиции и/или лекарственные формы, которые, по результатам тщательной медицинской оценки, являются пригодными для применения в контакте с тканями человеческих существ и животных без избыточной ток- 21 028611 сичности, раздражения, аллергической реакции или другой проблемы или осложнения, с соразмерным приемлемым соотношением риск/польза.

Соединения формулы (I) могут образовывать подходящие фармацевтически приемлемые соли кислот или оснований, и в данных случаях может быть подходящим введение соединения в виде соли. Примеры солей присоединения кислоты включают ацетат, адипат, аскорбат, бензоат, бензолсульфонат, бикарбонат, бисульфат, бутират, камфорат, камфорсульфонат, холин, цитрат, циклогексилсульфамат, диэтилендиамин, этансульфонат, фумарат, глутамат, гликолат, гемисульфат, 2-гидроксиэтилсульфонат, гептаноат, гексаноат, гидрохлорид, гидробромид, гидроиодид, гидроксималеат, лактат, малат, малеат, метансульфонат, меглумин, 2-нафталинсульфонат, нитрат, оксалат, памоат, персульфат, фениллактат, фосфат, дифосфат, пикрат, пивалат, пропионат, хинат, салицилат, стеарат, сукцинат, сульфамат, сульфанилат, сульфат, тартрат, тозилат (п-толуолсульфонат), трифторацетат и ундеканоат. Примеры солей оснований включают аммониевые соли; соли щелочных металлов, такие как соли натрия, лития и калия; соли щелочноземельных металлов, такие как соли алюминия, кальция и магния; соли с органическими основаниями, такие как дициклогексиламиновые соли и Ν-метил-Э-глюкамин; и соли с аминокислотами, такими как аргинин, лизин, орнитин, и так далее. Кроме того, основные содержащие азот группы можно кватернизировать такими агентами, как: низшие алкилгалогениды, такие как метил, этил, пропил и бутилгалогениды; диалкилсульфаты, такие как диметил, диэтил, дибутил; диамилсульфаты; длинноцепочечные галогениды, такие как децил, лаурил, миристил и стеарилгалогениды; арилалкилгалогениды, такие как бензилбромид и другие. Нетоксичные физиологически приемлемые соли являются предпочтительными, хотя другие соли могут быть пригодными, например, при выделении и очистке продукта.

Соли можно получить общепринятыми способами, такими как реакция свободной основной формы продукта с одним или более эквивалентами подходящей кислоты в растворителе или среде, в которой соль является нерастворимой, или в растворителе, таком как вода, который удаляют в вакууме или лиофилизируют, или обменом анионов имеющейся соли на другой анион на подходящей ионообменной смоле.

Композиции настоящего изобретения могут быть в форме, подходящей для перорального применения (например, в виде таблеток, пастилок, твердых или мягких капсул, водных или масляных суспензий, эмульсий, диспергируемых порошков или гранул, сиропов или эликсиров), для местного применения (например, в виде кремов, мазей, гелей или водных или масляных растворов или суспензий), для введения ингаляцией (например, в виде тонкодисперсного порошка или жидкого аэрозоля), для введения инсуфляцией (например, в виде тонкодисперсного порошка) или для парентерального введения (например, в виде стерильного водного или масляного раствора для внутривенного, подкожного или внутримышечного дозирования или в виде суппозитория для ректального дозирования).

Композиции настоящего изобретения можно получить общепринятыми способами, применяя общепринятые фармацевтические вспомогательные вещества, хорошо известные в данной области техники. Таким образом, композиции, предназначенные для перорального применения, могут содержать, например, один или более красителей, подсластителей, ароматизаторов и/или консервантов.

Подходящие фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества для состава таблеток включают, например, инертные разбавители, такие как лактоза, карбонат натрия, фосфат кальция или карбонат кальция; гранулирующие агенты и разрыхлители, такие как кукурузный крахмал или альгиновая кислота; связующие, такие как крахмал; смазывающие агенты, такие как стеарат магния, стеариновая кислота или тальк; консерванты, такие как: этил или пропил п-гидроксибензоат; и антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота. Составы для таблеток можно не покрывать или на них можно наносить покрытие или для изменения их распада и последующего поглощения активного ингредиента в желудочнокишечном тракте или для увеличения их стабильности и/или улучшения внешнего вида, в обоих случаях применяя общепринятые агенты для нанесения покрытия и способы, хорошо известные в данной области техники.

Композиции для перорального применения могут быть в виде твердых желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешивают с инертным твердым разбавителем, например, карбонатом кальция, фосфатом кальция или каолином, или в виде мягких желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешивают с водой или маслом, таким как арахисовое масло, жидкий парафин или оливковое масло.

Водные суспензии обычно содержат активный ингредиент в тонкоизмельченной форме или в виде нано- или тонкодисперсных частиц вместе с одним или более суспендирующими агентами, такими как карбоксиметилцеллюлоза натрия, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, альгинат натрия, поливинилпирролидон, трагакантовая камедь и аравийская камедь; диспергирующими или смачивающими агентами, такими как лецитин или продукты конденсации алкиленоксида с жирными кислотами (например, полиоксиэтиленстеарат), или продукты конденсации этиленоксида длинноцепочечного алифатического спирта, например, гептадекаэтиленоксицетанол, или продукты конденсации этиленоксида с неполными эфирами, полученными из жирных кислот и гекситола, такими как полиоксиэтиленсорбитолмоноолеат, или продукты конденсации этиленоксида с длинноцепочечными алифатическим спиртами, например, гептадекаэтиленоксицетанол, или продукты конденсации этиленоксида с неполными эфи- 22 028611 рами, полученными из жирных кислот и гекситола, такими как полиоксиэтиленсорбитолмоноолеат, или продукты конденсации этиленоксида с неполными эфирами, полученными из жирных кислот и ангидридов гекситола, например полиэтиленсорбитанмоноолеат. Водные суспензии могут также содержать один или более консервантов, таких как этил или пропил п-гидроксибензоат; антиоксидантов, таких как аскорбиновая кислота; красителей; ароматизаторов и/или подсластителей, таких как сахароза, сахарин или аспартам.

Масляные суспензии можно формулировать суспендированием активного ингредиента в растительном масле, таком как арахисовое масло, оливковое масло, кунжутное масло или кокосовое масло, или в минеральном масле, таком как жидкий парафин. Масляные суспензии могут также содержать загуститель, такой как пчелиный воск, твердый парафин или цетиловый спирт. Можно добавлять подсластители, такие как те, что описаны выше, и ароматизаторы, обеспечивая приятный на вид и вкус пероральный препарат. Данные композиции можно консервировать добавлением антиоксиданта, такого как аскорбиновая кислота.

Диспергируемые порошки и гранулы, пригодные для получения препарата водной суспензии добавлением воды, обычно содержат активный ингредиент вместе с дисперигирующим или смачивающим агентом, суспендирующим агентом и одним или более консервантами. Подходящие диспергирующие или смачивающие агенты и суспендирующие агенты представлены примерами, уже приведенными выше. Могут также присутствовать дополнительные вспомогательные вещества, такие как подсластители, ароматизаторы и красители.

Фармацевтические композиции настоящего изобретения могут также быть в виде эмульсий масла в воде. Масляная фаза может представлять собой растительное масло, такое как оливковое масло или арахисовое масло, или минеральное масло, такое как, например, жидкий парафин или смесь любого из данных. Подходящие эмульгаторы могут представлять собой, например, имеющиеся в природе камеди, такие как аравийская камедь или трагакантовая камедь, имеющиеся в природе фосфатиды, такие как соевые бобы, лецитин, эфиры или неполные эфиры, полученные из жирных кислот и ангидридов гекситола (например, сорбитанмоноолеат), и продукты конденсации указанных неполных эфиров с этиленоксидом, такие как полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат. Эмульсии могут также содержать подсластители, ароматизаторы и консерванты.

Сиропы и эликсиры можно формулировать с подсластителями, такими как глицерин, пропиленгликоль, аспартам или сахароза, и они могут также содержать смягчающий агент, консервант, ароматизатор и/или краситель.

Фармацевтические композиции могут также быть в виде стерильной инъецируемой водной или масляной суспензии, которую можно формулировать согласно известным способам, применяя один или более подходящих диспергаторов или смачивающих агентов, которые приведены выше. Стерильный инъецируемый препарат может также представлять собой стерильный инъецируемый раствор или суспензию в нетоксичном парентерально приемлемом разбавителе или растворителе, например, раствор в 1,3-бутандиоле.

Композиции для введения ингаляцией могут быть в виде общепринятого находящегося под давлением аэрозоля, приспособленного для распределения активного ингредиента, или в виде аэрозоля, содержащего мелкодисперсное твердое вещество или жидкие капли. Можно применять общепринятые аэрозольные пропелленты, такие как летучие фторированные углеводороды или углеводороды, и аэрозольное устройство удобно приспособлять для распределения дозируемого количества активного ингредиента.

Для получения дополнительной информации по формулированию, отсылаем читателя к главе 25.2 в 5 томе СотргеНепЬуе МеФсша1 СНетМгу (СогМп НапксЬ; СНаптап оГ ЕбПопа1 Воагб), Регдатоп Рге88 1990.

Количество активного ингредиента, которое смешивают с одним или более вспомогательными веществами, получая единичную лекарственную форму, будет заведомо изменяться в зависимости от реципиента, подвергаемого лечению, и конкретного пути введения. Для получения дополнительной информации по путям введения и режимам дозирования, отсылаем читателя к главе 25.3 в 5 томе СотргеНепЬуе МеФс1па1 СНетМгу (СогМп НапксЬ; СЬаитап оГ ЕбПопа1 Воагб), Регдатоп Рге88 1 990.

Способы применения.

В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) для получения лекарственного средства для применения в лечении туберкулеза или микобактериальной инфекции.

Выражение терапевтически эффективное количество включает количество сокристаллов, описанных в настоящем изобретении, которое будет вызывать биологический или медицинский ответ у субъекта, например, снижение или ингибирование активности фермента или белка, связанного с микобактери- 23 028611 альной инфекцией или туберкулезом, уменьшение интенсивности симптомов микобактериальной инфекции или туберкулеза, или замедление или задержку прогрессирования микобактериальной инфекции или туберкулеза. В некоторых вариантах осуществления выражение терапевтически эффективное количество включает количество сокристаллов, описанных в настоящем изобретении, которое при введении субъекту является эффективным, по меньшей мере, для частичного облегчения, ингибирования и/или улучшения микобактериальной инфекции или туберкулеза, и/или снижения или ингибирования роста, репликации бактерий или бактериальной нагрузки микобактерий у субъекта.

Термин субъект включает теплокровных животных, например приматов, коров, овец, собак, кошек, кроликов, крыс, полевок, тюленей и мышей. В некоторых вариантах осуществления субъект представляет собой примата, например человека. В некоторых вариантах осуществления субъект страдает от микобактериальной инфекции или туберкулеза. В некоторых вариантах осуществления субъект нуждается в лечении (например, субъект будет получать биологическую или медицинскую пользу от лечения).

Выражение ингибировать или ингибирование включает снижение исходного активности биологической активности или процесса.

Выражения лечить и лечение включают снижение или ингибирование активности фермента или белка, связанного с микобактериальной инфекцией или туберкулезом, у субъекта, облегчение одного или более симптомов микобактериальной инфекции или туберкулеза у субъекта или замедление или задержку прогрессирования микобактериальной инфекции или туберкулеза у субъекта. Выражение лечить и лечение также включает ослабление или ингибирование роста, репликации бактерий или снижение или ингибирование бактериальной нагрузки микобактерий у субъекта.

Выражение микобактериальная инфекция включает инфекции, вызванные одним или более видами из комплекса микобактерий туберкулеза, например МусоЪасЮгшт 1иЬсгси1о515. МусоЪасЮгшт ЬоуЬ. МусоЪас1епит айгсапит, МусоЪасЮпит сапеНк МусоЪас1спит саргае, МусоЪас1спит тюгой или МусоЪас1егшт риийреби. В некоторых вариантах осуществления микобактериальная инфекция представляет собой инфекцию микобактерий туберкулеза.

Термин туберкулез относится к заболеванию, вызванному заражением субъекта одним или более видами комплекса микобактерий туберкулеза. Термин туберкулез включает латентный туберкулез (ЬТВ1), нерезистентный к лекарственным средствам туберкулез, туберкулез с множественной лекарственной устойчивостью (МЭК-ТВ) и туберкулез с широкой лекарственной устойчивостью (ΧΚΌ-ТВ). Выражение латентный туберкулез включает заражение субъекта, вызванное одним или более видами комплекса микобактерий туберкулеза, но когда субъект не обязательно проявляет симптомы туберкулезного заболевания. Выражение нерезистентный к лекарственным средствам туберкулез включает туберкулез, вызванный заражением одним или более видами комплекса микобактерий туберкулеза, который не проявляет антибактериальной устойчивости к стандартной терапии туберкулеза. Выражение туберкулез с множественной лекарственной устойчивостью (МЭК-ТВ) включает туберкулез, вызванный заражением одним или более видами комплекса микобактерий туберкулеза, который является устойчивым к рифампицину и изониазиду. Выражение туберкулез с широкой лекарственной устойчивостью (ΧΚΌТВ) включает туберкулез, вызванный одним или более видами комплекса микобактерий туберкулеза, который является устойчивым к рифампицину и изониазиду, а также любому члену хинолонового семейства, и является устойчивым по меньшей мере к одному из канамицина, капреомицина и амикацина. В некоторых вариантах осуществления туберкулезная инфекция является острой. В некоторых вариантах осуществления туберкулезная инфекция является хронической.

В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли для ингибирования ΌριΈΕ

В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) для получения лекарственного средства для применения в ингибировании ΌριΈΕ

В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к способу ингибирования ΌριΈΕ включающему контакт клетки с терапевтически эффективным количеством соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.

Комбинации.

Соединения, описанные в настоящем изобретении, можно применять в виде монотерапии, или терапия может включать одно или более других веществ и/или терапий. Данную совместную терапию можно осуществлять посредством одновременного, последовательного или раздельного введения отдельных компонентов терапии. Когда введение является последовательным или раздельным, задержка введения второго компонента не должна быть такой, чтобы терялся полезный эффект комбинации. Подходящие классы и вещества включают один или более антибактериальных агентов, пригодных в лечении микобактериальных инфекций и/или туберкулеза, таких как, например, рифампицин, изониазид, пиризинамид, этамбутол, хинолоны (например, ципрофлоксацин, левофлоксацин, моксифлоксацин и гатифлоксацин), аминогликозиды (например, стрептомицин, канамицин и амикацин), полипептиды (например, капреомицин, биомицин и энвиомицин), рифабутин, кларитромицин, линезолид, тиоацетазон, тиоридазин, аргинин, витамин Ό и К207910.

- 24 028611

Примеры

Все безводные растворители, чистые для анализа растворители для хроматографии и исходные соединения покупали или у Зфша А16псй Сйетюа1 Со., или у ИкЬег δοίοηΙίΠο. Воду перегоняли и очищали системой для очистки воды МПН-0 (Мййроге Согр., ВебГогб. МА). Общие способы очистки соединений включали применение картриджей с силикагелем, приобретенных у Огасе Рштйсайоп ууДепъ. Реакции контролировали ТСХ на предварительно покрытых силикагельных пластинках Мегск 60 Р254 и визуализировали, применяя УФ-свет (254 нм). Все соединения анализировали на чистоту ВЭЖХ и охарактеризовывали ¹Н ЯМР, применяя Вгикег 300 МГц ЯМР и/или Вгикег 400 МГц ЯМР спектрометры. Химические сдвиги приводят в м.д. (δ) относительно пика остаточного растворителя в соответствующих спектрах; хлороформ δ 7,26, метанол δ 3,31, ΌΜ8Ο-ά₆ δ 3,33, и константы взаимодействия (й) приводят в герцах (Гц) (где с=синглет, ушс=уширенный синглет, д=дублет, дд=дублет дублетов, ушд=уширенный дублет, ддд=дублет дублетов дуплетов, т=триплет, тт=триплет триплетов, кв=квартет, м=мультиплет) и анализируют, применяя программное обеспечение для обработки ЯМР данных АСЭ. Величины масс-спектров приводят в виде ш/ζ. Все реакции проводили в атмосфере азота, если не указано иначе. Растворители удаляли в вакууме на роторном испарителе.

Сокращения:

ХМР=Ы-метилпирролидин;

НС1=хлористо-водородная кислота;

ПМР=Х,Х-диметилформамид;

ЫаН=гидрид натрия;

Е1=электроспрей ионизация;

НРМЗ=шасс-спектрометрия высокого разрешения.

Промежуточное соединение 3: к перемешиваемой суспензии ЫаН (60%) в сухом ЭМР добавляли по каплям в течение периода 30 мин диэтилмалонат. К данной смеси добавляли порциями замещенный 2хлор-3-нитропиридин в течение периода 1 ч, и перемешивали содержимое при комнатной температуре в течение 90 мин. Содержимое нагревали при 80°С в течение периода 30 мин и выдерживали в течение 1 ч. ЭМР отгоняли из реакционной смеси в вакууме и остаток разбавляли водой. рН реакционной смеси доводили до диапазона 5-6 и экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой, соляным раствором, сушили над безводным Ν;·ι₂3Ο₄ и концентрировали упариванием на роторе, получая оранжевую маслянистую жидкость. Соединение применяли как есть в следующей стадии без дополнительной очистки.

Промежуточное соединение 4: к перемешиваемому раствору промежуточного соединения 3 в ЭМЗО:Н₂О добавляли ЫС1 и реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 16 ч. Затем, реакционную смесь выливали в воду и экстрагировали этилацетатом. Объединенный органический слой промывали водой, соляным раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле, применяя этилацетат в гексане, получая промежуточное соединение 4.

Промежуточное соединение 5: к перемешиваемому раствору промежуточного соединения 4 в ЭМР добавляли ЭМР-ЭМА, и реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 16 ч. После завершения реакции реакционную смесь выливали в смесь воды и льда и экстрагировали этилацетатом. Объединенный органический слой промывали водой, соляным раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении, получая промежуточное соединение 5. Неочищенный материал применяли в следующей стадии без очистки.

Промежуточное соединение 6: к перемешиваемому раствору промежуточного соединения 5 в уксусной кислоте добавляли одной порцией порошок Ре, и смесь перемешивали при 60°С в течение 2 ч. Затем, реакционную смесь разбавляли метанолом и фильтровали через целит. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле, применяя этилацетат, получая промежуточное соединение 6 в виде твердого остатка.

Промежуточное соединение 7: к перемешиваемому раствору промежуточного соединения 6 и К₂СО₃ в ЭМР добавляли арилгалогенид, и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Полученную в результате смесь выливали в воду и экстрагировали дихлорметаном. Объединенный органический слой промывали водой, соляным раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении, получая промежуточное соединение 7 в виде твердого остатка или жидкости.

Промежуточное соединение 6 и К₂СО₃ растворяли в сухом ЭМР в атмосфере азота. К ним добавляли арилгалогенид. Полученную в результате реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 3 ч. ЭМР отгоняли досуха, разбавляли водой и экстрагировали ЭСМ. Очистку осуществляли на системе комбифлэш, получая промежуточное соединение 7 в виде твердого остатка или жидкости.

Промежуточное соединение 6 растворяли в ЭМР в атмосфере азота. К нему при 0°С добавляли №-)Н. Через 5 мин добавляли арилгалогенид. Полученную в результате реакционную смесь перемешива- 25 028611 ли при комнатной температуре в течение 6 ч. Реакционную смесь выливали на лед с водой, добавляли этилацетат. Органический слой отделяли и промывали соляным раствором и концентрировали. Очистку осуществляли на системе комбифлэш, получая промежуточное соединение 7 в виде твердого остатка или жидкости.

Промежуточное соединение 8: к раствору промежуточного соединения 7 в этаноле, добавляли гидроксид лития в воде. Реакционную смесь перемешивали в течение 5 ч при комнатной температуре. Растворитель отгоняли при пониженном давлении, получая промежуточное соединение 8 в виде грязнобелого твердого остатка.

К раствору промежуточного соединения 7 в метаноле добавляли гидроксид лития в воде. Реакционную смесь перемешивали при 60°С в течение 3 ч. Растворитель отгоняли при пониженном давлении, нейтрализовали уксусной кислотой, получая промежуточное соединение 8 в виде грязно-белого твердого остатка.

Промежуточное соединение 11: к раствору 2-хлор-5-(трифторметил)пиридина (5 г, 27,60 ммоль) в метаноле добавляли метоксид натрия (2,98 г, 55,20 ммоль) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 6 ч при комнатной температуре. Затем, растворитель удаляли в вакууме. Полученную в результате смесь выливали в воду (100 мл), добавляли воду, экстрагировали этилацетатом (2x50 мл). Объединенный органический слой промывали водой, соляным раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении, получая 2-метокси-5-(трифторметил)пиридин (11) в виде бледно-желтой жидкости (4 г, 82,1%).

Промежуточное соединение 12: к перемешиваемому раствору 2-метокси-5(трифторметил)пиридина (4 г, 22,58 ммоль), растворенного в ацетонитриле (50 мл) добавляли порциями при 0°С ΝΒδ (6 г, 33,87 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Растворитель удаляли в вакууме, гасили водой (100 мл) и экстрагировали этилацетатом. Объединенный органический слой промывали водой, соляным раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении, получая 3-бром-2-метокси-5-(трифторметил)пиридин (12) в виде бледно-желтой жидкости (2 г, 34,7%).

Промежуточное соединение 13: к перемешиваемому раствору 3-бром-2-метокси-5(трифторметил)пиридина (23) (1,2 г, 4,68 ммоль), растворенного в смеси метанол (10 мл)/толуол (10 мл), добавляли триэтиламин (1 мл, 7,65 ммоль) и дихлорид [1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен]палладия(11) (70 мг, 0,102 ммоль). Реакционную смесь карбонилировали в атмосфере СО (5 кг) при 80°С в течение 12 ч. Затем, растворитель фильтровали через целит и растворитель концентрировали в вакууме, получая неочищенный остаток. Неочищенное соединение очищали хроматографией на силикагеле, элюируя 30% этилацетата в гексане, получая метил 2-метокси-5(трифторметил)никотинат (13) в виде жидкости (0,5 г, 45,4%).

Промежуточное соединение 14: к раствору метил 2-метокси-5-(трифторметил)никотината (13) (0,5 г, 2,12 ммоль), растворенного в Ό0Μ, добавляли ΌΙΒΑΕ-Η (6,38 мл, 1 М в толуоле) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Затем, реакционную смесь гасили насыщенным раствором ΝΗ₄Ο1 и экстрагировали этилацетатом (2x25 мл). Объединенный органический слой промывали водой, соляным раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении, получая (2-метокси-5-(трифторметил)пиридин-3-ил)метанол (14) в виде бледножелтой жидкости (0,4 г, 90%).

Промежуточное соединение 15: к раствору 2-метокси-5-(трифторметил)пиридин-3-ил)метанола (14) (0,4 г, 1,93 ммоль), растворенного в Ό0Μ, добавляли тионилхлорид (0,38 мл, 3,86 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Растворитель отгоняли при пониженном давлении и реакционную смесь выливали в воду (50 мл) и экстрагировали Ό0Μ (2x50 мл). Объединенный органический слой промывали водой, соляным раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении, получая 3-(хлорметил)-2-метокси-5-(трифторметил)пиридин (15) в виде жидкости, (выход 0,3 г, 69,76%).

Промежуточное соединение 17: к раствору 2,6-дихлор-5-фторникотиновой кислоты (16) (5 г, 23,8 ммоль) в метаноле (50 мл) добавляли по каплям тионилхлорид (5,66 г, 47,62 ммоль) при 0°С и 2 капли ΌΜΡ [наблюдали интенсивное образование пузырьков]. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. К ней добавляли метанол и перемешивали реакционную смесь в течение 2 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, и смесь выливали в охлажденную льдом воду (20 мл) и экстрагировали дихлорметаном (2x50 мл). Объединенный органический слой промывали водой, соляным раствором, и растворитель отгоняли при пониженном давлении, получая метил 2,6-дихлор-5-фторникотинат (17) (5 г, 93,8%).

Промежуточное соединение 18: смесь метил 2,6-дихлор-5-фторникотината (17) (3,5 г, 15,62 ммоль), триметилбороксина (1,96 г, 15,62 ммоль), дихлорметанового комплекса дихлорида 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроценпалладия(П) (1,276 г, 1,562 ммоль) и карбоната цезия (15,27 г, 46,86 ммоль)

- 26 028611 нагревали при 110°С в течение ночи. Смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли водой и экстрагировали ЕЮАс. Объединенную органическую фазу промывали водой, с последующей промывкой соляным раствором, затем, сушили над безводным сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле, применяя градиент 0-30% ЕЮАс/гептан, получая метил 2-хлор-5-фтор-6-метилникотинат (18) 0,8 г в виде бесцветного твердого остатка (0,8 г, 25%).

Промежуточное соединение 19: к перемешиваемому раствору метил 2-хлор-5-фтор-6метилникотината (18) (0,8 г, 3,92 ммоль) в ТНР (35 мл) добавляли метанолат натрия (0,42 г, 7,85 ммоль) при 0°С. Смесь перемешивали при 60°С в течение 6 ч и охлаждали до комнатной температуры. Затем, смесь выливали в воду и экстрагировали дихлорметаном (2x50 мл). Объединенный органический слой промывали водой, соляным раствором и растворитель отгоняли при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, элюируя 10% этилацетатом в гексане, получая метил 5-фтор-2-метокси-6-метилникотинат (19) (250 мг, 32%) в виде белого твердого остатка.

Промежуточное соединение 20: к раствору метил 5-фтор-2-метокси-6-метилникотината (19) (0,25 г, ммоль) в МЭС добавляли по каплям ΌΙΒΑΤ-Н (2,5 мл, 1 М в толуоле) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Реакцию гасили насыщенным раствором хлорида аммония и экстрагировали ОСМ (2x50 мл). Объединенный органический слой промывали водой, соляным раствором, и растворитель отгоняли при пониженном давлении, получая (5-фтор-2-метокси-6метилпиридин-3-ил)метанол (20) в виде жидкости (0,2 г, 90%).

Промежуточное соединение 21: к раствору (5-фтор-2-метокси-6-метилпиридин-3-ил)метанола (20) (0,2 г, 1,16 ммоль) в ОСМ добавляли тионилхлорид (0,278 г, 2,33 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Растворитель отгоняли при пониженном давлении, и реакционную смесь выливали в воду (50 мл) и экстрагировали ОСМ (2x50 мл). Объединенный органический слой промывали водой, соляным раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении, получая 3-(хлорметил)-5-фтор-2-метокси-6-метилпиридин (21) в виде бледножелтой жидкости (0,2 г) 90%.

Промежуточное соединение 23: к раствору этил 6-хлор-5-метилпиримидин-4-карбоксилата (35) (0,9 г, 4,48 ммоль), растворенного в диоксане (20 мл), добавляли диметиламин в ТНР (1 М, 22,43 мл, 22,43 ммоль) и диизопропилэтиламин (3 мл, 22,43 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 80°С в течение 16 ч. Затем, смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли водой и экстрагировали ЕЮАс (2x50 мл). Объединенный органический слой промывали водой, соляным раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении, получая этил 6-(диметиламино)-5метилпиримидин-4-карбоксилат (23) в виде светло-желтой жидкости; 0,4 г (43%).

Промежуточное соединение 24: к перемешиваемому раствору этил 6-(диметиламино)-5метилпиримидин-4-карбоксилата (23) (0,4 г, 1,91 ммоль) в МеОН (10 мл) добавляли порциями NаΒН₄(0,14 г, 3,82 ммоль) при 0°С и смесь перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Растворитель отгоняли при пониженном давлении, реакционную смесь выливали в воду (20 мл) и экстрагировали этилацетатом (3x30 мл). Объединенный органический слой промывали водой, соляным раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении, получая (6-(диметиламино)5-метилпиримидин-4-ил)метанол (24); 0,1 г, (31,3%).

Промежуточное соединение 25: к раствору (6-(диметиламино)-5-метилпиримидин-4-ил)метанола (24) (0,1 г, 0,60 ммоль) в ОСМ добавляли тионилхлорид (0,14 г, 1,1961 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре. Растворитель удаляли при пониженном давлении, получая 6-(хлорметил)-Л,Щ5-триметилпиримидин-4-амин (25) в виде белого твердого остатка; 0,1 г, 90,9%.

Промежуточное соединение 27: 2-хлор-6-трифторметилпиридин (1,0 г, 5,5 ммоль) в растворе ТНР (10 мл) медленно добавляли к охлажденному (при -78°С) раствору ЬЭЛ (4,58 мл, 8,2 ммоль) в сухом ТНР (15 мл). Полученную в результате смесь перемешивали в течение 4 ч при -78°С перед добавлением метилйодида (0,705 мл, 0,0082 ммоль) в ТНР (4 мл). Перемешивание продолжали в течение 4 ч при -75°С перед гашением водой (10 мл) при той же температуре и дополнительным количеством воды (15 мл) при 0°С через 2 ч. Неочищенный продукт экстрагировали этилацетатом, промывали соляным раствором, и объединенный органический слой сушили над №ьЗО₄. и растворитель удаляли в вакууме, получая неочищенный твердый остаток, который очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (этилацетат/петролейный эфир (0-10%), получая 27 грязно-белого твердого остатка; (0,6 г, 33%).

Промежуточное соединение 28: в установке типа 1шу с1ауе, 2-хлор-3-метил-6(трифторметил)пиридин (27) (0,5 г, 2,5 ммоль) растворяли в МеОН (10 мл) и добавляли ТЕА (0,5 мл, 3,7 ммоль), который дегазировали в течение 15 мин азотом перед добавлением комплекса Рб(бррГ)С1₂-0СМ (0,061 г, 0,075 ммоль). Химический реактор типа 1шу с1ауе заполняли газообразным СО (75 ρδί, 5 кг) и нагревали при 75°С в течение 16 ч. Смесь фильтровали через целит и промывали метанолом. Объеди- 27 028611 ненный фильтрат концентрировали и неочищенный остаток очищали колоночной флэш-хроматографией на силикагеле (этилацетат/гексан (0-10%), получая метил 3-метил-6-(трифторметил)пиколинат (28): грязно-белый твердый остаток; (280 мг, 49,9%).

Промежуточное соединение 29: к раствору метил 3-метил-6-(трифторметил)пиколината (0,28 г) в ЭСМ (10 мл) при -78°С добавляли П1ВАЬ-Н (1,92 мл,1,91 ммоль) в атмосфере азота. Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 1 ч. Реакционную смесь гасили раствором хлорида аммония и экстрагировали этилацетатом (330 мл). Объединенный органический слой промывали соляным раствором, сушили над Ыа₂8О₄ и концентрировали, получая 3-метил-6(трифторметил)пиридин-2-ил)метанол (29). Неочищенный спирт применяли непосредственно в следующей стадии (180 мг, 72%).

Промежуточное соединение 30: к раствору (3-метил-6-(трифторметил)пиридин-2-ил)метанола (29) (0,18 г, 0,94 ммоль) в ОСМ (5 мл) добавляли тионилхлорид (0,112 г, 0,95 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. После завершения реакции смесь концентрировали и промывали гексаном, получая 2-(хлорметил)-3-метил-6-(трифторметил)пиридин (30).

Неочищенный твердый остаток применяли непосредственно в следующей стадии (180 мг, 91,8%).

Промежуточное соединение 32: к перемешиваемому раствору 1-(2,4-диметилфенил)этан-1-она (1,0 г, 0,0067 моль) в МеОН (10 мл) добавляли порциями ЫаВН₄ (0,77 г, 0,020 моль) при 0°С. Полученную в результате смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. После завершения реакции смесь гасили охлажденной на льду водой (2,5 мл) и растворитель концентрировали при пониженном давлении. Реакционную смесь разбавляли водой и экстрагировали ЕЮАс (3x15 мл). Объединенный органический слой промывали водой, соляным раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенную смесь сразу пропускали через слой силикагеля и промывали 3:1 гексан:ЕЮАс, получая (0,9 г, 88,8%) заявленного в заголовке соединения 32 в виде белого твердого остатка.

Промежуточное соединение 33: к перемешиваемому раствору 1-(2, 4-диметилфенил)этан-1-ола (32) (0,9 г, 0,006 моль) в СН₂С1₂ (10 мл) добавляли трибромид фосфора (0,85 мл, 0,009 моль) при комнатной температуре. Перемешивание продолжали в течение следующих 2 ч при той же температуре. Смесь гасили водой и экстрагировали СН₂С1₂ (3x15 мл). Объединенный органический слой промывали водой, соляным раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении, получая заявленный в заголовке продукт (33) в виде светло-оранжевого твердого остатка (900 мг, 70,8% выход).

Промежуточное соединение 35: к раствору 2,5-дибром-3-метилпиридина (1) 3 г, 12,1 ммоль) в метаноле (20 мл) добавляли метоксид натрия (2 М, 20 мл) и кипятили с обратным холодильником при 100°С в течение 2 ч. Реакционную смесь выливали в воду со льдом и нейтрализовали водной хлористоводородной кислотой (1 М) и экстрагировали дихлорметаном (2x15 мл). Объединенный органический слой промывали водой, соляным раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении, получая 5-бром-2-метокси-3-метилпиридин (35), который применяли без дополнительной очистки (1,9 г, 77,8%).

Промежуточное соединение 36: к раствору 5-бром-2-метокси-3-метилпиридина (1,0 г, 5,0 ммоль) в ΌΜΡ (10 мл) добавляли СиСЫ (0,534 г, 6,0 ммоль), и полученную в результате смесь кипятили с обратным холодильником в течение 28 ч. После охлаждения до комнатной температуры смесь разбавляли ЕЮАс и промывали 10% раствором аммиака, с последующей промывкой водой и соляным раствором. Органический слой отделяли, сушили над М§§О₄ и упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали флэш-хроматографией (5% ЕЮАс/гексан), получая 5-циано-2-метокси-3-метилпиридин (36) (0,68 г, 93%).

Промежуточное соединение 37: к раствору метил 5-циано-2-метокси-3-метилпиридина (36) (0,25 г, 1,7 ммоль) в СС1₄ (10 мл) добавляли Ν-бромсукцинимид (346 мг, 1,7 ммоль) и 2',2азобисизобутиронитрил (13,0 мг, 0,085 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 1 ч. Реакционную смесь фильтровали, и фильтрат концентрировали, получая 5-(бромметил)-6метоксиникотинонитрил (37) в виде желтого твердого остатка; (180 мг, 46,9%).

Промежуточное соединение 39: к раствору 38 (300 г, 2,94 моль) и этилпропионата (429,4 г, 2,94 моль) в 1,8 л безводного ЕЮН добавляли №ЮЕ1 (300 г, 4,41 моль) при комнатной температуре. Смесь перемешивали в течение ночи. После охлаждения, смесь доводили до рН 7 6Ν НС1. Смесь концентрировали в вакууме. Остаток разбавляли водой и затем экстрагировали ЕЮАс. Объединенные ЕЮАс слои сушили над Ыа₂8О₄ и концентрировали в вакууме, получая продукт 39 (400 г, 67%) в виде красной жидкости без дополнительной очистки для следующей стадии.

Ή ЯМР (400 МГц, СРСЕ): δ м.д. 4,103-4,386 (м, 5Н); 1,246-1,439 (м, 9Н).

Промежуточное соединение 40: Смесь 39 (300 г, 1,485 моль), ацетата формимидамида (225 г, 2,12

- 28 028611 моль) и ΝαΟΕι (160 г, 2,36 моль) в ΕΐΟΗ (2000 мл) кипятили с обратным холодильником в течение 12 ч. После охлаждения, смесь доводили до рН 7 6N НС1. Смесь концентрировали в вакууме. Остаток разбавляли водой, и затем экстрагировали Ό0Μ. Объединенные Ό0Μ слои промывали водой, соляным раствором и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали хроматографией на силикагеле (РЕ: ЕЮАс = 1:1-чистый ЕЮАс). получая продукт в виде белого твердого остатка (80 г, 30% выход).

Εδ+Μδ т/ζ: 183,0 (М+1).

¹Н ЯМР (400 МГц, СЭС1₃): δ м.д. 8,126 (с, 1Н); 4,345-4,399 (м,2Н); 2,242 (с, 3Н); 1,337-1,373 (т, 3Н).

Промежуточное соединение 41: раствор 40 (80 г, 0,44 моль) в РОС1₃ (800 г) кипятили с обратным холодильником в течение 4 ч. После охлаждения, избыток РОС1₃ удаляли при пониженном давлении, получая 41 (88 г неочищенный, 100% выход) в виде черного масла.

Εδ+Μδ т/ζ: 201,0 (М+1).

'II ЯМР (400 МГц, СЭС1₃): δ м.д. 8,954 (с, 1Н); 4,492-4,545 (м,2Н); 2,591 (с, 3Н); 1,454-1, 490 (т,

3Н).

Промежуточное соединение 42: к раствору 41 (88 г, 0,4 моль) в СН₃ОН (1 л) добавляли ί',Ή,ΟΝα (40 г, 0,74 моль) при комнатной температуре, и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Смесь доводили до рН 7 6Ν НС1. Смесь концентрировали в вакууме. Остаток разбавляли водой, и затем экстрагировали ΕιΟΑο. Объеденные ΕΐΟАс слои сушили над безводным Να₂δΟ.₄ и концентрировали в вакууме. Неочищенный продукт очищали хроматографией на силикагеле (РЕ: ΕιΟΑο =5:1), получая 42 (10 г, 14% выход) в виде желтого масла.

Εδ+Μδ т/ζ: 197,0 (М+1).

'II ЯМР (400 МГц, СЭС1₃): δ м.д. 8,626 (с, 1Н), 4,357-4,410 (м, 2Н), 3,969 (с, 3Н), 2,279 (с, 3Н), 1,344-1,380 (т, 3Н).

Промежуточное соединение 43: к раствору 42 (10 г, 0,057 моль) в СН₃ОН (100 мл) добавляли ΝαΒΗ.₄(10 г, 0,29 моль) при 0°С, полученную в результате реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч. Смесь концентрировали в вакууме и распределяли между водой и ΕιΟΑο. Водный слой экстрагировали ΕιΟΑο. Объеденные ΕιΟΑο слои сушили над Να₂δΟ₄, фильтровали и концентрировали в вакууме, получая 43 (7,5 г, 85% выход) в виде белого твердого остатка.

Εδ+Μδ т/ζ: 155,0 (М+1).

'Н ЯМР (400 МГц, СЭС1₃): δ м.д. 8,629 (с, 1Н), 4,641 (с, 2Н), 4,007 (с, 3Н), 2,028 (с, 3Н).

Промежуточное соединение 44: к раствору 43 (7,5 г, 48,7 ммоль) в Ό0Μ (150 мл) добавляли δΟΟ₂(75 г, 0,64 моль) при 0°С. Полученную в результате реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч. ТЬС показала потребление исходного соединения. Смесь концентрировали в вакууме, получая 44 (8,3 г, 99% выход) в виде желтого твердого остатка.

Εδ+Μδ т/ζ: 173,0 (М+1).

'Н ЯМР (400 МГц, СЭС1₃): δ м.д. 8,877 (с, 1Н), 4,992 (с, 2Н), 4,207 (с, 3Н), 2,317 (с, 3Н).

Промежуточное соединение 41: раствор этил 6-гидрокси-5-метилпиримидин-4-карбоксилата 40 (100 г, 549 ммоль) в ΡΟΟ1₃ (1000 мл) кипятили с обратным холодильником в течение 5 ч при 100°С в герметичной пробирке. После охлаждения до комнатной температуры, избыток ΡΟΟ1₃ удаляли при пониженном давлении, затем гасили водой со льдом и экстрагировали ΕιΟΑο. Объединенную органическую фазу промывали водой, соляным раствором и концентрировали при пониженном давлении, получая этил 6-хлор-5-метилпиримидин-4-карбоксилат 41 в виде черной жидкости, выход: 80 г (72%). Данный материал применяли как есть в следующей стадии без очистки.

Промежуточное соединение 45: к раствору этил 6-хлор-5-метилпиримидин-4-карбоксилата (41) (80 г, 398,0 ммоль), растворенного в диоксане (800 мл), добавляли диметиламин в ТНР (2 М, 600 мл, 1196,0 ммоль) и диизопропилэтиламин (330 мл, 1990,0 ммоль). Реакционную смесь нагревали при 80°С в течение 16 ч. Затем, смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли водой и экстрагировали ΕιΟΑο (2x50 мл). Объединенный органический слой промывали водой, соляным раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении, получая этил 6-(диметиламино)-5метилпиримидин-4-карбоксилат (45) в виде светло-желтой жидкости; выход: 60 г (72%).

Промежуточное соединение 46: к перемешиваемому раствору этил 6-(диметиламино)-5метилпиримидин-4-карбоксилата (45) (60,0 г, 287,0 ммоль) в БЮН (600 мл) добавляли порциями ЫаВН₄(21,82 г, 574,0 ммоль) при 0°С и смесь перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Растворитель отгоняли при пониженном давлении, реакционную смесь выливали в воду (200 мл) и экстрагировали этилацетатом (3x100 мл). Объединенный органический слой промывали водой, соляным раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении, получая (6(диметиламино)-5-метилпиримидин-4-ил)метанол (46); 47 г, (97%).

Промежуточное соединение 47: к раствору (6-(диметиламино)-5-метилпиримидин-4-ил)метанола (46)(40 г, 239 ммоль) в Ό0Μ добавляли тионилхлорид (35 мл, 478 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре. Растворитель удаляли при пониженном давлении, получая 6-(хлорметил)-М,Ы,5-триметилпиримидин-4-амин (47) в виде коричневого твердого остатка; вы- 29 028611 ход: 40 г (90,9%).

А ЯМР (400 МГц, ПМЗО-Ч,,) δ 8,69 (с, 1Н), 4,86 (с, 2Н), 3,27 (с, 6Н), 2,35 (с, 3Н).

Фиг. 15 показывает схему получения 10 для получения промежуточных соединений 48а и 486-50.

Промежуточное соединение 486: в круглодонную колбу (5 л) добавляли этил 6-гидрокси-5метилпиримидин-4-карбоксилат 40 (85 г, 466 ммоль), натриевую соль хлордифторуксусной кислоты (106,7 г, 699 ммоль), карбонат натрия (98,9 г, 933 ммоль), ацетонитрил (1500 мл) и ΌΜΡ (425 мл). Реакционную смесь нагревали при 90°С в течение 16 ч. Протекание реакции контролировали БСМЗ. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, и затем нейтрализовали насыщенным хлоридом аммония. Растворитель удаляли в вакууме и экстрагировали этилацетатом. Объединенный органический слой промывали водой, соляным раствором и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенное соединение очищали хроматографией на силикагеле, элюируя (3-4% этилацетата), получая этил 6(дифторметокси)-5-метилпиримидин-4-карбоксилат 486 в виде бледно-желтой жидкости. Выход: 14 г (13%).

Промежуточное соединение 49: к перемешиваемому раствору 6-(дифторметокси)-5метилпиримидин-4-карбоксилата 486 (14 г, 60,30 ммоль) в этаноле (200 мл), добавляли Νί-ιΒΗ, (4,58 г, 120,59 ммоль) при 0°С, и смесь перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Затем, растворитель отгоняли при пониженном давлении, реакционную смесь выливали в воду и экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали водой соляным раствором и концентрировали при пониженном давлении, получая (6-(дифторметокси)-5-метилпиримидин-4-ил)метанол 39 в виде желтого твердого остатка, выход: 8,4 г (73,3%).

Промежуточное соединение 50: к раствору (6-(дифторметокси)-5-метилпиримидин-4-ил)метанола 49 (15 г, 78,94 ммоль), растворенного в ОСМ (150 мл), добавляли тионилхлорид (8,59 мл, 118,42 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре. Растворитель удаляли вакуумным насосом, получая 4-(хлорметил)-6-(дифторметокси)-5-метилпиримидин 50 в виде коричневого твердого остатка, выход: 14 г (85%);

¹Н ЯМР (400 МГц, ПМЗО-Ч,,) δ 8,74 (с, 1Н), 7,77 (т, 1Н, 1=95,4 Гц), 4,81 (с, 2Н), 2,24 (с, 3Н).

Пример 1: 1-(1-(2,6-дифторфенил)этил)-Щ2-фторэтил)-1Н-пирроло[3,2-6]пиридин-3-карбоксамид

См. фиг. 16(а). 1-(1-(2,6-Дифторфенил)этил)-1Н-пирроло[3,2-6]пиридин-3-карбоновую кислоту (0,090 г, 0,30 ммоль), 2-фторэтанамин (0,019 г, 0,30 ммоль) и триэтиламин (0,166 мл, 1,19 ммоль) растворяли в ОСМ (15 мл) в атмосфере Ν₂ и перемешивали. Через 5 мин добавляли циклический ангидрид 1пропанфосфорной кислоты (0,379 г, 1,19 ммоль). Полученную в результате реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 40 мин. БСМЗ показала образование требуемого продукта. Реакционную смесь разбавляли БСМ и водой. БСМ слой экстрагировали и промывали соляным раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали. Очистку осуществляли на АаАъ КР системе, получая продукт, 1-(1-(2,6-дифторфенил)этил)-^(2-фторэтил)-1Н-пирроло[3,2-6]пиридин-3-карбоксамид (0,040 г, 38,7%) в виде твердого остатка.

ЕЗ+МЗ т/ζ: 348,40.

¹Н ЯМР (300 МГц, ОМЗО-а₆): δ м.д. 2,05 (д, 1=6,97 Гц, 3Н), 3,67 (кв, 1=5,21 Гц, 1Н), 3,71-3,82 (м, 1Н), 4,49 (т, 1=4,90 Гц, 1Н), 4,65 (т, 1=4,99 Гц, 1Н), 6,22 (кв, 1=7,16 Гц, 1н), 7,13 (т, 1=8,57 Гц, 2Н), 7,29 (дд, 1=8,48, 4,71 Гц, 1Н), 7,34-7,52 (м, 1н), 7,80 (д, 1=8,29 Гц, 1Н), 8,41 (с, 1Н), 8,50 (д, 1=4,71 Гц, 1Н), 8,92 (т, 1=5,75 Гц, 1Н).

Пример 2: №(циклопропилметил)-1-(5-фтор-2-метоксибензил)-7-метил-1Н-пирроло[3,2-6]пиридин3-карбоксамид

См. фиг. 16(6). К перемешиваемому раствору 1-(5-фтор-2-метоксибензил)-7-метил-1Н-пирроло[3,26]пиридин-3-карбоновой кислоты (0,22 г, 0,000699 моль) в дихлорметане (10 мл) добавляли 2-фторэтан1-амин (0,06 г, 0,000836 моль), триэтиламин (0,29 мл, 0,002 моль) и Т3Р (1,32 мл, 0,002 моль), и смесь перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь выливали в воду и экстра- 30 028611 гировали дихлорметаном. Объединенный органический слой промывали водой, соляным раствором и растворитель отгоняли при пониженном давлении. Неочищенный остаток очищали колоночной флэшхроматографией, применяя 50% этилацетат в гексане, получая Х-(циклопропилметил)-1-(5-фтор-2метоксибензил)-7-метил-1Н-пирроло[3,2-Ъ]пиридин-3-карбоксамид в виде грязно-белого твердого остатка, выход-24%.

Εδ+Μδ т/ζ: 368.

¹Н ЯМР (400 МГц, ΏΜδΟ-ά6): δ м.д.: 0,22-0,24 (м, 2Н), 0,48-0,50 (м, 2Н), 1,05-1,09 (м, 1Н), 2,44 (с, 3Н), 3,28 (т, 2Н, 1=6,2 Гц), 3,86 (с, 3Н), 5,63 (с, 2Н), 5,97-6,00 (м, 1Н), 7,03-7,04 (м, 1Н), 7,12-7,14 (м, 2Н), 8,22 (с, 1Н), 8,37 (д, 1Н, 1=4,8 Гц), 9,01 (т, 1Н, 1=5,6 Гц).

Пример 3: Х-(2-фторэтил)-1-((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-1Н-пирроло[3,2Ъ]пиридин-3 -карбоксамид

См. фиг. 16(с). 1-((6-Метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-1Н-пирроло[3,2-Ъ]пиридин-3карбоновую кислоту (250 мг, 0,84 ммоль) растворяли в 100 мл одногорлой колбе, снабженной воздушным холодильником, соединенным с источником азота. Добавляли 1)СМ (10 мл), получая суспензию. Добавляли триэтиламин (1,162 мл, 8,38 ммоль), получая прозрачный раствор. Добавляли циклический ангидрид 1-пропанфосфорной кислоты (1,497 мл, 2,51 ммоль), с последующим добавлением гидрохлорида 2-фторэтанамина (83 мг, 0,84 ммоль). Реакционную массу перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, наблюдали образование суспензии. После завершения реакции разбавляли ОСМ, добавляли воду, и отделенный ОСМ слой промывали соляным раствором. ОСМ слой сушили над сульфатом натрия, упаривали и очищали соединение колоночной хроматографией, выход - 52%.

Εδ+Μδ т/ζ: 344 (М+1).

¹Н ЯМР (300 МГц, ΏΜδΟ-ά6): δ м.д. 2,25 (с, 20Н), 3,67 (д, 1=5,46 Гц, 7Н), 3,77 (д, 1=5,46 Гц, 7Н), 4,50 (т, 1=4,90 Гц, 7Н), 4,66 (т, 1=4,99 Гц, 7Н), 5,69 (с, 13Н), 7,26 (дд, 1=8,29, 4,71 Гц, 7Н), 7,94 (д, 1=8,48 Гц, 7Н), 8,28 (с, 7Н), 8,41 (с, 6Н), 8,49 (д, 1=4,52 Гц, 7Н), 8,95 (т, 1=5,84 Гц, 7Н).

Пример 4: Х-(циклопропилметил)-1-((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-1Н-пирроло[3,2Ъ]пиридин-3 -карбоксамид

См. фиг. 16(Ъ). 1-((6-Метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-1Н-пирроло[3,2-Ъ]пиридин-3карбоновую кислоту (200 мг, 0,67 ммоль) растворяли в 1)С\1 (10 мл). Добавляли циклический ангидрид 1-пропанфосфорной кислоты (427 мг, 1,34 ммоль), с последующим добавлением триэтиламина (339 мг, 3,35 ммоль) и циклопропилметанамина (95 мг, 1,34 ммоль). Реакционную массу перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После завершения реакции добавляли воду и экстрагировали ^СΜ. Органический слой промывали водой и соляным раствором. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом натрия. Упаривали органический слой, получая остаток, который очищали колоночной хроматографией, получая чистое соединение. Выход - 74%.

Εδ+Μδ т/ζ: 352,38 (М+1).

¹Н ЯМР (300 МГц, ΏΜδΟ-ά6): δ м.д. 0,02 (кв, 1=4,58 Гц, 2Н), 0,18-0,31 (м, 2Н), 0,83 (т, 1=6,88 Гц, 1Н), 2,00 (с, 3Н), 2,98-3,11 (м, 3Н), 3,69 (с, 3Н), 5,43 (с, 2Н), 7,00 (дд, 1=8,29, 4,71 Гц, 1н), 7,68 (дд, 1=8,29, 1,13 Гц, 1Н), 7,98 (с, 1Н), 8,17 (с, 1Н), 8,24 (дд, 1=4,71, 1,13 Гц, 1Н), 8,55 (т, 1=5,75 Гц, 1Н).

Пример 5: 1-(2,3-дифтор-6-метоксибензил)-У-(2-фторэтил)-1Н-пирроло[3,2-Ъ]пиридин-3карбоксамид

- 31 028611

См. фиг. 17(а). В 50-мл круглодонной колбе Х-(2-фторэтил)-1Н-пирроло[3,2-Ъ]пиридин-3карбоксамид (0,1 г, 0,48 ммоль) растворяли ΏΜΡ (10 мл), получая бесцветную суспензию. Реакционную смесь охлаждали до 0°С, и затем добавляли карбонат калия (0,200 г, 1,45 ммоль) и 2-(бромметил)-3,4дифтор-1-метоксибензол (0,114 г, 0,48 ммоль), реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 4 ч. Реакцию контролировали ЬСМ8. ΏΜΡ концентрировали в вакууме, добавляли воду и экстрагировали ЭСМ. Объединенный органический слой промывали соляным раствором, сушили над сульфатом натрия, фильтровали и упаривали, получая неочищенный продукт. Неочищенный материал очищали на обращено-фазовой препаративной ВЭЖХ системе, получая 1-(2,3-дифтор-6-метоксибензил)-Х-(2-фторэтил)-1Нпирроло[3,2-Ъ]пиридин-3-карбоксамид (0,060 г, 34,2%).

Е8+М8 т/ζ: 364 (М+1).

¹Н ЯМР (ΏΜ8Ο-ά₆, 300 МГц): δ м.д. 8,90 (уш.с, 1Н), 8,50 (д, 1=4,3 Гц, 1Н), 8,02-8,15 (м, 2Н), 7,307,52 (м, 2Н), 6,92 (д, 1=8,7 Гц, 1Н), 5,53 (с, 2Н), 4,63 (т, 1=4,4 Гц, 1Н), 4,47 (т, 1=4,8 Гц, 1Н), 3,86 (с, 3Н), 3,74 (д, 1=5,3 Гц, 1Н), 3,65 (д, 1=5,3 Гц, 1Н).

Пример 6: 1-((5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)метил)-Х-(2-метоксиэтил)-1Н-пирроло[3,2Ъ]пиридин-3-карбоксамид

См. фиг. 17(Ъ). 1-((5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)метил)-1Н-пирроло[3,2-Ъ]пиридин-3-карбоновую кислоту (100 мг, 0,33 ммоль) растворяли в дихлорметане (15 мл), получая суспензию. Добавляли триэтиламин (230 мл, 1,66 ммоль), получая прозрачный раствор. Добавляли циклический ангидрид 1пропанфосфорной кислоты (198 мл, 0, 66 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин. Добавляли 2-метоксиэтанамин (74,8 мг, 1,00 ммоль) и перемешивали реакционную массу при комнатной температуре в течение 2 ч. После завершения реакции разбавляли реакционную массу ОСМ, промывали водой, соляным раствором. ОСМ слой отделяли, сушили над сульфатом натрия и упаривали, получая неочищенное соединение. Соединение очищали хроматографией на силикагеле, применяя метанол и дихлорметан в качестве элюента. Выход - 63%.

Е8+М8 т/ζ: 359,1 (М+1).

'Н ЯМР (500 МГц, ОМ8О-0₆): δ м.д. 3,44-3,52 (м, 2Н), 3,56 (кв, 1=5,46 Гц, 2Н), 3,89 (с, 3Н), 5,47 (с, 2Н), 7,31 (дд, 1=8,20, 4,73 Гц, 1Н), 7,46 (дд, 1=8,20, 2,84 Гц, 1Н), 8,09-8,22 (м, 2Н), 8,31 (с, 1Н), 8,51 (дд, 1=4,73, 0,95 Гц, 1Н), 8,85 (т, 1=5,52 Гц, 1Н).

Пример 7: 1 -((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-Х-(2-метоксиэтил)-1 Н-пирроло[3,2Ъ]пиридин-3-карбоксамид

См. фиг. 17(с). 1-((6-Метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-1Н-пирроло[3,2-Ъ]пиридин-3карбоновую кислоту (200 мг, 0,67 ммоль) растворяли в ОСМ (10 мл), получая суспензию. Добавляли триэтиламин (0,929 мл, 6,70 ммоль), получая прозрачный раствор. Добавляли циклический ангидрид 1пропанфосфорной кислоты (1,197 мл, 2,01 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин. Добавляли 2-метоксиэтанамин (151 мг, 2,01 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После завершения реакции разбавляли реакционную массу ОСМ, промывали водой, соля- 32 028611 ным раствором и затем упаривали, получая неочищенное соединение. Соединение очищали хроматографией на силикагеле. Выход - 90%.

Е8+М8 т/ζ: 356,2 (М+1).

¹Н ЯМР (300 МГц, Ю\18О-с1₆): δ м.д. 2,24 (с, 3Н), 3,30 (с, 3Н), 3,43-3,63 (м, 4Н), 3,93 (с, 3Н), 5,68 (с, 2Н), 7,24 (дд, 1=8,29, 4,71 Гц, 1Н), 7,92 (дд, 1=8,38, 1,22 Гц, 1Н), 8,25 (с, 1Н), 8,41 (с, 1Н), 8,48 (дд, 1=4,71, 1,13 Гц, 1Н), 8,85 (т, 1=5,65 Гц, 1Н).

Пример 8: П-(2-фторэтил)-1-((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-6-метил-1Н-пирроло[3,2Ь]пиридин-3-карбоксамид

См. фиг. 17(6). К 1-((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-6-метил-1Н-пирроло[3,2Ь]пиридин-3-карбоновой кислоте (0,190 мг, 0,61 ммоль) добавляли 2-фторэтанамин (0,077 г, 1,22 ммоль) и ТЕА (0,254 мл, 1,83 ммоль). Через 3 мин добавляли циклический ангидрид 1-пропанфосфорной кислоты (0,484 г, 1,52 ммоль). Полученную в результате реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 50 мин. ЬСМ8 анализ подтвердил образование требуемого продукта. Реакционную смесь разбавляли ЭСМ и водой. ЭСМ слой экстрагировали, промывали соляным раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали. Очистку осуществляли на Ша1егз КР системе, получая продукт, П-(2-фторэтил)-1 -((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-6-метил- 1Н-пирроло[3,2-Ь] пиридин3-карбоксамид (0,090 г, 41,4%).

Е8+М8 т/ζ: 358,36.

¹Н ЯМР (300 МГц, ΌΜ8Ο-6₆): δ м.д. 2,17-2,30 (3, 3Н), 2,40 (с, 3Н), 3,59-3,73 (м, 1Н), 3,73-3,83 (м, 1Н), 3,94 (с, 3Н), 4,50 (т, 1=4,99 Гц, 1Н), 4,66 (т, 1=4,99 Гц, 1Н), 5,64 (с, 2Н), 7,76 (с, 1Н), 8,15 (с, 1Н), 8,35 (с, 1Н), 8,42 (с, 1Н), 8,87 (т, 1=5,84 Гц, 1Н).

Пример 9: П-(2-гидроксиэтил)-1-((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-1Н-пирроло[3,2Ь]пиридин-3-карбоксамид

См. фиг. 18(а). 1-((6-Метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3карбоновую кислоту (1 г, 3,35 ммоль) растворяли в ЭСМ (20 мл), получая суспензию. Добавляли триэтиламин (1,394 мл, 10,06 ммоль), с последующим добавлением циклического ангидрида 1пропанфосфорной кислоты (3,991 мл, 6,70 ммоль). Реакционную массу перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин. Добавляли этаноламин (6,02 мл, 10,06 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. После завершения реакции разбавляли ЭСМ, и затем промывали водой и соляным раствором. Органический слой отделяли, сушили, упаривали, и неочищенное соединение очищали хроматографией на силикагеле. Выход - 45%.

Е8+М8 т/ζ: 342 (М+1).

¹Н ЯМР (300 МГц, ЭМ8О-6₆): δ м.д. 2,24 (с, 3Н), 3,37-3,64 (м, 4Н), 3,94 (с, 3Н), 4,80 (т, 1=4,99 Гц, 1Н), 5,67 (с, 2Н), 7,24 (дд, 1=8,29, 4,52 Гц, 1Н), 7,92 (д, 1=8,10 Гц, 1Н), 8,23 (с, 1Н), 8,41 (с, 1Н), 8,47 (д, 1=4,52 Гц, 1Н), 8,85 (т, 1=5,37 Гц, 1Н).

Пример 10: П-(циклопропилметил)-1 -((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-6-метил-1Нпирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид

- 33 028611

См. фиг. 18(Ъ). К 1-((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-6-метил-1Н-пирроло[3,2Ъ]пиридин-3-карбоновой кислоте (0,100 г, 0,32 ммоль) добавляли циклопропилметанамин (0,046 г, 0,64 ммоль) и ТЕА (0,134 мл, 0,96 ммоль). Через 3 мин добавляли циклический ангидрид 1-пропанфосфорной кислоты (0,255 г, 0,80 ммоль). Полученную в результате реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 50 мин. ЕСМ8 показала образование требуемого продукта. Реакционную смесь разбавляли ЭСМ и водой. ЭСМ слой экстрагировали и промывали соляным раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали. Очистку осуществляли на Ша1егз КР системе, получая продукт, ^(циклопропилметил)-1-((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-6-метил-1Н-пирроло[3,2Ъ]пиридин-3-карбоксамид (0,045 г, 38,5%).

ЕЗ+МЗ т/ζ: 366,44.

¹Н ЯМР (300 МГц, ЭМЗО-бб): δ м.д. 0,21-0,33 (м, 2Н), 0,41-0,56 (м, 2Н), 1,08 (м, 1=6,97 Гц, 1Н), 2,24 (с, 3Н), 2,40 (с, 3Н), 3,26 (д, 2Н), 3,94 (с, 3Н), 5,63 (с, 2Н), 7,75 (с, 1Н), 8,11 (с, 1Н), 8,35 (с, 1Н), 8,42 (с, 1Н), 8,74 (т, 1=5,65 Гц, 1Н).

Пример 11: 1-((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-Х-(2-метоксиэтил)-6-метил-1Нпирроло[3,2-Ъ]пиридин-3-карбоксамид

См. фиг. 18(с). К 1-((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-6-метил-1Н-пирроло[3,2Ъ]пиридин-3-карбоновой кислоте (0,100 г, 0,32 ммоль) добавляли 2-метоксиэтанамин (0,048 г, 0,64 ммоль) и ТЕА (0,134 мл, 0,96 ммоль). Через 3 мин добавляли циклический ангидрид 1-пропанфосфорной кислоты (0,255 г, 0,80 ммоль). Полученную в результате реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 50 мин. ЕСМЗ показала образование требуемого продукта. Реакционную смесь разбавляли ЭСМ и водой. ЭСМ слой экстрагировали, промывали соляным раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали. Очистку осуществляли на Ша1егз КР системе, получая продукт, 1((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-Ы-(2-метоксиэтил)-6-метил-1Н-пирроло[3,2-Ъ]пиридин-3карбоксамид (0,045 г, 38,0%).

ЕЗ+МЗ т/ζ: 370,21.

¹Н ЯМР (300 МГц, :ОМЗО-а₆): δ м.д. 2,17-2,28 (с, 3Н), 2,40 (с, 3Н), 3,30 (с, 13Н), 3,50 (д, 1=4,52 Гц, 2Н), 3,55 (т, 1=5,18 Гц, 2Н), 3,94 (с, 3Н), 5,63 (с, 2Н), 7,74 (с, 1Н), 8,12 (с, 1Н), 8,34 (с, 1Н), 8,42 (с, 1Н), 8,78 (т, 1=5,46 Гц, 1Н).

Пример 12: \-(2-фторэтил)-1 -((3 -метил-4-(2,2,2-трифторэтокси)пиридин-2-ил)метил)-1Нпирроло[3,2-Ъ]пиридин-3-карбоксамид

См. фиг. 18(6). 1-((3-Метил-4-(2,2,2-трифторэтокси)пиридин-2-ил)метил)-1Н-пирроло[3,2Ъ]пиридин-3-карбоновую кислоту (100 мг, 0,27 ммоль) растворяли в ЭСМ (10 мл), получая прозрачный раствор. Добавляли триэтиламин (0,190 мл, 1,37 ммоль), с последующим добавлением раствора цикличе- 34 028611 ского ангидрида 1-пропанфосфорной кислоты в этилацетате (0,326 мл, 0,55 ммоль) и перемешивали реакционную массу в течение 5 мин.

Добавляли гидрохлорид 2-фторэтиламина (54,5 мг, 0,55 ммоль) и перемешивали реакционную массу в течение 3 ч. После завершения реакции разбавляли ОСМ и затем промывали водой и соляным раствором. Органический слой отделяли, сушили, упаривали и неочищенное соединение очищали хроматографией на силикагеле, применяя метанол и дихлорметан в качестве элюента. Выход - 49%.

Е8+М8 т/ζ: 411 (М+1).

¹Н ЯМР (300 МГц, ΌΜ8Ο-ά6): δ м.д. 2,25 (с, 3Н), 3,67 (кв, 1=5,21 Гц, 1Н), 3,76 (кв, 1=5,21 Гц, 1Н), 4,50 (т, 1=4,99 Гц, 1Н), 4,66 (т, 1=4,90 Гц, 1Н), 4,90 (кв, 1=8,85 Гц, 2Н), 5,68 (с, 2Н), 7,06 (д, 1=5,84 Гц, 1Н), 7,24 (дд, 1=8,38, 4,62 Гц, 1Н), 7,93 (д, 1=7,35 Гц, 1Н), 8,17 (д, 1=5,65 Гц, 1Н), 8,24 (с, 1Н), 8,48 (д, 1=3,77 Гц, 1Н), 8,94 (т, 1=5,75 Гц, 1Н).

Пример 13: ^(2-фторэтил)-1-((2-метокси-5-(трифторметил)пиридин-3-ил)метил)-1Н-пирроло[3,2Ь]пиридин-3 -карбоксамид

См. фиг. 19(а). К перемешиваемому раствору 1-((2-метокси-5-(трифторметил)пиридин-3-ил)метил)1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоновой кислоты (60 мг, 0,177 ммоль) в дихлорметане (5 мл) добавляли гидрохлорид 2-фторэтан-1-амина (26 мг, 0,26 ммоль), триэтиламин (0,053 г, 0,531 ммоль) и Т3Р (0,33 г, 0,531 ммоль), и реакционную смесь перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Затем, реакционную смесь выливали в воду и экстрагировали дихлорметаном. Реакционную смесь выливали в воду и экстрагировали дихлорметаном. Объединенный органический слой промывали водой, соляным раствором, и растворитель отгоняли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле, получая ^(2-фторэтил)-1-((2-метокси-5(трифторметил)пиридин-3-ил)метил)-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид в виде белого твердого остатка, выход: 15 мг. (22,3%).

Е8+М8 т/ζ: 397.

¹Н ЯМР (400 МГц, ΌΜ8Ο-ά₆): δ м.д. 3,66-3,70 (м, 2Н), 3,72-3,76 (м, 2Н), 4,00 (с, 3Н), 4,50-4,52 (м, 2Н), 4,62-4,64 (м, 2Н), 5,76 (с, 2Н), 7,30-7,33 (м, 1Н), 7,92 (с, 1Н), 8,11 (д, 1Н, 1=8,3 Гц), 8,32 (с, 1Н), 8,508,52 (м, 1Н), 8,66-8,67 (м, 1Н), 8,94 (т, 1Н, 1=5,6 Гц).

Пример 14: 1-((5-циано-2-метоксипиридин-3-ил)метил)-Л-(2-фторэтил)-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин3-карбоксамид

См. фиг. 19(Ь). К раствору 1-((5-циано-2-метоксипиридин-3-ил)метил)-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин3-карбоновой кислоты (0,10 мг, 0,32 ммоль) в ИСМ, добавляли ТЕА (0,0,98 г, 0,135 мл, 0,97 ммоль), гидрохлорид 2-фторэтан-1-амина (0,095 г, 0,97 ммоль) и Т3Р (0,308 г, 0,97 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч. Добавляли к реакционной смеси воду и экстрагировали ИСМ. Объединенный органический слой промывали водой, соляным раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали колоночной флэш-хроматографией, получая 1-((5-циано-2-метоксипиридин-3-ил)метил)-Л-(2-фторэтил)-1Нпирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид-продукт в виде твердого остатка (17 мг, 14,9%).

Е8+М8 т/ζ: 354.

¹Н ЯМР (400 МГц, ВМ8О-б₆): δ 8,95 (т, 1=5,80 Гц, 1Н), 8,66 (д, 1=2,04 Гц, 1Н), 8,51 (д, 1=4,08 Гц, 1Н), 8,32 (с, 1Н), 8,11 (д, 1=8,40 Гц, 1Н), 7,93 (д, 1=1,92 Гц, 1Н), 7,30-7,33 (м, 1Н), 5,49 (с, 2Н), 5,30 (т, 1=5,00 Гц, 1Н), 4,51 (т, 1=4,96 Гц, 1Н), 3,91 (с, 3Н), 3,72-3,76 (м, 1Н), 3,66-3,70 (м, 1Н).

Пример 15: 1-((5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)метил)-Л-(2-фторэтил)-6-метил-1Н-пирроло[3,2Ь]пиридин-3 -карбоксамид

- 35 028611

См. фиг. 19(с). К 1-((5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)метил)-6-метил-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3карбоновой кислоте (60 мг, 0,19 ммоль) добавляли 2-фторэтанамин (21,60 мг, 0,34 ммоль) и ТЕА (0,080 мл, 0,57 ммоль). Через 3 мин добавляли циклический ангидрид 1-пропанфосфорной кислоты (151 мг, 0,48 ммоль). Полученную в результате реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 50 мин. ЬСМ8 показала образование требуемого продукта. Реакционную смесь разбавляли ОСМ и водой. ОСМ слой экстрагировали, промывали соляным раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали. Очистку осуществляли на ^а!ег8 КР системе, получая продукт, 1-((5-фтор-2метоксипиридин-3-ил)метил)-Щ2-фторэтил)-6-метил-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид (25,00 мг, 36,5%).

Е8+М8 т/ζ: 361,33.

¹Н ЯМР (300 МГц, БМ8О-д₆): δ м.д. 2,44 (с, 3Н), 3,65 (д, 1=5,27 Гц, 1Н), 3,75 (д, 1=5,27 Гц, 1Н), 3,90 (с, 3Н), 4,49 (т, 1=4,99 Гц, 1Н), 4,64 (т, 1=4,99 Гц, 1Н), 5,42 (с, 2Н), 7,36 (дд, 1=8,29, 3,01 Гц, 1Н), 7,93 (с, 1Н), 8,12 (д, 1=3,01 Гц, 1Н), 8,23 (с, 1Н), 8,38 (с, 5Н), 8,88 (т, 1=5,65 Гц, 1Н).

Пример 16: (8)-№(2-фторпропил)-1-((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-6-метил-1Нпирроло [3,2-Ь] пиридин-3 -карбоксамид

См. фиг. 19(ά). 1-((6-Метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-6-метил-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин3-карбоновую кислоту (100 мг, 0,32 ммоль) растворяли в дихлорметане (10 мл), получая суспензию. Добавляли триэтиламин (0,133 мл, 0,96 ммоль), с последующим добавлением циклического ангидрида 1пропанфосфорной кислоты (0,381 мл, 0,64 ммоль). Реакционную массу перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин. Добавляли (К)-2-фторпропан-1-амин (49,4 мг, 0,64 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После завершения реакции разбавляли реакционную массу ОСМ, промывали водой и соляным раствором. Органический слой сушили над сульфатом натрия, упаривали и неочищенное соединение очищали хроматографией на силикагеле. Выход - 75%.

Е8+М8 т/ζ: 373,2 (М+1).

¹Н ЯМР (300 МГц, ОМ8О-а₆): δ м.д. 1,25-1,42 (м, 4Н), 2,24 (с, 3Н), 2,40 (с, 3Н), 3,42-3,81 (м, 2Н), 3,94 (с, 3Н), 4,65-4,85 (м, 1Н), 4,93 (тд, 1=6,50, 3,39 Гц, 1Н), 5,64 (с, 2Н), 7,76 (с, 1Н), 8,16 (с, 1Н), 8,298,47 (м, 2Н), 8,91 (т, 1=6,03 Гц, 1Н).

Пример 17: №(2-гидроксиэтил)-1 -((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-6-метил-1Нпирроло [3,2-Ь] пиридин-3 -карбоксамид

См. фиг. 20(а). 1-((6-Метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-6-метил-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин3-карбоновую кислоту (75 мг, 0,24 ммоль) растворяли в дихлорметане (10 мл), получая суспензию. Добавляли триэтиламин (0,0669 мл, 0,48 ммоль), с последующим добавлением циклического ангидрида 1пропанфосфорной кислоты (0,286 мл, 0,48 ммоль). Реакционную массу перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин. Добавляли этаноламин (0,029 мл, 0,48 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После завершения реакции разбавляли реакционную массу ОСМ, промывали водой и соляным раствором. ОСМ слой сушили над сульфатом натрия, упаривали, получая

- 36 028611 неочищенное соединение, которое очищали колоночной хроматографией. . Выход - 52,7%.

Εδ+Μδ т/ζ: 356,4 (М+1).

¹Н ЯМР (300 МГц, ΌΜδΘ-ά₆): δ м.д. 2,23 (с, 3Н), 2,39 (с, 3Н), 3,39-3,65 (м, 4Н), 3,93 (с, 3Н), 4,84 (т, 1=5,09 Гц, 1Н), 5,63 (с, 2Н), 7,74 (с, 1Н), 8,12 (с, 1Н), 8,33 (с, 1Н), 8,41 (с, 1Н), 8,80 (т, 1=5,65 Гц, 1Н).

Пример 18: 1-((5-фтор-2-метокси-6-метилпиридин-3-ил)метил)А-(2-фторэтил)-1Н-пирроло[3,2Ь]пиридин-3 -карбоксамид

См. фиг. 20(Ь). К перемешиваемому раствору метил 1-((5-фтор-2-метокси-6-метилпиридин-3ил)метил)-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоновой кислоты (0,15 г, 0,47 ммоль) в дихлорметане (10 мл) добавляли гидрохлорид 2-фторэтан-1-амина (71 мг, 0,71 ммоль), триэтиламин (0,142 г, 1,41 ммоль) и Т3Р (0,9 г, 1,41 ммоль), смесь перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Затем, реакционную смесь выливали в воду и экстрагировали дихлорметаном. Объединенный органический слой промывали водой, соляным раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле, получая 1-((5-фтор-2-метокси-6метилпиридин-3-ил)метил)А-(2-фторэтил)-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид в виде белого твердого остатка, выход: 30 мг (18%).

Εδ+Μδ т/ζ: 361 (М+1).

¹Н ЯМР (400 МГц, ΌΜδΘΑ): δ м.д. 2,31 (д, 3Н, 1=2,9 Гц), 3,64-3,68 (м, 2Н), 3,71-3,75 (м, 2Н), 3,85 (с, 3Н), 4,49-4,51 (м, 2Н), 4,61-4,63 (м, 2Н), 5,41 (с, 2Н), 7,28-7,32 (м, 1Н), 7,45 (д, 1Н, 1=9, 0 Гц), 8,08-8,11 (м, 1Н), 8,29 (с, 1Н), 8,49-8,50 (м, 1Н), 8,92 (т, 1Н, 1=5,8 Гц).

Пример 19: 6-фторА-(2-фторэтил)-1-((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-1Н-пирроло[3,2Ь]пиридин-3 -карбоксамид

См. фиг. 20(с). К 6-фтор-1-((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин3-карбоновой кислоте (20 мг, 0,06 ммоль) добавляли 2-фторэтанамин (7,18 мг, 0,11 ммоль) и ΤΕΑ (0,026 мл, 0,19 ммоль). Через 3 мин добавляли циклический ангидрид 1-пропанфосфорной кислоты (50,3 мг, 0,16 ммоль). Полученную в результате реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 50 мин. I ΉΜδ показала образование требуемого продукта. Реакционную смесь разбавляли ОСМ и водой. ОСМ слой экстрагировали, промывали соляным раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали. Очистку осуществляли на \\'а1е1Б КР системе, получая продукт, 6-фтор-\’-(2фторэтил)-1-((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид (20,00 мг, 88%).

Εδ+Μδ т/ζ: 362.

¹Н ЯМР (300 МГц, ^ΜδΟ-ά6): δ м.д. 2,24 (с, 3Н), 3,57-3,70 (кв, 1Н), 3,70-3,80 (кв, 1Н), 3,94 (с, 3Н), 4,43-4,58 (т, 1Н), 4,66 (т, 1=4,99 Гц, 1Н), 5,68 (с, 2Н), 8,03 (дд, 1=9,89, 2,54 Гц, 1Н), 8,29 (с, 6Н), 8,40 (с, 1Н), 8,53 (т, 1=2,07 Гц, 1Н), 8,71 (т, 1=5,84 Гц, 1Н).

Пример 20: 6-бром-А(2-фторэтил)-1-((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-1Н-пирроло[3,2Ь]пиридин-3 -карбоксамид

См. фиг. 20(ά). К перемешиваемому раствору 6-бром-1-((6-метокси-5-метилпиримидин-4- 37 028611 ил)метил)-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоновой кислоты (0,13 г, 0,34 ммоль) в дихлорметане (10 мл) добавляли 2-фторэтан-1-амин (0,06 г, 0,68 ммоль), триэтиламин (0,1 г, 1,02 ммоль) и Т3Р (0,32 г, 1,02 ммоль), и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Затем, реакционную смесь выливали в воду и экстрагировали дихлорметаном. Органический слой промывали соляным раствором и концентрировали. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле и затем препаративной очисткой, получая 6-бром-А(2-фторэтил)-1-((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид в виде белого твердого остатка, выход: 25 мг (17%).

Ε8+Μ8 т/ζ: 424,2 (Μ+1).

Ή ЯМР (400 МГц, ΌΜ8Θ-ά6): δ м.д. 2,24 (с, 3Н), 3,68 (уш.с, 1Н), 3,75 (уш.с, 1Н), 4,51 (уш.с, 1Н), 4,64 (уш.с, 1Н), 5,70 (с, 2Н), 8,28 (с, 1Н), 8,39 (д, 1Н, 1=10,9 Гц), 8,58 (с, 1Н), 8,64 (уш.с, 2Н).

Пример 21: ^(2-фторэтил)-6-метил-1-((3-метил-4-(2,2,2-трифторэтокси)пиридин-2-ил)метил)-1Нпирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид

См. фиг. 21(а). 6-Метил-1-((3-метил-4-(2,2,2-трифторэтокси)пиридин-2-ил)метил)-1Н-пирроло[3,2Ь]пиридин-3-карбоновую кислоту (111 мг, 0,29 ммоль) растворяли в дихлорметане (10 мл). Добавляли триэтиламин (0,204 мл, 1,46 ммоль), получая прозрачный раствор. Добавляли циклический ангидрид 1пропанфосфорной кислоты (0,348 мл, 0,59 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин. Добавляли гидрохлорид 2-фторэтиламина (87 мг, 0,88 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После завершения реакции разбавляли реакционную массу дихлорметаном, промывали водой, соляным раствором. Органический слой отделяли, сушили над сульфатом натрия, упаривали, получая неочищенное соединение. Соединение очищали хроматографией на силикагеле, применяя метанол и дихлорметан в качестве элюента. Выход - 44,3%.

Ε8+Μ8 т/ζ: 425,2 (М+1).

¹Н ЯМР (300 МГц, ΌΜ8Θ-ά₆): δ м.д. 2,24 (с, 3Н), 2,39 (с, 3Н), 3,66 (кв, 1=5,21 Гц, 1Н), 3,75 (кв, 1=5,15 Гц, 1Н), 4,49 (т, 1=4,99 Гц, 1Н), 4,65 (т, 1=4,99 Гц, 1Н), 4,90 (кв, 1=8,85 Гц, 2Н), 5,63 (с, 2Н), 7,07 (д, 1=5,65 Гц, 1Н), 7,76 (с, 1Н), 8,11 (с, 1Н), 8,17 (д, 1=5,65 Гц, 1Н), 8,34 (с, 1Н), 8,88 (т, 1=5,84 Гц, 1Н).

Пример 22: (8)-А(2-фторпропил)-1-((2-метокси-5-(трифторметил)пиридин-3-ил)метил)-6-метил1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид

См. фиг. 21(Ь). В 25-мл термическую пробирку загружали 1-((2-метокси-5-(трифторметил)пиридин3-ил)метил)-6-метил-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоновую кислоту (100 мг, 0,27 ммоль) и НАТи (125 мг, 0,33 ммоль), растворяли в ΝΜΡ (4 мл) и перемешивали в течение 10 мин при комнатной температуре. Затем, добавляли гидрохлорид (8)-2-фторпропан-1-амина (37,3 мг, 0,33 ммоль) и триэтиламин (0,114 мл, 0,82 ммоль) и перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. ΕΟΜ8 показала завершение реакции. Реакционную смесь выливали в воду и экстрагировали хлороформом. Органический слой сушили и концентрировали, и неочищенный остаток подвергали обращено-фазовой очистке. Чистые фракции концентрировали, получая (8)-^(2-фторпропил)-1-((2-метокси-5-(трифторметил)пиридин3-ил)метил)-6-метил-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид (82 мг, 70,6%) в виде твердого остатка.

Ε8+Μ8 т/ζ: 425 (М+1).

¹Н ЯМР (300 МГц, ΌΜ8Θ-ά6): δ м.д. 1,15-1,44 (м, 3Н), 2,44 (с, 3Н), 3,39-3,79 (м, 2Н), 3,98 (с, 3Н), 4,75 (тд, 1=6,50, 3,39 Гц, 1Н), 4,92 (тд, 1=6,50, 3,20 Гц, 1Н), 5,48 (с, 2Н), 7,81 (д, 1=2,26 Гц, 1Н), 7,91-8,03 (м, 1Н), 8,25 (с, 1Н), 8,34-8,42 (м, 1Н), 8,53-8,62 (м, 1Н), 8,90 (т, 1=5,93 Гц, 1Н).

Пример 23: 1 -((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-А(2-(трифторметокси)этил)-1Нпирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид

- 38 028611

См. фиг. 21(с). 1-((6-Метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-1Н-пирроло[3,2-Ъ]пиридин-3карбоновую кислоту (40 мг, 0,13 ммоль) растворяли в 50 мл одногорлой колбе, снабженной воздушным холодильником, соединенным с источником азота. Добавляли ХМР (3 мл, 31,17 ммоль), получая раствор. Добавляли триэтиламин (0,056 мл, 0,40 ммоль), с последующим добавлением гидрохлорида 2(трифторметокси)этанамина (44,4 мг, 0,27 ммоль). Реакционную массу перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин. Добавляли НАТИ (61,2 мг, 0,16 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. После завершения реакции добавляли несколько капель метанола и прозрачный раствор подвергали обращено-фазовой ВЭЖХ очистке, получая 1-((6-метокси-5метилпиримидин-4-ил)метил)-Х-(2-(трифторметокси)этил)-1Н-пирроло[3,2-Ъ]пиридин-3-карбоксамид (15,00 мг, 27,3%).

Е8+М8 т/ζ: 410 (М+1).

¹Н ЯМР (300 МГц, ЭМ8О-0₆): δ м.д. 2,25 (с, 3Н), 3,68-3,80 (м, 2Н), 3,93 (с, 3Н), 4,24 (т, 1=5,27 Гц, 2Н), 5,69 (с, 2Н), 7,26 (дд, 1=8,29, 4,71 Гц, 1Н), 7,94 (д, 1=7,35 Гц, 1Н), 8,28 (с, 1Н), 8,38-8,54 (м, 2Н)8, 96 (с, 1Н).

Пример 24: (8)-1 -((5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)метил)-Х-(2-фторпропил)-6-метил-1Нпирроло [3,2-Ъ] пиридин-3-карбоксамид

См. фиг. 21(ό). 1-((5-Фтор-2-метоксипиридин-3-ил)метил)-6-метил-1Н-пирроло[3,2-Ъ]пиридин-3карбоновую кислоту (147 мг, 0,47 ммоль) растворяли в 50 мл одногорлой колбе, снабженной воздушным холодильником, соединенным с источником азота. Добавляли ХМР (3 мл, 31,17 ммоль), получая суспензию. Добавляли НАТИ (213 мг, 0,56 ммоль), с последующим добавлением (8)-2-фторпропан-1-амина (71,9 мг, 0,93 ммоль). Реакционную массу перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин. Добавляли триэтиламин (0,195 мл, 1,40 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение 10 мин.

После завершения реакции добавляли воду и экстрагировали этилацетатом. Органический слой сушили над сульфатом натрия, упаривали, получая неочищенное соединение. Неочищенное соединение очищали Ойзоп препаративной ВЭЖХ, получая (8)-1-((5-фтор-2-метоксипиридин-3-ил)метил)-Х-(2фторпропил)-6-метил-1Н-пирроло[3,2-Ъ]пиридин-3-карбоксамид (110 мг, 63,0%).

Е8+М8 т/ζ: 375 (М+1).

¹Н ЯМР (300 МГц, ЭМ8О-д₆): δ м.д. 1,24-1,37 (м, 3Н), 2,44 (с, 3Н), 3,47 (с, 1Н), 3,64 (уш.с, 1Н), 3,75 (с, 1Н), 3,90 (с, 3Н), 4,76 (уш.с, 1Н), 4,90 (уш.с, 1Н), 5,42 (с, 2Н), 7,38 (с, 1Н), 7,93 (с, 1Н), 8,12 (д, 1=3,01 Гц, 1Н), 8,23 (с, 1Н), 8,38 (с, 1Н), 8,90 (с, 1Н).

Пример 25: 2-циклопропил-Х-(1-((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-1Н-пирроло[3,2Ъ]пиридин-3-ил)ацетамид

См. фиг. 22. 3-Нитро-1Н-пирроло[3,2-Ъ]пиридин (25Ъ): к раствору соединения 1 (5 г, 0,042 моль) в концентрированной Н₂8О₄ (50 мл) добавляли при -10°С концентрированную НХО₃ (3 мл, 0,063 моль). Реакционную смесь перемешивали при данной температуре в течение 5 ч. Затем, смесь выливали в охлажденную на льду воду (100 мл), нейтрализовали водным №О11 (10%) и экстрагировали этилацетатом (2x100 мл). Объединенный органический слой промывали соляным раствором, и растворитель отгоняли при пониженном давлении, получая 3-нитро-1Н-пирроло[3,2-Ъ]пиридин (25Ъ) 3 г (43,4%).

- 39 028611

1-((6-Метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-3-нитро-1Н-пирроло[3,2-Ъ]пиридин (25с): к перемешиваемой суспензии 3-нитро-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридина (25Ь) (0,5 г, 3,04 ммоль) и К₂СО₃ (0,5 г, 9,12 ммоль) в ЭМР (10 мл) добавляли 4-(хлорметил)-6-метокси-5-метилпиримидин (0,7 г, 6,09 ммоль), полученную в результате смесь перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Затем, реакционную смесь выливали в воду (50 мл) и экстрагировали дихлорметаном (2x50 мл). Объединенный органический слой промывали соляным раствором и растворитель отгоняли при пониженном давлении, получая 1-((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-3-нитро-1Н-пирроло[3,2-Ъ]пиридин (25с) [300 мг (33%)] в виде бледно-желтого твердого остатка.

1- ((6-Метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-1Н-пирроло[3,2-Ъ]пиридин-3-амин (256): к раствору 1-((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-3-нитро-1Н-пирроло[3,2-Ъ]пиридина (0,15 г, 0,58 ммоль) в этаноле (5 мл) добавляли Р6/С (0,03 г). Реакционную смесь гидрировали под давлением баллона в течение 16 ч при комнатной температуре. Растворитель фильтровали и упаривали при пониженном давлении, получая 1-((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-амин (256) 0,1 г (74%).

2- Циклопропил-^(1-((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-1Н-пирроло[3,2-Ъ]пиридин-3ил)ацетамид: к перемешиваемому раствору 1-((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-1Нпирроло[3,2-Ь]пиридин-3-амина (256) (0,1 г, 0,37 ммоль) в дихлорметане (10 мл) добавляли триэтиламин (0,15 мл, 1,11 ммоль), Т3Р (0,35 г, 1,11 ммоль) и 2-циклопропилуксусную кислоту (0,037 г, 0,37 ммоль) и смесь перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Затем, реакционную смесь выливали в воду (20 мл) и экстрагировали дихлорметаном (2x50 мл).

Объединенный органический слой промывали соляным раствором и растворитель отгоняли при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле, применяя 50% этилацетат в гексане, получая 2-циклопропил-^(1-((6-метокси-5-метилпиримидин-4ил)метил)-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-ил)ацетамид в виде грязно-белого твердого остатка; выход: 25 мг (19%).

Е8+М8 ш/ζ: 352 (М+1).

¹Н ЯМР (400 МГц, ЭМ8О-6₆): δ м.д. 2,25 (с, 3Н), 3,67-3,69 (м, 1Н), 3,73-3,76 (м, 1Н), 4,50-4,52 (м, 1Н), 4,62-4,64 (м, 1Н), 5,49 (с, 2Н), 6,94-6,96 (м, 3Н), 7,27-7,30 (м, 1Н), 8,08 (д, 1=8,2 Гц), 8,45 (с, 1Н), 8,50 (д, 1=3,88 Гц), 8,92 (ш, 1=5,6 Гц).

Пример 26: 1-((5-фтор-2,6-диметилпиридин-3-ил)метил)-^(2-фторэтил)-6-метил-1Н-пирроло[3,2Ь]пиридин-3-карбоксамид

Р

См. фиг. 23(а). В 25-мл термическую пробирку загружали 1-((5-фтор-2,6-диметилпиридин-3ил)метил)-6-метил-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоновую кислоту (100 мг, 0,32 ммоль) и НАТи (146 мг, 0,38 ммоль), растворяли в NΜР (4 мл) и перемешивали в течение 10 мин при комнатной температуре. Затем, добавляли 2-фторэтанамин (20,13 мг, 0,32 ммоль) и триэтиламин (133 мл, 0,96 ммоль) и перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. ЬСМ8 показала завершение реакции. Реакционную смесь выливали в воду и экстрагировали хлороформом. Органический слой сушили и концентрировали, и неочищенный остаток подвергали обращено-фазовой очистке. Чистые фракции концентрировали, получая 1-((5-фтор-2,6-диметилпиридин-3-ил)метил)-^(2-фторэтил)-6-метил-1Н-пирроло[3,2-Ъ]пиридин-3карбоксамид (75 мг, 65,6%) в виде твердого остатка.

Е8+М8 ш/ζ: 359 (М+1).

¹Н ЯМР (300 МГц, ЭМ8О-6₆): δ м.д. 2,37 (д, 1=2,64 Гц, 3Н), 2,42 (с, 6Н), 3,66 (д, 1=5,46 Гц, 1Н), 3,75 (д, 1=5,27 Гц, 1Н), 4,49 (ш, 1=4,90 Гц, 1Н), 4,65 (ш, 1=4,99 Гц, 1Н), 5,52 (с, 2Н), 6,85 (д, 1=10,17 Гц, 1Н), 7,86 (с, 1Н), 8,15 (с, 1Н), 8,34-8,46 (м, 1Н), 8,89 (ш, 1=5,84 Гц, 1Н).

Пример 27: ^(2-гидроксиэтил)-6-метил-1-((3-метил-4-(2,2,2-трифторэтокси)пиридин-2-ил)метил)1 Н-пирроло [3,2-Ь] пиридин-3 -карбоксамид

- 40 028611

См. фиг. 23(Ь). 6-Метил-1-((3-метил-4-(2,2,2-трифторэтокси)пиридин-2-ил)метил)-1Н-пирроло[3,2Ь]пиридин-3-карбоновую кислоту (55 мг, 0,14 ммоль) и NМΡ (13,95 мкл, 0,14 ммоль) растворяли в 50 мл одногорлой колбе, снабженной воздушным холодильником, соединенным с источником азота. Добавляли НАТи (66,2 мг, 0,17 ммоль), получая суспензию. Добавляли этаноламин (17,50 мкл, 0,29 ммоль), с последующим добавлением триэтиламина (60,6 мкл, 0,43 ммоль). Реакционную массу перемешивали при комнатной температуре в течение 5 мин. ЬСМЗ показала завершение реакции. Неочищенное соединение очищали Οΐίδοη препаративной ВЭЖХ, получая чистый ^(2-гидроксиэтил)-6-метил-1-((3-метил-4-(2,2,2трифторэтокси)пиридин-2-ил)метил)-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид (15,00 мг, 24,49%).

ЕЗ+МЗ т/ζ: 423 (М+1).

¹Н ЯМР (300 МГц, ЭМЗО-а₆): δ м.д. 2,23 (с, 3Н), 2,39 (с, 3Н), 3,45 (уш.с, 2Н), 3,53 (уш.с, 2Н), 4,83 (с, 1Н), 4,90 (д, 1=9,04 Гц, 2Н), 5,62 (с, 2Н), 7,06 (д, 1=5,65 Гц, 1Н), 7,75 (с, 1Н), 8,07 (с, 1Н), 8,17 (д, 1=5,09 Гц, 1Н), 8,32 (с, 1Н), 8,79 (с, 1Н).

Пример 28: (К)^-(2-гидроксипропил)-1-((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-6-метил-1Нпирроло [3,2-Ь]пиридин-3 -карбоксамид о

См. фиг. 23(с). 1-((6-Метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-6-метил-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин3-карбоновую кислоту (75 мг, 0,24 ммоль) растворяли в термическом реакторе. Добавляли ЭСМ (5 мл), получая суспензию. Добавляли триэтиламин (0,067 мл, 0,48 ммоль) с последующим добавлением циклического ангидрида 1-пропанфосфорной кислоты (0,286 мл, 0,48 ммоль). Добавляли (К)-1-аминопропан-2ол (36,1 мг, 0,48 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь концентрировали и растворяли в ЭСМ:МеОН. Данное неочищенное соединение подвергали обращено-фазовой очистке, получая (К)^-(2-гидроксипропил)-1-((6-метокси-5метилпиримидин-4-ил)метил)-6-метил-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид (35,0 мг, 39,5%) в виде грязно-белого твердого остатка.

ЕЗ+МЗ т/ζ: 370 (М+1).

¹Н ЯМР (300 МГц, ЭМЗО-а6): δ м.д. 1,10 (д, 1=5,84 Гц, 3Н), 2,24 (с, 3Н), 2,39 (с, 3Н), 3,16-3,29 (м, 1Н), 3,37-3,48 (м, 1Н), 3,77 (уш.с, 1Н), 3,93 (с, 3Н), 4,85 (д, 1=4,33 Гц, 1Н), 5,63 (с, 2Н), 7,74 (с, 1Н), 8,12 (с, 1Н), 8,33 (с, 1Н), 8,41 (с, 1Н), 8,82 (уш.с, 1Н).

Пример 29: 1-((6-(диметиламино)-5-метилпиримидин-4-ил)метил)^-(2-фторэтил)-6-метил-1Нпирроло [3,2-Ь]пиридин-3 -карбоксамид

См. фиг. 23(а). 1-((6-(Диметиламино)-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-6-метил-1Н-пирроло[3,2Ь]пиридин-3-карбоновую кислоту (75 мг, 0,23 ммоль) растворяли в термическом реакторе. Добавляли ЭСМ (5 мл), получая суспензию. Добавляли триэтиламин (0,064 мл, 0,46 ммоль), с последующим добавлением циклического ангидрида 1-пропанфосфорной кислоты (0,274 мл, 0,46 ммоль). Добавляли гидрохлорид 2-фторэтанамина (22,94 мг, 0,23 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь концентрировали и растворяли в ЭСМ:МеОН.

- 41 028611

Данное неочищенное соединение подвергали обращено-фазовой очистке. Получали конечное соединение, 1-((6-(диметиламино)-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-Ы-(2-фторэтил)-6-метил-1Н-пирроло[3,2Ь]пиридин-3-карбоксамид (12,00 мг, 14,05%) в виде белого твердого остатка.

Е8+М8 т/ζ: 371 (М+1).

¹Н ЯМР (300 МГц, ΏΜ8Ο-ά₆): δ м.д. 2,27 (с, 3Н), 2,40 (с, 3Н), 2,95 (с, 6Н), 3,66 (д, 1=5,46 Гц, 1Н), 3,75 (д, 1=5,27 Гц, 1Н), 4,49 (т, 1=4,99 Гц, 1Н), 4,65 (т, 1=4,99 Гц, 1Н), 5,54 (с, 2Н), 7,75 (с, 1Н), 8,13 (с, 1Н), 8,22 (с, 1Н), 8,34 (с, 1Н), 8,88 (т, 1=5,84 Гц, 1Н).

Пример 30: Ы-(2,2-дифторэтил)-1 -((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-6-метил-1Нпирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид

См. фиг. 24(а). 1-((6-Метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-6-метил-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин3-карбоновую кислоту (100 мг, 0,32 ммоль) растворяли в термическом реакторе. Добавляли ОСМ (3 мл), получая суспензию. Добавляли триэтиламин (0,089 мл, 0,64 ммоль) с последующим добавлением циклического ангидрида 1-пропанфосфорной кислоты (0,381 мл, 0,64 ммоль). Добавляли 2,2-дифторэтанамин (26,0 мг, 0,32 ммоль) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. После завершения реакции реакционную смесь концентрировали и растворяли в ОСМ:МеОН. Данное неочищенное соединение подвергали обращено-фазовой очистке, получая Ы-(2,2-дифторэтил)-1-((6-метокси-5метилпиримидин-4-ил)метил)-6-метил-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид (20,00 мг, 16,64%) в виде грязно-белого твердого остатка.

Е8+М8 т/ζ: 376 (М+1).

¹Н ЯМР (300 МГц, ОМ8О-б₆): δ м.д. 2,24 (с, 4Н), 2,40 (с, 3Н), 3,77-3,89 (м, 2Н), 3,93 (с, 4Н), 5,65 (с, 2Н), 7,77 (с, 1Н), 8,20 (с, 1Н), 8,40 (с,1Н), 8,36 (с, 1Н), 8,91 (уш.с, 1Н).

Пример 31: 1-(2,4-диметилбензил)-Ы-(2-фторэтил)-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоксамид

См. фиг. 24(Ь). 1-(2,4-Диметилбензил)-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3-карбоновую кислоту (200 мг, 0,71 ммоль) растворяли в 100-мл одногорлой колбе, снабженной воздушным холодильником, соединенным с источником азота. Добавляли СН₂С1₂ (10 мл), получая прозрачный раствор. Добавляли триэтиламин (5 мл, 35,87 ммоль), с последующим добавлением циклического ангидрида 1-пропилфосфорной кислоты (2 мл, 1,43 ммоль) и гидрохлорида 2-фторэтиламина (142 мг, 1,43 ммоль). Реакционную массу перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Данное неочищенное соединение подвергали обращено-фазовой очистке, получая 1-(2,4-диметилбензил)-Ы-(2-фторэтил)-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3карбоксамид (50,00 мг, 22%) в виде грязно-белого твердого остатка.

Е8+М8 т/ζ: 326 (М+1).

¹Н ЯМР (300 МГц, ОМ8О-б₆): δ м.д. 2,21 (с, 3Н), 2,24 (с, 3Н), 3,57-3,86 (м, 2Н), 4,50 (т, 1=4,99 Гц, 1Н), 4,66 (т, 1=4,99 Гц, 1Н), 5,41-5,60 (м, 2Н), 6,72 (д, 1=7,72 Гц, 1Н), 6,94 (д, 1=7,54 Гц, 1н), 7,05 (с, 1Н), 7,28 (дд, 1=8,29, 4,71 Гц, 1Н), 7,98 (дд, 1=8,38, 1,04 Гц, 1Н), 8,13 (с, 1Н), 8,51 (дд, 1=4,62, 1,04 Гц, 1Н), 8,94 (т, 1=5,84 Гц, 1Н).

Пример 32: Ы-(циклопропилметил)-1-(2-фтор-6-метоксибензил)-1Н-пирроло[3,2-Ь]пиридин-3карбоксамид

- 42 028611

См. фиг. 24(с). В 50-мл круглодонной колбе 1-(2-фтор-6-метоксибензил)-1Н-пирроло[3,2Ъ]пиридин-3-карбоновую кислоту (1,30 г, 0,43 ммоль), циклопропилметанамин (0,040 г, 0,56 ммоль) и ТЕА (0,181 мл, 1,30 ммоль) растворяли в ОСМ (10 мл) в атмосфере Ν₂. К смеси добавляли циклический ангидрид 1-пропанфосфорной кислоты (0,317 г, 1,00 ммоль). Полученную в результате реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 50 мин. ЬСМ8 показала образование требуемого продукта. Реакционную смесь разбавляли ОСМ и водой. ОСМ слой экстрагировали, промывали соляным раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали. Очистку осуществляли на \Уа1сг5 КР системе, получая продукт, ^(циклопропилметил)-1-(2-фтор-6-метоксибензил)-1Н-пирроло[3,2Ъ]пиридин-3-карбоксамид (0,060 г, 39,2%).

Е8+М8 т/ζ: 354 (М+1).

¹Н ЯМР (300 МГц, ОМ8О-б₆): δ м.д. 0,24 (кв, 1=4,90 Гц, 2Н), 0,38-0,50 (м, 2Н), 1,03 (т, 1=7,06 Гц, 1Н), 3,25 (т, 1=6,22 Гц, 2Н), 3,88 (с, 3Н), 5,47 (с, 2Н), 6,83-6,99 (м, 2Н), 7,26-7,46 (м, 2Н), 8,02 (с, 1Н), 8,07 (д, 1=8,10 Гц, 1Н), 8,49 (д, 1=3,96 Гц, 1Н), 8,75 (т, 1=5,65 Гц, 1Н).

Пример 33: №(2,2-дифторэтил)-1-((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-6-метил-1Нпирроло [3,2-Ъ] пиридин-3 -карбоксамид.

Е8+М8 т/ζ: 376.

¹Н ЯМР (300 МГц, ОМ8О-б₆): δ м.д. 2,18-2,31 (м, 3Н), 2,40 (с, 3Н), 3,84-3,97 (м, 5Н), 5,62-5,70 (м, 2Н), 6,01- 6,22 (тт,1Н), 7,78 (с, 1Н), 8,20 (с, 1Н), 8,38-8,41 (д, 1=14,51 Гц, 2Н), 8,87-8,96 (м, 1Н).

Пример 34: 1-((6-(диметиламино)-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-^(2-гидроксиэтил)-6-метил-1Нпирроло[3,2-Ъ]пиридин-3 -карбоксамид.

Е8+М8 т/ζ: 369.

¹Н ЯМР (300 МГц, ОМ8О-б₆): δ м.д. 2,27 (с, 3Н), 2,40 (с, 3Н), 2,95 (с, 6Н), 3,41-3,58 (м, 4Н), 4,84 (т, 1=4,99 Гц, 1Н), 5,53 (с, 2Н), 7,73 (с, 1Н), 8,10 (с, 1Н), 8,22 (с, 1Н), 8,33 (с, 1Н), 8,80 (т, 1=5,46 Гц, 1Н).

Пример 35: 1-((6-(дифторметокси)-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-^(2-гидроксиэтил)-6-метил-1Нпирроло[3,2-Ъ]пиридин-3 -карбоксамид.

Е8+М8 т/ζ: 392.

¹Н ЯМР (400 МГц, ОМ8О-б₆): δ м.д. 2,32 (с, 3Н), 2,40 (с, 3Н), 3,46 (д, 1=5,6 Гц, 2Н), 3,56 (д, 1=5,1 Гц, 2Н), 5,75 (с, 2Н), 4,83 (уш.с, 1Н), 8,02-7,53 (м, 2Н), 8,21-8,04 (м, 1Н), 8,35 (с, 1Н), 8,52 (с, 1Н), 8,81 (уш.с, 1Н).

Пример 36: №(2-фторэтил)-6-метокси-1-((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-1Нпирроло[3,2-Ъ]пиридин-3 -карбоксамид.

Е8+М8 т/ζ: 374.

¹Н ЯМР (300 МГц, ОМ8О-б₆): δ м.д. 2,14-2,32 (м, 3Н), 3,64-3,86 (м, 5Н), 3,94 (с, 3Н), 4,49 (т, 1=4,99 Гц, 1Н), 4,65 (т, 1=4,90 Гц, 1Н), 5,64 (с, 2Н), 7,63 (д, 1=2,45 Гц, 1Н), 8,07 (с, 1Н), 8,26 (д, 1=2,45 Гц, 1Н), 8,43 (с, 1Н), 8,76 (т, 1=5,93 Гц, 1Н).

Пример 37: №(2,2-дифторэтил)-6-метокси-1-((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-1Нпирроло[3,2-Ъ]пиридин-3 -карбоксамид.

Е8+М8 т/ζ: 392.

¹Н ЯМР (300 МГц, ОМ8О-б₆): δ м.д. 2,18-2,31 (м, 3Н), 3,77-3,97 (м, 8Н), 5,62-5,69 (м, 2Н), 6,00-6,38 (тт, 1Н), 7,64 (д, 1=2,45 Гц, 1Н), 8,11 (с, 1Н), 8,27 (д, 1=2,45 Гц, 1Н), 8,43 (с, 1Н), 8,74-8,84 (м, 1Н).

Пример 38: №(2-гидроксиэтил)-6-метокси-1-((6-метокси-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-1Нпирроло[3,2-Ъ]пиридин-3 -карбоксамид.

Е8+М8 т/ζ: 372.

¹Н ЯМР (300 МГц, ОМ8О-б₆): δ м.д. 2,23 (с, 3Н), 3,31-3,43 (м, 4Н), 3,81 (с, 3Н), 3,94 (с, 3Н), 4,83 (т, 1=4,99 Гц, 1Н), 5,63 (с, 2Н), 7,61 (д, 1=2,45 Гц, 1Н), 8,03 (с, 1Н), 8,25 (д, 1=2,45 Гц, 1Н), 8,43 (с, 1Н), 8,648,74 (м, 1Н).

Пример 39: 1 -((6-(диметиламино)-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-^(2-фторэтил)-6-метокси-1Нпирроло[3,2-Ъ]пиридин-3 -карбоксамид.

Е8+М8 т/ζ: 387.

¹Н ЯМР (400 МГц, ОМ8О-б₆): δ м.д. 2,28 (с, 3Н), 2,96 (с, 6Н), 3,67 (кв, 1=5,2 Гц, 1Н), 3,74 (кв, 1=5,4 Гц, 1Н), 3,83 (с, 3Н), 4,51 (т, 1=5,0 Гц, 1Н), 4,63 (т, 1=5, 0 Гц, 1Н), 5,55 (с, 2Н), 7,62 (д, 1=2,4 Гц, 1Н), 8,05 (с, 1Н), 8,27-8,25 (м, 2Н), 8,77 (т, 1=6,0 Гц, 1Н).

Пример 40: №(2,2-дифторэтил)-1-((6-(диметиламино)-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-6-метокси1Н-пирроло [3,2-Ъ]пиридин-3 -карбоксамид.

Е8+М8 т/ζ: 405.

¹Н ЯМР (400 МГц, ОМ8О-б₆): δ м.д. 2,27 (с, 3Н), 2,95 (с, 6Н), 4,00-3,84 (м, 5Н), 5,55 (с, 2Н), 6,326,04 (м, 1Н), 7,62 (д, 1=2,3 Гц, 1Н), 8,08 (с, 1Н), 8,27-8,24 (м, 2Н), 8,79 (т, 1=6,0 Гц, 1Н).

Пример 41: 1-((6-(диметиламино)-5-метилпиримидин-4-ил)метил)^-(2-гидроксиэтил)-6-метокси1Н-пирроло [3,2-Ъ]пиридин-3 -карбоксамид.

Е8+М8 т/ζ: 385.

¹Н ЯМР (400 МГц, ОМ8О-б₆): δ м.д. 2,28 (с, 3Н), 2,96 (с, 6Н), 3,46-3,43 (м, 2Н), 3,55-3,54 (м, 2Н),

- 43 028611

3,82 (с, 3Н), 4,82 (уш.с, 1Н), 5,54 (с, 2Н), 7,60 (д, 1=2,4 Гц, 1Н), 8,01 (с, 1Н), 8,37-8,17 (м, 2Н), 8,69 (т, 1=5,7 Гц, 1Н).

Пример 42: 1-((6-(дифторметокси)-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-Ы-(2-фторэтил)-6-метокси-1Нпирроло [3,2-Ъ] пиридин-3 -карбоксамид.

Εδ+Μδ т/ζ: 410.

'ΐΐ ЯМР (400 МГц, ΌΜδΟ-ά₆): δ м.д. 2,31 (с, 3Н), 3,68-3,67 (м, 1Н), 3,77-3,71 (м, 1Н), 3,82 (с, 3Н), 4,52 (т, 1=4,9 Гц, 1Н), 4,64 (т, 1=4,9 Гц, 1Н), 5,75 (с, 2Н), 7,99-7,63 (м, 2Н), 8,09 (с, 1Н), 8,27 (д, 1=2,2 Гц, 1Н), 8,54 (с, 1Н), 8,78 (т, 1=5,7 Гц, 1Н).

Пример 43: Ы-(2,2-дифторэтил)-1-((6-(дифторметокси)-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-6-метокси1Н-пирроло [3,2-Ъ]пиридин-3 -карбоксамид.

Εδ+Μδ т/ζ: 428.

'ΐ I ЯМР (400 МГц, ΌΜδΟ-ά₆): δ м.д. 2,32 (с, 3Н), 3,90-3,82 (м, 5Н), 5,76 (с, 2Н), 6,34-6,05 (м, 1Н), 7,99-7,63 (м, 2Н), 8,13 (с, 1Н), 8,29 (д, 1=2,4 Гц, 1Н), 8,81 (т, 1=6,2 Гц, 1Н), 8,54 (с, 1Н), 8,81 (т, 1=6,2 Гц, 1Н).

Пример 44: 1-((6-(дифторметокси)-5-метилпиримидин-4-ил)метил)-Ы-(2-гидроксиэтил)-6-метокси1Н-пирроло [3,2-Ъ]пиридин-3 -карбоксамид.

Εδ+Μδ т/ζ: 408.

'ΐ I ЯМР (400 МГц, ΌΜδΟ-ά₆): δ м.д. 2,30 (с, 3Н), 3,46-3,42 (м, 2Н), 3,56-3,52 (м, 2Н), 3,82 (с, 3Н), 4,81 (т, 1=5,0 Гц, 1Н), 5,73 (с, 2Н), 7,97-7,61 (м, 2Н), 8,04 (с, 1Н), 8,25 (д, 1=2,3 Гц, 1Н), 8,53 (с, 1Н), 8,69 (т, 1=5,6 Гц, 1Н).

Пример 45: 1-((3,5-диметилпиразин-2-ил)метил)-Ы-(2-фторэтил)-6-метил-1Н-пирроло[3,2Ъ] пиридин-3 -карбоксамид.

Εδ+Μδ т/ζ: 342.

'ΐ I ЯМР (300 МГц, ΌΜδΟ-ά₆): δ м.д. 2,40 (д, 1=0,94 Гц, 6Н), 2,58 (с, 4Н), 3,63-3,70 (м, 1Н), 3,75 (кв, 1=5,53 Гц, 1Н), 4,49 (т, 1=4,99 Гц, 1Н), 4,65 (т, 1=5,18 Гц, 1Н), 5,67 (с, 2Н), 7,75-7,79 (м, 1Н), 8,12-8,17 (м, 2Н), 8,33-8,37 (м, 1Н), 8,87 (т, 1=5,93 Гц, 1Н).

Пример 46: Ы-(2,2-дифторэтил)-1 -((3,5-диметилпиразин-2-ил)метил)-6-метил-1Н-пирроло [3,2Ъ] пиридин-3 -карбоксамид.

Εδ+Μδ т/ζ: 360.

'ΐ I ЯМР (300 МГц, ΌΜδΟ-ά₆): δ м.д. 2,39 (с, 6Н), 2,58 (с, 3Н), 3,76-3,95 (м, 2Н), 5,68 (с, 2Н), 5,986,05 (м, 1Н), 6,15-6,22 (м, 1Н), 6,35-6,40 (м, 1Н), 7,78 (с, 1Н), 8,14 (с, 1Н), 8,19 (с, 1Н), 8,36 (с, 1Н), 8,858,97 (м, 1Н).

Минимальная ингибирующая концентрация (МИК) и минимальная бактерицидная концентрация (МБК).

Микобактерию туберкулеза (МТБ) Н37Ву АТСС 27294, применяемую для определения МИК, выращивали, как описано в .Гауагат с1 а1. (2003). Инокулят, применяемый для всех экспериментов, получали из односемянной партии, которую хранили при -70°С. Вкратце, МТБ выращивали во вращающихся флаконах при 37°С в течение 7-10 дней в ΜίάάΙοόΐΌοΚ 7Н9 питательной среде, дополненной 0,2% глицерином, 0,05% Т\уссп 80 (δίβΐηη) и 10% альбумин-декстроза-каталаза (Όίίάο ЬаЪогаФпек, ΌβΐΓοίΐ, Μίαίι.): называемой 7Н9 питательной средой в оставшейся части документа. Клетки собирали центрифугированием, промывали дважды 7Н9 питательной средой и повторно суспендировали в свежей 7Н9 питательной среде. Аликвоты 0,5 мл переносили, и суспензии посевной партии клеток хранили при -70°С. Через 24 ч при -70°С одну пробирку размораживали и высевали для подсчета колониеобразующих единиц (КОЕ). Все исходные растворы испытуемых соединения и разбавленные растворы получали в ΌΜδΟ.

МИК МТБ испытуемых соединений определяли в 7Н9 питательной среде стандартным способом микроразведения (Ва1дапе8Ъ е1 а1. 2010) с некоторыми модификациями. Вкратце, 1 мкл последовательных двукратно разбавленных растворов испытуемого соединения помещали в 384-луночный планшет с конечными концентрациями в диапазоне 100 мкМ-0,19 мкМ. Контрольные лунки включали контроли со средой и культурой. 40 мкл (3-7х10⁵ КОЕ/мл) бактериальной культуры добавляли во все лунки, за исключением контрольных лунок со средой. Планшеты упаковывали в газопроницаемые полиэтиленовые пакеты и выдерживали при 37°С в течение 5 дней. После данного периода выдерживания, 8 мкл свежеприготовленной смеси 1: 1 ресазурина (0,02% в воде) и 10% Т\уееп 80 добавляли во все лунки. Планшеты выдерживали в течение дополнительных 24 ч при 37°С, и регистрировали изменение цвета во всех лунках. Синий цвет в лунке интерпретировали как отсутствие роста, и розовый цвет засчитывали как наличие роста. Минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) определяли как наименьшую концентрацию лекарственного средства, которая предотвращает изменение цвета с голубого на розовый. Поглощение при 575 и 610 нм регистрировали и записывали их соотношение. Наименьшую концентрацию, которая давала 80% ингибирование, считали МИК. Изониазид применяли в качестве лекарственного средства для сравнения для данного анализа.

Аликвоты из лунок с образцами (МИК и больше) из МИК планшетов разбавляли 1:10 и переносили на 7Н10 планшеты с агаровой средой. Планшеты выдерживали при 37°С в течение 3-4 недель, подсчиты- 44 028611 вали КОЕ. Наименьшую концентрацию соединения, которая приводила в результате к снижению двух 1од₁₀КОЕ относительно исходного КОЕ, считали МБК.

МИК для чувствительных к лекарственным средствам и устойчивых к одному лекарственному средству изолятов микобактерий туберкулеза.

Данный анализ разрабатывали, применяя тот же протокол, как выше, однако период выдерживания продляли до 2-3 недель. Клеточный рост контролировали турбидиметрически и наименьшую концентрацию, которая не показывали роста, определяли как МИК. Для штаммов, устойчивых к одному лекарственному средству, соответствующий маркер лекарственной устойчивости включали в качестве положительного контроля.

Способ определения МИК для других бактерий (грамположительных и грамотрицательных).

Величины МИК для различных бактериальных штаммов (81арйу1ососсив аигеив АКС517, 81гер1ососсив рнеитошае АКС548, Наеторййив ίηΓ1ικηζ;κ АКС446, Наеторййив тЛиегмае АКС158, ЕвсйепсЫа сой АКС523, ЕвсйепсЫа сой АКС524, Рвеийотогав аегидшова АКС545, Р. аегидшова АКС546, К1еЬв1е11а рηеитоη^ае АКС1865, МусоЬас1егшт втедтайв (Мвт) АТСС607, Мвт тс²155 и Сагкййа аЮсамв АКС526) определяли согласно руководству института клинических и лабораторных стандартов (СЬ81) (Nайоηа1 СоттШее Гог СИтса1 ЬаЬога1огу 81аηάа^ά8. 2009), применяя 384-луночный формат в питательной среде Мюллера-Хинтона со стандартизированным содержанием катионов. Включали контроль со средой, культуральный контроль и подходящие контроля с лекарственными средствами для сравнения. Рост отслеживали проверкой поглощения при 600 нм. Минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) определяли как концентрация, которая приводила в результате к ингибированию роста >80%.

Кинетика бактерицидного эффекта в 7Н9 питательной среде и человеческих ТНР-1 макрофагах.

Анализ кинетики бактерицидного эффекта в 7Н9 питательной среде осуществляли в 200 мкл объеме, применяя 96-луночные планшеты с МПЛеЬгоок 7Н9 средой. Последовательные двукратные разбавления соединений осуществляли в ЭМ8О отдельно с концентрациями в диапазоне 128-0,25 мг/л. Из каждого из данных разбавленных растворов, 4 мкл добавляли в соответствующие лунки в 96-луночном планшете, которые содержали приблизительно 3х10⁷ КОЕ/мл МТБ Н37Ку. Планшеты выдерживали при 37°С и на 0, 3, 7, 10, 14 день аликвоты разбавляли в МПЛеЬтоок 7Н9 питательной среде и наносили на МПЛеЬтоок 7Н11 планшеты с агаровой средой. Бактериальные колонии подсчитывали через 21-28 дней. Данные выражали в виде 1од₁₀КОЕ для каждой обработки лекарственным соединением.

Внутриклеточная активность 1, 4-азаиндолов в ТНР-1 макрофагах.

ТНР-1 клетки (АТСС) выращивали в 75 см² колбе до конфлуентности, применяя КРМ1 1640 с 10% фетальной телячьей сывороткой (81дта, 81. Ьош8, Мо.), дополненную 2 мМ Ь-глютамином. Клетки выращивали в 37°С инкубаторе с 5% СО2 и 95% воздухом до того, как они достигали плотности 500000 клеток/мл. Из данной культуры, клетки при плотности 1-2 х10⁵ клеток/мл заражали микобактерией туберкулеза Н37Ку при множественности заражения (МО1) 1:10 (макрофаг:бактерия) в течение 2 ч при 37°С (заражение культуры). Через 2 ч клетки промывали дважды предварительно нагретым фосфатнобуферным солевым раствором, удаляя внеклеточные бактерии, и затем повторно суспендировали в полной КРМ11640. Форболмиристацетат (81дта) при концентрации 40 нМ применяли для дифференциации клеток до макрофагов и позволяли прирасти к 96-луночному планшету в течение 24 ч при 37°С. Через 24 ч различные концентрации испытуемых соединений добавляли к монослоям и выдерживали в течение 7 дней. Монослои макрофагов периодически наблюдали под микроскопом, контролируя неблагоприятные изменения в клеточной морфологии в результате токсичности лекарственного средства. В начале обработки лекарственным средством и через 7 дней после обработки, монослои аккуратно промывали и лизировали 0,04% 8Ό8 и наносили на ММЛеЬтоок 7Н11 планшеты с агаровой средой. Бактериальные колонии подсчитывали через 21-28 дней. Данные выражали в виде 1од10КОЕ для каждой обработки лекарственным средством.

Антимикробная активность против МТБ клеток с вызванной гипоксией нереплицирующей стойкостью (НРС).

Культуры микобактерии туберкулеза Н37Ку приспосабливали к гипоксическим условиям, как описано в \Уауг1е апй Науев (1996) с небольшими модификациями. Вкратце, МТБ клетки выращивали в ЭнЬов Т\уеег1 питательной среде в пробирках Маккартни с магнитными микроносителями, применяя определенное соотношение свободного пространства в пробирке над средой (Н8К) 0,5. Метиленовый синий добавляли в качестве редокс индикатора (конечная концентрация 1,5 мкг/мл) во все пробирки, контролируя уменьшение содержания кислорода. Пробирки Мак-Картни помещали на магнитную мешалку, установленную на 180 об/мин, внутри 37°С инкубатора. Метиленовый синий индикатор начинал выцветать к 8 дню и полностью обесцвечивался к 12 дню. Антимикробную активность различных соединений относительно ХКР МТБ клеток определяли в 96-луночных микротитрационных планшетах, применяя 14дневную приспособленную к гипоксии культуру, как описано выше в разделе по определению МИК. Весь анализ осуществляли в гипоксической камере (ЭиРоу). воздействуя на гипоксические клетки различными концентрациями соединений в течение 7 дней при 37°С. Анаэробную индикаторную полоску помещали внутрь камеры, визуально подтверждая удаление кислорода в течение всего процесса. Подсчет

- 45 028611 бактерий осуществляли на Μίάά1οόΐΌθ1< 7Н11 планшетах с агаровой средой. Изониазид и нигерицин применяли в качестве контролей в данном анализе. Изониазид не показал снижения бактериальных КОЕ даже при концентрации 10 мкг/мл, указывая на строгое состояние НРС. Данные выражали в виде 1од10КОЕ для каждой обработки лекарственным средством.

А549 цитотоксичность.

Цитотоксичность ίη νίίτο соединений измеряли относительно А549 клеток легочной карциномы человека, как описано в Бакш οι а1 (2012). Вкратце, А549 клетки (АТСС) выращивали в ΚΡΜΙ среде (О1ВΟΟ-ВКТ), содержащей 10% термоинактивированную фетальную бычью сыворотку (ΟΙΒΟΟ-ВКЬ) и 1 мМ Ь-глютамин (ΟIΒСΟ-ΒΚ^) при плотности ~1000 клеток/лунка.

После выдерживания клеток с соединением в атмосфере СО₂ при 37°С в течение 72 ч, жизнеспособность клеток определяли после добавления 10 мкМ раствора резазурина (δίβΐηα), измеряя флуоресценцию (возбуждение при 535 нм, излучение при 590 нм), применяя флуориметр. Концентрацию, при которой рост ингибировался на 50%, принимали в качестве 1С₅₀ величины.

Получение мутантов, частота устойчивости и сиквенс и анализ полного генома.

Получение устойчивых мутантных штаммов и частота устойчивости.

Спонтанно устойчивые мутанты получали относительно соединений 31 и 32, применяя одностадийный способ селекции. Вкратце, культуру, находящуюся в среднелогарифмической фазе роста, МТБ Н37Ру центрифугировали и концентрировали в 100 раз, получая количество бактерий ~10¹⁰ КОЕ/мл. Различные разбавления бактериальной культуры наносили на планшеты, содержащие соединение (концентрация, соответствующая 4Х, 8Х и 16Х МИК концентрации). Подходящие разбавления бактериальной культуры также наносили на Μίάά1οότοο1< 7Н11 агар без лекарственного средства, подсчитывая количество бактерий в данной культуре. Планшеты выдерживали в течение 4 недель при 37°С, и подсчитывали КОЕ в планшетах без лекарственного средства. Планшеты, содержащие лекарственное средство, выдерживали в течение вплоть до 6 недель при 37°С, уточняя конечное количество спонтанно устойчивых колоний. Коэффициент спонтанной устойчивости рассчитывали делением количества колоний в планшетах, содержащих лекарственное средство (при указанной концентрации) на суммарное количество жизнеспособных бактерий, оцененное на планшетах без лекарственного средства. Устойчивые колонии случайным образом отбирали из планшетов, содержащих лекарственное средство, и выращивали в полной 7Н9 питательной среде, определяя степень их устойчивости к конкретному соединению, а также другим стандартным ТБ лекарственным средствам с различными механизмами действия.

Сиквенс полного генома.

Суммарную ДНК для секвенирования полного генома экстрагировали из устойчивых МТБ клеток, применяя стандартный фенол-хлороформный способ. Выход - определяли количественно на ОпЬй 2.0 флуориметре, применяя набор реактивов для широкого спектра дцДНК (ЫГе ΤοοΗηο1ο§ίθ5, Огапй Ыапф ΝΥ). Получение библиотеки осуществляли, применяя набор для получения образцов ДНК ЫеХега ХТ и Ж.Чега ХТ индексные праймеры (111ит1па, δаη ^^едο. ΟΑ). Следовали рекомендованному способу со следующими исключениями; применяли высокие первоначальные исходные концентрации ДНК и стадию нормализации библиотеки в конце пропускали ради количественной оценки библиотеки кПЦР. кПЦР осуществляли на ВюКай СРХ96 циклере, применяя набор для количественной оценки библиотеки Кара ВюЗуетв (\νοόιιπη, ΜΑ) (КК4824). Библиотеки разбавляли до стандартной концентрации 4 нМ и 2,5 мкл каждого образца (8-12 образца) смешивали и денатурировали 1Ν NаΟΗ (конечная концентрация 0,1Ν №ГОН) в течение 5 мин. Соответствующий образец разбавляли до 600 мкл, получая мультиплексный образец 15-20 пмоль. Образцы секвенировали на 111ит1па Μ^δе^ У2 приборе в виде одноиндексных данных для способа со спаренными концами 2x150. Все секвенирования нацелены на ~50-кратное покрытие.

Сбор и анализ данных о последовательностях осуществляли вне прибора, применяя СЬСВю Оеηοιηίο νοτΙΥηοΙι ν 6.0 (СатЬгЦде, ΜΑ). РаЛс.] файлы обрабатывали и анализировали следующим способом; дублирующие данные о последовательностях удаляли, и оставшиеся данные сокращали для достоверности и минимальной длины (50 п.о.). Затем, данные независимо объединяли при высокой точности (длина фракции=0,9, сходство фракции=0,99), применяя стандартные стоимости мисматча/вставки/делеции.

Детекцию ОНП/вставок в изолятах мутантов осуществляли картированием обработанных данных с исходной сборкой для сравнения, применяя те же условия сборки. ОНП качественно детектировали при минимальной чистоте 80%, применяя стандартные критерии. Соответствующие ОНП/вставки проверяли Β^ΑδΤ сравнением области относительно независимой сборки, помогая устранить возможные ошибки в результате направленного картирования сборки.

Фармакокинетика (ФК) азаиндольных соединений.

Исследование фармакокинетики азаиндольных соединений осуществляли на мышах (здоровых и зараженных) и крысах. Мышей предварительно обрабатывали 100 мг/кг АВТ через 2 ч после введения соединения. ФК данные для здоровых мышей применяли для разработки режима дозирования для исследования эффективности, тогда как информацию для зараженных мышей применяли для ФК-ФД анализа.

ΒΑ^Β/с мышам или крысам линии Вистар вводили испытуемые соединения 3, 4, 8 и 17 в отдельных

- 46 028611 группах пероральным искусственным питанием. Все пероральные введения осуществляли в виде суспензий в 0,5% НРМС и 0,1% Т\уссп 80. В отдельных группах испытуемое соединение 3 (0,5 мг/кг) и 17 (2 мг/кг) вводили внутривенно в виде раствора (20% ν/ν ΌΜΆ в фосфатно-буферном солевом растворе). Все образцы крови собирали через подкожную вену в МюгоусИс СВ300® (§1аг81еб1, Сегтапу) пробирки, покрытые литий-гепарином, и плазму получали из собранной крови центрифугированием.

ФК при пероральном введении для инфицированных однократно мышей: соединения и лекарственные средства для сравнения формулировали в 0,5% НРМС (гидроксипропилметилцеллюлоза) и 0,1% Т\уееп80 суспензиях. ВЛЬВ/е мышам (3 мыши/группа) вводили пероральным искусственным питанием 50, 100 и 200 мг/кг. Исследование фармакокинетики осуществляли на зараженных мышах на 24-й день дозирования (Кеппагб, 1986). Образцы крови собирали у каждой мыши через 0,5, 1,5, 3, 5, 7 и 24 ч после введения соединения. Приблизительно 30 мкл образцы крови собирали последовательным отбором из всех групп через подкожную вену в МюгоуеИе СВ300® (§1аг81еб1, Сегтапу) пробирки, покрытые литиемгепарином, и плазму (10 мкл) получали после центрифугирования. Образцы плазмы хранили при -20°С до анализа, применяя ЬС-МЗ/МЗ.

ФК для жидкости эпителиальной выстилки (ЖЭВ): ФК для ЖЭВ осуществляли на здоровых мышах (три мыши/группа), как описано ранее (Зо1ариге е1 а1., 2013) после введения одной пероральной дозы 100 мг/кг соединения, сформулированного в 0,5% НРМС и 0,1% Туееп 80 суспензиях. Через 0,5, 1,5, 3, 5, 7, 17 и 24 ч после дозирования, мышей анестезировали, применяя изофлуран, и кровь собирали пункцией ретроорбитального сплетения. Бронхоальвеолярный лаваж (БАЛ) осуществляли после трахеотомии, применяя 0,7 мл охлажденного льдом РВЗ. Набор для оценки количества мочевины, ΌΙϋΚ-500 (Вю-а88ау ЗуЧет^ ИЗА), применяли для оценки количества мочевины в плазме и БАЛ образцах. Объем ЖЭВ рассчитывали после нормализации концентрации мочевины в БАЛ с концентрацией плазмы, как описано в Маггу е1 а1., 2011. Образцы плазмы и БАЛ хранили при - 20°С до анализа, применяя ЕС-МЗ/МЗ.

Анализ образцов плазмы и БАЛ: 1 мг/мл базовый раствор каждого соединения получали в диметилсульфоксиде (ИМЗО) и разбавляли дважды в ацетонитриле. Калибровочную кривую с шестнадцатью точками применяли для каждого аналита, и стандартные кривые были в диапазоне 0,001-40 мкг/мл. Образцы плазмы/БАЛ осаждали добавлением охлажденного ацетонитрила (1:10 ν/ν), содержащего карбамазепин в качестве внутреннего стандарта (250 нг/мл). Образцы встряхивали и центрифугировали при 4000 об/мин в течение 30 мин при 10°С. Полученную в результате надосадочную жидкость смешивали с подвижной фазой (50% ацетонитрил в воде с 0,1% муравьиной кисмлотой). 10 мкл образца вводили в системе для жидкостной хроматографии (^а1ег8-ЛСфиТУ ИРЬС), соединенную с тройным квадрупольным масс-спектрометром (^а1ег8-ЛСфиТУ-ТфП; МЗ/МЗ). Данные для образцов получали в режиме положительных ионов и детектировали мониторингом множественных реакций (МКМ). Концентрации аналита определяли из стандартной кривой, полученной построением графика известных концентраций аналита относительно отношений площадей пиков (отклик пика аналита/внутреннего стандарта).

Анализ фармакокинетических данных для здоровых и зараженных животных: ФК анализ отношений времени и концентрации в плазме осуществляли νίηΝοηΙίη Р1юеш\ программным обеспечением (версия 6.2; РНагДдЫ. ИЗЛ). Программу для анализа без использования камерной модели, модель 200, применяли для расчета ФК параметров. Оценивали максимальную концентрацию лекарственного средства в плазме (С_тах), продолжительность времени до достижения С_тах (Т_тах), период полувыведения (1_1/2 и ЛИС с нулевого момента времени до бесконечности (АИС_0-ю). ЛИС рассчитывали, применяя правило трапеции (линейно-логарифмический), и величину АИС_0-ю рассматривали, только когда экстраполированная ЛИС была не более чем 20% первоначальной величины. Минимум три точки измерения наклона конечной части кривой применяли для расчета времени полувыведения.

ФК анализ для ЖЭВ, объем ЖЭВ в БАЛ образцах рассчитывали в виде объема БАЛ, умноженного на соотношение концентрации мочевины в БАЛ и плазме, как описано (Зо1ариге е1 а1., 2013; Маггу е1 а1., 2011). Концентрацию соединения в ЖЭВ рассчитывали умножением концентрации в образцах БАЛ на отношение объема БАЛ к объему ЖЭВ. АИС_0-ю в плазме и ЖЭВ рассчитывали программным обеспечением νίηΝοηΙίη Р1юеш\ для анализа без использования камерной модели (версия 6.2; РПагМцЫ, ИЗА). АИС свободной плазмы рассчитывали после умножения концентраций в каждый момент времени на свободную фракцию в плазме. Показатель проникновения в ЖЭВ легкого рассчитывали в виде отношения АиС_0-/. в ЖЭВ к свободной АИС_0-ю в свободной плазме/суммарной плазме в течение того же временного интервала. Допускали, что данное отношение, измеренное на здоровых мышах после введения одной дозы, оставалось постоянным в процессе исследования эффективности многократных доз на зараженных мышах. Анализ образцов с помощью разреженных матриц в νίηΝοηΙίη применяли для оценки стандартной ошибки (ЗЕ), связанной с оценкой АИС.

Исследования эффективности ίη νίνο.

Инокуляты микобактерии туберкулеза: МТБ Η37Κν (АТСС 27294), чувствительные ко всем стандартным антимикобактериальным агентам, выращивали, как приводится выше. Через 7-10 дней клетки собирали центрифугированием, промывали дважды 7Н9 питательной средой и повторно суспендировали в свежей 7Н9 питательной среде. Одномиллилитровые аликвоты приготовляли и хранили при -70°С. За- 47 028611 мороженные базовые растворы размораживали в день заражения животных и применяли в виде инокулятов.

Этические принципы и животные: все протоколы экспериментов с животными и применение животных одобрены комитетом по формированию этики в отношении животных (1АЕС), зарегистрированы комитетом по контролю и наблюдению за экспериментами на животных (СРСЗЕА), правительством Индии. Мужские особи ВАЬВ/с мышей получали у КСС НуйегаЪай, и крыс получали у Вюпеейь Вапда1оге, Ιηύία. Мышей и крыс (6-8 недель) 8 случайным образом распределяли по группам из трех или четырех в клетке и выдерживали в течение однонедельного периода акклиматизации перед началом исследования. Животных содержали в стандартных условиях с 12-часовым циклом день-ночь. Обеспечивали неограниченный доступ к пище (№Цп1аЪ®) и воде. Зараженных мышей содержали в отдельно вентилируемых клетках (А11епГотеп Тесйпо1од1е8, ИЗА) в виварии с уровнем биобезопасности 3 (ВЗЬ-3). Все способы, включая дозирование и отбор крови для определения фармакокинетики для зараженных мышей, осуществляли при строгой биобезопасности.

Аэрозольное заражение: мышей и крыс заражали микобактерией туберкулеза способом ингаляции, применяя модифицированное аэрозольное устройство Мэдисона (1ауагат еГ а1. 2003). Модель острого заражения получали высокодозовым аэрозольным заражением, которое вводило ~10⁴ КОЕ/легкое мышам, и обработку лекарственным средством начинали через три дня после заражения (Зсйгоейег еГ а1., 2003; 1ауагат еГ а1. 2003). Напротив, модель хронического заражения (мыши и крысы) (Зсйгоейег еГ а1., 2003; 1ауагат еГ а1. 2003; Китаг еГ а1. 2014) получали с низкодозовым аэрозольным заражением МТБ, которое доставляло ~50-100 бацилл/легкое, и обработку лекарственным средством начинали через 28 дней после заражения. Определяли количество бактерий, присутствующее в легких в начале обработки лекарственным средством. В конце обработки мышей анестезировали, легкие асептически удаляли и гомогенизировали в 3,0-мл соляном растворе, применяя ^йеаГоп Тейоп-О1а88 гомогенизатор ткани. Гомогенаты легких последовательно разбавляли стадиями 10-кратного разбавления и наносили на М1йй1еЪгоок 7Н11 планшеты с агаровой средой, дополненной 10% АЭС. Планшеты выдерживали при 37°С с 5% СО₂ в течение 3 недель, получая выделенные колонии.

Исследования ш νί\Ό влияния величины дозы на мышах: зараженных мышей предварительно обрабатывали ежедневными пероральными дозами 100 мг/кг аминобензотриазола (АВТ) за 2 ч перед введением соединений, блокируя ферменты Р450 метаболизма. Азаиндольные соединения 3 и 4 формулировали в виде 0,5% (те/ν) НРМС и 0,1% Т\уееп 80 (Зфта сйет1са1 со. ИЗА) суспензий и доставляли пероральным искусственным питанием. В модели острого заражения на мышах, животным дозировали 50, 100 мг/кг соединения 3 и 4 и изониазид при 3 мг/кг в качестве положительного контроля. В модели хронического заражения применяли дозы 30 и 100 мг/кг соединения 3 и 4. Рифампицин при 10 мг/кг применяли в качестве контрольного лекарственного средства для сравнения. Две отдельные контрольные группы с введением пустышки с и без АВТ применяли для исключения любого неблагоприятного эффекта АВТ на заражение МТБ. Все лекарственные средства и испытуемые соединения вводили перорально в течение четырех недель в формате введения 6/7 дней в неделю. Через 48 ч после завершения периода дозирования, животных подвергали эйтаназии СО2, легкие асептически удаляли и КОЕ подсчитывали после посева, как описано выше.

Исследования ш νί\Ό влияния величины дозы на крысах: азаиндольные соединения 8, 17, 30 и 34 формулировали в виде 0,5% (те/ν) НРМС и 0,1% Ттеееп 80 (З1дта сйет1са1 со. ИЗА) суспензий и доставляли пероральным искусственным питанием. В модели хронического заражения на крысах, животным дозировали 30, 100 мг/кг соединения 8, 17, 30 и 34. Рифампицин при 10 мг/кг применяли в качестве контрольного лекарственного средства для сравнения. Все лекарственные средства и испытуемые соединения вводили перорально в течение четырех недель, в формате введения 6/7 дней в неделю. Через 48 ч после завершения периода дозирования, животных подвергали эвтаназии СО2, легкие асептически удаляли, и КОЕ подсчитывали после посева, как описано выше.

Статистический анализ: количество колоний, полученное после посева, переводили в Ьод10 ^+1). где х равен суммарному количеству жизнеспособных бацилл, присутствующих в указанном образце. РгЬт войтеаге версию 4 (Огарй Рай Зойтеаге, 1пс., Зап Э1едо, СаПГогша) применяли для построения графиков фармакодинамических эффектов. Критерий множественного сравнения Дуннета применяли для дифференцирования статистически значимых различий КОЕ в легких у обработанных мышей относительно необработанных мышей.

Анализ на растворимость.

Растворимость соединений в 0,1 М фосфатном буфере, рН 7,4 определяли, как описано. Глибурид применяли в качестве ОС стандарта в данном анализе. Вкратце, соединения разбавляли в АСЬ/воде (40:60) до требуемой концентрации, образцы сушили, применяя Οеηеνас в течение 4 ч, и затем добавляли 800 мкл буфера. Планшеты, содержащие соединение, перемешивали в течение 24 ч при 25°С на ЕррепйогГ ТНегтонпх К при 750 об/мин. Наконец, концентрацию соединения оценивали, применяя УФ и МС анализ.

Анализ на связывание с белками плазмы.

Связывание с белками измеряли, применяя способ равновесного диализа. Соединение добавляли к

- 48 028611

10% плазме, получая концентрацию 20 мкМ, и подвергали диализу с изотоническим буфером в течение 18 ч при 37°С. Растворы плазмы и буфера анализировали, применяя общий ^СυVΜ8, и получали кажущуюся константу связывания для полученного соединения. Затем, константу связывания применяли для определения свободный % в 100% плазме.

Анализ на метаболическую стабильность (мышиный/человеческий микросомальный С1 _ист).

мкМ соединения выдерживали с 1 мг/мл микросомами (объединенные НЬМ/МЬМ с концентрацией белка 20 мг/мл) при 37°С в 166 мкл буфера (100 мМ фосфатный буфер, рН-7,4), содержащего 2 мМ раствор ΝΑΌΡΠ 20 мкл смеси для выдерживания гасили 4 объемами охлажденного ацетонитрила в различные моменты времени, а именно через 0, 2, 5, 10, 20 и 30 мин в новом 96 луночном планшете. Планшет для прекращения реакции центрифугировали при 4000 об/мин в течение 15 мин. 30 мкл надосадочной жидкости разбавляли до 300 мкл 50% ацетонитрилом в воде, и уменьшение количества субстрата анализировали, применяя ЬС-М8/М8.

Анализ на метаболическую стабильность (крысиные/человеческие гепатоцитный С1 _ист).

Жизнеспособность замороженных гепатоцитов определяли, применяя трипановый синий, и концентрацию клеток доводили до 10⁶ клеток на мл буфером (КНВ буфер). 1 мкМ соединение (в ацетонитриле; 0,01% ЭМ8О) выдерживали с 500 мкл гепатоцитных клеток (1 миллион клеток на мл) в ΝΌΝΟ планшете. Реакцию прекращали в различные моменты времени (0, 5, 15, 30, 60, 90 и 120 мин) добавлением 3 объемов охлажденного ацетонитрила к 100 мкл реакционной смеси и центрифугировали при 4°С в течение 15 мин. Надосадочные жидкости анализировали, применяя БС-М8/М8, на уменьшение количества субстрата.

1о§О.

Коэффициент разделения октанол/вода (Ьод Ό) на основе принципа встряхивания колбы измеряли следующим способом. Применяемым водным раствором был 10 мМ натрийфосфатный буфер рН 7,4. 20 мкл 10 мМ соединения, растворенного в ЭМ8О, растворяли в планшете для стеклянных пробирок. ЭМ8О удаляли, применяя Ο-βηβνΗΟ. Добавляли 435 мкл октанола, применяя Тот!ес, перемешивали в течение 5 мин для растворения. Дополнительное перемешивание осуществляли переворачиванием в течение 5 ч при 25°С, затем центрифугированием в течение 30 мин при 3000 об/мин. Осуществляли количественную оценку ЬС/^/АРР1/М8 и водного и октанольного слоев. Ьод Ό величину определяли согласно следующему уравнению.

_т , октанол/ Вводимый объем октанола _ч

ЬодЕ) = -) буфер/ Вводимый объем буфера

Способ утвержден для 1о§ О в диапазоне -2-5,0.

ЬЕКО анализ.

Соединения испытывали на потенциалозависимых ионных каналах, применяя устройство средней производительности для электрофизиологии 1опШог1<8™. Подробные способы относительно работы 1опШог1<8™ опубликованы (8сйгоейег 2013). Для осуществления эксперимента, желобок в положении клетки 1опШог1<8™ прибора заполняли суспензией клеток, и 96-луночный РВ8 планшет-приемник помещали в положение планшет 1. 384-луночный Ра!сйР1а!е™ помещали в полость 1опШог1<8™ и удерживали в данном положении, применяя зажим в полости. С данного момента времени протекание эксперимента автоматизировали и, в конце концов, получали некумулятивную кривую концентрация-эффект для испытуемого соединения.

Сводные данные

Описанные соединения, хотя и бактерицидные для МТБ и МусоЬас!егшт 8тедтаЙ8 (М8т), не показали активности относительно широкого спектра патогенов, таким образом указывая на превосходную специфичность к целевому патогену (табл. 2, фиг. 25). Соединения в серии сохраняли МИК для чувствительных к лекарственному средству и устойчивых к одному лекарственному средству клинических изолятов МТБ (табл. 3, фиг. 26), указывая на их потенциал для терапии чувствительного к лекарственным средствам ТБ и ТБ с множественной лекарственной устойчивостью. Соединения показали зависящую от времени бактерицидную кинетику относительно реплицирующегося МТБ с ~4 1од10 снижением колониеобразующих единиц (КОЕ) к 10 дню при 1-4 кратной концентрации МИК (фиг. 1). Соединения также были активными относительно внутриклеточных МТБ с ~ 1 1од10 снижением КОЕ при концентрациях, в 1-4-раза больших, чем МИК на ТНР1 клетках, зараженных МТБ (фиг. 2). В добавление к их высокой активности относительно реплицирующих бактерий, поднабор молекул в серии показал умеренную активность относительно нереплицирующих МТБ в гипоксических условиях (бактерицидность, измеренная как НВС в модели Уэйна), представленную соединением 3 (табл. 4). Было обнаружено, что данное соединение в серии не является цитотоксичным для линии эпителиальных клеток аденокарциномы легкого человека А549 после 72-часовой обработки (ММИК >100 мкМ, табл. 4). Мы также наблюдали >95% ТНР-1 жизнеспособность макрофагов после 7 дневного введения соединения при максимум 32 мкМ (табл. 4).

Фиг. 26 показывает табл. 3, активность относительно чувствительной к лекарственным средствам и

- 49 028611 устойчивой к лекарственным средствам МТБ.

Таблица 4

Микробиологические свойства соединений

соединение №	МТБ МИК (мкМ)	МТБ МБК (мкМ)	МТБ НВС (мкМ)	ММИК (А549) (мкМ)
3	1,56-3,12	1,56-3,12	50	>100
4	0,39-1,56	0, 78-1,56	>100	>100
8	<0,39	<0, 39	100	>100
17	1,56-3,12	0, 78-1,56	>100	>100

Спонтанные устойчивые мутанты с пониженной чувствительностью к 1,4-азаиндолам возникали при частоте 2,9х10^-9 при 8х МИК концентрации (табл. 5). Сиквенс полного генома устойчивых МТБ мутантов показал однонуклеотидное изменение в 0ргЕ1 (Κν 3790), приводя в результате к аминокислотному замещению в положении 314 (Туг^Н1§) без наблюдаемой значимой вторичной мишени. Тогда как соединения в серии были перекрестно устойчивыми для мутантного штамма (Туг314Н1§), устойчивость не наблюдали для лекарственных средств для сравнения, включая ВТ2043. Мутации цистеина 387 Г)ргЕ1 (Су§ 8ег, Су§ О1у), которые придают устойчивость к ВТ2043 (Макаго\, V. е! а1. 8с1епсе, 324, 801804 (2009), не показали перекрестной устойчивости к 1,4-азаиндолам (табл. 6). Кроме того, специфичность к мишени повторно подтверждали модуляцией МИК на сверхэкспрессию ОргЕ1, как также видно для ВТ2043 (см. 6).

Таблица 5

Частота устойчивости

	Μϊ6Η37Κν М1С (мкМ)	Μώ Η37Κ.Υ МВС (мкМ)	ΜΛΗ37Κν НВС(мкМ)	ММ1С(А549) (мкМ)
соединение 31	1.56-3.12	3.12-6.25	12.5-25	>82
соединение 32	1.56-3.12	1.56-6.25	>200	>100
	М1ЬОргЕ1 ОЕ М1С(мкМ)	М1Ь0ргЕ1 С3875	М1Ь0ргЕ1 С387О М1С (мкМ)	М1Ь0ргЕ1 Υ314Η М1С (МКМ)
соединение 31	25	0.78	0.78	25
соединение 32	50	0,39	0.39	200

Таблица 6

Перекрестная устойчивость в серии и эталонных соединений

Величины в	мкМ	МТБ Η37Κν	МТБ ОргЕ1 ОЕ	МТБ ОргЕ1 С3873	МТБ ОргЕ1 С3876	МТБ БргЕ1 Υ314Η
соединение	3	3, 12	50	3, 12	0,78	>100
соединение	4	0,39	25	0,39	0,39	>200
соединение	8	0,39	б, 25	0,39	0,39	>200
соединение	17	1,56	100	0,39	0,78	>200

ΒΤΖ043	0, 003	50	>0, 1	>0, 1	0,00150,003
изониазид	0, Об	0, 03	0, 06	0, Об	0, Об
этамбутол	2	2	2	4	2,0-4,0
рифампицин	0, 01	0, 003	0, 003	0, 003	0,006
ТМС207	0, б	0, 15	0,3	0, 15	0,15-0,3
моксифлоксацин	0, 125	0, 06	0, 06	0, 06	0, 06
офлоксацин	1	0,5	0,5	0, 5	0,5
ϋ-циклосерин	8	8	8	8	8,0-16, 0
клофазимин	0, 125	0, Об	0, 03	0, 03	0,125

Соединения в серии профилировали по метаболизму лекарственного средства ΐη \Иго и фармакокинетическим (Г)МРК) свойствам, репрезентативные соединения показаны в табл. 7. Растворимость в вы- 50 028611 сушенном ЭМЗО для соединений 3, 4 и 8 была меньшей, чем для соединения 17; повышенную растворимость можно приписать гидроксиэтиламидной боковой цепи. Величины связывания белка (% свободного) для соединений 3-4, 8 и 17 находились в диапазоне 5-22%. Расчетный клиренс для соединений 3-4, 8 и 17 находился в диапазоне 4-18% кровотока через печень (% ЬВР), оцененный применением человеческих микросом, человеческих гепатоцитов и крысиных гепатоцитов. Напротив, расчетный клиренс был большим для мышиных микросом (табл. 8), указывая на специфические для вида механизмы клиренса. Проницаемость, измеренная анализом Сасо-2, показывала, что данные соединения являются высокопроницаемыми без наблюдаемого значительного истечения. Соединения в серии не показали ингибирования СУР ферментов при 50 мкМ (табл. 7), указывая на их потенциал для комбинированной терапии. Получение профиля безопасности ΐη νίίτο соединений 3-4, 8 и 17 относительно панели человеческих мишеней и сердечных каналов не показало значительных препятствий, связанных с безопасностью, связанных с данной серией (табл. 7).

Таблица 7

ЭМРК и характеристики безопасности соединений

Соединение	3	4	8	17
1одО	2,1	3, 0	2, б	1,8
растворимость (мкМ)	8^а	5^а	4^а	124
человеческие СЬ_расч микросомы (% ЬВЕ)	10,4	15, б	10, 1	16,1
человеческие СЬ_расч гепатоциты (% ЬВЕ)	б, 0	4,3	4,3	9, 2
крысиные СЪ_расч гепатоциты (% ЬВЕ)	13	13	14,9	17,9
человеческий РРВ (свободный %)	9, 8	5	5	22
Сасо-2 А-В/В-А (1Е-б.см/с)	25/17	38/24	33/17	11/30
СУР^Ь ингибирование (мкМ)	>50	>50	>50	>50
НЕЕС (мкМ)	>33	>33	>33	>33
Показания вторичной фармакологии Ю50 (мкМ)	Отсутствие значительных показаний

^а кинетическая растворимость в испытуемой среде >100 мкМ; ⁶ СУР1Л2, СУР2С9, СУР2С19, СУР2Э6, СУР3Л4.

Таблица 8

Большой собственный клиренс для мышиных микросом

Соединение	3	4	8	17
Мо микросомальный С1_ис1	, (мкл/мин/мг)	104	180	108	25

На основе свойств ΐη νίίτο соединения 3-4, 8 и 17 профилировали на ΐη νίνο ФК на мышах и крысах, оценивая пероральное воздействие. ФК воздействие на мышей измеряли в присутствии аминобензотриазола (АВТ), Рап-ингибитор изоформ СУР применяли для блокирования мышиного специфического клиренса. Значительное пероральное воздействие наблюдали для соединений 3-4, 8 и 17 и на крысах и на мышах (фиг. 3, табл. 9). На крысах наблюдали хорошую корреляцию между клиренсом ΐη νίίτο и ίη νίνο с 92% биодоступностью для соединения 17 (табл. 9). Эффективность ίη νίνο двух репрезентативных соединений (3 и 4) оценивали на ВЛЬВ/с мышах в острой и хронической модели ТВ (1ауагат οί а1. 2003; Маггу οί а1. 2011; Китаг οί а1. 2014). В модели острого ТВ, обработку начинали на 3 день после заражения, тогда как обработку начинали на 28 день в модели хронического ТБ. Четыре недели обработки соединениями 3 и 4 снижало бактериальную нагрузку в легких на >1,5 1ο§10 КОЕ, и наблюдали статистически значимую зависящую от дозы эффективность (фиг. 1). Пероральное воздействие соединений 3 и 4, оцененное на зараженных животных, показало ЛИС в диапазоне 200-700 мкМ-ч, и концентрации поддерживали выше МИК в течение ~10 ч после каждого дозирования (%Т > МИК ~10 ч), приводя в результате к эффективности в мышиной модели хронического ТВ (фиг. 4; табл. 10). Интересно, что концентрации соединений 3 и 4, измеренные в жидкости эпителиальной выстилки легких здоровых мышей (ФК ЖЭВ), были сравнимыми со свободными концентрациями в плазме для обоих соединений (фиг. 4, табл. 11), показывая значительное воздействие в сайте-мишени. Таким образом, наблюдали хорошую корреляцию между концентрациями в плазме и/или ЖЭВ и фармакодинамическим эффектом. В мыши- 51 028611 ной модели острого и хронического ТВ, животные переносили вводимые дозы в течение одного месяца, и неблагоприятных эффектов не наблюдали относительно веса тела и макропатологии.

Таблица 9

Фармакокинетические параметры соединений для здоровых ВАЬВ/с мышей и крыс линии Вистар после введения единичной дозы (данные представляют собой среднее +8.Ό., η=3, если не указано иначе)

Соединение		3	4	8^а	17^ь
мышиные РОРК (+АВТ)	доза (мг/кг)	100	100	30	50
АиСо-со (мкМ.ч)	521,50+ 19, 60	346,73+ 42,75	64,19	420,30+ 23,5

	Т_тах (Ч)	б, 33 + 1, 15	4, 67+ 1,15	2	1,33+ 0,58
Стах (МКМ)	66,01+ 11,17	44,12+ 13, 0	13,36	74,79+ 15, 61
Τΐ/2 (Ч)	1,91+ 0, 11	3, 63+ 1,46	4,15	1,78+ 0, 10
крысиные ινρκ	доза (мг/кг)	0,5	Νϋ	Νϋ	2
СР (мкл/мин/к г)	15,50+ 3,21	27,35
ν₃₃ (л/кг)	1,05+ 0,28	7,34
АИСо-2 (мкМ.ч)	1, 60+ 0,29	3,46
Τΐ/2 (ч)	2,22+ 2,51	2,06
Сон (мкМ)	1,7 6+ 0,42	2, 64
крысиные РОРК^С	доза (мг/кг)	30	30	30	20
АиСо-со (мкМ. с)	101,38	22,86	29,29	59, 82
Ттах (Ч)	2,0	3,0	4,5	0,5
Стах (МКМ)	15, 01	2,35	3, 69	17,84
Τΐ/2 (Ч)	2,01	3, 64	3,58	2,74
К	96%	ΝΡ	ΝΡ	100%

ΝΏ: не определяли; соединение 5 (η=2);

^Ь соединение 6 для крысиных ΙΥΡΚ (η=2); для всех соединений (η=2)

- 52 028611

Коэффициент проникновения в ЖЭВ 1,4-азаиндолов у здоровых ВАБВ/с мышей после введения одной дозы (данные представляют собой среднее +δ.Ό., п=3, если не указано иначе)

Таблица 10

Соединение	3	4
матрица	ЖЭВ	плазма	Свободная плазма	ЖЭВ	плазма	Свободная плазма
доза (мг/кг)	100	100
С_тах (МКМ)	74,0+3,77	63,84+7,37	4,85+0,56	39,92+13,71	38,09+5,86	1,52+0,07
АиСо-со (ч*мкМ)	712,85+176,16	573,27+78,76	43,46+5, 96	410,37+91,52	406,81+44,56	12,97+2,78
Коэффициент проникновения ЖЭВ (на основе АТСС свободной плазмы)*	7,29-26,10	12,4-50,9
коэффициент проникновения ЖЭВ (на основе АТСС общей плазмы)	0,60-1,97	0,52-1,51

* Рассчитан на основе свободного % Ни РРВ; коэффициент проникновения ЖЭВ рассчитан при 95% доверительном интервале.

Таблица 11

Фармакокинетические параметры 1,4-азаиндолов для зараженных ВАБВ/с мышей после нескольких пероральных доз (данные представляют собой среднее ± δ.Ό., п=3, если не указано иначе)

Соединение		3	4
РОРК зараженных мышей для кратковременной эффективности (+АВТ)	доза (мг/кг)	50	100	50	100
Стах (МКМ)	17,79+5,61	41,28+10,28	38,91+15,16	72,62+8,31
АиСо-со (мкМ*ч)	106,08+3,04	332,15+152,51	199,62+101,21	529,03+85,07
Ттах (Ч)	4,33+1,15	3,83+2,84	4,50+2,78	5,67+2,31
Τΐ/2 (Ч)	2,38+0,19	3,02+1,99	2,23+0,35	2,02+0,09
% £ Т>М1С	23	41	39	50
% Т>М1С	58	66	75	83
РОРК зараженных мышей для продолжительной эффективности (+АВТ)	доза (мг/кг)	30	100^а	30	100^ь
Стах (МКМ)	32,78+14,41	71,24	17,36+1,76	43, 17
АиСо-со (мкМ*ч)	251,94+64,01	695,76	226,98+28,87	772,33
Ттах (Ч)	2,00±0,87	3	5,67+2,31	5
Τΐ/2 (Ч)	4,4 6+0,16	4,4	3,85+0,54	4,21

	% £ Т>М1С	29	63	29	100
% Т>М1С	92	100	100	100

^а Соединение 3 (п=2); ^Ь соединение 4 (п=1).

Таблица 12

Фармакокинетические параметры (среднее^Г)) 1,4-азаиндольных соединений после введения нескольких пероральных доз (100 мг/кг) зараженным МТБ мужским особям крыс линии Вистар

Соединение	8	17	30	34
доза (мг/кг)	100
С_тах (мкм)	11,9+3,0	46,1+7,7	3,4+2,0	31,5+3,0
Ттах (Ь)	1,5+0,6	5,3+1,2	3,3+2,3	2,0+0,0
Аисо-» (мкМ*ч)	98,4+31,9	986,4+274,3	23,3+11,7	166,1+43,9
Τΐ/2 (ч)	7,2+1,3	3,8+0,6	3,3+1,1	4,6+0,0

Claims

1. Соединение формулы (I) в которой К¹ выбран из водорода, фтора, брома, -ОСН₃ и метила;

К² представляет собой водород или метил;

К³ представляет собой водород или метил;

X представляет собой Ν;

К⁵ выбран из водорода, фтора, -СЕ₃ и -ΟΝ;

Υ представляет собой Ν;

Ζ представляет собой Ν или СК⁷;

К⁷ выбран из водорода, фтора, -ОСН₃, -ОСНР₂, -ОСН₂СР₃ и -\(СН₃)₂;

η равен 1 или 2;

К⁹ выбран из фтора, циклопропила, -ОСН₃, -ОН, -ОСЕ₃, СНР₂, -СН(Е)СН₃ и -СН(ОН)СН₃, или где соединение представляет собой

- 54 028611 или его фармацевтически приемлемая соль.

2. Соединение по п.1, где соединение выбрано из

- 55 028611

- 56 028611

- 57 028611

- 58 028611

- 59 028611 или его фармацевтически приемлемая соль.

3. Фармацевтическая композиция, обладающая способностью ингибировать декапренилфосфорилβ-ϋ-рибоза 2'-эпимеразу-1 (ЭргЕ1), содержащая терапевтически эффективное количество соединения по п.1 или 2 или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

4. Применение соединения по п. 1 или 2 или его фармацевтически приемлемой соли в лечении туберкулеза или микобактериальной инфекции.

5. Применение соединения по п.1 или 2 в получении лекарственного средства для лечения туберкулеза или микобактериальной инфекции.

- 61 028611

6. Способ лечения туберкулеза или микобактериальной инфекции, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества соединения по п. 1 или 2 или его фармацевтически приемлемой соли.

7. Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по п.1 или 2 или его фармацевтически приемлемую соль для применения в лечении туберкулеза или микобактериальной инфекции.

8. Применение соединения по п.1 или 2 или его фармацевтически приемлемой соли в лечении заражения микобактериями, экспрессирующими ЭргЕ1.

9. Применение соединения по п.1 или 2 в получении лекарственного средства для лечения заражения микобактериями, экспрессирующими ЭргЕ1.

10. Способ ингибирования ЭргЕ1, включающий введение терапевтически эффективного количества соединения по п. 1 или 2 или его фармацевтически приемлемой соли.

11. Фармацевтическая композиция, обладающая способностью ингибировать декапренилфосфорилβ-Ό-рибоза 2'-эпимеразу-1 (ЭргЕ1) микобактерий, содержащая терапевтически эффективное количество соединения по п.1 или 2 или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.