EA026443B1

EA026443B1 - Меченныелютецием аналоги бомбезина для лучевой терапии

Info

Publication number: EA026443B1
Application number: EA201300611A
Authority: EA
Inventors: Зандра Борковски; Розальба Манси; Хельмут Меке
Original assignee: Пирамаль Имэджинг Са; Универзитетсшпиталь Базель
Priority date: 2010-11-22
Filing date: 2011-11-21
Publication date: 2017-04-28
Also published as: AU2011333948A1; BR112013012503A2; WO2012069410A1; IN2013MN01188A; EP2643024A1; NZ610740A; KR20140053819A; CN103476434A; CA2818694A1; US20140023585A1; EA201300611A1; SG190371A1; MX2013005697A; JP2014500262A; IL226498A0

Abstract

Настоящее изобретение относится к новым меченнымлютецием аналогам бомбезина для лечения опухоли лучевой терапией.

Description

Настоящее изобретение относится к новым меченным лютецием аналогам бомбезина для лечения опухоли лучевой терапией.

Предшествующий уровень техники

Лучевая терапия является наиболее распространенным способом лечения рака, при этом ежегодно во всем мире 50% онкологических больных проходят лучевую терапию. Пучки частиц обычно используют для обработки злокачественной ткани с использованием фотонов (рентгеновские лучи/у-излучение) или электронов, которые продуцируют излучение с низкой линейной передачей энергии в ткань. Такие пучки обычно получают с использованием линейных ускорителей или радиоактивных источников. Указанные виды лучевой терапии или радиохирургии широко используют в клиниках и больницах. Однако основная проблема стандартной лучевой терапии заключается в трудности эффективного уничтожения раковых клеток и рецидивах опухолей, что приводит к неудачному лечению. Кроме того, при таком лечении в значительной степени поражаются также здоровые ткани, вызывая радиационную токсичность. Обычные побочные эффекты включают воспаление облученного участка, а также токсический некроз и глиоз мозга, которые в комбинации со связанными с ними деменцией и когнитивными нарушениями представляют собой серьезные побочные эффекты лучевой терапии в нейроонкологии. Эффективная лучевая терапия рака включает облучение большими дозами радиации для точной ориентации излучения и его направления непосредственно в положение опухолей. В связи с этим молекулярно-направленная лучевая терапия в настоящее время считается перспективным подходом выполнения этой цели: для выбора эффективной и селективной дозы радиоактивного излучения в опухоли в комбинации со сниженными побочными эффектами для здоровых тканей.

Пептиды представляют собой биологические молекулы, которые играют важную роль во многих физиологических процессах, включая их действие в качестве нейромедиаторов, гормонов и антибиотиков. В ходе исследований была установлена их важность в таких областях, как неврология, иммунология, фармакология и цитобиология. Пептиды связываются с рецептором на поверхности клетки-мишени, и биологическое действие лиганда передается в ткань-мишень. Опухоли избыточно экспрессируют различные типы рецепторов, с которыми пептиды могут связываться избирательно. В статье Воегтап и др., §еш1иаг ίη Ыис1еаг Мебюте, т. 30, № 3, сс. 195-208 (июль 2000) и в статье 8сНойе1ш5 и др., Мебюбк, т. 48, № 2, сс. 161-177 (июнь 2009) представлен не полный, но значительный список пептидов, связывающихся с рецептором опухоли, таких как соматостатин, вазоактивный пептид кишечника (ВПК), бомбезин, связывающийся с рецептором гастрин-высвобождающего пептида (ГВП), гастрин, холецистокинин (ХЦК) и кальцитонин.

Установлено, что пептид бомбезин избыточно экспрессируется в рецепторах ВВ2 в клетках рака предстательной железы. Известно, что лучевая терапия с использованием радиоактивно-меченных пептидов является эффективной в случае нейроэндокринных опухолей с использованием радиоактивномеченных (⁹⁰Υ, ¹⁷⁷Ьи или ^{1 п}1п) аналогов соматостатина (см. статью Вобе1 Ь. и др., Еиг. Кеу. Меб. РНагтасо1. δει., т. 14, № 4, сс. 347-351 (апрель 2010)). Кроме того, аналоги бомбезина, специфически связывающиеся с рецептором ГВП, используют для наиболее перспективной лучевой терапии опухолей человека с использованием ¹⁷⁷Ьи-ЛМВЛ (см. статью Байту Ь.Е. и др., 1. Ыис1. Меб., т. 47, № 7, сс. 1144-1152 (июль 2006)). Однако наиболее чувствительным к облучению с использованием указанных радиоактивномеченных пептидов органом являются почки. Повышенный захват и удержание почками излучения может привести к значительным побочным эффектам (например, к тошноте) и острой или хронической нефротоксичности. Таким образом, лечение радиоактивно-меченными пептидами на основе соматостатина используют в таких дозах, которые не вызывают нефротоксичности и, кроме того, гематотоксичности в качестве следующего наиболее опасного побочного эффекта.

СВ-ТЕ2А является сшитым моноамидом, который представляет собой стабильную хелатную систему для ^64/67Си, которую включают в аналоги бомбезина для исследований рака предстательной железы ίη νίΐΐΌ и ίη νί\Ό. Визуализационные исследования методом ПЭТ/КТ показывают, что радиоактивномеченные аналоги бомбезина, специфически связывающиеся с рецептором ГВП, селективно поглощаются ксенотрансплантатами опухоли предстательной железы и значительно менее интенсивно поглощаются тканями, которые не являются мишенями (см. статью Раггу 1екке 1., МюгоРЕТ ипащпд о! Ьгеак! сапсег икшд габю1аЬе1еб ЬотЬе/ίη апа1одк 1агде11пд (Не дакйтп-гекактд рерОбе гесерЮг. Вгеак! Сапсег Кек. Тгей. 8ргтдег, т. 101, № 2, сс. 175-183 (2007)).

С теоретической точки зрения, высокая аффинность лиганда в отношении рецептора, фармакокинетика лиганда и доступность антигена ускоряют удерживание радиоактивно-меченного лиганда в тканях, экспрессирующих рецептор, и его клиренс из органов, не являющихся мишенями, что можно изменить в ходе химической реакции. Следовательно, существует необходимость в разработке оптимальной пептидной конструкции. Основная задача заключается в присоединении радионуклида к биомолекуле. Описаны различные способы, которые осуществляют в присутствии или в отсутствие линкера между радионуклидом и биомолекулой. Таким образом, известны различные линкеры. Например, в статье 8тйН С.1. и др., Ыис1. Меб. Вю., т. 30, № 2, сс. 101-109 (2003) описан радиоактивно-меченный бомбезин, в котором

- 1 026443 линкером является ΌΟΤΑ-Χ, где X обозначает ω-ΝΗ₂-(ΟΗ₂)₇-ΟΟΟΗ (8-Аос).

Объектом настоящего изобретения является разработка улучшенных радиоактивно-меченных терапевтических агентов на основе антагонистов пептида бомбезина, которые являются перспективными в качестве визуализирующих агентов для эффективного лечения опухолей человека, экспрессирующих рецептор ГВП человека, с использованием радиоактивно-меченных пептидов.

Краткое описание настоящего изобретения

Объект настоящего изобретения подробно описан ниже. Настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I), к способу получения соединений формулы (I) и к способу лечения опухоли радионуклидной терапией (лучевой терапией).

Подробное описание настоящего изобретения

Первый объект настоящего изобретения относится к соединениям или конъюгатам антагониста аналога пептида бомбезина формулы (I)

где К¹ обозначает металлический хелатирующий агент, пригодный для образования хелатного комплекса с [¹⁷⁷Ьи],

К² обозначает спейсер, присоединенный к Ν-концевому остатку пептида К³, или ковалентную связь, К³ обозначает последовательность антагониста аналога пептида бомбезина, еед 1-4:

вея 1: 0-РЬе-01п-Тгр-А1а-Уа1-01у-Н15-81а-Ьеи-МН2, вея 2: О-РНе-О1п-Тгр-А1а~Уа1-О1у-Н18-Ееи;|/(СНОН-СН2)-(СН2)2-СНз, вея 3: О-РЬе-С1п-Тгр-А1а-Уа1-С1у-Н18-Ьеиф(СН2ЫН)-РЬе-КН2 и вея 4: О-РЬе-01п-Тгр-А1а-Уа1-01у-Н1в-Ьеиф(СН₂МН)-Суз-НН2, и фармацевтически приемлемой соли.

ψ обозначает, что амидная карбонильная группа (С=О) заменена на (СН₂)-группу. Например

Εευψ(0Η₂ΝΗ)-Ο1γ.

Кроме того, настоящее изобретение относится к пригодным солям неорганических или органических кислот и гидратам соединений формулы (I).

Предпочтительно металлический хелатирующий агент К¹, пригодный для образования хелатного комплекса с [¹⁷⁷Ьи], выбирают из группы, включающей хелатирующие агенты на основе ΌΟΤΑ-, ΝΟΌΑδΑ-, ΝΟΌΑΟΑ-, ΝΟΤΑ-, ΌΤΡΑ-, ΕΌΤΑ- и ТРИЛ-. а также их близкие аналоги.

ΌΟΤΑ обозначает 1,4,7,10-тетраазациклододекан-Н,№,№',№-тетерауксусную кислоту.

ΌΤΡΑ обозначает диэтилентриаминпентауксусную кислоту.

ΕΌΤΑ обозначает этилендиамин-Ы,№-тетрауксусную кислоту.

ТЕТА обозначает 1,4,8,11-тетраазациклододекан-1,4,8,11-тетрауксусную кислоту.

ΝΟΤΑ обозначает 1,4,7-триазациклононан-1,4,7-триуксусную кислоту.

ΝΟΌΑδΑ обозначает 1,4,7-триазациклононан-1-янтарная кислота-4,7-диуксусную кислоту.

ΝΟΌΑΟΑ обозначает 1,4,7-триазациклононан-Н-глутаровая кислота-№,№'-диуксусную кислоту.

ΤΕΤΤΑ обозначает 1,4,7,10-тетраазациклотридекан-1,4,7,10-Н,№,№',№''-тетрауксусную кислоту.

Более предпочтительно металлический хелатирующий агент К¹ выбирают из группы, включающей хелатирующие агенты на основе ΌΟΤΑ-, ΝΟΤΑ-, ΌΤΡΑ- и ТЕТА-.

Структуры указанных хелатирующих лигандов в полностью депротонированной форме приведены ниже.

Еще более предпочтительно металлический хелатирующий агент К¹ обозначает ΌΟΤΑ (1,4,7,10тетраазациклододекан-Н,№,№',№-тетрауксусную кислоту).

Предпочтительно К² обозначает спейсер, присоединенный к Ν-концевому остатку пептида К³, характеризующийся формулой (II)

- 2 026443

где х равен целому числу от 0 до 3, ζ равен целому числу от 0 до 3, (*) обозначает связь с К¹ и (**) обозначает связь с К³.

Более предпочтительно х равен 0, ζ равен 1, т.е. одна (СН₂)-группа. χ/ζ = 1 обозначает (СН₂)-группу, χ/ζ = 2 обозначает (СН₂-СН₂)-группу, χ/ζ = 3 обозначает (СН2-СН2-СН2)-группу.

Предпочтительно К³ обозначает последовательность кед 1: П-РЬе-О1п-Тгр-А1а-Уа1-О1у-Н1к-81а-ЬеиΝΗ₂.

Кроме того, функциональные группы пептида бомбезина К³ защищены с использованием групп, блокирующих или защищающих функциональные группы, такие как карбоксильная группа или аминогруппа. Конъюгат формулы (I) по настоящему изобретению представляет собой необязательно защищенный конъюгат, в котором функциональная группа(ы) пептида бомбезина является защищенной. Предпочтительно последовательность кед 1 включает защитные группы, О1п(Тт1)-Ттр(Вос)-А1а-Уа1-О1уН1к(Тп)-§1а-Ьеи-№Н- (последовательность кед 1 включает защитные группы, которыми являются трифенилметил (Тг1) или трет-бутилоксикарбонил (Вос)).

О-защитную группу выбирают из группы, включающей метил, этил, пропил, бутил и трет-бутил. Предпочтительно О-защитную группу выбирают из группы, включающей метил, этил и трет-бутил. Более предпочтительно О-защитной группой является трет-бутил.

Ν-защитную группу выбирают из группы, включающей карбобензилокси (СЬх.), третбутилоксикарбонил (ВОС), 9-флуоренилметилоксикарбонил (РМОС) и трифенилметил. Предпочтительно Ν-защитную группу выбирают из группы, включающей карбобензилокси (СЬх.), третбутоксикарбонил (ВОС) и 9-флуоренилметилоксикарбонил (РМОС). Более предпочтительно Ν-защитной группой является трет-бутоксикарбонил (ВОС) и 9-флуоренилметилоксикарбонил (РМОС).

Предпочтительным соединением формулы (I) является

Радиоизотоп	Хелатирующий агент К.'	Спейсер К²	Последовательность з бомбезина К.
_г177_т , [ Ьи]	ϋΟΤΑ-	4-амино-1- карбоксиметилпиперидин-	О-РЬе-С1п-Тгр-А1а- Уа1-О1у-Н1з-81а- Беи-ИНг

[¹⁷⁷Ри]-ВОТА-4-амино-1-карбоксиметилпиперидин-П-РЬе-О1п-Тгр-А1а-Уа1-О1у-Н1к-81а-Реи-МН₂

Второй объект настоящего изобретения относится к композиции, включающей соединение формулы (I) и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель. Специалистам в данной области техники известны вспомогательные агенты, наполнители, эксципиенты, разбавители, носители или адъюванты, пригодные для требуемых фармацевтических составов, препаратов или композиций, которые специалисты выбирают в соответствии с их квалификацией.

Введение соединений, фармацевтических составов или комбинаций по настоящему изобретению осуществляют согласно любому из общеизвестных в данной области техники способов введения. Предпочтительным способом является внутривенная доставка.

В предпочтительном варианте композиция включает [¹⁷⁷Ьи]-ООТА-4-амино-1-карбоксиметилпиперидин-О-РЬе-О1п-Тгр-А1а-Уа1-О1у-Н1к-81а-Реи-МН₂ и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

Третий объект настоящего изобретения относится к способу лучевой терапии онкологического пациента с использованием соединения формулы (I) в качестве агента лучевой терапии.

Пациентом является любое млекопитающее, такое как животное или человек, предпочтительно человек.

- 3 026443

Агентом лучевой терапии является соединение формулы (I), предпочтительно [¹⁷⁷Ьи]-ООТА-4амино-1-карбоксиметилпиперидин-П-РЬе-С1п-Тгр-А1а-Уа1-С1у-Н15-§1а-Ьеи-НН₂. Онкологическим пациентом является пациент с диагнозом пролиферативного заболевания, где пролиферативным заболеванием является рак, характеризуемый наличием опухоли и/или метастаз. Предпочтительно опухоль и/или метастазы расположены в предстательной железе, легком или молочной железе.

Настоящее изобретение относится также к конъюгату/соединению формулы (I) или его фармацевтической композиции для лучевой терапии рака.

Настоящее изобретение относится также к применению соединения формулы (I) или его фармацевтической композиции для получения агента, предназначенного для лечения рака лучевой терапией.

Способ лучевой терапии включает следующие стадии: введение субъекту, нуждающемуся в указанном лечении, соединения формулы (I) или его композиции в терапевтически эффективных количествах и после локализации соединения формулы (I) или композиции в требуемых тканях облучение тканей для обеспечения требуемого терапевтического эффекта.

Соединения по настоящему изобретению являются пригодными для визуализации множества видов рака, при которых наблюдается избыточная экспрессия рецептора ГВП.

Предпочтительно термин рак включает, но не ограничивается только ими, карциному, такую как карцинома мочевого пузыря, молочной железы, ободочной кишки, почки, печени, легкого, включая мелкоклеточный рак легкого, пищевода, желчного пузыря, яичника, поджелудочной железы, желудка, шейки матки, щитовидной железы, предстательной железы и кожи, опухоли кроветворной системы лимфоидного и миелоидного происхождения, опухоли мезенхимальной природы, опухоли центральной и периферической нервной системы, другие опухоли, включая меланому, семиному, тератокарциному, остеосаркому, пигментную ксеродерму, кератоксантому, фолликулярный рак щитовидной железы и саркому Капоши.

Предпочтительно настоящее изобретение является пригодным для лечения рака предстательной железы, легкого или молочной железы и развившихся в результате опухолей, более предпочтительно рака предстательной железы.

Радиоактивно-меченные соединения формулы (I) по настоящему изобретению можно вводить внутривенно в любом фармацевтически приемлемом носителе, например, в стандартной среде, такой как водная солевая среда или плазма крови, в виде фармацевтической композиции для внутривенного введения. Такая среда также может содержать стандартные фармацевтические материалы, такие как, например, фармацевтически приемлемые соли для поддержания осмотического давления, буферные вещества, консерванты и т.п. Предпочтительными средами являются стандартный солевой раствор и плазма. Пригодные фармацевтически приемлемые носители известны специалистам в данной области техники, см., например, справочник КешшдХоп'к Ргасйсе οί Рйагшасу, изд. 11 и журнал ί. Рйагшасеийса1 Бшепсе & ТесЬпо1о§у, т. 52, № 5 (сентябрь-октябрь), сс. 238-311, табл. на стр. 240-311, обе публикации включены в настоящее описание в качестве ссылок.

Концентрация соединения формулы (I) и фармацевтически приемлемого носителя, например, в водной среде зависит от конкретной области применения. Достаточным количеством в фармацевтически приемлемом носителе является количество, при котором достигается удовлетворительная визуализация мишени (например, опухоли).

Согласно настоящему изобретению радиоактивно-меченные соединения формулы (I) в виде нейтральной композиции или в виде соли в комбинации с пригодным противоионом вводят в виде однократной дозы для инъекции. Любые из стандартных носителей, известных специалистам в данной области техники, такие как стерильный солевой раствор или плазма, можно использовать после введения радиоактивной метки для получения раствора для инъекции по настоящему изобретению. По сравнению с лучевой терапией с использованием радиоактивно-меченного соматостатина, при использовании антагонистов бомбезина формулы (I) по настоящему изобретению дозу, предназначенную для введения агента лучевой терапии, увеличивают приблизительно до 1-50 ГБк в зависимости от органов, чувствительных к лучевой терапии и к величине дозы (обычно приблизительно 4-8 ГБк на цикл, 3 цикла).

Четвертый объект настоящего изобретения относится к способу получения конъюгата антагониста аналога пептида бомбезина формулы (I) [^|77Ьи]-К.^|-К.²-К.³ (1), где К¹ обозначает металлический хелатирующии агент, пригодный для образования хелатного комплекса с [¹⁷⁷Ьи],

К² обозначает спейсер, присоединенный к Ν-концевому остатку пептида К³, или ковалентную связь,

К³ обозначает последовательность антагониста аналога пептида бомбезина, кед 1-4

- 4 026443 зея 1: П-РЬе-О1п-Тгр-А1а-Уа1-О1у-Н13-81а-Ьеи-ИН2, зея 2: В-РЬе-01п-Тгр-А1а-Уа1-О1у-Н15-Ееши(СН0Н-СН₂)-(СН₂)₂-СНз, зея 3: О-РЬе-О1п-Тгр-А1а-Уа1-О1у-Н13-Ееиу(СН₂ИН)-РЬе-ИН₂ и зея 4: П-РЬе-О1п-Тгр-А1а-Уа1-О1у-Н1з-Ееиу(СН₂ИН)-Суз-ИН₂, включающему следующие стадии:

необязательно присоединение спейсера К² к антагонисту аналога пептида бомбезина К³, при этом получают К²-К³ (стадия 1), присоединение К²-К³ к пригодному хелатирующему агенту К¹ (стадия 2) и получение радиоактивного хелатного конъюгата антагониста аналога пептида бомбезина [¹⁷⁷Еи]-К¹К²-К³ (стадия 3).

Схема 1

Введение радиоактивной метки в конъюгат антагониста аналога пептида бомбезина

Стадия 1

Стадия 2

Р2—«3

Стадия 3

...........П2 ^{1 1} КЗ

1_и ,_ПК;-Й2 КЗ 0)

Предпочтительно способ получения конъюгата антагониста аналога пептида бомбезина, характеризующегося общей формулой (I), включает стадию получения радиоактивного хелатного конъюгата с [¹⁷⁷Еи] (стадия 3).

К¹, К² и К³ имеют значения, указанные выше.

Из полученного соединения необязательно удаляют защитные группы с защищенных функциональных групп.

Варианты осуществления настоящего изобретения и предпочтительные признаки можно комбинировать, и все они включены в объем настоящего изобретения. Предпочтительные признаки, описанные для соединения общей формулы (I), включены в настоящее описание.

Пятый объект настоящего изобретения относится к набору, включающему закрытый флакон, содержащий предварительно определенное количество соединения, характеризующегося общей химической формулой (I), или соединения, характеризующегося общей химической формулой (I), где [¹⁷⁷Еи] отсутствует, и их пригодные соли неорганических или органических кислот, гидраты, комплексы, сложные эфиры, амиды и сольваты. Необязательно набор включает фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель, эксципиент или адъювант.

Определения.

[¹⁷⁷Еи] обозначает радиоизотоп лютеция, характеризующийся периодом полураспада 6, 7 сут.

Использованные в описании настоящего изобретения и в формуле изобретения термины соли неорганических или органических кислот, неорганическая кислота и органическая кислота обозначают минеральные кислоты, включая, но, не ограничиваясь только ими, кислоты, такие как карбоновая, азотная, фосфорная, хлористо-водородная, перхлорная или серная кислота, или кислые соли указанных кислот, такие как гидросульфат калия, или соответствующие органические кислоты, которые включают, но не ограничиваясь только ими, кислоты, такие как алифатические, циклоалифатические, ароматические, аралифатические, гетероциклические, карбоновые и сульфоновые кислоты, примеры которых включают муравьиную, уксусную, трифторуксусную, пропионовую, янтарную, гликолевую, глюконовую, молочную, яблочную, фумаровую, пировиноградную, бензойную, ортоаминобензойную, фумаровую, салициловую, фенилуксусную, миндальную, эмбоновую, метансульфоновую, этансульфоновую, бензолсульфоновую, пантотеновую, толуолсульфоновую, трифторметансульфоновую и сульфаниловую кислоту соответственно.

Использованные в описании настоящего изобретения и в формуле изобретения термины аминокислотная последовательность и пептид обозначают полиамид, полученный (поли)конденсацией по крайней мере двух аминокислот.

Использованный в описании настоящего изобретения и в формуле изобретения термин аминокис- 5 026443 лота обозначает любую молекулу, включающую по крайней мере одну аминогруппу и по крайней мере одну карбоксильную группу, но не содержащую пептидную связь в составе молекулы. Другими словами, аминокислота представляет собой молекулу, содержащую функциональную карбоксильную группу и атом азота в составе амина, содержащего по крайней мере один свободный атом водорода, предпочтительно в α-положении, и не содержащую амидную связь в составе молекулы. Таким образом, дипептид, содержащий свободную аминогруппу в Ν-концевом аминокислотном остатке и свободную карбоксильную группу в С-концевом аминокислотном остатке, нельзя рассматривать в качестве одиночной аминокислоты в приведенном выше описании. Амидная связь между двумя соседними аминокислотными остатками, образующаяся в результате такой конденсации, называется пептидной связью. Необязательно атомы азота в полиамидной цепи (обозначенные ΝΗ выше) можно независимо алкилировать, например, группами С1-С₆алкил, предпочтительно (СН₃)-группой.

Термин амидная связь, использованный в данном контексте, обозначает любую ковалентную связь формулы ί

-С(=О)-МН-Сгде карбонильная группа входит в состав одной молекулы, а аминогруппа входит в состав в состав другой молекулы, между которыми образуется связь. Амидные связи между двумя соседними аминокислотными остатками, образованные в результате указанной поликонденсации, называются пептидными связями. Необязательно, атомы азота в полиамидной цепи (обозначенные ΝΗ выше) можно независимо алкилировать, например, группами С₁-С₆алкил, предпочтительно (СН₃)-группой.

Использованный в описании настоящего изобретения и в формуле изобретения термин аминокислотный остаток образуется из соответствующей аминокислоты при образовании пептидной связи с другой аминокислотой.

Использованный в описании настоящего изобретения и в формуле изобретения термин аминокислотная последовательность может включать природные и/или синтетические/искусственные аминокислотные остатки, протеиногенные и/или непротеиногенные аминокислотные остатки. Непротеиногенные аминокислотные остатки можно дополнительно классифицировать на (а) гомоаналоги протеиногенных аминокислот, (б) β-гомоаналоги протеиногенных аминокислот и (в) другие непротеиногенные аминокислотные остатки.

Использованный в описании настоящего изобретения и в формуле изобретения термин аналоги пептидов обозначают синтетические или природные соединения, которые напоминают встречающиеся в природе пептиды по структуре и/или по действию.

Все природные аминокислоты представлены трехбуквенным кодом. Если не указано иное, все аминокислоты имеют Ь-конфигурацию.

Использованный в описании настоящего изобретения и в формуле изобретения термин аналог статина обозначает дипептидный миметик следующей формулы:

Статин: К2 обозначает ОН, КТ может значительно изменяться, но обычно аналогичен боковым цепям аминокислоты.

Аналоги статина: К2 обозначает Н, К1 может значительно изменяться, но обычно аналогичен боковым цепям аминокислоты.

Сокращение 31а обозначает статин.

Термин Ν-защитная группа (аминозащитная группа), использованный в настоящем контексте целиком или в качестве части другой группы, известен специалистам в данной области техники и обозначает группу, которую выбирают, но не ограничиваясь только ими, из класса защитных групп, а именно карбаматов, амидов, имидов, Ν-алкиламинов, Ν-ариламинов, иминов, енаминов, боранов, Ν-Ρзащитных групп, Ν-сульфенила, Ν-сульфонила и Ν-силила, и которую выбирают, но не ограничиваясь только ими, из групп, описанных в книге Стееие аиб ХУиК Рго1ес1шд дтоирк ίη Отдаше 3уп1кс515. 3 изд., сс. 494-653, которая включена в настоящее изобретение в качестве ссылки.

Аминозащитные группы выбирают, например, из группы, включающей карбобензилокси (СЬ/), трет-бутилоксикарбонил (ВОС) или 9-флуоренилметилоксикарбонил (РМОС).

Термин О-защитная группа, использованный в данном контексте, обозначает карбоксизащитную группу, предназначенную для блокировки или защиты функциональной карбоксильной группы соединения в ходе реакций с участием других функциональных групп. Карбоксизащитные группы описаны в книге Сгеепе апб ХУиК Рто1есйпд дтоирк ίη Огдатс 3уп1йе515, сс. 152-186 (1981), которая включена в

- 6 026443 настоящее изобретение в качестве ссылки. Такие карбоксизащитные группы известны специалистам в данной области техники и их широко используют для защиты карбоксильных групп. Примеры карбоксизащитных групп включают алкил (например, метил, этил или трет-бутил и т.п.), арилалкил, например фенетил или бензил, и их замещенные производные, такие как алкоксибензил или нитробензил и т.п.

Предпочтительными О-защищенными соединениями по настоящему изобретению являются соединения, в которых защищенной карбоксильной группой является (низш.)алкиловый, циклоалкиловый или арилалкиловый сложный эфир, например метиловый эфир, этиловый эфир, пропиловый эфир, изопропиловый эфир, бутиловый эфир, втор-бутиловый эфир, изобутиловый эфир, амиловый эфир, изоамиловый эфир, октиловый эфир, циклогексиловый эфир, фенилэтиловый эфир и т.п. или алканоилоксиалкиловый, циклоалканоилоксиалкиловый, ароилоксиалкиловый или арилалкилкарбонилоксиалкиловый эфир.

О-защитные группы выбирают, например, из группы, включающей метил, этил, пропил, бутил, трет-бутил или бензил.

Предполагается, что специалисты в данной области техники без дополнительного описания с использованием приведенного выше описания могут максимально широко использовать настоящее изобретение. Некоторые предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения, приведенные ниже, представлены только для иллюстрации изобретения и не ограничивают объем и сущность настоящего изобретения.

Полные описания всех приложений, патентов и публикаций, цитированных в настоящем контексте, включены в настоящее изобретение в качестве ссылок.

Приведенные ниже примеры можно с равным успехом воспроизвести при замене описанных в общих чертах или подробно реагентов и/или экспериментальных условий по настоящему изобретению, использованных в описанных выше примерах.

Из приведенного описания специалисты в данной области техники могут определить основные характеристики настоящего изобретения и осуществить различные изменения и модификации настоящего изобретения для его оптимизации для применения в различных областях и в различных условиях.

Сокращения.

| МВНА~ | 4-Метилбензилгидриламин |

ΩΙΕΑ	N-Этил-1Ч-изопропилпропан-2-амин (диизопропилэтиламин)
ови	1,8-Диазабицикло(5.4,0)ундец-7-ен
нвти	Гексафторфосфат ОДбензотриазол-1 -ил) ], 1,3,3-тетраметилурония
НОВ1	1 -Г идроксибензотриазол
ТФУ	Трифторуксусная кислота
ЖХВР-ОФ	Обращенно-фазовая ЖХВР
ЖХВР-МС	Жидкостная хроматография высокого разрешения масс-спектрометрия
ОМА	Ν,Ν-Диметилацетамид
ДМФА	Ν,Ν-Диметилформамид
ДМСО	Диметилсульфоксид
ЕЮАс	Этилацетат
РМОС	Флуоренилметилоксикарбонил
ЖХВР	Жидкостная хроматография высокого разрешения
ГБк	Г игабеккерель
МБк	Мегабеккерель
МС	Масс-спектрометрия
КТ	Комнатная температура
Ε8Ι	Ионизация электрораспылением
ПЭТ	Позитронная эмиссионная томография
Рецептор ГВП	Рецептор гастрин-высвобождающего пептида
РС-3	Ксенотрансплатат андрогекнезависимого рака предстательной железы
ЫЧСаР	Ксенотрансплатат андрогензависимого рака предстательной железы
ΜΙΡ	Проекция максимальной интенсивности
8РР8	Твердофазный синтез пептидов
МВНА	4-Метилбензгидриламин
ТВСК	Конденсирующий агент на основе триазина (в данном контексте тетрафторборат 4-(4,6-диметокси1,3,5-триазин-2-ил)-4-метилморфолин-4-ия)

- 7 026443

Экспериментальная часть, синтез соединений

Синтез нерадиоактивного соединения (1), ИОТА-4-амино-1-карбоксиметилпиперидин-И-РЬе-С1пТ гр-А1а-Уа1-О1у-Н18-§1а-Ьеи-№Н₂

Пептидный фрагмент молекулы Н-К²-К³ (Н обозначает водород) можно получить простым способом согласно стандартным методикам, известным в области синтеза пептидов, таким как 8РР8. Такие методы подробно описаны в литературе пептидов (см. книгу Ртос ЗоМ РЬаке Рерййе ЗупШеык. А ргасйса1 арргоасЬ, под ред. С1ап \С.С. апй \У1й1е Р.И., ОхГогй Ишуегкйу Ргекк (2000), сокращения приведены выше). Публикация, цитированная в настоящем контексте, включена в настоящее изобретение в качестве ссылки.

Соединение (1) получали согласно стандартной методике с использованием защитной группы РМОС (АШейоп Е., Р1иогепу1теШохусагЬопу1-ро1уат1Йе коПй р1аке рерййе купШеык. Сепега1 ргштр1ек апй йехе1ортеп1 (1989)) и амидной смолы Ринка МВНА. Спейсер и хелатирующий агент ООТА(¹Ви)₃ последовательно присоединяли к пептиду с использованием в качестве активирующего агента НАТИ. Отщепление пептидов и одновременное удаление защитных групп с боковой цепи проводили в системе ТФУ/Н₂О/Т18 (95/2,5/2,5). Пептид очищали полупрепаративной ЖХВР-ОФ и характеризовали методом

Е8Т-МС.

С₇₉Н₁₁₈Ы₂₀О₁₉ (т/ζ): рассч. 1639,9, найд. 1678,1 [М+К]+.

Синтез радиоактивного соединения (2), [¹⁷⁷Ри]-ИОТА-4-амино-1-карбоксиметилпиперидин-О-РЬе-

ацетатного буферного раствора (0,4 моль/л, рН 5,0) и инкубировали в присутствии ¹⁷⁷ЬиС13 (110-220 МБк) в течение 30 мин при 95°С. Для получения структурно охарактеризованных гомогенных лигандов добавляли ^{природный}ЬиС13х5 Н₂О (1 экв.) и полученный раствор инкубировали при 95°С в течение 30 мин. Для исследования биораспределения и устойчивости в сыворотке метку включали соответствующим образом без добавления холодного металла. Для инъекций раствор радиоактивного лиганда получали разбавлением 0,9% раствором ЫаС1 (0,1% раствор бычьего сывороточного альбумина). Синтез радиоактивного соединения (31, [^ш1п]-ИОТА-4-амино-1-карбоксиметилпиперидин-И-РЬе-О1п-Тгр-А1а-Уа1-О1у-Н1к81а-Реи-ИН₂.

Соединение (3) получали аналогично тому, как описано для соединения (2), с использованием ^!111пС13 и ^{природного}1пС13.

Экспериментальная часть, биологические испытания

Пример 1. Аффинность связывания с рецептором ГВП и устойчивость в сыворотке.

Определение аффинности связывания.

Исследование связывания при насыщении проводили с использованием увеличивающихся концентраций соединения (2) [¹⁷⁷/^{природны}^_и] и соединения (3) [¹¹¹/^{природный}1п] в интервале от 0,1 до 1000 нмоль/л. Для экспериментов с блокировкой использовали блокирующий агент (0,8 ммоль/л). Для каждого радиоактивного лиганда получали по три повтора для каждой концентрации как для общего связывания, так и для неспецифического связывания. Перед добавлением радиоактивных лигандов в лунки планшеты выдерживали во льду в течение 30 мин. После добавления специфических блокирующих агентов и радиоактивных лигандов планшеты инкубировали при 4°С в течение 2 ч. Затем буфер для связывания отбирали и клетки дважды промывали ледяным ФСБ (рН 7,4), при этом получали свободную фракцию. Затем клетки собирали с использованием 1н. ИаОН, при этом получали связанную фракцию. Специфическое связывание рассчитывали вычитанием величины неспецифического связывания из величины общего связывания при каждой концентрации радиоактивного лиганда.

Аффинность (К_й) радиоактивного лиганда в отношении рецептора и плотность связывающих участков (В_макс) рассчитывали из графиков Скэтчарда с использованием программного обеспечения Опщп 7.5

- 8 026443 (М1СГО8ОЙ 5>оП\\аге. 1пс., ШпНатрЮп. МА). По сравнению с пептидом, меченным 'ίη (соединение (3)), для пептида, меченного ¹⁷⁷Ьи (соединение (2)), наблюдали незначительное повышение аффинности связывания пептида кед 1.

Стабильность в сыворотке.

В 1 мл свежеприготовленной сыворотки человека, предварительно выдержанной в атмосфере 5% СО₂ при 37°С, добавляли готовый к применению раствор пептида, меченного Ьи (соединение (2), 0,03 нмоль). Смесь инкубировали в атмосфере 5% СО₂ при 37°С. Через различные интервалы времени отбирали аликвоты по 100 мкл (в тройном повторе) и обрабатывали 200 мкл этилового спирта, при этом белки сыворотки выпадали в осадок. Образцы центрифугировали в течение 15 мин при 500 об/мин. Затем отбирали 50 мкл супернатанта для определения радиоактивности с использованием счетчика для микролунок, осадок дважды промывали 1 мл этилового спирта, определяли радиоактивность, активность в супернатанте сравнивали с активностью в осадке и рассчитывали количество пептида, не связанного с белками (в %), или количество радиоактивного металла, перенесенного в белки сыворотки. Супернатант анализировали методом ЖХВР (элюенты: А = 0,1% ТФУ в воде и В = ацетонитрил, градиент: 0 мин 95% А, 20 мин 50% А) для определения стабильности пептида в сыворотке. Соединение (2) характеризовалось ίη νίίτο значительной стабильностью в сыворотке человека в течение периода инкубирования до 4 сут.

Пример 2. Биораспределение соединения (2) в организме мышей с привитой опухолью РС-3 в течение 1, 4, 24, 48 и 72 ч.

Биораспределение исследовали на голых мышах ΝΜΚΙ с опухолями РС-3, привитыми подкожно в правые задние конечности в различные интервалы времени. Масса тела самцов мышей составляла приблизительно 30 г, в один момент времени исследовали по 3 животных. После введения внутривенной дозы в хвостовую вену мышей умерщвляли в указанные интервалы времени и препарированные органы анализировали по уровню радиоактивности. Животному вводили дозу 100 мкл со средней активностью 86 кБк.

Через указанные интервалы времени количественно отбирали мочу и кал. В те же интервалы времени животных умерщвляли при анестезии изофлураном, проводили кровоизвлечение и удаляли следующие органы и ткани для измерения радиоактивности [¹⁷⁷Ьи] на счетчике γ-излучения: селезенку, печень, желчный пузырь, почки, легкое, бедро, сердце, мозг, жир, щитовидную железу, мышцы, кожу, кровь, хвост, желудок (без содержимого), предстательную железу, кишечник (с содержимым), поджелудочную железу, надпочечники и остальное тело (каркас).

Все органы и ткани или аликвоты взвешивали и определяли их радиоактивность на счетчике γлучей. Для определения общего количества радиоактивности, введенной каждому животному (100%), одновременно всегда измеряли 3 аликвоты (по 100 мкл) вводимого раствора. Результаты исследования биораспределения и выведения приведены в процентах от величины вводимой дозы на 1 г ткани (% ГО/г) и в процентах от величины вводимой дозы на орган (% ГО) соответственно. Все данные представлены в виде средних величин ± стандартное отклонение (СО), которое рассчитывали с использованием всех животных в момент времени и в образце.

Таблица 1

Биораспределение соединения (2) в организме мышей с привитой опухолью РС-3

Интервалы времени: 1 ч/4 ч/24 ч/48 ч/72 ч для 1 животного.

Вводимый объем: 100 мкл в/в.

Вводимая доза: 85,56 кБк (2,31 мкКи).

[¹⁷⁷Ти]ГООТА-4-амино-1-карбоксиметилпиперидин-П-РЬе-О1п-Тгр- А1а- ν;·ι1-Ο1ν-Ηί5-δΙ;·ι-ΕΌΐι-ΝΗ₂.

Подкожная инокуляция клеток РС-3 (рак предстательной железы человека): 2x10 клеток/100 мкл матригеля.

Животные: голые мыши (ΝΜΚΙ пи/пи, самцы).

Интервалы времени:	1,0 ч		4,0 ч		24,0 ч		48,0 Ч		72,0 ч
Масса, г	29,46		27,05		26,61		28,51		27,62
% Ю/г		СО		СО		СО		СО		СО
Селезенка	0,284	0,187	0,152	0,048	0,060	0,021	0,056	0,024	-	-
Печень	0,151	0,002	0,134	0,011	0,046	0,007	0,036	0,003	0,030	0,003
Почка	1,715	0,448	1,709	0,285	0,568	0,211	0,285	0,069	0,175	0,019
Легкое	0,364	0,069	0,083	0,017	0,019	0,005	0,048	0,029	-
Кость	0,096	0,009	0,052	0,013	-	-	-	-	-	-
Сердце	0,143	0,033	0,037	0,015	-	-	-	-	-
Мозг	0,028	0,03	0,014	0,006	-	-	-	-	-	-
Жир	0,511	0,320	0,115	0,050	-	-	-	-	-	-
Щитовидная железа	0,185	0,087	-	-	-	-	-		-	-
Желчный пузырь	0,440	0,250	0,470	0,340	-	-	-	-	-	-

- 9 026443

Интервалы времени:	1,0 ч		4,0 ч		24,0 ч		48,0 ч		72,0 ч
Масса, г	29,46		27,05		26,61		28,51		27,62
% Ю/г		СО		СО		СО		СО		СО
Мышцы	0,072	0,009	0,020	0,010	-	-	-	-	-	-
Опухоль	5,599	1,663	8,099	1,606	6,059	1,534	3,575	0,813	2,490	0,498
Кожа	0,409	0,164	0,145	0,063	0,055	0,020	0,074	0,077	0,040	0,027
Кровь	0,310	0,002	0,056	0,000	0,004	0,000	0,006	0,005	-	-
Хвост	2,230	0,871	0,953	0,511	0,436	0,229	0,194	0,061	0,313	0,195
Желудок	2,562	1,100	1,361	0,270	0,081	0,021	0,042	0,016	0,020	0,004
Предстательная железа	0,289	0,117	-	-	-	-	-	-		-
Кишечник	1,632	0,218	1,163	0,225	0,137	0,084	0,110	0,085	0,084	0,061
Поджелудочная железа	18,714	0,979	5,166	0,785	0,579	0,080	0,288	0,113	0,206	0,008
Надпочечники	3,038	1,628	2,190	0,291	1,528	0,238	1,064	0,745	1,031	0,295

Интервалы времени:	1,0 ч		4,0 ч		24,0 ч		48,0 ч		72,0 ч
% !О/г		СО		СО		СО		СО		СО
Селезенка	0,034	0,029	0,015	0,010	0,005	0,001	0,003	0,001	-	-
Печень	0,302	0,018	0,175	0,007	0,060	0,007	0,054	0,005	0,040	0,003
Почка	0,990	0,347	0,691	0,134	0,267	0,070	0,152	0,032	0,092	0,012
Легкое	0,102	0,022	0,024	0,004	0,005	0,001	0,013	0,008	-	-
Кость	0,005	0,001	0,003	0,000	-	-	-	-	-	-
Сердце	0,022	0,007	0,005	0,002	-	-	-	-	-	-
Мозг	0,011	0,001	0,005	0,002	-	-		-	-	-
Жир	0,018	0,001	0,006	0,006	-	-	-	-	-	-
Щитовидная железа	0,006	0,001	•	-	-	-	-	-	-	-
Желчный пузырь	ο,οοΰ	0,005	0,000	0,010	-	-	-	-	-
Мышцы	0,014	0,003	0,003	0,001	-	-	-	-	-	-
Опухоль	1,119	0,807	3,072	0,637	2,191	1,117	1,051	0,440	0,550	0,121
Кожа	1,806	0,839	0,515	0,202	0,162	0,073	0,246	0,239	0,152	0,110
Кровь	0,797	0,017	0,119	0,014	0,007	0,001	0,013	0,011	-
Хвост	1,836	0,833	0,694	0,408	0,337	0,181	0,150	0,051	0,263	0,175
Желудок	0,614	0,223	0,321	0,053	0,018	0,004	0,010	0,004	0,005	0,001
Предстательная железа	0,003	0,001	-	•	-		-	•	-	-
Кишечник	4,792	0,476	2,318	0,168	0,385	0,236	0,317	0,248	0,211	0,152
Поджелудочная железа	8,025	0,288	1,735	0,389	0,196	0,017	0,076	0,038	0,046	0,009
Надпочечники	0,014	0,009	0,013	0,002	0,007	0,002	0,007	0,004	0,005	0,001
Всего		СО		СО		СО		СО		со
Степень извлечения	96,950	4,038	92,830	1,904	86,280	16,138	91,600	6,344	91,750	12,838
Органы	20,080	0,382	9,640	0,888	3,640	0,741	2,090	0,366	1,370	0,478
Каркас	5,030	0,099	1,480	0,759	0,370	0,162	0,290	0,214	0,210	0,057
Моча	71,820	11,462	63,130	16,792	76,300	17,411	74,050	18,707	63,690	43,536
Кал	-	-	18,570	19,267	5,980	1,712	15,210	12,426	26,490	31,234

* Только аликвоты тканей

Соотношения опухоль (О)/ткань:

		СО		СО		СО		СО		со
О/селезенка	27,64	24,07	60,41	34,17	115,83	60,07	68,34	15,84
О/печень	37.09	10,59	60,01	7,01	131,75	21,28	100,56	21,36	84,93	22,61
О/почка	3,25	0,12	4,83	1,19	11,93	6,31	12,83	2,68	14,38	3,75
О/легкое	15,23	1.68	100,73	28.92	352,79	158,26	85,54	28,06	-	-
О/кость	57,84	11,71	156,36	10,32			-		-	-
О/сердце	41,52	21,16	241,71	92,80		-	-	-	-	-
О/мозг	201,41	39,71	670,63	288,07	-	-	-	-	-	-
О/жир	14,88	12,57	81,45	43,48	-	*	-	-	-	-
О'мышцы	80,43	33,64	459,24	149,43	-	-	-	-	-	-
О/кожа	15,76	10,36	59,98	15,56	122,45	67,66	79,48	44,75	83,73	49,57
О/кровь	18,07	5,46	143,89	28,98	1718,99	405,73	878,55	567,14	1564,46	1129,51
О/желудок	2,25	0,32	6,17	2,01	77,62	29,83	91,71	27,24	128,40	40,29
О/кишечник	3,53	1,49	7,01	0,90	56,82	39,92	47,21	33,24	43,54	30,43
О/щитовидная железа	31,67	5,95		-		-	-	-	74,41	78,32
О/предстательная железа	22,41	14,85	-	-	-	-	-	-	-	-
О/поджелудочная железа	0,30	0,07	1,63	0,61	10,82	3,94	13,17	3,57	12,03	2,03
О/надпочечники	2,32	1,79	3,73	0,78	4,12	1,58	4,05	1,48	2,60	1,01

Пример 3. Дозиметрия.

Данные по биораспределению соединения (2) в организмы мышей с привитой опухолью РС-3 (см. пример 2) использовали для расчета величин облучения методом Медицинской внутренней радиационной дозиметрии (ΜΙΚΌ) для оценки аутогенных доз мышь-орган (ке1Г-1о-ке1Г бокек). Данные по активности в зависимости от времени (кинетические данные) моделировали для расчета времен удерживания соединения (2).

Данные дозиметрии, рассчитанные методом ΜΙΚΠ, свидетельствуют об эффективном терапевтическом окне для организма мыши (в отношении почек и поджелудочной железы). Дозы 150-200 Гр в опу- 10 026443 холи можно вводить с учетом максимальной активности 450 МБк при введении животному. Почки не являлись чувствительными к облучению, а поджелудочная железа оказалась ограничивающим дозу органом (в отличие от поджелудочной железы грызунов поджелудочная железа человека экспрессирует очень низкие количества рецептора ГВП).

Пример 4. Сравнение соединения (2) с соединением ¹⁷⁷Ьи-ЛМВЛ.

Данные по биораспределению в организмах мышей с привитыми опухолями РС-3 свидетельствовали о преимуществах антагониста бомбезина - соединения (2) (пример 2, табл. 1) по сравнению с опубликованным радиотерапевтическим агонистом бомбезина ¹⁷⁷Ьи-ЛМВЛ фирмы Вгассо в отношении удерживания опухолью в течение времени и соотношения опухоль/почка.

Таблица 2

Сравнение биораспределения двух соединений в организмах мышей с привитыми опухолями РС-3 ч после внутривенной инъекции (ρ.ί.) и 24 ч ρ.ί. выражены в виде % ГО/г (п=3)

	-[77- ^1?/Ьи-АМВА	Соединеиие (2)
% ГО/г	1 ч ρ.ϊ.	24 ч ρ.ϊ.	1 ч ρ.ί.	24 ч ρ.ί.
Кровь	0,25 (±0,13)	0,02 (±0,01)	0,31	0,004
Опухоль	5,03 (±1,44)	3,40 (±0,950)	5,60 (±1,66)	6,06 (±1,53)
Печень	0,22 (±0,11)	0,39 (±0,57)	0,15	0,05 (±0,01)
Почки	7,61 (±2,87)	2,69 (±0,630)	1,72 (±0,45)	0,57 (±0,21)

*Раи§юие 8., Νιιηη Ά.Ό., О. 1. Ыис1. Меб. Мо1. 1т., т. 50, сс. 310-321 (2006).

Пример 5. Радионуклидная терапия.

Испытания с использованием повторных инъекций.

Первые испытания проводили с использованием 25 голых мышей (15-20 г), которым подкожно имплантировали клетки опухоли РС-3 (10⁶ млн клеток). Для исследования токсичности использовали аналогичный протокол терапии с использованием 25 мышей СЭ1. Через 13 дней после имплантации мышей рандомизировали в 5 групп и обрабатывали, как описано ниже.

1) 100 пмоль/6 МБк соединения (2),

2) 200 пмоль/12 МБк соединения (2),

3) 400 пмоль/24 МБк соединения (2),

4) 200 пмоль природного соединения (2),

5) ФСБ.

Согласно протоколу проводили 3 инъекции в неделю (день 0, 2, 4) и процедуру повторяли (день 14, 16, 18) после перерыва в течение 1 недели. Согласно данным по биораспределению соединения (3) с использованием ^1П1и было установлено, что при инъекциях через 48 ч поддерживается стабильный захват опухолью. По мнению авторов, перерыв в течение недели является важным для безопасности животных. Мышей периодически контролировали при измерении размера опухолей и массы тела. Животных с потерей массы более 20% от их исходной массы или с размером опухоли более 20% в диаметре умерщвляли. Размер опухолей определяли с использованием штангенциркуля в двух направлениях и рассчитывали объемы опухолей с учетом их эллиптической формы. Опухоли, почки и поджелудочные железы подготавливали для гистологического исследования (если возможно). У животных, обработанных большими дозами, наблюдали снижение массы опухоли и во многих случаях полную ремиссию.

У животных, обработанных меньшими радиоактивными дозами соединения (2), в основном наблюдали увеличение объема опухоли за исключением особи № 5. Действительно, у этих животных в начале лечения объем опухоли был небольшим, и наблюдалась полная ремиссия.

У животных из второй и третьей групп наблюдали хорошую ответную реакцию на лечение. Через 50 дней после начала лечения у некоторых животных (две особи из второй группы и одна особь из третьей группы) наблюдали быстрый повторный рост опухоли и их умерщвляли. Быстрый рост опухолей наблюдали у мышей из четвертой и пятой групп. В день 26 особи № 1 из первой группы и особи № 4 из пятой группы вводили однократную дозу (400 пмоль/50 МБк) для исследования влияния высокой дозы радиоактивности на опухоли на поздних стадиях. Объем опухоли быстро уменьшался до полной ремиссии у особи № 4, в то время как повторный рост опухоли наблюдали у особи № 1.

Все особи СЭ1 выжили и выглядели здоровыми, массы тела увеличивались и стабилизировались через 5-6 месяцев.

При завершении испытаний у прошедших лечение мышей, ткани которых исследовали гистологически, не наблюдали гистопатологических изменений, связанных с соединением (радиоактивным пептидом) по сравнению с контролями.

Пример 6. Испытания (радионуклидная терапия) с использованием однократной инъекции.

Испытания проводили аналогично тому, как описано в примере 5, но со следующими изменениями:

инокуляция 5x10 клеток опухоли РС-3, однократная инъекция 37 МБк соединения (2) в день 4, повторных испытания с набором из 5 мышей.

- 11 026443

В двух последовательных испытаниях действие соединения (2) на рост опухолей РС-3 подтвердилось.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Применение конъюгата формулы (I) [¹⁷⁷Ьи]-К‘-К²-К³(1), где К¹ обозначает металлический хелатирующий агент, пригодный для образования хелатного комплекса с [¹⁷⁷Ьи],

К² обозначает спейсер, присоединенный к Ν-концевому остатку пептида К³, или ковалентную связь,

К³ обозначает последовательность антагониста аналога пептида бомбезина, кед 1-4:

кед 1: Ό-Ρ^-Ο1η-Ττρ-Α1α-να1-Ο^-Ηίκ-δΐα^υ-ΝΗ₂, кед 2: Ό-Ρ^-Ο1η-Ττρ-Α1α-να1-Ο^-Ηίκ^υψ(ΟΗΘΗ-ΟΗ₂)-(ΟΗ₂)₂-ΟΗ₃, кед 3: Ό-ΡΐΒ;-Ο1η-ΤΓρ-Α1α-να1-Ο1γ-Ηίκ-ΕΌΐιψ(ίΉ₂ΝΗ)-ΡΐΒ;-ΝΗ₂ и кед 4: ^-ΡЬе-Ο1η-Τ^ρ-Α1а-Vа1-Ο1у-Η^κ-^еиψ(СΗ₂NΗ)-Суκ-NΗ₂ для лучевой терапии рака.
2. Применение по п.1, где металлическим хелатирующим агентом К¹, пригодным для образования хелатного комплекса с [¹⁷⁷Ьц], является хелатирующий агент на основе ΌΟΤΑ-, ΝΘΌΑδΑ-, ΝΘΌΑΟΑ-, ΝΟΤΑ-, ΌΤΡΑ-, ΕΌΤΑ-, ТЕТА- или ΤΡΙΤΑ- или их близкие аналоги.
3. Применение по п.1, где конъюгатом является [¹⁷⁷^и]-^ΟΤΑ-4-амино-1-карбоксиметилпиперидин^-ΡЬе-Ο1η-Τ^ρ-Α1а-Vа1-Ο1у-Η^κ-δίа-^еи-NΗ₂
4. Применение по п.1, где раком является опухоль и/или метастазы, расположенные или развившиеся в предстательной железе, легком или молочной железе.
5. Композиция для лучевой терапии рака, включающая соединение формулы (I) по предшествующим пунктам и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
6. Способ лучевой терапии рака включает следующие стадии: введение субъекту, нуждающемуся в указанном лечении, соединения формулы (I) по любому из предшествующих пунктов или композиции по п.5 в терапевтически эффективных количествах и после локализации соединения формулы (I) или композиции в требуемых тканях облучение тканей для обеспечения требуемого терапевтического эффекта.
7. Способ по п.6, где раком является опухоль и/или метастазы, расположенные или развившиеся в предстательной железе, легком или молочной железе.