EA026282B1 - Способ определения функционального состояния системы гемостаза - Google Patents

Способ определения функционального состояния системы гемостаза Download PDF

Info

Publication number
EA026282B1
EA026282B1 EA201300329A EA201300329A EA026282B1 EA 026282 B1 EA026282 B1 EA 026282B1 EA 201300329 A EA201300329 A EA 201300329A EA 201300329 A EA201300329 A EA 201300329A EA 026282 B1 EA026282 B1 EA 026282B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
clot
sample
time
coagulation
patient
Prior art date
Application number
EA201300329A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201300329A1 (ru
Inventor
Фазоил Иноятович Атауллаханов
Михаил Александрович Пантелеев
Татьяна Алексеевна Вуймо
Анна Николаевна Баландина
Елена Александровна Серегина
Елена Николаевна Липец
Original Assignee
Общество с ограниченной ответственностью "Гематологическая Корпорация" (ООО "ГемаКор")
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Общество с ограниченной ответственностью "Гематологическая Корпорация" (ООО "ГемаКор") filed Critical Общество с ограниченной ответственностью "Гематологическая Корпорация" (ООО "ГемаКор")
Priority to EA201300329A priority Critical patent/EA026282B1/ru
Priority to PCT/EA2014/000010 priority patent/WO2014166508A1/ru
Publication of EA201300329A1 publication Critical patent/EA201300329A1/ru
Publication of EA026282B1 publication Critical patent/EA026282B1/ru

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/483—Physical analysis of biological material
    • G01N33/487—Physical analysis of biological material of liquid biological material
    • G01N33/49—Blood
    • G01N33/4905—Determining clotting time of blood
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/86—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving blood coagulating time or factors, or their receptors

Abstract

Изобретение относится к медицине, в частности к клиническим лабораторным исследованиям, и касается диагностики нарушений свертывающей системы крови, включая скрининг, постановку диагноза, мониторинг, планирование и оценку эффективности терапии. Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является своевременное прогнозирование и предупреждение возникновения тромбозов, кровотечений и других патологий системы гемостаза; выявление тенденции течения заболеваний, связанных с нарушением работы свертывающей системы крови, и оценка эффективности проводимой терапии пациента. Указанная задача решается путем создания способа определения функционального состояния системы гемостаза, включающего следующие стадии: а) подготовка образца крови или ее плазмы, б) определение пространственной динамики in vitro; по меньшей мере одного из процессов свертывания или лизиса сгустка в исследуемом образце, включающее смешивание образца с реагентом для ингибирования контактной активации свертывания образца, добавление реагента для рекальцификации, обеспечивание локальной активации свертывания в исследуемом образце поверхностью с иммобилизованным на ней аналогом физиологического активатора коагуляции в неперемешиваемом тонком слое указанного образца, определение интенсивности светорассеяния в сгустке, времени задержки формирования сгустка, скорости роста сгустка, площади под кривой зависимости светорассеяния от расстояния, скорости распространения тромбиновой волны; пика тромбина, размера сгустка в заданный момент времени, времени начала фибринолиза, изменения фронта фибринолиза во времени, изменения

Description

Изобретение относится к медицине, в частности к клиническим лабораторным исследованиям, и касается диагностики нарушений свертывающей системы крови, включая скрининг, постановку диагноза, мониторинг, планирование и оценку эффективности терапии.
Уровень техники
Из уровня техники известен способ определения состояния системы свертывания крови у пациента, заявка на изобретение И8 2009/0130645, опубл. 21.05.2012 г. Указанный способ основан на определении скорости формирования сгустка, плотности сгустка в зависимости от времени, максимальной плотности сгустка и степени фибринолиза. Указанные характеристики определяются известным способом - вискоэластометрией, а затем сравниваются с референсными значениями.
Из уровня техники известен способ определения формирования и лизиса фибринового сгустка у пациента, раскрытый в заявке И8 2008/268483 опубл. 30.10.2008 г. Данный способ позволяет прогнозировать тромбозы и кровотечения посредством определения времени задержки (лагтайма, ЦД, максимальной амплитуды (плотности исследуемого образца), времени достижения максимальной плотности и времени падения плотности исследуемого образца.
Известен способ диагностики патологий системы гемостаза, патент КИ 2449281, кл. Ο01Ν 33/48, опубл. 27.04.2012 г. Указанный способ основан на определении времени свертывания, тромбопластинового времени, тромбинового времени и ряда других характеристик, с помощью которых осуществляют постановку предварительного диагноза или прогнозирование исхода заболеваний.
В качестве ближайшего аналога заявляемого решения можно назвать способ определения коагулологических характеристик, раскрытый в патенте И8 6432657, опубл. 13.08.2002 г. Где в исследуемом образце происходит деградация фибриногена с тромбином без образования сгустка и измеряется зависимость интенсивности светорассеяния от времени в сгустке, формирующемся в образце.
В качестве недостатков упомянутых способов можно назвать то, что они не приближены к физиологическому процессу формирования сгустка, т. е. активация процесса свертывания происходит во всем объеме образца, и количество самого активатора превышает в несколько раз физиологическую потребность, и таким образом не могут быть чувствительными ко всем патологиям и одновременно отражать всех нарушений состояния системы гемостаза.
Следовательно, для применения указанных способов необходимо провести большое количество определений, что требует затрат дополнительного времени и делает данные способы неудобными и не точными, приводящими к погрешностям, возникающим в процессе работы с ними.
Таким образом, существует потребность в диагностической системе, которая позволяет определять и оценивать как первоначальное состояние свертывающей системы крови и ее способность к образованию сгустка, отслеживать ухудшение этого состояния при прогрессировании заболевания, так и оценивать эффективность лечения в ходе проводимой терапии, и которая позволила бы преодолеть вышеуказанные недостатки.
Сущность изобретения
Задачей, на решение которой направлено заявляемое изобретение, является своевременное прогнозирование и предупреждение возникновения тромбозов, кровотечений и других патологий системы гемостаза; выявление тенденции течения заболеваний, связанных с нарушением работы свертывающей системы крови, и оценка эффективности проводимой терапии пациента.
Технический результат, получаемый от использования заявляемого решения, заключается в информативности и комплексности оценки состояния гемостаза, т. е. возможности оценить интегральное состояние системы свертывания и ее звеньев в рамках одного теста, а также в максимальном приближении к условиям ίη νίνο, что позволяет проще интерпретировать процессы.
Заявляемое техническое решение заключается в определении оптимального количества характеристик пространственной динамики процессов образования сгустка в исследуемом образце, последующего сравнения полученных данных с установленной нормой, и при отклонении упомянутых характеристик от нормы принятии решения о наличии у пациента гиперкоагуляции или гипокоагуляции, то есть склонности к основным клиническим проявлениям патологии гемостаза, тромбообразованию или кровотечению соответственно. На основании полученных данных об изменении состояния системы свертывания врачом принимается решение о назначении и коррекции терапии пациента.
Указанная задача решается путем создания способа определения функционального состояния системы гемостаза, включающего следующие стадии: а) подготовка образца крови или ее плазмы, б) определение пространственной динамики ίη νίίτο; по меньшей мере одного из процессов свертывания или лизиса сгустка в исследуемом образце, включающее смешивание образца с реагентом для ингибирования контактной активации свертывания образца, добавление реагента для рекальцификации, обеспечивание локальной активации свертывания в исследуемом образце поверхностью с иммобилизованным на ней аналогом физиологического активатора коагуляции в неперемешиваемом тонком слое указанного образца, определение интенсивности светорассеяния в сгустке, времени задержки формирования сгустка, скорости роста сгустка, площади под кривой зависимости светорассеяния от расстояния, скорости распространения тромбиновой волны; пика тромбина, размера сгустка в заданный момент времени, времени
- 1 026282 начала фибринолиза, изменения фронта фибринолиза во времени, изменения фронта тромбообразования во времени, изменения размера сгустка во времени; с) сравнение результатов, полученных на этапе Ь) с нормой, и определение направленности и степени выраженности отклонений у пациента.
А также тем, что на этапе Ь) дополнительно регистрируют следующие процессы в исследуемом образце: рост сгустка от активатора, рост спонтанных сгустков, фибринолиз или их комбинацию.
Авторами было обнаружено, что необходимым и достаточным является определение по меньшей мере одного из следующих процессов в исследуемом образце:
1. Рост сгустка от активатора.
Основные характеристики:
интенсивность светорассеяния в сгустке, характеризует качество сгустка;
время задержки формирования сгустка ((а&) характеризует начальные реакции свертывания;
скорость роста сгустка (V нач, V ст), начальная, стационарная и др. - интегральный показатель способности плазмы больного к образованию сгустка.
Характеристики в случае волны тромбина: скорость распространения тромбиновой волны; пик тромбина.
Дополнительные характеристики:
площадь под кривой зависимости светорассеяния от расстояния (8 сг) характеризует одновременно размер и качество.
Размер сгустка в заданный момент времени (1ι сг), интегральный показатель.
2. Рост спонтанных сгустков.
Основные характеристики:
время формирования первого спонтанного сгустка (ΐ спонт);
время полумаксимального зарастания сгустками исследуемого образца;
интенсивность светорассеяния вдали от активатора в заданный момент времени.
Дополнительные характеристики:
время полного зарастания исследуемого образца; скорость зарастания спонтанными сгустками.
3. Фибринолиз.
Основные характеристики: время задержки фибринолиза; средняя скорость лизиса сгустка.
Дополнительные характеристики: изменение размера сгустка со временем.
Регистрация указанных процессов в исследуемом образце и определение указанных характеристик осуществляется посредством эффективной и не требующей больших затрат времени (не более 30-45 мин) диагностической системы для измерения образования или лизиса сгустка в образце, которая позволяет получать воспроизводимые результаты.
Пространственная динамика по меньшей мере одного из процессов в исследуемом образце определяется посредством специально разработанного теста путем изучения динамики роста и лизиса сгустка в пространственно-неоднородной среде, который осуществляли следующим образом.
Производят забор крови у пациента и готовят исследуемый образец. Далее образец смешивают с реагентом для ингибирования контактной активации свертывания образца и добавляют реагент для рекальцификации.
Образец (в виде цельной крови или ее продуктов (плазмы и др.)) может быть свежеполученным или он может находиться в замороженном состоянии, например, в случае образцов, не содержащих клеток. Образец также может содержать смеси очищенных природных, синтетических или рекомбинантных белков и/или другие препараты/реагенты, обладающие гемостатической, фибринолитической или антифибринолитической активностью. Образец может быть получен от здоровых субъектов или от субъектов, которые могут страдать или страдают от нарушения свертывания крови.
Подготовленный указанным способом образец помещают в кювету, обеспечивают приведение в контакт исследуемого образца с аналогом физиологического активатора коагуляции. Где в качестве упомянутого активатора может быть выбран тканевый фактор (ТР). Далее, посредством разработанного для данного теста прибора (созданный заявителем ООО ГемаКор, Россия) регистрируют рост сгустка в пространстве исследуемого образца как функцию времени.
Особенностью теста является локальная активация свертывания поверхностью с иммобилизованным на ней активатором, и регистрация растущего сгустка в неперемешиваемом тонком слое исследуемого образца по светорассеянию методом темного поля. Свертывание происходит при установленной температуре. При этом термин иммобилизованный предполагает как простую иммобилизацию на носителе путем лиофилизации, так и иммобилизацию путем взаимодействия с носителем или путем присоединения к носителю, такого как ковалентное присоединение к носителю непосредственно или через линкерную молекулу.
- 2 026282
В результате проведенного теста получают графическую и визуальную (фото)информацию, которую обрабатывают с использованием разработанного программного обеспечения. В частности, длительность теста может составлять 45 мин, предпочтительно 30 мин, а каждые 15 с производится фотосъемка образца.
При обработке данных по светорассеянию все полученные фотографии полагались симметричными относительно перпендикуляра к активатору. Это позволяет перейти от двумерных распределений интенсивности к одномерным на отрезках, проведенных перпендикулярно активатору, вдоль направления роста сгустка. Для этого в данном направлении выбиралась узкая полоса, вдоль которой для всех моментов времени вычислялись кривые интенсивности регистрируемого сигнала светорассеяния - графики зависимости средней интенсивности светорассеяния (полученной из значений интенсивности пикселей) от расстояния от активатора. Для каждой кривой зависимости интенсивности светорассеяния от времени рассчитывался размер сгустка как координата, при которой интенсивность светорассеяния равнялась 50% от максимальной интенсивности. На основании зависимостей размера сгустка от времени были рассчитаны следующие характеристики роста сгустка в пространстве: время задержки формирования сгустка (ΐι36), (время инициации свертывания - момент времени, при котором размер сгустка становится ненулевым); начальная скорость роста сгустка (тангенс угла наклона прямой, аппроксимирующей методом наименьших квадратов участок кривой зависимости размера сгустка вблизи активатора); стационарная скорость роста сгустка (тангенс угла наклона прямой, аппроксимирующей участок зависимости размера сгустка вдали от активатора).
Заявляемый способ может быть проиллюстрирован следующими фигурами чертежей, где на фиг. 1 (а-в) представлена зависимость светорассеяния от расстояния, на которое вырос сгусток от поверхности активатора.
на фиг. 2 представлена зависимость размера сгустка от времени;
фиг. 3 иллюстрирует рост сгустка в разное время от начала эксперимента;
фиг. 4 иллюстрирует примеры спонтанного тромбообразования (образования сгустка вдали от активатора);
на фиг. 5 представлены примеры лизиса сгустка;
на фиг. 6 представлена зависимость светорассеяния от расстояния, на которое растет сгусток от границы поверхности активатора для случая лизиса тромба;
на фиг. 7 приведены зависимости распространения тромбиновой волны во времени и пространстве для разных концентраций активного XI фактора.
Одной из основных характеристик первого процесса в исследуемом образце Роста сгустка от активатора является интенсивность светорассеяния в сгустке, которую определяют исходя из визуальной информации, пример которой представлен на фиг. 3. Она иллюстрирует рост фибринового сгустка в разное время от начала проведения теста. По данным, полученным на фотографиях фиг. 3, посредством программного обеспечения строятся графики, проиллюстрированные на фиг. 1 и 2.
На фиг. 1 представлена зависимость интенсивности светорассеяния в сгустке от размера сгустка (расстояния, на которое он вырос от границы поверхности активатора) за время проведения теста, характерная для нормы, гиперкоагуляционного состояния и гипокоагуляционного состояния системы свертывания. Данные, отображенные на фиг. 1, показывают одновременно размер и качество сгустка, его плотность, характеризующую содержание фибриногена, являющейся еще одной основной характеристикой первого процесса в исследуемом образце - площадь под кривой зависимости светорассеяния от расстояния (8 сг).
Характеристика роста сгустка - время задержки формирования сгустка (ΐι36) описывает начальные реакции свертывания, которую определяют посредством графиков, представленных на фиг. 2. Время задержки формирования сгустка (ΐι3&) рассчитывается как время до начала образования сгустка на границе активатора-вставки. Время задержки формирования сгустка (ΐι38) отражает время, которое требуется для старта роста видимого фибринового сгустка, так если время задержки роста сгустка (ΐι38) меньше нормального значения, то можно сделать вывод о повышенной по сравнению с нормальным состоянием способности плазмы к образованию сгустка. Удлинение времени задержки может быть следствием сниженной по сравнению с нормальным состоянием способности плазмы к образованию сгустка, что может быть связано как с проведением антикоагулянтной терапии, так и с иным нарушением работы свертывающей системы крови и обуславливать склонность пациента к кровотечениям.
О сниженной способности к образованию фибринового сгусткаи соответственно о риске кровотечения также говорят укороченные скорости роста сгустка.
Здесь же определяют интегральный показатель - размер сгустка в заданный момент времени (1ι сг), из которого рассчитывают основные характеристики сгустка, растущего от активатора: скорость роста сгустка (V нач, V ст) - начальную, стационарную и др. в зависимости от конкретных задач.
Начальная скорость роста сгустка - скорость роста сгустка вблизи активатора рассчитывается как тангенс угла наклона участка прямой (фиг. 2). Время задержки (ΐι38) роста сгустка и начальная скорость, рассчитываемая на определенном промежутке времени, отражают внешний путь активации свертывания и могу быть чувствительными к таким препаратам, как Ν0ν08ΕνΕΝ®. В то время как стационарная
- 3 026282 скорость отражает внутренний путь активации свертывания, являясь чувствительной, например, к гемофилии. Стационарная скорость роста сгустка -это скорость роста сгустка вдали активатора рассчитывается как тангенс угла наклона участка прямой (фиг. 2).
Любые другие необходимые скорости роста сгустка рассчитываются в выбранном диапазоне времени.
Для каждой кривой рассчитывался размер сгустка как координата, при которой интенсивность светорассеяния равнялась 50% от максимальной интенсивности, что соответствует превращению половины всего фибриногена в фибрин.
Второй определяемый процесс в исследуемом образце заявляемого способа спонтанное тромбообразование характеризует состояние повышенной склонности к тромбообразованию (гиперкоагуляции). В норме сгусток растет только от активатора, однако при гиперкоагуляции наблюдается феномен активаторнезависимого свертывания - появление и рост фибриновых сгустков вдали от активатора в объеме исследуемого образца. Этот феномен здесь и далее будет обозначаться как спонтанное тромбообразование, а такие сгустки - как спонтанные сгустки. Наличие спонтанных сгустков и их характеристики указывают на то, что в образце крови пациента содержится большое количество активных компонентов, запускающих свертывание. Риск тромбообразования у пациента в таких случаях особенно высок.
На фиг. 4 представлены примеры спонтанного тромбообразования (образования сгустка вдали от активатора). Спонтанное образование сгустков показывает наличие в исследуемом образце активирующих свертывание компонентов (повышенное содержание активных факторов или, к примеру, фосфолипидных поверхностей), показатель не зависит от воздействия активатора, показывает сильную склонность к тромбообразованию. Этот процесс отражает характеристики сгустков, которые образуются независимо от активатора. Для оценки этого процесса существуют специфические характеристики: время формирования первого спонтанного сгустка (ΐ спонт), время полумаксимального зарастания сгустками исследуемого образца (процент зарастания образца в какой-то момент времени), время полного зарастания исследуемого образца, интенсивность светорассеяния вдали от активатора в заданный момент времени, скорость спонтанного зарастания сгустками.
Спонтанные сгустки и их характеристики являются особыми показателями тромбогенности у пациентов. Именно они позволяют оценить наличие выраженной склонности к патологическому тромбообразованию и/или начальные стадии (гиперкоагуляционную фазу) ДВС-синдрома у пациента.
Третий определяемый процесс в исследуемом образце заявляемого способа фибринолиз - процесс лизиса тромба, оценивается по времени задержки фибринолиза, средней скорости лизиса сгустка, полученной из фронта фибринолиза, функции светорассеяния и расстояния от времени χ(ΐ) и у(1). которые отражены на фиг. 5 и 6.
При фибринолизе можно наблюдать сниженные скорости роста сгустка, а также с помощью дополнительных показателей оценивать выраженность фибринолиза у пациента и принимать решение о необходимости в коррекции терапии. На фиг. 5 представлены фотографии примера лизиса тромба, когда спустя какое-то время тромб начинает лизировать сверху вниз от активатора (при определенной терапии пациента, заболевании или определенной постановке теста ίη νίΐτο для проверки медикаментозных средств, получаемых пациентом).
Зависимость, приведенная на фиг. 6, светорассеяния от расстояния, на которое вырос сгусток, для случая лизиса сгустка, позволяет определить показатели для оценки фибринолиза, на основе которых строятся графики зависимости фронта фибринолиза от времени, фронта тромбообразования от времени, зависимость изменения светорассеяния и размера сгустка от времени. Для оценки лизиса существуют характеристики - время задержки фибринолиза, средняя скорость лизиса сгустка (ΐ л).
Характеристикой роста сгустка также является распространение волны активности тромбина в пространстве и времени с помощью разработанного метода видеомикроскопии с использованием флуорогенного субстрата. Свертывание также запускается активатором и распространяется от него в пространстве кюветы. Однако в исследуемый образец добавлен тромбинспецифический белковый флуорогенный субстрат. В процессе свертывания в исследуемом образце образующийся тромбин способствует производству флуоресцентных молекул, по которым и можно судить о распространении волны активности тромбина. На фиг. 7 приведены зависимости распространения тромбиновой волны во времени и пространстве для разных концентраций активного XI фактора. По оси у указана концентрация тромбина нМ, по оси х - расстояние в мм, по оси ζ - время в мин. Фиг. 7а и 7б отражает ситуацию дефицита XI фактора свертывания крови 0 и 0,2 ЕД/мл. Фиг. 7в отображает нормальную волну тромбина для нормального содержания фактора XI 1 ЕД/мл. Фиг. 7г отражает волну тромбина для высокого содержания XI фактора 5 ЕД/мл. С помощью этих фигур рассчитывается скорость распространения тромбиновой волны и пик тромбина.
Все три указанные выше основных процесса в исследуемом образце заявляемого способа определяются постановкой одного теста, описанного выше.
Далее настоящее изобретение иллюстрируется с помощью приведенных примеров, но не ограничивается ими.
Для проведения контрольных тестов и определения диапазона референсных значений характери- 4 026282 стик процессов было использовано 74 образца плазмы здоровых добровольцев. Возрастной диапазон добровольцев составил от 20 до 62 лет.
На основании анализа процессов в исследуемом образце и сравнения их характеристик с референсными значениями делается вывод о направленности и степени выраженности отклонений в системе свертывания пациента. На основании определения гиперкоагуляционного или гипокогуляционного состояния врачом принимаются дальнейшие диагностические и терапевтические решения по отношению к конкретному пациенту
Пример 1.
У пациента А с тяжелой формой гемофилии типа А взяли образец крови. Из забранной у пациента крови была приготовлена свободная от тромбоцитов плазма (ρίρ). 120 мкл ρίρ плазмы смешали с реагентом для ингибирования контактной активации свертывания образца, после чего 15 мин инкубировали в термостате, и далее, добавив реагент для рекальцификации, сразу поместили образец в кювету, привели содержимое кюветы в контакт с активатором и запустили исследование на диагностическом приборе, как было указано ранее.
В результате проведенного теста были получены следующие данные:
Характеристики роста сгустка показания пациента норма
Задержка роста сгустка, мин 1.1 0.3-1.5
Начальная скорость роста сгустка, мкм/мин 25 36-56
Стационарная скорость роста сгустка, мкм/мин 12 20-30
Размер сгустка на 30 мин, мкм 530 740-1120
Плотность сгустка, усл.ед. 13776 14000-30000
Данный тест позволяет определять не только количественные характеристики, но и иллюстрационный материал в виде графиков и фотографий. Так на фиг. 1в приведены графики профилей роста сгустка. Сосредоточение кривых в промежутке от 0 до 1000 мкм говорит о гипокоагуляционном состоянии гемостаза пациента, а также о данном состоянии можно судить по фотографиям, на которых наглядно отражено, что рост сгустка практически отсутствует.
Существенно пониженные начальная и стационарная скорости роста сгустка и пониженный размер сгустка на 30 мин исследования указывают на состояние гипокоагуляции у пациента, он склонен к кровотечениям и нуждается в определенной терапии.
Пример 2.
Пациент В, ранний послеоперационный период после протезирования тазобедренного сустава. Образец крови данного пациента готовили и тестировали указанным в примере 1 способом.
В результате проведенного теста были получены следующие данные:
Характеристики роста сгустка показания пациента норма
Задержка роста сгустка, мин 1.4 0.3-1.5
Начальная скорость роста сгустка, мкм/мин 62 36-56
Стационарная скорость роста сгустка, мкм/мин 46 20-30
Размер сгустка на 30 мин, мкм 1501 740-1120
Плотность сгустка, усл.ед. 14664 14000-30000
Время полумакснмального тромбирования образца, мин 24 Не обнаружено
Время полного тромбирования (зарастания) образца, мин 42 Не обнаружено
Время образования первого спонтанного сгустка, мин 9 Не обнаружено
Так на фиг. 1б приведены графики профилей роста сгустка. Кривые распределены практически по всей длине координаты расстояния, что говорит о гиперкоагуляционном состоянии гемостаза пациента, а также о данном состоянии можно судить по фотографиям на фиг. 4, на которых наглядно отражено образование спонтанных сгустков и ускоренный рост сгустка, что подтверждает состояние гиперкоагуляции.
У пациента наблюдается повышение начальной скорости роста сгустка до 62 мкм/мин и стационарной скорости до 46 мкм/мин. Время полного зарастания составило 42 мин. Первый спонтанный сгусток образовался уже через 9 мин. Все эти характеристики подтверждают гиперкоагуляционное состояние у пациента, то есть у пациента очень высок риск тромбообразования, и, следовательно, он нуждается в проведении антикоагулянтной терапиии.
Пример 3.
Донор С, условно здоровый человек. Образец крови данного пациента готовили и тестировали ука- 5 026282 занным в примере 1 способом.
В результате проведенного теста были получены следующие данные:
Характеристики роста сгустка показания пациента норма
Задержка роста сгустка, мин 0.7 0,3-1.5
Начальная скорость роста сгустка, мкм/мин 54 36-56
Стационарная скорость роста сгустка, мкм/мин 27 20-30
Размер сгустка на 30 мин, мкм 1072 740-1120
Плотность сгустка, усл.ед. 16155 14000-30000
По полученным данным можно сделать вывод о том, что все показатели находятся в пределах диапазона нормальных значений, что подтверждает отсутствие данных за патологию.
Пример 4.
Пациент Ό с гемофилией А, находящийся на заместительной терапии препаратом рекомбинатного УШа фактора свертывания крови в стандартной дозировке. Образец крови данного пациента готовили и тестировали указанным в примере 1 способом.
Данные теста до введения препарата:
Характеристики роста сгустка показания пациента норма
Задержка роста сгустка, мин 0.5 0.3-1.5
Начальная скорость роста сгустка, мкм/мин 46 36-56
Стационарная скорость роста сгустка, мкм/мин 17 20-30
Размер сгустка на 30 мин, мкм 755 740-1120
Плотность сгустка, усл.ед. 19456 14000-30000
Данные теста через полчаса после введения препарата:
Характеристики роста сгустка показания пациента норма
Задержка роста сгустка, мин 0.6 0,3-15
Начальная скорость роста сгустка, мкм/мин 52 36-56
Стационарная скорость роста сгустка, мкм/мин 27 20-30
Размер сгустка на 30 мин, мкм 1029 740-1120
Плотность сгустка, усл.ед. 19723 14000-30000
Результаты проведенного теста наглядно показали, что до начала заместительной терапии пациент находился в состоянии гипокоагуляции с пониженной стационарной скоростью роста сгустка 17 мкм/мин. Данные характеристики подтверждают склонность пациента к кровотечениям. После введения препарата полученные характеристики теста показывают, что состояние гемостаза данного пациента было приведено в норму, т. е. стационарная скорость роста сгустка стала составлять 27 мкм/мин. Можно делать вывод о том, что проведенный тест наглядно отобразил действие введенного пациенту препарата и позволил подтвердить правильный выбор его дозирования.
Следовательно, данный тест позволяет быстро и наглядно проводить мониторинг заместительной терапии у пациентов с нарушениями свертывания крови.
Пример 5.
Пациент Е с тромбозом портальной вены, находящийся на терапии антикоагулянтами. Образец крови данного пациента готовили и тестировали указанным в примере 1 способом.
Данные теста до введения антикоагулянта:
Характеристики роста сгустка показания пациента норма
Задержка роста сгустка, мин 0.7 0,3-1,5
Начальная скорость роста сгустка, мкм/мин 65 36-56
Стационарная скорость роста сгустка, мкм/мин 37 20-30
Размер сгустка на 30 мин, мкм 1374 740-1120
Плотность сгустка, усл.ед. 17844 14000-30000
Данные теста через 3 ч после введения антикоагулянта:
Характеристики роста сгустка показания пациента норма
Задержка роста сгустка, мин 0.7 0,3-1,5
Начальная скорость роста сгустка, мкм/мин 56 36-56
Стационарная скорость роста сгустка, мкм/мин 15 20-30
Размер сгустка на 30 мин, мкм 840 740-1120
Плотность сгустка, усл.ед. 17398 14000-30000
Результаты проведенного теста наглядно показали, что пациент находился в состоянии гиперкоагуляции с повышенными начальной и стационарной скоростями роста сгустка 65 и 37 мкм/мин соответственно и увеличенным размером сгустка 1374 мкм. Данные характеристики подтверждают склонность
- 6 026282 пациента к патологическому тромбообразованию. После введения антикоагулянтного препарата полученные характеристики теста показывают, что состояние гемостаза данного пациента было приведено в состояние легкой гипокоагуляции со стационарной скоростью роста сгустка 15 мкм/мин, что является необходимым для предотвращения прогрессирования тромбоза. Можно делать вывод о том, что проведенный тест наглядно отобразил действие введенного пациенту препарата и позволил определить правильный выбор его дозирования.
Следовательно, данный тест позволяет быстро и наглядно проводить мониторинг эффективности антикоагулянтной терапии у пациентов с нарушениями свертывания крови.
Пример 6.
Пациент Р с только что произошедшим тромбозом портальной вены получает терапию антикоагулянтами и одновременно фибринолитическую терапию. Образец крови данного пациента готовили и тестировали указанным в примере 1 способом.
В результате проведенного теста были получены следующие данные:
Характеристики роста сгустка показания пациента норма
Задержка роста сгустка, мин 0.8 0.3-1.5
Начальная скорость роста сгустка, мкм/мин 14 36-56
Стационарная скорость роста сгустка, мкм/мин 12 20-30
Размер сгустка на 30 мин, мкм 405 740-1120
Плотность сгустка, усл.ед. 20874 14000-30000
Время задержки фибринолиза, мин 3Ι
Скорость лизиса сгустка, мкм/мин 3,5
В результате тестирования образца крови данного пациента было зарегистрировано появление фронта фибринолиза (фронта растворения образовавшегося сгустка) и рассчитаны его характеристики, время задержки фибринолиза 31 мин и скорость лизиса сгустка - 3,5 мкм/мин. Характеристики позволяют судить о том, что у данного пациента препарат для расщепления тромба работает. Размер сгустка и скорости образования сгустка рассчитываются по зависимости фронта тромбообразования и светорассеяния данного образца от расстояния. Пониженные характеристики образования сгустка отражают действие антикоагулянтной терапии.
Пример 7.
Пациент О, ранний послеоперационный период, пневмония. Не получал антикоагуляционной терапии в связи с тромбоцитопенией. На 2-й день после операции у пациента развился тромбоз воротной вены.
Данные теста перед тромбозом:
Характеристики роста сгустка показания пациента норма
Задержка роста сгустка, мин 1 0,3-1,5
Начальная скорость роста сгустка, мкм/мин 59 36-56
Стационарная скорость роста сгустка, мкм/мин 34 20-30
Размер сгустка на 30 мин, мкм 1227 740-1120
Плотность сгустка, усл.ед. 14602 14000-30000
Образец крови данного пациента был протестирован в первый день после оперативного вмешательства, и результаты теста показали увеличение начальной и стационарной скоростей роста сгустка (59 и 34 мкм/мин соответственно), что уже подтвердило склонность данного пациента к патологическому тромбообразованию. Однако пациенту не была назначена необходимая терапия, а случившийся на 2-й день после операции тромбоз явился следствием данного патологического состояния.
Описанный здесь тест обладает способностью прогноза и может использоваться для назначения терапии по коррекции состояния гемостаза.
Приведенные примеры подтверждают тот факт, что при отклонении определяемых характеристик от установленных норм может быть вовремя выявлено наличие у пациента гиперкоагуляции или гипокоагуляции, то есть склонности к основным клиническим проявлениям патологии гемостаза, тромбообразованию или кровотечению соответственно. На основании полученных данных врачом может приниматься решение о назначении и коррекции терапии пациента.
Данный способ прогнозирования применим к пациентам с различными патологиями гемостаза.
Таким образом, совокупность характеристик, определяемых в результате проведения упомянутого теста, позволяет диагностировать склонность к тромбообразованию, кровотечению и другим патологиям системы гемостаза. А также позволяет следить за изменениями и состояниями коагуляции при проведении заместительной терапии факторов свертывания, антикоагулянтной, фибринолитической терапии и терапии другими препаратами, влияющими на свертывающую систему крови.
Пример 8.
- 7 026282
У пациента Н, имеющего тяжелую форму гемофилии С (дефицит фактора свертывания XI менее 1% нормы), взяли образец крови. Посредством стандартной процедуры центрифугирования была приготовлена богатая тромбоцитами плазма, разделенная на четыре образца. В эти образцы были добавлены разные концентрации фактора Х1а: 0 (фиг. 7а) 0,2 ЕД/мл (фиг. 7б), 1 ЕД/мл (фиг. 7в) и 5 ЕД/мл (фиг. 7г) соответственно. Нормальной считается концентрация в 1 ЕД/мл (фиг. 7в). Таким образом, первый образец соответствует собственно гемофилии, второй - мягкому дефициту, третий - нормальной плазме и четвертый - сильному избытку фактора (500% от нормы).
Характеристики роста сгустка 0 ЕД/мл 0.2 ЕД/мл 1 ЕД/мл 5 ЕД/мл
Скорость распространения тромбиновой волны, мкм/мин 14 35 70 90
Пик тромбина, нМ. Нет пика 12 100 120
В случае нормальной плазмы (1 ЕД/мл) наблюдалось распространение в пространстве волны тромбина с амплитудой пика 100 нМ и скоростью 70 мк/мин. При уменьшенной концентрации (0.2 ЕД/мл) формирование волны было слабо выраженным, амплитуда резко уменьшалась (на порядок), а скорость падала в два раза. При полном отсутствии фактора XI скорость распространения тромбина падала еще больше, а выраженного пика не было совсем, что демонстрирует качественный переход. Эти результаты иллюстрируют, что пик тромбина может быть важным диагностическим показателем, в ряде ситуаций более чувствительным и специфичным нежели скорость роста сгустка: когда скорость меняется в разы, пик меняется на порядки и даже претерпевает качественные изменения (исчезает).
Пример 9.
У пациента I, условно здорового человека, взяли образец крови. Был приготовлен образец бедной тромбоцитами плазмы ррр, на котором проведено исследование.
В результате проведенного теста были получены следующие данные:
Характеристики роста сгустка показания норма
Задержка роста сгустка, мин
Начальная скорость роста сгустка, мкм/мин Стационарная скорость роста сгустка, мкм/мин Размер сгустка на 30 мин, мкм
Плотность сгустка, усл.ед.
Полученные показатели находятся в пределах диапазона нормальных значений, что подтверждает отсутствие данных за патологию.

Claims (2)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Способ определения функционального состояния системы гемостаза, включающий следующие стадии:
    a) подготовка образца крови или ее плазмы;
    b) определение пространственной динамики ίη νίίΓο; по меньшей мере одного из процессов свертывания или лизиса сгустка в исследуемом образце, включающее смешивание образца с реагентом для ингибирования контактной активации свертывания образца, добавление реагента для рекальцификации, обеспечивание локальной активации свертывания в исследуемом образце поверхностью с иммобилизованным на ней аналогом физиологического активатора коагуляции в неперемешиваемом тонком слое указанного образца, определение интенсивности светорассеяния в сгустке, времени задержки формирования сгустка, скорости роста сгустка, площади под кривой зависимости светорассеяния от расстояния, скорости распространения тромбиновой волны; пика тромбина, размера сгустка в заданный момент времени, времени начала фибринолиза, изменения фронта фибринолиза во времени, изменения фронта тромбообразования во времени, изменения размера сгустка во времени;
    c) сравнение результатов, полученных на этапе Ь), с нормой и определение направленности и степени выраженности отклонений у пациента.
  2. 2. Способ по п.1, где на этапе Ь) дополнительно регистрируют следующие процессы в исследуемом образце: рост сгустка от активатора, рост спонтанных сгустков, фибринолиз или их комбинацию.
EA201300329A 2013-04-11 2013-04-11 Способ определения функционального состояния системы гемостаза EA026282B1 (ru)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EA201300329A EA026282B1 (ru) 2013-04-11 2013-04-11 Способ определения функционального состояния системы гемостаза
PCT/EA2014/000010 WO2014166508A1 (ru) 2013-04-11 2014-04-11 Способ определения функционального состояния системы гемостаза

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EA201300329A EA026282B1 (ru) 2013-04-11 2013-04-11 Способ определения функционального состояния системы гемостаза

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201300329A1 EA201300329A1 (ru) 2014-10-30
EA026282B1 true EA026282B1 (ru) 2017-03-31

Family

ID=51688972

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201300329A EA026282B1 (ru) 2013-04-11 2013-04-11 Способ определения функционального состояния системы гемостаза

Country Status (2)

Country Link
EA (1) EA026282B1 (ru)
WO (1) WO2014166508A1 (ru)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2703541C1 (ru) * 2019-03-15 2019-10-21 федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр профилактической медицины" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ ПМ" Минздрава России) Способ определения фибриногена при рекальцификации цитратной плазмы и оценка его функциональности
RU2712643C1 (ru) * 2019-10-23 2020-01-30 федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр профилактической медицины" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ ПМ" Минздрава России) Способ определения фибриногена и оценка его функциональности

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112162102B (zh) * 2020-07-22 2023-09-08 三诺生物传感股份有限公司 一种用于凝血四项测试的校正方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2151401C1 (ru) * 1998-07-16 2000-06-20 Сибирский государственный медицинский университет Способ диагностики повреждения системы гемостаза у больных с циркуляторным шоком
US6482653B1 (en) * 1997-12-19 2002-11-19 Dade Behring Marburg Gmbh Method and diagnostic agent for hemostasis diagnosis
RU2282855C2 (ru) * 2004-04-12 2006-08-27 Иван Илларионович Тютрин Способ оценки функционального состояния системы гемостаза

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2063037C1 (ru) * 1992-09-22 1996-06-27 Научно-производственное объединение "Меднорд" Способ оценки функционального состояния системы гемостаза
RU2186521C2 (ru) * 2000-10-11 2002-08-10 Российский центр функциональной хирургической гастроэнтерологии Способ диагностики функционального состояния системы гемостаза

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6482653B1 (en) * 1997-12-19 2002-11-19 Dade Behring Marburg Gmbh Method and diagnostic agent for hemostasis diagnosis
US20030027235A1 (en) * 1997-12-19 2003-02-06 Dade Behring Marburg Gmbh Novel method and diagnostic agent for hemostasis diagnosis
RU2151401C1 (ru) * 1998-07-16 2000-06-20 Сибирский государственный медицинский университет Способ диагностики повреждения системы гемостаза у больных с циркуляторным шоком
RU2282855C2 (ru) * 2004-04-12 2006-08-27 Иван Илларионович Тютрин Способ оценки функционального состояния системы гемостаза

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ROSLYN BONAR et al. Quality in coagulation and haemostasis testing. Biochemia Medica, 2010; 20 (2): pp. 184-199. Найдено в Интернет:<http://www.biochemia-medica.com/content/quality-coagulation-and-haemostasis-testing>, с. 2, абзац 7-с. 3, абзац 9, с. 4, абзац 5, табл. 1 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2703541C1 (ru) * 2019-03-15 2019-10-21 федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр профилактической медицины" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ ПМ" Минздрава России) Способ определения фибриногена при рекальцификации цитратной плазмы и оценка его функциональности
RU2712643C1 (ru) * 2019-10-23 2020-01-30 федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр профилактической медицины" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБУ "НМИЦ ПМ" Минздрава России) Способ определения фибриногена и оценка его функциональности

Also Published As

Publication number Publication date
WO2014166508A1 (ru) 2014-10-16
EA201300329A1 (ru) 2014-10-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7246559B2 (ja) 凝固分析を使用した抗凝固剤の検出および分類
JP6877340B2 (ja) 血栓溶解剤の存在下における粘弾性解析を用いた新規病態の確認
EP1885873B1 (en) Method and system for absolute platelet percent aggregation determination
JP5662802B2 (ja) フォン−ビルブランド病ならびにフォン−ビルブランド病および血小板機能の後天性または先天性障害に関連する出血リスクの増加を評価するためのインビトロ診断法
US7754489B2 (en) Protocol for risk stratification of ischemic events and optimized individualized treatment
US10935559B2 (en) Methodologies and reagents for detecting fibrinolysis and hyperfibrinolysis
KR20020021811A (ko) 환자 표본에서 지혈 기능장애의 존재를 예견하기 위한 방법
EA026282B1 (ru) Способ определения функционального состояния системы гемостаза
KR20200034749A (ko) 혈장 및 전혈에서 항응고제 탐지 방법 및 장치
Mason et al. The current role of platelet function testing in clinical practice
van Veen et al. Blood product support for delivery in severe factor X deficiency: the use of thrombin generation to guide therapy
RU2660706C1 (ru) Скрининг-тест определения контактного пути коагуляции (СТОКПК)
WO2021023894A1 (en) Method and means for diagnosing a human sepsis
RU2601111C1 (ru) Способ оценки гемостатической активности тромбоцитов
US11630101B2 (en) Method for diagnosing anomalies in the coagulation of blood
Hosokawa et al. New methodological approaches for assessing thrombus formation in cardiovascular disease
Škiljić et al. Dijagnostičko-terapijski pristup kompleksnoj koagulopatiji uslijed recidivirajućeg krvarenja iz mokraćnog sustava
EA042763B1 (ru) Набор реагентов для оценки состояния систем свертывания и фибриндеструкции при диагностике нейрозаболевания
Peetz et al. Coagulation diagnostics
WO2020009614A1 (ru) Набор реагентов для диагностики степени нейровоспаления

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ KG TJ TM