EA022137B1 - КОНЪЮГАТЫ ε-ПОЛИЛИЗИНА И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ - Google Patents

Abstract

Настоящее изобретение относится к конъюгатам ε-полилизина, в особенности конъюгатам ε-полилизина с соединениями, несущими карбоксильные группы, и к их приготовлению и применению для нацеливания на почки.

Description

Настоящее изобретение относится к конъюгатам е(эпсилон)-полилизина, в особенности конъюгатам ε-полилизина с соединениями, несущими карбоксильные группы, и к их приготовлению и применению для нацеливания на почки.

Почки представляют собой орган, который является важным, в частности, для транспорта и экскреции различных веществ и для продукции гормонов.

Одной из функций почек является экскреция конечных продуктов метаболизма, так называемых содержащихся в моче веществ, и токсинов из организма путем образования мочи, которая в конечном итоге выводится из организма через мочевые пути. Почки регулируют водный баланс и таким образом служат для длительной регуляции кровяного давления. Они регулируют баланс электролитов и кислотно-щелочной баланс путем контроля состава мочи. Кроме того, почки являются важным органом для промежуточного метаболизма в организме (они оказывают влияние на глюконеогенез). Почки продуцируют гормоны, такие как, например, эритропоэтин, для кровообразования и представляют собой сайт разложения пептидных гормонов. Тем не менее, многие функции почек сами также контролируются гормонами.

Таким образом, почки представляют собой жизненноважный орган, для которого в настоящее время были разработаны многие диагностические и терапевтические методы. Например, иммуносупрессанты, цитостатики, иммунотерапевтические средства, противовоспалительные средства, антибиотики, вирусостатики, противогипертонические средства, средства, способствующие выведению мочевой кислоты, или мочегонные средства применяются для лечения почек или для воздействия на функции почек. В данном случае чрезвычайно важным является, чтобы лекарственные средства достигали почек максимально нацеленным образом, насколько это возможно.

В равной степени также является чрезвычайно важным изображение почки в методах визуализации.

С помощью общепринятых ядерно-медицинских и радиологических методов, таких как БРЕСТ, РЕТ, ультразвук и МКТ, ферментативных процессов, метаболических процессов, экспрессия определенных генов и молекулярные реакции, а также морфологические структуры могут быть представлены с помощью так называемой молекулярной визуализации. Методы медицинской визуализации, представленные выше, при необходимости, могут быть дополнены компьютерной томографией и методами оптической визуализации (ближняя инфракрасная визуализация, флуоресцентная томография). В настоящее время центр внимания молекулярной визуализации все еще сосредоточен на диагностике злокачественных заболеваний, неврологических вопросов и мониторинга генной терапии, но в будущем будет расширен на все области, в которых будут открыты клеточные изменения в максимально сжатые сроки.

В качестве источника сигнала для методов визуализации сигнальную молекулу обычно связывают с молекулой-носителем. Молекула-носитель обеспечивает чрезвычайно специфическое нацеливание, например, путем связывания специфически с целевыми клетками или захвата ними. Например, молекула-носитель может представлять собой лиганд рецептора или субстрат фермента. Сигнальная молекула может обеспечивать видимость с помощью одной или нескольких технологий визуализации. Примерами сигнальных молекул являются, например, комплексообразующие вещества или хелатообразующие вещества, ионы металлов которых можно обнаружить с помощью технологий визуализации. Соединение или конъюгат, содержащий сигнальную молекулу и молекулу-носитель, называют диагностическое средство. Различные технологии визуализации более подробно обсуждаются ниже.

Компьютерная томография (СТ)

В классической радиографии ткане-специфическое ослабление рентгеновских лучей представлено на рентгеновской пленке. Твердые ткани, например кости, абсорбируют большее количество радиации в этом случае, в отличие от мягких тканей, таких как жировая ткань и мышцы. Используемые рентгеноконтрастные вещества представляют собой вещества, которые содержат элементы с большим атомным номером, например йодсодержащие молекулы для ангиографии. В качестве дальнейшей разработки радиография предоставляет изображения поперечного сечения. В СТ рентгеновские изображения записывают с различных направлений с помощью сенсоров (детекторов) и воспроизводят с помощью компьютера в качестве трехмерных рентгеновских изображений. Благодаря широкой применимости СТ этот метод известен в качестве наиболее используемого метода классической радиологии. Тем не менее, низкая чувствительность метода ограничивает его применение в качестве метода для молекулярной визуализации.

Однофотонная эмиссионная компьютерная томография (БРЕСТ)

Сцинтиграфия использует гамма-излучение радиоактивно меченных веществ (радиоактивные индикаторы), эмитируемых короткоживущими радионуклидами. Они накапливаются специфически в целевой ткани в организме. С помощью камеры для гамма-излучения испускаемое излучение записывается и превращается в изображение. Однофотонная эмиссионная компьютерная томография (БРЕСТ) представляет собой трехмерную модификацию сцинтиграфии. В БРЕСТ излучение записывается под различными углами, как в СТ, и трехмерное изображение получают на компьютере. В статической БРЕСТ изменяют концентрацию радиоактивного индикатора в определенный момент времени. В динамической БРЕСТ измерение повторяют через определенные промежутки времени. Таким образом, можно исследовать из- 1 022137 менение накопления.

Позитронно-эмиссионная томография (РЕТ)

При клиническом применении РЕТ предоставляет собой наиболее структурно ориентированные методы визуализации рентгенологической диагностики. Позитронно-эмиссионная томография (РЕТ) является современным функциональным методом визуализации. С помощью атомов, испускающих позитроны, она обеспечивает очень хорошее разрешение при обнаружении радиоактивных изотопов (разрешение 2-3 мм достигается на современных приборах РЕТ даже в случае полноразмерных томографов). Если эти радиоактивные изотопы, например ^б8Оа, применяются для мечения биомолекул, то можно визуализировать биохимические процессы в индивидуальных органах организма. Существенным преимуществом ядерно-медицинских методов является высокая чувствительность, благодаря чему меченые вещества могут применяться только в минимальных количествах (измеряемых нанограммами). В настоящее время РЕТ камера интегрирована с СТ прибором (часто предоставляет высокое локальное разрешение приблизительно < 1 мм). РЕТ/СТ технология предоставила принципиально новые результаты для диагностики в последние годы. Таким образом могут быть получены в одном изображении функциональные изображения РЕТ и морфологическая информация СТ в одних и тех же анатомических структурах.

Органом, который очень часто и чрезвычайно интенсивно исследуется в медицинской диагностике, являются почки. Наиболее частным методом исследования в данном случае является сцинтиграфия почек.

Сцинтиграфия почек

Сцинтиграфия почек представляет собой метод ядерно-медицинского исследования, который предоставляет возможность оценки функции почек со статической и динамической точек зрения. В этом методе определяют кровоснабжение, функцию и экскрецию каждой индивидуальной почки. Он является общепринятым методом для распознавания рубцевания паренхимы, в особенности у детей, и, кроме того, служит для оценки региональной функции почек и функции левой и правой почек.

Существуют различия между двумя формами сцинтиграфии почек.

Статическая сцинтиграфия почек

При статической сцинтиграфии почек функциональное состояние почечной ткани определяют с помощью радиоактивного изотопа ^99тТс. Технеций в этом случае связывается в комплексной форме, например, с 2,3-димеркаптоянтарной кислотой (ΌΜδΑ). Таким образом, статическая сцинтиграфия почек преимущественно пригодна для визуализации почек, имеющих аномалии (дистрофия, подковообразная почка и др.) или состояния после воспаления.

Динамическая сцинтиграфия почек

В отличие от этого динамическая сцинтиграфия почек исследует функции почек. Таким образом, можно исследовать скорость клубочковой фильтрации, почечный кровоток (РВЕ) и канальцевую секрецию для диагностики функции почек и их клиренса.

Радиофармацевтические препараты, которые используют в настоящее время, представляют собой следующие вещества:

^99тТ с-МЛСЗ меркаптоацетилтриглицин;

^99тТс-ЭМ8А 2,3-димеркаптоянтарная кислота;

^99тТс-ОТРЛ диэтилентриаминпентауксусная кислота;

¹²³1-О1Н гиппуран (ортойодгиппуровая кислота).

На фиг. 3 представлена химическая структура МАСЗ, ΌΜδΑ и ЭТРЛ.

Сцинтиграфия функции почек (= динамическая сцинтиграфия почек) используется при следующих показаниях:

для классификации функции левой и правой почки отдельно при заболеваниях почек, таких как, например, почечные камни (нефролитиаз), опухоли почек, дистрофические (неправильно расположенные) почки или диспластические (деформированные) почки;

для исследования частичной функции в случае удвоенных почек; для исследования нарушений мочеотделения;

для классификации пузырно-лоханочного рефлюкса (аномалии мочевых путей);

если подозревают реноваскулярную гипертензию;

для тестирования почечной функции перед пересадкой живой почки;

для контроля прогресса хирургически восстановленного сужения или непроходимости сосудов; для оценки трансплантированных почек;

для экстренной диагностики при подозрении на повреждение почки (травма почки); в случае острого существенно уменьшенного мочеотделения (анурии) для исключения почечной эмболии или острой непроходимости мочевых путей; для определения общего клиренса; для определения или исключения истечения мочи.

До настоящего времени сцинтиграфию функции почек обычно осуществляют с помощью БРЕСТ, поскольку разрешенные радиоактивные изотопные метки МАС3 и ΌΜδΑ можно было метить только с помощью БРЕСТ нуклида ^99тТс. Вследствие этого до настоящего времени не возможно было применять

- 2 022137 существенно улучшенные возможности благодаря РЕТ и РЕТ/СТ для диагностики функции почек.

Также было бы чрезвычайно желательным для терапевтических целей, если можно было бы улучшить нацеливание на почки. В настоящее время около 280 млн людей страдают от хронических заболеваний почек. Применение или дозировка лекарственных средств для лечения заболеваний почек часто ограничены побочными действиями лекарственных средств. Если бы было возможно разработать концепцию нацеливания лекарственных средств, с помощью которой известные или также новые лекарственные средства достигали бы почки нацеленным образом, то терапевтическое лечение заболеваний почки существенно улучшилось.

В \νϋ 03/086293 описана попытка улучшить аромат лекарственных средств путем образования их комплекса с полилизином или полиаргинином. В этом случае комплекс состоит из органической соли, то есть в нем отсутствует ковалентная связь, а присутствует вместо этого ионная, между полилизином/полиагринином и лекарственным средством. Нигде не описано касательно возможности применения конъюгатов полилизина для нацеливания лекарственного средства на почки.

1ид-Биид δΐιίΐι и др. (Вютекоитсе Тесйио1о§у 97(2006), 1148-1159) описали применение ε-полилизина для нацеливания лекарственных средств. Было предложено, что ε-полилизин может быть ковалентно связан с активными соединениями. Задачей подхода, описанного в данном источнике, является повышение скорости поглощения в клетки. Специфичность к специфической ткани не являлась задачей и не достигалась.

Таким образом, задачей настоящего изобретения является обеспечение носителя или молекулыносителя для терапевтического средства или диагностического средства, которое имеет наивысшую возможную аффинность и селективность по отношению к почке.

Неожиданно, было обнаружено, что конъюгаты ε-полилизина или производные ε-полилизина с соединениями, несущими карбоксильные группы, имеют чрезвычайно высокую селективность по отношению к почке. Это обозначает, что такие конъюгаты поглощаются фактически исключительно тканью почки. Такие конъюгаты, связанные с сигнальными молекулами, такие как, например, радиоактивные изотопы и/или активные соединения, могут применяться для диагностического и/или терапевтического лечения почки.

Таким образом, настоящее изобретение относится к конъюгату, содержащему по меньшей мере одно соединение, несущее карбоксильные группы, и линейный или разветвленный олигомер, который состоит из пептидно-связанных мономерных звеньев и который либо сформирован в целом из более чем 50% (исходя из количества мономерных звеньев) мономерных звеньев ε-лизина или содержит по меньшей мере 10 последовательных мономерных звеньев, которые сформированы по меньшей мере из 70% (исходя из количества мономерных звеньев) мономерных звеньев ε-лизина. Предпочтительным является применение соединений, несущих карбоксильные группы, в которых пропорция карбоксильных групп в молярной массе соединения, несущего карбоксильные группы, составляет больше чем 30%, особенно предпочтительно больше чем 40%.

В предпочтительном варианте осуществления, в частности для терапевтических показаний, конъюгат дополнительно содержит по меньшей мере одно активное соединение, предпочтительно ковалентно связанное.

В предпочтительном варианте осуществления, олигомер имеет длину цепи от 10 до 50 мономерных звеньев.

В особенно предпочтительном варианте осуществления олигомер состоит только из мономерных звеньев ε-лизина, в частности только из звеньев ε-лизина.

В предпочтительном варианте осуществления по меньшей мере одно соединение, несущее карбоксильные группы, связано посредством аминогруппы мономерного звена ε-лизина, то есть одно или несколько мономерных звеньев ε-лизина несут на их аминогруппе соединение, несущее карбоксильные группы, которое конъюгировано непосредственно или с помощью спейсера.

В варианте осуществления изобретения, которое является особенно предпочтительным для диагностических показаний, соединение, несущее карбоксильные группы, представляет собой комплексообразующее вещество, особенно предпочтительно ΌΘΤΆ (= 1,4,7,10-тетраазациклододекан-П,-№,-№',-№''-тетрауксусную кислоту) или ΌΤΡΆ (диэтилентриаминпентауксусную кислоту).

Настоящее изобретение также относится к способу получения соединений в соответствии с изобретением, который включает по меньшей мере следующие стадии способа:

a) обеспечение олигомера в соответствии с изобретением, который содержит по меньшей мере одну реакционноспособную группу,

b) конъюгирование по меньшей мере одного необязательно активированного соединения, несущего карбоксильные группы, с олигомером со стадии а).

В варианте осуществления способа в соответствии с изобретением, если конъюгат содержит комплексообразующее вещество, соединение, полученное на стадии Ь), приводят в контакт с солями металлов на следующей стадии с) таким образом, что ионы металлов комплексуются с помощью комплексообразующих веществ.

- 3 022137

Настоящее изобретение дополнительно относится к конъюгату в соответствии с изобретением в качестве лекарственного средства, такого как, в частности, терапевтическая композиция или композиция, усиливающая визуализацию.

Настоящее изобретение также относится к лекарственному средству или фармацевтической композиции, в частности терапевтической или усиливающей визуализацию композиции, по меньшей мере содержащей конъюгат в соответствии с изобретением.

Настоящее изобретение также относится к набору для приготовления лекарственного средства или фармацевтической композиции, в частности терапевтической или усиливающей визуализацию композиции, по меньшей мере, содержащей конъюгат в соответствии с изобретением. Этот конъюгат можно подвергать реакции в зависимости от применения, например, с подходящим активным соединением для приготовления терапевтической композиции или, если присутствует комплексообразующее вещество, с ионами металлов, которые имеют усиливающее визуализацию и/или терапевтическое действие.

Настоящее изобретение также относится к применению конъюгата в соответствии с изобретением для приготовления макромолекулярных конъюгатов, где два или больше конъюгатов в соответствии с изобретением связаны с макромолекулой, и макромолекулярный конъюгат состоит по меньшей мере из двух или больше конъюгатов в соответствии с изобретением, которые ковалентно связаны с макромолекулой.

Настоящее изобретение также относится к применению конъюгата в соответствии с изобретением для нацеливания на почки. Нацеливание на почки в данном случае предпочтительно служит для обогащения лекарственными средствами для фармацевтических или диагностических применений в почке, то есть создания повышенного поглощения почками по сравнению с остальным организмом.

На фиг. 1 показано схематичное изображение соединения в соответствии с изобретением, полученного в примере синтеза 1.

На фиг. 2 показано распределение по органам ^ш1и-насыщенного ε-полилизин-ЭОТА. Дальнейшие примеры представлены в примере использования 1.

На фиг. 3 показана химическая структура МАС3, ΌΜ8Α и ΌΤΡΑ.

На фиг. 4 показаны производные эналаприла в соответствии с примером 7.

Вещества, которые улучшают изображение целевого органа в определенных диагностических методах, действуют в качестве композиции, усиливающей визуализацию, или контрастного вещества или усилителя визуализации, обычно путем повышения контраста к окружающей среде или сигнала целевого органа по отношению к окружающей среде.

Соединение, несущее карбоксильные группы, в соответствии с настоящим изобретением представляет собой химическое соединение, которое содержит по меньшей мере одну карбоксильную группу (-СООН) и по меньшей мере одну группу или функциональную группу для связывания с олигомером конъюгата в соответствии с изобретением. Связывание с олигомером может осуществляться с помощью любого известного способа, который приводит к ковалентному связыванию олигомера и соединения, несущего карбоксильные группы. Примерами функциональных групп, с помощью которых может осуществляться связывание, являются -ΝΗ₂, -8Н, -ОН, -На1 (например, -С1, -Вг, -I), -алкин, -N08, -N00. -8О₂С1, -азид, -карбонат, -альдегид, -эпоксид, -СООН, -СООК, где К в этом случае предпочтительно представляет собой галоген или предпочтительно активатор, то есть полезную уходящую группу, такую как, например, Ν-гидроксисукцинимид, пентафторфенил или паранитрофенил (обзор возможных ковалентных типов связывания можно найти, например, в Вюсоп)ида1е Тесйшдиек, Сгед Т. Негшаикои, Асабепис Ргекк, 1996, на с. 137-165).

Соединение, несущее карбоксильные группы, предпочтительно содержит две или больше карбоксильных групп. Примерами соединений, несущих карбоксильные группы, которые являются пригодными в соответствии с изобретением, являются лимонная кислота, янтарная кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, глутаровая кислота, адипиновая кислота, винная кислота, щавелевая кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, глутаровая кислота, адипиновая кислота, субериновая кислота, азелаиновая кислота, себациновая кислота, соответствующие разветвленные жирные кислоты, малеиновая кислота, фумаровая кислота, циклогександикарбоновая кислота и соответствующие позиционные изомеры и сходные алифатические двухосновные кислоты; тетрагидрофталевая кислота, 5-норборнен-2,3дикарбоновая кислота и сходные алициклические двухосновные кислоты; трикарбаллиловая кислота, аконитовая кислота, тримезиновая кислота и сходные трехосновные кислоты; адамантантетракарбоновая кислота, бутантетракарбоновая кислота, циклопентантетракарбоновая кислота, тетрагидрофурантетракарбоновая кислота и сходные четырехосновные кислоты; сахарные кислоты, в частности альдаровые кислоты, такие как, например, глукаровая кислота, галактаровая кислота; яблочная кислота, винная кислота, лимонная кислота и сходные жирные оксикислоты; тримеллитовая кислота, пиромеллитовая кислота, бифенилтетракарбоновая кислота, бензофенонтетракарбоновая кислота, дифенилсульфонтетракарбоновая кислота и сходные ароматические поликарбоновые кислоты.

В соответствии с изобретением соединение, несущее карбоксильные группы, также может представлять собой комплексообразующие вещества, которые содержат по меньшей мере одну карбоксильную группу, предпочтительно две или больше карбоксильных групп, и по меньшей мере одну группу

- 4 022137 или функциональную группу для связывания с олигомером конъюгата в соответствии с изобретением. Их примерами являются ИОТА, ТЕТА, ЕИТА или предпочтительно ИОТА или ИТРА. В этом случае соединения, несущие карбоксильные группы, одновременно также выполняют функцию комплексообразующего вещества, что является особенно благоприятно для диагностических показаний.

Предпочтительными соединениями, несущими карбоксильные группы, являются те соединения, которые содержат две или больше свободных карбоксильных групп после конъюгирования к олигомеру.

Было обнаружено, что достигаемая специфичность при нацеливании на почку является чрезвычайно высокой, если карбоксильные группы соединения, несущего карбоксильные группы, составляют большую пропорцию молярной массы соединения, несущего карбоксильные группы. Предпочтительными в настоящем изобретении являются соединения, несущие карбоксильные группы, в которых пропорция карбоксильных групп в молярной массе составляет больше чем 30%, предпочтительно больше чем 40%.

Например, молярная масса ИОТА составляет 404 г/моль. Их 4 карбоксильные группы составляют пропорцию 180 г/моль (4 х СООН = 4 х 45 г/моль). Это обеспечивает пропорцию карбоксильных групп в молярной массе ИОТА приблизительно 44%.

Лимонная кислота имеет молярную массу 192 г/моль. Карбоксильные группы (3 х 45 г/моль) составляют 135 г/моль ее. Это обеспечивает пропорцию карбоксильных групп в молярной массе лимонной кислоты приблизительно 70%.

Соединения, несущие карбоксильные группы, которые являются особенно предпочтительными в соответствии с изобретением, представляют собой соединения, которые содержат две или больше свободных карбоксильных групп после конъюгирования к олигомеру и в которых пропорция карбоксильных групп в молярной массе составляет больше чем 30%, предпочтительно больше чем 40%, такие как, например, ИОТА, ИТРА и лимонная кислота.

Спейсер, который часто называется линкером, осуществляет ковалентное связывание между двумя частями молекулы, в данном случае, например, между олигомером в соответствии с изобретением и соединением, несущим карбоксильные группы, или активным соединением. Спейсер обычно вводят, если связывание между двумя частями только не происходит путем непосредственной химической связи, а вместо этого создается определенное разделение между двумя частями. В равной степени спейсер может обеспечивать химические функциональные группы, которые необходимы для связывания двух частей молекулы, которые иным образом не будут взаимодействовать друг с другом. Конъюгирование спейсера к олигомеру, соединению, несущему карбоксильные группы, или активному соединению предпочтительно осуществляется путем амидной или сложноэфирной связи. Спейсеры могут представлять собой, например, алифатические углеводороды, полиэфиры (такие как полиэтиленгликоли), олигопептиды или сходные структуры, имеющие цепочечную структуру. Спейсер может быть стабильным, то есть не может расщепляться в физиологических условиях или может только незначительно расщепляться, или может быть нестабильным, то есть может расщепляться, по меньшей мере, в определенных физиологических условиях.

Активные соединения, пептиды, комплексообразующие вещества или другие функциональные компоненты могут связываться с олигомером непосредственно или с помощью спейсера.

Примерами функциональных групп, с помощью которых может осуществляться непосредственное связывания, являются -ΝΗ₂, -8Н, -ОН, -На1 (например, -С1, -Вг, -I), -алкин, -N08, -Νί'Ό. -8О₂С1, -азид, -карбонат, -альдегид, -эпоксид, -СООН, -СООК, где К в этом случае предпочтительно представляет собой галоген или предпочтительно активатор, то есть полезную уходящую группу, такую как, например, Ν-гидроксисукцинимид, пентафторфенил или паранитрофенил (обзор возможных ковалентных типов связывания можно найти, например, в ВюсопщдаЮ Тесйшдиек, Огед Т. Негтапкоп, Асабешю Ргекк, 1996, на с. 137-165).

Например, активные соединения могут быть связаны с конъюгатом в соответствии с изобретением с помощью расщепляемого линкера. Этот линкер затем может расщепляться ш νίνο в определенных условиях, например путем ферментативного или химического расщепления, и высвобождать активное соединение. Подходящими для этой цели являются линкеры, которые содержат карбоксилатные и дисульфидные связи, в которых формирующие группы гидролизируются ферментативно или химически и последние отделяются путем дисульфидного обмена, например, в присутствии глутатиона.

Примером расщепляемого спейсера также является олигопептид, который может расщепляться специфически с помощью специфического, эндогенного или экзогенного фермента. Таким образом, например, пептидная последовательность ИЕМО (А8р-О1и-Уа1-А8р) расщепляется после индукции апоптоза каспазой-3. Таким образом, например, активное соединение или соединение, несущее карбоксильные группы, которое связано с помощью спейсера этого типа, может быть удалено из почки после определенного времени удержания в ней, или альтернативно соответствующая функциональная возможность (присутствие или отсутствие определенного фермента) почки также может быть проверена. Дальнейшими примерами являются пептидные последовательности ΟΡΕΝΣεΡ^ΟΟΟΟ или ΡΕΝΕΡ, которые могут быть расщеплены матриксной металлопротеазой-13. Простым вариантом осуществления расщепляемого

- 5 022137 спейсера является образование карбоксилата, которые легко может быть расщеплен эстеразами.

Альтернативно, спейсер может содержать кислото-неустойчивую структуру, например гидразон, имин, карбоскигидразон, ацеталь или кеталь (см., например, Наад-К, Кгак-Р., Апде\\апй1е СНепйе страница 1218 (2006)).

В соответствии с изобретением аминокислоты представляют собой соединения, которые несут по меньшей мере одну аминогруппу и по меньшей мере одну карбоксильную группу. Примерами являются природные, протеиногенные аминокислоты или непротеиногенные аминокислоты, которые встречаются в организме или приготавливают синтетически.

Пептид представляет собой соединение, которое образуется при связывании двух или больше аминокислот. Индивидуальные аминокислоты в этом случае связаны в указанной последовательности с образованием цепи, обычно неразветвленной. Аминокислоты в пептидах и в более крупных белках связаны друг с другом с помощью амидных связей.

В соответствии с изобретением твердая фаза представляет собой органический, неорганический или органический/неорганический композитный материал, который может применяться в качестве смолы или подложки при твердофазном синтезе. Кроме того, поверхности формовок, такие как, например, микротитровальные планшеты или материалы, состоящие из частиц, такие как, например, органические или неорганические наночастицы, частицы металлов или другие, также рассматриваются в качестве твердой фазы в соответствии с изобретением.

В соответствии с изобретением активные соединения или молекулы активных соединений в соответствии с Законом о лекарственных средствах Германии представляют собой вещества, которые предназначены для применения в качестве фармацевтически активных компонентов для приготовления лекарственных средств или становятся фармацевтически активными компонентами при использовании для приготовления лекарственных средств (Законом о лекарственных средствах Германии § 4 (19)). Активные соединения обычно вызываются специфический эффект в организме. Активное соединение в соответствии с изобретением обычно представляет собой фармацевтически активную молекулу или лекарственное средство, такое как, например, иммуносупрессанты, например азатиоприн, микофенолатмофетил, циклоспорин, такролимус, сиролимус, финголимод или триптолид, цитостатики, например блеомицин, дактиномицин, митомицин, даунорубицин, доксорубицин, эпирубицин, идарубицин, митоксантрон, доксофлуридин, цисплатин, карбоплатин, оксалиплатин, сатраплатин, камптотецин, топтекан, иринотекан, амсакрин, этопозид, тенипозид, циклофосфамид, трофосфамид, мелфалан, хлорамбуцил, эстрамустин, бусульфан, хлорамбуцил, хлорметин, треосульфан, кармустин, ломустин, нимустин, прокарбазин, стрептозоцин, дакарбазин, ифосфамид, темозоломид, тиотепа, винорелбин, винкристин, винбластин, виндезин, паклитаксел, доцетаксел, метотрексат, пеметрексед, ралтитрексед, фторурацил, капецитабин, цитозинарабинозид, гемцитабин, тиогуанин, пентостатин, меркаптопурин, флударабин, калдрибин, гидроксикарбамид, митотан, азацитидин, цитарабин, неларабин, бортезомиб, анагрелид, в частности, ингибиторы протеинкиназы, такие как, например, иматиниб, эрлотиниб, сунитиниб, сорафениб, дазатиниб, лапатиниб или нилотиниб, иммунотерапевтические средства, например цетуксимаб, алемтузумаб и бевацизумаб, противовоспалительные средства, например напроксен, ибупрофен, индометацин, преднизолон, преднизон, гидрокортизон или будесонид, антибиотики, в частности пенициллины, такие как, например, бензилпенициллин, метициллин или амоксициллин, цефалоспорины, такие как, например, цефуроксим, цефотаксим, цефадроксил или цефиксим, ингибиторы β-лактамазы, такие как, например, клавулановая кислота, сульбактам или тазобактам, карбапенемы, такие как, например, имипенем или меропенем, монобактамы, такие как, например, азтреонам, тетрациклины, такие как, например, тетрациклин, хлортетрациклин, окситетрациклин, доксициклин, миноциклин или тигециклин, макролидные антибиотики, такие как, например, эритромицин А, гликопептидные антибиотики, такие как, например, ванкомицин, ендиины, такие как, например, калихеамицин, вирусостатики, например ацикловир, валацикловир, ганцикловир, валганцикловир, пенцикловир, фамцикловир, бривудин, цидофовир, фоскарнет, идоксуридин или тромантадин, противогипертонические средства, в частности ингибиторы АСЕ, такие как, например, беназеприл, каптоприл, цилазаприл, эналаприл, фозиноприл, лизиноприл, периндоприл, хинаприл, рамиприл, трандолаприл или зофеноприл, сартаны, такие как, например, лозартан, балсартан, ирбесартан, кандесартан, эпросартан, олмесартан или телмисартан, ингибиторы ренина, такие как, например, алискирен, и β-блокаторы, такие как, например, пропранолол, пиндолол, соталол, бопиндолол, атенолол, бисопролол, целипролол, эсмолол, метопролол, небиволол, окспренолол, карведилол или лабеталол, средства, способствующие выведению мочевой кислоты, например пробенецид или бензбромарон, или мочегонные средства, например ацетазоламид, фуросемид, торасемид, буметанид, пиретанид, азосемид, этакриновая кислота, этозолин, гидрохлоротиазид, бензтиазид, хлортиазид, хлорталидон, индапамид, мефрусид, металозон, клопамид, ксипамид, гидрофлуметиазид, метиклотиазид, политиазид, амилорид, триамтерен, спиронолактон, капренон, эплеренон или спиронолактон.

Другие противоопухолевые средства, например средства, которые эффективны по отношению к пролиферирующим клеткам, также представляют собой активные соединения в соответствии с изобретением. Иллюстративные противоопухолевые средства включают цитокины, такие как, например, интер- 6 022137 лейкин-2 (1Ь-2), фактор некроза опухоли или другие, промоторы воспалительной реакции лектинов (селектины), такие как, например, Ь-селектин, Е-селектин, Р-селектин или др., и сходные молекулы.

В соответствии с изобретением одна или несколько идентичных или различных молекул активных соединений могут быть связаны на конъюгат в соответствии с изобретением.

В равной степени, в частности в случае макромолекул, таких как, например, относительно больших молекул активных соединений, например белков, в свою очередь, возможно для двух или больше, предпочтительно 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10, конъюгатов в соответствии с изобретением связываться с одной молекулой активного соединения для предоставления возможности специфического накопления активного соединения в почках. Ковалентное связывание конъюгатов в соответствии с изобретением с макромолекулами обычно также происходит в этом случае. В соответствии с изобретением макромолекулами являются не только большие молекулы, такие как белки, но также любая форма частиц (например, наночастицы), липосом или других систем, с помощью которых активные соединения могут транспортироваться или с которыми могут быть связаны активные соединения.

Дополнительно к молекулам активных соединений, или вместо молекул активных соединений, другие функциональные группы, такие как, например, функциональные группы для диагностических методов или методов визуализации, также могут связываться с конъюгатом в соответствии с изобретением.

В равной степени фторсодержащие боковые цепи могут быть инкорпорированы в качестве функциональной группы с помощью необязательных спейсеров. Таким образом, накопление соответствующих молекул в почках может быть представлено с помощью ¹⁹Р ядерно-резонансной томографии. Чрезвычайно симметрично упорядоченные атомы фтора, которые имеют одинаковую резонансную частоту, являются чрезвычайно благоприятными в данном случае. Для улучшения ¹⁹Р сигнала можно использовать контрастное вещество, которое обычно используют в ядерной спиновой томографии, такое как, например, галобутрол (МадпстМ®).

Если конъюгат в соответствии с изобретением содержит комплексообразующие вещества, то чрезвычайно благоприятным является интегрирование гадолиния или марганца или другого сильно парамагнитного иона металла, который известен специалисту в данной области техники, с помощью комплексообразующего вещества, расположенного на конъюгате в соответствии с изобретением. Подходящими комплексообразующими веществами в данном случае являются, например, ΌΘΤΆ и ΌΤΡΆ.

Кроме того, комплексообразующие вещества, которые не относятся к группе соединений, несущих карбоксильные группы, могут быть конъюгированы - также необязательно с помощью спейсеров. Примерами являются гидроксихинолин, тиомочевина, гуанидин, дитиокарбамат, гидроксамовая кислота, амид оксим, аминофосфорная кислота, (циклические) полиамино, меркапто, 1,3-дикарбонил и краунэфирные радикалы с различными металлами, имеющими в некоторых случаях очень специфические активности по отношению к ионам.

Функциональные структуры для специфического нацеливания на клетки, такие как, например, антитела, фрагменты антител или аптамеры, также могут быть связаны с конъюгатом в соответствии с изобретением. Также могут быть связаны флуоресцентные красители или интерлейкины, такие как 1Ь-2.

Пептидно-связанный в соответствии с изобретением обозначает, что -ΝΗ-СО- связь присутствует между двумя мономерными звеньями, также как и присутствует в пептидах или белках между двумя аминокислотами в качестве мономерных звеньев. Это обозначает, что два мономерных звена связаны таким образом, что -ΝΗ группа одного мономера связана с -С=О группой другого мономера. При этом соответственно образуется следующая связанная структура:

М-Ж-СО-М-Ж-СО-М-Ж-СО-М, где М представляет собой часть мономера, которая не задействована в связывании.

Конъюгат согласно настоящему изобретению состоит по меньшей мере из двух ковалентно связанных частей - соединения, несущего карбоксильные группы, и олигомера. В предпочтительном варианте осуществления конъюгат содержит олигомер, одно или несколько соединений, несущих карбоксильные группы, и одно или несколько молекул активных соединений. В особенно предпочтительном варианте осуществления конъюгат в соответствии с изобретением содержит множество, то есть, например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10, одинаковых или различных соединений, несущих карбоксильные группы, и множество, то есть, например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10, одинаковых или различных молекул активных соединений.

Было обнаружено, что конъюгаты в соответствии с изобретением накапливаются особенно специфически в почках, если соединение, несущее карбоксильные группы, ковалентно связано с от 10 до 80% мономерных звеньев.

В соответствии с изобретением комплексообразующее вещество представляет собой любую молекулярную структуру, которая способна образовывать комплексы с ионами металлов, то есть образовывать металл-хелатный комплекс с ионами металлов. Комплексообразующие вещества часто также известны как хелатообразующие вещества. Примерами комплексообразующих веществ, которые пригодны в соответствии с изобретением, являются ΕΌΤΆ, NОΤΑ, ТЕТА, иминодиуксусная кислота, ЭОТА или ΌΤΡΑ. Особенно предпочтительными в соответствии с изобретением являются комплексообразующие вещества, которые связывают ионы металлов, которые могут быть определены в 8РЕСТ, ΡΕΤ, СТ или

- 7 022137 ⁷²Λδ, ⁷²8е, ⁹⁷Ки, ²¹²РЬ, ⁶⁴Си, ⁶⁷Си, ¹⁸⁸Ке, ¹⁸⁶Ке, ¹⁹⁸Аи и/или Ад.

МКТ измерениях. Предпочтительные комплексообразующие вещества представляют собой ИОТА или ИТРА или их производные. В соответствии с изобретением комплексообразующие вещества представляют собой как молекулы, с которыми ионы металлов уже связаны, так и молекулы, с которыми ионы металлов могут быть связаны, но еще не связаны на данной стадии.

Ионы металлов, которые пригодны в соответствии с изобретением для связывания с комплексообразующими веществами, представляют собой, например, Ре²⁺, Ре³⁺, Си²⁺, Сг³⁴, Об³⁴, Еи³⁺, Иу³⁺, Ьа³⁺, УЬ³⁺ и/или Мп²' или также ионы радиоактивных изотопов, такие как гамма-излучатели, излучатели позитронов, излучатели оже-электронов, альфа-излучатели и источники флуоресценции, например, ⁵¹Сг, ⁶⁷Са, ⁶⁸Оа, ¹¹¹1п, ^99тТс, ¹⁴⁰Ьа, ¹⁷⁵УЬ, Ύιιι. ¹⁶⁶Но, ⁸⁸Υ, ⁹⁰Υ, ¹⁴⁹Рт, ¹⁷⁷Ьи, ⁴⁷8с, ¹⁴²Рг, ¹⁵⁹ Об, ²¹²Βί, “ ¹⁰⁹Рб, ¹⁰⁵Кй, ^101тКй, ¹¹⁹8Ь, ¹²⁸Ва, ¹⁹⁷Н§, ²¹

Примерами подходящих ионов металлов и их соответствующего применения являются ¹¹¹1п для 8РЕСТ;

⁶⁸Оа для РЕТ;

⁹⁰Υ для терапии;

Об, Ей, Мп для МКТ;

тантал, вольфрам или др. элементы с большим атомным номером для компьютерной томографии.

В соответствии с изобретением термин олигомер применяется к части конъюгата, которая состоит из олигомера, который состоит из пептидно-связанных мономерных звеньев. Олигомер обычно состоит из 5-1000, предпочтительно от 8 до 100, особенно предпочтительно от 10 до 50, мономерных звеньев. В особенно предпочтительном варианте осуществления олигомер состоит из ε-полилизина, который имеет в диапазоне 8-100 мономерных звеньев, особенно предпочтительно от 10 до 50 мономерных звеньев.

Тем не менее, в других вариантах осуществления изобретения вплоть до 50% мономерных звеньев ε-лизина могут быть заменены другими мономерными звеньями и/или вплоть до 50% мономерных звеньев ε-лизина могут быть дериватизированы или модифицированы путем включения других функциональных структур. Аналогичным образом, олигомер, который состоит из пептидно-связанных мономерных звеньев, может содержать множество последовательных мономерных звеньев, которые не являются мономерными звеньями ε-лизина, если он содержит по меньшей мере 10 последовательных мономерных звеньев, которые состоят по меньшей мере из 70% (исходя из количества мономерных звеньев), предпочтительно по меньшей мере из 80% звеньев ε-лизина. Это имеет место, например, если цепь из 10-20 мономерных звеньев (например, содержащих аминокислоты), в которой не присутствует мономерное звено ε-лизина, и, в дальнейшем, например, десять мономерных звеньев, из которых восемь представляют собой мономерные звенья ε-лизина и два состоят из других аминокислот, расположены на одном конце олигомера.

В соответствии с изобретением термин мономерное звено применяется к любой части олигомера, которая пептидно связана по меньшей мере с одной следующей частью олигомера. Концевые мономерные звенья в данном случае обычно только пептидно связаны с одним следующим мономерным звеном. Мономерные звенья в середине олигомера пептидно связаны с двумя следующими мономерными звеньями. Мономерные звенья, которые пептидно связаны с тремя следующими мономерами, расположены в точках ветвления. В случае мономерных звеньев в середине олигомера мономерное звено обычно обеспечивает с одной стороны -ΝΗ часть пептидной связи, а с другой стороны -СО часть.

В соответствии с изобретением мономерное звено ε-лизина представляет собой звено ε-лизина, звено орнитина, звено 2,3-диаминопропионовой кислоты или звено 2,4-диаминомасляной кислоты. Мономерное звено ε-лизина предпочтительно состоит из звена ε-лизина. Термин звено в настоящей заявке в каждом случае предназначен для обозначения того, что представляет собой звено или мономер в пептидно-связанном олигомере и не представляет собой свободную аминокислоту.

Звено ε-лизина имеет следующую химическую структуру:

Мономерные звенья ε-лизина могут быть представлены в Ό или Ь форме в олигомере в соответствии с изобретением.

Типичные другие мономерные звенья, которые может содержать олигомер в соответствии с изобретением, кроме мономерных звеньев ε-лизина, представляют собой природные или синтетические аминокислоты, такие как, в частности, аланин, β-аланин, глицин, глутаминовая кислота, аспарагиновая кислота или аргинин.

Дальнейшими типичными мономерными звеньями являются мономерные звенья, имеющие спейсерную функцию формулы

-ΝΗ-ЗР-СО- I

- 8 022137 где 8Р может представлять собой С1-С20 алкиленовую, алкениленовую или алкиниленовую группу, в которой одна или несколько несмежных метиленовых групп могут быть заменены -О-, -δ-, -δ(Θ)-, -δθ2-, -δθ2θ-, -С(О)-, -С(О)О-, -СН2-, -СНК'-, -СК'2, -СК'=СН-, -СН-СК'-, -СН=СН-, -СК'=СК'-, -С^С-, -Ν+Κ'₂-, -Р(О)К'О-, -С(О)ИК'-, -δΟ₂ΝΚ'-, -ОР(О)К'О-, -Ρ(Ο)(ΝΚ'₂)ΝΚ'-, -ΡΚ'₂=Ν- или -Р(О)К'-, где К' = С₁-С₆-алкил, С₃-С₇-циклоалкил, незамещенный или замещенный фенил. δΡ предпочтительно представляет собой линейные С3-С10-алкильные цепи, линейные С3-С10 цепи, имеющие одну или несколько алкиленовых групп, этиленгликольные цепи, имеющие два-десять этиленгликольных звеньев или олигопептидные цепи.

Другими типичными мономерными звеньями являются те, которые содержат функциональные структуры для связывания спейсеров, активных соединений, комплексообразующих веществ, пептидов, красителей, солюбилизаторов, защитных групп, твердой фазы или аналогичных компонентов или с которыми компоненты, такие как активные соединения, комплексообразующие вещества, пептиды, солюбилизаторы, защитные группы, твердая фаза или красители уже связаны непосредственно или с помощью спейсера. Мономерные звенья этого типа предпочтительно имеют по меньшей мере одну из следующих функциональных групп -Ж, -δΚ -ОН, -На1 (например, -С1, -Вг, -I), -алкин, -ΝΟδ, -ЫСО, ^О₂С1, -азид, -карбонат, -альдегид, -эпоксид, -СООН, -СООК, где К в этом случае предпочтительно представляет собой галоген или предпочтительно активатор, то есть полезную уходящую группу, такую как, например, Ν-гидроксисукцинимид, пентафторфенил или паранитрофенил, или связаны с активными соединениями, комплексообразующими веществами, пептидами, красителями или сходными соединениями с помощью функциональной группы этого типа.

Кроме того, олигомер в соответствии с изобретением может содержать мономерные звенья εлизина, которые дериватизированы. Существуют мономерные звенья, в которых дополнительные функциональные структуры (Р1/Р2) соответственно связаны с ΝΉ группой и/или аминогруппой. Р1 и Р2 в данном случае могут представлять собой независимо друг от друга ацетильную группу или также активные соединения, комплексообразующие вещества, пептиды, красители, солюбилизаторы, защитные группы, твердую фазу или аналогичные соединения, связанные непосредственно или с помощью спейсера. Соответствующее звено ε-лизина, в которое внедрена деиватизация с группами Р1 и/или Р2, представлено на формуле II

Для специалиста в данной области техники является очевидным, что формулы, представленные выше, описывают мономерные звенья в середине олигомерной цепи и что концевые мономерные звенья, в зависимости от того, расположены они на С- или Ν-концевой области, в каждом случае несут СООН или СООК группу вместо -СО- или несут ΝΉ₂, №ГН, ΝΡ1Κ, ΝΉΚ или ΝΚ₂ группу вместо-ΝΉ- или -ΝΡ1-, где К типично представляет собой Н, линейный или разветвленный С1-С6 алкил, спейсерную функцию для связывания активных соединений, комплексообразующих веществ, пептидов, красителей, солюбилизаторов, защитных групп, твердой фазы или сходных компонентов, или активного соединения, комплексообразующего вещества, пептида, красителя, солюбилизатора, защитной группы, твердой фазы или сходного компонента, связанного непосредственно или с помощью спейсера.

Таким образом, производные ε-полилизина представляют собой олигомеры в соответствии с изобретением, которые образованы не только из звеньев ε-лизина, но вместо этого в которых встречаются другие мономерные звенья ε-лизина, такие как, например, звенья орнитина, и/или в которых в соответствии с характеристиками в соответствии с изобретением некоторые мономерные звенья образованы, например, из других аминокислот чем ε-лизин, орнитина, 2,3-диаминопропионовой кислоты или 2,4диаминомасляной кислоты и/или из соединений формулы I.

Настоящее изобретение основывается на неожиданном эффекте, что конъюгаты ε-полилизина и производные ε-полилизина с соединениями, несущими карбоксильные группы, накапливаются практически исключительно в почках, например, после инъекции в кровоток или после подкожной инъекции. Соответственно конъюгаты в соответствии с изобретением пригодны для применения в терапевтических методах для лечения почек, в методах визуализации для отображения почки и для нацеливания на почки.

Соединения в соответствии с изобретением предпочтительно приготавливают, используя в качестве исходного соединения ε-полилизин, путем конъюгирования соответствующих соединений, несущих карбоксильные группы, и предпочтительно одной или нескольких молекул активных соединений или других функциональных структур, необязательно после соответствующей активации.

ε-Полилизин представляет собой гомополимер аминокислоты Ь-лизин. ε-Полилизин продуцируется бактериями δΙίΌρΙοιηνοοδ а1Ьи1и8 в аэробном процессе. Этот природно продуцируемый ε-полилизин содержит приблизительно 30 Ь-лизиновых звеньев. ε-Полилизин разрешен в Японии в качестве антимик- 9 022137 робного консерванта для пищевых продуктов. В отличие от α-полилизина ε-полилизин ферментативно не расщепляется протеазами.

Любой тип ε-полилизина может применяться в соответствии с изобретением, то есть, например, εполилизин, продуцируемый в природе, продуцируемый с помощью генной инженерии или продуцируемый синтетически. Химический синтез ε-полилизина осуществляют в соответствии с общепринятым пептидным синтезом, используя соответствующе защищенный Ь-лизин, таким образом, что связывание пептида осуществляется с помощью ε-аминогруппы боковой цепи.

Для приготовления соединений в соответствии с изобретением можно применять ε-полилизин, имеющий определенную длину цепи (например, синтетически продуцируемый ε-полилизин или очищенный природный ε-полилизин), или также смесь ε-полилизина с различной длиной цепи, как получено, например, в природе из 81тер1отусе8 а1Ьи1и8. В соответствии с изобретением как ε-полилизин, имеющий определенную длину цепи, так и смеси ε-полилизина с различной длиной цепи или смеси, содержащие различные производные ε-полилизина, таким образом охватываются термином ε-полилизин и производные ε-полилизина.

Кроме того, было обнаружено, что не только конъюгаты ε-полилизина, но также и производные конъюгатов ε-полилизина проявляют превосходное накопление в почках.

Типичные конъюгаты, которые пригодны в соответствии с изобретением, также могут быть представлены формулой III

А-(Еуз)_п-Е III в которой η представляет собой число в интервале от 5 до 1000,

А представляет собой одну или несколько заряженных или незаряженных концевых групп, связанных непосредственно или с помощью спейсера, или дендритную функциональную структуру, например водород, -СК, -ОК', -ΝΚ'₂, -Р(О)К'₂, -Р(О)(ОК')₂, -Ρ(Θ)(ΝΚ'₂)₂, -С(О)К', -С(О)ОК', -С(О)ОН, -С(О)ЫК'₂, -8О_;\К', -С(О)На1, 8О₂ОН, -8О₂На1, -КО₂, -На1, или одну или несколько групп, связанных непосредственно или с помощью спейсера, или дендритную функциональную структуру, такие как, например, соединения, несущие карбоксильные группы, молекулы активных соединений, комплексообразующие вещества, красители, одна или несколько одинаковых или различных аминокислот, пептидов, белков, солюбилизаторов, защитных групп или твердую фазу,

Е представляет собой одну или несколько заряженных или незаряженных концевых групп, связанных непосредственно или с помощью спейсера, или дендритную функциональную структуру, например водород, -СК, -ОК', -ΝΉ₂, ННК', -ΝΚ'2, -Р(О)К'₂, -Р(О)(ОК)₂, -Р(О)(КК'₂)₂, -С(О)К', -С(О)ОК', -С(О)ОН, -С(О)КК'₂, -8О₂НК'₂, -С(О)На1, 8О₂ОН, -8О₂На1, -ЫО₂, -На1, или одну или несколько групп, связанных непосредственно или с помощью спейсера, или дендритную функциональную структуру, такие как, например, соединения, несущие карбоксильные группы, молекулы активных соединений, комплексообразующие вещества, красители, одна или несколько одинаковых или различных аминокислот, пептидов, белков, солюбилизаторов, защитных групп или твердую фазу,

Ьу8 представляет собой независимо друг от друга мономерное звено ε-лизина, соответствующее определению, представленному выше, мономерное звено в соответствии с формулой I или II, группу в соответствии с формулой IV (НН-М-СО) IV, где М может представлять независимо друг от друга -О-, -δ-, -8(О)-, -8О₂-, -8О₂О-, -С(О)-, -С(О)О-, -СН₂-, -СНК'-, -СК'₂, -СК'=СН-, -СН-СК'-, -СН=СН-, -СК'=СК'-, -С С-. -Ν+Кг-, -Р(О)К'О-, -С(О)КК'-, -8О₂НК'-, -ОР(О)К'О-, -Р(О)(КК'₂)КК'-, -РК'₂=Ы- или -Р(О)К'-, или неразветвленный или разветвленный алкил, имеющий 1 -20 атомов углерода, неразветвленный или разветвленный алкенил, имеющий 2-20 атомов углерода и одну или несколько двойных связей, неразветвленный или разветвленный алкинил, имеющий 2-20 атомов углерода и одну или несколько тройных связей, насыщенный, частично или полностью ненасыщенный циклоалкил, имеющий 3 -7 атомов углерода, который может быть замещен алкильными группами, имеющими 1-6 атомов углерода, где одна или несколько несмежных метиленовых групп могут быть заменены -О- или -δ- и смежные метиленовые группы могут быть заменены алкенильными или алкинильными группами, где одна или несколько метиленовых групп могут быть заменены независимо друг от друга -О-, -δ-, -8(О)-, -8О₂-, -8О2О-, -С(О)-, -С(О)О-, -СН2-, -СНК'-, -СК'2-, -СК'=СН-, -СН-СК'-, -СН=СН-, -СК'=СК'-, -С С-, -Ν+Кг-, -Р(О)К'О-, -С(О)КК'-, -8О₂КК'-, -ОР(О)К'О-, -Р(О)(КК'₂)КК'-, -РК'₂=Ы- или -Р(О)К'-, и одна или несколько метиленовых групп, представленных в М, могут быть моно- или дизамещены независимо друг от друга с помощью К, где

К' представляет собой линейный или разветвленный С₁-С₈-алкил, С₃-С₇-циклоалкил, незамещенный или замещенный фенил, и

- 10 022137

К представляет собой линейный или разветвленный С1-С₈-алкил, С₃-С--циклоалкил. незамещенный или замещенный фенил, или -СЫ, -ОК', -ЫН₂, ЫНК', -ΝΚ'₂, -Р(О)К'₂, -Р(О)(ОК')₂, -Р(О)(ЫК'₂)₂, -С(О)К', -С(О)ОК', -С(О)ОН, -С(О)ЫК'₂, -8О₂ЫК'₂, -С(О)На1, 8О₂ОН, -8О₂На1, -ЫО₂, -На1 и

На1 = -Р, -С1, -Вг или -I, где соединения, несущие карбоксильные группы, активные соединения, комплексообразующие вещества, пептиды, солюбилизаторы, защитные группы, твердая фаза, красители или аналогичные компоненты могут быть связаны непосредственно или с помощью спейсера со всеми функциональными группами, которые пригодны для конъюгации (например, ЫН, ЫН₂, СООН, ОН, -8Н, -На1 (например, -С1, -Вг, -I), -алкин, -азид, -альдегид) мономерных звеньев Ьу8, независимо друг от друга, при условии, что соединение в соответствии с изобретением содержит по меньшей мере одно соединение, несущее карбоксильные группы, и либо больше чем 50% мономерных звеньев (исходя из количества мономерных звеньев) представляют собой мономерные звенья ε-лизина или по меньшей мере 70% (исходя из количества мономерных звеньев) по меньшей мере из 10 последовательных мономерных звеньев представляют собой мономерные звенья ε-лизина.

В предпочтительном варианте осуществления соединения в соответствии с изобретением А представляет собой

-С(О)ОК', -С(О)ОН, -С(О)ЫК'₂ или -С(О)На1, или один или несколько компонентов, связанных непосредственно или с помощью спейсера, или дендритную функциональную структуру, такие как соединения, несущие карбоксильные группы, активные соединения, комплексообразующие вещества, пептиды, солюбилизаторы, защитные группы, твердая фаза или красители.

А особенно предпочтительно представляет собой -ОН, -ОСН₃, -ОСН₂СН₃ или одну или несколько молекул активных соединений, связанных непосредственно или с помощью спейсера, или дендритную функциональную структуру.

В предпочтительном варианте осуществления Е представляет собой

-Н, -СН3, -СН2СН3 или один или несколько компонентов, связанных непосредственно или с помощью спейсера, или дендритную функциональную структуру, такие как соединения, несущие карбоксильные группы, активные соединения, комплексообразующие вещества, пептиды, солюбилизаторы, защитные группы, твердая фаза или красители.

Е особенно предпочтительно представляет собой одну или несколько молекул активных соединений, связанных непосредственно или с помощью спейсера, или дендритную функциональную структуру.

Если соединение в соответствии с изобретением содержит одну или несколько групп Ьу8, которые содержат ЫН₂ или СООН группу, другие мономерные звенья могут быть связаны посредством ее с помощью пептидной связи, и образуются однократно или многократно разветвленные соединения. Соединения в соответствии с изобретением предпочтительно являются неразветвленными.

п предпочтительно представляет собой число в интервале от 8 до 100, особенно предпочтительно в интервале от 10 до 50.

Конъюгаты в соответствии с изобретением предпочтительно содержат не только одно, но взамен множество соединений, несущих карбоксильные группы. Они могут быть связаны непосредственно или с помощью спейсера с карбоксил- и/или аминоконцевой областью олигомера и/или с функциональной группой мономерных звеньев, которая пригодна для конъюгирования (например, ЫН, -ЫН₂, -СООН, -ОН, -8Н, -На1 (например, -С1, -Вг, -I), -алкин, -азид, -альдегид).

В предпочтительном варианте осуществления связывание соединений, несущих карбоксильные группы, происходит посредством аминогрупп мономерных звеньев, например свободной аминогруппы εлизина.

Конъюгат в соответствии с изобретением будет предпочтительно содержать по меньшей мере одно соединение, несущее карбоксильные группы, на 10 мономерных звеньев, особенно предпочтительно в интервале от 3 до 6 соединений, несущих карбоксильные группы, на 10 мономерных звеньев. Тем не менее в равной степени также представляется возможным для одного соединения, несущего карбоксильные группы, связываться с более чем 9 из 10 мономерных звеньев или со всеми мономерными звеньями. Оптимальное количество соединений, несущих карбоксильные группы, на 10 мономерных звеньев зависит от типа соединения, несущего карбоксильные группы, и типа мономерных звеньев. Вышеуказанное предпочтительное количество соединений, несущих карбоксильные группы, на мономерное звено применяется, в частности, для олигомеров, которые построены полностью из мономерных звеньев ε-лизина. Расположение соединений, несущих карбоксильные группы, в конъюгате в соответствии с изобретением может быть случайным, что обозначает, что, например, первые мономерные звенья содержат -ЫН₂, за которыми следует мономерное звено с соединением, несущим карбоксильные группы, затем снова одно, содержащее -ЫН₂, затем два раза мономерное звено, которое несет соединение, несущее карбоксильные

- 11 022137 группы, затем снова два раза одно, содержащее -ΝΗ₂, и т.д.

В равной степени расположение комплексообразующих веществ в соединении в соответствии с изобретением также может быть упорядочено таким образом, что, например, каждое второе мономерное звено имеет соединение, несущее карбоксильные группы, связанное с ним. Упорядочивание также может осуществляться таким образом, что все мономерные звенья в одном конце конъюгата в соответствии с изобретением имеют конъюгированное соединение, несущее карбоксильные группы, тогда как оставшиеся мономеры содержат свободные ΝΗ₂ функциональные группы.

Соединения, несущие карбоксильные группы, предпочтительно случайно распределены в конъюгатах в соответствии с изобретением.

Конъюгаты в соответствии с изобретением могут быть получены, в частности, с помощью различных процессов, известных специалисту в данной области техники в сфере пептидного синтеза.

1. Синтез с использованием в качестве исходного соединения ε-полилизина

В данной заявке синтетический или природный ε-полилизин с одинаковой или различной длиной цепи обычно подвергают реакции с соответствующими соединениями, несущими карбоксильные группы, в растворе. Для этого, например, сначала соединения, несущие карбоксильные группы, могут быть активированы. Это можно осуществлять, например, путем активации одной или нескольких их карбоксильных групп путем превращения их в активный сложный эфир или хлорангидрид. После этого осуществляют реакцию с ε-полилизином, где конъюгирование предпочтительно осуществляют на свободных аминогруппах. Альтернативно, например, одна или несколько карбоксильных групп соединения, несущего карбоксильные группы, могут быть активированы, используя связующий реагент, такой как дициклогексилкарбодиимид или НАТИ, и реагировать с ε-полилизином, где конъюгирование предпочтительно осуществляют на свободных аминогруппах. Условия реакции для реакций этого типа хорошо известны специалисту в данной области техники. Подходящими растворителями являются, например, вода, ацетонитрил, ДМСО, ДМФА, диоксан, ТГФ, метанол или смеси двух или более из указанных растворителей.

2. Твердофазный синтез

В частности, если конъюгат содержит одно или несколько мономерных звеньев, которые не состоят из ε-лизина или которые состоят из дериватизированных мономерных звеньев ε-лизина, то может быть благоприятным твердофазный синтез для приготовления конъюгатов в соответствии с изобретением. Этот твердофазный синтез осуществляют соответственно общепринятому пептидному синтезу (например, Ртос пептидному синтезу или Вое пептидному синтезу). Твердофазные синтезы этого типа известны специалистам в данной области техники (подходящими пособиями для пептидного синтеза являются Зойб-РЬаке Рерйбе 8уп1Ье515: 289 (МеШобк ίη Еп/уто1оду). 81бпеу Р. Со1о\У1ск (автор), Огедд В. Р1е1бк (издатель), МеМп I. §1топ (издатель) Асабеплс Ргекк 1пс (ноябрь 1997 г.) или Ртос Зойб-РЬаке РерЕбе 8уп1йе515: А Ргас11са1 АрргоасЬ, СЬап (автор), С. СЬап (издатель), Ре1ег Ό. \УЬЬе (издатель) ОхГогб Ищу Рг (2 марта 2000 г.)). Мономеры, применяемые в каждом случае, выбирают при этом таким образом, чтобы образовывался олигомер или конъюгат в соответствии с настоящим изобретением. В зависимости от типа мономерного звена синтез можно осуществлять, используя дериватизированное мономерное звено непосредственно или мономерное звено, которое сначала защищают в сайте, предназначенном для дериватизации. Если синтез олигомера завершен, то финальную дериватизацию с соединениями, несущими карбоксильные группы, активными соединениями и т.д., после этого можно осуществлять либо на твердой фазе или после отщепления от твердой фазы в растворе.

Связывание соединений, несущих карбоксильные группы, в этом случае предпочтительно осуществлять с конечным олигомером, то есть либо еще на твердой фазе, если твердофазный синтез олигомера завершен, или после того, как последний был расщеплен в растворе.

Если соединение, несущее карбоксильные группы, или активное соединение или аналогичные компоненты (способ описан ниже в качестве примера для комплексообразующего вещества) связывается, например, с Ν-концевой областью олигомера, олигомеры типично формируются с аминоконцевой защитной группой, такой как, например, Ртос. Если комплексообразующее вещество способно выдерживать условия, используемые для отщепления олигомера от смолы при синтезе и для снятия защиты боковых цепей, Ртос может быть отщеплен от Ν конца полного связанного со смолой полипептида, что предоставляет возможность комплексообразующему веществу связываться со свободным Ν-концевым амином. В таких случаях, комплексообразующее вещество обычно активируется с помощью процессов, которые, в целом, известны в данной области, для получения активного сложного эфира или активной карбонатной группы, которая эффективна для образования амида или карбамата, связанного с аминогруппой олигомера. Это, очевидно, также возможно с использованием различной химии связывания.

Для минимизации побочных реакций в данном случае гуанидино- и амидиногруппы могут блокироваться, используя общепринятые защитные группы, такие как, например, карбобензилоксигруппы (СВ2), ди-1-ВОС, РМС, РЬГ, Ν-ΝΟ₂ и др.

Реакции сочетания осуществляют с помощью известных процессов сочетания в растворителях, таких как, например, Ν,Ν-диметилформамид (ДМФА), Ν-метилпирролидон, дихлорметан и/или вода. Иллюстративные связующие реагенты включают гексафторфосфат О-бензотриазолилокситетраметилу- 12 022137 рония (НАТи), дициклогексилкарбодиимид, бромид бром-трис-(пирролидино)фосфония (РуВгоР) и др. Могут присутствовать другие реагенты, такие как, например, Ν,Ν-диметиламинопиридин (ΌΜΑΡ), 4пирролидинопиридин, Ν-гидроксисукцинимид или Ν-гидроксибензотриазол.

Соответственно связывание соединений, несущих карбоксильные группы, активные соединения, комплексообразующие вещества или аналогичные компоненты также можно осуществлять с аминогруппами неконцевых мономерных звеньев ε-лизина.

Если молекула содержит комплексообразующие вещества, то ионы металлов могут образовывать комплексы с помощью известных методов.

Настоящее изобретение дополнительно относится к применению конъюгатов в соответствии с изобретением для приготовления фармацевтической композиции или лекарственного средства, в частности терапевтической композиции, и/или композиции, усиливающей визуализацию (например, контрастное вещество), и/или радиоактивная изотопная метка для ядерно-медицинской визуализации.

Настоящее изобретение дополнительно относится к конъюгатам в соответствии с изобретением, в которых одно или несколько активных соединений предпочтительно ковалентно связаны, и/или их фармацевтически приемлемым солям и стереоизомерам, включая их смеси во всех соотношениях, и необязательно наполнители и/или вспомогательные вещества в качестве лекарственного средства;

для применения в качестве лекарственного средства;

в качестве активного соединения или активного компонента в лекарственном средстве;

в качестве диагностического средства;

для применения в качестве диагностического средства;

для применения для нацеливания на почку;

и, в частности, в качестве лекарственного средства для лечения заболеваний почек.

Терапевтическая композиция обычно состоит по меньшей мере из активного соединения - в данном случае конъюгата в соответствии с изобретением с активным соединением, предпочтительно связанного ковалентно, и одного или нескольких подходящих растворителей и/или наполнителей, которые позволяют осуществить введение терапевтической композиции.

Диагностическая композиция или диагностическое средство служит в качестве усилителя изображения или визуализирующей композиции в диагностических методах. Диагностическое средство обычно состоит по меньшей мере из источника сигнала, то есть визуализирующего и/или усиливающего изображение компонента - в данном случае конъюгата в соответствии с изобретением, где в данном случае по меньшей мере одно соединение, несущее карбоксильные группы, в конъюгате предпочтительно представляет собой комплексообразующее вещество - и один или больше подходящих растворителей и/или наполнителей, которые предоставляют возможность введения диагностической композиции.

Для диагностических показаний конъюгат в соответствии с изобретением предпочтительно служит в качестве источника сигнала в усиливающим изображение контрастном веществе, что предоставляет возможность обнаруживать это вещество с помощью ядерно-медицинских и/или радиологических методов, таких как БРЕСТ. РЕТ, ультразвук, и/или также с помощью ядерно-резонансной томографии, компьютерной томографии и методов оптической визуализации (инфракрасная визуализация). Способы обнаружения и применения усиливающих изображение контрастных средств известны специалисту в данной области техники. Примерами подходящих применений являются диагностика злокачественных заболеваний, неврологических проблем, проверка ответа на терапию, проверка степени поражения почки в случае, например, аутоиммунного заболевания и мониторинг генных терапий, а также распознавание клеточных изменений.

Изобретение также относится к лекарственным средствам или фармацевтическим композициям, содержащим по меньшей мере один конъюгат в соответствии с изобретением и/или его фармацевтически приемлемые соли и стереоизомеры, включая их смеси во всех соотношениях, и необязательно наполнители и/или вспомогательные вещества.

Фармацевтические композиции или лекарственные средства могут быть адаптированы для введения с помощью любого подходящего метода, например, путем орального (включая буккальное или подъязычное), ректального, назального, местного (включая буккальное, подъязычное или трансдермальное), вагинального или парентерального (включая подкожное, внутримышечное, внутривенное или внутрикожное) методов. Такие препараты могут быть приготовлены с использованием всех процессов, известных в области фармацевтики, например, путем объединения активного (ых) компонента (ов) или вспомогательного (ых) компонента (ов).

Фармацевтические препараты, адаптированные для перорального введения, можно вводить в виде отдельных единиц, таких как, например, капсулы или таблетки; порошки или гранулы; растворы или суспензии в водных или неводных жидкостях; пищевые пены или пенообразных пищевых продуктов; или жидких эмульсий масло-в-воде или жидких эмульсий вода-в-масле.

Таким образом, например, в случае перорального введения в форме таблетки или капсулы активный компонент можно комбинировать с пероральным, нетоксичным и фармацевтически приемлемым инертным наполнителем, таким как, например, этанол, глицерин, вода и др. Порошки приготавливают путем

- 13 022137 измельчения соединения до подходящего мелкого размера и смешивания их с фармацевтическим наполнителем, измельченным аналогичным образом, таким как, например, пищевой углевод, такой как, например, крахмал или маннит. Также может присутствовать ароматизатор, консервант, диспергирующее вещество и краситель.

Капсулы получают путем приготовления порошкообразной смеси, как описано выше, и заполнения ею формованных желатиновых оболочек. Скользящие вещества и смазывающие вещества, такие как, например, сильно диспергированная кремниевая кислота, тальк, стеарат магния, стеарат кальция или полиэтиленгликоль в твердой форме, можно добавлять к порошкообразной смеси перед заполнением капсул. Агент, вызывающий дезинтеграцию, или солюбилизатор, такой как, например, агар-агар, карбонат кальция или карбонат натрия, также можно добавлять для улучшения доступности лекарственного средства после приема капсул.

Дополнительно, если это является желательным или необходимым, подходящие связующие, смазывающие вещества и агенты, вызывающие дезинтеграцию, а также красители, также можно включать в смесь. Подходящие связующие включают крахмал, желатин, природные сахара, такие как, например, глюкоза или β-лактоза, подсластители, приготовленные из кукурузы, природные и синтетические каучуки, такие как, например, гуммиарабик, трагакантовая камедь или альгинат натрия, карбоксиметилцеллюлоза, полиэтиленгликоль, воски и др. Смазывающие вещества, используемые в таких дозированных формах, включают олеат натрия, стеарат натрия, стеарат магния, бензоат натрия, ацетат натрия, хлорид натрия и др. Агенты, вызывающие дезинтеграцию, включают, но не ограничиваясь только ими, крахмал, метилцеллюлозу, агар, бентонит, ксантановую камедь и др. Таблетки получают, например, путем приготовления порошкообразной смеси, гранулирования или сухого прессования смеси, добавления смазывающего вещества и агента, вызывающего дезинтеграцию, и прессования целой смеси с получением таблеток. Порошкообразную смеси приготавливают путем смешивания соединения, измельченного подходящим образом, с разбавителем или основанием, как описано выше, и необязательно со связующим, таким как, например, карбоксиметилцеллюлоза, альгинат, желатин или поливинилпирролидон, замедлитель растворения, такой как, например, парафин, усилитель абсорбции, такой как, например, четвертичная соль, и/или абсорбент, такой как, например, бентонит, каолин или дикальций фосфат. Порошкообразную смесь можно гранулировать путем увлажнения ее со связующим, таким как, например, сироп, крахмальная паста, гуммиарабик или растворы целлюлозы или полимерных материалов, и прессования ее через сито. В качестве альтернативы грануляции порошкообразную смесь можно пропускать через таблетирующую машину, получая куски разной формы, которые распадаются с образованием гранул. Гранулы можно замасливать путем добавления стеариновой кислоты, стеаратной соли, талька или минерального масла для предотвращения прилипания к таблетирующим пресс-формам. После этого замасленную смесь спрессовывают с получением таблеток. Соединения в соответствии с изобретением также можно объединять со свободнотекущим инертным наполнителем и затем спрессовывать непосредственно с получением таблеток без осуществления стадий гранулирования или сухого прессования. Может присутствовать светопроницаемый или прозрачный защитный слой, состоящий из шеллакового герметизирующего слоя, слоя сахара или полимерного материала и глянцевого слоя воска. К этим покрытиям можно добавлять красители для различения различных дозированных единиц.

Пероральные жидкости, такие как, например, растворы, сиропы и эликсиры, могут быть приготовлены в форме дозированных единиц, таким образом, чтобы заданная величина содержала предварительно заданное количество соединения. Сиропы могут быть приготовлены путем растворения соединения в водном растворе с подходящим ароматизатором, тогда как эликсиры приготавливают с использованием нетоксичного спиртового наполнителя. Суспензии могут быть приготовлены путем диспергирования соединения в нетоксичном спиртовом наполнителе. Также можно добавлять солюбилизаторы и эмульсификаторы, такие как, например, этоксилированные изостеариловые спирты и полиоксиэтиленовые простые эфиры сорбита, консерванты, ароматизующие добавки, такие как, например, масло перечной мяты или природные подсластители или сахарин, или другие искусственные подсластители и др.

Препараты лекарственных форм для перорального введения можно, если это является желательным, инкапсулировать в микрокапсулы. Препарат также может быть приготовлены таким образом, чтобы удлинить или замедлить высвобождение, например, путем покрытия или заделывания зернистого материала в полимеры, воски и др.

Конъюгаты в соответствии с изобретением также могут вводиться в форме липосомных систем доставки, таких как, например, небольшие однослойные пузырьки, большие однослойные пузырьки и многослойные пузырьки. Липосомы могут образовываться из различных фосфолипидов, таких как, например, холестерин, стеариламин или фосфатидилхолины.

Конъюгаты в соответствии с изобретением также могут доставляться с использованием моноклональных антител в качестве индивидуальных носителей, с которыми связаны конъюгаты. Конъюгаты также могут связываться с растворимыми полимерами в качестве нацеливающих носителей лекарственных средств. Такие полимеры могут охватывать поливинилпирролидон, сополимер пирана, полигидроксипропилметакриламидофенол, полигидроксиэтиласпартамидофенол или полиэтилен оксид полилизин, замещенный пальмитоильными радикалами. Соединения также могут быть связаны с классом биоразла- 14 022137 гаемых полимеров, которые пригодны для обеспечения контролируемого высвобождения лекарственного средства, например полимолочной кислотой, поли-е-капролактоном, полигидроксимасляной кислотой, полиотроэфирами, полиацеталями, полидигидроксипиранами, полицианоакрилатами и перекрестносшитыми или амфипатическими блок-сополимерами гидрогелей.

Фармацевтические препараты, адаптированные для трансдермального введения, могут вводиться в виде независимых пластырей для длительного, тесного контакта с эпидермисом пациента. Таким образом, например, активный компонент может доставляться из пластыря путем ионофореза (как описано в общем в РЬагтасеиЕса1 КекеагсЬ, 3(6), 318 (1986)).

Фармацевтические соединения, адаптированные для местного введения, могут быть приготовлены в виде мазей, кремов, суспензий, лосьонов, порошков, растворов, паст, гелей, спреев, аэрозолей или масел.

Фармацевтические препараты, адаптированные для ректального введения, могут вводиться в форме суппозиториев или клизм.

Фармацевтические препараты, адаптированные для назального введения, в которых носитель представляет собой твердое вещество, содержащее крупный порошок, имеющий размер частиц, например, в диапазоне 20-500 микрон, которые вводят с помощью вдыхания, то есть путем быстрой ингаляции через носовые ходы из контейнера, содержащего порошок, придерживаемого возле носа. Подходящие препараты для введения в виде назального спрея или носовых капель с жидкостью в качестве носителя охватывают растворы активного компонента в воде или масле.

Фармацевтические препараты, адаптированные для введения путем ингаляции, охватывают тонкоизмельченные пылеобразные препараты или аэрозоли, которые могут генерироваться различными типами диспенсеров под давлением с аэрозолями, распылителями или порошковдувателями.

Фармацевтические препараты, адаптированные для парентерального введения, включают водные и неводные стерильные растворы для инъекций, содержащие антиоксиданты, буферы, бактериостатические компоненты и растворенные вещества, с помощью которых поддерживается изотоничность препарата по отношению к крови реципиента, подвергаемого лечению; и водные и неводные стерильные суспензии, которые могут содержать суспензионную среду и загустители. Препараты могут вводиться в однодозовых или многодозовых контейнерах, например запечатанных ампулах и флаконах, и храниться в высушенном сублимацией (лиофилизированном) состоянии таким образом, что необходимо только добавить стерильную жидкость-носитель, например воду для инъекций, непосредственно перед применением. Инъекционные растворы и суспензии, приготовленные в соответствии с рецептом, могут быть приготовлены из стерильных порошков, гранул и таблеток.

Конъюгаты в соответствии с изобретением предпочтительно вводят парентерально.

Совершенно очевидно, что дополнительно к вышеуказанным предпочтительным составляющим препараты также могут содержать другие агенты, которые обычно используют в данной области в соответствии с конкретным типом препарата; таким образом, например, препараты, которые пригодны для перорального введения, могут содержать ароматизаторы.

Терапевтически эффективное количество конъюгата в соответствии с изобретением зависит от различных факторов, включая тип связанного активного соединения, возраст и вес пациента, определенное состояние, которое необходимо лечить, и его тяжесть, природу препарата и способ введения.

Настоящее изобретение также относится к набору для приготовления фармацевтической композиции, в частности усиливающей визуализацию или терапевтической композиции, по меньшей мере содержащей конъюгат в соответствии с изобретением. Если такой конъюгат содержит комплексообразующее вещество, то оно предпочтительно еще не образовало комплекс с любыми ионами металлов, имеющих усиливающее визуализацию или терапевтическое действие. Конъюгат в соответствии с изобретением может быть в растворенной форме в наборе в растворителе (например, водном буфере) или предпочтительно в форме лиофилизата.

Поскольку ионы металлов, которые образуют комплексы с комплексообразующим веществом конъюгата в соответствии с изобретением, являются радиоактивными для многих применений, то фармацевтические композиции, которые содержат конъюгат, не могут быть приготовлены заблаговременно, насколько это является желательным. Кроме того, вследствие радиоактивности при приготовлении следует соблюдать определенные процедуры, касающиеся техники безопасности. В связи с этим является предпочтительным в соответствии с изобретением обеспечивать набор, который содержит конъюгат в соответствии с изобретением, где комплексообразующее вещество еще не образовало комплексы с ионами металлов, необходимыми для конечного применения.

Было обнаружено, что конъюгаты в соответствии с изобретением уже накапливаются специфически, то есть исключительно или фактически исключительно, в почках через короткое время после применения. В случае предпочтительного внутривенного введения конъюгатов в соответствии с изобретением накопление в почках наблюдают только через 5 мин. Через 1 ч более чем 30%, предпочтительно более чем 50%, особенно предпочтительно более чем 70%, наиболее особенно предпочтительно более чем 80% инъецированной дозы локализовано в почках (% данных на основе измерения радиоактивности).

В исследованиях распределения по органам с радиоактивно меченными конъюгатами в соответст- 15 022137 вии с изобретением (например, РЕТ измерения или неинвазивная визуализация) конъюгаты в соответствии с изобретением типично проявляют, по меньшей мере, двукратное, предпочтительно, по меньшей мере, пятикратное, особенно предпочтительно, по меньшей мере, десятикратное обогащение в почках относительно других органов или систем организма (кровь, сердце, легкие, селезенка, печень, мышцы, головной мозг) через 1 ч после применения. Это обозначает, что сигнал, который коррелирует непосредственно с количеством радиоактивно меченного соединения, в почках по меньшей мере в два раза сильнее, чем сумма сигналов, полученных из крови, сердца, легких, селезенки, печени, мышц и головного мозга вместе.

Таким образом, конъюгаты в соответствии с изобретением могут применяться чрезвычайно хорошо для диагностических показаний, таких как сцинтиграфия почек, РЕТ почек и МРТ почек, функциональное тестирование почек в целом, для терапии и диагностики рака почки и, если это является желательным, метастазов рака почки, СТ почки и/или ультразвукового исследования почки.

Терапевтическое применение состоит, в частности, в нацеливании лекарственного средства на орган почки. В частности, конъюгаты в соответствии с изобретением могут служить в качестве лекарственных средств для лечения заболеваний почки или заболеваний, для лечения которых примеряются лекарственные средства, сайтом действия которых являются почки. Одно или несколько активных соединений, таких как антибиотики, ингибиторы воспаления, ингибиторы АСЕ, мочегонные средства, иммуносупрессанты или химиотерапевтические средства, предпочтительно связывают с конъюгатами в соответствии с изобретением, например, с помощью расщепляемых спейсерных последовательностей.

Также является возможным применение конъюгатов в соответствии с изобретением для блокирования резорбции веществ, токсичных для почек.

В соответствии с изобретением нацеливание на почки обозначает достижение повышенного поглощения применяемого вещества в почках относительно других органов или систем организма. При нацеливании на почки с помощью конъюгата в соответствии с изобретением, по меньшей мере, двукратное, предпочтительно, по меньшей мере, пятикратное, особенно предпочтительно, по меньшей мере, десятикратное обогащение предпочтительно достигается в почках относительно других органов или систем организма (кровь, сердце, легкие, селезенка, печень, мышцы, головной мозг) путем введения конъюгата в соответствии с изобретением. Эти значения определяют с помощью исследований распределения по органам с помощью радиоактивных конъюгатов в соответствии с изобретением (например, РЕТ измерения или неинвазивная визуализация). Обогащение в почках обычно происходит через от 30 мин до 8 ч в зависимости от типа введения.

Даже без дополнительных комментариев, полагают, что квалифицированный специалист в данной области техники сможет использовать вышеуказанное описание в наиболее широком объеме. Следовательно, предпочтительные варианты осуществления и примеры должны рассматриваться только как описательное раскрытие, которые абсолютно никоим образом не является ограничивающим.

Полное раскрытое содержание все заявок, патентов и публикаций, указанных выше и ниже, в частности соответствующей заявки ЕР 09009393.1-20, поданной 20 июля 2009 г., включено в настоящую заявку в качестве ссылки.

Примеры

1. Синтез материалов

Пример 1 (е-Ь-полилизин-ЭОТА).

ЭОТЛ 2,б-дифторфениловый эфир: из ЭОТЛ и 2,б-дифторфенола с ЭСС (М1ег и др. В|осоп]ида1с СЬет. 2005, 1б, 237).

ε-Ь-Полилизин, средняя молярная масса приблизительно 4000 (преимущественно содержащий 2934 лизиновых звеньев), получали в виде 25% водного раствора от Οιίδδο Согр. (.Гараи) и лиофилизировали. ε-Полилизин (30 мг) растворяли в воде (200 мкл) и добавляли раствор ЭОТЛ 2,б-дифторфенилового эфира (100 мг) в метаноле (1 мл), и добавляли 100 мкл Ν,Ν-диизопропилэтиламин, и смесь перемешивали при КТ в течение 2 дней. Затем снова добавляли ЭОТЛ 2,б-дифторфениловый эфир (100 мг) и смесь перемешивали в течение ночи при КТ. После этого смесь разводили водой и очищали препаративно путем ВЭЖХ. Чистые фракции лиофилизировали совместно. ЭОТЛ-е-полилизин (98 мг) получали в виде бесцветного твердого вещества. Количество ЭОТЛ звеньев на молекулу ε-полилизина определяли путем насыщения с С4 и путем М§, и оно составляет около 10 ЭОТЛ звеньев на молекулу ε-полилизина; то есть приблизительно 30% аминогрупп ε-полилизина прореагировало.

На фиг. 2 показано графическое отображение соединения, полученного в примере 1, где ЭОТЛ модификации, в отличие от упрощенного отображения на фиг. 2, являются, несомненно, случайно распределенными в молекуле.

Пример 2 (ε-Ε-полилизин-ЭТРЛ).

мг ε-Ь-Полилизина и 310 мг ЭТРЛ дифторфенилового эфира тетра-Г-бутилового эфира растворяли в 4 мл метанола и перемешивали при КТ в течение 20 ч. Реакционный раствор упаривали и к остатку добавляли 4 мл ТЕЛ +100 мкл воды и оставляли отстаиваться в течение 20 ч. Продукт осаждали, используя диэтиловый эфир. При очистке путем ВЭЖХ и лиофилизации получали 150 мг в виде бесцветного

- 1б 022137 твердого вещества.

Пример 3 (насыщение с ^1П1и).

1,5 мг ε-Ε-Полилизин-ООТА растворяли в 500 мкл этанола, 100 мкл ДМСО и 500 мкл 0,4 М буфера с ацетатом натрия, рН 5. 30 мкл Этого раствора разводили с помощью 30 мкл буфера, ¹¹¹1иС1₃ (20 МБк) добавляли и смесь нагревали при 70°С в течение 8 мин. Радио-ВЭЖХ показала полное комплексообразование.

1,2 мг ε-Ь-Полилизин-ОТРЛ растворяли в 400 мкл 0,4 М буфер с ацетатом натрия, рН 5. 20 МБк ¹¹¹1иС1₃ добавляли к 80 мкл этого раствора и смесь нагревали при 70°С в течение 10 мин. Радио-ВЭЖХ показала полное комплексообразование.

Пример 4 (насыщение с ⁶⁸0а).

мкл Раствора ε-Ь-полилизин-ПОТЛ из примера 3 добавляли к 100 мкл раствора 50 МБк ⁶⁸0аС1₃ (рН 3) и смесь нагревали при 95°С в течение 10 мин. ВЭЖХ показала полное комплексообразование.

Пример 5 (насыщение с Οά).

мг ε-Ь-Полилизин-ПОТЛ и 50 мг ОйС1₃ гексагидрата нагревали при 60°С в течение 30 мин в 600 мкл 0,4 М буфер с ацетатом натрия рН 5. При очистке путем ВЭЖХ и лиофилизации получали 10 мг в виде бесцветного твердого вещества.

Пример 6 (ЕРЬ-ООТЛ модификация с использованием ¹⁹Р).

мг ε-Ь-Полилизин-ООТЛ растворяли в 3 мл метанола и 200 мкл триэтиламина и 200 мкл этилтрифторацетата добавляли, и смесь перемешивали при КТ в течение 1 ч. При очистке путем ОФ-ВЭЖХ, используя градиент элюирования, содержащий воду и ацетонитрил, и лиофилизации получали 35 мг в виде бесцветного твердого вещества.

Пример 7 (эналаприльное производное ε-полилизина).

Эналаприл. Эналаприл малеат (ВоксЬе Заеиййс) наносили на колонку, содержащую Όο\\ό\ 50νΧ8, и промывали водой до нейтрального состояния. Затем эналаприл элюировали с помощью 2% пиридина в воде, растворители упаривали и остаток упаривали несколько раз с ацетонитрилом. Эналаприл получали в виде бесцветного масла и затем использовали непосредственно.

Эналаприл ΐ-бутиловый эфир. Синтез осуществляли из эналаприла и Ν,Ν'-дициклогексил-О-!бутилизомочевины (СЬайгаи, Κανί ИЗ 2006241017).

Эналаприлат ΐ-бутиловый эфир. Синтез осуществляли из эналаприл ΐ-бутилового эфира, используя №ОН (Ι\ν;·ΐ5;·ι1<ί и др. СЬет. РЬагт. Ви11. 37(2) 280 (1989).

Ν,Ν'-Диизопропил-О-бутилизомочевина. Синтез осуществляли из бензилового спирта и Ν,Ν'дициклогексилкарбодиимида (Μ;·ι11ιί;·ΐ5. ЗуйЬе818 1979, 561).

Бензил 6-гидроксигексаноат. Раствор Ν,Ν'-диизопропил-О-бутилизомочевины (2,34 г; 10 ммоль) в ТГФ (8 мл) добавляли к 6-гидроксикапроновой кислоте (АВСК) (1,32 г; 10 ммоль) и смесь перемешивали при КТ в течение 2 дней. Твердый материал отфильтровывали и фильтрат упаривали. Остаток элюировали на силикагеле с этилацетатом:гексаном 1:2 к 1:1. Выход 90%.

Бензил гексаноат 6-О-Ы,№-диизопропилизомочевина. Ν,Ν'-Диизопропилкарбодиимид (1,14 г, 9 ммоль) добавляли к бензил 6-гидроксигексаноату (2,0 г; 9 ммоль), СиС1 (30 мг) и ТГФ (6 мл) и смесь перемешивали в течение ночи при КТ. После этого смесь разводили с помощью ТГФ и фильтровали через нейтральный оксид алюминия во фритте и промывали с помощью ТГФ. Фильтрат упаривали, остаток ресуспендировали в диэтиловом эфире, твердый материал отфильтровывали и фильтрат упаривали. Продукт использовали без дополнительной очистки.

Производное эналаприла 1 (в соответствии с фиг. 4). Раствор эналаприл ΐ-бутилового эфира (2,87 г 7,09 ммоль) в ТГФ (20 мл) добавляли к бензилгексаноат 6-О-Ы,№-диизопропилизомочевине (2,47 г, 7,09 ммоль), добавляли 20 мг ОМАР и смесь нагревали в колбе с обратным холодильником в течение 7 ч, затем перемешивали в течение ночи при 60°С. Реакционный раствор охлаждали на льду и твердый материал отфильтровывали. Фильтрат упаривали и остаток элюировали на силикагеле с этилацетатом:гексаном 1:2 к 2:1. Чистые фракции упаривали вместе. Выход 85%. ¹³С и ¹Н-ЯМР подтверждал указанную структуру.

Производное эналаприла 2 (в соответствии с фиг. 4). Производное эналаприла 1 (400 мг) растворяли в метаноле (50 мл), 10% Рй/С (70 мг) добавляли, и смесь гидрировали, используя водород при атмосферном давлении. Через 40 мин ВЭЖХ указывала на завершение реакции. Катализатор отфильтровывали и растворитель упаривали. Продукт использовали без дополнительной очистки. ¹³С и ¹Н-ЯМР подтверждал указанную структуру.

Производное эналаприла 3 (в соответствии с фиг. 4). Производное эналаприла 2 (183 мг; 0,35 ммоль) растворяли в ацетонитриле (2 мл) и добавляли тетрафторборат ^^№,№-тетраметил-О-Гсукцимидил)урония (ТЗТИ) (106 мг; 0,35 ммоль) в ацетонитриле (2 мл), и добавляли Ν,Νдиизопропилэтиламин (63 мкл; 0,35 ммоль), и смесь перемешивали при КТ. ВЭЖХ указывала на завершение реакции через 5 мин. Продукт очищали с помощью препаративной ВЭЖХ. После лиофилизации продукт получали в виде бесцветного полутвердого соединения. МЗ (масс-спектрометрия) показала точную ожидаемую массу.

- 17 022137

Производное эналаприла 4 (в соответствии с фиг. 4). Производное эналаприла 3 (8 мг) оставляли отстаиваться при КТ, растворяли в смеси ТРА (200 мкл) и триизопропилсилана (5 мкл). ВЭЖХ указывала на завершение реакции через 1 ч. Добавляли ацетонитрил (1 мл) и затем смесь упаривали. Остаток растворяли в 1 мл ацетонитрила:воды 1:1 и лиофилизировали. Μδ показала точную ожидаемую массу.

ε-Полилизин-производное эналаприла.

Раствор А: 8 мг производного эналаприла 4 в 100 мкл ацетонитрила.

Раствор В: 100 мг ε-полилизина в 650 мкл воды и 350 мкл ацетонитрила.

мкл Ν,Ν-диизопропилэтиламин добавляли к 100 мкл раствора В и смешивали. Затем добавляли 25 мкл раствора А и смешивали как можно быстрее. Через несколько минут ВЭЖХ показала пик непрореагировавшего ε-полилизина и новый основной пик, но больше не показывала пика для производного эналаприла 4. Вновь образованный продукт выделяли с помощью препаративной ВЭЖХ и характеризовали с помощью Μδ в виде желательного производного моно-эналаприл-ε-полилизина.

Производное ΌΟΤΑ-ε-полилизин-эналаприл. Избыток ΌΟΤΑ 2,6-дифторфенилового эфира в метаноле добавляли к производному ε-полилизин-эналаприла в воде добавляли Ν,Ν-диизопропилэтиламин. При очистке с помощью препаративной ВЭЖХ получали желательное соединение.

Пример 7. Производное рапамицина ε-полилизина.

Рапамицин 42-гемисукцинат готовили из рапамицин (ЬС-ЬаЪогабопез) янтарного ангидрида и липаза акриловой смолы из СапФйа ап1аг1сИса ^1дта). (Ои и др. Огд. Ьей. 2005, 7, 3945-3948).

Рапамицин 42-гемисукцинил-NНδ сложный эфир. Рапамицин 42-гемисукцинат (180 мг; 0,177 ммоль) растворяли в ацетонитриле (1,5 мл) и добавляли тетрафторборат ЧЧ№,№-тетраметил-О-(Ч сукцимидил)урония (ΤδΤυ) (56 мг; 0,186 ммоль) в ацетонитриле (0,5 мл), и добавляли Ν,Ν-диизопропилэтиламин (36 мкл; 0,20 ммоль), и смесь перемешивали при КТ. ВЭЖХ указывала на завершение реакции через 30 мин. Продукт очищали путем препаративной ВЭЖХ. После лиофилизации продукт (125 мг) получали в виде бесцветного твердого соединения. Μδ показала точную ожидаемую массу.

Производное ε-полилизин-рапамицин ε-Полилизин (3 мл 25% водного раствора; СЫззо) разводили водой (30 мл) и доводили до рН приблизительно 3, используя ТРА, и лиофилизировали.

Раствор А: 30 мг рапамицин 42-гемисукцинил-NНδ сложного эфира в 500 мкл ацетонитрила.

Раствор В: 500 мг ε-полилизина (кислотный, см. выше) растворяли в 5 мл воды:ацетонитрила (2:1) и доводили до рН 7-7,5 путем добавления триэтиламина.

Раствор А добавляли к раствору при перемешивании. Образовывалась мутная смесь. Добавление ацетонитрила (1 мл) вызывало образование прозрачного раствора. ВЭЖХ через приблизительно 15 мин показала завершение реакции рапамицин 42-гемисукцинил-NНδ сложного эфира и образование нового продукта наряду с непрореагировавшим ε-полилизином. Вновь образованный продукт выделяли путем препаративной ВЭЖХ и характеризовали с помощью Μδ в виде желательного производного моно-рапамицин-ε-полилизина.

Производное ΌΟΤΑ-ε-полилизин-рапамицин. ΌΟΤΑ 2,6-Дифторфениловый эфир (20 мг; 40 мкмоль) в ацетонитриле (200 мкл) добавляли к производному ε-полилизин-рапамицина (10 мг; около 2 мкмоль), растворенному в воде:ацетонитриле 2:1 (500 мкл), и реакционный раствор доводили до рН 7-7,5 путем добавления триэтиламина и подвергали реакции в течение ночи при КТ. При очистке с помощью препаративной ВЭЖХ получали после лиофилизации желательное соединение в виде бесцветного твердого вещества. Количество ΌΟΤΑ групп на молекулу определяли с помощью Μδ. Пропорция составляла от 15 до 18 ΌΟΤΑ звеньев на молекулу.

Пример 8. Производное сорафениба ε-полилизина.

4-Хлор(2-пиридил) Ν-2-гидроксиэтилкарбоксамид (δ-2). Метил 4-хлорпиридин-2-карбоксилат гидрохлорид (δ-1) (2,08 г; 10 ммоль) (Вапкзбоп и др. Οι^ηκ Ргосе88 КезеагсЬ & Оеуе1ортеп1 2002, 6, 777781) изначально вносили в метаноле (5 мл) и охлаждали на льду. Этаноламин (3 мл; 50 ммоль) в ТГФ (50 мл) добавляли по каплям в течение 10 мин, затем смесь перемешивали при 0° дополнительно в течение 3 ч и после этого при КТ в течение ночи. После упаривания остаток ресуспендировали в этилацетате и промывали с помощью 5% NаНСΟз, органический раствор высушивали и упаривали. Продукт, δ-2, (1,84 г 91%) получали в виде светло-желтого твердого вещества с высокой чистотой (ВЭЖХ). ¹³С ЯМР (ДМСО-ά..): δ 42,15, 59,98, 122,30, 126,82, 145,01, 150,43, 152,09, 163,20 част. на млн.

(4-(4-Аминофенокси)(2-пиридил))-Ы-2-гидроксиэтилкарбоксамид (δ-3). К трет-бутоксид (3,17 г; 28,24 ммоль) добавляли порциями к раствору 4-аминофенола (2,96 г; 27,1 ммоль) в ДМФА (45 мл) в атмосфере аргона, и затем смесь перемешивали при КТ в течение 1,5 ч. Добавляли раствор δ-2 (5,43 г; 27 ммоль) в ДМФА (10 мл), и затем добавляли Κ^Ο₃ (2,0 г). Реакцию нагревали при 70° на масляной бане в течение 6 ч, затем охлаждали, и добавляли этилацетат (400 мл) и насыщенный №С1 (400 мл). Водную фазу экстрагировали снова с этилацетатом, и объединенные органические фазы промывали с помощью 4 х 100 мл насыщенного №С1, высушивали и упаривали. Темный остаток очищали сначала на силикагеле с этилацетатом/гексаном (3:1)-этилацетатом/метанолом (10:1). Фракции, содержащие продукт, упаривали вместе и затем элюировали на оксиде алюминия с этилацетатом/гексаном (3:1)-этилацета- 18 022137 том/метанолом (10:1). Продукт в виде светло-желтого твердого вещества (3,20 г; 43%) с высокой чистотой (ВЭЖХ) М8: Μ+Να==296,100; рассчитано для С₁₄Н₁^₃№О₃= 296,1011.

^(4-Хлор-3-(трифторметил)фенил)-((4-(2-^-гидроксиэтилкарбамоил)(4-пиридилокси))фенил)амино)карбоксамид (8-4). Раствор 8-3 (1,50 г; 5,49 ммоль) в дихлорметане (20 мл) охлаждали на льду и добавляли раствор 4-хлор-3-трифторметилфенил изоцианата (1,26 г; 5,70 ммоль) в дихлорметане (20 мл). Через 1 ч осажденное твердое вещество отфильтровывали и промывали с помощью дихлорметана и высушивали. Продукт (8-4) (2,34 г; 4,73 ммоль; 86%) получали в виде белого твердого вещества. М8: М+Н= 495,1037 рассчитано для С₂₂Н₁₉С1Р₃^О₄: 495,1047.

Производное сорафениба 8-5. 8-4 (2,30 г; 4,65 ммоль) растворяли в пиридине (15 мл) и добавляли раствор янтарного ангидрида (581 мг; 5,81 ммоль) в пиридине (5 мл), добавляли Ν,Ν-диметиламинопиридин (284 мг; 2,33 ммоль) и смесь перемешивали в течение ночи при КТ. Реакционную смесь наносили на колонку, содержащую приблизительно 20 мл пиридиния-Ио^ех в пиридине: метаноле:воде (8:1:1) и элюировали с такой же смесью. Элюат упаривали, остаток упаривали несколько раз с толуолом, в завершение с ацетонитрилом. Продукт (8-5) получали в виде белой пены (2,65 г; 4,45 ммоль; 95% ) М8: М+Н=595,1115; рассчитано для СбНзаВДО,: 595,1207.

Производное сорафениба 8-6. 8-5 (180 мг; 0,30 ммоль) растворяли в ацетонитриле (3 мл) и добавляли раствор тетрафторбората ^^№,№-тетраметил-О-^-сукцимидил)урония (Т8ТИ) (99 мг; 0,32 ммоль) в ацетонитриле (3 мл), и добавляли Ν,Ν-диизопропилэтиламин (67 мкл; 0,37 ммоль). ВЭЖХ указывала на завершение реакции через 10 мин. Добавляли 0,1% ТРА в воде (2 мл) и смесь очищали путем препаративной ВЭЖХ. 8-6 получали в виде не совсем белого твердого вещества (163 мг; 0,24 ммоль; 78%). М8: М+Н= 692,1368; рассчитано для С₃ 11_;,С1РЛ',О.: 692,1371.

Производное ε-полилизин-сорафениб ε-Полилизин (3 мл 25% водного раствора; Сйкко) разводили водой (30 мл) и доводили до рН приблизительно 3, используя ТРА, и лиофилизировали.

Раствор А: 17 мг производного сорафениба 8-6 в 500 мкл ацетонитрила.

Раствор В: 500 мг ε-полилизина (кислотный, см. выше) растворяли в 5 мл воды:ацетонитрила (2:1) и доводили до рН 7-7,5 путем добавления триэтиламина.

Раствор А добавляли к раствору В при перемешивании. Образовывался мутный раствор. Добавление ацетонитрила (1 мл) вызывало образование прозрачного раствора. ВЭЖХ через приблизительно 15 мин показала завершение реакции производного сорафениба 8-6 и образование нового продукта в добавок к непрореагировавшему ε-полилизину. Вновь образованный продукт (71 мг) выделяли путем препаративной ВЭЖХ и характеризовали с помощью М8 в виде желательного производного моно-сорафенибε-полилизина.

Производное ИОТА^-полилизин-сорафениб. ИОТА 2,6-дифторфениловый эфир (197 мг; 360 мкмоль) в ацетонитриле (1,5 мл) добавляли к производному ε-полилизин-сорафениба (71 мг; около 15 мкмоль), растворенному в воде:ацетонитриле 2:1 (1,5 мл), и реакционный раствор доводили до рН 7-7,5 путем добавления триэтиламина и подвергали реакции в течение ночи при КТ. При очистке с помощью препаративной ВЭЖХ получали после лиофилизации желательное соединение в виде бесцветного твердого вещества (90 мг). Количество ИОТА групп на молекулу определяли с помощью М8 как 16-20.

2. Примеры использования

1. Исследование распределения по органам

Для определения фармакокинетики ε-полилизин-ИОТА метили с помощью радиоактивного нуклида ^1П1и в соответствии с примером синтеза 2/3 и МКМ1 мышам инъецировали в группах из трех животных каждому через хвостовую вену. Используемое количество составляло около 5 мкг ε-полилизинаИОТА на животное, доза составляла около 1 МБк на животное.

Животных после этого умертвляли, и изолированные органы (кровь, сердце, легкие, селезенку, печень, почки, мышцы, головной мозг) исследовали для определения их радиоактивности на гаммасчетчике. Количество радиоактивности в соответствующем органе представляет непосредственно поглощенное количество ε-полилизина-ИОТА. Животных умертвляли в различные промежутки времени. Это осуществляли, как и полное проведение эксперимента, в соответствии с этическими принципами для научно-исследовательского проведения экспериментов на животных.

Неожиданно, при измерениях наблюдали, что свыше 150% инъецированной дозы на грамм ткани почки накапливалось в почках экспериментальных животных только через 10 мин после инъекции ^П11инасыщенного ε-полилизин-ИОТА. Небольшое количество экскретировалось с мочой.

Графическое представление накопление в различных органах при исследовании показано на фиг. 2. На оси Υ представлено специфическое накопление в конкретных органах - указанное в виде % инъецированной дозы на грамм ткани. Р1-Р3 представляют результаты для конъюгатов с различной степенью насыщения: Р1: около 10% лизиновых мономеров несут ИОТА, Р2: около 30% лизиновых мономеров несут ИОТА и Р3: около 50% лизиновых мономеров несут ИОТА.

- 19 022137

2. ΡΕΤ измерение

Для ΡΕΤ измерений насыщение осуществляли с ⁶⁸0а в соответствии с примером синтеза 4, и накопление в почках исследовали динамически в сканере ΡΕΤ для небольших животных (§1етеп8). В данном эксперименте было обнаружено, что соединение (ε-^-полилизин-^ОΤΑ, насыщенное с помощью ⁶⁸0а) обеспечивает чрезвычайно хорошее соотношение в органе фон-сигнал и накапливается практически исключительно в почках. Типичными значениями в данном случае являются 10-кратное накопление в почках относительно остальных органов и систем организма.

3. Сравнительные примеры

Поглощение СТс-МАОЗ и СТс-ИМЗА сравнивали с поглощением (ε-^-полилизин-^ОΤΑ, насыщенный с помощью ^ш1и) на моделях крыс и мышей в планарных сцинтиграфах. Обе известные радиоактивные изотопные метки проявляют худшее соотношение в почках фон-сигнал, чем вещество в соответствии с изобретением.

3. Конъюигрование различных соединений, несущих карбоксильные группы

Для исследования влияния различных соединений, несущих карбоксильные группы, на накопление в почках, ε-полилизин конъюгировали с ^ОΤΑ звеном для облечения мечения с помощью радиоактивных изотопов для экспериментов на животных. Дополнительно к одному ^ОΤΑ звену множество звеньев другого соединения, несущего карбоксильные группы, или соединения, не несущего карбоксильные группы, конъюгировали. Исследования распределения по органам этих конъюгатов показали, что конъюгаты с ИО-ЗАМ (1,4,7,10-тетраазациклододекан-^-№,-№'-триамид, Ν'''-моноуксусная кислота, МасгосусНск), которая не содержит карбоксильных групп после конъюгирования, проявляет накопление в почках, которое не превышает накопления, уже достигаемого с ^ОΤΑ группой, тогда как конъюгаты с лимонной кислотой проявляют чрезвычайно хорошее накопление и конъюгаты с янтарной кислотой проявляют очень хорошее накопление в почках.

Синтез ε-полилизина только с одним ^ОΤΑ звеном на молекулу (Ср. 1). ε-Полилизин (780 мг) растворяли в воде:метаноле 1:1 и добавляли ^ОΤΑ 2,6-дифторфениловый эфир (103 мг) в метаноле, добавляли диизопропилэтиламин (100 мкл) и смесь перемешивали в течение ночи при КТ. Продукт очищали с помощью ВЭЖХ и лиофилизировали. М§ показала смесь ε-полилизина и ε-полилизинЛ х ^ОΤΑ в соотношении приблизительно 2:1. Это соединение, Ср. 1, использовали для приготовления всех следующих производных.

Производное ИО-3АМ-уксусной кислоты Ср. 1. ИО-3АМ-уксусную кислоту (42 мг) и ΤδΤυ (31 мг) растворяли в ДМФА (2 мл) и добавляли диизопропилэтиламин (18 мкл). Через 1 мин этот раствор добавляли к Ср. 1 (16 мг) в воде:диоксане 1:1 (400 мкл) и оставляли для реакции при КТ в течение ночи. После разведения водой продукт очищали с помощью ВЭЖХ и лиофилизировали.

Производное лимонной кислоты Ср. 1. Лимонный ангидрид приготавливали из лимонной кислоты (2 ммоль) и дициклогексилкарбодиимида (1 ммоль) в ТГФ (5 мл). Через 30 мин образованную дициклогексилмочевину отфильтровывали и промывали с помощью ТГФ. Фильтрат упаривали и использовали непосредственно в следующей реакции. Лимонный ангидрид (80 мг) в пиридине (200 мкл) добавляли к раствору Ср. 1 (38 мг) и диметиламинопиридина (5 мг) в пиридине:воде 1:1 (200 мкл) и смесь перемешивали при КТ в течение ночи. После разведения водой продукт очищали с помощью ВЭЖХ и лиофилизировали. Количество звеньев лимонной кислоты на молекулу ε-полилизинаЛ х ^ОΤΑ можно определить с помощью М§ как 4-8.

Производное янтарной кислоты Ср. 1. Янтарный ангидрид (100 мг) в пиридине:диоксане 1:1 (2000 мкл) добавляли к раствору Ср. 1 (38 мг) и диметиламинопиридина (5 мг) в пиридине:воде 1:1 (1000 мкл) и смесь перемешивали при КТ в течение ночи. После разведения водой продукт очищали с помощью ВЭЖХ и лиофилизировали.

Claims (14)

1. Конъюгат, содержащий по меньшей мере одно соединение, несущее карбоксильные группы, и олигомер, который состоит из пептидно-связанных мономерных звеньев и сформирован из более чем 50% (исходя из количества мономерных звеньев) мономерных звеньев ε-лизина или содержит по меньшей мере 10 последовательных мономерных звеньев, которые сформированы по меньшей мере из 70% (исходя из количества мономерных звеньев) мономерных звеньев ε-лизина, отличающийся тем, что доля карбоксильных групп в молекулярной массе соединения, несущего карбоксильные группы, превышает 30% и по меньшей мере одно соединение, несущее карбоксильные группы и конъюгированное с олигомером, содержит по меньшей мере две свободные карбоксильные группы, при этом конъюгат содержит от 3 до 6 соединений, несущих карбоксильные группы на каждые 10 мономерных звеньев.

2. Конъюгат по п.1, отличающийся тем, что дополнительно содержит по меньшей мере одно активное соединение, ковалентно связанное с конъюгатом.

3. Конъюгат по п.2, отличающийся тем, что активное соединение выбирается из группы иммуносупрессантов, например, таких как азатиоприн, микофенолат-мофетил, циклоспорин, такролимус, сиролимус, финголимод или триптолид, цитостатиков, например, таких как блеомицин, дактиномицин, мито- 20 022137 мицин, даунорубицин, доксорубицин, эпирубицин, идарубицин, митоксантрон, амсакрин, доксофлуридин, цисплатин, карбоплатин, оксалиплатин, сатраплатин, камптотецин, топтекан, иринотекан, этопозид, тенипозид, циклофосфамид, трофосфамид, мелфалан, хлорамбуцил, эстрамустин, бусульфан, хлорметин, треосульфан, кармустин, ломустин, нимустин, прокарбазин, стрептозоцин, дакарбазин, ифосфамид, темозоломид, тиотепа, винорелбин, винкристин, винбластин, виндезин, паклитаксел, доцетаксел, метотрексат, пеметрексед, ралтитрексед, фторурацил, капецитабин, цитозинарабинозид, гемцитабин, тиогуанин, пентостатин, меркаптопурин, флударабин, калдрибин, гидроксикарбамид, митотан, азацитидин, цитарабин, неларабин, бортезомиб, анагрелид, в частности, ингибиторов протеинкиназы, таких как, например, иматиниб, эрлотиниб, сунитиниб, сорафениб, дазатиниб, лапатиниб или нилотиниб, иммунотерапевтических средств, например, таких как цетуксимаб, алемтузумаб и бевацизумаб, противовоспалительных средств, например, таких как напроксен, ибупрофен, индометацин, преднизолон, преднизон, гидрокортизон или будесонид, антибиотиков, в частности пенициллинов, таких как, например, бензилпенициллин, метициллин или амоксициллин, цефалоспоринов, таких как, например, цефуроксим, цефотаксим, цефадроксил или цефиксим, ингибиторов β-лактамазы, таких как, например, клавулановая кислота, сульбактам или тазобактам, карбапенемов, таких как, например, имипенем или меропенем, монобактамов, таких как, например, азтреонам, тетрациклинов, таких как, например, тетрациклин, хлортетрациклин, окситетрациклин, доксициклин, миноциклин или тигециклин, макролидных антибиотиков, таких как, например, эритромицин А, гликопептидных антибиотиков, таких как, например, ванкомицин, ендиинов, таких как, например, калихеамицин, вирусостатиков, например, таких как ацикловир, валацикловир, ганцикловир, валганцикловир, пенцикловир, фамцикловир, бривудин, цидофовир, фоскарнет, идоксуридин или тромантадин, противогипертонических средств, в частности ингибиторов АСЕ, таких как, например, беназеприл, каптоприл, цилазаприл, эналаприл, фозиноприл, лизиноприл, периндоприл, хинаприл, рамиприл, трандолаприл или зофеноприл, сартанов, таких как, например, лозартан, балсартан, ирбесартан, кандесартан, эпросартан, олмесартан или телмисартан, ингибиторов ренина, таких как, например, алискирен, и β-блокаторов, таких как, например, пропранолол, пиндолол, соталол, бопиндолол, атенолол, бисопролол, целипролол, эсмолол, метопролол, небиволол, окспренолол, карведилол или лабеталол, средств, способствующих выведению мочевой кислоты, например, таких как пробенецид или бензбромарон, или мочегонных средств, например, таких как ацетазоламид, фуросемид, торасемид, буметанид, пиретанид, азосемид, этакриновая кислота, этозолин, гидрохлоротиазид, бензтиазид, хлортиазид, хлорталидон, индапамид, мефрусид, металозон, клопамид, ксипамид, гидрофлуметиазид, метиклотиазид, политиазид, амилорид, триамтерен, спиронолактон, капренон, эплеренон или спиронолактон.

4. Конъюгат по любому из пп.1-3, отличающийся тем, что олигомер имеет длину цепи от 10 до 50 мономерных звеньев.

5. Конъюгат по любому из пп.1-4, отличающийся тем, что олигомер состоит только из мономерных звеньев ε-лизина.

6. Конъюгат по любому из пп.1-5, отличающийся тем, что олигомер состоит из ε-полилизина.

7. Конъюгат по любому из пп.1-6, отличающийся тем, что по меньшей мере одно соединение, несущее карбоксильные группы, связано непосредственно или с помощью спейсера с аминогруппой мономерного звена ε-лизина.

8. Конъюгат по любому из пп.1-7, отличающийся тем, что по меньшей мере одно соединение, несущее карбоксильные группы, представляет собой комплексообразующее вещество.

9. Способ приготовления конъюгата по любому из пп.1-8, который включает по меньшей мере следующие стадии:

a) обеспечение олигомера, который состоит из пептидно-связанных мономерных звеньев и сформирован из более чем 50% (исходя из количества мономерных звеньев) мономерных звеньев ε-лизина или содержит по меньшей мере 10 последовательных мономерных звеньев, которые сформированы по меньшей мере из 70% (исходя из количества мономерных звеньев) мономерных звеньев ε-лизина;

b) конъюгирование по меньшей мере одного необязательно активированного соединения, несущего карбоксильные группы, с олигомером, полученным на стадии а).

10. Конъюгат по любому из пп.1-8 в качестве лекарственного средства.

11. Применение конъюгата по любому из пп.1-8 для нацеливания на почки.

12. Макромолекулярный конъюгат, состоящий по меньшей мере из двух конъюгатов по любому из пп.1-8, которые ковалентно связаны с макромолекулой.

13. Терапевтическая или усиливающая визуализацию композиция, по меньшей мере, содержащая конъюгат по любому из пп.1-8.

14. Набор для приготовления терапевтической или усиливающей визуализацию композиции, по меньшей мере, содержащий конъюгат по любому из пп.1-8.

- 21 022137

Фиг. 1

Фиг. 2

Фиг. 3

- 22 022137

Фиг. 4