EA021401B1

EA021401B1 - Антитела к dkk-1

Info

Publication number: EA021401B1
Application number: EA201171237A
Authority: EA
Inventors: Марсио Чедид; Райан Джеймс Дарлинг; Рашель Жанетт Гелвин; Барбара Энн Свэнсон
Original assignee: Эли Лилли Энд Компани
Priority date: 2009-04-10
Filing date: 2010-04-06
Publication date: 2015-06-30
Also published as: LT2417158T; BRPI1014157A2; CA2758252A1; PT2417158T; CY1124412T1; LT3514173T; KR20140033523A; HUE043904T2; HUE055376T2; SI2930184T1; MX2011010707A; DK2417158T4; HUE034625T2; CY1121637T1; SI3514173T1; PL2930184T3; SG175244A1; RS58612B1; HRP20171400T1; ZA201107256B

Abstract

Изобретение обеспечивает сконструированные человеческие антитела к DKK-1 или его антигенсвязывающие фрагменты, которые связываются с и ингибируют активность DKK-1 человека и которые эффективны при лечении заболеваний, патогенез которых опосредован DKK-1.

Description

Настоящее изобретение относится к сконструированным человеческим антителам к ΌΚΚ-1 и к применению указанных антител для лечения заболеваний, патогенез которых опосредован ΌΚΚ-1.

01еккорГ-1 (ΌΚΚ-1) является представителем семейства белков ФеккорГ. для которых была показана способность выступать в роли негативных регуляторов канонического пути передачи сигналов через Мп! Указанный путь играет ключевую роль в образовании и развитии кости. ΌΚΚ-1 ингибирует передачу сигнала Мп! посредством взаимодействия с корецептором Мп! ЬКР5 или ЬКРб и белками кгетеп. ΌΚΚ-1 предотвращает взаимодействия компонентов пути передачи сигнала через Мп! как с ЬКР5, так и с ЬКРб, и, соответственно, предотвращает передачу сигнала, опосредованную Мп1. Также было показано, что ΌΚΚ-1 участвует в развитии рака, образующего метастазы в кости, включая множественную миелому, рак молочной железы, почечно-клеточную карциному и немелкоклеточный рак легкого.

Были описаны антитела, связывающие ΌΚΚ-1 (см., например, МО 2006/015373), тем не менее, все еще существует потребность в терапевтических сконструированных человеческих антителах, направленных против ΌΚΚ-1, которые будут способны ингибировать взаимодействие ΌΚΚ-1 с ЬКР5 и ЬКРб. Также ввиду участия ΌΚΚ-1 в регуляции формирования костной ткани существует потребность в сконструированных человеческих антителах к ΌΚΚ-1, предназначенных для применения при заживлении кости. Также, принимая во внимание участие ΌΚΚ-1 в развитии рака, существует потребность в сконструированных человеческих антителах к ΌΚΚ-1, предназначенных для лечения рака, включая множественную миелому, рак молочной железы и немелкоклеточный рак легкого.

Антитела согласно настоящему изобретению представляют собой терапевтически эффективные антагонисты ΌΚΚ-1, которые обладают рядом желательных свойств. Сконструированные человеческие антитела согласно настоящему изобретению проявляют высокую аффинность (Κά) по отношению к ΌΚΚ-1 человека, ΌΚΚ-1 яванского макака, ΌΚΚ-1 крысы, ΌΚΚ-1 мыши и ΌΚΚ-1 кролика. Антитела согласно настоящему изобретению блокируют ингибирование щелочной фосфатазы, опосредованное ΌΚΚ-1, что является показателем активности остеобластов. Более того, применение антител согласно настоящему изобретению приводит к повышению плотности костной массы как в задней, так и в передней частях надкостницы в модели кортикального дефекта ίη νίνο и существенным образом усиливают ингибирование ксенотрансплантатов немелкоклеточного рака легкого ίη νίνο.

Согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающий фрагмент, значение Κά при 37°С для которого составляет менее 5,0х10^-11 М по отношению к ΌΚΚ-1 человека (8ЕО ΙΌ N0:29), ΌΚΚ-1 яванского макака (8Е0 ΙΌ N0:30), ΌΚΚ-1 крысы (8ЕО ΙΌ N0:31), ΌΚΚ-1 мыши (8ЕО ΙΌ N0:33) и ΌΚΚ-1 кролика (8ЕО ΙΌ N0:32).

Согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1 или связывающий фрагмент указанного антитела, аминокислотной последовательностью ЬСОК1 которого является 8Е0 ΙΌ N0:5, аминокислотной последовательностью ЬСОК2 которого является 8Е0 ΙΌ N0:47, аминокислотной последовательностью ЬСОК3 которого является 8Е0 ΙΌ N0:49, аминокислотной последовательностью НСОК1 которого является 8Е0 ΙΌ N0:1, аминокислотной последовательностью НСОК2 которого является 8Е0 ΙΌ N0:2 и аминокислотной последовательностью НСОК3 которого является 8Е0 ΙΌ N0:44.

Также согласно настоящему изобретению предложена фармацевтическая композиция, содержащая сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающий фрагмент согласно настоящему изобретению и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент.

Согласно настоящему изобретению предложен способ заживления кости, включающий введение сконструированного человеческого антитела к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающего фрагмента согласно настоящему изобретению. Также согласно настоящему изобретению предложен способ лечения рака, включающий введение сконструированного человеческого антитела к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающего фрагмента согласно настоящему изобретению, при этом рак выбран из группы, состоящей из множественной миеломы, рака молочной железы и немелкоклеточного рака легкого.

Согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающий фрагмент согласно описанному в настоящем документе, причем значение Κά составляет менее 1,5х10^-11 М по отношению к ΌΚΚ-1 человека (8ЕЦ ΙΌ N0:29). В более предпочтительном варианте согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающий фрагмент, значение Κά для которых составляет менее 1,0х 10^-11 М по отношению к ΌΚΚ-1 человека (8ЕЦ ΙΌ N0:29). В более предпочтительном варианте согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающий фрагмент, значение Κά для которого составляет менее 5,0х10^-12 М по отношению к ΌΚΚ-1 человека (8ЕЦ ΙΌ N0:29). В более предпочтительном варианте согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающий фрагмент, значение Κά для которых находится в интервале от 0,5х10^-12 до 1,5х10^-11 М по отношению к ΌΚΚ-1 человека (8ЕЦ ΙΌ N0:29). В более предпочтительном варианте согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающий фрагмент, значение Κά для которых находится в интервале от 1,0х10^-12 до 1,0х10^-11 М по отношению к

- 1 021401

ΌΚΚ-1 человека (8ЕЦ ΙΌ N0:29). Значения Κά устанавливают посредством равновесного связывания при 37°С, как описано в примере 2.

Также согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с описанным в настоящем документе, значение Κά для которых составляет менее 5,0х10^-11 М по отношению к ΌΚΚ-1 человека (8ЕО ГО N0:29), ΌΚΚ-1 яванского макака (8ЕО ГО N0:30), ΌΚΚ-1 крысы (8ЕО ГО N0:31), ΌΚΚ-1 мыши (8Е0 ГО N0:33) и ΌΚΚ-1 кролика (8Е0 ГО N0:32). В более предпочтительном варианте согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающий фрагмент, значение Κά для которого составляет менее 3,0х10^-11 М по отношению к ΌΚΚ-1 человека (8Е0 ГО N0:29), ΌΚΚ-1 яванского макака (8Е0 ГО N0:30), ΌΚΚ-1 крысы (8Е0 ГО N0:31), ΌΚΚ-1 мыши (8ЕЦ ГО N0:33) и ΌΚΚ-1 кролика (8Е0 ГО N0:32). В еще более предпочтительном варианте согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающий фрагмент, значение Κά для которых составляет менее 2,0х10^-11 М по отношению к ΌΚΚ-1 человека (8Е0 ГО N0:29), ΌΚΚ-1 крысы (8Е0 ГО N0:31) и ΌΚΚ-1 мыши (8Е0 ГО N0:33). В более предпочтительном варианте согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающий фрагмент, значение Κά для которых находится в интервале от 1,0х10^-11 до 5,0х10^-11 М по отношению к ΌΚΚ-1 человека (8ЕО ГО N0:29), ΌΚΚ-1 яванского макака (8ЕО ГО N0:30), ΌΚΚ-1 крысы (8ЕО ГО N0:31), ΌΚΚ-1 мыши (8Е0 ГО N0:33) и ΌΚΚ-1 кролика (8Е0 ГО N0:32). В дополнительном предпочтительном варианте согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающий фрагмент, значение Κά для которых находится в интервале от 1,5х10^-11 до 3,0х10^-11 М по отношению к ΌΚΚ-1 человека (8ЕО ГО N0:29), ΌΚΚ-1 крысы (8ЕО ГО N0:31) и ΌΚΚ-1 мыши (8Е0 ГО N0:33). Значения Κά устанавливают посредством равновесного связывания при 37°С, как описано в примере 2.

В более предпочтительном варианте согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающий фрагмент, включающее ЬСУК, которая содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:14, и НСУК, которая содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:12, при этом значение Κά для указанного сконструированного человеческого антитела к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающего фрагмента составляет менее 3,0х10^-11 М по отношению к ΌΚΚ-1 человека (8Е0 ГО N0:29), ΌΚΚ-1 яванского макака (8Е0 ГО N0:30), ΌΚΚ-1 крысы (8ЕО ГО N0:31), ΌΚΚ-1 мыши (8ЕО ГО N0:33) и ΌΚΚ-1 кролика (8ЕО ГО N0:32). В дополнительном предпочтительном варианте согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающий фрагмент, включающее ЬСУК, которая содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:14, и НСУК, которая содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:12, причем значение Κά для указанного сконструированного человеческого антитела к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающего фрагмента составляет менее 2,5х10^-11 М по отношению к ΌΚΚ-1 человека (8Е0 ГО N0:29), ΌΚΚ-1 яванского макака (8Е0 ГО N0:30), ΌΚΚ-1 крысы (8ЕО ГО N0:31), ΌΚΚ-1 мыши (8ЕО ГО N0:33) и ΌΚΚ-1 кролика (8ЕО ГО N0:32). В более предпочтительном варианте согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающий фрагмент, которое включает ЬСУК, которая содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:14, и НСУК, которая содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:12, причем значение Κά для указанного сконструированного человеческого антитела к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающего фрагмента составляет менее 2,0х10^-11 М по отношению к ΌΚΚ-1 человека (8Е0 ГО N0:29), ΌΚΚ-1 яванского макака (8Е0 ГО N0:30), ΌΚΚ-1 крысы (8Е0 ГО N0:31), ΌΚΚ-1 мыши (8Е0 ГО N0:33) и ΌΚΚ-1 кролика (8Е0 ГО N0:32). В дополнительном предпочтительном варианте согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающий фрагмент, включающее ЬСУК, которая содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:14, и НСУК, которая содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:12, причем значение Κά для сконструированного человеческого антитела к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающего фрагмента находится в интервале от 0,5х10^-12 до 3,0х10^-11 М по отношению к ΌΚΚ-1 человека (8Е0 ГО N0:29), ΌΚΚ-1 яванского макака (8Е0 ГО N0:30), ΌΚΚ-1 крысы (8ЕО ГО N0:31), ΌΚΚ-1 мыши (8ЕО ГО N0:33) и ΌΚΚ-1 кролика (8ЕО ГО N0:32). В более предпочтительном варианте согласно настоящему-изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающий фрагмент, включающее ЬСУК, которая содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:14, и НСУК, которая содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:12, причем значение Κά для сконструированного человеческого антитела к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающего фрагмента находится в интервале от 1,0х10^-12 до 2,5х10^-11 М по отношению к ΌΚΚ-1 человека (8Е0 ГО N0:29), ΌΚΚ-1 яванского макака (8Е0 ГО N0:30), ΌΚΚ-1 крысы (8Е0 ГО N0:31), ΌΚΚ-1 мыши (8Е0 ГО N0:33) и ΌΚΚ-1 кролика (8Е0 ГО N0:32). Значения Κά устанавливают посредством равновесного связывания при 37°С, как описано в примере 2.

- 2 021401

Согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающий фрагмент, которое включает вариабельную область легкой цепи (ЬСУК) и вариабельную область тяжелой цепи (НСУК), причем ЬСУК содержит гипервариабельные участки (СИКк) 1.С1)Н1. ЕС1Ж2 и 1.С1)1С. а НСУК содержит С1Ж НСОН1. 11С1Ж2 и НСИКЗ, при этом ЬСЭК1 имеет аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:5, НСГОК1 имеет аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0:1 и НСГОК2 имеет аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:2.

Согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающий фрагмент, аминокислотной последовательностью ЬСЭК1 в составе которого является 8ЕЦ ГО N0:46, аминокислотной последовательностью ЬСЭК2 является 8ЕС ГО N0:48, аминокислотной последовательностью ЬСИКЗ является 8ЕЦ ГО N0:50, аминокислотной последовательностью НСГОК1 является 8ЕЦ ГО N0:1, аминокислотной последовательностью НСГОК2 является 8ЕС ГО N0:43 и аминокислотной последовательностью НСГОКЗ является 8ЕЦ ГО N0:45.

Согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающий фрагмент, аминокислотной последовательностью ЬСЭК1 в составе которого является 8ЕЦ ГО N0:5, аминокислотной последовательностью ЬСЭК2 является 8ЕЦ ГО N0:47, аминокислотной последовательностью ЬСИКЗ является 8ЕЦ ГО N0:49, аминокислотной последовательностью НСГОК1 является 8ЕЦ ГО N0:1, аминокислотной последовательностью НСИК2 является 8ЕС ГО N0:2 и аминокислотной последовательностью НСИКЗ является 8ЕЦ ГО N0:44.

Согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающий фрагмент, аминокислотной последовательностью ЬСЭК1 в составе которого является 8ЕЦ ГО N0:5, а аминокислотная последовательность ЬСЭК2 выбрана из группы 8ЕС ГО N0:6, 8ЕС ГО N0:8 и 8ЕЦ ГО N0:10, аминокислотная последовательность ЬСИКЗ выбрана из группы 8ЕС ГО N0:7 и 8ЕЦ ГО N0:9, аминокислотной последовательностью НСГОК1 является 8ЕС ГО N0:1, аминокислотной последовательностью НСИК2 является 8ЕЦ ГО N0:2 и аминокислотная последовательность НСИКЗ выбрана из группы 8ЕЦ ГО N00 и 8ЕЦ ГО N0:4.

Предпочтительно согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающий фрагмент, аминокислотные последовательности ЬСЭК1, ЬСИК2, ЬСИКЗ, НСЭК1, НСИК2 и НСИКЗ в составе которого выбраны из группы, состоящей из:

(ί) ЬСЭК1 имеет аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:5, ЬСЭК2 имеет аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:6, ЬСИКЗ имеет аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0:7, НСГОК1 имеет аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:1, НСИК2 имеет аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:2 и НСГОКЗ имеет аминокислотную последовательность 8ЕС) ГО N00;

(и) ЬСЭК1 имеет аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:5, ЬСЭК2 имеет аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:8, ЬСИКЗ имеет аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0:7, НСГОК1 имеет аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:1, НСИК2, имеет аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:2 и НСГОКЗ имеет аминокислотную последовательность 8ЕС) ГО N0:4;

(ίίί) ЬСЭК1 имеет аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:5, ЬСЭК2 имеет аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:6, ЬСИКЗ имеет аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0:9, НСГОК1 имеет аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:1, НСГОК2 имеет аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:2 и НСГОКЗ имеет аминокислотную последовательность 8ЕС) ГО N00;

(ίν) ЬСЭК1 имеет аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:5, ЬСЭК2 имеет аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:10, ЬСИКЗ имеет аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0:9, НСГОК1 имеет аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:1, НСГОК2 имеет аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:2 и НСГОКЗ имеет аминокислотную последовательность 8ЕС) ГО N00

Согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающий фрагмент, в котором ЬСУК содержит аминокислотную последовательность 8ЕС ГО N0:52 и НСУК содержит аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:51.

Предпочтительно согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающий фрагмент, в котором ЬСУК содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы 8ЕЦ ГО N0:^, 8ЕЦ ГО N0:14, 8ЕЦ ГО N0:15 и 8ЕС) ГО N0:16.

Предпочтительно согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающий фрагмент, в котором НСУК содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы 8ЕЦ ГО N0:11 и 8ЕЦ ГО N0:12.

Предпочтительно согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающий фрагмент, в котором ЬСУИ и НСУИ содержат последовательности аминокислот, выбранные из группы, состоящей из:

(ί) ЬСУК, которая содержит аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:13, и НСУК, которая содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:11;

(ίί) ЬСУК, которая содержит аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:14, и НСУК, которая содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:12;

(ίίί) ЬСУК, которая содержит аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:15, и НСУК, которая содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:11;

(ίν) ЬСУК, которая содержит аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:16, и НСУК, которая содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:11.

Предпочтительно согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающий фрагмент, которые включают ЬСУК, содержащую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:14, и НСУК, содержащую аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:12.

Предпочтительно согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1, причем указанное антитело включает легкую цепь, при этом указанная легкая цепь содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы 8Е0 ГО N0:19, 8ЕЦ ГО N0:20, 5ΙΤ) ГО N0:21 и 5ЕО ГО N0:22.

Предпочтительно согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1, причем антитело включает тяжелую цепь, при этом указанная тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы 8Е0 ГО N0:17 и 8ЕЦ ГО N0:18.

Более предпочтительно согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1, которое содержит аминокислотные последовательности легкой цепи и тяжелой цепи, которые выбраны из группы, состоящей из:

(ί) тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:17, и легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:19;

(ίί) тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:18, и легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:20;

(ίίί) тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:17, и легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:21; и (ίν) тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:17, и легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:22.

Предпочтительно согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1, включающее две легкие цепи, причем каждая из указанных легких цепей содержит аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:19, и две тяжелые цепи, причем каждая из указанных тяжелых цепей содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:17.

Предпочтительно согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1, включающее две легкие цепи, причем каждая из указанных легких цепей содержит аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:21, и две тяжелые цепи, причем каждая из указанных тяжелых цепей содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:17.

Предпочтительно согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1, включающее две легкие цепи, причем каждая из указанных легких цепей содержит аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:22, и две тяжелые цепи, причем каждая из указанных тяжелых цепей содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:17.

Предпочтительно согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1, включающее две легкие цепи, причем каждая из указанных легких цепей содержит аминокислотную последовательность 8ЕЦ ГО N0:20, и две тяжелые цепи, причем каждая из указанных тяжелых цепей содержит аминокислотную последовательность 8Е0 ГО N0:18.

Также настоящее изобретение предусматривает антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые конкурируют со сконструированным человеческим антителом к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающим фрагментом настоящего изобретения за связывание с ДКК-1 человека (8ЕЦ ГО N0:29), как определено с помощью анализа конкуренции антител.

Также согласно настоящему изобретению предложена фармацевтическая композиция, содержащая сконструированное человеческое антитело согласно настоящему изобретению к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающий фрагмент и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент.

Кроме того, согласно настоящему изобретению предложена фармацевтическая композиция, содержащая сконструированное человеческое антитело согласно настоящему изобретению к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающий фрагмент и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент и, возможно, другие терапевтические компоненты.

В другом своем аспекте настоящее изобретение обеспечивают способ заживления кости, включающий введение сконструированного человеческого антитела к ΌΚΚ-1 согласно настоящему изобретению

- 4 021401 или его антигенсвязывающего фрагмента.

В другом своем аспекте настоящее изобретение обеспечивает способ лечения рака, включающий введение сконструированного человеческого антитела к ΌΚΚ-1 согласно настоящему изобретению или его антигенсвязывающего фрагмента, при этом рак предпочтительно выбран из группы, состоящей из множественной миеломы, рака молочной железы и немелкоклеточного рака легкого.

Далее, согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающий фрагмент, предназначенный для применения в ходе терапии. Предпочтительно согласно настоящему изобретению предложено сконструированное человеческое антитело к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающий фрагмент, предназначенный для применения при лечении для заживлении кости или для лечения рака, причем рак предпочтительно выбран из группы, состоящей из множественной миеломы, рака молочной железы и немелкоклеточного рака легкого.

Далее, согласно настоящему изобретению предложено применение сконструированного человеческого антитела согласно настоящему изобретению к ΌΚΚ-1 или его антигенсвязывающего фрагмента для производства лекарственного средства, предназначенного для терапии, для заживления кости или лечения рака, причем рак предпочтительно выбран из группы, состоящей из множественной миеломы, рака молочной железы и немелкоклеточного рака легкого.

Определения.

Полноразмерное антитело, аналогичное существующему в природе в форме молекулы иммуноглобулина, содержащее 2 тяжелые (Н) и 2 легкие (Ь) цепи, соединенные между собой с помощью дисульфидных связей. Ν-концевая часть каждой цепи содержит вариабельную область, длина которой составляет 100-110 аминокислот, основной функцией которой является распознавание антигена с помощью гипервариабельных участков (ΟΌΚκ), входящих в ее состав. С-концевая часть каждой цепи определяет константную область, которая в основном ответственна за эффекторную функцию.

Участки ΟΌΚκ чередуются с областями, обладающими большей консервативностью, обозначаемые как каркасные участки (РК). Каждая вариабельная область легкой цепи (ЬСУК) и вариабельная область тяжелой цепи (НСУК) состоит из трех СОК и четырех РК, расположенных в направлении от Ν-конца к С-концу в следующем порядке: РК1, СГОКЕ РК2, СГОК2. РК3, СГОК3. РК4. Три участка СОК в составе легкой цепи обозначают как ЬСПК1, ЬСПК2 и ЬСОКЗ, а три участка СОК в составе тяжелой цепи обозначают как НСГОКЕ НСГОК2 и НСГОКЗ. Участки СОК содержат большую часть остатков, образующих специфические взаимодействия с антигеном. Нумерация и расположение аминокислотных остатков СОК в пределах областей ЬСУК и НСУК соответствует широко известному способу нумерации по 1<аЬа1.

Легкие цепи подразделяют на каппа или лямбда по признаку наличия определенных константных областей, как известно в данной области. Тяжелые цепи подразделяют на гамма, мю, альфа, дельта или эпсилон, что определяет изотип антитела: 1§О, 1дМ, 1§А, Ι§ϋ или 1дЕ соответственно. Антитела 1§О дополнительно подразделяют на подклассы, например Ι§Ο1, 1дО2, Ι§Ο3, Ι§Ο4. Для каждого типа тяжелой цепи характерно наличие константной области определенного типа, последовательности которых хорошо известны в данной области.

Термин моноклональное антитело (МаЪ), при употреблении в настоящем описании, относится к антителу, которое получили из одной копии или клона, включая, например, любой клон эукариот, прокариот или фагов, но не к способу получения антитела. Моноклональные антитела согласно настоящему изобретению находятся предпочтительно в гомогенной или по существу гомогенной популяции. Полноразмерные моноклональные антитела содержат две тзгжелые цепи и две легкие цепи. Антигенсвязывающие фрагменты указанных моноклональных антител включают, например, РаЪ-фрагменты, РаЪ'-фрагменты, Р(аЪ')₂-фрагменты и одноцепочечные Ρν-фрагменты. Моноклональные антитела согласно настоящему изобретению и их антигенсвязывающие фрагменты можно получать, например, с помощью методик рекомбинации, фагового отображения, методик синтеза, например СОК-графтинга, или комбинации указанных методик или с помощью других методик, известных в данной области. Например, возможно проведение иммунизации мыши с помощью ΌΚΚ-1 человека или его фрагментов с последующим извлечением и очисткой полученных антител и определение, обладают ли они функциональными свойствами, сходными или аналогичными свойствам антител, описанных в настоящем документе, возможно с применением способов, описанных ниже, в примерах. Антигенсвязывающие фрагменты также можно получать с помощью стандартных способов. Способы получения и очистки антител и антигенсвязывающих фрагментов хорошо известны в данной области, и их описание можно найти, например, в Наг1о\у аиб Ьаие (1988), АпйЪоб1е8, А ЬаЪогаЮгу Мапиа1, Со1б 8ргшд НагЪог ЬаЪогаЮгу Рге88, Со1б 8ргшд НагЪог, №ν Уогк, скар1ег8 5-8 апб 15, ΙδΒΝ 0-87969-314-2.

Выражение химерное антитело относится к антителу, содержащему домены, полученные от разных видов (обычно от двух видов). Антитело У представляет собой химерное антитело, вариабельные области легкой цепи и тяжелой цепи, в составе которого содержатся остатки, полученные из антитела мыши, тогда как константная область легкой цепи содержит остатки, образующие легкую каппа-цепь антитела крысы, а константная область тяжелой цепи содержит остатки из состава антитела 1§О1 крысы. Антитело У представляет собой химеру мыши/крысы и применяется для исследований по снижению вероятности иммунного ответа в долгосрочных преклинических моделях.

- 5 021401

Выражение сконструированные человеческие антитела относится к моноклональным антителам, обладающим связывающими и функциональными свойствами согласно настоящему изобретению и содержащим каркасные области полностью или в существенной степени соответствующие каркасным областям человека, окружающие участки СИК, полученные из антитела, не являющегося человеческим антителом. Антигенсвязывающие фрагменты указанных сконструированных человеческих антител включают, например, РаЪ-фрагменты, РаЪ'-фрагменты, Р(аЬ')₂-фрагменты и одноцепочечные Ρν-фрагменты. Выражение каркасная область или каркасная последовательность относится к любой из каркасных областей с 1 по 4. Сконструированные человеческие антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, входящие в объем настоящего изобретения, включают молекулы, любая из каркасных областей или более одной каркасной области 1-4 в составе которых целиком или в существенной степени представляют собой области молекул организма человека, т.е. предусматривается любая комбинация отдельных каркасных областей иммуноглобулина человека или каркасных областей, в существенной степени соответствующих областям 1-4 иммуноглобулина человека. Например, указанное определение включает молекулы, в составе которых каркасная область 1 и каркасная область 2, каркасная область 1 и каркасная область 3, каркасная область 1, 2, 3 и т.д., представляют собой целиком или в существенной степени каркасные области иммуноглобулина человека. Каркасными областями, которые в существенной степени соответствуют каркасным областям человека, являются каркасные области, обладающие по меньшей мере приблизительно 80% идентичности известной каркасной последовательности зародышевой линии человека. Предпочтительно каркасные области, которые в существенной степени соответствуют каркасным областям человека, обладают по меньшей мере приблизительно 85%, приблизительно 90%, приблизительно 95% или приблизительно 99% идентичности известной каркасной последовательности зародышевой линии человека.

Полноразмерными каркасными областями человека являются каркасные области, идентичные известной каркасной последовательности зародышевой линии человека. Каркасные последовательности зародышевой линии человека можно получить в 1тМипоСеиеТ1С8 (ΙΜΟΤ) через их сайт ЬЬр://1тд!.с1пе8.Гт или в ТЬе 1ттипод1оЪиЬп РасШВоок Ьу Мапе-Раи1е ЬеГгаис апй Сегагй ЬеРгапс, Лсайетю Рте88, 2001, ΙδΒΝ 012441351. Например, зародышевые каркасные области легкой цепи можно выбирать из группы, состоящей из А11, А17, А18, А19, А20, А27, А30, Ь1, Ь11, Ь12, Ь2, Ь5, Ь15, Ьб, Ь8, 012, 02 и 08, зародышевые каркасные области тяжелой цепи можно выбирать из группы, состоящей из УН2-5, УН2-26, УН2-70, УН3-20, УН3-72, УН1-46, УН3-9, УН3-66, УН3-74, УН4-31, УН1-18, УН1-69, У1-13-7, УН3-11, УН3-15, УН3-21, УН3-23, УН3-30, УН3-48, УН4-39, УН4-59 и УН5-51.

Сконструированные человеческие антитела, обладающие функциональными сходными свойствами согласно настоящему изобретению, в дополнение к описанным в настоящем документе, можно получать с помощью нескольких различных способов. Отдельные соединения на основе антител, описанные в настоящем документе, можно применять в качестве матриц или родительских соединений на основе антител для получения дополнительных соединений на основе антител. В соответствии с одним подходом СИК из состава родительского соединения на основе антитела трансплантируют в каркасную область человека, последовательность которой обладает высокой идентичностью с каркасной областью родительского соединения на основе антитела. Идентичность последовательностей полученной каркасной области обычно будет составлять по меньшей мере приблизительно 80%, по меньшей мере приблизительно 85%, по меньшей мере приблизительно 90%, по меньшей мере приблизительно 95% или по меньшей мере приблизительно 99% идентичности соответствующей каркасной области в составе родительского вещества на основе антитела. Подобная трансплантация может приводить к снижению аффинности связывания по сравнению с родительским антителом. В таком случае можно осуществить обратный процесс мутации каркасной области к родительскому варианту в отдельных положениях на основе определенных критериев, описанных Онееп е! а1. (1991), Ргос. №И. Асай. 8с1. И8А, 88:2869. Дополнительные публикации, описывающие способы, полезные при гуманизировании антител мыши, включают патенты США № 4816397; 5225539 и 5693761; компьютерные программы АВМ0И и ЕЖ’АО согласно описанному в ^еν^й (1983), 1. Мо1. Вю1. 168:595-620; и способ ХУиНег и его коллег (1опе8 е! а1. (1986), №йиге. 321:522-525; ШесЬтапп е! а1. (1988), №-11иге. 332:323-327 апй УетЬоеуеп е! а1. (1988), §аепсе, 239:1534-1536.

Определение остатков для проведения обратной мутации можно проводить следующим способом.

Если аминокислота попадает в следующую категорию, присутствующую аминокислоту каркасной области зародышевой последовательности человека (каркасной области - акцептора) заменяют на аминокислоту каркасной области родительского антитела (каркасной области - донора):

(a) аминокислота каркасной области человека в составе каркасной области - акцептора является необычной для каркасных областей человека в данном положении, тогда как соответствующая аминокислота в составе молекулы иммуноглобулина - донора является типичной для каркасных областей человека в данном положении;

(b) аминокислота в данном положении непосредственно примыкает к одному из СИК или (c) любой атом боковой цепи каркасной области находится на расстоянии приблизительно 5-6 ангс- 6 021401 тремов (от центра до центра) от любого атома аминокислоты в составе СЭР в трехмерной модели иммуноглобулина.

Если каждая из аминокислот в составе каркасной области человека каркасной области - акцептора и соответствующая аминокислота в составе каркасной области - донора является в общем случае необычной для каркасных областей человека в данном положении, указанную аминокислоту можно заменить на аминокислоту, являющуюся типичной для каркасных областей человека в данном положении. Приведенный критерий обратной мутации позволяет восстанавливать активность родительского соединения на основе антитела.

Другой подход для получения сконструированных человеческих антител, проявляющих функциональные свойства, сходные с антителами, описанными в настоящем документе, включает внесение случайных мутаций в аминокислоты в пределах трансплантированных участков СОК без изменения каркасной области и скрининг полученных молекул по признаку аффинности связывания и других функциональных свойств, аналогичных или лучших, чем свойства родительских соединений на основе антител. Также можно вносить одиночные мутации в каждом аминокислотном положении каждого участка СОК с последующим измерением действия внесенных мутаций на аффинность связывания или функциональные свойства. Одиночные мутации, приводящие к улучшению свойств, можно сочетать для измерения их воздействия в комбинациях.

Кроме того, возможно сочетание обоих приведенных выше подходов. После трансплантации СОК, можно проводить обратную мутацию определенных каркасных областей в дополнение к внесению замен аминокислот в участки СОК. Данная методика описана в Щи е! а1. (1999), 1. Μοί. ΒίοΙ. 294:151-162.

При реализации настоящего изобретения специалист в данной области может применять обычные методики, например сайт-направленный мутагенез, для замены аминокислот в составе описанных в настоящем документе СОК и каркасных последовательностей и, следовательно, создать доступные для дальнейшего применения аминокислотные последовательности вариабельной области, полученные на основе последовательностей, приведенных в настоящем документе. Все альтернативные аминокислоты, встречающиеся в природе, можно вносить в определенный сайт замены. Затем способы, описанные в настоящем документе, можно применять для скрининга указанных дополнительных последовательностей вариабельной области для определения последовательностей, обладающих указанной активностью ίη νίνο. Следовательно, в соответствии с настоящим изобретением можно определять дополнительные последовательности, подходящие для получения сконструированных человеческих антител и их антигенсвязывающих фрагментов. Предпочтительно количество замен аминокислот в составе каркасной области ограничивают в пределах одного, двух или трех положений в составе одной или более из четырех каркасных областей легкой цепи и/или тяжелой цепи, описанных в настоящем документе. Предпочтительно количество замен аминокислот в составе СОК ограничивают в пределах одного, двух или трех положений в составе одного или более из трех участков СОК легкой цепи и/или тяжелой цепи. Также возможны комбинации различных замен в составе указанных каркасных областей и участков СОК, описанных выше. Наиболее предпочтительно указанные методики применяют для получения дополнительных аминокислотных последовательностей вариабельной области на основе аминокислотных последовательностей вариабельных областей тяжелой и легкой цепей, соответствующих 8ЕС ГО N0:12 и 8ЕС ГО N0:14 соответственно.

Сконструированные человеческие антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, конкурирующие с молекулами, описанными в настоящем документе, представляют собой молекулы, связывающие ΌΚΚ-1 человека (8ЕС ГО N0:29) в сайте (сайтах), идентичных или перекрывающихся с сайтом (сайтами), с которыми связывается молекула согласно настоящему изобретению. Конкурирующие сконструированные человеческие антитела или их антигенсвязывающие фрагменты можно определить, например, с помощью конкурентного анализа связывания. Например, образец или очищенный или частично очищенный ΌΚΚ-1 человека (8ЕС ГО N0:29) закрепляют на твердой подложке. После этого добавляют антитело, описанное в настоящем документе, и исследуемое моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент с внесением метки либо в исследуемое антитело, либо в антитело согласно настоящему изобретению. Если меченое антитело и антитело без метки связываются с разными и отдельными сайтами на ΌΚΚ-1, уровень связывания меченого антитела будет одинаковым, независимо от присутствия потенциально конкурирующего антитела. Но если сайты взаимодействия идентичны или перекрываются. Немеченное антитело будет конкурировать за них, и количество меченого антитела, связавшегося с антигеном, будет понижено. Если немеченное антитело присутствует в избытке, меченое антитело вообще не будет связываться с мишенью. Для целей настоящего изобретения к конкурирующим сконструированным человеческим антителам или их антигенсвязывающим фрагментам относят молекулы, снижающие связывание антител согласно настоящему изобретению с ΌΚΚ-1 приблизительно на 50%, приблизительно на 60%, приблизительно на 70%, приблизительно на 80%, приблизительно на 85%, приблизительно на 90%, приблизительно на 95% или приблизительно на 99%. Детали способов проведения указанных конкурентных анализов хорошо известны в данной области, и их можно найти, например, в Наг1о\у апб Ьапе (1988), АпНЬоФез, А ЬаЬота1огу Мапиа1, Со1б §ртшд НагЬог ЬаЬота1огу Ргезз, Со1б δρτίη§ НагЬог, №\у Уогк, радез 567-569, I§ΒN 0-87969-314-2. Указанные способы анализа можно прово- 7 021401 дить в количественной форме путем применения очищенных антител. Стандартную кривую строят путем титрования одного антитела с его меченой версией. Титруют способность немеченного конкурирующего моноклонального антитела или его антигенсвязывающего фрагмента ингибировать связывание меченой молекулы с планшетом. Результаты наносят на график и сравнивают концентрации, требуемые для достижения целевой степени ингибирования связывания. Обладают ли моноклональные антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, конкурирующие со сконструированными человеческими антителами согласно настоящему изобретению или с их антигенсвязывающими фрагментами, аналогичными или сходными функциональными свойствами со сконструированными человеческими антителами согласно настоящему изобретению, можно определить с помощью способов, описанных в примерах в настоящем документе.

Термин ингибирует обозначает способность в значительной степени антагонизировать, препятствовать, предотвращать, ограничивать, замедлять, прерывать, устранять, останавливать, снижать или обращать вспять биологическое действие ΌΚΚ-1.

Термин лечение (или лечить, или подвергать лечению) относится к процессам, включающим замедление, прерывание, прекращение, контроль, остановку, снижение или обращение вспять развития или тяжести симптоматики, нарушения, состояния или заболевания, но не обязательно обозначает полное устранение всех симптомов, состояний или нарушений, связанных с активностью ΌΚΚ-1.

Термин предотвращение (или предотвращать) обозначает подавление, сдерживание или ингибирование частоты возникновения симптома, нарушения, состояния или заболевания. Возможно лечение или предотвращение острых приступов или хронических заболеваний. В случае острых приступов антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят при появлении симптома, нарушения, состояния или заболевания и прекращают после окончания острого приступа. Напротив, хронический симптом, нарушение, состояние или заболевание подвергают лечению в течение более продолжительного времени.

Термин эффективное количество относится к количеству или дозе соединения на основе антитела согласно настоящему изобретению, которое, в ходе однократного или многократного введения пациенту, обеспечивает целевое лечение или предотвращение. Терапевтически эффективные количества соединений на основе антитела согласно настоящему изобретению могут находиться в интервале приблизительно от 0,1 приблизительно до 20 мг/кг для однократной дозы. Терапевтически эффективное количество для любого отдельного пациента может установить специалист, обеспечивающий медицинское обслуживание, путем отслеживания действия соединений на основе антител на биологический маркер.

Термин заживление кости относится к стимуляции образования кости в областях повреждения путем блокирования ΌΚΚ-1. Примеры заживления кости включают, но не ограничиваются заживлением трещины, закреплением/удерживанием имплантата и закреплением/удерживанием зубного имплантата.

Сконструированные человеческие антитела согласно настоящему изобретению можно применять в качестве лекарственных средств в медицине человека при введении различными способами.

В наиболее предпочтительном варианте указанные композиции предназначают для парентерального введения. Указанные фармацевтические композиции можно получать различными способами, хорошо известными в данной области (см., например, РепипДоп: Тйе 8с1еисе апй Ргасйсе οί РЬагтасу, 19* ей. (1995), А. Оеппаго е1 а1., Маск РиЪИкЫпд Со.), и включать в их состав сконструированные человеческие антитела согласно настоящему изобретению и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент.

Результаты анализов, приведенные ниже, показывают, что моноклональные антитела согласно настоящему изобретению и их антигенсвязывающие фрагменты эффективны в качестве ингибиторов ΌΚΚ1. Антитела согласно настоящему изобретению обладают рядом желательных свойств. Например, антитело II согласно настоящему изобретению обладает повышенной химической и физической стабильностью, а также растворимостью. Ускоренные испытания проводят для измерения химической стабильности антител путем инкубирования антител согласно настоящему изобретению в различных буферных условиях (при различных значения рН и концентрациях ЫаС1) и инкубирования при 4, 25 и 40°С в течение 4 недель. Химические модификации антител согласно настоящему изобретению определяют с помощью катионнообменной хроматографии (СЕХ) для разделения заряженных вариантов (например, дезаминирование аспарагина до аспарагиновой кислоты) и анализа на жидкостном хроматографе/массспектрографе (ЬС-М8) для установления определенных сайтов расщепления. Для антитела II с помощью СЕХ показали наименьшее количество расщепления, и данные, полученные с помощью ЬС-М8, показывающие, что все три остатка аспарагина в составе участков СОК имели наименьшую степень дезаминирования по сравнению с другими антителами, описанными в настоящем документе, после 4 недель инкубирования при 40°С в буфере, значение рН которого составляло 8, подтвердили полученные результаты. Растворимость антитела II является более подходящей по сравнению с антителом I при нахождении при рН 6 + 150 мМ ЫаС1. Более того, антитело II сохраняло растворимость >105 мг/мл при хранении при 4°С, тогда как растворимость антитела I составляла только 48 мг/мл, и оно образовывало осадок в тех же условиях. Обозначение ЕС₅₀, используемое в настоящем описании, относится к концентрации агента, производящей 50% ответа, максимально возможного для указанного агента. 1<й относится к равновес- 8 021401 ной константе диссоциации, которую можно подсчитать по формуле: к_о££/к_оп=Кб.

Пример 1.

Получение антител.

Антитела I, II, III и IV можно получать и очищать следующим способом. Соответствующую клеткухозяина, например НЕК 293 ΕΒΝΑ или СНО, временно или стабильно трансфицируют с помощью системы экспрессии, предназначенной для выработки антител с применением предварительно установленного оптимального векторного соотношения НС:ЬС или с помощью простой векторной системы, кодирующей как НС, например 8ЕЦ ГО N0:23 или §ЕЦ ГО N0:24, так и ЬС, например 8ЕЦ ГО N0:25, 8Е0 ГО N0:26, §ЕЦ ГО N0:27 или §ЕЦ ГО N0:28. Очищенную среду, в которую происходит выработка антитела, получают с помощью любой из обычно применяемых методик. Например, среду удобно пропускать через колонку с белком А или РР колонку с О-сефарозой, уравновешенную с помощью соответствующего буфера, например фосфатно-солевого буфера (рН 7,4). Колонку промывают для удаления неспецифических связывающих компонентов. Связанное антитело элюируют, например, с помощью градиента рН (например, 0,1 М натрий-фосфатный буфер, рН 6,8 с 0,1 М натрий-цитратным буфером, рН 3,0). Определяют фракции антитела, например, с помощью 8И8-РАОЕ и после этого объединяют. Дальнейшая очистка является необязательной, в зависимости от целевого назначения. Антитело можно концентрировать и/или стерильно фильтровать с помощью обычных методик. Растворимые агрегаты и мультимеры можно эффективно удалять с помощью обычных методик, включая эксклюзионную хроматографию, гидрофобные взаимодействия, ионнообменую или гидроксиапатитную хроматографию. Степень чистоты антитела после всех перечисленных этапов хроматографии составляет более 99%. Продукт можно незамедлительно подвергнуть заморозке при -70°С или лиофилизировать. Аминокислотные последовательности указанных антител приведены ниже.

8ЕО ГО N05

Антитело	Тяжелая Цепь	Легкая Цепь	НОТЕ	БОТЕ
I	17	19	11	13
II	18	20	12	14
III	17	21	11	15
IV	17	22	11	16
V	35	34	37	36

Антитело	НСОК1	НСЦЕ2	нсокз	ЬС0Е1	ЬСОК2	ьсикз
I	1	2	3	5	6	7
II	1	2	4	5	8	7
III	1	2	3	5	6	9
IV	1	2	3	5	10	9
V	1	38	39	40	41	42

Пример 2.

Измерения аффинности (Кб) антител, направленных против ИКК-1.

Для достижения равновесного связывания антитело в не меняющейся концентрации смешивали с Н15-меченым ИКК-1 в различных концентрациях (ЗЕЦ ГО N0:29, ЗЕЦ ГО N0:30, ЗЕЦ ГО N0:31, 8Е0 ГО N0:32 или ЗЕЦ ГО N0:33) (в интервале 1 нМ-1 пМ) в ФСБ (рН 7,4) + 1 мг/мл бычьего сывороточного альбумина (БСА) или только с буфером и инкубировали в течение нескольких дней при 37°С. Ставили две серии реакций связывания, одну серию - с низкими концентрациями антитела (3 пМ) и одну серию - с высокими концентрациями антитела (30 или 50 пМ).

После установления равновесия применяли аппарат К1пЕхА 3000 (Зар1бупе ^51. Ше.) для исследования фракции свободного (несвязанного) антитела. Вкратце, Н15-меченый ИКК-1 ковалентно парно связывают с NНЗ-активированными бусинами для проточной хроматографии в Зерйаго5е 4 (ОЕ НеаНЪеаге), упакованные в аппарате с получением маленькой колонки. Предварительно уравновешенные смеси антитела + Н15-меченый ИКК-1 пропускали через бусины для захвата только свободного антитела. Количество свободного захваченного антитела пропорционально свободной концентрации в уравновешенных образцах, и его устанавливали путем введения второго антитела с флуоресцентной меткой. Наборы данных экспериментов с низкими и с высокими концентрациями антитела в целом подбирали с применением анализа п-кривой на программном обеспечении КшЕхА. Указанный подбор выдает значение Кб, а также 95% доверительный интервал.

- 9 021401

Таблица 1

Аффинность антитела II по отношению к ΌΚΚ-1 различных видов

Виды организмов, из которых получали ΌΚΚ-1	ка (пм)	9 5% доверительный интервал для КД (пМ)
Человек	3,3	1,4-7,5
Яванский макак	14	8,4-26
Крыса	8,4	3,9-23
Мышь	7,0	4,7-11
Кролик	17	11-27

Пример 3.

Активность антител, направленных против ΌΚΚ-1, в анализе с применением щелочной фосфатазы С2С12.

Классическая передача сигнала важна для дифференциации и активности остеобластов. \Уп1-3а СМ (кондиционированная среда) в комбинации с ВМР-4 стимулирует дифференциацию плюрипотентных клеток С2С12 мыши в остеобласты с заметным конечным показателем содержания щелочной фосфатазы (АР), маркера активности остеобластов. ΌΚΚ-1, ингибитор классической передачи сигнала \Уп1. ингибирует дифференциацию и образование АР. Нейтрализующие антитела к ΌΚΚ-1 предотвращают ингибирование АР, опосредованное ΌΚΚ-1. Антитела, блокирующие ингибиторную активность ΌΚΚ-1, предотвращают потерю активности АР.

Клетки С2С12 выращивают до плотности, составляющей 60-80%, в колбах для культивирования в среде для выращивания (модифицированная по способу Дульбекко среда Игла (ИМЕМ), содержащей Ь-глутамин, 10% термоинактивированной фетальной бычьей сыворотки (ФБС), 1х антибиотик/антимикотик, 1х пируват натрия). Клетки С2С12 ресуспендировали до концентрации, составлявшей 30000 клеток/мл, в среде для выращивания и вносили по 100 мкл/лунку на 96-луночный планшет для культуры ткани с последующей инкубацией в течение ночи при 37°С, 95% влажности, 5% СО₂. Среду для выращивания замещали 50 мкл среды для анализа (ИМЕМ, содержащая Ь-глутамин, 5% термоинактивированной ФБС, 1х антибиотик/антимикотик, 1х пируват натрия). Для стимуляции дифференциации (и, следовательно, индуцирования образования АР) добавляли по 100 мкл среды для анализа плюс 1,5х \Уп1-3а СМ + ВМР-4 (Κ&Ό §ук1етк са!а1одле #314-ВР). Таким образом достигали итоговых значений концентрации, составлявших концентрацию 1х \Уп1-3а СМ и 25 нг/мл для ВМР-4. Отрицательные контроли содержали только СМ Ь-клеток (без \Уп1-3а или ВМР-4). Клетки инкубировали при 37°С, 95% влажности, 5% СО₂ в течение 72 ч. Среду удаляли, клетки отмывали с помощью 200 мкл фосфатносолевого буфера (ФСБ), после чего ФСБ удаляли. Проводили 3 цикла замораживания/оттаивания клеток. В каждую лунку вносили по 100 мкл субстрата Опе-к!ер ρΝΡΡ (Тйегто Бшепййс са!а1одле #37621) и планшет инкубировали при комнатной температуре. Величину поглощения считывали при 405 нм. Для определения концентрации ΌΚΚ-1, необходимой для ингибирования дифференциации, молекулы ΌΚΚ-1, полученные из различных видов организмов, титровали для определения минимальной концентрации, требуемой для полного ингибирования индукции АР.

Минимальная концентрация ΌΚΚ-1 каждого вида, полностью ингибирующей индукцию АР, имела следующие значения: ΌΚΚ-1 человека = 38 нМ, ΌΚΚ-1 яванского макака = 11,4 нМ, ΌΚΚ-1 крысы = 5,8 нМ и ΌΚΚ-1 кролика = 25,0 нМ.

После определения концентрации ΌΚΚ-1, полностью ингибирующей индукцию АР, антитело, направленное против ΌΚΚ-1, в повышенных концентрациях предварительно инкубировали в среде для анализа с ингибиторной концентрацией ΌΚΚ-1 в течение 30 мин при комнатной температуре. Индукцию АР определяли с помощью способа, описанного выше. Результаты приведены в виде ЕС₅₀ (нМ ± стандартная ошибка).

Антитело II блокирует ингибирование щелочной фосфатазы С2С12, опосредуемое ΌΚΚ-1. ЕС₅₀(приведенные в виде нМ ± стандартная ошибка) для ΌΚΚ-1 различных видов составляли следующие значения: человека = 9,8±0,41, яванского макака = 6,4±0,25, крысы = 2,9±0,25 и кролика = 6,0±0,32.

Пример 4.

Анализ кортикального дефекта (СИ) ίη νίνο.

Проводили овариэктомию шестимесячных самок крыс линии Бргадие-ОаМеу и оставляли их для потери костной массы в течение двух месяцев. В правую и левую бедренные кости с помощью электрической дрели с 2 мм стоматологическим буром вносили повреждения, диаметр которых составлял 2 мм. Указанное отверстие проходит как через переднюю, так и через заднюю поверхности надкостницы. Заживление кости проверяли в продольном направлении путем измерения плотности костной массы (ВМИ) с применением количественно компьютерной томографии (цСТ) через 35 дней после операции. В конце эксперимента животных умерщвляли и бедренные кости целиком подвергали испытаниям на разрушение для определения биохимической прочности всего диафиза. Антитела вводили подкожно в приведенных дозах и с указанными интервалами.

- 10 021401

Антитело II вводили следующим способом: 5 мг/кг раз каждые две недели, с началом через день после операции (группа 1), 1 мг/кг (группа 2), 5 мг/кг (группа 3) или 15 мг/кг (группа 4) вводили раз каждые две недели, с началом через девять дней после операции. ΒΜΌ измеряли с помощью с|СТ на 35 день. Для группы 1 показали статистически значимое повышение ΒΜΌ в области как передней, так и задней надкостницы. Для группы 4 показали статистически значимое повышение ΒΜΌ в обеих областях надкостницы, хотя для групп 2 и 3 не показали значительного повышения ΒΜΌ.

Пример 5.

Ιη νίνο анализ эффективности при раке.

Мышей (самок мышей С.В-17, Рох Сйаке модель тяжело комбинированной иммунной недостаточности # СΒ17§С-Μ) выдерживали для акклиматизации в виварии в течение недели перед началом эксперимента. После акклиматизации мышей случайным образом разделяли на группы по 10 особей на обработку. Подкожно имплантировали культивированные клетки немелкоклеточного рака легкого человека А549 в боковую поверхность живота мыши и позволяли достичь средних значений объема опухоли, составлявших ~100 мм³. Антитело II (1 и 5 мг/кг), контрольное антитело 1дС (1 и 5 мг/кг) или среду (цитратный буферный солевой раствор с добавлением 0,02% Т\\ееп 80) вводили путем подкожной инъекции. Животных подвергали обработке 2 раза с интервалов 7 дней.

Опухоли измеряли 2 раза в неделю с помощью электронных штангенциркулей для построения кривых роста. Животных также осматривали дважды в неделю на предмет колебаний в массе тела и признаки токсичности. Результаты измерений объема опухоли, отобранных на 29 день, приведены в табл. 3.

Как показано в табл. 2, в группах, получавших антитело II, обнаружено значительное ингибирование роста трансплантатов немелкоклеточного рака легкого человека А549 ίη νίνο.

Таблица 2

Эффективность антитела II в модели трансплантата немелкоклеточного рака легкого человека А549

Группы по способу обработки	Обоек опухоли ± стандартная ошибка (мм³)	р-Значение (по отношению к контрольной группе, получавшей среду)
Цитратная среда	402+36	-
Контроль 1дС (1 мг/кг)	372±45	-
Контроль 1дС (5 мг/кг)	492+72	-
Антитело II (1 мг/кг)	279+32	0,01-0,05
Антитело II (5 мг/кг)	202+21	<0,001

Пример 6.

Ш νίνο анализ ангиогенной ренормализации ксенотрансплантата.

Для понимания механизма противоопухолевой эффективности проводили анализ большого количества изображений на опухолях А549, подвергавшихся обработке антителом II или контролем ЦС. Проводили как качественные, так и количественные измерения нескольких фенотипических маркеров для оценки биологического процесса ангиогенеза, связанного с раком (СИ31 и актин гладкой мускулатуры, 8ΜΑ), индукцией гипоксии (переносчик глюкозы 1, СЬиТ1), пролиферацией клеток (Κί67) и апоптозом (концевая метка ИЭР ΝίοΚ-Εηά. ΤυΝΕΤ).

Самкам мышей С.В-17 (Рох Сйаке 8СГО) модель # СΒ17§С-Μ в возрасте 7-8 недель позволяли акклиматизироваться в течение недели и питаться аб НЪйит при соблюдении диеты с нормальным содержанием жира (4,5%), которой придерживались в ходе всего исследования.

Клетки А549 из АТСС выращивали раздельно в среде Р-12 КащЬп’к теб1а (Чпуйгодеп #21127) с добавлением 10% ФБС Д^йгодеп #0, и 100х разведений пирувата натрия, неосновных аминокислот и реп-51гер Дшйгодеп #11360, #11140 и #15140 соответственно). Их разъединяли и подготавливали в итоговой концентрации, составлявшей 50х 10⁶ клеток/мл в ФСБ после 19 пассажа с 95% жизнеспособностью.

Клетки рака легкого человека А549 вводили в количестве 5х 10⁶ подкожно в бок экспериментальной мыши в смеси ФСБ и Μаΐ^^де1 (Βοοίοη ΌίοΕίηκοη, РебРо^, ΜΑ) с соотношением 1:1. Измерения размера опухоли и массы тела проводили дважды в неделю. Перед обработкой мышей рандомизировали на основе размера опухоли с применением алгоритма рандомизации.

Когда объем опухолей достигал 200 мм³, рандомизированных мышей разделяли на 2 группы по 10 животных и подкожно вводили в 1 день и в 8 день по 5 мг/кг антитела II или контрольного ЦС4. Исследование останавливали через 10 дней после введения первой дозы антитела.

Антитело II готовили в цитратно-солевом буфере ^Βδ) (10 мМ цитрата, рН 6, 150 мМ №С1 и 0,2% полисорбата). Контрольный ЦС4 находился в концентрации 6,0 мг/мл в фосфатно-солевом буфере (ФСБ).

Ксенотрансплантаты опухолей извлекали из мышей через 17 дней введения и помещали в фиксатор цинк-трис (ΒΌ Рйагпппдеп). Фиксированные опухоли обрабатывали, блокировали в парафине и делали срезы, толщина которых составляла 3 мкм, на стандартных предметных стеклах микроскопа. Срезы запекали при 60°Р в течение 1 ч, после чего депарафинизировали в ксилене (4 обработки, каждая продол- 11 021401 жительностью 10 мин). Срезы дегитратировали с помощью серий погружений в этанол/воду с итоговыми отмывками в трис-буферном солевом растворе с Т\уссп (ТВ8Т). После этого срезы блокировали с помощью блокирующего белка (ΌΛΚΘ) в течение 30 мин. Для группы по исследованию опухоли срезы окрашивали комбинацией НоесНк! 33324 (1пу|(годсп). СЭ31 крысы, направленного против иммуноглобулинов человека (РЬагт1пдеп)/А1еха-488, направленного против иммуноглобулинов крысы ДпуДгодеп), антител кролика, направленных против Κί67 (№оМаткег5)/А1еха 647, направленного против иммуноглобулинов кролика (1пуйтодеп) и ТиПЕЬ-ТМК геД (разведенного 1:5 в буфере для разведения ТиПЕЬ; КосНе). Для группы по исследованию ангиогенеза срезы окрашивали комбинацией НоесНк! 33324 (1пуДтодеп), С.П31 крысы, направленного против иммуноглобулинов человека (РЬатт1п§еп)/А1еха-488, направленного против иммуноглобулинов крысы Дпуйтодеп), антител кролика, направленных против СЬиТ1 (СНеппсоп)/А1еха 647, направленного против иммуноглобулинов кролика (ЧпуДгодеп) и антител мыши, направленных против актина гладкой мускулатуры/Су3 (§1§та). Срезы визуализировали с помощью лазерного сканирующего цитометра 1Сук (СотриСу1е) и рабочей станции Мапапак ΌφίΕιΙ 1тадшд, оснащенной инвертированным флуоресцентным микроскопом 2ейк Ахюуей 200М (1п1еШдеп1 Опадтд 1ппоуайопк). Сравнения количественных данных исследованных групп проводили с применением анализа ЭщтеН на статистическом программном обеспечении 1МР (8А8).

Как показано в табл. 3, ксенотрансплантаты А549 контрольных животных, подвергавшихся обработке 1дС, слабо васкуляризованы, имеют средние показателя миофибробластов и много ограниченных областей гипоксии. Контрольные опухоли, подвергавшиеся обработке 1дС, имели обширную сеть сосудов, состоящую как из неоангиогенных отростков сосудов, так и из зрелых сосудов, слабо покрытых перицитами. Контрольные опухоли, подвергавшиеся обработке 1дС, содержат области гипоксии (маркером которых является СЬиТ1), с четко отсутствующим маркером, расположенные на некотором расстоянии от перфузированных сосудов и областей некроза, находящихся еще дальше от сосудов. Обработка антителом II приводила к снижению площади сосудов, снижению площади перицитов и снижению покрытия сосудов перицитами. Тем не менее, указанное лечение не приводило к значительным различиям в гипоксии опухоли. Количественно, похоже, что васкуляризация сосудов, подвергнутая обработке антителом II, состояла из более мелких, менее разветвленных сосудов и с меньшим покрытием перицитами по сравнению с контрольной группой, подвергавшейся воздействию ШС.

Как показано в табл.3, опухоли, обрабатываемые ^С, содержали пролиферирующие клетки, даже распространявшиеся наружу, но также содержали одну или более больших областей некроза, не подвергнутых васкуляризации. Обработка антителом II не приводила к изменениям в процессах апоптоза и лишь к легкому незначительному снижению общей площади пролиферации. Тем не менее, произошло основательное снижение процента площади клеток с высокой плотностью Κί67 в опухолях, подвергнутых обработке антителом II, что может указывать на снижение количества клеток, находящихся в фазе С2 клеточного цикла.

- 12 021401

Антитело II в анализе ангиогенной ренормализации ксенотрансплантат ίη νί\Ό

Таблица 3

Фенотипические группы	Биологический параметр	Значение контрольного 1дС:значение воздействия Антитела II	Статисти- ческая значимость {ПиппеЪ¹ в р- значение)
Группа ангиогенеза опухоли	% Общей площади сосудов	10,26:7,88	0,001
Группа ангиогенеза опухоли	% Функциональной площади сосудов	9,84:7,59	0,0009
Группа ангиогенеза опухоли	% Нефункциональной площади сосудов	0,42:0,30	0,1341
Группа ангиогенеза опухоли	% Сосудов, покрытых перицитами	42,44:30,88	0,0234
Группа ангиогенеза опухоли	% Площади гипоксии опухоли	14,90:11,77	0,3615
Группа пролиферации опухоли	% Площади пролиферации опухоли	12,16:9,68	0,1739
Группа пролиферации опухоли	% Площади высокой пролиферации ΚΪ67	0,66:0.19	0,0012
Группа пролиферации опухоли	% Циркулирующих клеток опухоли с высокими показателями ΚΪ67	5,24:1,68	<0,0001
Группа апоптоза опухоли	% Площади апоптоза в опухоли	8,63:8,24	0,7466

- 13 021401

£ Обшей площади сосудов - процент	площади от их	ткани опухоли, функционального
покрытой всеми сосудами, статуса.	независимо
% Функциональной площади	сосудов -	процент	площади ткани
опухоли, покрытой сосудами	в областях	без гипоксии.
% Нефункциональной площади	сосудов -	процент	площади ткани
опухоли, покрытой сосудами	в областях	гипоксии
% Сосудов, покрытых перицитами -	процент	всех сосудов
опухоли, связанных с клетками,	экспрессирующими актин
гладких мышц (ЗМА).
% Области гипоксии опухоли	- процент	площади	ткани опухоли,
покрытой клетками, экспрессирующими	сьит1,	заместительный
маркер гипоксии.

% Площади пролиферации опухоли - процент площади ткани опухоли, являющейся положительной по К167, ядерному белку, обычно применяемому в качестве маркера активно пролиферирующих клеток.

% Площадь высокого содержания Κί67 - процент площади ткани опухоли, интенсивно окрашивающейся на ΚΪ67. Клетки, экспрессирующие высокие уровни ΚΪ67 находятся на более поздних стадиях клеточного цикла, чем клетки, экспрессирующие более низкие уровни Κί67.

% Циркулирующих клеток опухоли с высоким уровнем Κι67 процент всех положительных по Κί67 клеток, определяемых как клетки с высоким уровнем экспрессии ΚΪ67. Клетки, экспрессирующие высокие уровни ΚΪ67 находятся на более поздних стадиях клеточного цикла, чем клетки, экспрессирующие более низкие уровни К167.

% Площади апоптоза ткани - процент площади ткани опухоли с сильным окрашиванием на ТЦЫЕЬ. ТОМЕЬ представляет собой стандартно применяемый способ определения разрывов двойной спирали ДНК, что является индикатором терминального апоптоза.

Пример 7.

Ση νίνο анализ эффективности для кости.

Для оценки способности антитела V (легкая цепь - 8ЕЦ ГО N0:34 и тяжелая цепь - 8ЕЦ ГО N0:35) ускорять образование кости вокруг имплантата и восстановление костной ткани применяли четырехмесячных самцов крыс 8ргадиеГОаМеу (Наг1ап 8ргадие Оа\\'1еу Фс). вес которых составлял приблизительно 425 г. Крысам хирургическим путем имплантировали титановый винт (2x4 мм) в оба ответвления латеральной стороны средней оболочки стенки кровеносного сосуда непосредственно над большеберцовым малоберцовым сочленением. После этого крыс случайным образом разделяли на 2 группы в соответствии с массой тела и вводили антитело V в дозе, составлявшей 10 мг/кг или контрольный !дС в дозе, составлявшей 10 мг/кг путем подкожной инъекции раз в неделю с началом в день проведения операции и продолжительностью курса 21 день. Для ех νίνο сканирования оценки новообразованной кости применяли количественную компьютерную томографию (сканер для КТ модели А1ока ЬаТЬе1а ЬТС-100) с размеров воксела, составлявшим 60 мкм. Целевой объем (νΟΟ устанавливали через 28 срезов с интервалом в 0,1 мм от предыдущего места имплантации. Различия в группах измеряли с помощью программного обеспечения ΣΜΡ версии 5.1. (Сагу, ΝοΠίι Сагойпа), сравнение против контрольного ЦС проводили с помощью способа ЭиппеИ'5 при уровне значимости Р<0,05. Количественная оценка с помощью ех νίνο факситронных х-лучевых изображений указывает на то, что крысы, подвергнутые обработке антителом V, имели большую массу новообразованной кости или костной мозоли вокруг имплантата. В ходе количественного анализа с методом КТ выявили статистически значимое увеличение кортикального содержания минеральных веществ в области имплантата (14%), площади новой кости (16%), толщины надкостницы (7%), содержания минеральных веществ в костном мозге новообразованной губчатой кости в области имплантата (18%) и площади кости (16%) в организме крыс, подвергнутых обработке антителом V

- 14 021401 по сравнению с контрольным Ι§0. Данные указывают на то, что антитело V стимулирует образование новой кости и ускоряет восстановление костной ткани в организме мышей с титановыми имплантатами.

Таблица 4

Анализ новообразованной кости в области имплантата методом микро-КТ

	Анализ костного мозга в области имплантата	Анализ надкостницы в области имплантата
Группа	Л	Содержание	Площадь	Содержание	Площадь	Толщина
		минеральных	КОСТИ	минеральных	КОСТИ	надкост-
		веществ в	(СГ4*2)	веществ в	{см^а2)	ни ц ы
		кости (мг)		кости (мг)		(см)
Контрольный	10	0,84	0,034	6,70	0,064	0,054
Гдб		±0,04	±0,001	±0,07	+0,001	±0,001
Антитело V	10	1,00	0,039	7,61	0,074	0,057
		±0,04*	±0,002*	±0,06*	±0,001*	±0,001*

Данные представлены в виде значений ±8Е.

* р<0,05, νδ контрольного Ι§Ο, ДМР тест. Биппей'з.

Список 8ЕЦ ГО.

Участки СОК тяжелых цепей:

ЗЕО	Ιϋ	N0:1	ΟΡΤΕ33ΥΤΜ3
5Е0	Ιϋ	N0:2	ΤΙ80<3ΟΓΌΤΥΥΡϋ5νκσ
5Е0	ΙΟ	N0:3	ΡΟΥΗΝΥΥΡΌΙ
5Е0	ΙΌ	N0:4	ΡΟΥΝΝΥΥΓΟΙ

Участки СОК легких цепей:

3Ε0 ΙΌ N0:5 ΗΑ3Ο8Ι3Ν3ΙιΗ
ΞΕ<2	ΙΌ	N0:6	ΥΟΚ05Ι0
3Ε0	Ιϋ	N0:7	008Е8ИРШ
3Ε0	Ιϋ	N0:8	ΥΑΕ08Ι0
8Ε0	Ιϋ	N0:9	ООЗАЗИРЬН
5Ε<3	ΙΌ	N0:10 ΥΑΕ05Ε<3

Вариабельные участки тяжелых цепей:

3Εζ) 10 N0:11

ЕУОЪУЕЗООСЬУОРОСЗЬЕЬЗСААЗбРТРЗЗУТМЗИУЕОАРСКОЬЕИУАИЗбСЗСРСТУУРПЗ νΚΟΕΓΤΙ3ΕΟΝΑΚΝ3ΕΥΕΟΜΝ3ΕΕΑΕΌΤΑνΥΥΟΑΕΡσΥΗΝΥΥΡΏΙΜ<30<3ΤΤντν53 ЗЕ<2 Ю N0:12

ЕУОЬУЕЗСССЫЛЭРаСЗЬКЪЗСААдеРТРЗЗУТМЗтКОАРСКСЬЕИУАТТЗаССГСТУУРОЗ νΚΟΡ.ΓΤΙ3ΕΟΝΑΚΝ5ΕΥΟΟΜΝ3ΕΕΑΕΟΤΑνΥΥΟΑΕΡσΥΝΝΥΥΡΟΙΝΟθσΤΤντν3 3

Вариабельные участки легких цепей:

ΞΕζ) Ю N0:13

Е1УЬТ03РАТЬ8ЬЗРСЗЕЕАТЬЗСНАЗО318НЗЫ1НУ<20КРС(ЭАРКЬЫУУНК0310а1РАЕРЗ

СЗСЗаТИРТЬТ188ЬЕРЕОРАУУУСС>С>ЗЕ£ИРЬНРа<ЗатКУЁ1К

ЗЕ(2 Ю N0:14

Е1УЪТ03РАТЬЗЬЗРОЕЕАТ15СНАЗО313НЗЪНИ¥<Э0КРС0АРЕЫ1УУАЕ031(Зе1РАЕР5

СЗСЗСТИРТЬИЗЗЬЕРЕИРАУУУССЮЗЕЗНРЪНГааОТКУЕХК

ЗЕО Ю N0:15

Е1УЬТ05РАТЬЗЬЗРОЕЕАТЬЗСНАЗО313ЫЗЬНИУ00КРа0АРЕЬЫ¥¥ЙЕ0310а1РАЕР5

СЗОЗЙТОРТЬТ133ЬЕРЕОРАУ¥УС0СЗАЗНРЬНРаССТК7Е1К

3Εζ) Ю N0:16

ΕIУИТОЗ РАТЬЗ ЬЗРеЕЕАТЬЗСНАЗОЗ 13ЫЗЬННУ(212КРО0АРЕЫ IΥΥΑΕ03Ε0ΟΙРАЕРЗ ЙЗСЗСТОРТЬТ153ЬЕРЕОРАУУУСС<Э5А5ИРЪНРСССТКУЕ1К Полноразмерные тяжелые цепи:

- 15 021401

ΞΕΟ Ιϋ N0:17

Е70ЬУЕ5аССЬУ0РСО31ЛЬЗСАА5СРТР53УТМЗИУЕ0АРОКСЬЕНУАТ13ОССРОТУУРОЗ νΚ6ΡΡΤΙ3ΡβΝΑΚΝ3Ι<ΥΕ0ΜΝ8Ι:ΡΑΕΌΤΑνΥΥΟΑΡΡΟΥΗΝΥΥΡΒΙΝ<30ΘΊΤντν33Α3ΤΚΟΡ5

УРРЪАРСЗКЗТЗЕЗТААЬаСЬУКПУРРЕРУП/ЗИНЗНАЬТЗСТНТРРАЧЬОЗЗСЬУЗЬЗЗтеТ

УРЗЗЗЬСТКТУТСОТОНКРЗЫТКГОКОТЕЗКУаРРСРРСРАРЕААСаРЗУРЬРРРКРКОТЪМ1

ЗЕТРЕУТОТУУОУЗОЕОРЕУОРЫИУУВСУЕУНЫАКТКРКЕЕОРЫЗТУЕУУЗУЬтеЬНООИЬЫд

КЕУКСКУЗЫКСЬРЗЗГЕКТГЗКАКСОРКЕРОУУТЬРРЗОЁЕМТКМОУЗЬТСЬУКОРУРЗОХАУ

ЕИЕЗЫСОРЕЫНУКТТРРУЬОЗОСЗГРЬУЗКЬТТОКЗКНОЕСЫУРЗСЗУМНЕАЬНННУТОКЗЬЗ ьзьс

ЗЕО Ю N0:18

ЕУ0ЬУЕЗО<ЗСЬУ0Ре(ЗЗЬЕЬЗСАА5СРТРЗЗУТМЗМУК0АР(ЗКСЬЕИУАТ13СССГОТУУРОЗ νΚΘΕΡΤΙ3ΕΌΝΑΚΝ3ΕΥΕ0ΜΝΞΕΕΑΕΌΤΑνΥΥ€ΑβΡ0ΥΝΝΥΥΡϋΙΝ(305ΤΤντν53Α5ΤΚ<3Ρ3

УРРЬАРСЗЕ8Т8Е8ТААИЗСЪУКП¥РРЕРУТУ5И№ОАЬТ8СУНТРРАУЬОЗБСЬУЗЬ88УУТ

УРЗЗЗЬСТКТУТСНУЕНКРЗЫТЮТЖЕУЕЗКУСРРСРРСРАРЕААО<ЗРЗУРЪГРРКРКПТЪМ1

5ΡΤΡΕνΤθνννΠν30ΕΟΡΕν0ΓΝΝΥνυθνΕνΗΝΑΚΤΚΡΡΕΕ0ΓΝ3ΤΥΡνν3νΕΤνΐ,Η0ΟΜΙ,Ν{3

КЕУКСКУ8ЫКаЬР331ЕКТ13КАКСОРРЕРОУУТЪРРЗОЕЕМТКЫОУЗЬТСЪУКСЕУР301АУ

ЕНЕЗЫООРЕЫНУКТТРРУЬОЗОаЗРРЬУЗЕЕТЧЦКЗРНОЕСЫУРЗСЗТМНЕАЬНЫНУТОКЗЬЗ ьзьс

Полноразмерные легкие цепи:

ЗЕО Ю N0:19

ЕГУЬТОЗ РАТЬЗ ЬЗ РОЕРАТЬЗСНАЗОЗI ЗЫЗЬННУООКРСОАРР.ЬЫ ΥΥΟΡ0310<3Ι РАЕРЗ СЗСЗСТО РТЬТ15 3 ЬЕРЕОРАТУУСООЗЕЗИРЬНРСССТЮ/ЕIКРТУААРЗνρ1ГРР5ЕЕ01Ж 3ΟΤΑ3νν0ϋΝΝΡΥΡΚΕΑΚν0ΗΚνθΝΑΙ,0ΞΟΝ50Ε3ντΕ0Ο3Κϋ3ΤΥ3Ι,33ΤΕΤΙ,3ΚΑΟΥΕΚΗ КУУАСЕУТНОСЬЗЗРУТКЗРЫЕСЕС

ЗЕО Ιϋ N0:20

Е1УЬТ05РАТЬЗЬЗРОЕЕАТЬЗСНАЗР313НЗЬНМ¥00КРеОАРРЬЫУ¥АР0Б10<31РАЕР5 СЗСЗСТОРТЬТ133ЬЕРЕОРАУУ¥С005ЕЗИРЬНРСССТКУЕ1КРТУААРЗУР1РРРЗОЕ0ЬК ЗСТЛЙУУСЬитаРУРРРАКУОИКТОтаЬОЗеНЗОЕЗУТЕГЮЗКВЗТУЗЬЗЗТЬТЬЗКАОУЕКН КУ УАСЕУ ТНОСЬ Ξ 3 РУТКЗ РЫКСЕС

ЗЕО Ю N0:21

Е1УЬТ03РАТЬЗЬЗРСЕЕАТЬ5СНАЗС313Ы5ЬНИУ00КР60АРРЬЫУУ6Е0310О1РАРРЗ

СЗСЗСТОРТЬТ133ЬЕРЕОРАУУУСООЗАЗИРЬНРСеоТКУЕ1КЕТУААР5УР1РРРЗОЕОЬК

ЗеТАе'/УСШМРУРЕЕАКУОНКУСМАЬОЗСМЗОЕЗУТЕООЗКПЗТУЗЬЗЗТГЯЬЗКАПУЕКН

КУУАСЕУТНОСЬЗЗРУТКЗРЫР.СЕС

ЗЕО 10 N0:22

Е1УЬТ03РАТЬЗЬ5РСЕЕАТЬ5СНАЗО313№ЬНИУ00КРС0АРЕЬЫУУАР03Е0О1

ΡΑΕΡΞαΞα3ΟΤΟΡΤΙ/ΓΙ33Ι,ΕΡΕϋΡΑνΥΥ000ΞΑ3ΗΡΕΗΡαθι3ΤΚνΕΙΚΕΤνΑΑΡ5νΡΙΡΡΡ3

ОЕОЬКЗСТАЗУУСЬЬННГ¥РЕЕАКУОИКУОЫАЬОЗС№ОЕЗУТЕООЗКВЗТ¥ЗЬЗЗТЬТЬЗКА

ΌΥΕΚΗΚνΥΑΟΕνΤΗΟΟί,Ξ3ΡντΚ3ΡΝΪΙΟΕΟ

- 16 021401

Нуклеотидная последовательность - вариабельные области тяжелой цепи: ΞΕφ ΙΏ N0:23 аА<ЗСТССА0СТ<ЗаТ0САСТСТСЗ<ЗОа<ЗАСССТТССТССАСССТССССССТСССТОАСАСТСТСС

ТОТССАаСС’РСТаеАТТСАСТТТСАСТАССТАТАССАТСТСТТСССТССеССАСССТССАССО

ААОаООСТаОАСТОеОТСеССАССАТТТССССТССТССТТТСОССАСАТАСТАТССССАСАаТ

ОТОААОСЮТСОАТТСАССАТСТССАОАОАСААСОССААОААСТСАСТОТАТСТеСАААТОААС

АОССТОАСАСССЗАеОАСАСеОСТОТОТАТТАСТОТОСОАОАССТСаАТАТСАСААСТАСТАС

ТТТСАСАТСТОаОЗССААООСАССАСССТСАСССТСТССТСАСССТССАССААССССССАТСа аТСТТСССеСТАОСССССТасТССАООАССАССТСССАСАаСАСАаССССССТСОССТСССТС

СТСААОСАСТАСТТССССОААССССТСАСССТСТССТССААСТСАСССОСССТСАССАССОСС

СТаСАСАССТТССССССТСТССТАСАСТССТСАСОАСТСТАСТСССТСАССАССеТСОТСАСС еТССССТССАаСАаСТТОСССАССААСАССТАСАССТаСААОЗТАаАТСАСААСЗСССАСЗСААС

АССААССТССАСААСАСАСТТСАСТССАААТАТССТСССССАТОСССАСССТеСССАОСАССТ

САСССССССОООООАССАТСАеТСТТССТОТТССССССААААСССААааАСАСТСТСАТСАТС

ТСССССАССССТСАССТСАССТСССТССТССТССАССТСАСССАССААСАСССССАССТССАС

ТТСААСТССТАССТССАТССССТССАОСТССАТААТОССААОАСАААОССОСОООАСОАОСАС

ТТСААСАССАСОТАССОТОТСЗОТСАОССТССТСАССОТССТаСАССАааАСТОССТОААСОСС

ААООАСТАСААСТеСААОбТСТССААСАААСОССТСССОТССТССАТССАаААААССАТСТСС

АААСССАААбСОСАОСССССАСАеССАСАСОТСТАСАСССТОСССССАТСССАСОАОбАСАТС

АССААСААССАОаТСАОССТСАССТасСТООТСАААСССТТСТАССССАССОАСАТСаСССТО бАОТОСОАААОСААТОСеСАОСССеАбААСААСТАСААОАССАСОССТССССТОСТЙЗАСТСС

САСООСТССТТСТТССТСТАСАССАОССТААСССТССАСААСАОСАССТСЗССАеаАСССОААТ атСТТСТСАТеСТССОТСАТССАТСАЙОСТСТЙСАСААССАСТАСАСАСАСААОАЙССТСТСС статстстссст

5Е0 ΙΌ N0:24 еАоотосАостоотасАотстсасесАоссттсотссАссстсесосотссстеАСАСтстсс

ТСТаСАОССТСТОСАТТСАСТТТСАаТАССТАТАССАТСТСТТСССТСССССАСССТССАССС

ААСССССТСОАСТСССТСОССАССАТТТССОеТССТСОТТТСаССАСАТАСТАТССССАСАОТ

СТСААСОСТССАТТСАССАТСТССАСАСАСААССССААСААСТСАСТСТАТСТССАААТСААС

АОССТОАСАССССАОСАСАССССтеТСТАТТАСТеТОСеАСАССТЭЗАТАТААТААСТАСТАС

ТТТОАСАТСТСОСЗеССААСОСАССАССеТСАСССТСТССТСАОССТССАССААСЗООСССАТССЗ еТСТТСССОСТАССССССТССТССАССАССАССТСССАСАеСАСАОССеСССТСеОСТОССТО

ОТСААООАСТАСТТССССОААССОСТОАСООТСТССТОСААСТСАСОСеСССТаАССАОССОС

СТаСАСАССТТСССОССТОТССТАСАСТССТСАССАСТСТАСТСССТСАССАСССТООТОАСС

ОТОСССТССАОСАОСТТССеСАСОААаАССТАСАССТССААССТАОАТСАСААССССАССААС

АССААОСТООАСААОАОАСТТОАОТССАААТАТСОТСССССАТССССАСССТССССАОСАССТ

САССССССССОСССАССАТСАСТСТТССТСТТССССССААААСССААОСАСАСТСТСАТОАТС

ТСССОеАССССТОАООТСАССТСССТСОТООТСОАСеТОАСССАССААеАССССОАСОТССАС

ТТСААСТОСТАССТаОАТСССаТСаАОСТОСАТААТСССААаАСАААеСССССССАССАССАС

ТТСААСАОСАСОТАССбТСТССТСАОССТССТСАСССТССТССАССАССАСТОССТОААСССС

ААССАСТАСААСТОСААСОТСТССААСАААССССТССССТССТССАТССАСААААССАТСТСС

АААОССАААССЮСАСССССеАОАСССАСАбОТОТАСАСССТеСССССАТСССАООАООАаАТе

АССААеААССАООТСАеССТСАССТСССТеОТСАААСССТТСТАССССАОССАСАТССССОТа

САОТСООАААОСААТСОаСАОССаСАеААСААСТАСААСАССАСОССТСССОТОСТОеАСТСС

САСеоСТССТТСТТССТСТАСАОСАООСТААССОТООАСААеАОСАОСТСОСАООАОеСОААТ

СТСТТСТСАТССТСССТаАТССАТОАОССТСТССАСААССАСТАСАСАСАСААОАСССТСТСС статстстсоат

Нуклеотидная последовательность - вариабельные области легкой цепи: 5Е0 Ю N0:25

САААТТ(ЗТОТТОАСАСА(ЗТСТССАЙССАСССТ<ЗТСТТТСТСТССАООССАААаАСССАСССТС

ТССТСССАСОССАСССАСАСТАТТАОСААСАСССТАСАСТССТАССААСАОАААССТССССАС

ССТСССАСССТССТСАТСТАТТАТСССАСАСАСТССАТССАССССАТСССАСССАССТТСАОТ

ООСАОТСОСТСТОССАСАОАСТТСАСТСТСАССАТСАбСАОССТАОАСССТСААСАТТТТССА

- 17 021401

СТТТАТТАСТСТСААСАСА<ЗТСАСА6СТебСС<ЗСТССАСТТСОСС«ЗАеССАССААС€ТССАС

АТСАААССААСТСТСОСТССАССАТСТСТСТТСАТСТТСССаССАТСТОАТСАаСАСТТСААА

ТСТ6СААСТСССТСТСТТ0ТСТСССТССТ6ААТААСТТСТАТСССА5АСАССССАААСТАСА0

ТСОАДСОТССАТААСОСССТССААТССССТААСТСССАССАОАОТСТСАСАСАОСАССАСАОС

ААСбАСАССАССТАСАСССТСАССАеСАСССТСАСССТСАОСАААССАСАСТАСОАОАААСАС

АААСТСТАСеССТСССААСТСАСССАТСАСССССТСАССТССССССТСАСАААСАССТТСААС

АСбСеАСАСТСС

ЗЕО Ю N0:26

САААТТСТСТТСАСАСАСТСТССАСССАСССТСТСТТТСТСТССАССОСАААСАеССАСССТС

ТССТСССАССССАСССАСАОТАТТАССААСАОССТАСАСТааТАССААСАОАААССТОСССАС

ССТСССАСбСТССТСАТСТАТТАТССТАОАСАСТССАТССАСеаСАТСССАОССАССТТСАеТ

С5ОСА6ТООСТСТ®ЗСАСА5АСТТСАСТСТСАССАТСАССАСССТАаАЙССТаААСАТТТТССА

СТТТАТТАСТСТСААСАСАСТСАСАССТССССССТССАСТТСССССОАСССАССААСатССАС

АТСАААССААСТСТОССТССАССАТСТеТСТТСАТСТТССССССАТСТСАТСАОСАСТТСААА

ТСТССААСТСССТСТСТТаТСТСССТССТСААТААСТТСТАТСССАОАСАСЗСССАААаТАСАС

ТССААССТООАТААСССССТССААТССОСТААСТСССАССАСАСТСТСАСАСАССАСеАСАСС

ААССАСАССАССТАСАСССТСАССАССАСССТСАСаСТСАССАААССАСАСТАСОАСАААСАС

АААСТСТАСОССТССбААСТСАСССАТСАОССССТСАССТСССССОТСАСАААСАССТТСААС

АСССбАСАСТСС

5Е<Э Ю N0:27

ОАААТТСТСТТСАСАСАСТСТССАСССАСССТСТСТТТеТСТССАССаОАААСАеССАСССТС

ТССТбССАССССАССОАСАОТАТТАССААСАеССТАСАСТССТАССААСАеАААССТСЙССАС

ССТСССАОССТССТСАТСТАТТАТСаСАСАСАСТССАТССАСОССАТСССАСССАСатТСАСТ

СбСАеТССеТСТСССАСАаАСТТСАСТСТСАССАТСАССАСССТАОАеССТСААСАТТТТЙСА еТТТАТТАСТаТСААСАОАаТСССАССТССССССТССАСТТСССССеАСаСАССААСетССАе

АТСАААССААСТеТСССТЕСАССАТСТСТСТТСАТСТТССС'еССАТСТеАТеАССАСТТСААА

ТСТССААСТСССТСТСТТСТетесСТССТеААТААСТТСТАТСССАОАОАССССАААСТАСАС

ТССААООТССАТААСССССТССААТСООСТААСТСССАССАСАОТОТСАСАОАССАСОАСАСС

ААОСАСАССАССТАСАСССТСАОСАеСАСССТСАСаСТСАОСАААССАСАСТАСОАОАААСАС

АААОТСТАСОССТОСОААСТСАСССАТСАССеССТСАССТССССССТСАСАААСАеСТТСААС

АССССАОАСТСС

ЗЕО Ю N0:28

САААТТСТеТТСАСАСАОТСТССАСССАСССТСТСТТТСТСТССАССССАААСАСССАСССТС

ТССТСССАССССАСССАСАСТАТТАССААСАСССТАСАСТССТАССААСАСАААССТССССАС

ССТСССАСОСТССТСАТСТАТТАТССТАСАСАСТСССАССАССССАТСССАСССАССТТСАСТ

СССАСТеССТСТСССАСАаАСТТСАСТСТСАССАТСАССАСССТАСАСССТОААСАТТТТССА

- 18 021401

СТТТАТТАСТеТСААСАОАСТеССАССТССССССТССАСТТСеССССАССЗСАССААбеТСОАО

АТСАААССААСТСТСОСТССАССАТСТСТСТТСАТСТТССССССАТСТСАТСАССАСТТСААА

ТСТССААСТСССТСТСТТСТСТСССТССТСААТААСТТСТАТСССАСАСАССССАААСТАСАС

ТССААССТССАТААСССССТССААТСССОТААСТСССАССАСАСТСТСАСАСАССАССАСАСС

АА6САСА«САССТАСАеССТСА0САеСАСССТ0АСССТСАССАААССАеАСТАССА0АААСАС

АААОТСТАССССТССОААСТСАСССАТСАОСеССТСАССТСССССОТСАСАААСАОСТТСААС

АССССАОАСТСС

РКК-1 человека

3Εΰ Ю N0:29

ТЬЫЗУЪЫЗЫА1КЫЬРРРЪСеААСНРеЗАУ5ААРС1ЬУРССЦКУ0Т1РМ¥0РУРСАЕОЕЕССТР ЕУСАЗ РТРСС0АСУ01СЬАСРКЕЕКР.СМЕНАМССРСЬГУСКНе1 ОТЗ 3Ρ0ΝΗΡΕΟΕΙΕΕΤΙ ТЕ 3 РеЫОНЗТЬРСУЗЕР.ТТЬЗЗЮ4УНТКССЕС8’7СЬКеЗОСАЗСЬССАКНРИЙК1СКРУЬКЕСОУС ТКНЕЕКОЗН6РЕ1РОКСУСеЕОЬЗСЕЮКРННОАЗЫЗЗЕЬНТСОЕН

РКК-1 яванского макака ЗЕО ΙΡ N0:30

ТЬ№7Ъ№ЫА1КНЬРРРЬСЗ<ЗААСНР<ЗЗАУЗААРС1ЬУРСеПКУ0Т1РЫУ0РУРСАЕРЕЕССТР ЕУСАЗРТЕ©ЗРА6У01СРАСЕКЕЕКЕСМЕНАМССРСЫУСКЫСЮТЗЗР0НИГЕОЕ1ЕЕТ1ТЕЗ РеЫРНЗТЬР6У5ЕЕТТЬЗЗКМУН5Ке0Е63УСТЕЗЗРСАТеЬСТАЕНРИЗК1СЖР7ЬКЕЙГ)УС ТКНЕЕКбЗНОЬЕIРОКСУССЗЕСЬ5СЕ10ΚΡΗΗ0Α3Ν33ЕЬНТСОЕ

РКК-1 крысы

ЗЕО ΙΡ N0:31

ТЬЫЗУЫНЗНАУКЫЬРРРРСОАОСОРСЗАУЗУАРСУРУЕССНКУОТЬРНУОРУРСАЕРЕЕССТ

РЕУС35РЗЕОААСТССТ01СЦАСЕКККККСМЕНАМССРСНУСКНО1СМРЗРНЗНЬРЕ<ЗЕ1ЕЕ<3

11ЕНЬСЫРНСАеРСУРЕЕТТ1/Г5К1УНТК«0ЕСЗУСРЕ35РСАТС1,ССАЕНРИЗК1СКР7РКЕ

О0УСТКНЕЕКеЗНСЬЕ1Р0ЕСУСОЕа1дАСЕ10КОНН0ТЗ№ЗЕРНТС0ЕНАР1РУКРРРРКНУ

РКК-1 кролика

ЗЕО Ю N0:32

ТЬМ37ЬтаЗНА1ККЬРРРЬаеАМОНРеЗАУ5АТРС1ЕУЁС6ЫКУЬРЬРНУ0РУРСТЕРЕЕСОТ

РЕУСАЗРАК(ЗССАСТ01С1АСЕКЕЕКЕСМЕНАМССР(ЗЫУСЮЮ1СМР5РНЫНРНЕбЕ1ЕЕТ1У

ЕЗРОЫРНЗТЗРОУЗЕЕТТЬЗЗКМУНАКООЕСЗУСРЕЗЗРСАТСЬССАКНРНЗИСКРУЬКЕСО

УСТКНКККСЗНОЬЕ1Р0ЕСУС<ЗРСЬЗСКЬ0НР0НЕАЗНЗЗЕЬНТС0Е

РКК-1 мыши

ЗЕО га N0:33

Ти^ЗУЫЫЗЫАТКНЬРРРЬССАССОРСЗАУЗУАРСУЬУЕССЫК/ОТЬОПУОРУРСАЕРЕЕСеЗ

РЕУСЗЗРЗЕСААеУ0СУО1СЬАСЕКЕЕКЕСМТНАМССРСНУСКЫС1СМРЗРНЗНРРЕСЕ1ЕЕЗ

11ЕНЬСНРШ1АААСРСУРЕЕТТЬТ5К1УНТКС0ЕС5УСЬЕЗЗРСААСЬССАЕНРН5К1СКР7Ь

КЕСОУСТКНКККСЗНбЬЕ IГОКСУСОЕСЬ АСК1ζ>ΚΏΗΗζ>Α8Ν3 5Е.ЬКТС<ЭРН Антитело V - полноразмерная легкая цепь:

ЗЕО ΙΏ N0:34

Р1ЬЬТ05РАТЬЗУТРСР373Р5СЕАЗР313СЗЬНИУ00КЗНЕЗРЕЬЫКУА50313О1РЗЕРЗ СЗСЗСТРРТЬЗIN8УЕТЕРРСМУРСООЗМЗ ИРЬЫРСАСТКЬЕТЖР.АПААРТУЗIРРРЗТЕОЬА ТССА£АЛ7СЬМГО1ГУРЕР13УКИК1РСТЕЕЕРСТЬР5УТР0Р5КР5ТУ5МЗЗТЬ5Ь5КАРУЕ8Н ΝΡΥΤΌΕννΗΚΤ3£3ΡννΚ3ΡΝΕΝΕΟ

- 19 021401

Антитело V - полноразмерная тяжелая цепь:

ЗЕО ГО N0:35

ЕУОЬУЕЗСОСЬУКРССЗЬКЬЗСААЗСРТРЗЗУТМЗИУЕОТРЕККЪЕИУАТТЗССССЫТУУРПЗ νκακΡΤΙ3ΕΌΝΑΚΝΤΕΥΕ0Ε33ΕΕ3ΕΟΤΑβΥΥ0ΑΕΡαΥΝΝΥΥΡΏΥΜΘ0αΤΤΕΤν33ΑΚΤΤΡΡ3

ТУРЬАРеТАЬКЗЫЗМУТЬССОТКетРРЕРУТТ/ТИНЗСАЬЗЗетаТГРАУЬОЗСЬУТЬТЗЗТТУ

Ρ33ΤΝΡ30ΤντσΝνΑΗΡΑ33ΤΚνθΚΚΧνΡΕΝΟΟθηεΚΡΟΙΟΤα3Εν33νΡΙΡΡΡΚΡΚυνΕΤΙΤ

ЬТРК7ТС^7¥Ш50РОРЕУНРЗИРТООУЕУНТА0ТЕРРЕЕ0РЫЗТГЕЗУЗЕЬР1ЬН0ОИЬНСЕ

ΤΡΕΟΚνΤ5ΑΑΡΡ3ΡΙΕΚΤΙ3ΚΡΕΟΕΤ(2νΡΗνΥΤΜΞΡΤΚΕΕΜΤΟΝΕν3ΙΤΟΜνΚαΡΥΡΡΟΙΥνΕ

ИОМЫСОРОЕЫУКНТРРТМОТОаЗУРЬУЗКЬЫУККЕКИООСНТРТСЗУЬНЕСЬНЫННТЕКЗЬЗН

РСК

Антитело V - вариабельная область легкой цепи:

5Е0 Ю N0:36

01ЬЬТОЗ РАТЪЗУТРСОЗУЗЬЗСКАЗВЗI ЗСЗ ЬНИΥ00Κ3ΗΕ3РЕЬЬIΚΥΑ305ΙБС1РЗЕРЗ СЗСЗСТОРТЬ31ЫЗУЕТЕОРСМУРСООЗИЗИРЬЫРСАСТКЬЕЬК Антитело V - вариабельная область тяжелой цепи:

ЗЕО ГО N0:37

ЕУОЬУЕЗСССЬУКРССЗЬКЬЗСААЗСРТРЗЗУТМЗНУЕОТРЕКЕЬЕИУАТХЗСЗСССЫТУУРОЗ УКСЕГТ15ЕОПАКНТЬУЬ0ЬЗЗЬЕЗЕОТАЬУУСАЕРСУ№1УУГОУИС0СТТЬТУ55 Антитело V - участки СОК тяжелой цепи:

ЗЕО ГО N0:38 Т13ССССЫТУУР0£УКС

ЗЕО Го N0:39 ΡΟΥΝΝΥΥΡΟΥ

Антитело V - участки СОК легкой цепи:

ЗЕО ГО N0:40 ЕА30313С5ЬН

ЗЕО Го N0:41 ΥΑ303Ι3

ЗЕО ГО N0:42 003Ν3ΜΡΕΝ

Консенсусные СОК тяжелой цепи:

ЗЕО ГО N0:43 ΤΙ3Ο0αΧιΧ₂ΤΥΥΡΌ3νΚΟ

Х₁ представляет собой Р, О,

Х₂ представляет собой О, N

ЗЕО ГО N0:44 ΡΟΥΧ₃ΝΥΥΡΟΙ

Х₃ представляет собой Н, N

ЗЕО ГО N0:45 ΡΟΥΧ₄ΝΥΥΕΒΧ₅Х₄ представляет собой Н, N Х₅ представляет собой I, Υ.

Консенсусные СОК легкой цепи:

ЗЕО ГО N0:46 Χ₆Α3ϋ5Ι3Χ₇5ΝΗ

Х₆ представляет собой Н, К,

Х₇ представляет собой N О ЗЕО ГО N0:47 ΥΧ_βΡ03Χ₉0

Х₈ представляет собой О, А,

Х₉ представляет собой I, Е ЗЕО ГО N0:48 ΥΧχοΧιι03Χ₁₂Χι₃Х₁₀ представляет собой О, А,

Х₁₁ представляет собой К, 8,

Х₁₂ представляет собой I, Е,

Х₁₃ представляет собой О. 8,

ЗЕО ГО N0:49 ООЗХдлЗИРЬН Х₁₄ представляет собой Е, А

ЗЕО ГО N0:50 ООЗХ₁₅ЗИРЬХ₁₆Х₁₅ представляет собой Е, А, N Х₁₆ представляет собой Н, N.

- 20 021401

Консенсусная вариабельная область тяжелой цепи:

ЗЕО Ιϋ N0:51

ЕЧОЪУЕЙОСЮЬУОРСМЗЬКЬЗСААЗСРТРЗ 3УТМЗИУЕОАРбКСЬЕНЦАТIЗббОРСТУУРОЗ νΚΟΚΓΤΙ5Κ)ΝΑΚΝ5ΕΥΕ0ΜΝ3ΕΚΑΕΟΤΑνΥΥΟΑΚΡσΥΧ₁₇ΝΥΥΓΟΙ ИОООТТЛ/ТУЗЗ

Х₁₇ представляет собой Н, N.

Консенсусная вариабельная область легкой цепи:

ЗЕО Ю N0:52

Е1УЬТОЗРАТЬЗЬЗРаЕЕАТЪЗСНА5Е513МЗЬНИУООКРСОАРЕЬЫУУХ1₈ЕОЗ

Χΐ30<3ΙΡΑΚΡ5Ο5Ο5σΤΌΈ^,Ίΐ.ΤΙ55ΕΕΡΕΟΡΑνΥΥΟ 005Х_гоЗШЪНРСССТКУЕ1К Х₁₈ представляет собой С, А,

Х₁₉ представляет собой I, Е,

Х₂₀ представляет собой Е, А.

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ <110> ЭЛИ ЛИЛЛИ ЭНД КОМПАНИ <120> Антитела к ϋΚΚ-1 <130> Х-18097 <150> 61/168411 <151> 2009-04-10 <150> РСТ/и520Ю/ОЗйОЗЭ <151> 2010-04-06 <160> 52 <170> Патентная версия 3.5 <210> 1 <211> 10 <212> РИТ <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическая структура <400> 1 <31у РНе ТНг РНе Зег Зег Туг ТНг Μβΐ. Зег 15 10 <210> 2 <211> 17 <212> РЕТ <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическая структура

ТЬг Не Зег С1у С1у О1у РЬе С1у ТНг Туг Туг Рго Азр Зег Уа1 Ьуз 15 10 15

С1у <210> 3 <211> 10 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическая структура <400> 3

Рго С1у Туг Шз Азп Туг Туг РНе Азр Не 15 10

- 21 021401

<210> <211> <212> <213>

4 10 РКТ Искусственная последовательность

<220> <223>	Синтетическая структура
<400>	4

Рго С1у Туг Азп Азп Туг Туг РЬе Азр Не 15 10

<210> <211> <212> <213>

5 11 РКТ Искусственная последовательность

<220> <223>	Синтетическая структура
<400>	5

Шв А1а Зег Азр Зег Не Зег Азп Бег Ьеи Шз

1	5 10
<210> <211> <212> <213>	6 7 РКТ Искусственная последовательность

<220> <223>	Синтетическая структура
<400>	6

Туг С1у Агд С1п Зег Не С1п 1 5

<210> <211> <212> <213>

7 9 РКТ Искусственная последовательность

<220> <223>	Синтетическая структура
<400>	7

С1п С1п Зег С1и Зег Тгр Рго Ьеи Шз 1 5

<210> <211> <212> <213>

3 7 РКТ Искусственная последовательность

<220> <223>

Синтетическа я структура

- 22 021401 <400> 8

Туг А1а Агд С1п Зег Не С1п <210> 9 <211> 9 <212> РЕТ <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическая структура <400> 9

С1п С1п Бег А1а Зег Тгр Рго Ьеи Ηίε <210> 10 <211> 7 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическая структура <400> 10

Туг А1а Агд С1п Зег С1и αΐη 1 5 <210> 11 <211> 119 <212> РЕТ <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическая структура <400> 11 <31и Уа1 С1п Ьеи Уа1 О1и Зег С1у О1у С1у Ьеи Уа1 С1п Рго (31у О1у 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РЬе ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30

ТЬг МеС Зег Тгр Уа1 Агд Οίη А1а Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр Уа1 35 40 45

А1а ТЬг Не Зег С1у <31у <31у РЬе С1у ТЬг Туг Туг Рго Азр Зег Уа1 50 55 60

Ьуз <31у Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп Зег Ьеи Туг 65 70 75 80

- 23 021401

Ьеи С1п МеС. Аэп Зег Ьеи Агд А1а 01и Аэр ТЬг А1а Уа1 Туг Туг Суэ 85 90 95

А1а Агд Рго О1у Туг Ηίε Азп Туг Туг РЬе Азр Не Тгр О1у О1п С1у 100 105 110

ТЬг ТЬг Уа! ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 12 <211> 119 <212> РЕТ <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическая структура <400> 12

С1и Уа1 С1п Ьеи Уа1 О1и Зег О1у О1у С1у Ьеи Уа1 01п Рго <31у С1у 15 10 15

Зег Ьеи Агд Ьеи бег Суз А1а А1а бег С1у РЬе ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30

ТНг МеС Зег Тгр Уа1 Агд С1п А1а Рго С1у Ьуэ С1у Ьеи О1и Тгр Уа1 35 40 45

А1а ТНг Не Зег С1у С1у О1у РЬе С1у ТЬг Туг Туг Рго Азр бег Уа1 50 55 60

Ьуэ С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп Зег Ьеи Туг 65 70 75 80

Ьеи Θΐη Мес Азп Зег Ьеи Агд А1а С1и Авр ТНг А1а Уа1 Туг Туг Суз 85 90 95

А1а Агд Рго С1у Туг Азп Азп Туг Туг РЬе Азр Не Тгр <31у <31п С1у 100 105 110

ТЬг ТЬг Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег 115 <210> 13 <211> 107 <212> РЕТ <213 > Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическая структура <400> 13

- 24 021401

С1и Не νβΐ Ьеи ТЬг <31п Зег Рго А1а ТЬг Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у 15 10 15 <31и Агд А1а ТЬг Ьеи Зег Сув Нхз А1а Зег Авр Зег 11е Зег Азп Зег 20 25 30

Ьеи Нхз Тгр Туг <31п О1п Ьув Рго 01у С1п А1а Рго Агд Ьеи Ьеи 11е 35 40 45

Туг Туг С1у Агд С1п Зег Не <31п С1у 11е Рго А1а Агд РЬе Зег С1у 50 55 €0

Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи С1и Рго 65 70 75 80 <31и Авр РЬе А1а Уа1 Туг Туг Сув С1п С1п Зег С1и Зег Тгр Рго Ьеи 85 90 95

Нхз РЬе <31у С1у 01у ТЬг Ьуз Уа1 С1и Не Ьуз 100 105 <210> 14 <211> 107 <212> РРТ <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическая структура <400> 14

С1и Не Уа1 Ьеи ТЬг С1п Зег Рго А1а ТЬг Ьеи Зег Ьеи Зег Рго Пу 15 10 15

С1и Агд А1а ТЬг Ьеи Зег Суз ΗΪ3 А1а Зег Авр Зег Не Зег Азп Зег 20 25 30

Ьеи ΗΪ3 Тгр Туг С1п С1п Ьуз Рго С1у С1п А1а Рго Агд Ьеи Ьеи Не 35 40 45

Туг Туг А1а Агд Ип Зег Не С1п С1у Не Рго А1а Агд РЬе Зег С1у 50 55 60

Зег <31у Зег <51у ТЬг Аэр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи О1и Рго 65 70 75 80 <31и Авр РЬе А1а Уа1 Туг Туг Суз С1п Ип Зег Ии Зег Тгр Рго Ьеи 85 90 95

ΗΐΒ РЬе О1у Пу С1у ТЬг Ьув Уа1 С1и Не Ьуз 100 105

- 25 021401 <210> 15 <211> 107 <212 > РИТ <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическая структура <400> 15

С1и Не Ьеи ТЬг αΐη

Зег

Рго

А1а

ТЬг 10

Ьеи

Зег Ьеи

Зег

Рго 15

С1у

1

5

С1и

Агд

А1а

ТНг

Ьеи

Зег

Суэ

А1а

Зег

Азр

Зег

11е

Зег

Азп

Зег

20

25

30

Ьеи

Нгв

Тгр

Туг

С1п

Ьуз

Рго

С1у

01п

А1а

Рго

Агд

Ьеи

11е

35

40

45

Туг

О1у

Агд

С1п

Зег

Не

αΐη

01у

11е

Рго

А1а

Агд

РЬе

Зег

С1у

50

55

60

Зег

С1у

Зег

с1у

ТЬг

Азр

РЬе

ТЬг

Ьеи

ТЬг

Не

Зег

Ьеи

С1и

Рго

65

70

75

80

С1и

Азр

РЬе

А1а

Уа1

туг

Туг

Суз

С1п

Зег

А1а

Зег

Тгр

Рго

Ьеи

85

ЭО

Э5

Ή13

РЬе

С1у

ТНг

Ьуз

Уа1

С1и

Не

Ьуз

100 105 <210> 16 <211> 107 <212> ΡΗΤ <213> Искусственная последовательность

<220>

<223> ι <400> :

Синтетическая структура 16

С1и 1

Не

Уа1

Ьеи

ТЬг 5

С1п

Зег

Рго

А1а

ТЬг 10

Ьеи

Зег

Ьеи

Зег

Рго 15

С1у

С31и

Агд

А1а

ТЬг 20

Ьеи

Зег

Суз

ΗΪ3

А1а 25

Зег

Азр

Зег

Не

Зег 30

Азп

Зег

Ьеи

Н1з

Тгр 35

Туг

С1п

Ьуз

Рго 40

С1у

Е1п

А1а

Рго

Агд 45

Ьеи

Не

Туг

Туг 50

А1а

Агд

О1п

Бег

С1и 55

01п

<31у

11е

Рго

А1а 60

Агд

РЬе

Зег

С1у

- 26 021401

Зег

СЯу

Зег

С1у

ТЬг

Авр

РЬе

ТЬг

Ьеи

ТЬг

1Те

Зег

Ьеи

СТи

Рго

65

70

75

80

СТи

Авр

РЬе

А1а

Уа1

Туг

Сув

СТп

Зег

АТа

Зег

Тгр

Рго

Ьеи

85

90

95

ΗίΒ

РЬе

СТу

С1у

СТу

ТЬг

Ьув

УаТ

СТи

Не

Ьув

100 105 <210> 17 <211> 445

<212> ]	РКТ
<213> Искусственная последовательность <220> <223> Синтетическая структура <400> 17
С1и Уа1 1	О1п Ьеи УаТ С1и Зег СТу СТу СТу Ьеи УаТ С1п Рго СТу С1у 5 10 15
Зег Ьеи	Агд Ьеи Зег Сув АТа А1а Зег СТу РЬе ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30
ТЬг МеЬ	Зег Тгр УаТ Агд С1п АТа Рго СТу Ьув С1у Ьеи С1и Тгр Уа1 35 40 45
А1а ТЬг 50	Не Зег СТу С1у СТу РЬе С1у ТЬг Туг Туг Рго Азр Зег Уа1 55 60
Ьув С1у 65	Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Авр Авп А1а Ьув Авп Зег Ьеи Туг 70 75 80
Ьеи С1п	МеЬ Азп Зег Ьеи Агд А1а СТи Авр ТЬг А1а УаТ Туг Туг Су5 85 90 95
А1а Агд	Рго С1у Туг Нгз Азп Туг Туг РЬе Азр Не Тгр С1у С1п СТу 100 105 110
ТЬг ТЬг	Уа1 ТЬг Уа1 Зег Зег А1а Зег ТЬг Ьуз С1у Рго Зег Уа1 РЬе 115 120 125
Рго Ьеи 130	А1а Рго Суз Зег Агд Зег ТЬг Зег С1и Зег ТЬг А1а А1а Ьеи 135 140
СТу Суз 145	Ьеи Уа1 Ьув Азр Туг РЬе Рго С1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 Зег Тгр 150 155 160
Авп Зег	С1у А1а Ьеи ТЬг Бег С1у Уа1 Шв ТЬг РЬе Рго АТа Уа1 Ьеи 165 170 175

- 27 021401

- 28 021401

Αεη	ΗΪ5	Туг ТЬг <31п Ьув Зег Ьеи	Зег Ьеи	8ег	Ьеи	С1у 445
435	440
<210?	18
<211>	445
<212? :	РКТ
<213? ,	Искусственная последовательность
<220?
<223? '	Синтетическая структура
<400?	18
С1и	Уа1	С1п Ьеи Уа1 О1и Зег	С1у	С1у С1у	Ьеи	Уа1	С1П РГО С1у С1у
1		5		10			15
Зег	Ьеи	Агд Ьеи Зег Суз А1а	А1а	Зег С1у	РНе	ТЬг	РЬе Зег Зег Туг
		20		25			30
ТЬг	Меб	Зег Тгр Уа1 Агд Οίη	А1а	Рго С1у	Ьуа	С1у	Ьеи С1и Тгр Уа1
		35	40				45
А1а	ТНг	11е Зег С1у С1у С1у	РЬе	(}1у ТЬг	Туг	Туг	Рго Аар Зег ναΐ
	50	55				60
Ьуз	□ 1у Агд РЬе ТЬг Не Зег	Агд	Азр Азп	А1а	Ьуз	Авп Зег Ьеи Туг
65		70			75		80
Ьеи	С1п	МеЬ Авп Зег Ьеи Агд	А1а	С1и Азр	ТЬг	А1а	Уа1 Туг Туг Суз
		85		90			95
А1а	Агд	рго С1у Туг Азп Азп	Туг	Туг РЬе	Азр	11е	Тгр С1у С1п С1у
		100		105			110
ТЬг	ТЬг	Уа1 ТЬг 7а1 Зег Зег	А1а	Зег ТЬг	Ьуз	С1у	Рго Зег \7а1 РЬе
		115	120				125
Рго	Ьеи	А1а Рго Суз Зег Агд	Зег	ТЬг Зег	С1и	Зег	ТЬг А1а А1а Ьеи
	130	135				140
51у	Суе	Ьеи Уа1 Ьуз Азр Туг	РЬе	Рго О1и	Рго	Уа1	ТЬг Уа1 Зег Тгр
145		150			155		160
Азп	Зег	С1у А1а Ьеи ТЬг Зег	С1у	ν&1 ΗΪ5	ТНг	РЬе	Рго А1а Уа1 Ьеи
		165		170			17 5
αΐη	Зег	Зег С1у Ьеи Туг Зег	Ьеи	Зег Зег	Уа1	Уа1	ТЬг \Га1 Рго Зег
		180		185			190
Зег	Зег	Ьеи <31у ТЬг Ьуз ТЬг	Туг	ТЬг Суз	Азп	Уа1	Азр Нхз Ьуз Рго
		195	200				205

- 29 021401

Зег Авп ТЬг Ьуз УаЬ Азр Ьуз Агд УаЬ С1и Зег Ьуз Туг СЬу Рго Рго 210 215 220

Суз Рго Рго Суз рго АЬа рго СЬи АЬа А1а СЬу СЬу Рго Зег УаЬ РЬе 225 230 235 240

Ьеи РЬе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр ТЬг Ьеи МеГ Не Зег Агд ТЬг Рго 245 250 255

С1и УаЬ ТЬг Суз УаЬ УаЬ УаЬ Азр УаЬ Зег С1п СЬи Азр Рго СЬи УаЬ 260 265 270

СЬп РЬе Азп Тгр Туг УаЬ Азр СЬу Уа1 СЬи Уа1 Шз Азп А1а Ьуз ТЬг 275 2Θ0 285

Ьуз Рго Агд СЬи СЬи СЬп РЬе Азп Зег ТЬг Туг Агд νβί Уа1 Зег УаЬ 290 295 300

Ьеи ТЬг Уа! Ьеи НЬз С1п Азр Тгр Ьеи Азп СЬу Ьуз СЬи Туг Ьуз Суз 305 310 315 320

Ьуз Уа1 Зег Азп Ьуз с1у Ьеи Рго Зег Зег Не С1и Ьуз ТЬг Не Зег 325 330 335

Ьуз А1з Ьуз СЬу С1п Рго Агд С1и Рго С1п УаЬ Туг ТЬг Ьеи Рго Рго 340 345 350

Зег С1п СЬи С1и МеЬ ТЬг Ьуз Азп СЬп УаЬ Зег Ьеи ТЬг Суз Ьеи УаЬ 355 360 365

Ьуз СЬу РЬе Туг рго Зег Аэр Не АЬа УаЬ С1и Тгр С1и Зег Азп С1у 370 375 380

С1п Рго СЬи Азп Азп Туг Ьуз ТЬг ТЬг Рго Рго УаЬ Ьеи Азр Зег Азр 385 390 395 400

СЬу Зег РЬе РЬе Ьеи Туг Зег Агд Ьеи ТЬг Уа1 Азр Ьуз Зег Агд Тгр 405 410 415

СЬп СЬи С1у Азп УаЬ РЬе Зег Суз Зег Уа1 МеС Н±з С1и АЬа Ьеи НЬз 420 425 430

Азп ΗΪ3 Туг ТЬг с!п Ьуз Зег Ьеи Зег Ьеи Зег Ьеи СЬу 435 440 445 <210>

<211>

<212>

<213>

214

РКТ

Искусственная последовательность

- 30 021401 <220>

<223> Синтетическая структура <400> 19

С1и Не Уа1 Ьеи ТЬг С1п Зег Рго А1а ТНг Ьеи бег Ьеи Зег Рго С1у 15 10 15

31и Агд А1а ТНг Ьеи Зег Суз ΗΪ5 А1а Зег Азр Зег 11е Зег Азп Зег 20 25 30

Ьеи Шз Тгр Туг <31п С1п Ьуз Рго О1у С1п А1а Рго Агд Ьеи Ьеи 11е 35 40 45

Туг Туг <31у Агд <31п Зег Не С1п О1у Не Рго А1а Агд РЬе Зег С1у 50 55 60

Зег С1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Не Зег Зег Ьеи <31и Рго 65 70 75 80

О1и Азр РЬе А1а Уа1 Туг Туг Суз С1п С1п Зег С1и Зег Тгр Рго Ьеи 85 90 95

Н13 РЬе 61у С1у С1у ТЬг Ьуз Уа1 01и 11е Ьуз Агд ТЬг Уа1 А1а А1а 100 105 110

Рго Зег т/а1 РЬе 11е РЬе Рго Рго Зег Азр С1и С1п Ьеи Ьуз Зег О1у 115 120 125

ТЬг А1а Зег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд С1и А1а 130 135 140

Ьуз ν&1 С1п Тгр Ьу5 Уа1 Азр Азп А1а Ьеи С1п Зег С1у Азп Зег С1п 145 150 155 160

С1и Зег Уа1 ТЬг С1и <31п Азр Зег Ьуз Авр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи Зег 165 170 175

Зег ТЫ ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьув А1а Авр Туг С1и ьуз Ηίβ Ьуз Уа1 Туг 180 185 190

А1а Суе С1и Уа1 ТЬг Нхз С1п <31у Ьеи Зег Зег Рго Уа1 ТЬг Ьуз Зег 195 200 205

РЬе Авп Агд <31у С1и Сув 210

<210>	20
<211>	214
<212>	РКТ

- 31 021401 <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическая структура <400> 20

С1и 11е Уа1 Ьеи ТЬг С1п Зег Рго А1а ТЬг Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у 15 10 15

С1и Агд А1а ТЬг Ьеи Зег Суэ ΗΪ3 А1а Зег Азр Зег Не Зег Авп Зег 20 25 30

Ьеи Нхз Тгр Туг 01η С1п Ьуз Рго С1у (31п А1а Рго Агд Ьеи Ьеи Не 35 40 45

Туг Туг А1а Агд 01п Зег 11е С1п С1у 11е Рго А1а Агд РЬе Зег С1у 50 55 60

Зег С1у Зег 01у ТЬг Аер РЬе ТЬг Ьеи ТЬг Не Зег Зег Ьеи С1и Рго 65 70 75 80

С1и Азр РЬе А1а Уа1 Туг Туг Суэ С1п <31п Зег С1и Зег Тгр Рго Ьеи 85 90 95

Ηίδ РЬе С1у <31у О1у ТЬг Ьуэ Уа1 С1и 11е Ьуэ Агд ТЬг Уа1 А1а А1а 100 105 110

Рго Зег 7а1 РЬе 11е РЬе Рго Рго Зег Азр С1и С1п Ьеи Ьуз Зег С1у 115 120 125

ТЬг А1а Зег Уа1 ν3ΐ Суэ Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд <31и А1а 130 135 140

Ьуэ Уа1 Οίη Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп А1а Ьеи 01п Зег 01у Азп Зег Οίη 145 150 155 160

01и Зег νβΐ ТЬг <31и С1п Аэр Зег Ьуэ Аэр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи Зег 165 170 175

Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз А1а Аер Туг С1и Ьуэ Н1э Ьуэ \га1 Туг 180 185 190

А1а Суз О1и Уа1 ТЬг Н1э С1п <31у Ьеи Зег Зег Рго Уа1 ТЬг Ьуэ Зег 195 200 205

РЬе Азп Агд <31у С1и Суз 210 <210> 21

- 32 021401

<211> <212> <213>	214 РКТ Искусственная	последовательность
<220> <223>	Синтетическая	структура
<400>	21
01и Не Уа1 Ьеи ТЬг	Ип Зег Рго А1а ТЬг Ьеи Зег Ьеи Зег Рго Иу

10 15

Ии Агд А1а ТЬг Ьеи Зег Суз Шв А1а Зег Азр Зег 11е Зег Азп. Зег 20 25 30

Ьеи Нхз Тгр Туг Пп Нп Ьуз Рго Пу Пп А1а Рго Агд Ьеи Ьеи Не 35 40 45

Туг Туг Ну Агд Ип Зег Не С1п Иу Не Рго А1а Агд РЬе Зег С1у 50 55 60

Зег 01у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг Ьеи ТЬг 11е Зег Зег Ьеи Ии Рго 65 70 75 80

Пи Азр РЬе А1а Уа1 Туг Туг Суз Нп Пп Зег А1а Зег Тгр Рго Ьеи 65 90 95

ΗΪ3 РЬе Иу С1у Пу ТЬг Ьуз Уа1 Ни Не Ьув Агд ТЬг Уа1 А1а А1а 100 105 110

Рго Зег Уа1 РЬе 11е РЬе Рго Рго Зег Азр Ии Ип Ьеи Ьув Зег Иу 115 120 125

ТЬг А1а Зег Уа1 Уа1 Сув Ьеи Ьеи Азп Азп РЬе Туг Рго Агд Пи А1а 130 135 140

Ьуз Уа1 Пп Тгр Ьуз Уа1 Азр Азп А1а Ьеи Ип Зег С1у Азп Зег С1п 145 150 155 160

Пи Зег Уа1 ТЬг Пи Пп Азр Зег Ьуз Авр Зег ТЬг Туг Зег Ьеи Зег 165 170 175

Зег ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр Туг Пи Ьуз Нхз Ьув Уа1 Туг 180 185 190

А1а Сув Пи Уа1 ТЬг Нхз Ип Пу Ьеи Зег Зег Рго Уа1 ТЬг Ьуз Зег 195 200 205

РЬе Азп Агд Пу Ни Суз 210

- 33 021401 <210> 22 <211> 214 <212> РЕТ <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическая структура <400> 22

С1и Не Уа1 Ьеи ТНг 01п Зег Рго А1а ТНг Ьеи Зег Ьеи Зег Рго С1у 15 10 15

С1и Агд А1а ТНг Ьеи Зег Сув Ηίε А1а Зег Азр Зег Не Зег Азп Зег 20 25 30

Ьеи Н1з Тгр Туг (31п С1п Ьуз Рго (И у С1п А1а Рго Агд Ьеи Ьеи Не 35 40 45

Туг Туг А1а Агд <51п Зег (Пи С1п <31у Не Рго А1а Агд РНе Зег С1у 50 55 60

Зег (Пу Зег <31у ТНг Азр РЬе ТНг Ьеи ТНг Не Зег Зег Ьеи <31и Рго 65 70 75 80

С1и Азр РНе А1а Уа1 Туг Туг Суз С1п <31п Зег А1а Зег Тгр Рго Ьеи 85 90 95

Н1з РНе С1у <31у С1у ТНг Ьуз Уа1 С1и Не Ьуе Агд ТНг 7а1 А1а А1а 100 105 НО

Рго Зег Уа1 РНе Пе РНе Рго Рго Зег Азр Ии Нп Ьеи Ьуз Зег С1у 115 120 125

ТНг А1а Зег Уа1 Уа1 Суз Ьеи Ьеи Азп Азп РНе Туг Рго Агд С1и А1а 130 135 140

Ьуз Уа1 С1п Тгр Ьуэ Уа1 Азр Азп А1а Ьеи С1п Зег (Пу Авп Зег О1п 145 150 155 160

С1ц Зег ν&1 ТНг 01и <Лп Авр Зег Ьуз Азр Зег ТНг Туг Зег Ьеи Зег 165 170 175

Зег ТНг Ьеи ТНг Ьеи Зег Ьуз А1а Азр Туг Пи Ьуз Шз Ьуз Уа1 Туг 180 185 190

А1а Суз С1и Уа1 ТНг Н1з С1п С1у Ьеи Зег Зег Рго Уа1 ТЬг Ьув Зег 195 200 205

РЬе Азп Агд С1у 01и Суз 210

- 34 021401 <210> 23 <211> 1335 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическая структура <400> 23

даддСдсадс	сддСддадСс	Сдддддаддс	ССддСссадс	сСддддддСс	ссСдадасСс	60
СссСдСдсад	ссСсСддаСС	сасСССсадс	адсСаСасса	СдСсССдддС	ссдссаддсС	120
ссадддаадд	ддссддадсд	ддСддссасс	асссссддСд	дСддСССсдд	сасаСасСаС	180
сссдасадСд	СдаадддСсд	аССсассаСс	Сссададаса	асдссаадаа	сСсасСдСаС	240
сСдсааасда	асадссСдад	адссдаддас	асддсСдСдС	аССасСдСдс	дадассСдда	300
СассасаасС	ассассссда	саСсСддддс	саадддасса	сддСсассдС	сСссСсадсс	360
Сссассаадд	дсссаСсддС	сССсссдсСа	дсдсссСдсЬ	ссаддадсас	сСссдададс	420
асадссдссс	СдддсСдссС	ддСсааддас	СасССссссд	аассддСдас	ддСдСсдСдд	480
аасСсаддсд	сссСдассад	сддсдсдсас	ассСссссдд	сСдСссСаса	дСссСсадда	540
сссСасессс	ссадсадсдС	ддСдассдСд	сссСссадса	дсССдддсас	даадассСас	600
ассСдсаасд	Садассасаа	дсссадсаас	ассааддСдд	асаадададС	СдадСссааа	660
СаСддСсссс	саСдсссасс	ссдсссадса	сссдаддссд	ссдддддасс	аСсадСсССс	720
ссдССссссс	саааасссаа	ддасасСсСс	аСдаСсСссс	ддассссСда	ддСсасдСдс	780
дСддСддСдд	асдСдадсса	ддаадасссс	даддСссадС	СсаасСддса	сдСддаСддс	840
дсддаддСдс	аСааСдссаа	дасааадссд	сдддаддадс	адССсаасад	сасдСассдС	900
дСддСсадсд	СссСсассдС	сссдсассад	дасСддсСда	асддсаадда	дСасаадСдс	960
ааддСсСсса	асаааддссС	сссдСссСсс	аСсдадаааа	ссаСсСссаа	адссаааддд	1020
садссссдад	адссасаддС	дСасасссСд	сссссаСссс	аддаддадаС	дассаадаас	1080
саддСсадсс	СдассСдссС	ддСсаааддс	ССсСасссса	дсдасаСсдс	сдСддадСдд	1140
дааадсааСд	ддсадеедда	даасаасСас	аадассасдс	сСсссдСдсС	ддассссдас	1200
ддсСссССсС	СссссСасад	саддсСаасс	дЬддасаада	дсаддСддса	ддаддддааС	1260
дСсЫсСсаС	дсСссдСдаС	дсаСдаддсС	сСдсасаасс	ассасасаса	даададссСс	1320
СсссСдСсСс	СдддС					1335

<210> 24 <211> 1335 <212> ДНК <213 > Искусственная последовательность <220>

<223 > Синтетическая структура

- 35 021401 <400> 24

даддИдсадс	СддГддадСс	едддддаддс	ССддСссадс	ссддддддсс	ссСдадасСс	60
ЬсссдСдсад	ссссРддасс	сасСССсадС	адсСаСасса	СдСсССдддС	ссдссаддсС	120
ссадддаадд	ддсСддадСд	ддСддссасс	аСССссддСд	дСддСССсдд	сасаСасСаС	180
сссдасадСд	СдаадддСсд	аССсассаСс	Сссададаса	асдссаадаа	сСсасЬдЬаС	240
сСдсаааСда	асадссСдад	адссдаддас	асддсСдСдС	аССасСдСдс	дадассСдда	300
СаГааЬаасС	асРасСХСда	саЬсСддддс	саадддасса	сддссассдс	сСссСсадсс	360
Сссассаадд	дсссаСсддС	сССсссдсСа	дсдсссСдсС	ссаддадсас	сСссдададс	420
асадссдссс	СдддсСдссс	ддссааддас	СасССссссд	аассддСдас	ддСдСсдСдд	480
аасГсаддсд	сссСдассад	сддсдСдсас	асссссссдд	сСдСссСаса	дСссСсадда	540
сЬс£.ассссс	дсадсадсдс	ддСдассдСд	сссСссадса	дсССдддсас	даадассСас	600
ассЪдсаасд	СадаСсасаа	дсссадсаас	ассааддСдд	асаадададС	СдадЪссааа	660
СаЬддСсссс	саСдсссасс	сСдсссадса	сссдаддссд	ссдддддасс	аСсадСсССС	720
ссдгъссссс	саааасссаа	ддасасСсСс	аСдаСсСссс	ддассссСда	ддСсасдСдс	780
дгддьддидд	асдСдадсса	ддаадасссс	даддсссадС	Ссаассддса	сдСддаСддс	840
дЬддаддЪдС	аСааСдссаа	дасааадссд	сдддаддадс	адсссааоад	сасдСассдС	900
дЬддесадсд	сссисассдС	ссСдсассад	дасСддсСда	асддсаадда	дСасаадСдс	960
ааддСсссса	асаааддссс	сссдСссСсс	аСсдадаааа	ссаСсСссаа	адссаааддд	1020
садссссдад	адссасаддС	дСасасссСд	сссссаСссс	аддаддадаС	дассаадаас	1080
садд£садсс	СдасссдссС	ддСсаааддс	ССсхасссса	дсдасаСсдс	сдЁддадЬдд	1140
дааадсаард	ддсадссдда	даасаасСас	аадассасдс	сСсссдСдсС	ддассссдас	1200
ддсРсссссЕ	СссСсСасад	саддсСаасс	дсддасаада	дсаддСддса	ддаддддаас	1260
дСсДСсСсаР	дсСссдЬдаС	дсаъдаддсс	срдсасаасс	асСасасаса	даададссСс	1320
есссрдсссс	ЬдддЪ					1335

<210> 25 <211> 642 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическая структура <400> 25

дааассдсдс	СдасасадСс	сссадссасс	ссдсссссдс	сСссадддда	аададссасс	60
сСсСссСдсс	асдссадсда	садСаССадс	аасадсссас	асСддсасса	асадааассС	120
ддссаддсСс	ссаддсСссС	саСсСаССаС	ддсадасадС	ссаСссаддд	саСсссадсс	180
аддсссадсд	дсадСдддСс	Сдддасадас	ССсасСсСса	ссаСсадсад	ссСададссС	240

- 36 021401

даадаСССДд	садСССаССа	сСдСсаасад	адСдададсС	ддссдсСсса	сССсддсдда	300
дддассаадд	ЪддадаЬсаа	асдаасЬдЬд	дсСдсассаЬ	сЬдЕсЪЬсаЬ	сЕСсссдсса	360
СссдаСдадс	адССдаааСс	ЪддаасСдсс	СсгдССдсдД	дссСдсСдаа	саасССсСаС	4Ξ0
ессадададд	ссааадСаса	дСддааддСд	даГаасдссс	ессааСсддд	ЬаасСсссад	480
дададСдСса	сададсадда	садсааддас	адсассСаса	дссСсадсад	сасссЕдасд	540
сьдадсааад	садасЪасда	дааасасааа	дЕсЪасдссС	дсдаадСсас	ссапсадддс	600
сСдадсСсдс	ссдСсасааа	дадсССсаас	аддддададС	дс		642

<210> 26 <211> 642 <212> ДНК <213 > Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическая структура <400> 26

даааССдДд^	£дасасад£с	Сссадссасс	ссдСсСССдС	сСссадддда	аададссасс	60
сгсСссСдсс	асдссадсда	садСассадс	аасадсссас	асСддсасса	асадааассС	120
ддссаддсСс	ссаддсЬссС	саСсСаССаС	дсСадасадС	ссаСссаддд	саСсссадсс	180
аддССсадДд	дсадСдддЪс	Сдддасадас	ДссасссСса	ссассадсад	ссСададссс	240
даадаЪЪцдд	садЪЪЪа£Са	сСдъсаасад	адЪдададсс	ддссдсьсса	сССсддсдда	300
дддассаадд	Сддадассаа	асдаасДдСд	дсСдсассаС	сСдСсССсаД	сССсссдсса	360
ссСдаСдадс	адссдааасс	СддаасСдсс	СсСдССдСдС	дссСдсСдаа	саасссесас	420
ессадададд	ссааадеаса	дСддааддСд	даСаасдссс	СссааСсддд	СаасСсссад	480
дададСдЬса	сададсадда	садсааддас	адсассСаса	дссСсадсад	сасссСдасд	540
сСдадсааад	садасСасда	дааасасааа	дсссасдссС	дсдаадСсас	ссаСсадддс	600
сСдадсСсдс	ссдСсасааа	дадсССсаас	аддддададС	дс		642

<210> 27 <211> 642 <212> ДНК <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическая структура <400> 27

даааССдСдС	СдасасадСс Сссадссасс сСдСсСССдС сСссадддда аададссасс	60
сссСссСдсс	асдссадсда садСаССадс аасадссСас асСддСасса асадааассС	120
ддссаддсСс	ссаддсСссС саСсСасСаС ддсадасадС ссаСссаддд саСсссадсс	1Э0
аддССсадСд	дсадСдддСс Сдддасадас ССсаспсСса ссассадсад ссСададссс	240

- 37 021401

даадаССССд	садСССаССа	сСдСсаасад	адСдссадсС	ддссдсСсса	сССсддсдда	300
дддассаадд	ЪздадаЬсаа	асдааспдьд	дсСдсассаС	сЬдсссСсаС	сССсссдсса	360
СсСдаьдадс	адССдаааСс	СддаасСдсс	СсСдССдСдС	дссСдсСдаа	СаасССсСаС	420
сссадададд	ссааадсаса	дСддааддСд	дасаасдссс	Сссаассддд	СаасСсссад	480
дададСдСса	сададсадда	садсааддас	адсассСаса	дссСсадсад	сасссСдасд	540
сСдадсааад	садасСасда	дааасасааа	дСсСасдссС	дсдаадСсас	ссаЬсадддс	600
сСдадсссдс	ссдссасааа	дадсССсаас	аддддададС	дс		642

<210> 28 <211> 642 <212> ДНК <213 > Искусственная последовательность

<220>
<223> Синтетическая структура
<400> 28 дааассдсдс	СдасасадСс	Сссадссасс	сСдСсСССдС	сСссадддда	аададссасс	60
сСсСссСдсс	асдссадсда	садСаССадс	аасадссьас	асСддсасса	асадааассс	120
ддссаддсСс	ссаддсСссС	сассьассас	дсСадасадС	ссдадсаддд	саСсссадсс	180
аддССсадСд	дсадгдддСс	Сдддасадас	сгсассссса	ссаСсадсад	ссСададссС	240
даадассссд	садсссасъа	сСдСсаасад	адСдссадсС	ддссдсСсса	ссссддсдда	300
дддассаадд	еддадаСсаа	асдаасСдСд	дсСдсассаС	сСдссССсае	сССсссдсса	360
СсСдаСдадс	адссдааасс	сддаассдсс	сссдссдсдс	дсссдсСдаа	СаасССсСас	420
сссадададд	ссааадСаса	дСддааддСд	даСаасдссс	СссааСсддд	СаасСсссад	480
дададСдСса	сададсадда	садсааддас	адсассСаса	дссссадсад	сасссСдасд	540
сьдадсааад	садасьасда	дааасасааа	дСсСасдссС	дсдаадСсас	ссаСсадддс	600
сСдадсСсдс	ссдСсасааа	дадсССсаас	аддддададЬ			642

<210> 29 <211> 235 <212> РКТ <213 > Ното заргепз

<400> 29

ТЬг 1

Ьеи

Азп

Зег

Уа1 5

Ьеи

Азп

Зег

Азп

А1а 10

Не

Ьуз

Азп

Ьеи

Рго 15

Рго

РГО

Ьеи

<31у

С1у 20

А1а

С1у

ΗΪ3

Рго 25

С1у

8ег

А1а

Уа1

Зег 30

А1а

Рго

СНу

11е 35

Ьеи

Туг

Рго

<31у

С1у 40

Азп

Ьуз

Туг

(31п

ТЬг 45

11е

Азр

Азп

- 39 021401

Туг <31п Рго Туг Рго Суз А1а б1и Азр 01 и 01 и Суз С1у ТЬг Азр О1и 50 55 60

Туг Суз А1а Бег Рго ТЬг Агд О1у О1у Азр А1а С1у Уа1 С1п Не Суз 65 70 75 80

Ьеи А1а Суз Агд Ьуз Агд Агд Ьуз Агд Суз МеЕ Агд Шз А1а МеЕ Суз 85 90 95

Суз Рго 61у Азп Туг Сув ьуз Азп О1у 11е Суз Уа1 Зег Зег Азр С1п 100 105 110

Азп Азп РЬе Агд О1у О1и 11е С1и С1и ТЬг Не ТЬг О1и Бег РЬе 01у 115 120 125

Азп Азр Шз Зег ТЬг Ьеи Азр 01у Туг Бег Агд Агд ТЬг ТЬг Ьеи Зег 130 135 140

Зег Ьуз МеЕ Туг Шз Бег Ьуз О1у О1п С1и 01у Зег Уа1 Суз Ьеи Агд 145 150 155 160

Бег Зег Азр Суз А1а ТЬг С1у Ьеи Суз Суз А1а Агд Шз РЬе Тгр Зег 165 170 175

Ьуз Не Суз Ьуз Рго Уа1 Ьеи Ьуз 01и О1у 01п Уа1 Суз ТЬг Ьуз Шз 180 185 190

Агд Агд Ьуз О1у Зег Шз 01у Ьеи О1и Не РЬе 61п Агд Суз Туг Суз 195 200 205

С1у С1и 01у Ьеи Зег Суз Агд Не 01п Ьуз Азр Шз Шз О1п А1а Зег 210 215 220

Азп Зег Бег Агд Ьеи Ηίβ ТЬг Суз 01п Агд 225 230 <210> 31 <211> 252 <212> РКТ <213> КаЕЕиз гаЕЕиз <400> 31

ТЬг Ьеи Азп Бег \7а1 Ьеи Не Азп Зег Азп А1а Не Ьуз Азп Ьеи Рго 15 10 15

Рго Рго Ьеи С1у С1у А1а О1у С1у 31п Рго О1у Зег А1а Уа1 Зег Уа1 20 25 30

- 40 021401

А1а Рго С1у Уа1 Ьеи Туг С1и С1у С1у Азп Ьуз Туг <31п ТЬг Ьеи Азр 35 40 45

Азп Туг С1п Рго туг Рго Суз А1а С1и Азр <31и С1и Суз <31у ТЬг Азр 50 55 60

С1и Туг Суз Зег Зег Рго Зег Агд <31у А1а А1а С1у Уа1 С1у С1у Уа1 65 70 75 80

О1п Не Суз Ьеи А1а Суз Агд Ьуз Агд Агд Ьуз Агд Суз МеС Агд Н1з 85 90 95

А1а МеЪ Суз Суз Рго СЬу Азп Туг Суз Ьуз Азп С1у 11е Суз МеЬ Рго 100 105 110

Зег Азр Ηίβ Зег Нхз Ьеи Рго Агд С1у С1и Не С1и <31и <31у Не Не 115 120 125

С1и Азп Ьеи С1у Азп Азр Нхз С1у А1а С1у Азр С1у Туг Рго Агд Агд 130 135 140

ТЬг ТЬг Ьеи ТЬг 5ег Ьуз Не Туг Нхз ТЬг Ьуз С1у (31п С1и С1у Зег 145 150 155 160

Уа1 Суз Ьеи Агд Зег Зег Азр Суз А1а ТЬг С1у Ьеи Суз Суз А1а Агд 165 170 175

Нхз РЬе Тгр Зег Ьуз Не Суз Ьуз Рго Уа1 Ьеи Ьуз С1и С1у С1п \Га1 180 185 190

Суз ТЬг Ьув Нхз Агд Агд Ьуз С1у Зег Нхз <31у Ьеи С1и Не РЬе С1п 195 200 205

Агд Суз Туг Суз С1у С1и С1у Ьеи А1а Суз Агд Не С1п Ьув Азр Нхз 210 215 220

Нхз С1п ТЬг 5ег Азп Зег Зег Агд Ьеи Ηί3 ТЬг Суз С1п Агд Нхз А1а 225 230 235 240

РЬе 11е Авр Туг Ьуз Авр Авр Авр Азр Ьуз Нхз \га1 245 250 <210? 32 <211? 236 <212? РКТ <213> Ьериз атег1сапиз <400? 32

ТЬг Ьеи Азп 5ег Vа1 Ьеи Уа1 Авп £ег Азп А1а Не Ьуз Азп Ьеи Рго

- 41 021401

1

5

10

15

Рго

Ьеи

Е1у

С1у

А1а

Азп

С1у

Н13

Рго

О1у

Зег

А1а

Уа1

Зег

А1а

20

25

30

ТЬг

Рго

01у

Не

Ьеи

Туг

С1и

С1у

Азп

Ьуе

Туг

Ьеи

Рго

Ьеи

Аер

35

40

45

Азп

Туг

С1п

Рго

Туг

Рго

Суе

ТЬг

С1и

Азр

61и

С1и

Суз

С1у

ТЬг

Азр

50

55

60

61и

Туг

Суз

А1а

Зег

Рго

А1а

Агд

Е1у

С1у

61у

А1а

С1у

Уа1

С1п

Не

65

70

75

80

Суз

Ьеи

А1а

Суз

Агд

Ьуз

Агд

Ьуз

Агд

Сув

МеГ

Агд

НХЗ

А1а

Мег

85

90

95

Суз

Рго

01у

Азп

Туг

Суз

Ьуз

Аеп

С1у

11е

Суз

МеЬ

Рго

Зег

Азр

100

105

110

Н13

Аеп

ΗΪ3

РЬе

Н1з

Агд

С1у

<31и

11е

С1и

О1и

ТЬг

11е

Уа1

С1и

Зег

115

120

125

РЬе

61у

Азп

Азр

ΗΪ3

Зег

ТЬг

Зег

Азр

С1у

Туг

Зег

Агд

ТЬг

130

13 5

140

Ьеи

Зег

Ьуз

МеЬ

Туг

Нгз

А1а

Ьуе

С1у

<31п

Е1и

С1у

Зег

Уа1

Суз

145

150

155

160

Ьеи

Агд

Зег

Азр

Суз

А1а

ТЬг

С1у

Ьеи

Суз

А1а

Агд

Нхз

РЬе

165

17 0

175

Тгр

Зег

Ьуз

11е

Суз

Ьуз

Рго

Ца1

Ьеи

Ьуз

О1и

<31у

С1п

ца1

Суз

ТЬг

180

185

190

Ьуз

Н1з

Агд

Ьуе

О1у

Зег

ΗΪ3

С1у

Ьеи

<31и

11е

РЬе

О1п

Агд

Суз

195

200

205

Туг

Суз

О1у

Авр

<31у

Ьеи

Зег

Суз

Агд

Ьеи

С1п

Аэп

Азр

СЯп

Н1з

<31и

210

215

220

А1а

Зег

Азп

Зег

Агд

Ьеи

Нхз

ТЬг

Суз

01п

Агд

225

230

235

<210> 33 <211ι- 241 <212> РЕТ <213> Мив тиесиТиз

- 42 021401 <400> 33

ТЬг Ьеи Азп Зег Уа1 Ьеи Не Азп Зег Азп АЬа Не Ьуз Азп Ьеи Рго 15 10 15

Рго Рго Ьеи С1у С1у А1а С1у <31у С1п Рго С1у Зег А1а Уа1 Зег 'Ή1 20 25 30

А1а Рго <31у Уа1 Ьеи Туг С1и С1у С1у Азп Ьуз Туг С1п ТЬг Ьеи Аер 35 40 45

Азп Туг <31п Рго Туг Рго Суа А1а Пи Азр Пи С1и Суз Пу Зег Аар 50 55 60

Ии Туг Суз Зег Зег Рго Зег Агд Ну А1а А1а С1у Ή Пу С1у Уа1 65 70 75 80

С1п 11е Суа Ьеи А1а Суб Агд Ьуз Агд Ахд Ьуз Агд Суз Мес ТЬг Ηίβ 85 90 95

А1а МеС Суз Суа Рго (31у Азп Туг Суз Ьуз Азп С1у 11е Суз МеС Рго 100 105 110

Зег Азр Ηίε Зег Ηίε РЬе Рго Агд С1у 01и Не С1и С1и Зег Не Не 115 120 125

О1и Адп Ьеи С1у Анп Аер Шз Азп А1а А1а А1а С1у Аар Пу Туг Рго 130 135 140

Агд Агд ТЬг ТЬг Ьеи ТЬг Зег Ьуа Не Туг Н1а ТЬг Ьуз О1у С1п Пи 145 150 155 160

Ну Зег Уа1 Суз Ьеи Агд Зег Зег Аар Суз А1а А1а С1у Ьеи Суз Суз 165 170 175

А1а Агд Ηίε РЬе Тгр Зег Ьуз Не Суз Ьуз Рго Уа1 Ьеи Ьуз С1и <31у 180 185 290 <31п 7а 1 Суз ТЬг Ьуз Ηίε Ьуз Агд Ьув Пу Бег Ηίε С1у Ьеи Ии Не 195 200 205

РЬе Ип Агд Суз Туг Суз С1у Ни С1у Ьеи А1а Суз Агд Не Нп Ьуз 210 215 220

Азр Ηί3 Ньз <31п А1а Зег Азп Зег Зег Агд Ьеи Ньз ТЬг Суз Θΐη Агд 225 230 235 240

Н1з

- 43 021401 <210? 34 <211? 214 <212? РРТ <213? Искусственная последовательность <220?

<223? Синтетическая структура <400? 34

Авр Не Ьеи Ьеи ТЬг 31 η Зег Рго 1 5

А1а ТЬг Ьеи Зег Уа1 ТЬг Рго С1у 10 15

Азр Зег Уа1 Зег Ьеи Зег Суз Агд 20

А1а Зег Азр Зег 11е Зег О1у Зег 25 30

Ьеи Ηί3 Тгр Туг 01η αΐη Ьуз Зег 35 40

Н1з Я1и Зег Рго Агд Ьеи Ьеи 11е 45

Ьуз Туг А1а Зег 61п Зег Не Зег 50 55

С1у 11е Рго Зег Агд РЬе Зег С1у 60

Зег е1у Зег С1у ТЬг Азр РЬе ТЬг 05 70

Ьеи Зег 11е Азп Зег 7а1 С1и ТЬг 75 80

С1и Азр РЬе О1у МеС Туг РЬе Суз 85

С1п С1п Зег Азп Зег Тгр Рго Ьеи 90 95

Азп РЬе С1у А1а С1у ТЬг Ьув Ьеи 100

Ии Ьеи Ьуз Агд А1а Азр А1а А1а 105 110

Рго ТЬг Уа1 Зег Не РЬе Рго Рго 115 120

Зег ТЬг С1и С1п Ьеи А1а ТЬг (31у 125 <31у А1а Зег Уа1 Уа1 Суз Ьеи МеЬ 130 135

Азп Азп РЬе Туг Рго Агд Азр Не 140

Зег ’7а1 Ьуз Тгр Ьуз Не Азр С1у 145 150

ТЬг <31и Агд Агд Азр С1у νπΐ Ьеи 155 160

Азр Зег Уа1 ТЬг Азр С1п Азр Зег 165

Ьуз Азр Зег ТЬг Туг Зег КеЬ Зег 170 175

Зег ТЬг Ьеи Зег Ьеи Зег Ьуз А1а 180

Азр Туг С1и Зег Н1е Азп Ьеи Туг 185 190

ТЬг Суз <31и 7а1 Уа1 Н1з Ьуз ТЬг 195 200

Зег Зег Зег Рго Уа1 Уа1 Ьуз Зег 205

РЬе Азп Агд Азп С1и Суз 210

- 44 021401 <210> 35 <211> 445 <212> ΡΕΤ <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическая структура <400> 35

С1и УаХ С1п Ьеи Уа1 СХи Зег <31у <31у СХу Ьеи Уа1 Ьуз Рго С1у С1у 15 10 15

Зег Ьеи Ьуз Ьеи Зег Суз А1а А1а Зег С1у РЬе ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30

ТЬг ИеЬ Зег Тгр Уа1 Агд С1п ТЬг Рго С1и Ьуз Агд Ьеи СХи Тгр Уа1 35 40 45

А1а ТЬг Не Зег С1у СХу С1у С1у Азп ТЬг Туг Туг Рго Азр Зег Уа1 50 55 60

Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг 65 70 75 80

Ьеи С1п Ьеи Зег Зег Ьеи Агд Зег СХи Азр ТЬг А1а Ьеи Туг Туг Суд 85 Э0 95

АХа Агд Рго С1у Туг Азп Азп Туг Туг РЬе Азр Туг Тгр С1у СХп С1у 100 105 110

ТЬг ТЬг Ьеи ТЬг УаХ Зег Зег А1а Ьуз ТНг ТЬг Рго Рго Зег УаХ Туг 115 120 125

Рго Ьеи А1а Рго СХу ТЬг АХа Ьеи Ьуз Зег Азп Зег МеЬ Уа1 ТЬг Ьеи 130 135 140

С1у Суз Ьеи УаХ Ьуз е1у Туг РЬе Рго С1и Рго Уа1 ТЬг Уа1 ТЬг Тгр 145 150 155 160

Азп Зег С1у АХа Ьеи Зег Зег С1у Уа1 Нгз ТЬг РЬе Рго А1а Уа1 Ьеи 165 170 175

С1п Зег С1у Ьеи Туг ТЬг Ьеи ТЬг Зег Зег Уа1 ТЬг Уа1 Рго Зег Зег 180 185 190

ТЬг Тгр Рго Зег С1п ТЬг Уа1 ТЬг Суз Азп Уа1 А1а Н1з Рго А1а Зег 195 200 205

Зег ТЬг Ьуз Уа1 Азр Ьуз Ьуз Не Уа1 Рго Агд Азп Суз С1у С1у Азр 210 215 220

- 45 021401

Суз Ьуз Рго Суз Не Суз ТНг С1у Зег С1и 225 230

Уа1 Бег Зег Уа1 РНе Пе 235 240

РНе Рго Рго Ьуз Рго Ьуз Азр Уа1 Ьеи ТНг 245 250

IIе ТНг Ьеи ТНг Рго Ьув 255

Уа1 ТНг Суз Уа1 Уа1 Уа1 Азр 11е Бег С1п 260 265

Авр Азр Рго С1и Уа1 НЬз 270

РНе Бег Тгр РНе Уа1 Азр Азр Уа1 С1и Уа1 275 280

НЬз ТНг А1а С1п ТНг Агд 285

Рго Рго С1и С1и <31п РНе Азп Зег ТНг РНе 290 295

Ага Зег Уа1 Зег <31и Ьеи 300

Рго 11е Ьеи НЬз αΐη Азр Тгр Ьеи Азп С1у 305 310

Агд ТНг РНе Агд Суз Ьуз 315 320

Уа1 ТНг Зег А1а А1а РЬе Рго Зег Рго Не 325 330

С1и Ьуз ТНг Пе Зег Ьуз 335

Рго С1и С1у Агд ТНг <31п Уа1 Рго НЬз Уа1 340 345

Туг ТНг Мес Зег Рго ТНг 3 50

Ьуз С1и С1и МеС ТЬг ΰΐη Азп <31и Уа1 Зег 355 360

Пе ТНг Суз МеС Уа1 Ьуз 365

61у РНе Туг Рго Рго Азр 11е Туг Уа1 С1и 370 375

Тгр О1п МеС Азп С1у Θΐη 380

Рго С1п <31и Азп Туг Ьуз Азп ТНг Рго Рго 385 390

ТНг МеС Азр ТЬг Азр О1у 395 400

Зег Туг РНе Ьеи Туг Зег Ьуз Ьеи Азп ’Й1 405 410

Ьуз Ьуз С1и Ьуз Тгр <31п 415

С1п С1у Азп ТНг РЬе ТЬг Суз Зег Уа1 Ьеи 420 425

НЬз <31и 01у Ьеи НЬз Азп 430

НЬз НЬз ТНг С1и Ьуз Зег Ьеи Зег НЬз Зег 435 440

Рго 61у Ьуз 445 <210> 36 <211> 107 <212> РЕТ <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическая структура

- 46 021401 <400> 36

Азр Не Ьеи Ьеи ТЬг <31п Зег Рго А1а ТЬг Ьеи Зег Уа1 ТЪг Рго 01у 15 10 15

Аар Зег Уа1 Зег Ьеи Зег Суз Агд А1а Зег Азр Зег Не Зег О1у Зег 20 25 30

Ьеи Ήϊξ Тгр Туг О1п С1п Ьуз Зег Н1з 01и Зег Рго Агд Ьеи Ьеи Не 35 40 45

Ьуз Туг А1а Зег С1п Зег Не Зег О1у Не Рго Зег Агд РЬе Бег <31у 50 55 60

Зег С;1у Зег С1у ТЬг Азр РНе ТЬг Ьеи Зег Не Азп Зег Уа1 (31и ТЬг 65 70 75 80

С1и Азр РЬе 01у МеЕ Туг РЬе Суз О1п с1п Зег Азп Зег Тгр Рго Ьеи 85 90 95

Азп РЬе С1у А1а С1у ТЬг Ьуз Ьеи С1и Ьеи Ьуз 100 105 <210ь 37 <211> 119 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220ь <223> Синтетическая структура с400> 37

С1и Уа1 С1п Ьеи \Га1 <31и Зег С1у С1у 01 у Ьеи 1/а1 Ьуз Рго 61у <з1у 15 10 15

Зег Ьеи Ьуз Ьеи Зег Суз А1а А1а Бег <з!у РЬе ТЬг РЬе Зег Зег Туг 20 25 30

ТЬг МеЕ Зег Тгр Уа1 Агд С1п ТЬг Рго О1и Ьуз Агд Ьеи С1и Тгр Уа1 35 40 45

А1а ТЬг Не Зег О1у С1у С1у 51у Анп ТЬг Туг Туг Рго Азр Зег 7а1 50 55 60

Ьуз 01у Агд РЬе ТЬг Не Зег Агд Азр Азп А1а Ьуз Азп ТЬг Ьеи Туг 65 70 75 80

Ьеи С1п Ьеи Бег Зег Ьеи Агд Зег С1и Азр ТЬг А1а Ьеи Туг Туг Суз 85 90 95

- 47 021401

<210> 41 <211> 7 <212 > РКТ <213=· Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическая структура <400> 41

- 48 021401

Туг А1а Зег С1п Зег Не Зег 1 5 <210? 42 <211? 9 <212? РКТ <213? Искусственная последовательность <220?

<223> Синтетическая структура <400? 42

01п 01п Зег Авп Бег Тгр Рго Ьеи Азп 1 5 <210? 43 <211? 17 <212? РКТ <213? Искусственная последовательность <220?

<223> Синтетическая структура <220?

<221? Н15С_РЕАТиКЕ <222? (7)..(7) <223? Хаа при позиции 7 = РЬе или О1у <220?

<221? И15С_РЕАТОКЕ <222? (8)..(8) <223? Хаа при позиции 8 = О1у или Азп <400? 43

ТЬг 11е Зег <31у О1у О1у Хаа Хаа ТЬг Туг Туг Рго Азр Бег Уа1 Ьуз 15 10 15

О1у <210? 44 <211? 10 <212? РКТ <213? Искусственная последовательность <220?

<223? Синтетическая структура <22 0?

<221? М13С„РЕАТиКЕ <222? (4) . . (4) <22 3? Хаа при позиции 4 = Шз или Азп <400? 44

Рго 01у Туг Хаа Азп Туг Туг РЬе Азр 11е

- 49 021401

10 <210> 45 <211> 10 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>

<223 > Синтетическая структура <220>

<221> М13С_РЕАТЦКЕ <222> (4)..(4} <223 > Хаа при позиции 4 = Ньз или Азп <220>

<221> М13С_РЕАТиКЕ <222> (10)..(10) <22 3> Хаа при позиции 10 = 11е или Туг <400> 45

Рго С1у Туг Хаа Азп Туг Туг РЬе Азр Хаа 15 10 <210> 46 <211> 11 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическая структура <220>

<221> М13С_РЕАТЦНЕ <222> (1)..(1) <223> Хаа при позиции 1 = Ньз или Агд <220>

<221> М13С_РЕАТОКЕ <222> (8) , , (8) <223> Хаа при позиции 8 = Азп или С1у <400> 46

Хаа А1а Зег Азр Зег 11е Зег Хаа Зег Ьеи Ньз 15 10 <210> 47 <211> 7 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическая структура <22 0 >

<221> М15С_РЕАТОКЕ

- 50 021401 <222> (2)..(2) <223> Хаа при позиции 2 = СЯу или А1а <220>

<221> М13С_РЕАТиКЕ <222> (6)..(6) <223 > Хаа при позиции 6 = Не или <31и <400> 47

Туг Хаа Агд 01п 5ег Хаа е1п

5 <210> 46 <211> 7 <212> РКТ <213> Искусственная последовательность <220>

<223 > Синтетическая структура <220>

<221> М15С_РЕАТиКЕ <222ь (2)..(2) <223> Хаа при позиции 2 = <31у или А1а <220>

<221> М13С_ГЕАТиКВ <222> (3)..(3) <223> Хаа при позиции 3 = Агд или Зег <220>

<221> М15С_РЕАТиКЕ <222> (6)..(6) <223> Хаа при позиции 6 = Не или О1и <220>

<221> М13С_РЕАТиКЕ <222> (7) . . (7) <223> Хаа при позиции 7 = <31п или Зег <400> 48

Туг Хаа Хаа Θΐη Зег Хаа Хаа

5 <210> 49 <211> 9 <212 > РКТ <213> Искусственная последовательность <220>

<223> Синтетическая структура <220>

<221 > И13С_РЕАТиКЕ <222> (4) . . (4) <223 > Хаа при позиции 4 = <31и или А1а <400> 49

- 51 021401

01η 01η Зег Хаа Зег Тгр Рго Ьеи Нхз 1 5 <210? 50 <211? 9 <212? РКТ <213 > Искусственная последовательность <220?

<223? Синтетическая структура <220?

<221? М13СРЕАТСКЕ <222? (4)..(4) <223? Хаа при позиции 4 - С1и, А1а или Азп <220?

<221? М13С_РЕАТиКЕ <222? (9)..(9) <223? Хаа при позиции 9 = Ηίε или Азп <400? 50 <31п С1п Зег Хаа Зег Тгр Рго Ьеи Хаа 1 5 <210? 51 <211? 119 <212? РКТ <213? Искусственная последовательность <220?

<223? Синтетическая структура <220?

<221? М1БС_ЕЕАТиКЕ <222? {102)..(102) <223? Хаа при позиции 102 = ΗΪ3 или Азп <400? 51

С1и Уа1 О1п Ьеи \7а1 С1и Зег С1у <31у С1у Ьеи Уа1 <31п Рго С1у С1у 15 10 15

ТЬг Мер Зег Тгр Уа1 Агд Οίη. А1а Рго С1у Ьуз С1у Ьеи С1и Тгр Уа1 35 40 45

А1а ТЬг Не Зег <31у <31у О1у РЬе С1у ТЬг Туг Туг Рго Азр Зег Уа1 50 55 60

Ьуз С1у Агд РЬе ТЬг 11е Зег Агд Азр Азп А1а Ьув Азп Зег Ьеи Туг 65 70 75 80

- 52 021401

Ьеи С1п МеЬ Азп Зег Ьеи	Агд А1а	С1и	Авр ТЬг А1а 90	Уа1	Туг	Туг 95	Суз
	85
А1а Агд	Рго е1у Туг Хаа	Азп Туг	Туг	РЬе Азр 11е	Тгр	О1у	С1п	С1у
	100		105			110
ТЬг ТЬг	7а1 ТЫ Уа1 Зег	Зег
	115
<210?	52
<211;.	107
<212?	РНТ
<213?	Искусственная последовательность
<220?
<223?	Синтетическая структура
<220?
<221>	М13С РЕАТЦКЕ
<222?	(51)..(51)
<223?	Хаа при позиции I	51 = С1у	ИЛИ	А1а
<220?
<221?	М15С_РЕАТСЕЕ
<222?	(55) . . (55)
<223?	Хаа при позиции I	55 = Х1е	ИЛИ	С1и
<220?
<221?	М13С ЕЕАТиКЕ
<222?	(92) . , (92)
<223?	Хаа при позиции !	92 = 61ц	ИЛИ	А1а
<400?	52
<31и 11е	Уа1 Ьеи ТЫ С1п	Зег Рго	А1а	ТЬг Ьеи Зег	Ьеи	Бег	Рго	О1у
1	5			10			15
С1и Агд	А1а ТЬг Ьеи Зег	Суз Шз	А1а	Бег Азр Зег	11е	Зег	Азп	Бег
	20		25			30
Ьеи Шз	Тгр Туг С1п С1п	Ьуз Рго	С1у	С1п А1а Рго	Агд	Ьеи	Ьеи	11е
	35	40			45
Туг Туг	Хаа Агд С1п Зег	Хаа 61п	61у	11е Рго А1а	Агд	РЬе	Зег	61у
50		55		60
Зег С1у	Зег С1у ТЬг Азр	РЬе ТЬг	Ьеи	гы Не зег	Зег	Ьец	61и	Рго
65	70			75				80
С1и Азр	РЬе А1а Уа1 туг	Туг Суз	С1п	С1п Зег Хаа	Зег	Тгр	Рго	Ьеи
	85			90			95
Шз РЬе	С1у С1у С1у ТЫ	Ьуз Уа1	СХи	11е Ьуз
	100		105

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Сконструированное человеческое антитело к ИКК-1, содержащее вариабельную область легкой цепи (ЬСУР) и вариабельную область тяжелой цепи (НСУР), где указанные ЬСУР и НСУР включают аминокислотные последовательности, выбранные из группы, состоящей из:

(ί) ЬСУР, содержащей аминокислотную последовательность ЗЕО ГО N0:13, и НСУР, содержащей аминокислотную последовательность ЗЕО ГО N0:11;

(ίί) ЬСУР, содержащей аминокислотную последовательность ЗЕО ГО N0:14, и НСУР, содержащей аминокислотную последовательность ЗЕО ГО N0:12;

(ίίί) ЬСУР, содержащей аминокислотную последовательность ЗЕО ГО N0:15, и НСУР, содержащей аминокислотную последовательность ЗЕО ГО N0:11;

(ίν) ЬСУР, содержащей аминокислотную последовательность ЗЕО ГО N0:16, и НСУР, содержащей аминокислотную последовательность ЗЕО ГО N0:11.
2. Сконструированное человеческое антитело к ИКК-1 по п.1, где ЬСУР содержит аминокислотную последовательность ЗЕО ГО N0:14 и НСУР содержит аминокислотную последовательность ЗЕО ГО N0:12.
3. Сконструированное человеческое антитело к ИКК-1 по п.1, где указанное сконструированное человеческое антитело к ИКК-1 включает тяжелую цепь и легкую цепь, выбранные из группы, состоящей из:

a) тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность ЗЕЦ ГО N0:17, и легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность ЗЕО ГО N0:19;

b) тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность тяжелой цепи ЗЕО ГО N0:18, и легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность ЗЕО ГО N0:20;

c) тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность тяжелой цепи ЗЕО ГО N0:17, и легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность ЗЕО ГО N0:21; и

й) тяжелой цепи, содержащей аминокислотную последовательность тяжелой цепи ЗЕО ГО N0:17, и легкой цепи, содержащей аминокислотную последовательность ЗЕО ГО N0:22.
4. Сконструированное человеческое антитело к ИКК-1 по п.3, содержащее две легкие цепи, где каждая легкая цепь содержит аминокислотную последовательность ЗЕО ГО N0:20, и две тяжелые цепи, где каждая тяжелая цепь содержит аминокислотную последовательность ЗЕО ГО N0:18.
5. Фармацевтическая композиция для лечения заболеваний, патогенез которых опосредован ИКК-1, содержащая эффективное количество сконструированного человеческого антитела к ИКК-1 по любому из пп.1-4 и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или эксципиент.
6. Применение человеческого антитела к ИКК-1 по любому из пп.1-4 для заживления костей.
7. Применение человеческого антитела к ИКК-1 по любому из пп.1-4 для лечения множественной миеломы или немелкоклеточного рака легкого.