EA017395B1 - Ингибиторы цистеиновой протеазы - Google Patents

Abstract

Изобретение относится к соединению формулы IIaгде Rпредставляет собой боковую цепь лейцина, циклогексилглицина или 4-фторлейцина; Rпредставляет собой Н или F; Rпредставляет собой C-C-алкил; Rпредставляет собой Н, метил или F; или его фармацевтически приемлемой соли или N-оксида, полезного при лечении расстройств, характеризующихся несоответствующей экспрессией или активацией катепсина K, таких как остеопороз, остеоартрит, ревматоидный артрит или метастазы кости.

Description

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к ингибиторам цистеиновых протеаз, в частности к представителям папаинового надсемейства. Изобретение предусматривает новые соединения, применимые для профилактики или лечения расстройств, происходящих от дисбаланса нормальных протеаз, таких как катепсин К.

Уровень техники

Папаиновое надсемейство цистеиновых протеаз широко распространено у различных биологических видов, включая млекопитающих, беспозвоночных, простейших, растений и бактерий. Ряд ферментов катепсинов млекопитающих, включая катепсины В, Е, Н, К, Ь, О и 8, приписаны к этому надсемейству, и неадекватная регуляция их активности участвует в ряде метаболических расстройств, включая артрит, мышечную дистрофию, воспаление, гломерулонефрит и опухолевую инвазию. Патогенные подобные катепсину ферменты включают бактериальные гингипаины, малярийные фальципаины I, II, III и далее, а также цистеиновые протеазы из Рпеишосувйз салил, Ттураиозоша сги/с! и Ьгисе1, СтйЫФа 1и81си1а1а, 8сЫ51о8оша зрр.

Неадекватная регуляция катепсина К участвует во многих расстройствах, включая остеопороз, заболевания десен, такие как гингивит и периодонтит, болезнь Пэджета, гиперкальциемию при злокачественных новообразованиях и метаболических заболеваниях костей. Учитывая его повышенные уровни в хондрокластах синовии при остеоартрите, катепсин К участвует в заболеваниях, характеризующихся избыточной деградацией хряща или матрикса, таких как остеоартрит и ревматоидный артрит.

Вероятно, что лечение заболеваний костей и хрящей, таких как остеоартроз и остеопороз, будет требовать пожизненного введения ингибитора катепсина К, часто группе пациентов старческого возраста или приближающихся к нему. Это определяет необычайно высокие требования к простоте введения лекарственных препаратов, предназначенных для таких расстройств. Например, предпринимаются попытки растянуть режимы дозирования общепринятых лекарств для лечения остеопороза класса бисфосфонатов до недельных или более длительных режимов приема для повышения приверженности пациентов лечению. Тем не менее, даже при улучшении режима дозирования другие побочные эффекты бисфосфонатов остаются. Бисфосфонаты блокируют ремоделирование костей скорее, чем ослабляют его, как это делает ингибитор катепсина К. Для здоровой кости важно поддерживать процесс ремоделирования, который бисфосфонаты блокируют полностью. Кроме того, бисфосфонаты имеют очень длительный период полувыведения из костей так, что, если проявляются такие эффекты, как некроз челюстной кости, невозможно удалить бисфосфонат из кости. Наоборот, ингибиторы катепсина К обычно обладают быстрым наступлением эффекта и диссоциативным способом действия, это означает, что, если обнаруживается проблема, введение может быть приостановлено и не будет накопления ингибитора в костном матриксе.

Таким образом, существует потребность в альтернативных лекарственных средствах от остеопороза и остеоартрита с улучшенными фармакокинетическими и/или фармакодинамическими свойствами.

\УО 02/057270 раскрывает соединения формулы ТА

где остаток υννΧΥ в значительной мере соответствует Р3 и Р2 (их значения приведены ниже) ингибиторов дипептидцистеинпротеазы;

Ζ является, помимо прочего, О, 8, метиленом или -ΝΚ-;

К/ является алкилом, алкиларилом и т.п.;

Р₁ и О. каждый, являются, помимо прочего, метиленом.

Хотя общее раскрытие в этом патентном описании допускает очень широкий спектр заместителей Р₁ и О, ни один не приведен индивидуально или приводится в качестве примера, и не приводится путь их синтеза. В действительности, единственные предложения по синтезу, присутствующие в XVО 02/05720, не подразумевают замещение по Р₁ или О вовсе. Соединения предполагаются быть применимыми, помимо прочего, для лечения протозойных инфекций, таких как трипаносомы.

Пример 9 в νθ 2005/066180 раскрывает, помимо прочего, соединение формулы Ш

Соединение является активным ингибитором катепсина К, но, как показано ниже, дальнейшая модификация структуры приводит к улучшениям относительно фармакокинетики и/или фармакодинамики, заметно улучшая стабильность в цельной крови и, следовательно, к лучшей экспозиции.

- 1 017395 νθ 2008/007127, которая не была опубликована до даты приоритета данной заявки, раскрывает соединения формулы 1С

которые описаны как ингибиторы цистеиновой протеазы, в частности как ингибиторы катепсина К.

Краткое описание изобретения

В соответствии с настоящим изобретением обеспечивается соединение формулы 11а

На где В² представляет собой боковую цепь лейцина, циклогексилглицина, 4-фторлейцина;

В³ представляет собой Н или Р;

В⁴ представляет собой С₁-С₆-алкил;

В⁵ представляет собой Н, метил или Р, или их фармацевтически приемлемая соль или Ν-оксид.

Выражение С_1-6алкил означает алкильную цепь, имеющую от одного до шести атомов углерода (например, С_1-4алкильная группа или С_1-3алкильная группа). Алкильные группы могут иметь прямую или разветвленную цепь. Подходящие С_1-6алкильные группы включают, например, метил, этил, пропил (например, н-пропил и изопропил), бутил (например, н-бутил, изобутил, втор-бутил и трет-бутил), пентил (например, н-пентил) и гексил (например, н-гексил). Особенно интересной алкильной группой является метил.

В предпочтительном воплощении изобретения В² представляет собой боковую цепь лейцина, 4-фторлейцина.

Особенно подходящие значения В² включают те, которые воплощены частичными структурами

в особенности значение В² соответствует боковой цепи Ь-лейцина.

Воплощения, приведенные в абзаце непосредственно выше, преимущественно применяют к соединениям, где В³ или В⁵ представляют собой фтор.

Как правило, радикал В³, такой как фтор, если присутствует, расположен по мета-положению относительно бензиламидной связи, как показано ниже на частичной структуре о

Н5

Соединение, которое представляет данное воплощение, имеет формулу

- 2 017395

В определенных воплощениях изобретения К⁵ представляет собой Р, в особенности, когда В³ представляет собой Н и/или В⁴ представляет собой метил. Подходящие соединения в этом воплощении имеют В² в виде боковой цепи 4-фторлейцина и более предпочтительно лейцина. Соединение, которое представляет данное воплощение, имеет формулу

Предпочтительные воплощения изобретения включают те, которые представлены ниже в каждом случае со стереохимией, определенной выше в формуле 11а.

Предпочтительные воплощения изобретения включают соединения формулы 11а, представленные как

N-[1 -(6-хлор-3 -оксогексагидрофуро [3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3-фтор-3 -метилбутил]-4-[2-(4метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамид;

№[2-(6-хлор-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-ил)-1-циклогексил-2-оксоэтил]-4-[2-(4метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамид;

N-[1 -(6-хлор-3 -оксогексагидрофуро [3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4-[2-(4метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамид;

№[1-(6-хлор-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-метил-2-(4метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамид или их фармацевтически приемлемую соль или Ν-оксид.

Особенно предпочтительные воплощения изобретения включают соединения формулы 11а, представленные как N-[1 -(6-хлор-3 -оксогексагидрофуро [3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-фтор2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамид, или их фармацевтически приемлемую соль или Ν-оксид.

Дальнейшим аспектом изобретения является применение соединения, описанного выше, для лечения или для производства лекарственного средства для лечения расстройств, опосредованных катепсином К, таких как остеопороз;

заболевания десны, такие как гингивит и периодонтит;

болезнь Пэджета;

гиперкальциемия при злокачественных заболеваниях;

метаболическое заболевание костей;

заболевания, характеризующиеся избыточной деградацией хряща или матрикса, такие как остеоартрит и ревматоидный артрит; рак костей, включая неоплазию;

боль.

Также предусматривается способ лечения или предотвращения заболевания, опосредованного катепсином К, включающий введение безопасного и эффективного количества соединения согласно изобретению, который в этом нуждается. Такие субъекты обычно являются млекопитающими, в частности людьми.

Соединения по изобретению могут образовывать соли, которые образуют дополнительный аспект изобретения. Соответствующие фармацевтически приемлемые соли соединений формулы 11а включают соли органических кислот, в особенности карбоновых кислот, включая, но без ограничения, ацетат, трифторацетат, лактат, глюконат, цитрат, тартрат, малеат, малат, пантотенат, изетионат, адипат, альгинат, аспартат, бензоат, бутират, диглюконат, циклопентанат, глюкогептанат, глицерофосфат, оксалат, гептаноат, гексаноат, фумарат, никотиноат, пальмоат, пектинат, 3-фенилпропиноат, пикрат, пивалат, пропионат, лактобионат, пиволат, камфорат, ундеканоат и сукцинат, органические сульфоновые кислоты, такие как метансульфонат, этансульфонат, 2-гидроксиэтансульфонат, камфорсульфонат, 2-нафталинсульфонат, бензолсульфонат, п-хлорбензолсульфонат и п-толуолсульфонат; и неорганические кислоты, такие как гидрохлорид, гидробромид, гидроиодид, сульфат, бисульфат, гемисульфат, тиоцианат, персульфат, фосфорные и сульфоновые кислоты.

Ν-оксиды соединений по изобретению могут быть получены с помощью способов, известных среднему специалисту. Например, Ν-оксиды могут быть получены путем обработки неокисленной формы соединения по изобретению агентом окисления (например, трифторперуксусной кислотой, пермалеиновой кислотой, пербензойной кислотой, перуксусной кислотой, метахлорпероксибензойной кислотой или им подобные) в подходящем инертном органическом растворителе (например, галогенированном углеводороде, таком как дихлорметан) при температуре приблизительно 0°С. Альтернативно, Ν-оксиды соединений по изобретению могут быть получены из Ν-оксида соответствующего исходного продукта.

- 3 017395

Примеры Ν-оксидов по изобретению включают те, в которых есть частичные структуры:

Соединения по изобретению в неокисленной форме могут быть получены из Ν-оксидов соответствующих соединений по изобретению путем обработки агентом восстановления (например, серой, диоксидом серы, трифенилфосфином, боргидридом лития, боргидридом натрия, дихлоридом фосфора, трибромидом фосфора или им подобными) в подходящем инертном органическом растворителе (например, ацетонитриле, этаноле, водном растворе диоксана или им подобных) в интервале температур от 0 до 80°С. Следует отметить, что расположения радикала, встречающегося в определениях, в любом остатке молекулы могут быть по любому его положению при условии, что соединение является химически стабильным.

Радикалы, используемые в определениях переменных, включают все возможные изомеры, если иное не указано.

Когда любая переменная появляется более чем один раз в любом компоненте, каждое определение является независимым.

Если иное не упомянуто или не указано, химическое обозначение соединения охватывает смесь всех возможных стереохимически изомерных форм, которым указанное соединение может располагать. Указанная смесь может содержать все диастереомеры и/или энантиомеры основной молекулярной структуры указанного соединения. Все стереохимически изомерные формы соединений настоящего изобретения как в чистой форме, так и в смеси друг с другом подразумеваются как охваченные границами настоящего изобретения.

Чистые стереоизомерные формы соединений и промежуточных соединений, как упомянуто в настоящем описании, определены как изомеры, по существу, свободные от других энантиомерных или диастереомерных форм той же самой основной молекулярной структуры указанных соединений или промежуточных соединений. В частности, термин стереоизомерно чистые относится к соединениям или промежуточным соединениям, имеющим стереоизомерный избыток по крайней мере 80% (т.е. минимум 90% одного изомера и максимум 10% других возможных изомеров) вплоть до стереоизомерного избытка 100% (т.е. 100% одного изомера и ни одного другого), более предпочтительно соединений или промежуточных соединений, имеющих стереоизомерный избыток от 90 вплоть до 100%, даже более предпочтительно имеющих стереоизомерный избыток от 94 вплоть до 100% и наиболее предпочтительно имеющих стереоизомерный избыток от 97 вплоть до 100%. Термины энантиомерно чистый и диастереомерно чистый должны быть понятны по аналогии, но при этом имея отношение к энантиомерному избытку и диастереомерному избытку по отношению к обсуждаемой смеси.

Соединения по изобретению могут быть получены в виде их индивидуальных стереоизомеров, путем взаимодействия рацемической смеси соединения с оптически активным разрешающим агентом для образования пары диастереоизомерных соединений, разделения диастереомеров и выделения оптически чистого энантиомера. Разделение энантиомеров может быть осуществлено при использовании ковалентных диастереомерных производных соединений формулы (I), диссоциирующиеся комплексы являются предпочтительными (например, кристаллические диастереоизомерные соли). Диастереомеры имеют особые физические свойства (например, точки плавления, точки кипения, растворимость, реакционность и т.д.) и могут быть легко разделены за счет использования преимуществ этих различий. Диастереомеры могут быть разделены с помощью хроматографии, например НРЬС, или предпочтительно путем методик отделения/разделения основанных на различиях в растворимости. Оптически чистый энантиомер затем выделяют вместе с агентом разделения, любыми практическими способами, которые не приводят к рацемизации. Более подробное описание методик, подходящих к разложению стереоизомеров соединений из их рацемической смеси, могут быть найдены в 1еап 1асс.|иез Апйге Со11е1, 8атие1 Н. ШПсп. Епапйотетз, Касета1ез апй Везо1ийопз, 1о1т Шйеу & 8опз, 1пс. (1981).

В то время как возможно введение соединения по изобретению как активного агента в чистом виде, предпочтительно вводить его в виде части фармацевтического препарата. Такой препарат будет содержать вышеуказанный активный агент вместе с одним или более приемлемыми носителями/наполнителями и, необязательно, другими терапевтическими компонентами. Носитель(и) должен быть подходящим в отношении совместимости с другими компонентами препарата и не оказывать вредное действие на реципиента.

Такие препараты включают таковые, подходящие для ректального, интраназального, местного (включая защечное и подъязычное), вагинального или парентерального (включая подкожное, внутримышечное, внутривенное и внутрикожное) введения, но предпочтительно такой препарат является препаратом для перорального введения. Такие препараты могут традиционно быть представлены в дозированной лекарственной форме, например таблетки и капсулы с замедленным высвобождением, и могут

- 4 017395 быть приготовлены с помощью любых методов, хорошо известных в области фармацевтики.

Указанные методы включают стадию объединения вышеуказанного активного агента с носителем. В общем, препараты приготавливают путем однородного и тщательного объединения активного агента с жидкими носителями или хорошо измельченными твердыми носителями или с обоими и затем, если необходимо, придания формы продукту. Если производство фармацевтических препаратов включает тщательное смешивание фармацевтических наполнителей и активного ингредиента в форме соли, тогда часто предпочтительно использовать наполнители, которые не являются основными по природе, т. е. либо кислые, либо нейтральные.

Препараты для перорального введения могут быть представлены в виде дискретных единиц, таких как капсулы, крахмальные облатки или таблетки, каждая из которых содержит заранее определенное количество активного агента; в виде порошка или гранул; в виде раствора или суспензии активного агента в водной жидкости или в неводной жидкости или в виде жидкой эмульсии масло-в-воде или жидкой эмульсии вода-в-масле и в виде болюса и т.д.

В отношении композиций для перорального введения (например, таблетки и капсулы) термин подходящий носитель включает носители, такие как обычные наполнители, например связывающие агенты, например сироп, гуммиарабик, желатин, сорбит, трагакант, поливинилпирролидон (повидон), метилцеллюлоза, этилцеллюлоза, натрий-карбоксиметилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, сахароза и крахмал; наполнители и носители, например кукурузный крахмал, желатин, лактоза, сахароза, микрокристаллическая целлюлоза, каолин, маннит, дикальция фосфат, хлорид натрия и альгиновая кислота; и смазывающие вещества, такие как стеарат магния, стеарат натрия и другие стеараты металлов, стеарат глицерина, стеариновая кислота, силиконовое масло, тальковые воски, масла и коллоидный оксид кремния. Ароматизаторы, такие как перечная мята, винтергриновое масло, вишневый ароматизатор или т.п. также могут быть использованы. Может быть желательно добавить краситель, чтобы сделать лекарственную форму легко идентифицируемой. Таблетки могут быть также покрыты оболочкой с помощью методов, хорошо известных в данной области.

Таблетка может быть приготовлена путем прессования или формованием, необязательно, с одним или более дополнительными ингредиентами. Прессованные таблетки могут быть приготовлены путем прессования в соответствующей машине активного агента в сыпучей форме, такой как порошок или гранулы, необязательно смешанных со связывающим веществом, смазывающим веществом, инертным разбавителем, консервантом, поверхностно-активным или диспергирующим агентом. Формованные таблетки могут быть получены путем формования в соответствующей машине смеси порошкообразного соединения, увлажненного инертным жидким разбавителем. Таблетки могут быть необязательно покрыты оболочкой или снабжены риской и могут быть приготовлены таким образом, чтобы обеспечить замедленное или контролируемое высвобождение активного агента.

Другие препараты, подходящие для перорального введения, включают пастилки, содержащие активный агент в ароматизированной основе, обычно в сахарозе и гуммиарабике или трагаканте; пастилки, содержащие активный агент в инертной основе, такой как желатин и глицерин, или сахароза и гуммиарабик; и зубной эликсир, содержащий активный агент в подходящем жидком носителе.

Соответствующая дозировка для соединений по изобретению будет зависеть от показаний и от пациента и легко определяется с помощью традиционных исследований на животных моделях и подтверждается в клинических исследованиях на пациентах. Обычно желательными и достижимыми являются дозировки, обеспечивающие внутриклеточные концентрации (для ингибирования нормальных протеаз папаинового надсемейства) порядка 0,01-100 мкМ, более предпочтительно 0,01-10 мкМ, такие как 0,1-25 мкМ.

Соединения по изобретению получают с помощью ряда методов жидкостной и твердофазной химии.

Соединения, как правило, получают в виде строительных блоков, относящихся к остаткам Р1, Р2 и Р3 конечного ингибиторного продукта. В любом случае, не желая быть связанными с теорией или экспериментальными способами определения связывания для определенных переменных, отвлеченные понятия Р1, Р2 и Р3, как используют в настоящем описании, обеспечены только для удобства и имеют, по существу, их обычные значения по Шлектеру и Бергеру (8с111ес1ег & Ветдет) и обозначают те части ингибитора, которые, как полагают, заполняют сайты соответственно фермента 81, 82 и 83, где 81 представляет собой смежный сайт расщепления и 83 отдален от сайта расщепления. Соединения, определенные формулой II, предназначены, чтобы быть в объеме изобретения, независимо от способа связывания.

- 5 017395

В общем строительный блок Р1 будет иметь формулу

где РС представляет собой обычную Ν-защитную группу или свободный амин;

две ЯЬ группы определяют кеталь, такой как бис-метилкеталь, или вместе определяют циклический кеталь, такой как 1,3-диоксолан;

Яс представляет собой защитную группу гидроксила или реже представляет собой Н или представляет собой кетофункцию целевого ингибитора в случаях, когда строительный блок Р1 в виде кетона удлиняется с помощью Р2 и Р3;

Р2, как правило, представляет собой Ν-защищенный Ь-лейцин, Ь-изолейцин, О-метил-Ь-треонин, Ь-3-гидроксивалин, 4-фторлейцин или Ь-циклогексилглицин;

Р3, как правило, включает головную группу, такую как производное бензойной кислоты с Ν-алкилпиперазинил-Е остатком, уже введенным или обеспеченным с помощью синтона в параположение.

Подходящие защищенные индивидуальные строительные блоки могут быть вначале получены и последовательно связаны вместе предпочтительно в последовательности Р2+Р1^Р2-Р1, а затем Ν-алкилпиперазинилтиазолилбензойная кислота*+Р2-Р 1 ^№алкилпиперазинилтиазолилбензоат-Р2-Р2Р1, где * означает активированную форму, для того, чтобы минимизировать рацемизацию на Р2.

Связывание между двумя аминокислотами, аминокислотой и пептидом или двумя пептидными фрагментами может быть осуществлено с использованием стандартных методик связывания, таких как азидный способ, смешанный углерод-карбоксиангидридный (изобутилхлорформиат) способ, карбодиимидный (дициклогексилкарбодиимид, диизопропилкарбодиимид или растворимый в воде карбодиимид) способ, способ на основе активного сложного эфира (п-нитрофениловый эфир, Ν-гидроксиянтарный имидоэфир), К-способ с реагентом Вудварда (^ооб^атб), карбонилдиимидазольный способ, способы с реагентами фосфора или окисления-восстановления. Некоторые из указанных способов (в особенности карбодиимидный способ) могут быть улучшены путем добавления 1-гидроксибензотриазола или 4-ОМЛР. Указанные реакции связывания могут быть выполнены или в растворе (жидкая фаза), или в твердой фазе.

Более подробно, стадия связывания включает дегидративное связывание свободного карбоксила одного из реагентов со свободной аминогруппой другого реагента в присутствии агента связывания для образования связующей амидной связи. Описания таких агентов связывания приведены в общих руководствах по пептидной химии, например М. Вобаик/ку, Рерйбе Скешййу, 2¹¹'¹ геу еб., 8ргшдег-Уег1ад, Ветки, Сегтапу (1993), в дальнейшем просто названные как Бодански (Вобаик/ку), содержание которых при этом включено как ссылка. Примерами подходящих агентов связывания являются Ν,Ν'-дициклогексилкарбодиимид, 1-гидроксибензотриазол в присутствии Ν,Ν'-дициклогексилкарбодиимида или №этил-И'-[(3-диметиламино)пропил]карбодиимида. Возможный и пригодный агент связывания является коммерчески доступным - это гексафторфосфат (бензотриазол-1-илокси)-трис(диметиламино)фосфония или отдельно, или в присутствии 1-гидроксибензотриазола или 4-ОМЛР. Другим возможным и пригодным агентом связывания является коммерчески доступный тетрафторборат 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-Н,^№,№-тетраметилурония. Еще другим возможным и пригодным агентом связывания является коммерчески доступный гексафторфосфат О-(7-азабензотриазол-1-ил)-Н^,№,№тетраметилурония.

Реакцию связывания проводят в инертном растворителе, например дихлорметане, ацетонитриле или диметилформамиде. Добавляют избыток третичного амина, например диизопропилэтиламина, Ν-метилморфолина, Ν-метилпирролидина или 4-ОМЛР, чтобы поддерживать рН реакционной смеси при значении, равном приблизительно 8. Температура реакции, как правило, находится в интервале между 0 и 50°С, и время реакции, как правило, - в интервале между 15 мин и 24 ч.

Функциональные группы элементов неприродных аминокислот, как правило, могут быть защищены во время реакции связывания, чтобы избежать образования нежелательных связей. Защитные группы, которые могут быть использованы, представлены в Сгееие, РгсИесЦуе Сгоирк ίη Отдашс Сйетййу, 1ойи ХУбеу & 8оик, №\ν Уотк (1981) и Тке Рерйбек: Аиа1ук1к, 8уи1кек1к, Вю1оду, Уо1. 3, Лсабетк Ргекк, №\ν Уотк (1981), в дальнейшем просто названные как Грин (Сгееие), включены в настоящее описание посредством ссылки.

Альфа-карбоксильная группа С-конца остатка является, как правило, защищенной в виде сложного эфира, который может быть отщеплен, что дает карбоновую кислоту. Защитные группы, которые могут быть использованы, включают 1) алкильные сложные эфиры, такие как метил, триметилсилил и третбутил; 2) аралкильные сложные эфиры, такие как бензил и замещенный бензил; или 3) сложные эфиры,

- 6 017395 которые могут быть расщеплены с помощью мягкого основания или мягких агентов восстановления, таких как трихлорэтильные и фенацильные сложные эфиры.

Альфа-аминогруппа каждой аминокислоты, которая должна быть связанной, как правило, является Ν-защищенной. Может быть использована любая защитная группа, известная из уровня техники. Примеры таких групп включают 1) ацильные группы, такие как формил, трифторацетил, фталил и п-толуолсульфонил; 2) ароматические карбаматные группы, такие как бензилоксикарбонил (СЬх или Ζ) и замещенные бензилоксикарбонилы и 9-флуоренилметилоксикарбонил (Ртос); 3) алифатические карбаматные группы, такие как трет-бутилоксикарбонил (Вос), этоксикарбонил, диизопропилметоксикарбонил и аллилоксикарбонил; 4) циклические алкилкарбаматные группы, такие как циклопентилоксикарбонил и адамантилоксикарбонил; 5) алкильные группы, такие как трифенилметил и бензил; 6) триалкилсилил, такой как триметилсилил; и 7) тиолсодержащие группы, такие как фенилтиокарбонил и дитиасукциноил. Предпочтительной альфа-аминозащитной группой является или Вос, или Ртос. Большинство аминокислотных производных, приемлемо защищенных для пептидного синтеза, являются коммерчески доступными.

Альфа-аминозащитную группу, как правило, отщепляют до следующей стадии связывания.

Когда используют Вос группу, выбранными реагентами являются трифторуксусная кислота, чистая или в дихлорметане, или НС1 в диоксане или в этилацетате. Полученную аммонийную соль затем нейтрализуют или до связывания, или ίη 8Йи с основными растворами, такими как водные буферные растворы, или третичных аминов в дихлорметане или ацетонитриле, или диметилформамиде. Когда используют Ртос группу, выбранными реагентами являются пиперидин или замещенный пиперидин в диметилформамиде, но может быть использован любой вторичный амин. Снятие защиты проводят при температуре в интервале между 0°С и комнатной температурой, как правило, 20-22°С.

Как только заканчивается ингибиторная последовательность, любые остающиеся защитные группы удаляют любым способом, продиктованным выбором защитных групп. Указанные методики хорошо известны среднему специалисту.

Первую стадию в синтезе соединений по изобретению, таких как те, которые представлены общей формулой 11а, обычно получают в растворе функционирующего Р1 строительного блока, например, как показано на схеме 1.

- 7 017395

Схема 1

ι) МзС1, Руг; й) ЫаОЛс, Ас₂О, БМР, 130°С; ΐΐΐ) ΒΡ₃χΕΐ₂Θ, Εΐ₃8ίΗ, БСМ; ίν) ТВБР8-С1, 1т-Н, БМР; ν) ЫаОМе; νί) 8О₂С1₂, Руг, БСМ; νίί) РРй₃, МеОН, Н₂О, затем Εΐ₃Ν, 50°С; νϊϊί) ВоС₂О, Εΐ₃Ν; ίχ) ТВАР, ТГФ; х) периодинан ДессМартина; χι) способ а: МеОН, ТМОР, п-ТзОН, затем Εΐ₃Ν, Вос₂О, затем хроматография и, наконец, МеОН, АсС1; способ Ъ: МеОН, АсС1, ТМОР.

Хотя схема, представленная выше, иллюстрирована с помощью стратегии, использующей отличную защитную группу, включая ацетил, мезил, ТВБР8 и Вос группу, является очевидным, что могут использоваться другие перестановки обычных защитных групп, как описано у Грина (там же). Кроме того, может быть приемлемо использовать диметилполуацеталь кетоновой группы во время связывания Р2 и Р3 остатков с последующим восстановлением функции кетона на последней стадии.

Увеличение длины строительных блоков с помощью Р2 и Р3 строительных блоков, как правило, осуществляют в присутствии подходящего агента связывания, например гексафторфосфата бензотриазол-1-илокси-трис-пирролидинофосфония (РуВОР), гексафторфосфата О-бензотриазол-1-илΝ,Ν,Ν',Ν'-тетраметилурония (НВТИ), гексафторфосфата О-(7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3тетраметилурония (НАТИ), гидрохлорида 1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимида (ББС) или 1,3-дициклогексилкарбодиимида (БСС), необязательно в присутствии 1-гидроксибензотриазола (НОВТ) и основания, такого как Ν,Ν-диизопропилэтиламин, триэтиламин, Ν-метилморфолин и им подобные. Реакции, как правило, осуществляют в интервале температур от 20 до 30°С, предпочтительно при температуре приблизительно 25°С и требуют от 2 до 24 ч для завершения. Подходящими реакционными растворителями являются инертные органические растворители, такие как галогенированные органические растворители (например, хлористый метилен, хлороформ и им подобные), ацетонитрил, Ν,Ν-диметилформамид, эфирные растворители, такие как тетрагидрофуран, диоксан и им подобные.

Альтернативно, указанная выше стадия связывания для удлинения может быть осуществлена вначале путем превращения Р3/Р2 строительного блока в активное производное кислоты, такое как сукцинимидный сложный эфир, с последующим его взаимодействием с амином Р1. Реакция, как правило, требует от 2 до 3 ч для своего завершения. Условия, используемые в этой реакции, зависят от природы

- 8 017395 производного активной кислоты. Например, если оно является таким производным, как хлорангидрид кислоты, реакцию проводят в присутствии подходящего основания (например, триэтиламина, диизопропилэтиламина, пиридина и им подобным). Подходящими реакционными растворителями являются полярные органические растворители, такие как ацетонитрил, Ν,Ν-диметилформамид, дихлорметан или любые их подходящие смеси.

Р2 строительные блоки в виде Ν-защищенных Ь-аминокислот являются коммерчески легко доступными, например Ь-лейцин, Ь-изолейцин, Ь-циклогексилглицин, О-метил-Ь-треонин и др. являются коммерчески доступными с рядом различных защитных групп, таких как СВх. Вос или Ртос. Соединения с другими значениями К² легко получают из коммерчески доступных исходных продуктов. Например, соединения, где К² представляет собой -С(СН₃)₂ОСН₃, могут быть получены путем взаимодействия СВ/ защищенной (8)-(+)-2 -амино-3-гидрокси-3-метилбутановой кислоты с 3,3-диметоксигексагидрофуро(3,2Ь)пирролом для образования требуемого Р2-Р1 блока. Боковая цепь Р2 спирта может тогда быть метилирована, используя метилиодид в обычных условиях гидрида натрия, имидазола, ТГФ, чтобы получить требуемый Р2 без существенной рацемизации альфа-центра. Этот Р2-Р1 остаток может затем быть пронесен через синтез, как определено в настоящем описании, а именно через удаление СВ/ и связывание.

\νϋ 05/565299 описывает получение гамма-фторлейцинового Р2 строительного блока. Альтернативный синтез Ртос и Ν-Вос-гамма-фторлейциновых строительных блоков представлен в Ттиопд с1 а1. 8упЬей, 2005, по 8, 1278-1280.

Получение Р3 строительных блоков написано в νΟ 05/66180 или их легко получают с помощью аналогичных способов. Например, на схеме 2 показано получение фтор-замещенного тиазолила.

1. НОАс, Вг₂, комнатная температура, 2 ч, 55% выход; п. КР, 18-краун-эфир-6, С1 Ρ,Ρ'Ν, 90°С, 16 ч, 31% выход; 1й. НОАс, Вг₂, 45°С, 4 ч, 100% выход; ιν. 4-метилпиперазин-1-карботиоамид. этанол, 70°С, 2 ч, 74% выход, ν. Р-1ОН, ТГФ, Н₂О, комнатная температура, 16 ч, 79% выход.

Синтез 4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензойной кислоты.

Исходный продукт, метил 4-ацетилбензоат, является коммерчески доступным. Бромирование по α-положению кетона выполняют с помощью брома в уксусной кислоте, чтобы обеспечить требуемый метиловый эфир 4-(2-бромацетил)бензойной кислоты. Последовательная обработка метилового эфира 4(2-бромацетил)бензойной кислоты фторидом калия в присутствии 18-краун-эфира-6 при температуре 90°С обеспечивает метиловый эфир 4-(2-фторацетил)бензойной кислоты после хроматографии на колонке. Повторное бромирование по α-положению кетона выполняют с помощью брома в уксусной кислоте, чтобы обеспечить требуемый метиловый эфир 4-(2-бром-2-фторацетил)бензойной кислоты. Образование тиазола, как правило, осуществляют путем нагревания метилового эфира 4-(2-бром-2фторацетил)бензойной кислоты с 4-метилпиперазин-1-карботиоамидом при температуре 70°С в течение 2 ч. При охлаждении требуемый метиловый эфир 4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4ил]бензойной кислоты высаживается. Снятие защиты с метилового эфира проводят, используя раствор гидроксида лития и требуемую кислоту, 4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензойную кислоту, как правило, получают с хорошим выходом в виде дигидрохлоридной соли при обработке соляной кислотой.

νΟ 05/066159 и νΟ 05/065578 описывают получение соединений, где Р2 и Р3 блоки связывают вместе через С(СР3) остаток, включая те, где Р3 представляет собой бифенилсульфон. Пример получения такого Р2-Р3 строительного блока, подходящего для получения соединений формулы II, где Кд представляет собой трифторметил и Кд¹ представляет собой Н, показан на схеме 3.

- 9 017395

Схема 3

Защиту кислотной функции бромпроизводного (3 а) получают в соответствии с методикой, описанной в Вюогд. Меб. СНет. Ьей. 2006, 16, 1985, с помощью реакции, например с изопропиловым спиртом в присутствии кислоты, такой как серная кислота, обеспечивая соответствующий сложный эфир. Требуемое производное тиазола может затем быть связано с ароматической группой из предоставленного сложного эфира, используя, например, условия связывания по Штилле или Сузуки. Например, сложный эфир бромпроизводного 3 а может взаимодействовать с борановым реагентом, подобным пинакол-борановому комплексу в присутствии хлорида [1,1'-бис-(дифенилфосфино)ферроцен]палладия(П), чтобы обеспечить соответствующее диоксоборолановое производное. Последующее замещение бороновой группы требуемым производным тиазола 3Ь в присутствии хлорида [1,Т-бис-(дифенилфосфино)ферроцен]палладия(П) затем дает биарильное производное 3с. Тиазольные производные 3Ь могут быть получены, например, как определено в 1. Меб. СНет. 2005, 48, 7520-7534. Удаление кислотной защитной группы, например, путем обработки кислотой, такой как хлористо-водородная кислота в диоксане, обеспечивает Р2-Р3 строительный блок, готовый для связывания с Р1 строительным блоком, чтобы обеспечить соединения по изобретению. \νϋ 07/006716 демонстрирует получение и связывание строительных блоков, таких как Р3 и Р3-Р2.

Термин Ν-защитная группа или Ν-защищенный, как используют в настоящем описании, относится к группам, предназначенным, чтобы защитить Ν-концы аминокислоты или пептида или чтобы защитить аминогруппу от нежелательной реакции во время синтеза. Как правило, используемые Ν-защитные группы раскрыты Сгееие РгсИесбсе Сгоирк ίη Огдашс 8уп1йе818 (Ιοίιη νίΕν & 8оп5. №\ν Уогк, 1981), что включено в настоящее описание посредством ссылки. Ν-защитные группы включают ацильные группы, такие как формил, ацетил, пропионил, пивалоил, трет-бутилацетил, 2-хлорацетил, 2-бромацетил, трифторацетил, трихлорацетил, фталил, о-нитрофеноксиацетил, а-хлорбутирил, бензоил, 4-хлорбензоил, 4-бромбензоил, 4-нитробензоил и им подобные; сульфонильные группы, такие как бензолсульфонил, п-толуолсульфонил и им подобные, образуют карбаматные группы, такие как бензилоксикарбонил, п-хлорбензилоксикарбонил, п-метоксибензилоксикарбонил, п-нитробензилоксикарбонил, 2-нитробензилоксикарбонил, п-бромбензилоксикарбонил, 3,4-диметоксибензилоксикарбонил, 4-метоксибензилоксикарбонил, 2-нитро-4,5-диметоксибензилоксикарбонил, 3,4,5-триметоксибензилоксикарбонил, 1-(п-бифенилил)-1-метилэтоксикарбонил, а,а-диметил-3,5диметоксибензилоксикарбонил, бензгидрилоксикарбонил, трет-бутоксикарбонил, диизопропилметоксикарбонил, изопропилоксикарбонил, этоксикарбонил, метоксикарбонил, аллилоксикарбонил, 2,2,2-трихлорэтоксикарбонил, феноксикарбонил, 4-нитрофеноксикарбонил, флуренил-9-метоксикарбонил, циклопентилоксикарбонил, адамантилоксикарбонил, циклогексилоксикарбонил, фенилтиокарбонил и им подобные; алкильные группы, такие как бензил, трифенилметил, бензилоксиметил и им подобные; и силильные группы, такие как триметилсилил и им подобные. Подходящие Ν-защитные группы включают формил, ацетил, бензоил, пивалоил, трет-бутилацетил, фенилсульфонил, бензил (Ьх), трет-бутоксикарбонил (Вос) и бензилоксикарбонил (СЬх).

Гидрокси- и/или карбоксизащитные группы также широко рассмотрены в той же книге у Грина и включают эфиры, такие как метил, замещенные метиловые эфиры, такие как метоксиметил, метилтиометил, бензилоксиметил, трет-бутоксиметил, 2-метоксиэтоксиметил и им подобные, силиловые эфиры, такие как триметилсилил (ТМ8), трет-бутилдиметилсилил (ΤΒΌΜ8), трибензилсилил, трифенилсилил, трет-бутилдифенилсилил, триизопропилсилил и им подобные, замещенные этиловые эфиры, такие как 1-этоксиметил, 1-метил-1-метоксиэтил, трет-бутил, аллил, бензил, п-метоксибензил, дифенилметил, трифенилметил и им подобные, аралкильные группы, такие как тритил и пиксил (9-гидрокси-9фенилксантеновые производные, в особенности хлорид). Гидроксизащитные группы сложного эфира включают эфиры, такие как формиат, бензилформиат, хлорацетат, метоксиацетат, феноксиацетат, пивалоат, адамантоат, мезитоат, бензоат и им подобные. Карбонатные гидроксизащитные группы включают

- 10 017395 метил, винил, аллил, циннамил, бензил и им подобные.

Подробное описание воплощений

Различные воплощения изобретения будут затем описаны путем иллюстрации со ссылкой на сле дующие примеры.

Пример 1.

Получение строительного блока Р1. Стадия а).

(3-азидо-3-дезокси-1,2-О-(1-метилэтилиден)-а-Э-аллофуранозу,

1еаи МЛ.; СеиШе, Ветиатй; Оука-Роисе!, 1ое11е; Моте!, СШек;

Соединение 1 (7,0 г, 28,5 ммоль) полученную, как описано в Тгоиске!, ЗсЮ'агхепЬаск Ооттк|ие; ВатЬа1а1-Веу, Ртаисо15е; Тгоиске!, 1еаишие. СатЬокуйта1е Векеагск (1977), 59(1), 87-93) растворяют в сухом пиридине (50 мл) и раствор охлаждают до температуры 0°С. К раствору медленно добавляют мезилхлорид и дают возможность ему нагреться вплоть до комнатной температуры. Реакционную смесь перемешивают в течение ночи и через 14 ч добавляют МеОН (10 мл), а затем ЕЮАс (150 мл). Раствор промывают трижды 2 М Н₂8О₄ (водный раствор) (3x100 мл) и дважды ЫаНСОз насыщенный (водный раствор) (2x100 мл) и после этого органическую фазу сушат Ыа₂8О₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Затем продукт помещают в вакуумный насос на ночь, чтобы удалить оставшиеся растворители, продукт 2 получают в виде масла бледно-желтого цвета с количественным выходом (11,5 г).

Ή ЯМР (СПС1₃, 400 МГц) 1,34 (с, 3Н), 1,51 (с, 3Н), 3,07 (с, 3Н), 3,16 (с, 3Н), 4,18 (д, 1Н, 1=3,1 Гц), 4,36 (дд, 1Н, 1=8,6, 3,2 Гц), 4,42 (дд, 1Н, 1=12,0, 5,0 Гц), 4,67 (дд, 1Н, 1=11,9, 2,3 Гц), 4,74 (д, 1Н, 1=3,7 Гц), 5,11 (ддд, 1Н, 1=8,6, 5,0, 2,3 Гц), 5,89 (д, 1Н, 1=3,6 Гц).

Стадия Ь).

Соединение 2 (11,5 г, 28,5 ммоль) растворяют в ДМФА (50 мл). К полученному раствору добавляют №ОАе (23,4 г, 285 ммоль) и АС₂О (48,6 мл, 0,514 моль), который затем нагревают до температуры 125°С в течение 86 ч. Некоторое количество растворителя удаляют путем выпаривания на роторе перед добавлением 500 мл ЕЮАс. Раствор очень темного цвета фильтруют через целит. Органическую фазу промывают Н₂О (3x350 мл). Затем ее сушат Ыа₂8О₄, фильтруют и растворитель удаляют путем выпаривания на роторе. Сырые продукты очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии (смесь геп тан: этилацетат 7:3^-2:1), получая требуемое соединение 3 с 61% выходом (5,70 г) и соединение 4 с 22% выходом (2,34 г).

Соединение 3: Ή ЯМР (СПС1₃, 400 МГц) 1,34 (с, 3Н), 1,53 (с, 3Н), 2,09 (с, 3Н), 2,11 (с, 3Н), 3,94 (д, 1Н, 1=3,4 Гц), 4,19 (дд, 1Н, 1=12,2, 5,0 Гц), 4,32 (дд, 1Н, 1=8,0, 3,3 Гц), 4,37 (дд, 1Н, 1=12,3, 3,5 Гц), 4,73 (д, 1Н, 1=3,6 Гц), 5,32-5,37 (м, 1Н), 5,94 (д, 1Н, 1=3,8 Гц).

Соединение 4: Ή ЯМР (СПС1₃, 400 МГц) 1,34 (с, 3Н), 1,51 (с, 3Н), 2,10 (с, 3Н), 3,10 (с, 3Н), 4,11 (д, 1Н, 1=3,6 Гц), 4,21 (дд, 1Н, 1=12,8, 6,2 Гц), 4,32 (дд, 1Н, 1=8,3, 3,2 Гц), 4,65 (дд, 1Н, 1=12,7, 2,2 Гц), 4,73 (д, 1Н, 1=3,5 Гц), 5,09 (ддд, 1Н, 1=8,3, 6,1, 2,3 Гц), 5,89 (д, 1Н, 1=3,5 Гц).

Стадия с).

Триэтилсилан (27,6 мл, 173 ммоль) добавляют к соединению 3 (5,70 г, 17,3 ммоль), растворенному в сухом ЭСМ (40 мл). Круглодонную колбу помещают в инертную атмосферу (Ν₂) на бане со льдом и дают возможность остыть перед медленным добавлением ВГ₃-Е1₂О (23,1 мл, 173 ммоль). Реакция медленно продолжается и полученную реакционную смесь перемешивают в течение 3 дней. После указанного времени исходный продукт еще присутствует. Медленно добавляют NаНСО₃ (насыщенный водный раствор) (70 мл), а затем добавляют ложкой твердый NаНСО₃, пока не прекратится выделение газа. Водные фазы экстрагируют с помощью ЭСМ (150 мл) и затем последовательно промывают NаНСО₃ (насыщенный водный раствор) (70 мл) и ΝΗ.·|Ο (насыщенный водный раствор) (70 мл). Органическую фазу сушат №₂8О₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Сырой продукт очищают с помощью колоночной флэшхроматографии (смесь гептан:этилацетат (2:1), что дает выход 41% (1,95 г) соединения 5. 0,69 г оставше

- 11 017395 гося исходного продукта также выделяют.

¹Н ЯМР (СПС1₃, 400 МГц) 2,08 (с, 3Н), 2,11 (с, 3Н), 3,72 (дд, 1Н, 1=10,0, 2,6 Гц), 3,95 (дд, 1Н, 1=4,6, 2,1 Гц), 4,17-4,27 (м, 3Н), 4,37 (дд, 1Н, 1=12,1, 3,7 Гц), 4,52-4,57 (м, 1Н), 5,26-5,31 (м, 1Н).

Стадия ά).

Имидазол (1,46 г, 21,4 ммоль) добавляют к раствору соединения 5 (1,95 г, 7,14 ммоль) в ДМФА (50 мл). Через несколько минут добавляют ТВЭР8С1 и полученную реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. К реакционной смеси добавляют этилацетат (200 мл) и раствор промывают 10% лимонной кислотой (водный раствор) (3x50 мл) и NаНСΟ₃ (насыщенный водный раствор) (50 мл). Органическую фазу сушат №₂8О₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Сырой продукт очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии (смесь гептан: этилацетат (4:1), что дает соединение 6 с выходом 92% (3,39 г).

Ή ЯМР (СОС1₃, 400 МГц) 1,09 (с, 9Н), 2,04 (с, 3Н), 2,05 (с, 3Н), 3,71 (дд, 1Н, 1=4,3, 2,1 Гц), 3,78 (дд, 1Н, 1=9,5, 2,2 Гц), 3,99 (дд, 1Н, 1=9,6, 4,6 Гц), 4,12 (дд, 1Н, 1=12,2, 5,1 Гц), 4,28-4,33 (м, 2Н), 4,36-4,40 (м, 1Н), 5,17-5,22 (м, 1Н), 7,37-7,51 (м, 6Н), 7,58-7,74 (м, 4Н).

Стадия е).

№1ОМе (10 мл, 0,5 М в МеОН) добавляют к раствору соединения 6 (3,39 г, 6,63 ммоль) в МеОН (60 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч перед нейтрализацией раствора путем добавления смолы Όο\\όχ 50 \УХ8 (Н⁺ форма), пока значение рН не достигнет нейтрального значения. Гранулы смолы отфильтровывают и растворитель удаляют путем выпаривания на роторе, а затем в высоком вакууме. Продукт 7 получают с количественным выходом (2,66 г).

Ή ЯМР (СОС1₃, 400 МГц) 1,08 (с, 9Н), 3,64 (дд, 1Н, 1=11,5, 5,5 Гц), 3,71 (дд, 1Н, 1=11,4, 3,9 Гц), 3,73-3,77 (м, 2Н), 3,85-3,90 (м, 1Н), 3,95 (дд, 1Н, 1=9,6, 4,7 Гц), 4,15 (дд, 1Н, 1=6,1, 4,2 Гц), 4,39-4,43 (м, 1Н), 7,37-7,51 (м, 6Н), 7,58-7,74 (м, 4Н).

Стадия ί).

Соединение 7 (1,4 г, 3,27 ммоль), растворенное в хлороформе (10 мл) и пиридине (4,77 мл, 58,9 ммоль), охлаждают на бане с сухим льдом и ацетоном. Добавляют 8О₂С1₂ (1,56 мл, 19,6 ммоль) и после этого баню удаляют. Реакционную смесь перемешивают в течение ночи, и со временем она становится более темной. Через 16 ч реакционную смесь разбавляют ИСМ (15 мл) и промывают 10% лимонной кислотой (водный раствор) (15 мл) и NаНСО₃ (насыщенный водный раствор) (15 мл). Органическую фазу сушат №₂8О₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Масло коричневого цвета растворяют в МеОН (10 мл) и к полученному раствору добавляют приблизительно 0,5 мл ΝαΙ (0,8% в МеОН: Н₂О (1:1)), который перемешивают в течение 15 мин. Затем растворитель упаривают и сырой продукт очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии (смесь гептан:этилацетат (4:1), что дает выход 68% соединения 8.

Ή ЯМР (СПС1₃, 400 МГц) 1,10 (с, 9Н), 3,80-3,85 (м, 2Н), 3,89 (дд, 1Н, 1=12,1, 5,8 Гц), 3,96 (дд, 1Н, 1=9,7, 3,8 Гц), 4,00 (дд, 1Н, 1=12,3, 2,6 Гц), 4,15 (ддд, 1Н, 1=9,7, 5,9, 2,6 Гц), 4,32-4,36 (м, 2Н), 7,35-7,52 (м, 6Н), 7,58-7,75 (м, 4Н).

РР11₃ (882 мг, 3,36 ммоль) добавляют к раствору соединения 8 (1,04 г, 2,24 ммоль) в МеОН (50 мл) и Н₂О (5 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. ЬС-М8 показывает отсутствие исходного продукта, но очень небольшое количество циклизованного продукта. ТЕА (9,38 мл, 67,2 ммоль) и Н₂О (5 мл) добавляют к раствору, который нагревают до температуры 50°С. Через 4 ч ЬС-М8 показывает отсутствие нециклизованного амина. Растворитель упаривают и сырой продукт очищают с помощью флэш-хроматографии (смесь гептан: этилацетат (3:2)), что дает продукт 9 с 54% вы

- 12 017395 ходом (0,49 г).

ЬКМ8 (М+Н) 402.

¹Н ЯМР (СПС1₃, 400 МГц) 1,06 (с, 9Н), 2,71 (дд, 1Н, 1=11,1, 10,4 Гц), 3,18 (дд, 1Н, 1=11,2, 7,0 Гц), 3,73 (д, 1Н, 1=4,7 Гц), 3,78 (дд, 1Н, 1=9,8, 3,5 Гц), 3,84 (дд, 1Н, 1=9,8, 2,0 Гц), 3,95 (ддд, 1Н, 1=10,2, 7,1, 4,1 Гц), 4,16-4,19 (м, 1Н), 4,66 (дд, 1Н, 1=4,4, 4,4 Гц), 7,35-7,46 (м, 6Н), 7,61-7,67 (м, 4Н).

Стадия 11).

(восро, ТЕЛ, МеОН количественный'

Вос-ангидрид (0,52 г, 2,40 ммоль) добавляют к раствору соединения 9 (0,48 г, 1,20 ммоль) в 50 мл смеси МеОН:ТЕА (9:1). Реакционную смесь перемешивают в течение ночи и после этого растворитель удаляют путем концентрации в вакууме. Сырой продукт очищают с помощью колоночной флэшхроматографии (смесь гептан:этилацетат (4:1—2:1)), что дает продукт 10 с количественным выходом (0,60 г).

Ή ЯМР (СПС1₃, 400 МГц) 1,07 (с, 9Н), 1,24-1,46 (м, 9Н)*, 3,05 (дд, 1Н, 1=10,4, 10,4 Гц), 3,56 (д, 1Н, 1=9,7 Гц), 3,70-3,89 (м, 1Н)*, 3,90-4,15 (м, 2Н)*, 4,24-4,89 (м, 3Н)*, 7,34-7,47 (м, 6Н), 7,59-7,78 (м, 4Н). *Обозначает ротамеры.

Стадия ί).

Фторид тетрабутиламмония (1,79 мл, 1,79 ммоль) добавляют к раствору соединения 10 (0,60 г, 1,19 ммоль), растворенному в ТГФ (12 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч перед удалением растворителя путем концентрации в вакууме. Сырой продукт очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии (смесь гептан:этилацетат (1:1 —>0:1), и получают с 94% выходом (0,29 г) соединение 11.

Ή ЯМР (СПС1₃, 400 МГц) 1,45-1,52 (м, 9Н)*, 3,16-3,32 (м, 1Н)*, 3,83-4,22 (м, 5Н)*, 4,41-4,54 (м, 1Н)*, 4,66-4,71 (м, 1Н)*.

*Обозначает ротамеры.

Стадия _)).

Периодинан Десс-Мартина (0,60 г, 1,42 ммоль) добавляют к раствору соединения 11 (0,34 г, 1,29 ммоль), растворенному в сухом ЭСМ. Реакционную смесь перемешивают в атмосфере Ν₂ в течение 2 ч, когда, как полагают, реакция достигает завершения, что определяют с помощью ТСХ. Раствор промывают трижды (3x20 мл) смесью 1:1 10% №ь8₂О₃ (водный раствор) и NаНСО₃ (насыщенный водный раствор). Органическую фазу сушат №₂8О₄, фильтруют и концентрируют в вакууме. Сырой продукт очищают с помощью флэш-хроматографии (смесь гептан: этилацетат (3:1)), что дает выход 84% (284 мг) соединения 12.

Ή ЯМР (СОС1₃, 400 МГц) 1,49 (с, 9Н), 3,45 (дд, 1Н, 1=11,3, 9,0), 4,01-4,17 (м, 2Н), 4,19-4,41 (м, 3Н), 4,68-4,87 (м, 1Н).

Стадия к).

Предварительно смешанный раствор АсС1 (42 мкл, 0,601 ммоль) и МеОН (5 мл) добавляют к раствору соединения 12 (263 мг, 1,01 ммоль). После перемешивания в течение 2 ч вводят дополнительное количество АсС1 (0,98 мл, 14 ммоль) и снова после перемешивания в течение 16 ч вводят дополнительное количество АсС1 (9,8 мл, 140 ммоль). Реакцию быстро заканчивают, после чего реакционную смесь концентрируют в вакууме и затем любой оставшийся растворитель удаляют в высоком вакууме, что дает сырой выход 103% (253 мг) соединения 13.

Ή ЯМР (СОС1₃, 400 МГц) 3,34 (с, 3Н), 3,40 (с, 3Н), 3,76 (д, 1Н, 1=10,6 Гц), 3,72-3,90 (м, 1Н), 4,15 (д, 1Н, 1=10,4 Гц), 4,34 (д, 1Н, 1=4,6 Гц), 4,50-4,60 (м, 1Н), 4,69-4,75 (м, 1Н), 4,83 (с, 1Н).

- 13 017395

Пример 2. Связывание Р-2 с Ь-Ьеи

ΌΓΕΑ (304 мкл, 1,84 ммоль) и Вос-Ьеи (117 мг, 0,506 ммоль) добавляют к сырому соединению 13 (112 мг, 0,460 ммоль), растворенному в ДМФА (6 мл). Реакционную колбу охлаждают на бане со льдом в течение 10 мин, перед добавлением НАТи (193 мг, 0,506 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч при комнатной температуре перед концентрацией в вакууме. Сырой остаток растворяют в СНС1₃ (15 мл) и промывают 10% лимонной кислотой (водный раствор) (10 мл) и NаНСО₃ (насыщенный водный раствор) (10 мл). Органическую фазу сушат Ν₂8Ο₄, фильтруют и упаривают. Сырой продукт очищают с помощью флэш-хроматографии (смесь гептан:этилацетат (2:1^1:1)), что дает продукт 14 с выходом 62% (121 мг).

Пример 3. Строительный блок Р3.

4-[5-Метил-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензойная кислота

Стадия а). 4-Цианопропиофенон

Как описано в методике получения 4-цианоацетофенона (8у п(11. Соттип, 1994, 887-890), смесь из 4-бромпропиофенона (5,65 г, 26,4 ммоль), Ζη(ί.’Ν)_; (1,80 г, 15,3 ммоль) и Рб(РРЬ₃)₄ (2,95 г, 2,6 ммоль) нагревают при температуре кипения с обратным холодильником при температуре 80°С в дезоксигенированном ДМФА (35 мл, хранящийся над 4 А молекулярными ситами, барботированием Аг до применения) в течение 18 ч. Смесь распределяют между толуолом (100 мл) и 2н. раствором ΝΗ₄ΟΗ (100 мл). Органическую фазу экстрагируют раствором 2н. ΝΗ₄ΟΗ (100 мл), промывают насыщенным водным раствором №1С1 (2x100 мл), сушат и концентрируют в вакууме. Аналогичным образом получают 10 ммоль реакционной смеси и сырые продукты объединяют. Флэш-хроматография (330 г силикагеля, 6/1 петролейный эфир - ЕЮАс) дает требуемое соединение в виде твердого вещества белого цвета (5,17 г, 89%).

¹Н ЯМР (СПС1₃) δ част./млн: 1,22 (т, 3Н, 1=7,2 Гц), 3,00 (кв., 2Н, 1=7,3 Гц), 7,75 (д, 2Н, 1=8,8 Гц), 8,03 (д, 2Н, 1=8,4 Гц).

¹³С ЯМР (СБС1з) δ част./млн: 7,8, 32,1, 116,1, 117,9, 128,3, 132,4, 139,7, 199,2.

Стадия Ь). 4-Пропионилбензойная кислота

4-Цианопропиофенон (4,67 г, 29,3 ммоль) нагревают при температуре кипения с обратным холодильником с 2н. раствором №1ОН (90 мл, 180 ммоль) и диоксаном (90 мл) при температуре 95°С в течение ночи. Смесь разбавляют водой (150 мл), промывают эфиром (75 мл), подкисляют до значения рН, равного 2, с помощью концентрированной НС1 и экстрагируют эфиром (3x75 мл). Органическую фазу промывают насыщенным водным раствором №1С1 (3x75 мл), сушат и концентрируют, что дает твердое вещество желтого цвета (5,12 г, 98%).

¹Н ЯМР (СОС1_; + СО.ОО) δ част./млн: 1,18 (т, 3Н, 1=7,2 Гц), 2,99 (кв., 2Н, 1=7,1 Гц), 7,95 (д, 2Н, 1=8,4 Гц), 8,08 (д, 2Н, 1=8,8 Гц).

¹³С ЯМР (СПС1₃) δ част./млн.: 7,9, 32,1, 127,7, 130,0, 134,0, 140,0, 168,0, 200,8.

Стадия с). Метил-4-пропионилбензоат

Бензойную кислоту, указанную выше (890 мг, 5 ммоль), NаΗСΟ₃ (1,26 г, 15 ммоль) и йодметан (935 мкл, 15 ммоль) в ДМФА (10 мл) перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Смесь разбавляют насыщенным водным раствором №1С1 (50 мл) и экстрагируют эфиром (3x50 мл). Органическую фазу промывают водой (50 мл), сушат и концентрируют. Флэш-хроматография (90 г силикагель, 2/1 петролейный эфир - ЕЮАс) дает твердое вещество белого цвета (744 мг, 77%).

¹Н ЯМР (СБС1з) δ част./млн: 1,24 (т, 3Н, 1=7 Гц), 3,03 (кв., 2Н, 1=7 Гц), 3,95 (с, 3Н), 8,0 и 8,12 (АВф 4Н).

- 14 017395

Стадия б). Метил-4-(2-бромпропионил)бензоат

Метил-4-пропионилбензоат (744 мг, 3,87 ммоль), гидротрибромид пирролидона (1,98 г) и 2-пирролидинон (380 мг, 4,5 ммоль) в ТГФ (38 мл) нагревают при температуре 50°С в атмосфере азота в течение 3 ч. Смесь охлаждают, фильтруют, концентрируют в вакууме и затем повторно растворяют в эфире (50 мл). Раствор эфира промывают последовательно водой (20 мл), насыщенным водным раствором Ыа₂8₂О₅ (20 мл), насыщенным водным раствором №1С1 (20 мл) и водой (20 мл), сушат и концентрируют в вакууме, что дает масло желтого цвета (1,025 г), которое используют непосредственно в реакции связывания по Хантчу (Ηαηΐζδοίι). Указанный продукт содержит 91% требуемого бромкетона, 5% исходного кетона и 4% 4-бром-1-бутанола, как определяют с помощью ¹Н ЯМР.

¹Н ЯМР (СОС1₃) δ част./млн: 1,92 (д, 3Н, 1=7 Гц), 3,96 (с, 3Н), 5,28 (кв., 1Н, 1=7 Гц), 8,07 и 8,14 (АВд, 4Н).

Стадия е). Метиловый эфир 4-[2-(4-трет-бутоксикарбонилпиперазин-1-ил)-5-метилтиазол-4ил] бензойной кислоты

Все α-бромкетоны, полученные выше, и трет-бутиловый эфир 4-тионокарбонилпиперазин-1карбоновой кислоты (1. Меб. Сйеш., 1998, 5037-5054, 917 мг, 3,73 ммоль) нагревают при температуре кипения с обратным холодильником в 36 мл ТГФ при температуре 70°С в течение 2 ч в атмосфере Ν₂. Осадок отфильтровывают и фильтрат концентрируют в вакууме, что дает твердое вещество желтого цвета. Колоночная флэш-хроматография (силикагель, 5/1 петролейный эфир - ЕЮАс) дает 624 мг твердого вещества светло-желтого цвета. Хроматография осадка (силикагель, 2/1 петролейный эфир - ЕЮАс) дает дополнительно 32 мг соединения. Общий выход 44%.

Ή ЯМР (СОС1₃) δ част./млн: 1,46 (с, 9Н), 2,43 (с, 3Н), 3,42 (м, 4Н), 3,54 (м, 4Н), 3,90 (с, 3Н), 7,68 и 8,04 (АВд, 4Н).

Стадия 1). 4-[2-(4-трет-Бутоксикарбонилпиперазин-1-ил)-5-метилтиазол-4-ил]бензойная кислота

Указанный выше метиловый эфир (564 мг, 1,35 ммоль) нагревают с 1,35 мл 2н. раствора ΝαΟΗ, 5 мл ТГФ и 3,65 мл воды при температуре 60°С в течение 4 ч. Реакционную смесь упаривают, выливают в 20 мл насыщенного водного раствора Ναί'Ί и 20 мл СН₂С1₂ и затем подкисляют до значения рН, равного 3, с помощью 5% раствора лимонной кислоты, на бане со льдом. Слои разделяют и органическую фазу экстрагируют дополнительно 2x10 мл СН₂С1₂. Органические фазы объединяют, промывают водой (10 мл), сушат и концентрируют в вакууме, что дает твердое вещество светло-желтого цвета (537 мг, 98%).

Ή ЯМР (СОС1₃) δ част./млн: 1,48 (с, 9Н), 2,47 (с, 3Н), 3,47 (м, 4Н), 3,57 (м, 4Н), 7,74 и 8,12 (АВд, 4Н).

¹³С ЯМР (СОС1₃) δ част./млн: 12,6, 28,3, 42,8, 48,1, 80,3, 119,1, 127,8, 128,2, 130,1, 140,5, 145,6, 154,6,

167,2, 171,4.

ЬСМ8: (М+Н)⁺ 404, (М-Н)^- 402.

Стадия д). 4-[5-Метил-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензойная кислота

трет-Бутиловый эфир 4-[4-(4-карбоксифенил)-5-метилтиазол-2-ил]пиперазин-1-карбоновой кислоты (0,421 ммоль) растворяют в 4 М растворе НС1 в 1,4-диоксане и перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем растворитель удаляют в вакууме и остаток в виде 4-(5-метил-2-пиперазин-1илтиазол-4-ил)бензойной кислоты суспендируют в метаноле (10 мл) и обрабатывают буфером АсОН/АсО№1 (рН~5,5; 5 мл), затем формальдегидом (0,547 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч, затем обрабатывают NаСNВН₃ (0,547 ммоль) и перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Затем растворитель удаляют в вакууме и остаток очищают с помощью колоночной хроматографии, что дает указанное в заголовке соединение (0,403 ммоль, 95%).

М8 (Е8) т/ζ: 318 (100%, [М+Н]⁺).

- 15 017395

Пример 4.

Ацетилхлорид (0,4 мл) добавляют по каплям к раствору соединения 14 (0,121 г, 0,288 ммоль) в метаноле (4 мл) при температуре 0°С. Затем реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи и затем концентрируют в вакууме. Остаток повторно растворяют дважды в сухом ДМФА (5 мл) и концентрируют досуха, затем снова растворяют в ДМФА (6 мл). К раствору добавляют 4-[5-метил-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензойную кислоту НС1 (112 мг, 0,316 ммоль) и ΌΙΕΆ (190 мкл, 1,15 ммоль) перед его охлаждением до температуры 0°С и затем добавляют НАТи (120 мг, 0,316 ммолъ). Реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч при комнатной температуре перед удалением растворителя путем выпаривания на роторе. Сырую смесь растворяют в СНС1₃ (15 мл) и промывают 10% лимонной кислотой (водный раствор) (10 мл) и №НСО₃ (насыщенный водный раствор) (10 мл). Органическую фазу сушат Ыа₂8О₄, фильтруют и упаривают. Сырой продукт очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии (1:1 смесь этилацетат:ацетон + 0,2% ТЕА), что дает продукт в виде бесцветного масла/твердого вещества с 84% выходом (150 мг).

ЬКМ8 (М+Н) 620.

'Н ЯМР (СОС1₃, 400 МГц) для основного ротамера (13:1 смесь ротамеров): 0,98 (д, 3Н, 1=6,5 Гц), 1,04 (д, 3Н, 1=6,4 Гц), 1,55-1,89 (м, 3Н), 2,34 (с, 3Н), 2,42 (с, 3Н), 2,49-2,54 (м, 2Н), 3,25 (с, 3Н), 3,43 (с, 3Н), 3,45-3,51 (м, 3Н), 3,72 (д, 1Н, 1=10,5 Гц), 3,91 (д, 1Н, 1=10,5 Гц), 4,05-4,15 (м, 1Н), 4,46-4,53 (м, 1Н), 4,59 (дд, 1Н, 1=5,2, 5,1 Гц), 4,74 (д, 1Н, 1=5,6 Гц), 4,96-5,04 (м, 1Н), 6,83 (д, 1Н, 1=8,0 Гц), 7,68 (д, 2Н,

1=8,3 Гц), 7,79 (д, 2Н, 1=8,5 Гц).

Пример 5.

Соединение 15 (137 мг, 0,220 ммоль) растворяют в 20 мл ТГА:Н₂О (97,5:2,5) и перемешивают в течение 4 ч. Растворитель удаляют в вакууме и сырой продукт предварительно абсорбируют на силикагеле, чтобы очистить с помощью колоночной флэш-хроматографии (смесь ЕЮАс:ацетон (1:2) с 0,2% ТЕА), что дает продукт (лиофилизованный из диоксана) в виде твердого вещества грязно-белого цвета с 71% выходом (90 мг).

'Н ЯМР (СОС1₃, 400 МГц) для основного ротамера (10:1 смесь ротамеров): 0,98 (д, 3Н, 1=6,5 Гц), 1,02 (д, 3Н, 1=6,2 Гц), 1,58-1,86 (м, 3Н), 2,34 (с, 3Н), 2,42 (с, 3Н), 2,50-2,54 (м, 2Н), 3,44-3,53 (м, 2Н), 3,68 (дд, 1Н, 1=10,4, 8,8 Гц), 4,11 (д, 1Н, 1=17,2 Гц), 4,29 (д, 1Н, 1=17,3 Гц), 4,36-4,44 (м, 1Н), 4,59 (дд, 1Н, 1=10,5, 7,1 Гц), 4,81 (д, 1Н, 1=5,8 Гц), 4,87-4,97 (м, 2Н), 6,83 (д, 1Н, 1=7,9 Гц), 7,68 (д, 2Н, 1=8,4 Гц), 7,79 (д, 2Н, 1=8,5 Гц).

Пример 6.

Ы-[(8)-1-((3а8,6К,6а8)-6-Хлор-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4-[2(4-метилпиперазин-1 -ил)тиазол-4-ил]бензамид

Стадия а).

К перемешиваемому раствору сырого соединения 12 (приблизительно 0,56 ммоль) в триметилортоформиате (0,8 мл) и метаноле (3 мл) добавляют моногидрат п-толуолсульфоновой кислоты (п-ТкОН, 0,007 г, 0,037 ммоль), затем нагревают до температуры 50°С в течение ночи. После этого ход реакции контролируют с помощью ТСХ (3:2 смесь гексан-этилацетат, окрашивание нингидрином). Реакционную

- 16 017395 смесь нагревают до температуры 60°С и добавляют общее количество 21 мг п-ΤδΟΗ в течение более 4 ч, что дает кеталь со снятой Вос-защитой в виде основного продукта (как регистрируют с помощью ТСХ). Затем реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и добавляют триэтиламин (0,32 мл, 2,24 ммоль), а затем ди-трет-бутилдикарбонат (0,184 г, 0,84 ммоль). Реакционную смесь оставляют при комнатной температуре на 2,5 ч, затем концентрируют в вакууме и остаток абсорбируют на силикагеле. Колоночная флэш-хроматография остатка (ступенчатый градиент элюирования, этилацетат в гексане, 20-25%), последующая концентрация в вакууме соответствующих фракций и удаление оставшегося растворителя путем дополнительного высушивания на вакуумной линии в течение ночи дает продукт 31 в виде твердого вещества грязно-белого цвета (0,069 г, 0,022 ммоль, 40% после 2 стадий).

Ή ЯМР (400 МГц, 298 К, ΟΌΟ1₃): δ 1,47 (с, 9Н), 3,16 (м, 1Н), 3,30 (с, 3Н), 3,37 (с, 3Н), 3,72 (д, 1Н, 1=9,3 Гц), 3,86 (м, 1Н), 3,98 (м, 1Н), 4,15 (м, 1Н), 4,44 (д, 1Н, 1=5,4 Гц), 4,61 (м, 1Н).

Стадия Ь).

К перемешиваемому раствору соединения 31 (0,074 г, 0,24 ммоль) в метаноле (2,7 мл) при температуре 0°С добавляют по каплям ацетилхлорид (0,3 мл) в течение более 1 мин. Ход реакции контролируют с помощью ТСХ (3:2 смесь гексан-этилацетат и полученную смесь 95:5 дихлорметан-метанол, окрашивание нингидрином) и после 4,5 ч исходный продукт полностью вступает в реакцию. Затем реакционную смесь концентрируют в вакууме и затем повторно растворяют в диоксане с несколькими каплями Н2О, после чего лиофилизуют. Полученное аморфное твердое вещество грязно-белого цвета и моногидрат №(трет-бутоксикарбонил)-Ь-лейцина (0,066 г, 0,26 ммоль) растворяют в ДМФА (3 мл) и концентрируют в вакууме. Остаток повторно растворяют в ДМФА (3 мл) и добавляют Ν-этилдиизопропиламин (0,13 мл, 0,72 ммоль). К этому раствору добавляют гексафторфосфат №О-(7-азабензотриазол-1-ил)-Ы,^№,№тетраметилурония (НАТИ, 0,12 г, 0,31 ммоль) при температуре 0°С. Реакционную смесь оставляют при температуре 0°С на 40 мин и еще на 75 мин при комнатной температуре. Затем реакционную смесь разбавляют этилацетатом (25 мл), промывают последовательно водным раствором 10% лимонной кислоты (3x15 мл) и насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (3x15 мл) и затем сушат (сульфат натрия), фильтруют и концентрируют в вакууме. Колоночная флэш-хроматография на силикагеле остатка, используя 2:1 смесь гексан-этилацетат в виде элюента, последующая концентрация в вакууме соответствующих фракций, дает соединение 32Ь в виде бесцветного сиропа (0,089 г, 0,21 ммоль, 88%), который используют непосредственно на следующей стадии.

Стадия с).

К раствору соединения 32Ь (0,089 г, 0,21 ммоль) в метаноле (2,7 мл) при температуре 0°С добавляют по каплям ацетилхлорид (0,3 мл) в течение 0,5 мин. Затем реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 5,5 ч (контролируют с помощью ТСХ: 95:5 смесь дихлорметанметанол, окрашивания, используя смесь молибдат аммония - сульфат церия в 10% водном растворе серной кислоты) и затем концентрируют в вакууме. Остаток повторно растворяют в диоксане (5 мл) и добавляют небольшое количество воды и затем раствор лиофилизуют. Полученное бесцветное аморфное твердое вещество и 4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензойной кислоты НВг соль (0,089 г, 0,23 ммоль) растворяют в ДМФА (3 мл) и затем добавляют Ν-этилдиизопропиламин (0,15 мл, 0,85 ммоль) и раствор охлаждают до температуры 0°С и добавляют НАТИ (0,105 г, 0,275 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при температуре 0°С в течение 1 ч и еще в течение 1 ч при комнатной температуре (контролируют с помощью ТСХ: 95:5 смесь дихлорметан-метанол, наблюдают с помощью УФ-излучения и окрашивания, используя смесь молибдат аммония-сульфат церия в 10% водном растворе серной кислоты). Затем реакционную смесь разбавляют этилацетатом (25 мл), промывают 3:1 насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия/рассолом (3x20 мл), затем сушат (сульфат натрия), фильтруют и концентрируют в вакууме. Колоночная флэш-хроматография остатка, используя ступенчатый градиент элюирования (метанол в дихлорметан, 0-5%), последующая концентрация в вакууме соответствующих фракций и лиофилизация из диоксана (5 мл) с несколькими каплями воды дает продукт 32с в виде бесцветного аморфного твердого вещества (0,121 г, 0,20 ммоль, 94%).

- 17 017395

Стадия ά).

К продукту 32с (0,114 г, 0,188 ммоль) добавляют раствор 97,5:2,5 ТЕА-вода (6 мл) при комнатной температуре, полученный раствор контролируют с помощью ЬС-М8 и после перемешивания в течение 2 ч при комнатной температуре реакционную смесь концентрируют в вакууме. Остаток повторно растворяют в этилацетате (25 мл), промывают насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (3x15 мл) и рассолом (1x15 мл), затем сушат (сульфат натрия), фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток, полученный в виде аморфного твердого вещества, растворяют в смеси ДМСО-ацетонитрилвода-диоксан (приблизительно 12 мл) и очищают с помощью препаративной НРЬС-М8 (колонка: 8ипПге 19x100 мм (С₁₈), элюент А: 10 мМ ацетата аммония в воде, элюент В: 10 мМ ацетата аммония в 9:1 ацетонитрил-вода, градиент: от 30% В до 80% В в течение 8 мин, скорость потока: 20 мл/мин). Соответствующие фракции концентрируют в вакууме. Остаток повторно растворяют в диоксане с несколькими каплями воды, замораживают и лиофилизуют, получая соединение 32ά в виде аморфного твердого вещества грязно-бело-желтого цвета (0,055 г, 0,10 ммоль, 52%). Аликвоту полученного продукта растворяют в СЭСЕ, и анализируют с помощью ЯМР-спектра, который определяет выход продукта в кетоформе (гидратная форма не обнаруживается) в 9:1 смеси ротамеров. ЯМР-данные относятся к основному ротамеру. Когда анализируют с помощью НРЬС-М8, гидратная форма представляет собой основную форму.

Ή ЯМР (500 МГц, 293 К, СОС1₃): δ 0,96 (д, 3Н, СН₃-СН), 1,02 (д, 3Н, СН₃-СН), 1,62-1,78 (м, 3Н, СН(СН₃)₂ и СН₂СН(СН₃)₂), 2,37 (с, 3Н, СНз-Ν), 2,56 (м, 4Н, 2хСН₂-Ц), 3,59 (м, 4Н, 2хСН₂-Ц), 3,70 (м, 1Н, СНН-СНС1), 4,13 (д, 1Н, СНН-О), 4,31 (д, 1Н, СНН-О), 4,42 (м, 1Н, СНС1), 4,60 (м, 1Н, СНН-СНС1), 4,82 (м, 1Н, СНС1-СН), 4,90-4,96 (м, 2Н, СН-С=О и СНЕ1Н), 6,85-6,89 (м, 2Н, ΝΉ и тиазол-Н), 7,78 (д, 2Н, АгН), 7,89 (д, 2Н, Аг-Н).

Ш-М8: Вычислено для С₂₇Н₃₅СШ₅0₄8: 560,2. Получено: 560,3 [М+Н].

Вычислено для С₂₇Н₃₇СШ₅0₅8: 578,2. Получено: 578,3.

Пример 7.

№[2-((3а8,6В,6а8)-6-Хлор-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-ил)-1-8-циклогексил-2-оксоэтил]4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамид

Стадия а). трет-Бутиловый эфир [2-((3а8,6К,6а8)-6-хлор-3,3-диметоксигексагидрофуро[3,2Ь]пиррол-4-ил)-1-8-циклогексил-2-оксоэтил]карбаминовой кислоты (7 а)

НС1 соль (3а8,6К,6а8)-6-хлор-3,3-диметоксигексагидрофуро[3,2-Ь]пиррола (13) (0,23 ммоль) и Восциклогексил-С1у-0Н (64,4 мг, 0,25 ммоль) совместно упаривают из ДМФА, повторно растворяют в 3 мл ДМФА и охлаждают на бане со льдом. Добавляют ΩΙΕΛ (160 мкл, 0,92 ммоль), а затем НАТИ (108 мг, 0,28 ммоль). Через 20 мин смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч 20 мин и концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в ЕЮАс (10 мл), промывают последовательно 10% раствором лимонной кислоты (5 мл), насыщенным раствором NаНС0₃ (5 мл) и насыщенным раствором №1С1 (2x5 мл). Органическую фазу сушат (№ь80₄) и концентрируют. Колоночная флэш-хроматография (силикагель, 2/1 пентан - ЕЮАс) дает твердое вещество белого цвета (86,6 мг, 84% выход).

ЬСМ8 [М+23]⁺=469.

- 18 017395

Стадия Ъ). №[2-((3а8,6К,6а8)-6-Хлор-3,3-диметоксигексагидрофуро[3,2-Ъ]пиррол-4-ил)-1-8циклогексил-2-оксоэтил]-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамид (7Ъ)

Ацетилхлорид (0,25 мл) добавляют к охлажденному льдом раствору трет-бутилового эфира карбаминовой кислоты, полученного выше (86,6 мг, 0,194 ммоль) в метаноле (2,20 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч 45 мин и упаривают. Сушка сублимацией из раствора диоксанвода дает незащищенную НС1 соль амина, которую затем вначале совместно упаривают из ДМФА с 4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензойной кислоты НВг солью (83 мг, 0,22 ммоль) и затем повторно растворяют в 2,5 мл ДМФА. Смесь охлаждают на бане со льдом, добавляют ЭША (140 мкл, 0,80 ммоль), а затем НАТИ (83,8 мг, 0,22 ммоль). Через 15 мин смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2,5 ч. Смесь концентрируют, растворяют в ΕΐОАс (20 мл), промывают последовательно насыщенным раствором NаНСОз (10 мл) и насыщенным раствором №1С1 (2x10 мл). Органическую фазу сушат (№ь8О₄) и концентрируют. Колоночная флэш-хроматография (силикагель, СН₂С1₂ МеОН - Εΐ₃Ν) дает твердое вещество белого цвета (121,2 мг, 99% выход).

ЬСМ8 [М+1]⁺=632.

Стадия с). №[2-((3а8,6К,6а8)-6-Хлор-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ъ]пиррол-4-ил)-1-8-циклогексил-2оксоэтил]-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамид (7 с)

С диметоксиэфира, полученного выше (115 мг, 0,182 ммоль)? снимают защиту в растворе ТРА-вода (97,5:2,5 об./об., 6,0 мл) путем перемешивания при комнатной температуре в течение 2 ч 15 мин. Смесь концентрируют, растворяют в ΕΐОАс (25 мл), промывают последовательно насыщенным раствором NаНСОз (3x15 мл) и насыщенным раствором №1С1 (15 мл). Органическую фазу сушат (№1₂8О₄) и упаривают. Сырой продукт очищают с помощью НРЬС-М8 (колонка 8ипПге РгерС₁₈ОВЭ 5 мкм 19x100 мм; градиент от 60 до 80% В в А, мобильные фазы А 10 нМ ЯН₄ОАс в воде и В 10 мМ ЫН₄ОАс в 90% МеСЦ), что дает конечное соединение в виде твердого вещества белого цвета (63 мг, 59% выход).

ЬСМ8 Ε8⁺=604 (гидрат) и Ε8⁺=586 (кетон).

Ή ЯМР (500 МГц, СБС1₃) δ част./млн: 7,90 и 7,78 (АВд, 2Н каждый), 6,89 (с, 1Н), 6,83 (д, 1Н, ΝΉ), 4,91 (м, 1Н), 4,86 (м, 1Н), 4,69 (м, 1Н), 4,62 (дд, 1Н), 4,40 (м, 1Н), 4,32 и 4,14 (АВд, 1Н каждый), 3,72 (дд, 1Н), 3,60 (м, 4Н), 2,58 (м, 4Н), 2,38 (с, 3Н), 2,10-1,04 (м, 11Н).

Пример 8.

№[(8)-1-((3а8,6К,6а8)-6-Хлор-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ъ]пиррол-4-карбонил)-3-фтор-3метилбутил] -4-[2-(4 -метилпиперазин-1 -ил)тиазол-4 -ил] бензамид

Стадия а).

Ацетилхлорид (0,4 мл) добавляют по каплям к раствору соединения 11 (60 мг, 0,228 ммоль) в метаноле (4 мл) при температуре 0°С. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 6 ч, концентрируют, повторно растворяют в 1,4-диоксане и сушат сублимацией в течение ночи. Остаток растворяют в 5 мл ДМФА. К раствору добавляют γ-фтор-Вос-Ьеи-ОН (Тгиопд е! а1. 8упЬей, 2005, № 8, 1279-1280, 50 мг, 0,201 ммоль) и ЭША (133 мкл, 0,802 ммоль) перед его охлаждением до температуры 0°С и затем добавляют НАТИ (80 мг, 0,211 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч при комнатной температуре перед концентрированием растворителя в вакууме. Продукт растворяют в ΕΐОАс (20 мл) и промывают NаНСО₃ (насыщенный водный раствор) (10 мл). Органическую фазу сушат №₂8О₄. фильтруют и концентрируют в вакууме. Продукт очищают с помощью флэш-хроматографии

- 19 017395 (этилацетат), что дает продукт 42 с 99% выходом (79 мг) Стадия Ь).

Ацетилхлорид (0,4 мл) добавляют по каплям к раствору соединения 42 (79 мг, 0,199 ммоль) в метаноле (4 мл) при температуре 0°С. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 6 ч, концентрируют, повторно растворяют в 1,4-диоксане и сушат сублимацией в течение ночи. Остаток растворяют в 5 мл ДМФА. К раствору добавляют 4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4ил]бензойной кислоты НВг (76 мг, 0,198 ммоль). Добавляют ΌΙΕΑ (119 мкл, 0,721 ммоль), перед его охлаждением до температуры 0°С, и НАТИ (72 мг, 0,189 ммоль). Реакционную смесь перемешивают в течение 3 ч при комнатной температуре перед удалением растворителя в вакууме. Продукт растворяют в СНС1з (15 мл) и промывают NаНСОз (насыщенный водный раствор) (10 мл). Органическую фазу сушат №₂8О₄, фильтруют и упаривают. Продукт очищают с помощью флэш-хроматографии (7:3 смесь хлороформ:этанол + 0,1% ТЕА), что дает на выходе в достаточной мере чистое соединение 43, которое может быть использовано непосредственно на следующей стадии.

Стадия с).

Соединение 43 (104 мг, 0,198 ммоль) (сырое) растворяют в 9 мл ОС’М:ДМСО (2:1). Добавляют ТЕА^: (111 мкл, 0,797 ммоль), а затем 8О₃*пиридин (48 мг, 0,299 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре и контролируют с помощью ЬС-М8. Через 4 ч добавляют другую порцию (48 мг) 8О₃*пиридина и более чем через 4 ч другую порцию. Через 22 ч (в течение ночи) вводят дополнительную порцию и более чем через 2 ч добавляют конечную порцию. Раствор выливают в делительную воронку с 40 мл ОСМ и промывают 20 мл NаНСО₃ (насыщенный водный раствор). Органическую фазу сушат №ь8О₄. фильтруют и концентрируют в вакууме. Продукт очищают с помощью полупрепаративной НРЬС на 8ипПге С18 колонке с мобильной фазой А (90:10 Н₂О:ацетонитрил, 10 мМ ΝΠ-Ас) и В (10:90 Н₂О: ацетонитрил, 10 мМ МН₄Ас), идя от 40-75% В. Продукт получают в виде твердого вещества грязно-белого цвета с 29% выходом (30 мг).

Ή ЯМР (СОС1₃, 400 МГц): 1,37-1,52 (м, 6Н), 2,10-2,30 (м, 2Н), 2,37 (с, 3Н), 2,58-2,63 (м, 2Н), 3,573,62 (м, 2Н), 3,73 (дд, 1Н, 1=10,5, 8,7 Гц), 4,10 (д, 1Н, 1=16,9 Гц), 4,28 (д, 1Н, 1=16,9 Гц), 4,43-4,50 (м, 1Н), 4,71 (дд, 1Н, 1=10,6, 6,9 Гц), 4,78 (д, 1Н, 1=6,0 Гц), 4,87-4,93 (м, 1Н), 4,95-5,03 (м, 1Н), 6,86 (с, 1Н), 7,37 (д, 1Н, 1=7,3 Гц), 7,73 (д, 2Н, 1=8,3 Гц), 7,82 (д, 2Н, 1=8,6 Гц).

ЬВМ8 (М+Н) 578.

Пример 9.

Альтернативный строительный блок Р3.

НС1 соль 3-фтор-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензойной кислоты.

Стадия а). Метил-4-бром-3-фторбензоат (9а)

4-Бром-3-фторбензойную кислоту (2,46 г, 11,2 ммоль) растворяют в МеОН (9 мл) и толуоле (4 мл) и охлаждают на бане со льдом. Добавляют по каплям (триметилсилил)диазометан (11 мл, 2,0 М в гексане, 22 ммоль), пока сохраняется желтый цвет. Раствор перемешивают при комнатной температуре в течение 40 мин и затем концентрируют в вакууме. Вторую порцию карбоновой кислоты (2,43 г) обрабатывают аналогичным образом. Сырой продукт из обеих порций объединяют и подвергают флэш-хроматографии (силикагель, 5/1 пентан - ЕЮАс), что дает метиловый эфир в виде твердого вещества белого цвета (4,92 г, 95% выход).

Ή ЯМР (400 МГц, СОС1₃) δ част./млн: 7,77 (м, 1Н), 7,71 (м, 1Н), 7,64 (м, 1Н), 3,93 (с, 3Н).

- 20 017395

Стадия Ь). Метил-4-ацетокси-3-фторбензоат (9Ь)

ρ

Аллилхлорид (105 мкл, 1,28 ммоль) и ТРА (20 мкл, 0,26 ммоль) добавляют к суспензии цинкового порошка (480 мг, 7,34 ммоль) и безводный бромид кобальта(П) (96,6 мг, 0,44 ммоль) в ΜеСN (4 мл) в инертном газе. После перемешивания при комнатной температуре в течение 10 мин добавляют арилбромид (1,003 г, 4,30 ммоль растворенный в 5 мл МеСЦ) из стадии (а), а затем уксусный ангидрид (0,45 мл, 4,79 ммоль) и дополнительное количество МеСN (1 мл). Смесь перемешивают в течение ночи, гасят 1 М раствором НС1 (20 мл) и затем экстрагируют с помощью ЕЮАс (3x20 мл). Органическую фазу промывают последовательно насыщенным водным раствором №1НСО₃, (20 мл) и насыщенным раствором №1С1 (2x20 мл), сушат (Ца₂8О₄) и концентрируют. Флэш-хроматография (силикагель, от 6/1 до 4/1 смесь петролейный эфир-ЕЮАс) дает регенерированный бромид (161,1 мг, 16%) и требуемый кетон (твердое вещество белого цвета, 305,5 мг, 36%).

'Н ЯМР (400 МГц, СОС1_;) δ част./млн: 7,94-7,86 (м, 2Н), 7,80 (дд, 1Н, 1=11,2, 1,6 Гц), 3,95 (с, 3Н), 2,67 (д, 3Н, 1=4,4 Гц);

¹⁹Р (376 МГц) -109,2 (м);

¹³С (100 МГц) 195,4 (д, 1=3,7 Гц), 165,1 (д, 1=2,2 Гц), 161,6 (д, 1=255 Гц), 135,8 (д, 1=8,1 Гц), 130,7 (д, 1=2,9 Гц), 129,0 (д, 1=14 Гц), 125,2 (д, 1=3,6 Гц), 117,9 (д, 1=26 Гц), 52,7 (с), 31,4 (д, 1=7,3 Гц).

Стадия с). Метил-4-(2-бромацетокси)-3-фторбензоат (9с)

Е

ТГФ (10 мл) и 2-пирролидинон (91 мкл, 1,20 ммоль) добавляют к смеси кетона со стадии Ь) (198 мг, 1,01 ммоль) и гидротрибромиду пирролидона (532 мг, 1,07 ммоль). После нагревания при температуре 60-65°С в течение 2 ч смесь концентрируют в вакууме и затем распределяют между ЕЮАс (20 мл) и насыщенным раствором №1₂8₂О₃ (10 мл). Водные фазы экстрагируют с помощью ЕЮАс (10 мл). Органические фазы объединяют, промывают насыщенным раствором Ναί,Ί (2x10 мл), сушат (№1₂8О₄) и концентрируют. Флэш-хроматография (силикагель, 7/1 петролейный эфир - ЕЮАс) дает твердое вещество белого цвета (0,2634 г), содержащее 84% требуемого бромида (как определяют с помощью интегрирования ¹⁹Р ЯМР пиков).

'|| ЯМР (400 МГц, СОСЕ) δ част./млн: 7,93 (м, 1Н), 7,88 (м, 1Н), 7,79 (дд, 1Н, 1=11,2, 1,6 Гц), 4,50 (д, 2Н, 1=2,4 Гц), 3,94 (с, 3Н);

¹⁹Р (376 МГц) -108,4 (м).

Стадия ά). Метил 3-фтор-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензоат (9ά)

ЕЮН (5,0 мл) добавляют к бромкетону, полученному выше (193 мг, 0,70 ммоль), и амиду 4-метилпиперазин-1-карботиокислоты (113 мг, 0,71 ммоль), после чего полученную смесь нагревают при температуре 70°С в течение 2 ч 15 мин. Осадки отфильтровывают, промывают холодным ЕЮН, сушат в вакууме и идентифицируют. Методику повторяют в большем масштабе для 1,75 г бромкетона (6,36 ммоль).

'|| ЯМР (400 МГц, 1/1 СОС1_;-СО_;ОО) δ част./млн: 8,20 (м, 1Н), 7,86 (дд, 1Н, 1=8,4, 1,6 Гц), 7,76 (дд, 1Н, 1=11,4, 1,8 Гц), 7,38 (д, 1Н, 1=2,4 Гц), 4,23 (ушир., 2Н), 3,95 (с, 3Н), 3,65 (ушир., 4Н), 3,32 (ушир., 2Н), 2,98 (с, 3Н);

¹⁹Р (376 МГц) -114,0 (м).

ЬСМ8 [М+Н]⁺=336.

Осадки из обоих приготовлений объединяют и суспендируют в насыщенном растворе NаНСΟ₃ (50 мл). Смесь экстрагируют с помощью ЕЮАс. Органическую фазу промывают водой, сушат (№1₂8О₄) и упаривают, что дает указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества кремового цвета (1,76 г).

Стадия е). НС1 соль 3-фтор-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензойной кислоты (9е)

Метиловый эфир (1,76 г, 5,25 ммоль) (9ά) нагревают при температуре 80°С с 6 М раствором НС1 (40 мл) в течение 5,5 ч. Вводят дополнительное количество 6 М раствора НС1 (10 мл) и полученную смесь нагревают при температуре 90°С в течение 1 ч 15 мин. Затем после охлаждения смесь упаривают в вакууме и сушат сублимацией из воды, что дает конечный продукт в виде твердого вещества кремового

- 21 017395 цвета с количественным выходом.

Ίί ЯМР (400 МГц, ДМСО-б₆) δ част./млн: 11,60 (ушир., 1Н), 8,18 (т, 1Н, 1=8,0 Гц), 7,82 (дд, 1Н, 1=8,4, 1,6 Гц), 7,72 (дд, 1Н, 1=12,0, 1,6 Гц), 7,48 (д, 1Н, 1=2,8 Гц), 4,11 (м, 2Н), 3,58 (м, 2Н), 3,49 (м, 2Н), 3,19 (м, 2Н), 2,80 (д, 3Н, 1=4,4 Гц);

¹⁹Е (376 МГц) -113,5 (м); ¹³С (100 МГц) 168,9, 166,0, 159,0 (д, 1=250 Гц), 143,4, 131,4 (д, 1=8 Гц), 129,8, 125,8 (д, 1=11 Гц), 125,6, 116,6 (д, 1=24 Гц), 111,1 (1=15 Гц), 51,1, 45,0, 41,9.

ЬСМ8 [М+Н]⁺=322.

Пример 10.

№[(8)-1-((3а8,6К,6а8)-6-Хлор-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-3фтор-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамид

Стадия а). №[(8)-1-((38,3а8,6К,6а8)-6-Хлор-3-гидроксигексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)3-метилбутил]-3 -фтор-4-[2-(4-метилпиперазин-1 -ил)тиазол-4-ил]бензамид

Указанное соединение получают из трет-бутилового эфира №[(8)-1-((38,3а8,6К,6а8)-6-хлор-3гидроксигексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбоновой кислоты путем серий из снятия защиты (ацетилхлорид, МеОН) и НАТи-опосредованных стадий связывания первоначально с Вос-лейцином и, наконец, с НС1 солью 3-фтор-4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензойной кислоты, полученной, как описано в примере 9.

ЬСМ8: [М+Н]⁺=580; [М-Н]^-=578.

¹⁹Е ЯМР (376 МГц, С1)С1_;-С1)_;О1)) δ част./млн: -113,3 (м).

Стадия Ь).

Триэтиламин (20 мкл) и комплекс триоксид серы-пиридин (20 мг, 0,125 ммоль) добавляют к раствору спирта (16,6 мг, 0,03 ммоль) со стадии (а) в 0,9 мл СН₂С1₂ и 0,45 мл ДМСО и перемешивают при комнатной температуре. Через 2 ч вводят дополнительное количество триэтиламина (10 мкл) и комплекса триоксид серы-пиридин (10 мг) и полученную смесь перемешивают в течение ночи, чтобы полностью завершить окисление до кетона. Смесь разбавляют СН2С12 и промывают насыщенным раствором NаНСО₃, а затем насыщенным водным раствором №С1. Органическую фазу сушат Ща₂8О₄), упаривают и получают масло. Сырой продукт очищают с помощью НРЬС-М8 (колонка 8ипйге РгерС1₈ит 19x100 мм; ОВО 5 градиент от 30 до 80% В в А, мобильные фазы А 10 мМ ΝΚ-ОАс в воде и В 10 мМ ΝΚ-ОАс в 90% МеСЩ, что дает указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества белого цвета (4,4 мг).

'Н ЯМР (СОС1₃, 500 МГц, регистрируют 2 ротамера, основной ротамер описывают) δ част./млн:

8,22 (м, 1Н, фенил Н5), 7,56-7,54 (м, 2Н, фенил Н2 и Н6), 7,21 (м, 1Н, тиазол), 6,81 (д, 1Н, 1=8,5 Гц, ЫН), 4,94-4,85 (м, 2Н, ХНСНСО и С1ССНО), 4,84 (д, 1Н, 1=6,0 Гц, (О=С^СНС=О)), 4,56 (дд, 1Н, 1=10,5, 7,0 Гц), 4,42 (м, 1Н, С1СН), 4,32 и 4,14 (АВф 1Н каждый), 3,70 (дд, 1Н, 1=10,9 Гц), 3,59 (м, 4Н), 2,57 (м, 4Н), 2,37 (с, 3Н, ЫМе), 1,8-1,6 (м, 3Н, СН₂СНМе₂), 1,03 (д, 3Н, 1=6,0 Гц, ί-Рг), 0,96 (д, 3Н, 1=6,5 Гц, ί-Рг);

¹⁹Р (376 МГц) -112,9 (м, основной ротамер, 84%) и -113,2 (м, второстепенный, 16%).

ЬСМ8: моноизотопная молярная масса 577,4 Эа; Е8⁺=578,4 (М+Н)⁺, 596,5 [М+Н₂О+Н]⁺.

- 22 017395

Пример 11.

Альтернативный строительный блок Р3/Р2

Стадия а). Изопропиловый эфир (8)-2-[(8)-1-(4-бромфенил)-2,2,2-трифторэтиламино]-4метилпентановой кислоты (11а)

К перемешиваемому раствору (8)-2-[(8)-1-(4-бромфенил)-2,2,2-трифторэтиламино]-4метилпентановой кислоты, полученной, как показано в Ь1, С.8. е! а1. Вюогд. Мей. Скет. Ьей. 2006, 16, 1985 (1,80 г, 4,9 ммоль) в изопропиловом спирте (100 мл) добавляют концентрированную серную кислоту (2 мл). Полученный раствор нагревают при температуре 80°С в течение 4 ч. Реакционной смеси дают возможность остыть и затем концентрируют в вакууме. Полученное масло диспергируют в СН2С12 (100 мл), промывают насыщенным раствором NаНСО₃ (2x50 мл), сушат (Мд8О₄) и концентрируют в вакууме, что дает на выходе указанное в заголовке соединение в виде масла коричневого цвета (1,77 г, 88%).

М8 [М+Н] 412.

Стадия Ь). Изопропиловый эфир (8)-4-метил-2-{(8)-2,2,2-трифтор-1-[4-(4,4,5,5тетраметил[1,3,2]диоксоборолан-2-ил)фенил]этиламино}пентановой кислоты (11Ь)

К перемешиваемому раствору бромпроизводного 1к (2,2 г, 5,36 ммоль) в ДМФА (30 мл) добавляют бис-(пинаколато)бор (2,0 г, 8,04 ммоль), ацетат калия (1,6 г, 16,1 ммоль) и хлорид [1,1'-бис-(дифенилфосфино)ферроцен]палладия(11) 1:1 комплекс с СН₂С1₂ (0,438 г, 0,54 ммоль). Полученный раствор герметизируют в трубке и нагревают при микроволновом облучении до температуры 160°С в течение 20 мин. Реакционной смеси дают возможность остыть до комнатной температуры и затем фильтруют через короткую колонку с силикагелем, элюируя этилацетатом (500 мл). Полученный раствор концентрируют в вакууме и сырой продукт очищают с помощью С18 колоночной хроматографии с обращенной фазой (Н₂О:МеСК 50-100% градиент), что дает на выходе указанное в заголовке соединение в виде масла коричневого цвета (0,920 г, 38%).

М8 [М+Н] 458.

Стадия с). Изопропиловый эфир (8)-4-метил-2-((8)-2,2,2-трифтор-1-{4-[2-(4-метилпиперазин-1ил)тиазол-4-ил]фенил}этиламино)пентановой кислоты (11с)

К перемешиваемому раствору бороланового производного 1к (0,72 г, 1,57 ммоль) в ДМФА:Н₂О (1:1, 20 мл) добавляют хлорид 1-(4-бромтиазол-2-ил)-4-метилпиперазина (0,5 г, 1,89 ммоль), карбонат натрия (0,2 г 1,89 ммоль) и [1,1'-бис-(дифенилфосфино)ферроцен]палладия(11) 1:1 комплекс с СН₂С1₂ (0,129 г, 0,16 ммоль). Полученный раствор герметизируют в трубке и нагревают при микроволновом облучении до температуры 160°С в течение 20 мин. Реакционной смеси дают возможность остыть и затем разбавляют СН₂С1₂ (100 мл). Органическую фазу разделяют, сушат (Мд8О₄) и концентрируют в вакууме. Сырой продукт очищают с помощью колоночной флэш-хроматографии (этилацетат :МеОН, 9:1), чтобы получить на выходе указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества темно-красного цвета (0,150 г, 13%).

М8 [М+Н] 513.

Время задержки 4,0 мин 50-97 10 мМ (NН₃)₂СО₃:МеСN 6 мин градиент С12 обращенная фаза.

- 23 017395

Стадия й). Гидрохлорид (8)-4-метил-2-((8)-2,2,2-трифтор-1-{4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4ил]фенил}этиламино)пентановой кислоты (11й)

К перемешиваемой смеси 2 М раствора соляной кислоты и диоксана (1:1, 10 мл) добавляют изопропиловый эфир (8)-4-метил-2-((8)-2,2,2-трифтор-1-{4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4ил]фенил}этиламино)пентановой кислоты (0,15 г, 0,29 ммоль), полученный, как описано у Ра1тег е1 а1. в 1. Мей. Сйет. 2005, 48, 7520-7534. Раствор нагревают в течение 20 ч при температуре 100°С и затем концентрируют в вакууме, что дает указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества темнокоричневого цвета (0,14 г, 98%), которое может быть связано со строительным блоком Р1 и кетоном, регенерированием с помощью любого из способов, описанных выше, как правило, без дополнительной очистки.

М8 М-Н 469.

Пример 11 А. Альтернативный строительный блок Р3.

1. АсОН, бром, комнатная температура, 2 ч, 55% выход; ίί. КР, ацетонитрил, 18-краун эфир-6, 90°С, 16 ч, 31% выход; ίϊϊ. АсОН, бром, 45°С, 4 ч, 100% выход; ίν. амид 4-метилпиперазин-1-карботиокислоты, Δ, 2 ч, 74% выход; ЬЮН, комнатная температура, 16 ч, 100% выход.

Доступность исходных продуктов.

Метил-4-ацетилбензоат, доступный от А1йпсй; амид 4-метилпиперазин-1-карботиокислоты - 11 поставщики находятся в 8с1Ртйег (например, Сйет Риг Ргойис18 Ый в Германии).

Стадия а). Метиловый эфир 4-(2-бромацетил)бензойной кислоты

К раствору метилового эфира 4-ацетилбензойной кислоты (8,4 ммоль) в уксусной кислоте (20 мл) добавляют бром (8,4 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч, в течение которых красный цвет исчезает и образуется осадок грязно-белого цвета. Продукт собирают фильтрованием и промывают холодным раствором метанол/вода (200 мл 1:1), что дает на выходе порошок белого цвета (55%).

Ή ЯМР (400 МГц, СОС1₃): 3,98 (3Н, с), 4,20 (2Н, с), 8,02 (2Н, д, 1=8 Гц), 8,18 (2Н, д, 1=8 Гц).

Стадия й). Метиловый эфир 4-(2-фторацетил)бензойной кислоты

К суспензии фторида калия (3,11 ммоль) в ацетонитриле (1 мл) добавляют 18-краун эфир-6 (0,1 ммоль) и полученную реакционную смесь нагревают при температуре 90°С в течение 30 мин. Добавляют 4-(2-бромацетил)бензойную кислоту (1,56 ммоль) и полученную реакционную смесь нагревают при температуре 90°С в течение 16 ч. Реакционную смесь разбавляют водой (10 мл) и экстрагируют этилацетатом (3x20 мл). Продукт очищают на силикагеле, элюируя 5-15% этилацетат в изогексане, что дает на выходе при концентрации в вакууме требуемые фракции указанного в заголовке продукта, в виде твердого вещества белого цвета (31%).

Ή ЯМР (400 МГц, СОС1₃): 3,98 (3Н, с), 5,55 (2Н, д, 1=50 Гц), 7,95 (2Н, д, 1=8 Гц), 8,18 (2Н, д, 1=8 Гц).

- 24 017395

Стадия с). Метиловый эфир 4-(2-бром-2-фторацетил)бензойной кислоты

К суспензии 4-(2-фторацетил)бензойной кислоты (1,19 ммоль) в уксусной кислоте (5 мл) добавляют бром (1,19 ммоль). Реакционную смесь нагревают при температуре 45°С в течение 4 ч, в течение которых образуется раствор зеленого цвета. Реакционную смесь концентрируют в вакууме и отгоняют азео тропно дважды с толуолом, что дает на выходе указанное в заголовке соединение в виде твердого вещества зеленого цвета (100%). Продукт используют сырым на следующей стадии.

¹Н ЯМР (400 МГц, СОС1₃): 3,98 (3Н, с), 7,04 (1Н, с), 8,05-8,10 (4Н, м).

Стадия ά). Метиловый эфир 4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензойной кислоты

Метиловый эфир 4-(2-бром-2-фторацетил)бензойной кислоты (1,18 ммоль) и амид 4-метилпиперазин-1-карботиокислоты (1,18 ммоль) растворяют в этаноле (10 мл). Реакционную смесь нагревают при температуре кипения с обратным холодильником в течение 2 ч. Затем ее охлаждают до комнатной температуры, вызывая выпадение в осадок продукта. Продукт собирают фильтрованием и промывают холодным этанолом. Продукт подвергают обработке водным раствором гидрокарбоната натрия, что дает на выходе указанное в заголовке соединение в виде бесцветного масла (74%).

М8 (Е8⁺) 337 (М+Н, 100%).

Стадия ί). Дигидрохлорид 4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензойной кислоты

К раствору метилового эфира 4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензойной кислоты (0,43 ммоль) в смеси тетрагидрофуран/вода (2,5 мл, 4:1) добавляют гидроксид лития (0,5 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 16 ч. Затем ее концентрируют в вакууме и добавляют соляную кислоту (2н. раствор, 3 мл), вызывая выпадение продукта в осадок в виде твердого вещества белого цвета. Продукт собирают фильтрованием, что дает на выходе указанный в заголовке продукт в виде твердого вещества белого цвета (79%).

М8 (Е8⁺) 322 (М+Н, 100%).

Пример 12.

N-[1 -(6-Хлор-3 -оксогексагидрофуро [3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3 -метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4метилпиперазин-1-ил)тиазол-4 -ил] бензамид

Стадия а). Бензиловый эфир 6-бензилокси-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбоновой кислоты (12а)

Периодинан Десс-Мартина (12,5 г, 30 ммоль) растворяют в ЭСМ (250 мл). К перемешиваемому раствору соединения 10, полученного, как описано в νΟ 07/066180 (7,4 г, 20 ммоль) в ЭСМ (50 мл), добавляют окислитель при комнатной температуре в атмосфере азота в течение 45 мин. Когда реакция, как полагают, окончательно закончится в соответствии с ТСХ, добавляют 10% водный раствор №₂8₂О₃

- 25 017395 (200 мл) и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение еще 15 мин. Двухфазную систему переносят в делительную колбу и экстрагируют дважды ЕЮАс (200 и 100 мл соответственно). Объединенные органические фазы промывают один раз насыщенным водным раствором ЫаНСО₃ (100 мл) и рассолом (100 мл), сушат над Ыа₂8О₄, фильтруют и растворитель упаривают в вакууме, получая на выходе сырой продукт 2 в виде прозрачного масла (7,69 г).

Ε8Ι⁺, т/ζ: 368 (М⁺+1).

Стадия Ь). Бензиловый карбоновой кислоты (12Ь) эфир 6-бензилокси-3,3-диметоксигексагидрофуро [3,2-Ь]пиррол-4-

- о о—

Соединение 12а (7,6 г) растворяют в сухом метаноле (100 мл). Добавляют триметилортоформиат (30 мл) и рТкОН (0,2 г) при комнатной температуре в атмосфере азота. Смесь нагревают при температуре 60°С в течение 8 ч. Когда реакция, как определяют в соответствии с ТСХ, окончательно закончится, реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры и концентрируют в вакууме. Сырой продукт очищают с помощью хроматографической колонки с силикагелем, элюируя смесью этилацетат-гептан (1:4), что дает после концентрации в вакууме кеталь 12Ь в виде прозрачного масла (5,9 г, 71% после 2 стадий).

Ε8Ι⁺, т/ζ: 382 (М⁺ -ОМе).

Стадия с). трет-Бутиловый эфир (3а8,6К,6а8)-6-гидрокси-3,3-диметоксигексагидрофуро[3,2Ь]пиррол-4-карбоновой кислоты (12с)

Раствор соединения 12Ь (2,5 г, 6,4 ммоль) в метаноле (60 мл) и Рй(ОН)₂ (0,7 г) перемешивают при комнатной температуре в атмосфере водорода в течение 48 ч. Смесь фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток (2,8 г, 14,8 ммоль) растворяют в 75 мл смеси диоксан/вода (2:1). Добавляют по каплям 10% раствор Ыа₂СО₃ (25 мл) до значения рН, равного 9-9,5. Смесь охлаждают до температуры 0°С на бане воды со льдом и добавляют одной порцией Вос ангидрид. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи и рН смеси поддерживают при значении, равном 9-9,5, путем введения дополнительного количества 10% раствора Ыа₂СО₃, если необходимо. Смесь фильтруют и растворитель удаляют в вакууме. Водную смесь экстрагируют 3x100 мл ЕЮАс, объединенные органические фазы промывают 100 мл воды и 100 мл рассола, сушат над Ыа₂8О₄, фильтруют и растворитель упаривают в вакууме, что дает 3,79 г карбамата в виде прозрачного масла (89%).

Ε8Ι⁺, т/ζ: 312 (М⁺+Ыа).

Стадия й). Бензиловый эфир (3а8,6К,6а8)-6-гидрокси-3,3-диметоксигексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4карбоновой кислоты (12й) он

о о

К перемешиваемому раствору соединения 12с (3,8 г, 13,13 ммоль) в СН₂С1₂ (100 мл) добавляют 2 М раствор НС1 в МеОН (50 мл). Полученный раствор перемешивают в течение ночи и затем концентрируют в вакууме и отгоняют азеотропно с толуолом (3x100 мл). Сырой остаток растворяют в СН₂С1₂ (100 мл), охлаждают до температуры 0°С и добавляют пиридин (1071 мкл, 13,13 ммоль), а затем по каплям добавляют ί,'όζΟ (1875 мкл, 13,13 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 2 ч, затем промывают 2 М раствором НС1 (2x50 мл), насыщенным раствором ЫаНСО₃ (2x50 мл), сушат (Мд8О₄) и концентрируют. Остаток очищают с помощью колоночной флэшхроматографии (5-100% изогексанНЮАс). что дает указанное в заголовке соединение в виде прозрачного масла (2510 мг, 59%).

М8 М+Н 324.

- 26 017395

Стадия е). Бензиловый эфир (3а8,6В,6а8)-6-метансульфонилокси-3,3-диметоксигексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбоновой кислоты (12е)

О о

К перемешиваемому раствору соединения 126 (500 мг, 1,55 ммоль) в СН₂С1₂ (20 мл) добавляют триэтиламин (332 мкл, 2,32 ммоль) и мезилхлорид (266 мг, 2,32 ммоль). После перемешивания в течение 30 мин реакционную смесь промывают насыщенным раствором №1НСО₃ (1x20 мл), 2 М НС1 (1x20 мл), сушат Мд8О₄ и концентрируют, что дает указанное в заголовке соединение (655 мг, 99%) в виде масла желтого цвета.

М8 М+Н 402.

Стадия ί). Бензиловый эфир (3а8,68,6а8)-6-хлор-3,3-диметоксигексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4карбоновой кислоты (12ί)

С1

о о

К перемешиваемому раствору соединения 12е (550 мг, 1,37 ммоль) в ДМФА (30 мл) добавляют хлорид лития (721 мг, 13,7 ммоль). После перемешивания в течение 120 мин при температуре 120°С реакционную смесь концентрируют в вакууме. Остаток разбавляют СН₂С1₂ (50 мл), промывают водой (1x20 мл), сушат Мд8О₄ и концентрируют в вакууме. Остаток очищают с помощью колоночной флэшхроматографии (5-66% изогексан:ЕйОАс), что дает указанное в заголовке соединение (330 мг, 72%) в виде масла желтого цвета.

М8 М+Н 342, 344.

Стадия д). трет-Бутиловый эфир [2-(6-хлор-3,3-диметоксигексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4карбонил)-3-метилбутил]карбоновой кислоты (12д).

С бензилового эфира 6-хлор-3,3-диметоксигексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбоновой кислоты (68 мг, 0,20 ммоль) снимают защиту путем каталитического гидрирования, используя 10% палладий-наугле и водород при атмосферном давлении. После перемешивания в течение 2 ч суспензию фильтруют через целит и фильтрат упаривают на роторе, что дает сырой 6-хлор-3,3-диметоксигексагидрофуро[3,2Ь]пиррол, который связывают с Ν-Вос-лейцином, используя НАТи по способу, аналогичному тому, который описан в примере 2, что дает указанное в заголовке соединение (78 мг, 93%).

М8 т/ζ: 421,2 (М+Н)⁺.

Стадия 11). №[2-(6-Хлор-3,3-диметоксигексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4[5-фтор-2- (4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамид (12 1).

С трет-бутилового эфира [2-(6-хлор-3,3-диметоксигексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3метилбутил] карбаминовой кислоты (78 мг, 0,185 ммоль) снимают защиту в кислотных условиях (ацетилхлорид в метаноле), как описано в примере 4, и затем промежуточный сырой гидрохлорид пиррола связывают с НС1 солью 4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензойной кислоты, используя НАТи условия, как описано в примере 2, что дает указанное в заголовке соединение (98 мг, 85%).

М8 т/ζ: 624,2 (М+Н)⁺.

Ή-ЯМР (400 МГц, СЭСЕ): 7,91 (д, 2Н), 7,81 (д, 2Н), 6,85 (д, 1Н), 5,00 (м, 1Н), 4,75 (д, 1Н), 4,60 (м, 1Н), 4,50 (дт, 1Н), 4,12 (д, 1Н), 3,92 (д, 1Н), 3,75 (м, 1Н), 3,49 (м, 4Н), 3,48 (м, 1Н), 3,45 (с, 3Н), 3,28 (с, 3Н), 2,62 (м, 4Н), 2,42 (с, 3Н), 1,85 (м, 1Н), 1,70 (м, 2Н), 1,05 (д, 3Н), 1,00 (д, 3Н).

Стадия ί). №[1-(6-Хлор-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-фтор2-(4 -метилпиперазин-1 -ил)тиазол-4 -ил] бензамид (121).

№[2-(6-Хлор-3,3-диметоксигексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-фтор-2(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамид (98 мг, 0,157 ммоль) гидролизуют в кислотных условиях, как описано в примере 5. Остаток очищают с помощью препаративной НРЬС хроматографии (С8, градиент 10-90% МеСМН₂О), что дает чистое указанное в заголовке соединение 41,8 мг (46%), в виде смеси 2 ротамеров, оба из которых являются кетонами (27%) [М8 т/ζ: 578,1 (М+Н)⁺], и гидрат (73%) [М8 т/ζ: 596,1 (М+Н2О+Н)⁺].

- 27 017395

Пример 13.

6-Хлор-4-{4-метил-2-[2,2,2-трифтор-1-(4'-метансульфонилбифенил-4-ил)этиламино]пентаноил}- тетрагидрофуро [3,2-Ь] пиррол-3 -он

Стадия а). 1 -(6-Хлор-3,3-диметоксигексагидрофуро [3,2-Ь]пиррол-4-ил)-4-метил-2-[2,2,2-трифтор-1 (4'-метансульфонилбифенил-4-ил)этиламино]пентан-1-он (13а).

С бензилового эфира 6-хлор-3,3-диметоксигексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбоновой кислоты (55 мг, 0,16 ммоль) снимают защиту путем каталитического гидрирования, используя 10% палладий-наугле и водород при атмосферном давлении. После перемешивания в течение 2 ч суспензию фильтруют через целит и фильтрат концентрируют. Затем полученный амин связывают с 4-метил-2-[2,2,2-трифтор1-(4'-метансульфонилбифенил-4-ил)этиламино]пентановой кислотой (76 мг, 0,17 ммоль), полученной, как описано в ЭДО 07/006716, используя НАТИ условия, как описано в примере 2, что дает указанное в заголовке соединение (101 мг, 50%).

Стадия Ь).

Соединение 13а (47 мг, 0,07 ммоль) гидролизуют в кислотных условиях, как описано в примере 5. Полученный остаток очищают с помощью колоночной хроматографии (ЕЮАс-петролейный эфир 3:2), что дает чистое указанное в заголовке соединение (26 мг).

М8 т/ζ: 586,4.

Пример 14.

6-Хлор-4-[4-метил-2-(2,2,2-трифтор-1-{4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]фенил}этиламино)пентаноил]тетрагидрофуро [3,2-Ь] пиррол-3 -он

Стадия а). 1 -(6-Хлор-3,3-диметоксигексагидрофуро [3,2-Ь]пиррол-4-ил)-4-метил-2-(2,2,2-трифтор-1 {4-[2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил] фенил}этиламино)пентан-1 -он (14а).

Бензильную группу бензилового эфира 6-хлор-3,3-диметоксигексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4карбоновой кислоты (35 мг, 0,10 ммоль) удаляют путем каталитического гидрирования, используя 10% палладий-на-угле и водород при атмосферном давлении. После перемешивания в течение 2 ч суспензию фильтруют через целит и фильтрат концентрируют. Затем полученный амин связывают с кислотой примера 11, стадия й (42 мг, 0,09 ммоль), используя НАТИ условия, как описано в примере 2, что дает указанное в заголовке соединение (45 мг).

Стадия Ь).

Соединение 14а (47 мг, 0,07 ммоль) гидролизуют в кислотных условиях, как описано в примере 5. Полученный остаток очищают с помощью колоночной хроматографии (СН₂С1₂-ацетон 2:1 + 0,05% ΌΙΕΛ). что дает чистое указанное в заголовке соединение (20 мг).

Пример 15. Альтернативный синтез строительного блока Р1

Стадия ί).

Соединение со стадии д) примера 1 оптимизируют следующим образом. Смесь, указанную выше, включающую моно- и бициклические амины (приблизительно 1,8 ммоль) из первой реакции стадии д), растворяют в этилацетате (25 мл) и добавляют триэтиламин (1,5 мл). Раствор нагревают при температуре кипения с обратным холодильником в течение 3 ч, контролируют с помощью ЬС-М8, затем вводят дополнительное количество триэтиламина (1,5 мл) и полученную реакционную смесь нагревают при температуре кипения с обратным холодильником в течение еще 15 ч. Затем реакционную смесь охлаждают до температуры приблизительно 0°С и добавляют одной порцией бензилхлорформиат (0,38 мл, 2,7 ммоль), затем дают возможность достичь комнатной температуры. Ход реакции контролируют с помощью ТСХ (4:1 и 3:2 смесь гексан-этилацетат, наблюдают с помощью УФ-излучения и АМСокрашивания) и через 4 ч реакционную смесь разбавляют этилацетатом (15 мл), промывают последовательно водным раствором 10% лимонной кислоты (3x25 мл) и насыщенным водным раствором гидрокарбоната натрия (3x25 мл), затем сушат (сульфат натрия), фильтруют и концентрируют. Флэш

- 28 017395 хроматография остатка (ступенчатый градиент элюирования, этилацетат в гексане, 10-20%), последующая концентрация соответствующих фракций и высушивание в вакууме в течение ночи дает продукт в виде бесцветной пены (0,57 г, 1,06 ммоль).

¹Н ЯМР данные (400 МГЦ, 298 К, СПС1₃): δ 1,02 и 1,10 (2 с, 9Н, С(СН₃)₃), 3,13 (м, 1Н, СНН), 3,59 и 3,80 (2 м, 2х1Н, СН₂), 3,99-4,15 (м, 2Н, СНН и СН), 4,34, 4,42, 4,46 и 4,68 (4 ушир.с, 2Н, основной и второстепенный СН), 4,84 (м, 1Н, СН), 4,92-5,16 (м, 2Н, СН₂), 7,11-7,80 (м, 15Н, АгН).

Стадия ίί).

К перемешиваемому раствору продукта со стадии ί) (0,56 г, 1,05 ммоль) в ТГФ (6 мл) добавляют 1 М раствор фторида тетрабутиламмония в ТГФ (1,26 мл) и перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Затем реакционную смесь концентрируют на силикагеле и колоночная флэшхроматография остатка (ступенчатый градиент элюирования, этилацетат в гексане, 50-100%), последующая концентрация соответствующих фракций и высушивание в вакууме в течение ночи дают продукт в виде бесцветного сиропа (0,27 г, 0,91 ммоль, 87%).

'Н ЯМР (400 МГц, 298 К, СПС1₃): δ 2,22 и 3,00 (2д, 1Н, 1_ОН,₃=3,5 Гц, ОН основной и второстепенный), 3,30 (м, 1Н, СНН), 3,89 (м, 1Н, СНН), 4,00-4,16 (м, 3Н, 2СНН и СН), 4,24 (д, 1Н, СН), 4,43 и 4,54 (2 ушир.с, 1Н, Н-3 основной и второстепенный), 4,70 (м, 1Н, СН), 5,08-5,23 (м, 2Н, ОСН₂Рй), 7,32-7,40 (м, 5Н, Аг-Н).

Стадия ίίί).

К перемешиваемому раствору продукта со стадии ίί) (0,26 г, 0,88 ммоль) в дихлорметане (6 мл) добавляют периодинан Десс-Мартина (0,41 г, 0,97 ммоль) при комнатной температуре. Ход реакции контролируют с помощью ТСХ (3:2 смесь этилацетат-гексан, наблюдают с помощью окрашивания АМС) и через 3,5 ч реакционную смесь разбавляют дихлорметаном (20 мл), промывают 1:1 смесью насыщенный водный раствор гидрокарбоната натрия/10% водный раствор тиосульфата натрия (3x20 мл), затем сушат (сульфат натрия), фильтруют и концентрируют. Остаток повторно растворяют в метаноле (5 мл) и добавляют триметилортоформиат (1,25 мл) и моногидрат п-толуолсульфоновой кислоты (0,03 г, 0,16 ммоль). Реакционную смесь оставляют при температуре 60°С на ночь, затем добавляют диизопропилэтиламин (0,5 мл) и полученную реакционную смесь концентрируют. Флэш-хроматография (ступенчатый градиент элюирования, этилацетат в гексане, 20-40%) остатка, последующая концентрация соответствующих фракций и высушивание в вакууме в течение 2 дней дают продукт в виде бесцветного густого сиропа (0,27 г, 0,79 ммоль, 89%).

'Н ЯМР (400 МГц, 298 К, СЭС1₃): δ 3,08-3,47 (м, 7Н, 2хОСН₃ основной и второстепенный и СНН), 3,80 (м, 2Н, СН₂), 3,98 (ушир.с, 1Н, СН), 4,25 (м, 1Н, СНН), 4,45 (м, 1Н, СН), 4,60 (т, 1Н, СН), 5,04-5,26 (м, 2Н, СН₂), 7,29-7,42 (м, 5Н, Аг-Н).

Сравнительный пример 1. №[(8)-1-((3а8,68,6а8)-(6-Хлор-3-оксо)гексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4[2-(4-метилпиперазин-1 -ил)тиазол-4-ил] бензамид

Хлорсодержащий строительный блок 6-8 получают, как показано на схеме 4.

- 29 017395

Схема 5

Соединение 10 в ОТО 05/06Θ180

1. Периодинан Десс-Мартина, БСМ, 2 ч, комнатная температура; п. Триметилортоформиат, рТкОН, МеОН, 8 ч, 60°С; ίίί. Рб(ОН)₂, Н₂, МеОН, 48 ч, комнатная температура; ίν. ВОС₂О, 10% Ыа₂СО₃, 16 ч, от 0°С до комнатной температуры; ν. НС1, СН₂СН₂/Ру, СВ/С1; νΐ. СН₂СН₂/Е1₃Ы МкС1; νΐΐ ДМФА, ЫС1.

Затем указанный строительный блок подвергают снятию Ν-защиты и получают через последующие стадии, как описано в примере 5, №[(8)-1-((3а8,6а8)-(6Я-хлор-3-оксо)гексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4карбонил)-3-метилбутил] -4-[2-(4-метилпиперазин-1 -ил)тиазол-4-ил]бензамид.

Сравнительный пример 2. №[((18)-1-((3а8,6аЯ)-3-оксо)гексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4-[2-(4метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамид

Строительный блок Р1 синтезируют, как описано в XVО 02/05720, связывают с Ν-защищенным Ь-лейцином и строительным блоком Р3 примера 3, указанного выше, и окисляют до кетона, как показано в примере 4.

Сравнительный пример 3. №[((18)-1-((3а8,6аЯ)-3-оксо)гексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4-[2-(4метилпиперазин-1-ил)тиазол-4 -ил] бензамид

Синтез соединения по указанному сравнительному примеру проводят аналогично примеру 9 \ν() 05/66180.

Биологические примеры.

Определение протеолитической, каталитической активности катепсина К.

Традиционные исследования для катепсина К проводят, используя человеческий рекомбинантный фермент, такой как описанный в РОВ.

ГО ВС016058 к!аибатб; тКПЛ; НИМ; 1699 ВР.

ΌΕ Ното кар1еик саШеркт К (русиобукок1ок1к), ιηΚΝΛ ^ΌΝΆ с1оие МСС:23107).

ЯХ МЕОЫЫЕ; ЯХ РИВМЕО; 12477932.

ОЯ Я/РО: 1ЯЛЬр962С1234.

1)Я δνΐδδ-РЯОТ; Р43235.

- 30 017395

Рекомбинантный катепсин К может быть экспрессирован во множестве коммерчески доступных систем экспрессии, включая системы Е.сой, Р1сЫа и Васи1оу1шк. Очищенный фермент активируют путем удаления пропоследовательности стандартными методами.

Стандартные условия исследования для определения кинетических констант используют фторорганический пептидный субстрат, обычно Н-О-Л1а-Ьеи-Ьу8-ЛМС, и определяют либо в 100 мМ Мек/Тпк, рН 7,0 содержащем 1 мМ ЭДТА и 10 мМ 2-меркаптоэтанола, или 100 мМ натрия фосфата, 1 мМ ЭДТА, 0,1% РЕС4000 рН 6,5 или 100 мМ натрия ацетата, рН 5,5 содержащем 5 мМ ЭДТА и 20 мМ цистеина, в каждом случае по необходимости с 1 М ИТТ в качестве стабилизатора. Используемая концентрация фермента составляет 5 нМ. Исходный раствор субстрата изготавливают в концентрации 10 мМ в ДМСО. Тесты проводят при фиксированной концентрации субстрата 60 мкМ и детализированные кинетические исследования с двойными разведениями субстрата от 250 мкМ. Общую концентрацию ДМСО в исследовании сохраняют ниже 3%. Все исследования проводят при температуре окружающей среды. Флуоресценцию продукта (длина волны возбуждения 390 нм, эмиссии 460 нм) отслеживают с помощью планшетного считывающего устройства ЬаЬкуйешк Ниотоккаи Аксеп!. Кривые накопления продукта строят через 15 мин после получения АМС продукта.

Определения К₁ катепсина 8.

В исследовании применяется человеческий катепсин 8, экспрессированный бакуловирусом, и флуоресцентным субстратом Ьос-Уа1-Ееи-Еук-АМС, доступным в Васйеш в формате 384-луночного планшета, в котором 7 тестируемых соединений могут быть протестированы параллельно с положительным контролем, содержащим известный ингибитор катепсина 8 в качестве препарата сравнения.

Разведения субстрата.

280 мкл/лунка 12,5% ДМСО добавляют в ряды В-Н двух колонок полипропиленового планшета с 96 глубокими лунками. 70 мкл/лунка субстрата добавляют к ряду А. 2x250 мкл/лунка буфера исследования (100 мМ натрия фосфата, 100 мМ №1С1. рН 6,5) добавляют к ряду А, перемешивают и дважды разбавляют по планшету до ряда Н.

Разведения ингибитора.

100 мкл/лунка буфера исследования добавляют в колонки 2-5 и 7-12 4 рядов 96-луночного полипропиленового планшета с У-образным дном. 200 мкл/лунка буфера исследования добавляют в колонки 1 и 6.

Первое тестируемое соединение, приготовленное в ДМСО, добавляют в колонку 1 верхнего ряда, обычно в объеме, обеспечивающем 10-30-кратную К₁ от приблизительно определенной изначально. Приблизительная К₁ подсчитывается по предварительному тесту, в котором 10 мкл/лунка 1 мМ Ьос-УЕКАМС (разведение 1/10 10 мМ исходного раствора в ДМСО, разведенного в буфере исследования) распределяют по рядам В-Н и 20 мкл/лунка в ряд А 96-луночного планшета М1сгоДиог™. 2 мкл каждого 10 мМ тестируемого соединения добавляют в отдельную лунку ряда А, колонки 1-10. Добавляют 90 мкл буфера исследования, содержащего 1 мМ ИТТ и 2 нМ катепсина 8 в каждую лунку рядов В-Н, и 180 мкл в ряд А. Смешивают ряд А, используя многоканальную пипетку, и дважды разбавляют до ряда С. Смешивают ряд Н и считывают на флуоресцентном спектрофотометре. Результаты считывания аппроксимируют под уравнение конкурентного ингибирования, принимая 8=100 мкМ и К_М=100 мкМ, чтобы получить приблизительную К₁, до максимума 100 мкМ.

Второе тестируемое соединение добавляют в колонку 6 верхнего ряда, третье - в колонку 1 второго ряда и т.д. Добавляют 1 мкл вещества сравнения в колонку 6 нижнего ряда. Смешивают колонку 1 и дважды разбавляют до колонки 5. Смешивают колонку 6 и дважды разбавляют до колонки 10.

Используя 8-канальную многошаговую пипетку, с установкой 5x10 мкл, распределяют 10 мкл/лунка субстрата в 384-луночный планшет исследования. Распределяют первую колонку планшета с разведениями субстрата во все колонки планшета исследования, начиная с ряда А. Шаг кончиков многоканальной пипетки будет корректно пропускать промежуточные ряды. Распределяют вторую колонку во все колонки, начиная с ряда В.

Используя 12-канальную многошаговую пипетку, с установкой 4x10 мкл, распределяют 10 мкл/лунка ингибитора в 384-луночный планшет. Распределяют первый ряд планшета с разведениями ингибитора в промежуточные ряды планшета исследования, начиная с ряда А1. Шаг кончиков многоканальной пипетки будет корректно пропускать промежуточные ряды. Сходным образом распределяют второй, третий и четвертый ряды в промежуточные ряды и колонки, начиная с А2, В1 и В2 соответственно.

Смешивают 20 мл буфера исследования и 20 мкл ИТТ. Добавляют необходимое количество катепсина 8, чтобы получить конечную концентрацию 2 нМ.

Используя распределитель, такой как МиШбтор 384, добавляют 30 мкл/лунка во все лунки планшета исследования и считывают во флуоресцентном спектрофотометре, таком как Аксеп!.

Считывания флуоресценции (длина волны возбуждения и эмиссии 390 и 460 нм соответственно, устанавливают с помощью полосно-пропускающих фильтров), отражающие степень ферментативного расщепления флуоресцентного субстрата, несмотря на ингибитор, аппроксимируют по линейной скорости для каждой лунки.

- 31 017395

Аппроксимированные скорости для всех лунок для каждого ингибитора подбирают по уравнению конкурентного ингибирования, используя 81дтаР1о1 2000, чтобы определить значения V, К_т и К₁.

Определение К₁ для катепсина Ь.

Вышеуказанная процедура со следующими изменениями используется для определения К₁ для катепсина Ь.

Фермент является коммерчески доступным человеческим катепсином Ь (например, Са1Ыосйет). Субстрат является Н-О^а1-Ьеи-Ьу5-АМС, доступным в Вайсет. Буфер исследования - 100 мМ натрия ацетата, 1 мМ ЕЭТА, рН 5,5. Исходный раствор ДМСО (10 мМ в 100% ДМСО) разводят до 10% в буфере исследования. Фермент приготавливают в концентрации 5 нМ в буфере исследования с добавлением 1 мМ дитиотреитола непосредственно перед применением. 2 мкл 10 мМ ингибитора, сделанные в 100% ДМСО, распределяют в ряд А. 10 мкл 50 мкМ субстрата (=1/200 разведение 10 мМ исходного раствора в ДМСО, разведенного в буфере исследования).

Исследования ингибирования.

Потенциальные ингибиторы подвергают скринингу с помощью вышеуказанного исследования с различными концентрациями тестируемого соединения. Реакции инициируют путем добавления фермента к забуференным растворам субстрата и ингибитора. Значения К подсчитывают согласно уравнению (1) га где ν₀ является скоростью реакции;

V является максимальной скоростью;

является концентрацией субстрата с константой Михаэлиса К_М;

I является концентрацией ингибитора.

Результаты представлены следующим образом:

А - ниже 50 нМ;

В - 50-500 нМ;

С - 501-1000 нМ;

Ό - 1001-5000 нМ;

Е - 5001-10000 нМ;

Р - выше 10000 нМ.

Таблица 1

Соединения формулы II являются, таким образом, мощными ингибиторами катепсина К и при этом избирательными среди очень схожих катепсинов 8 и Ь.

Показательные уровни из конкретных партий соединение/фермент/отбор пробы включают

- 32 017395

Пример	Κί для катепсина К	' - Κί-для катепсина 3	Κί для катепсина Ь
5	1, 6	7500	880
6	1, 5	4000	890
7	4,2	1700	1200
8	3,3	13000	2900
10	3', 4	- 4700	490
12	1,8	11000	1600

Метаболическая стабильность.

Соединения изобретения и указанные сравнительные примеры были протестированы на метаболическую стабильность в цитозольном исследовании, в котором соединения инкубируют с коммерчески доступными цитозольными фракциями гепатоцитов человека и исчезновение соединения отслеживают с помощью метода НРЬС или ЬС/М8. Собранные цитозольные фракции гепатоцитов человека с меньшей вероятностью представляют выпадающее значение, чем кровь отдельного индивидуума и могут храниться в замороженном виде в отличие от цельной крови. Таким образом, цитозольное исследование обеспечивает подходящую испытательную модель для стабильности соединения в среде ίη νίνο, такой как при контакте с цельной кровью.

Вкратце, тестируемые соединения (2 мкМ) инкубируют в собранном цитозоле печени человека (Хепо1ес11 ЬЬС Ьепеха И8, 1 мг/мл белка в 0,1 М фосфатного буфера, рН 7,4) при 37°С в течение 1 ч. Инкубацию запускают путем добавления 1 мМ кофактора ХЛЭРН. Синхронные образцы берут через 0, 20, 40 и 60 мин и краш-преципитируют путем добавления 3 объемов ледяного ацетонитрила. Образцы центрифугируют при пониженной температуре и надосадочную фракцию отделяют и анализируют с помощью ЬС-М8-М8.

Альтернативно, аналогичное исследование стабильности проводится на цельной крови человека или обезьяны.

Сравнительный пример 3 содержит эпимер с нижним положением атома Р компонента соединения Р1 νθ 0566180. Сравнительный пример 2 содержит предпочтительные компоненты соединения Р1 и Р2 \νϋ 02/057270 вместе с частью соединения Р3 в рамках настоящей формулы (которые находятся вне рамок νθ 02/057270). Сравнительный пример 1 показывает нижний С1 эпимер соединения примера 6.

Таблица 2

Пример		Ъ1/2/ минуты
Сравнительный пример 2	ОчА ° °	72
Сравнительный пример 3	>· I Р _____1 3 н о \ о «Ах А А з-^у	100-150
Сравнительный пример 1	А А о \ ζ γ— о ОЧдА ° °	24

- 33 017395

Пример	6	ГК	л	д н Г	С1 Дтф 1 О О	>300
Пример	5			д	С1	198
				о
					ΑγΥΜ
		Υ'Λ N	-О	Н	П н и о о
		Υ7Μ Υ
Пример	11				Д Р'	180
				О	ДгД
				V	гм
			М	н	о к д
		ДумД			О
Пример	12				Ч н	270
		/—Л З'-т' —Ν Ν—4
				ч
				_![	«М4
				о	Υ

Должно быть очевидно из сравнительного примера 2, что известное из уровня техники соединение Р1 в VΟ 02/057270 обеспечивает соединения с цитозольным периодом полувыведения чуть больше 1 ч. Соединение Р1 с нижним положением атома фтора, активно представленное в VΟ 05/66180, является несколько лучшим с периодом полувыведения более 1,5 ч. Тем не менее, замещение атома хлора на фтор в нижнем положении в VΟ 05/66180 драматически снижает стабильность, что иллюстрируется сравнением сравнительного примера 1 со сравнительным примером 3. Наоборот, эпимер с верхним положением атома хлора по изобретению (пример 6) предусматривает соединение с временем полувыведения, превышающим 5 ч. Сходным образом, с идентичными компонентами Р3 и Р2, сравнительный пример 2 и эпимер по изобретению с верхним расположением атома хлора (пример 5) ясно демонстрируют, что эпимер с верхним расположением атома хлора обеспечивает больший период полувыведения.

Проницаемость.

Этот пример измеряет перенос ингибиторов через клетки желудочно-кишечного тракта человека. Исследование использует хорошо известные клетки линии Сасо-2 с числом пассажей между 40 и 60.

Апикально-базолатеральный транспорт.

Обычно каждое соединение тестируют в 2-4 лунках. Базолатеральные и апикальные лунки содержат 1,5 и 0,4 мл транспортного буфера (ТВ) соответственно, и стандартная концентрация тестируемых веществ составляет 10 мкМ. Более того, все тестируемые растворы и буферы содержат 1% ДМСО. Перед экспериментом транспортные планшеты предварительно покрывают культуральной средой, содержащей 10% сыворотку, в течение 30 мин во избежание неспецифического связывания с пластиком. После 21-28 суток в культуре на фильтровальной основе клетки готовы к экспериментам на проницаемость.

Транспортный планшет № 1 содержит 3 ряда по 4 лунки в каждом. Ряд 1 обозначается отмывочный, ряд 2 - 30 мин и ряд 3 - 60 мин. Транспортный планшет № 2 содержит 3 ряда по 4 лунки в каждом, один обозначенный ряд 4 - 90 мин, ряд 5 - 120 мин и остальные ряды не обозначены.

Культуральную среду из апикальных лунок удаляют и включения переносят в отмывочный ряд (№ 1) в транспортном планшете (планшет № 1) из 2 планшетов без включений, которые уже приготовлены с 1,5 мл транспортного буфера (НВ88, 25 мМ НЕРЕ8, рН 7,4) в рядах 1-5. В А^В скрининге ТВ в базолатеральной лунке также содержит 1% альбумин бычьей сыворотки.

0,5 мл транспортного буфера (НВ88, 25 мМ МЕ8, рН 6,5) добавляют к включениям и монослои клеток уравновешивают в транспортной буферной системе в течение 30 мин при 37°С в полимиксном шейкере. После уравновешивания с буферной системой уровень трансэпителиального электрического сопротивления (ТЕЕК) измеряют в каждой лунке с помощью инструмента ЕУОМ скор 5Пск. Значения ТЕЕК обычно находятся в пределах от 400 до 1000 Ω на лунку (зависит от количества пассажей).

Транспортный буфер (ТВ, рН 6,5) удаляют и включение переносят в ряд 30 мин (№ 2) и свежие 425 мкл ТВ (рН 6,5), включающие тестируемое вещество, добавляют в апикальную (донорскую) лунку. Планшеты инкубируют в полимиксном шейкере при 37°С с низкой скоростью встряхивания приблизительно 150-300 об/мин.

- 34 017395

Через 30 мин инкубации в ряду 2 включения переносят в новые предварительно нагретые базолатеральные (акцепторные) лунки каждые 30 мин; ряд 3 (60 мин), 4 (90 мин) и 5 (120 мин).

мкл образцы берут из апикального раствора после ~2 мин и в конце эксперимента. Эти образцы представляют донорские образцы из начала и конца эксперимента.

300 мкл берут из базолатеральных (акцепторных) лунок в каждую запланированную временную точку и уровень ТЕЕК измеряют в конце эксперимента. Ко всем собранным образцам добавляют ацетонитрил до конечной концентрации 50% в образцах. Собранные образцы хранят при -20°С до анализа с помощью НРЬС или ЬС-М8.

Базолатерально-апикальный транспорт.

Обычно каждое соединение тестируют в 2-4 лунках. Базолатеральные и апикальные лунки содержат 1,55 и 0,4 мл ТВ соответственно, и стандартная концентрация тестируемых веществ составляет 10 мкМ. Более того, все тестируемые растворы и буферы содержат 1% ДМСО. Перед экспериментом транспортные планшеты предварительно покрывают культуральной средой, содержащей 10% сыворотку в течение 30 мин во избежание неспецифического связывания с пластиком.

Через 21-28 суток в культуре на фильтровальной основе клетки готовы для экспериментов на проницаемость. Культуральную среду из апикальных лунок удаляют и включения переносят в ряд отмывания (№ 1) в новый планшет без включений (транспортный планшет).

Транспортный планшет содержит 3 ряда по 4 лунки. Ряд 1 обозначают как отмывочный, и ряд 3 является экспериментальным рядом. Транспортный планшет предварительно приготавливают с 1,5 мл ТВ (рН 7,4) в отмывочном ряду № 1 и с 1,55 мл ТВ, включая тестируемое вещество, в экспериментальном ряду №3 (донорная сторона).

0,5 мл транспортного буфера (НВ88, 25 мМ МЕ8, рН 6,5) добавляют к включениям в ряду № 1 и монослои клеток уравновешивают в транспортной буферной системе в течение 30 мин, 37°С в полимиксном шейкере. После уравновешивания в буферной системе значение ТЕЕК измеряют в каждой лунке с помощью инструмента ЕУ0М скор зЕск.

Транспортный буфер (ТВ, рН 6,5) удаляют с апикальной стороны и включение переносят в ряд 3 и 400 мкл свежего ТВ, рН 6,5 добавляют к включениям. Через 30 мин 250 мкл забирают с апикальной (акцепторной) лунки и замещают свежим транспортным буфером. Затем 250-мкл образцы забирают и замещают свежим транспортным буфером каждые 30 мин до конца эксперимента через 120 мин, в итоге конечный уровень ТЕЕК измеряют в конце эксперимента. 25-мкл образцы забирают из базолатерального (донорного) компартмента через ~2 мин и в конце эксперимента. Эти образцы представляют донорные образцы из начала и конца эксперимента.

Ко всем собранным образцам добавляют ацетонитрил до конечной концентрации 50% в образцах. Собранные образцы хранят при -20°С до анализа с помощью НРЬС или ЬС-М8.

Подсчеты.

Определение кумулятивной поглощенной фракции, ЕА_сит, относительно времени. ЕА_сит подсчитывают по формуле ^РЛсит⁼ где С_К1 является концентрацией акцептора в конце интервала I и Сы является донорной концентрацией в начале интервала ί.

Линейное взаимоотношение должно быть получено.

Определение коэффициентов проницаемости (Р_арр, см/с) проводят по формуле ^РаРР~ (Л 6О>

где к - является скоростью транспорта (мин^-1), определенной как наклон, полученный путем линейной регрессии кумулятивной поглощенной фракции (ЕА_сит) как функции от времени (мин);

У_К является объемом в акцепторной камере (мл);

А является площадью фильтра (см²).

- 35 017395

Типичные характерные соединения.

Категории абсорбции у человека	Маркеры	% абсорбции у человека
ПАССИВНЫЙ ТРАНСПОРТ
Низкая (0-20%)	Маннит	16
	Метотрексат	20
Умеренная (21-75%)	Ацикловйр	30
Высокая (76-100%)	Пропанолол	90
	Кофеин	100
АКТИВНЫЙ ТРАНСПОРТ
Аминокислотный	Ь-фенилаланин	100
транспортер
АКТИВНЫЙ ПОТОК
ΡΟΡ-ΜϋΚΙ	Дигоксин ’ -'	30

Показательные результаты для соединений по изобретению в этом Сасо-2 исследовании включают уровни Рарр 5,2х10⁶ для соединения по примеру 10 и 10х10⁶ см/с для соединения по примеру 12. Соединения формулы 1В, включающие трифторметильную группу, такие как в примере 13, обычно имеют Рарр уровни в 2-5 раз выше.

Сокращения

ДМФА - диметилформамид;

ТВЭМ8 - трет-бутилдиметилсилил;

ТГФ - тетрагидрофуран;

ТСХ - тонкослойная хроматография;

ЭСМ - дихлорметан;

КТ - комнатная температура;

Ас - ацетил;

ОМАР - диметиламинопиридин;

ЕЮАс - этилацетат.

Все ссылки, относящиеся к данному изобретению, включая патенты и патентные заявки, включены в настоящее описание посредством ссылки в максимально полной степени.

На всем протяжении описания и последующей формулы изобретения, если контекст не требует иного, выражение включать и переменные, такие как включает и содержащий, будут понятны для обозначения включения установленного целого числа, стадии, группы целых чисел или группы стадий, но не исключения любого другого целого числа, стадии, группы целых чисел или группы стадий.

Claims (14)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Соединение формулы 11а

   На где К² представляет собой боковую цепь лейцина, циклогексилглицина или 4-фторлейцина;

   К³ представляет собой Н или Р;

   К⁴ представляет собой С1-С6-алкил;

   К⁵ представляет собой Н, метил или Р, или его фармацевтически приемлемая соль или Ν-оксид.
2. 2. Соединение по п.1, где К² представляет собой боковую цепь лейцина или 4-фторлейцина.
3. 3. Соединение по п.2, где К² представляет собой боковую цепь лейцина.
4. 4. Соединение по любому из пп.1-3, где К³ представляет собой фтор в мета-положении относительно бензильного амида.
5. 5. Соединение по любому из пп.1-3, где К³ представляет собой Н.
6. 6. Соединение по любому из пп.1-5, где К⁵ представляет собой фтор.
7. 7. Соединение по любому из пп.1-6, где К⁴ представляет собой метил.

   - 36 017395
8. 8. Соединение по п.1, выбранное из

   N-[1 -(6-хлор-3 -оксогексагидрофуро [3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3-фтор-3 -метилбутил]-4-[2-(4метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида;

   №[2-(6-хлор-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-ил)-1-циклогексил-2-оксоэтил]-4-[2-(4метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида;

   N-[1 -(6-хлор-3 -оксогексагидрофуро [3,2-Ь)]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4-[2-(4метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида;

   №[1-(6-хлор-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4-карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-метил-2-(4метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамида, или его фармацевтически приемлемая соль или Ν-оксид.
9. 9. Соединение по п.1, обозначенное как №[1-(6-хлор-3-оксогексагидрофуро[3,2-Ь]пиррол-4карбонил)-3-метилбутил]-4-[5-фтор-2-(4-метилпиперазин-1-ил)тиазол-4-ил]бензамид, или его фармацевтически приемлемая соль или Ν-оксид.
10. 10. Применение соединения, как определено по любому из пп.1-9, для лечения или изготовления лекарственного средства для лечения расстройств, опосредованных катепсином К.
11. 11. Применение соединения по любому из пп.1-9 для изготовления лекарственного средства для лечения или предотвращения расстройства, опосредованного катепсином К.
12. 12. Применение по п.10 или 11, где расстройство выбрано из остеопороза; заболеваний десны, таких как гингивит и периодонтит; болезни Пэджета; гиперкальциемии при злокачественных заболеваниях; метаболического заболевания костей; заболеваний, характеризующихся избыточной деградацией хряща или матрикса, таких как остеоартрит и ревматоидный артрит; рака костей, включая неоплазию; боли.
13. 13. Способ лечения или предотвращения расстройства, опосредованного катепсином К, включающий введение безопасного и эффективного количества соединения по любому из пп.1-9 субъекту, нуждающемуся в нем.
14. 14. Способ по п.13, где расстройство выбрано из остеопороза; заболеваний десны, таких как гингивит и периодонтит; болезни Пэджета; гиперкальциемии при злокачественных заболеваниях; метаболического заболевания костей; заболеваний, характеризующихся избыточной деградацией хряща или матрикса, таких как остеоартрит и ревматоидный артрит; рака костей, включая неоплазию; боли.

    Евразийская патентная организация, ЕАПВ

    Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2