JP5501961B2 - システインプロテアーゼ阻害剤 - Google Patents

Description

本発明は、システインプロテアーゼ（特に、パパインスーパーファミリーに属する）阻害剤に関する。本発明は、生理的プロテアーゼ（例えば、カテプシンＫ）のミスバランス（misbalance）に由来する疾患の、予防または治療における有用な新規化合物を提供する。

システインプロテアーゼのパパインスーパーファミリーは、多様な種（哺乳類、無脊椎動物、原生動物、植物および細菌を含む）で広く分布している。多くの哺乳類のカテプシン酵素（カテプシンＢ、Ｆ、Ｈ、Ｋ、Ｌ、ＯおよびＳを含む）は、このスーパーファミリーに属しており、それらの活性の不適当な制御が多くの代謝疾患（関節炎、筋ジストロフィー、炎症、糸球体腎炎および腫瘍浸潤を含む）と結び付けられる。病原性カテプシン様酵素には、ニューモシスチス・カリニ、クルーズトリパノソーマおよびブルセイトリパノソーマ、クリチジア・フシキュラータ、シストソマ種からの細菌性ジンジパイン、マラリア性ファルシパインＩ、ＩＩ、ＩＩＩ（以下参照）およびシステインプロテアーゼを含む。

カテプシンＫの不適当な制御は、多くの疾患［骨粗鬆症、歯肉疾患（例えば、歯肉炎および歯周炎）、パジェット病、悪性高カルシウム血症および代謝性骨疾患を含む］と結び付けられる。骨関節炎滑膜における破軟骨細胞の上昇値を考慮すると、カテプシンＫは、過剰な軟骨またはマトリックス分解によって特徴付けられる疾患（例えば、骨関節炎および関節リウマチ）と結び付けられる。

骨および軟骨疾患（例えば、骨関節炎および骨粗鬆症）の治療は、カテプシンＫ阻害剤を、多くの場合は老齢期にあるかまたはそれに近い患者集団に対して、生涯投与することを要求すると考えられる。これによって、そのような疾患に向けられた薬物の投与の容易さには、非常に高い要求が課される。例えば、現在の、ビスホスホネート群の骨粗鬆症薬の投与計画を、服薬遵守を補助するために、週間またはより長い投与間隔に引き伸ばす試みが行われている。しかしながら、投薬が改良されたとしても、ビスホスホネートの他の副作用は残る。ビスホスホネートは、骨代謝回転を弱毒化するというよりはむしろ阻害してしまい、それはカテプシンＫ阻害剤がそうするのと同じである。健康な骨にとって、ビスホスホネートが完全に阻害してしまう再形成過程を維持することが大切である。また、ビスホスホネートは骨において非常に長い半減期を有するので、下顎の骨壊死のような作用が現れた場合に、ビスホスホネートを骨から除去することは不可能である。その一方で、カテプシンＫ阻害剤は概して、作用の開始および終了が速い様式を有するので、問題が見つかった場合に投薬を停止することができ、骨マトリックスにおける阻害剤の蓄積も無い。

したがって、より優れた薬物動態的および／または薬理学的特性を有する、他の骨粗鬆症および骨関節炎の治療薬への欲求が存在する。

国際公開第０２／０５７２７０号は、式ＩＡ：

［式中、
ＵＶＷＸＹは概して、ジペプチドシステインプロテアーゼ阻害剤のＰ３およびＰ２（これらの記号は以下で説明する）に対応し、
Ｚは、特にＯ、Ｓ、メチレンまたは−ＮＲ−であり、
Ｒ’_１は、アルキル、アルキルアリールなどであり、並びに
Ｐ１およびＱは各々、特に、メチレンである］
の化合物を開示する。この特許出願の一般的記述ではＰ１およびＱについて非常に広い範囲の置換基を前提としているが、いずれもが特徴付けまたは例証を欠き、またそれらの合成手順が全く提供されていない。実際、国際公開第０２／０５７２０号で示される唯一の合成手順は、Ｐ１またはＱにおける置換基を全く満たしていない。該化合物は、特に、原生動物（例えば、トリパノソーマ）の感染治療において有用であると主張されている。

国際公開第２００５／０６６１８０号の実施例９では、特に、式ＩＢ：

の化合物を開示する。該化合物はカテプシンＫの活性阻害剤であるが、以下で示すように、構造をさらに修飾して薬物動態および／または薬力学を改良でき、特に全血における高い安定性、そしてそれ故により優れた暴露をもたらす。

本出願の優先日には非公開であった国際公開第２００８／００７１２７号は、式ＩＣ：

の化合物を開示し、それはシステインプロテアーゼ阻害剤（特に、カテプシンＫ阻害剤）であると説明されている。

本発明は、式ＩＩ：

［式中、
Ｒ^２は、ロイシン、イソロイシン、シクロヘキシルグリシン、Ｏ−メチルスレオニン、４−フルオロロイシンまたは３−メトキシバリンの側鎖であり；
Ｒ^３は、Ｈ、メチルまたはＦであり；
Ｒｑは示された立体化学を有するＣＦ_３であり、Ｒｑ’はＨであるか；または
ＲｑおよびＲｑ’は一緒になってケトであり；
Ｑは、

（式中、
Ｒ^４は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
Ｒ^５は、Ｈ、メチルまたはＦであり；
Ｒ^６は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルである）
である］
の化合物、あるいはそれの医薬的に許容される塩、プロドラッグまたはＮ−オキシドを提供する。

本発明の一つの態様において、式：

［式中、
Ｒ^２は、ロイシン、イソロイシン、シクロヘキシルグリシン、Ｏ−メチルスレオニン、４−フルオロロイシンまたは３−メトキシバリンの側鎖であり；
Ｒ^３は、Ｈ、メチルまたはＦであり；
Ｒ^４は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキル、好ましくはメチルであり；
Ｒ^５は、Ｈ、メチルまたはＦである］
のエナンチオマー化合物、あるいはそれの医薬的に許容される塩、Ｎ−オキシドまたは水和物が提供される。

本発明は別の態様において、式ＩＩｂ：

［式中、
Ｒ^２およびＲ^３は上記と同義であり、
Ｑは、式ＩＩａで定義したＮ−アルキル−ピペラジニル−チアゾリル部分、または４−（Ｃ_１〜Ｃ_４アルキル）スルホニルフェニル部分であり国際公開第０７／００６７１６号で記載される、例えば式：

の化合物の通りである］
の化合物、あるいはそれの医薬的に許容される塩、Ｎ−オキシドまたは水和物を含む。

用語「Ｃ_１〜６アルキル」は、１〜６の炭素原子を有するアルキル鎖（例えば、Ｃ_１〜４アルキル基、またはＣ_１〜３アルキル基）を示す。アルキル基は、直鎖または分岐鎖であってもよい。適したＣ_１〜６アルキル基には、例えば、メチル、エチル、プロピル（例えば、ｎ−プロピルおよびイソプロピル）、ブチル（例えば、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチルおよびｔｅｒｔ−ブチル）、ペンチル（例えば、ｎ−ペンチル）およびヘキシル（例えば、ｎ−ヘキシル）が含まれる。特に興味深いアルキル基は、メチルである。

当然のことながら、本発明の化合物は水和物（例えば、

のような部分式）として存在することができ、また本発明はそのような別の形態の全てにまで及ぶ。

本発明の好ましい態様において、Ｒ^２はロイシン、イソロイシン、Ｏ−メチルスレオニン、４−フルオロロイシンまたは３−メトキシバリンの側鎖である。

今のところ、Ｒ^２の好ましい基は、

によって例示される部分構造を含み、特に、Ｌ−ロイシンの側鎖に対応するＲ^２の基を含む。

真上の段落の態様は、好ましくは、Ｒ^３またはＲ^５がフルオロである化合物に適用される。

下記の部分構造：

で示すように、メチルまたはフルオロのような典型的なＲ^３基が存在するならば、それはベンジルアミド結合に対してメタ位に位置する。

この態様の代表的な化合物は、式：

を有する。

本発明のある態様において、特にＲ^３がＨおよび／またはＲ^４がメチルである場合に、Ｒ^５はＦである。この態様の好ましい化合物は、Ｒ^２として４−フルオロロイシン、シクロヘキシルアラニン、そして最も好ましいのはロイシンの側鎖を有する。この態様の代表的な化合物は、式：

を有する。

本発明の好ましい態様には、各々について上の式ＩＩで記載した立体化学を有する、以下に示す化合物：
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−メチル−ブチル］−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［２−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−イル）−１−シクロヘキシル−２−オキソ−エチル］−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−２−メチル−ブチル］−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−２−メトキシ−プロピル］−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−２−メトキシ−２−メチル−プロピル］−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−メチル−ブチル］−４−［５−メチル−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［２−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−イル）−１−シクロヘキシル−２−オキソ−エチル］−４−［５−メチル−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−２−メチル−ブチル］−４−［５−メチル−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−２−メトキシ−プロピル］−４−［５−メチル−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−２−メトキシ−２−メチル−プロピル］−４−［５−メチル−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−メチル−ブチル］−４−［５−フルオロ−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［２−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−イル）−１−シクロヘキシル−２−オキソ−エチル］−４−［５−フルオロ−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−２−メチル−ブチル］−４−［５−フルオロ−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−２−メトキシ−プロピル］−４−［５−フルオロ−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−２−メトキシ−２−メチル−プロピル］−４−［５−フルオロl−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−メチル−ブチル］−３−メチル−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［２−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−イル）−１−シクロヘキシル−２−オキソ−エチル］−３−メチル−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−２−メチル−ブチル］−３−メチル−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−２−メトキシ−プロピル］−３−メチル−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−２−メトキシ−２−メチル−プロピル］−３−メチル−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−メチル−ブチル］−３−メチル−４−［５−メチル−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［２−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−イル）−１−シクロヘキシル−２−オキソ−エチル］−３−メチル−４−［５−メチル−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−２−メチル−ブチル］−３−メチル−４−［５−メチル−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−２−メトキシ−プロピル］−３−メチル−４−［５−メチル−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−２−メトキシ−２−メチル−プロピル］−３−メチル−４−［５−メチル−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−メチル−ブチル］−３−メチル−４−［５−フルオロ−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［２−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−イル）−１−シクロヘキシル−２−オキソ−エチル］−３−メチル−４−［５−フルオロ−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−２−メチル−ブチル］−３−メチル−４−［５−フルオロ−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−２−メトキシ−プロピル］−３−メチル−４−［５−フルオロ−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−２−メトキシ−２−メチル−プロピル］−３−メチル−４−［５−フルオロl−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−メチル−ブチル］−３−フルオロ−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［２−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−イル）−１−シクロヘキシル−２−オキソ−エチル］−３−フルオロ−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−２−メチル−ブチル］−３−フルオロ−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−２−メトキシ−プロピル］−３−フルオロ−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−２−メトキシ−２−メチル−プロピル］−３−フルオロ−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−メチル−ブチル］−３−フルオロ−４−［５−メチル−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［２−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−イル）−１−シクロヘキシル−２−オキソ−エチル］−３−フルオロ−４−［５−メチル−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−２−メチル−ブチル］−３−フルオロ−４−［５−メチル−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−２−メトキシ−プロピル］−３−フルオロ−４−［５−メチル−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−２−メトキシ−２−メチル−プロピル］−３−フルオロ−４−［５−メチル−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−メチル−ブチル］−３−フルオロ−４−［５−フルオロ−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［２−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−イル）−１−シクロヘキシル−２−オキソ−エチル］−３−フルオロ−４−［５−フルオロ−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−２−メチル−ブチル］−３−フルオロ−４−［５−フルオロ−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−２−メトキシ−プロピル］−３−フルオロ−４−［５−フルオロ−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−２−メトキシ−２−メチル−プロピル］−３−フルオロ−４−［５−フルオロl−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド
並びに、それの医薬的に許容される塩、Ｎ−オキシドおよび水和物が含まれる。

さらなる好ましい態様には、上で記載した立体化学を有する化合物：
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−フルオロ−３−メチル−ブチル］−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−フルオロ−３−メチル−ブチル］−４−［５.メチル−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−フルオロ−３−メチル−ブチル］−４−［５−フルオロ−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−フルオロ−３−メチル−ブチル］−３−メチル−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−フルオロ−３−メチル−ブチル］−３−フルオロ−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−フルオロ−３−メチル−ブチル］−３−メチル−４−［５.メチル−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−フルオロ−３−メチル−ブチル］−３−メチル−４−［５.フルオロ−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−フルオロ−３−メチル−ブチル］−３−フルオロ−４−［５−メチル−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−フルオロ−３−メチル−ブチル］−３−フルオロ−４−［５−フルオロ−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド
並びに、それの医薬的に許容される塩、水和物およびＮ−オキシドが含まれる。

本発明の好ましい態様には：
Ｎ−［１−６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−フルオロ−３−メチル−ブチル］−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］ベンズアミド；
Ｎ−［２−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−イル）−１−シクロヘキシル−２−オキソ−エチル］−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−メチル−ブチル］−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］ベンズアミド；
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−メチル−ブチル］−４−［５−メチル−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド
で表される式ＩＩの化合物、あるいはそれの医薬的に許容される塩、水和物またはＮ−オキシドが含まれる。

本発明の特に好ましい態様には、
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−メチル−ブチル］−３−フルオロ−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド
で表される式ＩＩの化合物、あるいはそれの医薬的に許容される塩、水和物またはＮ−オキシドが含まれる。

本発明の特に好ましい態様には、
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−メチル−ブチル］−４−［５−フルオロ−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド
で表される式ＩＩの化合物、あるいはそれの医薬的に許容される塩、水和物またはＮ−オキシドが含まれる。

本発明のさらなる態様には、上で定義した化合物およびそれの医薬的に許容される担体または希釈剤を含む、医薬組成物が含まれる。

本発明のさらなる態様は、カテプシンＫによってもたらされる疾患の、治療における、または治療剤の製造における、上記で定義した化合物の使用であり、該疾患は例えば、
骨粗鬆症、
歯肉疾患（例えば、歯肉炎および歯周炎）、
パジェット病、
悪性高カルシウム血症、
代謝性骨疾患、
過剰な軟骨分解またはマトリックス分解を特徴とする疾患（例えば、骨関節炎および関節リウマチ）、
骨癌（異常増殖を含む）、
疼痛（特に慢性疼痛）
である。

さらに、治療または予防が必要な患者に、請求項１から１７のいずれかの化合物の安全で有効な量を投与することを特徴とする、カテプシンＫによってもたらされる疾患の治療方法または予防方法も提供される。そのような患者は、典型的には哺乳類であり、特にはヒトである。

本発明の化合物は塩を形成することができ、それによって本発明のさらなる態様が形成される。式ＩＩの化合物の、適した医薬的に許容される塩には、有機酸であって、特にカルボン酸［これらに限定されないが、酢酸、トリフルオロ酢酸、乳酸、グルコン酸、クエン酸、酒石酸、マレイン酸、リンゴ酸、パントテン酸、イセチオン酸、アジピン酸、アルギン酸、アスパラギン酸、安息香酸、酪酸、二グルコン酸、シクロペンタナート（cyclopentanate）、グルコヘプトン酸、グリセロリン酸、シュウ酸、ヘプタン酸、ヘキサン酸、フマル酸、ニコチン酸、パルモ酸（palmoate）、ペクチネート（pectinate）、３−フェニルプロピオン酸、ピクリン酸、ピバル酸、プロプリオネート（proprionate）、酒石酸、ラクトビオン酸、ピボル酸（pivolate）、樟脳酸、ウンデカン酸およびコハク酸を含む］、有機スルホン酸［例えば、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、２−ヒドロキシエタンスルホン酸、樟脳スルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−クロロベンゼンスルホン酸およびｐ−トルエンスルホン酸］；並びに無機酸［例えば、塩酸塩、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、重硫酸酸、へミスルファート（hemisulphate）、チオシアン酸、過硫酸、リン酸およびスルホン酸］の塩が含まれる。

本発明の化合物は、ある場合には水和物として単離され得る。水和物は、典型的には、有機溶媒（例えば、ダイオキシン、テトラヒドロフランまたはメタノール）を用いる水性／有機溶媒混合物から再結晶によって製造される。水和物はまた、患者に、対応するケトンを投与することでそのまま（in situ）得ることができる。

本発明の化合物のＮ−オキシドは、当業者に公知の方法によって製造できる。例えばＮ−オキシドは、本発明の化合物の酸化されていない形に、酸化剤（例えば、トリフルオロ過酢酸、過マレイン酸、過安息香酸、過酢酸、メタ−クロロペルオキシ安息香酸など）を、適した不活性有機溶媒（例えば、ジクロロメタンのようなハロゲン化炭化水素）中、約０℃で処理することによって製造できる。あるいは、本発明の化合物のＮ−オキシドは、適した出発物質のＮ−オキシドから製造できる。

本発明のＮ−オキシドの例には、以下：

のような部分構造を有するものが含まれる。本発明の化合物の酸化されていない形は、本発明の化合物に対応するＮ−オキシドから、還元剤（例えば、硫黄、二酸化硫黄、トリフェニルホスフィン、水素化ホウ素リチウム、水素化ホウ素ナトリウム、二塩化リン、三臭化物など）を、適した不活性有機溶媒（例えば、アセトニトリル、エタノール、含水ジオキサンなど）中、０〜８０℃で処理することにより製造できる。

注意すべきことは、定義で用いられるいずれの分子部分における結合基の位置も、化学的に安定である限り、そのような部分のいずれにあってもよいということである。

特に断りがなければ、記号の定義で用いられる結合基には、全ての可能な異性体が含まれる。

いずれかの記号が、いずれかの構成物に１回以上現れる場合、各々の定義は独立である。

特に断りがなければ、化合物の化学名は全ての可能な立体化学的異性体（それは、前記化合物も有し得る）の混合物を包含する。前記混合物は、前記化合物の基本分子構造のあらゆるジアステレオマーおよび／またはエナンチオマーを含んでもよい。本発明の化合物のあらゆる立体化学的な異性体は、純粋な形または各々混合されている形のいずれもが、本発明の範囲内にあると意図される。

本明細書で言及する化合物および中間体の純粋な立体異性体は、前記化合物または中間体と同一の基本分子構造で、他のエナンチオマーまたはジアステレオマーの形態が実質的に存在しない異性体として定義される。特に、用語「純粋な立体異性体」は、少なくとも立体異性体過剰率（steroisomeric excess）が８０％（すなわち、一方の異性体が最小で９０％、他方の可能な異性体が最大で１０％）から立体異性体過剰率が１００％（すなわち、一方の異性体が１００％、他方が存在しない）までを有する化合物または中間体のことを指し、具体的には立体異性体過剰率が９０％〜１００％、より具体的には立体異性体過剰率が９４％〜１００％、さらに具体的には立体異性体過剰率が９７％〜１００％を有する化合物または中間体のことを指す。用語「純粋なエナンチオマー」および「純粋なジアステレオマー」も同じように理解されるべきであるが、それぞれ問題となっている混合物の、エナンチオマー過剰率、およびジアステレオマー過剰率に関する。

本発明の化合物は、該化合物のラセミ混合物を光学活性分割剤と一緒に反応させることにより、ジアステレオマー化合物の対を形成させ、ジアステレオマーを分離し、光学的に純粋なエナンチオマーを回収して、それらを個々の立体異性体として製造できる。エナンチオマーの分割は、式（Ｉ）の化合物の共有結合性ジアステレオマーの誘導体を用いて行うことができ、分離可能な複合体が好ましい（例えば、結晶；ジアステレオマーの塩）。ジアステレオマーは、異なる物理的性質（例えば、融点、沸点、溶解度、反応性など）を有し、これらの相違点を利用して容易に分離することができる。ジアステレオマーは、クロマトグラフィー（例えばＨＰＬＣ）によって分離することができるか、または好ましくは、溶解度の違いに基づく分離／分割技術による。次いで、ラセミ化が生じない任意の実用的手段によって、光学的に純粋なエナンチオマーは、分割剤と一緒に回収される。それらのラセミ混合物から立体異性体化合物の分離をするのに適した技術に関する詳細な記載は、Jean Jacques Andre Collet, Samuel H. Wilen, Enantiomers, Racemates and Resolutions, John Wiley & Sons, Inc. (1981) に見つけることができる。

当然のことながら本発明は、プロドラッグ、溶媒和物、複合体および本発明の化合物をインビボで放出する他の形態にまで及ぶ。

活性薬剤を単独投与することは可能だが、医薬製剤の一部として提供することが好ましい。そのような製剤は、上で定義した活性薬剤と、１またはそれ以上の許容される担体／賦形剤および適宜含まれる他の治療成分とを一緒に含む。担体は、製剤の他の成分と適合性を有するという意味において許容されなければならず、またレシピエントに対して有害であってはならない。

製剤には、直腸、経鼻、局所（バッカルおよび舌下を含む）、膣または非経口（皮下、筋肉内、静脈内および皮肉を含む）投与に適したものが含まれるが、好ましい製剤は経口投与製剤である。製剤は単一剤形（例えば、錠剤および徐放カプセル剤）で提供されることが都合よく、医薬分野でよく知られたいずれの方法を用いて製造されてもよい。

そのような方法には、上で定義した活性薬剤を担体と会合させる段階が含まれる。一般に製剤は、活性薬剤を液体担体または微細に分離された固体（finely divided solid）担体またはその両方と一緒に、一様に（uniformly）強く会合させて製造し、次いで必要ならば生成物を形作る。本発明は、式ＩＩの化合物またはその医薬的に許容される塩を、医薬的に許容される担体またはベヒクルと結合または会合させることを特徴とする、医薬組成物の製法にまで及ぶ。医薬製剤の製造に医薬賦形剤および塩の形での活性成分の緊密混合が含まれる場合、普通は塩基性でない（すなわち、酸性または中性の）賦形剤が好ましく用いられる。

本発明における経口投与製剤は、分離した単位（例えば、カプセル剤、カシュ剤または錠剤）として、各々、予定された量の活性薬剤を；散剤または顆粒剤として；水性液体または非水性液体における活性薬剤の溶液または懸濁液として；あるいは、水中油液体乳剤または油中水液体乳剤としておよびボーラスなどとして含んで、提供されてもよい。

経口投与の構成物（例えば、錠剤およびカプセル剤）に関して、用語「適した担体」には、ベヒクル［例えば、通常の賦形剤、例えば結合剤、例えばシロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビトール、トラガント、ポリビニルピロリドン（Povidone）、メチルセルロース、エチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピル−メチルセルロース、ショ糖およびデンプン］；賦形剤および担体（例えばトウモロコシデンプン、ゼラチン、乳糖、ショ糖、微結晶セルロース、カオリン、マンニトール、リン酸ジカルシウム、塩化ナトリウムおよびアルギン酸）；並びに滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウムおよび他のステアリン酸金属塩、ステアリン酸グリセロール、ステアリン酸、シリコーン溶液、タルクワックス、油およびコロイドシリカ）が含まれる。香味剤（例えば、ペパーミント、ウィンター・グリーン油、チェリー風味など）も用いることができる。剤形を容易に識別可能にするために、着色剤を加えることが望ましい場合がある。錠剤はまた、当技術分野でよく知られた方法によってコーティングされることもある。

錠剤は、適宜１またはそれ以上の付属成分を含んで、圧縮または成形によって作られ得る。圧縮錠剤は、適宜結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤、防腐剤、界面活性剤または分散剤と混合して、適した装置内で活性薬剤を流動性の良い形（例えば、散剤または顆粒剤）に圧縮することによって製造されてもよい。成形錠剤は、不活性液体希釈剤で湿らした粉末化合物の混合物を適した装置内で成形することによって製造されてもよい。錠剤は、適宜コーティングまたは分割されてもよく、また活性薬剤の持続放出または制御放出を提供するように製剤されてもよい。

経口投与に適した他の製剤には、味の付いた基剤（通常は、ショ糖およびアカシアまたはトラガント）中に活性薬剤を含むトローチ剤；不活性基剤（例えば、ゼラチンおよびグリセリン、またはショ糖およびアカシア）中に活性薬剤を含む錠剤（pastille）；並びに、適した液体担体中に活性薬剤を含む口腔洗浄薬。

本発明の化合物または製剤に適した用量は効能および患者に依存し、その用量は通常の動物実験により容易に決定され、ヒト臨床試験で確かめられる。細胞内（パパインスーパーファミリーの生理的プロテアーゼの阻害）に提供する投与量濃度のオーダーは、０.０１〜１００ｍＭ（例えば０.１〜２５ｍＭ）、より好ましくは０.０１〜１０ｍＭが通常望ましく、また達成可能である。

本発明の化合物は、様々な液相および固相化学によって製造される。

化合物は典型的に、最終産物である阻害剤のＰ１、Ｐ２およびＰ３部分を示す構成要素（building block）として製造される。理論、または特定の基に関する一時的な結合様式の起因に拘束されることは、いかなる場合も望ましくない。本明細書で用いられる抽象的な概念のＰ１、Ｐ２およびＰ３は、便宜のためにのみ提供されるのであって、実質的には通常のＳｃｈｌｅｃｔｅｒ ＆ Ｂｅｒｇｅｒの意味を有し、各々は酵素のＳ１、Ｓ２、およびＳ３サブサイト（ここで、Ｓ１は隣接する切断部位であり、Ｓ３は切断部位から離れている）を満たすと考えられる、阻害剤の部分を示す。式ＩＩの化合物は、結合様式に係わらず、本発明の範囲内にあることが意図される。

概して、Ｐ１構成要素は、式：

［式中、ＰＧは、通常のＮ−保護基または遊離アミンであり；２つのＲｂ基はケタール（例えば、ビスメチルケタール）であるか、または一緒になって環状ケタール（例えば、１，３−ジオキソラン）であり；並びにＲｃはヒドロキシ保護基であるか、またはそれほど一般的でないものの、Ｈもしくは最終産物である阻害剤のケト基を示すが、但しケトンとしてのＰ１構成要素がＰ２およびＰ３と結合（elongated）している場合である。］
を有する。

Ｐ２は典型的に、Ｎ−保護Ｌ−ロイシン、Ｌ−イソロイシン、Ｏ−メチル−Ｌ−スレオニン、Ｌ−３−ヒドロキシバリン、４−フルオロロイシンまたはＬ−シクロヘキシルグリシンであり；Ｐ３は典型的に、Ｎ−アルキル−ピペラジニル−Ｅ部分を有する安息香酸誘導体（既にパラ位におけるそのシントンで導入または提供されている）のようなキャッピング基（capping group）を含む。

適当に保護された個々の構成要素をまず製造し、続いてその後で結合することができ、好ましくはＰ２＋Ｐ１→Ｐ２−Ｐ１、続いてＮ−アルキルピペラジニル−チアゾリル−安息香酸＊＋Ｐ２−Ｐ１→Ｎ−アルキルピペラジニル−チアゾリル−安息香酸エステル−Ｐ２−Ｐ２−Ｐ１という順番である（ここで、＊はＰ２でラセミ化を最小化するための活性型を示す）。

２つのアミノ酸、アミノ酸およびペプチド、または２つのペプチド断片におけるカップリングは、標準的なカップリング手順を用いて行うことができ、例えば；アジド法、混合無水カルボニックカルボン酸（クロロギ酸イソブチル）法、カルボジイミド（ジシクロヘキシルカルボジイミド、ジイソプロピルカルボジイミド、または水溶性カルボジイミド）法、活性エステル（ｐ−ニトロフェニルエステル、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミドエステル）法、ウッドワード試薬Ｋを用いる方法、カルボジイミダゾール法、リン試薬または酸化還元法である。これらの方法の一部（特に、カルボジイミド法）は、１−ヒドロキシベンゾトリアゾールまたは４−ＤＭＡＰを加えることにより強めることができる。これらのカップリング反応は、溶液（液相）または固相のいずれにおいても行うことができる。

より具体的に、カップリング工程には、カップリング剤の存在下で、１つの反応物の遊離カルボキシルと他の反応物の遊離アミノ基の脱水カップリングにより、連結アミド結合を形成することが含まれる。そのようなカップリング剤の記載は、ペプチド化学に関する概説書［例えば、M. Bodanszky, "Peptide Chemistry", 2nd rev ed., Springer-Verlag, Berlin, Germany, (1993) 、以下では単にＢｏｄａｎｓｚｋｙと呼ぶ］で見つけることができ、その内容は本明細書で参照によりそのまま援用される。適したカップリング剤は例えば、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミドまたはＮ−エチル−Ｎ’−［（３−ジメチルアミノ）プロピル］カルボジイミドの存在下、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド、１−ヒドロキシベンゾトリアゾールである。実用的で使い易いカップリング剤は、市販品として入手可能な（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウムヘキサフルオロホスフェートであり、それは単独でまたは１−ヒドロキシベンゾトリアゾールもしくは４−ＤＭＡＰの存在下で用いる。別の、実用的で使い易いカップリング剤は、市販品として入手可能な２−（ｌＨ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロホウ酸塩である。さらに別の、実用的で使い易いカップリング剤は、市販品として入手可能なＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートである。

カップリング反応は、不活性溶媒（例えばジクロロメタン、アセトニトリルまたはジメチルホルムアミド）中で行う。過剰量の第三級アミン（例えば、ジイソプロピルエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、Ｎ−メチルピロリジンまたは４−ＤＭＡＰ）を加えて、反応混合物をｐＨ約８で維持した。反応温度は通常０℃〜５０℃の範囲にあり、反応時間は通常１５分〜２４時間の範囲にある。

構成要素である非天然アミノ酸の官能基は、一般に、望まれない結合の形成を防ぐために、カップリング反応中は保護されていなければならない。用いることのできる保護基は、Greene, "Protective Groups in Organic Chemistry", John Wiley & Sons, New York (1981) および "The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology", Vol. 3, Academic Press, New York (1981)（これ以降は単にＧｒｅｅｎｅと呼ぶ）に列記されており、その開示物は本明細書で参照によりそのまま援用される。

Ｃ末端残基のα−カルボキシル基は、通常、カルボン酸を与えるために切断することのできるエステルとして保護される。用いることのできる保護基には；
１）アルキルエステル（例えば、メチル、トリメチルシリルおよびｔｅｒｔ−ブチル）、
２）アルアルキルエステル（例えば、ベンジルおよび置換ベンジル）、あるいは
３）弱塩基または穏やかな還元的方法（例えば、トリクロロエチルおよびフェナシルエステル）によって切断できるエステルが含まれる。

カップルされる、各々のアミノ酸のα−アミノ基は、典型的にはＮ−保護である。当技術分野で公知のいずれの保護基も用いることができる。そのような基の例は：
１）アシル基（例えば、ホルミル、トリフルオロアセチル、フタリル、およびｐ−トルエンスルホニル）；
２）芳香族カルバメート基［例えば、ベンジルオキシカルボニル（ＣｂｚまたはＺ）および置換ベンジルオキシカルボニル、および９−フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）］；
３）脂肪族カルバメート基［例えば、ｔｅｒｔブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）、エトキシカルボニル、ジイソプロピルメトキシ−カルボニル、およびアリルオキシカルボニル］；
４）環状アルキルカルバメート基（例えば、シクロペンチルオキシカルボニルおよびアダマンチルオキシカルボニル）；
５）アルキル基（例えば、トリフェニルメチルおよびベンジル）；
６）トリアルキルシリル（例えば、トリメチルシリル）；並びに
７）チオールを含む基（例えば、フェニルチオカルボニルおよびジチアスクシノイル）。
好ましいα−アミノ保護基は、いずれかＢｏｃまたはＦｍｏｃである。ペプチド合成のために適当に保護された、多くのアミノ酸誘導体は、市販品として入手可能である。

α−アミノ保護基は、通常、次のカップリング工程の前に切断される。Ｂｏｃ基が用いられる場合、選択の方法は、トリフルオロ酢酸、無溶媒またはジクロロメタン中、あるいはＨＣｌのジオキサン溶液または酢酸エチル溶液中である。次いで、生じたアンモニウム塩を、カップリング前またはインサイツで、塩基性溶液（例えば、水性緩衝液、あるいは第三級アミンのジクロロメタン溶液もしくはアセトニトリル溶液、またはジメチルホルムアミド）を用いて、中性化する。Ｆｍｏｃ基が用いられる場合、選択の試薬はジメチルホルムアミド中、ピペリジンまたは置換ピペリジンであるが、いずれの第二級アミンも用いることができる。脱保護は、０℃〜室温（通常は２０〜２２℃）の温度で行われる。

阻害剤の配列（sequence）がいったん完了すると、保護基の選択によって示される任意の方法で、いずれの残った保護基も除去される。これらの手順は、当業者によく知られている。

本発明の化合物（例えば、一般式ＩＩの化合物）の合成の最初の段階は、通常、官能基を有するＰ１構成要素の溶液中での製造であり、例えば以下のスキームで示す：

ｉ）ＭｓＣｌ、Ｐｙｒ
ｉｉ）ＮａＯＡｃ、Ａｃ_２Ｏ、ＤＭＦ、１３０℃
ｉｉｉ）ＢＦ_３ｘＥｔ_２Ｏ、Ｅｔ_３ＳｉＨ、ＤＣＭ
ｉｖ）ＴＢＤＰＳ−Ｃｌ、Ｉｍ−Ｈ、ＤＭＦ
ｖ）ＮａＯＭｅ
ｖｉ）ＳＯ_２Ｃｌ_２、Ｐｙｒ、ＤＣＭ
ｖｉｉ）ＰＰｈ_３、ＭｅＯＨ、Ｈ_２Ｏ、次いでＥｔ_３Ｎ、５０℃
ｖｉｉｉ）Ｂｏｃ_２Ｏ、Ｅｔ_３Ｎ
ｉｘ）ＴＢＡＦ、ＴＨＦ
ｘ）デス・マーチン・ペルヨージナン
ｘｉ）方法ａ：ＭｅＯＨ、ＴＭＯＦ、ｐ−ＴｓＯＨ、次いでＥｔ_３Ｎ、Ｂｏｃ_２Ｏ、次いでクロマトグラフィー、および最終的に、ＭｅＯＨ、ＡｃＣｌ；方法ｂ：ＭｅＯＨ、ＡｃＣｌ、ＴＭＯＦ

上のスキームが異なる保護基戦略（strategy）（アセチル、メシル、ＴＢＤＰＳおよびＢｏｃを用いる）で例示されているが、Ｇｒｅｅｎｅ（ｉｂｉｄ）で記載されるように、通常の保護基の他の順列も用いることができることは明らかである。また、Ｐ２およびＰ３残基のカップリングの間、ケトン基のジメチルヘミアセタールを用いることは都合がよく、後の工程でケトン基を再生産する。

該構成要素とＰ２およびＰ３構成要素との結合（elongation）は、通常、適したカップリング剤［例えば、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリスピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＢＯＰ）、Ｏ−ベンゾトリアゾール−l−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）、Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチル−ウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）、または１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）］の存在下、適宜、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢＴ）および塩基（例えば、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、トリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、など）の存在下で行われる。反応は典型的には２０〜３０℃で、好ましくは約２５℃で行い、完了するまでに２〜２４時間を要する。適した反応溶媒は不活性有機溶媒であり、例えば、ハロゲン化有機溶媒（例えば、塩化メチレン、クロロホルムなど）、アセトニトリル、Ｎ，Ｎジメチルホルムアミド、エーテル溶媒（例えば、テトラヒドロフラン、ジオキサンなど）である。

あるいは、上記の結合カップリング段階は、まずＰ３／Ｐ２構成要素を活性酸誘導体（例えば、サクシニミドエステル）に変換させ、次いでそれをＰ１アミンと反応させることによって行える。反応は通常、完了するまでに２〜３時間を要する。この反応で利用する条件は、活性酸誘導体の性質に依存する。例えば、それが酸塩化物誘導体の場合、反応は適した塩基（例えば、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン、ピリジンなど）の存在下で行われる。適した反応溶媒は、極性有機溶媒（例えば、アセトニトリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、またはそれらいずれかの適した混合物）である。

Ｎ−保護Ｌ−アミノ酸の形のＰ２構成要素は市販品として容易に入手可能であり（例えばＬ−ロイシン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−シクロヘキシルグリシン、Ｏ−メチル−Ｌ−スレオニン）、また多様な保護基（例えば、ＣＢｚ、ＢｏｃまたはＦｍｏｃ）を有する他のものも市販品として入手可能である。Ｒ^２の他の種類も、市販品として入手可能な出発物質から容易に製造できる。例えば、Ｒ^２が−Ｃ（ＣＨ_３）_２ＯＣＨ_３である化合物は、ＣＢｚ保護（Ｓ）−（＋）−２−アミノ−３−ヒドロキシ−３−メチルブタン酸を、３，３−ジメトキシ−ヘキサヒドロ−フロ（３，２ｂ）ピロールと反応させることにより製造でき、目的のＰ２−Ｐ１単位を形成する。これによりＰ２側鎖アルコールは、通常の、水素化ナトリウム、イミダゾール、ＴＨＦ条件下で、ヨウ化メチルを用いてメチル化することができ、実質的にα中心のラセミ化がされずに目的のＰ２を得ることができる。このＰ２−Ｐ１部分は、本明細書で記載するように、合成を通じて用いることができる（ＣＢｚ除去およびカップリングと名付ける）。

国際公開第０５／５６５２９９号は、γ−フルオロロイシンＰ２構成要素の製造について記載する。ＦｍｏｃおよびＮ−Ｂｏｃ−γフルオロロイシン構成要素の別の合成は、Truong et al SynLett 2005 no 8 1278-1280 に示される。

Ｐ３構成要素の製造は、国際公開第０５／６６１８０号に記載されているか、または類似の方法で容易に製造される。例えば下のスキームは、フルオロ−置換チアゾリルの製造を示す：

ｉ．ＨＯＡｃ、Ｂｒ_２、室温、２時間、収率５５％；
ｉｉ．ＫＦ、１８−クラウン−６、ＣＨ_３ＣＮ、９０℃、１６時間、収率３１％；
ｉｉｉ．ＨＯＡｃ、Ｂｒ_２、４５℃、４時間、収率１００％；
ｉｖ．４−メチルピペラジン−１−カルボチオアミド、エタノール、７０℃、２時間、収率７４％；
ｖ．ＬｉＯＨ、ＴＨＦ、Ｈ_２Ｏ、室温、１６時間、収率７９％。

４−［５−フルオロ−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−安息香酸の合成
出発物質の４−アセチル安息香酸メチルは、市販品として入手可能である。ケトンのα位のブロム化を酢酸中、臭素で行い、目的の４−（２−ブロモ−アセチル）−安息香酸メチルエステルを得た。続いて４−（２−ブロモ−アセチル）−安息香酸メチルエステルを、１８−クラウン−６の存在下、９０℃、フッ化カリウムで処理して、カラムクロマトグラフィーした後に、４−（２−フルオロ−アセチル）−安息香酸メチルエステルを得た。ケトンのα位のブロム化を酢酸中、臭素で繰り返し行い、目的の４−（２−ブロモ−２−フルオロ−アセチル）−安息香酸メチルエステルを得た。チアゾールの形成は通常、４−（２−ブロモ−２−フルオロ−アセチル）−安息香酸メチルエステルを、４−メチルピペラジン−１−カルボチオアミドと一緒に、７０℃で２時間加熱して行う。冷却後、目的の４−［５−フルオロ−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−安息香酸メチルエステルが沈殿する。メチルエステルの脱保護を水酸化リチウム溶液で行い、目的の酸である、４−［５−フルオロ−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−安息香酸を、塩酸でワークアップして、一般に高収率で二塩酸塩として得る。

国際公開第０５／０６６１５９号および国際公開第０５／０６５５７８号は、Ｐ２およびＰ３単位が、Ｃ（ＣＦ_３）部分（Ｐ３がビフェニルスルホンであるものを含む）を介して結合している化合物の製造を記載する。Ｒｑがトリフルオロメチルであり、Ｒｑ’がＨである、式ＩＩの化合物の製造に適したＰ２−Ｐ３構成要素の製造例をスキーム３に示す。

ブロモ誘導体（３ａ）の酸性基の保護は、Bioorg. Med. Chem Lett. 2006, 16, 1985 に記載された手順に従って製造し、すなわち；酸（例えば硫酸）の存在下、例えばイソプロピルアルコールと反応させて、対応エステルを得た。次いで、望ましいチアゾール誘導体は、例えばＳｔｉｌｌｅまたはＳｕｚｕｋｉカップリング条件を用いて、得られたエステルの芳香族基とカップリングできる。例えば、ブロモ誘導体３ａのエステルは、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−フェロセン］パラジウムＩＩクロライドの存在下で、ボラン試薬（例えばピナコールボラン）と反応させて、対応するジオキソボロラン誘導体を得ることができる。続いて、［１，１’−ビス（ジフェニルホスフィノ）−フェロセン］パラジウムＩＩクロライドの存在下で、望ましいチアゾール誘導体（３ｂ）のボロン基の置換により、ビアリール誘導体（３ｃ）を得た。チアゾール誘導体（３ｂ）は、例えば、J. Med. Chem. 2005, 48, 7520-7534 に記載されるようにして製造できる。酸保護基の除去は、例えばジオキサン中、酸（例えば塩酸）による処理によって行い、Ｐ２−Ｐ３構成要素を得て、Ｐ１構成要素とカップリングして、本発明の化合物を得る。国際公開第０７／００６７１６号は、そのようなＰ３およびＰ３−Ｐ２構成要素の製造およびカップリングを示す。

用語「Ｎ−保護基」または「Ｎ−保護」は、本明細書で用いられるように、アミノ酸またはペプチドのＮ−末端を保護するための基、あるいは合成手順における望ましくない反応からアミノ基を保護するための基を言う。通常用いられるＮ−保護基は、Greene, ”Protective Groups in Organic Synthesis” (John Wiley & Sons, New York, 1981)に開示されており、それは本明細書で引用により援用される。Ｎ−保護基には、アシル基（例えば、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ピバロイル、ｔ−ブチルアセチル、２−クロロアセチル、２−ブロモアセチル、トリフルオロアセチル、トリクロロアセチル、フタリル、ｏ−ニトロフェノキシアセチル、α−クロロブチリル、ベンゾイル、４−クロロベンゾイル、４−ブロモベンゾイル、４−ニトロベンゾイルなど）；スルホニル基（例えば、ベンゼンスルホニル、ｐ−トルエンスルホニルなど）、カルバメートを形成する基（例えば、ベンジルオキシカルボニル、ｐ−クロロベンジルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジルオキシカルボニル、ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル、２−ニトロベンジルオキシカルボニル、ｐ−ブロモベンジルオキシカルボニル、３，４−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、４−メトキシベンジルオキシカルボニル、２−ニトロ−４，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、３，４，５−トリメトキシベンジルオキシカルボニル、１−（ｐ−ビフェニルイル）−１−メチルエトキシカルボニル、α，α−ジメチル−３，５−ジメトキシベンジルオキシカルボニル、ベンズヒドリルオキシカルボニル、ｔ−ブトキシカルボニル、ジイソプロピルメトキシカルボニル、イソプロピルオキシカルボニル、エトキシカルボニル、メトキシカルボニル、アリルオキシカルボニル、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニル、フェノキシカルボニル、４−ニトロフェノキシカルボニル、フルオレニル−９−メトキシカルボニル、シクロペンチルオキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、シクロヘキシルオキシカルボニル、フェニルチオカルボニルなど）；アルキル基（例えば、ベンジル、トリフェニルメチル、ベンジルオキシメチルなど）；およびシリル基（例えば、リメチルシリルなど）が含まれる。好ましいＮ−保護基には、ホルミル、アセチル、ベンゾイル、ピバロイル、ｔ−ブチルアセチル、フェニルスルホニル、ベンジル（ｂｚ）、ｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）およびベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）が含まれる。

ヒドロキシおよび／またはカルボキシ保護基はまた、Ｇｒｅｅｎｅ ｉｂｉｄにおいても広く概説されており、エーテル（例えばメチル）、置換メチルエーテル［例えば、メトキシメチル、メチルチオメチル、ベンジルオキシメチル、ｔ−ブトキシメチル、２−メトキシエトキシメチルなど）、シリルエーテル（例えば、トリメチルシリル（ＴＭＳ）、ｔ−ブチルジメチルシリル（ＴＢＤＭＳ）トリベンジルシリル、トリフェニルシリル、ｔ−ブチルジフェニルシリル、トリイソプロピルシリルなど］、置換エチルエーテル（例えば、１−エトキシメチル、１−メチル−１−メトキシエチル、ｔ−ブチル、アリル、ベンジル、ｐ−メトキシベンジル、ジフェニルメチル、トリフェニルメチルなど）、アルアルキル基［例えば、トリチル、およびピキシル（９−ヒドロキシ−９−フェニルキサンテン誘導体、特に塩化物）］が含まれる。ヒドロキシエステル保護基には、例えばギ酸、ギ酸ベンジル、クロロ酢酸、メトキシ酢酸、フェノキシ酢酸、ピバル酸、アダマントエート（adamantoate）、メシトエート（mesitoate）、安息香酸などのエステルが含まれる。炭酸ヒドロキシ保護基には、ビニルメチル、アリル、シンナミル、ベンジルなどが含まれる。

（実施形態）
本発明の様々な態様は、これから以下の実施例を参考にしながら、例証としてのみ説明する。

実施例１
Ｐ１構成要素の製造：
工程ａ）

化合物１（７.０ｇ、２８.５ｍｍｏｌ）の３−アジド−３−デオキシ−１，２−Ｏ−（１−メチルエチリデン）−α−Ｄ−アロフラノース［Tronchet, Jean M. J.; Gentile, Bernard; Ojha-Poncet, Joelle; Moret, Gilles; Schwarzenbach, Dominique; Barbalat-Rey, Francoise; Tronchet, Jeannine. Carbohydrate Research (1977), 59(1), 87-93 に記載されるように製造した］を乾燥ピリジン（５０ｍＬ）に溶解し、溶液を０℃まで冷却した。塩化メシルを該溶液にゆっくりと加え、溶液を室温まで加温した。反応液を終夜攪拌し、１４時間後ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）を加え、続いてＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）を加えた。溶液をＨ_２ＳＯ_４（水）（２Ｍ、３×１００ｍＬ）で３回洗浄し、飽和ＮａＨＣＯ_３（水）（２×１００ｍＬ）で２回洗浄し、その後有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮した。生成物を高真空ポンプに終夜置いた後、残留溶媒を除去し、生成物２を淡黄色の油状物として定量的収率で得た（１１.５ｇ）。¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) 1.34 (s, 3H), 1.51 (s, 3H), 3.07 (s, 3H), 3.16 (s, 3H), 4.18 (d, 1H, J = 3.1), 4.36 (dd, 1 H, J = 8.6, 3.2), 4.42 (dd, 1H, J = 12.0, 5.0), 4.67 (dd, 1H, J = 11.9, 2.3), 4.74 (d, 1H, J = 3.7), 5.11 (ddd, 1H, J = 8.6, 5.0, 2.3), 5.89 (d, 1H, J = 3.6).

工程ｂ）

化合物２（１１.５ｇ、２８.５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ溶液（５０ｍＬ）に溶解した。ＮａＯＡｃ（２３.４ｇ、２８５ｍｍｏｌ）およびＡｃ_２Ｏ（４８.６ｍＬ、０.５１４ｍｏｌ）を該溶液に加え、次いでそれを１２５℃で８６時間加熱した。溶媒の一部を回転蒸発により除去し、ＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）を添加した。とても暗い溶液をセライトを通して濾過した。次いで有機相をＨ_２Ｏで洗浄した（３×３５０ｍＬ）。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、溶媒を回転蒸発により除去した。粗生成物をフラッシュ・カラム・クロマトグラフィーで精製し（ヘプタン：酢酸エチル、７：３→２：１）、目的の化合物３を収率６１％（５.７０ｇ）、化合物４を収率２２％（２.３４ｇ）で得た。
化合物３：¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) 1.34 (s, 3H), 1.53 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 3.94 (d, 1H, J = 3.4), 4.19 (dd, 1H, J = 12.2, 5.0), 4.32 (dd, 1H, J = 8.0, 3.3), 4.37 (dd, 1H, J = 12.3, 3.5), 4.73 (d, 1H, J = 3.6), 5.32-5.37 (m, 1H), 5.94 (d, 1H, J = 3.8).
化合物４：¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) 1.34 (s, 3H), 1.51 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 3.10 (s, 3H), 4.11 (d, 1H, J = 3.6), 4.21 (dd, 1H, J = 12.8, 6.2), 4.32 (dd, 1H, J = 8.3, 3.2), 4.65 (dd, 1H, J = 12.7, 2.2), 4.73 (d, 1H, J = 3.5), 5.09 (ddd, 1H, J = 8.3, 6.1, 2.3), 5.89 (d, 1H, J = 3.5).

工程ｃ）

トリエチルシラン（２７.６ｍＬ、１７３ｍｍｏｌ）を、化合物３（５.７０ｇ、１７.３ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭに溶解した溶液（４０ｍＬ）に加えた。丸底フラスコを不活性雰囲気（Ｎ_２）下で氷浴内に入れ、冷却し、ＢＦ_３．Ｅｔ_２Ｏ（２３.１ｍＬ、１７３ｍｍｏｌ）をゆっくり添加した。反応をゆっくり進行させ、反応液を３日間攪拌した。この段階で、出発物質は未だ存在する。ＮａＨＣＯ_３（飽和水）（７０ｍＬ）をゆっくり添加し、続いてスプーン１杯の（spoonwise）固体ＮａＨＣＯ_３を添加して、気体発生を止めた。水相をＤＣＭ（１５０ｍＬ）で抽出し、ＮａＨＣＯ_３（飽和水）（７０ｍＬ）で洗浄し、続いてＮＨ_４Ｃｌ（飽和水）（７０ｍＬ）を加えた。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュ・カラム・クロマトグラフィーで精製し（ヘプタン：酢酸エチル＝２：１）、化合物５を得た（収率４１％、１.９５ｇ）。変化していない出発物質（０.６９ｇ）も単離した。¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) 2.08 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 3.72 (dd, 1H, J = 10.0, 2.6), 3.95 (dd, 1H, J = 4.6, 2.1), 4.17- 4.27 (m, 3H), 4.37 (dd, 1H, J = 12.1, 3.7), 4.52- 4.57 (m, 1H), 5.26- 5.31 (m, 1H).

工程ｄ）

イミダゾール（１.４６ｇ、２１.４ｍｍｏｌ）を、化合物５（１.９５ｇ、７.１４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（５０ｍＬ）に加えた。数分後、ＴＢＤＰＳＣｌを加え、反応液を室温で終夜攪拌した。酢酸エチル（２００ｍＬ）を反応液に加え、溶液を１０％クエン酸（水）（３×５０ｍＬ）およびＮａＨＣＯ_３（飽和水）（５０ｍＬ）で洗浄した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュ・カラム・クロマトグラフィーで精製し（ヘプタン：酢酸エチル＝４：１）化合物６を得た（収率９２％、３.３９ｇ）。¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) 1.09 (s, 9H), 2.04 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 3.71 (dd, 1H, J = 4.3, 2.1), 3.78 (dd, 1H, J = 9.5, 2.2), 3.99 (dd, 1H, J = 9.6, 4.6), 4.12 (dd, 1H, J = 12.2, 5.1), 4.28- 4.33 (m, 2H), 4.36- 4.40 (m, 1H), 5.17- 5.22 (m, 1H), 7.37- 7.51 (m, 6H), 7.58- 7.74 (m, 4H).

工程ｅ）

ＮａＯＭｅ（１０ｍＬ、０.５ＭのＭｅＯＨ溶液）を、化合物６（３.３９ｇ、６.６３ｍｍｏｌ）を溶解したＭｅＯＨ溶液（６０ｍＬ）に加えた。反応液を室温で２時間攪拌し、Ｄｏｗｅｘ ５０ ＷＸ８（Ｈ^＋型）を加えることにより溶液を中性化して、中性のｐＨとした。ビーズ（beads）を濾去し、溶媒を回転蒸発により、続いて高減圧下で除去した。生成物７を、定量的収率で得た（２.６６ｇ）。¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) 1.08 (s, 9H), 3.64 (dd, 1H, J = 11.5, 5.5), 3.71 (dd, 1H, J = 11.4, 3.9), 3.73- 3.77 (m, 2H), 3.85- 3.90 (m, 1H), 3.95 (dd, 1H, J = 9.6, 4.7), 4.15 (dd, 1H, J = 6.1, 4.2), 4.39- 4.43 (m, 1H), 7.37- 7.51 (m, 6H), 7.58- 7.74 (m, 4H).

工程ｆ）

化合物７（１.４ｇ、３.２７ｍｍｏｌ）をクロロホルム（１０ｍＬ）およびピリジン（４.７７ｍＬ、５８.９ｍｍｏｌ）に溶解し、ドライアイス（アセトン浴）で冷却した。ＳＯ_２Ｃｌ_２（１.５６ｍＬ、１９.６ｍｍｏｌ）を加え、浴をその後で除去した。反応混合物を終夜攪拌し、時間とともに暗くなった。１６時間後、反応混合物をＤＣＭ（１５ｍＬ）で希釈し、１０％クエン酸（水）（１５ｍＬ）およびＮａＨＣＯ_３（飽和水）（１５ｍＬ）で洗浄した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮した。褐色の油状物をＭｅＯＨ（１０ｍＬ）に溶解し、約０.５ｍＬのＮａＩ［０.８％のＭｅＯＨ：Ｈ_２Ｏ（１：１）溶液］を、１５分間攪拌した溶液に加えた。次いで溶媒を蒸発させ、粗生成物をフラッシュ・カラム・クロマトグラフィーで精製し（ヘプタン：酢酸エチル＝４：１）、化合物８を得た（収率６８％）。¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) 1.10 (s, 9H), 3.80- 3.85 (m, 2H), 3.89 (dd, 1H, J = 12.1, 5.8), 3.96 (dd, 1H, J = 9.7, 3.8), 4.00 (dd, 1H, J = 12.3, 2.6), 4.15 (ddd, 1H, J = 9.7, 5.9, 2.6), 4.32- 4.36 (m, 2H), 7.35- 7.52 (m, 6H), 7.58- 7.75 (m, 4H).

工程ｇ）

ＰＰｈ_３（８８２ｍｇ、３.３６ｍｍｏｌ）を、化合物８（１.０４ｇ、２.２４ｍｍｏｌ）を溶解したＭｅＯＨ（５０ｍＬ）およびＨ_２Ｏ（５ｍＬ）溶液に加えた。反応液を室温で終夜攪拌した。ＬＣ−ＭＳは出発物質の存在を全く示さなかったが、微小量の環化生成物を示した。ＴＥＡ（９.３８ｍＬ、６７.２ｍｍｏｌ）およびＨ_２Ｏ（５ｍＬ）を溶液に加え、５０℃まで加熱した。４時間後、ＬＣ−ＭＳは非環化（non−cyclized）アミンを示さなかった。溶媒を蒸発させ、粗生成物をフラッシュ・クロマトグラフィー（ヘプタン：酢酸エチル＝３：２）で精製し、生成物９を得た（収率５４％、０.４９ｇ）。LRMS (M+H) 402. ¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) 1.06 (s, 9H), 2.71 (dd, 1H, J = 11.1, 10.4), 3.18 (dd, 1H, J = 11.2, 7.0), 3.73 (d, 1H, J = 4.7), 3.78 (dd, 1H, J = 9.8, 3.5), 3.84 (dd, 1H, J = 9.8, 2.0), 3.95 (ddd, 1H, J = 10.2, 7.1, 4.1), 4.16- 4.19 (m, 1H), 4.66 (dd, 1H, J = 4.4, 4.4), 7.35- 7.46 (m, 6H), 7.61- 7.67 (m, 4H).

工程ｈ）

ＢＯＣ無水物（０.５２ｇ、２.４０ｍｍｏｌ）を、化合物９（０.４８ｇ、１.２０ｍｍｏｌ）を溶解したＭｅＯＨ：ＴＥＡ（９：１、５０ｍＬ）溶液に加えた。反応液を終夜攪拌し、その後溶媒を減圧下で濃縮により除去した。粗生成物をフラッシュ・カラム・クロマトグラフィーで精製し［ヘプタン：酢酸エチル（４：１→２：１）］、生成物１０を定量的収率で得た（０.６０ｇ）。¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) 1.07 (s, 9H), 1.24- 1.46 (m, 9H)^＊, 3.05 (dd, 1H, J = 10.4, 10.4), 3.56 (d, 1H, J = 9.7), 3.70- 3.89 (m, 1H)^＊, 3.90- 4.15 (m, 2H)^＊, 4.24− 4.89 (m, 3H)^＊, 7.34− 7.47 (m, 6H), 7.59- 7.78 (m, 4H). ＊回転異性体

工程ｉ）

フッ化テトラブチルアンモニウム（１.７９ｍＬ、１.７９ｍｍｏｌ）を、化合物１０（０.６０ｇ、１.１９ｍｍｏｌ）を溶解したＴＨＦ溶液（１２ｍＬ）に加えた。反応液を室温で３時間攪拌し、溶媒を減圧下で濃縮することにより除去した。粗生成物をフラッシュ・カラム・クロマトグラフィーで精製し［ヘプタン：酢酸エチル（１：１→０：１）］、化合物１１を得た（収率９４％、０.２９ｇ）。¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) 1.45- 1.52 (m, 9H)^＊, 3.16- 3.32 (m, 1H)^＊, 3.83− 4.22 (m, 5H)^*, 4.41− 4.54 (m, 1H)^＊, 4.66- 4.71 (m, 1H)^＊. ＊回転異性体

工程ｊ）

デス・マーチンペルヨージナン（０.６０ｇ、１.４２ｍｍｏｌ）を、化合物１１（０.３４ｇ、１.２９ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＣＭに溶解した溶液に加えた。ＴＬＣによって反応が完了したと見なされたとき、反応液をＮ_２下で２時間攪拌した。溶液を、１０％Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３（水）およびＮａＨＣＯ_３（飽和水）の１：１混合物で、３回洗浄した（３×２０ｍＬ）。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮し、粗生成物をフラッシュ・クロマトグラフィー（ヘプタン：酢酸エチル＝３：１）で精製して、化合物１２を得た（収率８４％、２８４ｍｇ）。¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) 1.48 (s, 9H), 3.45 (dd, 1H, J = 11.3, 9.0), 4.01- 4.17 (m, 2H), 4.19- 4.41 (m, 3H), 4.68- 4.87 (m, 1H).

工程ｋ）

予め混合したＡｃＣｌ（４２μＬ、０.６０１ｍｍｏｌ）およびＭｅＯＨ（５ｍＬ）の溶液を、化合物１２（２６３ｍｇ、１.０１ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。２時間攪拌した後、さらにＡｃＣｌ（０.９８ｍＬ、１４ｍｍｏｌ）を加え、再び１６時間攪拌した後、さらなるlＡｃＣｌ（９.８ｍＬ、１４０ｍｍｏｌ）を加えた。まもなく反応を完了させ、その後減圧下で濃縮し、続いて全ての残留溶媒を減圧下で除去し、化合物１３を得た（粗収率１０３％、２５３ｍｇ）。¹H NMR (CDCl₃, 400 MHz) 3.34 (s, 3H), 3.40 (s, 3H), 3.76 (d, 1H, J = 10.6), 3.72- 3.90 (m, 1H), 4.15 (d, 1H, J = 10.4), 4.34 (d, 1H, J = 4.6), 4.50- 4.60 (m, 1H), 4.69- 4.75 (m, 1H), 4.83 (s, 1H).

実施例２
Ｐ−２にＬ−Ｌｅｕをカップリング

ＤＩＥＡ（３０４μＬ、１.８４ｍｍｏｌ）およびＢＯＣ−Ｌｅｕ（１１７ｍｇ、０.５０６ｍｍｏｌ）を粗製化合物１３（１１２ｍｇ、０.４６０ｍｍｏｌ）に加え、ＤＭＦ（６ｍＬ）に溶解した。反応フラスコを氷浴中で１０分間冷却し、ＨＡＴＵ（１９３ｍｇ、０.５０６ｍｍｏｌ）を添加した。反応液を室温で３時間攪拌し、減圧下で濃縮した。粗製残渣をＣＨＣｌ_３（１５ｍＬ）に溶解し、１０％クエン酸（水）（１０ｍＬ）およびＮａＨＣＯ_３（飽和水）（１０ｍＬ）で洗浄した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、蒸発させた。粗生成物をフラッシュ・クロマトグラフィー［ヘプタン：酢酸エチル（２：１→１：１）］で精製し、生成物１４を得た（収率６２％、１２１ｍｇ）。

実施例３
Ｐ３構成要素
４−［５−メチル−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］安息香酸

工程ａ）４−シアノプロピオフェノン

４−シアノアセトフェノンの製造で記載されているように（Synth. Commun 1994, 887-890）、４−ブロモプロピオフェノン（５.６５ｇ、２６.４ｍｍｏｌ）、Ｚｎ（ＣＮ）_２（１.８０ｇ、１５.３ｍｍｏｌ）、およびＰｄ（ＰＰｈ_３）_４（２.９５ｇ、２.６ｍｍｏｌ）の混合物を、８０℃、脱酸素ＤＭＦ溶液（３５ｍＬ、４Åモレキュラ・シーブスで貯蔵、用いる前にＡｒでバブリング）中で１８時間還流した。混合物を、トルエン（１００ｍＬ）およびＮＨ_４ＯＨ（２Ｎ、１００ｍＬ）で分液処理した。有機相をＮＨ_４ＯＨ（２Ｎ、１００ｍＬ）で抽出し、飽和ＮａＣｌ水（２×１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し、減圧下で濃縮した。１０ｍｍｏｌスケールの反応を同じように行い、粗生成物を合わせた。フラッシュ・クロマトグラフィー（３３０ｇシリカ、６／１石油エーテル−ＥｔＯＡｃ）により、目的の化合物を白色の固形物として得た（５.１７ｇ、８９％）。¹H NMR (CDCl₃) δ ppm: 1.22 (t, 3H, J = 7.2 Hz), 3.00 (q, 2H, J = 7.3 Hz), 7.75 (d, 2H, J = 8.8 Hz), 8.03 (d, 2H, J = 8.4 Hz)¹³C NMR (CDCl₃) δ ppm: 7.8, 32.1, 116.1, 117.9, 128.3, 132.4, 139.7, 199.2

工程ｂ）４−プロピオニル安息香酸

４−シアノプロピオフェノン（４.６７ｇ、２９.３ｍｍｏｌ）を、ＮａＯＨ（２Ｎ、９０ｍＬ、１８０ｍｍｏｌ）およびジオキサン（９０ｍＬ）で、９５℃終夜還流した。混合物を水（１５０ｍＬ）で希釈し、エーテル（７５ｍＬ）で洗浄し、濃ＨＣｌでｐＨ２まで酸性化し、、エーテル抽出した（３×７５ｍＬ）。有機相を飽和ＮａＣｌ水（３×７５ｍＬ）で洗浄し、乾燥し、濃縮し黄色の固形物を得た（５.１２ｇ、９８％）。¹H NMR (CDCl₃ + CD₃OD) δ ppm: 1.18 (t, 3H, J = 7.2 Hz), 2.99, (q, 2H, J = 7.1 Hz), 7.95 (d, 2H, J = 8.4 Hz), 8.08 (d, 2H, J = 8.8 Hz)¹³C NMR (CDCl₃) δ ppm: 7.9, 32.1, 127.7, 130.0, 134.0, 140.0, 168.0, 200.8

工程ｃ）４−プロピオニル安息香酸メチル

上記の安息香酸（８９０ｍｇ、５ｍｍｏｌ）、ＮａＨＣＯ_３（１.２６ｇ、１５ｍｍｏｌ）およびヨードメタン（９３５μＬ、１５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（１０ｍＬ）を室温で終夜攪拌した。混合物を飽和ＮａＣｌ水（５０ｍＬ）で希釈し、エーテル抽出した（３×５０ｍＬ）。有機相を水（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し、濃縮した。フラッシュ・クロマトグラフィー（９０ｇシリカ、２／１石油エーテル−ＥｔＯＡｃ）白色の固形物を得た（７４４ｍｇ、７７％）。¹H NMR (CDCl₃) δ ppm: 1.24 (t, 3H, J = 7 Hz), 3.03 (q, 2H, J = 7 Hz), 3.95 (s, 3H), 8.0 and 8.12 (ABq, 4H)

工程ｄ）４−（２−ブロモプロピオニル）安息香酸メチル

４−プロピオニル安息香酸メチル（７４４ｍｇ、３.８７ｍｍｏｌ）、ピロリドンヒドロトリブロミド（１.９８g）、および２−ピロリジノン（３８０ｍｇ、４.５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（３８ｍＬ）を窒素下で３時間、５０℃で加熱した。混合物を冷却し、濾過し、減圧下で濃縮し、次いで再びエーテル（５０ｍＬ）で溶解した。エーテル溶液を連続して、水（２０ｍＬ）、飽和Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_５水（２０ｍＬ）、飽和ＮａＣｌ水（２０ｍＬ）、および水（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し、減圧下で濃縮して黄色の油状物を得た（１.０２５ｇ）。それを直接、Ｈａｎｔｚｓｃｈカップリングに用いた。この物質は、目的のブロモケトンを９１％、最初のケトンを５％、および４−ブロモ−１−ブタノールを４％含むことが、^１ＨＮＭＲで分かった。¹H NMR (CDCl₃) δ ppm: 1.92 (d, 3H, J = 7 Hz), 3.96 (s, 3H), 5.28 (q, 1H, J = 7 Hz), 8.07 and 8.14 (ABq, 4H)

工程ｅ）４−［２−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルピペラジン−１−イル）−５−メチルチアゾール−４−イル］安息香酸 メチル エステル

全ての上記α−ブロモケトンおよび４−チオノカルボニルピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（J. Med. Chem., 1998, 5037-5054, ９１７ｍｇ、３.７３ｍｍｏｌ）を、７０℃のＴＨＦ溶液（３６ｍＬ）中、２時間、Ｎ_２下で還流した。沈殿物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮し、黄色の固形物を得た。フラッシュ・カラム・クロマトグラフィー（シリカ、５／１石油エーテル−ＥｔＯＡｃ）で、淡黄色の固形物を得た（６２４ｍｇ）。沈殿物のクロマトグラフィー（シリカ、２／１石油エーテル−ＥｔＯＡｃ）で、さらに３２ｍｇの化合物を得た。全収率は４４％であった。¹H NMR (CDCl₃) δ ppm: 1.46 (s, 9H), 2.43 (s, 3H), 3.42, (m, 4H), 3.54 (m, 4H), 3.90 (s, 3H), 7.68 and 8.04 (ABq, 4H).

工程ｆ）４−［２−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルピペラジン−１−イル）−５−メチルチアゾール−４−イル］安息香酸

上記のメチルエステル（５６４ｍｇ、１.３５ｍｍｏｌ）をＮａＯＨ（１.３５ｍＬ、２Ｎ）、ＴＨＦ（５ｍＬ）、および水（３.６５ｍＬ）と一緒に、６０℃で４時間加熱した。反応混合物を蒸発させ、飽和ＮａＣｌ水（２０ｍＬ）およびＣＨ_２Ｃｌ_２（２０ｍＬ）を注ぎ、次いで５％クエン酸を用いて氷浴でｐＨ３に酸性化した。層を分離し、さらに有機相を抽出した（２×１０ｍＬ、ＣＨ_２Ｃｌ_２）。有機相を合わせて、水（１０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し、減圧下で濃縮し淡黄色の固形物を得た（５３７ｍｇ、９８％）。¹H NMR (CDCl₃) δ ppm: 1.48 (s, 9H), 2.47 (s, 3H), 3.47 (m, 4H), 3.57 (m, 4H), 7.74 and 8.12 (ABq, 4H). ¹³C NMR (CDCl₃) δ ppm: 12.6, 28.3, 42.8, 48.1, 80.3, 119.1, 127.8, 128.2, 130.1, 140.5, 145.6, 154.6, 167.2, 171.4. LCMS: (M + H)⁺ 404, (M - H)^- 402.

工程ｇ）４−［５−メチル−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］安息香酸

４−［４−（４−カルボキシフェニル）−５−メチルチアゾール−２−イル］−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（０.４２１ｍｍｏｌ）を、ＨＣｌ（４Ｍ）の１，４−ジオキサン溶液に溶解し、室温で１時間攪拌した。次いで溶媒を減圧下で除去し、残渣である４−（５−メチル−２−ピペラジン−１−イル−チアゾール−４−イル）−安息香酸をメタノール溶液（１０ｍＬ）中で懸濁し、ＡｃＯＨ／ＡｃＯＮａ緩衝液（ｐＨ〜５.５、５ｍＬ）およびホルムアルデヒド（０.５４７ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を室温で１時間攪拌し、次いでＮａＣＮＢＨ_３（０.５４７ｍｍｏｌ）で処理し、室温で終夜攪拌した。次いで溶媒を減圧下で除去し、残渣をカラム・クロマトグラフィーで精製し、表題化合物を得た（０.４０３ｍｍｏｌ、９５％）。MS(ES) m/z 318 (100%, ［M+H］^＋）。

実施例４

塩化アセチル（０.４ｍＬ）を、化合物１４（０.１２１ｇ、０.２８８ｍｍｏｌ）のメタノール溶液（４ｍＬ）に、０℃で滴下して加えた。次いで反応混合物を室温で終夜攪拌し、次いで減圧下で濃縮した。残渣を２回乾燥ＤＭＦ溶液（５ｍＬ）中で溶解し、乾固するまで濃縮し、次いで再びＤＭＦ溶液（６ｍＬ）に溶解した。４−［５−メチル−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−安息香酸ＨＣｌ（１１２ｍｇ、０.３１６ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（１９０μＬ、１.１５ｍｍｏｌ）を溶液に加え、それを０℃に冷却し、ＨＡＴＵ（１２０ｍｇ、０.３１６ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で３時間攪拌し、溶媒を回転蒸発により除去した。粗混合物をＣＨＣｌ_３（１５ｍＬ）に溶解し、１０％クエン酸（水）（１０ｍＬ）およびＮａＨＣＯ_３（飽和水）（１０ｍＬ）で洗浄した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、蒸発させた。粗生成物をフラッシュ・カラム・クロマトグラフィーで精製し（酢酸エチル：アセトン＝１：１ ＋ ０.２％ＴＥＡ）、生成物を無色の油状物／固形物として得た（収率８４％、１５０ｍｇ）。LRMS (M+H) 620. NMR (CDCl₃, 400 MHz) 主要な回転異性体に関する (13:1 回転異性体混合物): 0.98 (d, 3H, J = 6.5), 1.04 (d, 3H, J = 6.4), 1.55- 1.89 (m, 3H), 2.34 (s, 3H), 2.42 (s, 3H), 2.49- 2.54 (m, 2H), 3.25 (s, 3H), 3.43 (s, 3H), 3.45- 3.51 (m, 3H), 3.72 (d, 1H, J = 10.5), 3.91 (d, 1H, J = 10.5), 4.05- 4.15 (m, 1H), 4.46- 4.53 (m, 1H), 4.59 (dd, 1H, J = 5.2, 5.1), 4.74 (d, 1H, J = 5.6), 4.96- 5.04 (m, 1H), 6.83 (d, 1H, J = 8.0), 7.68 (d, 2H, J = 8.3), 7.79 (d, 2H, J = 8.5).

実施例５

化合物１５（１３７ｍｇ、０.２２０ｍｍｏｌ）をＴＦＡ：Ｈ_２Ｏ（９７.５：２.５、２０ｍＬ）に溶解し、４時間攪拌した。溶媒を減圧下で除去し、粗生成物を予めシリカに吸収させ、フラッシュ・カラム・クロマトグラフィーで精製し（ＥｔＯＡｃ：アセトン＝１：２、０.２％ＴＥＡ）、生成物（ジオキサンから凍結乾燥）をオフ・ホワイトの固形物としてを得た（収率７１％、９０ｍｇ）。NMR (CDCl₃, 400 MHz) 主要な回転異性体に関する (10:1 回転異性体混合物): 0.98 (d, 3H, J = 6.5), 1.02 (d, 3H, J = 6.2), 1.58- 1.86 (m, 3H), 2.34 (s, 3H), 2.42 (s, 3H), 2.50- 2.54 (m, 2H), 3.44- 3.53 (m, 2H), 3.68 (dd, 1H, J = 10.4, 8.8), 4.11 (d, 1H, J = 17.2), 4.29 (d, 1H, J = 17.3), 4.36- 4.44 (m, 1H), 4.59 (dd, 1H, J = 10.5, 7.1), 4.81 (d, 1H, J = 5.8), 4.87- 4.97 (m, 2H), 6.83 (d, 1H, J = 7.9), 7.68 (d, 2H, J = 8.4), 7.79 (d, 2H, J = 8.5).

実施例６
Ｎ−［（Ｓ）−１−（（３ａＳ，６Ｒ，６ａＳ）−６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−メチル−ブチル］−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］ベンズアミド

工程ａ）

攪拌した、粗化合物１２（約０.５６ｍｍｏｌ）のオルトギ酸トリメチル（０.８ｍＬ）およびメタノール（３ｍＬ）溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（ｐ−ＴｓＯＨ、０.００７ｇ、０.０３７ｍｍｏｌ）を加え、次いで５０℃で終夜加熱した。次いで反応混合物をＴＬＣ（３：２ヘキサン−酢酸エチル、ニンヒドリン染色）でモニターした。反応混合物を６０℃に加熱し、ｐ−ＴｓＯＨ（総量２１ｍｇ）を４時間かけて加え、Ｂｏｃ−脱保護ケタールを主要な生成物として得た（ＴＬＣにより示された）。次いで反応混合物を室温まで冷却し、トリエチルアミン（０.３２ｍＬ、２.２４ｍｍｏｌ）を加え、続いて炭酸−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（０.１８４ｇ、０.８４ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２.５時間置き、次いで減圧下で濃縮し、予めシリカに吸収した。残渣をフラッシュ・カラム・クロマトグラフィー（段階グラジエント溶離、酢酸エチルのヘキサン溶液、２０〜２５％）し、続いて適当なフラクションを減圧下で濃縮し、真空ラインで終夜さらに乾燥して残留溶媒を除去し、生成物３１をオフ・ホワイトの固形物として得た（０.０６９ｇ、０.０２２ｍｍｏｌ、２段階で４０％）。NMR data (400 MHz, 298 K, CDCl₃): 1H, δ 1.47 (s, 9 H), 3.16 (m, 1 H), 3.30 (s, 3 H), 3.37 (s, 3 H), 3.72 (d, 1 H, J 9.3 Hz), 3.86 (m, 1 H), 3.98 (m, 1 H), 4.15 (m, 1 H), 4.44 (d, 1 H, J 5.4 Hz), 4.61 (m, 1 H).

工程ｂ）

攪拌した、化合物３１（０.０７４ｇ、０.２４ｍｍｏｌ）のメタノール（２.７ｍＬ）溶液に、０℃で塩化アセチル（０.３ｍＬ）を１分かけて滴下して加えた。反応混合物をＴＬＣ（ヘキサン−酢酸エチル３：２およびジクロロメタン−メタノール９５：５、ニンヒドリン染色）でモニターし、４.５時間後に出発物質は完全に消費された。次いで反応混合物を減圧下で濃縮し、数滴のＨ_２Ｏと一緒にジオキサン溶液中で再び溶解し、凍結乾燥した。得たオフ・ホワイトの無定形固形物おおびＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−ロイシン一水和物（０.０６６ｇ、０.２６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ溶液に溶解し（３ｍＬ）、減圧下で濃縮した。次いで残渣を再びＤＭＦ溶液（３ｍＬ）に溶解し、Ｎ−エチルジイソプロピルアミン（０.１３ｍＬ、０.７２ｍｍｏｌ）を加えた。この溶液に、Ｎ−Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ、０.１２ｇ、０.３１ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を０℃で４０分間保ち、さらに７５分間室温で保った。次いで反応混合物を酢酸エチル（２５ｍＬ）で希釈し、１０％クエン酸水（３回、１５ｍＬ）および飽和炭化水素ナトリウム水（３回、１５ｍＬ）で連続して洗浄し、次いで乾燥し（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣のシリカゲル・フラッシュ・カラム・クロマトグラフィーは、２：１ヘキサン−酢酸エチルを溶離液として用い、続いて適当なフラクションを減圧下で濃縮して、化合物３２ｂを無色のシロップとして得た（０.０８９ｇ、０.２１ｍｍｏｌ、８８％）。それを次の工程でそのまま用いた。

工程ｃ

化合物３２ｂ（０.０８９ｇ、０.２１ｍｍｏｌ）のメタノール溶液（２.７ｍＬ）に、０℃で塩化アセチル（０.３ｍＬ）を０.５分かけて滴下して加えた。次いで反応混合物を室温で５.５時間攪拌し（ＴＬＣによりモニター：ジクロロメタン−メタノール９５：５、モリブデン酸アンモニウム−セリウム硫酸塩の１０％硫酸水で染色）、次いで減圧下で濃縮した。残渣を再びジオキサン溶液（５ｍＬ）に溶解し、少量の水を加え、次いで溶液を凍結乾燥した。得た無色の無定形固形物および４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）チアゾール−４−イル］安息香酸ＨＢｒ塩（０.０８９ｇ、０.２３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ溶液に溶解し（３ｍＬ）、次いでＮ−エチルジイソプロピルアミン（０.１５ｍＬ、０.８５ｍｍｏｌ）を加え、溶液を０℃に冷却し、ＨＡＴＵ（０.１０５ｇ、０.２７５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を０℃で１時間攪拌し、さらに１時間室温で攪拌した（ＴＬＣによりモニター：ジクロロメタン−メタノール９５：５、紫外線により視覚化、およびモリブデン酸アンモニウム−セリウム硫酸塩の１０％硫酸水で染色）。次いで反応混合物を酢酸エチル（２５ｍＬ）で希釈し、飽和炭化水素ナトリウム水／食塩水（３：１、３回、２０ｍＬ）で洗浄し、次いで乾燥し（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣のフラッシュ・カラム・クロマトグラフィーは段階グラジエント溶離（メタノールのジクロロメタン溶液、０〜５％）を用い、続いて適当なフラクションを減圧下で濃縮し、ジオキサン（５ｍＬ）および数滴の水から凍結乾燥し、生成物３２ｃを無色の無定形固形物として得た（０.１２１ｇ、０.２０ｍｍｏｌ、９４％）。

工程ｄ）

化合物３２ｃ（０.１１４ｇ、０.１８８ｍｍｏｌ）に、ＴＦＡ−水（９７.５：２.５、６ｍＬ）溶液を室温で加え、得られた溶液をＬＣ−ＭＳによりモニターし、２時間攪拌した後、反応混合物を室温、減圧下で濃縮した。残渣を再び酢酸エチル溶液（２５ｍＬ）に溶解し、飽和炭化水素ナトリウム水（３×１５ｍＬ）および食塩水（１×１５ｍＬ）で洗浄し、次いで乾燥し（硫酸ナトリウム）、濾過し、減圧下で濃縮した。残渣として得た無定形固形物を、ＤＭＳＯ−アセトニトリル−水−ジオキサン溶液（約１２ｍＬ）に溶解し、プレパラティブＨＰＬＣ−ＭＳ［カラム：Ｓｕｎｆｉｒｅ １９×１００ｍｍ（Ｃ１８）、溶離液Ａ：１０ｍＭ酢酸アンモニウム水溶液、溶離液Ｂ：１０ｍＭ酢酸アンモニウムのアセトニトリル−水（９：１）溶液、グラジエント：８分で３０％Ｂ〜８０％Ｂ、流速：２０ｍＬ／分］で精製した。適当なフラクションを減圧下で濃縮した。残渣を数滴の水と一緒に再びジオキサン溶液に溶解し、凍結乾燥し、化合物３２ｄをオフ・ホワイトな黄色の無定形固形物として得た（０.０５５ｇ、０.１０ｍｍｏｌ、５２％）。得た生成物の一定分量をＣＤＣｌ_３に溶解し、ＮＭＲで分析し、それは生成物が９：１回転異性体混合物でケト型（水和物型は検出不能）として存在することを示した。ＮＭＲデータは、主要な回転異性体について示す。ＨＰＬＣ−ＭＳで分析した場合、水和物型が主要な型である。NMR data (500 MHz, 293 K, CDCl₃): 1H, δ 0.96 (d, 3 H, CH₃-CH), 1.02 (d, 3 H, CH₃-CH) 1.62-1.78 (m, 3 H, CH(CH₃)2 and CH₂CH(CH₃)2), 2.37 (s, 3 H, CH₃-N), 2.56 (m, 4 H, 2 x CH₂-N), 3.59 (m, 4 H, 2 x CH₂-N), 3.70 (m, 1 H, CHH-CHCl), 4.13 (d, 1 H, CHH-O), 4.31 (d, 1H, CHH-O), 4.42 (m, 1 H, CHCl), 4.60 (m, 1 H, CHH-CHCl), 4.82 (m, 1 H, CHCl-CH), 4.90-4.96 (m, 2 H, CH-C=O and CHNH), 6.85-6.89 (m, 2 H, NH and チアゾール-H), 7.78 (d, 2 H, Ar-H), 7.89 (d, 2 H, Ar-H). LR-MS: C₂₇H₃₅ClN₅O₄Sの計算値: 560.2. 実験値: 560.3 [M+H], C₂₇H₃₇ClN₅O₅Sの計算値: 578.2. 実験値: 578.3.

実施例７
Ｎ−［２−（（３ａＳ，６Ｒ，６ａＳ）−６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−イル）−１−Ｓ−シクロヘキシル−２−オキソ−エチル］−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド

工程ａ）［２−（（３ａＳ，６Ｒ，６ａＳ）−６−クロロ−３，３−ジメトキシ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−イル）−１−Ｓ−シクロヘキシル−２−オキソ−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（７ａ）

ＨＣｌ塩としての（３ａＳ，６Ｒ，６ａＳ）−６−クロロ−３，３−ジメトキシ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール（１３）（０.２３ｍｍｏｌ）およびＢｏｃ−シクロヘキシル−Ｇｌｙ−ＯＨ（６４.４ｍｇ、０.２５ｍｍｏｌ）をＤＭＦから共蒸発させ、ＤＭＦ溶液（３ｍＬ）に再び溶解し、氷浴中で冷却した。ＤＩＥＡ（１６０μＬ、０.９２ｍｍｏｌ）、続いてＨＡＴＵ（１０８ｍｇ、０.２８ｍｍｏｌ）を加えた。２０分後、混合物を室温で２時間２０分攪拌し、減圧濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ溶液（１０ｍＬ）に溶解し、１０％クエン酸（５ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ_３（５ｍＬ）、および飽和ＮａＣｌ（２×５ｍＬ）で連続して洗浄した。有機相を乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濃縮した。フラッシュ・カラム・クロマトグラフィー（シリカ、２／１ペンタン−ＥｔＯＡｃ）により、白色の固形物を得た（８６.６ｍｇ、収率８４％）。LCMS [M+23]⁺ = 469

工程ｂ）Ｎ−［２−（（３ａＳ，６Ｒ，６ａＳ）−６−クロロ−３，３−ジメトキシ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−イル）−１−Ｓ−シクロヘキシル−２−オキソ−エチル］−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド（７ｂ）

塩化アセチル（０.２５ｍＬ）を、氷冷した、上記カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（８６.６ｍｇ、０.１９４ｍｍｏｌ）のメタノール溶液（２.２０ｍＬ）に加え。混合物を室温で３時間４５分攪拌し、蒸発させた。ジオキサン−水から凍結乾燥し、脱保護アミンＨＣｌ塩を得て、次いでまずそれを４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）チアゾール−４−イル］安息香酸ＨＢｒ塩（８３ｍｇ、０.２２ｍｍｏｌ）でＤＭＦから共蒸発させ、次いでＤＭＦ溶液（２.５ｍＬ）に再び溶解した。混合物を氷浴中で冷却し、ＤＩＥＡ（１４０μＬ、０.８０ｍｍｏｌ）を加え、続いてＨＡＴＵ（８３.８ｍｇ、０.２２ｍｍｏｌ）を加えた。１５分後、混合物を室温で２.５時間攪拌した。混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ_３（１０ｍＬ）および飽和ＮａＣｌ（２×１０ｍＬ）で連続して洗浄した。有機相を乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濃縮した。フラッシュ・カラム・クロマトグラフィー（シリカ、ＣＨ_２Ｃｌ_２−ＭｅＯＨ−Ｅｔ_３Ｎ））により、白色の固形物を得た（１２１.２ｍｇ、収率９９％）。LCMS [M+1]⁺ = 632

工程ｃ）Ｎ−［２−（（３ａＳ，６Ｒ，６ａＳ）−６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−イル）−１−Ｓ−シクロヘキシル−２−オキソ−エチル］−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド（７ｃ）

上記のジメトキシエーテル（１１５ｍｇ、０.１８２ｍｍｏｌ）を、室温で２時間１５分攪拌することにより、ＴＦＡ−水（９７.５：２.５ ｖ／ｖ、６.０ｍＬ）溶液で脱保護した。混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃ溶液（２５ｍＬ）に溶解し、飽和ＮａＨＣＯ_３（３×１５ｍＬ）および飽和ＮａＣｌ（１５ｍＬ）で連続して洗浄した。有機相を乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、蒸発させた。粗製物質をＨＰＬＣ−ＭＳ（カラム；Ｓｕｎｆｉｒｅ ＰｒｅｐＣ_１８ＯＢＤ ５μｍ １９×１００ｍｍ：グラジエント６０〜８０％ＢのＡ溶液、移動相Ａ；１０ｎＭＮＨ_４ＯＡｃ水溶液およびＢ；１０ｍＭＮＨ_４ＯＡｃの９０％ＭｅＣＮ溶液）で精製し、最終化合物を白色の固形物として得た（６３ｍｇ、収率５９％）。LCMS ES+ = 604 (水和物) and ES+ = 586 (ケトン)¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ ppm 7.90 and 7.78 (ABq, 2H each, 6.89 (s, 1H), 6.83 (d, 1H, NH), 4.91 (m, 1H), 4.86 (m, 1H), 4.69 (m, 1H), 4.62 (dd, 1H), 4.40 (m, 1H), 4.32 and 4.14 (ABq, 1H each), 3.72 (dd, 1H), 3.60 (m, 4H), 2.58 (m, 4H), 2.38 (s, 3H), 2.10 - 1.04 (m, 11H)

実施例８
Ｎ−［（Ｓ）−１−（（３ａＳ，６Ｒ，６ａＳ）−６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−フルオロ−３−メチル−ブチル］−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］ベンズアミド

工程ａ）

塩化アセチル（０.４ｍＬ）を、化合物１１（６０ｍｇ、０.２２８ｍｍｏｌ）のメタノール溶液（４ｍＬ）に０℃で滴下して加えた。反応混合物を室温で６時間攪拌し、濃縮し、再び１，４−ジオキサン溶液に溶解し、終夜凍結乾燥した残渣をＤＭＦ溶液（５ｍＬ）に溶解した。γ−フルオロ−Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ（Truong et al SynLett 2005 No 8 1279-1280, ５０ｍｇ、０.２０１ｍｍｏｌ）およびＤＩＥＡ（１３３μＬ、０.８０２ｍｍｏｌ）を溶液に加え、０℃に冷却し、ＨＡＴＵ（８０ｍｇ、０.２１１ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で３時間攪拌し、溶媒を減圧下で濃縮した。生成物をＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）に溶解し、ＮａＨＣＯ_３（飽和水）（１０ｍＬ）で洗浄した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮した。生成物をフラッシュ・クロマトグラフィーで精製し（酢酸エチル）、生成物４２を得た（収率９９％、７９ｍｇ）。

工程ｂ）

塩化アセチル（０.４ｍＬ）を、化合物４２（７９ｍｇ、０.１９９ｍｍｏｌ）のメタノール溶液（４ｍＬ）に０℃で滴下して加えた。反応混合物を室温で６時間攪拌し、濃縮し、再び１，４−ジオキサン溶液に溶解し、終夜凍結乾燥した残渣をＤＭＦ溶液（５ｍＬ）に溶解した。４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−安息香酸ＨＢｒ（７６ｍｇ、０.１９８ｍｍｏｌ）。ＤＩＥＡ（１１９μＬ、０.７２１ｍｍｏｌ）を溶液に加え、０℃に冷却し、ＨＡＴＵ（７２ｍｇ、０.１８９ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で３時間攪拌し、溶媒を減圧下で除去した。生成物をＣＨＣｌ_３溶液（１５ｍＬ）に溶解し、ＮａＨＣＯ_３（飽和水）（１０ｍＬ）で洗浄した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、蒸発させた。生成物をフラッシュ・クロマトグラフィー（クロロホルム：エタノール７：３＋０.１％ＴＥＡ）で精製し、十分純粋な化合物４３を得て、それを次の工程でそのまま用いた。

工程ｃ）

化合物４３（１０４ｍｇ、０.１９８ｍｍｏｌ）（不純）を、ＤＣＭ：ＤＭＳＯ（２：１、９ｍＬ）に溶解した。ＴＥＡ（１１１μＬ、０.７９７ｍｍｏｌ）を加え、続いてＳＯ_３ ^＊ピリジン（４８ｍｇ、０.２９９ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で攪拌し、ＬＣ−ＭＳでモニターした。４時間後、さらなる量のＳＯ_３ ^＊ピリジン（４８ｍｇ）を加え、さらに４時間後さらなる量を加えた。２２時間後（終夜）、さらなる量を加え、さらに２時間後、最後の量（finishing portion）を加えた。溶液をＤＣＭ（４０ｍＬ）と分液漏斗に注ぎ、ＮａＨＣＯ_３（飽和水）（２０ｍＬ）で洗浄した。有機相をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、減圧下で濃縮した。生成物をセミプレパラティブＨＰＬＣで精製した［Ｓｕｎｆｉｒｅ Ｃ１８ カラムで、移動相Ａ（９０：１０＝Ｈ_２Ｏ：アセトニトリル、１０ｍＭ ＮＨ_４Ａｃ）およびＢ（１０：９０＝Ｈ_２Ｏ：アセトニトリル、１０ｍＭ ＮＨ_４Ａｃ）で４０〜７５％Ｂ］。生成物をオフ・ホワイトの固形物として得た（収率２９％、３０ｍｇ）。NMR (CDCl₃, 400 MHz): 1.37- 1.52 (m, 6H), 2.10- 2.30 (m, 2H), 2.37 (s, 3H), 2.58- 2.63 (m, 2H), 3.57- 3.62 (m, 2H), 3.73 (dd, 1H, J = 10.5, 8.7), 4.10 (d, 1H, J = 16.9), 4.28 (d, 1H, J = 16.9), 4.43- 4.50 (m, 1H), 4.71 (dd, 1H, J = 10.6, 6.9), 4.78 (d, 1H, J = 6.0), 4.87- 4.93 (m, 1H), 4.95- 5.03 (m, 1H), 6.86 (s, 1H), 7.37 (d, 1H, J = 7.3), 7.73 (d, 2H, J = 8.3), 7.82 (d, 2H, J = 8.6).LRMS (M+H) 578.

実施例９
別のＰ３構成要素
３−フルオロ−４−［２−（４−メチルピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］安息香酸ＨＣｌ塩
工程ａ）４−ブロモ−３−フルオロ安息香酸メチル（９ａ）

４−ブロモ−３−フルオロ安息香酸（２.４６ｇ、１１.２ｍｍｏｌ）を、ＭｅＯＨ（９ｍＬ）およびトルエン（４ｍＬ）に溶解し、氷浴中で冷却した。（トリメチルシリル）ジアゾメタン（１１ｍＬ、２.０Ｍのヘキサン溶液、２２ｍｍｏｌ）を滴下して加え、持続的に黄色にした。溶液を室温で４０分間攪拌し、次いで減圧下で濃縮した。カルボン酸（２.４３ｇ）の２つ目のバッチも同じように処理した。両方のバッチからの粗生成物を合わせて、フラッシュ・クロマトグラフィー（シリカ、５／１ペンタン−ＥｔＯＡｃ）をして、メチルエステルを白色の固形物として得た（４.９２ｇ、収率９５％）。¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) delta ppm 7.77 (m, 1H), 7.71 (m, 1H), 7.64 (m, 1H), 3.93 (s, 3H).

工程ｂ）４−アセトキシ−３−フルオロ安息香酸メチル（９ｂ）

塩化アリル（１０５μＬ、１.２８ｍｍｏｌ）およびＴＦＡ（２０μＬ、０.２６ｍｍｏｌ）を、懸濁液した、亜鉛ダスト（４８０ｍｇ、７.３４ｍｍｏｌ）および無水臭化コバルト（ＩＩ）（９６.６ｍｇ、０.４４ｍｍｏｌ）のＭｅＣＮ溶液（４ｍＬ）に、不活性ガス下で加えた。室温で１０分間攪拌した後、工程ａ）からの臭化アリール（１.００３ｇ、５ｍＬＭｅＣＮ溶液に４.３０ｍｍｏｌ溶解）を加え、続いて無水酢酸（０.４５ｍＬ、４.７９ｍｍｏｌ）およびさらなるＭｅＣＮ（１ｍＬ）を加えた。混合物を終夜攪拌し、ＨＣｌ（１Ｍ、２０ｍＬ）でクエンチし、次いでＥｔＯＡｃ（３×２０ｍＬ）で抽出した。有機相を飽和ＮａＨＣＯ_３水（２０ｍＬ）および飽和ＮａＣｌ（２×２０ｍＬ）で連続して洗浄し、乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濃縮した。フラッシュ・クロマトグラフィー（シリカ、６／１〜４／１石油エーテル−ＥｔＯＡｃ）により、回復した臭化物（１６１.１ｍｇ、１６％）および目的のケトン（白色の固形物、３０５.５ｍｇ、３６％）を得た。NMR (CDCl₃) delta ppm: ¹H (400 MHz) 7.94-7.86 (m, 2H), 7.80 (dd, 1H, J = 11.2, 1.6 Hz), 3.95 (s, 3H), 2.67 (d, 3H, J = 4.4 Hz); 19F (376 MHz) -109.2 (m); 13C (100 MHz) 195.4 (d , J = 3.7 Hz), 165.1 (d, J = 2.2 Hz), 161.6 (d, J = 255 Hz), 135.8 (d, J = 8.1 Hz), 130.7 (d, J = 2.9 Hz), 129.0 ( d, J = 14 Hz), 125.2 (d, J = 3.6 Hz), 117.9 (d, J = 26 Hz), 52.7 (s), 31.4 (d, J = 7.3 Hz).

工程ｃ）４−（２−ブロモアセトキシ）−３−フルオロ安息香酸メチル（９ｃ）

ＴＨＦ（１０ｍＬ）および２−ピロリジノン（９１μＬ、１.２０ｍｍｏｌ）を、工程ｂ）からのケトン（１９８ｍｇ、１.０１ｍｍｏｌ）およびピロリドンヒドロトリブロミド（５３２ｍｇ、１.０７ｍｍｏｌ）の混合物に加えた。６０〜６５℃で２時間加熱した後、混合物を減圧濃縮し、次いでＥｔＯＡｃ（２０ｍＬ）および飽和Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３（１０ｍＬ）で分液処理した。水相をＥｔＯＡｃ（１０ｍＬ）で抽出した。有機相を合わせて、飽和ＮａＣｌ（２×１０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、濃縮した。フラッシュ・クロマトグラフィー（シリカ、７／１石油エーテル−ＥｔＯＡｃ）により、白色の固形物を得た［０.２６３４ｇ、目的の臭化物を８４％含む（^１９Ｆ ＮＭＲピークの積分により決定）］。NMR (CDCl₃) δ ppm: ¹H (400 MHz) 7.93 (m, 1H), 7.88 (m, 1H), 7.79 (dd, 1H, J = 11.2, 1.6 Hz), 4.50 (d, 2H, J = 2.4 Hz), 3.94 (s, 3H); 19F (376 MHz) -108.4 (m).

工程ｄ）３−フルオロ−４−［２−（４−メチルピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］安息香酸メチル（９ｄ）

ＥｔＯＨ（５.０ｍＬ）を上記ブロモケトン（１９３ｍｇ、０.７０ｍｍｏｌ）および４−メチル−ピペラジン−１−カルボチオ酸アミド（１１３ｍｇ、０.７１ｍｍｏｌ）に加え、その混合物を７０℃で２時間１５分加熱した。沈殿物を濾過し、冷ＥｔＯＨで洗浄し、減圧下で乾燥し、解析した。この手順をより大きなスケールで、ブロモケトン（１.７５ｇ、６.３６ｍｍｏｌ）で繰り返した。NMR (1/1 CDCl₃ - CD₃OD) δ ppm: ¹H (400 MHz) 8.20 (m, 1H), 7.86 (dd, 1H, J = 8.4, 1.6 Hz), 7.76 (dd, 1H, J = 11.4, 1.8 Hz), 7.38 (d, 1 H, J = 2.4 Hz), 4.23 (br, 2H), 3.95, (s, 3H), 3.65 ( br, 4H), 3.32 (br, 2H), 2.98 (s, 3H); ¹⁹F (376 MHz) -114.0 (m). LCMS [M+H]⁺ = 336.
両方の沈殿物からの沈殿物を合わせて、飽和ＮａＨＣＯ_３（５０ｍＬ）で懸濁した。混合物をＥｔＯＡｃで抽出した。有機相を水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、蒸発させ、表題化合物をクリーム状の固形物として得た（１.７６ｇ）。

工程ｅ）３−フルオロ−４−［２−（４−メチルピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］安息香酸ＨＣｌ塩（９ｅ）

メチルエステル（１.７６ｇ、５.２５ｍｍｏｌ）（９ｄ）をＨＣｌ（６Ｍ、４０ｍＬ）と一緒に、８０℃で５.５時間加熱した。さらなるＨＣｌ（６Ｍ、１０ｍＬ）を加え、混合物を９０℃で１時間１５分加熱した。冷却後、混合物を減圧下で蒸発させて、水から凍結乾燥して、最終産物をクリーム状の固形物として得た（定量的収率）。NMR (DMSO-d6) δ ppm: ¹H (400 MHz) 11.60 (br, 1H), 8.18 (t, 1H, J = 8.0 Hz), 7.82 (dd, 1H, J = 8.4, 1.6 Hz), 7.72 (dd, 1H, J = 12.0, 1.6 Hz), 7.48 (d, 1H, J = 2.8 Hz), 4.11 (m, 2H), 3.58 (m, 2H), 3.49 (m, 2H), 3.19 (m, 2H), 2.80 (d, 3H, J = 4.4 Hz); 19F (376 MHz) -113.5 (m); 13C (100 MHz) 168.9, 166.0, 159.0 (d, J = 250 Hz), 143.4, 131.4 (d, J = 8 Hz), 129.8, 125.8 (d, J = 11 Hz), 125.6, 116.6 (d, J = 24 Hz), 111.1 (J = 15 Hz), 51.1, 45.0, 41.9. LCMS [M+H]⁺ = 322.

実施例１０
Ｎ−［（Ｓ）−１−（（３ａＳ，６Ｒ，６ａＳ）−６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−メチル−ブチル］−３−フルオロ−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド

工程ａ）Ｎ−［（Ｓ）−１−（（３Ｓ，３ａＳ，６Ｒ，６ａＳ）−６−クロロ−３−ヒドロキシ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−メチル−ブチル］−３−フルオロ−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド

この化合物を、一連の脱保護（塩化アセチル、ＭｅＯＨ）および最初にＢｏｃ−ロイシンを用いるＨＡＴＵ−介在カップリング段階によって、Ｎ−［（Ｓ）−１−（（３Ｓ，３ａＳ，６Ｒ，６ａＳ）−６−クロロ−３−ヒドロキシ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルから製造し、最終的に３−フルオロ−４−［２−（４−メチルピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］安息香酸ＨＣｌ塩を実施例９で記載したように製造した。LCMS : [M+H]⁺ = 580; [M-H]- = 578. ¹⁹F NMR (376 MHz, CDCl₃ + CD₃OD) delta ppm -113.3 (m).

工程ｂ）
トリエチルアミン（２０μＬ）および三酸化硫黄ピリジン複合体（２０ｍｇ、０.１２５ｍｍｏｌ）に、工程ａ）からのアルコール（１６.６ｍｇ、０.０３ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２（０.９ｍＬ）およびＤＭＳＯ（０.４５ｍＬ）溶液を加え、室温で攪拌した。
２時間後、さらなるトリエチルアミン（１０μＬ）および三酸化硫黄ピリジン複合体（１０ｍｇ）を加え、混合物を終夜攪拌して、ケトンへの酸化を完了させた。
混合物をＣＨ_２Ｃｌ_２で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ_３、続いて飽和ＮａＣｌ水で洗浄し。
有機相を乾燥し（Ｎａ_２ＳＯ_４）、蒸発させて、油状物を得た。
粗製物質をＨＰＬＣ−ＭＳ（カラム；Ｓｕｎｆｉｒｅ ＰｒｅｐＣ_１８ｕｍ １９×１００ｍｍ；ＯＢＤ ５ グラジエント ３０〜８０％ＢのＡ溶液、移動相Ａ：１０ｍＭＮＨ_４ＯＡｃ水溶液およびＢ：１０ｍＭＮＨ_４ＯＡｃの９０％ＭｅＣＮ溶液）で精製し、表題化合物を白色の固形物として得た（４.４ｍｇ）。NMR (CDCl₃) delta ppm:¹H (500 MHz, 回転異性体を2つ観測, 主要な回転異性体を記載する) 8.22 (m, 1H, フェニル H5), 7.56-7.54 (m, 2H, フェニル H2 and H6), 7.21 (m, 1H, チアゾール), 6.81 (d, 1H, J = 8.5 Hz, NH), 4.94-4.85 (m, 2H, NHCHC=O and ClCCHO), 4.84 (d, 1H, J = 6.0 Hz, (O=C)NCHC=O)), 4.56 (dd, 1H, J = 10.5, 7.0 Hz), 4.42 (m, 1H, ClCH), 4.32 and 4.14 (ABq, 1H each), 3.70 (dd, 1H, J = 10, 9 Hz), 3.59 (m, 4H), 2.57 (m, 4H), 2.37 (s, 3H, NMe), 1.8-1.6 (m, 3H, CH₂CHMe₂), 1.03 (d, 3H, J = 6.0 Hz, i-Pr), 0.96 (d, 3H, J = 6.5 Hz, i-Pr); ¹⁹F (376 MHz) -112.9 (m, 主要な回転異性体, 84%) and -113.2 (m, 副次的な回転異性体, 16%). LCMS: モノアイソトピックモル質量 577.4 Da; ES+ = 578.4 (M+H)⁺, 596.5 [M+H₂O+H]⁺.

実施例１１
別のＰ３／Ｐ２ 構成要素

工程ａ）（Ｓ）−２−［（Ｓ）−１−（４−ブロモ−フェニル）−２，２，２−トリフルオロ−エチルアミノ］−４−メチル−ペンタン酸イソプロピルエステル（１１ａ）

（Ｓ）−２−［（Ｓ）−１−（４−ブロモ−フェニル）−２，２，２−トリフルオロ−エチルアミノ］−４−メチル−ペンタン酸（Li, C. S.et al Bioorg. Med. Chem. Lett. 2006, 16, 1985に記載されているように）（１.８０ｇ、４.９ｍｍｏｌ）のイソプロピルアルコール攪拌溶液（１００ｍＬ）に、濃硫酸（２ｍＬ）を加えた。生じた溶液を８０℃で４時間加熱した。反応混合物を冷却し、次いで減圧下で濃縮した。得られた油状物をＣＨ_２Ｃｌ_２（１００ｍＬ）に分散させ、飽和ＮａＨＣＯ_３（２×５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、減圧下で濃縮し、表題化合物を褐色の油状物として得た（１.７７ｇ、８８％）。MS [M+H] 412.

工程ｂ）（Ｓ）−４−メチル−２−｛（Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−［４−（４，４，５，５−テトラメチル−［１，３，２］ジオキサボロラン−２−イル）−フェニル］−エチルアミノ｝−ペンタン酸イソプロピルエステル（１１ｂ）

ブロモ誘導体１ｋ（２.２ｇ、５.３６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ攪拌溶液（３０ｍＬ）に、ビス(ピナコラト)ボロン（２.０ｇ、８.０４ｍｍｏｌ）、酢酸カリウム（１.６ｇ１６.１ｍｍｏｌ）および［１，１'−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）クロライド（ＣＨ_２Ｃｌ_２との１：１複合体）（０.４３８ｇ、０.５４ｍｍｏｌ）を加えた。生じた溶液を管に密閉し、１６０℃の電子レンジ内で２０分間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、次いでショート・シリカ・カラム（５００ｍＬの酢酸エチルで溶離）に通じて濾過した。生じた溶液を減圧下で濃縮し、粗生成物を逆相Ｃ１８カラム・クロマトグラフィー（Ｈ_２Ｏ：ＭｅＣＮ、５０〜１００％グラジエント）で精製し、表題化合物を褐色の油状物として得た（０.９２０ｇ、３８％）。MS [M+H] 458.

工程ｃ）（Ｓ）−４−メチル−２−（（Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−｛４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−フェニル｝−エチルアミノ）−ペンタン酸イソプロピルエステル（１１ｃ）

ボロラン誘導体１ｋ（０.７２ｇ、１.５７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ：Ｈ_２Ｏ（１：１、２０ｍＬ）攪拌溶液に、１−（４−ブロモ−チアゾール−２−イル）−４−メチル−ピペラジン（０.５ｇ、１.８９ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（０.２ｇ１.８９ｍｍｏｌ）および［１，１'−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン］パラジウム（ＩＩ）クロリド（ＣＨ_２Ｃｌ_２との１：１複合体）（０.１２９ｇ、０.１６ｍｍｏｌ）を加えた。生じた溶液を管に密閉し、１６０℃の電子レンジで２０分間加熱した。反応混合物を冷却し、次いでＣＨ_２Ｃｌ_２（１００ｍＬ）で希釈した。有機相を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、減圧下で濃縮した。粗生成物をフラッシュ・カラム・クロマトグラフィーで精製し（酢酸エチル：ＭｅＯＨ＝９：１）、表題化合物を暗赤色の固形物として得た（０.１５０ｇ、１３％）。MS ［M+H］ 513． 保持時間４.０分 ５０−９７ １０ｍＭ （ＮＨ_３）_２ＣＯ_３：ＭｅＣＮ ６分グラジエント Ｃ１２逆相。

工程ｄ）（Ｓ）−４−メチル−２−（（Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−｛４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−フェニル｝−エチルアミノ）−ペンタン酸；塩化水素（１１ｄ）

攪拌した、塩酸（２Ｍ）およびジオキサン（１：１、１０ｍＬ）の混合物に、（Ｓ）−４−メチル−２−（（Ｓ）−２，２，２−トリフルオロ−１−｛４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−フェニル｝−エチルアミノ）−ペンタン酸イソプロピルエステル（０.１５ｇ、０.２９ｍｍｏｌ）を加えて、Palmer et al. の J. Med. Chem. 2005, 48, 7520-7534 に記載されているように製造した。溶液を１００℃で２０時間加熱し、次いで減圧下で濃縮し、表題化合物を濃褐色の固形物として得て（０.１４ｇ、９８％）、典型的にはさらなる精製をせずに、それをＰ１構成要素およびケトン（上記の方法のいずれかによって再産生される）とカップルすることができる。MS M - H 469.

実施例１１Ａ
別のＰ３構成要素

ｉ．ＡｃＯＨ、臭素、室温、２時間、収率５５％；
ｉｉ．ＫＦ、アセトニトリル、１８−クラウン−６、９０℃、１６時間；収率３１％；
ｉｉｉ．ＡｃＯＨ、臭素、４５℃、４時間、収率１００％；
ｉｖ．４−メチル−ピペラジン−１−カルボチオ酸アミド、Δ、２時間、収率７４％；ＬｉＯＨ、室温、１６時間、収率１００％。
（出発物質の入手可能性）
４−アセチル安息香酸メチルはアルドリッチから入手可能であり；４−メチル−ピペラジン−１−カルボチオ酸アミド−１１の供給者はＳｃｉＦｉｎｄｅｒで見つかる（例えば、ドイツのＣｈｅｍ Ｐｕｒ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ Ｌｔｄ）。

工程ａ）４−（２−ブロモ−アセチル）−安息香酸メチルエステル

４−アセチル−安息香酸メチルエステル（８.４ｍｍｏｌ）の酢酸溶液（２０ｍＬ）に、臭素（８.４ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で２時間攪拌し、赤色が消失し、オフ・ホワイトの沈殿物が形成した。生成物を濾過により回収し、冷メタノール／水（２００ｍＬ、１：１）で洗浄して白い粉末を得た（５５％）。¹H NMR (400MHz, CDCl₃) 3.98 (3H, s), 4.20 (2H, s), 8.02 (2H, d, J = 8Hz), 8.18 (2H, d, J = 8Hz).

工程ｂ）４−（２−フルオロ−アセチル）−安息香酸メチルエステル

カリウムフルオリド（３.１１ｍｍｏｌ）のアセトニトリル懸濁液（１ｍＬ）に、１８−クラウン−６（０.１ｍｍｏｌ）を加え、反応液を９０℃で３０分間加熱した。４−（２−ブロモ−アセチル）−安息香酸（１.５６ｍｍｏｌ）を加え、反応液を９０℃で１６時間加熱した。反応液を水（１０ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（３×２０ｍＬ）で抽出した。生成物をシリカ上で精製し（５〜１５％酢酸エチルのイソ−ヘキサン溶液で溶離）、減圧下で濃縮して目的のフラクションである、表題生成物を白色の固形物として得た（３１％）。¹H NMR (400MHz, CDCl₃) 3.98 (3H, s), 5.55 (2H, d, J = 50Hz), 7.95 (2H, d, J = 8Hz), 8.18 (2H, d, J = 8Hz).

工程ｃ）４−（２−ブロモ−２−フルオロ−アセチル）−安息香酸メチルエステル

４−（２−フルオロ−アセチル）−安息香酸（１.１９ｍｍｏｌ）の酢酸懸濁液（５ｍＬ）に、臭素（１.１９ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を４５℃で４時間加熱し、緑色の溶液が形成した。反応液を減圧下で濃縮し、トルエンで２回共沸して、表題化合物を緑色の固形物として得た（１００％）。生成物を粗製のまま次の工程で用いた。¹H NMR (400MHz, CDCl₃) 3.98 (3H, s), 7.04 (1H, s), 8.05 - 8.10 (4H, m).

工程ｄ）４−［５−フルオロ−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−安息香酸メチルエステル

４−（２−ブロモ−２−フルオロ−アセチル）−安息香酸メチルエステル（１.１８ｍｍｏｌ）および４−メチル−ピペラジン−１−カルボチオ酸アミド（１.１８ｍｍｏｌ）をエタノール溶液（１０ｍＬ）に溶解した。反応液を２時間加熱還流した。反応液を室温まで冷却して、生成物を沈殿させた。生成物を濾過により回収し、冷エタノールで洗浄した。生成物に炭酸水素ナトリウム水ワークアップを行い、表題化合物を無色の油状物として得た（７４％）。MS (ES+) 337 (M+H, 100%).

工程ｆ）４−［５−フルオロ−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−安息香酸 二塩酸塩

４−［５−フルオロ−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−安息香酸メチルエステル（０.４３ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン／水（２.５ｍＬ、４：１）溶液に、水酸化リチウム（０.５ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を室温で１６時間攪拌した。反応液を減圧下で濃縮し、塩酸（２Ｎ、３ｍＬ）を加え、生成物を白色の固形物として沈殿させた。生成物を濾過により回収し、表題生成物を白色の固形物として得た（７９％）。MS (ES+) 322 (M+H, 100%).

実施例１２
Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−メチル−ブチル］−４−［５−フルオロ−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド

工程ａ）６−ベンジルオキシ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボン酸ベンジルエステル（１２ａ）

デス・マーチンペルヨージナン（１２.５ｇ、３０ｍｍｏｌ）をＤＣＭ溶液（２５０ｍＬ）に溶解した。国際公開第０７／０６６１８０号からの化合物１０（７.４ｇ、２０ｍｍｏｌ）のＤＣＭ溶液（５０ｍＬ）を、オキシダントの攪拌溶液に室温、窒素雰囲気下で４５分かけて加えた。ＴＬＣに基づいて反応が完了したと見なされたら、１０％Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３水（２００ｍＬ）を加え、混合物をさらに１５分間室温で攪拌した。２相系を分液漏斗で移し、ＥｔＯＡｃで２回抽出した（それぞれ、２００ｍＬおよび１００ｍＬ）。有機相を合わせて、飽和ＮａＨＣＯ_３水（１００ｍＬ）および食塩水（１００ｍＬ）で１回洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、溶媒を減圧下で蒸発させ、粗生成物２を澄明な油状物として得た（７.６９ｇ）； ESI+, m/z: 368 (M⁺ +1).

工程ｂ）６−ベンジルオキシ−３，３−ジメトキシ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボン酸ベンジルエステル（１２ｂ）

化合物１２ａ（７.６ｇ）を乾燥メタノール溶液（１００ｍＬ）に溶解した。オルトギ酸トリメチル（３０ｍＬ）およびｐＴｓＯＨ（０.２ｇ）を、窒素雰囲気下の室温で加えた。混合物を、６０℃で８時間加熱した。ＴＬＣに基づき反応を完了し、反応液を室温まで冷却し、減圧下で濃縮した。粗生成物をシリカゲル・カラム・クロマトグラフィー［酢酸エチル−ヘプタン（１：４）を溶離液］で精製し、減圧下で濃縮して、ケタール１２ｂを澄明な油状物として得た（５.９ｇ、２段階で７１％）； ESI+, m/z: 382 (M+ -OMe).

工程ｃ）（３ａＳ，６Ｒ，６ａＳ）−６−ヒドロキシ−３，３−ジメトキシ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１２ｃ）

化合物１２ｂ（２.５ｇ、６.４ｍｍｏｌ）のメタノール（６０ｍＬ）およびＰｄ（ＯＨ）_２（０.７ｇ）溶液を、Ｈ_２雰囲気下の室温で４８時間攪拌した。混合物を濾過し、減圧下で濃縮した。残渣（２.８ｇ、１４．８ｍｍｏｌ）を、ジオキサン／水（２：１）の混合物（７５ｍＬ）に溶解した。１０％Ｎａ_２ＣＯ_３溶液（２５ｍＬ）を滴下して加え、ｐＨ９〜９.５とした。混合物を氷水浴内で０℃まで冷却し、ＢＯＣ無水物を１回で加えた。反応液を室温で終夜攪拌し、必要ならばさらなる１０％Ｎａ_２ＣＯ_３溶液を加えることにより、混合物のｐＨを９〜９.５で維持した。混合物を濾過し、溶媒を減圧下で除去した。水性混合物をＥｔＯＡｃ（３×１００ｍＬ）で抽出し、有機相を合わせて、水（１００ｍＬ）および食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４で乾燥し、濾過し、溶媒を減圧下で蒸発させて、カルバメートを澄明な油状物として得た（３.７９ｇ、８９％）。ESI+, m/z: 312 (M++Na).

工程ｄ）（３ａＳ，６Ｒ，６ａＳ）−６−ヒドロキシ−３，３−ジメトキシ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボン酸ベンジルエステル（１２ｄ）

化合物１２ｃ（３.８ｇ、１３.１３ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２攪拌溶液（１００ｍＬ）に、ＨＣｌ（２Ｍ）のＭｅＯＨ溶液（５０ｍＬ）を加えた。生じた溶液を終夜攪拌し、次いで減圧下で濃縮し、トルエンで共沸した（３×１００ｍＬ）。粗製残渣をＣＨ_２Ｃｌ_２溶液（１００ｍＬ）に溶解し、０℃まで冷却し、ピリジン（１０７１μＬ、１３.１３ｍｍｏｌ）を加え、続いてＣｂｚＣｌ（１８７５μＬ、１３.１３ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。反応液を室温で２時間攪拌し、次いでＨＣｌ（２Ｍ）（２×５０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ_３（２×５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ_４）、濃縮した。残渣をフラッシュ・カラム・クロマトグラフィーで精製し（５〜１００％イソヘキサン：ＥｔＯＡｃ）、表題化合物を澄明な油状物として得た（２５１０ｍｇ、５９％）。MS M + H 324.

工程ｅ）（３ａＳ，６Ｒ，６ａＳ）−６−メタンスルホニルオキシ−３，３−ジメトキシ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボン酸ベンジルエステル（１２ｅ）

化合物１２ｄ（５００ｍｇ、１.５５ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２攪拌溶液（２０ｍＬ）に、トリエチルアミン（３３２μＬ、２.３２ｍｍｏｌ）および塩化メシル（２６６ｍｇ、２.３２ｍｍｏｌ）を加えた。３０分間攪拌した後、反応液を飽和ＮａＨＣＯ_３（１×２０ｍＬ）、ＨＣｌ（２Ｍ）（１×２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、濃縮して、表題化合物（６５５ｍｇ、９９％）を黄色の油状物として得た。MS M + H 402.

工程ｆ）（３ａＳ，６Ｓ，６ａＳ）−６−クロロ−３，３−ジメトキシ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボン酸ベンジルエステル（１２ｆ）

化合物１２ｅ（５５０ｍｇ、１.３７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ攪拌溶液（３０ｍＬ）に、塩化リチウム（７２１ｍｇ、１３.７ｍｍｏｌ）を加えた。１２０分攪拌した後、反応液を１２０℃の減圧下で濃縮した。残渣をＣＨ_２Ｃｌ_２（５０ｍＬ）で希釈し、水で洗浄し（１×２０ｍＬ）、ＭｇＳＯ_４で乾燥し、減圧下で濃縮した。残渣をフラッシュ・カラム・クロマトグラフィーで精製し（５〜６６％イソヘキサン：ＥｔＯＡｃ）、表題化合物を黄色の油状物として得た（３３０ｍｇ、７２％）。MS M + H 342, 344.

工程ｇ）［２−（６−クロロ−３，３−ジメトキシ−ヘキサヒドロフロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−メチルブチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔブチルエステル（１２ｇ）
６−クロロ−３，３−ジメトキシ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボン酸ベンジルエステル（６８ｍｇ、０.２０ｍｍｏｌ）を、減圧した水素雰囲気下で、１０％パラジウム木炭を用いる触媒の水素化により、脱保護した。２時間攪拌した後、懸濁液にセライトを通して濾過し、ロータリーエバポレーター（rotavapor）で濾液を蒸発させ、粗製の６−クロロ−３，３−ジメトキシ−ヘキサヒドロフロ［３，２−ｂ］ピロールを得て、ＨＡＴＵを用いてＮ−Ｂｏｃ−ロイシンを実施例２で記載したのと同じような方法でカップリングして、表題化合物を得た（７８ｍｇ、９３％）。MS m/z 421.2 (M+H)⁺.

工程ｈ）Ｎ−［２−（６−クロロ−３，３−ジメトキシ−ヘキサヒドロフロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−メチルブチル］−４−［５−フルオロ−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド（１２ｈ）
［２−（６−クロロ−３，３−ジメトキシ−ヘキサヒドロフロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−メチルブチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔブチルエステル（７８ｍｇ、０.１８５ｍｍｏｌ）を酸性条件下（塩化アセチルのメタノール溶液）、実施例４で記載されているように脱保護し、次いで実施例２で記載したＨＡＴＵ条件を用いて、粗製のピロール塩酸塩中間体を４−［５−フルオロ−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−安息香酸のＨＣｌ塩とカップリングし、表題化合物を得た（９８ｍｇ、８５％）。MS m/z 624.2 (M+H)+. ¹H-NMR (400MHz, CDCl₃): 7.91 (d, 2H), 7.81 (d, 2H), 6.85 (d, 1H), 5.00 (m, 1H), 4.75 (d, 1H), 4.60 (m, 1H), 4.50 (dt, 1H), 4.12 (d, 1H), 3.92 (d, 1H), 3.75 (m, 1H), 3.49 (m, 4H), 3.48 (m, 1H), 3.45 (s, 3H), 3.28 (s, 3H), 2.62 (m, 4H), 2.42 (s, 3H), 1.85 (m, 1H), 1.70 (m, 2H), 1.05 (d, 3H), 1.00 (d, 3H).

工程ｉ）Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−メチル−ブチル］−４−［５−フルオロ−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド（１２ｉ）
Ｎ−［２−（６−クロロ−３，３−ジメトキシ−ヘキサヒドロフロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−メチルブチル］−４−［５−フルオロ−２−（４−メチルピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド（９８ｍｇ、０.１５７ｍｍｏｌ）を、実施例５で記載した酸性条件下で加水分解した。残渣をプレパラティブＨＰＬＣクロマトグラフィー（Ｃ８、グラジエント１０〜９０％ＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏ）で精製し、純粋な表題化合物（４１.８ｍｇ、４６％）を２つの回転異性体の混合物として得た。ケトン（２７％）[MS m/z 578.1 (M+H)+]および水和物（７３％）[MS m/z 596.1 (M+H₂O+H)⁺]。

実施例１３
６−クロロ−４−｛４−メチル−２−［２，２，２−トリフルオロ−１−（４'−メタンスルホニル−ビフェニル−４−イル）−エチルアミノ］−ペンタノイル｝−テトラヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−３−オン

工程ａ）１−（６−クロロ−３，３−ジメトキシ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−イル）−４−メチル−２−［２，２，２−トリフルオロ−１−（４'−メタンスルホニル−ビフェニル−４−イル）−エチルアミノ］−ペンタン−１−オン（１３ａ）
６−クロロ−３，３−ジメトキシ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボン酸ベンジルエステル（５５ｍｇ、０.１６ｍｍｏｌ）を、減圧した水素雰囲気下で、１０％パラジウム木炭を用いる触媒の水素化により、脱保護した。２時間攪拌した後、懸濁液にセライトを通して濾過し、濾液を濃縮て得たアミンを、次いで４−メチル−２−［２，２，２−トリフルオロ−１−（４'−ｍエタンスルホニル−ビフェニル−４−イル）−エチルアミノ］−ペンタン酸（７６ｍｇ、０.１７ｍｍｏｌ）とカップリングし、実施例２で記載したＨＡＴＵ条件を用いて、国際公開第０７／００６７１６号の記載のように製造して、表題化合物を得た（１０１ｍｇ、５０％）。

工程ｂ）
化合物１３ａ（４７ｍｇ、０.０７ｍｍｏｌ）を、実施例５で記載した酸性条件下で加水分解した。得られた残渣をカラム・クロマトグラフィー（ＥｔＯＡｃ−Ｐ．エーテル＝３：２）で精製して、純粋な表題化合物を得た（２６ｍｇ）。[MS m/z 586.4.

実施例１４
６−クロロ−４−［４−メチル−２−（２，２，２−トリフルオロ−１−｛４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−フェニル｝−エチルアミノ）−ペンタノイル］−テトラヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−３−オン

工程ａ）１−（６−クロロ−３，３−ジメトキシ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−イル）−４−メチル−２−（２，２，２−トリフルオロ−１−｛４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−フェニル｝−エチルアミノ）−ペンタン−１−オン（１４ａ）
６−クロロ−３，３−ジメトキシ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボン酸ベンジルエステル（３５ｍｇ、０.１０ｍｍｏｌ）のベンジル基を、減圧した水素雰囲気下で、１０％パラジウム木炭を用いる触媒の水素化により、除去した。２時間攪拌した後、懸濁液にセライトを通して濾過し、濾液を濃縮した。次いで得たアミンを、実施例２で記載したＨＡＴＵ条件を用いて、実施例１１工程ｄ（４２ｍｇ、０.０９ｍｍｏｌ）の酸とカップリングし、表題化合物を得た（４５ｍｇ）。

工程ｂ
化合物１４ａ（４７ｍｇ、０.０７ｍｍｏｌ）を、実施例５で記載した酸性条件下で加水分解した。得られた残渣をカラム・クロマトグラフィー（ＣＨ_２Ｃｌ_２−アセトン＝２：１ ＋ ０.０５％ＤＩＥＡ）で精製し、純粋な表題化合物を得た（２０ｍｇ）。

実施例１５
Ｐ１構成要素の別の合成

工程ｉ）
実施例１の工程ｇ）を以下のように最適化した：工程ｇ）の最初の反応から得た、上記に示した一環式および二環式アミン混合物（約１.８ｍｍｏｌ）を、酢酸エチル（２５ｍｌ）に溶解し、トリエチルアミン（１.５ｍｌ）を加えた。溶液を３時間還流し、ＬＣ−ＭＳでモニターし、次いでさらなるトリエチルアミン（１.５ｍｌ）を加え、反応混合物をさらに１５時間還流した。次いで、反応混合物を約０℃まで冷却し、クロロギ酸ベンジル（０.３８ｍｌ、２.７ｍｍｏｌ）を１回で加え、次いで室温に戻した。反応液をＴＬＣ（４：１および３：２のヘキサン−酢酸エチル、紫外線およびＡＭＣ染色で視覚化）でモニターし、４時間後反応混合物を酢酸エチル（１５ｍｌ）で希釈し、１０％クエン酸水（３×２５ｍｌ）および飽和炭化水素ナトリウム水（３×２５ｍｌ）で連続して洗浄し、次いで乾燥し（硫酸ナトリウム）、濾過し、濃縮した。残渣をフラッシュ・クロマトグラフィーして（段階グラジエント溶離、酢酸エチルのヘキサン溶液、１０〜２０％）、続いて適当なフラクションを濃縮し、減圧下で終夜乾燥して、生成物を無色の泡沫として得た（０.５７ｇ、１.０６ｍｍｏｌ）。NMR data (400 MHz, 298 K, CDCl₃): 1H, δ 1.02 and 1.10 (2 s, 9H, C(CH₃)3), 3.13 (m, 1H, CHH), 3.59 and 3.80 (2 m, 2 x 1H, CH₂), 3.99-4.15 (m, 2H, CHH and CH), 4.34, 4.42, 4.46 and 4.68 (4 brs, 2H, major and minor CH), 4.84 (m, 1H, CH), 4.92-5.16 (m, 2H, CH₂), 7.11-7.80 (m, 15 H, ArH).

工程ｉｉ）

工程ｉ）の生成物（０.５６ｇ、１.０５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ攪拌溶液（６ｍｌ）に、テトラブチルアンモニウムフルオリド（１Ｍ）のＴＨＦ溶液（１.２６ｍｌ）を加え、室温で終夜攪拌した。次いで反応混合物を濃縮し、シリカに乗せ、残渣をフラッシュ・カラム・クロマトグラフィーし（段階グラジエント溶離、酢酸エチルのヘキサン溶液、５０〜１００％）、続いて適当なフラクションを濃縮し、減圧下で終夜乾燥し、生成物を無色のシロップとして得た（０.２７ｇ、０.９１ｍｍｏｌ、８７％）。NMR data (400 MHz, 298 K, CDCl₃): 1H, δ 2.22 and 3.00 (2 d, 1H, JOH,3 = 3.5 Hz, OH major and minor), 3.30 (m, 1 H, CHH), 3.89 (m, 1H, CHH), 4.00-4.16 (m, 3H, 2 CHH and CH), 4.24 (d, 1H, CH), 4.43 and 4.54 (2 brs, 1H, H-3 major and minor), 4.70 (m, 1H, CH), 5.08-5.23 (m, 2H, OCH₂Ph), 7.32-7.40 (m, 5H, Ar-H).

工程ｉｉｉ）

工程ｉｉ）の生成物（０.２６ｇ、０.８８ｍｍｏｌ）のジクロロメタン攪拌溶液（６ｍｌ）に、デス・マーチンペルヨージナン（０.４１ｇ、０.９７ｍｍｏｌ）を室温で加えた。反応液をＴＬＣ（３：２酢酸エチル−ヘキサン、ＡＭＣで染色して視覚化）でモニターし、３.５時間後反応混合物をジクロロメタン（２０ｍｌ）で希釈し、１：１の飽和炭化水素ナトリウム水／１０％チオ硫酸ナトリウム水（３×２０ｍｌ）で洗浄し、次いで乾燥し（硫酸ナトリウム）、濾過し、濃縮した。残渣をメタノール（５ｍｌ）およびオルトギ酸トリメチル（１.２５ｍｌ）溶液に再び溶解し、ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（０.０３ｇ、０.１６ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を終夜６０℃に保ち、次いでジイソプロピルエチルアミン（０.５ｍｌ）を加え、反応混合物を濃縮した。残渣をフラッシュ・クロマトグラフィーし（段階グラジエント溶離、酢酸エチルのヘキサン溶液、２０〜４０％）、続いて適当なフラクションを濃縮し、週末かけて減圧下で乾燥し、生成物を無色の硬（hard）シロップとして得た（０.２７ｇ、０.７９ｍｍｏｌ、８９％）。NMR data (400 MHz, 298 K, CDCl₃): 1H,δ 3.08-3.47 (m, 7H, 2 x OCH₃ major and minor and CHH), 3.80 (m, 2H, CH₂), 3.98 (brs, 1H, CH), 4.25 (m, 1H, CHH), 4.45 (m, 1H, CH), 4.60 (t, 1H, CH), 5.04-5.26 (m, 2H, CH₂), 7.29-7.42 (m, 5H, Ar-H)

比較の実施例１
Ｎ−［（Ｓ）−１−（（３ａＳ，６Ｓ，６ａＳ）−６−クロロ−３−オキソ）−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−メチル−ブチル］−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］ベンズアミド

下のスキームで示すようにして、６−Ｓクロロ構成要素を製造した：

ｉ． デス・マーチンペルヨージナン、ＤＣＭ、２時間、室温；
ｉｉ． オルトギ酸トリメチル、ｐＴｓＯＨ、ＭｅＯＨ、８時間、６０℃；
ｉｉｉ． Ｐｄ（ＯＨ）_２、Ｈ_２、ＭｅＯＨ、４８時間、室温；
ｉｖ． Ｂｏｃ_２Ｏ、１０％Ｎａ_２ＣＯ_３、１６時間、０℃〜室温；
ｖ． ＨＣｌ、ＣＨ_２ＣＨ_２／Ｐｙ、ＣＢｚＣｌ
ｖｉ． ＣＨ_２ＣＨ_２／Ｅｔ_３Ｎ、ＭｓＣｌ
ｖｉｉ． ＤＭＦ、ＬｉＣｌ
次いでこの構成要素をＮ−脱保護し、実施例５で記載した合成の残りを取り込み、Ｎ−［（Ｓ）−１−（（３ａＳ，６ａＳ）−６Ｒ−クロロ−３−オキソ）−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−メチル−ブチル］−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］ベンズアミドを得た。

比較の実施例２
Ｎ−［（１Ｓ）−１−（（３ａＳ，６ａＲ）−３−オキソ）−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−メチル−ブチル］−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］ベンズアミド

Ｐ１構成要素を国際公開第０２／０５７２０号に記載されているように合成した。Ｎ−保護Ｌ−ロイシンおよび実施例３のＰ３構成要素をカップリングし、実施例４で示すようにしてケトンに酸化した。

比較の実施例３
Ｎ−［（１Ｓ）−１−（（３ａＳ，６ａＲ）−３−オキソ）−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−メチル−ブチル］−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］ベンズアミド

この比較実施例の合成は、国際公開第０５／６６１８０号の実施例９として示されている。

生物学的実施例
カテプシンＫタンパク分解触媒活性の測定
カテプシンＫの常套的アッセイは、例えばＰＤＢに記載されているようなヒト組換え酵素を用いて行う。
ＩＤ ＢＣ０１６０５８ 標準；ｍＲＮＡ；ＨＵＭ；１６９９ ＢＰ.
ＤＥ ホモサピエンスカテプシンＫ（濃化異骨症）、ｍＲＮＡ（ｃＤＮＡクローンＭＧＣ：２３１０７
ＲＸ ＭＥＤＬＩＮＥ； ＲＸ ＰＵＢＭＥＤ；１２４７７９３２.
ＤＲ ＲＺＰＤ；ＩＲＡＬｐ９６２Ｇ１２３４．
ＤＲ ＳＷＩＳＳ−ＰＲＯＴ；Ｐ４３２３５；

組換えカテプシンＫは、大腸菌、ピキア（Pichia）、およびバキュロウイルス系を含む種々の、市販品として入手可能な発現系で発現させることができる。精製酵素は、通常の方法で前配列を除去することによって活性化する。

動力学定数を測定するための標準的アッセイ条件には、蛍光性ペプチド基質（典型的にはＨ−Ｄ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ＡＭＣ）を使用し、ＥＤＴＡ（１ｍＭ）および２−メルカプトエタノール（１０ｍＭ）を含むＭｅｓ／トリス（１００ｍＭ、ｐＨ７．０）、あるいはＥＤＴＡ（５ｍＭ）およびシステイン（２０ｍＭ）を含むリン酸ナトリウム（１００ｍＭ）、ＥＤＴＡ（ｉｍＭ）、０．１％ＰＥＧ４０００（ｐＨ６．５）、または酢酸ナトリウム（１００ｍＭ、ｐＨ５．５）（各々は適宜、安定化剤として１Ｍ ＤＴＴを含む）を用いて測定した。用いた酵素濃度は５ｎＭであった。ストック基質溶液をＤＭＳＯ溶液中で１０ｍＭに調製した。スクリーニングを６０μＭの固定基質濃度で行い、詳細な動力学的試験では２５０μＭからの基質の２倍希釈を用いた。該アッセイにおいて総ＤＭＳＯ濃度を、３％以下に維持した。すべてのアッセイを周囲温度で行った。生成物の蛍光（３９０ｎｍで励起、４６０ｎｍで放射）をＬａｂｓｙｓｔｅｍｓ Ｆｌｕｏｒｏｓｋａｎ Ａｓｃｅｎｔ蛍光プレートリーダーでモニターした。生成物のプログレス曲線をＡＭＣ生成物の生成後１５分間にわたり作成した。

カテプシンＳ Ｋｉ測定
本アッセイでは、３８４ウェルプレートフォーマットにおいて、バキュロウイルス発現ヒトカテプシンＳおよびＢａｃｈｅｍから入手可能なｂｏｃ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ＡＭＣ蛍光基質を用い、それによって７つの試験化合物を既知のカテプシンＳ阻害剤コンパレータを含む陽性対照と同時に試験することができる。

（基質の希釈）
１２.５％ ＤＭＳＯ（２８０μｌ／ウェル）を９６深ウェルポリプロピレンプレートの２つの縦列の横列Ｂ〜Ｈに加える。基質（７０μｌ／ウェル）を横列Ａに加える。２×２５０μｌ／ウェルのアッセイ緩衝液（１００ｍＭリン酸ナトリウム、１００ｍＭ ＮａＣｌ、ｐＨ６．５）を横列Ａに加え、混合し、プレートの横列Ｈまで２倍希釈する。

（阻害剤の希釈）
アッセイ緩衝液（１００μｌ／ウェル）を９６ウェルＶ底ポリプロピレンプレートの縦列２〜５および７〜１２の横列４つに加える。アッセイ緩衝液（２００μｌ／ウェル）を縦列１および６に加える。

ＤＭＳＯ溶液中で調製した最初の試験化合物を典型的には最初に測定したおよそのＫ_ｉの１０〜３０倍をもたらす容量で上端横列の縦列１に加える。およそのＫ_ｉを予備ラン（preliminary run）から計算する。その予備ランは、１０μｌ／ウェルの１ｍＭ ｂｏｃ−ＶＬＫ−ＡＭＣ（アッセイ緩衝液中で希釈したＤＭＳＯ溶液中の１０ｍＭストックの１／１０希釈）が、９６ウェルＭｉｃｒｏｆｌｕｏｒ（登録商標）プレートの横列Ｂ〜Ｈに、および、２０μｌ／ウェルを横列Ａに分配される。各試験化合物（２μｌ、１０ｍＭ）を横列Ａ、縦列１〜１０の別個のウェルに加える。９０μｌのアッセイ緩衝液（１ｍＭ ＤＴＴおよび２ｎＭ カテプシンＳを含む）を横列Ｂ〜Ｈの各ウェルに、また１８０μｌを横列Ａに加える。横列Ａをマルチチャンネルピペットで混合し、横列Ｇまで２倍希釈する。横列Ｈを混合し、蛍光分光光度計で計測する。計測値は競合阻害方程式に適合させたプリズムデータであり、Ｓ＝１００μＭおよびＫ_Ｍ＝１００μＭにセットし、最大１００μＭまでのＫ_ｉ推定値を得る。

２番目の試験化合物を上端横列の縦列６に、３番目の試験化合物を横列２の縦列１に加えるなどする。下端横列の縦列６にコンパレータ（１μｌ）を加える。縦列１を混合し、縦列５まで２倍希釈する。縦列６を混合し、縦列１０まで２倍希釈する。

５×１０μｌにセットした８チャンネルマルチステッピングピペットを用い、基質（１０μｌ／ウェル）を３８４ウェルアッセイプレートに分配する。基質希釈プレートの最初の縦列を横列Ａから出発してアッセイプレートの全縦列に分配する。マルチチャンネルピペットのチップ間隔は、交互に（１つ置きに）横列を正確に飛ばす。第２縦列を横列Ｂから出発して全ての縦列に分配する。

４×１０μlにセットした１２−チャンネルマルチステッピングピペットを用い、阻害剤（１０μｌ／ウェル）を３８４ウェルアッセイプレートに分配する。阻害剤希釈プレートの横列１をＡ１から出発してアッセイプレートの１つ置きの横列に分配する。マルチチャンネルピペットのチップ間隔を1つ置きに、横列に正確に飛ばす。同様に、横列２、３、および４をそれぞれＡ２、Ｂ１、およびＢ２から出発する１つ置きの横列および縦列に分配する。

アッセイ緩衝液（２０ｍｌ）およびＤＴＴ（１Ｍ、２０μｌ）を混合する。十分なカテプシンＳを加え、２ｎＭの最終濃度を得る。

分配器（例えば、Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ３８４）を用いて、アッセイプレートの全ウェルに３０μｌ／ウェルを加え、蛍光分光光度計（例えば、Ａｓｃｅｎｔ）を用いて計測する。

蛍光計測値（励起波長および放射波長は、それぞれ３９０ｎｍおよび４６０ｎｍ；バンドパスフィルターを用いてセット）は、蛍光基質の酵素開裂の程度を反映し、阻害剤にも係わらず各ウェルに適合した線形速度である。

各阻害剤に対する全ウェルの適合速度を、ＳｉｇｍａＰｌｏｔ２０００を用いて競合阻害方程式に適合させ、Ｖ、Ｋ_ｍ、およびＫ_ｉ値を決定する。

（カテプシンＬ Ｋｉ）
上記方法を、以下の修正を施して、カテプシンＬのＫ_ｉを決定するのに用いる。

酵素は、市販品として入手可能なヒトカテプシンＬ（例えば、Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）である。基質にはＢａｈｃｅｍから入手できるＨ−Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ＡＭＣがある。アッセイ緩衝液は酢酸ナトリウム（１００ｍＭ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、ｐＨ５．５）である。ＤＭＳＯストック（１０ｍＭの１００％ＤＭＳＯ溶液）をアッセイ緩衝液で１０％に希釈する。酵素は使用直前に、アッセイ緩衝液にジチオスレイトール（１ｍＭ）を加えて、５ｎＭの濃度に調製する。１００％ＤＭＳＯで調製した阻害剤（１０ｍＭ、２μｌ）を横列Ａに分配する。１０μｌの５０μＭ基質（＝１０ｍＭストックのＤＭＳＯ溶液中１／２００希釈、アッセイ緩衝液で希釈）。

（阻害研究）
潜在的阻害剤を種々の濃度の試験化合物を用いて、上記アッセイによりスクリーニングする。反応は、基質と阻害剤の緩衝溶液に酵素を加えることにより開始した。Ｋ_ｉ値を方程式１：

[ここで、ｖ_０は反応速度であり、Ｖは最大速度であり、Ｓはミカエル定数Ｋ_Ｍで表す基質濃度であり、Ｉは阻害剤濃度である］
に従って計算した。

結果を以下の記号で表す。
Ａ：５０ナノモル未満
Ｂ：５０〜５００ナノモル
Ｃ：５０１〜１０００ナノモル
Ｄ：１００１〜５０００ナノモル
Ｅ：５００１〜１００００ナノモル
Ｆ：１００００ナノモルを超える

したがって、式ＩＩの化合物は強力なカテプシンＫ阻害剤であり、近縁のカテプシンＳおよびカテプシンＬとの間で選択性がある。

化合物／酵素／アッセイの場合における、特定のバッチ（batches）からの代表値には下記が含まれる：

代謝安定性
本発明の化合物および示された比較の実施例について、その代謝安定性をサイトゾルアッセイで試験し、すなわち；それらの化合物を市販品として入手可能なヒト肝臓のサイトゾルフラクションでインキュベートし、化合物の消失をＨＰＬＣまたはＬＣ／ＭＳによってモニターした。プールされたヒト肝臓のサイトゾルフラクションは、単一個体からの血液と比べて異常値を示すことが少なく、また全血と異なり冷凍貯蔵できる。したがって、サイトゾルアッセイは、インビボ環境（例えば、全血にさらされた場合）における化合物の安定性への指標として試験される、一貫したアッセイを提供する。

簡潔には、試験化合物（２μＭ）を、プールされたヒト肝臓のサイトゾル（Ｘｅｎｏｔｅｃｈ ＬＬＣ Ｌｅｎｅｘａ ＵＳ、１ｍｇ／ｍＬタンパク質の０.１Ｍリン酸緩衝液中、ｐＨ７．４）において３７℃で１時間以上インキュベートする。インキュベーションは、ＮＡＤＰＨ（１ｍＭ）補助因子の添加によって開始する。時間毎のサブ試料（sub−samples）を、０、２０、４０および６０分で取り、氷冷アセトニトリル（３容量）の添加によって「沈殿を破壊した（crash precipitated）」。試料を低温で遠心分離し、上澄みを分離し、ＬＣ−ＭＳ−ＭＳで解析した。

あるいは、類似の安定性アッセイは、ヒトまたはサルの全血で行われる。

比較の実施例３は、国際公開第０５／６６１８０号のＰ１単位の下向き−Ｆエピマーを用いる。比較の実施例２は、国際公開第０２／０５７２７０号の好ましいＰ１およびＰ２単位を、本出願の特許請求の範囲内であるＰ３単位（それは、国際公開第０２／０５７２７０号の範囲外である）と一緒に用いる。比較の実施例１は、実施例６の化合物の下向き−Ｃｌエピマーを示す。

比較の実施例２から明らかであるが、国際公開第０２／０５７２７０号の先行技術Ｐ１は、１時間を少し越える半減期のサイトゾルを有する化合物を提供する。国際公開第０５／６６１８０号に広く例示されている下向きフルオロＰ１は、１．５時間超の半減期の方がいくらか良い。しかし、国際公開第０５／６６１８０号の下向き−フルオロにおけるクロロの置換は、比較の実施例１を比較の実施例３と比べて示されるように、安定性が劇的に減少する。その一方、本発明の上向き−クロロエピマー（実施例６）は、５時間超の半減期を有する化合物を提供する。同様に、同一のＰ３およびＰ２構成要素を有する、比較の実施例２および本発明の上向き−クロロエピマー（実施例５）は、上向き−クロロエピマーの方が相当良い半減期を有することを明確に示す。

透過性
この実施例では、ヒト消化管細胞を通過する阻害剤の輸送を測定する。アッセイでは、よく知られたＣａｃｏ−２細胞を、４０〜６０の通過数で用いる。

先端（apical）から側底（basolateral）への輸送
一般に、すべての化合物は２〜４ウェルで試験する。側底および先端ウェルはそれぞれ１．５ｍＬおよび０．４ｍＬ輸送緩衝液（ＴＢ）を含み、試験物質の標準濃度は１０μＭである。さらに、すべての試験溶液および緩衝液は１％ＤＭＳＯを含む。試験前に、輸送プレートを１０％血清が含まれる培養液で３０分間プレコート（pre−coat）することによって、プラスチック物質への非特異的結合を回避する。２１〜２８日後、フィルター支持体上の培養細胞は浸透性試験の準備が整っている。

輸送プレートＮｏ．１は、各４ウェルの横列３つを含む。横列１は洗浄を示し、横列２は「３０分間」を、横列３は「６０分間」を示す。輸送プレートＮｏ．２は、４ウェルの３横列を含み、横列４は「９０分間」を、横列５は「１２０分間」を示し、残る横列は割り当てない。

先端ウェルから培養液を除去し、挿入物を、すでに横列１〜５に１．５ｍＬ輸送緩衝液（ＨＢＳＳ、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４）で調製した挿入物を含まない２プレートのうちから、輸送プレート（プレートＮｏ．１）中の洗浄横列（Ｎｏ．１）に移す。Ａ→Ｂスクリーニングにおいて、側底ウェル中のＴＢは、１％ウシ血清アルブミンも含む。

輸送緩衝液（０．５ｍＬ、ＨＢＳＳ、２５ｍＭ ＭＥＳ、ｐＨ６．５）を挿入物に加え、細胞単層を３７℃のポリミックスシェーカー中３０分間、輸送緩衝液系で平衡化する。緩衝液系で平衡化した後、経上皮電気抵抗値（ＴＥＥＲ）は、ＥＶＯＭチョップスティック器具を用いて各ウェルで測定する。ＴＥＥＲ値は、通常４００〜１０００Ω／ウェル（用いるパッセージ数に依存する）。

輸送緩衝液（ＴＢ、ｐＨ６．５）を先端側から除去し、挿入物を３０分間横列（Ｎｏ．２）に移し、試験物質を含む新鮮なＴＢ（４２５μＬ、ｐＨ６．５）を先端（ドナー）ウェルに加える。プレートを、約１５０〜３００ｒｐｍの低振盪速度のポリミックスシェーカー中、３７℃でインキュベートする。

横列２で３０分間インキュベートした後、挿入物を、３０分毎に新たな、予め温めた側底（レシーバー）ウェルに移す；横列３（６０分間）、４（９０分間）、および５（１２０分間）。

２５μＬ試料を〜２分後および実験終了時に先端溶液から取る。これらの試料は、実験開始時および終了時に得たドナー試料を示す。

３００μＬを計画した各時点で側底（リザーバー）ウェルから取り、ＴＥＥＲのポスト値を実験終了時に測定する。すべての回収試料にアセトニトリルを加えて、試料において５０％の最終濃度とする。回収試料は、ＨＰＬＣまたはＬＣ−ＭＳにより分析するまで−２０℃で保存する。

（側底から先端への輸送）
一般に、すべての化合物は２〜４ウェルで試験する。側底および先端ウェルは、それぞれ１．５５ｍＬおよび０．４ｍＬのＴＢを含み、試験物質の標準濃度は１０μＭである。さらに、全ての試験溶液および緩衝液は１％ＤＭＳＯを含む。試験前に、輸送プレートを１０％血清が含まれる培養液で３０分プレコートすることによって、プラスチック物質への非特異的結合を回避する。

２１〜２８日後、フィルター支持体上の培養細胞は透過性試験の準備が整っている。先端ウェルから得た培養液および挿入物を、挿入物を含まない新たなプレート（輸送プレート）の洗浄横列（Ｎｏ．１）に移す。

輸送プレートは、４ウェルの横列３つを含む。横列１は「洗浄」を示し、横列３は「実験列」である。輸送プレートは予め、洗浄横列Ｎｏ．１中でＴＢ（１．５ｍＬ、ｐＨ７．４）、および実験横列Ｎｏ．３（ドナー側）中で試験物質を含むＴＢ（１．５５ｍＬ、ｐＨ７．４）により調製した。

輸送緩衝液（０．５ｍＬ、ＨＢＳＳ、２５ｍＭ ＭＥＳ、ｐＨ６．５）を横列Ｎｏ．１中の挿入物に加え、細胞単層を３７℃のポリミックスシェーカー中３０分間、輸送緩衝液系で平衡化する。緩衝液系で平衡化した後、ＴＥＥＲは、ＥＶＯＭチョップスティック器具を用いて各ウェルで測定する。

輸送緩衝液（ＴＢ、ｐＨ６．５）を先端側から除去し、挿入物を横列３に移し、新鮮ＴＢ（４００μＬ、ｐＨ６．５）を挿入物に加える。３０分後、２５０μＬを先端（レシーバー）ウェルから除去し、新鮮輸送緩衝液で交換する。次に、２５０μＬ試料を除去し、１２０分の実験終了時まで３０分毎に新鮮輸送緩衝液に交換し、最終的にＴＥＥＲのポスト値を実験終了時に測定する。２５μＬ試料を〜２分後および実験終了時に側底（ドナー）コンパートメントから取る。これら試料は、実験開始時および終了時のドナー試料を示す。

すべての回収試料にアセトニトリルを加えて、試料において５０％の最終濃度とする。回収試料をＨＰＬＣまたはＬＣ−ＭＳにより分析するまで−２０℃で保存する。

計算
累積吸収分画ＦＡ_ｃｕｍ対時間の測定は、

［式中、Ｃ_ＲＩは間隔Ｉの終末のリザーバー濃度であり、Ｃ_ＤＩは間隔Ｉの開始点のドナー濃度である］
から計算する。直線関係が得られるはずである。

浸透性係数(Ｐ_ａｐｐ、ｃｍ／ｓ)の測定値は、

［式中、ｋは時間（ｍｉｎ）に応じて累積吸収分画（ＦＡ_ｃｕｍ）の直線回帰により得られる勾配で定義した輸送速度（ｍｉｎ^−１）であり、Ｖ_Ｒはリザーバーチャンバーの容量（ｍＬ）であり、Ａはフィルター面積（ｃｍ^２）である］
から計算する。

典型的な対照化合物は以下である。

このＣａｃｏ−２アッセイにおける、本発明の化合物の代表的な結果は、パップ値（Papp values）が実施例１０の化合物について５.２×１０^６、および実施例１２の化合物について１０x１０^６ｃｍ／秒を含む。トリフルオロメチル基を含む式ＩＢの化合物（例えば、実施例１３）は、一般に２〜５倍高いパップ値を有する。

略語
ＤＭＦ ジメチルホルムアミド
ＤＣＭ ジクロロメタン
ＴＢＤＭＳ ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル
ＲＴ 室温
ＴＨＦ テトラヒドロフラン
Ａｃ アセチル
ＴＬＣ 薄層 クロマトグラフィー
ＤＭＡＰ ジメチルアミノピリジン
ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル

本出願で引用している全ての参考文献（特許および特許出願を含む）は、最大限可能な限り本明細書で参照によって援用される。

特に断りがなければ、明細書および請求の範囲を通して、用語「含む(comprise)」(およびその変形、例えば「comprises」および「comprising」)は、記載した整数、工程、整数群、または工程群を含み、いかなる他の整数、工程、整数群、または工程群も排除しない意図であることが理解される。

Claims (34)

1. 式ＩＩ：
   

   

   ［式中、
   Ｒ^２は、ロイシン、イソロイシン、シクロヘキシルグリシン、Ｏ−メチルスレオニン、４−フルオロロイシンまたは３−メトキシバリンの側鎖であり；
   Ｒ^３は、Ｈ、メチルまたはＦであり；
   Ｒｑは示された立体化学を有するＣＦ_３であり、Ｒｑ’はＨであるか；または
   ＲｑおよびＲｑ’は一緒になってケトであり；
   Ｑは、
   

   

   （式中、
   Ｒ^４は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
   Ｒ^５は、Ｈ、メチルまたはＦであり；
   Ｒ^６は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルである）
   である］
   の化合物、あるいはそれの医薬的に許容される塩、またはＮ−オキシド。
2. 式ＩＩａ：
   

   

   ［式中、
   Ｒ^２は、ロイシン、イソロイシン、シクロヘキシルグリシン、Ｏ−メチルスレオニン、４−フルオロロイシンまたは３−メトキシバリンの側鎖であり；
   Ｒ^３は、Ｈ、メチルまたはＦであり；
   Ｒ^４は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
   Ｒ^５は、Ｈ、メチルまたはＦである］
   を有する請求項１の化合物、あるいはそれの医薬的に許容される塩、またはＮ−オキシド。
3. 式ＩＩｂ：
   

   

   ［式中、
   Ｒ^２は、ロイシン、イソロイシン、シクロヘキシルグリシン、Ｏ−メチルスレオニン、４−フルオロロイシンまたは３−メトキシバリンの側鎖であり；
   Ｒ^３は、Ｈ、メチルまたはＦであり；
   Ｑは、
   

   

   （式中、
   Ｒ^４は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルであり；
   Ｒ^５は、Ｈ、メチルまたはＦであり；
   Ｒ^６は、Ｃ_１〜Ｃ_６アルキルである）
   である］
   の化合物、あるいはそれの医薬的に許容される塩、またはＮ−オキシド。
4. Ｒ^２がロイシン、イソロイシン、Ｏ−メチルスレオニン、４−フルオロロイシンまたは３−メトキシバリンの側鎖である、請求項１から３のいずれかの化合物。
5. Ｒ^２が４−フルオロロイシン、またはロイシンの側鎖である、請求項４の化合物。
6. Ｒ^２がロイシンの側鎖である、請求項５の化合物。
7. Ｒ^３がＦまたはメチルである、請求項１から６のいずれかの化合物。
8. Ｒ^３がＦまたはメチルであり、ベンジルアミドに対してメタ位にある、請求項１から６のいずれかの化合物。
9. Ｒ^３がＦである、請求項７または８のいずれかの化合物。
10. Ｒ^３がメチルである、請求項７または８のいずれかの化合物。
11. Ｒ^３がＨである、請求項１から６のいずれかの化合物。
12. Ｒ^５がＦである、請求項１から１１のいずれかの化合物。
13. Ｒ^５がメチルである、請求項１から１１のいずれかの化合物。
14. Ｒ^５がＨである、請求項１から１１のいずれかの化合物。
15. Ｒ^４がメチルである、請求項１から１４のいずれかの化合物。
16. Ｒ^６がメチルであり、並びにＲ^２が４−フルオロロイシンまたはロイシンの側鎖である、請求項１の化合物。
17. Ｒ^６がメチルであり、並びにＲ^２がロイシンの側鎖である、請求項１６の化合物。
18. Ｎ−［１−６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−フルオロ−３−メチル−ブチル］−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］ベンズアミド；
    Ｎ−［２−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−イル）−１−シクロヘキシル−２−オキソ−エチル］−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド；
    Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−メチル−ブチル］−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］ベンズアミド；
    Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−メチル−ブチル］−４−［５−メチル−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド
    から選択される請求項１の化合物、あるいはそれの医薬的に許容される塩、水和物またはＮ−オキシド。
19. Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−メチル−ブチル］−３−フルオロ−４−［２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド
    である請求項１の化合物、あるいはそれの医薬的に許容される塩、水和物またはＮ−オキシド。
20. Ｎ−［１−（６−クロロ−３−オキソ−ヘキサヒドロ−フロ［３，２−ｂ］ピロール−４−カルボニル）−３−メチル−ブチル］−４−［５−フルオロ−２−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−チアゾール−４−イル］−ベンズアミド
    である請求項１の化合物、あるいはそれの医薬的に許容される塩、水和物またはＮ−オキシド。
21. 薬物として使用するための、請求項１から２０のいずれかの化合物。
22. 請求項１から２０のいずれかの化合物、およびそれの医薬的に許容される担体または希釈剤を含む、医薬組成物。
23. 骨粗鬆症、
    歯肉疾患、
    パジェット病、
    悪性高カルシウム血症、
    代謝性骨疾患、
    過剰な軟骨分解またはマトリックス分解を特徴とする疾患、
    骨癌、
    疼痛
    から選択される疾患の、治療剤または予防剤の製造における、請求項１から２０のいずれかの化合物の使用。
24. 歯肉疾患が、歯肉炎および歯周炎から選択される、請求項２３の使用。
25. 過剰な軟骨分解またはマトリックス分解を特徴とする疾患が、骨関節炎および関節リウマチから選択される、請求項２３の使用。
26. 骨癌が、異常増殖である、請求項２３の使用。
27. 請求項１から２０のいずれかの化合物を含む、
    骨粗鬆症、
    歯肉疾患、
    パジェット病、
    悪性高カルシウム血症、
    代謝性骨疾患、
    過剰な軟骨分解またはマトリックス分解を特徴とする疾患、
    骨癌、
    疼痛
    から選択される疾患の治療剤または予防剤。
28. 歯肉疾患が、歯肉炎および歯周炎から選択される、請求項２７の剤。
29. 過剰な軟骨分解またはマトリックス分解を特徴とする疾患が、骨関節炎および関節リウマチから選択される、請求項２７の剤。
30. 骨癌が、異常増殖である、請求項２７の剤。
31. 骨粗鬆症、
    歯肉疾患、
    パジェット病、
    悪性高カルシウム血症、
    代謝性骨疾患、
    過剰な軟骨分解またはマトリックス分解を特徴とする疾患、
    骨癌、
    疼痛
    から選択される疾患の治療または予防に使用するための、請求項１から２０のいずれかの化合物。
32. 歯肉疾患が、歯肉炎および歯周炎から選択される、請求項３１の化合物。
33. 過剰な軟骨分解またはマトリックス分解を特徴とする疾患が、骨関節炎および関節リウマチから選択される、請求項３１の化合物。
34. 骨癌が、異常増殖である、請求項３１の化合物。