EA013401B1 - Противомикробная активность биологически стабилизированных наночастиц серебра - Google Patents

Противомикробная активность биологически стабилизированных наночастиц серебра Download PDF

Info

Publication number
EA013401B1
EA013401B1 EA200602094A EA200602094A EA013401B1 EA 013401 B1 EA013401 B1 EA 013401B1 EA 200602094 A EA200602094 A EA 200602094A EA 200602094 A EA200602094 A EA 200602094A EA 013401 B1 EA013401 B1 EA 013401B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
silver
silver nanoparticles
biologically stabilized
ppm
nanoparticles
Prior art date
Application number
EA200602094A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200602094A1 (ru
Inventor
Кишоре Мадхукар Пакникар
Original Assignee
Нано Каттинг Эдж Текнолоджиз Пвт. Лтд.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Нано Каттинг Эдж Текнолоджиз Пвт. Лтд. filed Critical Нано Каттинг Эдж Текнолоджиз Пвт. Лтд.
Publication of EA200602094A1 publication Critical patent/EA200602094A1/ru
Publication of EA013401B1 publication Critical patent/EA013401B1/ru

Links

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J13/00—Colloid chemistry, e.g. the production of colloidal materials or their solutions, not otherwise provided for; Making microcapsules or microballoons
    • B01J13/0004—Preparation of sols
    • B01J13/0043—Preparation of sols containing elemental metal
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N59/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing elements or inorganic compounds
    • A01N59/16—Heavy metals; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K33/00—Medicinal preparations containing inorganic active ingredients
    • A61K33/24—Heavy metals; Compounds thereof
    • A61K33/38—Silver; Compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/44—Oils, fats or waxes according to two or more groups of A61K47/02-A61K47/42; Natural or modified natural oils, fats or waxes, e.g. castor oil, polyethoxylated castor oil, montan wax, lignite, shellac, rosin, beeswax or lanolin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y30/00—Nanotechnology for materials or surface science, e.g. nanocomposites

Abstract

Изобретение относится к противомикробной композиции, содержащей биологически стабилизированные наночастицы серебра, стабилизированные с использованием «зеленого» биологического пути, средним размером 1-100 нм в носителе, концентрация в котором составляет от 1 до 6 ч./млн.

Description

Данное изобретение относится к противомикробным композициям.
В соответствии с данным изобретением рассматривается противомикробная композиция, содержащая серебро.
Предпосылки создания изобретения
Полезность серебра в качестве противомикробного агента известна на протяжении длительного времени. Цивилизации по всему миру тысячелетиями использовали серебро в качестве заживляющего и антибактериального агента. Его медицинские, защитные и восстанавливающие способности можно проследить до древних греков и Римской империи. Задолго до развития современной фармацевтики серебро использовали в качестве бактерицида и антибиотика.
Греки использовали серебряные сосуды для сохранения свежести воды и других жидкостей. Сочинения Геродота, греческого философа и историка, датируют применение серебра до Рождества Христова.
В Римской империи вино хранили в серебряных вазах для предотвращения гниения.
Применение серебра отмечено в сочинениях древней Индии и Египта.
В средние века изделия из серебра защищали состоятельных людей от высшей степени тяжести эпидемий чумы.
До появления современных бактерицидов и антибиотиков было известно, что вызывающие заболевания патогены не выживают в присутствии серебра. Вследствие этого серебро использовали для изготовления посуды, сосудов для питья и столовой утвари.
В частности, состоятельные люди хранили и ели пищу из серебряных сосудов, чтобы предотвратить рост бактерий.
Китайские императоры и их двор ели с помощью серебряных палочек для еды.
Жрецы оставили подтверждения применения ими серебра.
Колонисты в необжитых местностях Австралии подвешивали изделия из серебра в емкостях для воды, чтобы предотвратить ее порчу.
Пионеры, пересекавшие американский Запад на повозках, запряженных волами, установили, что, если они помещали серебряные или медные монеты в бочки с питьевой водой, это предохраняло воду от размножения в ней бактерий, водорослей и т. д.
Повсюду вдоль границы серебряные доллары помещали в молоко, чтобы сохранить его свежим.
Во время первой мировой войны в войсках листы серебра использовали для борьбы с инфекцией в длительно не заживающих ранах.
Перед введением антибиотиков в больницах широко использовали коллоидное серебро, которое было известно как бактерицид в течение по крайней мере 1200 лет.
В начале 1800-х гг. врачи использовали серебряные нити для зашивания хирургических ран с весьма успешными результатами.
В аюрведической медицине серебро использовали в небольших количествах в качестве тонизирующего агента, эликсира или омолаживающего агента для пациентов, ослабленных вследствие возраста или болезни.
Незадолго до конца 1800-х гг. ученые Востока вновь открыли то, что было известно тысячелетиями, т.е. то, что серебро представляет собой мощное средство борьбы с бактериями. Были разработаны лекарственные соединения серебра, и серебро стали в большинстве случаев использовать в качестве лекарственного средства. В начале 1900-х гг. применение серебра в качестве антибактериального вещества стало широко распространенным. К 1940 году на рынке имелось приблизительно четыре дюжины различных соединений серебра, используемых для лечения любого известного инфекционного заболевания. Они были доступны в виде лекарственных форм для перорального, инъекционного и наружного применения. Однако такие лекарственные препараты серебра вызывали изменение цвета кожи, называемое аргирия, особенно в случае некоторых типов протеинсвязанных соединений серебра и неправильно приготовленных и нестабильных композиций.
Новые знания о химии организма привели к появлению огромного множества применений коллоидных дезинфицирующих и лекарственных средств и продолжающихся исследований способностей и возможностей для коллоидного серебра. Однако «вновь найденная» популярность серебра в качестве превосходного средства для борьбы с инфекцией оказалась короткоживущей.
В период 1930-х гг. начали появляться синтетически изготовленные лекарственные средства, и приносимые прибыли, наряду с простотой производства данного нового источника лечения, стали мощной силой на рынке. Возникло большое возбуждение по поводу новых «чудесных лекарственных средств», и в то время не обнаруживалось устойчивых к антибиотикам штаммов организмов, вызывающих заболевания. Серебро быстро утратило свой статус по отношению к современным антибиотикам.
- 1 013401
В господствующих тенденциях медицины сохранило жизнеспособность применение некоторых препаратов серебра. Среди них применение разбавленного нитрата серебра для защиты глаз новорожденных от инфекции и применение «сильвадина», мази на основе серебра, в ожоговых отделениях для уничтожения инфекции. Перевязочные материалы на основе серебра также были одобрены Управлением по контролю за продуктами и лекарствами (США) и разрешены к продаже. Другие применения, к которым не утерян интерес, включают следующее:
серебряные фильтры для очистки воды и таблетки используют для предотвращения роста водорослей и бактерий;
устройства электрической ионизации, которые вводят в воду ионы серебра и меди, используют для дезинфекции воды в бассейнах без раздражающего воздействия хлора;
серебро используется для стерилизации рециркулируемой воды на космических кораблях;
в Швейцарии серебряные фильтры используются дома и в офисах; городские власти используют серебро для обработки сточных вод;
серебро является популярным агентом для борьбы с токсинами, переносимыми воздушным путем, а также другими промышленными ядами.
Однако в целом с открытием фармацевтических антибиотиков интерес к серебру в качестве противомикробного агента снизился почти до точки исчезновения.
В результате выдающейся работы доктора Марграфа, который установил, что применение разбавленного до 5%-ного раствора нитрата серебра убивает инвазивные бактерии при ожогах и способствует заживлению ран, серебро опять возникло в качестве вспомогательной добавки при лечении антибиотиками. Важно, что не появились устойчивые штаммы. Нитрат серебра широко использовался в 1960-е гг. для лечения жертв ожогов Мойера. Но нитрат серебра был далек от идеала. В конечном счете он не рассматривался в качестве идеального противомикробного агента вследствие многих осложнений, таких как нейтрализация ионов Ад+ анионами С1-, НСО3- и белков в жидкостях организма (снижая тем самым его бактерицидную активность) и развитие косметических аномалий, т.е. аргирии, вызываемой осаждением солей серебра на коже, что вызывает серо-голубое окрашивание.
Был разработан сульфадиазин серебра (Сильваден, Матюи БаЬогаЮпек), который в настоящее время используется в 70% ожоговых центрах. Открытый доктором Чарльзом Фоксом в Колумбийском университете сульфадиазин также оказался удачным для лечения холеры, малярии и сифилиса. Он также останавливает вирус герпеса, который отвечает за появление герпесной лихорадки, опоясывающего лишая и заболеваний.
Благодаря исследованиям, показавшим превосходные характеристики коллоидного серебра в борьбе с микробами, оно привлекло внимание ведущих ученых и исследователей-медиков по всему миру. Его преимущества стимулируют в настоящий момент новый интерес, поскольку 50 знаменитых врачей в настоящее время исследуют эффективность и применения коллоидного серебра для здоровья человека. В результате появилось много интересных исследований.
В соответствии с мнением экспертов ни один из протестированных когда-либо микроорганизмов не был способен выживать дольше 6 мин при непосредственном воздействии коллоидного серебра.
8с1епсе Э|де81 упоминает коллоидное серебро как «...чудо современной медицины» и далее указывает: «Антибиотики убивают возможно полдюжины различных болезнетворных микроорганизмов, но серебро убивает около 650. Резистентные штаммы не развиваются. Более того, серебро в сущности нетоксично. Коллоидное серебро, используемое в качестве противомикробного агента, не будет создавать сверхмикробов, как это делают антибиотики». А Иге б 8еат1е, основатель гиганта 8еат1е РйаттасеибсаН (теперь МопкаШо), указывал: «Применение коллоидного серебра на людях было проведено для большого числа случаев при удивительно успешных результатах. Для внутреннего введения оно имеет то преимущество, что быстро вызывает смерть патогенов, не оказывая токсического действия на хозяина. Оно полностью стабильно». Дополнительная информация показывает, что коллоидное серебро не вызывает опасных взаимодействий с другими лекарственными средствами или наружным лечением. В лабораторных исследованиях коллоидного серебра оно убивало при контакте организмы бактерий, вирусов и грибов в течение нескольких минут. Баггу С. Еотб, доктор медицины факультета акушерства и гинекологии, ИСБА Школы медицины Центра наук о здоровье, сообщал 1 ноября 1988 г.: «Я протестировал их (растворы серебра) с использованием стандартных противомикробных тестов для дезинфицирующих средств. Растворы серебра обладали антибактериальными свойствами для концентраций растворов 105 организмов на 1 мл в случае 81тер1ососси8 Руодепек, 81арйу1ососси8 Аитеик, №18кепа Оопотгйеа, Оаибпеге11а УадшаПк, 8а1топе11а ТурЫ и других кишечных патогенов и фунгицидными для Сапб1ба А1Ысапк, Сапб1ба С1оЬа1а и М.ЕигГиг».
Поскольку многие организмы выработали штаммы, устойчивые к действию современных антибиотиков, особый интерес представляют открытия доктора РоЬеП Вескег. Вескег из университета Сиракуз утверждает: «Все организмы, которые мы протестировали, были чувствительными к генерированным электрически ионам серебра, включая некоторые из них, которые были устойчивыми ко всем известным антибиотикам. Ни в одном из случаев не было видимого нежелательного побочного действия при лечении с использованием серебра».
- 2 013401
Потенциал коллоидного серебра значителен, поскольку в отличие от антибиотиков, которые являются специфическими только для бактерий, коллоидное серебро выводит из строя некоторые ферменты, необходимые для анаэробных бактерий, вирусов, дрожжей и грибов, что приводит к разрушению данных ферментов. Дальнейшие указания таковы, что данные бактерии не могут выработать устойчивость к серебру, как они это делают в случае антибиотиков, поскольку серебро атакует их источник питания, а не непосредственно их самих.
Однако в настоящее время стало понятным, что как нитрат серебра, так и сульфадиазин серебра повреждают фибробласты и пролиферацию эпителия, в конечном счете останавливая процесс заживления. Попытки найти лучшие средства от болезней на основе серебра имели ограниченный успех. Несколько интересных сообщений появилось в последние несколько лет, в которых описано применение покрытых серебром пленок при лечении ожогов. Такие пленки получали с использованием метода осаждения пара, так чтобы получить толщину около 300 нм. В одном из таких исследований пленки целенаправленно содержали химически закрытое нанокристаллическое серебро с типичным размером зерна ~50 нм. Такие пленки длительно доставляли высокие (5000-10000 мг/л) концентрации серебра, которые оказывали цитотоксическое действие. Значительная абсорбция ионов серебра через ожоговую рану могла происходить, когда пациентов обрабатывали наружными содержащими серебро препаратами. По оценке концентрация серебра в печени составляла 14 мг/г, когда использовали препараты серебра с основой крема, содержащие до 3000 мкг Ад'/г. Действие нитрата серебра на клетки фибробластов кожи человека исследовали Ηίάηίβο с1 а1. и было установлено, что низкая концентрация ионов серебра проявляет ингибирующее действие.
Соответственно существует необходимость в содержащем серебро препарате, который можно было бы эффективно использовать в качестве противомикробного агента, не обладающего каким-либо цитотоксическим действием и не содержащего каких-либо добавленных веществ, которые не являются биосовместимыми.
Сущность изобретения
Задача настоящего изобретения заключается в разработке противомикробной композиции, содержащей биологически стабилизированные наночастицы серебра, которые стабилизированы с использованием «зеленого» биологического пути, со средним размером 1-100 нм в носителе, концентрация в котором составляет от 1 до 6 ч./млн.
Другая задача настоящего изобретения заключается в разработке противомикробной композиции, содержащей биологически стабилизированные наночастицы серебра, которые (а) проявляют противомикробную активность в очень низкой эффективной концентрации (благодаря чрезвычайно высокой площади поверхности) и (Ь) не являются цитотоксичными в данных концентрациях.
Положения изобретения
В соответствии с настоящим изобретением разработана противомикробная композиция, содержащая:
a) биологически стабилизированные наночастицы серебра размером в диапазоне от 1 до 100 нм и
b) носитель, в котором концентрация указанных биологически стабилизированных наночастиц серебра находится в диапазоне от 1 до 6 ч./млн.
Обычно наночастицы серебра стабилизированы биологически водным раствором мацерированных клеток тканей растений.
В соответствии с одним вариантом осуществления изобретения водный раствор разбавляют деионизированной водой вплоть до десятикратного разбавления.
Обычно ткань растения представляет собой по крайней мере одну ткань растения, выбранную из группы тканей растений, которая включает листья, корни, стебли, цветы и плоды следующих растений: люцерна, акация аравийская (Асас1а атаЫеа), кориандр (Сопапйгшп кайуит), восточно-индийский кипрей (Етуа1аш1а сотопапа), бергавия раскидистая (Восг11а\за йййика), индийский барбарис (ВегЬегпк апкЕИа), бархатцы (Са1епйи1а оГйщпайк), петрушка (Ре1гоке1шшп кайуит), горец перечный (АсНугагИНек акрега), кассия Теннера (СакДа аштси1а1а), лаванда, бахед (Теттшайа Ье1епса), фенхель (Еепшси1ит уи1дате), хвощ лесной (ЕдшкеЫт атуепке), малина (КиЬик Иаеик), алоэ вера (А1ое ЬатЬайепДк), желтокорень канадский (Нуйтакйк сапайепДк), чеснок (АШиш кайуит), ЕсЫпасеа крр., очанка (Еирйтак1к оГйсшайк), эгле мармеладное (Аед1е шатше1о8), индийский тмин (Ттасйукрегшиш ашш1), ромашка горькая (Ма)псапа сйашошШа), гвоздика (ЗухуДшп атошайсиш), имбирь (2шд1Ьет оГПс1па1е), базилик священный (Оашиш 8апс1иш), акалифа индийская (Аса1урка шФса), дурман (Ба1ига шпох1а), мята (МепШа крр.), листья бетеля (Р1рег Ьейе, Ыпп), календула (Са1епйи1а оййсшайк ΕΙΝΝ), звездчатка (ТпсНоЬакЪ 1усйп1йеашш), огурец (Сисит18 кайуик, Ыпп.), акация аравийская, олива (О1еа еигореа Ь.), нивяник обыкновенный, семена тмина (Сишшиш сутшит), листья карри (Миггауа коепд1), укроп (АпеЛит дгауео1епк), индийская мальва (АЬиШоп шйюиш), мелия индийская (АхаййасЫа шйюа), мадука индийская (МайНиса шФса), тамаринд (Татаппйик шФсик), куркума (Ситсита 1опда), зимняя вишня (ХУйНаша коттизГета), унаби (Ζί/урНик )ищЬа), тыква (СиситЬйа реро, СиситЬйа тахина), американская липа (ТШа атенсат), аир (Асогик са1атик), амарант (АтатапШик, кршока), арника (Атшса Моп1апа), американская бузина (ЗатЬисик Сапайеп81к), буквица (8)асНук оГйсшайк), евгения (Еидеша ^ашЬо1аиа), календула (Са1епйи1а оГйсшаИк
- 3 013401
ΕΙΝΝ). ромашка обыкновенная (Майгсапа сйашотШа). плаун (Ьусоробшт ке1адо или с1ауа!ит). одуванчик (Тагахасит оШсша1ет). эхинацея (ЕсЫпасеа апдщйГойа). эвкалипт (Еиса1ур!и8 д1оЬи1е§). желтокорень канадский (НубгаШк Сапабеп818). норичник. окопник лекарственный (8утрйу1ит оШсша1е). примула (Рпти1а уегЦ (Ь)). подлесник европейский (8ишси1а еигораеа). вербена европейская (УегЬепа оГйсшаШ). мелколепестник канадский. молодило (8етрегу1уит 1ес!огит.Ьшп). лиственница (Ьапх 1апсша). медуница (Ри1топапа апдиШГойа). лук (Л1шт сера). папайя (Сапса рарауа). персиковое дерево (Ргипик регыса). анютины глазки (Ую1а 1г1со1ог (ΟΝΝ.)). анафалис жемчужный (ЛпарйаШ тагдагйасеа).
Носитель представляет собой крем. гель. мазь. жидкость. суспензию. аэрозольный спрей. марлевую прокладку. волокнистый тампон. мембрану. пленку. ленту. пластырь.
В соответствии с другим аспектом изобретения разработан способ получения противомикробной композиции согласно любому из предшествующих абзацев. который включает стадии:
(1) получения обычным образом носителя. выбранного из группы носителей. которая включает крем. гель. мазь. жидкость. суспензию. аэрозольный спрей. марлевую прокладку. волокнистый тампон. мембрану. пленку. ленту. пластырь. брикет;
(2) получения водной дисперсии биологически стабилизированных наночастиц серебра размером в диапазоне от 1 до 100 нм;
(3) смешивания полученного количества указанной водной дисперсии в указанном носителе с образованием гомогенной матрицы. в которой концентрация биологически стабилизированных наночастиц серебра составляет от 1 до 6 ч./млн.
Водную дисперсию биологически стабилизированных наночастиц получают с использованием стадий. включающих:
a) растворение соли серебра в воде. имеющей проводимость менее чем 3 мкСм. с получением раствора. в котором концентрация ионов серебра находится в диапазоне от 20000 до 50000 ч./млн;
b) получение свежепрофильтрованного водного раствора экстракта биологической ткани;
c) разведение водного раствора деионизированной водой в соотношении. колеблющемся от 1:5 до 1:50. с получением раствора. имеющего потенциал открытой цепи между 0.02 и 0.2 В и рН между 5.5 и 7.5 и общее содержание органического углерода по меньшей мере 7500 ч./млн;
б) поддерживание указанного водного раствора в условиях непрерывного перемешивания при температуре между 20 и 30°С;
е) введение небольшого количества раствора соли серебра в указанный раствор водного экстракта в условиях непрерывного перемешивания так. чтобы конечная концентрация иона металла в реакционной смеси была в диапазоне от 50 до 300 ч./млн;
Г) продолжение перемешивания в течение от 30 мин до 3 ч в условиях хорошего освещения для получения коллоидной суспензии наночастиц серебра;
д) отделение наночастиц от коллоидной суспензии с использованием известного способа. такого как центрифугирование.
Способ получения биологически стабилизированных наночастиц серебра может быть проиллюстрирован следующим образом.
Воду собирали с использованием системы очистки воды ЬаЬсопсо. США. имеющей предварительный фильтр. угольный фильтр и обратную осмотическую мембрану. Указанная вода имела проводимость 2.7 мкСм в соответствии с измерением с помощью он-лайн цифрового измерителя. встроенного в прибор. 50 цельных цветков ШЬщсик гокакшещщ Ыпп (48.37 г сырого веса) вымачивали в 150 мл деионизированной воды в блендере (500 об/мин) в течение 10 мин. получая гомогенную вязкую суспензию. Данную вязкую суспензию фильтровали через бумажный фильтр \У11а1тап № 1 в вакууме. получая 165 мл прозрачного вязкого раствора. Аликвоту данного раствора. равную 10 мл. разводили водой до 100 мл.
Удаляли аликвоту. равную 7 мл. и контролировали потенциал открытой цепи при 25°С на электрохимическом анализаторе (СН 1и81гитеп18 600В. США) с использованием трехэлектродной системы. В качестве электрода сравнения использовали Ад/АдС1 (водн.). стеклянный углеродный электрод (диаметр 3 мм) в качестве рабочего электрода и Р1 проволоку (длина 4 см) в качестве противоэлектрода. Найденное значение составляло 0.15 В. Аналогично контролировали рН свободно текущего раствора с использованием цифрового рН-метра (соп1го1 Оупатюк. Индия). которое составляло. как было найдено. 5.6.
С использованием анализатора Весктап ТОС была измерена концентрация общего органического углерода. которая составляла. как было установлено. 22180 ч./млн.
Синтез наночастиц серебра проводили методом восстановления боргидридом. как описано Лп. В. Сао У.^.. Ке11у К.Ь.. 8с11а1х С.С.. 2йепд. 1.С. и Сйаб А. М1гкш. (2001). Рйо!ошбисеб сопуеШоп оГ Щуег папокрйегек Ю папорШпъ. 8с1епсе: 294; 1901-1903. Кратко. 10 мл водного экстракта цветов подвергали взаимодействию со 100 мкл исходного раствора нитрата серебра (100 нМ) с последующим добавлением 100 мкл боргидрида натрия (500 мМ). что приводило к образованию коллоидной суспензии.
Образец коллоидной суспензии сканировали в диапазоне от 200 до 800 нм с использованием спектрофотометра с диодной матрицей (Осеап Ор11сз. США). Обнаруживали пик при 410 нм. Данный пик представлял собой характеристичный плазмонный пик для наночастиц серебра (фиг. 1 в прилагаемых фигурах). обычно имеющий средний диаметр 5-120 нм.
- 4 013401
Другую аликвоту коллоидной суспензии исследовали методом трансмиссионной электронной микроскопии (ТЕМ) при 200 кВ с использованием электронного микроскопа Ρΐιίΐίρδ. оборудованного полевой эмиссионной пушкой. т.е. СМ200 ЕЕС. Образец ТЕМ получали. капая из пипетки 2 мкл коллоидного раствора на покрытую углем медную сетку и получая изображение. Средний размер. видимый на изображении. составлял 10-20 нм (фиг. 2).
Атомное силовое микроскопическое исследование образца проводили с использованием головки АЕМ Ναηοηίοδ МиШУ1ете с Е-сканером (Ναηοηίοδ 1шадтд Ь(6.. Иерусалим. Израиль). Образец сканировали в неконтактном методе с зондом радиусом 20 нм и при резонансной частоте 80 кГц. Изображения АЕМ фиксировали. обрабатывали и анализировали с использованием программного обеспечения ООАШТ7. версия 1.00 (Сауеи618Й 1п8(гитеи(8 Ь(6.. Великобритания). Для исследования 5 мкл образца помещали на предметное стекло 1 см2 (толщина 0.5 мм) и сушили в ламинарном токе воздуха перед получением изображения. Наблюдали однородные частицы диаметром 50-100 нм и высотой 125 нм. как видно на фиг. 3 а. который представляет собой трехмерный АЕМ вид части образца. тогда как фиг. 3Ь представляет собой двумерный вид. показывающий анализ размера типичной частицы.
Оценка противомикробной активности.
С целью оценки композиции получали следующим образом.
Жидкая суспензия.
Полученную. как указано выше. суспензию наночастиц серебра разбавляли деионизированной водой в отдельных емкостях. в которых измеренная концентрация биологически стабилизированных наночастиц серебра находилась в диапазоне от 2.56 до 6 ч./млн.
Мазь на кремовой основе.
Жидкий парафин (400 мл) смешивали с оксидом цинка (25 г) и глицерином (25 г). получая гомогенную смесь. Воск (950 г). специальный воск (50 г) и стеариновую кислоту (11 г) нагревали на водяной бане при 100°С с образованием гомогенной жидкой смеси. Жидкую парафиновую смесь медленно выливали в смесь воска и интенсивно перемешивали. получая гомогенную массу. Лиофилизованный порошок биологически стабилизированных наночастиц серебра (5 мг) медленно и при непрерывном перемешивании вводили в массу. получая гомогенный крем. содержащий наночастицы серебра.
Куски марли.
Стерилизованные куски марли пропитывали суспензией или мазью биологически стабилизированных наночастиц серебра. полученных. как указано выше.
Противомикробные возможности биологически стабилизированных наночастиц серебра оценивали на основании следующих способов и тестов.
Микроорганизмы.
В данном исследовании использовали следующие штаммы бактерий: ЕзсйепсЫа сой АТСС 117. Р8еиάотоиа8 аетидшоза АТСС 9027. 8а1тог1е11а аЬону ΝΟΤΟ 6017. 8а1тог1е11а (урЫтигшт АТСС 23564. К1еЬз1е11а аего^ие^ АТСС 1950. Рго(еиз уи1дапз Νί’ΒΙ 4157. 8(арйу1ососси8 аитеиз АТСС 6538Р. ВасШиз 8иЬ(1118 АТСС 6633 и Саиά^άа аШюащ (дрожжи).
Тестирование восприимчивости.
Минимальную ингибирующую концентрацию (М1С) биологически стабилизированных наночастиц серебра для вышеуказанных штаммов определяли в соответствии с рекомендациями Национального комитета клинических лабораторных стандартов (ИССЬ!?) в 96-луночных микротитровальных планшетах. содержащих 200 мкл бульона МН. Концентрация серебра в лунках колебалась от 1.56 до 25 мкг/мл. Клеточные суспензии в логарифмическом масштабе разводили физиологическим раствором и инокулировали в лунки. получая конечную концентрацию инокуляции 1х105 колониеобразующих единиц/мл. Микротитровальные планшеты инкубировали при 37°С и обследовали визуально с точки зрения наличия/отсутствия роста через 24 ч. Наименьшую концентрацию серебра. ингибирующую рост. регистрировали как минимальную ингибирующую концентрацию (М1С). Среду из лунок. где не наблюдался видимый рост. инокулировали в виде пятна на агаровые планшеты МН и инкубировали планшеты в течение 24 ч для определения минимальной концентрации серебра. которая является бактерицидной (МВС).
Результаты представлены на фиг. 4 (табл. 1). Результаты показывают. что величины М1С для грамположительных и грамотрицательных бактерий колеблются в диапазоне от 1.56 до 3.12 ч./млн биологически стабилизированных наночастиц серебра. тогда как величины МВС колеблются в диапазоне от 6.25 до 12.5 ч./млн биологически стабилизированных наночастиц серебра. Величина М1С для дрожжей составляет 12.5 ч./млн. а МВС равна 50. что показывает. что при выбранной концентрации значительного действия на дрожжи не имеется.
Влияние нейтрализующих агентов на биологически стабилизированные наночастицы серебра.
Нейтрализацию активности биологически стабилизированных наночастиц серебра в присутствии сывороточного альбумина. хлорида натрия и тиогликолята натрия исследовали в МНВ. Для этой цели для одного набора для опытов МНВ дополняли тремя разными концентрациями сывороточного альбумина (2. 5. 10%) наряду с 0.85% хлорида натрия. в другом наборе опытов добавляли 0.1. 0.5 и 1% тиогликолята натрия. как предложено Еигг е( а1. (1994). М1С определяли. как описано выше.
- 5 013401
Было установлено, что величины М1С остаются неизменными в присутствии вышеуказанных нейтрализующих агентов.
Кинетика время-подавление.
Бактериальные культуры инокулировали (конечная плотность клеток 1х105 колониеобразующих единиц/мл) в 2 мл бульона МН, дополненного подходящими количествами биологически стабилизированных наночастиц серебра (в концентрации, соответствующей МВС для соответствующих культур). После воздействия биологически стабилизированных наночастиц серебра в течение определенных интервалов времени (примерно 0, 30, 60, 90 и 120 мин) 0,1 мл образца удаляли, серийно разводили и помещали на агаровые планшеты МН. Общее выжившее число (ТУС) определяли после инкубирования планшетов при 37°С в течение 24 ч. Все эксперименты проводили в четырех повторностях. Конструировали кривые подавления путем графического изображения 1од10 КОЕ/мл относительно времени. Данные кривые подавления показаны на фиг. 5.
Для всех протестированных бактериальных культур общая выжившая популяция клеток уменьшалась на 90% при коротком времени воздействия, составляющем 2 ч. Данные позволяют предположить, что биологически стабилизированные наночастицы серебра эффективно ингибируют рост грамотрицательных и грамположительных бактерий, включая устойчивый к множеству лекарственных средств штамм Рзеийотопаз аегидшоза.
Постдействие биологически стабилизированных наночастиц серебра.
Постдействие наночастиц серебра исследовали с использованием спектрофотометрического метода. Кратко, все бактериальные штаммы (105 КОЕ/мл) подвергали воздействию 4хМВС биологически стабилизированных наночастиц серебра в течение 1 ч при 37°С. В качестве контроля в данном эксперименте служили культуры, не подвергавшиеся воздействию биологически стабилизированных наночастиц серебра. Суспензии центрифугировали при 3000хд в течение 10 мин и осадок клеток промывали несколько раз физиологическим раствором для удаления каких-либо следов наночастиц серебра. Подсчет колоний проводили в момент времени ноль (Νιηκ) и после удаления биологически стабилизированных наночастиц серебра ^наносеребро). Осадок культур затем суспендировали в МНВ и рост культур контролировали периодически по измерению ОП при 660 нм. Все культуры инкубировали при 37°С при встряхивании и ОП измеряли через каждый 1 ч. Постдействие биологически стабилизированных наночастиц серебра рассчитывали как разницу во времени, требуемом для достижения увеличения в КОЕ на единицу в логарифмической шкале в тестируемых культурах, подвергнутых воздействию биологически стабилизированных наночастиц серебра и в отсутствие воздействия.
Расчет постдействия биологически стабилизированных наночастиц серебра.
После определения Ν1Π1Ο и ^аносеребро и спектрофотометрического контролирования роста контроля и культур, подвергнутых воздействию, проводили следующие стадии:
(ί) построение графика в полулогарифмической шкале спектрофотометрического роста кривых контроля и культур после воздействия, представления оптической плотности (ОП) вдоль оси у и времени относительно оси х, обычно первое значимое значение ОП можно регистрировать для контрольной культуры через 4 или 5 ч после первоначального момента времени (1[п1с=0);
(ίί) определение времени образования (ί8) из кривых спектрофотометрического роста;
(ίίί) расчет бактерицидного действия (г) ί=Ν· /Ν б ' 1 1 тС1 Ί наносеребро >
(ίν) графическое определение времени отделения спектрофотометрического роста кривых контрольных культур и культур после воздействия (18ер);
(ν) расчет постдействия биологически стабилизированных наночастиц серебра был проведен согласно следующей формуле постдействие биологически стабилизированных наночастиц серебра = 1зер-1ехро-1в1од-г/1од2, где !,е|) представляет собой время отделения спектрофотометрических кривых роста контрольных культур и культур после воздействия;
1ехро представляет собой время, эквивалентное 1 ч продолжительности;
1геср1 представляет собой теоретическое время, которое требуется обработанной культуре для подсчета ее выживаемости (Ναηί1), чтобы стать равной первоначальному счету (Νιηιρ);
г представляет собой бактерицидное действие и ί8 представляет собой время образования.
На фиг. 6а и 6Ь показано постдействие биологически стабилизированных наночастиц серебра на культуру грамотрицательных бактерий и дрожжи соответственно. Установлено, что постдействие биологически стабилизированных наночастиц серебра составляет 6-8 ч, как указывает 1ад фаза в кривых роста.
Взаимодействие лекарственных средств с биологически стабилизированными наночастицами серебра.
Двумерный метод шахматного макроразбавления использовали для охарактеризовывания взаимодействий между биологически стабилизированными наночастицами серебра и лекарственными средствами (а именно, гентамицин, пенициллин, цефотаксим, цептазидим, канамицин, ванкомицин). Для опи
- 6 013401 санного выше штамма Ркеийотопак аетидшока ΜΌΚ проводили шесть экспериментов. Инокулят получали аналогично тому, который использовали в тесте на чувствительность. Для отдельных лекарственных средств с биологически стабилизированными наночастицами серебра проводили двукратное серийное разведение, и концентрации колебались от более низкой в четыре раза и более высокой в четыре раза, чем М1С. Наиболее высокое разведение комбинации лекарственного средства и биологически стабилизированными наночастицами серебра, которое ингибирует видимый рост тестируемого организма, рассматривали как частичную ингибирующую концентрацию (МС). Показатель частичной ингибирующей концентрации (Р1С1) использовали для определения взаимодействия между двумя лекарственными средствами. Р1С1 представляет собой сумму значений Р1С для каждого из лекарственных средств. Р1С рассчитывали следующим образом:
М1С протестированного лекарственного средства в комбинации/М1С протестированного по отдельности лекарственного средства.
Взаимодействие определяли как синергическое, если Р1С1 был равен 0,5, как аддитивное, если Р1С1>0,5 до 1,0, как индифферентное, если Р!С[>1,0 до 2,0, и как антагонистическое, если Р1С1>2,0.
Средние значения Р1С1, полученные в процессе проведения данной работы, показывали, что действие биологически стабилизированных наночастиц серебра было синергическим для цефотаксима и цефалоспорина, частично синергическим для цептазидима и индифферентным для гентамицина, пенициллина и ампициллина. Однако антагонистическое действие наблюдалось в сочетании с канамицином и ванкомицином.
Противомикробная активность биологически стабилизированных наночастиц серебра на марлевых прокладках.
Марлевые прокладки (2x2 см) обрабатывали в автоклаве и смачивали 100 мкл суспензии биологически стабилизированных наночастиц серебра или обрабатывали путем нанесения мази, содержащей биологически стабилизированные наночастицы серебра (оба имели концентрацию наночастиц серебра 4хМ1С для соответствующих культур) и инокулировали с использованием 105 клеток. Одновременно проводили контрольный опыт с использованием стерильного физиологического раствора. Марлевые прокладки помещали в стерильные чашки Петри и выдерживали в увлажненном инкубаторе, установленном при 37°С. Выживаемость культур контролировали в момент времени 0 ч и в интервал от 4 до 24 ч. Для этого марлевую прокладку удаляли, помещали в 10 мл физиологического раствора, встряхивали и суспензию серийно разводили и помещали на питательный агаровый планшет. ТУС определяли после инкубации при 37°С в течение 24 ч. Для каждого времени реакции проводили шесть параллельных экспериментов как для обработанных, так и для контрольных марлевых прокладок.
Число в масштабе 1од10 организмов, выделенных с каждого типа марлевой прокладки, рассчитывали для всех шести параллельных экспериментов (предполагали одну колонию в случае обнаружения отсутствия колоний). Результаты изображены как средняя величина логарифма (1од) относительно времени реакции на фиг. 7А-7С.
Полученные результаты показывают, что время, необходимое для >97% уменьшения в популяции тестируемых организмов, составляло 8 ч.
Исследование цитотоксичности ίη уйго.
Клеточную линию лейкемии человека К562, клеточную линию гепатоклеточной карциномы НЕРС2 и мышиные фибробласты Ь929 культивировали обычным образом в модифицированной по способу Дульбекко среде Игла (ΌΜΕΜ, 81дта, США), дополненной 10% околоплодной телячьей сыворотки и 1% коммерческого антибиотического противогрибкового препарата (Реп81тер, 81дта, США). Культуры поддерживали при 37°С в атмосфере 5% СО2.
Сравнительное действие четырех препаратов, а именно электрохимически синтезированных наночастиц серебра, стабилизированных глицерином (ЕС-С1у), электрохимически синтезированных наночастиц серебра, стабилизированных поливинилпирролидоном (ЕС-РУР), биологически стабилизированных наночастиц серебра (Сйет-Вю) и нитрата серебра (АдИО3), контролировали на пролиферацию и жизнеспособность клеток вышеуказанных трех клеточных линий с использованием набора для анализа ХТТ (Воске Мо1еси1аг ВюскетюаИ, Германия). Кратко, в микротитровальные планшеты (96 лунок), содержащие ΌΜΕΜ (модифицированная по способу Дульбекко среда Игла), высевали клетки при первоначальной плотности клеток 1х 105 клеток/мл. Клеткам давали возможность размножаться в течение 24 ч при 37°С, 5% СО2. После инкубации супернатант осторожно удаляли и добавляли стерильную среду ΌΜΕΜ, дополненную наночастицами серебра в диапазоне 1,5-15 мкл/мл. Планшеты дополнительно инкубировали в течение 48 ч при 37°С в атмосфере 5% СО2.
После инкубации добавляли в каждую лунку 50 мкл реагента ХТТ и планшеты инкубировали при 37°С в атмосфере 5% СО2 в течение 4 ч. Окрашивание, появляющееся вследствие образования формазана, оценивали количественно с использованием ридера ЕЫ8А (μθιι;·ιη1. Вю1ес11 йШгитегШ) при 450 нм. Планшеты сканировали при 690 нм таким образом, чтобы обеспечить коррекцию поглощения клетками. ХТТ анализ проводили в 6 повторностях с использованием подходящих контролей в отсутствие наночастиц серебра.
- 7 013401
Полученные результаты показаны в таблицах, которые можно видеть на фиг. 8-10.
Четко видно, что биологически стабилизированные наночастицы серебра являются нетоксичными для всех трех клеточных линий в концентрации от 1 до 6 ч./млн. Также можно видеть, что химически стабилизированные наночастицы серебра, так же как и нитрат серебра, являются высокоцитотоксичными даже в концентрации 3,12 ч./млн.
Таким образом, в экспериментах, проведенных в соответствии с данным изобретением, установлено, что биологически стабилизированные наночастицы серебра обладают широким спектром противомикробного действия в диапазоне концентраций 1-6 ч./млн. Кроме того, в данном диапазоне концентраций биологически стабилизированные наночастицы серебра не демонстрируют цитотоксичности ίη νίίτο.
Описанные в данном изобретении биологически стабилизированные наночастицы серебра могут найти применение при лечении ожоговых ран, в качестве укрывающего материала для различных медицинских устройств, таких как катетеры, сердечные клапаны, биоактивные стекла, покрытые оболочкой нити для сшивания ран и ортопедические устройства. Немедицинское применение может заключаться в использовании в системах для очистки воды и воздуха.
Биологически стабилизированные наночастицы серебра в соответствии с данным изобретением можно использовать в качестве бактерицида и антибиотика при различных бактериальных инфекциях.
Таким образом, композицию, полученную с использованием биологически стабилизированных наночастиц серебра, можно использовать при лечении карбункулов, грибкового заболевания ног, фурункулов, кандидомикотического сепсиса, цереброспинального менингита, колита, цистита, дерматита, дифтерии, диплококков, Е.сой, гонореи, импетиго, инфекции, пневмококков, стригущего лишая, опоясывающего лишая, стафилококков, туберкулеза, бородавок, коклюша.
Биологически стабилизированные наночастицы серебра могут быть получены в виде суспензии/раствора, в которых растворитель может представлять собой очищенную воду, воду для инъекций, которая используется для стерильного препарата, или любой другой неводный сорастворитель, который может представлять собой, например, полигликоли, спирты, инертные ожиженные газы и другие галогенуглеродные соединения, как будет предпочтительно.
Другие эксципиенты могут включать поверхностно-активные вещества, суспендирующие агенты и модифицирующие вязкость агенты, воски, целлюлозные полимеры, карбополы и необязательно консерванты, буферные агенты, регулирующие осмотическое давление агенты или регулирующие изотоничность агенты, углеводороды и низкокипящие растворители.
Эксципиенты в препаратах могут включать полисорбат, карбополы, гидроксипропилметилцеллюлозу, вазелиновую основу, воски, хлорид натрия, маннит, лимонные кислоты, фосфаты, ацетаты, бензиловые спирты, бутиратный гидрокситолуол (ВНТ), бутиратный гидроксианизол (ВНА), гликоли, такие как глицерин, полиэтиленгликоли, пропиленгликоли, сорбит, инертные газы, такие как азот, водород и другие, углеводороды могут представлять собой этанол, бутанолы и другие, фторуглероды.
Композиции могут представлять собой глазные капли, ушные капли, капли для носа, растворы, мази, кремы, лосьоны и другие препараты для перевязки ожогов или инфекций.
Указанные композиции, которые подразумевают наружное нанесение на инфицированную площадь, могут также содержать другие синергические активные ингредиенты, такие как усилители для растирания, которые могут представлять собой по крайней мере один из выбранных из ментола, метилсалицилата, олеумной жидкой мази, капсаицина.
Данный раствор вместе с низкокипящими растворителями, или сжатыми ожиженными газами или углеводородами, или комбинациями любых двух из них может быть помещен с использованием подходящего устройства в систему под давлением, из которой лекарственное средство распыляют на инфицированную область для непосредственного действия.
Мазь может быть получена с использованием раствора/суспензии биологически стабилизированных наночастиц серебра вместе с указанными активными ингредиентами и может быть вместе с вышеуказанными сорастворителями. Модифицирующие вязкость агенты используют в подходящей концентрации таким образом, чтобы получать желаемую вязкость, как требуется для препарата.
Композиции для наружного применения также могут быть получены с использованием природных ингредиентов без консервантов. Очень мелкий размер частиц в композиции обеспечивает лучшую биодоступность и всасывание.

Claims (6)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Нецитотоксическая противомикробная композиция, содержащая:
    a) наночастицы серебра размером от 1 до 100 нм, биологически стабилизированные водным раствором мацерированных клеток тканей растений; и
    b) носитель, в котором концентрация указанных биологически стабилизированных наночастиц серебра составляет от 1 до 6 ч./млн.
  2. 2. Противомикробная композиция по п.1, в которой водный раствор разбавлен вплоть до 10кратного разведения деионизированной водой.
  3. 3. Противомикробная композиция по п.1, в которой ткань растения представляет собой по меньшей мере одну ткань растения, выбранную из группы тканей растений, которая включает листья, корни, стебли, цветы и плоды следующих растений: люцерна, акация аравийская (Асас1а атаЫса), кориандр (Сопапйгит зайуит), восточно-индийский кипрей (Етуа1аш1а сотопапа), бергавия раскидистая (Воетйау1а ййГиза), индийский барбарис (ВегЬетз апзЫ1а), бархатцы (Са1епйи1а оГНст-Шз), петрушка (Рейозейпит зайуит), горец перечный (АсйутаЫйез азрета), кассия Теннера (Сазз1а аштси1аЫ), лаванда, бахед (Тетшшайа Ье1епса), фенхель (БепшсиЫт уи1дате), хвощ лесной (Ес.|шзе1ит атуепзе), малина (ВиЬиз 1йаеиз), алоэ вера (А1ое ЬатЬайепз1з), желтокорень канадский (Нуйтазйз сапайепз1з), чеснок (А11шш зайуит), ЕсЫпасеа зрр., очанка (Еирйтаз1з оГйсшайз), эгле мармеладное (Аед1е шатше1оз), индийский тмин (Тгасйузрегшиш ашш1), ромашка горькая (Майтсапа сйашошй1а), гвоздика (БухудЫт атотайсит), имбирь (УшщЬег оГДс1па1е), базилик священный (Остит запсЫт), акалифа индийская (Аса1урйа шйюа), дурман (Этига 1ппох1а), мята (МеШйа зрр.), листья бетеля (Р1рег Ьейе, Бшп), календула (Са1епйи1а оГйсшайз ЬШИ), звездчатка (ТпсйоЬаз1з 1усйЫйеатит), огурец (Сисит1з зайуиз, Ьшп.), акация аравийская, олива (О1еа еигореа Ь.), нивяник обыкновенный, семена тмина (Ситшит сутшит), листья карри (Миггауа коеп§1), укроп (АпеЫит дгауео1епз), индийская мальва (АЬий1оп шйюит), мелия индийская (АхаййасЫа шйюа), мадука индийская (Маййиса шйюа), тамаринд (Татаппйиз шйюиз), куркума (Сигсита 1опда), зимняя вишня (\Уй11аЫа зоттЫГета), унаби (Ζί/урНиз ]ищЬа), тыква (СиситЬйа реро, СиситЬйа тахта), американская липа (ТШа атепсапа), аир (Асогиз са1атиз), амарант (АтатаЫйиз, зршоза), арника (Атшса МоЫапа), американская бузина (БатЬисиз Сапайепз1з), буквица (81асйуз оГйсшайз), евгения (Еидеша _)атЬо1апа), календула (Са1епйи1а оГйсшайз ΕΙΝΝ), ромашка обыкновенная (Майтсапа сйатотШа), плаун (БусороФит зе1адо или с1ауаЫт), одуванчик (Тагахасит оГйсша1ет), эхинацея (ЕсЫпасеа апдизйГойа), эвкалипт (Еиса1урЫз д1оЬи1ез), желтокорень канадский (Нуйтазйз Сапайепз1з), норичник, окопник лекарственный (БутрйуЫт оГйсша1е), примула (Рпти1а уепз (Б)), подлесник европейский (БиЫси1а еигораеа), вербена европейская (УегЬепа оГйсшаИз), мелколепестник канадский, молодило (8етрету1уцт 1ес1отит, Бшп), лиственница (Бапх 1апсша), медуница (Ри1топапа апдлзйГойа), лук (А1шт сера), папайя (Сапса рарауа), персиковое дерево (Ргипиз регзюа), анютины глазки (Ую1а 1г1со1ог (ΕΙΝΝ)), анафалис жемчужный (Апарйайз татдатйасеа).
  4. 4. Противомикробная композиция по п.1, в которой носитель представляет собой крем, гель, мазь, жидкость, суспензию, аэрозольный спрей, марлевую прокладку, волокнистый тампон, мембрану, пленку, ленту, пластырь.
  5. 5. Способ получения противомикробной композиции согласно любому из предшествующих пунктов, который включает стадии:
    a) получения обычным образом носителя, выбранного из группы носителей, которая включает крем, гель, мазь, жидкость, суспензию, аэрозольный спрей, марлевую прокладку, волокнистый тампон, мембрану, пленку, ленту, пластырь, брикет;
    b) получения водной дисперсии биологически стабилизированных наночастиц серебра размером от 1 до 100 нм;
    c) смешивания полученного количества указанной водной дисперсии в указанном носителе с образованием гомогенной матрицы, в которой концентрация биологически стабилизированных серебряных наночастиц составляет от 1 до 6 ч./млн.
  6. 6. Способ получения противомикробной композиции по п.5, в которой водную дисперсию биологически стабилизированных наночастиц получают с использованием стадий, включающих:
    a) растворение соли серебра в воде, имеющей проводимость менее чем 3 мкСм, с получением раствора, в котором концентрация ионов серебра составляет от 20000 до 50000 ч./млн;
    b) получение свежепрофильтрованного водного раствора экстракта биологической ткани;
    c) разведение водного раствора деионизированной водой в соотношении, составляющем от 1:5 до 1:50, с получением раствора, имеющего потенциал открытой цепи между 0,02 и 0,2 В и рН между 5,5 и 7,5, и общее содержание органического углерода по крайней мере 7500 ч./млн;
    й) поддерживание указанного водного раствора в условиях непрерывного перемешивания при температуре между 20 и 30°С;
    е) введение небольшого количества раствора соли серебра в указанный раствор водного экстракта в условиях непрерывного перемешивания так, чтобы конечная концентрация иона металла в реакционной
    - 9 013401 смеси составляла от 50 до 300 ч./млн;
    ί) продолжение перемешивания в течение от 30 мин до 3 ч в условиях хорошего освещения для получения коллоидной суспензии наночастиц серебра;
    д) отделение наночастиц от коллоидной суспензии с использованием известного способа, такого как центрифугирование.
EA200602094A 2004-05-12 2005-05-12 Противомикробная активность биологически стабилизированных наночастиц серебра EA013401B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
IN548MU2004 2004-05-12
PCT/IN2005/000155 WO2005120173A2 (en) 2004-05-12 2005-05-12 Anti-microbial activity of biologically stabilized silver nano particles

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200602094A1 EA200602094A1 (ru) 2007-04-27
EA013401B1 true EA013401B1 (ru) 2010-04-30

Family

ID=35503579

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200602094A EA013401B1 (ru) 2004-05-12 2005-05-12 Противомикробная активность биологически стабилизированных наночастиц серебра

Country Status (8)

Country Link
US (1) US20070218555A1 (ru)
EP (1) EP1753293A4 (ru)
CN (1) CN1953664A (ru)
AU (1) AU2005251570B2 (ru)
EA (1) EA013401B1 (ru)
IL (1) IL179189A0 (ru)
WO (1) WO2005120173A2 (ru)
ZA (1) ZA200608552B (ru)

Families Citing this family (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2006026026A2 (en) * 2004-07-30 2006-03-09 Acrymed, Inc. Antimicrobial silver compositions
US20060115536A1 (en) * 2004-11-12 2006-06-01 Board Of Regents, The University Of Texas System Glycerin based synthesis of silver nanoparticles and nanowires
US8333994B2 (en) * 2007-09-17 2012-12-18 The Curators Of The University Of Missouri Stabilized, biocompatible gold nanoparticles and enviro-friendly method for making same
US20070224288A1 (en) * 2006-03-22 2007-09-27 Kiss Nail Products, Inc. Antibacterial gel coating and pedicure spa with antibacterial function
WO2008104076A1 (en) * 2007-03-01 2008-09-04 Aroll Exama Electrocolloidal silver and echinacea root antimicrobial formulation
EP2182963B8 (en) * 2007-07-19 2013-09-25 Delhi Institute Of Pharmaceutical Sciences And Research (DIPSAR) Herbal composition on the basis of extracts of foeniculum vulgare, murraya koenigii and triphala
ES2319064B1 (es) * 2007-10-05 2010-02-15 Universidad De Santiago De Compostela Uso de clusteres cuanticos atomicos (aqcs) como antimicrobianos y biocidas.
US20090232904A1 (en) * 2008-03-13 2009-09-17 Stephen Quinto Homeopathic Skin Care Compositions and Uses Thereof
CN101745352B (zh) * 2009-12-15 2012-05-30 中国科学院化学研究所 超疏水表面材料及其专用具有核壳结构的纳米颗粒
MD4075C1 (ru) * 2009-12-31 2011-07-31 Анатолий ЭФКАРПИДИС Способ получения высокодисперсного коллоидного серебра
KR20120084681A (ko) * 2011-01-20 2012-07-30 한양대학교 산학협력단 유세포 분석을 이용한 나노 물질 위해성 평가 방법
AU2011247875B1 (en) * 2011-09-16 2012-08-09 Robert White Disinfectant Compositions and Uses Thereof
CN103156802B (zh) * 2011-10-11 2014-09-24 沈志荣 一种含番石榴、美洲接骨木提取物和珍珠粉的免洗睡眠面膜组合物
BR112015015007B1 (pt) 2012-12-21 2021-03-02 Delaval Holding Ab Composições germicidas que compreendem mistura de ácido carboxílico e uso como desinfetantes tópicos
EP2898878A1 (de) * 2014-01-23 2015-07-29 LTS LOHMANN Therapie-Systeme AG Klebeband enthaltend Beinwell
EP2905259B1 (en) * 2014-02-05 2016-08-31 King Saud University Porous noble metal oxide nanoparticles, method for preparing the same and their use
CN105177747A (zh) * 2015-09-17 2015-12-23 宁波鑫泰生纺织科技有限公司 一种抗菌粘胶纤维及其制备方法
US9701552B1 (en) * 2016-10-28 2017-07-11 King Saud University Synthesis of silver nanoparticles using fungi
MD4542C1 (ru) * 2017-02-15 2018-07-31 Институт Микробиологии И Биотехнологии Академии Наук Молдовы Способ культивирования цианобактерии Spirulina platensis
MD4543C1 (ru) * 2017-02-15 2018-07-31 Институт Микробиологии И Биотехнологии Академии Наук Молдовы Способ культивирования цианобактерии Spirulina platensis
CN106987304A (zh) * 2017-02-27 2017-07-28 张晓娟 一种米糠防腐败处理工艺
GB2561818B (en) * 2017-03-30 2020-01-15 Phyto Sophos Ltd Plant extract compositions
WO2018217761A1 (en) * 2017-05-23 2018-11-29 Hitchcock Wiley William Antimicrobial composition
CN107308063B (zh) * 2017-08-08 2019-12-13 广州蜜妆生物科技有限公司 一种抗皱眼睛露及其制备方法
RU2708051C1 (ru) * 2019-01-10 2019-12-03 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Ивановский государственный химико-технологический университет" (ИГХТУ) Способ получения наночастиц серебра
ES2778948B2 (es) * 2019-02-12 2021-08-13 Univ Valladolid Metodo industrial de sintesis de nanoparticulas metalicas de tamano graduable
CN111657306A (zh) * 2020-06-19 2020-09-15 广东一芙化妆品有限公司 一种草本植物银离子组合物及其应用
KR20220057248A (ko) * 2020-10-29 2022-05-09 주식회사 영동테크 민들레 추출물을 포함하는 금속 나노분말 및 이의 제조방법
FR3124378A1 (fr) * 2021-06-24 2022-12-30 Bobs Silver Composition antiseptique pour administration nasale
CN116419758A (zh) * 2020-11-04 2023-07-11 巴布西尔韦有限责任公司 抗菌组合成分
FR3115683A1 (fr) * 2020-11-04 2022-05-06 Bobs Silver Composition antiseptique pour administration nasale
CO2021001399A1 (es) * 2021-02-08 2022-08-09 Zumo Tecnologia Zumotec S A Formulación antimicrobiana que comprende nanopartículas metálicas o de óxidos metálicos sintetizados a partir de extractos vegetales
CN113318125B (zh) * 2021-06-04 2022-10-11 青岛农业大学 一种紫锥菊多糖纳米颗粒的制备方法
CN113427015B (zh) * 2021-06-18 2022-11-01 上海交通大学 一种新型银纳米材料AgNFs的制备方法及其应用
CN113875464A (zh) * 2021-09-27 2022-01-04 广西绿循环新材料技术有限责任公司 一种利用纳米抗菌剂联合生物防治八角炭疽病的方法
US11564967B1 (en) * 2022-01-24 2023-01-31 Tran Ky Huynh Oral compositions containing extracts of a betel leaf and related methods
US11878043B1 (en) * 2023-06-12 2024-01-23 King Faisal University Method for synthesizing silver nanoparticles from Amaranthus hybridus

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1369206A (zh) * 2001-12-26 2002-09-18 骏安科技投资有限公司 钠米银消毒凝胶及其制备方法和应用
CN1395829A (zh) * 2002-08-06 2003-02-12 中国地质大学（武汉） 以藻类为载体的纳米银抗菌粉体及其制备方法
US6720006B2 (en) * 1999-06-17 2004-04-13 Bernhard Hanke Anti-microbial body care product

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2519126A1 (de) * 1974-05-07 1975-11-20 Dick Insektizide vorrichtung und verfahren zu deren herstellung
US4536388A (en) * 1983-07-18 1985-08-20 Zoecon Corporation Pest control device comprising α-cyano-3-phenoxybenzyl 2-(2-chloro-4-trifluoromethylanilino)-3-methylbutanoate
US5411737A (en) * 1991-10-15 1995-05-02 Merck & Co., Inc. Slow release syneresing polymeric drug delivery device
FR2746585B1 (fr) * 1996-03-29 1998-07-03 Rhone Merieux Collier anti-puces et anti-tiques pour chien et chat, a base de n-phenylpyrazole
WO2001003711A1 (de) * 1999-07-08 2001-01-18 Phyotopharmaka Gmbh Verfahren zur isolierung von lipophilen wirkstoffen aus pflanzlichem und/oder tierischem material
US6414036B1 (en) * 1999-09-01 2002-07-02 Van Beek Global/Ninkov Llc Composition for treatment of infections of humans and animals
DE10063864A1 (de) * 2000-12-21 2002-06-27 Bayer Ag Pyrazoloximhaltige Formkörper zur dermalen Bekämpfung von Parasiten an Tieren
US6962773B2 (en) * 2001-11-30 2005-11-08 Agfa Gevaert Thermographic recording material with improved developability

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6720006B2 (en) * 1999-06-17 2004-04-13 Bernhard Hanke Anti-microbial body care product
CN1369206A (zh) * 2001-12-26 2002-09-18 骏安科技投资有限公司 钠米银消毒凝胶及其制备方法和应用
CN1395829A (zh) * 2002-08-06 2003-02-12 中国地质大学（武汉） 以藻类为载体的纳米银抗菌粉体及其制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
WO2005120173A2 (en) 2005-12-22
AU2005251570B2 (en) 2011-03-31
EP1753293A2 (en) 2007-02-21
EP1753293A4 (en) 2008-09-17
WO2005120173A3 (en) 2006-04-27
ZA200608552B (en) 2008-05-28
EA200602094A1 (ru) 2007-04-27
CN1953664A (zh) 2007-04-25
US20070218555A1 (en) 2007-09-20
AU2005251570A1 (en) 2005-12-22
IL179189A0 (en) 2007-05-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA013401B1 (ru) Противомикробная активность биологически стабилизированных наночастиц серебра
Cai et al. Magnesium oxide nanoparticles: effective agricultural antibacterial agent against Ralstonia solanacearum
Mohamed et al. Promising antiviral, antimicrobial and therapeutic properties of green nanoceria
Strayer et al. Low concentrations of a silver-based nanocomposite to manage bacterial spot of tomato in the greenhouse
US10016525B2 (en) Antimicrobial compositions for use in wound care products
Barker et al. The use of cerium compounds as antimicrobials for biomedical applications
EP3012225A1 (en) Nanoparticulate titanium dioxide nanomaterial modified with functional groups and with citric extracts adsorbed on the surface, for the removal of a wide range of microorganisms
Arya et al. Silver nanoparticles as a potent antimicrobial agent: a review
KR101339533B1 (ko) 은／물, 은 겔 및 은-기초 조성물 및 이들의 제조 및 사용방법
Rasha et al. Effects of zinc oxide nanoparticles synthesized using aspergillus niger on carbapenem-resistant klebsiella pneumonia in vitro and in vivo
Verma A review on synthesis and their antibacterial activity of Silver and Selenium nanoparticles against biofilm forming Staphylococcus aureus
WO2018011822A1 (en) An anti-microbial fabric impregnated with the conjugate of silver nano particles and aloe vera colloidal solution and a method of producing same
Rentz Do Comm Cnmo Viral pathogens and severe acute respiratory syndrome: oligodynamic Ag+ for direct immune intervention
CN108210990A (zh) 一种以氧化石墨烯为抗菌组分的新型液体创可贴
Li et al. An anti-biofilm material: polysaccharides prevent the precipitation reaction of silver ions and chloride ions and lead to the synthesis of nano silver chloride
CN109122687A (zh) 乙醇酸盐配合物杀菌剂及其应用
Sultana et al. Antibacterial effect of aqueous neem (Azadirachta indica) leaf extract, crude neem leaf paste, and ceftriaxone against Staphylococcus aureus, Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa
US20200306185A1 (en) Antibacterial colloid and method for manufacturing the same
Dhir et al. Plant-mediated synthesis of silver nanoparticles: unlocking their pharmacological potential–a comprehensive review
Villegas et al. Metallic nanoparticles as a strategy for the treatment of infectious diseases
Varghese et al. Comparative anti-inflammatory activity of silver and zinc oxide nanoparticles synthesized using Ocimum tenuiflorum and Ocimum gratissimum herbal formulations
El-Gebaly et al. Green synthesis, characterization and medicinal uses of silver nanoparticles (Ag-NPs), copper nanoparticles (Cu-NPs) and zinc oxide nanoparticles (ZnO-NPs) and their mechanism of action: A review
Mudiyanselage et al. Development of novel nanomaterials containing antimicrobial metals for treating topical bacterial infections
Bandeira Green synthesis of zinc oxide nanoparticles using Ilex paraguariensis leaves for application in antimicrobial polyelectrolyte biomaterials
Penman Silver Halide Nanoparticles as Antimicrobial Agents Against Pseudomonas Aeruginosa

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU