EA008173B1 - Способ и соединения, стимулирующие процессы заживления и ослабления воспаления - Google Patents

Abstract

Настоящее изобретение относится к способам, стимулирующим процессы заживления и ослабления воспаления, и к композициям для этих целей. В частности, изобретение относится к применению солей 1,3-диалкил-4,5-бис(N-метилкарбамоил)имидазолия для стимуляции процессов заживления ран и ослабления воспаления. Новые соединения и композиции также разработаны. В одном предпочтительном аспекте изобретение относится к способу лечения инфаркта миокарда.

Description

Настоящее изобретение относится к способам стимуляции процессов заживления и ослабления воспаления и к композициям, применяемым для таких же целей. В частности, изобретение относится к применению солей 1,3-диалкил-4,5-бис(необязательно Ν-замещенный карбамоил)имидазолия с целью стимуляции процессов заживления и ослабления воспаления. В одном предпочтительном аспекте соединения применяют для лечения инфаркта миокарда. Новые соединения и композиции также описаны.

Предпосылки к созданию изобретения

Все публикации, включая любые патенты или патентные заявки, цитированные в данном описании, включены в текст посредством ссылки. Авторы не делают утверждений о том, что любую из ссылок можно рассматривать как предшествующий уровень техники. Обсуждение ссылок указывает на то, что их авторы отстаивают свои права, а заявители сохраняют за собой права, чтобы требовать точности и уместности цитированных документов. Очевидно, что, хотя на ряд публикаций предыдущего уровня техники ссылаются в данном тексте, эта ссылка не рассматривается как признание того, что какие-либо из указанных документов являются частью общих знаний в конкретной предметной области в Австралии или в любой другой стране.

Повреждение ткани или органа у млекопитающих обычно сопровождается воспалением. Воспаление представляет собой сложный процесс, связанный с активностью медиаторов воспаления, таких как гистамин, серотонин, брадикинин, простагландин и другие биологически активные вещества, и может быть вызвано рядом эндогенных или экзогенных патологических агентов или процессов. Воспалительный процесс может привести к нарушению функции отдельного органа и к ухудшению общего состояния здоровья.

Как нестероидные противовоспалительные средства (НСПВС), так и стероидные гормоны, такие как кортикостероиды, проявляют противовоспалительный эффект и широко используются в медицинской практике. Кортикостероиды имеют существенные побочные эффекты, включая чрезмерное накопление натрия и воды в организме, отек, повышение кровяного давления, снижение сопротивляемости инфекции, изъязвление слизистой желудочно-кишечного тракта, ухудшение заживления ран и регенерации ткани, чувствительность к свертыванию крови и ожирение, а также эндокринные, нервные и психические расстройства. В случае, если кортикостероиды вводят в течение длительного периода времени, возникает риск того, что выработка собственных гормонов надпочечниками подавляется.

Противовоспалительная активность НСПВС проявляется за счет их супрессивного действия на ферменты, участвующие в синтезе простагландина (простагландинсинтетаза), серотонина (5-гидрокситриптофандекарбоксилаза), гистамина (гистаминдекарбоксилаза), и на высвобождение медиаторов воспаления. НСПВС могут вызывать побочные эффекты, такие как раздражение слизистой желудка, аллергические реакции и дисфункция печени и почек.

Заживление ран представляет собой сложный морфологический, патофизиологический и биохимический процесс, на течение и результат которого в значительной степени воздействует ряд факторов, относящихся к повреждению кожи. Общий процесс заживления ран предусматривает три стадии:

1. деградацию некротической пульпы и удаление некротического материала из раны посредством воспалительного процесса,

2. пролиферацию элементов соединительной ткани и образование грануляционной ткани для устранения раневого дефекта,

3. фиброз грануляционной ткани и образование и эпителизацию рубца.

Многие агенты были предложены для стимуляции заживления ран и регенерации кожи, включая гормоны, ферменты, агенты растительного происхождения и полипептидные факторы роста.

Раны могут быть не только результатом травмы, включая ожоги, но и хирургических вмешательств. В частности, пластическая реконструктивная операция и дерматологические технические приемы могут привести к дефектам кожи, которые необходимо быстро устранить без образования рубца или с минимальным образованием рубца. Указанные технические приемы включают в себя процедуры, такие как пересадка кожи с помощью лазера, блефаропластика, дермабразия, химическое отслаивание и тому подобное. В послеоперационный период у больных могут развиться осложнения, такие как продолжительная эритема, дерматит, гиперпигментация или инфекция организмами, такими как Ркеибошопак аегидшока, 81арйу1оссоссик аигеик, 8. ЕрИегшМЦ некоторые грамотрицательные бактерии, различные типы СапШба или вирус Негрек 81шр1ех. Это может привести к образованию гипертрофных рубцов и может повлечь за собой продление периода лечения (8пргасйуа-Апип1 е1 а1., 1997).

Хотя указанные осложнения можно уменьшить или устранить посредством тщательного ухода после операции и применения противоинфекционных агентов и стимуляторов восстановления и регенерации поврежденных тканей, полное устранение осложнений не всегда возможно.

Для заживления кожных ран могут быть использованы различные лекарственные средства, такие как стимуляторы процессов тканевой регенерации, включая протеолитические ферменты, синтетические анаболические гормоны, факторы роста, антисептики, мед и его продукты, лекарственные средства растигельного происхождения, различные масла, абсорбенты и т.д. (Макйкоукку, 1998).

В послеоперационный период антибиотики, противовирусные лекарственные средства, кортикостероиды и витамины, такие как витамины А, С и Е, могут быть использованы в сочетании с лекарственны

- 1 008173 ми препаратами, усиливающими восстановление и регенерацию поврежденной ткани (Ка1/ипд, 1998).

Таким образом. в данной области до сих пор существует потребность в способах и средствах. способствующих эффективному заживлению ран и уменьшению образования рубца и имеющих низкую стоимость.

Соединение этимизол (бис-И-метиламид 1-этилимидазол-4,5-дикарбоновой кислоты; ди(И -метилкарбамоил) имидазол)

1-этил-4,5-

использовали в качестве противоаллергического и противовоспалительного лекарственного средства при лечении артрита. воспалительного полиартрита и определенных форм бронхиальной астмы (Μ.Ώ. Мазйкоузку, Меб1ста1з, МеЛсше, 1987, рр. 130-131). В организме незаряженное имидазольное кольцо имидазол-4,5дикарбоновой кислоты позволяет этимизолу проникать через гематоэнцефалический барьер.

В результате указанное лекарственное средство вызывает нежелательные побочные эффекты, связанные с его влиянием на центральную нервную систему. В частности, этимизол противопоказан больным, подверженным двигательному или психическому возбуждению. Исследователи предположили, что этимизол не пригоден для лечения ран.

В предыдущем патенте КЦГ075668 авторы описали 1,3-диалкил-4,5-бис(И-метилкарбамоил)имидазолбензолсульфонатные соединения, которые проявляли стимулирующее действие на энергетический метаболизм ткани. Указанные соединения имели общую формулу

в которой К¹ и К² могут быть одинаковыми и различными и могут быть независимо выбраны из метила и этила и X^- означает бензолсульфонат. У данных соединений имидазольное кольцо этимизола заменяют заряженным кольцом имидазолия. Такие заряженные соединения не способны преодолевать гематоэнцефалический барьер, и поэтому они не могут оказывать влияние на центральную нервную систему.

Описание патента Ки1075668 раскрывает синтез трех соединений, соответствующих указанной выше формуле, а именно 1,3-диметильных, 1-метил-3-этильных и 1,3-диэтильных соединений, и их способность предотвращать развитие нейрогенных повреждений желудка у крыс. Соединения предназначены стимулировать заживление таких повреждений и повышать уровни креатинфосфата в стенке желудка при введении внутрибрюшинным способом. Авторы предположили, что, вследствие указанного стимулирующего эффекта на энергетический метаболизм, соединения могут быть использованы в качестве средств, восстанавливающих поврежденные ткани.

Однако никаких указаний не было сделано относительно того, какие другие состояния можно подвергать лечению, какие соединения следует синтезировать и какими способами их следует вводить. В патенте был описан только внутрибрюшинный способ введения. В частности, в описании не было указаний относительно того, что любое из раскрытых в нем соединений может проявлять активность, способствующую заживлению ран, ожогов, кожных язв или тому подобного, снижению образования рубца, ослаблению воспаления, восстановлению кости или лечению инфаркта миокарда.

Авторы изобретения обнаружили, что соли 1,3-диалкил-4,5-бис(И-метилкарбамоил)имидазолия способствуют восстановлению ткани в ряде ситуаций, и в частности ускоряют заживление ран и снижают образование рубца. Авторы также обнаружили, что ряд солей 1,3-диалкил-4,5-бис(И-метилкарбамоил)имидазолия проявляет противовоспалительные и ранозаживляющие свойства и что соединения являются активными при введении пероральным и местным способом. Указанные соединения демонстрируют противовоспалительный эффект в экспериментальных моделях воспаления, не проявляют токсического действия в ряде анализов, и их легко синтезировать согласно простым схемам реакций.

Не ограничиваясь каким-либо возможным механизмом, авторы предположили, что противовоспалительная активность указанных соединений объясняется их супрессивным действием на синтез и секрецию медиаторов воспаления.

Краткое описание сущности изобретения

В первом основном аспекте изобретение описывает способ стимулирования восстановления ткани или заживления ран, предусматривающий стадию введения эффективного количества соли 1,3-диалкил4,5-бис(необязательно Ν-замещенный карбамоил)имидазолия субъекту, нуждающемуся в таком лечении.

- 2 008173

В одном предпочтительном аспекте изобретение описывает способ ослабления воспаления, предусматривающий стадию введения эффективного количества соли 1,3-диалкил-4,5-бис(необязательно Ν-замещенный карбамоил)имидазолия субъекту, нуждающемуся в таком лечении.

Во втором предпочтительном аспекте изобретение описывает способ уменьшения образования рубца, предусматривающий стадию введения эффективного количества соли 1,3-диалкил-4,5-бис(необязательно Ν-замещенный карбамоил)имидазолия субъекту, нуждающемуся в таком лечении.

В третьем предпочтительном аспекте изобретение описывает способ лечения инфаркта миокарда, предусматривающий стадию введения эффективного количества соли 1,3-диалкил-4,5-бис(необязательно Ν-замещенный карбамоил)имидазолия субъекту, нуждающемуся в таком лечении.

В четвертом предпочтительном аспекте изобретение описывает способ стимулирования восстановления кости, предусматривающий стадию введения эффективного количества соли 1,3-диалкил-4,5-бис (необязательно Ν-замещенный карбамоил)имидазолия субъекту, нуждающемуся в таком лечении.

В пятом предпочтительном аспекте изобретение описывает способ лечения язвенного колита, предусматривающий стадию введения эффективного количества соли 1,3-диалкил-4,5-бис(необязательно Νзамещенный карбамоил)имидазолия субъекту, нуждающемуся в таком лечении.

Предпочтительно соль 1,3-диалкил-4,5-бис(необязательно Ν-замещенный карбамоил)имидазолия представляет собой соединение формулы I

в которой

К¹ и К² могут быть одинаковыми или разными и каждый выбирают из группы, состоящей из водорода и линейной или разветвленной алкильной группы, включающей в себя от 1 до 6 атомов углерода, которая может быть, необязательно, замещена аминогруппой, замещена или не замещена аминометильной группой, нитрогруппой, гидроксильной группой, галогеном, карбоксигруппой или амидом карбоновой кислоты;

К³ и К⁴ могут быть одинаковыми или разными и каждый представляет собой линейную или разветвленную алкильную группу, включающую в себя от 1 до 6 атомов углерода; и

X^- является фармацевтически приемлемым неорганическим или органическим анионом, выбранным из группы, состоящей из хлора, брома, иода, сульфата, нитрата, фосфата, перхлората, формиата, ацетата, фумарата, малата, малоната, цитрата, бензоата, салицилата, бензолсульфоната, метилсульфоната, п-толуолсульфоната, гентизата (дигидроксибензоата) и нафталин-8-сульфоната.

Когда К¹ или К² означает галоген, то этим галогеном является хлор, бром или йод.

Предпочтительно К¹ и К² являются различными, например, если К¹ означает водород, К² означает алкильную группу, состоящую из 1-6 атомов углерода; К³ и К⁴ являются одинаковыми или различными, и каждый независимо означает алкильную группу, состоящую из 1-6 атомов углерода, более предпочтительно из 1-4 атомов углерода. Наиболее предпочтительно, когда К³ означает метил и К⁴ означает этил.

Анион X^- не имеет особых ограничений и предпочтительно означает органический анион, выбранный из группы, состоящей из бензолсульфоната, метилсульфоната, н-толуолсульфоната, формиата, ацетата, фумарата, малата, малоната, цитрата, бензоата, салицилата, гентизата и нафталин-8-сульфоната. Предпочтительнее, когда X^- означает бензолсульфонат, бензоат, салицилат или гентизат. Наиболее предпочтительно, когда X^-означает бензолсульфонат. И, в качестве альтернативы, X^-предпочтительно представляет собой неорганический анион, выбранный из группы, состоящей из хлора, брома и иода.

К³ и/или К⁴ может, необязательно, быть замещен группой, выбранной из замещенной или незамещенной аминогруппы, замещенного или незамещенного аминометила, ΝΟ₂, ацетамида или замещенной или незамещенной сульфонамидной группы.

Предпочтительно, когда по крайней мере один из К³ и К⁴ является незамещенным; более предпочтительно, когда оба, К³ и К⁴, являются незамещенными. В случае, когда К³ или К⁴ означает замещенный сульфонамид, заместителем предпочтительно является алкильная цепь, состоящая из 1-6, более предпочтительно 1-4 атомов углерода.

Особенно предпочтительными соединениями, применяемыми в способе изобретения, являются: бензолсульфонат 1,3-диметил-4,5-бис(У-метилкарбамоил) имидазолия (1), бензолсульфонат 1-метил-3-этил-4,5-бис(Уметилкарбамоил)имидазолия (2), бензолсульфонат 1,3 -диэтил-4,5-бис(Х-метилкарбамоил)имидазолия (3), хлорид 1-метил-3-этил-4,5-бис(Уметилкарбамоил)имидазолия (4),

- 3 008173 бензоат 1-метил-3-этил-4,5-бис(М-метилкарбамоил)имидазолия (5), салицилат 1-метил-3-этил-4,5-бис(Ы-метилкарбамоил)имидазолия (6) и гентизат 1-метил-3-этил-4,5-бис(Ы-метилкарбамоил)имидазолия (7).

Способ согласно изобретению применим к лечению повреждения эпителиальной ткани, слизистой оболочки, мышечной ткани, ткани сердца, печени и костной ткани, вызванного эрозиями, язвами, хроническим повреждением, инфекцией, травмой или операцией. Например, повреждение может представлять собой язвы желудка или двенадцатиперстной кишки, инфаркт миокарда, заболевания печени, такие как цирроз и гепатит, или переломы кости.

Раны, возникающие в результате широкого ряда случаев, можно лечить способом согласно изобретению, включая, но не ограничиваясь, травматические раны, хирургические раны, ожоги, операционные разрезы, трансплантаты, диабетические язвы, варикозные язвы, декубитальные язвы (пролежни), трофические язвы, тропические язвы, стероидные язвы, хронические незаживающие язвы, ротовые или глоточные язвы, афтозные язвы и язвы роговицы; язвы желудка, двенадцатиперстной кишки и пептические язвы; язвенный колит; эрозии шейки матки; повреждение миокарда, включая инфаркт миокарда; повреждение печени, например, вызванное циррозом или гепатитом; и костные переломы.

Во всех осуществлениях первого аспекта изобретения соль 1,3-диалкил-4,5-бис(необязательно Νзамещенный карбамоил)имидазолия предпочтительно вводят перорально или, если соответствует особому состоянию, местно или посредством клизмы.

Во втором аспекте соединение относится к соединению формулы I, которая приведена выше, но с условием, что, когда X^- означает бензолсульфонат, В¹ представляет собой водород и В² означает метил, тогда В³ и В⁴ не являются метилом или этилом.

В третьем аспекте изобретение описывает композицию, содержащую соединение согласно изобретению, вместе с фармацевтически приемлемым или приемлемым в ветеринарии носителем. Непредвиденно авторы обнаружили, что соединения согласно изобретению проявляют активность в случае перорального или местного введения. Поэтому в одном предпочтительном осуществлении аспекта композицию приспосабливают для перорального введения. Во втором предпочтительном осуществлении аспекта композицией является композиция, которая приспособлена к местному применению в виде мази, крема или геля.

Способы и фармацевтические носители для приготовления фармацевтических композиций хорошо известны в данной области и изложены в руководствах, таких как Веш1пд1ои’8 Рйаттассийса1 8с1спсс5. 19‘^ь Εάίίίοη, Маск РиЫщЫид Сотраиу, ЕаДои, Рсиикукаша, И8А.

Примеры композиций, которые могут быть использованы для решения задач изобретения, включают в себя местные композиции, такие как кремы, гели, мази и пропитанные перевязочные материалы; ректальные или вагинальные композиции, такие как тампоны, суппозитории и пессарии; пероральные композиции, такие как таблетки, лепешки, капсулы или растворы; щечные или подъязычные композиции, такие как таблетки или лепешки; композиции в виде раствора или спрея для внутриносового применения; клизмы для ректального использования; композиции в виде раствора для инъекции и повязки из целлюлозы или коллагена.

Следует признать, что формула I, приведенная во втором аспекте изобретения, применима только к простым композициям в виде растворов, у которых носителем является вода или солевой раствор. Она не применима к первому аспекту изобретения или к композициям, приспособленным для местного или перорального введения.

Млекопитающим, которое подвергается лечению, может быть человек или домашнее или прирученное животное. Хотя и предполагается, что соединения согласно изобретению являются подходящими средствами для лечения человека, их также можно применять в ветеринарии, включая лечение прирученных животных, таких как собаки и кошки, и домашних животных, таких как лошади, крупный рогатый скот и овцы, или животных в зоопарке, таких как приматы, отличные от человека, животные из семейства кошачьих, псовых, животные, относящиеся к полорогим жвачным животным, и копытные животные.

Соединения и композиции согласно изобретению можно вводить любым подходящим путем, и квалифицированный специалист в данной области легко сможет определить способ введения и дозу в зависимости от состояния больного, которое подвергают лечению.

Дозировка устанавливается лечащим врачом или ветеринарным врачом и зависит от природы и стадии состояния, которое подвергается лечению, возраста и общего статуса здоровья субъекта, который подвергается лечению, способа введения и от какого-либо возможного предыдущего лечения.

Носитель или разбавитель или другие наполнители будут зависеть от способа введения, и квалифицированный специалист в данной области легко сможет подобрать наиболее подходящую композицию для каждого отдельного случая.

Следует признать, что способ согласно изобретению может быть применен в сочетании с одним или более другими способами лечения, такими как другие терапевтические средства или применение кислорода под повышенным давлением или давления ниже атмосферного.

В четвертом аспекте изобретение описывает способ синтеза соединения формулы I, предусматри

- 4 008173 вающий стадию алкилирования (образование четвертичного основания) 1-алкил-4,5-бис(необязательно Ν-замещенный карбамоил)имидазола посредством алкилбензолсульфоната с получением соответствующего бензолсульфоната имидазолия и, возможно, замены бензолсульфонатного аниона путем ионного обмена, в которой имидазольный фрагмент является таким, как определено в формуле I.

В последующей формуле изобретения и в предшествующем описании изобретения, за исключением случая, когда контекст требует другого объяснения для точного отражения понятия, используют слово содержать или его вариации, такие как включает в себя или включающий в себя, в том смысле, чтобы подчеркнуть наличие установленных признаков, но не отвергнуть присутствие или добавление дальнейших признаков в различных осуществлениях изобретения.

Краткое описание фигур

На фиг. 1 представлена картина заживления полнослойных кожных ран на 15-й день.

А: Контрольная группа, самозаживление без обработки.

В: Экспериментальная группа, подвергаемая обработке соединением 2 (10% крем).

С: Контрольная группа, подвергаемая обработке бальзамом Спасатель (§ра§а1е1).

Ό: Экспериментальная группа, подвергаемая обработке гелем Солкосерил (8о1со§егу1).

На фиг. 2 представлена картина заживления криогенного повреждения слизистой оболочки рта.

А: Контроли, криогенное повреждение - 7 дней.

В: Экспериментальная группа, подвергаемая обработке соединением 2, 50 мг/кг - 7 дней.

С: Экспериментальная группа, подвергаемая обработке соединением 2, 50 мг/кг - 14 дней.

На фиг. 3 представлена картина сравнения действия некоторых фармакологических средств на язву желудка у крыс после электростимуляции. На вертикальной оси отложено количество язв на животное:

1. Контроль.

2. Животные, обработанные метилурацилом в количестве 50 мг/кг.

3. Животные, обработанные циметидином в количестве 12 мг/кг.

4. Животные, обработанные мг/кг соединением 2.

Панель А: внутрибрюшинное введение; панель В: пероральное введение.

На фиг. 4 представлена картина заживления криогенных язв толстой кишки на 7-й день.

А: Контроли, криогенная язва.

В: Экспериментальная группа, подвергаемая обработке соединением 2, 20 мг/кг.

С: Экспериментальная группа, подвергаемая обработке соединением 2, 50 мг/кг.

Ό: Экспериментальная группа, подвергаемая обработке метилурацилом, 180 мг/кг.

На фиг. 5 представлены результаты действия соединения 2 на уровни циклической АМФ (панель А) и уровни Са⁺⁺ (панель В) в ткани миокарда кролика.

1. Контроль, не подвергаемый обработке.

2. Только электростимуляция.

3. 10 мг/кг соединения 2 до электростимуляции.

4. Соединение 2, которое дается через 3 дня после электростимуляции.

5. Соединение 2, которое дается ежедневно в течение 3 дней после электростимуляции.

На фиг. 6А представлены уровни креатинкиназы в миокарде кролика (а) и плазме крови (Ь) после электростимуляции дуги аорты.

На фиг. 6В показано действие соединения 2 на уровни креатинфосфата в миокарде. На обеих фиг. 6А и 6В:

1. Необработанные контрольные животные.

2. Только электростимуляция.

3. Животные, подвергаемые обработке соединением 2, 10 мг/кг.

4. Животные, подвергаемые обработке рибоксином, 10 мг/кг.

На фиг. 7 представлена картина регенерации костной ткани в области искусственно произведенного дефекта в костной пластинке нижней челюсти крыс.

А: Контроли, самозаживление без обработки - 1 месяц.

В: Экспериментальная группа, подвергаемая обработке соединением 2, 50 мг/кг - 3 месяца.

С: Контроли, самозаживление без обработки - 3 месяца.

Ό: Экспериментальная группа, подвергаемая обработке соединением 2, 100 мг/кг - 3 месяца.

Подробное описание изобретения

В последующей формуле изобретения и в предшествующем описании изобретения, за исключением случая, когда контекст требует другого объяснения для точного отражения понятия, используют слово содержать или его вариации, такие как включает в себя или включающий в себя в том смысле, чтобы подчеркнуть наличие установленных признаков, но не отвергнуть присутствие или добавление дальнейших признаков в различных осуществлениях изобретения.

Употребляемые в тексте формы единственного числа слова включают в себя соответствующую форму множественного числа, если в контексте не продиктовано иное. Таким образом, например, ссылка на фермент включает в себя множество таких ферментов, и ссылка на аминокислоту представляет собой ссылку на одну или более аминокислот. Если не указано особо, все применяемые в тексте техниче

- 5 008173 ские и научные термины имеют такое же значение, которое часто используют средние специалисты в области, к которой принадлежит изобретение. Хотя любые материалы и способы, подобные или эквивалентные материалам и способам, описанным в данном тексте, могут быть использованы на практике или для проверки настоящего изобретения, авторы описывают предпочтительные материалы и способы.

Термин алкил означает алкил с прямой, разветвленной цепью или циклический алкил. Примеры алкила с прямой и разветвленной цепью включают в себя метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, амил, изоамил, втор-амил, 1,2-диметилпропил, 1,1-диметилпропил, гексил, 4-метилпентил, 1-метилпентил, 2-метилпентил, 3-метилпентил, 1,1-диметилбутил, 2,2-диметилбутил, 3,3-диметилбутил, 1,2-диметилбутил, 1,3-диметилбутил, 1,2,2-триметилпропил, 1,1,2-триметилпропил и т. п.

Примеры циклического алкила включают в себя моно- или полициклические алкильные группы, такие как циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и т.п.

Выражение возможно замещенный означает, что группа может быть замещена или не замещена одной или более группами, выбранными из алкила, алкенила, алкинила, арила, галогена, галогеналкила, галогеналкенила, галогеналкинила, галогенарила, гидрокси, алкокси, алкенилокси, арилокси, карбокси, бензилокси, галогеналкокси, галогеналкенилокси, галогенарилокси, нитро, нитроалкила, нитроалкенила, нитроалкинила, нитроарила, нитрогетероциклила, азидо, амино, алкиламино, алкениламино, алкиниламино, ариламино, бензиламино, ациламино, ацила, алкенилацила, алкинилацила, арилацила, ациламино, ацилокси, альдегидо, алкилсульфонила, арилсульфонила, сульфониламино, алкилсульфониламино, арилсульфониламино, алкилсульфонилокси, арилсульфонилокси, гетероциклила, гетероциклокси, гетероциклиламино, галогенгетероциклила, алкилсульфенила, арилсульфенила, карбоалкокси, карбоарилокси, меркапто, сульфокислоты, алкилтио, арилтио и ацилтио.

В целом, термин лечение и т.п., который употребляют в данном тексте, означает воздействие на субъект, ткань или клетку с целью достижения желаемого фармакологического и/или физиологического эффекта. Эффект может быть профилактическим, исходя из полного или частичного предотвращения заболевания, повреждения или его признака или симптома, и/или может быть терапевтическим, исходя из частичного или полного излечения заболевания. Термин лечение, который употребляют в данном тексте, охватывает любое лечение или предотвращение заболевания или повреждения у позвоночных, млекопитающих, особенно у человека, и включает в себя предотвращение заболевания у субъекта, который может быть предрасположен к заболеванию, но еще не диагностирован на возможное наличие заболевания; торможение заболевания, т.е. остановку его развития; или ослабление или улучшение последствий заболевания, т.е. лечение приводит к регрессии последствий заболевания.

Употребляемый в тексте термин терапевтически эффективное количество означает количество соединения согласно настоящему изобретению, которое является эффективным, способным достичь желаемого терапевтического ответа, например предупредить или вылечить заболевание, которое поддается лечению посредством введения фармацевтически активного средства.

Отдельное терапевтически эффективное количество будет изменяться в зависимости от таких факторов, как особое состояние, подвергаемое лечению, физическое состояние и история болезни субъекта, вид животного, подвергаемого лечению, продолжительность лечения, природа конкурентной терапии (если таковая имеется) и используемые специфические композиции и структура соединения или его производных.

Употребляемый в тексте термин фармацевтический носитель означает фармацевтически приемлемый растворитель, суспендирующий реагент, наполнитель или связующее для доставки субъекту соединения формулы I и/или фармацевтически активного средства. Носитель может быть жидким или твердым, и его выбирают с учетом запланированного способа введения.

Соединение формулы I и/или второе фармацевтически активное средство могут быть введены перорально, местно или парентерально в виде стандартных лекарственных композиций, содержащих обычные нетоксичные фармацевтически приемлемые носители, адъюванты и связующие материалы. Употребляемый в тексте термин парентеральное введение включает в себя подкожное введение, внутривенное, внутримышечное, внутриоболочечное, внутричерепное введение, инъекцию или инфузию.

Изобретение также описывает подходящие местные, пероральные, аэрозольные и парентеральные фармацевтические композиции с целью применения их в новых способах лечения согласно настоящему изобретению. Соединения согласно настоящему изобретению можно вводить перорально в виде таблеток, водных или масляных суспензий, лепешек, пастилок, порошков, гранул, эмульсий, капсул, сиропов или эликсиров. Композиция для перорального использования также может содержать один или несколько реагентов, выбранных из группы подсластителей, ароматизаторов, красителей и консервантов с целью получения фармацевтических приятных на внешний вид и на вкус препаратов. Таблетки содержат активный ингредиент в смеси с нетоксичными фармацевтически приемлемыми наполнителями, которые подходят для производства таблеток.

Указанными наполнителями могут быть инертные разбавители, такие как карбонат кальция, лактоза, фосфат кальция или фосфат натрия; гранулирующие и дезинтегрирующие реагенты, такие как кукурузный крахмал или альгиновая кислота; связующие реагенты, такие как крахмал, желатин или аравий

- 6 008173 ская камедь, или смазывающие реагенты, такие как стеарат магния, стеариновая кислота или тальк. Таблетки могут быть непокрытыми или покрытыми известными способами для задержки дезинтеграции и всасывания в желудочно-кишечном тракте, и, таким образом, покрытия способствуют замедленному действию лекарственного средства в течение более длительного периода. Например, для этого может быть использован материал отсроченного действия, такой как глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат. Покрытие также может быть сделано способами, описанными в патентах США 4256108; 4160452 и 4265874, с получением осмотических терапевтических таблеток для контролируемого высвобождения.

Для применения ίη νίνο соединения согласно настоящему изобретению или дополнительные фармацевтически активные средства могут быть введены парентерально с помощью инъекции или постепенной перфузии в течение времени, независимо или вместе. Введение может быть внутривенным, внутриартериальным, внутрибрюшинным, внутримышечным, подкожным, внутриполостным или чрескожным. Для исследований ίη νίΐτο соединения могут быть добавлены или растворены в соответствующем, биологически приемлемом буфере и добавлены к клетке или ткани.

Препараты для парентерального введения включают в себя стерильные водные или неводные растворы, суспензии и эмульсии. Примерами неводных растворителей являются пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла, такие как оливковое масло, и инъецируемые органические сложные эфиры, такие как этилолеат. Водные носители включают в себя воду, спиртовые/водные растворы, эмульсии или суспензии, включая солевой раствор и забуференную среду. Связующие вещества, применяемые для парентерального введения, включают в себя раствор хлорида натрия, декстрозу Рингера, декстрозу и хлорид натрия. Связующие вещества Рингера с лактозой для внутривенного введения включают в себя жидкие и пищевые добавки, электролитные добавки, такие как основанные на декстрозе Рингера добавки, и т.п. Консерванты и другие добавки также могут присутствовать, такие как антимикробные реагенты, антиоксиданты, хелатирующие реагенты, ростовые факторы и инертные газы и т.п.

Изобретение включает в себя различные фармацевтические композиции, применяемые для ослабления заболевания или повреждения. Фармацевтические композиции согласно одному аспекту изобретения приготовляют путем превращения соединения формулы I или его аналога, производного или соли и одного или более фармацевтически активных средств или комбинаций соединения формулы I и одного или более других фармацевтически активных средств в форму, подходящую для введения субъекту, с использованием носителей, наполнителей и добавочных или вспомогательных веществ.

Носители и композиции описывают, например, в руководстве К.еттдФп’к Рйагтасеибса1 8с1спсс5. 20‘^ь еб. А1111ат§ & Абкпъ (2000) апб Т11е Βπΐίδΐι ΝηΟοπηΙ Рогти1агу 43^гб еб. (Βπΐίδΐι Меб1са1 ΛδδοάαΙίοη апб Κοуа1 Рйагтасеи11са1 8οс^еίу ο£ Сгеа! Вгйат, 2002; Н1р://Ьп£.гйп.пе1), содержание которого включено в текст посредством ссылки. рН и точную концентрацию разных компонентов фармацевтической композиции доводили с помощью обычных приемов в данной области. Смотри Сοοбтаη апб Сбтап’к, Тйе Ρ1ι;·ιπη;·κο1οβΚ;·ι1 Ва§щ £ογ Тйегареибск (7'¹' еб., 1985).

Фармацевтические композиции предпочтительно приготовляют и вводят в виде стандартной лекарственной формы. Твердые стандартные лекарственные формы включают в себя таблетки, капсулы и суппозитории. Для лечения субъекта могут быть использованы различные суточные дозы, зависящие от активности соединения, способа введения, природы и тяжести расстройства, возраста и массы тела субъекта. Однако при определенных обстоятельствах подходящими могут оказаться более высокие или более низкие суточные дозы. Введение суточной дозы может быть выполнено как путем однократного введения в виде индивидуальной стандартной дозы или еще нескольких меньших стандартных доз, так и путем множества введений разделенных доз при определенных интервалах.

Фармацевтические композиции согласно изобретению могут быть введены локально или системно в терапевтически эффективной дозе. Эффективные количества, конечно, будут зависеть от тяжести заболевания и массы и общего состояния субъекта. Обычно, используемые ш νίίτο дозировки помогут подобрать количества, которые окажутся пригодными для ш δίΐιι введения фармацевтической композиции, и модели животных можно использовать для выявления эффективных дозировок с целью устранения цитотоксических побочных эффектов. Различные рассуждения на эту тему описаны в публикации Ьапдег, 8с1епсе, 249: 1527 (1990). Композиции для перорального использования могут быть приготовлены в виде твердых желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешивают с инертным твердым разбавителем, например карбонатом кальция, фосфатом кальция или каолином. Они также могут быть приготовлены в виде мягких желатиновых капсул, в которых активный ингредиент смешивают с водой или масляной средой, такой как арахисовое масло, жидкий парафин или оливковое масло.

Водные суспензии обычно содержат активные материалы в смеси с наполнителями, подходящими для производства водных суспензий. Такими наполнителями могут быть суспендирующие реагенты, такие как карбоксиметилцеллюлоза натрия, метилцеллюлоза, гидроксипропилметилцеллюлоза, альгинат натрия, поливинилпирролидон, трагакант и аравийская камедь; диспергирующие или смачивающие реагенты, которыми могут быть (a) природный фосфатид, такой как лецитин;

(b) продукт конденсации спиртоокиси с жирной кислотой, например полиоксиэтиленстеарат;

(c) продукт конденсации окиси этилена с длинноцепочечным алифатическим спиртом, например

- 7 008173 гептадекаэтиленоксицетанол;

(ά) продукт конденсации окиси этилена с неполным сложным эфиром, произведенным из жирной кислоты и гексита, такой как полиоксиэтиленсорбитмоноолеат, или (е) продукт конденсации окиси этилена с неполным сложным эфиром, произведенным из жирных кислот и ангидридов гексита, например полиоксиэтиленсорбитанмоноолеат.

Фармацевтическая композиция может быть приготовлена в виде стерильной инъецируемой водной или масляной суспензии. Такая суспензия может быть приготовлена известными способами с использованием подходящих диспергирующих или смачивающих реагентов и суспендирующих реагентов, таких как упомянутые выше реагенты. Стерильный инъецируемый препарат также может быть приготовлен в виде стерильного инъецируемого раствора или суспензии в нетоксичном разбавителе или растворителе, приемлемом для парентерального введения, например, как раствор в 1,3-бутандиоле. Среди приемлемых связующих веществ и растворителей, которые могут быть использованы, находятся вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Кроме того, стерильные, жирные масла обычно используют в качестве растворителя или суспендирующей среды. С этой целью может быть использовано чистое, жирное масло, включая синтетические моно- или диглицериды. Кроме того, жирные кислоты, такие как олеиновая кислота, могут быть использованы для приготовления инъецируемых форм.

Соединения формулы I также можно вводить в виде липосомных систем доставки, таких как маленькие однослойные' пузырьки, большие однослойные пузырьки и многослойные пузырьки. Липосомы могут быть образованы из разных фосфолипидов, таких как холестерин, стеариламин или фосфатидилхолины.

Дозированные уровни соединения формулы I согласно настоящему изобретению будут находиться в диапазоне приблизительно от 0,5 до 200 мг на килограмм массы тела, с предпочтительной областью дозировок приблизительно от 0,5 до 100 мг на килограмм массы тела в день (приблизительно от 0,5 до 30 г на пациента в день). Количество активного ингредиента, который может быть комбинирован с носителями с получением однократной дозы, будет изменяться в зависимости от хозяина, который подвергается лечению, и отдельного способа введения. Например, композиция, предназначенная для перорального введения человеку, может содержать приблизительно от 5 до 1 г активного соединения с соответствующим и подходящим количеством носителя, которое может изменяться приблизительно от 5 до 95% от всей композиции. Как правило, стандартные лекарственные формы содержат приблизительно от 5 до 500 мг активного ингредиента.

Следует признать, однако, что отдельный уровень доз для любого отдельного больного будет зависеть от ряда факторов, включая активность отдельного соединения, возраст, массу тела, общее состояние здоровья, пол, питание, время введения, способ введения, скорость выведения, лекарственную комбинацию и тяжесть отдельного заболевания, подвергаемого терапии.

Кроме того, некоторые из соединений согласно настоящему изобретению могут образовывать сольваты с водой или общими органическими растворителями. Такие сольваты входят в объем данного изобретения.

Соединения согласно изобретению также могут быть комбинированы с другими соединениями для получения эффективной комбинации. Авторы изобретения намереваются включить любую химически совместимую комбинацию фармацевтически активных средств, если комбинация не исключает активность соединения формулы I согласно настоящему изобретению.

Способы данного изобретения могут включать в себя введение соединения формулы I до введения второго фармацевтически активного средства, а также совместное или последовательное введение; или введение комбинации соединения формулы I и второго фармацевтически активного средства.

В определенных предпочтительных аспектах изобретение относится к новым четвертичным производным имидазолия, а именно

у которых К¹ и К² представляют собой метильную или этильную алкильную группу и X^- означает анион органической или неорганической кислоты. Особенно предпочтительными соединениями являются со единения, у которых:

К¹ и К² означают СН₃, X^- означает бензолсульфонат (1);

К¹ означает СН3, К² означает С2Н₅, X^- означает бензолсульфонат (2);

К¹ и К² означают С₂Н₅, Х^- означает бензолсульфонат (3);

К¹ означает СН3, К² означает С2Н₅, Х^- означает С1^- (4);

К¹ означает СН3, К² означает С2Н₅, X^- означает бензоат (5);

К¹ означает СН3, К² означает С2Н₅, Х^- означает салицилат (6);

К¹ означает СН3, К² означает С2Н₅, X^- означает дигидроксибензоат (гентизат) (7).

Соединения 1-3 могут быть синтезированы путем образования четвертичного основания из 1-алкил- 8 008173

4,5-бис(№метилкарбамоил)имидазолия при нагревании со сложным алкиловым эфиром бензолсульфоната согласно следующей схеме реакции:

Соединения 4-7 могут быть синтезированы путем замещения аниона в соединении бензолсульфонат 1-метил-3-этил-4,5-бис(У-метилкарбамоил)имидазолия (2) посредством ионного обмена согласно следующей схеме реакции:

ОН

Соединения согласно изобретению легко растворяются в воде, стабильны и нетоксичны.

Поскольку воспаление представляет собой сложный процесс, состоящий из нескольких стадий и в который вовлечены медиаторы воспаления, единообразная модель воспаления нереальна. Действие солей 1,3-диалкил-4,5-бис(необязательно Ν-замещенный карбамоил)имидазолия оценивали на моделях, которые широко используют в исследовании противовоспалительных свойств лекарственных препаратов. Активность соединений согласно изобретению оценивали в отношении их профилактического и терапевтического действия.

Экспериментальное воспаление у мышей и крыс вызывали различными способами. В качестве модели острого воспаления авторы изобретения использовали появление отека на лапке в ответ на введение конканавалина А (Соп А; 8егуа), карагенина (8егуа) или брадикинина (81дта). В качестве модели хронического воспаления авторы изобретения использовали индуцированную ватой гранулему. Полученные результаты показали, что соединения предотвращали острое воспаление, вызванное различными воспалительными агентами (профилактический эффект), и снижали развитие хронического воспаления (лечебный эффект) до уровня, сравнимого с действием хорошо известных противовоспалительных лекарст венных препаратов, таких как нестероидные противовоспалительные средства.

Остроту воспаления оценивали через 30 мин после инъекции брадикинина и через 3 ч после инъекции карагенина, соответственно, путем измерения изменения объема лапки. Противовоспалительное действие оценивали по уменьшению опухоли и выражали в виде % относительно контроля или показатель реакции воспаления голеностопного сустава оценивали путем взвешивания лапок экспериментальных и контрольных животных. Испытуемые вещества вводили перорально через желудочный зонд за 1 ч до введения карагенина или брадикинина. В качестве сравнительных лекарственных препаратов следующие нестероидные противовоспалительные средства также вводили перорально: бутадион 60 мг/кг, ибупрофен 48 мг/кг и парамидин 50 мг/кг. Указанные дозировки соответствуют величинам ΕΌ₅₀, описанным в литературе.

Что касается воспаления, вызванного карагенином или брадикинином, испытуемые вещества инъецировали 4 раза, ежедневно в течение 3 дней и за 1 ч до введения воспалительного агента. Относительно воспаления, вызванного конканавалином А, испытуемые вещества вводили 1 раз, за 1 ч до введения Соп А. Полученные результаты подтвердили предположение о том, что соединения согласно изобретению могут снижать острое воспаление, вызванное конканавалином А, карагенином или брадикинином, при введении в виде разовой дозы или непрерывно как у животных, подвергаемых адреналэктомии, так и у ин тактных животных.

Хорошо известно, что при нанесении лекарственных препаратов на кожу их физические и химические характеристики, такие как способность к ионизации (рКа) при величине рН, которую имеют структурные элементы кожи, и липофильность (1одР), оказывают влияние на скорость, при которой активные реагенты высвобождаются из лекарственного препарата и впитываются в кожу. Поскольку соединения согласно изобретению имеют низкую липофильность (1одР приблизительно -0,95), они плохо проникают через биологические мембраны, таким образом, помогая продлить контакт с поврежденным участком. Оба этих фактора пролонгируют действие соединений, повышая их эффективность при локальном применении. Поэтому указанные реагенты являются подходящими для местного применения, например, в

- 9 008173 виде мази, раствора или тонкодиспергированного порошка.

Авторы подробно описывают изобретение, ссылаясь только на следующие неограничивающие примеры и фигуры.

Пример 1. Бензолсульфонат 1,3-диметил-4,5-бис(П-метилкарбамоил)имидазолия (1).

Соединение 1-метил-4,5-бис(К-метилкарбамоил)имидазолий[бис(Л-метиламид)-1-метилимидазолий-

4,5-дикарбоновая кислота] в количестве 1 г нагревали в 5 мл метилового эфира бензолсульфокислоты при 120°С в течение 3 ч. Реакционную смесь разбавляли соответствующим растворителем, таким как безводный диэтиловый эфир или безводный ацетон, и осадок фильтровали. Выход составлял 1,5 г (85,7%). Точка плавления была 159-161°С (н-бутанол, н-гептан). Результаты элементного анализа и ЯМР спектроскопии приведены в табл. 1 и 2, соответственно.

Пример 2. Бензолсульфонат 1-метил-3-этил-4,5-бис(П-метилкарбамоил)имидазолия (2).

Соединение 1-метил-4,5-бис(Ы-метилкарбамоил)имидазолий[бис(К-метиламид)-1-этилимидазолий-

4,5-дикарбоновая кислота] в количестве 1 г нагревали в 5 мл метилового эфира бензолсульфокислоты при 120°С в течение 3 ч. Реакционную смесь разбавляли соответствующим растворителем, таким как безводный диэтиловый эфир или безводный ацетон, и осадок фильтровали. Выход составлял 1,5 г (82,5%). Точка плавления была 133-135°С (н-бутанол, н-гептан). Результаты элементного анализа и ЯМР спектроскопии приведены в табл. 1 и 2, соответственно.

Пример 3. Бензолсульфонат 1,3-диэтил-4,5-бис(П-метилкарбамоил)имидазолия (3).

Соединение 1-этил-4,5-бис(Х-метилкарбамоил)имидазолий[бис(Х-метиламид)-1-этилимидазолий-

4,5-дикарбоновая кислота] в количестве 1 г нагревали в 5 мл этилового эфира бензолсульфокислоты при 120°С в течение 3 ч. Реакционную смесь разбавляли соответствующим растворителем, таким как безводный диэтиловый эфир или безводный ацетон, и осадок фильтровали. Выход составлял 1,4 г (74,2%). Точка плавления была 108-111°С (н-бутанол, н-гептан). Результаты элементного анализа и ЯМР спектроскопии приведены в табл. 1 и 2, соответственно.

Пример 4. Хлорид 1-метил-3-этил-4,5-бис(Х-метилкарбамоил)имидазолия (4).

Соединение 1-метил-3-этил-4,5-бис(Х-метилкарбамоил)имидазолийбензолсульфонат (2) в количестве 1 г растворяли в 20 мл дистиллированной воды и затем раствор нагревали с ионообменной смолой Амберлит ΙΚΑ-410 (С1^--форма, 40 мл, элюент-вода). Элюент в количестве 600 мл собирали и воду упаривали в вакууме. Остаток сушили в вакууме над Р₂О₅ при комнатной температуре в течение 12-18 ч. Соединение 4 получали в виде белого гигроскопического порошка. Выход составил 0,68 г (98%). Точка плавления была 192-194°С. Результаты элементного анализа и ЯМР спектроскопии приведены в табл. 1 и 2, соответственно.

Пример 5. Бензоат 1-метил-3-этил-4,5-бис(Х-метилкарбамоил)имидазолия (5).

Соединение 1-метил-3-этил-4,5-бис(Л-метилкарбамоил)имидазолийбензолсульфонат (2) в количестве 1 г растворяли в 20 мл дистиллированной воды и затем раствор нагревали с ионообменной смолой Амберлит ΙΚΑ-410 (С₆Н₅СОО^--форма, 40 мл, элюент-вода). Элюент в количестве 600 мл собирали и воду упаривали в вакууме. Остаток сушили в вакууме над Р₂О₅ при комнатной температуре в течение 12-18 ч. Соединение 5 получали в виде белого гигроскопического порошка. Выход составил 0,89 г (97%). Точка плавления была 140-145°С. Результаты элементного анализа и ЯМР спектроскопии приведены в табл. 1 и 2, соответственно.

Пример 6. Салицилат 1-метил-3-этил-4,5-бис(Х-метилкарбамоил)имидазолия (6).

Соединение 1-метил-3-этил-4,5-бис(Л-метилкарбамоил)имидазолийбензолсульфонат (2) в количестве 6 г растворяли в 200 мл дистиллированной воды. Затем раствор нагревали с ионообменной смолой Амберлит ΙΚΑ-410 (ОН^--форма) и элюент собирали в 2-литровый лабораторный стакан, содержащий 3,5 г (0,024 моль) салициловой кислоты на 15 мл воды. Объем элюента составлял 1,5 л. Нерастворившуюся салициловую кислоту отфильтровывали и дигидрат соединения 6 экстрагировали путем лиофилизации с получением гигроскопического порошка светло-желтого цвета. Выход составил 5,85 г (98%). Точка плавления была 109-110°С. Результаты элементного анализа и ЯМР спектроскопии приведены в табл. 1 и 2, соответственно.

Пример 7. 2,4-Дигидроксибензоат 1-метил-3-этил-4,5-бис(Х-метилкарбамоил)имидазолия (7).

Соединение 1-метил-3-этил-4,5-бис(Х-метилкарбамоил)имидазолийбензолсульфонат (2) в количестве 6 г (0,016 моль) растворяли в 200 мл дистиллированной воды. Затем раствор нагревали с ионообменной смолой Амберлит ΙΚΑ-410 (ОН^--форма) и элюент собирали в 2-литровый лабораторный стакан, содержащий 3,85 г (0,025 моль) 2,5-дигидроксибензойной кислоты на 15 мл воды. Объем элюента составлял 1,5 л. Нерастворившуюся кислоту отфильтровывали и соединение 7 экстрагировали путем лиофилизации с получением гигроскопического порошка светло-желтого цвета. Выход составил 5,76 г (97%). Точка плавления была 168-170°С. Результаты элементного анализа и ЯМР спектроскопии приведены в табл. 1 и 2, соответственно.

Пример 8. Альтернативный синтез соединений 6 и 7.

Соединения 6 и 7 также получали путем нагревания раствора соединения 2 с ионообменной смолой, содержащей салициловую или 2,5-дигидроксибензойную кислоту, подобно способу, которым синтезировали соединения 4 и 5, при этом конечные продукты выделяли лиофилизацией.

- 10 008173

Таблица 1

Результаты элементного анализа соединений 1-7

Соединение	Молекулярная формула	Найденный	Рассчитанный
с	Н	N	с	Н	N
1	СхБНгоЫдОэЗ	48.95 48.48	5.60 5.47	14.63 14.87	48.90	5.47	15.21
2	С16Н22Щ05Б	50.81 50.81	5.84 6.13	14.41 14.65	50.25	5.80	14.65
3		51.18 51.23	6.07 6.11	14.13 14.33	51.50	6.10	14.13
4	σ10Η17Ν4ο2ει	46.13 46.35	6.57 6.31	21.47 21.06	46.07	6.57	21.29
5	^17^22^404	58.75 59.08	6.39 6.77	15.94 16.09	58.93	6.41	16.18
6	^17^22^405 2Η2Ο	51.71 51.55	6.40 6.35	13.94 14.21	51.25	6.58	14.06
7	С17Н22Ы40б			14.93 15.01			14.81

Таблица 2 Результаты анализа ЯМР соединений 1-7 (ΌΜ8Ο-ά₆)

Соединение	δ, М.Д.
1	2.78 с [ЗН, (ИН)-СН3], 2.80 с [ЗН, [ΝΗ)-ΌΗ3], 3.87 с [6Н, К1(3)-СН3], 7.31-7.60 [5Н,аром. Н], 8.77-8.78 [2Н, ΝΗ],9.26 С [1Н, (С2)-Н)
2	1.37 Т [ЗН, СНа-СН3, Д=7 Гц], 2.79 С [ЗН, ΝΗ-СНз] , 2.80 С [ЗН, (ИН)-СН3], 3.87 С [ЗН, ΝΙ-СНз] ,· 4.28 КВ [2Н, СН2,. Д=7 Гц], 7.32-7.60 [ВН.аром. Н], 8.73-8.82 [2Н, ΝΗ] , 9.35 С [1Н, (С2)-Н]
3	1.38 Т [6Н, 2 (СН2)-СН3/ Д=7 Гц], 2.80 С [6Н, 2 (КН)-СН3], 4.30 кв [2Н, 2 (СН3)-СН2, Д=7 Гц], 7.31-7.59 [5Н, аром. Н], 8.80 [2Н, 2 ΝΗ], 9.41 С [1Н, [С2)-Н]
4	1.38 Т [ЗН, СН2-СН3, Л=7 Гц], 2.78-2.79 [6Н, (ΝΗ)-СН3], 3.90 С [ЗН, И1-СН3] , 4.30 КВ [2Н, СН2, Л=7 Гц], 9.35 С [1Н, ΝΗ], 9.42 С [1Н, КН], 9.64 С [1Н, (С2)-Н]
5	1.31 т [ЗН, СН2-СН3, σ=7 Гц], 2.81 С [6Н, 2 ПН-СН3], 3.79 С [ЗН, Νΐ-СНз), 4.20 КВ [2Н, СН2, Д=7 Гц], 7.29-7.78 Μ [5Н, аром. Н], 9.42-10.1 [ЗН, 2 МН, (С2)-Н]
6	1.37 Т [ЗН, СН2-СН3, Д=7 Гц], 2.81 С [6Н, 2 КН-СН3], 3.87 С [ЗН, К1-СН3], 4.30 КВ [2Н, СН2, σ=7 Гц], 6.63-7.71 [4Н, аром. Н], 8.94 с [ΙΗ, ΝΗ], 9.00 с [1Н, ΝΗ] , 9.40 с [1Н, (С2)-Н]
7	1.37 Т [ЗН, СНа-СН3, 3-Ί Гц], 2.80 С [6Н, 2 КН-СН3] , 3.86 с ЕЗН, ΝΙ-СНз], 4.28 КВ [2Н, СН2, *Т»7 Гц], 6.45-7.15 [ЗН, аром. Н], 8.5 С [1Н], 9.02-9.08 с [2Н, 2ΝΗ] , 9.40 с [1Н, (С2]-Н]

- 11 008173

Пример 9. Влияние солей 1,3-диалкил-4,5-бис(И-метилкарбамоил)имидазолия на острое воспаление, вызванное Соп А.

Соли 1,3-диалкил-4,5-бис(И-метилкарбамоил)имидазолия в дозах 10 и 50 мг/кг вводили внутрибрюшинно самцам мыши СВА, имеющим массу между 18 и 20 г, за 1 ч до инъекции конканавалина А (Соп А). Солевой раствор подобным образом вводили контрольным животным. В каждой группе было по 10 мышей. Через 1 ч конканавалин А в дозе 100 мкг/20 г массы тела вводили подподошвенно посредством инъекции при подошвенном апоневрозе левых лапок мышей, как экспериментальных, так и контрольных. Такое же количество солевого раствора инъецировали в контралатеральные лапки. По истечении 1 ч мышей убивали и лапки экспериментальных и контрольных мышей взвешивали, чтобы оценить показатель воспалительной реакции в голеностопном суставе (ЬшЫшоу е! а1., 1999).

Авторы изобретения обнаружили, что максимальная опухоль голеностопных суставов наблюдалась через 1 ч после подподошвенного введения Соп А. Внутрибрюшинное введение солей 1,3-диалкил-4,5бис(И-метилкарбамоил)имидазолия в дозе от 10 до 50 мг/кг за 1 ч до появления отека снижало интенсивность воспалительного процесса. Полученные результаты суммированы в табл. 3.

Таблица 3 Влияние солей 1,3-диалкил-4,5-бис(И-метилкарбамоил)имидазолия на острое воспаление у мышей, вызванное Соп А

Лекарственный препарат	Реакционный индекс (%)
Солевой раствор	20,2±3,8
Соединение (1) 10 мг/кг	14,6±3,5
Соединение (1) 50 мг/кг	5,3±2,0**
Соединение (2) 10 мг/кг	10,4±2,0*
Соединение (2) 50 мг/кг	8,4±0,9*
Соединение (3) 10 мг/кг	9,5±2,5*
Соединение (3) 50 мг/кг	9,5±2,0*
Соединение (4) 10 мг/кг	14,1±2,0*
Соединение (4) 50 мг/кг	12,4±0,4*
Соединение (5) 50 мг/кг	7,2+1,8*

*Значительная разница между экспериментальной группой и контролем (Соп А) - Р<0,001. **Разница между действием соединения 1 (50 мг/кг) и контролями.

Пример 10. Сравнение противовоспалительного эффекта соединения 2 и соединения 7.

Противовоспалительный эффект соединения 2 и соединения 7 сравнивали у самцов мыши, имеющих массу 18-22 г, используя модель, описанную в примере 9. Величину ΕΌ₅₀, т.е. дозу, снижающую отек на лапке на 50% в течение 1 ч после инъекции конканавалина А, рассчитывали. Результаты, представленные в табл. 4, указывают, что ΕΌ₅₀ для соединения 2 составляла 33 мг/кг и ΕΌ₅₀ для соединения 7 составляла 52 мг/кг.

Таблица 4

Сравнение противовоспалительного эффекта соединения 2 и соединения 7

Группа животных N=10	Реакционный показатель	Снижение отека лапки (%)
Солевой раствор + Соп А	16,0	0
Соединение 2 10 мг/кг + Соп А	11,1±3,5	33
Соединение 2 19 мг/кг + Соп А (0,005 М)	5,4±2,0	66
Соединение 2 38 мг/кг + Соп А (0,01 М)	7,7±1,8	52
Соединение 2 57 мг/кг + Соп А (0,015 М)	5,3+2,0	66
Соединение 2 76 мг/кг + Соп А (0,02 М)	3,3±2,0	77
Соединение 7 16,4 мг/кг + Соп А (0,005 М)	6,73±2,2	60
Соединение 7 32 мг/кг + Соп А (0,01 М)	9,93+2,8	13
Соединение 7 49 мг/кг + Соп А (0,015 М)	7,2±1,8	45
Соединение 7 65,6 мг/кг + Соп А (0,02 М)	4,9±1,7	70

- 12 008173

Пример 11. Влияние соединения 2 на вызванное карагенином воспаление у интактных и адреналэктомированных животных

Отек, возникающий при остром воспалении, вызывали у интактных и подвергаемых адреналэктомии самцов крысы, которые имели массу 180-200 г, посредством подподошвенной инъекции 0,1 мл 1% раствора карагенина в левую лапку (АпНег е! а1., 1962). Такой же объем солевого раствора вводили в контралатеральную лапку. Соединение 2 в дозах 50 и 100 мг/кг и ибупрофен в качесте сравнительного лекарственного препарата в дозе 48 мг/кг, соответствующей приведенной в литературе величине ΕΌ₅₀, вводили перорально в желудок через желудочный зонд 4 раза, 1 раз в день в течение 3 дней и за 1 ч до введения карагенина. В каждой группе было 10 крыс.

Степень воспаления голеностопных суставов, вызванного карагенином, оценивали через 3 ч после индукции воспаления на основе изменения веса лапок экспериментальных и контрольных животных (реакционный показатель). Данные, суммированные в табл. 5, показывают, что соединение 2 с воспроизводимым результатом уменьшало воспаление как у интактных, так и адреналэктомированных животных.

Таблица 5

Влияние продолжительного введения соединения 2 на стадии острого воспаления у крыс, вызванного карагенином

Группа	Реакционный показатель (%)	Ингибирование отека (%)
Интактные животные + солевой раствор + карагенин	43,04±3,58	0
Интактные животные + соединение (2) 50 мг/кг 4 дня + карагенин	29, 96±2, 30*'**	30,41
Адреналэктомированные животные + соединение (2) 50 мг/кг 4 дня + карагенин	31, 04±2, 49*'**	27,88
Интактные животные + соединение (2) 100 мг/кг 4 дня + карагенин	22,63±2,86*'**	47,43
Адреналэктомированные животные + соединение (2) 100 мг/кг 4 дня + карагенин	25, 63±2,86*'**	44,43
Ибупрофен 48 мг/кг 4 дня + карагенин	15,88±1,88*	63,39
Адреналэктомированные животные + ибупрофен 48 мг/кг перорально 4 дня + карагенин	18,12±1,82*	57,90

*Значительная разница между экспериментальными группами и контролями, Р<0,001.

** Значительная разница между действием соединения 2 и контролями.

Пример 12. Влияние соединения 2 на вызванное брадикинином воспаление у интактных животных.

Острое воспаление вызывали посредством подподошвенной инъекции 0,1 мг 0,01% брадикинина в солевом растворе в левые лапки самцов крысы, имеющих массу 180-200 г. Степень воспаления оценивали через 30 мин после инъекции брадикинина по изменению объема лапки. Противовоспалительный эффект, оцениваемый по уменьшению опухоли, выражали как процент первоначального веса лапки, сравненный с контролями. Испытуемые вещества вводили перорально через желудочный зонд в течение 3 дней и за 1 ч до введения брадикинина. Для сравнения использовали следующие реагенты.

Контроль: только физиологический раствор.

Бутадион: 60 мг/кг (противовоспалительное средство).

Парамидин: 50 мг/кг (пиридинолкарбамат; Вис1оте (Такеба); специфическое средство против брадикинина).

Указанные реагенты перорально вводили крысам в течение 3 дней и за 1 ч до инъекции реагента. В каждой группе было 12 крыс. Дозы бутадиона и парамидина соответствовали величинам ΕΌ₅₀, приведенным в литературе.

Соединение 2 в дозе 50 мг/кг приводило к уменьшению образования опухоли, вызванной брадикинином. Произведенный соединением 2 эффект был равен эффекту парамидина, который является специфическим средством против брадикинина, и подобен эффекту бутадиона. Результаты суммированы в табл. 6.

- 13 008173

Таблица 6

Влияние соединения 2 на вызванное брадикинином острое воспаление у крыс

Лекарственный препарат	Объем лапки (уменьшение воды, мл)	Увеличение объема лапки (мл)	Ингибиро вание опухоли (%)
Исходный	Через 30 минут после введения брадикинина
Брадикинин	1,23±0,043	1,92±0,070	0,69	0
Соединение (2) 20 мг/кг	1,39±0,040	1,80±0,060	0,41	40,58

Соединение (2) 50 мг/кг	1,35±0,038	1,69±0,060*	0,34	50,72
Парамидин 50 мг/кг	1,27±0,038	1,61±0,051*	0,34	50,72
Бутадион 60 мг/кг	1,33±0,061	1,60±0,07*	0,27	60,87

^Значительная разница между бутадионом, парамидином, соединением 2 и контролями - Р<0,001.

Пример 13. Влияние соединения 2 на хроническое пролиферативное воспаление (гранулема).

Авторы изобретения исследовали способность соединения 2 снижать образование грануляционной ткани в очаге воспаления, который возникает на участке, на котором тампон из нестерильной ваты, имеющий вес 40 мг, вводят подкожно (8\шд1е апб. 8Ыбешап, 1972). Соединение 2 вводили перорально самцам крысы, имеющим массу 130-150 г, в дозе 100 мг/кг в течение 6 дней до имплантации ватного тампона и затем в течение 6 дней при такой же дозе в процессе развития гранулемы. Противовоспалительные средства, такие как ибупрофен и бутадион, использовали для сравнения по такой же процедуре. В каждой группе было 10 крыс.

Через 12 дней эксперимент заканчивали, и гранулемы вырезали, взвешивали, и измеряли вес влажной грануляционной ткани. Сухую массу гранулемы измеряли после сушки в течение 24 ч при 70°С и экссудативную и пролиферативную стадии образования гранулемы оценивали. Статистический анализ выполняли, используя параметрический тест 8шс1еп1. Результаты, суммированные в табл. 7, показывают, что соединение 2 проявляет способность ингибировать образование гранулемы до степени, подобной степени ингибирования обычными противовоспалительными средствами.

Таблица 7

Влияние соединения 2 на развитие экспериментальной гранулемы у крыс

Группа	Вес гранулемы (мг)
Вес свежей гранулемы	Вес высушенной гранулемы
Контроли (0,5 мл крахмала)	1375,8+61,85	249,6±13,27
Экссудативная стадия 1126,2	Пролиферативные стадии 209, 6
Соединение (2) (100 мг/кг)	956,29±115, 5*	180,71±14,16*
Экссудативная стадия 775,58	Пролиферативные стадии 140,71
Ибупрофен (48 мг/кг)	814,0±63, 72**	143,2±9,83**
Экссудативная стадия 670,8	Пролиферативные стадии 103,2
Бутадион (60 мг/кг)	828,0±76, 68**	145,4±7,45**
Экссудативная стадия 682,6	Пролиферативные стадии 105,4

^Значительная разница между второй экспериментальной группой и контролями (Р<0,01).

^^Значительная разница между третьей экспериментальной группой и контролями; значительная разница между четвертой группой и контролями (Р<0,001).

Пример 14. Влияние применяемого местно соединения 2 на заживление ран.

Для успешного заживления раны ее следует обрабатывать с учетом отдельных характеристик различных стадий процесса заживления ран (Κιιζιη е! а1., 1981). Ранозаживляющий эффект солей производных Ν-замещенного 1,3-диалкил-4,5-бис(карбамоил)имидазолия изучали на модели асептических полнослойных кожных ран крыс (Харабпунк е! а1., 1983). Действие 10% бензолсульфоната 1-этил-3-метил-4,5бис(№метилкарбамоил)имидазолия в ланолине, как в основе мази, сравнивали с действием геля Солкосерил и бальзама Спасатель.

- 14 008173

Статистический анализ данных выполняли стандартными способами, включающими параметрический тест 81ибеп1. основанный на программе, разработанной отделом нейрофармакологии Института экспериментальной медицины Российской академии медицинских наук. Заживление полнослойной раны оценивали на основе множества морфологических критериев, характеризующих степень процесса регенерации.

Полнослойные раны являются ранами, в которых все три слоя кожи, т.е. эпидермальный, дермальный и подкожный, повреждены. Процессы репарации и регенерации в ткани затрагивают каждый из трех слоев. Заживление происходит так называемым первичным натяжением, если рана является асептической или основательно очищенной на ранних стадиях процесса; регенеративные процессы в эпителии осуществляются совместно и завершаются на 15-й день с образованием грануляционной ткани и с пролиферацией и дифференциацией регенеративных тканей. Заживление вторичным натяжением является заживлением в присутствии инфекции или после потери большого участка ткани, например, после большой травмы или ожога. Заживление вторичным натяжением всегда сопровождается образованием рубца.

Асептические полнослойные кожные раны были созданы у крыс под наркозом летучим простым эфиром. На спинке животного, где оно не может облизывать рану, участок кожи брили и кусочек кожи круглой формы площадью приблизительно 2,5 см² вырезали ножницами. После выхода животных из состояния наркоза их держали в отдельных клетках с обычной пищей и водой аб БЬбит. Всего использовали 100 крыс, имеющих массу от 200 до 250 г, по 20 крыс в каждой группе. Группы были следующие.

1. Необработанная контрольная группа (самозаживление).

2. Контрольная группа, обработанная плацебо (только ланолиновая мазь).

3. Испытуемая группа (10% соединение 2 в ланолиновой мази).

4. Сравнительная группа А: гель Солкосерил (8о1со, 8\\'Нхег1апб).

5. Сравнительная группа В: бальзам Спасатель (АОЕ ЕГГесГ Икгате).

Обработку осуществляли через 24 ч после образования раны путем нанесения 200 г мази 1 раз в день в пропорции 80 мг мази на 1 см² площади раны (8 мг вещества на 1 см²) и затем ежедневно до полного заживления.

Солкосерил широко используют в России в качестве ранозаживляющего лекарственного средства; данная композиция содержит депротеинизированный диализат крови теленка. Было показано, что Солкосерил индуцирует заживление вторичным натяжением. Спасатель представляет собой многокомпонентный бальзам, содержащий масло облепихи крушиновидной, нафталин, пчелиный воск, эфирные масла, выделенные из различных растений, и витамины. Данная композиция способствует заживлению за счет вторичного натяжения, и после ее применения часто остаются рубцы.

Животных исследовали на 5, 10, 15 и 20 дни в отношении следующих параметров: размер раны и время заживления раны; увеличение массы, показатели периферической крови (общий счет лейкоцитов, счет дифференциальных лейкоцитов и скорость оседания эритроцитов) и биохимические показатели сыворотки (общий белок, альбумин, глобулин и фракции глобулинов); и макроскопическая и микроскопическая оценка ран. Средний период полного заживления ран составлял 16,8±1,9 дней для соединения 2 по сравнению с 23,5±2,2 днями для Спасателя и 24,0±2,4 днями для Солкосерила. Таким образом, соединение 2 согласно изобретению оказалось значительно более эффективным, чем любое из средств, употребляемых на предыдущем уровне техники.

Для измерения размера раны стерильное предметное стекло накладывали на рану и ее контур очерчивали маркером. Рану фотографировали, очертания раны сканировали и ее площадь рассчитывали, используя компьютерную программу собственной разработки.

Результаты измерения площади раны иллюстрируют динамику процессов регенерации, происходящих как в эпителиальной ткани, покрывающей рану, так и в грануляционной ткани, расположенной под раной. Среднюю площадь рисунков в контрольных и испытуемых группах сравнивали. Сравнительный анализ динамики заживления ран указывает на то, что площадь раны у животных, обработанных мазью, содержащей 10% соединения 2, составляла 0,4% на 15-й день по сравнению с 10,4% для Солкосерила, 11% для Спасателя и 24,1% для плацебо.

Результаты представлены в табл. 8-10. Наиболее значительный ранозаживляющий эффект наблюдали при использовании мази, содержащей соединение 2; отличие от контрольных и сравнительных групп было существенным (Р<0,05).

Заживление в ответ на лечение соединением 2 имеет место путем первичного натяжения, при котором рана быстро и полностью очищается и процессы регенерации в системе эпителиальная-соединительная ткань протекают одновременно и заканчиваются на 15-й день без каких-либо признаков патологической регенерации или дифференцировки соединительной ткани.

- 15 008173

Таблица 8

Длительность заживления раны

Νθ.	Группа животных	Эпителизация (длительность в днях)
1.	Контроль (самозаживление)	29,2±1,1
2.	Плацебо1	24,5±1,Г
3 .	Соединение 22 (10% мазь)	16,8±1,9*'**
4.	Гель Солкосерил	24,0+2,4*
5.	Бальзам Спасатель	23,5±2,3*

Основа мази - ланолин.

²Бензолсульфонат 1-метил-3 -этил-4,5-бис^-метилкарбамоил)имидазолия. *Значительная разница по сравнению с контролем (Р<0,05).

**Значительная разница по сравнению с плацебо (Р<0,05).

Таблица 9

Динамика заживления раны

Площадь раны	(% площади до обработки)
	Группа животных	До обработки	5™ день	Ю1®1 день	15“* день	20“π день
1	Плацебо1	100,0	106, 9	43,8	24,1	11, 6
2	Испытуемое соединение2 (10% мазь)	100,0	84,0	8,1	0,4	0,1
3	Солкосерил	100,0	89,2	22,6	10,4	3,8
4	Спасатель	100,0	89, 6	23, 8	11,0	5,8

Ланолин в качестве основы мазы.

²Бензолсульфонат 1-этил-3-метил-4,5-бис^-метилкарбамоил)имидазолия (соединение 2).

Таблица 10

Период заживления раны

	Группа животных	Период эпителизации
1	Контроль (необработанный)	29,2+1, 1
2	Плацебо1	24,5+1,1
3	Испытуемое соединение2 (10% мазь)	16,8±1, 9**
4	Солкосерил	24,0+2,4
5	Спасатель	23,5±2,2

* Отличия являются существенными по сравнению с контрольной группой (самозаживление), Р<0,05.

**Отличия являются существенными по сравнению с контрольной группой (плацебо), Р<0,05.

¹Ланолин в качестве основы мази.

²Бензолсульфонат 1-этил-3-метил-4,5-бис^-метилкарбамоил)имидазолия (соединение 2).

Массу тела проверяли 1 раз в неделю до кормления животных. Результаты представлены в табл. 11. Ежедневные наблюдения указывают на то, что статистически значимое увеличение массы наблюдали только у животных, которых обрабатывали соединением 2. На 20-й день в испытуемой группе данный показатель составлял 19%, в то время как в контрольных (необработанная группа и плацебо) группах он составлял 10-12%. Полученные результаты подтверждают факт положительного действия испытуемого соединения на заживление раны и процессы регенерации ткани.

Таблица 11

Изменения массы тела крысы в период лечения полнослойной раны

	Группа животных	До лечения	5-ый день	10-ый день	15-ый день	20-ый день
г	%	г	%	г	%	г	%	г	%
1	Контроль (необработанный)	272+12,6	100	279±10,5	102,6	279+8,4	102,6	294+11,6	108,1	301+12,6	110,7
2	Плацебо1	229+13,7	100	240+16,8	104,8	245+12,6	107,0	252,5+ 12,6	110,3	257,5+12,6	112,4
	Испытуемое							253,3+ О Ί
3	соединение2	226+8,4	100	236+8,4	104,4	246+1,1	108,8	112,1	268,0+4,2	118,6
	(10% мазь )
4	Солкосерил	235+6,3	100	250+6,3	106,4	264+8,4	112,3	272+10,5	115,7	279,0+8,4	118,7
5	Спасатель	230+8,4	100	244+10,5	106,1	250+10,5	108,7	255+12,6	110,9	258,0+12,6	112,2

¹Основа мази - ланолин.

²Бензолсульфонат 1-этил-3-метил-4,5-бис^-метилкарбамоил)имидазолия (соединение 2).

Показатели периферической крови (лейкоциты, формула лейкоцитов, скорость оседания эритроци- 16 008173 тов) крыс в испытуемых и контрольных группах измеряли до того, как животным делали экспериментальные раны, и затем проверяли на 5-й, 10-й и 15-й дни от начала эксперимента. Результаты указанных экспериментов представлены в табл. 12, 13 и 14. Никаких воспроизводимых сдвигов гематологических показателей крыс, обработанных соединением 2, при сравнении с характеристиками крови интактных животных до появления раны не было выявлено.

Таблица 12 Показатели периферической крови крыс в период лечения полнослойной кожной раны - 5-й день

	Группа животных	СОЭ мм/ч	Лейкоциты 109/л	Счет лейкоцитов (%)
Палочкоядерные нейтрофильные гранулоциты	Сегменто ядерные нейтрофильные гранулоциты	Эозинофилы	Базофилы	Моноциты	Лимфоциты
1	Интактные	2,3±1,3	7,2±1,3	1,3±0,3	30,0±5,1	1,7±0,3	0	3,7±0,7	63,3±6,2
	Контроль (необработанная)				5 дней
2	1,8±0,4	5,3+0,2	1,2±0,2	43,2±3,0	2,0±0,4	0,4±0,2	3,б±0,9	49,б±3,7
3	Плацебо1 Испытуемое	1,8±0,4	5,5+0,3	1,2+0,2	37,8±3,9	2,8±0,б	0,4±0,2	5,0+1,1	52,8±3,2
4	соединение2	2,2±0,6	6,6±0,9	1,4±0,4	35,2±4,4	2,б±0,6	0	8,2±0,8	52,б±4,5
	(10% мазь)
5	Солкосерил Спасатель	1,0+0	5,8±0,4	1,2±0,2	40,2+2,5	3,2+0,7	0,4±0,2	4,4+0,8	51,0±3,3
6		1,8±0,4	5,2±0,4	1,0±0	39,4±3,0	3,6±0,5	0	5,0±1,2	50,8±2,7

¹ Основа мази - ланолин.

²Бензолсульфонат 1-этил-3-метил-4,5-бис(Н-метилкарбамоил)имидазолия (соединение 2).

Таблица 13 Показатели периферической крови крыс в период лечения полнослойной кожной раны - 10-й день

	Группа животных	СОЭ мм/ч	Лейкоциты 109/л	Счет лейкоцитов (%)
Палочкоядерные нейтрофильные гранулоциты	Сегменто ядерные нейтрофильные гранулоциты	Эозинофилы	БазоФилы	Моноциты	Лимфоциты
1	Контроль	1,2±0,2	8,6+1,0	3,0±0,5	10 дней 23,5±5,2	2,7±0,5	0,4±0,2	3,4±0,6	67,0±5,9
2	(необработанная) Плацебо1	1,3±0,3	7,2±1,1	1,3±0,3	39,3±1,3	3,3±1,0	0	6,0±0,7	50,3±1,7
3	Испытуемое соединение2	1,0±0	7,9±0,6	1,2±0,2	29,б±2,2	2,4+0,5	0,6+0,2	2,4+0,5	63,8±1,9
4	(10% мазь) Солкосерил	1,6±0,4	9,2±0,8	1,8±0,4	29,б±2,5	3,2±0,6	0,2±0,2	2,8±0,6	62,4±2,5
5	Спасатель	1,2±0,2	9,4±0,8	1,4±0,2	40,0±3,0	2,0±0,6	0,2±0,2	1,8±0,4	54,6±2,3

¹ Основа мази - ланолин.

²Бензолсульфонат 1-этил-3-метил-4,5-бис(Н-метилкарбамоил)имидазолия (соединение 2).

Таблица 14

Показатели периферической крови крыс в период лечения полнослойной кожной раны - 15-й день

	Группа животных	СОЭ мм/ч	Лейкоциты 109/л	Счет лейкоцитов (%)
Палочкоядерные нейтрофильные гранулоциты	Сегменто . ядерные нейтрофильные гранулоциты	Эозино филы	Базофилы	Моноциты	Лимфоциты
1	Контроль	1,8+0,4	10,1±2,3	1,8±0,4	15 дней 35,4±5,7	3,6+1,7	0,2+0,2	5,4+1,7	53,8+5,8
2	(необработанная) Плацебо1	1,4±0,2	9,4±1,4	1,4±0,2	29,4±2,6	2,2±0,6	0,4±0,2	4,8±0,6	62,0±2,3
3	Испытуемое соединение2	1,4+0,2	11,1±1,6	1,2+0,2	21,0±3,1	2,8±0,2	0,4+0,2	4,0±0,7	70,6±3,4
4	(10% мазь) Солкосерил	1,6±0,2	7,8±1,2	1,2±0,2	31,8±4,9	5,6+1,3	0,4±0,2	4,2+0,9	56,0+5,3
5	Спасатель	1,4±0,2	6,6+0,7	1,0±0	34,0±2,4	3,0+0,9	0,6+0,4	6,4±1,2	55,0±1,9

¹ Основа мази - ланолин.

²Бензолсульфонат 1-этил-3-метил-4,5-бис(Н-метилкарбамоил)имидазолия (соединение 2).

Общий белок в крови испытуемых и контрольных животных определяли биуретовым методом и белковые фракции (альбумины и глобулины: α₁, α₂, β и γ) определяли электрофоретически до начала эксперимента и затем на 5-й, 10-й и 15-й дни. Данные, представленные в табл. 15, 16 и 17, показывают, что на 5-й день все группы животных демонстрировали уменьшение уровня альбумина и увеличение

- 17 008173 уровней глобулиновых фракций в крови указанных животных, что является результатом воспаления. Данные величины возвращались к нормальным уровням на дни 10 и 15. Указанные изменения в белковых параметрах отражают общую картину, возникающую в ответ на повреждение кожи.

Таблица 15

Общий белок сыворотки и белковые фракции - день 5

	Группа животных	Общий белок	Альбумин %	Глобулин %	Глобулины	А/С
ах	а2	β	γ
1	Интактные	65,57±1,15	44,8+0,7	55,2+0,7	12,1±1,4 5 дней	9,0±1,5	21,4±1,99	12,7±1,2	0,82+0,02
2	Контроль (необработанная)	56,80±1,72	39,2±3,6	60,8±3,6	19,4±0,9	10,9±1,1	16,5±0,96	14,1±3,1	0,67±0,09
3	Плацебо1	59,34±0,89	41,8±1,4	58,2±1,4	17,1±1,5	13,3±0,6	17,6±2,3	10,1±1,2	0,72±0,04
4	Испытуемое соединение2 (10% мазь)	57,45±0,64	37,2+2,5	62,8+2,5	16,8±0,4	16,0+1,5	18,3±1,4	11,3±0,7	0,60±0,07
5	Солкосерил	61,51±2,18	37,3+2,0	62,7±2,0	17,0+1,2	15,7±1,5	21,5+1,6	8,5+1,3	0,60+0,05
6	Спасатель	59,54±2,05	41,0±2,3	59,0±2,3	19,6+1,5	14,0±1,3	16,7+1,4	8,7±0,5	0,71±0,07

*Ланолин в качестве основы мази.

²Бензолсульфонат 1-этил-3-метил-4,5-бис(Ы-метилкарбамоил)имидазолия (соединение 2).

Таблица 16

Общий белок сыворотки и белковые фракции - день 10

	Группа животных	Общий белок	Альбумин %	Глобулин %	Глобулины	А/С
«1	«2	β	У
1	Контроль	56,4±0,98	43,5±0,8	56,5+0,8	5 дней 11,9±0,8	9,5±0,9	21,0±0,8	14,2±0,6	0,77±0,03
2	(необработанная) Плацебо1	66,88±1,07	50,0±1,9	50,0±1,9	12,5±0,3	8,3±0,3	18,2±1,6	11,0±0,8	1,01±0,08
3	Испытуемое	64,77±1,44	42,9±0,9	57,1±0,9	13,2+0,8	8,8±0,5	21,7+0,9	13,3±0,6	0,75+0,03
4	соединение2 (10% мазь) Солкосерил	55,11±0,76	41,5±1,8	58,5±1,8	15,6+0,4	8,8±0,8	20,0±1,5	14,0±0,7	0,72±0,06
5	Спасатель	60,62±0,87	43,4±1,6	56,6+1,6	16,0+0,7	9,8±0,6	18,4±0,8	12,3±0,8	0,77±0,05

*Ланолин в качестве основы мази.

²Бензолсульфонат 1-этил-3-метил-4,5-бис(Ы-метилкарбамоил)имидазолия (соединение 2).

Таблица 17

Общий белок и белковые фракции сыворотки крови крыс

	Группа животных	Общий белок	Альбумин %	Глобулин %	Глобулины	А/С
ах	а2	β	У
1	Контроль	58,93±1,29	46,9+1,7	53,1±1,7	15 дней 10,3±1,0	10,2+1,6	18,7±0,4	13,9±0,4	0,89±0,06
2	(необработанная) Плацебо1	59,22±1,65	48,2±2,4	51,8+2,4	10,1±0,3	10,0+1,1	17,3±1,1	14,4±0,6	0,94±0,08
3	Испытуемое	59,06+1,97	48,3±1,7	51,7±1,7	10,3+0,9	7,9±0,7	19,6±1,5	13,8+1,1	0,94±0,06
4	соединение2 (10% мазь) Солкосерил	57,93±0,51	47,8+0,6	52,2±0,6	11,7±0,9	7,6+0,5	18,9+0,9	13,9±0,5	0,92±0,02
5	Спасатель	63,24+1,19	47,0±2,4	53,0+2,4	11,5±0,9	8,1+0,6	21,5+1,3	11,9±0,8	0,90±0,08

*Ланолин в качестве основы мази.

²Бензолсульфонат 1-этил-3-метил-4,5-бис(Ы-метилкарбамоил)имидазолия (соединение 2).

Когда лекарственные препараты наносят на кожу, физикохимические свойства кожи, такие как липофильность, оказывают влияние на скорость, с которой данное лекарственное средство высвобождается из композиции и впитывается в кожу (8еЬеир1ет Κ.Ι., 1965). Полученные авторами изобретения результаты показывают, что соли производных Ν-замещенного 1,3-диалкил-4,5-бискарбамоилимидазола плохо проникают через биологические мембраны из-за их низкой липофильности, таким образом, они способствуют продлению контакта с поврежденным участком и увеличению их эффективности в течение местного применения. Поэтому указанные средства подходят для местного применения, например в виде мази, крема или геля.

Пример 15. Морфологическая оценка стадий заживления раны.

Важным показателем заживления раны является морфология и эпителизация раневой поверхности (8агк1§оу е! а1., 1981). Образцы были взяты от экспериментальных животных на 5-й, 10-й и 15-й дни от начала исследования, описанного в примере 13, которые примерно соответствовали трем стадиям заживления ран: первая травматическая воспалительная стадия завершалась на 5-й день, стадия развития грануляционной ткани завершалась на 10-й день, и рубцевание и эпителизация имели место от 15-го до 20

- 18 008173 го дня. Результаты иллюстрированы на фиг. 1.

День 5.

a) Необработанный контроль.

Раны были значительного размера, покрыты пленками или струпьями, состоящими из некротической массы, фибрина и лейкоцитов, с колониями бактерий. Только у 20% животных наблюдалось очищение раны от пленки на отдельных участках поражений; в остальных случаях пленка близко соприкасалась с раневой поверхностью, которая была диффузно пропитана лейкоцитами. Грануляционная ткань на дне раны походила на созревающие и беспорядочно расположенные сосуды и волокна. При этом имели место сильное воспаление и отек на участках, расположенных рядом с раной. На начальных стадиях наблюдали незначительную эпителизацию у краев раны. Дегенеративный, клинообразный слой, образованный в процессе эпителизации, не имел явных признаков дифференцировки.

b) Плацебо.

Рана была значительной по размеру, вплотную соприкасалась с поверхностью под пленкой. Имела место интенсивная инфильтрация лейкоцитов поверхностных областей дна раны с уменьшением пленки у границы. Граница между грануляционной тканью дна раны и примыкающей кожей и гиподермом была нечеткой, со слабо проявляющимися признаками созревания грануляционной ткани. У 60% животных наблюдали незначительную регенерацию эпителиальной ткани по краям раны, без четкой дифференцировки.

c) Соединение 2.

Рана была значительной по размеру, из центра раны пленка была удалена, плотность раны варьировала, но чаще незначительно. Поверхность была свободна от пленки у периферии раны, где регенерацию эпителия наблюдали у всех животных. Различался клиновидный слой регенерирующего эпителия различных размеров с явными признаками дифференцировки плоских клеток. У дна раны грануляционная ткань созревала с воспалительной инфильтрацией, которая была более выражена на поверхности разрезов. Границы между дном и боковыми разрезами раны были неразличимыми из-за отека и воспаления.

День 10.

a) Необработанная контрольная группа.

Все экспериментальные раны покрывались пленкой, состоящей из некротической массы, фибрина, лейкоцитов с колониями бактерий. Признаков очищения не наблюдали, и пленка прочно прикреплялась к дну раны. На дне раны наблюдали созревающую грануляционную ткань с большим числом вновь образованных сосудов, нерегулярные, хаотично расположенные коллагеновые волокна и явную инфильтрацию лейкоцитов. Наблюдалась диффузная воспалительная инфильтрация соединительной ткани, которая была более интенсивной на поверхности участков. В 60% случаев это были участки гноящихся скоплений соединительной ткани. Интенсивное диффузное воспаление, приводящее к склерозу, отмечалось в клетчатке, примыкающей к дну раны, и в соединительной ткани. Воспаление имело место не только на дне раны, но и распространялось на соседние области дермы. Имела место слабая первоначальная регенерация эпителия с клиновидными регенерирующими областями у краев раны и без различимых признаков дифференцировки.

b) Плацебо.

Очищение раневой поверхности было незначительным, и на пленке преобладали лейкоциты. В областях без признаков очищения наблюдалась интенсивная инфильтрация лейкоцитов у нижнего слоя созревающей соединительной ткани. На некоторых участках наблюдалась тенденция к рубцеванию соединительной ткани. Дно раны не имело четких границ: воспаление распространялось на соседнюю дерму и жировую клетчатку. Регенерация эпителия практически отсутствовала и могла быть заметной только у одного или двух краев у 60% животных.

c) Соединение 2.

На поверхности раны находились неравномерные остатки пленки, представленной фибрином, эритроцитами и подвергаемыми лизису лейкоцитами. Соединительная ткань с правильной ориентацией коллагеновых волокон и умеренной клеточной инфильтрацией преобладала у дна раны. Края регенерирующей соединительной ткани были более четкими, и воспалительная инфильтрация дермы, примыкающей к ране, была незначительной. Регенерация эпителия была обнаружена во всех ранах. Регенерирующий эпителий был скорее растянутым с четкими признаками многослойной дифференцировки, и в некоторых областях эпителий образовывался без полного очищения дна раны с эпителием, растущим под пленкой.

День 15.

а) Необработанная контрольная группа.

Только у 20% животных наблюдали значительное очищение ран и четкую, но незавершенную, эпителизацию: центральная часть раны была лишена эпителия, и дно имело зрелую соединительную ткань с тенденцией к рубцеванию. У 80% животных поверхность раны была очищена не полностью, и раны имели четкую воспалительную инфильтрацию зрелой соединительной ткани с нечетким рубцеванием на

- 19 008173 различных уровнях регенерирующей соединительной ткани. Грануляционную ткань наблюдали в областях с четкой воспалительной инфильтрацией, где лейкоциты топографически соответствовали зонам, которые не обнаружили признаков полного очищения. Регенерация эпителия была слабой, эпителиальный слой вытягивался в виде клина за края раны. Псевдоэпителиоматозную гиперплазию можно было увидеть в эпидермисе участков кожи, примыкающих к ране. Данные представлены на фиг. 1 А.

b) Плацебо.

У 60% животных наблюдали полное очищение раневой поверхности и эпителизацию раны. Однако многослойная регенерирующая ткань была пропитана лейкоцитами, с отеком и четкими признаками дистрофии. Данные участки топографически соответствовали областям с резко выраженным отеком, гиперемией, воспалительной инфильтрацией зрелой соединительной ткани у дна раны. Склероз и гранулему, обусловленную инородными веществами, обнаруживали в жировой ткани. В эпидермисе, примыкающем к ране, обнаруживали псевдоэпителиоматозную гиперплазию. У 40% животных раны были очищены слабо, только края раны были эпителизированы, что соответствовало интенсивной воспалительной инфильтрации регенерирующей соединительной ткани.

c) Соединение 2.

У 60% животных наблюдали полную эпителизацию раны со значительной степенью дифференцировки регенерирующего эпителия, образующего многократный, плоский слой над всей областью раны. Под многослойным плоским эпителием образовалась зрелая соединительная ткань с нормальной структурой коллагеновых волокон и без признаков дезорганизации и рубцевания. Клеточная инфильтрация регенерирующей соединительной ткани была минимальной. Чистые границы можно было увидеть между дном зажившей раны, подкожной клетчаткой и примыкающими участками дермы. У 40% животных эпителизация на значительной площади дна раны была неполной. В этом случае на поверхности неэпителизированных участков присутствовали неоднородные остатки пленки. Регенерирующий эпителий иногда образовывался под пленкой и отделял ее от раны. В таких участках скапливался инфильтрат из лимфоцитов, лейкоцитов и макрофагов. Данные представлены на фиг. 1В.

Пример 16. Морфологические показатели заживления раны.

Сравнительную оценку заживления полнослойной раны делали на основе совокупности морфологических показателей, характеризующих процесс регенерации:

(а) выделенный интервал времени, и признаки очищения раны, и вторичная инфекция асептической раны;

b) выделенный интервал времени, степень, направление и уровень дифференцировки регенерирующего эпителия у дна раны;

c) время развития, топография и распространение регенерирующей соединительной ткани;

ά) наличие и степень воспаления в регенерирующей ткани;

е) наличие или отсутствие синхронизации процессов регенерации в системе эпителий-соединительная ткань;

Г) наличие или отсутствие морфологических признаков патологической регенерации эпителия в соединительной ткани (акантоз, псевдоэпителиоматозная гиперплазия, роговидная киста, рубцевание) и

д) корреляция между этими процессами и типом заживления раны (первичное или вторичное натяжение).

У всех животных в каждой группе делали раны на коже и обрабатывали их, как описано в примере 14. Все перечисленные выше показатели изменялись в пределах группы. Однако эти различия подчеркивали определенные тенденции, сложившиеся в пяти группах ран. Таким образом, необработанная контрольная группа обнаружила следующее.

1. Замедленное или неполное удаление массивной пленки (некротические массы, фибрин, лейкоциты) со дна раны, которое наблюдали у некоторых животных даже на 15-й день эксперимента.

2. Регенерация эпителия была слабой и устанавливалась в пограничных участках раны, и регенерация эпителия не сопровождалась дифференцировкой плоских клеток.

3. Значительный рост грануляционных тканей на дне раны с нечетким созреванием и сопутствующей воспалительной инфильтрацией.

4. Отсутствие синхронности пролиферации в эпителии и соединительной ткани, что, в связи с данным воспалением, определяет тенденцию к заживлению вторичным натяжением.

Морфологические данные, полученные в группе с плацебо (ланолиновая мазь), были подобны данным, полученным в необработанных группах на 5-й и 10-й дни. Однако положительную динамику наблюдали на 15-й день: раны вновь очищались и эпителизировались на значительном участке, и регенерирующая соединительная ткань созревала. Однако тенденция к воспалению сохранялась, и воспаление распространялось к эпителию, что уменьшало возможность эпителиальной пролиферации и дифференцировки и способствовало заживлению раны вторичным натяжением. Данные представлены на фиг. 1А.

Существенные различия наблюдали при изучении заживления ран с помощью испытуемого соединения. Наблюдаемые различия дополняли и подтверждали результаты по положительному ранозаживляющему действию соединения 2 на полнослойные кожные раны. На 5-й день соединение вызывало фокальное очищение раневой поверхности от пленки и регенерацию эпителия с признаками дифференци

- 20 008173 ровки плоских клеток у краев раны. На 10-й день наблюдали одновременную регенерацию эпителия и соединительной ткани и тенденцию к созреванию регенерирующей ткани. Даже в случае, когда пленка частично оставалась на раневой поверхности, регенерирующий эпителий образовывался под пленкой. На 15-ый день у большинства животных наблюдали завершение процесса заживления первичным натяжением с дифференцировкой плоских клеток и без признаков патологической регенерации или рубцевания соединительной ткани. Данные представлены на фиг. 1В.

Применение Спасателя приводило к менее благоприятным результатам по заживлению ран, чем применение Солкосерила, и значительно менее эффективным, чем применение соединения 2. Очищение поверхности было медленным и неполным даже на 15-й день и коррелировало с устойчивой, исчерпывающей воспалительной инфильтрацией регенерирующей соединительной ткани. В ряде случаев течение воспаления, одновременность регенерации в системе эпителий-соединительная ткань были нарушены, поверхность была не полностью эпителизирована и соединительная ткань рубцевалась в некоторых очагах, создавая предпосылки для заживления вторичным натяжением. Данные представлены на фиг. 1С.

Солкосерил был сравним с соединением 2 по пролиферативному потенциалу. Однако с Солкосерилом пленка отделялась, и рана очищалась на более поздней стадии, что создавало условия, способствующие воспалению в регенерирующей соединительной ткани. Результаты коррелировали с неполной эпителизацией раны и возможностью деградации лейкоцитов регенерирующего эпителия, что создавало предпосылки для заживления раны вторичным натяжением. Данные представлены на фиг. 1Ό.

Пример 17. Лечение ран у больных людей.

Действие соединения 2 на заживление различных типов ран изучали на больных людях. Порошок, раствор или мазь, содержащие активное средство в пропорции от 5 до 95%, наносили на рану. Во всех случаях раны заживали быстро без инфицирования и рубцевания.

1. Больной А. 38-летний человек (операционная рана 5 см).

Раневую поверхность обрабатывали 10% соединением 2 в ланолиновой мази через 12 ч после образования раны. Мазь в количестве 1 г применяли под бинт. Процедуру повторяли ежедневно в течение 5 дней. Рана затягивалась, и на 17-й день рубца не было, и кожа полностью восстанавливалась.

2. Больной В. 78-летний человек (пролежни на бедре 1,0х2,0 см).

0,5 г тонкодисперсного порошка соединения 2 наносили на поверхность раны под бинт. Процедуру повторяли ежедневно в течение 5 дней. Рана затягивалась, и на 16-й день рубца не было, и кожа полностью восстанавливалась.

3. Больной С. 15-летний человек (вторая степень термического ожога на левой руке, 2,0х1,5 см).

Стерильную салфетку, смоченную 10% стерильным водным раствором соединения 2, накладывали на рану через 10 мин после ожога. Салфетку вновь смачивали, так как она высыхала. Процедуру повторяли в течение 24 ч. Через 1 ч боль в месте ожога прекращалась. На следующий день наблюдали, что гиперемия значительно уменьшалась на участке ожога. Проверка на 16-й день продемонстрировала полное заживление кожи, без рубцов.

4. Больной Ό. 9-летний ребенок (ссадина на левой ноге, 3,0х0,5 см).

0,5 г тонкодисперсного порошка соединения 2, смешанного с равным количеством талька, наносили на поверхность раны под бинт. Процедуру повторяли через 5 дней. Рана затягивалась, и на 12-й день кожа полностью зажила.

5. Больной Е. 68-летняя женщина (эрозия шейки матки, 1,5х1,2 см).

Поверхность раны подсушивали и 10% соединение 2 в мази, приготовленной, как для больного А, наносили на раневую поверхность с помощью тампона. Процедуру повторяли ежедневно в течение 2 недель. Кольпоскопия, сделанная на 18-й день, показала, что эпителий слизистой оболочки шейки матки полностью восстановился.

Пример 18. Влияние соединения 2 на заживление язв полости рта.

Модель язв полости рта, возникших в результате криогенного повреждения с внутренней стороны щеки, использовали с этой целью. Исследование проводили на 110 самцах крыс, имеющих массу 180-200 г, по 10 животных в каждой группе. Язвы создавали у экспериментальных животных путем надавливания металлического прутка диаметром 2,5 см, охлажденного в жидком азоте, на слизистую в течение 10 с под наркозом эфиром. Животных держали в отдельных клетках с обычной пищей и водой аб 11Ы1ит. Обработку проводили путем орошения слизистой оболочки рта через 24 ч после возникновения раны и затем ежедневно до полного заживления. Соединение 2 вводили животным в дозе 50 мг/кг (2 мл водного раствора). Использовали следующие группы животных.

Группа 1: интактные животные.

Группа 2: криогенное повреждение (рана) на 1-й день.

Группа 3: рана на 3-й день.

Группа 4: рана + обработка на 3-й день.

Группа 5: рана на 7-й день.

Группа 6: рана + обработка на 7-й день.

Группа 7: рана на 14-й день.

Группа 8: рана + обработка на 14-й день.

- 21 008173

Криогенное повреждение слизистой оболочки рта приводит к ране, характеризующейся некротической поверхностью, воспалением с интенсивной инфильтрацией лейкоцитов, выраженными нарушениями кровообращения, фибриноидным некрозом соединительной ткани слизистой, и распространением воспаления в мышцу, и реактивным кожным воспалением.

За ходом процесса заживления раны следили с помощью морфологической проверки на 1-й, 3-й, 7-й и 14-й дни. На 3-й день степень повреждений увеличивалась, приводя к развитию некротических изменений с образованием обширной некротической зоны у дна раны и к развитию и распространению острого воспаления, охватывающего мышцу, кожу и слизистую за пределами раневого участка. На 7-й день раны у половины животных частично очищались от некротической массы, что сопровождалось образованием грануляционной ткани у дна раны и в примыкающей слизистой. Наблюдались первоначальные признаки регенерации многослойного плоского эпителия у краев раны и ослабление признаков воспаления. В частности, на 7-й и 14-й дни наблюдали тенденцию к очищению раневой поверхности и развитию и созреванию соединительной ткани. Однако воспалительная реакция в очаге воспаления с гнойным скоплением созревающей грануляционной ткани оставалась в поверхностных участках раны, особенно под некротической массой. Эпителизация раны не выходила за пределы первоначальной стадии, имеющей место у краев раны. Признаков тенденции к полной эпителизации не наблюдали. Данные представлены на фиг. 2А.

Сравнение экспериментальной группы, обработанной соединением 2, и контрольной группой показало, что на 3-ий день рана была свободной от некротической массы и что имело место увеличение грануляционной ткани, коррелирующее с ослаблением воспаления, а также регенерацией эпителия у краев раны. Процессы заживления раны в экспериментальной группе были более четкими на 7-й день. У 60% животных наблюдали полное очищение раневой поверхности, которое сопровождалось ослаблением воспаления, созреванием грануляционной ткани, уменьшением размера раневого дефекта, а также более очевидными признаками регенерации эпителия. Данные представлены на фиг. 2В.

На 14-й день указанные тенденции были более выраженными: не было ран с неполным очищением от некротической массы со дна раны, и не было признаков активного воспаления на дне раны и в примыкающей ткани. Размер раневой поверхности значительно уменьшался; созревание грануляционной ткани на дне раны и в примыкающей слизистой коррелировало с тенденцией к полной эпителизации раневой поверхности у всех животных без каких-либо рубцов или дефекта. Данные представлены на фиг. 2С.

Поэтому сравнительный морфологический анализ показал, что соединение 2 вызывало более выраженное, более раннее и более полное заживление криогенного повреждения слизистой ротовой полости крысы по сравнению с необработанными контролями.

Пример 19. Влияние соединений 1-3 на процессы репарации в слизистой желудка крысы.

Эксперименты, проведенные на крысах с использованием различных моделей повреждения желудка, показали, что соединения 1, 2 и 3 оказывают профилактический и терапевтический эффект, как суммировано в табл. 18. В качестве моделей использовали язвы желудка, вызванные

a) электростимуляцией фиксированных в неподвижном состоянии крыс в течение 3 ч;

b) фиксированием в неподвижном состоянии и гипотермией (вызванной охлаждением водой);

c) язвой, образованной локально при действии криогенного зонда способом, подобным способу, описанному выше для ротовых язв.

Соединения вводили внутрибрюшинно в дозе 20 мг/кг; в случаях модели язвы, вызванной криогенной обработкой, соединение 2 вводили либо внутрибрюшинно (10 мг/кг) либо перорально (20 мг/кг 2 раза в день, т. е. всего 40 мг/кг/день) и сравнивали с гастрозепином, введенным перорально (1 мг/кг 2 раза в день, т. е. всего 2 мг/кг/день).

Однако, в противоположность соединению 1, соединение 2 в значительной степени снижало частоту, объем и тяжесть повреждения слизистой. Соединение 3 не воздействовало на секреторную функцию желудка у собак или крыс при хроническом или остром воспалении.

Все три соединения ускоряли процессы репарации в слизистой желудка. Как показано в табл. 18, через 3 дня крысы, обработанные указанными соединениями, имели в 1,2-2 раза меньше эрозивные повреждения, чем необработанные животные.

Модель криогенной язвы продемонстрировала, что на 14-й день соединение в дозе 10 мг/кг снижало объем повреждений в слизистой желудка на 53% при внутрибрюшинном введении и на 51% при пероральном введении суточной дозы 40 мг/кг. Действие соединения 2 было подобным действию обычного противоязвенного средства гастрозепина (пирензепин; ТИотае).

Введение соединения 2 животным как в профилактических, так и терапевтических целях приводило к обращению изменений в содержании ферментов цитохромоксидазы и сукцинатдегидрогеназы, уровень которых служит показателем статуса окислительного фосфорилирования и функциональной активности слизистой желудка.

- 22 008173

Таблица 18

Защитный и заживляющий эффект соединений 1, 2 и 3 на поражения слизистой желудка у крыс

Типы повреждений	Среднее число повреждений на одно животное	% снижения степени изъявления	Площадь повреждения	% снижения площади изъявления
Защитный эффект за 30 минут до испытания
Электрическая стимуляция фиксированных в неподвижном состоянии крыс Контроль	7,0±0,7	0	15,2±5,7	0
Соединение 1	7,0±0,7	0	15,0+4,7	0
Соединение 2	2,4±0,8	66	2,8±2,1	91
Соединение 3	3,5±0,4	50	7,1±4,1	54
Фиксирование крыс в неподвижном состоянии под гипотермией Контроль	11,5±1,5	0	10,4±2,4	0
Соединение 1	10,2±1,2	0	10,1±1,4	0
Соединение 2	4,1+0,9	64	4,1+0,8	62
Соединение 3	6, 8±1, 4	41	Ί,2+2, 0	41
Электрическая стимуляция фиксированных в неподвижном состоянии животных (заживляющий эффект в течение курса из 3 дней) Контроль	3,4±0,2	0
Соединение 1	2,8+0,7	18
Соединение 2	1,7±0,2	50
Соединение 3	2,5+0,4	26,5

Криогенная язва (заживляющий эффект в течение курса из 14 дней) Контроль Соединение 1 Соединение 2 (дважды в день перорально) Соединение 3 (дважды в день перорально)

18,6+2,2 8,8+1,9 9,4±1,0 7,7+2,5

53 62 59

Пример 20. Клинические исследования влияния соединения 2 на язву желудка и двенадцатиперстной кишки.

Клиническое испытание влияния соединения 2 на язву желудка и двенадцатиперстной кишки проводили в нескольких гастроэнтерологических клиниках в России. Всего исследовали 167 больных возрастом от 30 до 75 лет; из них у 93 были язвы двенадцатиперстной кишки и у 74 были язвы желудка. Результаты контролировали гастроскопией с интервалами в 1 неделю. Каждый больной продолжал получать лечение, которое она/он получал до начала испытания. Соединение 2 вводили в дополнение к предыдущему лечению. Соединение 2 давали перорально в виде 3 таблеток по 0,2 г в день в течение периода 3 недель, т.е. общая доза была 12 г на курс лечения. Введение соединения 2 приводило к заживлению 80% из всех подвергаемых лечению язв двенадцатиперстной кишки и 54% из всех подвергаемых лечению язв желудка. Соединение 2 также оказалось эффективным в случаях состояний, которые, как было показано, являлись устойчивыми к обычной терапии. Влияние соединения 2 сравнивали с влиянием плацебо или циметидина. Наилучшие результаты были получены при введении соединения 2 вместе с обычной терапией. Побочных эффектов не наблюдали. По окончании лечения соединением 2 никакого изъязвления не наблюдали, т.е. признаков синдрома абстиненции не было, который обычно проявляется при употреблении Н2-блокаторов и гормонов. Соединение 2 оказалось эффективным терапевтическим средством с выраженным репаративным эффектом по отношению к поражениям гастродуоденальной области, таким как эрозия и язва.

Пример 21. Эффект соединения 2 и соединения 6 в модели язвенного колита.

Модель криогенного повреждения ободочной кишки использовали в данном эксперименте для моделирования язвенного колита. Криогенные повреждения сигмовидной ободочной кишки крыс вызывали путем надавливания металлическим прутком диаметром 2,5 см, охлажденным в жидком азоте, на серозную оболочку ободочной кишки в течение 10 с под наркозом эфиром.

Испытания проводили на 67 самцах крыс, имеющих массу 180-200 г, по 8 животных в каждой группе. Животных держали в отдельных клетках с обычной пищей и водой ас! йЬйит. Испытуемые соединения вводили перорально на 2-й день после операции и затем ежедневно до полного заживления. Соединение 2 или соединение 6 вводили испытуемым животным в дозе 20-50 мг/кг. Следующие агенты использовали для сравнения:

мг/кг оротата калия + 50 мг/кг рибоксина (инозин);

180 мг/кг метилурацила;

г/кг сульфасалазина (Рйагтас1а).

Следующие группы животных использовали.

Группа 1: интактные животные, дни 1, 3 и 7.

Группа 2: язва, необработанный контроль, дни 1, 3 и 7.

Группа 3: язва + соединение 2 20 мг/кг перорально, дни 3 и 7.

- 23 008173

Группа 4: язва + соединение 2 50 мг/кг, дни 3 и 7.

Группа 5: язва + соединение 6 20 мг/кг, дни 3 и 7.

Группа 6: язва + оротат калия 50 мг/кг + рибоксин 50 мг/кг перорально, дни 3 и 7.

Группа 7: язва + (метилурацил 180 мг/кг перорально), дни 3 и 7.

Группа 8: язва + (сульфасалазин 2 г/кг перорально), дни 3 и 7.

Природу заживления язвенного поражения изучали морфологически на 1-й, 3-й и 7-й дни. Морфологический анализ показал, что в контрольной группе животных было вызвано повреждение стенки ободочной кишки с деструкцией слизистого и мышечного слоев и развитием некротического процесса с тотальным поражением слизистой; образование лейкоцитарного некротического струпа; значительное поражение мембраны мышц; и острое воспаление с серозным, фиброцитарным и лейкоцитарным инфильтратом в пораженной области, включая брюшину. Процесс воспаления распространялся за пораженную область в примыкающие области и за брюшину в жировую ткань.

У контрольных животных процесс заживления имел следующую динамику.

На 1-й день наблюдали обширное поражение с большими некротическими поверхностями и без признаков выброса некротической массы и с выраженной диффузной инфильтрацией лейкоцитов в субнекротическую зону. Стенка ободочной кишки была полностью поражена, с острым отеком и инфильтрацией лейкоцитов. Острое воспаление распространялось в брюшину, примыкающую клетчатку и области кишки. Края некротической зоны были представлены слизистой примыкающих областей ободочной кишки.

На 3-й день наблюдали тенденцию к отторжению струпа, которая выражалась по-разному у различных животных; однако, не было случая полного очищения от некротической массы. У большинства животных не наблюдали признаков регенерации эпителия. В пораженных областях наблюдали выраженное воспаление наряду с увеличением грануляции и начальными признаками созревания.

На 7-й день дно пораженной области значительно очищалось от некротической массы. Подслизистый и мышечный слои заменялись на грануляционную ткань с различной степенью зрелости в сочетании с воспалительной инфильтрацией, которая оставалась как в пораженной, так и в примыкающей части ободочной кишки. Размер раны уменьшался, и слизистая оболочка регенерировалась неполностью без дифференцировки. В некоторых случаях в очагах оставались остатки струпа. Полученные результаты представлены на фиг. 4А.

В соответствии с полученными результатами авторы изобретения установили следующие критерии для сравнительной оценки процессов заживления в раневых областях, подвергаемых обработке различными средствами.

1. Масштаб некротических изменений и динамика очищения раны от струпа.

2. Степень и размер воспаления в раневой области.

3. Динамика, качество и синхронизация процессов восстановления-регенерации эпителия и соединительной ткани и количественная полнота регенерации.

Животные, обработанные средствами, используемыми для сравнения (метилурацил, оротат калия+рибоксин, сульфасалазин), существенно не отличались от контрольных групп на 3-й день; на 7-й день раны характеризовались более медленной очисткой дна раны от некротической массы, слабой регенерацией эпителия, отсутствием синхронизации регенерации эпителия и соединительной ткани и стойким воспалением по сравнению с контролями. На 7-й день у 18% животных наблюдали полное заживление.

Сравнение между экспериментальными группами, подвергаемыми обработке соединением 2 или соединением 6, и контролями четко обозначило ряд основных отличий. Начиная с 3-го дня, происходило ускоренное отторжение струпа с поверхности раны и ослабление степени воспаления в раневой области и вне этой области. На 7-й день наблюдали ускорение роста и созревания грануляционной ткани в области поражения. При использовании соединения 2 в дозе 20 мг/кг на 7-й день наблюдалась тенденция к полной регенерации эпителия и слизистой оболочки и уменьшению площади раны благодаря синхронной регенерации, которая завершалась в 100% случаев, как показано на фиг. 4В, в то время как при использовании дозы 50 мг/кг наблюдалось уменьшение площади раны только у 67% животных, как показано на фиг. 4С.

Все перечисленные выше признаки наблюдали у всех животных в испытуемых группах; однако, объем этих признаков и согласование во времени варьировали между различными группами. Оптимальные показатели заживления наблюдали, когда соединение 2 использовали в дозах 20 и 50 мг/кг; они были менее выражены в случае использования соединения 6.

Пример 22. Влияние соединения 2 в модели инфаркта миокарда.

Исследовали влияние соединения 2 на ткань миокарда в экспериментальной модели инфаркта миокарда. В данной модельной системе нейрогенную дистрофию миокарда вызывали у крыс или кроликов электрической стимуляцией рефлексогенной зоны дуги аорты с помощью вживляемых электродов в течение 3 ч. Данная обработка вызывает функциональные нарушения активности мышцы миокарда, которые характеризуются изменениями амплитуды ОРЗ волн и положением ЗТ сегмента, как было показано электрокардиографией с помощью аппарата с 12 отведениями. Указанные изменения сопровождаются изменениями биохимических показателей, таких как креатинфосфат, цАМФ и концентрации ионов каль

- 24 008173 ция, и изменениями в активности окислительно-восстановительных ферментов, таких как сукцинатдегидрогеназа, лактатдегидрогеназа и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа. На более поздней стадии наблюдали органические поражения миокарда, такие как некротические и фибросклеротические очаги.

Влияние соединения 2, вводимого внутрибрюшинно или перорально, на данные показатели исследовали на крысах и кроликах после электростимуляции, как описано выше. Результаты действия соединения 2 на уровни креатинфосфата в миокарде крысы представлены в табл. 19, и результаты действия соединения 2 на аденозинтрифосфатазу (АТФаза), сукцинатдегидрогеназу и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназу миокарда кролика представлены в табл. 20. Действие соединения 2 на уровни цАМФ и Са⁺⁺ в ткани миокарда кролика показано на фиг. 5, и действие соединения 2 на креатинкиназу в миокарде и крови кролика и уровни креатинфосфата в миокарде показаны на фиг. 6.

Таблица 19 Уровень креатинфосфата (мкМ/г) в миокарде крысы после внутрибрюшинного введения соединения 2

Условия экспериментов	Интактные животные	Контроль	Соединение 2
10 мг/кг	20 мг/кг
До стимуляции	1,22±0,Об	0,50±0,07	0,92± 0,08	1,4±0,15
Через 3 дня после стимуляции	1,07+0,05	0,54±0,05	0,95± 0,06	1,7+0,04
			Пероральное соединение 2 10 мг/кг
До стимуляции	1,10±0,04	0,47±0,04	0,80 + 0,07
Через 3 дня после стимуляции	1,19±0,08	0,7б±0,08	1,09±0,1

Таблица 20

Влияние соединения 2 на активность ферментов в миокарде кролика

Экспериментальный маркер	Интактное животное	48 часов после электростимуляции
Без обработки	Соединение 2 10 мг/кг	Этимизол 5 мг/кг
АТФаза (мкМ/мг/мин	0,57±0,13 Р<0,001	0,28±0,12	0,47±0,13 Р<0,01	0,43±0,11 Р>0,05
Сукцинатдегидрогеназа (единицы оптической плотности)	46,1±5,5 Р<0,001	31,8+6,2	44,2±6,7 Р=0,01	39,7+7,4 Р>0,05
Глюкозо-6фосфатдегидрогеназа (единицы оптической плотности)	5,6±0,6 Р<0,01	7,1+0,8	6,2±0,7 Р>0,01	6,8±0,7 Р=0,05

Примечание: Р оценивают в сравнении с группой кроликов, которых не обрабатывали после электростимуляции.

Полученные результаты показали, что соединение 2 оказалось эффективным в устранении повреждения миокарда как при пероральном, так и внутрибрюшинном введении. У контрольных животных, которые не получали соединение 2 до или после электростимуляции, наблюдали снижение в биохимических показателях повреждения миокарда, а также некроз, пролиферацию миокардиальной стромы и склеротических центров, т.е. образование рубца. Действие соединения 2 было сравнимо с действием рибоксина или леводопы.

Пример 23. Влияние соединения 2 на больных с инфарктом миокарда.

Клиническое испытание соединения 2 проводили на 100 больных в возрасте от 25 до 75 лет в течение подострого периода инфаркта миокарда. Каждый больной продолжал получать лечение, которое она/он получал до начала испытания. Соединение 2 вводили в дополнение к предыдущему лечению. Контрольная группа получала стандартное лечение, т.е. нитрат, антикоагулянты и/или гипотензивные

- 25 008173 средства, которые были назначены. Результаты лечения указанных двух групп сравнивали с данными, полученными в группах больных, которым давали рибоксин и плацебо. Соединение 2 вводили в течение 3 недель от 7-го до 28-го дня после инфаркта и вводили перорально в дозе 3 таблетки по 0,2 г в день.

Результаты лечения контролировали с помощью электрокардиографии, выполненной на аппарате с 12 ответвлениями, используя систему количественных показателей ЦГ8. Гемодинамические параметры и сократительную функцию миокарда контролировали с помощью ультразвуковой камеры ΤοΜη^-ι, модели 88Н-60Л, обычными методами.

Влияние соединения 2 также изучали у 25 больных в возрасте от 43 до 66 лет, страдающих от сердечной недостаточности, и сравнивали с действием рибоксина или плацебо.

У больных, страдающих от инфаркта миокарда, восстановление сократительной функции миокарда было более быстрым у больных, получающих соединение 2, чем у больных, получающих плацебо или рибоксин. У больных, страдающих от сердечной недостаточности, соединение 2 предупреждало развитие состояния и предотвращало расширение левого желудочка. Побочных эффектов не наблюдали ни в одной из групп.

Пример 24. Влияние соединения 2 на больных с инфарктом миокарда.

Оценивали влияние терапии соединением 2 у больных с подострой фазой инфаркта миокарда (М1). Больных разделяли на две группы. Существенных различий между группами по возрасту и основным признакам некротических очагов не наблюдали. Каждый больной продолжал получать лечение, которое она/он получал до начала испытания. Соединение 2 вводили дополнительно к предыдущему лечению. Первая группа включала 63 больных, которые получали стандартную терапию, т. е. нитраты, антикоагулянты и/или гипотензивные средства, которые были назначены, и вторая группа включала 44 больных, которых лечили соединением 2 в дозе 600 мг в день в период от 7-го до 28-го дня после установки диагноза инфаркта миокарда, кроме получения обычного лечения. Контрольная группа включала 14 здоровых мужчин в возрасте от 26 до 42 лет. Средний возраст больных в первой группе был 50,3 года и во второй группе - 49,5 года.

Повторные инфаркты миокарда были диагностированы у 20% больных первой группы и 25% больных второй группы. Показатель локализации некротических очагов в переднеперегородочной и переднебоковой областях левого желудочка сердца составляла 0,47 в первой группе и 0,38 во второй группе. Локализация некротических очагов в нижней и нижнебоковой области характеризовалась показателем 0,53 для больных первой группы и 0,62 для больных второй группы.

Данные клинического обследования, полученные при ежедневных проверках обеих групп и в результате электрокардиографического исследования с помощью аппарата с 12 ответвлениями, оценивали в течение всего периода обследования. Ряд анализов был выполнен на 7-й и 28-й день развития М1, включая клинический анализ крови, определение билирубина плазмы, сахара, креатина, холестерина, βлипопротеинов, калия и натрия, активности протромбинового комплекса и анализ мочи; и определяли время рекальцификации. Центральную гемодинамику проверяли с помощью метода интегральной реографии тела, посредством которого рассчитывали ударный объем и сердечные индексы. Показатели сокращения левого желудочка сердца - конечный диастолический объем, фракция выброса и степень систолического сокращения переднезадних размеров полости (%Δ8) - проверяли методом эхографии, используя прибор Л&ка 88Ό-119 Царап). Центральную и внутрисердечную гемодинамику исследовали на 1-й, 7-й, 14-й, 21-й и 28-й дни болезни. Физическая проверка не выявила существенных различий между группами больных в течение периода обследования.

Клинические испытания соединения 2 показали, что в течение трехнедельного курса лечения (от 7-го до 28-го дня заболевания) больных с инфарктом миокарда дозой 600 мг в день никаких клинических побочных эффектов не возникало. Терапия соединением 2 приводила к повышению уровня несвязанного и, следовательно, общего билирубина в сыворотке, который, однако, не превышал верхнего предела стандартных величин. Комбинированная терапия соединением 2 с обычной терапией больных ИМ повышала скорость и степень восстановления сократительной способности миокарда левого желудочка. Результаты, полученные авторами изобретения, показывают, что соединение 2 пригодно для лечения М1 больных с подострой фазой заболевания.

Пример 25. Сравнение клинической эффективности соединения 2 и рибоксина у больных с подострой фазой инфаркта миокарда.

Всего исследовали 94 больных, из них:

соединение 2 давали 32 больным;

плацебо давали 14 больным;

рибоксин (инозин) давали 18 больным;

обычную терапию, как в примере 24, получали 30 больных.

Каждый больной продолжал получать лечение, которое она/он получал до начала испытания. Соединение 2 вводили в дополнение к предыдущему лечению.

Всех больных подвергали стандартным лабораторным испытаниям до начала терапии соединением 2, через 14 дней после начала курса лечения и по окончании курса лечения. Испытания включали в себя

- 26 008173 клинический анализ крови; общий анализ мочи; определение креатинина, билирубина, активности трансаминазы, сахара в крови, холестерина и β-липопротеинов, малонового диальдегида, оснований Шиффа, цинка, железа, меди, калия и натрия в плазме крови, протромбина и фибриногена; и проверку ЕСС в динамике.

Все больные получали обычную терапию, т.е. нитраты, антикоагулянты и/или гипотензивные средства, которые были назначены.

Комбинированная терапия включала соединение 2 (1-я группа - 32 больных) или рибоксин (2-я группа - 18 больных). Средства вводили в дозе 200 мг 3 раза в день.

В добавление к улучшению субъективных данных, соединение 2 оказывало положительный эффект на сократительную функцию миокарда, поскольку авторы наблюдали явное увеличение фракции выброса от 54,4±1,5% (отсутствие средства) до 60,0±0,5% (приблизительно 6%), в противоположность группе больных, которых лечили рибоксином (56,8±1,3%).

У больных, которых подвергали лечению соединением 2, наблюдали тенденцию к нормализации уровней холестерина на 96,5% и снижению уровня протромбина до 91,3%, в то время как цифровые данные у больных, которых лечили рибоксином, были 85,5 и 88,7%, соответственно.

Наиболее выраженный терапевтический эффект наблюдали у больных с повторным инфарктом миокарда, у которых рубец образовывался на 1 или 2 дня раньше (27 дней, в среднем) в 90% случаев, чем у больных, которых лечили рибоксином (12% случаев).

Исследование состава электролитов в крови, в частности микроэлементов, таких как цинк и медь, показало довольно интересные результаты. Как известно, инфаркт миокарда вызывает уменьшение уровня цинка. У больных, которые принимали соединение 2, наблюдали существенное повышение уровня цинка по сравнению с группой, получавшей рибоксин, у которых цинк оставался ниже нормальных уровней на протяжении всего курса лечения. Кроме того, было обнаружено, что в течение лечения соединением 2 уровень меди повышался пропорционально увеличению содержания супероксиддисмутазы, антиокислительного фермента плазмы, который отражает нормализацию гомеостаза. У больных, которые принимали рибоксин, не обнаружили такого взаимоотношения.

Интенсификация процессов перекисного окисления липидов (ЬРО), сопровождающегося снижением активности антиоксидантных систем, играет заметную роль в патогенезе ишемической болезни сердца. У всех больных обнаружили первоначально высокий уровень ЬРО показателей (малоновый диальдегид и основания Шиффа). До лечения все больные имели уровни малонового диальдегида выше нормы, т.е., в среднем, 1,3 нмоль/мл, в норме уровень составляет 1,21 нмоль/мл. В ходе лечения соединением 2 наблюдали явное уменьшение уровня малонового диальдегида до 1 нмоль/мл на 21-й день. Уменьшение уровня малонового диальдегида в ходе лечения рибоксином находится в соответствии с развитием инфаркта миокарда. Уровень оснований Шиффа до лечения составлял 75 условных единиц, т. е. выше нормы (60 условных единиц). После терапии соединением 2 уровень оснований Шиффа резко снижался до 40 условных единиц в сравнении с 62,6 условными единицами, определенными по окончании терапии рибоксином. До лечения активность супероксиддисмутазы была низкой в обеих группах, составляющей, в среднем, 18-20 условных единиц. После терапии соединением 2 уровни супероксиддисмутазы превышали норму (23 условные единицы), достигая 25 условных единиц; после терапии рибоксином, однако, указанный параметр не только не повышался, но фактически незначительно снижался, до 21,5 условных единиц.

Все больные, которых подвергали лечению соединением 2, чувствовали себя хорошо, и у них не развивались какие-либо аллергические или побочные реакции.

Пример 26. Влияние соединения 2 на поражение печени, вызванное четыреххлористым углеродом.

Профилактическое и терапевтическое действие соединения 2 на пораженную печень проверяли на модели интоксикации четыреххлористым углеродом. Дисфункцию печени вызывали посредством внутривенного введения 50% раствора четыреххлористого углерода, основанного на жидком парафине, в дозе 0,8 мл на 100 г массы тела ежедневно в течение 4 дней. Инбредных самцов белых крыс, имеющих массу 200-220 г, обрабатывали соединением 2 в дозе 20 мг/кг путем перорального введения через желудочный зонд на 8-й день после инъекции четыреххлористого углерода и затем ежедневно в течение 4 дней. Контрольные животные получали только четыреххлористый углерод. Животных убивали через 7 дней после последней инъекции четыреххлористого углерода, когда морфологические изменения были наиболее выражены, и образцы печени брали для гистологического исследования.

В контрольной группе животных наблюдали некроз паренхимы и деструкцию характерной структуры печени; кроме того, можно было увидеть жировую дистрофию и диффузную воспалительную инфильтрацию портальной стромы. Картины митоза не наблюдали. У животных, обработанных соединением 2, степень некроза была меньше и некротические зоны были локализованы скорее, чем конфлюент; преобладала белковая дистрофия и центральная воспалительная инфильтрация портальной стромы. Огромные мононуклеарные, бинуклеарные и полинуклеарные гепатоциты были обнаружены во всех срезах, и можно было наблюдать частые картины митоза. Таким образом, соединение 2 оказывает защитный эффект на паренхиму печени и повышает способность к регенерации печени после интоксикации четыреххлористым углеродом, что указывает на то, что соединения согласно настоящему изобретению могут

- 27 008173 оказывать благоприятное действие при лечении хронического активного гепатита. Полученные результаты суммированы в табл. 21.

Таблица 21 Сравнение основных морфологических показателей контрольной и экспериментальной групп животных после интоксикации СС1₄

Показатели (произвольные)	Группы животных	Р
Контроль	Соединение 2
Некроз гепатоцитов	8,2+0,24	2,7±0,3	<0,001
Удаление гликогена из поврежденных зон	1,8+0,2	4,9±0,4	<0,001
Средний митотический индекс	0,0012±0,001	0,021+0,001	<0,001

Пример 27. Восстановительное действие соединения 2, соединения 4, соединения 5 и соединения 6 после резекции печени.

Резекцию печени выполняли обычным методом (Ηίββίηδ апй Апйегзоп, 1931) путем удаления левой латеральной и центральной долей печени у 80 самцов белых крыс, имеющих массу 180-200 г.

Соединение 2, соединение 4, соединение 5 и соединение 6 вводили экспериментальным группам животных внутрибрюшинно в эквимолярных дозах 0,1 и 0,2 мМ/кг. Данные оптимальные дозы были установлены в предварительных экспериментах. Контрольная группа получала внутрибрюшинные инъекции физиологического раствора. Соединения вводили через день после операции и затем по 1 инъекции давали ежедневно в течение курса из 7 дней, поскольку максимальный рост массы печени у крыс наблюдали в первые 7 дней после резекции печени (8о1ораеу, 1980).

Эффективности соединений сравнивали с эффективностью комбинации нестероидных анаболических стимуляторов регенерации, которые используют в лечении патологических состояний печени, а именно рибоксина и оротата калия в дозе 0,2 мМ/кг каждый (КусЬпеу апй Рго1оу, 1984).

С целью оценки процесса регенерации в печени авторы определяли коэффициент завершения регенерации по формуле, приведенной ниже:

к « ^РГ^?2 · юо%,

Рз где

Р₁ = масса печени через 7 дней после резекции печени,

Р₂ = остаточная масса печени после резекции печени,

Р3 = масса удаленной печени.

Исходную массу печени, которая необходима для расчета массы органа, остающейся после операции, рассчитывали на основании общей массы тела животного, поскольку масса печени у крыс прямо пропорциональна массе тела.

Уравнение регрессии представлено ниже:

Υ = 0,036х + 2,37, где х = масса животного и

Υ = масса печени.

Коэффициент линейной корреляции для оценки размера, который исследуют, составляет 0,654 (Ощуогопзкауа е! а1., 2000).

Стимуляция регенерации ткани после гепатэктомии в ответ на различные лекарственные препараты ассоциирована с повышением синтеза нуклеиновых кислот, о чем свидетельствуют данные по увеличению содержания РНК и ДНК в регенерированной ткани. Количественный анализ ДНК и РНК выполняли посредством центрифугирования. Сравнительный анализ содержания ДНК у излеченных животных оказался самым информативным. Ферментативный компонент антиокислительной системы защиты оценивали на основе активности каталазы и супероксиддисмутазы (8ΟΌ).

Содержание РНК и ДНК

К образцу (100 мг) добавляли 5 мл раствора 0,3 мМ/кг НС1О₄. Для того, чтобы убедиться в полном осаждении не растворимой в кислоте фракции, лабораторные стаканы помещали на лед в течение 15 мин. Затем их подвергали центрифугированию в течение 10 мин при 5000 об./мин. Осадок промывали дважды 0,2М НС1О₄. После конечного центрифугирования стенки стакана тщательно сушили с помощью марли и фильтровальной бумаги. Осадок перетирали стеклянным пестиком, суспендировали в 1 мл воды и затем добавляли 1 мл 0,6М раствора КОН при комнатной температуре. Гидролиз проводили в течение 1 ч при 37°С, затем стаканы помещали на лед для остановки процесса гидролиза. К каждому стакану добавляли 4 мл 0,6М раствора и стаканы оставляли на льду в течение дополнительных 15 мин, затем центрифугировали в течение 15 мин при 5000 об./мин. Супернатант использовали для определения содержания РНК посредством измерения абсорбции в УФ-области при 260 и 290 нм по сравнению с контрольным образцом,

- 28 008173 содержащим 0,4М НС10.₄. Количество РНК, выраженное в мкг в 1 мл супернатанта, рассчитывали по следующей формуле:

В270 “ £>290

С= ------------ X 10,5

0,19 где С = означает концентрацию РНК (мкг/мл).

Содержание ДНК определяли в осадке, остающемся после щелочного гидролиза, который применяли для определения РНК. В сухой стакан, содержащий осадок, выливали 0,5М раствор НС10₄ (5 мл на образец). Гидролиз осуществляли на кипящей водяной бане в течение 20 мин. Количество ДНК, выраженное в мкг в 1 мл гидролизата, рассчитывали по следующей формуле:

0270 ~ Огэо ^С= 0Д9 ^{Х 10,1} где С = означает концентрацию ДНК (мкг/мл).

Активность каталазы

Активность каталазы определяли перманганатным методом. Оптимальное количество субстрата (3 мл 1% Н₂0₂) и 1 мл фермента добавляли к 10 мл фосфатного буфера, рН 7,8. Через 10 мин реакцию останавливали добавлением 1,5 мл Н₂80₄ (50%). Остаточную перекись водорода фильтровали с 0,1М раствором КМп0₄. Активность каталазы рассчитывали на основании того, что 1 мл 0,1М раствора КМп0₄ соответствует 1,7 мл Н₂0₂.

Активность суперокиддисмутазы

80Ό активность определяли дианизидиновым методом, который основывается на факте, что под действием ультрафиолетового излучения рибофлавин (КЪ) переходит в возбужденное (ионизированное) состояние и поэтому становится способным атаковать восстановленный дианизидин (ΌΗ₂). Образованный флавиновый семихинон восстанавливает молекулярный кислород и образует перекисный радикал. В отсутствие 80Ό перекисный радикал восстанавливает дианизидиновый радикал в реакционной смеси. Когда 80Ό является доступной, концентрация 0₂ является очень маленькой; поэтому дианизидиновые радикалы взаимодействуют друг с другом, образуя одну молекулу восстановленного (бесцветного) дианизидина и другую молекулу окисленного (окрашенного) дианизидина. Чем выше активность 80Ό, тем больше образуется окисленного дианизидина с максимумом абсорбции при 460 нм.

Инкубационная среда:

0,1М фосфатный буфер 1,00 мл

Рибофлавин 0,26 мл о-Дианизидин 0,04 мл

Образец 0,10 мл

Контрольный образец содержит известное количество 80Ό.

Образцы подвергали действию УФ-лучей в течение 10 мин на расстоянии 10 см, охлаждали при комнатной температуре и измеряли оптическую плотность.

Результаты, суммированные в табл. 22, показали, что гепатэктомия привела к выраженному повышению содержания ДНК и РНК в печени крысы. Содержание ДНК в группе, обработанной соединением 2 в дозе 0,1 или 0,2 мМ/кг, было на 15% выше, чем у животных, подвергаемых только гепатэктомии, и восстанавливающая активность в группах, подвергаемых обработке соединением 3, соединением 5, соединением 6 или соединением 7, была выше, чем в группе, обработанной 0,2 мМ/кг оротата калия + рибоксина. Эффективность соединений располагалась в следующем порядке: соединение 2, 0,1 мМ/кг > соединение 2, 0,2 мМ/кг > соединение 6, 0,2 мМ/кг > соединение 5, 0,2 мМ/кг > соединение 4, 0,2 мМ/кг > {оротат калия + рибоксин} 0,2 мМ/кг.

Уровень антиоксидантной защиты также оценивали по активности каталазы и супероксиддисмутазы (80Ό). Важность указанных ферментов объясняется их физиологической ролью, связанной с процессами окисления, вовлекающими молекулярный кислород, перекись водорода и кислородные радикалы в метаболические изменения. Изменения антиокислительной активности более выражены для каталазы. Явную стабилизацию активности каталазы наблюдали после обработки соединением 2 в дозе 0,2 мМ/кг и соединением 6 в дозе 0,2 мМ/кг. Полученные результаты подобны результатам, полученным в группе, подвергаемой обработке стандартными средствами (оротат калия + рибоксин). С другими соединениями также наблюдали усиление процессов репарации; однако, их эффективность была немного ниже (соединение 2, 0,1 мМ/кг > соединение 2, 0,2 мМ/кг > соединение 5, 0,2 мМ/кг > соединение 4, 0,2 мМ/кг).

Терапевтическую эффективность можно оценить по изменениям активности второго фермента, осуществляющего защиту от окисления, 80Ό. Его активность в печени экспериментальных животных снижалась после гепатэктомии. Введение 0,2 мМ/кг соединения 2 или 0,2 мМ/кг соединения 6 приводило к более выраженной стимуляции процессов восстановления в печени при использовании обычного курса лечения (0,2 мМ/кг оротата калия + рибоксина). Положительные изменения активности 80Ό также обна

- 29 008173 ружены в группах животных, которые получали соединение 2 в дозе 0,1 или 0,2 мМ/кг и соединение 4 в дозе 0,2 мМ/кг после гепатэктомии.

Поэтому эффективность соединений согласно изобретению, оцененная по их способности стабилизировать антиоксидантную ферментативную активность, располагалась следующим образом: соединение 6, 0,2 мМ/кг > соединение 2, 0,2 мМ/кг > соединение 5, 0,2 мМ/кг (смотри табл. 22).

Таблица 22

Влияние солей 1,3-диалкил-4,5-бис(№метилкарбамоил)имидазолия (соединения 3, 5, 6 и 7) на регенерацию печени после резекции печени

Показатели	Группы животных	Гепатэктомия + тестируемые компоненты
Интактные животные п=7	Только гепатэктомия (контроль) п=7	Соединение 2 0,1 мМ/кг п=7	Соединение 2 0,2 мМ/кг п=7	Соединение 5 0,2 мМ/кг п=7	Соединение 6 0,2 мМ/кг п=7	Соединение 4 0,2 мМ/кг п=7	Оротат калия + рибоксин 0,2 мМ/кг
Уровень восстановления	-	100	150,5	134,9	120,3	105,0	128,3	144,7
Содержание РНК (мг/г ткани)	5,42+0,17	7,23±0,25	7,07+0,18	6,96+0,39	7,46 + 0,14	7,14+0,16	7,14+0,2	6,95+0,35
Содержание ДНК (мг/г ткани)	2,99±0,21	3,65±0,12	4,2±0,37	4,1+0,13	3,76+0,29	3,88+0,17	3,72±0,09	3,48+0,19
Активность каталазы Е мкгМ/мин/г ткани х 1000	34,0±1,86	14,0±0,9	18,0±3,1	20,0±1,92	17,3±2,6	20,0±2,7	18,0+2,6	23,0±3,1
Активность 5Οϋ единиц/г ткани	90,8±1,35	72,7+5,9	78,9+5,8	98,0±4,6	103,0±4,4	100,0+4,7	90,0±3,3	80,36±5,7
Содержание белка мг/г ткани	107,0±4,9	93,2±7,0	86,4±9,8	94,8±8,4	86,8±6,9	93,0+14,0	85,5±10,6	91,5±8,5

* После резекции печени обычно наблюдается гепатомегалия.

Пример 28. Морфологическое изучение печени после резекции печени и введения соединения 2, соединения 4, соединения 5 и соединения 6.

Морфологические методы исследования являются весьма информативными при оценке процессов репарации. Гистологические исследования печени после резекции печени выполняли общепринятыми методами. Микроскопические срезы окрашивали гематоксилином и эозином по методике Уап П1е§оп. Исследования печени после резекции печени проводили на 8 группах животных, насчитывающих 37 крыс. Всех животных проверяли через 1 неделю после гепатэктомии.

Гистологическая проверка показала, что печень полностью восстанавливалась после резекции печени в ответ на введение испытуемых соединений. Испытывали следующие соединения, которые не проявляли нежелательные эффекты: соединение 2, 0,1 мМ/кг, соединение 6, 0,2 мМ/кг, соединение 4, 0,2 мМ/кг и, для сравнения, стандартная комбинация оротата калия + рибоксина, 0,2 мМ/кг.

В противоположность действию стандартной комбинации и в дополнение к гипертрофии гепатоцитов, в испытуемых группах наблюдали распространение областей роста с регенерирующими ядрами, появляющимися в периферических областях, и пролиферацию эпителия желчных протоков. Однако при использовании соединения 2, 0,2 мМ/кг и соединения 5, 0,2 мМ/кг у некоторых из животных наблюдали гипертрофию гепатоцитов, связанную с подострым гепатитом, с выраженным склерозом в портальных путях и воспалительную инфильтрацию, коррелирующую с дистрофическими изменениями в гепатоцитах.

Результаты показали, что соединение 2, которое повышало степень полной регенерации органа на 34,9-50,5%, оказалось самым эффективным из испытуемых соединений в активации процессов восстановления в печени, и оно способствовало увеличению показателей содержания ДНК у животных, подвергаемых гепатэктомии, на 15%. Группы животных, обработанных соединением 2, соединением 4, соединением 5 и соединением 6, проявляли наибольшую способность к регенерации по сравнению с группой животных, обработанных комбинацией средств оротат калия + рибоксин. Исходя из их эффективностей, указанные вещества располагались в ряду следующим образом: соединение 2, 0,1 мМ/кг > соединение 2, 0,2 мМ/кг > соединение 6, 0,2 мМ/кг > соединение 5, 0,2 мМ/кг > {оротат калия + рибоксин} 0,2 мМ/кг.

Результаты, полученные авторами изобретения в указанной модели, указывают на то, что соединения согласно изобретению являются пригодными для стимуляции регенерации печени после резекции.

Пример 29. Исследование клинического эффекта соединения 2 у больных с хроническим активным вирусным гепатитом.

больных в возрасте между 18 и 32 годами с хроническим активным вирусным гепатитом разделяли на 4 группы и держали под наблюдением. Все больные получали стандартную терапию, обычно оротат калия, рибоксин и интерферон до начала испытания.

Первая группа (10 больных) получала стандартную терапию в течение 20 дней. Определение клинических и биохимических показателей и серологические исследования осуществляли неоднократно в течение 20 дней после начала лечения.

Вторая группа (10 больных) получала как традиционное лечение, так и преднизолон в дозе 15 мг/кг в течение 20 дней. В данной группе клиникобиохимические и серологические анализы делали до лечения

- 30 008173 и через 10 и 20 дней после начала лечения.

Третья группа (10 больных) получала как традиционное лечение, так и соединение 2, вводимое перорально в дозе 600 мг в день в течение 20 дней. Контрольный клинико-биохимический и серологический анализ делали через 20 дней после начала лечения.

Четвертая группа (15 больных) получала преднизолон либо перорально, либо внутрибрюшинно в дозе 15 мг в день в течение 10 дней; затем преднизолон отменяли и заменяли его соединением 2 в дозе 600 мг в день в течение 10 дней. В данной группе первый клинико-биохимический и серологический анализ делали до начала лечения, второй анализ делали, когда лечение преднизолоном прекращали, и конечный анализ делали после полного курса лечения соединением 2.

При таком лечении преднизолоном наблюдали симптом отдачи с повышением иммунореактивности и торможением репликации вируса. Преднизолон обычно предписывают в дозе 20-30 мг в день в течение курса 4 недель, затем его резко отменяют и после нескольких дней назначают α-интерферон. Однако, когда преднизолон дают в течение достаточно длительного периода времени (более 2 недель), репликация вируса значительно усиливается, что делает прогноз заболевания неблагоприятным.

Маркеры вирусов были обнаружены у всех больных, находящихся под наблюдением. Хронический активный гепатит был диагностирован на основе первичных клинических и лабораторных данных: наличие астеновегетативного синдрома, гепатомегалия со склерозом печени, сердцебиение и слабость, а также спонтанная боль в области печени, диспептические расстройства и желтушная склера. Следующие биохимические показатели были рассмотрены: повышенная активность аланинтрансферазы в течение предыдущих 6 месяцев; повышение содержания билирубина и γ-глобулина в сыворотке, а также уменьшение титра очищения и содержания альбумина в сыворотке.

Результаты, полученные авторами изобретения при исследовании влияния соединения 2 на больных с хроническим активным гепатитом, показали, что данный агент улучшает клиническую картину и нормализует биохимические показатели, особенно при комбинировании его с предварительным курсом терапии преднизолоном; кроме того, он делает диспепсию менее выраженной и частой и последовательно снижает активность аланинтрансферазы.

Пример 30. Влияние соединения 2 на репарацию костной ткани.

Повреждение круглой или овальной формы в костной пластинке диаметром 2,5 мм было образовано в костной ткани нижней челюсти крысы посредством зубного сверла под анестезией эфиром. В послеоперационный период животных держали в отдельных клетках с обычной пищей и водой ай 11Ы1ит. Эксперименты проводили на 130 самцах крысы, имеющих массу 180-200 г, с 10 крысами в каждой группе.

Группы тестируемых животных обрабатывали соединением 2 (50 или 100 мг/кг) или метилурацилом (50 мг/кг) через 24 ч после повреждения и ежедневно в течение 3 месяцев. Контрольную группу представляли животные с поврежденной костной тканью, которые не получали никакого лечения. Следующие группы использовали.

Группа 1: интактные животные.

Группа 2: контроли (дефект костной пластинки; необработанные) 30 дней.

Группа 3: дефект костной пластинки + соединение 2, 50 мг/кг, 30 дней.

Группа 4: дефект костной пластинки + соединение 2, 100 мг/кг, 30 дней.

Группа 5: дефект костной пластинки + метилурацил, 50 мг/кг, 30 дней.

Группа 6: контроли (дефект костной пластинки; необработанные) 60 дней.

Группа 7: дефект костной пластинки + соединение 2, 50 мг/кг, 60 дней.

Группа 8: дефект костной пластинки + соединение 2, 100 мг/кг, 60 дней.

Группа 9: дефект костной пластинки + метилурацил, 50 мг/кг, 60 дней.

Группа 10: контроли (дефект костной пластинки; необработанные) 90 дней.

Группа 11: дефект костной пластинки + соединение 2, 50 мг/кг, 90 дней.

Группа 12: дефект костной пластинки + соединение 2, 100 мг/кг, 90 дней.

Группа 13: дефект костной пластинки + метилурацил, 50 мг/кг, 90 дней.

Характер восстановления поврежденной кости оценивали морфологически на тканевых срезах после 30, 60 и 90 дней. Срезы исследовали с помощью светового микроскопа при увеличениях х15, х100, х200 и х400.

Морфологический анализ показал, что костная ткань в поврежденных зонах восстанавливалась в ответ на лечение соединением 2 или метилурацилом путем первичного срастания остеогенезом соответственно характеру апозиционного роста зрелой компактной костной ткани. Ни одного случая раневой инфекции, приводящей к изменениям в природе и продолжительности заживления костного дефекта, не наблюдали. Продолжительность и природа заживления костного дефекта согласуются с литературными данными о фазах регенерации костной ткани.

Наилучшие результаты в устранении костных дефектов были достигнуты в группе животных, которым давали соединение 2 в дозе 50 мг/кг в течение курса лечения из 3 месяцев и у которых дефект почти полностью устранялся благодаря вновь образованной первичной костной мозоли, как показано на фиг. 7В, по сравнению с контролями (фиг. 7 А) и другими испытуемыми группами (фиг. 7С и 7Ό).

- 31 008173

Пример 31. Токсичность солей 1,3-диалкил-4,5-бис(Х-метилкарбамоил)имидазолия.

Острый токсический эффект солей 1,3-диалкил-4,5-бис(Х-метилкарбамоил)имидазолия оценивали после внутрибрюшинной инъекции 200 белым самцам мыши, имеющим массу от 18 до 20 г. Умерших животных подсчитывали ежедневно после введения испытуемого вещества. Полный период наблюдения составил 14 дней. Величину ΕΌ₅₀ рассчитывали согласно методу КегЬег (Ве1епку, 1963), результаты показаны в табл. 23. Гибель животных была вызвана дыхательной недостаточностью; при введении животным токсической дозы лекарственного препарата они лежали неподвижно, затем останавливались дыхание и сердце.

Соединения 1, 3, 4 и 7 все имели очень низкую токсичность, в то время как даже соединение 3 имело величину ΕΌ₅₀ свыше 500 мг/кг.

Таблица 23

Острый токсический эффект солей 1,3-диалкил-4,5-бис(Х-метилкарбамоил)имидазолия (ΕΌ₅₀)

Авторы изобретения обнаружили, что соединение 2 является эффективным в дозах от 10 до 20 мг/кг при продолжительном пероральном и/или парентеральном введении. В данных исследованиях величина ΕΌ₅₀ для крыс была 1210 мг/кг, а для мышей величина ΕΌ₅₀ была 1920 мг/кг при внутрибрюшинном введении. При пероральном введении величина ΕΌ₅₀ для крыс и морских свинок была более 20000 мг/кг. Полагают, что при клиническом применении лечение пероральными таблетками будет продолжаться от 2 до 3 недель, причем каждый больной получит 3 таблетки, содержащие 0,6 г активного соединения в день.

Исследования хронического токсического эффекта у животных в течение периода 6 месяцев показали, что соединение 2 не проявляло раздражающего или аллергического действия, не действовало на центральную нервную систему и не обладало тератогенной, мутагенной или канцерогенной иммуносупрессивной активностью. Никакого эффекта на массу тела, массу внутренних органов, структуру или функцию внутренних органов или показателей крови не наблюдали. Данные исследования проводили на мышах (40 мг/кг в день, даваемые подкожно), на крысах (40 мг/кг в день, даваемые подкожно) и на собаках (10 мг/кг или 40 мг/кг в день, даваемые перорально).

Специалистам в данной области станет очевидно, что, хотя изобретение описывают подробно для ясности и осмысления сущности изобретения, различные модификации аспектов и способов, описанных в тексте, могут быть сделаны без отступления от объема концепции изобретения, раскрытой в данном описании.

Ссылки, цитированные в данном тексте, перечислены на следующих страницах и включены в текст посредством ссылки.

Ссылки

Ве1епку М.Ь. Е1етеп!8 о£ сщапШаЦуе аззеззтеп! о£ рйагтасеибса1 е££ес! (1963).

Ощуогопзкауа У.У., Окоуйу 8.У., 8йи81оу Е.В., 8тйпоу А.В. Ехрептеп1а1 апб с11тса1 РИагтасо1о§у, 2000, νο1. 63, № 5, рр. 34-36.

Н1§§1п8 О.М. апб Лпбегзоп К.М. ЛгсИ. Ра!Ио1., 1931, ν. 12. № 1, рр. 188-202.

Ка1/апц О.В. Пегта1о1о§1са1 рйагтасоЬду/Вазю апб с11тса1 рйагтасо1о§у: 1998, νо1. 2, рр. 552-571.

Ка/ш М.1., Ко81уисйепко В.М., Кабоу ν.Α. 8иттагу геу1е\у о£ \уоипб ге1а!еб Сеопез. ЛУоапбз апб \уоипб т£ес!юп. - М., Мебюте, 1981, рр. 13-54.

ПиЫтоу, В.1. е! а1. 1999. Ме1Иобо1о§1са1 Ш81гис1юп8 \упЬ гедагб 1о 1Не а88е88етп1 о£ 1Не аПегшс сЬагас1еп8Ис8 о£ рЬагтасиеЦса! 8иЬ81апсе8 ίπ Мапиа1 оп Ехрептеп1а1 Рге-сйет1са1 81ибу о£ пе\у рбагтасеаЦса! 8иЬ81апсе8, рр. 234-241.

Ма8Икоу8ку М.И. Меб1ста18 збтиЫтд те!аЬойс ргосе88е8//Меб1сша18. 1998, νο1. 2, рр. 168-192.

Рю1гоу8ку Б.В., Мага8апоуа Ν.Υ., Кйготоу-Вог18оу Ν.ν., Могеуа Е.У., 8аргопоу N.8., \оу1коу У.Р., Коуа1еуа ν.Α. Ки881ап Ра1еп1 Νο. 1075668: Веп7епе8и1рйопа1е8 о£ 1,3-б1а1ку1-4,5-Ь18Щте1Иу1сагЬатоу1)1т1ба7о1шт, 811ти1а11п§ 1188ие епегду ехсИапде.

КусИпеу ν.Ε, Ετο1ον \.М. Кедепегайоп 811ти1а1ог8 и8еб т 1геа1теп1 о£ уиа! Ьера1й18 апб о1Ьег Нуег б18еа8е8, \'огопе/Ь 81а1е итуег8йу Рге88, \'огопе/Ь, 1984.

8агк18оу Ό.8., Ра118уп Α.Α., Ми81кап! Ь.1. Могрйо1о§у о£ 1Ие \уоипб Иеайпд ргосе88, \уоипб8 апб \уоипб т£ес1юп. \'1о8со\у, 1981, рр. 688-695.

8сйеир1ет Κ.Ι. Месйат8т о£ регси1апеои8 аЬ8огрйоп. I. 1пуе811§. Иегта1о1о§у, 1965, νο1. 45, N5, рр.

- 32 008173

334-345.

8о1орасу В.Р. Всдсηс^аΐ^οη οί'иогта1 аий ра1Ко1оу'1са1 аксгайоиз оГ 111с йусг, Уо1до-У1а1. Воок РиЬйзйсгз, Оогку, 1980.

8\утд1с, К.Г., 8Ыйстаи, Г.Е. 1972 I. Рйагтасо1. Ехр. Тйсгар. 183 22 6-234.

‘мчргасЬуа-АтпП 8., ГЩрайгск В.Е., Со1йтаи М.Р., 8ιηί11ι 8.В. ШГссйоиз сотрйсайид рийсй сагЬои йюх1йс 1азсг гсзигГастд Гог рйо!оадсй Гас1а1 8кт.//Псгта1о1од1с 8игдсгу, 1997, 23(7): 527-35.

№ш1сг, С.А., В181су Г.А. Ш88, Ο.Ν. 1962 Ргос. №Й. Ехр. Вю1. Мсй. 3 544-547.

/арайиуик 1.Р., /арайиуик У.1., ХакЬапа Е.А., /арабисик В.У.//ЬаЬога1огу ашта18. К1су. УузсЬа 8Йко1а, 1983, рр. 248-250, 254-255.

Claims (22)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Способ стимуляции восстановления ткани или заживления раны, предусматривающий стадию введения эффективного количества соли 1,3-диалкил-4,5-бис(необязательно Ν-замещенный карбамоил)имидазолия субъекту при необходимости такого лечения.
2. 2. Способ по п.1 ослабления воспаления, предусматривающий стадию введения эффективного количества соли 1,3-диалкил-4,5-бис(необязательно Ν-замещенный карбамоил)имидазолия субъекту при необходимости такого лечения.
3. 3. Способ по п.1 или 2, в котором соль 1,3-диалкил-4,5-бис(необязательно Ν-замещенный карбамоил)имидазолия является соединением формулы I

   I в которой

   В¹ и В² могут быть одинаковыми или разными и каждый выбирают из группы, состоящей из водорода и линейной или разветвленной алкильной группы, содержащей от 1 до 6 атомов углерода, которая может быть, необязательно, замещена аминогруппой, замещена или незамещена аминометильной группой, нитрогруппой, гидроксильной группой, галогеном, карбоксигруппой или амидом карбоновой кислоты;

   В³ и В⁴ могут быть одинаковыми или разными и каждый представляет собой замещенную или незамещенную линейную или разветвленную алкильную группу, включающую в себя от 1 до 6 атомов углерода, и

   X^- является фармацевтически приемлемым неорганическим или органическим анионом, выбранным из группы, состоящей из хлора, брома, йода, сульфата, нитрата, фосфата, перхлората, формиата, ацетата, фумарата, малата, малоната, цитрата, бензоата, салицилата, бензолсульфоната, метилсульфоната, ртолуолсульфоната, гентизата и нафталин-8-сульфоната.
4. 4. Способ по п.3, в котором по крайней мере один из В³ и В⁴ является незамещенным.
5. 5. Способ по любому из пп.1-4, в котором В¹ и В² являются различными, и В³ и В⁴ являются одинаковыми или различными, и каждый независимо означает алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода.
6. 6. Способ по п.5, в котором В³ и В⁴, оба означают метил, или оба означают этил, или один из В³ и В⁴ означает метил и другой означает этил.
7. 7. Способ по п.6, в котором В³ является метилом и В⁴ является этилом.
8. 8. Способ по любому из пп.1-7, в котором X^- означает бензолсульфонат, бензоат, салицилат или гентизат.
9. 9. Способ по любому из пп.1-7, в котором X^- означает неорганический анион, выбранный из группы, состоящей из хлора, брома и йода.
10. 10. Способ по любому из пп.1-7, в котором субъект претерпевает повреждение эпителиальной ткани кожи или слизистой оболочки, вызванное эрозиями, язвами, хроническим повреждением, инфекцией, травмой или операцией.
11. 11. Способ по любому из пп.1-10, в котором субъект испытывает состояние, выбранное из группы, состоящей из травматических ран, хирургических ран, ожогов, раскрытых хирургических разрезов, трансплантатов, диабетических язв, варикозных язв, декубитальных язв (пролежни), трофических язв, тропических язв, стероидных язв, хронических незаживающих язв, ротовых или глоточных язв, афтозных язв, язв роговицы, эрозий шейки матки, язв желудка и двенадцатиперстной кишки, язвенного колита, повреждения миокарда, повреждения печени и повреждения кости.

    - 33 008173
12. 12. Способ по любому из пп.1-11, в котором соль 1,3-диалкил-4,5-бис(необязательно Ν-замещенный карбамоил)имидазолия выбирают из группы, состоящей из бензолсульфоната 1,3-диметил-4,5-бисЩ-метилкарбамоил)имидазолия, бензолсульфоната 1-метил-3-этил-4,5-бисЩ-метилкарбамоил)имидазолия, бензолсульфоната 1,3-диэтил-4,5-бисЩ-метилкарбамоил)имидазолия, бензоата 1-метил-3-этил-4,5-бисЩ-метилкарбамоил)имидазолия, салицилата 1-метил-3-этил-4,5-бисЩ-метилкарбамоил)имидазолия, гентизата 1-метил-3-этил-4,5-бисЩ-метилкарбамоил)имидазолия и хлорида 1-метил-3-этил-4,5-бисЩ-метилкарбамоил)имидазолия.
13. 13. Соединение формулы I в которой

    К¹ и К² могут быть одинаковыми или разными и каждый выбирают из группы, состоящей из водорода и линейной или разветвленной алкильной группы, содержащей от 1 до 6 атомов углерода, которая может быть, необязательно, замещена аминогруппой, замещена или не замещена аминометильной группой, нитрогруппой, гидроксильной группой, галогеном, карбоксигруппой или амидом карбоновой кислоты;

    К³ и К⁴ могут быть одинаковыми или разными и каждый представляет собой замещенную или незамещенную линейную или разветвленную алкильную группу, включающую в себя от 1 до 6 атомов углерода, и

    Х^- является фармацевтически приемлемым неорганическим или органическим анионом, выбранным из группы, состоящей из хлора, брома, йода, сульфата, нитрата, фосфата, перхлората, формиата, ацетата, фумарата, малата, малоната, цитрата, бензоата, салицилата, бензолсульфоната, метилсульфоната, птолуолсульфоната, гентизата и нафталин-8-сульфоната, при условии, что, когда X^- является бензолсульфонатом, К¹ означает водород и К² означает метил, К³ и К⁴ не является метилом или этилом.
14. 14. Соединение по п.13, в котором по крайней мере один из К³ и К⁴ является незамещенным.
15. 15. Соединение по п.13 или 14, в котором К¹ и К² являются различными; и К³ и К⁴ являются одинаковыми или различными, и каждый независимо представляет собой алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода.
16. 16. Соединение по п.15, в котором К³ и К⁴ означают оба метил, или означают оба этил, или один из К³ и К⁴ является метилом и другой является этилом.
17. 17. Соединение по п.16, в котором К³ является метилом и К⁴ является этилом.
18. 18. Соединение по любому из пп.13-17, в котором Х^- означает бензолсульфонат, бензоат, салицилат или гентизат, при условии, что, когда Х^- означает бензолсульфонат, К¹ является водородом и К² является метилом, К³ и К⁴ не являются метилом или этилом.
19. 19. Соединение по любому из пп.13-17, в котором X^- означает неорганический анион, выбранный из группы, состоящей из хлора, брома и йода.
20. 20. Соединение по любому из пп.13-17, выбранное из группы, состоящей из бензоата 1-метил-3-этил-4,5-бисЩ-метилкарбамоил)имидазолия, салицилата 1-метил-3-этил-4,5-бисЩ-метилкарбамоил)имидазолия, гентизата 1-метил-3-этил-4,5-бисЩ-метилкарбамоил)имидазолия и хлорида 1-метил-3-этил-4,5-бисЩ-метилкарбамоил)имидазолия.
21. 21. Композиция, содержащая соединение, как определено в любом из пп.13-20, вместе с фармацевтически приемлемым или приемлемым в ветеринарии носителем.
22. 22. Способ синтеза соединения по п.13, предусматривающий стадию алкилирования (образование четвертичного основания) соединения 1-алкилимидазол-4,5-бис(необязательно Ν-замещенный карбамоил)имидазола посредством алкилбензолсульфоната с образованием соответствующего бензолсульфоната имидазолия и, необязательно, замещения бензолсульфонатного аниона с помощью ионного обмена, в котором имидазольный фрагмент является таким, как определено в п.13.