EA006314B1

EA006314B1 - Способ ингибирования прогрессивного развития или стабилизации волчаночного нефрита

Info

Publication number: EA006314B1
Application number: EA199900636A
Authority: EA
Inventors: Сьюзан Л. Каллед; Дэвид В. Томас
Original assignee: Байоджен, Инк.
Priority date: 1997-01-10
Filing date: 1997-12-31
Publication date: 2005-10-27
Also published as: EA199900636A1; KR100618081B1; JP2001508441A; TR200001249T2; PL190663B1; EA200501076A1; HUP0000833A2; CZ297680B6; TR199902191T2; EP1357131A2; TR200001251T2; EP0948355A1; KR20000070034A; NO993274D0; WO1998030240A1; NZ337072A; IL130784A0; NO993274L; EE9900273A; TR200001250T2

Abstract

Представлены способы ингибирования прогрессивного развития или стабилизации волчаночного нефрита у человека с использованием анти-CD40L соединений. В одном из вариантов анти-CD40L соединения вводят человеку с волчаночным нефритом, которому проводилась пересадка почки, с целью подавления развития иммунокомплексного гломерулонефрита в ткани пересаженной почки.

Description

Изобретение касается введения анти-СЭ40Б соединений пациентам для лечения иммунокомплексного гломерулонефрита и, в частности, волчаночного нефрита.

Настоящее изобретение касается способов ингибирования прогрессивного развития или стабилизации волчаночного нефрита. Более конкретно настоящее изобретение касается использования соединений, которые связываются с лигандами молекул СЭ40 на поверхности В-клеток и различных других клеток, отдельно или в сочетании с другими соединениями, для лечения или снижения прогрессирования, тяжести, симптомов или проявлений нефрита, ассоциированного с опосредованными антителами болезнями, такими как волчанка или индуцируемая лекарственными препаратами сывороточная болезнь. В соответствии с одним из вариантов в настоящем изобретении применяются моноклональные антитела 5с8.

Предпосылки изобретения

Болезнь иммунных комплексов обусловливается отложением иммунных комплексов в некоторых тканях, включая почечные клубочки и стенки кровеносных сосудов. В этих комплексах агрегируются антиген и антитело. Антигены могут быть аутоантигенами, когда организм вырабатывает антитела к компонентам собственных тканей, или же внешним антигенам, таким как инфекционные агенты или лекарственные препараты. В каждом случае отложение иммунных комплексов в кровеносных сосудах может вызывать высыпания на коже, перикардит и васкулит. Отложение иммунных комплексов в почечных клубочках может препятствовать нормальной фильтрационной способности почек, что в отдельных случаях может приводить к почечной недостаточности и смерти.

Системная красная волчанка (СКВ) является аутоиммунным заболеванием, связанным с угрозой для жизни, характеризующимся выработкой аутоантител к различным тканям, часто к ДНК. От СКВ страдают приблизительно 140 тысяч человек в США и 105 тысяч в Западной Европе: преимущественно это женщины, находящиеся в репродуктивном возрасте.

СКВ характеризуется воспалениями, поражающими соединительные ткани, включая системы кожи, связок и органов; часто поражаемыми органами являются почки, сердце, лёгкие и центральная нервная система. Клинические проявления СКВ часто включают общее недомогание, боли, сыпь, нарушение обучаемости, тромбозы, анемию, плеврит, нарушение желудочно-кишечных функций и выкидыши у беременных женщин. У большинства пациентов связанные с волчанкой иммуноглобулины и иммунные комплексы откладываются в почечных клубочках, что вызывает снижение почечной фунции. У половины пациентов с СКВ средней тяжести, которые составляют 70% всех пациентов с волчанкой, развивается клинический нефрит, характеризующийся наличием белка в моче. При том, что некоторые из этих пациентов могут быть успешно вылечены с применением иммуносупрессоров и(или) цитотоксических препаратов, клиническая реакция на эти лекарственные препараты может быть перемежающейся и, соответственно, лечение этими лекарственными препаратами обусловливает нежелательные побочные эффекты, поэтому многие пациенты не реагируют на проводимую лекарственную терапию. У значительной доли таких пациентов развивается почечная недостаточность, и многим из них для сохранения жизни необходимо проведение повторного диализа или пересадка почки. Средний возраст, в котором начинают проводить диализ пациентам с СКВ, - 35 лет. Трансплантат также может иметь короткий срок жизни, поскольку новая почка также чувствительна к повреждению вызываемому неремитирующими аутоантителами, присутствующими в крови пациентов с СКВ. Многие пациенты с СКВ в конечном итоге умирают в результате прямых или косвенных проявлений нефрита.

Лекарственные препараты и способы, применяемые для лечения СКВ, разделяются на различные классы: салицилаты и нестероидные противовоспалительные препараты, стероидные противовоспалительные препараты (системные кортикостероиды), иммуносупрессоры или цитотоксические препараты, противомалярийные препараты, диализ, пересадка, облучение лимфоидной ткани или плазмаферез. Большинство этих препаратов действуют как симптоматические агенты, призванные ослаблять воспаление, ориентируясь на симптомы заболевания и подавляя его проявления в ходе общего курса их применения. Примерами симптоматических средств являются салициловая кислота, глюкокортикоиды и нестероидные противовоспалительные препараты, такие как индометацин. Другие препараты воздействуют на патогенетический механизм заболевания, подавляя аутоиммунные реакции и влияя на их проявления только после нескольких недель их применения, к тому же этот эффект сохраняется и после окончания курса лечения. Эти препараты включают иммунодепрессанты, такие как азатиоприн и циклофосфамид, равно как и кортизоны, такие как преднизон.

Основные иммунодепрессанты, используемые в настоящее время для лечения СКВ, обычно вызывают нежелательные побочные эффекты, такие как повышение восприимчивости пациента к инфекциям, что является противопоказанием к долговременному применению таких препаратов. Появились попытки использования отдельных иммунодепрессантов, которые соответствуют специфическим этапам патогенеза заболевания, с целью снижения или нормализации концентрации иммуноглобулинов у пациентов с СКВ; в этом случае можно было ожидать положительного сдвига в почечном проявлении данного заболевания. Одной из необходимых реакций в процессе выработки антител является взаимодействие СЭ40 на В-клетках с лигандом СЭ40 (СЭ40Б) на активированных Т-клетках: этот этап необходим для роста В

- 1 006314 клеток и последующей выработки ими антител. СО40Ь в литературе также обозначают как др39 и как Т-ВАМ (молекула Т/В-клеточной активации). Из вышесказанного понятно, что СЭ40Ь. др39 и Т-ВАМ - одна и та же молекула. В РСТ публикации \УО 93/09812 (27 мая 1993 г.) описано моноклональное антитело мыши, обозначенное 5с8, которое специфически связывается с Т-ВАМ на поверхности активированных Т-клеток, подавляя таким образом активацию В-клеток Т-клетками.

Пипе е! а1. (1993, 8с1епсе, 261, 1328-1330) описывает мышиную модель, предназначенную для изучения предотвращения индуцируемого коллагеном артрита, являющегося системным хроническим иммунологическим заболеванием, путём введения анти-СЭ40Ь моноклональных антител МК1. Мышиная модель включает индукцию артрита путём иммунизации мыши цыплячьим коллагеном типа II (С11) с последующим повторным воздействием С11 спустя три недели. Симптомы заболевания наблюдаются только после повторного воздействия. Эппс е! а1. начинали лечение мышей с использованием антител МК1 спустя одну неделю после первой иммунизации и продолжали введение МК1 каждые четыре дня после этого. Эппе е! а1. сообщают, что лечение МК.1 предотвращает выявление клинического заболевания (артрита) у всех подвергавшихся лечению мышей, и делают вывод, что блокирование СЭ40Ь обладает позитивным лечебным потенциалом в подавлении проявления аутоиммунного заболевания.

Две группы исследователей блокировали взаимодействие СЭ40-С040Ь с использованием антиСЭ40Ь моноклональных антител (тАЬз) у молодых кроссбредных мышей линии ΝΖΒ и исследовали влияние этого на последующее развитие нефрита у таких мышей (Мойап е! а1., I. 1ттипо1., 154, 14701480, 1995; Еаг1у е! а1., I. 1ттипо1., 157, 3159-3164, 1996). У потомства женского пола, полученного от скрещивания новозеландских бурых мышей (линия ΝΖΒ) либо с новозеландскими белыми (ΝΖν), либо нормальными мышами 3\УК (соответственно, эти кроссы обозначаются как [(ΝΖΒ х ΝΖν)Ρ1 и (3\УК х ΝΖΒ)Ρ1], развивается синдром, во многих отношениях сходный с СКВ человека (81ешЬегд е! а1., Апп. 1п1егп. Меб., 115, 548, 1991; ХУоГзу & Зеатап, I. Ехр. Меб., 161, 378, 1985). У самок мышей Ρ₁ в каждом из скрещиваний по мере старения проявляются аномальные сывороточные аутоантитела и развивается гломерулонефрит.

Мойап е! а1. (зирга) провели исследование, в котором молодых мышей (3\УК х ΝΖΒ) Ρ₁ женского пола подвергали лечению тремя дозами МК1 по 250 мг, вводимыми трёхмесячным мышам каждый день в течение трёх дней. Животных умерщвляли после развития нефрита, определяемого по протеинурии на уровне по крайней мере 300 мкг/дл в течение двух последующих недель. У неподвергавшихся лечению животных развитие нефрита выявлялось в возрасте шести месяцев - к 10-му месяцу нефрит был отмечен у 60% таких животных. У первых животных, которых лечили с использованием МК1, симптомы нефрита развивались только в возрасте 9 месяцев; к 12-му месяцу жизни мышей, когда эксперимент был закончен, заболевшими из подвергавшихся лечению оказались только 40% животных. Процесс лечения также сопровождался продолжительным по времени снижением содержания в сыворотке аутоантител к одноцепочечным ДНК (анти-оцДНК) и к двухцепочечным ДНК (анти-дцДНК): у 7-месячных мышей, не подвергавшихся лечению, или у 4-месячных мышей, подвергавшихся лечению с МК1, средние уровни антител к оцДНК составили 4,5 ед./мл и 0,6 ед./мл, соответственно, а средние уровни антител к дцДНК составили 2,2 ед./мл и 0,4 ед./мл, соответственно. При этом проводившееся лечение не влияло на уровни 1дС в сыворотке.

В исследовании Еаг1у е! а1. (зирга) для лечения мышей (ΝΖΒ х ΝΖ\ν)Ρ| женского пола использовали антимышиные анти-СВ40Ь моноклональные антитела МК1 хомячка (№ое11е е! а1., Ргос. №111. Асаб. Зсг 89, 6550, 1992), которые вводили мышам внутрибрюшинно дозами по 200 мг МК1 дважды в неделю в возрасте от 4 до 10 месяцев. Лечение начинали до достижения возраста, в котором у мышей развивался тяжёлый нефрит, который подтверждался сильной протеинурией, составлявшей по крайней мере 500 мг/дл. (У первой мыши из 10 мышей контрольной, не подвергавшейся лечению группы тяжёлая протеинурия развивалась в возрасте 4,5 месяцев (Еаг1у е! а1., зирга 3161)). По существу лечение МК1 обусловливает подавление развития нефрита у подвергающихся лечению животных и увеличивает их жизнеспособность: при том, что у половины из неподвергавшихся лечению мышей Ρ₁ нефрит развивался в возрасте 6 месяцев и все они погибали в возрасте 10 месяцев; в группе подвергавшихся лечению МК1 мышей нефрит развивался менее чем у половины особей, и только 35% погибали в возрасте 10 месяцев, т.е. после окончания лечения МК1. Лечение МК1 также обусловливало стабилизацию титра анти-ДНК антител на протяжении нескольких месяцев после начала лечения, в то время как титры анти-ДНК антител у не подвергавшихся лечению мышей увеличивались до существенно более высоких значений в течение того же периода времени.

При том, что результаты этих исследований являются информативными, они имеют ограниченную возможность применения в лечении пациентов со спонтанной СКВ по следующим причинам. Что наиболее важно, лечение мышей в описанных выше исследованиях с применением моноклональных антител к СЭ40Ь начинали до того момента, как проявлялась протеинурия. Соответственно, хотя данные исследований и подтверждают, что лечение с использованием анти-СЭ40Ь может обусловливать предотвращение развития нефрита тогда, когда лечение начинается до появления симптомов заболевания, эти данные не позволяют определить того, что должно произойти в аналогичных клинических ситуациях, чтобы пациенту был поставлен диагноз симптоматической волчанки. Кроме того, используемые Еаг1у е! а1. в ка

- 2 006314 честве модели мыши (ΝΖΒ х ΝΖν)Ρι могут и не иметь достаточного сходства патогенеза нефрита с таковым у пациентов с СКВ, которое было бы достаточно для установления необходимости лечения. Например, мыши (ΝΖΒ х ΝΖν)Ρι характеризуются высоким содержанием в крови ретровирусного белка, который наряду с сывороточными аутоантителами предположительно обусловливает нефрит у животных. Поскольку большинство пациентов с СКВ не имеют ретровирусных белков в крови, а влияние антиСО40Ь соединений на уровень ретровирусов неизвестно, влияние анти-СО40Ь соединений на ассоциированный с аутоантителами волчаночный нефрит человека, исходя из результатов лечения мышей (ΝΖΒ х ΝΖν)Ρι, непредсказуемо.

Сущность изобретения

Изобретение предусматривает способ ингибирования прогрессивного развития или стабилизации волчаночного нефрита у людей путем введения терапевтически эффективного количества анти-СЭ40Ь соединения этому пациенту. Под симптоматической СКВ здесь понимается то, что у данного человека отмечается один или большее число следующих симптомов: протеинурия выше чем 150 мг/л, суммарное выделение белка с мочой более 150 мг в день или большим, чем у нормального человека содержание антител к дцДНК в сыворотке. Активный нефрит обычно диагностируется при протеинурии выше 300 мг/л.

Анти-СЭ40Ь соединение может быть любым соединением, которое связывается с СО40Ь на поверхности клеток, экспрессирующих СЭ40Ь. таких как активированные Т-лимфоциты. В одном из вариантов соединение является антителом к СЭ40Ь. предпочтительно моноклональным антителом. Это может быть моноклональное антитело 5с8 (депозитарный номер НВ 10916 в АТСС).

Анти-СВ40Ь соединение может быть включено в состав терапевтической композиции, которая включает терапевтически эффективное количество анти-СО40Ь соединения и фармацевтически приемлемый носитель. Терапевтическая композиция также может включать второе терапевтически эффективное соединение.

В другом варианте изобретение представляет способ подавления развития нефрита в пересаженной почке у людей с болезнью иммунных комплексов. В этом способе человеку вводят терапевтически эффективное количество анти-СО40Ь соединения. Этот способ может быть использован в отношении людей с любыми болезнями иммунных комплексов, включая СКВ и сывороточную болезнь. Анти-СО40Ь соединение может быть введено пациенту до момента пересадки, во время пересадки, после пересадки, периодически после пересадки чужого органа этому пациенту или после применения одного из этих режимов введения.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1 представляет таблицу изменений во времени некоторых измеряемых параметров крови и мочи контрольных и подвергавшихся лечению мышей линии (δνκ. х ΝΖΒ)Ρι в эксперименте II. Моноклональные антитела МК1 к СО40Ь вводили внутрибрюшинно из расчёта 500 мкг на 1 животное один раз в 4-месячном возрасте, затем в 7-месячном возрасте, затем в 9-месячном возрасте и затем с 1-месячным интервалом. Каждый из пяти верхних рядов таблицы, обозначенных АК-ΒΝ, включает данные по одному контрольному животному, а каждый из шести нижних рядов, обозначенных СЬ-СК, включает данные по одному подвергавшемуся лечению животному. Это исследование было начато в феврале 1996 года, когда животные достигли 4-месячного возраста. Вертикальные сдвоенные линии разделяют 4 группы данных, а каждая группа данных представляет измерения в пробах мочи и крови, даты взятия которых отмечены выше этих данных. Уровни протеинурии (Ρϋ) определены от следовых до 4 баллов. Уровень в 1 балл соответствует содержанию белка на уровне 30 мг/дл, уровень в 2 балла - 100 мг/дл, уровень в 3 балла 300 мг/дл, и уровень в 4 балла - свыше 2000 мг/дл. Уровни антител к МК1 (представлены в колонке, обозначенной анти-МК1), антител к оцДНК и антител к дцДНК даны в мкг/мл крови. Когда это удобно, значения приведены как средние со стандартными отклонениями (8.6.). Прочерк обозначает то, что пробы не были взяты, как правило, из-за преждевременной гибели животного. Знак ΝΏ обозначет не выполнено.

Фиг. 2 представляет таблицу данных измерения протеинурии у животных во время эксперимента II. Первая колонка представляет номера животных так же, как на фиг. 1. В заглавии колонок указаны даты взятия проб. Знак NС обозначает пробу не брали.

Фиг. 3 представляет таблицу параметров крови и мочи во время эксперимента V у контрольных мышей и не подвергавшихся лечению особей, лечение которых начинали в возрасте 4,5 месяцев. Антитела МК1 вводили подвергающимся лечению животным внутрибрюшинно из расчёта 500 мкг на 1 животное один раз в возрасте 4,5 месяцев и затем ежемесячно по 500 мкг (внутрибрюшинно). Каждый из 7 верхних рядов таблицы, обозначенных ΑΚ-ΒΒΕ, включает данные по одному контрольному животному, а каждый из семи нижних рядов, обозначенных СК-СЬК, включает данные по одному подвергавшемуся лечению животному. Этот эксперимент был начат в мае 1996 г., когда животные достигли возраста 4,5 месяцев. Остальные параметры таблицы такие же, как в табл. на фиг. 1.

Фиг. 4 представляет таблицу измерений параметров протеинурии во время эксперимента V. Номера животных даны в соответствии с фиг. 3. Другие параметры таблицы даны так же, как это описано для фиг. 2.

- 3 006314

Фиг. 5 представляет таблицу параметров крови и мочи во время эксперимента VII у контрольных и не подвергавшихся лечению мышей, лечение последних начинали по достижении возраста 5,5 месяцев. Антитела МВ1 вводили подвергающимся лечению мышам по одному разу в неделю внутрибрюшинно из расчёта 500 мкг на 1 животное в течение шести недель, затем инъекции проводили ежемесячно по 500 мкг (внутрибрюшинно). Каждый из трёх верхних рядов таблицы, обозначенный ΑΝ-ВЬ, включает данные по одному контрольному животному (как отмечено на фиг. 6, некоторые контрольные животные погибли до того, как данные для фиг. 5 были собраны), а каждый из семи нижних рядов, обозначенных СВ-ΌΝ, включает данные по одному подвергавшемуся лечению животному. Этот эксперимент был начат в июне 1996 года, когда возраст животных достиг 5,5 месяцев. Другие параметры таблицы такие же, как в таблице на фиг. 1.

Фиг. 6 представляет таблицу данных измерения протеинурии у животных во время эксперимента VII. Каждый из верхних семи рядов таблицы, обозначенных ΑΒ-ΒΝ, включает данные по одному контрольному животному, а каждый из нижних семи рядов, обозначенных СВ-ΌΝ, включает данные по одному подвергавшемуся лечению животному. Остальные параметры таблицы такие же, как в табл. на фиг. 2.

Фиг. 7 представляет таблицу параметров крови и мочи у контрольных мышей и не подвергавшихся лечению животных, лечение которых было начато в возрасте 5,5 месяцев в эксперименте X. Антитела МВ1 вводили внутрибрюшинно подвергающимся лечению животным из расчёта 500 мкг на 1 животное один раз неделю в течение четырёх недель с последующими ежемесячными инъекциями по 200 мкг (внутрибрюшинно). Каждый из восьми верхних рядов таблицы, обозначенных ΑΒ-ВЬВ, включает данные по одному контрольному животному, а каждый из восьми нижних рядов, обозначенных СВ-ОЬВ, включает данные по одному подвергавшемуся лечению животному. Этот эксперимент был начат в октябре 1996 года, когда возраст животных достиг 5,5 месяцев. Остальные параметры данной таблицы такие же, как в таблице на фиг. 1.

Фиг. 8 представляет таблицу данных измерения протеинурии у животных во время эксперимента X. Первая колонка представляет номера животных в соответствии с фиг. 7. Другие параметры данной таблицы такие же, как в таблице на фиг. 2.

Фиг. 9 представляет параметры крови и мочи во время эксперимента VI у контрольных мышей и не подвергавшихся лечению животных, лечение которых было начато в возрасте 7 месяцев. Антитела МВ1 вводили внутрибрюшинно 4 предназначенным для лечения животным из расчёта 500 мкг на 1 животное один раз в неделю в течение шести недель с последующими ежемесячными инъекциями по 500 мкг (внутрибрюшинно). Каждый из четырёх нижних рядов, обозначенных ΌΝ-ΕΝ, включает данные по одному подвергавшемуся лечению животному. В момент получения данных для этой таблицы все контрольные особи погибли, что отмечено на фиг. 10. Этот эксперимент был начат в июне 1996 г., когда возраст животных достиг 7 месяцев. Другие параметры данной таблицы такие же, как в таблице на фиг. 1.

Фиг. 10 представляет таблицу данных измерения протеинурии у животных во время эксперимента VI. Каждый из четырёх верхних рядов таблицы, обозначенных АВ-ΟΝ, включает данные по одному контрольному животному, а каждый из четырёх нижних рядов, обозначенных ΌΝ-ΕΝ, включает данные по одному подвергавшемуся лечению животному. Другие параметры данной таблицы такие же, как в таблице на фиг. 2.

Подробное описание изобретения

Способ по настоящему изобретению включает лечение, реверсию или стабилизацию нефрита у пациентов и с болезнью иммунных комплексов, и со стабилизировавшейся СКВ. Для лечения таких пациентов используют соединение, которое блокирует взаимодействие ΟΌ40Ό на Т-клетках с ΟΌ40 на Вклетках. Это подразумевает подавление выработки патологических антител, которые, в свою очередь, снижают уровни патогенетических аутоантител, связанных с развитием и обострением нефрита, ассоциирующегося с образованием иммунных комплексов.

Соединения

Терапевтические соединения, применимые в способе по настоящему изобретению, включают любые соединения, которые блокируют взаимодействие ΟΌ40 на В-клетках с ΟΌ40Ό, экспрессируемым на поверхности активированных Т-лимфоцитов. Специально представляемые анти-СО40Е соединения включают поликлональные антитела и моноклональные антитела (шАЬ§), а также производные антител, такие как химерные молекулы, смягчённые молекулы, молекулы со сниженными эффекторными функциями, бифункциональные молекулы и конъюгаты антител. В предпочтительном варианте выбирается антитело 5с8, описанное в патенте США 5474771, включённом в настоящее изобретение, в качестве ссылки. Другие известные антитела к антигену 5с8 включают антитела IтxМ90, IтxМ91 и IтxМ92 (полученные от Iттиηеx), моноклональные антитела к СО40Е, производимые Апсе11 (клон 24-31, каталожный № 353-020, Ваурой. ΜΝ) и моноклональные антитела к СО40Ь. производимое Сеп/уше (СашЬпбде. МА, каталожный № 80-3703-01). Также известны моноклональные антитела к СВ40Ь, производимые РйагМтдеп (8ап О|едо, каталожный № 33580Ό). Также были синтезированы и охарактеризованы различные другие антитела к СО40Ь (см., например, \¥О 96/23071 Вп81о1-Муег8 8дн|ЬЬ), которая включена в описание в качестве ссылки.

- 4 006314

Изобретение также представляет анти-СВ40Ь молекулы других типов, такие как полные фрагменты РаЬ, соединения Р(аЬ')₂, домены УН, домены РУ, одноцепочечные антитела (см., например, АО 96/23071), полипептиды, химерные конструкции полипептидов, химеры СИ40 (такие как СЭ40[д. как описано у Но11спЬаид11 е! а1., 1995, 1. ПптипоР МеЫобк, 188, 1-7, включённой в качестве ссылки) и небольшие молекулы, такие как маленькие полупептидные соединения и небелковые соединения, которые способны блокировать взаимодействие СЭ40-СЭ40Б. Процедуры идентификации, скрининга и оптимизации малых молекул представлены в заявке на РСТ 96/10664 от 21 июня 1996 г., включённой в описание цитирования настоящего изобретения в качестве ссылки.

Различные формы антител могут быть также получены с использованием стандартных методик формирования рекомбинантных ДНК (Аш!ег & МйДет, 349, 293-299, 1991). Например, могут быть сконструированы химерные антитела, в которых антиген-связывающий домен антитела животного связан с константным доменом антитела человека (антитело, исходно производное от млекопитающего, но не от человека, с применением технологии рекомбинантной ДНК с целью полного или частичного замещения шарнирного и константного доменов тяжёлой цепи и (или) константного домена лёгкой цепи на соответствующие домены лёгких или тяжёлых цепей иммуноглобулина человека) (см., например, СаЬШу е! а1., патент США 4816567; Моггтооп е! а1., 1984, Ргос. №11. Асаб. 8сР, 81, 6851-6855). Химерные антитела снижают уровень иммунных ответов, индуцируемых антителами животных, в случае применения в клинической практике.

Кроме того, могут быть синтезированы рекомбинантные смягчённые антитела. Смягчённые антитела - это антитела, исходно полученные от млекопитающего, но не человека, при использовании технологии рекомбинантной ДНК для замещения некоторых или всех аминокислот, не являющихся необходимыми для связывания антигена, на аминокислоты из соответствующих сегментов лёгкой или тяжёлой цепи иммуноглобулина человека (химеры, в основном включающие последовательности [§С человека, в которые встроены сегменты, обеспечивающие специфическое связывание антигенов) (см., например, заявку на патент АО 94/04679). Животных иммунизуют желаемым антигеном, соответствующие антитела выделяют и отчленяют последовательности вариабельного домена, обеспечивающие специфическое связывание антигена. Антиген-связывающие домены из антитела животного затем клонируют в подходящие положения генов антител человека, из которых предварительно делегированы домены связывания антигена. Смягчённые антитела сводят к минимуму использование гетерологичных (т. е. от разных видов) последовательностей в антителах человека: соответственно, они с меньшей вероятностью вызывают иммунные ответы у подвергаемого лечению объекта.

Также применимыми в способах и композициях по настоящему изобретению являются приматизированные антитела и антитела приматов.

Фрагменты антител и моновалентные (неполные) антитела также могут быть использованы в способах и композициях по настоящему изобретению. Моновалентные антитела включают димер тяжёлой и лёгкой цепей, связанный с Рс-фрагментом (стволовым доменом) второй тяжёлой цепи. РаЬ-фрагмент обозначает те части цепей, которые приблизительно эквивалентны или аналогичны последовательностям, которые включают участки Υ-ветвления тяжёлой цепи и лёгкой цепи по всей её длине и которые вместе (в соединении друг с другом) обеспечивают активность антитела. Белок РаЬ включает агрегаты одной тяжёлой и одной лёгкой цепей (что обычно обозначается как РаЬ'), равно как и тетрамеры, которые соответствуют двум разветвлённым сегментам Υ антитела (известны как Р(аЬ)2), при том, что любой из обозначенных выше фрагментов связан ковалентным или нековалентным способом таким образом, что такой агрегат способен селективно реагировать с конкретным антигеном или семейством антигенов.

Кроме того, стандартные технологии получения рекомбинантной ДНК могут быть использованы для изменения аффинности связывания рекомбинантных антител с их антигенами путём изменения аминокислотных остатков поблизости от сайтов связывания антигена. Аффинность связывания антигенов гуманизированным антителом может быть увеличена с помощью мутагенеза на основе молекулярного моделирования (Онееп е! а1., Ргос. Наб. Асаб. 8сР 86, 10029-10033, 1989), публикация патентной заявки АО 94/04679). Желательным может быть увеличение или уменьшение аффинности антител по отношению к СИ40Ь, в зависимости от выбранного тканевого типа или конкретного планируемого способа лечения. Это может быть выполнено с использованием методики конструирования фагов (см., например, А1п!ег е1 а1., Апп. Ксу. 1ттипо1., 12, 433-455, 1994; и 8сЫег е! а1., 1 Мо1. Вю1., 255, 28-43, 1996, которые включены в качестве ссылок). Например, может иметь преимущество лечение пациента при постоянном уровне антител со сниженной аффинностью к СИ40Ь при полупрофилактическом режиме лечения. Аналогично антитела с повышенной аффинностью по отношению к СИ40Ь - могут иметь преимущества при кратковременных режимах лечения.

Субъекты

Субъектами, к которым могут быть применены способы лечения по настоящему изобретению, являются люди с болезнью иммунных комплексов. Эти заболевания характеризуются присутствием циркулирующих иммуноглобулинов и иммунных комплексов в крови. Один класс болезней иммунных комплексов называют сывороточными болезнями: они могут быть обусловлены иммунным ответом на внешний антиген, такой как инфекционный агент, лекарство, чужая антисыворотка или продукты крови.

- 5 006314

Болезнь иммунных комплексов также может встретиться, когда у пациента вырабатываются аутоантитела, которые являются антителами к компоненту собственных тканей пациента. Примерами таких аутоиммунных иммунокомплексных заболеваний являются СКВ, ревматоидный артрит, синдром Гудпасчера, гранулематоз Вегенера, микроскопический полиартериит, узелковый полиартериит, синдром Черджа-Штрауса и различные формы васкулита. Лечение нефрита, относящегося к связанным с иммунитетом состояниям, которые не попадают ни в одну из выше указанных категорий, также может быть проведено с применением способов по настоящему изобретению: состояния по этой группе включают геморрагическую сыпь Хеноха-Шенлайна, смешанную криоиммуноглобинемию, АЫСА-ассоциированный гломерулонефрит и моноклональные гаммапатии, такие как множественная миелома, доброкачественные моноклональные гаммапатии и макроглобинемия Уолденстрема.

Термин пациент принят для обозначения любого пациента, человека которому могут быть введены анти-СП40Ь соединения.

Способы введения

Соединения по настоящему изобретению могут быть введены любым способом, который является приемлемым по медицинским показаниям. Это могут быть парентеральные такие как внутривенные, внутрисосудистые, внутриартериальные, подкожные, внутримышечные, внутриопухолевые, внутрибрюшинные, внутрижелудочковые, внутриэпидуральные, или вводиться например, перорально, назально, офтальмологически, ректально или топически. Введение с отсроченным высвобождением также специально включено в настоящее изобретение, в частности, таким способом как депо-инъекции (инъекции соединений замедленного всасывания). Некоторые формы анти-СП40Ь соединений могут быть пригодны для перорального введения и могут быть приготовлены в виде суспензий или пилюль.

Дозы и частота введения

Количество и частота введения каждого конкретного соединения при лечении пациента с данной болезнью иммунных комплексов определяется по усмотрению лечащего врача и основывается на большом числе факторов. Основные дозы определяют исходя из доклинических и клинических испытаний, которые включают подробные эксперименты по определению позитивного и негативного влияния на данного пациента различных доз соединения. Даже после того, как такие рекомендации даны, врач часто может варьировать такие дозировки для различных пациентов, основываясь на различных соображениях, таких как возраст пациента, его общее состояние здоровья, вес, пол и наличие конкурирующего лечения с применением других фармацевтических средств. Определение оптимальной дозировки для каждого анти-СП40Ь соединения, применяемого для лечения волчаночного нефрита, является рутинной процедурой для специалистов в данной области фармацевтической и медицинской науки.

Различные режимы могут быть использованы для лечения волчанки или других болезней иммунных комплексов в соответствии с настоящим изобретением. В целом, частота введения должна быть определена лечащим врачом и может быть однократной или повторяющейся ежедневно, с интервалом в 2-6 дней, еженедельной, раз в 2 недели или ежемесячной.

В качестве примера выбора дозировок анти-СП40Ь соединений приведены следующие примеры стратегий введения моноклональных антител к СО40Ь. Параметры введения могут быть легко определены и для других типов анти-СП40Ь соединений. В целом, представляются однократные дозы от примерно 0,05 до примерно 50 мг/кг веса тела пациента, при том, что наиболее частыми должны быть дозы в пределах 1-20 мг/кг. Для острого лечения эффективная доза антител варьируется от примерно 1 мг/кг веса тела до примерно 20 мг/кг веса тела для введения ежедневно в течение 1-5 дней, предпочтительно путем внутривенного введения в виде болюсов. Сходные дозы и дозировки могут быть использованы в нагрузочной фазе в режиме нагрузка-поддержание, при том, что поддерживающая фаза включает внутривенное или внутримышечное введение антител дозами в пределах от примерно 0,1 мг/кг веса тела до примерно 20 мг/кг веса тела при лечении в течение любого периода от одной недели до 3 месяцев. Хроническое лечение также может быть проведено в поддерживающем режиме, когда антитела вводят внутривенно или внутримышечно дозами от примерно 0,1 мг/кг веса тела до примерно 20 мг/кг веса тела в течение периода, прерываемого интервалами от примерно одной недели до трех месяцев.

Антитела также могут быть введены дозами от примерно 0,2 мг/кг веса тела до примерно 10 мг/кг веса тела. Кроме того, хроническое лечение может быть сопровождено режимом перемежающихся болюсных внутривенных введений при дозах от примерно 1,0 мг/кг веса тела до примерно 100 мг/кг веса тела в любом варианте при интервале от одного до 6 месяцев между этапами лечения. Для всех случаев, кроме режима перемежающихся болюсных инъекций, введение может быть осуществлено перорально, через лёгкие, назально или подкожно.

Обычно лечение начинают с низких доз антител. Например, исходную дозу антител вводят пациенту путём, например, инъекции или инфузии. Такая исходная доза должна находится в пределах примерно 1,0-30 мг антитела в день для пациента, весящего 70 кг. Для повторных введений спустя несколько дней могут быть выбраны дозы для нескольких последующих дней, один раз в каждые 2-6 дней, один раз в неделю, каждые две или четыре недели или один раз в месяц, до тех пор, пока не будет выявлена желательная супрессия симптомов заболевания. Однако также могут быть применены и другие режимы дозировок. Когда симптомы будут приведены к желаемому уровню, лечение может быть завершено. Однако

- 6 006314 для пациентов может оказаться необходимым перемежающееся лечение в течение длительного времени с целью подавления рецидивов симптомов заболевания.

В соответствии с альтернативным вариантом лечения волчанки по настоящему изобретению, эффективность антител может быть повышена путём серийного введения или сочетания с традиционными противоволчаночными лекарственными препаратами, такими как, например, салицилаты, кортикостероиды или иммунодепрессанты. С другой стороны, антитела могут быть конъюгированы со стандартным агентом. Как преимущество, это позволяет вводить стандартный агент в количестве меньше стандартных доз, например, менее чем 50% от стандартной дозы, применяемой тогда, когда это средство используется как единственное. Соответственно, может быть предотвращено возникновение многих побочных эффектов, обусловливаемых этим стандартным средством.

Комбинированное лечение волчанки согласно настоящему изобретению включает использование антител к СО40Ь вместе со средствами, мишенями для которых являются В-клетки, такими как антитела к ί.Ό19. СЭ28 или СЭ20 (неконъюгированные или меченные изотопами), антагонисты 1Ь-14, ЫР394 (блокатор рецепторов Ьа 1о11а Рйатш.), Ш-1116 (малая молекула Такеба) и моноклональные антитела к идиотипам иммуноглобулина. С другой стороны, комбинированные варианты могут включать средства, мишенями которых является Т/В-клеточное взаимодействие, такие как СТЬЛ41д, антагонисты 1Ь-2, антагонисты 1Ь-4, антагонисты ТЬ-6, антагонисты рецепторов, моноклональные антитела к В7, ΤΝΡ, антагонисты ЬЕА1/1САМ, антагонисты УБА4/УСАМ, конъюгаты брекинара и токсина 1Ь-2 (например, ΏΑΒ), преднизон, циклофосфамид и другие иммуносупрессоры. Комбинированные варианты также могут включать средства, мишенями которых являются Т-клетки, такие как антагонисты СЭ4, антагонисты С1)2 и Ш-12.

Комбинированное лечение пациентов с неволчаночными болезнями иммунных комплексов может включать введение анти-СО40Ь соединения, также как и средства, которое обычно вводят при болезнях иммунных комплексов.

Если улучшение состояния пациента достигается, необходимой становится поддерживающая доза анти-СП40Ь антител как самих по себе, так и в сочетании со стандартными противоволчаночными средствами. Соответственно, доза или частота введения, или и то и другое могут быть сокращены в зависимости от проявляемых симптомов до уровня, при котором сохраняется достигнутое состояние. Когда же симптомы снижаются до желаемого уровня, лечение может быть прекращено. В других случаях, которые определяются лечащим врачом пациента, может быть проведено повторное лечение, например, с интервалами в четыре недели или больше. Однако пациенты могут нуждаться в перемежающемся лечении в течение длительного времени с целью предотвращения рецидивов симптомов заболевания.

Приготовление фармацевтических препаратов

Анти-СП40Ь соединение, применяемое в способах по настоящему изобретению, вводят в фармацевтически эффективном количестве, которое является количеством, которое обусловливает положительный лечебный эффект в отношении почек пациента с болезнью иммунных комплексов, в частности, СКВ. Положительный лечебный эффект должен включать предотвращение ухудшения или обусловливать улучшение функций почек или здоровья в целом. Функции почек и состояние здоровья могут быть проконтролированы с помощью одного или большего числа лабораторных тестов, с помощью которых измеряют содержание относящихся к делу соединений в крови или моче, другие параметры мочи или скорость клиренса различных соединений из крови в мочу. Параметры, определяемые в этих тестах, как сами по себе, так и в сочетаниях, могут быть использованы врачом для оценки функций или повреждений почек. Примерами таких параметров являются концентрация мочевины, креатинина или белка в крови; концентрация в моче белка или различных клеток крови, таких как эритроциты или лейкоциты; удельный вес мочи; общее количество мочи; скорость клиренса инулина, креатинина, мочевины или раминогиппуровой кислоты; и наличие повышенного кровяного давления или отёчности. Положительные лечебные эффекты также должны включать уменьшение аутоантител, таких как антитела к дцДНК в сыворотке у пациентов с волчанкой.

Анти-СП40Ь соединение по настоящему изобретению вводят пациенту в составе фармацевтически приемлемой композиции, которая может включать фармацевтически приемлемый носитель. Такой носитель является относительно нетоксичным и безвредным для пациента в концентрациях, соответствующих эффективной активности анти-СО40Е соединения или других активных компонентов, т.е. так, чтобы любые побочные эффекты, приписываемые носителю, не помешали бы проявлению положительного эффекта активных компонентов композиции. Композиция может включать другие совместимые соединения: по использованию в настоящем тексте совместимость означает то, что компоненты фармацевтической композиции могут быть смешаны с анти-СП40Ь соединением и друг с другом таким образом, чтобы не происходило какого-либо взаимодействия, способного существенно снизить терапевтическую эффективность фармацевтического препарата. Аэрозольные назальные препараты включают очищенные водные растворы активного соединения с консервирующими компонентами и изотоническими средствами. Такие готовые формы предпочтительно доводят до параметров рН и изотонического состояния, соответствующих таковым слизистых перегородок носовой полости. Готовые формы по настоящему изобретению, предназначенные для перорального применения, могут быть представлены в виде дискретных

- 7 006314 единиц, таких как капсулы, крахмальные облатки, таблетки, пилюли или таблетки-лепёшки, каждая из которых содержит определённое количество анти-СО40Ь соединения, в виде порошка или гранул, липосом или суспензии в водной фазе или неводной жидкости, такой как сироп, эликсир, эмульсия или однократная жидкая доза.

Композиции по настоящему изобретению могут быть представлены в контейнерах, пригодных для обеспечения стерильности, сохранения активности активного компонента во время распределения и хранения и обеспечения удобного и эффективного доведения композиции для введения пациенту. Для препаратов, предназначенных для инъецирования анти-СО40Ь соединения, композиция может быть приготовлена в закрытом пузырьке, пригодном для изъятия содержимого с помощью иглы и шприца. Пузырек может быть пригоден как для однократного, так и для многократного использования. Также композиция может быть представлена в виде собственно шприца. В некоторых вариантах содержимое может быть приготовлено в виде жидкого препарата, в то время как в других вариантах оно может быть приготовлено в сухом или лиофилизированном состоянии, которые включают этап восстановления в жидкое состояние с использованием стандартного или прилагаемого растворителя. В случаях, когда соединение приготавливается в виде жидкости для внутривенного введения, оно должно быть помещено в стерильную ёмкость или контейнер, пригодные для представления в приспособления и катетеры для внутривенного введения. В вариантах, когда анти-СП40Ь соединение вводится перорально в виде таблеток или пилюль, соединение может быть приготовлено в бутылках (пузырьках) со снимаемой крышкой. Контейнеры могут быть снабжены этикетками с информацией, такой как тип соединения, название производителя или дистрибьютора, показания, рекомендуемые дозы, инструкции по хранению или инструкции к применению.

Использование анти-СП40Ь соединений для лечения волчаночного нефрита у субъекта, не являющегося человеком

Проведено тестирование влияния хомячковых моноклональных антител МКТ к мышиному СП40Ь на течение нефрита у самок мышей линии (§νκ х ΝΖΒ)Ρ, в ряде экспериментов, описанных ниже. Контрольным животным были инъецированы либо поликлональные антитела сирийского хомячка, либо моноклональные антитела На4/8 армянского хомячка к КЬН. Уровни протеинурии были определены от следовых до 4 баллов. Уровень в 1 балл соответствует 30 мг белка в 1 дл мочи, уровень в 2 балла - 100 мг/дл, уровень в 3 балла - 300 мг/дл, и уровень в 4 балла - свыше 2000 мг/дл. Уровень в 2 балла рассматривается как индикатор нефрита средней тяжести, а уровни в 2,5 и выше соответствуют тяжёлой форме нефрита.

При отсутствии лечения или при введении контрольным животным неспецифических хомячковых иммуноглобулинов мыши в норме погибали до достижения возраста 12 месяцев. При том, что уровень протеинурии у не подвергавшихся лечению животных варьировался, большинство из них проявляли от слабой до средней протеинурию в возрасте более 3 месяцев; уровень протеинурии имеет тенденцию к увеличению с возрастом. После 5 месяцев жизни все контрольные животные демонстрировали выявляемое количество антител к дцДНК, и у многих из них выявлялись антитела к оцДНК; эти параметры контрастируют с полным отсутствием определяемых уровней этих антител у мышей в норме, таких как самки линии 8\νΚ являющейся родительской для мышей (8\УК х ΝΖΒ)Ρ₁.

Эксперимент II: лечение начинали с возраста 4 месяца (фиг. 1 и 2).

Лечение с использованием МК1 было начато тогда, когда возраст мышей достиг 4 месяцев. МК1 вводили внутрибрюшинно подвергающимся лечению животным из расчёта 500 мкг на 1 животное один раз в возрасте 4 месяцев, один раз в возрасте 7 месяцев и один раз в возрасте 9 месяцев с последующими ежемесячными инъекциями. После 4 месяцев 4 из 5 контрольных мышей погибли, в то время как четыре из шести подвергавшихся лечению животных были живы. Три из этих четырёх выживших на первой стадии эксперимента мыши погибли в возрасте 12, 13 и 13,5 месяцев. Еще одна особь была жива, и на момент подготовки описания её возраст составил 15 месяцев, что является исключительно высокой продолжительностью жизни для данной линии мышей. Что весьма интересно, выжившее животное (мышь ΙΙ:ΌΝ по обозначению на фиг. 2) имела нефрит средней степени тяжести (уровень протеинурии 2+) в возрасте от 8 до 13 месяцев, а в следующие два месяца протеинурия постепенно снизилась до следовых уровней. Таким образом, это явилось первым подтверждением функциональной реверсии нефрита у мыши из данной линии.

Эксперимент V: лечение начинали с возраста 4,5 месяцев (фиг. 3 и 4). Лечение с использованием МК1 было начато по достижении мышами возраста 4,5 месяцев. МК1 вводили подвергающимся лечению животным внутрибрюшинно из расчёта 500 мкг на 1 животное один раз в возрасте 4,5 месяцев и затем ежемесячно внутрибрюшинными инъекциями по 500 мкг. Спустя 4,5 месяцев погибли 6 из 7 контрольных особей, в то время как шесть из семи подвергавшихся лечению мышей были живы. После 8 месяцев лечения все контрольные особи погибли, а в группе подвергавшихся лечению мышей погибли только три из семи особей. Как показано на фиг. 4, у четырёх из семи мышей, которым вводили МК1, наблюдается реверсия нефрита, проявляющаяся в снижении уровня протеинурии. Эти животные были живы по крайней мере до возраста 12,5 месяцев.

- 8 006314

Эксперимент VII: Лечение начинали с возраста 5,5 месяцев (фиг. 5 и 6).

Лечение с использованием МК1 было начато тогда, когда мыши достигли возраста 5,5 месяцев. МК1 вводили подвергавшимся лечению мышам внутрибрюшинно из расчёта 500 мкг на 1 животное по одному разу в неделю в течение 6 недель, а затем ежемесячно. После 5 месяцев лечения, т.е. в возрасте 10,5 месяцев, 6 из 7 контрольных особей погибли; все 7 подвергавшихся лечению мышей были живы по крайней мере до возраста 12 месяцев. Следующие параметры были определены у животных, которые были живы в возрасте 8,5 месяцев, т.е. после 3,5 месяцев лечения.

антитела к оцДНК Антитела к дцДНК протейнурия контроль 2,4 0 4

8,8 6,3 4

6,3 10,1 4

Среднее	(стан-	5, 8	(2,6)	5,4 (4,1)	4 (0)
дартное	откло-
нение)
МК.1		2,7		0	1
		2, 0		0	1,5
		2,0		1,5	3
		0		0	2
		2,7		0	1
		0		0	2
		3, 5		0	1,5
Среднее	(стан-	1,8	(1,2)	0,2(0,5)	1,7 ( )
дартное	откло-
нение)

Эксперимент X: менее интенсивное лечение, начиная с возраста 5,5 месяцев (фиг. 7 и 8).

Лечение с использованием МК.1 было начато по достижении мышами возраста 5,5 месяцев. Антитела МК1 вводили внутрибрюшинно подвергавшимся лечению животным из расчёта 500 мкг на 1 животное еженедельно в течение четырёх недель с последующими ежемесячными внутрибрюшинными инъекциями по 200 мкг. Из 16 включённых в этот эксперимент мышей (по 8 в контроле и в группе, подвергавшейся лечению) погибла только одна в возрасте 7,5 месяцев, входившая в контрольную группу: на момент подготовки текста описания изобретения все мыши достигли возраста 8,5 месяцев. Как показано на фиг. 8, у семи из восьми контрольных животных происходит постепенное возрастание протеинурии, составившей в среднем +3,4 в среднем по семи выжившим особям. У семи мышей из подвергавшейся лечению МК1 группы поддерживался низкий уровень протеинурии, +2 в среднем для всех 8 животных этой группы. Как показано на фиг. 1, отсутствие выявляемых антител к дцДНК отмечено у шести подвергавшихся лечению животных и только у одной контрольной особи.

Эксперимент VI: лечение, начиная с возраста 7 месяцев (фиг. 9 и 10). Лечение с использованием МК1 было начато по достижении мышами возраста семи месяцев. МК1 вводили внутрибрюшинно подвергавшимся лечению мышам из расчёта 500 мкг на 1 животное один раз в неделю в течение шести недель, а затем проводили ежемесячные внутрибрюшинные инъекции по 500 мкг. К возрасту 10 месяцев погибли все 4 контрольные особи. При том, что 2 подвергавшиеся лечению особи погибли в возрасте 11 месяцев, а третья - в возрасте 13 месяцев, одна из четырёх подвергавшихся лечению мышей была жива в возрасте 14 месяцев (т.е. на момент подготовки данного текста), т.е. спустя 7 месяцев лечения. Выжившее подвергавшееся лечению животное (обозначенное VI: ЕК) имеет текущий уровень протеинурии 1 и выявляемое количество антител к оцДНК и дцДНК.

Эти эксперименты показывают, что лечение мышей (ВАК х ΝΖΒ)Ει с использованием моноклональных антител к СО401, увеличивает продолжительность жизни по сравнению с контрольными животными и замедляет развитие нефрита, что определяется по уровню протеинурии. У некоторых животных наблюдается реверсия нефрита, на что указывает снижение уровня протеинурии. У 11 из 32 подвергавшихся лечению животных отмечено снижение содержание белка в моче в ответ на лечение с использованием моноклональных антител к СО401,; такого снижения не обнаружено ни у одного из контрольных животных. Снижение показателя ΒϋΝ (содержание мочевинного азота в сыворотке крови) обнаружено у 3 мышей из 24 особей, у которых такой показатель был определён: это ни разу не было выявлено у контрольных животных. Кроме того, лечение с использованием МК1 приводило к снижению концентрации

- 9 006314 аутоантител к оцДНК и дцДНК в сыворотке, которые в норме продуцируются у не подвергавшихся лечению мышей того же типа.

Хотя представляемое изобретение описано в подробностях с использованием иллюстраций и примеров, для лучшего его понимания, специалистам в данной области техники должно быть ясно, что могут быть произведены определённые изменения и модификации, которые ограничиваются лишь объемом прилагаемой формулы изобретения.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Способ ингибирования прогрессивного развития или стабилизации волчаночного нефрита у человека с уровнем протеинурии до начала лечения свыше 150 мг/л и суммарным выделением белка с мочой более 150 мг в день, заключающийся в том, что пациенту вводят терапевтически эффективное количество анти-СВ40Ь соединения в дозе от 0,05 до 50 мг/кг веса тела пациента.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что уровень протеинурии у человека до начала лечения составляет свыше 300 мг/л.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что анти-СО40Ь соединение представляет собой антитело к СО40Б или его фрагмент.

4. Способ по п.3, отличающийся тем, что указанное антитело представляет собой моноклональное антитело.

5. Способ по п.4, отличающийся тем, что моноклональное антитело представляет собой антитело 5с8, продуцируемое гибридомой АТСС № НВ-10916.

6. Способ по п.5, отличающийся тем, что указанное антитело является гуманизированным.

7. Способ ингибирования прогрессивного развития или стабилизации волчаночного нефрита у человека с пересаженной почкой и уровнем протеинурии до начала лечения свыше 150 мг/л и суммарным выделением белка с мочой более 150 мг в день, заключающийся в том, что пациенту вводят терапевтически эффективное количество анти-СО40Б соединения в дозе от 0,05 до 50 мг/кг веса тела пациента.

8. Способ по п.7, отличающийся тем, что уровень протеинурии у человека до начала лечения составляет свыше 300 мг/л.

9. Способ по п.8, отличающийся тем, что анти-СО40Ь соединение представляет собой антитело к СО40Б или его фрагмент.

10. Способ по п.9, отличающийся тем, что указанное антитело представляет собой моноклональное антитело.

11. Способ по п.10, отличающийся тем, что моноклональное антитело представляет собой антитело 5с8, продуцируемое гибридомой АТСС № НВ-10916.

12. Способ по п.11, отличающийся тем, что указанное антитело является гуманизированным.

4-11-96 5-10-96 11 ри МВ1, ₍ мкг/мл анти-МК1, мкг/мп анти-оцДНК, мкг/мл , анти-ΜΚΐ; мкг/мл ри ΜΗ1, мкг/мл анти-МК1, мкг/кл ' анти-оиДНК, мкг/мл / анти-дцднк, мкг/мл АА 2.5 Νϋ Νϋ 4.6 (0.26) 0 3 N0 Νϋ 1.7 (0.12) 0 АЦ 4 Νϋ Νϋ 1.2 (0.05) 0 4 ΝΟ N0 6.5 (2.3) 5.7(0.98) ΑΝ 4 ЕГО Νϋ 2.8 (0.08) 1.24 (0.06) - ВА 4 Νϋ N0 0 0 - - - - ΒΝ 3 Νϋ ΝΟ 8.8(0.04) · 0.47 (0.05) 4+ Νϋ Νϋ ’ >25.5(1.6) 13.8(0.71) СЬ 2 0 6.5 (0.3) 5.9 (0.36) 6.5 (0.84) 2 0 21.1 (2.2) >67.5(1.97) >39.14(1.82) СЬА 2 15.9 (2.1) 0 0 0 3 0.9 (0.1) 0 1.5(0.7) 0 ϋΑ 1.5 25.7 (2.5) 0 18.1 (0.7) 9.5 (0.9) 2 4.9(1) 0 Νϋ 1.4(0.1) ΟΝ 1 36.1 (1.6) 0 0 0 2 1.8(0.2) 0 1.5 (0.3) 0 '. ΟΝ 2 0 0.6 (0.04) 0 0 - - Νϋ : Νΰ СА 3 0 1.4 (0.13) 0 0 • Νϋ Νϋ 10-2-96 , 11-15-96