CN1572325A - 用抗cd40l化合物治疗狼疮性肾炎 - Google Patents

Abstract

本发明提供了用抗CD40L化合物治疗与免疫综合性疾病相关的肾炎的方法。在一个实施方案中，将抗CD40L化合物施用于已接受了肾脏同种移植物的免疫综合性疾病患者，以抑制移植肾脏内免疫综合性肾小球肾炎的发展。

Description

用抗CD40L化合物治疗狼疮性肾炎

发明领域

本发明涉及对患者施用抗CD40L化合物，以治疗免疫综合性肾小球肾炎，更具体地说是狼疮性肾炎。

本发明涉及对免疫综合性肾小球肾炎进行治疗的方法和组合物。更具体地说，本发明涉及可与B细胞和多种其它细胞之CD40表面分子的配体结合的化合物单独或与其它药剂结合用于治疗肾炎相关的抗体介导性疾病(如狼疮或药物诱导的血清病)、或降低这类疾病的进程、严重性、症状或影响。根据一个实施方案，本发明应用了单克隆抗体5c8。

发明背景

免疫综合性疾病是由免疫复合物在某些组织、包括肾小球和血管壁内的沉积所介导的。这些复合物是抗原与抗体的聚集物。当机体产生了针对其自身组织成分的抗体时，抗原可以是自身抗原，或者也可以是外源抗原，如感染性因子或药物。在每一种情形下，免疫复合物在血管内的沉积物都会导致皮疹、心包炎和血管炎。肾小球内的免疫复合物沉积物会影响肾脏的过滤能力，极端情形下会导致肾衰竭和死亡。

系统性红斑狼疮(SLE)是一种危及生命的自身免疫疾病，其特征在于会产生针对各种组织(并且通常是DNA)的自身抗体。在美国，有近140,000人患有SLE，在欧洲有105,000人，其中主要是育龄妇女。

SLE的特征在于影响结缔组织(包括皮肤、关节和器官系统)的炎症。受影响的器官常常包括肾脏、心脏、肺和中枢神经系统。SLE的临床表现包括一般性病症、疼痛、出疹、可觉察的功能障碍、血栓形成、贫血、胸膜炎、胃肠功能障碍以及怀孕妇女的流产。大多数患者中，狼疮相关性免疫球蛋白和免疫复合物沉积在肾小球内，导致肾功能降低。在占狼疮患者总人数70％的中度至重度SLE患者中，一半发展成临床性肾炎，这种疾病的特征在于尿液中存在蛋白质。虽然其中一些患者可以用免疫抑制性和/或细胞毒性药物成功地进行治疗，但这些药物的临床效果可能比较短暂，这种药物治疗可能会导致不希望的副作用，并且目前可用的这些药物治疗对许多患者没有什么作用。这些患者中有明显多人会发展成肾衰竭，为了生存，必须进行重复多次透析，或进行肾移植。而移植物本身寿命可能也不会太长，因为新肾脏也易受到SLE患者血液中始终存在的自身抗体的损伤。SLE患者开始透析的居中年龄是35岁。最终许多SLE患者直接或间接死于肾炎。

治疗SLE所用方法可分成多类：水杨酸盐类和非类固醇性抗炎剂，类固醇性抗炎剂(系统性皮质类固醇)，免疫抑制剂或细胞毒性剂、抗疟药、透析、移植、淋巴辐射或血浆提取法。其中大部分是作为症状性药剂，旨在减轻炎症，目标是疾病的症状，在用药时和整个期间产生效果。症状性药剂的实例有水杨酸、糖皮质类固醇和非类固醇性抗炎剂，如消炎痛。其它治疗方法作用于该疾病的病理发生，以抑制自身免疫反应，只有在用药开始几周后才产生效果，然后在治疗停止后仍能维持一段时间的疗效。这种药剂包括免疫抑制剂，如化疗剂硫唑嘌呤和环磷酰胺，以及可的松类，如强的松。

目前用来治疗SLE的常规免疫抑制剂常常会产生副作用，如使患者对感染更为敏感，这样使得这些药剂无法长期使用。现已开始开发使用靶向该疾病病理发生某些特定步骤的选择性免疫抑制剂，试图降低SLE患者体内免疫球蛋白浓度，或使其正常化；预期这对疾病的肾脏指数有有益效果。产生抗体的必要反应之一是B细胞上的CD40与活化T细胞上的CD40配体(CD40L)之间的相互作用，这是B细胞生长和随后产生抗体所需的一个步骤。CD40L在本领域也称为“gp39”和“T细胞-B细胞活化分子(T-BAM)”。本文中将CD40L、gp39和T-BAM视作同一种分子。例如，PCT公开WO93/09812(1993年5月27)公开了一种命名为5c8的鼠单克隆抗体，它特异结合活化T细胞表面的T-BAM，从而抑制了T细胞对B细胞的激活。

Durie等(1993)261，科学，1328-1330公开的一项小鼠模型体系研究考察了施用抗CD40L单克隆抗体MR1对慢性免疫系统紊乱、胶原蛋白诱导的关节炎的预防作用。这种小鼠模型体系包括用鸡II型胶原蛋白(CII)免疫小鼠从而诱发关节炎、再三周后用额外的CII进行激发。只在此激发后观察到疾病症状。Durie等人在初次免疫小鼠一周后用MR1处理小鼠，此后每4天给以MR1继续处理。Durie等报导，MR1疗法能够抑制所有处理小鼠的临床疾病(关节炎)，并得出结论：对CD40L进行阻断，由于影响了自身免疫疾病的发作，因而具有很好的治疗效果。

在NZB杂交幼鼠中，两个研究小组用抗CD40L单克隆抗体(mAb)阻断了CD40-CD40L相互作用，并检查了对小鼠中肾炎后续发展的影响。(Mohan等，免疫学杂志，154：1470-1480，1995；Early等，免疫学杂志，157：3159-3164，1996)。新西兰黑(NZB)小鼠与新西兰白(NZW)小鼠或正常SWR小鼠杂交的雌性后代[分别称作(NZB×NZW)F1和(SWR×NZB)F1]出现的症状在许多方面与人类中的SLE比较相似(Steinberg等，国际医学年鉴(Ann.Int.Med.)115：548，1991；Wofsy和Seaman，实验医学杂志，161：378，1995)。随着长大，每一杂交的雌性F1小鼠出现了异常血清自身抗体和肾小球肾炎。

Mohan等人(出处同前)的研究中，用250mg MR1处理雌性(SWR×NZB)F1幼鼠，给药三次，给药方式为每隔一天对三月龄的小鼠给药，共三天。在动物患肾炎(由动物连续两周的蛋白尿水平至少为300μg/dl可确定)后处死动物。未处理动物在6月龄时开始出现肾炎，其中60％在10月龄之前患肾炎。第一只MR1处理动物只在9月龄时开始出现肾炎，其中仅40％的处理动物在研究结束时的12月龄时显示患有肾炎。这种疗法也与抗单链DNA(抗ssDNA)和抗双链DNA(抗dsDNA)自身抗体血清水平的长期降低有关：未治疗的或MR1治疗4个月后的7月龄动物中，抗ssDNA中值分别为4.5U/ml或0.6U/ml，抗dsDNA中值分别为2.2U/ml或0.4U/ml。这种疗法对总IgG血清水平没有影响。

在Early等(出处同前)的研究中，对雌性(NZB×NZW)F1小鼠用仓鼠抗muCD40L mAb MR1进行处理(Noelle等，美国国家科学院学报，89：6550，1992)，给药方式为在4-10月龄之间，每周两次以基本剂量200mg MR1腹膜内给药。处理开始于小鼠发展成重度肾炎的年龄之前，重度肾炎可由至少500mg/dl的显著量蛋白尿证实。(10只发展严重蛋白尿症的对照小鼠中，最早发展蛋白尿症的小鼠是在4.5月龄时(Early等，出处同前，第3161页))。

MR1疗法能显著抑制处理动物内的肾炎发展，并延长它们的寿命：一半未处理F1小鼠在6月龄之前发展肾炎，到10月龄时全部未处理F1小鼠都死亡，而MR1处理动物中，当MR1处理结束时，不到一半的处理动物具有肾炎，仅35％在10月龄之前死亡。MR1疗法也能使得抗DNA自身抗体滴度在治疗开始之后稳定数月，而未处理对照在同一时期的抗ssDNA抗体滴度升高，水平要高得多。

虽然这些研究的结果颇有知识性，但对于患有自发SLE的患者进行类似治疗，它们的相关性很有限，原因如下。首先，上述研究中，小鼠在蛋白尿症明显之前用抗CD40L mAb进行处理。因此，虽然研究结果暗示在症状性疾病出现之前开始治疗时，抗CD40L疗法有可能抑制肾炎的发展，但结果并未反映出在患者已发展了症状性肾炎时的临床相关环境下会出现什么情况。此外，Early等所用的模型-(NZB×NZW)F1小鼠的肾炎病理性发生机理与人SLE患者的发生机理之间的相似性可能不足以预知治疗性干预的结果。例如，(NZB×NZW)F1小鼠具有比较高的逆转录病毒蛋白血液水平，人们认为这种蛋白质与血清自身抗体一起引起了动物的肾炎。由于绝大多数人SLE患者在其血液中都没有逆转录病毒蛋白，而抗CD40L化合物对逆转录病毒水平的影响也未可知，因此，从(NZB×NZW)F1小鼠内的治疗性干预结果并不能预知抗CD40L化合物对自身抗体相关性人狼疮性肾炎的效果。

发明简述

本发明提供了一种通过给患者施用治疗有效量的抗CD40L化合物，对免疫综合性疾病或症状性SLE患者的肾炎进程进行治疗、逆转、稳定或抑制的方法。“症状性SLE”是指患者具备下述情况之一或多种；蛋白尿水平超过150mg/L；尿蛋白总水平超过150mg/天；或者抗ds DNA抗体的血清水平比正常人水平要高。蛋白尿水平超过300mg/L常常指示肾炎比较严重。

抗CD40L化合物可以是能与位于CD40L表达细胞(例如活化T细胞)表面的CD40L结合的任何化合物。在一个实施方案中，该化合物是一种抗CD40L抗体，优选是一种单克隆抗体。所述单克隆抗体可以是5c8(ATCC保藏号HB10916)。

可以将抗CD40L化合物制成治疗用组合物，其中含有治疗有效量的抗CD40L化合物和一种药学可接受的载体。这种治疗用组合物还可以包含另一种治疗上有效的化合物。

本发明还提供了改善免疫综合性疾病患者肾功能的一种方法，包括给患者施用治疗有效量的抗CD40L化合物，然后测量患者尿液中的蛋白质水平，这一水平比在施用抗CD40L化合物之前测得的尿蛋白水平要低。

本发明还提供了一种包含治疗组合物的医疗产品；该组合物中包括治疗有效量的抗CD40L化合物和一种药学可接受载体，它们无菌包装在容器中，并提供了用于治疗狼疮性肾炎或其它免疫综合性疾病的说明。在这种组合物中，该抗CD40L化合物可以是单克隆抗体，如5c8。

另一方面，本发明提供了抑制免疫综合性疾病患者体内肾脏同种移植物的肾炎发展或进程的方法。在该方法中给患者施用治疗有效量的抗CD40L化合物。对于任何免疫综合性疾病(包括SLE和血清病)患者，该方法可能有用。可以在移植前、移植时或移植后，在将同种移植物移植到患者体内后周期性地或按照上述给药方案中的多种方式，将抗CD40L化合物施用于患者。

附图简述

图1是实验II中对对照和实验组(SWR×NZB)F1小鼠血液和尿液测量的几种特性随时间的变化图。在小鼠4月龄时，以500μg/动物的剂量腹膜内施用抗CD40L mAb MR1一次，7月龄时再给药一次，9月龄时又给药一次，然后以一个月的间隔给药。图中上面5行(标有AR-BN)中的每一行包含得自单只对照动物的数据，下面6行(标有CL-CR)中的每一行包含得自单只实验动物的数据。于1996年2月对4月龄动物开始这项实验。双竖线分隔了4组数据，每一数据组给出了在列于各数据之上的日期采集的尿样和血样中测得的数值。蛋白尿症(PU)水平定为微量到4级。1级对应30mg尿白蛋白/dl白蛋白，2级对应100mg/dl，3级对应300mg/dl，4级对应2000mg/dl以上。抗MR1抗体水平(标有“抗MR1”栏给出)、抗ssDNA抗体水平以及抗dsDNA抗体水平以μg/ml血液表示。合适的情况下，以几个样品的平均值和标准误差，采用平均值(标准误差)形式表示数值。破折号表示通常由于动物已经死亡而未采集样品。ND代表“未作”。

图2是实验II动物随时间的蛋白尿症测量值。第一栏给出动物号(同图1)。每栏上标样品采集日期。NC代表“未采集”。

图3是实验V中对照和未处理小鼠(4.5月龄开始处理)的血液和尿特性与时间的关系图。于小鼠4.5月龄时，以500μg/动物的剂量腹膜内施用MR1于处理组动物一次，然后每月腹膜内注射500μg一次。表中上面7行(标有AR-BLR)中的每一行包含得自单只对照动物的数据，下面7行(标有CR-CLR)中的每一行包含得自单只处理动物的数据。于1996年5月对4.5月龄动物开始这项实验。图的其它描述与图1相同。

图4是实验V动物的蛋白尿测量值的时间变化表。动物号与图3所述相同。图的其它描述与图2相同。

图5是实验VII中对照和未处理小鼠(5.5月龄时开始处理)的血液和尿特性与时间的关系图。以500μg/动物的剂量，每周对处理动物腹膜内施用MR1一次，持续6周，随后每月腹膜内注射500μg。图中上面3行(标有AN-BL)中的每一行包含得自单只对照动物的数据(如图6中提到的那样，一些对照动物在采集图5数据前即已死亡)，下面7行(标有CR-DN)中的每一行包含得自单只处理动物的数据。于1996年6月对5.5月龄动物开始这项实验。图的其它描述与图1相同。

图6是实验VII动物的蛋白尿测量值的时间变化图。图中上面7行(标有AR-BN)中的每一行包含得自单只对照动物的数据，下面7行(标有CR-DN)中的每一行包含得自单只处理动物的数据。图的其它描述与图2相同。

图7是实验X中对照和未处理小鼠(5.5月龄时开始处理)的血液和尿特性与时间的关系图。以500μg/动物的剂量，每周对处理动物腹膜内施用MR1一次，持续4周，随后每月腹膜内注射200μg。图中上面8行(标有AR-BLR)中的每一行包含得自单只对照动物的数据，下面8行(标有CR-DLR)中的每一行包含得自单只处理动物的数据。于1996年10月对5.5月龄动物开始这项实验。图的其它描述与图1相同。

图8是实验X中动物的蛋白尿测量值的时间变化图。第一栏给出与图7相同的动物号。其它描述与图2相同。

图9是实验VI中对照和未处理小鼠(7月龄时开始处理)的血液和尿特性与时间的关系图。以500μg/动物的剂量，每周对处理动物腹膜内施用MR1一次，持续6周，随后每月腹膜内注射500μg。图中下面4行(标有DN-EN)中的每一行包含得自每只处理动物的数据。采集该表中第一个数据时，全部对照动物即已死亡(如图10所示)。于1996年6月对7月龄动物开始这项实验。图的其它描述与图1相同。

图10是实验VI中动物的蛋白尿测量值的时间变化图。图中上面4行(标有AR-CN)中的每一行包含得自单只对照动物的数据，下面4行(标有DN-EN)中的每一行包含得自单只处理动物的数据。图的其它描述与图2相同。

发明详述

本发明方法包括对免疫综合性疾病患者或者已发展的SLE患者进行治疗、预防、逆转或稳定肾炎。对这种患者用能阻断位于T细胞上的CD40L与B细胞上的CD40间相互作用的化合物进行处理，人们认为这样可以抑制病原性抗体的产生，由此降低与免疫复合物相关性发展和恶化肾炎相关的病原性自身抗体水平。

化合物

可用于本发明方法的治疗用化合物包括能阻断位于B细胞上的CD40与活化T细胞表面上表达的CD40L间相互作用的任何化合物。具体涉及的抗CD40L化合物包括多克隆抗体和单克隆抗体(mAb)，以及抗体衍生物，例如嵌合分子、人源化分子、效应子作用弱化了的分子、双特异性分子和抗体的偶联物。在一个优选实施方案中，抗体是美国专利5474771中描述的5c8(该专利的说明书此处引作参考文献)。已知抗5c8抗原的其它抗体包括抗体ImxM90、ImxM91、ImxM92(得自Immunex)，可从Ancell购买的抗CD40L mAb(克隆24-31，目录号353-020，Bayport，MN)，可从Genzyme购买的抗CD40LmAb(Cambridge，MA，目录号80-3703-01)。还可以买到的是PharMingen的一种抗CD40L mAb(San Diego，目录号33580D)。已生产和鉴定了多种其它抗CD40L抗体(参见例如Bristol-Myers Squibb的WO96/23071，该专利申请的说明书此处引作参考文献)。

本发明还包括其它类型的抗CD40L分子，例如完整Fab片段、F(ab’)2化合物、VH区、FV区、单链抗体(参见例如WO96/23071)、多肽、多肽的融合构建体、CD40的融合体(例如此处引作参考文献的Hollenbaugh等，免疫方法杂志188：1-7，1995文中的CD40Ig)，以及一些小分子化合物(如小亚肽化合物或非肽化合物)，它们都能够阻断CD40-CD40L相互作用。专利申请PCT/US96/10664(1996年6月21日递交申请，该专利申请的说明书此处引作参考文献)提供了小分子的设计、筛选和优化步骤。

还可以用标准重组DNA技术制备各种形式的抗体(Winter和Milstein，自然349：293-99，1991)。例如，可以构建嵌合抗体，在这种抗体中来自动物抗体的抗原结合区与人恒定区连接在一起(一种来源于非人哺乳动物的抗体，其中已通过重组DNA技术将重链的全部或部分铰链区和恒定区和/或轻链的恒定区用人免疫球蛋白轻链或重链上的相应区取代)(参见例如Cabilly等的美国国家专利4816567；Morrison等，美国国家科学院学报81：6851-55，1984)。嵌合抗体用于人临床治疗中时能减少动物抗体引起的免疫原性应答。

另外，可以合成重组的人源化抗体。人源化抗体是最初来源于非人哺乳动物的抗体，其中已通过重组DNA技术用人免疫球蛋白轻或重链相应区域的氨基酸取代了抗原结合所不必需的部分或全部氨基酸(主要由人IgG序列组成的嵌合体，其中插入了特异抗原结合所需区域)(参见例如PCT专利申请WO94/04679)。用所需抗原免疫动物，分离相应的抗体，取出可变区序列中为特异抗原结合所需的部分。然后将动物源的抗原结合区克隆到已缺失了抗原结合区的人抗体基因中的适当位置。人源化抗体使在人抗体中使用异源(种间)序列达到最小程度，更不太可能引起处理对象的免疫反应。

也能用于本发明方法和组合物中的是灵长动物抗体或灵长动物源化抗体。

抗体片段和单价抗体也可用于本发明方法和组合物。单价抗体包含与另一重链F_C(或茎)区结合的重链/轻链二聚体。“Fab”区指的是与包含重链Y形部分的序列以及全部轻链大致相同或相似的部分，它们一起(以聚合体形式)显示出抗体活性。Fab蛋白包括一条重链和一条轻链的聚合体(通常称为Fab’)，以及相当于抗体Y的两个分支片段的四聚体(通常称为F(ab)₂)，上述任何聚合体可以是共价或非共价聚合的只要能够与特异抗原或抗原族选择性反应即可。

另外，可以用标准重组DNA技术，通过改变抗原结合位点附近的氨基酸残基来改变重组抗体与其抗原的结合亲和力。根据分子模型进行诱变可以提高人源化抗体的抗原结合亲和力(Queen等，美国国家科学院学报86：10029-33，1989；PCT专利申请WO94/04679)。提高或降低抗体对CD40L的亲和力都有可能是需要的，这取决于目标组织的类型或预想的具体治疗方案。用噬菌体展示技术(参见例如此处引作参考文献的Winter等，免疫学年度综述12：433-455，1994；及Schier等，分子生物学杂志255：28-43，1996)可以实现这一点。例如，用一定量的对CD40L亲和力有所减弱的抗体处理患者，以进行半预防性治疗是有好处的。同样，用对CD40L亲和力有所增强的抗体进行短期治疗也比较有利。

作用对象

本发明方法的作用对象患有免疫综合性疾病。这些疾病的特征在于血液中存在循环性免疫球蛋白和免疫复合物。一类免疫综合性疾病称作血清病，可由于对外源性抗原(如感染因子、药物、外源抗血清或血液产品)的免疫反应所致。当患者产生“自身抗体”，即针对患者自身组织成分的抗体时，也可以发生免疫综合性疾病。这种免疫综合性自身免疫疾病的实例有SLE、类风湿性关节炎、古德帕斯彻综合症、韦格纳肉芽肿病、显微性多动脉炎、多动脉炎结节、丘-施综合症以及其它多种形式的血管炎。不归为上述各类的免疫相关疾病相关性肾炎也可用本发明方法治疗。属于这类疾病的例子有亨诺赫-舍恩莱因紫癜、特发性(混合型)冷免疫球蛋白血症[essential(mixed)cryoimmunoglobinemia]、ANCA相关性肾小球肾炎，以及单克隆丙球蛋白病，如多发性骨髓瘤、良性单克隆丙球蛋白病和瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。

术语“患者”是指可以施用抗CD40L化合物的任何哺乳动物患者。可用本发明方法进行治疗的具体患者包括人以及非人灵长动物、绵羊、马、牛、山羊、猪、狗、猫、兔、豚鼠、仓鼠、沙鼠、大鼠和小鼠，以及由这些宿主衍生或来源的器官、肿瘤和细胞。

给药途径

本发明化合物可以采用医学上可接受的任何方式给药。包括通过肠胃外途径注射，例如静脉内、血管内、动脉内、皮下、肌内、肿瘤内、腹膜内、心室内、表皮内或其它方式，以及经口、鼻、眼、直肠或局部给药。本发明还特别包括缓释给药方式(通过诸如储存注射途径)。某些形式的抗CD40L化合物可能适合口服给药，可以制成悬液或丸剂。

治疗剂量和频率

针对特定免疫综合性疾病施用于患者的任何特定化合物的剂量和给药频率要由患者的医生根据多方面因素作出判断。通常剂量由临床前和临床试验(包括大量试验，以确定不同剂量化合物对患者的有益和有害影响)确定。即使已有这种建议，医生也常常应该基于多方面考虑(例如患者年龄、医疗状况、体重、性别以及同时使用其它药物)，改变不同患者的剂量。确定用于治疗狼疮性肾炎的每种抗CD40L化合物的最佳剂量对医药领域技术人员而言是一项常规工作。

根据本发明可以用多种方案治疗狼疮或其它免疫综合性疾病。通常，给药频率应由主治医生确定，可以是单次给药，或者每天重复给药，或以2-6天、一周、两周或一月的间隔给药。

为了举例说明抗CD40L化合物的给药因素，以下提供针对抗CD40LmAb的给药策略实例。其它类型抗CD40L化合物的剂量可以很容易地调节。通常，考虑每次剂量为约0.05-50mg/kg患者体重，最常用剂量在1-20mg/kg范围。用于急性治疗时，有效抗体剂量为约1mg/kg体重到约20mg/kg体重，每天给药，持续约1-5天，优选通过静脉内大量给药方式。负荷保持疗法的负荷期可以使用相同的剂量和给药方案，而保持期经静脉内或肌内给予抗体约0.1mg/kg体重到约20mg/kg体重，疗程间隔期为一周到3个月。长期治疗还可以通过保持疗法进行，这种方法中抗体经静脉内或肌内途径给药，剂量为约0.1mg/kg体重到约20mg/kg体重，连续给药之间的间隔期为约1周到约3个月。施用的抗体量也可以是约0.2mg/kg体重到约10mg/kg体重。另外，可以通过间歇性的静脉内大量给药方案进行长期治疗，其中给予的抗体量为约1.0mg/kg体重到约100mg/kg体重，连续治疗间的间隔为1到6个月。除了间歇性的大量给药方案外，其它方案中均可经口、肺、鼻或皮下途径给药。

通常，治疗开始时采用低剂量的抗体。例如，通过例如注射或输液将起始量的抗体给予患者。对70kg的患者，起始剂量应含有每天约1.0mg到约30mg的抗体。对几天内重复给药的方式，这样的剂量可以连续每天给予，每2到6天给予，每周一次给予，每2到4周给予或每月一次给予，直到观察到疾病症状受到所需抑制。但是，其它给药方案也适用。当症状已减轻到希望的水平，则可以停止治疗。但由于病症复发，患者可能需要进行长期的间歇性治疗。

根据本发明用于治疗狼疮的候选方案，可以通过连续给药或与常规抗狼疮治疗剂或药物(例如，水杨酸盐、皮质类固醇或免疫抑制剂)结合使用而增强抗体的效力。或者，可以将抗体与常规试剂偶联。这样可以有利地使给予的常规药剂比在单一疗法中的用量更低，例如低于常规剂量的大约50％。因此，可以避免产生这种药剂带来的许多副作用。

本发明治疗狼疮的结合疗法包括与靶向B细胞的药剂同时使用抗CD40L抗体，如抗CD19、抗CD28或抗CD20抗体(未偶联物或放射标记物)、IL-14拮抗剂、LJP394(LaJolla Pharmaceuticals受体阻断因子)、IR-1116(Takeda小分子)和抗Ig独特型单克隆抗体。或者，这种结合可以包括靶向T细胞/B细胞的药剂，例如CTLA4Ig、IL-2拮抗剂、IL-4拮抗剂、IL6拮抗剂、受体拮抗剂、抗B7单克隆抗体、TNF、LFA1/ICAM拮抗剂、VLA4/VCAM拮抗剂、brequinar和IL-2毒素偶联物(如DAB)、强的松、环磷酰胺及其它免疫抑制剂。这种结合还可以包括靶向T细胞的药剂，例如CD4拮抗剂、CD2拮抗剂、IL-12。

对非狼疮性免疫综合性疾病患者进行治疗的结合疗法可以包括给予抗CD40L化合物以及通常用于所述具体免疫综合性疾病的药剂。

一旦患者状况好转，如果需要就将维持量的抗CD40L抗体单独给予或与常规抗狼疮药物结合使用。随后，可以根据症状情况将给药量或给药频率或两者减少到能够维持改善状况的水平。当症状缓和到预期水平，则可以停止治疗。在另一些情况下，可以由患者的医生确定采用非经常性疗法(例如间隔4周或以上)。但由于病症复发，患者可能需要进行长期的间歇性治疗。

剂型

将本发明方法中所用的抗CD40L化合物以药学有效量(即对免疫综合性疾病、特别是SLE患者的肾脏能产生有益疗效的量)给予患者。医学上的有益效果应包括避免患者肾功能或健康状况恶化或使其有所改善。肾功能和健康状况可以采用一种或多种实验室检测法进行监控，这些检测法中测量的是血液或尿液中相关物质的浓度，其它尿特征，或者将各种物质从血液清除到尿液中的速率。医生可以单独或结合使用这些检测法中测得的各参数来评估肾功能或损伤程度。这种参数的实例包括血液中尿素、肌酸酐或蛋白质的浓度；尿液中蛋白质或各种血细胞(如红细胞或白细胞)的浓度；尿液比重；尿量；菊粉、肌酸酐、尿素或对氨基马尿酸的清除速率；以及高血压或浮肿的存在与否。医学上的有益效果还应包括自身抗体，如狼疮患者血清中抗dsDNA抗体的减少。

以药学可接受的组合物形式将本发明抗CD40L化合物施用于患者，所述组合物中可包含药学可接受的载体。在与抗CD40L化合物或其它活性组分有效活性一致的浓度下，这种载体相对无毒，对患者也无害，因此由载体引起的任何副作用不会破坏组合物中活性成分的有益效果。组合物中还可包含其它相容性物质；本文中所称的“相容性”是指药物组合物中的诸组分能够与抗CD40L化合物混合，并能互相混合，而不会存在能显著降低药物疗效的相互作用。鼻腔喷雾制剂中包含活性化合物的纯化水溶液和防腐剂及等渗剂。这种制剂优选被调整到与鼻粘膜相容的pH和等渗状态。适于口服的本发明剂型可以作为离散单元提供，如胶囊、cachet、药片、药丸或锭剂，每一单元内含粉末或颗粒形式的预定量强效抗CD40L化合物；作为脂质体提供；作为含水液体或不含水液体中的悬浮液提供，如糖浆、酏剂(elixir)、乳剂或顿服剂。

本发明组合物可以提供于容器中，从而适于在适当分装和保存期间维持无菌状态，保护活性成分的活性，并便于方便有效地将组合物施用于患者。对于CD40L化合物的可注射性剂型，组合物可以作为贮于适于利用针头和注射器从中取出各成分的带塞小瓶中的形式提供。这种小瓶可供一次性使用或多次使用。组合物也可作为预充满的注射器的形式提供。在某些情形下，各组分可以作为液体制剂提供，而另一些情况下，它们可以干燥或冻干状态提供，这样就需要用标准或供给的稀释剂重溶制剂，使之呈液态。若化合物作为静脉内给药的液体形式提供，即可以将其贮于适合连接到静脉内给药线或者catheter的无菌包或容器内。在以片剂或丸剂形式口服抗CD40L化合物的情形下，化合物即可贮于带可移动瓶盖的瓶子中。容器上可以贴有信息单，如化合物类型，生产商或分装者名称，各指数，建议使用的剂量，恰当贮存的建议或者给药建议。

用抗CD40L化合物治疗非人对象中狼疮性肾炎的用途

在以下描述的几项研究中，我们检测了仓鼠抗muCD40L mAb MR1对雌性(SWR×NZB)F1小鼠肾炎发展进程的影响。给对照动物注射Syrian仓鼠多克隆Ig或Ha4/8(针对KLH的Armenian仓鼠mAb)。将蛋白尿水平定为微量到4级。1级对应30mg尿白蛋白/dl白蛋白，2级对应100mg/dl，3级对应300mg/dl，4级大于2000mg/dl。2级代表中度肾炎，2.5或更高值代表重度肾炎。

如果不处理，或者用非特异性的仓鼠免疫球蛋白处理对照动物，则小鼠正常在12月龄时死亡。尽管未处理动物开始时的蛋白尿水平各不相同，但多数在3月龄时达到中度蛋白尿水平；蛋白尿水平趋向于随年龄增加。在大约5月龄时，所有对照动物中通常已具有可检测量的抗dsDNA抗体，多数具有可检测量的抗ssDNA抗体；这与正常小鼠(例如(SWR×NZB)F1小鼠的雌性SWR亲代)中完全检测不到这些抗体形成鲜明对比。

实验II：4月龄时开始处理(图1和2)

MR1处理在小鼠4个月大时开始。当小鼠长到4个月大时，用MR1以500μg/动物的剂量对处理动物腹膜内给药一次，7个月时给药一次，9个月时再给药一次，随后每月注射一次。处理4个月后，5只对照动物中已死亡4只，而6只处理动物中有4只存活。这4只本来存活的处理小鼠有3只分别在12、13和13.5个月的死亡。一只仍活着，现在已15个月，对这个品系的小鼠来说这是极其长寿的。有趣的是，这只存活动物(小鼠II：图2中的DN)在8到13月龄有中度肾炎(蛋白尿2+)，而最近两个月已降低到微量蛋白尿水平。这是这一品系小鼠中肾炎功能性逆转的首次报道。

实验V：4.5月龄时开始处理(图3和4)

MR1处理在小鼠4.5个月大时开始。当小鼠长到4.5个月大时，用MR1以500μg/动物的剂量对处理动物腹膜内给药一次，随后每月腹膜内注射500μg。4.5个月后，7只对照动物中已死亡6只，而7只处理动物中有6只存活。处理8个月后，对照全部死亡，而7只处理小鼠中只有3只死亡。如图4所示，7只MR1处理动物中有4只的蛋白尿水平维持降低，表明肾炎发生逆转。这4只动物仍活着，已12.5月龄.

实验VII：5.5月龄时开始处理(图5和6)

MR1处理在小鼠5.5个月大时开始。用MR1以500μg/动物的剂量对处理动物腹膜内给药，每周给药一次，共6周，随后每月注射。处理5个月后(小鼠10.5月龄)，7只对照动物中已死亡6只，而7只处理动物在12月大时仍全部存活。以下数值是在8.5月龄时(处理3.5个月后)仍存活的动物中测得的。

                    抗ssDNA       抗dsDNA       PU

对照                2.4           0             4

                    8.8           6.3           4

                    6.3           10.1          4

平均值(标准误差)    5.8(2.6)      5.4(4.1)      4(0)

MR1                 2.7           0             1

                    2.0           0             1.5

                    2.0           1.5           3

                    0             0             2

                    2.7           0             1

                    0             0             2

                    3.5           0             1.5

平均值(标准误差)    1.8(1.2)      0.2(0.5)      1.7(  )

实验X：5.5月龄时开始的低频率处理(图7和8)

MR1处理在小鼠5.5个月大时开始。用MR1以500μg/动物的剂量对处理动物腹膜内给药，每周给药一次，共4周，随后每月腹膜内注射200μg。研究中所用16只小鼠(对照和处理组各8只，现在8.5月大)，只有一只对照动物在7.5月大时死亡。如图8所示，8只对照动物中7只的蛋白尿水平稳步增长到高水平，7只存活对照小鼠平均为+3.4。所有8只MR1处理小鼠中除1只外均维持低水平蛋白尿，目前8只处理小鼠平均水平为+2。如图7所示，处理动物中的6只，而对照中只有1只没有可检测水平的抗dsDNA抗体。

实验VI：：7月龄时开始处理(图9和10)

MR1处理在小鼠7个月大时开始。将MR1以500μg/动物的剂量对4只处理动物腹膜内给药，每周一次，共6周，随后每月腹膜内注射500μg。至10个月大时，4只对照动物全部死亡。而处理小鼠中的2只在11个月时死亡，第3只在13个月时死亡，4只处理动物中的1只经7个月处理，目前仍存活(14个月大)。这只存活的处理动物(编号VI：ER)目前蛋白尿水平为1级，具有可检测水平的抗dsDNA抗体和抗ssDNA抗体。

这些实验表明，用抗CD40L mAb处理(SWR X NZB)F1小鼠，与对照动物相比，可以延长小鼠生命，并且减慢肾炎发展(由蛋白尿水平指示)。在某些动物中这种处理确实逆转了肾炎，这一点可由蛋白尿水平的下降证实。32只处理动物中，11只由于抗CD40L mAb治疗而尿蛋白水平下降；而对照动物中没有类似的下降。进行血清血尿氮(BUN)检测的24只处理动物中，3只在处理后BUN水平下降，这在任何对照动物中都未观察到。另外，MR1处理会导致抗DS和抗SS DNA自身抗体的血清浓度降低，而这些抗体是未处理的这类动物正常产生的。

虽然为了便于清楚理解，通过图解和实例方式比较详细地描述了以上发明，然而，对本领域技术人员来说，很显然，可以在本发明范围内进行某些改变和调整，这只受到后附权利要求书范围的限制。

Claims (19)

1.抗CD40L化合物在生产用于治疗免疫综合性疾病患者的药物中的用途。

2.根据权利要求1的用途，其中所述药物中含有量能够使得在患者内有效达到下述目的的所述化合物：(a)抑制肾炎的进程；(b)稳定肾炎；或者(c)逆转肾炎。

3.根据权利要求1的用途，其中所述药物中含有量能够使得在患者内有效达到下述目的的所述化合物：(a)抑制血管炎的进程；(b)稳定血管炎；或者(c)逆转血管炎。

4.根据权利要求1的用途，其中所述药物中含有量能够使得在患者内有效达到下述目的的所述化合物：(a)抑制蛋白尿的进程；(b)稳定蛋白尿；或者(c)逆转蛋白尿。

5.根据权利要求4的用途，其中所述患者在治疗前的蛋白尿水平为：(a)150mg/L以上；或者(b)300mg/L以上。

6.根据权利要求1的用途，其中所述药物中含有量能够使得在患者内有效达到下述目的的所述化合物：(a)抑制抗DNA抗体血清水平的升高；(b)稳定抗DNA抗体血清水平；或者(c)使抗DNA抗体的升高血清水平降低。

7.根据权利要求1的用途，其中所述药物中含有量能够使得在患者内有效稳定或者降低选自下述的临床参数的所述化合物：(a)患者血液中的尿素，肌酸酐或蛋白质浓度；(b)患者尿液中的蛋白质或血细胞浓度；(c)患者尿液的比重；(d)患者尿量；(e)患者对菊粉，肌酸酐，尿素或对氨基马尿酸的清除速率；(f)患者的高血压；(g)患者的浮肿情况；和(h)患者的循环性自身抗体水平。

8.根据权利要求1的用途，其中患者感染了选自下述的免疫综合性疾病：(a)血清病；(b)自身免疫疾病；和(c)单克隆丙球蛋白病。

9.根据权利要求8的用途，其中所述血清病是由(a)对外源性抗原的免疫反应，或者(b)对感染因子，药物，外源抗血清或血液产品的免疫反应所致。

10.根据权利要求8的用途，其中所述自身免疫疾病(a)特征在于患者内存在自身抗体；或者(b)是SLE(例如症状性SLE)、类风湿性关节炎、古德帕斯彻综合症、韦格纳肉芽肿病、显微性多动脉炎、多动脉炎结节、丘-施综合症，亨诺赫-舍恩莱因紫癜，特发性冷免疫球蛋白血症和ANCA相关性肾小球肾炎。

11.根据权利要求8的用途，其中所述单克隆丙球蛋白病是多发性骨髓瘤、良性单克隆丙球蛋白病或瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症。

12.根据权利要求1的用途，其中所述患者具有肾脏同种移植物，而且其中所述药物的量能够使得在患者内有效达到下述目的：(a)抑制同种移植物中肾炎的发展；或者(b)抑制同种移植物中肾炎的进程。

13.根据权利要求12的用途，其中在将同种移植物移植到患者后，周期性地将所述化合物施用于患者。

14.根据权利要求13的用途，其中所述患者患有SLE。

15.根据上述权利要求中任一项的用途，其中所述抗CD40L化合物是一种抗体或者抗体片段。

16.根据权利要求15的用途，其中所述抗体是一种单克隆抗体。

17.根据权利要求16的用途，其中所述单克隆抗体是由ATCC保藏号HB10916产生的5c8。

18.根据上述权利要求中任一项的用途，其中所述患者是人。

19.根据权利要求18的用途，其中所述抗CD40L化合物是一种人源化抗体。

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