EA004710B1 - Протеинкиназа candida albicans, обладающая активностью фосфорилирования циклинзависимых протеинкиназ, и способы ее применения - Google Patents
Протеинкиназа candida albicans, обладающая активностью фосфорилирования циклинзависимых протеинкиназ, и способы ее применения Download PDFInfo
- Publication number
- EA004710B1 EA004710B1 EA200000213A EA200000213A EA004710B1 EA 004710 B1 EA004710 B1 EA 004710B1 EA 200000213 A EA200000213 A EA 200000213A EA 200000213 A EA200000213 A EA 200000213A EA 004710 B1 EA004710 B1 EA 004710B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- nucleic acid
- protein kinase
- azr
- activity
- bie
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/12—Transferases (2.) transferring phosphorus containing groups, e.g. kinases (2.7)
- C12N9/1205—Phosphotransferases with an alcohol group as acceptor (2.7.1), e.g. protein kinases
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Изобретение относится к протеинкиназе, обладающей следующими характеристиками: в ней отсутствует звено GxGx(Y/F)Gx, она обладает активностью фосфорилирования циклинзависимых протеинкиназ. Изобретение относится также к нуклеиновой кислоте, кодирующей названную протеинкиназу, и к ее применению для скрининга банка кДНК C.albicans. Изобретение относится к рекомбинантным векторам соответственно для амплификации последовательности нуклеиновой кислоты и для экспрессии последовательности нуклеиновой кислоты, получаемым путем встраивания указанной нуклеиновой кислоты соответственно в подходящий вектор клонирования и в подходящий вектор экспрессии. Изобретение относится также к способу скрининга фунгицидных продуктов с использованием указанной выше киназы.
Description
Настоящее изобретение относится к новой протеинкиназе СапЛба а1Ыеаи5, обладающей активностью фосфорилирования циклинзависимых протеинкиназ и к ее применению.
Циклинзависимые протеинкиназы (Цзк) являются основными регуляторами цикла клеточного деления у эукариотов как при переходе 01/8/, так и при переходе С2/М клеточного цикла. Первыми идентифицированными Цзк были СЭС28 8аес11аготусс5 еегеу15ае и СЭС2 8с1и/05асс11аготусс5 ротЬе.
Активация циклинзависимых киназ требует одновременной фиксации молекулы циклина и фосфорилирования Цзк на сохраняющемся остатке треонина, расположенном в области, называемой «петлей Т».
Было показано, что это фосфорилирование осуществляется киназой, называемой «киназой, активирующей Цзк» (Кац), которая у позвоночных имеет форму гетеротримера, содержащего каталитическую субъединицу, имеющую название Сбк7, субъединицу циклинового типа, имеющую название циклин Н, и фактор МАТ-1 (см. 8о1отои, Тгепбк ВюсЕет.8ст, 1994, 19, 496500). Комплекс Сбк7-циклин Н является кроме того компонентой комплекса ТЕИН, необходимой для базальной транскрипции генов с помощью РНК-полимеразы II, и участвует в фосфорилировании повторяющихся последовательностей С-концевого домена (Скд) большой субъединицы этой полимеразы.
У размножающихся делением дрожжей 8с1и/о5асс11аготусе5 ротЬе был идентифицирован комплекс, подобный комплексу Сбк7циклин Н, содержащий каталитическую субъединицу, называемую Сгк1, и регуляторный циклин Мск2. Было показано, что ген Сгк1 является важным для жизнедеятельности клетки, а ίη νί1го наблюдали, что комплекс Сгк1-Мск2 имеет отношение к активности Кац и активности Скдкиназы [Виск е! а1., ЕМВО 1., 1955, 14(24) 617383; Эатадпех е! а1., ЕМВО 1., 1995, 14(24), 616472].
У почкующихся дрожжей 8ассЬаготусе5 сеге^'Бае был также обнаружен комплекс, содержащий одну киназу (Κίη28) и один циклин (Сс11), родственные на уровне последовательностей, соответственно, киназам Сбк7 и Сгк1 и регуляторным белкам циклину Н и Мск2. Комплекс К1п28-Сс11 составляет часть комплекса ΤΕΙΙΗ и обладает активностью Скд-киназы, но не имеет отношения к активности КАЦ.
Заявителем была идентифицирована киназа, ответственная за активность КАЦ у 8ассНаготусек сеге\'15ае. Эта киназа была названа С1У1 (КАЦ ίη νί\Ό). а соответствующий ген назван С1У1 [ТЕиге! е! а1., Се11, 1996, 86 (4)]. Эти результаты были подтверждены другими исследовательскими группами [Ка1б15 е! а1., Се11, 1996, 86(4) 553-564; Е^рпю/а е! а1., 8с1епсе, 1996, 273 (5282), 1714-1717]. КАЦ 8ассЕаготусе5 сеге^'Бае в целом подобен семейству серин-треонинкиназ и особенно протеинкиназам СЭС2 и СЭС28, и в то же время отличается от ранее идентифицированных КАЦ у других организмов отсутствием сохраняющегося звена с большим количеством глициновых остатков: ОхОх(У/Е)ОхУ, которое имеется у большинства протеинкиназ, наличием вставок от 5 до 29 аминокислот, расположенных между элементами вторичной структуры, сохраняющимися у семейства Сбк, и тем фактом, что активность КАЦ 8ассЕаготусе5 се^еν^5ае не требует его включения в ферментный комплекс.
Поскольку активность КАЦ у С1У1 необходима для жизнедеятельности и деления клеток, было предпринято исследование с целью выяснения, имеются ли у патогенных дрожжей гены, гомологичные генам С1У1, кодирующим протеинкиназы, обладающие активностью КАЦ. В действительности, в этом случае получение средств регуляции этой активности и особенно получение ингибиторов представило бы большой интерес для промышленности или терапевтической практики, и главным образом для получения фунгицидов.
С этой целью заявитель просмотрел ряд банков ДНК патогенных дрожжей Сапб1ба а1Ь1сапк с использованием зондов, являющихся производными различных участков гена С1У1 8ассЕаготусе5 се^еν^5ае. Однако, ни один из использованных зондов не позволил обнаружить наличие гомологичных последовательностей в геноме Сапб1ба а1Ысап5.
Тогда было проведено исследование с целью выяснения, имеет или нет СапЛба а1Ысап8 функциональный аналог КАЦ 8ассЕаготусе5 сегсс^ае путем поиска наличия у Сапб1ба а1Ь1сап8 одного или более генов, способных восстанавливать у 8ассЕаготусе5 се^еν^5ае функцию КАЦ в термочувствительном мутанте гена С1У1. Таким образом удалось идентифицировать ген у Сапб1ба а1Ысап8, который способен восполнить недостающую у мутанта функцию КАЦ.
Была определена последовательность этого гена, названного СаС1У1. Она приведена в списке последовательностей в приложении под номером 8ЕО ΙΌ N0:1. Последовательность продукта его транскрипции, названная СаС1У1, приведена под номером 8Еф ΙΌ N0:2.
На фиг. 1 представлено сравнение аминокислотной последовательности (код 1-буква) СаС1У1 с аминокислотными последовательностями КАЦ 8ассЕаготусе5 се^еν^5ае (называемой 8сС1У1) и киназы СЭС28 8ассЕаготусе5 сеге\'15ае (называемой 8сСЭС28). Сохраняющиеся остатки в 8сС1У1 и СаС1У1 выделены жирным шрифтом.
Расшифровка обозначений на фиг. 1:
к - остаток, сохраняющийся в большинстве протеинкиназ;
• - остаток, часто присутствующий у семейства Сбк;
о - остаток, всегда присутствующей у семейства Сбк;
+ - остаток, присутствующий у семейства Сбк и в 8сСГУ1;
Вторичные структуры; а - спираль α; Ь спираль β.
В общей последовательности аминокислот СаСГУ1 только 28% из них идентичны аминокислотам последовательности Зассйаготусек сегеукае (8сСГУ1).
Однако, обнаруженное между 8сСГУ1 и СаСГУ1 сходство позволяет определить семейство киназ, называемое далее СГУ1, в которое входят белки, обладающие следующими характеристиками:
в этих белках отсутствует звено ОхОх(У/Р)ОхУ, в котором О обозначает глицин, х обозначает какую-либо аминокислоту, Υ/Ρ обозначает либо тирозин, либо фенилаланин и У обозначает валин;
белки обладают активностью фосфорилирования циклинзависимых протеинкиназ (Цзк).
Настоящее изобретение относится к протеинкиназам, принадлежащим к определенному выше семейству СГУ1, за исключением КАЦ 8сСГУ1 Зассйаготусек сегеукае.
Согласно предпочтительному варианту осуществления настоящего изобретения названная протеинкиназа может быть получена из какого-либо аскомицета, преимущественно из какого-либо гемиаскомицета, из которых предпочтение отдается Сапб1ба а1Ысаи8.
Протеинкиназа по изобретению представлена, например, аминокислотной последовательностью, приведенной в приложении под номером 8ЕО ГБ N0:2.
Предметом настоящего изобретения является также нуклеотидная последовательность, кодирующая протеинкиназу по изобретению.
Нуклеотидная последовательность по изобретению может быть, например, представлена приведенной в приложении последовательностью 5ЕО ГБ N0:1.
Предметом настоящего изобретения являются также фрагменты нуклеиновой кислоты размером по меньшей мере 18 пар оснований, гомологичные или комплементарные нуклеотидной последовательности, кодирующей специфическую пептидную последовательность КАЦ по изобретению.
Эти фрагменты могут быть, в частности, использованы в качестве зондов гибридизации и/или праймеров амплификации для выделения и/или клонирования из Сапб1ба а1Ь1саи8 нуклеотидной последовательности, кодирующей КАЦ по изобретению.
Настоящее изобретение относится также к нуклеотидным фрагментам размером по меньшей мере 15 пар оснований, предпочтительно не менее 18 пар оснований, которые являются гомологичными и комплементарными нуклеотид ной последовательности, кодирующей сохраняющуюся пептидную последовательность в семействе протеинкиназ по изобретению, определенных как КАЦ СаСГУ1, и протеинкиназ КАЦ 8сСГУ1 Зассйаготусек сегеукае.
Эти фрагменты могут быть, в частности, использованы в качестве зондов гибридизации и/или праймеров амплификации для выявления наличия у организмов отличных от 8ассйаготусе§ сегеукае и Сапб1ба а1Ысап8 последовательностей, кодирующих киназы, родственные КАЦ СаСГУ1 и 8сСГУ1, и для выделения и/или клонирования идентифицируемых таким образом генов. Изобретение относится также к полученным таким образом нуклеотидным последовательностям, а также к протеинкиназам семейства КАЦ СаСГУ1 и 8сСГУ1, кодируемым этими последовательностями.
Предметом настоящего изобретения является также любой рекомбинантный вектор и, в частности, любой вектор экспрессии, образованный путем встраивания по меньшей мере одной нуклеотидной последовательности настоящего изобретения в подходящий вектор. Выбор подходящего вектора может быть легко осуществлен специалистами из многочисленных имеющихся в наличии векторов в зависимости от клетки-хозяина, выбранной для размножения и/или экспрессии нуклеиновой кислоты, соответствующей настоящему изобретению.
Изобретение относится также к прокариотическим и эукариотическим клеткам, трансформированным нуклеотидной последовательностью по изобретению. Эти трансформированные клетки могут быть, в частности, использованы для экспрессии киназы по изобретению, например, для ее очистки в клеточных культурах, например, с использованием методов, аналогичных методам, описанным выше авторами изобретения для СГУ1 Зассйаготусек сегеукае (приведенная выше ссылка Тйиге! е1 а1., 1995), или же для выявления активности этой киназы с помощью подходящего теста на выживаемость клетки.
Доказательство авторами изобретения функциональной гомологии киназ СаСГУ1 и 8сСГУ1 позволяет предвидеть многочисленные пути применения для этого семейства киназ.
В частности, исходя из того факта, что активность не являющейся циклинзависимой КАЦ из этого семейства киназ является, повидимому, существенной для выживания и деления клеток, ингибирующие эту активность вещества могут представлять ценность в качестве фунгицидов либо в виде лекарственных препаратов, либо в виде промышленных фунгицидов.
Для выявления фунгицидных веществ, таких как вещества, активные в отношении киназ
Сапб1ба а1Ысап8, производят, например, измерение активности киназы СаСГУ1 или одного из ее функциональных гомологов, образованного не являющейся циклинзависимой КАЦ семейства С1У1, в присутствии каждого из продуктов, у которых определяются фунгицидные свойства, и отбирают продукты, проявляющие ингибирующий эффект в отношении этой активности.
Такого рода отбор может производиться путем измерения киназной активности у КАЦ семейства С1У1 в присутствии тестируемых потенциальных активаторов или ингибиторов. Киназную активность можно, например, измерять ίη νίίτο либо путем непосредственной детекции фосфорилирования субстратного пептида или белка, например СЭС28 или Сбк2 или белка МВР (основного миелинового белка) в подходящей реакционной смеси, либо опосредованно путем детекции и/или измерения активности субстратного белка в том случае, когда последняя зависит от фосфорилирования.
Киназная активность может быть также измерена ίη νίνο с использованием теста на выживаемость клеток. Например, киназную активность СаС1У1 предпочтительно измерять в трансформированных геном СаС1У1 клетках мутанта Зассйатотусек есгсуБас. не экспрессирующего КАЦ 8сС1У1.
Таким образом изобретение относится к способу скрининга фунгицидных продуктов, включающему измерение активности протеинкиназы, описанной выше, в присутствии определяемых продуктов и отбор продуктов, проявляющих ингибирующий эффект в отношении фунгицидной активности,
Изобретение станет более понятным с помощью следующего ниже дополнения к описанию в виде примера, иллюстрирующего доказательство активности КАЦ СаС1У1 и клонирование соответствующего гена.
Пример
Штамм Зассйатотоусек се^еν^8ае, СМУ975 (генотип С1У1-2 ига3 1еи2 йр1 1ук2 абе2 абе3) содержит термочувствительную мутацию гена С1У1 и по этой причине прорастает не при 37°С, а при 24°С.
Культуру этого штамма трансформируют литийацетатным методом (ЗсЫекй и ^еА Сиггеп1 Оепейск, 1989, 16, 339-346) с использованием банка геномных фрагментов 8аи3А СапФба а1Ь1сапк, клонированных в сайте ВатН1 вектора ΥΕρ24 (мультикопия-ИКА3) (Во1к1еш еί а1., Сепе, 1979, 8, 17-24).
Клетки СМУ975 помещают в чарки с не содержащей урацила синтетической средой и культивируют при 37°С.
В названных условиях были получены десять колоний СМУ975. Из каждой колонии были выделены плазмиды УЕр24, содержащие включения СапШба а1Ь1сапк, и амплифицированы в ЕксйепсЫа сой.
Была получена рестрикционная карта каждой из этих плазмид, которая позволила установить, что все вставки происходят из одного и того же участка генома Сапбйа а1Ь1сапк. Секве нирование этого участка позволило выявить одну и ту же открытую рамку считывания, кодирующую протеинкиназу из 339 аминокислот, что свидетельствует о том, что все 10 отдельно полученных вставок соответствуют одному и тому же гену Сапб1ба а1Ысапк. Этот ген получил название СаС1У1.
Последовательность СаС1У1 приведена в списке последовательностей в приложении под номером 8ЕО ГО N0:1, а последовательность белка СаС1У1 представлена под номером 8Е0 ГО N0:2. Сравнение последовательности белка СаС1У1 с имеющимися в базе данных последовательностями дает основание полагать, что у этого белка имеется только 28% аминокислот, идентичных аминокислотам КАЦ 8ассйатотусек сегеуйае 8сСГУ1 и 24% аминокислот, идентичных аминокислотам Сбк 8сСЭС28 8ассйаготусек сегеуйае и СаСЭС28 Сапб1ба а1Ь1сапк.
Геномный фрагмент ВатНГ-С1а1 размером 3 тыс. пар оснований, содержащий ген СаСГУ1, был далее клонирован в центромерной плазмиде ТЯР1 рР8414 (81коткк1 и Н^еίе^, Оепейск, 1989, 122, 19-27). Эту плазмиду использовали для трансформации мутанта 8ассйатотусек сеЮт18ае, в котором последовательность 8сСГУ1 удалена из генома и который содержит ген 8сСГУ1 на репликативной плазмиде, включающей также селекционный ген ϋΚΑ3 (штамм СМУ116 генома ига3 1еи2 йр1 1ук2 сА1 ЬЕи2/рЮ43 (иЯА3-8сСГУ 1). Трансформированные плазмидой иКА3-8сС1У1 клетки жизнеспособны после контрселекции и утраты плазмиды рЮ43 (иКА3-8сСГУ 1), что подтверждает тот факт, что ген СаСГУ1 может функционировать вместо основного гена 8сС1У1. Следовательно, ген СаСГУ1 кодирует функциональный гомолог 8сСГУ1 и достаточен для восстановления активности КАЦ.
Список последовательностей
Ί <110> ΕΑΥΕ, Сёгага νΑΕΑΥ, σββη СаЬгхе!
ΜΑΝΝ, Саг1 тнивЕТ, σββη-Υνβδ СЕА
ΙΝ5ΤΙΤ0Τ С0Н1Е сына <120> ΚΙΝΑ5Ε АСТ1УАТК1СЕ 0Ε3 ΡΚ0ΤΕΙΝΕ-ΚΙΝΑ5Ε3 СУСЫЫЕ 0ΕΡΕΝ0ΑΝΤΕ5, ΕΤ ЗЕЗ ОТ11ДЗАТ10ЫЗ <130> ΜσΡπη263/33 <140>
<141>
<150> ΓΗ 9710287 <151> 1997-08-12 <160> 2 <170> РаСепЫп Уегз. 2.0 <210> 1 <211> 1020 <212> ΑϋΝ <213> СапсЦба а1Ьхсапз <220>
<221> С05 <222> (1).. (1020) <400> 1
асд Мес 1 | аад ссд | Сса даС Зег Азр 5 | СаС Туг | СаС аса дас аад даа ССа асе Сас аас аде | 48 | |||||||||||
ьуз | Ьеи | Туг | Не | Азр | Ьуз С1и 10 | Ьеи | Не | Туг Азп 15 | Зег | |||||||
дсс | асе | СсС | даС | аса | СаС | асд | дсс | аСС | дас | аад | ССС | аас | аас | ССа | сса | 96 |
А1а | Не | Зег | Азр | Не | Туг | ТЬг | АХа | Не | Азр | Ьуз | РЬе | Азп | Азп | Ьеи | Рго | |
20 | 25 | 30 | ||||||||||||||
дса | сдс | ссс | ааа | аса | дсс | дас | даа | дас | ССс | аде | есс | сса | сса | сас | сса | 144 |
УаХ | Суз | Ьеи | Ьуз | Не | УаХ | Азр | С1и | Азр | РЬе | Зег | Ьеи | Рго | Рго | Нхз | Зег | |
35 | 40 | 45 | ||||||||||||||
асе | еас | еда | даа | дсс | есс | аса | ССС | ааа | асе | есд | ааа | сса | саС | сса | аас | 192 |
1Хе | Нхз | Агд | С1и | УаХ | Ьеи | Не | Ьеи | Ьуз | ТЬг | Ьеи | Ьуз | Рго | Нхз | Рго | Азп | |
50 | 55 | 60 | ||||||||||||||
аса | асе | даа | сас | ссс | аас | дас | ССС | ааа | асе | с де | дас | дас | асе | аса | ССа | 240 |
Не | Не | С1и | Туг | РЬе | Азп | Азр | Ьеи | Ьуз | Не | Суз | Азр | Азр | Не | 11е | Ьеи | |
65 | 70 | 75 | 80 | |||||||||||||
дсс | асе | ааа | ссд | СаС | еде | сас | дас | ССд | аде | саа | сед | асе | даа | аСС | аса | 288 |
УаХ | ТЫ | Ьуз | Ьеи | Туг | Агд | Туг | Азр | Ьеи | Зег | С1п | Ьеи | Не | СХи | Не | ТЬг | |
85 | 90 | 95 | ||||||||||||||
ааа | сас | сдс | ааа | еда | аса | аса | еда | ссс | асе | Сае | ддс | асе | аас | ддс | аас | 336 |
Ьуз | Туг | Суз | Ьуз | Агд | ТЬг | ТЬг | Агд | РЬе | 11е | Туг | 61у | Не | Азп | 61у | Азп | |
100 | 105 | 110 | ||||||||||||||
ссс | дсс | аде | ааС | саа | сас | аса | ССС | дсс | аас | даа | асе | даа | даа | ааа | да С | 384 |
Ьеи | УаХ | Зег | Азп | 61п | Туг | ТЬг | Ьеи | АХа | Азп | 61 и | Не | 61и | 61 и | Ьуз | Азр | |
115 | 120 | 125 |
АХа Не 5ег Азр 11е Туг ТЬг | АХа | Не Азр Ьуз РЬе Азп Азп Ьеи | Рго | ||||||||||||
20 | ' 25 | 30 | |||||||||||||
ν*ι | Суз | Ьеи | Ьуз | 11е | Уа1 | Азр | СХи | Азр | РЬе | Зег | Ьеи | Рго | Рго | Нхз | Зег |
35 | 40 | 45 | |||||||||||||
Не | Нхз | Агд | 61и | Уа1 | Ьеи | Не | Ьеи | Ьуз | ТЬг | Ьеи | Ьуз | Рго | Нхз | Рго | Азп |
50 | 55 | 60 | |||||||||||||
Не | 11е | С1и | Туг | РЬе | Азп | Азр | Ьеи | Ьуз | Не | Суз | Азр | Азр | Не | Пе | Ьеи |
65 | 70 | 75 | 80 | ||||||||||||
Уа1 | ТЬг | Ьуз | Ьеи | Туг | Агд | Туг | Азр | Ьеи | Зег | С1п | Ьеи | Не | 61и | 11е | ТЬг |
85 | 90 | 95 | |||||||||||||
Ьуз | Туг | Суз | Ьуз | Агд | ТЬг | ТЬг | Агд | РЬе | Не | Туг | СХу | Не | Азп | СХу | Азп |
100 | 105 | 110 | |||||||||||||
Ьеи | Уа1 | 5ег | Азп | 61п | Туг | ТЬг | Ьеи | А1а | Азп | СХи | Не | С1и | С1и | Ьуз | Азр |
115 | 120 | 125 | |||||||||||||
Не | Ьуз | Ьеи | Тгр | Ьеи | Ьуз | Зег | МеС | Зег | Зег | СХу | Ьеи | С1и | РЬе | Не | НХЗ |
130 | 135 | 140 | |||||||||||||
Зег | 61п | б1у | Не | Не | Нхз | Агд | Азр | Не | Ьуз | Рго | Зег | Азп | Не | РЬе | РЬе |
145 | 150 | 155 | 160 | ||||||||||||
АХа | Агд | Азр | Азр | Не | ТЬг | СХп | Рго | Не | Не | С1у | Азр | РЬе | Азр | Не | Суз. |
165 | 170 | 175 | |||||||||||||
Туг | Азр | Ьеи | Ьуз | Ьеи | РГО | Рго | Ьуз | Азр | С1и | Рго | Рго | МеС | АХа | Ьуз | Туг |
180 | 185 | 190 | |||||||||||||
Не | Азр | Уа1 | Зег | ТЬг | 61у | Не | Туг | Ьуз | АХа | Рго | О1и | Ьеи | 11е | Ьеи | 61у |
195 | 200 | 205 | |||||||||||||
Не | ТЬг | Азп | Туг | С1и | Туг | С1и | ХХе | Азр | Не | Тгр | Зег | Ьеи | СХу | Не | Пе |
210 | 215 | 220 | |||||||||||||
Ьеи | ТЬг | СХу | Ьеи | Туг | Зег | 61и | Азп | РЬе | СХп | Зег | УаХ | Ьеи | Уа1 | Ьуз | Азо |
225 | 230 | 235 | 240 | ||||||||||||
Азр | Ьуз | СХи | Ьеи | ТЬг | Азп | Азр | Зег | Нхз | Уа1 | Зег | Азр | Ьеи | Туг | Ьеи | Ьеи |
245 | 250 | 255 | |||||||||||||
Азп | С1п | Не | РЬе | СХи | Азп | РЬе | С1у | ТЫ | Рго | Азп | Ьеи | ТЬг | Азр | РЬе | С1и |
260 | 265 | 270 | |||||||||||||
Азр | 61и | Ьеи | РЬе | Суз | Азр | С1и | Туг | Азп | Азп | СХи | Азп | Ьеи | Нхз | РЬе | Ьуз |
275 | 280 | 285 | |||||||||||||
Ьуз | РЬе | Азп | Ьеи | 61П | Ьуз | Туг | Рго | Агд | Ьуз | Азр | Тгр | АЗр | Не | Не | Ьеи |
290 | 295 | 300 | |||||||||||||
Рго | Агд | Суз | Азп | Азр | Азр | РЬе | МеС | Ьу_з | СХи | Не | РЬе | ТЬг | Ьуз | Мес | 11е |
305 | 310 | 315 | 320 | ||||||||||||
Агд | Туг | Азр | Агд | Зег | Ьуз | Агд | 11е | ТЬг | Зег | Ьуз | С1и | Не | Ьеи | С1п | Ьеи |
325 | 330 | 335 |
Мес Ьеи Азр
аСс | ааа | сса | сдд | сса | ааа | сса | асд аде | сса | дда | есс | ааа | ССС | асе сас «32 |
Не | Ьуз | Ьеи | Тгр | Ьеи | Ьуз | 5ег | МеС 'Зег | Зег | 61у | Ьеи | 61и | РЬе | Не Нхз |
130 | 135 | 140 | |||||||||||
Сса | саа | ддд | аса | аес | сас | сдС | дас аса | ааа | ссс | аде | ааС | асе | ССс ссс 480 |
Зег 61η 61у Не 11е Ηίδ Агд Азр Не Ьуз Рго Зег Азп Не РЬе РЬе
145 150 155 160 дсс сдд дас даС аСа аса саа ссд асе аСС дда дас ссс дас асе СдС528
А1а Агд Азр Азр Не ТЬг С1п Рго Не Не 61у Азр РЬе Азр НеСуз
165 по175 сас дас сса ааа сСд сса ссс ааа дас даа ссс ссс асд дед ааа сас576
Тут Авр Ьеи Ьуз Ьеи Рго Рго Ьуз Азр С1и Рго Рго МеС А1а ЬузТуг
180 195190 асе дас дса ссс аса ддс асе сас ааа дса сса даа ссд асе ссс ддс624
Не Азр Уа1 Зег ТЫ С1у 11е Туг Ьуз А1а Рго 61и Ьеи 11е Ьеи01у
195 200205 аса асе аас сас даа сас даа асе дас аСС Сдд сса ссд ддс аса асе672
11е ТЬг Азп Туг 61и Туг С1и Не Азр Не Тгр Зег Ьеи С1у НеНе
210 215220 ссд асе ддс сса сас Сса даа аас ССС саа аде дсс сса дсс ааа дас720
Ьеи ТЬг С1у Ьеи Туг Зег 01и Азп РЬе О1п Зег Уа1 Ьеи Уа1 ЬузАзр
225 230 235240 дас ааа даа ссд асе аас дас ссс сас дсс адС дас сса сас сса сса768
Азр Ьуз 61и Ьеи ТЬг Азп Азр Зег Нхз УаХ Зег Азр Ьеи Туг ЬеиЬеи
245 250255 аас саа аса ССС даа аас ссс ддс аса ссс ааС сса асе дас ссс даа816
Азп С1п 11е РЬе б1и Азп РЬе СХу ТЬг Рго Азп Ьеи ТЫ Азр РЬе31и
260 265270 дас даа сса ссс сдс дас даа Сас аас ааС даа аас ССд сас ссс ааа864
Азр СХи Ьеи РЬе Суз Азр С1и Тус Азп Азп СХи Азп Ьеи Нхз РЬеЬуз
275 290285 ааа ссс аас сса саа ааа сас ссс ада ааа дас Сдд дас асе аСС сса912
Ьуз РЬе Азп Ьеи С1п Ьуз Туг Рго Агд Ьуз Азр Тгр Азр Не 11еЬеи
290 295· 300 ссс еда Сдс аас дас дас ссс асд ааа даа аСС ССС асе аад асд асе960
Рго Агд Суз Азп Азр Азр РЬе МеС Ьуз СХи ХХе РЬе ТЬг Ьуз МеСНе
305 310 315320 ада Сас дас еда адС ааа ада аСа асе ссС ааа даа асе ССа саа сса1008
Агд Туг Азр Агд Зег Ьуз Агд 11е ТЬг Зег Ьуз 61и Не Ьеи С1пЬеи
325 330335
асд сса даС еда. МеС Ьеи Азр 340 | 1020 | |
<210> 2 <211> 339 <212> ₽ат <213> СапОхОа аЮхсапз | ||
<400> 2 Мес Ьуз Ьеи Зег Азр Туг Туг 1 5 | Х1е Азр Ьуз С1и Ьеи Не Туг Азп Зег 10 15 |
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
Claims (8)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Протеинкиназа, полученная из СапФба а1Ысап8, выбранная из протеинкиназы, имеющей последовательность 8ЕО ΙΌ N0:2, и ее аллельные варианты, и определяемая следующими характеристиками:в ней отсутствует звено ОхОх(У/Р)ОхУ, в котором О обозначает глицин, х обозначает какую-либо аминокислоту, Υ/Р обозначает либо тирозин, либо фенилаланин, V обозначает валин;она обладает активностью фосфорилирования циклинзависимых протеинкиназ (Цзк).
- 2. Нуклеиновая кислота, кодирующая протеинкиназу по п.1.
- 3. Нуклеиновая кислота по п.2, имеющая последовательность 8ЕО ΙΌ N0:1.
- 4. Применение нуклеиновой кислоты по п.3 для скрининга банка кДНК С.а1Ысап8.
- 5. Применение нуклеиновой кислоты с последовательностью ЗЕО ΙΌ N0:1 или комплементарной нуклеиновой кислоты для получения протеинкиназы по п.1.
- 6. Рекомбинантный вектор для амплификации последовательности нуклеиновой кислоты по любому из пп.2 или 3, получаемый путем встраивания указанной нуклеиновой кислоты в подходящий вектор клонирования.
- 7. Рекомбинантный вектор для экспрессии последовательности нуклеиновой кислоты по любому из пп.2 или 3, получаемый путем встраивания указанной нуклеиновой кислоты в подходящий вектор экспрессии.
- 8. Способ скрининга фунгицидных продуктов, отличающийся тем, что он включает стадию, в которой измеряют активность киназы поп.1 в присутствии каждого из продуктов, у которых определяют фунгицидные свойства, и отбирают продукты, проявляющие ингибирующий эффект в отношении этой активности.Киназы сОс/свк ст (с.а.) ст (8.с.» С<1с2е|8.с.) структура
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
FR9710287A FR2767334B1 (fr) | 1997-08-12 | 1997-08-12 | Kinase activatrice des proteine-kinases cycline dependantes, et ses utilisations |
PCT/FR1998/001788 WO1999007836A1 (fr) | 1997-08-12 | 1998-08-11 | Kinase activatrice des proteine-kinases cycline dependantes, et ses utilisations |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
EA200000213A1 EA200000213A1 (ru) | 2000-08-28 |
EA004710B1 true EA004710B1 (ru) | 2004-06-24 |
Family
ID=9510243
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
EA200000213A EA004710B1 (ru) | 1997-08-12 | 1998-08-11 | Протеинкиназа candida albicans, обладающая активностью фосфорилирования циклинзависимых протеинкиназ, и способы ее применения |
Country Status (24)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US6413754B1 (ru) |
EP (1) | EP1003844B1 (ru) |
JP (1) | JP2001512677A (ru) |
KR (1) | KR20010022505A (ru) |
CN (1) | CN1149281C (ru) |
AP (1) | AP1089A (ru) |
AT (1) | ATE318302T1 (ru) |
AU (1) | AU751829B2 (ru) |
BR (1) | BR9811169A (ru) |
CA (1) | CA2300439A1 (ru) |
CZ (1) | CZ291968B6 (ru) |
DE (1) | DE69833556D1 (ru) |
EA (1) | EA004710B1 (ru) |
FR (1) | FR2767334B1 (ru) |
HU (1) | HUP0004606A3 (ru) |
IL (1) | IL134344A0 (ru) |
NO (1) | NO20000687D0 (ru) |
NZ (1) | NZ502720A (ru) |
PL (1) | PL338684A1 (ru) |
SK (1) | SK1922000A3 (ru) |
TR (1) | TR200000337T2 (ru) |
WO (1) | WO1999007836A1 (ru) |
YU (1) | YU7500A (ru) |
ZA (1) | ZA987206B (ru) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20030104362A1 (en) * | 1995-06-05 | 2003-06-05 | Guillaume Cottarel | Cell-cycle regulatory proteins from human pathogens, and uses related thereto |
FR2818642B1 (fr) * | 2000-12-26 | 2005-07-15 | Hoechst Marion Roussel Inc | Nouveaux derives de la purine, leur procede de preparation, leur application a titre de medicaments, compositions pharmaceutiques et nouvelle utilistion |
KR100677396B1 (ko) * | 2004-11-20 | 2007-02-02 | 엘지전자 주식회사 | 음성인식장치의 음성구간 검출방법 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5733920A (en) * | 1995-10-31 | 1998-03-31 | Mitotix, Inc. | Inhibitors of cyclin dependent kinases |
-
1997
- 1997-08-12 FR FR9710287A patent/FR2767334B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
1998
- 1998-08-11 CZ CZ2000491A patent/CZ291968B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-08-11 IL IL13434498A patent/IL134344A0/xx unknown
- 1998-08-11 CN CNB988080087A patent/CN1149281C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-08-11 AT AT98942723T patent/ATE318302T1/de not_active IP Right Cessation
- 1998-08-11 WO PCT/FR1998/001788 patent/WO1999007836A1/fr active IP Right Grant
- 1998-08-11 SK SK192-2000A patent/SK1922000A3/sk unknown
- 1998-08-11 AU AU90750/98A patent/AU751829B2/en not_active Ceased
- 1998-08-11 YU YU7500A patent/YU7500A/sh unknown
- 1998-08-11 JP JP2000506321A patent/JP2001512677A/ja active Pending
- 1998-08-11 PL PL98338684A patent/PL338684A1/xx unknown
- 1998-08-11 EA EA200000213A patent/EA004710B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-08-11 BR BR9811169-8A patent/BR9811169A/pt not_active Application Discontinuation
- 1998-08-11 KR KR1020007001091A patent/KR20010022505A/ko not_active Application Discontinuation
- 1998-08-11 AP APAP/P/2000/001768A patent/AP1089A/en active
- 1998-08-11 CA CA002300439A patent/CA2300439A1/fr not_active Abandoned
- 1998-08-11 DE DE69833556T patent/DE69833556D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-11 HU HU0004606A patent/HUP0004606A3/hu unknown
- 1998-08-11 EP EP98942723A patent/EP1003844B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1998-08-11 US US09/463,962 patent/US6413754B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-08-11 TR TR2000/00337T patent/TR200000337T2/xx unknown
- 1998-08-11 NZ NZ502720A patent/NZ502720A/xx unknown
- 1998-08-12 ZA ZA987206A patent/ZA987206B/xx unknown
-
2000
- 2000-02-11 NO NO20000687A patent/NO20000687D0/no not_active Application Discontinuation
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EA200000213A1 (ru) | 2000-08-28 |
EP1003844A1 (fr) | 2000-05-31 |
CN1149281C (zh) | 2004-05-12 |
AU751829B2 (en) | 2002-08-29 |
KR20010022505A (ko) | 2001-03-15 |
FR2767334A1 (fr) | 1999-02-19 |
CZ291968B6 (cs) | 2003-06-18 |
CZ2000491A3 (cs) | 2000-07-12 |
SK1922000A3 (en) | 2000-11-07 |
IL134344A0 (en) | 2001-04-30 |
JP2001512677A (ja) | 2001-08-28 |
AP1089A (en) | 2002-08-01 |
HUP0004606A3 (en) | 2005-11-28 |
AU9075098A (en) | 1999-03-01 |
ZA987206B (en) | 1999-02-12 |
DE69833556D1 (de) | 2006-04-27 |
NZ502720A (en) | 2001-01-26 |
NO20000687L (no) | 2000-02-11 |
AP2000001768A0 (en) | 2000-03-31 |
PL338684A1 (en) | 2000-11-20 |
CA2300439A1 (fr) | 1999-02-18 |
FR2767334B1 (fr) | 1999-10-22 |
TR200000337T2 (tr) | 2000-09-21 |
NO20000687D0 (no) | 2000-02-11 |
WO1999007836A1 (fr) | 1999-02-18 |
CN1266456A (zh) | 2000-09-13 |
EP1003844B1 (fr) | 2006-02-22 |
US6413754B1 (en) | 2002-07-02 |
HUP0004606A2 (hu) | 2001-04-28 |
YU7500A (sh) | 2003-07-07 |
ATE318302T1 (de) | 2006-03-15 |
BR9811169A (pt) | 2000-07-25 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Brewster et al. | An osmosensing signal transduction pathway in yeast | |
Muzi-Falconi et al. | Orp1, a member of the Cdc18/Cdc6 family of S-phase regulators, is homologous to a component of the origin recognition complex. | |
Homesley et al. | Mcm10 and the MCM2–7 complex interact to initiate DNA synthesis and to release replication factors from origins | |
Brenner et al. | CDC33 encodes mRNA cap-binding protein eIF-4E of Saccharomyces cerevisiae | |
Arai et al. | Cloning of a human homolog of the yeast OGG1 gene that is involved in the repair of oxidative DNA damage | |
Le et al. | Two new S‐phase‐specific genes from Saccharomyces cerevisiae | |
Tu et al. | Multiple regulatory domains on the Byr2 protein kinase | |
Krüger et al. | The transcriptional activator GvpE for the halobacterial gas vesicle genes resembles a basic region leucine-zipper regulatory protein | |
Chen et al. | Characterization of TRZ1, a yeast homolog of the human candidate prostate cancer susceptibility gene ELAC2 encoding tRNase Z | |
Naumovski et al. | Analysis of the essential and excision repair functions of the RAD3 gene of Saccharomyces cerevisiae by mutagenesis | |
Cross et al. | Molecular evolution allows bypass of the requirement for activation loop phosphorylation of the Cdc28 cyclin-dependent kinase | |
Chen et al. | Saccharomyces cerevisiae Mpt5p interacts with Sst2p and plays roles in pheromone sensitivity and recovery from pheromone arrest | |
Vivier et al. | Coregulation of starch degradation and dimorphism in the yeast Saccharomyces cerevisiae | |
Wang et al. | Stage-specific activity of the Leishmania major CRK3 kinase and functional rescue of a Schizosaccharomyces pombe cdc2 mutant | |
Hoffmann et al. | The WD protein Cpc2p is required for repression of Gcn4 protein activity in yeast in the absence of amino‐acid starvation | |
Gupta-Rossi et al. | Specific over-expression of deltex and a new Kelch-like protein in human germinal center B cells | |
EA004710B1 (ru) | Протеинкиназа candida albicans, обладающая активностью фосфорилирования циклинзависимых протеинкиназ, и способы ее применения | |
US20050164393A1 (en) | Method for identifying genes encoding signal sequences | |
JPH10512447A (ja) | ナンセンス媒介によるmRNAの崩壊機能非存在下における異種ポリペプチドの産生 | |
Lamond et al. | Yeast splicing factors and genetic strategies for their analysis | |
Takeda et al. | A novel Dictyostelium Cdk8 is required for aggregation, but is dispensable for growth | |
Wang et al. | Isolation and sequence analysis of a Caenorhabditis elegans cDNA which encodes a 14-3-3 homologue | |
Tate et al. | The identification of the inhibitory γ-subunits of the type 6 retinal cyclic guanosine monophosphate phosphodiesterase in non-retinal tissues: Differential processing of mRNA transcripts | |
Chiannilkulchai et al. | Biochemical and genetic dissection of the Saccharomyces cerevisiae RNA polymerase C53 subunit through the analysis of a mitochondrially mis-sorted mutant construct | |
Nguyen-Yue et al. | The isolation, localization and characterization of the QM homolog in Drosophila melanogaster |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU |