EA002387B1 - Способ получения ассоциированной паротитно-коревой вакцины - Google Patents

Способ получения ассоциированной паротитно-коревой вакцины Download PDF

Info

Publication number
EA002387B1
EA002387B1 EA200001204A EA200001204A EA002387B1 EA 002387 B1 EA002387 B1 EA 002387B1 EA 200001204 A EA200001204 A EA 200001204A EA 200001204 A EA200001204 A EA 200001204A EA 002387 B1 EA002387 B1 EA 002387B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
mumps
measles
carried out
incubation
component
Prior art date
Application number
EA200001204A
Other languages
English (en)
Other versions
EA200001204A1 (ru
Inventor
Игорь Закванович Зайцев
Владимир Михайлович Колышкин
Елена Серафимовна Сидоренко
Владимир Федорович Попов
Надежда Васильевна Юминова
Игорь Викторович Красильников
Людмила Васильевна Дорофеева
Original Assignee
Унитарное Государственное "Московское Предприятие По Производству Бактерийных Препаратов"
Игорь Закванович Зайцев
Владимир Михайлович Колышкин
Елена Серафимовна Сидоренко
Владимир Федорович Попов
Надежда Васильевна Юминова
Игорь Викторович Красильников
Людмила Васильевна Дорофеева
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=20231530&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=EA002387(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Унитарное Государственное "Московское Предприятие По Производству Бактерийных Препаратов", Игорь Закванович Зайцев, Владимир Михайлович Колышкин, Елена Серафимовна Сидоренко, Владимир Федорович Попов, Надежда Васильевна Юминова, Игорь Викторович Красильников, Людмила Васильевна Дорофеева filed Critical Унитарное Государственное "Московское Предприятие По Производству Бактерийных Препаратов"
Publication of EA200001204A1 publication Critical patent/EA200001204A1/ru
Publication of EA002387B1 publication Critical patent/EA002387B1/ru

Links

Landscapes

  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

Назначение: производство вакцин. Сущность: трипсинизированные первичные культуры клеток эмбрионов перепелов заражают раздельно штаммами вирусов эпидемического паротита (Л-3) и кори (Л-16). Затем проводят инкубирование в ростовой среде в присутствии антибиотика и ростовых протеинов и отмывку клеток поддерживающей средой не менее 6 раз для каждого компонента. После этого проводят дальнейшее инкубирование и сбор вируссодержащей жидкости, в которую добавляют стабилизатор. Приготовленные жидкие монокомпоненты замораживают и хранят до окончания контролей. Перед расфасовкой монокомпоненты смешивают с соблюдением определенных пропорций для получения ассоциированной вакцины с заданными концентрациями компонентов эпидемического паротита и кори.

Description

Способ относится к области биотехнологии, а именно к производству вакцин.
Известен способ получения ассоциированной паротитно-коревой вакцины, включающий заражение штаммами вирусов эпидемического паротита и кори первичной культуры клеток эмбрионов перепелов с инкубированием в ростовой среде, содержащей ростовые протеины, последующую отмывку клеток, дальнейшее инкубирование и сбор вируссодержащей жидкости (см. авт. свид. СССР 701147, А 61 К 39/165, 13.06.77).
Недостатками этого способа являются непрогнозируемый разброс значений прививочных доз эпидемического паротита и кори в препарате, невозможность получения препарата с заданными концентрациями, высокое содержание белка, невозможность получения моновакцин.
Устранение указанных недостатков достигается тем, что вирусы эпидемического паротита и кори инкубируют раздельно в присутствии антибиотика, собранную вируссодержащую жидкость подвергают осветляющей фильтрации, затем добавляют стабилизатор и объединяют в пропорциях, соответствующих конечным прививочным дозам паротитного компонента - не ниже 20000 ТЦД 50/0,5 мл, коревого не ниже 1000 ТЦД 50/0,5 мл.
Сущность способа заключается в следующем.
Трипсинизированные первичные культуры клеток эмбрионов перепелов заражают штаммами вирусов эпидемического паротита и кори. В качестве вакцинного штамма вируса эпидемического паротита используют штамм Ленинград-3 (Л-3), в качестве вакцинного штамма вируса кори используют штамм Ленинград-16 (Л16). Множественность заражения для штамма вируса эпидемического паротита составляет 0,00001-0,001 ТЦД/50 на клетку, для штамма вируса кори 0,001-0,01 ТЦД/50 на клетку соответственно. Затем проводят инкубирование в ростовой среде в присутствии антибиотика и ростовых протеинов при температуре от (+34) до (+36)°С в течение 2-4 суток для эпидемического паротита и в течение 4-8 суток для кори. Затем из роллерных бутылей или стационарных условий (матрасов) удаляют ростовую среду и осуществляют отмывку клеток поддерживающей средой не менее 6 раз как для паротитного, так и для коревого компонентов, что позволяет получить ассоциированную вакцину с количеством белка (протеинов) не более 8 мкг/дозу. После этого проводят дальнейшее инкубирование и сбор вируссодержащей жидкости, которую подвергают осветляющей фильтрации, затем добавляют стабилизатор. В качестве стабилизаторов используют ЛС-18 с желатином или сорбит с желатозой. А также в качестве одного из стабилизаторов вместо желатина или желатозы может быть использован полиглюкин или поли-Ы-винилпирролидон, который применяют с молекулярной массой не менее 12 кД с целью стандартизации препаратов. Приготовленные жидкие монокомпонентные препараты замораживают и хранят до окончания контролей.
Компоненты эпидемического паротита и кори объединяют в пропорциях, соответствующих конечным прививочным дозам паротитного компонента - не ниже 20000 ТЦД 50/0,5 мл, а коревого - не ниже 1 000 ТЦД 50/0,5 мл.
Ассоциированную вакцину можно получать с заданными концентрациями компонентов, которые определяют по формуле 0=Τ2/ΤγΝ, где О - объем каждого исходного компонента, л;
Т1 - исходная активность компонента, ТЦД 50/0,5 мл;
Т2 - заданная активность компонента в ассоциированной вакцине, ТЦД 50/0,5 мл;
N - заданный объем ассоциированного препарата, л.
Жидкую паротитно-коревую вакцину разливают в ампулы или флаконы с последующим замораживанием и лиофилизацией.
Замораживание в процессе лиофилизации препарата осуществляют до температуры (-30) (-55)°С в течение 3-6 ч. Затем в процессе лиофилизации вакцину высушивают при температуре от (-17) до (-28)°С в течение 24-60 ч с последующим нагревом до температуры (+22) (+28)°С в течение 8-14 ч.
Пример 1.
Свежеприготовленную суспензию первичной культуры клеток эмбрионов перепелов в среде 199 разливают в одноразовые роллерные бутыли по 200 тыс. клеток на 1 см2 поверхности и заражают вирусом эпидемического паротита (штамм Л-3) с множественностью заражения 0,00001 ТЦД/50 на клетку во взвесь. Аналогичную операцию проводят для вируса кори (штамм Л-16) с множественностью заражения 0,008 ТЦД/50 на клетку во взвесь. Культуры инкубируют в ростовой среде, содержащей 10% сыворотки крупного рогатого скота или телячью, или эмбриональную сыворотку, а также антибиотик - гентамицина сульфат в концентрации 100 ед/мл - и инкубируют при температуре +35,2°С для эпидемического паротита в течение 72 ч, для кори - в течение 96 ч. После этого проводится шестикратное отмывание как для одного, так и для другого компонента. На четвертые сутки от момента заражения начинается сбор вируссодержащей жидкости для эпидемического паротита, а на восьмые сутки - для кори. После получения результатов контроля на стерильность и специфическую активность индивидуальные вирусные сборы каждого компонента объединяются отдельно друг от друга и подвергаются осветляющей фильтрации. Проводится контроль на остаточный белок, отсутствие интактных клеток и стерильность. Затем добавляется стабилизатор, и еще раз проводится контроль на специфическую активность и стерильность. Монопрепараты объединяются непосредственно перед лиофилизацией в соответствующих пропорциях для получения ассоциированной вакцины.
Для получения ассоциированной паротитно-коревой вакцины в объеме 6,0 л при исходной активности паротитного компонента (Т) 141300 ТЦД 50/0,5 мл и исходной активности коревого компонента (Т) - 35480 ТЦД 50/0,5 мл берут 3,0 л паротитного компонента и 3,0 л коревого компонента и объединяют их. В результате объединения получилось 6,0 л ассоциированной вакцины с конечной концентрацией паротитного компонента - 70650 ТЦД 50/0,5 мл и коревого компонента - 17740 ТЦД 50/0,5 мл.
Разлитый в ампулы жидкий полуфабрикат паротитно-коревой вакцины со стабилизатором ЛС-18 в процессе лиофилизации замораживают на полке при температуре ниже -35°С в течение 3 ч, вакуумируют при той же температуре. Затем полки нагревают до -20°С. Сублимация (высушивание) проводится при температуре (-20) (-22)°С в течение 45 ч. После этого полки нагревают до +25°С в течение 10 ч. Досушивание проводят при температуре полки от (+25) до (+28)°С в течение 8 ч.
Пример 2.
Свежеприготовленную суспензию первичной культуры клеток эмбрионов перепелов в среде 199 разливают в стационарные условия (матрасы) по 200 тыс. клеток на 1 см2 поверхности и заражают вирусом эпидемического паротита (штамм Л-3) с множественностью заражения 0,00009 ТЦД/50 на клетку во взвесь. Аналогичную операцию проводят для вируса кори (штамм Л-16) с множественностью заражения 0,0095 ТЦД/50 на клетку во взвесь. Культуры инкубируют в ростовой среде, содержащей 10% сыворотки крупного рогатого скота или телячью, или эмбриональную сыворотку, а также антибиотик - гентамицина сульфат в концентрации 100 ед/мл - и инкубируют при температуре +34,5°С для эпидемического паротита в течение 60 ч, для кори - в течение 96 ч. После этого проводится шестикратное отмывание как для одного, так и для другого компонента. На третьи сутки от момента заражения начинается сбор вируссодержащей жидкости для эпидемического паротита и на восьмые сутки - для кори. После получения результатов контроля на стерильность и специфическую активность индивидуальные вирусные сборы каждого компонента объединяются отдельно друг от друга и подвергаются осветляющей фильтрации. Проводится контроль на остаточный белок, отсутствие интактных клеток и стерильность. Затем добавляется стабилизатор и еще раз проводится контроль на специфическую активность и стерильность. Монопрепараты объединяются непосредственно перед лиофилизацией в соответст вующих пропорциях для получения ассоциированной вакцины.
Для получения ассоциированной паротитно-коревой вакцины в объеме 7 л (Ν - здесь и далее обозначение параметра согласно формуле, приведенной на стр. 2) с конечной активностью паротитного компонента (Т) - 100000 ТЦД 50/0,5 мл и коревого компонента (Т) 10000 ТЦД 50/0,5 мл рассчитывают объемы каждого компонента по формуле, приведенной на стр. 2, исходя из известной активности монопрепаратов.
Исходная активность паротитного компонента (Т) - 141300 ТЦД 50/0,5 мл.
Исходная активность коревого компонента (Т) - 35480 ТЦД 50/0,5 мл.
Подставляя в формулу известные значения, получаем необходимые для сведения объемы монопрепаратов:
0^=(100000/141300)-7=4.95 л (~5,0 л) Ок=(10000/35480)-7=1,97 л (~2,0 л)
А именно, паротитного компонента необходимо 5 л, а коревого - 2 л, которые затем объединяют перед лиофилизацией.
Разлитый в ампулы жидкий полуфабрикат паротитно-коревой вакцины со стабилизатором - сорбит с желатозой - в процессе лиофилизации замораживают на полке при температуре ниже -30°С в течение 4 ч, вакуумируюг при той же температуре. Затем полки нагревают до -27°С. Сублимация (высушивание) проводится при температуре (-25) - (-28)°С в течение 52 ч. После этого полки нагревают до +25°С в течение 8 ч. Досушивание проводят при температуре полки от (+25) до (+28)°С в течение 11 ч.
Настоящий способ позволяет увеличить урожайность вирусов эпидемического паротита и кори с единицы площади поверхности. Объединение индивидуальных вирусных сборов с последующей осветляющей фильтрацией стандартизирует вирусный материал по специфической активности и остаточному белку при гарантированном отсутствии интактных клеток субстрата. Неиспользованные в ассоциации материалы могут быть применены для получения монопрепаратов. Способ также позволяет уменьшить поствакцинальные осложнения, такие как аллергические проявления и реактогенность, за счет снижения содержания белка в препарате.

Claims (14)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Способ получения ассоциированной паротитно-коревой вакцины, включающий заражение штаммами вирусов эпидемического паротита и кори первичной культуры клеток эмбрионов перепелов с инкубированием в ростовой среде, содержащей ростовые протеины, последующую отмывку клеток, дальнейшее инкубирование и сбор вируссодержащей жидкости, отличающийся тем, что вирусы эпидемического паротита и кори инкубируют в присутствии антибиотика раздельно, собранную вируссодержащую жидкость подвергают осветляющей фильтрации, затем добавляют стабилизатор и объединяют в пропорциях, соответствующих конечным прививочным дозам паротитного компонента не ниже 20000 ТЦД 50/0,5 мл, коревого - не ниже 1000 ТЦД 50/0,5 мл, затем препарат лиофилизируют.
  2. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве вакцинных штаммов используют для вируса эпидемического паротита штамм Л-3, для вируса кори - штамм Л-16.
  3. 3. Способ по п.2, отличающийся тем, что множественность заражения для штамма вируса эпидемического паротита составляет 0,000010,001 ТЦД/50 на клетку, для штамма вируса кори - 0,001-0,01 ТЦД/50 на клетку.
  4. 4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что инкубирование проводят при температуре от +34 до +36°С.
  5. 5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что инкубирование проводят в роллерных установках.
  6. 6. Способ по п.1, отличающийся тем, что инкубирование проводят в стационарных условиях.
  7. 7. Способ по п. 1, отличающийся тем, что отмывку клеток поддерживающей средой осуществляют не менее 6 раз как для паротитного, так и для коревого компонентов.
  8. 8. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве стабилизаторов используют ЛС-18 с желатином или сорбит с желатозой.
  9. 9. Способ по п.8, отличающийся тем, что в качестве одного из стабилизаторов вместо желатина или желатозы используют полиглюкин или поли-Ы-винилпирролидон.
  10. 10. Способ по п.8 или 9, отличающийся тем, что поли-Ы-винилпирролидон используют с молекулярной массой не менее 12 кД.
  11. 11. Способ по п. 1 , отличающийся тем, что количество протеина в ассоцииированной вакцине не превышает 8 мкг/дозу.
  12. 12. Способ по п.1, отличающийся тем , что замораживание в процессе лиофилизации проводят при температуре в пределах Т=(-30) -( -55)°С в течение 3-6 ч.
  13. 13. Способ по п. 1 , отличающийся тем, что высушивание в процессе лиофилизации проводят при температуре от Т=(-17) - (-28)°С в течение 24-60 ч с последующим нагревом до температуры Т=(+22) - (+28)°С в течение 8-14 ч.
  14. 14. Способ по п. 1 , отличающийся тем, что ассоциированную вакцину получают с заданными концентрациями компонентов, которые определяют по формуле:
    0=Τ2γΝ, где С - объем каждого исходного компонента, л;
    Τι - исходная активность компонента, в ТЦД 50/0,5 мл;
    Т2 - заданная активность компонента в ассоциированном препарате, в ТЦД 50/0,5 мл;
    N - заданный объем ассоциированного препарата, л.
EA200001204A 2000-03-10 2000-12-19 Способ получения ассоциированной паротитно-коревой вакцины EA002387B1 (ru)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2000105581A RU2158134C1 (ru) 2000-03-10 2000-03-10 Способ получения ассоциированной паротитно-коревой вакцины

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA200001204A1 EA200001204A1 (ru) 2001-10-22
EA002387B1 true EA002387B1 (ru) 2002-04-25

Family

ID=20231530

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA200001204A EA002387B1 (ru) 2000-03-10 2000-12-19 Способ получения ассоциированной паротитно-коревой вакцины

Country Status (2)

Country Link
EA (1) EA002387B1 (ru)
RU (1) RU2158134C1 (ru)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1894995B1 (de) 2005-04-28 2010-10-27 Vasilieva, Elena Aleksandrovna Irilis-biopräparation auf der basis von darin enthaltenen bacillus-bakterienstämmen bacillus subtilis und bacillus licheniformis
RU2657801C1 (ru) * 2016-12-22 2018-06-15 Федеральное государственное унитарное предприятие "Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам "Микроген" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГУП "НПО "Микроген" Минздрава России) Комбинированная вакцина для иммунопрофилактики кори, эпидемического паротита и краснухи

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2115695A (en) * 1982-02-24 1983-09-14 Green Cross Corp Stabilizing live mumps vaccine composition with albumin or gelatin
EP0295043A2 (en) * 1987-06-08 1988-12-14 The Kitasato Institute Stabilized live attenuated vaccine and its production
RU2144369C1 (ru) * 1998-12-28 2000-01-20 Трифонов Валерий Дмитриевич Живая культуральная коревая вакцина

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2115695A (en) * 1982-02-24 1983-09-14 Green Cross Corp Stabilizing live mumps vaccine composition with albumin or gelatin
EP0295043A2 (en) * 1987-06-08 1988-12-14 The Kitasato Institute Stabilized live attenuated vaccine and its production
RU2144369C1 (ru) * 1998-12-28 2000-01-20 Трифонов Валерий Дмитриевич Живая культуральная коревая вакцина

Also Published As

Publication number Publication date
EA200001204A1 (ru) 2001-10-22
RU2158134C1 (ru) 2000-10-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10329536B2 (en) Methods for producing an active constituent of a pharmaceutical or a diagnostic agent in an MDCK cell suspension culture
AU2002338666B2 (en) Multiplication of viruses in a cell culture
CA2301000C (en) An attenuated japanese encephalitis virus adapted to vero cell and a japanese encephalitis vaccine
RU2706693C2 (ru) Вирусная вакцина и способы ее производства
CN101352570B (zh) 二倍体细胞狂犬疫苗及纯化狂犬疫苗的制备方法
WO2011134163A1 (zh) 一种h9n2亚型禽流感灭活疫苗的制备方法及产品
EA002387B1 (ru) Способ получения ассоциированной паротитно-коревой вакцины
KR20120027381A (ko) 일본뇌염 백신 및 그것의 제조 방법
McKimm-Breschkin et al. Conditions required for induction of interferon by rotaviruses and for their sensitivity to its action
CN108261543B (zh) 传代细胞源nd、ib、ai三联灭活疫苗的制备方法及其应用
RU2420314C1 (ru) Способ получения живой культуральной вакцины против вируса гриппа
US3819482A (en) Method of preparing high yields of double-stranded ribonucleic acid
Aunins et al. Vaccine production
RU2212895C2 (ru) Вакцина против ящура типа о и способ ее изготовления
US8426124B2 (en) Two-step temperature profile for the propagation of viruses
EP0013188A2 (en) Parainfluenza virus vaccine and its preparation
RU2077338C1 (ru) Способ изготовления антирабической вакцины инактивированной культуральной
RU2538617C2 (ru) Способ получения антирабической вакцины
CN121154615B (zh) 水黄皮素在制备抗塞内卡病毒药物中的应用
RU2330885C2 (ru) Способ получения живой культуральной вакцины против вируса гриппа
RU2537183C2 (ru) Способ получения инактивированной антирабической вакцины при безопорном выращивании клеток и репродукции в них вируса в укороченном цикле культивирования
TWI690592B (zh) 日本腦炎疫苗及其製備方法
SU1317021A1 (ru) Штамм диплоидных клеток кожи и мышц эмбриона человека,используемый дл культивировани вирусов
RU2129442C1 (ru) Способ получения вакцины против чумы плотоядных
CN121154615A (zh) 水黄皮素在制备抗塞内卡病毒药物中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PC4A Registration of transfer of a eurasian patent by assignment
PD4A Registration of transfer of a eurasian patent in accordance with the succession in title
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU