DK3128325T3 - Fremgangsmåde til bestemmelse af en koncentration af epitheliale celler i en blodprøve eller aspirat prøve - Google Patents
Fremgangsmåde til bestemmelse af en koncentration af epitheliale celler i en blodprøve eller aspirat prøve Download PDFInfo
- Publication number
- DK3128325T3 DK3128325T3 DK15186743.9T DK15186743T DK3128325T3 DK 3128325 T3 DK3128325 T3 DK 3128325T3 DK 15186743 T DK15186743 T DK 15186743T DK 3128325 T3 DK3128325 T3 DK 3128325T3
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- cells
- antibodies
- antibody
- hours
- antibody fragments
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56966—Animal cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
- G01N2333/705—Assays involving receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- G01N2333/70596—Molecules with a "CD"-designation not provided for elsewhere in G01N2333/705
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Claims (14)
1. Fremgangsmåde til bestemmelse af en koncentration af epitheliale celler i en blodprøve eller aspirat prøve, der stammer fra et menneske eller pattedyr og er tilsat et koagulationshæmmende middel, med følgende trin: a) lysering af de i blodprøven eller den aspirate prøve indeholdte erythrocyter ved tilsætning af en buffer, der bevirker en lysering af erythrocyterne, isolering af de celler, der herved ikke er lyseret, og suspension af de isolerede celler i en buffer, hvorved blodprøven eller den aspirate prøve lagres i i det mindste 24 timer ved en temperatur mellem 0 og 40 °C, før erythrocyterne lyseres, b) tilsætning af antistoffer, antistoffragmenter eller antistofmimetika, som hver bærer i det mindste en markering, og som hver især er rettet mod det epitheliale celleadhæsionsmolekyle (EpCAM) og/eller i det mindste et andet antigen, der er specifikt for epitheliale celler, til en cellesuspension, der er opnået ved trin a), eller en ved isolering opnået delmængde af denne cellesuspension, blanding af antistofferne, antistoffragmenterne eller antistofmimetika og cellesuspensionen eller delmængden og inkubation af en derved opnået blanding i i det mindste en tid, der er nødvendig til opnåelse af en aftagende bindingsrate af en binding af antistofferne, antistoffragmenterne eller antistofmimetika til cellerne, hvorved inkubationen sker i i det mindste 6 timer, c) bestemmelse af antallet af ved hjælp af en binding af antistofferne, antistoffragmenterne eller antistofmimetika markerede celler i den ved trin b) opnåede blanding og d) beregning af koncentrationen af de markerede celler, hvis antal blev bestemt ved trin c), i blodprøven eller den aspirate prøve.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, hvorved der mellem trinene a) og b) gennemføres følgende yderligere trin: a1) isolering af i det mindste en delmængde eller en yderligere delmængde af den ved trin a) opnåede cellesuspension, a2) tilsætning af de antistoffer, antistoffragmenter eller antistofmimetika, der hver bærer i det mindste en markering, og som hver især er rettet mod det epitheliale celleadhæsionsmolekyle (EpCAM) og/eller i det mindste et andet antigen, der er specifikt for epitheliale celler, til den yderligere delmængde i en sådan mængde, at deres koncentration i den yderligere delmængde er identisk med koncentrationen af antistofferne, antistoffragmenterne eller antistofmimetika i cellesuspensionen eller delmængden ifølge trin b), blanding af antistofferne, antistoffragmenterne eller antistofmimetika og den yderligere delmængde og inkubation af en derved opnået blanding ved en forudfastsat temperatur og a3) fortløbende eller gentagen bestemmelse af en mængde af antistoffer, antistoffragmenter eller antistofmimetika, som er bundet til celler, der er indeholdt i den yderligere delmængde, i afhængighed af tiden fra blandingen ifølge trin a2) at regne, herudfra konstatering af en bindingsrate og bestemmelse af en tid, som er nødvendig til opnåelse af en aftagende bindingsrate for bindingen af antistofferne, antistoffragmenterne eller antistofmimetika til disse celler, hvorved inkubationen ved trin b) sker ved den forudfastsatte temperatur, hvorved tiden ifølge trin b) er valgt sådan, at den er i det mindste lige så lang som tiden bestemt ved trin a3).
3. Fremgangsmåde ifølge krav 2, hvorved den forudfastsatte temperatur er en temperatur i området fra 0 til 30 °C, især 0 til 20 °C, især 8 til 15 °C.
4. Fremgangsmåde ifølge et af de foregående krav, hvorved inkubationen ifølge trin b) sker i i det mindste 7 timer, i det mindste 8 timer, i det mindste 10 timer, i det mindste 12 timer, i det mindste 14 timer, i det mindste 16 timer, i det mindste 18 timer, i det mindste 20 timer, i det mindste 22 timer, i det mindste 24 timer, i det mindste 25 timer eller i det mindste 30 timer.
5. Fremgangsmåde ifølge et af de foregående krav, hvorved markeringen er en fluorescensmarkering ved hjælp af en fluorochrom, en farvemarkering ved hjælp af en chromophor eller en indirekte detekterbar markering ved hjælp af biotin, avidin, streptavidin eller et andet affinitets-tag, epitop-tag eller protein-tag.
6. Fremgangsmåde ifølge et af de foregående krav, hvorved bestemmelsen af mængden af bundne antistoffer, antistoffragmenter eller antistofmimetika ifølge trin a3) og/eller bestemmelsen af antallet af celler, der er markeret ved en binding af antistofferne, antistoffragmenterne eller antistofmimetika, ifølge trin c) sker ved hjælp laserscanningcytometri, fluorescensmikroskopi eller lysmikroskopi.
7. Fremgangsmåde ifølge krav 6, hvorved bestemmelsen af mængden af bundne antistoffer, antistoffragmenter eller antistofmimetika og/eller bestemmelsen af antallet af markerede celler sker ved hjælp af fluorescensmikroskopi eller lysmikroskopi, og der til identifikationen af cellerne anvendes en software til billedgenkendelse.
8. Fremgangsmåde ifølge krav 6 eller 7, hvorved markeringen er en fluorescensmarkering, og der ved laserscanningcytometrien eller fluorescensmikroskopien for hver af cellerne dynamisk bestemmes en samlet fluorescens pr. celle og en baggrundsfluorescens for denne celle, således at der for cellerne fås ækvivalente fluorescensværdier hver gang som differens mellem den for den respektive celle konstaterede samlede fluorescens og den for denne celle konstaterede baggrundsfluorescens.
9. Fremgangsmåde ifølge et af de foregående krav, hvorved isoleringen ifølge trin a) sker ved centrifugering, sedimentation eller filtration.
10. Fremgangsmåde ifølge et af de foregående krav, hvorved der til cellesuspensionen, delmængden eller den yderligere delmængde af cellesuspensionen hver gang før tilsætningen af antistoffer, antistoffragmenter eller antistofmimetika ifølge trinene b) og a2), der hver bærer i det mindste en markering, tilsættes en blokeringsreagens til blokering af ikke-specifikke bindingssteder og/eller af Fc-receptorer og blandes og inkuberes med cellesuspensionen, delmængden eller den yderligere delmængde af cellesuspensionen.
11. Fremgangsmåde ifølge et af de foregående krav, hvorved der ved intet af trinene anvendes en detergent, og/eller ved intet af trinene sker en fiksering af cellerne.
12. Fremgangsmåde ifølge et af de foregående krav, hvorved samtlige trin af fremgangsmåden eller i det mindste trinene b) og c) eller i det mindste trinene b), a2), a3) og c) gennemføres automatiseret af en dertil konstrueret automat.
13. Fremgangsmåde ifølge et af de foregående krav, hvorved der ved trin a1) isoleres flere delmængder, hvorved der ved trin a2) til hver af delmængderne hver gang tilsættes en forskellig mængde af antistofferne, antistoffragmenterne eller antistofmimetika og blandes med den respektive delmængde, hvorved der ved trin a3) for hver af delmængderne bestemmes den tid, der er nødvendig til opnåelse af den aftagende bindingsrate, hvorved der til gennemførelsen af trin b) derefter vælges den mængde af antistofferne, antistoffragmenterne eller antistofmimetika, ved hvilken den aftagende bindingsrate opnås i en ønsket tid.
14. Fremgangsmåde ifølge et af de foregående krav, hvorved det øvrige for epitheliale celler specifikke antigen er udvalgt fra den følgende gruppe: androgenreceptor, epithelial growth factor receptor (EGF receptor), estrogen receptor, progesteron receptor, prostataspecifikt antigen (PSA), prostataspecifikt membranantigen (PSMA), programmed death ligand 1 (PDL-1), Melan A, B7-H3, vascular endothelial growth factor receptor (VEGF receptor), Ki67, insulin-like growth factor receptor (IGF receptor) og her2neu.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP15180229 | 2015-08-07 | ||
EP15184733 | 2015-09-10 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
DK3128325T3 true DK3128325T3 (da) | 2019-04-15 |
Family
ID=54196908
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
DK15186743.9T DK3128325T3 (da) | 2015-08-07 | 2015-09-24 | Fremgangsmåde til bestemmelse af en koncentration af epitheliale celler i en blodprøve eller aspirat prøve |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11029311B2 (da) |
EP (1) | EP3128325B1 (da) |
JP (1) | JP6876676B2 (da) |
CN (1) | CN108139400B (da) |
DK (1) | DK3128325T3 (da) |
ES (1) | ES2718689T3 (da) |
LT (1) | LT3128325T (da) |
PL (1) | PL3128325T3 (da) |
PT (1) | PT3128325T (da) |
SI (1) | SI3128325T1 (da) |
WO (1) | WO2017025409A1 (da) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112710833B (zh) * | 2021-01-13 | 2023-01-31 | 上海交通大学 | 基于微管流控芯片的细胞捕获方法 |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20030082632A1 (en) * | 2001-10-25 | 2003-05-01 | Cytoprint, Inc. | Assay method and apparatus |
US7615358B2 (en) | 2006-04-20 | 2009-11-10 | Ulrich Pachmann | Method for determining the concentration of vital epithelial tumor cells in a body fluid |
US8497361B2 (en) * | 2010-08-23 | 2013-07-30 | Sri International | Topoisomerase binding probe and method of use |
DE102012213838A1 (de) * | 2012-08-03 | 2014-02-06 | Katharina Pachmann | Verfahren zur Kultivierung einer Subpopulation zirkulierender epithelialer Tumorzellen aus einer Körperflüssigkeit |
US9671405B2 (en) | 2012-09-19 | 2017-06-06 | Cornell University | Identifying taxane sensitivity in prostate cancer patients |
CN103808898A (zh) * | 2012-11-13 | 2014-05-21 | 刘一江 | 测试吐温80-edta二钠盐表面活性剂除垢性能的方法 |
CN103472240B (zh) * | 2013-08-23 | 2016-03-23 | 上海北加生化试剂有限公司 | 人血脂(血清/血浆)质量管理参比试剂盒及制备方法 |
-
2015
- 2015-09-24 PL PL15186743T patent/PL3128325T3/pl unknown
- 2015-09-24 DK DK15186743.9T patent/DK3128325T3/da active
- 2015-09-24 EP EP15186743.9A patent/EP3128325B1/de active Active
- 2015-09-24 SI SI201530682T patent/SI3128325T1/sl unknown
- 2015-09-24 LT LTEP15186743.9T patent/LT3128325T/lt unknown
- 2015-09-24 PT PT15186743T patent/PT3128325T/pt unknown
- 2015-09-24 ES ES15186743T patent/ES2718689T3/es active Active
-
2016
- 2016-08-03 WO PCT/EP2016/068541 patent/WO2017025409A1/de active Application Filing
- 2016-08-03 CN CN201680046614.0A patent/CN108139400B/zh active Active
- 2016-08-03 US US15/751,071 patent/US11029311B2/en active Active
- 2016-08-03 JP JP2018506271A patent/JP6876676B2/ja active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2018529085A (ja) | 2018-10-04 |
EP3128325B1 (de) | 2019-01-02 |
CN108139400A (zh) | 2018-06-08 |
ES2718689T3 (es) | 2019-07-03 |
EP3128325A1 (de) | 2017-02-08 |
US20180231549A1 (en) | 2018-08-16 |
PL3128325T3 (pl) | 2019-07-31 |
LT3128325T (lt) | 2019-04-10 |
WO2017025409A1 (de) | 2017-02-16 |
SI3128325T1 (sl) | 2019-05-31 |
CN108139400B (zh) | 2021-11-02 |
JP6876676B2 (ja) | 2021-05-26 |
US11029311B2 (en) | 2021-06-08 |
PT3128325T (pt) | 2019-04-24 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5619603B2 (ja) | 抗グリピカン3抗体を用いる肝癌細胞の検出法 | |
JP5916991B2 (ja) | 遺伝子異常細胞の解析方法 | |
JP7376021B2 (ja) | ヒト血液からのマイクロベシクルの分離方法及び分析方法 | |
JP2012168012A (ja) | 血管内皮障害を検査するための新規な検査方法および検査用キット | |
EP3602070B1 (en) | A rapid, on-demand heparin-induced thrombocytopenia functional assay | |
DK3128325T3 (da) | Fremgangsmåde til bestemmelse af en koncentration af epitheliale celler i en blodprøve eller aspirat prøve | |
JP6893639B2 (ja) | がんの判定方法、がんの判定のための装置及びコンピュータプログラム | |
JP2022148530A (ja) | 被検者における心血管疾患の発症リスクを判定する方法、被検者における血管石灰化を判定する方法、および検査キット | |
Nicolazzo et al. | Molecular characterization of circulating tumor cells to study Cancer Immunoevasion | |
DK2986985T3 (da) | Automatiserbar fremgangsmåde til identificering, kvantificering og diskriminering af specifikke signaler i forhold til uspecifikke signaler i en påvisningsmetode ved hjælp af detektor | |
JP6707505B2 (ja) | 腫瘍細胞を検出するためのステロイド受容体アッセイ | |
JP2017186262A (ja) | 検査用モノクローナル抗体及びこれを用いた検査キット | |
US7615358B2 (en) | Method for determining the concentration of vital epithelial tumor cells in a body fluid | |
AU2016364990B2 (en) | IgG subtyping assay for identifying transplantable tissue samples | |
CN110780075A (zh) | 生物体粒子测定用方法、装置及试剂盒、及非特异信号的检测方法 | |
Kurtulmuş et al. | Comparision of anti-HLA antibodies of kidney transplant candidates with chronic renal failure by two different methods: Flow-PRA and Luminex PRA | |
EP2318830A1 (en) | Ex vivo therapeutic screening of living bone marrow cells for multiple myeloma |