DK2520653T3 - Integration af gener i kromosomet af saccharopolyspora spinosa - Google Patents
Integration af gener i kromosomet af saccharopolyspora spinosa Download PDFInfo
- Publication number
- DK2520653T3 DK2520653T3 DK12166602.8T DK12166602T DK2520653T3 DK 2520653 T3 DK2520653 T3 DK 2520653T3 DK 12166602 T DK12166602 T DK 12166602T DK 2520653 T3 DK2520653 T3 DK 2520653T3
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- gene
- spinosyn
- spinosa
- polynucleotide
- host cell
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/60—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin
- C12P19/62—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin the hetero ring having eight or more ring members and only oxygen as ring hetero atoms, e.g. erythromycin, spiramycin, nystatin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
Landscapes
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Claims (24)
1. Fremgangsmåde til integration af et gen ved homolog rekombination i kromosomalt DNA af en S. spinosa-værtscelle, hvilken fremgangsmåde omfatter trinnene: a) at klone to genomiske DNA-fragmenter fra obsA-genet af obscurin-po-lyketidsynthase-genlocuset for at frembringe et integrationsplasmid, hvilket ene genomiske fragment klones opstrøms for et polynukleotid, der skal integreres, og det andet genomiske fragment klones nedstrøms for et polynukleotid, der skal integreres, og det resulterende ligerede DNA-fragment bliver integrationsplasmidet, hvilket obsA-gen af obscurin-poly-ketidsynthase-genlocuset ved integration afbrydes af polynukleotidet; b) at indføre plasmidet fra trin (a) ind i værtscellen; c) at integrere polynukleotidet i det native obsA-gen af obscurin-polyke-tidsynthase-genlocuset i genomet af værtscellen; og d) at screene værtscellen for tilstedeværelse af polynukleotidet.
2. Fremgangsmåden ifølge krav 1, hvor integration af polynukleotidet ikke påvirker vækst af S. spinosa eller en ønsket metabolisk karakteristik negativt.
3. Fremgangsmåde til stabil ekspression af et polynukleotid i en S. spinosa-værtscelle, der omfatter en fremgangsmåde ifølge krav 1 eller 2.
4. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 3, hvor polynukleotidet omfatter en genekspressionskassette, hvilken genekspressionskassette omfatter et gen, der koder for et spinosyn-biosyntetisk enzym og/eller et gen, der koder for et oxygen-bindende protein.
5. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 4, hvor polynukleotidet omfatter en selekterbar markør.
6. Genetisk modificeret S. spinosa-værtscelle, der omfatter et tilsat gen i det kromosomale DNA ved PSK-genet obsA for obscurin-polyketidsynthase-gen-klyngen eller et substitueret gen, som ikke er identisk med et nativt S. spinosa-gen.
7. Genetisk modificeret S. spinosa-værtscelle ifølge krav 6, hvor genet, som er blevet tilføjet, er identisk med et nativt S. spinosa-gen.
8. Fremgangsmåde til fremstilling af et proteinprodukt af et target-gen, hvilken fremgangsmåde omfatter at fremstille en S. sp/nosa-værtcelle, i hvilken et bestemt antal kopier af target-genet er integreret i genomet af S. spinosa ifølge trin (a) til (d) i krav 1, og at dyrke cellen i et egnet dyrkningsmedium i tilstrækkelig tid for target-genet til at blive udtrykt og for det nævnte protein til at blive produceret.
9. Fremgangsmåde til stabil ekspression af et target-gen, hvilken fremgangsmåde omfatter: at integrere en obscurin-polyketidsyntase-genklynge i et S. spinosa-genom som et neutralt site for integration og ekspression af et target-gen af interesse; at integrere target-genet af interesse i det neutrale site, hvorved obscu-rin-polyketidsynthase-genklyngen afbrydes; hvilket target-gen af interesse koder for et oxygen-bindende protein.
10. Fremgangsmåden ifølge krav 9, hvor endvidere obscurin-PKS-genet obsA af den integrerede klynge er stedet for integration.
11. Fremgangsmåde ifølge krav 9 eller 10, hvor target-genet omfatter en kodende sekvens, der er funktionelt forbundet til en heterolog promotor, der er heterolog til stamme af S. spinosa.
12. Fremgangsmåde ifølge ethvert af kravene 9 til 11, hvor target-genet omfatter en selekterbar markør.
13. Fremgangsmåde ifølge ethvert af kravene 9 til 12, hvor integrationen omfatter homolog rekombination.
14. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 9 til 13, hvilken fremgangsmåde yderligere omfatter: at dyrke en værtscelle under betingelser, der passer til fremstilling af spi-nosyn; og at opsamle spinosyn fra en kultur af værtscellen.
15. Ekspressionskonstrukt, der omfatter obscurin-polyketidsyntase-genet obsA, hvor obsA-genet omfatter et gen, der koder for et oxygen-bindingsprotein, og som er integreret deri.
16. Ekspressionskonstrukt ifølge krav 15, hvor ekspressionskonstruktet er egnet til integration i et værtscellegenom.
17. Anvendelse af et ekspressionskonstrukt ifølge krav 15 eller 16 i en fremgangsmåde til integration af et gen ved homolog rekombination i kromosomalt DNA af en S. spinosa-værtscelle til stabil genekspression.
18. Fremgangsmåde til fremstilling af en S. spinosa stamme, i hvilken et bestemt antal kopier af et udvalgt gen eller polynukleotid er integreret i et S. spi-nosa-genom, hvilken fremgangsmåde omfatter: a) at klone et obscurin-polyketid-syntase-genlocus til et mobilt element, i hvilket der er mindst ét markørgen, som er placeret inden i det mobile element; b) at integrere det mobile element i et obscurin-polyketidsyntase-genlo-cus i kromosomet eller episomet af den nævnte S. spinosa-stamme; c) at komplementere det nævnte mobile element med et funktionelt gen; d) at udtrykke det nævnte funktionelle gen af det mobile element; e) at udvælge stammen på et medium, der er selekterbart for det nævnte markørgen på en sådan måde, at der opnås en stamme, der indeholder et bestemt antal kopier af obscurin-polyketidsynthase-genlocuset; f) at udvinde den derved udvalgte stamme; og g) at integrere et polynukleotid i det specifikke antal kopier af obscurin-polyketid-synthase-genlocuset ved obscurin-PKS-genet obsA, hvorved obscurin-polyketidsynthase-genlocuset afbrydes.
19. Fremgangsmåden ifølge krav 18, hvor kromosomet eller episomet er indeholdt på et plasmid og indføres ved transformation.
20. Fremgangsmåden ifølge krav 18 eller 19, hvor det mobile element er et genetisk konstrukt.
21. Fremgangsmåde, celle eller konstrukt ifølge ethvert af de foregående krav, hvor integration af et polynukleotid ikke negativ påvirker produktion, vækst eller andre ønskede metaboliske egenskaber af spinosyn.
22. Anvendelse af en genetisk modificeret S. sp/nosa-værtcelle, der omfatter et tilsat, substitueret eller deleteret gen i det kromosomale DNA i obscurin-polyke-tidsyntase-genklyngen, i en fremgangsmåde til stabil genekspression.
23. Anvendelse ifølge krav 22, hvor værtscellen er som defineret i ethvert af kravene 6 eller 7.
24. Anvendelse ifølge krav 22 eller 23, hvor fremgangsmåden omfatter at dyrke værtscellen under betingelser, der passer for fremstilling af spinosyn; og for opsamling af spinosyn fra en kultur af værtscellen.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US13/100,202 US8741603B2 (en) | 2011-05-03 | 2011-05-03 | Enhancing spinosyn production with oxygen binding proteins |
| US13/100,220 US9404107B2 (en) | 2011-05-03 | 2011-05-03 | Integration of genes into the chromosome of Saccharopolyspora spinosa |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK2520653T3 true DK2520653T3 (da) | 2017-07-03 |
Family
ID=46001043
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK12166602.8T DK2520653T3 (da) | 2011-05-03 | 2012-05-03 | Integration af gener i kromosomet af saccharopolyspora spinosa |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (3) | EP2520653B1 (da) |
| DK (1) | DK2520653T3 (da) |
| ES (2) | ES2553079T3 (da) |
| HU (1) | HUE034838T2 (da) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB2513859B (en) * | 2013-05-07 | 2018-01-17 | Rotam Agrochem Int Co Ltd | Agrochemical composition, method for its preparation and the use thereof |
| CA3064619A1 (en) * | 2017-06-06 | 2018-12-13 | Zymergen Inc. | A high-throughput (htp) genomic engineering platform for improving saccharopolyspora spinosa |
| CN107418925B (zh) * | 2017-06-13 | 2020-03-31 | 国家粮食和物资储备局科学研究院 | 多杀菌素高产基因工程菌及其构建方法和应用 |
| CN110511990A (zh) * | 2019-09-12 | 2019-11-29 | 广东美立康生物科技有限公司 | 一种棘胸蛙蝌蚪变态期死亡风险预测技术 |
| CN110656093A (zh) * | 2019-10-12 | 2020-01-07 | 山东省农业科学院畜牧兽医研究所 | 一种新型沙门氏菌噬菌体库及其应用 |
| CN114773454B (zh) * | 2022-04-27 | 2022-11-29 | 广州蕊特生物科技有限公司 | 从马心中提取肌红蛋白的提取与纯化方法 |
Family Cites Families (29)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4302204A (en) | 1979-07-02 | 1981-11-24 | The Board Of Trustees Of Leland Stanford Junior University | Transfer and detection of nucleic acids |
| US4358535A (en) | 1980-12-08 | 1982-11-09 | Board Of Regents Of The University Of Washington | Specific DNA probes in diagnostic microbiology |
| FI63596C (fi) | 1981-10-16 | 1983-07-11 | Orion Yhtymae Oy | Mikrobdiagnostiskt foerfarande som grundar sig pao skiktshybridisering av nukleinsyror och vid foerfarandet anvaenda kombinationer av reagenser |
| US4994373A (en) | 1983-01-27 | 1991-02-19 | Enzo Biochem, Inc. | Method and structures employing chemically-labelled polynucleotide probes |
| US4683202A (en) | 1985-03-28 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying nucleic acid sequences |
| US4683195A (en) | 1986-01-30 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences |
| US4965188A (en) | 1986-08-22 | 1990-10-23 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences using a thermostable enzyme |
| EP0228075B1 (en) | 1986-01-03 | 1991-04-03 | Molecular Diagnostics, Inc. | Eucaryotic genomic dna dot-blot hybridization method |
| US4800159A (en) | 1986-02-07 | 1989-01-24 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences |
| US5202231A (en) | 1987-04-01 | 1993-04-13 | Drmanac Radoje T | Method of sequencing of genomes by hybridization of oligonucleotide probes |
| IL88095A0 (en) * | 1987-10-23 | 1989-06-30 | California Inst Of Techn | Dna sequences,proteins and gene preparations |
| US5049493A (en) | 1987-10-23 | 1991-09-17 | California Institute Of Technology | Enhancement of cell growth by expression of a cloned hemoglobin gene |
| US5030557A (en) | 1987-11-24 | 1991-07-09 | Ml Technology Venture | Means and method for enhancing nucleic acid hybridization |
| US5362634A (en) | 1989-10-30 | 1994-11-08 | Dowelanco | Process for producing A83543 compounds |
| PE5591A1 (es) | 1988-12-19 | 1991-02-15 | Lilly Co Eli | Un nuevo grupo de compuestos de macrolida |
| US5231020A (en) | 1989-03-30 | 1993-07-27 | Dna Plant Technology Corporation | Genetic engineering of novel plant phenotypes |
| US5034323A (en) | 1989-03-30 | 1991-07-23 | Dna Plant Technology Corporation | Genetic engineering of novel plant phenotypes |
| US5219726A (en) | 1989-06-02 | 1993-06-15 | The Salk Institute For Biological Studies | Physical mapping of complex genomes |
| CN1073483A (zh) | 1991-11-08 | 1993-06-23 | 道伊兰科公司 | 一种发酵杀虫剂化合物及其制备方法 |
| EP0688332B1 (en) | 1993-03-12 | 1997-03-26 | Dowelanco | New a83543 compounds and process for production thereof |
| US5770365A (en) | 1995-08-25 | 1998-06-23 | Tm Technologies, Inc. | Nucleic acid capture moieties |
| US6001981A (en) | 1996-06-13 | 1999-12-14 | Dow Agrosciences Llc | Synthetic modification of Spinosyn compounds |
| US6506559B1 (en) | 1997-12-23 | 2003-01-14 | Carnegie Institute Of Washington | Genetic inhibition by double-stranded RNA |
| US6143526A (en) * | 1998-03-09 | 2000-11-07 | Baltz; Richard H. | Biosynthetic genes for spinosyn insecticide production |
| ATE507299T1 (de) | 1998-04-08 | 2011-05-15 | Commw Scient Ind Res Org | Verfahren und mittel zum erhalt von veränderten phänotypen |
| US7285653B1 (en) * | 1999-08-27 | 2007-10-23 | Bayer Aktiengesellschaft | Nucleic acids which code for the enzyme activities of the spinosyn biosynthesis |
| AR033022A1 (es) * | 2001-03-30 | 2003-12-03 | Dow Agrosciences Llc | Genes biosinteticos para la produccion de insecticida de butenilespinosina |
| JP4765032B2 (ja) | 2002-02-19 | 2011-09-07 | ダウ・アグロサイエンス・エル・エル・シー | 新規スピノシンを産生するポリケチド合成酵素 |
| US7996021B2 (en) | 2002-06-28 | 2011-08-09 | Hewlett-Packard Development Company, L.P. | Location determination in a wireless communication network |
-
2012
- 2012-05-03 EP EP12166602.8A patent/EP2520653B1/en active Active
- 2012-05-03 EP EP15182915.7A patent/EP2998399A1/en not_active Withdrawn
- 2012-05-03 ES ES12166535.0T patent/ES2553079T3/es active Active
- 2012-05-03 ES ES12166602.8T patent/ES2625504T3/es active Active
- 2012-05-03 HU HUE12166602A patent/HUE034838T2/en unknown
- 2012-05-03 DK DK12166602.8T patent/DK2520653T3/da active
- 2012-05-03 EP EP12166535.0A patent/EP2520658B1/en active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP2520653A1 (en) | 2012-11-07 |
| EP2520658A3 (en) | 2013-02-20 |
| ES2553079T3 (es) | 2015-12-04 |
| EP2520658B1 (en) | 2015-10-07 |
| EP2998399A1 (en) | 2016-03-23 |
| HUE034838T2 (en) | 2018-03-28 |
| EP2520658A2 (en) | 2012-11-07 |
| ES2625504T3 (es) | 2017-07-19 |
| EP2520653B1 (en) | 2017-03-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK2520653T3 (da) | Integration af gener i kromosomet af saccharopolyspora spinosa | |
| US20140248667A1 (en) | Enhancing spinosyn production with oxygen binding proteins | |
| CA2197160C (en) | Platenolide synthase gene | |
| CA2322449C (en) | Biosynthetic genes for spinosyn insecticide production | |
| EP2271666A1 (en) | Nrps-pks gene cluster and its manipulation and utility | |
| EP2963110A1 (en) | Microorganisms and methods for producing vanillin | |
| CA2332129A1 (en) | Dna encoding methymycin and pikromycin | |
| US9404107B2 (en) | Integration of genes into the chromosome of Saccharopolyspora spinosa | |
| US20110281359A1 (en) | Spnk strains | |
| EP2610344B1 (en) | Identification and characterization of the spinactin biosynthesis gene cluster from spinosyn-producing Saccharopolyspora spinosa | |
| Sun et al. | Identification of a gene cluster encoding meilingmycin biosynthesis among multiple polyketide synthase contigs isolated from Streptomyces nanchangensis NS3226 | |
| WO2006053313A2 (en) | Elaiophylin biosynthetic gene cluster | |
| CA2354030A1 (en) | Micromonospora echinospora genes encoding for biosynthesis of calicheamicin and self-resistance thereto | |
| WO2009147984A1 (ja) | ハーボキシジエンの生合成に関与するポリペプチドをコードするｄｎａ | |
| CN116515876A (zh) | 异源合成黄酮类化合物的调控方法与应用 | |
| JP2004089156A (ja) | ビセニスタチン合成酵素遺伝子クラスター、ビセニサミン糖転移酵素ポリペプチドおよび当該ポリペプチドをコードする遺伝子 | |
| JP2009502187A (ja) | チオコラリンの生合成に関与する遺伝子およびその異種産生 |