DK175175B1

DK175175B1 - Heteropolysaccharid BM07, fremgangsmåde til fremstilling deraf samt anvendelse deraf

Info

Publication number: DK175175B1
Application number: DK198903468A
Authority: DK
Inventors: Gabriel Ullmann; Alain Jarry
Original assignee: Rhone Poulenc Chimie
Priority date: 1988-07-13
Filing date: 1989-07-13
Publication date: 2004-06-21
Also published as: DK346889A; ATE103001T1; KR920009526B1; EP0351303B1; IL90966A; PT91160A; FI95396B; AR245222A1; NZ229901A; JPH02128694A; ES2052946T3; NO175373C; ZA895292B; DE68913841D1; DK346889D0; EP0351303A1; IL90966A0; IE62995B1; US5348675A; IE892254L

Description

DK 175175 B1

Den foreliggende opfindelse angår et hidtil ukendt heteropolysaccharide BM07, en fremgangsmåde til fremstilling deraf ved fermentering af en mikroorganisme såvel som anvendelsen deraf inden for forskellige typer af industrier.

5

Heteropolysaccharideme er molekyler med høj molekylvægt indeholdende mindst to typer af monosaccharider, som danner en basis gentagelsesgruppe, der er polymeriseret.

10 Xanthangummi er et af de heteropolysaccharider, der mest hyppigt er anvendt inden for industrielle områder så forskellige som især agrokemien, landbrugs- og fødemiddelindustrien, petroleumsindustrien, kosmetiske industrier etc.

15 Xanthangummi udviser imidlertid trods sine mulige anvendelser talrige utilstrækkeligheder, blandt hvilke man kan nævne en mangel på temperaturstabilitet, ved sure pH-værdier og ved alkaliske pH-værdier, såvel som i kraftige saltholdige medier.

20 Man har som følge heraf bragt andre heteropolysaccharider ud på markedet.

Blandt disse sidstnævnte kan man nævne heteropolysaccharidet udviklet af firmaet SHELL under handelsmærket "SHELL-FLO S®". Efter analyser udført af ansøgeren, har man kunnet påvise at dette heteropolysaccharid omfattede gentagelsesgrupper afledt af glucose, af galactose og salte af pyrodruesyre, 25 ravsyre og eddikesyre.

EP offentliggørelsesskrift nr. 0 040 445 omhandler også heteropolysaccharider bestående af gentagelsesgrupper afledt af glucose, galactose, pyrodruesyre, ravsyre og eddikesyre.

30

Men disse heteropolysaccharider har også udvist utilstrækkeligheder, især når de er anvendt ved høje temperaturer i størrelsesordenen 80 °C. Man har nu for at undgå de ovennævnte ulemper tilvejebragt et hidtil ukendt heteropo- 2 DK 175175 B1 lysaccharid, som ikke alene er temperaturstabilt, i saltholdige, basiske eller sure opløsninger; men som yderligere udviser kraftige rheologiske egenskaber ved lave koncentrationer, en høj suspensionsevne, en hurtig opløsning i vandværksvand såvel som i destilleret vand.

5

Et første formål med den foreliggende opfindelse er således et sådant heter-opolysaccharid.

Et andet formål med opfindelsen er en fremgangsmåde til fremstilling af dette 10 heteropolysaccharid. Et tredie formål med opfindelsen er anvendelsen af dette heteropolysaccharid inden for forskellige typer af industrier.

Den foreliggende opfindelse angår således et hidtil ukendt heteropolysaccharid, som er ejendommeligt ved, at det opnås ved fermentering af et medium 15 omfattende mindst en kilde til assimilerbart carbon med en stamme af Agro-bacterium tumefaciens I-736, at det omfatter gentagelsesgrupper afledt af glucose, galactose og pyrodruesyre, ravsyre eller eddikesyre eller af salte af disse syrer i molære forhold på henholdsvis: 5-8 /1-2 / 0,5-2 / 0,5-2 / 0,05-2, og at en opløsning på 0,1 vægt-% af nævnte heteropolysaccharid BM07 i 20 destillered vand ved 25 °C udviser viskositeter efter 24 timers forløb større end 350 mPa*s, idet viskositeteme er målt med en hastighedsgradient på 1 s'1 ved hjælp af et viskosimeter af typen low shear.

Denne stamme af Agrobacterium tumefaciens er blevet deponeret i over-25 ensstemmelse med Budapestoverenskomsten hos Collection Nationale de Culture des Microorganismes (CNCM) 1. marts 1988, hvor den er tilgængelig for offentligheden under reference nr. I-736. Denne stamme stammer fra Collection Nationale de Bactéries Phytopathogéne og er registreret under nr.

CNBP 291 i kataloget 1974 over organismer med helbredende egenskaber.

30

Rendyrkning af Agrobacterium tumefaciens I-736 kan gennemføres i en skråkultur i gelatinerør (slant), som inkuberes ved en temperatur på 26-32 °C, mere almindeligt mellem 28 og 32 °C.

3 DK 175175 B1

Ved disse temperaturer, og især på medier placeret på MY agar og på Bennett agar, hvis sammensætninger er anført i det følgende, har man kunnet iagttage dannelsen af et mukoidt bakterie-tæppe, som dækkede den sam-5 lede skrå overflade efter 20 timers forløb.

De efterfølgende næringsmedier er blevet betragtet som værende særlig fordelagtige for dyrkningen af Agrobacterium tumefaciens I-736: 10 - Substrat MY agar (ig/l):

Soya-peptoner 5 Gærekstrakt 3

Maltekstrakt 3

Glucose 10 15 Agar 20 - Substrat TGY agar (produkt fra institut Pasteur) (i g/l):

Peptoner 5 Gærekstrakt 2,5 20 Glucose 1

Agar 20 - Substrat Bennett Agar (i g/l):

Peptoner 1 25 Kødekstrakt 1 NZ Amin A® 2

Produkt af firmaet Sheffield Chemical)

Glucose 10

Agar 20 30 - Substrat t.S agar (produkt fra firmaet Bio-Mérieux) (i g/l):

Biotrypcase 17

Biosoyase 3 4 DK 175175 B1 K2HPO4 2,5

NaCI 5

Glucose 2,5

Agar 20 5

Stammen Agrobacterium tumefaciens I-736 kan ligeledes dyrkes i Petriskål, f.eks på et substrat af MY agar eller TGY agar. Under disse betingelser er kolonierne synlige allerede fra tidspunktet 24-30 timer, og de udviser følgende karakteristika ved tidspunktet 48 timer: 10 - størrelse: 2-3 mm diameter - udseende glat og kun lidt opblæret - meget lys brungul farve - kolonier ved kanten og mindre mukoide på Petriskål end 15 ved skråkultur.

Stammen Agrobacterium tumefaciens I-736 kan udnytte følgende sukkerarter.

20 - glucose - saccharose - stivelseshydrolysater og mere vanskeligt uomdannet stivelse og lactose.

25

Glucose og saccharose er de foretrukne sukkerarter.

Man har kunnet påvise, at i almindelighed omfatter heteropolysaccharid BM07 gentagelsesgrupper afledt af glucose af galactose og af syrerne pyrod-30 ruesyre, ravsyre og eddikesyre eller salte af disse syrer, i almindelighed i overensstemmelse med følgende molære forhold på 5-8/1-2/0,5-2/0,5-2/0,05-2, fortrinsvis på 6-7,5/1-1,5/0,5-1/0,5-1/0,05-0,2, og med yderligere mere foretrukket på7/1/0,5-1/0,5-1/0,05-0,01.

5 DK 175175 B1

De nævnte syrer pyrodruesyre, ravsyre og eddikesyre, foreligger sædvanligvis i form af salte, såsom salte af natrium, kalium, calcium eller ammonium.

De analysemetoder for heteropolysaccharid BM07, som har gjort det muligt 5 at bestemme dets bruttoformel som ovenfor specificeret, har som princip bestemmelsen af elementer, som opbygger forbindelsen (sukkerarter og syrer) efter hydrolyse af det pågældende heteropolysaccharid BM07 og kromatografiske bestemmelser med intern eller ekstern kalibrering.

10 Analysen af sukkerarter er således blevet gennemført påfølgende måde: 100 mg heteropolysaccharid BM07 hydrolysenes i hermetisk lukkede rør med 5 ml molært trifluoreddikesyre på 105 °C i 3 til 6 timer.

Denne behandling er efterfulgt af en inddampning til tørhed og en geno- 15 pløsning af den tørre inddampningsrest i 5 ml pyridin indeholdende 15 mg sorbitol som intern standard; derpå en silylering på 1 ml af opløsningen pyridin med 0,9 ml hexamethyldisilazan. Silyleringen katalyseres med 1,5 ml trifluoreddikesyre.

20 Målingen af sukker gennemføres derpå ved gasfasekromatografi med F.I.D-detektion på en glaskapillarkolonne af længden 25 m og diameter 0,25 mm, som er fyldt med en methylsiliconefase, der udviser en filmtykkelse på 0,14 pm. Den anvendte bærer er hydrogen med en hastighed på 2 ml/minut.

25 Målingen af pyrodruesyre gennemføres ud fra en stamopløsning opnået ved hydrolyse af 80 mg heteropolysaccharid BM07 ved hjælp af 5 ml 4N saltsyre i 1 time ved 105 °C og derpå tilsætning af 2 mg ketoglutarsyre (som udgør en intern standard) og regulering til 25 ml med destilleret vand.

30 Målingen gennemføres derpå ved højtryksvæskekromatografi (HPLC) ved hjælp af en kolonne fyldt med Cie podet siliciumoxid med diameteren 5 pm, og hvis længde er 250 mm og diameteme 4,6 mm. Det anvendte eluering- 6 DK 175175 B1 smiddel er en blanding i forholdet 50/50 efter rumfang af 0,02 M phosphor-syre og acetonitril. Hastigheden er 1,5 ml/minut.

Detektionen af pyrodruesyren foretages med ultraviolet detektion ved 375 5 nm.

Målingen af ravsyren foregår efter hydrolyse af heteropolysaccharid BM07 under de samme betingelser, som dem der anvendes ved målingen af pyrod-ruesyre. Målingen er direkte med ekstern kalibrering. Den anvendte 10 standardopløsning af ravsyre indeholder 8 mg ravsyre i 25 ml vand.

Man anvender på ny HPLC teknikken på kolonner af typen Aminex HPX87H® fra firmaet BIORAD®. Elueringsmidlet er 0,01 N svovlsyre og hastigheden er 0. 8 ml/minut. Detektionen af ravsyren er refraktometrisk.

15 Målingen af eddikesyren sker efter hydrolyse af 300-350 mg heteropolysaccharid BM07 med 5 ml 4N trifluoreddikesyre ved 120 °C i 3 timer. Derpå tilsætter man 30 mg propionsyre som intern standard, og man måler ved gasfasekromatografi med F.I.D detektion (flammeionisationdetektion). i 20

Man anvender ved målingen en søjle af glas med længden 2 m og diameteren 3 mm fyldt med en fase FFAP med 5% og phosphorsyre med 1% absorberet på Chromosorb G® (AW DMCS) med komstørrelsen 80-100 mesh. Bærergassen er helium i en mængde på 30 ml/minut.

25

Heteropolysaccharid BM07, som stammer fra de forskellige prøver, udviser i almindelighed følgende egenskaber: 1. 1. Dets grænseviskositetstal er mellem 30 og 250 dl/g, især mellem 140 og 30 250 dl/g, fortrinsvis mellem 150 og 240 dl/g.

Renseviskositetstallet (η), således som det er specificeret, bestemmes ved ekstrapolering til en koncentration på 0 af viskositetstallet 7 DK 175175 B1 Π-Πο Πο c, 5 i hvilken formel: - η er opløsningsviskositet - r|o er viskositeten af opløsningsmidlet - c er koncentrationen af heteropolysaccharid BM07, 10 idet man anvender Huggins ligning: n-Πο

-=[nj + k* 8n)2 . C

15 Hoc idet k' er Huggins konstant på første Newton niveau.

Den specifikke viscositet 20 η-η0 Πο måles på følgende måde: 25 Man fremstiller en stamopløsning med 0,2 g/l heteropolysaccharid BM07 i en vanding opløsning af 0,1 M NaCI.

Man fremstiller derpå en serie af opløsninger omfattende he-teropoiysaccharid BM07 in koncentrationer, der befinder sig mellem 0,03 og 30 0,1 g/l med fortynding af stamopløsningen med en 0,1 M opløsning af M

NaCI.

8 DK 175175 B1 Målingerne gennemføres derpå ved 23 °C under anvendelse af et såkaldt LOW SHEAR vlskosimeter.

Man optegner kurven for den specifikke viskositet som en funktion af koncen-5 trationen, man ekstrapolerer til koncentrationen nul.

2. Molekylvægten af heteropolysaccharid BM07 målt ved lysdiffusion i almindelighed mellem 6 x 106 og 10 x 106, fortrinsvis mellem 6,5 x 106 og 9,5 x 106.

10 II. Heteropolysaccharid BM07 udviser særdeles gode rhelogiske egenskaber i opløsningen destilleret vand, og dette gælder især for lave koncentrationer.

Men derudover holder disse egenskaber sig særdeles godt, når heteropoly-saccharidet underkastes indflydelse af vanskelige forhold, især ved stærk sur 15 eller stærk basisk pH, i et stærk ionisk medium og ved høj temperatur.

Man har således kunnet konstatere: 1. At opløsninger af 0,1 vægt-% heteropolysaccharid BM07 i destilleret vand 20 ved 25 °C udviser viskositeter efter 24 timers forløb større end 350 mPa x s, især mellem 400 og 700 mPa x s; idet viskositeteme er målt med en hastighedsgradient på 1 x s*1 ved hjælp af et viskosimeter af typen LOW SHEAR.

2. Heteropolysaccharidet BM07 viser gode rhelogiske egenskaber i salt-25 holdigt medium, især i saltopløsninger baseret på CaCI2 på Na2S04 og på

NaCI.

Man har i særlig grad konstateret, at opløsninger med 0,3 vægt-% af dette heteropolysaccharid BM07 i en saltopløsning (hvis sammensætning fremgår 30 af det efterfølgende) i almindelighed udviste viskositeter efter 2 timers forløb mellem 2000 og 3500 mPa x s, især mellem 2500 og 3000 mPa x s, idet viskositeteme blev målt med et rheometer af typen Cammed® med en has- 9 DK 175175 B1 tighedsgradient på 1 s'1, og idet saltopløsningen havde følgende sammensætning:

NaCi 91,71 g 5 CaCI2,2H20 10,41 g

Mg Cl2, 6H20 10,12 g

BaCI2> 2H20 0,113 g

NaHCo3 0,195 g

Destilleret vand op til 1 liter 10 På den anden side udviser opløsninger med 0,2 vægt-% heteropolysaccharid BM07 i vandige opløsninger indeholdende 20% NaCI viskositeter efter 24 timer på mellem 1600 og 2400 mPa x s, fortrinsvis mellem 1700 og 2100 mPa x s, idet viskositeteme blev målt ved hjælp af et viskosimeter af typen 15 LOW SHEAR med en hastighedsgradient på 1 s*1.

3. Vandige opløsninger af 0,2 vægt-% heteropolysaccharid BM07 ved pH 1,7 og ved 25 °C udviser en viskositet ved 24 timer på mellem 1000 og 2500 mPa x s, især mellem 1400 og 2000 mPa x s, idet viskositeteme blev målt 20 ved hjælp af et viskosimeter af typen LOW SHEAR med en hastighedsgradient på 1 s'1.

4. Vandige opløsninger med 0,2 vægt-% heteropolysaccharid BM07 udviser ved pH 11,8 og 25 °C en viskositet ved 24 timer på mellem 1000 og 2500 25 mPa x s, især mellem 1400 og 2000 mPa x s, idet viskositeteme blev målt ved hjælp af et viskosimeter af typen LOW SHEAR og med en hastighedsgradient på 1 s*1.

5. Opløsninger med 0,2 vægt-% heteropolysaccharid BM07 i destilleret vand, 30 der er udsat for en temperatur på 80 °C i 24 timer, udviser i almindelighed viskositeter mellem 500 og 2500 mPa x s mere specielt mellem 1000 og 2000 mPa x s, idet viskositeteme måles ved hjælp af et viskosimeter af typen LOW SHEAR med en hastighedsgradient på 1 s’1.

10 DK 175175 B1 6. Vandige opløsninger af 0,2 vægt-% heteropolysaccharid BM07 med pH 7 og ved 25 °C udviser en viskositet efter 24 timer mellem 1000 og 2500 mPa x s, især mellem 1400 og 2000 mPa x s, idet viskositeteme måles ved hjælp af et viskosimeter af typen LOW SHEAR med en hastighedsgradient på 1 s'1.

5

Man har ligeledes konstateret, at heteropolysaccharid BM07 udviser en god evne til suspension. Evnen til suspension af opløsninger af heteropolysaccharid BM07 vil kunne bedømmes ved hjælp af efterfølgende test: 10 et prøverør MEGAL på 100 ml fyldes i sin helhed (fyldt rumfang på 130 ml) med en 0,1 vægt-% opløsning af heteropolysaccharid BM07 i destilleret vand. Densiteten af opløsningen er således tæt på 1.

Man anbringer en kugle af polyamid 6,6 med en diameter på3 mm og en ! 15 densitet på 1,135 på væskens overflade uden hastighed fra starten. Fald-tiden for kuglen måles, indtil den når frem til bunden af prøveglasset, dvs. efter et udført fald på 23,5 cm. For at kunne opnå en gennemsnitstid gentages denne test nogle gange. Gennemsnitstiden for faldet er i almindelighed større end 2000 sekunder, det er især mellem 3000 og 15000 sekun-20 der.

Til sammenligning udviser en 0,1 vægt-% opløsning af xanthangummi under de samme betingelser en faldtid mellem ca. 60 og 350 sekunder.

25 Den foreliggende opfindelse angår ligeledes en fremgangsmåde til fremstilling af heteropolysaccharid BM07, således som dette er beskrevet ovenfor.

Denne fremgangsmåde til fremstilling af det omtalte heteropolysaccharid BM07 er ejendommelig ved fermentering af et substrat indeholdende mindst 30 en kilde tiJ assimiJerbart carbon med en stamme af Agrobacterium tumefa-ciens I-736, idet den anvendte kilde til assimilerbart carbon er glucose, sucrose eller stivelseshydrolysat.

DK 175175 B1 11

Fermenteringssubstratet kan ligeledes udover den nævnte kilde til assimiler-bar carbon indeholde mindst én kilde til nitrogen, fortrinsvis en kilde til organisk nitrogen, og eventuelt et eller flere uorganiske salte.

5 Substratet podes på klassisk måde med stammen Agrobacterium tumefa-ciens I-736.

Når rumfanget af fermenteringssubstratet er af stort omfang, kan man med fordel pode ved hjælp af et podet medium, som i sig selv er podet med et 10 medium af flydende præ-kultur. Denne sidstnævnte er forinden i sig selv blevet podet med en ren kultur af Agrobacterium tumefaciens I-736.

Man kan ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen som podningsmedium anvende en værtmedium, der klassisk anvendes til dette formål, med fordel et 15 medium af uorganisk art. Man kan som eksempel på substrat for prækulturen f.eks. nævne substratet YM i bioth DIFCO reference 07101, fortrinsvis et substrat, der er fremstillet ud fra følgende forbindelser: - Soya - peptoner 5 g/l .

20 - Maltekstrakt 3 g/l - Gærekstrakt 3 g/l - Glucose eller saccharose 10 g/l

Det naturlige pH i dette medium er 7-7,2, og det reguleres ikke.

25

Som organisk kilde til carbon, som udgør en del af fermenteringssubstratet, anvendes glucose, sucrose eller stivelseshydrolysater. Glucose og sucrose er de foretrukne sukkerarter. Koncentrationen af organisk carbonkilde i fermenteringssubstratet kan være mellem 1 og 100 g/l, fortrinsvis 15-60 g/l.

Man kan nævne som kilde til organisk nitrogen casein og caseinater, fiske-hydrolysater, hvedemel, majsmel eller soyamel, gærekstrakter (bagerigær, ølgær, mælkesyregær), tørre opløselige stoffer fra destillerier, kartoffelpro- 30 DK 175175 B1 12 teiner, majsudblødningsvand (com steap liquor CSL) og opløselige dele af CSL, som opnås ved fortynding af CSL efterfulgt af en fjernelse af faste partikler ved centrifugering, gennembobling eller dekantering. CSL og især de opløselige dele af CSL bedømmes som værende særlig fordelagtig inden for 5 rammerne af den foreliggende opfindelse.

Koncentrationen af kilder til organisk nitrogen i fermenteringssubstratet kan være mellem 3 og 80 g/l, fortrinsvis 5-50 g/l.

10 Man kan som eksempler på uorganiske salte, som man eventuelt kan indføre i fermenteringssubstratet, nævne sulfater såsom magnesiumsulfat, mangansulfat, zinksulfat, jemsulfat, carbonater såsom calciumcarbonat, opløselige calciumsalte, phosphater såsom kaliumphosphater eller natriumphosphater.

15 Koncentrationen af hver af disse uorganiske salte i fermenteringssubstratet kan variere mellem 0,01 og 5 g/l, fortrinsvis 0,05-2 g/l.

Fermenteringssubstratet kan ligeledes omfatte sporstoffer såsom spor af salte af cobalt og/eller molybdæn såvel som vitaminer og nucleotider.

20

Fermenteringen kan gennemføres ved tryk mellem 1 og 4 bar ved en temperatur mellem 25 og 35 °C, fortrinsvis 28-32 eC under betingelser, som kan beskrives som neddykkede aerobe betingelser.

25 pH i fermenteringssubstratet kan være mellem 5 og 9, fortrinsvis 6-8. pH kan reguleres afhængig af det enkelte tilfælde med en base såsom natriumhy-droid eller kaliumhydroxid eller med en syre såsom svovlsyre, phosphorsyre, saltsyre eller salpertersyre. Fermenteringssubstratet, der f.eks. er anbragt i en kolbe eller i et fermenteringskar, kan med fordel underkastes en omrøring.

Denne omrøring kan blive udøvet f.eks. ved hjælp af en frem og tilbagegående omrører, en roterende omrører, en mobil omrøring eller en 30 DK 175175 B1 13 boblekolonne. Fermenteringstiden er sædvanligvis længere end 30 timer; men den er i almindelighed mellem 40 og 90 timer.

Udbytterne af fermenteringen er i almindelighed større end 40%, især 55-5 75% ganske særlig 66-75 vægt-% af produceret heteropolysaccharid BM07 i forhold til den anvendte kilde til carbon.

Heteropolysaccharid BM07 kan separeres fra fermenteringsmediet.

10 For at gøre dette, kan man med fordel opvarme fermenteringsvæsken omfattende heteropolysaccharidet BM07 til temperaturer mellem 80 og 120 °C i 10-60 minutter, fortrinsvis i 15-45 minutter.

Den væske, der underkastes den ovennævnte varmebehandling, har for-15 trinsvis et pH mellem 6 og 8. Dette pH kan imidlertid reguleres om nødvendigt under anvendelse af en base eller en syre afhængig af det enkelte tilfælde.

Disse sidstnævnte kan være valgt blandt de ovenfor nævnte baser og syrer 20 anvendt til regulering af pH i fermenteringssubstratet.

Indvindingen af heteropolysaccharidet BM07 fra væsken ved afslutning af fermenteringen kan så gennemføres ved udfældning af det nævnte heteropolysaccharid ved hjælp af en organisk væske, der er blandbar med vand, 25 og i hvilken heteropolysaccharidet er uopløseligt eller praktisk talt uopløseligt.

Man kan nævne som eksempler på organiske væsker, der egner sig ifølge den foreliggende opfindelse, acetone, alkoholer såsom ethanol, propanol, isopropanol, butanol og tert-butanol.

Isopropanol er særligt foretrukket inden for rammerne af den foreliggende opfindelse.

30 14 DK 175175 B1

Rumfanget af organisk væske, der anvendes, er i almindelighed 2-3 gange rumfanget af den væske, der skal behandles.

Udfældningen af heteropolysaccharidet BM07 med en organisk væske kan 5 ligeledes gennemføres i nærvær af salte, såsom sulfater, chlorider eller phosphater af natrium, af kalium eller af calcium.

Når først heteropolysaccharidet BM07 er blevet udfældet, kan det derpå separeres fra den organiske væske ved filtrering, centrifugering eller tørring.

10

De således opnåede fibre kan dehydratiseres, f.eks. ved hjælp af acetone eller en alkohol, såsom ethanol, propanol, isopropanol eller tert-butanol.

Vægten af den alkohol, der er nødvendig til at gennemføre denne behandling 15 til dehydratiséring, er i almindelighed fra 1 til 10 gange vægten af de fibre, ' der skal behandles.

De dehydratiserede fibre kan underkastes fornyede behandlinger med filtrering og centrifugering eller afsugning.

20

Fibrene kan derpå tørres, formales og sigtes på en sådan måde, at man opnår et pulver af heteropolysaccharidet BM07. Dette pulver er sædvanligvis af et cremefarvet eller beigefarvet udseende.

25 For at opnå et endnu renere pulver er det muligt at behandle enten fermenteringsvæsken eller en gendannet vandig opløsning ud fra det pulver, der er opnået i overensstemmelse med den ovenfor beskrevne fremgangsmåde, ved hjælp af et eller flere enzymer.

30 Som enzymer, der kan egne sig til denne virkning, kan man nævne prote-aser, mutanaser, lipoproteaser, cellulaser og chitinaser.

DK 175175 B1 15

Den enzymatiske rensning kan være kombineret eller erstattet med fysiske fremgangsmåder til rensning, såsom forskellige former for filtrering, eller dialyse, eller ved hjælp af forskellige kromatografiske fremgangsmåder.

5 Fermenteringsvæskeme og de gendannede vandige opløsninger af heter-opolysaccharid BM07, som eventuelt har undergået en rensningsbehandling, kan opkoncentreres. Opkoncentreringen kan være fordelagtig i visse tilfælde, især i det omfang, hvor transportomkostningerne på denne måde kan reduceres. Yderligere kan de koncentrerede opløsninger hurtigere tages i brug 10 end pulverne af heteropolysaccharid BM07. Opkoncentreringen kan gennemføres ved fremgangsmåder såsom inddampning, ultrafiltrering eller diafil-trering.

Heteropolysaccharidet BM07 kan med fordel anvendes inden for talrige in-15 dustrielle områder, hvori man allerede anvender andre vandopløselige polymerer.

I disse anvendelser bruges hovedsageligt heteropolysaccharid BM07 som et fortykkelsesmiddel eller som et suspensionsmiddel, og dette gøres inden for 20 et stort område af pH-værdier, i tilstedeværelse af eller uden tilstedeværelsen af salte, af ikke-ioniske eller anioniske overfladeaktive midler eller andre additiver. Man anvender i almindelighed ved disse anvendelser fra 0,001 til 2 vægt-%, fortrinsvis 0,1-1 vægt-% heteropolysaccharid BM07 beregnet i forhold til vægten af det præparat, som indeholder heteropolysaccharidet.

25

Heteropolysaccharidet BM07 kan således anvendes: inden for levnedsmiddelindustrien, især som et suspensionsmiddel eller som et fortykkelsesmiddel, i præparater beregnet til det agrikulturkemiske område, især i såkaldte "flowables" som et suspensionsmiddel, 30 16 DK 175175 B1 i industrielle rensningsmidler, som er bestemt til behandling af metaloverflader, i husholdings- eller i industrielle rensemidler, isser som fortykkelsesmid-5 del og som et middel, som stabiliserer slibende partikler. Heteropoly- saccharid BM07 kan ganske særligt anvendes som fortykkelsesmiddel i vandige syrepræparater indeholdende en organisk eller uorganisk syre i vandig opløsning.

10 Man kan som organisk syre nævne monocarboxylsyre såsom myresyre, ed dikesyre, chloreddikesyre, mælkesyre, ascorbinsyre, garvesyre, og dicarbox-ylsyre såsom fumarsyre, malonsyre, ravsyre, glutarsyre, itaconsyre, vinsyre, og tricarboxylsyre såsom citronsyre.

15 Man kan som eksempel på uorganisk syre nævne saltsyre, phosphorsyre, salpetersyre og svovlsyre.

Alle disse syrer kan anvendes alene eller i indbyrdes blanding. De relative mængdeandele af syrer og heteropolysaccharid kan variere inden for brede 20 rammer som en funktion af faktorer, såsom den særlige art af hver af disse komponenter, den ønskede viskositet, og den valgte specifikke anvendelse.

Man anvender i almindelighed mellem 1 og 40% syre, mellem 0,01 og 2% heteropolysaccharid BM07 og mellem 55 og 98,99% vand.

25

Man foretrækker dog mængder af heteropolysaccharid BM07, der befinder sig mellem 0,1 og 1%.

Disse præparater kan fremstilles på enhver ønskelig måde ved blanding af 30 de forskellige forbindelser i vand. Man foretrækker fra begyndelsen at opløse heteropolysaccharidet BM07 i vand, og derpå at tilsætte den eller de indgående syrer.

^-—...... . , .

DK 175175 B1 17

Disse præparater kan eventuelt indeholde forskellige andre bestanddele anvendt inden for syreformuleringer, såsom overfladeaktive midler, farvestoffer, detergenter, parfumer, baktericider og slibemidler.

5 Disse præparater kan i særlig grad være bestemt til rensning af overflader til fjernelse af sten fra porcelænsoverflader og fra metaloverflader eller til dekapering af metaloverflader.

Andre karakteristika og fordele knyttet til opfindelsen vil fremgå aide efterføl-10 gende eksempler og af de vedlagte fig. 1 og 2, som viser udvikling en af viskositeten som en funktion af hastighedsgradienten for opløsninger i destilleret vand indeholdende henholdsvis 0,1 og 0,2 vægt-% heteropolysaccharid BM07 samt xanthangummi.

V

15 EKSEMPEL 1

Fremgangsmåde til fremstilling af heteropolysaccharid BM07 i et uorganisk produktionssubstrat.

20 Man lader fermentere med en stamme af Agrobacterium tumefaciens 1-736 et substrat omfattende udtrykt i g/l: CSL (majsstøbevand) 11 K2, HP04 4 25 MgS04l 7H20 0,5

Saccharose 25

Drikkevand op til 1 liter

Dette substrat fermenteres med denne stamme ved en temperatur på 28 °C 30 under følgende betingelser.

Fermentering i en Erlenmeyer-kolbe på 500 ml indeholdende et nyttigt volumen på 100 ml. Dette substrat underkastes en omrøring på 220

DK 175175 B1 I

18 omdrejninger/minut ved hjælp af en frem og tilbagegående omrører med en amplitude på 5 cm.

Fermentering i en beholder på 10 liter indeholdende nyttigt volumen på 5 6 liter. Substratet underkastes en omrøring på 270 omdrejninger/minut opnået ved hjælp af vinger med udskårne firkanter. Substratet blev luftet med en lufthastighed på 500 l/time.

Fermentering i en beholder på 20 liter BIOLAFFITE®, som indeholder 10 nyttigt volumen på 15 liter. Substratet underkastes en omrøring på 400 omdrejninger/minut opnået ved hjælp af bevægelige vinger af typen RUSHTON®. Substratet blev luftet med en lufthastighed på 825 l/time.

De opnåede resultater er vist i efterfølgende tabel I: 15

TABEL I

Afslutning af fer- Udbytte Viskositet __menteringer___

Erlenmeyer__80 h__72%__6 400 mPa x s

Beholder på 10 liter__100 h__67%__9 000 mPa x s

Beholder på 20 liter__90 h__66%__6 800 mPa x s I denne tabel I svarer afslutningen af fermenteringen til det fuldstændige eller 20 næsten fuldstændige forbrug af saccharose, og udbyttet svarer til forholdet udtrykt i procent mellem vægten af heteropolysaccharid BM07 opnået i forhold til den anvendte mængde af saccharose.

Viskositeten er den viskositet der er i væsken ved afslutningen af fermenter-25 ingen målt ved hjælp af et Brookfield LN/T® viskosimeter med en cylindrisk nål nr. 4 og med 30 omdrejninger/minut.

19 DK 175175 B1 EKSEMPEL 2:

Indvinding af heteropolvsaccharid BM07 fra fermenteringsvæsken· 5 Indvinding af heteropolysaccharid blev gennemført ud fra 2 kg væske opnået ved fermentering af et organisk produktionssubstrat, som var indeholdt i en beholder på 20 liter, og i overensstemmelse med eksempel 1.

Væsken behandles termisk ved 90 °C i 30 minutter.

10

Til den således behandlede væske sættes 2300 ml isopropylalkohol (IPA). Udfældning gennemføres i nærvær af 150 g natriumsulfat.

Fibrene stammende fra udfældningen dehydratiseres derpå to gange i nær-15 vær af 1200 ml IPA.

Fibrene afsuges, hvorpå de løsnes og tørres i en ovn ved 85 °C.

Det indhøstede tørne materiale formales og sigtes.

20

Man opnår på denne måde et pulver af heteropolysaccharid BM07 med cremefarve.

EKSEMPEL 3: 25

Rheologiske egenskaber af heteropolvsaccharid BM07 i destilleret vand ved pH 7.

Man afprøver viskositeten og tærskelværdien for udstrømning af opløsninger 30 i destilleret vand ved pH 7 af heteropolysaccharid BM07 i forskellige koncentrationer.

20 DK 175175 B1

Forsøgene blev gennemført ud fra et pulver af heteropolysaccharid BM07, således som det er opnået i eksempel 2.

Man fremstillede opløsninger med 0,2 vægt-% og 0,3 vægt-% he-5 teropolysaccharid BM07 med tilsætning af destilleret vand til dette pulver af heteropolysaccharid efterfulgt af en omrøring ved hjælp af en omrøring af typen RAYNERI®med en hastighed på 1000 til 1200 omdrejninger/minut i 15 minutter. Overførslen til opløsning er komplet efter forløbet af disse 15 minutter i destilleret vand.

10

Opløsninger med 0,1 vægt-% heteropolysaccharid opnås ved simpel fortynding med destilleret vand af opløsningerne med 0,2% som ovenfor beskrevet.

15 Forsøgene gennemføres ved en temperatur på 25 °C 24 timer efter fremstilling af opløsningerne. i i

Man gennemførte sammenligningseksempler under de samme betingelser med RHODOPOL 23® (en xanthangummi fremstillet af firmaet RHONE 20 POULENC).

Målingen af værdierne for tærskelværdien for udstrømning og af viskositeter-ne i forsøgene 1-4 blev gennemført ved hjælp af et viskosimeter af typen LOW SHEAR og ved hjælp af et apparat RHEOMAT 30 for målingerne i for-25 søgene 5 og 6.

De således opnåede resultater er vist i efterfølgende tabel II

^_ DK 175175 B1

·· H

•<0 i o O o o o o o. to o o o o o in vO CM CM E'' 03 h i—t

<D CM CO H

Ό 0) 0) -- — — SL X Cn I t j co-μ i oo oo oo o> co to o i-ι o m oo q to iH co in o o o in •C v μ 10 O CM CM CO co 00

O) rH CM

μ c 0) μ-- μ c μ ό CO >ι μ o x i x a a

(OM O O in O

μ O cn CM μ Ml O

* >*H O O 03 μ CM

© V

co Ό o m ^ in ii

cm o CM

> μ O

α---

o M

Ό 0) o c

JZ o I

Di μ « μ o μ to c (0 Μ μ μ μ c cMCMOomo σι C q μ c» cm Γ" o men

Od) SU μ oo μ μ cn

ϋ Μ X

C" c μ η cn I

^ o o co μ to N Σ ϋ OBD, i ™ en o μ e 1 0) Ό D)--

•ri *H

Μ μ 10 μ dP Ofi dp dP dp dp

SZ (D μ μ CM CM CO CO

OX ......

0 0) oooooo

to M

COO Ό Ό ' Ό Ό Ό Ό >ι μ Ό Φ Φ Φ Φ Φ Φ μ μ >>>>>> Ο Ό Μ ο. οι μ to c^ c^ is Ο > (0 JC ο ο ο Μ η Σ Σ Σ ο) ό c α m m m μ c ο to

d) (0 μ CO Ό Ό XJ

jC > μ >s μ μ μ (0 μ Μ Μ Μ μ μ μ ο to to <ο

(0 φ μα JZ JZ JZ

μ c ο ο ο ο Μ φ φ Μ ο υ ο Φ μ ο φ π© π© η© .Ω μ ομ cococototocn

t0 μ Ο Φ >ιίΜ >ι<Μ >,CM

X μ X χ: μ μ μ COCO ομομομ c φ α ο α ο α ο φ ό ο α ο a ο α σι Μ Ο Μ Ο Μ Ο φμ Φ Ό φ Ό 9) Ο μ ο μ ο μ ο φ ο φ£ φχ; φ£ χ c κ κ sc os a: α: (0 μ Η μ C-- Η Ο) (0 Ο & ι μ μ μ Μ Ο) ω οα ο© μ cm to in ίο

CQ Φ O Pk CO

< sz l·* ¢: μ -- 22 DK 175175 B1

Denne tabel viser klart, at heteropolysaccharidet BM07 i opløsning i destilleret vand er mere pseudoplastisk end xanthangummi anbragt under de samme betingelser.

5 En 0,1 vægt-% opløsning af heteropolysaccharid udviser de samme karakteristika som en 0,2% opløsning af xanthangummi.

De senere viste fig. 1 og 2 belyser udviklingen af viskositeten som en funktion af hastighedsgradienten for opløsninger i destilleret vand af henholdsvis 10 0,1 og 0,2 vægt-% heteropolysaccharid BM07 og af xanthangummi (RHO- DOPOL 23®). Målingerne af viskositeteme blev gennemført under de samme betingelser som beskrevet ovenfor.

EKSEMPEL 4: 15

Rheologiske egenskaber af heteropolysaccharid BM07 i vandværksvand ved pH 7 ved 22 ° hårdhed.

Forsøgene blev gennemført på 0,1 og 0,2 vægt-% opløsninger af heteropoly-20 saccharid BM07 i vandværksvand ved pH 7, dvs. under de samme betingelser som anvendt i eksempel 3.

Man bemærker imidlertid, at overførslen til opløsning af heteropolysaccharid BM07 er i endnu lettere i destilleret vand end i vandværksvand.

25

Resultatet af forsøgene såvel som resultaterne af sammenligningsfbrsøgene gennemført under de samme betingelser med RHODOPOL 23® fremgår af efterfølgende tabel III.

30 Viskositeteme og tærskelværdierne for strømning blev målt ved hjælp af et viskosimeter af typen LOW SHEAR i forsøgene 7 og 9 og med et apparat RHEOMAT 30 i forsøg 8.

^_ DK 175175 B1

·· rH

•<o i o in o o< w η σ> ir>

P <H

<D rH

Ό to (U - —.......... — X O)

W i—I

to ρ i in o o. to to o E to «-i o« in •h tn o ή i o

O) H

P c <D -H-- P C •Η Ό W >ι Ή

0 X I

x cn co CD P O o •η o m in -ty > <w o cn o% Ό o cn i cm

0) CM

>

CO

0> c

•H *W

c o o E <—i cn in in S Φ r-ι co

P X

p to - CD P (0 ™ Ό « Λ

™ O -P E

dp dp dp

«Η -H CM

θ' θ' θ' Ό Ό Ό Ό 0)0)0) Η > > > Ρ Ίί <0 CV CN.

ιο £ 0.0 Ο Σ Σ

C Ο ω CQ

0 10

•Η to V V

Ρ >ι -Η -Η <0 Η Ρ Ρ Ρ Ο (0 10 Ρ α Λ Λ c ο Ο ο Ο) Ρ ο ο Ο Φ (0 © (0 c ρ co en co Ο CD (Μ >, X jC Η Η Ο Η Ο α ο α ρ a ο pop α> ό α) POP <D Æ φ X κ χ Η Η----- Μ PJ Ρ Ο) ω ο s cv as σ\ η ti to < Ε- ---—- 24 DK 175175 B1 EKSEMPEL 5:

Indflydelse af pH. af temperaturen og af forskydningen påde rheologiske egenskaber af heteropolysaccharid BM07 5

Indflydelsen af pH på de rheologiske egenskaber af heteropolysaccharid BM07 blev undersøgt på 0,2 vægt-% opløsninger af dette heteropolysaccharid BM07, således som det er beskrevet i eksempel 3; men hvorved pH er enten 1,7 (efter tilsætning af en tilstrækkelig stor mængde myresyre) eller på 10 11,8 (efter tilsætning af en tilstrækkelig stor mængde natriumhydroxido pløsning).

Forsøgene blev gennemført ved en temperatur på 22 °C, 24 timer, 7 dage og 1 måned efter fremstillingen af opløsningerne.

15

Indflydelse af temperaturen blev undersøgt på 0,2 vægt-% opløsninger af heteropolysaccharid BM07 som beskrevet i eksempel 3.

Målingerne blev gennemført på sådanne opløsninger, som blev underkastet 20 en temperatur på 80 °C i 1 time og i 24 timer.

For at bedømme virkningen af forskydningen på 0,2 vægt-% opløsninger af heteropolysaccharid BM07 som bekrevet i eksempel 4, underkaster man disse opløsninger en forskydning med et apparat ULTRA TURRAX JANKE-25 KUNKEL TP 18-20 med en maksimal hastighed på ca. 20000 om-drejninger/minut i 5 minutter, hvilket foregår umiddelbart efter fremstillingen af opløsningerne. Målingerne gennemføres 24 timer efter denne behandling.

Sammenligningsforsøg blev genneført på 0,2 vægt-% opløsninger af RHO-30 DOPOL 23® (firmaet Rhone-Poulenc), som blev behandlet under de samme betingelser.

25 DK 175175 B1 Målingerne blev gennemført ved hjælp af et viskosimeter af typen LOW SHEAR.

Resultaterne af forsøgene fremgår af den nedenfor bragte tabel IV: 5

Man kan ved læsningen af denne tabel konstatere, at holdbarheden af de rheologiske egenskaber af heteropolysaccharid BM07, især underkastet indflydelse af et surt eller basisk pH er særdæles gode, og er helt sammenligneligt med holdbarheden i destilleret vand, hvilket især gør sig gældende over 10 en periode på 1 måned.

DK 175175 B1 tn -------

O

Wi tu in o O σ> co cn p tn tv ^ in oo 3 Ό (0 m vo vo es

P CU P P CN P P

(0 W x: P H H H

Wi O)

0) X P

Ot P - - ε «ο « 0) ft. 10 p ε xh

Ml ooo ooo oo oo p p o moo ooo oooo «5 Cinrvooomoin in o ro co © P -Η P tv ‘Co d)C‘ æari x) o p co od rv p

X CN ΡΌΟ P HH H

O. P

p tn λ: ---- n n^N inooo\ to p £ ό o (DK 0) ‘ ΟΌΝ CN li 00 p

Ό > O P CN CN N N (N

>ι Ό p 0) - — — — .— ....... - p ε Ό C Wl i <0 p d) to ft to tn ε p p c

tU <U P P

P O) c tn c ε p ooo o ooo o cn p co tv (UP -©O in vo oo oo oo o m o cn rv in oi X P Wl x cv tv co co en o p in ^ U <1) P to <D £3 01 Wi p Ό Ό tø

CO OP

3 ε ε " 1 —1 * ————— —— - Λ N (ri Lj Li Li Lj ϋ ~ O 05 φφ.φφφ. wi εεεε OQ) P (0 Ό P P CO Ό pppp

to Ό ΡΌΕΡΡΌΕ -»-»-#-> +-* -M

Ό tn p PP E-I ^iCvp^i^iCvp P Tit ri

Wl Ό CN CN CN (N CN

(0 £ lH---- O 0)

U Ό CN

Λ G ‘Ol

« 3 O O

P

P O) <U tv 0)

O C X O P O

Q.P P 2 03 O ® O C P OQ 10 o wi en > x o <U P ρ P Wi o oo

P P <0 tu CO

tu Q) Wi T3 H0 G ε O Wi C 10 O» ε p <u 3 oo o.

P t0 O) tv 00 - Wi to to ‘ C P cv ‘ ‘ P Wi 3

WiP(U‘ PP P 3 P

wip p p pto tu E CflCOtU X X (0 Wi λ to p ©p s a x α wi tu toto tu p £i a a tu a x cn a ό ό a ε cn ‘ G O Wi Ό 0) Ό tu ε tu

GC Ptutu >tu >0) P

> > +j cn O) tu i o oo oo oo

<UC Λ P 00 CV (Mtv CN IS CM

P OltN OOO

<UG a m x dq am a as >λ > HJO---- p σι to O Wi 1 XI P o Wi o> wop Ο © ο p cn co -¾1 m CQ (U ft. OS p H H PP p

< £ P

H a to ---- DK 175175 B1

.. I

40 (0 ft Ή **»

r4 > K

μι o in < a) ο »π ρ ω Ό μ ο co ωκ

o W

B £ Η 0M Ό I

O) OS

X -H GO

P - ^

10 10 P

ft ο μ c

E £H ·© O

Ml Ο O 4-1 ft •Η Ο) O 00 E >i C m o in op

P -H ^ C

O C - O c 4Π P Ό O rH ora P >1 O) w λ - μ om μ o ji μ-ι op Μ Ol 0) Ο μ m c Ε >00 -μ -Η Ό Ο Η Μ Ο » 40 0

> Ο Σ X

ι (0 Μ ft Ο) Ε C

*ιΗ *Η c Ε ή γΗ ιη Ό· Ο rH γΗ μ χ c^ Ρ Μ μ μ Ό (Β D Ρ Γ- __ο

ο» μ μ CQ

(Μ ο © Ε Ε Ό •μ -μ ·μ Ό Ρ Ρ μ Ρ (Cg) Ε-* 4JI 4ί £ Γ0 cm om o n 0 --(0 ^ 0} o CM >ift * ο» μο

O O O Q

P ftO

ΦΜ1Ι OK

x o ρ μ æ H S M 0 μ to ra ρ μ > X 0 0 Λ «μ μ χ c ra ο οι μ ό x x c^ ο ο μ c < < ο ρ μ Φ 3 ft ft 2 0 Ο) ft ft ΟΧ) -CP 3 3 μ -μ φ Εη Ε-· μ 00

0 C > 0 CM

Μ Μ Ο < < C

Η Ρ c* II

ο I ο tJ J3 Ρ 00 IS 0Ο Η ω οι cm όνο m ο « j: ς js ja < α > ft co ft <o η__Ρ ρ ο (0 ι c μ μ οι c ρ os ιο ν ο μ ft Μ τΗ ιΗ ό 0 ft -- Η 28 DK 175175 B1 EKSEMPEL 6:

Indflydelse af et stærkt ionisk medium på de rheologiske egenskaber heter-opolysaccharid BM07 5

Forsøgene 18-23 blev gennemført på 0,2 vægt-% opløsninger af heteropoly-saccharid BM07 omfattende 20% NaCI.

Disse opløsninger blev fremstillet ud fra en stamopløsning baseret på des-10 tilleret vand og heteropolysaccharid BM07, således som den er opnået i ek sempel 2. Stamopløsningen fortyndes med en NaCI opløsning til opnåelse de ønskede koncentrationer af heteropolysaccharid BM07 og af NaCI.

Forsøgene blev gennemført 24 timer, 7 dage og 1 måned efter fremstillingen 15 af opløsningerne, der var holdt ved 22 “C.

i

Sammenligningsforsøg blev gennemført under de samme betingelser med 0,2 vægt-% opløsninger af RHODOPOL 23®, som var blevet opnået ved den samme fremgangsmåde. Målingerne af viskositeteme og af udstrømning-20 stærskelværdieme blev gennemført med et viskosimeter af typen LOW SHEAR.

Resultatet af forsøgene fremgår af efterfølgende tabel V.

DK 175175 B1 H · oooooo u "<o i-t ooo m o m to Oii co o o σ> σ> crv

2 Ό W

0) U HNN

«Μ > <ΰ r-i (0 Ό co o) - "

O) JZ

C X Ο) r-1

H -Hl OOOOOO

C (0+J 0) 000 ooo

to O. CO in o O CS <7\ CS

ό ε ίο »h IH JZ > HNN cn **

Oi *H (O O r-1 >H i—I

O O) 4-> c--

<#> O) -H

O -Ρ C -H

ni ήβ i in o O in in in to >i to room in o o C O X in ι-t h es co r-i O) x co co co (h o id in co c^ co H -ri o * CS es es >4-1 o ©--- co es P) o

Οι I (O

O CA (X

d a> ε o c X Ή Ή K C co co co in es h ε h rH vo es co in co 4-i & φ σ> σ* σ\ es es es

co μ X

•μ co O) co μ

O Ό (B

O JJ

σ\ O

es 2--- m μ ό μ ό Ό di (D <D α) α) O) •η ε o c ε o c U Ή (O *C0 -H (O *C0 co ό -o ε -μ ·σ ε jc ή ϋ El > «Η ^ γ-Ι ϋ es es co co--- >ι Ή C'* Ο Ο α 2

Ο CQ

μ 0) Ό -μ -η α) μ ΧΖ (0

SZ

<0 Ο J

χ -Ρ α ο

0) X Ο CU

cd μ ο

0) Ό 0) X

co α) Cv. I

< JS

eh k -1-- 30 DK 175175 B1

Forsøgene 24-26 og 27-29 blev gennemført på 0,3 vægt-% opløsninger af -heteropolysaccharid BM07, der ligeledes blev fremstillet under de betingelser, som er anført i eksempel 3, ved addition af dette heteropolysaccharid i destilleret vand indeholdende 10 vægt-% CaCfe, Na2SC>4 eller NaCI. Forsø-5 gene belv gennemført 4 timer, 7 dage og 1 måned efter fremstillingen af opløsningerne, som beholdt hvor det drejede sig om forsøgene 24-26 ved 22 °C, og hvor det drejede sig om forsøgene 27-29 ved 40 °C. Målingerne af viskositeteme blev gennemført ved hjælp af et rheometer af typen BROOKFIELD L.V.T. med 60 omdrejninger/minut.

10

Resultaterne af forsøgene 24-26 og 27-29 fremgår henholdsvis af de efterfølgende tabeller VI og VIL

TABEL VI 15

Rheologiske egenskaber af heteropolysaccharid BM07 i 10% saltholdige opløsninger ved 22 °C

Forsøg Saltets art Viskositet (i mPa x s) efter:_ 4 timer__7 dage__1 måned 24 CaCI2__530__650__640 25 Na2SQ4__560__680__640 26 NaCI 500 620 580

DK 175175 B1 I

TABEL Vil ; I

Rheologiske egenskaber af heteropolysaccharid BM07 i 10% saltholdige I

opløsninger og ved 40 °C I

Forsøg Saltets art Viskositet (i mPa x s) efter: _ I

______4 timer__7 dage__1 måned I

27 CaC|2__550__610__630 I

28 Na2SQ4__620__510__450 I

29 NaCl__590__460__- I

EKSEMPEL 7: I

Forsøgene 30 og 31 viser den gode holdbarhed ved høj temperatur af opløs- I

10 ninger af heteropolysaccharid BM07 i sammenligning med opløsninger af I

SHELL-FLO®. I

SHELL-FLO S® er et heteropolysaccharid udviklet af firmaet SHELL, som I

omfattergentagelsesgrupper afledt af glucose, af galactose og af salte af py- I

15 rodruesyre, eddikesyre og ravsyre. I

0,3 vægt-% opløsningerne i destilleret vand af heteropolysaccharid BM07 I

fremstilles under de samme betingelser, som det er beskrevet i eksempel 3. I

20 På samme måde fremstiller man 0,3 % opløsninger af SHELL-FLO S®. I

Disse opløsninger udsættes for en temperatur på 80 °C i 30 minutter. Efter 2 I

timers henstand måler man ved hjælp af et rheometer af typen Cammed CS I

50 viskositeteme og udstrømningstærskelværdierne for de behandlede op- I

25 løsninger. I

Resultaterne fremgår af efterfølgende tabel VIII: I

32 DK 175175 B1

TABEL VIII

Forsøg 0,3% opløsning af Udstrømningstærskel Viskositet (i mPa x ___(i mPa)__s) ved 1 s'1_ 30 Heteropolysaccharid 1080 2415 __BM07___ 31 I SHELL FLOS® 66 323 EKSEMPEL 8: 5

Anvendelse af heteropolysaccharid BM07 i præparater til fjernelse af sten Man fremstiller et præparat til fjernelse af sten ved tilførsel til en kolbe af: 10 - heteropolysaccharid BM07 0,25% - vand 87,70% - myresyre 10% - ethoxyleret nonylphenol (12 OE) 2% - parfume og farvestof 0,05% 15 pH i dette præparat er 1,4.

Stabiliteten af dette præparat bedømmes som en funktion af temperaturen og oplagringstiden ved målingen af viskositeten deraf ved hjælp af et apparat 20 Rheomat 30 inden for et stort område af hastighedsgradienter (0,1 s'1 til 100 s'1) og ved hjælp af et Brookfield viskosimeter LVT ved 20 om-drejninger/minut.

Målingerne gennemføres ved 20 °C og de opnåede resultater fremgår af ef-25 terfølgende tabel IX: DK 175175 B1 •(O " ^~l

Cu μ

H

-<o μ E 0) μ CO Q)

E X *H CD

(O O C

a x -η in o o in E cn E o vo in in •w \ in in in in -η > μ μ *σ o

0) »-H CM

μ 0) •Η -Η Ό 0) Ή 0) OJO X o to O Eh •Η M >

> CD J

O

CO

μ »η to i co vo vo in E 0) 'ΐ ^ ^ o μ a> c o .CO) o

K Ή rH

•o •«o id --- a μ O) μ to h •Η Ό i O in in in •to 0) to o σ> σ> σ>

E £ o co <s (M CM

_ D) r-t £ __

X CO

<0 i-( o o o o (OKI o in o m

Cu co o on Q o*

E

t-l CM ι-H CM i—I

•H

μ 0) Ή μ i o o o o

Ή 0) O O O O

to in o tn o O Ή

•X «· CM (O CO CO

(0 O Η Η Η H

Ή >

U

o

•W

μ 3 μ <o o o o o μ n n ^ Ό 0) a E d)

Ir·

U

X (1)0)0) h E cn D) O) Ό Ή (0 <0 (0 ►J -Η μ 'O Ό Ό ω E-· tn cm æ i-< cn < E-t --

Claims

1. Heteropolysaccharid BM07, kendetegnet ved, at det opnås ved fer-5 mentering af et medium omfattende mindst en kilde til assimilerbart carbon med en stamme af Agrobacterium tumefaciens I-736, at det omfatter gentagelsesgrupper afledt af glucose, galactose og pyrodruesyre, ravsyre eller eddikesyre eller af salte af disse syrer i molære forhold på henholdsvis: 5-8 /1-2 / 0,5-2 /0,5-2 / 0,05-2, og at en opløsning på 0,1 vægt-% af nævnte 10 heteropolysaccharid BM07 i destillered vand ved 25 °C udviser viskositeter efter 24 timers forløb større end 350 mPa-s, idet viskositeteme er målt med en hastighedsgradient på 1 s'1 ved hjælp af et viskosimeter af typen low shear.

2. Heteropolysaccharid BM07 ifølge krav 1,kendetegnet ved, at en opløsning på 0,1 vægt-% af nævnte heteropolysaccharid BM07 i destilleret vand ved 25 °C udviser viskositeter mere specifikt mellem 400 og 700 mPa*s, idet viskositeteme er målt med en hastighedsgradient på 1 s'1 ved hjælp af et viskosimeter af typen low shear. 20

3. Heteropolysaccharid BM07 ifølge krav 1 eller 2, kendetegnet ved, at dets indre viskositet er mellem 30 og 250 dl/g, mere specifikt mellem 140 og 250 dl/g og mest fortrinsvis mellem 150 og 240 dl/g.

4. Heteropolysaccharid BM07 ifølge ethvert af de foregående krav, kende tegnet ved, at en opløsning på 0,2 vægt-% af heteropolysaccharidet BM07 i en 20 vægt-% opløsning af NaCI udviser viskositeter efter 24 timers forløb mellem 1.600 og 2.400 mPa*s, og fortrinsvis mellem 1.700 og 2.100 mPa*s, idet viskositeteme er målt med en hastighedsgradient på 1 s'1 ved 30 hjælp af et viskosimeter af typen low shear.

5. Heteropolysaccharid BM07 ifølge ethvert af de foregående krav, kendetegnet ved, at en vandig opløsning på 0,2 vægt-% af dette heteropolysac- 35 DK 175175 B1 charid ved en pH-værdi på 7 og ved en temperatur på 25 °C efter 24 timers forløb udviseren viskositet på mellem 1.000 og 2.500 mPa*s, og mere specifikt mellem 1.400 og 2.000 mPa»s, idet viskositeterne er målt med en hastighedsgradient på 1 s'1 ved hjælp af et viskosimeter af typen low shear. 5

6. Heteropolysaccharid BM07 ifølge ethvert af de foregående krav, kendetegnet ved, at en vandig opløsning på 0,2 vægt-% af dette heteropolysaccharid ved en pH-værdi på 1,7 og ved en temperatur på 25 °C udviser en viskositet efter 24 timers forløb på mellem 1.000 og 2.500 mPa»s, og mere 10 specifikt mellem 1.400 og 2.000 mPa«s, idet viskositeterne er målt med en hastighedsgradient på 1 s*1 ved hjælp af et viskosimeter af typen low shear.

7. Heteropolysaccharid BM07 ifølge ethvert af de foregående krav, kendetegnet ved, at en vandig opløsning på 0,2 vægt-% af dette heteropolysac- 15 charid ved en pH-værdi på 11,8 og ved en temperatur på 25 °C udviser en viskositet efter 24 timers forløb på mellem 1.000 og 2.500 mPa»s, og mere specifikt mellem 1.400 og 2.000 mPa*s, idet viskositeterne er målt med en hastighedsgradient på 1 s'1 ved hjælp af et viskosimeter af typen low shear.

8. Heteropolysaccharid BM07 ifølge ethvert af de foregående krav, kende tegnet ved, at en vandig opløsning på 0,2 vægt-% af dette heteropolysaccharid i destilleret vand efter at være opvarmet til 80 °C i 24 timer udviser viskositeter på mellem 500 og 2.500 mPa»s, mere specifikt mellem 1.000 og 2.000 mPa-s, idet viskositeterne er målt med en hastighedsgradient på 1 s'1 25 ved hjælp af et viskosimeter af typen low shear.

9. Heteropolysaccharid BM07 ifølge ethvert af de foregående krav, kendetegnet ved, at det har en molekylvægt mellem 6 x 106 og 10 x 106, fortrinsvis mellem 6,5 x 106 og 9,5 x 106.

10. Heteropolysaccharid BM07 ifølge ethvert af de foregående krav, ken detegnet ved, at det molære forhold af gentagelsesgrupper er henholdsvis 6-7,5 /1-1,5/ 0,5-1 / 0,5-1 / 0,05-2. 36 DK 175175 B1

11. Heteropolysaccharid BM07 ifølge ethvert af de foregående krav, kendetegnet ved, at det molære forhold af gentagelsesgrupper er henholdsvis 7/1 /0,5-1 /0,5-1/0,05-1.

12. Heteropolysaccharid BM07 ifølge ethvert af de foregående krav, ken detegnet ved, at pyrodruesukker, ravsyre og eddikesyre er til stede i form af salte.

13. Heteropolysaccharid BM07 ifølge krav 12, kendetegnet ved, at 10 disse syrer er til stede i form a natrium-, kalium-, calcium- eller ammoniumsalte.

14. Fremgangsmåde til fremstilling af heteropolysaccharid BM07 ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 13, kendetegnet ved fermentering af 15 et medium indeholdende mindst en kilde til assimilerbart carbon med en stamme af Agrobacterium tumefaciens I-736, idet den anvendte kilde til assimilerbart cabon er glucose, sucrose eller stivelseshydrolysat.

15. Fremgangsmåde ifølge krav 14, kendetegnet ved, at koncentra-20 tionen af kilden til assimilerbart carbon, der er til stede i fermenteringsmediet, er mellem 1 og 100 g/l, og fortrinsvis mellem 15 og 60 g/l.

16. Fremgangsmåde ifølge krav 14 og 15, kendetegnet ved, at fermenteringsmediet indeholder mindst en kilde til organisk nitrogen. 25

17. Fremgangsmåde ifølge krav 15, kendetegnet ved, at kilden til organisk nitrogen kan være casein og caseinater, hvede, majs- eller soyamel, gærekstrakter, opløselige dele fra tørdestillering, kartoffelproteiner, majsudblødningsvand eller opløselige dele fra majsudblødningsvand. 30

18. Fremgangsmåde ifølge krav 17, kendetegnet ved, at kilden til organisk nitrogen er majsudblødningsvand eller opløselige dele fra majsudblødningsvand. 37 DK 175175 B1

19. Fremgangsmåde ifølge et af kravene 16-18, kendetegnet ved, at koncentrationen af en kilde til organisk nitrogen i fermenteringsmediet er mellem 3 og 80 gfl. 5

20. Fremgangsmåde ifølge et af kravene 14-19, kendetegnet ved, at fermenteringsmediet indeholder mindst et uorganisk salt.

21. Fremgangsmåde ifølge krav 20, k e ndetegnet ved, at det uor- 10 ganiske salt er sulphat eller carbonat.

22. Fremgangsmåde ifølge et af kravene 19-21, kendetegnet ved, at koncentrationen af uorganisk salt er mellem 0,01 og 5 g/l.

23. Fremgangsmåde ifølge et af kravene 14 til 22, k e n d e t e g n e t ved, at den gennemføres ved et tryk mellem 1 og 4 bar og ved temperaturer mellem 25 og 35 °C under aerobe betingelser.

24. Fremgangsmåde ifølge et af kravene 14 til 23, kendetegnet ved, at 20 pH-værdien i fermenteringsmedium er mellem 5 og 9, fortrinsvis mellem 6 og 8.

25. Fremgangsmåde ifølge et af kravene 14-24, kendetegnet ved, at fermenteringsudbyttet er fra 40 til 75 vægt-% af det fremstillede heteropoly- 25 saccharid BM07 i forhold til den anvendte carbonkilde.

26. Fremgangsmåde ifølge et hvilket som helst af kravene 14 til 25, k en· d e t e g n e t ved, at heteropolysaccharid BM07 separeres fra det fermenterede maltafkog ved følgende trin: Det fermenterede maltafkog opvarmes til mellem 80 og 120 °C i 10 til 60 minutter. 30 38 DK 175175 B1 Heteropolysaccharid BM07 bundfældes ved hjælp af en organisk væske, der er blandbar med vand. Heteropolysaccharid BM07 separeres fra den organiske væske ved 5 filtrering, centrifugering eller tørring.

27. Fremgangsmåde ifølge krav 26, kendetegnet ved, at nævnte organisk væske er ethanol, propanol, isopropanol, butanol eller tert-butanol.

28. Fremgangsmåde ifølge et af kravene 26 eller 27, kendetegnet ved, at når først heteropolysaccharid BM07 er separeret fra det fermenterede maltafkog, dehydreres det, tørres, males og sigtes.

29. Anvendelse af heteropolysaccharid BM07 ifølge et af kravene 1 til 13 15 som et fortykkelsesmiddel.

30. Anvendelse af heteropolysaccharid BM07 ifølge et af kravene 1 til 13 som et opløsningsmiddel.

31. Anvendelse af heteropolysaccharid BM07 ifølge ethvert af kravene 1 til 13 som fortykkelsesmiddel i sure vandige præparater indeholdende i vandig opløsning en organisk syre med en dissociationskonstant pK ved 25 °C større end eller lig med 2 og/eller mindst et salt af en organisk eller uorganisk syre med pK større end eller lig med 2 samt en stærk base. 25

32. Anvendelse af heteropolysaccharid BM07 ifølge krav 31,kendetegne t ved, at nævnte syre er myresyre, eddikesyre, citronsyre eller garvesyre.

33. Anvendelse af heteropolysaccharid BM07 ifølge krav 31 og 32, k e n -30 d e t e g n e t ved, at de nævnte præparater er bestemt til rensning af overflader, til fjernelse af sten på porcelænsoverflader eller til dekapering af metaloverflader.