DK174120B1 - Poly(lactid-co-glycol)polymer omfattende mindst 25 mol% mælkesyreenheder og op til 75 mol% glycosyreenheder samt fremgangsmåde til fremstilling heraf - Google Patents

Description

• _ _ _ DK 174120 B1 i

Den foreliggende opfindelse angår en heterogen polylactid-co-glycolid) polymer med bred molekylvægtsfordeling samt en fremgangsmåde til fremstilling heraf

Poly(lactid-co-glycolid)polymeren er ejendommelig ved, at den 5 omfatter mindst 25 mol% mælkesyreenheder og op til 75 mol% glycol syreenheder, at den er uopløselig i benzen, og at den har et logaritmisk viskositetstal {1 g/100 ml opløsning i chloroform eller dioxan) lig med eller større end 0,09 dl/g og et grænseviskositetstal lig med eller mindre end 0,33 dl/g 10 Fremgangsmåden til fremstilling af poly (lactid-co-glycolid) polymeren er ejendommelig ved ringåbnende polymerisation af en cyklisk dimer af mælkesyre og eventuelt i nærværelse af en cyklisk dimer af glycolsyre ved en forhøjet temperatur i nærværelse af en polymerisationskatalysator valgt blandt zmk-15 oxid, zmkcarbonat, basisk zinkcarbonat, diethylzink, or-ganotinforbindelser, tributylaluminium, titan, magnesium eller bariumforbmdelser eller blyoxid og i nærværelse af et kædevækst regulerende middel Sådanne poly(lactid-co-glycolid)polymere er velegnede til 20 anvendelse i farmaceutiske midler indeholdende farmakologisk aktive syrestabile polypeptider, som giver kontinuerlig frigørelse af polypeptidet gennem længere tid, når midlet anbringes i et vandigt miljø af fysiologisk type

Det har længe været erkendt, at kontinuerlig frigørelse af 25 visse lægemidler gennem længere tid efter en enkelt administration kunne have betydelige praktiske fordele i klinisk praksis, og der er allerede udviklet midler, som giver forlænget frigørelse af en række klinisk nyttige lægemidler efter oral dosering (se f eks Remington's Pharmaceutical Sciences, 30 udgivet af Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania, USA, 15 udgave, 1975, side 1618-1631), efter parenteral administration (ibidem, side 1631-1643) og efter topisk administration (se f eks britisk patentskrift nr 1 351 409) DK 174120 B1 2

En egnet metode til parenteral administration er subdermal infektion eller implantation af et fast legeme, f eks en pille eller en film indeholdende lægemidlet, og der er beskrevet forskellige sådanne implanterbare organer Specielt er 5 det kendt, at for mange lægemidler kan egnede implanterbare organer til at give forlænget frigørelse af lægemiddel opnås ved at indkapsle lægemidlet i en bionedbrydelig polymer eller ved at fordele lægemidlet i en grundmasse af en sådan polymer, således at lægemidlet frigøres, efterhånden som nedbrydningen 10 af den polymere grundmasse skrider frem

Egnede bionedbrydelige polymere til brug i præparater med vedligeholdt frigørelse er velkendte og indbefatter polyestere, som bliver gradvis nedbrudt ved hydrolyse, når de anbringes i et vandigt mil^ø af fysiologisk type Særlige polyestere, som 15 har været anvendt, er de, der er afledt af hydroxycarboxylsyrer, og megen kendt teknik har vedrørt polymere afledt af a-hydroxycarboxylsyrer, især mælkesyre i både dens racemiske og optisk aktive former, og glycolsyre og copolymere deraf (se f eks de amerikanske patentskrifter nr 3 773 919 og 20 3 887 699, Jackanicz m fl , Contraception, 1973, 8, 227-234,

Anderson m fl , ibidem, 1976, 11, 375-384, Wise m fl Life Sciences, 1976, 19, 867-874, Woodland m fl , Journal of Medicinal Chemistry, 1973, 16, 897-901, Yolles m fl , Bulletin ' of the Parenteral Drug Association, 1976, 30, 306-312, Wise 25 m fl , Journal of Pharmacy and Pharmacology, 1978, 30, 686-689, og 1979, 31, 201-204) I den foreliggende beskrivelse anvendes udtrykket "polylactid" generelt til at indbefatte polymere af mælkesyre alene, copolymere af mælkesyre og glycolsyre, blandinger af disse poly-30 mere og blandinger af sådanne copolymere samt blandinger af sådanne polymere og copolymere, hvor mælkesyren er enten i racemisk form eller i optisk aktiv form Udtrykket "syre-stabil" skal forstås som betydende, at polypeptidet ikke hydrolyseres væsentligt under de betingelser, der optræder inde 35 i de omhandlede præparater under den brugsperiode, der tilsig- 3 DK 174120 B1 tes, dvs ved pH 2 ved pattedyrs legemstemperatur, f eks op til 40°C, i op til 6 måneder

Britisk patentskrift nr 1 325 209 (ækvivalent med amerikansk patentskrift nr 3 773 919) og amerikansk patentskrift nr 5 3 887 669 er den hidtil eneste for ansøgerne kendte teknik, som omtaler forlænget frigørelse af polypeptider, idet sidstnævnte kun nævner insulin, men den indeholder ingen konkrete eksempler på noget sådant præparat, og omtalen af polypeptider er tilsyneladende helt spekulativ, idet den kun forekommer i 10 en omfattende liste over mange forskellige klasser lægemidler, der hævdes at kunne inkorporeres i præparater af den deri beskrevne slags I hovedsagen alle de andre lægemiddel typer, der er omtalt i denne beskrivelse, bortset fra polypeptider, er faktisk for-15 holdsvis hydrofobe af karakter og af forholdsvis lav molekylvægt, og patentbeskrivelsen viser ingen erkendelse af vanskelighederne, som man har mødt, når man har søgt at opnå tilfredsstillende vedligeholdt frigørelse af præparater af polypeptider, hvoraf mange er forholdsvis hydrofile og med for-20 holdsvis hø] molekylvægt

Fra US-patentskrift nr 4 011 312 kendes bougies på 5 x 0,5 cm beregnet til indførelse i køers yverkanaler til behandling af mastritis omfattende et antimikrobielt lægemiddel og en lac-tid/glycolid-copolymer med en molekylvægt under 2000, hvilket 25 svarer til et logaritmisk viskositetstal på mindre end 0,093 Et sådant præparat frigør ikke et polypeptidlægemiddel kontinuerligt gennem længere tid I Chemical Abstracts, 88, 79041 n er beskrevet mikrokapsler, hvor en kerne af lægemiddel er indesluttet i et hylster af 30 polylactid En sådan mikrokapsel er ikke et præparat, hvori lægemidlet er ensartet dispergeret i polylactidet

Det vil forstås, at "vedligeholdt" eller "forlænget" frigø- DK 174120 B1 4 relse af et lægemiddel kan være enten kontinuerlig eller diskontinuerlig Det er nu opdaget, at i mange tilfælde, hvor den kendte tekniks lære, og især den i britisk patentskrift nr l 325 209 indeholdte lære, anvendes på fremstilling af et præ-5 parat af et syrestabilt polypeptid, kan frigørelsen af poly-peptidet fra præparatet, selv om den sker over en længere tid, også være diskontinuerlig Forud for frigørelse af et polypeptid fra en polylactidpolymer, som beskrevet i nævnte beskrivelse, går der f eks ofte en betydelig induktionsperiode, 10 hvorunder intet polypeptid frigøres, eller frigørelsen er tofaset og omfatter en begyndelsesperiode, hvorunder noget polypeptid frigøres, og en anden periode, hvorunder intet eller kun lidt polypeptid frigøres, og en tredje periode, hvorunder det meste af resten af polypeptidet frigøres I modsætning 15 hertil er det et formål med den foreliggende opfindelse at tilvejebringe ny polymere til anvendelse ved fremstilling af midler indeholdende syrestabile polypeptider, fra hvilke, eventuelt bortset fra en forholdsvis kort induktionsperiode i begyndelsen, polypeptidet frigøres kontinuerligt, idet der 20 ikke er nogen perioder, hvorunder intet eller kun lidt polypeptid frigøres Udtrykket "kontinuerlig frigørelse" anvendes i den foreliggende beskrivelse alene til at beskrive en frigø-relsesprofil, som er i det væsentlige en-faset, selv om den kan have et vendepunkt, men som i hvert fald ikke har nogen 25 plateaufase DK-patentansøgmng nr 591/82, som denne ansøgning er afdelt af, angår et farmaceutisk middel, som omfatter (a) fra 50% til 99,9% af et polylactid, som er en polymer af mælkesyre alene, en copolymer af mælkesyre og glycolsyre, hvori forholdet mel-30 lem glycolid- og lactidenheder er fra O op til 3 1, en blanding af sådanne polymere eller en blanding af sådanne polymere og copolymere, idet mælkesyren er enten i racemisk eller optisk aktiv form, og hvor polylactidet er enten uopløseligt i benzen og har et logaritmisk viskositetstal fra 0,093 (l g pr 35 100 ml i kloroform) til 0,5 (1 g pr 100 ml i benzen) eller uopløseligt i benzen og har et logaritmisk viskositetstal fra 5 DK 174120 B1 Q# 093 (1 g pr 100 ml i kloroform) til 4 (1 g pr 100 ml i kloroform eller dioxan) , og (b) fra 0,1% til 50% af et farmakologisk aktivt polypeptid, som ikke hydrolyseres tilstrækkeligt under de betingelser, der forekommer inde i midlet 5 under den tilsigtede brugsperiode, hvilket polypeptid er ensartet dispergeret i polylactidet

Poly(lactid-co-glycolid)polymererne er anvendelige i farmaceutiske midler omfattende syrestabile polypeptider generelt uden nogen begrænsning med hensyn til struktur eller molekyl-10 vægt, men er mest nyttige til polypeptider, som er forholdsvis hydrofile, og den følgende liste, der ikke skal anses for udtømmende, viser polypeptider, som kan anvendes sammen med · poly{lactid-co-glycolid)polymererne ifølge opfindelsen

Oxytocin, vasopressin, adrenocortikotropt hormon (ACTH), epi-15 dermal vækstfaktor {EGF), prolactin, lulibenn eller lutemi-serende hormon-frigørende hormon (LH-RH), insulin, somatostatin, glucagon, interferon, gastrin, tetragastrm, pen-tagastrin, urogastron, secretin, calcitonin, enkephaliner, endorphiner, angiotensiner, renin, bradykimn, bacitracmer, 20 polymyxiner, colistiner, tyrocidin, gramicidmer og syntetiske-analoge og modifikationer og farmakologisk aktive fragmenter deraf

Det har imidlertid vist sig, at polypeptider, som ikke er stabile under sure betingelser, er uegnede til brug i midler-25 ne, da de bliver nedbrudt i det sure miljø, som er frembragt i den polymere grundmasse, når polylactidet begynder af nedbryde ved hydrolyse, og derved frembringer carboxylsyre-endegrupper

Ved udtrykket "et vandigt miljø af fysiologisk type" menes legemet, især muskelsystemet og cirkulationssystemet, hos et 30 varmblodet dyr, omend ved laboratorieundersøgelser et sådant miljø kan efterlignes af vandige væsker, der eventuelt med en stødpude er indstillet til en fysiologisk pH-værdi ved en temperatur mellem 35 og 40°C

DK 174120 B1 6

Midlerne med kontinuerlig frigørelse kan anbringes i legemet hos et dyr, som man ønsker at behandle med polypeptid, ved f eks mtramuskulær eller subkutan infektion eller ved sub-dermal kirurgisk implantation på sædvanlig klinisk eller ve-5 termær måde

Det har vist sig, at et farmaceutisk middel, som indeholder et polylactid som defineret på side 4, andet afsnit, kan udformes til at give kontinuerlig frigørelse af polypeptidet ved passende valg eller regulering af forskellige parametre, f eks 10 ved at variere polylactid-sammensætningen, især forholdet mellem mælkesyre og glycolsyre i copolymere, ved at regulere molekylvægten af polylactidet, både gennemsnitsmolekylvægten efter vægt og molekylvægtsintervallet eller polydispersiteten, målt ved forholdet mellem gennemsnitsmolekylvægten efter vægt

15 (Μω) og gennemsnitsmolekylvægten efter antal (Mn), d v s M

ω

Mn i ved valg af mængdeforholdet mellem polypeptid og polylactid eller ved valg af geometrien af et fast præparat til implantation eller af partikelstørrelsen i et præparat til infektion Frigørelsesegenskaberne af sådanne midler reguleres 20 også til en vis grad af karakteren af polypeptidet selv Specielt er der mindre valgfrihed til at definere de ovennævnte parametre, når man fremstiller et middel til et polypeptid med hø} molekylvægt (f eks større end 6000), end der er, når man fremstiller et middel til et polypeptid med lavere molekylvægt 25 (f eks mindre end 6000)

Det har endvidere vist sig, at frigørelsen af et polypeptid fra et middel omfattende et polylactid og et polypeptid forløber ved to adskilte og uafhængige mekanismer, nemlig først en diffusionsafhængig frigørelse af polypeptid ud af grundmas-30 sen af polylactid og polypeptid, bestående i udludning fra overfladen, og for lavmolekylære polypeptider nogen fordelings-afhængig diffusion af polypeptid som sådan, og bagefter, efterhånden som polylactidet bliver nedbrudt, diffusion af vandig polypeptid-opløsning ud af midlet gennem vandige kana- 7 DK 174120 B1 ler I almindelighed er foreneligheden af polypeptider i polylac-tidpolymere begrænset, undtagen, hvor det drejer sig om lavmolekylære polypeptider (f eks op til en molekylvægt på 5 6000), som er i stand til at have nogen specifik reaktion med polylactidet, f eks et lavmolekylært polypeptid, der er basisk, og som derfor reagerer med de endestillede carboxyl-syregrupper i polylactidet På grund af denne begrænsede for-enelighed af polypeptid i polylactid frigør et præparat af 10 polypeptid og polylactid, når det anbringes i et vandigt miljø, meget lidt polypeptid ved diffusion gennem den polymere grundmasse Dette er stort set rigtigt for alle kombinationer af polypeptid og polylactid, men grundmassediffusion er på et minimum for højmolekylære polypeptider i højmolekylære poly-15 lactider Selv om der sker nogen grundmassediffusion, som resulterer i en polypeptidfrigørelse i begyndelsen ved anbringelse af midlet i et vandigt miljø ved frigørelse fra eller meget nær ved overfladen, ophører dette snart, fordi diffusionen af polypeptid ind i polylactid er utilstrækkelig til 20 at resultere i kontinuerlig transport af polypeptid fra det indre af midlet til dets overflade Når et middel af polypeptid og polylactid anbringes i et vandigt miljø, diffunderer vand ind i grundmassen og fordeles mellem polypeptid og polylactid til dannelse af områder med 25 vandig polypeptid-opløsning Dette vandige polypeptid, som er fremkommet, når absorberet vand fordeles mellem polypeptid og polylactid, er uforeneligt med og uopløseligt i polylactider, især de med høj molekylvægt, således at midlets absorption af vand til at begynde med yderligere nedsætter en sandsynlighed 30 for grundmassediffusion af polypeptid ud af midlet Hvis de således dannede områder af polypeptid er adskilte og isolerede, er midlerne ude af stand til at frigøre polypeptid Muligheden for, at de vandige polypeptidområder har nogen kontinuitet, vokser imidlertid med stigende koncentration af 35 polypeptid i midlet og med stigende absorption af vand, og når DK 174120 B1 8 kontinuiteten af vandige polypeptidområder når et tilstrækkeligt niveau til at komme i kontakt med den ydre overflade af midlet, begynder polypeptid at blive frigjort fra præparatet ved diffusion, ikke gennem polylactidgrundmassen, men gennem 5 vandige polypeptid-kanaler Selv når nogle vandige polypep-tid-områder nær overfladen har udvidet sig, således at de når det ydre af midlet, bliver det vandige polypeptid, som eksisterer i stadig isolerede områder, ikke frigjort, det frigøres først, når en sekundær hydrofil bane for diffusion bliver 10 tilgængelig For højmolekylære polylactider opstår denne sekundære hydrofile diffusionsbane, når polylactidet er undergået tilstrækkelig nedbrydning til, at hastigheden af absorptionen af vand vokser betydeligt Når dette sker, udvikles der vandige porer eller kanaler i polylactidgrundmassen, som 15 muliggør en kontinuerlig og betydelig frigørelse af polypeptid som vandig opløsning fra tidligere adskilte og isolerede områder

Som ovenfor anført har det vist sig, at når midler med vedligeholdt frigørelse af kendt art, og især de i britisk patent 20 nr 1 325 209 beskrevne, anvendes til frigørelse af polypep-tider, er den oprindelige grundmassediffusionsfase af polypep-tidfngørelsen og den anden frigørelse af polypeptid, der følger efter nedbrydning af polylactidet, adskilt i tid med det resultat, at frigørelsen af polypeptid ikke er konti-25 nuerlig, men to-faset og diskontinuerlig og omfatter en lille første frigørelse a polypeptid, en død fase hvorunder der i hovedsagen ikke frigøres noget polypeptid, og en påfølgende anden frigørelsesfase, hvorunder i hovedsagen alt det resterende polypeptid frigøres Det har nu vist sig, at ved pas-30 sende valg af midlets parametre kan grundmassediffusionsfasen af frigørelsen og den påfølgende af nedbrydning inducerede frigørelsesfase bringes til at overlappe tidsmæssigt

Et farmaceutisk middel omfattende et polylactid, som defineret i det foregående, og et syrestabilt polypeptid udviser to på 35 hinanden følgende faser af frigørelse af polypeptid, når det 9 DK 174120 B1 anbringes i et vandigt miljø af fysiologisk type, idet den første fase er frigørelse ved grundmassediffusion, og den anden fase er frigørelse som følge af nedbrydning af polylac-tid, og som er ejendommeligt ved, at diffusionsfasen og den 5 nedbrydningsinducerede fase overlapper i tid

De to faser kan bringes til at overlappe ved enten at forlænge den første diffusionsfase eller ved at bringe den af nedbrydning inducerede fase til at begynde tidligere eller begge dele 10 Den første grundmassefrigørelsesfase er vanskelig at forlænge, men er følsom for koncentration af polypeptid i grundmassen og i begrænset omfang for karakteren af polypeptidet, især dets hydrofllicitet

Den af nedbrydning inducerede frigørelsesfase kan bringes til 15 at begynde tidligere ved passende valg af polylactid (mere glycolid-rige polymer-molekyler, som nedbrydes hurtigere end laetid-rige molekyler), Μω (molekyler med lav molekylvægt nedbrydes hurtigere til et niveau, hvor vandige kanaler fremkommer i grundmassen) og polypeptidkoncentration (en højere 20 polypeptidkoncentration muliggør hurtigere absorption af vand-og følgelig hurtigere udvikling af kontinuerlige vandige kanaler som letter frigørelse af polypeptid)

Foruden nødvendigheden af, at den nedbrydningsinducerede frigørelsesfase begynder tidligere, er det også nødvendigt at 25 regulere hastigheden af polypeptidfrigørelse under denne fase og at sikre, at den samlede varighed af denne fase er tilstrækkelig til dens tilsigtede kliniske eller veterinære formål En metode til at forlænge varigheden af den nedbrydnings-inducerede frigørelsesfase er at anvende polylactider, som 30 indeholder lactid-rige molekyler, der nedbrydes langsommere end glycolid-nge molekyler, eller alternativt kan der anvendes polylactider indeholdende molekyler med høj molekylvægt, som det tager længere tid at nedbryde til et niveau, hvor der DK 174120 B1 10 dannes vandige kanaler

Det er derfor klart, at da glycolid-rige polymer-molekyler og/eller molekyler med lav molekylvægt foretrækkes, hvis nedbrydningsfasen skal begynde hurtigt, og lactid-nge molekyler 5 og/eller molekyler med hø] molekylvægt foretrækkes, hvis den nedbrydningsinducerede frigørelsesfase skal vare i tilstrækkelig lang tid, er foretrukne polylactider de med en høj grad af heterogenitet med hensyn til glycolidnge og lactidrige molekyler eller hø] polydispersitet 10 Alternativt kan samme egenskaber opnås ved at blande to eller flere forskellige polylactider, som er forskellige med hensyn til lactid/glycolid-indhold og/eller med hensyn til Μω Blanding af en mindre mængde polylactid med hø] Μω med et polylac-tid med lav Μω giver desuden ønskelige fysiske egenskaber til 15 midler fremstillet deraf, idet det gør dem lettere at fremstille og forarbe]de

Det har endvidere vist sig, at profilen af polypeptidfrigørelsen fra både kendte lactider og hidtil ukendte polylactider parallelliseres næsten nø]agtigt af profilen af vand-absorp-20 tion Det vil sige, at når polypeptidfrigørelsen er diskontinuerlig, er vand-absorptionen også diskontinuerlig i hovedsagen på samme måde, og omvendt, når polypeptidfrigørelsen er kontinuerlig, er vand-absorptionen også Variation af de ovenfor omtalte parametre til regulering af polypeptidfrigørel-25 sesegenskaberne af midlet har endvidere vist sig at påvirke vand-absorptionen af midlet på en nøjagtigt parallel måde

Virkningen af de forskellige parametre, der er omtalt ovenfor, på polypeptidfrigørelsen og/eller vandabsorptionsegenskaberne illustreres af følgende forsøg 30 A Molekylvægt af polvlactidkomponenten A 1 Lavmolekylær polypeptid 11 DK 174120 B1

All Der blev fremstillet præparater omfattende 20% w/w af det gastriske peptidfragment tetragastrm-hydrochlo-rid, Trp-Met-Asp-Phe-NH2,HC1, molekylvægt = 633, i et polylactid omfattende ækvimolære mængder D,L-lactid-5 og glycol-enheder i form af en 0,2 mm tyk film Fil mene blev anbragt enkeltvis i vand ved 37°C, som blev skiftet daglig, og den ultraviolette absorption ved 277 nm blev målt for at bestemme tetragastnnfngørel-sen af præparatet den pågældende dag 10 Med en kendt type polylactid med Μω på ca 240 000 (grænseviskositetstal = 1,36) var der en begyndende frigørelse af tetragastnn, derefter en død periode ... fra ca 5 dag til 21 dag, hvorunder meget lidt blev fng}ort, efterfulgt af en hovedfrigørelse fra den 24 15 dag fremefter

Med et nyt polylactid med Μω på ca 15 000 (grænsevi-skositetstal = 0,25) var frigørelsesmønsteret lignende, men den døde periode varede kun fra dag 4 eller 5 til dag 8 eller 9 20 Med et nyt polylactid med lav Μω (grænseviskositetstal .

af en 1 g/100 ml opløsning i chloroform på 0,11) var der ingen død periode, og tetragastnn blev frigjort kontinuerligt fra tiden nul (TQ) A 1 2 Lignende præparater blev fremstillet under anvendelse

25 af 10 vægt% af den syntetiske luliberin-analoge, ICI

118 630, j^lu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser (O-tBu) Leu-Arg-Pro--Azgly-NH2, molekylvægt * 1269, i stedet for tetragas-tnn

Med et kendt polylactid med Μω ca 240 000 (grænsevi-30 skositetstal = 1,36) var frigørelsen af polypeptidet to-faset med en død periode på ca 15 dage DK 174120 B1 12

Med et nyt polylactid med Μω ca 14 000 (grænsevisko-sitetstal = 0,25) var der en kort induktionspenode, efterfulgt af kontinuerlig frigørelse

Med et nyt polylactid med lav Μω (grænseviskositetstal 5 af en 1 g/100 ml opløsning i chloroform på 0,11) var

der en kontinuerlig frigørelse fra TQ

A 2 Polypeptid med middel-molekylvægt

Polypeptidpræparater med middelmolekylvægt blev fremstillet omfattende 0,1 vægt% muse-epidermal vækstfak- 10 tor (EGF) , molekylvægt = 6041, i polylactider omfat tende ækvimolære mængder D,L-mælkesyre- og glycol-syre-enheder og med forskellig Μω og anbragt i en stødpude med pH 7,4 Frigørelse af EGF blev overvåget ved radioimmunbestemmelse 15 Med et kendt polylactid med Μω ca 200 000 (grænsevi- skositetstal = 1,08) var der ingen frigørelse i begyndelsen og ingen kendelig frigørelse af polypeptid indtil mellem den 13 og 20 dag efter TQ< hvorefter frigørelsen var kontinuerlig 20 Med et nyt polylactid med Μω ca 80 000 (grænsevisko sitetstal = 0,58) var der heller ingen frigørelse i begyndelsen, og betydelig frigørelse skete først mellem den 6 og 10 dag efter T0' hvorefter frigørelsen var kontinuerlig 25 Med et nyt polylactid med lav Μω (grænseviskositetstal

af en 1 g/100 ml opløsning i chloroform på 0,11) var der kontinuerlig frigørelse fra TQ

A 3 Højmolekylær polypeptid

Der blev fremstillet et præparat omfattende 20% w/w 13 DK 174120 B1 okseprolactm, molekylvægt ca 22 000, i et nyt po-lylactxd omfattende ækvimolære mængder D,L-mælkesyre-og glycolsyre-enheder og med lav Μω (grænseviskosi-tetstal af en lg/100 ml opløsning i chloroform på 5 0,11) Som forventet af de foregående forsøg All, A 1 2 og A 2, frigjorde dette præparat også polypeptid kontinuerligt fra T0, når det blev afprøvet in vivo i rotter, og cirkulerende okseprolactm blev bestemt ved radioimmunbestemmelse 10 Forsøg Al- A3 viser således, at reducering af molekylvægten Μω eller viskositeten af polylactidet anvendt til fremstilling af et middel reducerer den to-fasede karakter af polypeptidfngørelsen for poly-peptider med lav eller middel-molekylvægt eller den 15 begyndende forhaling i frigørelsen af polypeptideme med middel- eller høj molekylvægt og opnår en kontinuerlig frigørelse af polypeptidet fra T0 B Forhold lactid/alycolid i polvlactidet

Der blev fremstillet midler i form af implanterbare organ-20 er indeholdende 100 μg (3% w/w) af lulibenn-analogen, ICI

118 630, i polylactider med Μω ca 300 000, men med forskellige lactid/glycolid-forhold Når disse præparater blev afprøvet in vivo i voksne hun-rotter, der udviste normal østrus-adfærd, gav de alle to-faset frigørelse af 25 polypeptidet omfattende frigørelse i ca 6 dage efter be handlingen, efterfulgt af en død periode, hvorunder der ikke var nogen kendelig frigørelse af polypeptid Længden af denne døde periode aftog med aftagende lactid/glycolid--forhold (L/G) som følger DK 174120 B1 14 L/G_Død periode (dage) 100/0 Ingen frigørelse 75/25 51 67/33 34 5 50/50 15

Dette forsøg viser således, at et middel, der udviser en to-faset frigørelse af polypeptid, kan forbedres i retning af a.t opnå kontinuerlig frigørelse ved at forøge mængden af glycolid i forhold til lactid i det anvendte polylactid 10 op til ca 50% glycolid C Molekylvægts-fordeling

En opløsning af en polymer-blanding med bred molekylvægts-fordeling (polydispersitet) blev fremstillet ved at blande opløsninger af et 50/50 D,L-lactid/glycolid polylactid med 15 lav Μω (viskositetstal af en l g/100 ml opløsning i chlo roform på 0,115) (3 vægtdele) og et 50/50 D,L-lactid/ gly-colid polylactid med Μω ca 200 000 (grænseviskositetstal = 1,08) (1 vægtdel) Tetragastnn (1 vægtdel) blev tilsat, og blandingen blev støbt til dannelse af et polylac- 20 tid/tetragastrin-matenale indeholdende 20 vægt% tetragas- trm, og dette blev så formet til en 0,02 cm tyk plade Pladen blev anbragt i vand ved 37°C, og frigørelsen af tetragastnn viste sig at være kontinuerlig fra Tq og at fortsætte i mindst 44 dage 25 Polylactider med bred molekylvægts-fordeling kan fås, en ten ved at blande forud-dannede polymere med forskellige molekylvægte eller ved passende regulering af polymerisationsprocessen på velkendt måde, og sådanne polylactider giver vigtige fordele, f eks muliggør polylactiderne med 30 lavere molekylvægt en i hovedsagen umiddelbar frigørelse af noget polypeptid, medens de mere hø]molekylære polylac- 15 DK 174120 B1 tider både forlænger fngørelsesperioden og nedsætter den samlede hastighed af frigørelsen af polypeptidet Blandingen af lav- og hø} Μω-fraktioner modificerer desuden vand-absorptionsegenskaberne af polylactidet på parallel måde 5 Af det foregående er det klart, at det er ønskeligt at fremstille polylactider med et M-interval, især med lav til middelstor Μω, i intervallet op til 60 000 og med hø} polydisper-sitet /Μω\

Den kendte teknik vedrørende polylactider i almindelighed og 10 copolymere indeholdende mælkesyre- og glycol-enheder i særdeleshed siger intet om fremstilling af sådanne copolymere med lav molekylvægt og intet om fremgangsmåder til at opnå hø} polydispersitet i sådanne copolymere Det ligger faktisk i de kendte beskrevne polylactider, at de i almindelighed har Μω 15 større end ca 30 000 - 60 000 (et grænseviskositet stal stør re end 0,5) og har lav polydispersitet på grund af deres fremstilling under vandfrie betingelser og uden nogen tilsatte kædestoppere Ifølge opfindelsen er det erkendt, at på grund af de forskellige grader af reaktionsdygtighed under polymen -20 sationsbetingelser af de cykliske dimere af mælkesyre og glycol syre kan copolymere med hø} heterogenitet med hensyn til polymer-typer fås ved ring-åbnende polymerisation af en blanding af de to cykliske dimere i nærværelse af kædevækstregule-rende midler, således at der fås polylactider med et vi-25 skositetstal mindre end 0,5 Den cykliske dimere af glycolsyre er den mest reaktionsdygtige under polymensationsbetingelser, og de første copolymermolekyler dannet ved polymerisationen er derfor glycolsyrerige Som følge heraf er de senere dannede copolymermolekyler nødvendigvis mælkesyre-rige, således at der 30 produceres en copolymer af mælkesyre og glycolsyre med den ønskede hø}e heterogenitet

Desuden reguleres ifølge opfindelsen polymerisationen til fremstilling af copolymere i det ønskede lave Μω-interval ved at udføre den ringåbnende copolymerisation af de blandede DK 174120 B1 16 cykliske dimere i nærværelse af vand, mælkesyreholdigt vand eller en anden kendt kædevækstregulator i overensstemmelse med almen viden inden for polymer-kemien

Egnede polymerisationskatalysatorer er zinkoxid, zinkcarbonat, 5 basisk zinkcarbonat, diethylzmk, organotinforbmdelser, f eks stannooctanoat, tnbutylaluminium, titan-, magnium- eller bariumforbindelser, eller blyoxid, og af disse foretrækkes stannooctanoat

Copolymensationen af de blandede cykliske dimere udføres i 10 øvrigt på sædvanlig måde med hensyn til tid og temperatur

Lavmolekylære polylactider kan også fås ved copolymerisation af hydroxysyrerne selv i stedet for de cykliske dimere Selv om der fås mindre heterogene polymere ved denne metode, kan egnede grundmasser til kontinuerlig frigørelse af polypeptider 15 fås ved at blande sådanne polylactider med forskellige sammensætninger fremstillet ved denne metode eller ved at blande et polylactid fremstillet på denne måde med et eller flere polylactider fremstillet ved ring-åbnende polymerisation af de cykliske dimere 20 Ved et "heterogent polylactid" menes polylactider med en hø] grad af heterogenitet med hensyn til glycolid-nge og lac-tid-rige molekyler eller med hø] polydispersitet eller blandinger af to eller flere forskellige polylactider, som er forskellige med hensyn til laetid/glycolid-indhold og/eller 25 Μω> som beskrevet i det foregående

Om en given copolymer er heterogen eller e] i denne forstand, kan let bestemmes ved undersøgelse af det 25 MHz13C kememag-netiske resonansspektrum af den copolymere i f eks deutereret dimethylsulfoxid I en homogen copolymer, som fås i den kendte 30 teknik ved copolymerisation a£ mælkesyre- og glycolsyre-monomere, viser resonansen af glycolsyreenhedens carbonylkulstof ved δ = 166,0 - 166,2 sig som to dubletter som en følge af de 17 DK 174120 B1 fire forskellige tilnærmelsesvis lige sandsynlige molekylære tilstande, hvori dette kulstofatom kan eksistere, nemlig GGG, lSg, G^Tl og LGL (G = en glycol syre-enhed, L = en mælkesyre-enhed, og stjernen angiver den glycolsyre-enhed, der er tale 5 om) I en heterogen copolymer, således som den anvendes ifølge den foreliggende opfindelse, er det derimod usandsynligt, at rækkefølgen l£l forekommer, således at et af dubletsignalerne i spektret for den homogene copolymer fremkommer som en singlet Det viser sig faktisk, at i spektret af heterogene copo-10 lymere viser dette signal fra glycol syre-enhedens carbonylkul-stof sig ofte som to singlets En "heterogen copolymer" som defineret i den foreliggende beskrivelse er derfor en copolymer, for hvilken glycolsyrens carbonylkulstof-signal i -^C ^mr viser sig som andet end et par dubletter 15 Heterogeniteten eller homogeniteten af mælkesyre/glycolsyre-copolymere kan også påvises ved undersøgelse af deres nedbrydning Når en copolymer således anbringes i en stødpude med pH-værdi 7,4 ved 37°C, udtages periodisk, tørres, og prøver udtages, og forholdet mellem mælkesyre- og glycolsyre-enheder 20 i prøverne bestemmes ved NMR, vokser forholdet L/G med tiden for en heterogen copolymer, da fortrinsvis glycolsyresekvenserne hydrolyserer For en homogen copolymer bliver forholdet L/G derimod konstant, efterhånden som nedbrydningen skrider frem 25 Mælkesyreindholdet af den copolymere er fortrinsvis i den ra-cemiske (D,L)-form eller i den optisk aktive L-form

Et egnet kædevækstregulerende middel til anvendelse ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen er f eks vand, mælkesyre, glycol syre eller andre hydroxysyrer, alkoholer eller carboxyl-30 syrer i almindelighed

Opfindelsen illustreres af følgende fremstillinger og eksempler DK 174120 B1 18

Fremstilling 1 16 g zinkoxid blev sat til 800 g D,L-mælkesyre i en 2-liter 3-halset rundbundet kolbe, udstyret med omrører, termometer og destillationsopsats forbundet med en vandkondensator Blandm-5 gen blev omrørt og opvarmet til ca 135°C, ved hvilken temperatur vand begyndte at destillere over Opvarmning blev fortsat i 8 timer, hvorunder temperaturen steg til ca 190°C Da destillation af vand ophørte, blev trykket reduceret, og destillationen blev fortsat, indtil fast stof begyndte at samle 10 sig i kondensatoren På dette stadium blev vandkondensatoren erstattet med en luftkondensator, og remanensen blev afkølet og derefter destilleret under hø]vakuum (2-8 mm kviksølv), og den fraktion (ca 300 g), der destillerer mellem 130 og 160°C, blev opsamlet, den var D,L-lactid (3,6-dimethyl-l,4-dio-15 xan-2,5-dion), den cykliske dimere af D,L-mælkesyre

Det rå D,L-lactid blev krystalliseret af ethylacetat (ca 600 ml) tre gange, og det omkrystalliserede produkt blev til slut tørret ved 45°C under reduceret tryk (2 mm kviksølv) i 24 - 48 timer, hvorefter det havde smeltepunktet 124 - 125°C

20 Fremstilling 2

Glycolid (1,4-dioxan-2,5-dion), den cykliske dimere af glycol-syre, blev fremstillet på den måde, der er beskrevet i Preparative Methods in Polymer Chemistry af W R Sorenson & T E Campbell, 2 udgave, udgivet af Interscience (1968), side 363 25 Det rå glycolid blev renset ved tre på hinanden følgende krystallisationer af tør ethylacetat, derpå tørret ved 45°C under recuderet tryk (2-8 mm kviksølv) i 24 - 48 timer, smeltepunkt 82 - 84°C

EKSEMPEL 1-8 30 Polymere af D,L-lactid og glycolid blev fremstillet som følger DK 174120 B1 19

Ren tør D,L-lactid (fremstilling 1), ren tør glycolid (fremstilling 2), i alt 42 g, industriel D,L-mælkesyre indeholdende ca 12 vægt% vand og 1 ml af en 8 vægt%'s opløsning af stan-nooctanoat i hexan blev anbragt i et forud tørret glasrør 5 Hexanen blev afdampet under reduceret tryk, og røret blev opvarmet til 160 °C i 6 timer med konstant omrøring, om muligt Røret blev afkølet i pulveriseret fast kuldioxid, og'polylac-tidet blev udtaget, opbrudt til små stykker og opløst i chloroform (400 ml) Chloroformopløsningen blev filtreret, og 10 filtratet blev hældt i methanol (2 1) for at udfælde polylac-tidet, som blev frafiltreret og tørret under vakuum ved 40°C i 24 timer og derpå ved 80°C i 24 timer Alle de således fremstillede polylactider var opløselige i chloroform og dioxan, men uopløselige i benzen 15 Følgende polylactider blev fremstillet på denne måde D, L- L/G D,L- Grænse- Μ-ω

Eks lactid Glycolid mol- Mælke- viskosi (ca ) __(L) (g) (G) (g) forhold syre__tet__ 1 __23,0__18,5 50/50 400 ul 0,25 15 200 2 23,0 18,5 50/50 920 ul 0,126 lav ______X)__ 3 23,0 18,5 50/50 1380 ul 0,108 lav ______x)__ 20 4__23,0__18,5__50/50___0,33__ 5 __23,0__18,5__50/50___0,25__ 6 __23,0__18,5__50/50___0,115*__ 7 __23,0__18,5 50/50___0,11**__ 8 23,0 18,5 50/50 0,11* 25 Μω er i forhold til polystyren-standard x) er viskositetstal af en 1 g/100 ml opløsning i chloroform xx) logaritmisk viskositetstal (1 g/100 ml i chloroform)

Alternativt kan lactidet, glycolidet og mælkesyre, hvis den er DK 174120 B1 20 til stede, opvarmes til 160°C og 0,08 g stannooctanoat derefter tilsættes for at igangsætte polymerisationen EKSEMPEL A (ikke ifølge opfindelsen)

Et polylactid omfattende ækvimolære mængder glycolsyre- og 5 D,L-mælke-syre-enheder og med et grænseviskositetstal på 1,36 (50 mg) blev opløst i 1 ml dioxan, og 50 μΐ af en opløsning af ICI 118 630, C^luHis-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(0-tBu)-Leu-Arg-Pro-Azgly-NH2 (233 mg pr ml af acetatsaltet, ækvivalent med 200 mg pr ml base) i destilleret vand blev tilsat Den fremkomne 10 uklare opløsning blev støbt som en film, opløsningsmidlerne blev afdampet i en strøm af nitrogen i mørke, og filmen blev tørret ved 40°C under reduceret tryk (0,02 mm kviksølv) i 48 timer Blandingen indeholdende ca 17 vægt% ICI 118 630 i polylactidet blev homogeniseret ved tre på hinanden følgende 15 trykstøbninger ved 110°C i 10 sekunder og blev til slut trykstøbt til implanterbare organer 0,038 cm tykke, som hver vejede 1,5 mg og indeholdt 309±7 μg (ca 17 vægt%) ICI 118 630

Den kontinuerlige frigørelse ar ICI 118 630 fra disse implanterede organer blev demonstreret ved at anbringe dem i hun-20 rotter, der udviser normal østrus-adfærd Efter implantation gik rotterne i en periode med diøstrus, der blev sporet ved mangel på horndannet vaginal udsmønng, der varede fra 31 til 40 dage, hvilket viser, at ICI 118 630 blev kontinuerligt frigjort under denne periode 25 Den ovenfor beskrevne fremgangsmåde blev gentaget under anvendelse af 50 μΐ ICI 118 630 acetatopløsning (150 mg ren peptid pr ml vand), og implanterbare organer blev fremstillet på lignende måde, som vejede 2 mg og indeholdt 306+ 6 /xg ICI 118 630 (13 vægt%) og med en tykkelse på 0,038 cm Ved den 30 ovenfor beskrevne rotte-østrus-prøve frigjorde disse implanterbare organer ICI 118 630 kontinuerligt gennem en periode på 30 - 38 dage, påvist ved diøstrus-perioden hos rotterne 21 DK 174120 B1

Til brug i human-terapien blev der fremstillet implanterbare organer indeholdende 1 - 100 mg ICI 118 630 (5 - 50 vægt%), som vejede 2 mg - 1 g og i form af cylindriske stænger egnede til implantation ved trocart 5 EKSEMPEL 4-5

Fremgangsmåden, der er beskrevet i eksempel A, blev gentaget, men under anvendelse af polylactider omfattende ækvimolære mængder D,L-mælkesyre- og glycolsyre-enheder og med grænse-viskositetstal på 0,33 (eks 4) og 0,25 (eks 5) i stedet for 10 1,36 for at fremstille implanterbare organer indeholdende 10 vægt% ICI 118 630, der vejede ca 3 mg og var 0,08 cm tykke

Disse organer blev anbragt i hun-rotter (5 pr gruppe), som før implanterinqen udviste regelmæssig østrus-adfærd De implanterede organer fremstillet af polylactid med grænsevisko-15 sitetstal 0,33 udviste en induktionsperiode på 5 dage, efterfulgt af en diøst rus-periode på ca 26 dage, og organerne fremstillet af polylactid med grænseviskositetstal 0,25 udviste en induktionsperiode på 3 - 4 dage, efterfulgt af en diøstrus-periode på ca 25 dage 20 Lignende implanterbare organer, men indeholdende 20 vægt% af ICI 118 630 blev fremstillet på samme måde, og disse udviste en lignende diøstrus-periode, men ingen induktions-periode ved den oven for beskrevne rotte-prøve

Til brug i human-terapien blev der på lignende måde fremstil-25 let implanterbare organer indeholdende 1 - 100 mg ICI 118 630 (5 - 50 vægt%) , der vejede 2 mg - 1 g, og i form af cylindriske stænger egnede til implantation med trocart

EKSEMPEL B

Tetragastrin-hydrochlond (Trp-Met-Asp-Phe-NH2,HC1) (200 mg) 30 blev opløst i en blanding af 9 ml dioxan og l ml vand, og til 22 DK 174120 B1 opløsningen blev sat et polylactid som beskrevet i eksempel l (1,8 g) Blandingen blev støbt som en film, og opløsningsmidlerne blev afdampet i en strøm af nitrogen Den fremkomne film blev tørret under reduceret tryk (0,02 mm kviksølv) ved 40°C i 5 48 timer, og derefter blev den homogeniseret ved tre på hinan den følgende trykstøbninger ved 80°C i 10 sekunder og støbt til dannelse af film med tykkelser på 0,02, 0,06 eller 0,12 cm, der hver vejede ca 80 mg

Frigørelsen af tetragastrin blev målt ved at anbringe en film 10 i destilleret vand, udtage en prøve af det destillerede vand daglig, erstatte alt det tilbageblevne destillerede vand med frisk vand og måle den ultraviolette absorption af de daglige prøver ved 277 nm Der fremkom følgende resultater, som viste kontinuerlig frigørelse af tetragastrin fra film af alle tre 15 tykkelser

Kumulativ % frigjort tetragastrin

Tid (dage)__0,02 cm film__0,06 cm film__0,12 cm film _1__9j_6__5,6__4j_0_ _4__14,9__10, 5__9j_0_ 20 7__20,3__13,9__11,7_ _9__25,3__17,7__14,8_ _11__33,1__22,6__19,4_ _14__48,6__33,2__28,1_ _17__61,9__45, 9__40, 5_ 25 21__74,7__59, 8__53,2_ _24__81,8__68,1__60,2_ _28__85,2__74,9__66,4_ _31__86,9__77,7__70,9_ _36__88,5__82,5__77,5_ 30 39 89,2__85,1__82,6_ EKSEMPEL 6 23 DK 174120 B1 40 rag tetragastrin-hydrochlorid blev opløst i vandigt dioxan (1 9 efter rumfang) og sat til en opløsning af (a) et polylactid omfattende ækvimolære mængder D,L-mælkesy-re- og glycolsyre-enheder og med et viskositetstal på 5 0,115 (som en 1 g/100 ml opløsning i chloroform) (eks 6) (120 mg) og (b) et polylactid omfattende ækvimolære mængder D,L-mlkesyre og glycolsyrerester og med et grænseviskositetstal på 0,08 (40 mg) i 2 ml dioxan 10 De blandede opløsninger blev støbt som en film som beskrevet i eksempel A og støbt som implanterbare organer, der vejede ca r 50 mg og var 0,02 cm tykke

Frigørelsen af tetragastrm fra disse implanterbare organer blev målt ved fremgangsmåden, der er beskrevet i eksempel B og 15 de følgende resultater, der viser kontinuerlig frigørelse, blev opnået DK 174120 B1 24

Tid (daae_Kumulativ % friqiort tetragastnn_ 1 0,6 2 1,0 3 1,6 5 4 2,7 7 8,6 10 17,2 14 29,4 18 43,1 10 23 56,3 28 64,9 32 71, 36 79,0 39 83,9 15 44 90,5 EKSEMPEL 7

Et polylactid omfattende ækvimolære mængder D,L-mælkesyre- og glycolsyre-enheder og med et viskositetstal på 0,11 som en 1 g/100 ml opløsning i chloroform (eks 7) (50 mg) blev opløst i 20 dioxan (1 ml) , og der blev tilsat en opløsning af muse-epider-mal vækstfaktor (EGF, 0,05 mg) i 0,05 ml vand Blandingen blev støbt som en film på polytetrafluorethylen-stof, og opløsningsmidlet blev fjernet i en strøm af nitrogen i mørke Filmen blev tørret ved 60°C under reduceret tryk (0,8 mm kvik-25 sølv) i 48 timer Filmen blev så trykstøbt ved 120°C i 10 sekunder til dannelse af implanterbare organer 0,02 cm tykke og med en vægt af 10 mg

De implanterbare organer blev hver anbragt i en sort flaske ved 37°c med l ml af Mcllvain's stødpude (pH 7,4) (Documenta 30 Geigy, Scientific Tables, redigeret af K Diem & C Leutner, udgivet af J R Geigy SA, Basel, Schweiz, 7 udgave, 1970, side 280) indeholdende 0,02 vægt% natriumazid Stødpuden blev fjernet daglig og erstattet med frisk, og EGF frigjort i stødpuden af organet blev målt ved radioimmunbestemmelse, hvilket viste, DK 174120 B1 25 at frigørelsen startede straks og fortsatte i mindst 2 uger og frigjorde 100 - 200 //g pr dag EKSEMPEL 8

Et polylactid omfattende ækvimolære mængder D,L-lactid og 5 glycolid og med et viskositetstal (1 g/100 ml opløsning i chloroform) på 0,11 (eks 8) (400 mg) blev opløst i 2 ml dio-xan, og en opløsnmg/suspension af okse-prolactin (100 mg) i 0,5 ml destilleret vand blev tilsat under kraftig omrøring Blandingen blev hældt på et polytetrafluorethylen-stof og 10 tørret, først i en strøm af nitrogen og derpå under reduceret tryk (0,01 mm kviksølv) ved 40°C i 24 timer Den derved fremkomne heterogene blanding blev homogeniseret ved fire på hinanden følgende trykstøbninger ved 60°C og blev derefter støbt til en plade med en tykkelse på 0,2 cm, hvoraf der blev udskå-15 ret implanterbare organer, som vejede 60 mg

Organerne blev anbragt subkutant i voksne hun-rotter, som så periodisk fik tappet blod fra halen, og prolactmet i blodprøverne blev målt ved radioimmun-bestemmelse En placebo-gruppe, der ikke fik noget prolactin i det implanterede organ, blev 20 undersøgt på lignende måde, og mængderne af cirkulerende prolactin blev sammenlignet Der fremkom følgende resultater DK 174120 B1 26 nifRP-nrnlactm i plasma (uq/ml)

Tid __Placebo-gruppe_Behandlet „gruppe 5 1 0,38 24,7 2 0,45 105,9 6 0,54 7,7 9 0,72 17,8 10 13 0,52 65,4 16 0,56 89,7 20 0,75 288 23 0,81 142 26 0,84 562 15 42 1,25 1250

Fremgangsmåden, der er beskrevet i eksempel 1-8, blev gentaget med undtagelse af, at polylactidet blev opløst i dioxan i stedet for i chroroform, og der fremkom lignende polylac-20 tider EKSEMPEL 9-15

Fremgangsmåden, der er beskrevet i eksempel 1-8, blev gentaget med undtagelse af, at polylactidet blev opløst i iseddike, og den derved fremkomne iseddike-opløsning blev sat dråbe-25 vis til methanol for at udfælde polylactidet, som blev frafil-treret og tørret under vakuum ved 40°C i 24 timer og derpå ved 80°C i 24 timer 27 DK 174120 B1 Følgende specielle polylactider blev fremstillet på denne måde D, li- L/G D,L- Græn- Mole- Stan-

Eks lactid Glycolid mol- mælke- sevi- kyl- nooc- <L) (G) (g) for- syre skosi- vægt ta- __(£)___hold___tet__(ca ) noat 9 33,3__26,7 50/50 360μ1 0,234 13 500 93μ1 5 10 11,1__8,9 50/50 120μ1 0,243 14 450 31μ1 11 11,1__8,9 50/50 120μ1 0,265 16 800 31μ1 12 111,0 89,0 50/50 1,2ml 0,257 15 850 0, ________31ml 13 111,0 89,0 50/50 1,2ml 0,239 14 200 0, ________31ml 14 88,8 71,2 50/50 0,96ml 0,262 16 600 0, ________25ml 10 15 22,2__17,8 50/50 1,38ml 0,09**__62μ1 16 11,1__8,9 50/50___0,126*___ 17 __=__ 67/33___0,121*___ 18 __:__ 75/25___0,108*___ 19 11,1__8,9 50/50___0,126**___ 15 20 11,1__8,9 50/50___0,093**___ 21 11,1 8,9 50/50 0,11* 22 __11,1__8,9 50/50___1, 06___ * viskositetstal {lg/100 ml i chloroform) ** logaritmisk viskositetstal (lg/100 ml i chloroform)

20 EKSEMPEL C

Et polylactid omfattende ækvimolære mængder glycolsyre- og D,L-mælkesyre-enheder og med et grænseviskositetstal på 0,25 blev opløst i iseddike, og opløsningen blev frysetørret Det frysetørrede pulver (540,7 mg) og ICI 118 630 (142,1 mg) af 25 acetatsaltet (ækvivalent med 124 mg base) blev opløst i 6,8 ml eddikesyreanhydrid-fn iseddike og frysetørret i 24 timer (Iseddiken blev tilbagesvalet i 2 timer med 1% vand for at fjerne eddikesyreanhydndet) Det frysetørrede produkt blev ekstruderet under tryk ved 70°C til en stang med en diameter 30 på 1 mm, hvorfra der blev udskåret implanterbare organer af DK 174120 B1 28 den ønskede vægt De implanterbare organer blev opløst i et passende opløsningsmiddel, f eks acetonitnl, og efterprøvet for lægemiddel-indhold og renhed Organerne viste sig at indeholde 16,1% w/w ren 118 630-base 5 Frigørelse af 118 630 blev bedømt ved at neddykke implanterbare organer, der vejede ca 10 mg, i Mcllvam's pH 7,4-stød-pude ved 37°C ICI 118 630 blev frigjort kontinuerligt i mindst 5 uger

Ved et yderligere forsøg blev implanterbare organer, der ve-10 jede ca 390 μg, 860 μg, 1500 μg, 3000 μg og ca 6000 μg, lm-planteret subkutant i en gruppe voksne hun-rotter med regelmæssig cyklus I de 28 dage efter implantationen var dyrene i det væsentlige fri for østrus-intervaller, hvilket viser, at aktivt lægemiddel blev frigjort kontinuerligt i denne periode

15 EKSEMPEL D

En opløsning af ICI 118 630 acetatsalt blev fremstillet ved at opløse 170,8 mg ICI 118 630 acetat i 5 ml eddikesyreanhydnd--fri iseddike (Iseddiken blev tilbagesvalet i 2 timer med 1% vand for at fjerne eddikesyreanhydnd) Denne opløsning vistes 20 ved højtryksvæskekromatografi (HPLC) at indeholde 25,21 mg ICI 118 630-base pr ml 442,5 mg polylactid (fremstillet som i eksempel 12) blev opløst i 4,5 ml af eddikesyreopløsningen, og den fremkomne opløsning blev frysetørret i 25 timer Det frysetørrede produkt blev ekstruderet under tryk ved 74°C til en 25 stang med en diameter på 1 mm, hvoraf der blev udskåret implanterbare organer af den ønskede vægt Organerne blev opløst i et passende opløsningsmiddel såsom acetonitnl, og den fremkomne opløsning blev analyseret ved HPLC Implant er mgsor-ganerne vistes at indeholde 20% w/w ren 118 630-base 30 EKSEMPEL 16-18

Et polylactid omfattende ækvimolære mængder D,L-mælkesyre- og DK 174120 B1 29 glycol syre-enheder og med et viskositetstal på 0,126 (1 g/ 100 ml opløsning i chloroform) (eks 16) (240 mg) blev opløst i iseddike (5 ml) , og en opløsning af tetragastnn-hydrochlond (60 mg) opløst i iseddike (5 ml) blev tilsat under kraftig 5 omrøring Opløsningen blev frysetørret i 24 timer, og det fremkomne faste stof blev trykstøbt ved 50°C i 20 sekunder til dannelse af implanteringsorganer, der var 0,2 cm tykke og vejede 35-40 mg

Ovenstående fremgangsmåde blev gentaget med følgende polymere 10 (a) Et polylactid omfattende 67 mol% D,L-mælkesyre- og 33 mol% glycolsyre-enheder og med et viskositetstal på 0,121 (1 g/100 ml opløsning i chloroform (eks 17) (b) Et polylactid omfattende 75 mol% D,L-mælkesyre- og 25 mol% glycolsyre-enheder og med et viskositetstal på 15 0,108 (1 g/100 ml opløsning i chloroform (eks 18) (c) Et polylactid omfattende 100% D,L-mælkesyre og med et viskositetstal på 0,100 (1 g/100 ml opløsning i chloroform)

Frigørelsen af tetragastnn fra disse implanteringsorganer 20 blev målt ved fremgangsmåden, der er beskrevet i eksempel 17, og der fremkom følgende resultater DK 174120 B1 30

Kumulativ S frigjort tetragastrm T id ttr1 » 50% D,L- 67% D,L- 75% D,L- lactid lactid lactid n r 100% D,L- 50% 33% 25% lactid glycolid glycolid glycolid I 6,0 1,0 1,7 1,9 3 12,9 2,1 3,2 3,0 7 23,3 7,1 8,0 5,1 9 27,2 12,2 11,6 6,5 II 30,3 20,2 15,8 8,2 15 36,7 40,0 27,0 14,0 17 39,3 45,0 29,7 17,9 21 44,5 51,8 35,1 25,5 24 49,6 55,6 37,9 30,4 28 58,8 59,6 41,1 36,1 31 68,8 62,3 42,8 40,1 35 81,5 67,3 45,0 45,6 39 91Ό 74,3 47,6 50,7 42 95,9 81,9 50,6 55,3 46 96#5 89,1 55,5 60,4 49 97,5 93,2 60,0 65,2 53 95,4 64,8 70,0 56 96,3 68,6 73,6 59 97,0 73,1 77,8 63 97,2 77,1 81,5 70 82,7 86,1 74 85,0 87,5 84 90,4 89,5 DK 174120 B1 31

Disse resultater viser, at kontinuerlig frigørelse af tetra-gastrm opnås ved at anvende lavmolekylære polylactider, og at varigheden af frigørelsen bestemmes af sammensætningen af den hydrolytisk ustabile polyester 5 EKSEMPEL 19

Et polylactid omfattende ækvimolære mængder D,L-mælkesyre- og glycolsyre-enheder og med et logaritmisk viskositetstal på 0,126 (som en 1 g/100 ml opløsning i chloroform) (eks 19) (9,5 mg) blev opløst i destilleret dioxan (0,25 ml), og der 10 blev tilsat en opløsning af museepidermal vækstfaktor (EGF 0,5 mg) i destilleret vand (0,1 ml) Blandingen blev støbt som en film på polytetrafluorethylen-stof, og opløsningsmidlet blev fjernet i en strøm af nitrogen i mørke Filmen blev tørret ved 40°C under reduceret tryk (0,01 mm kviksølv) i 48 timer Fil-15 men blev så trykstøbt ved 70°C i 10 sekunder til et lmplante-ringsorgan, der var 0,02 cm tykt, og som vejede ca 9 mg Et placebo-implanteringsorgan blev også fremstillet

Prøverne blev implanteret subkutant i marsvin kanyleret i halspulsåren, og blodprøver blev udtaget periodisk, og EGF-20 mængderne i plasmaet blev målt ved radioimmun-bestemmelse

Forøgede EGF-mængder i plasmaet blev iagttaget fra den 3 dag og fortsatte i mindst én uge

Lignende implantenngsorganer blev fremstillet som ovenfor beskrevet, men under anvendelse af et polylactid omfattende 25 ækvimolære mængder D, L-mælkesyre- og glycol syre-enheder og med et grænseviskositetstal på 1,06 Trykstøbning af dette implanteringsorgan blev udført ved 120°C

Implantation og undersøgelse af plasma blev udført som ovenfor beskrevet, men der blev ikke iagttaget forøgede EGF-mængder i 3 2 DK 174120 B1 plasmaet før 17 dage efter implantationen EKSEMPEL 20

Et polylactid omfattende ækvimolære mængder D,L-raælkesyre- og glycolsyre-enheder og med et logaritmisk viskositetstal på 5 0,093 (som en 1 g/100 ml opløsning i chloroform) (eks 20) (40 mg) blev opløst i anhydrid-fn iseddike (1 ml), og en opløsning af museepidermal vækstfaktor (EGF, 8,15 mg) i en blanding af vand (0,5 ml) og anhydrid-fn iseddike (3 ml) blev tilsat Opløsningen blev frysetørret i 24 timer Det fremkomne pulver 10 blev så trykstøbt ved 50°C til dannelse af et implantermgs-organ på 2 mm x 2 mm x 10 mm, som vejede 36,1 mg

Prøven blev implanteret subkutant i kanyleret kat, blodprøver blev udtaget periodisk, og EGF-mængderne i plasmaet blev målt ved radioimmun-bestemmelse 15 Forøgede EGF-mængder i plasmaet blev iagttaget fra den 3 dag og fortsatte i mindst 40 dage EKSEMPEL 21-22

Impl ante rings organer indeholdende okse-prolactm blev fremstillet som beskrevet i eksempel 20, men under anvendelse af 20 (a) et polylactid (400 mg) omfattende ækvimolære mængder D,L- mælkesyre- og glycolsyreenheder og med et viskositetstal (l 9/100 ml opløsning i chloroform) på 0,11, (eks 21) opløst i 4 ml dioxan, og (b) et polylactid (400 mg) omfattende ækvimolære mængder D,L-25 mælksyre- og glycolsyreenheder og med et grænseviskosi tetstal på 1,06, (eks 22) opløst i 4 ml dioxan

Denne prøve blev støbt ved 110°C

DK 174120 B1 33

Præparaterne (a) og (b) blev afprøvet in vivo som beskrevet i eksempel 20 Præparat (a) frigjorde betydelige mængder okse-prolactin i plasma i det mindste så tidligt som fra den 4 dag og fortsatte med at frigøre i mindst 85 dage, medens præparat 5 (b) frigjorde betydelige mængder i det mindste så tidligt som fra den 8 dag og i mindst 85 dage

Claims (3)

1 Heterogen poly(lactid-co-glycolid)polymer med bred mole-10 kylvægtsfordeling, kendetegnet ved, at den omfatter mindst 25 mol% mælkesyreenheder og op til 75 mol% glycol-syreenheder, at den er uopløselig i benzen, og at den har et logaritmisk viskositetstal (lg/100 ml opløsning i chloroform eller dioxan) lig med eller større end 0,09 dl/g og et grænse-15 viskositetstal lig med eller mindre end 0,33 dl/g

2 Fremgangsmåde til fremstilling af en heterogen polydactid--co-glycolid)polymer med bred molekylvægtsfordeling omfattende mindst 25 mol% mælkesyreenheder og op til 75 mol% glycolsyre-enheder, som er uopløselig i benzen og har et logaritmisk vis- 20 kositetstal (1 g/100 ml opløsning i chloroform eller dioxan) lig med eller større end 0,09 dl/g og et grænseviskositetstal lig med eller mindre end 0,33 dl/g, kendetegnet ved ringåbnende polymerisation af en cyklisk dimer af mælkesyre og eventuelt i nærværelse af en cyklisk dimer af glycolsyre ved 25 en forhøjet temperatur i nærværelse af en polymerisationskatalysator valgt blandt zinkoxid, zinkcarbonat, basisk zmkcar-bonat, diethylzink, organotmforbindelser, tributylaluminium, titan-, magnesium- eller bariumforbindelser eller blyoxid og i nærværelse af et kædevækstregulerende middel

30. Heterogen poly(lactid-co-glycolid)polymer med bred mole kyl vægt s fordeling omfattende mindst 25 mol% mælkesyreenheder og op til 75 mol% glycolsyreenheder, som er uopløselig i benzen og har et logaritmisk viskositetstal (lg/100 ml opløsning DK 174120 B1 34 i chloroform eller dioxan) lig med eller større end 0,09 dl/g og et grænseviskositetstal lig med eller mindre end 0,33 dl/g fremstillet ved fremgangsmåden ifølge krav 3 eller på indlysende ækvivalent måde 5