DK173287B1

DK173287B1 - Phenylnonatetraensyrederivater, en fremgangsmåde til fremstilling deraf og farmaceutiske præparater indeholdende dem

Info

Publication number: DK173287B1
Application number: DK198503404A
Authority: DK
Inventors: Edward Roy Aig; John William Coffey; Allen John Lovey; Michael Rosenberger
Original assignee: Hoffmann La Roche
Priority date: 1984-07-27
Filing date: 1985-07-25
Publication date: 2000-06-13
Also published as: MC1692A1; IL75913A; HUT38306A; ZW12185A1; DK340485A; PH21556A; NZ212868A; DE3561808D1; ATE32882T1; FI84345C; NO161064B; ES8703825A1; KR930000112B1; JPS6143135A; CS550285A2; AU4557585A; IE58735B1; ES8705355A1; FI852899L; AU4260889A

Description

DK 173287 B1

Den foreliggende opfindelse angår hidkil ukendte phenylnonatetraen-syreforbindelser med den almene formel 1 *» R, R.

r i7 i1 R ^ Λ .CH=CH-C*CH-CH=CH-C=CH-R, 987654321 1 R| betegner hydrogen, chlor, fluor eller trifluormethyl; 5 R2 betegner hydrogen, lavere alkoxy, trifluormethyl-lavere alkoxy eller hydroxy; R4 betegner alkyl med lige kædelængde med 4-9 carbonatomer eller - CH2 (CHj) „CHjOH ; X betegner -CH-0-. -CH-. .-0- eller -N-; R10 Rio R10 R10 10 Rs betegner -C-0Ag;

O

og R7, r8, R9 og R1q uafhængigt af hinanden betegner lavere alkyl eller hydrogen; hver n er et helt talt valgt blandt 6 eller 7; og salte deraf, hvor R^ betegner hydrogen, samt farmaceutiske præpara-15 ter indeholdende dem.

Forbindelserne med den almene formel Z og salte deraf er virksomme som sygdomsmodifikatorer til behandling af rheumatoid arthritis samt beslagtede sygdomme såsom osteo-arthritie.

Fig. 1, 2, 3, 4, 5, G og 7 viser skematieke fremgangsmådetrin til 20 fremstilling af de ovenfor anførte forbindelser med den almene formel I.

Udtrykket "lavere alkyl" betegner i nærværende sammenhæng både lige-kedet og forgrenet alkyl med 1-7 carbonatomer. Blandt de foretrukne lavere alkylgrupper kan nævnes methyl, ethyl, isopropyl, n-butyl, 25 etc., idet methyl og ethyl især foretrækkes. Udtrykket "lavere alkoxy" betegner lavere alkoxygrupper med 1-7 carbonatomer såsom methoxy, ethoxy, isopropoxy, isobutoxy, etc. udtrykket "trifluormethyl-lavere alkoxy" betegner en trifluormethyl-substitueret lavere alkoxysubstitu-ent, hvor lavere alkoxy har den ovenfor anførte betydning.

2 DK 173287 B1

Inden for rammerne af den foreliggende opfindelse ligger også salte af forbindelsen med den ovenfor anførte almene formel I med farmaceutisk acceptable, ikke-toxiske, uorganiske eller organiske baser, fx alkalimetal- og jordalkalimetalsalt. Blandt de foretrukne salte er natrium-, 5 kalium-, magnesium- eller calciumsalte samt salte med ammoniak eller hensigtsmæssige ikke-toxiske aminer såsom lavere alkylaminer, fx tri-ethylamin, hydroxy-lavere alkylaminer, fx 2-hydroxyethylamin, bis- (1-hydroxyethyl)amin eller tris-(2-hydroxyethyl)amin, cycloalkylaminer, fx dicyclohexylamin, eller benzylaminer, fx N,N*-dibenzylethylendiamin 10 og dibenzylamin. Disse salte kan fremstilles ved at behandle de forbindelser med den almene formel I, hvor R9 betegner hydrogen, med uorganiske eller organiske baser ved sædvanlige, inden for teknikken velkendte metoder.

Forbindelserne med den almene formel I kan anvendes til behandling af 15 patienter, som lider af rheumatoid arthritis eller beslægtede sygdomme. I sådanne tilfælde modificerer forbindelserne disse sygdommes virkninger, idet de reducerer den ødelæggelse af knogleleddene, der forårsages af denne sygdom, og reducerer inflammation, varme og smerte i knogleleddene, som skyldes rheumatoid arthritis og beslægtede 20 sygdomme. Forbindelserne med den almene formel I og salte deraf er også nyttige til behandling af sygdomme, der skyldes immun hyperaktivitet såsom transplantations-autoimmunitet, autoimmune sygdomme og transplantat/vsrt-inkompatibilitet ("graft versus host disease"). Den uventede mangel på toxicitet hos forbindelserne ifølge opfindelsen kan 25 påvises ved, at forbindelsen (alle-E)-9-[2-(nonyloxy)phenyl]-3,7- dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyre har en LD^-værdi i mus på over 1.000 mg/kg både interperitonealt og peroralt.

3 DK 173287 B1

Forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse er virksomme anti-arthritismidler, hvilket kan ses ud fra de resultater, der opnås, når disse forbindelser administreres til rotter i overensstemmelse med det kroniske adjuvansarthritis-testsystem, som er beskrevet af Billingham 5 og Davies, Handbook of Experimental Pharmacoloov (red. J.R. Vane og S.H. Ferreira), vol. 50/11, s. 10B-144, Springer-Verlag, Berlin, 1979.

Ved denne fremgangsmåde blev adjuvansarthritis induceret ved sub-plantar injektion på dag 0 af 0,05 ml adjuvans (en suspension af var-medræbt, tørret Mycobacterium butvricum, 0,5% (vægt/volumen), i tung 10 mineralolie indeholdende 0,2% digitonin) i højre bagpote hos Charles

River Lewis-hanrotter (120-140 g), som var anbragt enkeltvis i bure og fik foder og vand ad libitum. Potevolumener (begge bagpoter) blev målt umiddelbart efter injektion af adjuvansen. Potevolumener blev også målt for at følge udviklingen af inflammationsinduceret opsvulmen i 15 arthritis-poterne med intervaller på 3-7 dage ved nedsænkning af poten i niveau med den laterale malleolus i en kviksølvplethysmograf.

Lægemidlerne blev administreret én gang om dagen (startende på dagen for adjuvansinjektion) ved inkubation under anvendelse af Tween® 80 (polyoxyethylen-sorbitanmonooleat) i en dosis på 0,25 ml/100 g le-20 gemsvægt som bærer. Arthritis-kontrolrotter modtog daglige doser af udelukkende bærer. På dag 23-25 blev rotterne aflivet, plasma blev indsamlet, og plasmaf ibrinogenniveauer blev bestemt (ammoniumsul fat-turbidimetrisk metode), hvilket er beskrevet af Exner et al.. Amer. J.

Cl in. Path. 71. 1979, s. 521-527. Testlægemidlernes antiinflammato-25 riske aktivitet blev bestemt ved at sammenligne graden af poteopsvul-men (potevolumen på en bestemt dag, dvs. dag 4 til dag 25, minus potevolumenet på dag 0) hos lægemiddelbehandlede arthritisrotter med graden af poteopsvulmen hos de bærerbehandlede arthritisrotter. Lægemiddelinducerede fald i niveauet af plasmafibrinogen, et akut fase-30 protein, som dannes i plasma hos rotter med adjuvansinduceret arthritis, blev også anvendt til at kvantificere den antiinflammatoriske aktivitet.

Resultaterne af forskellige forbindelser ifølge den foreliggende opfindelse i sammenligning med Indomethacin og 13-cis-vitamin A er 35 anført i tabel I nedenfor.

4 DK 173287 B1

TABEL I

» reduktion 1 Plis«*- ~ ‘ '>

Or»l potevolumen Mbrlnegen dosi* _pi dag .3____ I udring Forøgelse i __STRUKTUR___μ Hol/tg Højre Venstre (reduktion]___kropgvagt (g)_

Berer -- ... ---- ---- 28 · J1 lndo*«lhicfn 3 -66 .«7 -10 t 46 . 60 -31 -49 -18 -7 i

C02M

» .<1 -S. -SS

1ν^Λ"00,Η„ .

TQL 7S -*7 -?« -σι * v (QT ?5 -5Ϊ -53 ♦ 24 75 -29 -32 · 35 ^S^OCgHig____________ 95 -37 -49 OS '» 0(CH;)8Om (Ol 75 -56 -68 -51 +46 V"^C9h„ 5 DK 173287 B1 I tabel I ovenfor viser den procentvise reduktion i potevolumenet effektiviteten af forbindelserne ifølge opfindelsen med hensyn til at reducere den opsvulmen, der forårsages af adjuvansarthritis. Det fremgår af resultaterne i tabellen, at forbindelserne ifølge opfindelsen 5 effektivt reducerer den opsvulmen, der forårsages af adjuvansen. Endvidere var forbindelserne ifølge opfindelsen effektive til reduktion af plasmafibrinogen, som generelt forbindes med rheumatoid arthritis.

Det fremgår ydermere af dyrenes vægtforøgelse, at forbindelserne ifølge opfindelsen i den testede dosis ikke gav nogen væsentlig reduk-10 tion i dyrenes vægtforøgelse. Dette viser mangelen på toxicitet hos forbindelserne ifølge opfindelsen.

Forbindelserne med den almene formel I og farmaceutisk acceptable salte deraf kan anvendes til flere farmaceutiske præparater. I disse præparater kan forbindelserne administreres i form af orale enheds-15 dosisformer såsom tabletter, piller, pulvere, kapsler samt i sådanne former som injektioner, opløsninger, suppositorier, emulsioner, dispersioner og i andre hensigtsmæssige former. De farmaceutiske præparater, som indeholder forbindelserne med den almene formel I, dannes hensigtsmæssigt ved sammenblanding med en ikke-toxisk farmaceutisk 20 organisk bærer eller en ikke-toxisk farmaceutisk uorganisk bærer. Typiske farmaceutisk acceptable bærere er fx vand, gelatine, lactose, stivelser, magnesiumstearat, talkum, vegetabilske olier, polyalkylen-glycoler, vaseline og andre sædvanligvis anvendte farmaceutisk acceptable bærere. De farmaceutiske præparater kan også indeholde ikke-25 toxiske hjælpestoffer såsom emulgatorer, konserveringsmidler og befugtningsmidler og lignende såsom fx sorbitanmonolaurat, triethanol-aminoleat, polyoxyethylensorbitan, dioctylnatriumsulfosuccinat og lignende.

Den administrerede daglige dosis af forbindelserne afhænger naturlig-30 vis af den pågældende hidtil ukendte forbindelse, der anvendes, den valgte administrationsvej og modtagerens størrelse. Den administrerede dosis er ikke afhængig af bestemte grænser, men den er sædvanligvis i virksomme mængder i henhold til den farmakologiske funktion af forbindelserne ifølge opfindelsen. En repræsentativ typisk metode til 35 administration af forbindelserne med den almene formel I eller salte deraf er ved oral administration. Ad denne vej kan forbindelserne med den almene formel I eller salte deraf administreres i en daglig dosis på fra 0,5 mg/kg peroralt til 100 mg/kg peroralt. Disse forbindelser kan fortrinsvis administreres dagligt til patienter i orale enheds-40 dosisformer i daglige doser på 1-30 mg/kg legemsvægt, idet doser på l-10 mg/kg især foretrækkes.

Den forbindelse med den almene formel I, hvor X betegner -O-, kan

fremstilles ud fra forbindelser med den almene formel III

6 DK 173287 B1 o hvor R, og R2 har den ovenfor anførte betydning, via reaktionsskemaet 5 vist i fig. 1.

I reaktionsskemaet i fig. 1 har n, Rj, R2, R7 og Rg den ovenfor anførte betydning, og R'g betegner lavere alkyl, Z betegner en fraspaltelig enhed, Y betegner aryl, fortrinsvis phenyl, og Z' betegner halogen.

Forbindelsen med den almene formel III omdannes til forbindelsen med 10 den almene formel IV via reaktionstrin a) ved at reducere aldehydgruppen til en alkohol. Denne reaktion udføres under anvendelse af et konventionelt reduktionsmiddel, som omdanner aldehyder til alkoholer.

Der kan anvendes et hvilket som helst til dette formål konventionelt reduktionsmiddel i reaktionstrin a). Ved udførelsen af denne reaktion 15 foretrækkes det generelt at anvende et alkalimetalborhydrid såsom natriumborhydrid som reduktionsmiddel. Der kan anvendes en hvilken som helst ved sådanne reduktionsreaktioner sædvanlig betingelse til udførelse af reaktionstrin a). Hvis R2 betegner hydroxy, foretrækkes det generelt at beskytte det med R2 betegnede hydroxy under reduktionen 20 af forbindelsen med den almene formel III og den efterfølgende omdannelse til forbindelsen med den almene formel ΙΙ-Ά. Der kan anvendes en hvilken som helst konventionel hydrolyserbar hydroxybeskyttelses-gruppe såsom en lavere alkanoylgruppe til at beskytte hydroxygruppen, når R2 betegner hydroxy. Denne esterbeskyttelsesgruppe kan fraspaltes 25 ved konventionel esterhydrolyse efter dannelsen af Wittig-saltene med de almene formler XIII og XVI eller efter dannelsen af etheren med den almene formel X.

Forbindelsen med den almene formel IV omdannes til forbindelsen med den almene formel VI via reaktionstrin b) ved at behandle forbindelsen 30 med den almene formel IV med et triarylphosphinhydrohalogenid. På denne måde dannes phosphoniumsaltet med den almene formel VI. Der kan anvendes en hvilken som helst konventionel fremgangsmåde til omsætning af en allylalkohol med et triarylphosphinhydrohalogenid til at udføre denne reaktion. Phosphoniumsaltet med den almene formel VI omsættes 35 via en Wittig-reaktion med forbindelsen med den almene formel VII i 7 DK 173287 B1 trin c) til dannelse af forbindelsen med den almene formel VIII. Der . kan anvendes en hvilken som helst af de ved Wittig-reaktioner sædvanligvis anvendte betingelser til at udfore reaktionstrin c).

Få den anden side kan forbindelsen med den almene formel III omdannes 5 direkte til forbindelsen med den almene formel VIII via reaktion med phosphoniumsaltet af forbindelsen med den almene formel IX som i reaktionstrin e). Omsætningen mellem phosphoniumsaltet med den almene formel IX og forbindelsen med den almene formel III til dannelse af forbindelsen med den almene formel VIII udfores under anvendelse af de 10 samme betingelser, som er beskrevet i forbindelse med reaktionstrin c) .

Forbindelsen med den almene formel VIII omdannes til forbindelsen med den almene formel X ved esterificering eller alkylering af forbindelsen med den almene formel VIII med en forbindelse med den almene 15 formel V som i reaktionstrin d) . I forbindelsen med den almene formel V kan Z betegne en hvilken som helst konventionel fraspaltelig enhed såsom mesyloxy, tosyloxy eller et halogenid. Der kan anvendes en hvilken som helst konventionel fremgangsmåde til etherificering af en hydroxygruppe via omsætning med et halogenid eller en fraspaltelig 20 enhed til at udføre reaktionstrin d).

Ifølge en anden udførelsesform for opfindelsen kan forbindelsen med den almene formel X, hvor hydroxygruppen, når R2 betegner hydroxy, er beskyttet via en hydrolyserbar ester, fremstilles ud fra forbindelsen med den almene formel III ved alkylering eller etherificering af for-25 bindeisen med den almene formel III med forbindelsen med den almene formel V til dannelse af forbindelsen med den almene formel XI. Denne reaktion udføres ved at alkylere forbindelsen med den almene formel III med forbindelsen med den almene formel V som i trin d) . I reaktionstrin f) og d) , hvor r4 betegner hydroxyalkyl, behøver hydroxy 30 indeholdt i R4 ikke være beskyttet. Dette skyldes, at forbindelsen med den almene formel V under de i dette reaktionstrin anvendte betingelser vil reagere enten med forbindelsen med den almene formel III eller forbindelsen med den almene formel VIII til dannelse af forbindelsen med den almene formel XI eller forbindelsen med den almene formel X, 35 uden at det er nødvendigt at beskytte hydroxygruppen på alkylkæden.

Alkylering eller etherificering vil ske direkte med phenylhydroxydelen på enten forbindelsen med den almene formel III eller forbindelsen med den almene formel VIII, og der er kun en smule, om overhovedet nogen, reaktion med hydroxygruppen på alkylkæden betegnet med R4. Forbindelsen 40 med den almene formel XI omdannes til forbindelsen med den almene formel XII via reaktionstrin g) ved reduktion. Der kan anvendes de samme betingelser, som er beskrevet i forbindelse med reaktionstrin a), til at omdanne forbindelsen med den almene formel XI til for bindelsen med den almene formel XII.

e DK 173287 B1

Forbindelsen med den almene formel XII omdannes via reaktionstrin h) til forbindelsen med den almene formel XIII ved at behandle forbin-5 delsen med den almene formel XII med et triarylphosphinhydrohalogenid på samme måde som beskrevet ovenfor i forbindelse med trin b). Forbindelsen med den almene formel XIII omdannes til forbindelsen med den almene formel X ved at omsætte forbindelsen med den almene formel XIII med forbindelsen med den almene formel VII via reaktionstrin i). Dette 10 reaktionstrin udføres på samme måde som beskrevet ovenfor i forbindelse med reaktionstrin c).

Ifølge en anden udførelsesform for opfindelsen fremstilles forbindelsen med den almene formel X ved først at omdanne forbindelsen med den almene formel XI til forbindelsen med den almene formel XIV. Forbin-15 delsen med den almene formel XI omdannes til forbindelsen med den almene formel XIV ved aldolkondensering med forbindelsen med den almene formel XX. En hvilken som helst fremgangsmåde til aldolkondensering kan anvendes for at omsætte forbindelsen med den almene formel XI med forbindelsen med den almene formel XX til dannelse af 20 forbindelsen med den almene formel XIV. I næste trin kondenseres forbindelsen med den almene formel XIV via enten en Grignard-reaktion med vinylmagnesiumhalogenid eller en lithiumkondenseringsreaktion med vinyllithium til fremstilling af forbindelsen med den almene formel XV. Reaktionstrin k) kan udføres under anvendelse af en hvilken som 25 helst af de ved 1ithiumkondenseringer eller Grignard-kondenserings-reaktioner konventionelle betingelser. Forbindelsen med den almene formel XV omdannes til forbindelsen med den almene formel XVI ved at omsætte forbindelsen med den almene formel XV med et triarylphosphinhydrohalogenid på den ovenfor i forbindelse med reaktionstrin b) 30 beskrevne måde. Forbindelsen med den almene formel XVI omdannes derefter til forbindelsen med den almene formel X via reaktionstrin m) ved omsætning med forbindelsen med den almene formel XVII. Reaktionstrin m) udføres under anvendelse af en Wittig-standardreaktion som beskrevet i forbindelse med reaktionstrin c). Forbindelsen med den 35 almene formel XVI giver ved omsætning med forbindelsen med den almene formel XVII forbindelsen med den almene formel X. Forbindelsen med den almene formel X kan omdannes til den frie syre, dvs. den forbindelse med den almene formel I, hvor R5 betegner COOH, ved esterhydrolyse. En hvilken som helst konventionel esterhydrolyse-fremgangmåde vil give 40 den forbindelse med den almene formel I, hvor R5 betegner COOH.

Den forbindelse med den almene formel I, hvor X betegner -N-, *10

fremstilles ud fra forbindelser med den almene formel XXII

9 DK 173287 B1 hvor R| og R2 har den ovenfor anførte betydning, via reaktionsskemaet vist i fig. 2.

5 I fig. 2 har R(, R2, R4, R7, Rg, R9', Z' og Y den ovenfor anførte betydning. I fig. 2 betegner Rl3 det samme som R4 med et carbonatom mindre end den med R4 betegnede alkylgruppe. Derfor betegner R alkyl

X J

med 3-9 carbonatomer eller -CH2(CH2) mCH2OH, hvor m er et helt tal

mindre end n, dvs. m er et helt tal på 5-6. I fig. 2 betegner R

10 hydrogen eller lavere alkyl med 1-7 carbonatomer, og R ' betegner lavere alkyl med 1-7 carbonatomer. I denne udførelsesform betegner R " lavere alkyl med ét carbonatom mindre end alkylgruppen betegnet med R, '.

10 I fig. 2 omsættes forbindelsen med den almene formel XXII med et 15 syrechlorid med den almene formel XIX, hvor Z' betegner halogen, til dannelse af forbindelsen med den almene formel XXIII, som derefter omdannes enten til forbindelsen med den almene formel XXVI eller til forbindelsen med den almene formel XXXI. Når R^3 i forbindelsen med den almene formel XIX betegner -0112-(012),,,0112011, hvor m er et helt tal 20 på 5-6 carbonatomer, vil tilstedeværelsen af hydroxygruppen på sub-stituenten R ikke påvirke reaktionen til dannelse af forbindelsen med den almene formel XXVI eller forbindelsen med den almene formel XXXI. Det har vist sig, at denne hydroxygruppe forbliver upåvirket under hele den serie af reaktioner, der er vist i fig. 2.

25 På den anden side kan denne hydroxygruppe beskyttes ved at danne en hydrolyserbar funktionel ethergruppe. som beskytter hydroxygruppen under disse reaktioner. Der kan anvendes en hvlket som helst konventionel etherbeskyttelsesgruppe til at beskytte hydroxygruppen under disse reaktioner. Blandt de foretrukne etherbeskyttelsesgrupper kan 30 nævnes: tetrahydropyranyloxy, tert.butoxy, tri- lavere alkyl-silyloxy, dvs. trimethylsilyloxy, etc. Der kan anvendes en hvilken som helst konventionel etherbeskyttelsesgruppe til at beskytte den terminale hydroxygruppe, som kan være til stede som R . På den anden side kan de i fig. 2 viste reaktioner udføres uden nogen beskyttelse af den 35 terminale hydroxygruppe.

10 DK 173287 B1 I det første trin i reaktionen omsættes forbindelsen med den almene formel XXII med forbindelsen med den almene formel XIX til dannelse af forbindelsen med den almene formel XXIII. Der kan anvendes en hvilken som helst konventionel fremgangsmåde til kondensering af en amin med 5 et syrehalogenid til at udføre denne reaktion. I næste trin omdannes forbindelsen med den almene formel XXIII til forbindelsen med den almene formel XXIV via reaktionstrin n) ved at behandle forbindelsen med den almene formel XXIII med et reduktionsmiddel. Der kan anvendes et hvilket som helst konventionelt alkalimetalaluminiumhydrid-reduk-10 tionsmiddel til at udføre denne reaktion, idet det foretrukne reduktionsmiddel er lithiumaluminiumhydrid. Der kan anvendes en hvilken som helst af de til reduktion med et alkalimetalaluminiumhydrid-reduktionsmiddel konventionelle betingelser til at udføre denne reaktion.

Forbindelsen med den almene formel XXIV kan omdannes til forbindelsen 15 med den almene formel XXVI via mellemproduktet XXV. I første trin i denne fremgangsmåde, trin o), omdannes forbindelsen med den almene formel XXIV til phosphoniumsaltet med den almene formel XXV ved omsætning med et triarylphosphinhydrohalogenid som beskrevet ovenfor i forbindelse med reaktionstrin b). Forbindelsen med den almene formel 20 XXV omdannes til forbindelsen med den almene formel XXVI via reaktionstrin p) ved omsætning med aldehydet med den almene formel VII (jfr. fig. 1). Reaktionstrin p) til fremstilling af forbindelsen med den almene formel XXVI udføres ved en Wittig-reakt ion på samme måde som beskrevet i reaktionstrin c) ovenfor. Den forbindelse med den 25 almene formel XXVI, hvor Rg betegner lavere alkyl, kan om ønsket omdannes til den frie syre ved konventionel basisk hydrolyse. Der kan anvendes en hvilket som helst fremgangsmåde til basisk hydrolyse for at hydrolysere ester til at omdanne forbindelsen med den almene formel XXVI til den frie syre. På den anden side kan den forbindelse med den 30 almene formel XXVI, hvor R4 indeholder en terminal hydroxygruppe, der er etherificeret med en konventionel etherbeskyttelsesgruppe, omdannes til den frie alkohol ved sur hydrolyse. Der kan anvendes en hvilken som helst af de konventionelle fremgangsmåder til hydrolyse af ethere til at udføre denne reaktion. Etherhydrolysen af forbindelsen med den 35 almene formel XXVI kan udføres enten før eller efter den sure hydrolyse, der anvendes for at hydrolysere esterbeskyttelsen Ry' . På den anden side kan forbindelsen med den almene formel X, hvis R4 i forbindelsen med den almene formel X i fig. 1 indeholder en etherificeret hydroxygruppe, hydrolyseres på samme måde som forbindelsen med den almene 40 formel XXVI.

På den anden side kan forbindelsen med den almene formel XXIV omdannes til den tertiære aminforbindelse med den almene formel XXXI. I denne reaktion omsættes forbindelsen med den almene formel XXIV via reak- 11 DK 173287 B1 tionstrin q) med syrehalogenidet med den almene formel XIX-A til fremstilling af forbindelsen med den almene formel XXVII på samme måde som beskrevet ovenfor i forbindelse med reaktionen til omdannelse af forbindelsen med den almene formel XXII til forbindelsen med den 5 almene formel XXIII.

Forbindelsen med den almene formel XXVII omdannes til forbindelsen med den almene formel XXIX via reaktionstrin r) ved at behandle forbindelsen med den almene formel XXVII med et lithiumaluminiumhydrid- reduktionsmiddel som beskrevet i forbindelse med reaktionstrin n) .

10 I næste trin i dette reaktionsskema omdannes forbindelsen med den almene formel XXIX til forbindelsen med den almene formel XXX via reaktionstrin s) ved behandling med et triarylphosphinhydrohalogenid.

Denne reaktion udføres på samme måde som beskrevet i forbindelse med reaktionstrin b) ovenfor. Forbindelsen med den almene formel XXX 15 omdannes til forbindelsen med den almene formel XXXI via reaktionstrin t) ved omsætning med forbindelsen med den almene formel VII {fig. 1) .

Ved udførelsen af reaktionstrin t) anvendes en Wittig- reaktion. Reaktionstrin t) kan udføres på samme måde som beskrevet ovenfor i forbindelse med reaktionstrin c) . Den forbindelse med den almene 20 formel XXXI, hvor R9' betegner lavere alkyl, kan om ønsket omdannes til den tilsvarende forbindelse med den almene formel XXXI, der indeholder den frie syregruppe, ved basisk hydrolyse. På den anden side kan forbindelsen med den almene formel XXXI, hvis R4 indeholder en terminal hydroxygruppe, der er beskyttet ved dannelse af en hydrolyserbar 25 ether, omdannes til den tilsvarende forbindelse, hvor R4 betegner en fri hydroxygruppe, ved konventionel etherhydrolyse. Denne etherhydro-lyse kan udføres før eller efter hydrolyse af den med R9' betegnede estergruppe.

I reaktionsskemaet i fig. 2 foretrækkes det, når R2 betegner hydroxy, 30 at denne hydroxygruppe er beskyttet via dannelse af en esterbeskyttelsesgruppe. Esterbeskyttelsesgruppen kan fjernes efter dannelse af wittig-saltene med den almene formel XXX.

De forbindelser med den almene formel I, hvor X betegner -CH-,

Rio

35 fremstilles ud fra en forbindelse med den almene formel XXXV

X r K2 xxxv V^c-R ^ H “ o 12 DK 173287 B1 hvor Z" betegner ether, brom eller iod, R, og R2 har den ovenfor anførte betydning, og R betegner hydrogen eller lavere alkyl som vist i fig. 3. I fig. 3 har Rj, R2, R4, R7, Rg, R'9, R1Q, R , Y, Z' og Z" den ovenfor anførte betydning.

5 I fig. 3 omsættes forbindelsen med den almene formel XXXV først med forbindelsen med den almene formel XXXIV via reaktionstrin u) til fremstilling af forbindelsen med den almene formel XXXVI. Denne reaktion udføres via en Wittig-reaktion. I forbindelsen med den almene formel XXXVI kan R om ønsket betegne -CH2-(CH2) m-0H, hvor den frie 10 hydroxygruppe om ønsket kan være beskyttet ved dannelse af en hvilken som helst af de ovenfor nævnte konventionelle ethergrupper. På den anden side har det vist sig, at denne OH-gruppe kan være en fri hydroxygruppe og ikke behøver at blive beskyttet ved hjælp af en etherbeskyttelsesgruppe. Ved udførelsen af reaktionerne i fig. 3 på-15 virkes denne frie hydroxygruppe ikke af de reaktioner, som omdanner forbindelsen med den almene formel XXXVI til forbindelsen med den almene formel ΧΧΧΧΓ. Imidlertid foretrækkes det generelt til opnåelse af de bedste udbytter at beskytte denne hydroxygruppe via dannelse af en hydrolyserbar ether.

20 Reaktionstrin u) udføres via en Wittig-reaktion mellem forbindelsen med den almene formel XXXV og forbindelsen med den almene formel XXXIV under anvendelse af de samme reaktionsbetingelser, som er beskrevet ovenfor i forbindelse med reaktionstrin c).

Forbindelsen med den almene formel XXXVI kan omdannes til forbindelsen 25 med den almene formel XXXVII via reaktionstrin v) ved hydrogenering.

En hvilken som helst hydrogeneringsmetode kan anvendes til at udføre denne reaktion. De konventionelle hydrogeneringsmetoder omfatter bl.a. behandling af forbindelsen med den almene formel XXXVI i et inert organisk opløsningsmiddelmedium med hydrogengas i nærværelse af en 30 katalysator. Der kan anvendes en hvilken som helst konventionel hydrogeneringskatalysator ved udførelsen af denne reaktion. Blandt de foretrukne katalysatorer er palladium. Ved udførelsen af denne reaktion kan der anvendes et hvilket som helst konventionelt inert organisk opløsningsmiddel. Endvidere kan der i reaktionstrin v) anvendes 35 en hvilken som helst af de ved katalytisk hydrogenering konventionelle betingelser.

I næste trin i denne reaktion omdannes forbindelsen med den almene formel XXXVTI til forbindelsen med den almene formel XXXIX via reaktionstrin w) ved behandling af forbindelsen med den almene formel 40 XXXVII med formaldehyd eller en formaldehyd-afgivende forbindelse. Ved udførelsen af denne reakcion metalliseres forbindelsen med den almene 13 DK 173287 B1 formel XXXVII først med alkalimetalalkyl, fx n-butyllithium. Denne reaktion udføres generelt i et inert organisk opløsningsmiddel såsom et etheropløsningsmiddel. Blandt de foretrukne opløsningsmidler er diethylether og tetrahydrofuran. Ved udførelsen af denne reaktion er 5 temperaturen og trykket ikke kritisk. Reaktionen kan udføres ved stuetemperatur og atmosfærisk tryk. Hvis det ønskes, kan der anvendes højere og lavere temperaturer. Efter behandling af forbindelsen med. den almene formel XXXVIII med alkalimetalalkyl sættes formaldehyd eller en formaldehyd-afgivende, forbindelse til reaktionsmediet. Der 10 kan anvendes en hvilken som helst forbindelse, der er i stand til at afgive formaldehyd såsom paraformaldehyd, ved udførelsen af denne reaktion. Reaktionen udføres i samme reaktionsmedium og under anvendelse af samme betingelser, under hvilke metalliseringen af forbindelsen med den almene formel XXXVIII blev udført.

15 Forbindelsen med den almene formel XXXIX omdannes til forbindelsen med den almene formel XXXX via reaktionstrin x) ved behandling af forbindelsen med den almene formel XXXIX med triarylphosphinhydrohaloge-nid. Denne reaktion udføres på samme måde som beskrevet i forbindelse med reaktionstrin b) ovenfor. Forbindelsen med den almene formel XXXX 20 omdannes via reaktionstrin y) til forbindelsen med den almene formel XXXXI ved omsætning med forbindelsen med den almene formel VII (jfr. fig. 1). Reaktionstrin y) udføres via en Hittig-reaktion under anvendelse af samme betingelser som beskrevet i forbindelse med reaktionstrin c). Forbindelsen med den almene formel XXXXI kan omdannes 25 til den tilsvarende forbindelse indeholdende den frie carboxylgruppe i stedet for R9' . Denne reaktion udføres ved konventionel esterhydrolyse på den ovenfor beskrevne måde. Der kan anvendes en hvilken som helst konventionel esterhydrolyse-fremgangsmåde. Hvis R4 indeholder en terminal hydroxygruppe, der er beskyttet ved anvendelse af en etherbe-30 skyttelsesgruppe, kan denne ethergruppe hydrolyseres, hvilket giver den frie hydroxygruppe ved konventionel etherhydrolyse såsom ved at anvende en vandig uorganisk syre. Der kan anvendes en hvilken som helst konventionel fremgangsmåde til etherhydrolyse. Den beskyttede etherhydroxygruppe kan hydrolyseres enten før eller efter hydrolyse af 35 estergruppen til dannelse af den frie syre af forbindelsen med den almene formel XXXXI.

Hvis det ønskes at fremstille forbindelser med den almene formel i, hvor X betegner -C=CH-, omsættes forbindelsen med den almene for- R10 40 mel XXXV i fig. 3 via reaktionstrin u) med forbindelsen med den almene formel XXXIV, hvor R = R4, til dannelse af forbindelsen med den almene formel XXXVI, hvor = R4. Denne forbindelse med den almene formel XXXVI, hvor R4 = R^, underkastes derefter den samme serie af 14 DK 173287 B1 reaktioner som forbindelsen med den almene formel XXXVII, dvs. reaktionstrin w), x) og y), til dannelse af den forbindelse med den almene formel I, hvor X betegner -^=CH-.

R10 5 I reaktionsskemaet i fig. 3, hvor R2 i forbindelsen med den almene formel XXXV betegner hydroxy, foretrækkes det at beskytte denne hydroxygruppe via esterificering med en lavere alkansyre. Denne esterbeskyttelsesgruppe kan fraspaltes efter dannelse af Wittig-saltet med den almene formel XXXX.

10 Forbindelsen med den alnjene formel I og II, hvor X betegner -CH-O, *10

kan fremstilles ud fra en forbindelse med den almene formel L

VfHZ\ φζ *1 hvor R,, R2 og Z" har den ovenfor anførte betydning, via reaktions- 15 skemaet i fig. 4, I fig. 4 har R(, R2, R7, R8, R10* R9' , Y og Z" den ovenfor anførte betydning, og R = R4, idet en i R indeholdt hy- 15 15 droxygruppe er beskyttet i form af en hydrolyserbar ethergruppe såsom tetrahydropyranyl samt de ovenfor nævnte ethergrupper.

Forbindelsen med den almene formel L omdannes til en forbindelse med 20 den almene formel LI ved omsætning med et alkalimetalalkoxid med den almene formel L-A. Denne reaktion udføres ved at omsætte forbindelsen med den almene formel L med forbindelsen med den almene formel L-A under anvendelse af de konventionelle betingelser for omsætning af et alkalimetalalkoxid med et halogenid.

25 i dette trin omdannes forbindelsen med den almene formel LI til en forbindelse med den almene formel LII ved først af behandle forbindelsen med den almene formel LI med et alkyllithium såsom n-butyl-lithium for at metallere forbindelsen med den almene formel LI. Den metallerede forbindelse med den almene formel LI omsættes derefter med 30 formaldehyd eller en formaldehydafgivende forbindelse. Ved omdannelsen af forbindelsen med den almene formel LI til forbindelsen med den almene formel LII anvendes de samme reaktionsbetingelser som beskrevet i forbindelse med reaktionstrin w). Forbindelsen med den almene formel LII omdannes til et phosphoniumsalt med den almene formel LUI, idet 35 forbindelsen med den almene formel LII behandles med et triarylphos- DK 173287 Bl 15 phinhydrohalogenid på den i reaktionstrin b) ovenfor anførte måde. Phosphoniumsaltet med den almene formel Lill omsættes via en Wittig-reaktion med forbindelsen med den almene formel VII (jfr. fig. 1) til dannelse af en forbindelse med den almene formel LIV. Reaktionen til 5 dannelse af forbindelsen med den almene formel LIV udføres på samme måde som beskrevet i forbindelse med trin c) ovenfor.

Når R i forbindelsen med den almene formel LIV indeholder en beskyttet hydroxysubstituent, kan denne substituent hydrolyseres til dannelse af den frie hydroxyforbindelse ved konventionelle fremgangs-10 måder til hydrolyse af ethergrupper, som let kan fjernes. Der kan anvendes en hvilken som helst konventionel fremgangsmåde til hydrolyse af etherbeskyttelsesgrupper. De betingelser, som er konventionelle for hydrolyse af etherbeskyttelsesgrupper, vil ikke påvirke den anden ethergruppe i forbindelsen med den almene formel LIV. Forbindelsen med 15 den almene formel LIV kan omdannes til den frie syre ved konventionel esterhydrolyse.

Hvis R2 i forbindelserne med de almene formler L, LI, LII og LUI betegner hydroxy, foretrækkes det, at hydroxygruppen er beskyttet via en hydrolyserbar estergruppe såsom lavere alkanoyloxy. Den hydrolyserbare 20 esterbeskyttelsesgruppe kan fraspaltes efter dannelse af Wittig-saltet med den almene formel LUI.

Hvis det ønskes, kan dobbeltbindingerne i forbindelsen med den almene formel I i stilling 2-3, 4-5, 6-7 og 8-9 være enten i cis- eller i trans-konfiguration. På den anden side kan disse forbindelser være en 25 blanding af de forskellige cis- og trans-isomerer. I forbindelsen med den almene formel VII kan dobbeltbindingerne deri være enten i ciseller i trans-konfiguration afhængigt af den ønskede stereokonfiguration af dobbeltbindingerne i forbindelserne med den almene formel I. Wittig-reaktionen, der udføres ved fremstillingen af forbindelserne 30 med de almene formler I og II såsom i trin c), e), i), etc., giver dobbeltbindingen i 8-9-stillingen som en blanding af 8-9-cis- og -trans-isomerer. Disse cis- og trans-isomerer kan fraspaltes ved konventionelle metoder såsom fraktioneret krystallisation, etc.

Når forbindelserne med den almene formel I har en dobbeltbinding i 35 trans-konfigurationen i 2-3-stillingen, kan denne isomer desuden omdannes til den tilsvarende cis-dobbeltbinding ved konventionelle isomeriseringsmetoder, som er kendte inden for teknikken. Disse metoder omfatter bl.a. behandling af forbindelsen med den almene formel I med iod i et inert organisk opløsningsmiddel. Isomerisering med iod 40 giver forbindelsen med den almene formel I med en 2-3-dobbeltbinding i cis-stillingen.

16 DK 173287 B1

Forbindelserne med den almene formel I omfatter alle de geometriske isomerer, herunder blandinger af disse geometriske isomerer.

Forbindelsen med den almene formel XI, hvor R, betegner fluor, er en hidtil ukendt forbindelse og kan fremstilles ud fra en forbindelse med 5 den almene formel LV

'1 'rk.

*3 hvor R2 har den ovenfor anførte betydning via reaktionsskemaet i fig.

5. I fig. 5 har R2 og den ovenfor anførte betydning. R3 er hydrogen.

I fig. 5 alkyleres forbindelsen med den almene formel LV ved omsætning 10 med et allylbromid. Hvis den forbindelse, hvor R2 betegner hydroxy, er ønsket, anvendes der som udgangsmateriale den forbindelse med den almene formel LV, hvor den med R2 betegnede hydroxygruppe er beskyttet ved esterificering, dvs. den forbindelse med den almene formel LV, hvor R2 betegner en beskyttet hydroxygruppe. Der kan anvendes en 15 hvilken som helst konventionel fremgangsmåde til alkylering af en hydroxygruppe med et allylbromid til at udføre reaktionen til omdannelse af forbindelsen med den almene formel LV til forbindelsen med den almene formel LVI. Forbindelsen med den almene formel LVI omlejres til en forbindelse med den almene formel LVII ved at opvarme for-20 bindeisen med den almene formel LVI til en temperatur på 190-230°C.

Denne omlejring kan finde sted uden anvendelse af noget opløsningsmiddel eller i nærværelse af et carbonhydrid-opløsningsmiddel med højt kogepunkt. Når R3 betegner hydrogen, dannes forbindelsen med den almene formel LVII som en blanding med isomeren af forbindelsen med den 25 almene formel LVII, hvor allylgruppen sidder para i forhold til fluorsubstituenten på benzylringen. Denne isomer kan fraspaltes eller anvendes i de efterfølgende reaktioner og skilles fra reaktionsblandingen i et senere trin.

Forbindelsen med den almene formel LVII omdannes derefter til en 30 forbindelse med den almene formel LVIII ved omsætning med forbindelsen med den almene formel V (fig. 1) som beskrevet i reaktionstrin d) ovenfor. I næste trin i reaktionsskemaet omdannes forbindelsen med den almene formel LVIII til en forbindelse med den almene formel LIX ved isomerisering med en stærk base såsom et alkalimetalalkoxid i nær- 17 DK 173287 B1 værelse af et inert organisk opløsningsmiddel, fortrinsvis kalium-tert.butoxid i dimethylsulfoxid. Forbindelsen med den almene formel LIX omdannes til en forbindelse med den almene formel LX ved at behandle forbindelsen med den almene formel LIX med ozongas. Ved ud-5 førelsen af denne reaktion anvendes temperaturer på fra -70°C til -20°C. Denne reaktion udføres endvidere i et inert organisk opløsningsmiddel. Der kan anvendes et hvilket som helst konventionelt inert organisk opløsningsmiddel, fortrinsvis halogenerede carbonhydrider såsom methylenchlorid.

10 En forbindelse med den almene formel LX er forbindelsen med den almene formel XI, hvor R( betegner fluor. Denne forbindelse kan omdannes til en forbindelse med den almene formel X ifølge reaktionsskemaet i fig.

1.

Når R2 betegner hydroxy i forbindelsen med den almene formel III, er 15 der to hydroxygrupper. Derfor foretrækkes det generelt at fremstille den forbindelse med den almene formel XI, hvor R2 betegner beskyttet hydroxy, ud fra en forbindelse med den almene formel LXI som vist i fig. 6. På denne måde kan der fremstilles forbindelser med den almene formel I, hvor X betegner -O-, R2, betegner hydroxy, og R4 har den 20 ovenfor anførte betydning. I fig. 6 betegner Ri og R sammen med det 15 dertil bundne oxygenatom hydroxy beskyttet med en konventionel hydrolyserbar beskyttelsesgruppe, fortrinsvis lavere alkanoyl.

I fig. 6 omdannes forbindelsen med den almene formel LXI til en forbindelse med den almene formel LXII under anvendelse af den samme 25 reaktion som beskrevet i forbindelse med omdannelsen af en forbindelse med den almene formel LV til en forbindelse med den almene formel LVI (jfr. fig. 8). Forbindelsen med den almene formel LXII omdannes dernæst til en forbindelse med den almene formel LXIII under anvendelse af den samme fremgangsmåde som beskrevet i forbindelse med 30 omdannelsen af forbindelsen med den almene formel LVI til forbindelsen med den almene formel LVI I. I næste trin omdannes forbindelsen med den almene formel LXIII til en forbindelse med den almene formel LXIV ved samme fremgangsmåde som beskrevet i forbindelse med trin g') i fig. 5 og derefter til en forbindelse med den almene formel LXV ved frem-35 gangsmåden beskrevet i forbindelse med trin h') i fig. 5. Omdannelsen af brombenzenforbindelsen med den almene formel LXV til phenol forbindelsen med den almene formel LXVI finder sted ved velkendte fremgangsmåder som fx beskrevet af Kidwell og Darling, Tetrahedron Letters.

1966, s. 531-535.

40 I næste trin til fremstilling af mellemproduktet med den almene formel XI, hvor R2 betegner beskyttet hydroxy, dvs. forbindelsen med den 18 DK 173287 B1 almene formel XI-A, beskyttes hydroxygruppen på forbindelsen med den almene formel LXVi ved esterificering med en hvilken som helst konventionel hydrolyserbar estergruppe til dannelse af en forbindelse med den almene formel LXVII, hvor R sammen med det dertil bundne oxygen 5 danner en hydrolyserbar estergruppe. Der kan anvendes en hvilken som helst konventionel fremgangsmåde til esterificering af en hydroxygrup-pe med en organisk syre såsom lavere alkansyre med 1-7 carbonatomer til at fremstille forbindelsen med den almene formel LXVII. Forbindelsen med den almene formel XI*A dannes ud fra forbindelsen med den 10 almene formel LXVII ved den ovenfor beskrevne reaktion i forbindelse med omdannelsen af en forbindelse med den almene formel LIX til en forbindelse med den almene formel LX (jfr. fig. 5).

Ved omdannelsen af en forbindelse med den almene formel XI-A til en forbindelse med den almene formel XVII som vist i fig. 1 foretrækkes 15 det generelt af hydrolysere den estersubstituent, som udgør Rj, efter dannelsen af Wittig-saltet med den almene formel XIII eller XVI.

Ifølge en anden udførelsesform for opfindelsen kan den forbindelse med den almene formel XI, hvor Rf betegner CF3 (forbindelsen med den almene formel XI-B), dannes ved den i fig. 7 viste reaktion ud fra en for-20 bindelse med den almene formel LXX. I første trin i denne reaktion omdannes forbindelsen med den almene formel LXX til en forbindelse med den almene formel LXXI under anvendelse af den samme fremgangsmåde som beskrevet ovenfor i forbindelse med reaktionen via trin d), hvor forbindelsen med den almene formel VIII omsættes med en forbindelse 25 med den almene formel V til dannelse af en forbindelse med den almene formel X. I denne reaktion, hvor R2 betegner OH, sker alkylering meget langsomt på hydroxygruppen, der sidder ortho i forhold til CF3-gruppen. Beskyttelse af denne gruppe er derfor måske ikke nødvendig, eftersom alkyleringen fortrinsvis sker med meta- hydroxygruppen. Eventuelle 30 blandinger af alkylerede produkter, der fås ved denne reaktion, kan adskilles ved konventionelle separationsmetoder. Forbindelsen med den almene formel LXXI omdannes til forbindelsen med den almene formel XII-B ved konventionelle fremgangsmåder til formylering af en benzenring såsom ved behandling med alkyllithium og dimethylformamid.

35 Opfindelsen belyses nærmere ved nedenstående. I eksemplerne er etheren diethylether, og opløsningsmidlerne blev fjernet under vakuum.

19 DK 173287 B1 EKSEMPEL 1 [[{2-(Nonyloxy)phenyl]methyl]triphenylphosphoniumbromid 110 g 2-hydroxybenzaldehyd blev alkyleret ved at blande denne forbindelse med 180 g 1-bromnonan, vandfrit kaliumcarbonat og 800 ml 5 dimethylformamid. Denne blanding blev. opvarmet ved 80°C i 14 timer.

Der tilsattes derefter hexan og vand, og hexanekstrakten blev koncentreret, og remanensen blev destilleret, hvilket gav 210 g 2-nonyl-oxybenzaldéhyd, kogepunkt 121°C (0,3 mm Hg). En oplosning af 100 g 2-nonyloxybenzaldehyd fremstillet som beskrevet ovenfor i 1000 ml 10 ethanol ved 10°C blev reduceret ved behandling med et overskud af 6 g natriumborhydrid, og efter omrøring af blandingen i yderligere 15-20 minutter ved stuetemperatur blev forbindelsen 2-nonyloxybenzylalkohol isoleret ved ekstraktion i hexan. Fjernelse af hexanet under vakuum gav 98 g rå 2-nonyloxybenzylalkohol. Den resulterende 2-nonyloxyben-15 zylalkohol sattes til en blanding af 144 g triphenylphosphinhydrobro-mid i 500 ml acetonitril, og den resulterende opløsning blev opvarmet under tilbagesvaling i 14 timer. Fjernelse af opløsningsmidlerne under vakuum og krystallisation af remanensen af en tetrahydrofuran/ethylet-her-blanding gav 208 g rent [[ (2-(nonyloxy)phenyl]methyl]triphe-20 nylphosphoniumbromid.

EKSEMPEL 2 [(2-Hydroxyphenyl)methyl]triphenylphosphoniumbromid 2-Hydroxybenzylalkohol blev behandlet med triphenylphosphinhydrobromid i acetonitril som beskrevet i eksempel 1, hvilket gav 25 [(2-hydroxyphenyl)methyl]triphenylphosphoniumbromid.

EKSEMPEL 3 (All-E) -9- (2-hydroxyphenyl) -3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyre-ethylester

En opløsning af 1 mol [ (2-hydroxyphenyl)methyl] triphenylphosphoni-30 umbromid i tetrahydrofuran blev omdannet til ylidet ved -35°C med en opløsning af n-butyllithium i hexan (2,1 molækvivalenter) og derefter udsat for i mol 7-formyl-3-methyl-2,4,6-octatriensyreethylester og derefter omrørt ved -70°C i yderligere 15 minutter. Isolering af de organiske produkter med en hexan/ethylacetatblanding (4:1 dele efter 35 volumen) og fortyndet mineralsyre (2M vandig HC1) gav den rene (all- 20 DK 173287 B1 E)-9-(2-hydroxyphenyl)-3,7-dimethyl-2, 4,6,8-nonatetraensyreethylester (90% udbytte) efter chromatografi efterfulgt af krystallisation af en dichlormethan/hexanblanding.

EKSEMPEL 4 5 (All-E) -9-(2-hydroxyphenyl)-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyreethylester

En blanding af 0,5 mol 2-hydroxybenzaldehyd og 0,6 mol (7-carboxy* .

2,6-dimethyl-2,4,6-heptatrien-1-yl)triphenylphosphoniumbromid i 750 ml 1,2-epoxybutan blev opvarmet under tilbagesvaling i 30 minutter, 10 afkølet, hældt i en ether/hexanblanding (1:1 dele efter volumen), filtreret og koncentreret. Remanensen blev derefter krystalliseret af en hexan/etherblanding, hvilket gav (all-E)-9-(2-hydroxyphenyl)-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyreethylester (38% udbytte), smeltepunkt.

14 3 -14 5 °C.

15 EKSEMPEL 5 (All-E)-9-[2-(nonyloxy)phenyl]-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyre

En opløsning af 150 g ([2-(nonyloxy)phenyl]methyl]triphenylphosphoniumbromid i 1100 ml tetrahydrofuran blev afkølet til -50°C, hvilket gav en fin suspension af det faste salt. Til denne blanding sattes 20 180 ml af en 1,6M opløsning af n-butyllithium i hexan, hvilket gav en opløsning af ylidet. Blandingen blev derefter omrørt i yderligere 15 minutter ved -40°C, afkølet til -70°C og behandlet med 65 g 7-formyl-3-methyl-2,4,6-octatriensyreethylester opløst i 250 ml tetrahydrofuran. Tilsætning af hexan og 40%'s vandigt methanol til reak-25 tionsblandingen efterfulgt af koncentration af hexanekstrakten gav 64 g (all-E)-9-[2-(nonyloxy)phenyl]-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyreethylester (58% udbytte), smeltepunkt 52-53°C. Denne ester blev derefter hydrolyseret ved dannelse af en opløsning af 70 g af esteren i 1000 ml ethanol. Denne opløsning blev behandlet med 80 g vandigt 30 kaliumhydroxid (i 400 ml vand) og opvarmet under tilbagesvaling i 1 time. Vand og vandig mineralsyre blev derefter tilsat, og de faste stoffer blev ekstraheret i chloroform. Koncentration af denne organiske ekstrakt og krystallisation af remanensen af en ethylacetat/-hexanblanding gav 38 g (all-E)-9-[2-(nonyloxy)phenyl]-3,7-dimethyl-35 2,4,6,8-nonatetraensyre, smeltepunkt 102-103°C.

DK 173287 B1 EKSEMPEL 6 21 (All-E)-9- [2-(nonyloxy)phenyl]-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyre

En blanding af 24 g natriumhydrid (50 vægtprocent i mineralolie) og 1000 ml dimethyl formamid ved 10eC blev behandlet med 0,4 ækvivalenter 5 (all-E)-9-(2-hydroxyphenyl)-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyre- ethylester. Den resulterende blanding blev derefter omrørt ved stuetemperatur, indtil al. hydrogenudvikling var stoppet, til dannelse af natriumsaltet af (all-E)-9-(2-hydroxyphenyl)-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyreethylester. En opløsning af 0,5 ækvivalenter 1-nonyl-10 tosylat i 200 ml dimethylformamid blev derefter sat til denne saltopløsning, og reaktionsblandingen blev omrørt ved 45°C i 14 timer.

Hexan/vand blev derefter forsigtigt tilsat, hexanekstrakten blev koncentreret, og remanensen blev oprenset ved chromatografi på silicagel. Krystallisation af hexan gav derefter den rene (alle-E)-9-[2-(nonyl-15 oxy)phenyl]-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyreethylester. Hydrolyse af denne ester som i eksempel 5 gav (all-E)-9-[2-(nonyloxy)phenyl]- 3,7-dimethyl-2,4,6» 8-nonatetraensyre.

EKSEMPEL 7 (All-E)- 3,7-dimethyl-9-[2-[(2,2-dimethyloctyl)oxy]phenyl]-2,4,5,8-20 nonatetraensyre 2-Hydroxybenzaldehyd blev kondenseret med 2,2-dimethyl-l-iodoctan, hvilket gav 2-(2,2-dimethyloctyloxy)benzaldehyd, som blev reduceret til 2-(2,2-dimethyloctyloxy)benzylalkohol og derefter omdannet til ([2- (2,2-dimethyloctyloxy)phenyl]methyl] triphenylphosphoniumbromid som 25 i eksempel 1. Kondensering af dette phosphoniumbromid med 7-formyl-3-methyl-2,4,6-octatriensyreethylester som beskrevet i eksempel 3 efterfulgt af hydrolyse som i eksempel 5 gav (all-E)-3,7-dimethyl-9-(2-[(2,2-dimethyloctyl)oxylphenyl]-2,4,5,8-nonatetraensyre, smeltepunkt 113-117°C (af en dichlormethan/hexanblanding).

30 EKSEMPEL 8 (All-E)-3,7-dimethyl-9-[2-[(octyloxy)methyl]phenyl]-2,4,6,8 -nonatetraensyre

Lithiumoctanoat, der var fremstillet ud fra octanol og n-butyllithium, i en blanding af tetrahydrofuran/hexan og dimethylformamid blev kon-35 denseret med 2-brombenzylbromid, hvilket gav 2-(octyloxy)methylbrom- 22 DK 173287 B1 benzen. Dette materiale blev behandlet med n-butyllithium i en ether/-hexanblanding og derefter behandlet med paraformaldehyd, hvilket gav 2-(octyloxy)methylbenzylalkohol. Dette materiale blev derefter behandlet med triphenylphosphoniumbromid, hvilket gav 5 [(2-[(octyloxy)methyl]phenyl]methyl]triphenylphosphoniumbromid.

Kondensering af dette materiale med 7-formyl-3-methyl-2,4,6-octatri-ensyreethylester som i eksempel 3 efterfulgt af hydrolyse som i eksempel 5 gav (all- E)-3,7-dimethyl-9-[2-[(octyloxy)methyllphenyl)-2,4,6,B-nonatetraensyre, smeltepunkt 120-121°C (af en dichlormethan/-10 hexanblanding).

EKSEMPEL 9 (All-E)-9-[2-chlor-6-(nonyloxy)phenyl]-3,7-dimethyl-2,4,S,B-nonatetraensyre 2-Chlor-6-hydroxybenzaldehyd blev alkyleret med l-bromnonan som i 15 eksempel l, hvilket gav 2-chlor-6-nonyloxybenzaldehyd. Reduktion med natriumborhydrid som i eksempel 1 gav 2-chlor-6-nonyloxybenzylalkohol, som efter behandling med triphenylphosphinhydrobromid i acetonitril som i eksempel 1 gav [[2-chlor-6-nonyloxy]phenyl]methyl]triphenylphosphoniumbromid. Kondensering med 7-formyl-3-methyl-2,4,6-oc-20 tatriensyreethylester som beskrevet i eksempel 3 gav (all-E)-9-(2-chlor-6-(nonyloxy)phenyl)-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyreet-hylester. Esteren blev underkastet hydrolyse som i eksempel 5, hvilket gav (all-E)-9-[2-chlor-6-(nonyloxy)phenyl)-3,7-dimethyl- 2,4,6,8-nonatetraensyre, smeltepunkt 129-131^0 (af en ethylacetat/hexanblan-25 ding).

EKSEMPEL 10 (All-E)-9-(5-methoxy-2-nonyloxyphenyl)-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nona-tetraensyre 5-Methoxy-2-hydroxybenzaldehyd blev alkyleret med nonylbromid og 30 reduceret med natriumborhydrid som i eksempel 1, hvilket gav 5-me-thoxy-2-nonyloxybenzylalkohol, som efter udsættelse for triphenylphosphinhydrobromid gav [(5-methoxy-2-nonyloxyphenyl)methyl]triphenylphosphoniumbromid. Kondensering af dette materiale med 7-formyl-3-methyl-2,4,6-octatriensyreethylester som i eksempel 3 efterfulgt af 35 hydrolyse som i eksempel 5 gav (all-E)- 9-(5-methoxy-2-nonyloxyphenyl)- 3,7-dimethyl-2,4,6,B-nonatetraensyre, smeltepunkt 125-126°C (af methanol).

DK 173287 Bl 23 EKSEMPEL 11 (All-E) - 9- [2- (8-hydroxyoctyl)oxy]phenyl-3,7-din\ethyl-2,4,6,8-nona-tetraensyre

Natriumsaltet af (all-E)-9-(2-hydroxyphenyl)-3,7-dimethyl-2,4,6,8-5 nonatetraensyreethylester i dimethylformamid fremstillet som beskrevet i eksempel 6 blev behandlet med 1,8-dihydroxyoctan-monotosylat som beskrevet i eksempel 6, hvilket gav (all-E)-9-(2-(8-hydroxyoctyl)-oxy]phenyl-3,7-diethyl-2,4,6,8-nonatetraensyreethylester efter chro-matografi på silicagel. Hydrolyse som i eksempel 5 gav (all-E)- 9-[2-10 (8-hydroxyoctyl)oxy]phenyl-3,7-dimethyl-2,4,6,B-nonatetraensyre, smeltepunkt 122-123°C (af ethylacetat).

EKSEMPEL 12 (All-E)-[5-(2-nonyloxyphenyl)-3-methyl-2,4-pentadienyl]triphenyl-phosphoniumbromid 15 62 g 2-(nonyloxy)benzaldehyd opløst i 500 ml acetone blev behandlet med 100 ml 1M vandigt natriumhydroxid ved stuetemperatur i 18 timer.

Der tilsattes derefter saltvand og ethylacetat/hexan (1:1 dele efter volumen). Koncentration af den organiske fase efterfulgt af krystallisation af hexan gav 53 g 4-(2-nonyloxyphenyl)-3-buten-2-on.

20 En opløsning af 58 g 4-(2-nonyloxyphenyl)-3-buten-2-on i 200 ml te-trahydrofuran sattes ved -30°C til 200 ml af en 1,6M opløsning af vinylmagnesiumbromid i tetrahydrofuran (fortyndet til l 1 med mere tetrahydrofuran). Efter færdig tilsætning blev blandingen omrørt ved 0°C i 30 minutter, reaktionen blev standset med 100 ml mættet vandigt 25 ammoniumchlorid og 2 1 ether, og faste stoffer blev frafiltreret. Koncentration af den organiske ekstrakt og oprensning ved chromatografi på silicagel gav 40 g (E)-5-(2-nonyloxyphenyl)-3-hydroxy-3-methyl-1,4-pentadien som en olie.

En opløsning af 66 g (E) -5- (2-nonyloxyphenyl) -3-hydroxy-3-methyl- 1,4-30 pentadien i 250 ml acetonitril blev sat til en opslæmning af 66 g triphenylphosphinhydrobromid i yderligere 300 ml acetonitril ved 10°C.

Efter opvarmning til stuetemperatur blev blandingen omrørt ved denne temperatur i 2 timer, hvilket gav en opløsning. Denne opløsning blev derefter ekstraheret med 2 x 250 ml hexan, og acetonitrilfasen blev 35 koncentreret (ca. 400 ml) og afkølet til -10°C. De faste stoffer blev frafiltreret, vasket med acetonitril og hexan og tørret, hvilket gav 24 DK 173287 B1 21 g rent (all-E)-[5-(2-nonyloxyphenyl)-3-methyl-2,4-pentadienyl]-triphenylphosphoniumbromid.

EKSEMPEL 13

Idet man gik ud fra (all-E)-[S-(2-nonyloxyphenyl)-3-methyl-2,4-pen-5 tadienyl]triphenylphosphoniumbromid og anvendte fremgangsmåden ifølge eksempel 5, blev ylidet omsat med 3-formyl-2-butensyreethylester, hvilket gav (all-E)-9-(2-nonyloxyphenyl)-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nona-tetraensyre efter oprensning ved chromatografi på silicagel og hydrolyse med måttet ethanolisk kaliumhydroxidopløsning som i eksempel 5.

10 EKSEMPEL 14 (Ζ,Ε,Ε,Ε)-9-[2-(Nonyloxy)phenyl]-3,7-dimethyl-2,4,6.8-nonatetraensyre 10 g (all-E)-9-[2-(nonyloxy)phenyl]-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetra-ensyreethylester blev opløst i 200 ml hexan indeholdende 0,5 g iod og omrørtes ved stuetemperatur i 30 minutter. Hexanet blev vasket fri for 15 iod med en vandig natriumthiosulfatopløsning (10 vægtprocent), tørret og koncentreret, hvilket gav en blanding af dobbeltbindingsisomerer. Separation ved chromatografi på silicagel gav 1,5 g ren (Z,E,E,E)-9-[2-(nonyloxy)phenyl]-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyreethylester. Hydrolyse med vandigt ethanolisk kaliumhydroxid under tilbagesvaling 20 gav ren (Z,E,E, E)-9-[2-(nonyloxy)phenyl]-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyre, smeltepunkt 135-136°C.

EKSEMPEL 15 (Ε,Ε,Ε,Ζ)-9-[2-(Nonyloxy)phenyl]- 3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyre

Moderludmaterialet, der resulterede fra krystallisationen af 25 (all-E)-9-[2-(nonyloxy)phenyl]- 3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyreethylester i eksempel 5 var en blanding indeholdende forskellige isomerer. Oprensning ved chromatografi gav en 80% ren ethylester, som efter hydrolyse som i eksempel 5 gav ren (E,E,E,Z)-9-(2-(nonyloxy)p-henyl]-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyre, smeltepunkt 105-109°C.

30 EKSEMPEL 16 2-Decyl-1-brombenzen 25 DK 173287 B1 O,1 mol nonylmethyltriphenylphosphoniumbromid i 200 ml tetrahydrofuran blev omdannet til ylidet med 0,1 molækvivalent n-butyllithium (1,6M i hexan) ved -10°C.

0,09 mol 2-brombenzaldehyd blev derefter tilsat i 25 ml tetrahydrofu-5 ran, og efter at blandingen var blevet omrørt i yderligere 30 minutter ved o°C, tilsattes hexan og vandigt methanol (40:60). Hexanekstrakten blev koncentreret, og remanensen blev destilleret, hvilket gav 2-(1-decenyl)-1-brombenzen (90%).

Dette materiale blev opløst i hexan indeholdende en 10%'s palladium/-10 kul-katalysator og hydrogeneret ved stuetemperatur og atmosfærisk tryk, indtil den olefiniske binding var mættet. De faste stoffer blev frafiltreret, og destillering af remanensen gav rent 2-decyl-1-brom-benzen (80%), kogepunkt 120eC (0,001 mm Hg).

EKSEMPEL 17 15 2-Decyl-l-hydroxymethylbenzen 0,1 mol 2-decyl-l-brombenzen opløst i 150 ml ether blev behandlet med 0,11 ækvivalenter n-butyllithium (1,6M i hexan), og blandingen blev omrørt ved stuetemperatur i 2 timer.

0,2 molækvivalenter tørt paraformaldehyd blev derefter tilsat, og 20 blandingen blev omrørt i yderligere 18 timer ved stuetemperatur.

Vand og mere ether blev derefter tilsat, og etherekstrakterne blev tørret og koncentreret. Efter chromatografi gav remanensen rent 2-decyl-i-hydroxymethylbenzen (75% udbytte).

EKSEMPEL 18 25 (All-E)-9-(decylphenyl)-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyre 2-Decyl-l-hydroxymethylbenzen blev omdannet til phosphoniumsaltet med triphenylphosphoniumhydrobromid i acetonitril ved fremgangsmåden ifølge eksempel 1. Dette salt blev derefter udsat for n-butyllithium i tetrahydrofuran som beskrevet ovenfor og derefter behandlet med 30 7-formyl-3-methyl-2,4,6-heptatriensyremethylester som beskrevet oven for.

26 DK 173287 B1

Oprensning af det rå kondenseringsprodukt ved chromatografi på si-licagel efterfulgt af basisk hydrolyse gav ren (all-E)-9-(decylphen-yl)-3,7-dimethyl-2(4,6,8-nonatetraensyre, smeltepunkt 107-108°C (af hexan/ether).

5 EKSEMPEL 19 (All-E)-9-(2-octylaminophenyl)-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyre-ethylester 1 mol 2-aminobenzylalkohol blev behandlet med 2,2 mol octanoylchlorid i en blanding af dichlormethan og triethylamin ved 0°C. Efter 30 mi-10 nutter ved 10°C blev blandingen vasket med vand, og etheren blev fradestilleret. Den rå remanens blev opløst i 2000 ml tetrahydrofuran, behandlet med 1500 ml IN vandigt natriumhydroxid og omrørt ved stuetemperatur i 3 timer.

Tilsætning af vand og ether gav det rå hydroxymethyloctylamid. Op-15 rensning ved chromatografi gav det rene octylamid (85%).

100 g af dette materiale blev opløst i 500 ml tetrahydrofuran og sat til en opslæmning af 2 molækvivalenter lithiumaluminiumhydrid i 1000 ml tetrahydrofuran. Blandingen blev derefter opvarmet under tilbagesvaling i 6 timer og afkølet til 0°C, og reaktionen blev 20 standset med 100 ml vandig natriumsulfatopløsning.

De faste stoffer blev frafiltreret, opløsningsmidlerne blev fjernet under vakuum, og remanensen blev oprenset ved chromatografi på sili-cagel, hvilket gav 75 g rent 2-hydroxymethyl-N-octylamalin.

Dette materiale blev opløst i 300 ml acetonitril indeholdende 1,1 25 ækvivalenter triphenylphosphinhydrobromid, og blandingen blev opvarmet under tilbagesvaling i 24 timer og derefter koncentreret. Remanensen blev behandlet med ether, hvilket gav phosphoniumsaltet som et hvidt fast stof.

Dette materiale blev omdannet til det tilsvarende ylid med 1,5 mol-30 ækvivalenter n-butyllithium og omrørt ved 0°C i 1 time. 1,6 molækvivalenter overskydende 7-formyl-3-methyl-2,4,6-heptatriensyreethylester blev derefter tilsat i tetrahydrofuran, og blandingen blev omrørt ved 10°c i 1 time.

Tilsætning af hexan og vandigt methanol (2:3) og fjernelse af hexanet 35 under vakuum gav det rå koblede produkt. Oprensning ved chromatografi 27 DK 173287 B1 på silicagel og krystallisation af hexan gav ren (all-E)-9-(2- oc-tylaminophenyl)-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyreethylester (25%), smeltepunkt 38-40°C.

EKSEMPEL 20 5 2- Fluor- 6 -nonyloxybenzylalkohol

En opløsning af 100 g 3-fluorphenol i 1000 ml dimethylformamid indeholdende 165 g kaliumcarbonat blev behandlet med 115 g allylbromid og opvarmet ved 80°C i 18 timer.

Vand og hexan tilsattes derefter, og hexanekstrakten blev vasket med 10 5%'s vandig natriumhydroxidopløsning og mættet saltopløsning og blev inddampet, hvilket gav 155 g af allyletheren. Dette materiale (134 g) blev opvarmet ved 220°C i 16 timer, hvilket gav en blanding af 3-fluor-2-(2-butenyl)phenol og 5-fluor-2-(2-butenyl)phenol. Denne blanding blev opløst i 2000 ml dimethyl formamid indeholdende 170 g 15 1-bromnonan og 150 g kaliumcarbonat og opvarmet ved 80eC i 16 timer. Fortynding med vand og ekstraktion med hexan gav efter koncentration en blanding af produkter. Destillering gav en blanding af 3-[(2-fluor-6 - nony loxy) phenyl ] buten og 3-((3- fluor- 2 - nonyloxy) phenyl ] buten (186 g), kogepunkt 120-125eC (0,1 mm Hg).

20 Denne blanding af isomerer (185 g) i 1000 ml dimethylsulfoxid indeholdende 1,5 g kalium-tert.butoxid henstod ved stuetemperatur i 6 timer. Tilsætning af vand og ekstraktion med hexan gav en blanding af 1- [ (2 -fluor-6-nonyloxy)phenyl]buten og l- [(3-fluor-2-nonyloxy)phenyl] buten .

25 Denne blanding af isomerer (175 g) blev opløst i en blanding af di- chlormethan og methanol (9:1, 2000 ml) og blev udsat for en ozonstrøm ved -40°c i 8 timer. Herefter blev reaktionsblandingen hældt i en blanding af vand, hexan og dimethylsulfid (100 ml) og omrørt ved stuetemperatur i 1 time.

30 Hexanekstrakten blev vasket med vand, tørret over MgS04, behandlet med yderligere 50 ml dimethylsulfid og henstod ved stuetemperatur i 16 timer.

Fjernelse af opløsningsmidlerne gav 155 g af en blanding af aldehyderne 2-fluor-6-nonyloxybenzaldehyd og 4-fluor-2-nonyloxybenzaldehyd.

28 DK 173287 B1

Denne blanding af aldehyder (150 g) i 2000 ml ethanol blev udsat for 15 g natriumborhydrid ved 5eC og derefter omrørt ved stuetemperatur i 30 minutter. Der tilsattes 1500 ml vand og 500 ml saltvand, og blandingen af alkoholer blev ekstraheret i hexan. Fjernelse af opløsnings-5 midlerne og chromatografi af remanensen på silicagel (5% ethylacetat/-hexanblanding) gav 76 g ren 2-fluor-6-nonyloxybenzylalkohol.

EKSEMPEL 21 (All-E)- 9-2-fluor-6 -(nonyloxy)phenyl-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetra-ensyre 10 En blanding af 19 g 2-fluor-6-nonyloxybenzylalkohol og 26 g triphe-nylphosphinhydrobromid i 250 ml acetonitril blev opvarmet under til-, bagesvaling i 14 timer og derefter koncentreret til tørhed, hvilket gav 42 g [f(2-fluor-6-nonyloxy)phenyl]methyl]triphenylphosphoniumbro-mid. Dette phosphoniumsalt blev opløst i 600 ml tetrahydrofuran, afkø-15 let til -50°C og behandlet med 45 ml n-butyllithium (l,6M i hexan).

Efter yderligere 15 minutters omrøring ved -50°C tilsattes 8,4 g 7- formyl- 3-methyl-2,4,6-octatriensyreethylester, og reaktionsblandingen blev opvarmet til stuetemperatur og omrørt i yderligere 15 minutter. Hexan blev derefter tilsat, og blandingen blev vasket med vand og 20 40%'s vandigt methanol og tørret over MgSCV Koncentration af hexan- ekstrakten og oprensning ved chromatografi (5% ether/hexan) gav 11 g af den rene trans-isomer.

Krystallisation af hexan/ethylacetat gav 9,5 g (all-E)-9-[2-fluor-6-(nonyloxy)phenyl]-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyreethylester.

25 En opløsning af 6,5 g af esteren i 150 ml ethanol blev behandlet med en opløsning af 7 g kaliumhydroxid i 40 ml vand og opvarmet under tilbagesvaling i 1 time. Den afkølede reaktionsblanding blev hældt i kold vandig saltsyre, og syren blev ekstraheret i chloroform. Fjernelse af opløsningsmidlerne og krystallisation af hexan/ethylacetat gav 30 ren (all-E)-9-(2-fluor-6-(nonyloxy)phenyl]-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyre, smeltepunkt 107-109°C.

29 DK 173287 B1 EKSEMPEL 22 Kapselformuleringer

Nr. Bestanddele mg/kapsel tng/kapsel mg/kapsel 5 1 (all-E)-9-[2- 15 30 60 (nonyloxy)phenyl]- 3.7- dimethyl-2,4,- 6.8- nonatetraensyre 2 Lactose 239 224 194 10 3 Stivelse 30 30 30 4 Talkum 15 15 15 5 Magnesiumstearat 11 1

Kapselpåfyldningsvægt 300 mg 300 mg 300 mg 15---

Fremgangsmåde: 1) Nr. 1-3 blandes på hensigtsmæssig måde.

2) Der tilsættes talkum og magnesiumstearat og blandes i et kort tidsrum.

20 3) Der fyldes i kapsler på en hensigtsmæssig indkapslings maskine .

EKSEMPEL 23

Der fremstilles kapsler ved fremgangsmåden ifølge eksempel 22 med undtagelse af, at den aktive bestanddel (nr. 1) var (all-E)-9-Γ2-2 5 fluor-6-(nonyloxy)phenyl1-3,7-dimethyl-3,4,6,8-nonatetraensyre.

30 DK 173287 B1 EKSEMPEL· 24

Tabletformulering (vådgranulering)

Nr. Bestanddele mg/tablet mg/tablet mg/tablet 5 1 (all-E)-9- 12- 100 250 500 (nonyloxy)phenyl]- 3.7- dimethyl-2,4,- 6.8- nonatetraensyre 2 Lactose 98,5 147,5 170 10 3 Polyvinylpyrroli- 15 30 40 don (pvp) 4 Modificeret stivelse 15 30 40 5 Majsstivelse 15 30 40 6 Magnesiumstearat 1,5 2,5 5 15 -—----—--------

Tabletvægt 245 mg 490 mg 795 mg

Fremgangsmåde: 1) Nr. 1, 2, 4 og 5 blandes i en hensigtsmæssig blandemaskine, 20 granuleres med PVP og opløses i vand/alkohol. Granuleringen tørres. Den tørre granulering formales gennem en hensigtsmæssig mølle.

2) Der tilsættes magnesiumstearat og komprimeres på en hensigtsmæssig pressemaskine.

25 EKSEMPEL· 25

Der fremstilles tabletter på samme måde som i eksempel 24 med undtagelse af, at den aktive bestanddel (nr. 1) var (all-E)-9-[2-fluor-6-(nonyloxy)phenyl]-3,7-dimethyl - 2,4,6,8-nonatetraensyre.

31 EKSEMPEL 26 DK 173287 B1

Tabletformuleringer (direkte kompression)

Nr. Bestanddele mg/tablet mg/tablet mg/tablet 5 1 (all-E)-9-[2- 15 30 eo (nonyloxy)phenyl]- 3.7- dimethyl-2,4, - 6.8- nonatetraensyre 2 Lactose 207 192 162 10 3 Avicel® 45 45 45 4 Direkte kompres- 30 30 30 sionsstivelse 5 Magnesiumstearat 3 3 3 15 Tabletvægt 300 mg 300 mg 300 mg

Fremgangsmåde: 1) Nr. 1 blandes med en lige så stor mængde lactose. Der blandes grundigt.

20 2) Der blandes med nr. 3, 4 og den resterende mængde af nr. 2.

Der blandes grundigt.

3) Der tilsættes magnesiumstearat og blandes i 3 minutter.

4) Der komprimeres på et hensigtsmæssigt stempel.

EKSEMPEL 27 25 Kapselformuleringer

Nr. Bestanddele mg/kapsel mg/kapsel "'9/kapsel 1 (all-E)-(3,7-di- 15 30 60 methyl)-9-[2-[(8- 3 0 hydroxyoctyl)oxy]- phenyl]-2,4,6,8-nonatetraensyre 2 Lactose 239 224 194 3 Stivelse 30 30 30 35 4 Talkum 15 15 15 5 Magnesiumstearat li 1

Kapselpåfyldnings vægt 300 mg 300 mg 300 mg 32 DK 173287 B1

Fremgangsmåde: 1) Nr. 1-3 blandes i en hensigtsmæssig blandemaskine.

2) Talkum og magnesiumstearat tilsættes, og der blandes i et kort tidsrum.

5 3) Der fyldes i kapsler på en hensigtsmæssig indkapslings maskine.

EKSEMPEL 28

Tabletformuleringer (vådgranulering)

Nr. Bestanddele mg/tablet mg/tablet mg/tablet 10----——- 1 (all-E)-(3,7-di- 100 250 500 methyl)-9-[2-[(octyl- oxy)methyl]phenyl]- 2,4,6,8-nonatetraen-15 syre 2 Lactose 98,5 147,5 170 3 Polyvinylpyrrolidon 15 30 40 4 Modificeret stivelse 15 30 40 5 Majsstivelse 15 30 40 20 6 Magnesiumstearat 1,5 2,5 5

Tabletvægt 245 mg 490 mg 795 mg

Fremgangsmåde: 25 1) Nr. 1, 2, 4 og 5 blandes i en hensigtsmæssig blandemaskine, granuleres med PVP og opløses i vand/alkohol. Granuleringen tørres. Den tørre granulering formales gennem en hensigtsmæssig mølle.

2) Der tilsættes magnesiumstearat og komprimeres på en hen-30 sigtsmæssig pressemaskine.

EKSEMPEL 29 t[2-Trifluormethyl-S -(nonyloxy)phenyl] methyl]triphenylphosphonium-bromid

En blanding af 51 g a,or,0f-trifluor~m-cresol, 70 g 1-bromnonan og 35 100 g kaliumcarbonat i dimethylformamid blev opvarmet ved 85°C i 33 DK 173287 B1 48 timer. Tilsætning af vand og hexan gav 89 g ren (3-trifluorme-thylJphenylnonylefher, kogepunkt 115°C (0,1 mm Hg) . 89 g af dette produkt i 1,5 1 ether ved -20°C blev blandet med 233 ml n-butyl-lithium (1,5M i hexan) og derefter omrørt i 2 timer ved stuetem-5 peratur. Denne blanding blev derefter afkølet til -40°C, behandlet med et overskud af tørt dimethylformamid (40 ml) i 100 ml ether, opvarmet til 0°C og derefter behandlet med vand. Ekstraktion med hexan og chromatografi på silicagel (5% ether/hexan) gav 35 g (2-trifluormethyl-6-nonyloxy)benzaldehyd. Reduktion af dette produkt 10 med natriumborhydrid i ethanol ved den i eksempel l beskrevne fremgangsmåde gav 32 g (2-trifluormethyl-6-nonyloxy)benzenmethanol efter chromatografi på silicagel. 31 g af dette materiale blev omdannet til [[2-trifluormethyl-6-(nonyloxy)phenyl]methyl]triphenyl phosphoniumbromid ved omsætning med triphenylphosphinhydrobro-15 mid ved den i eksempel 1 beskrevne fremgangsmåde.

EKSEMPEL 30 (All-E)-9-[2-(trifluormethyl)-6-(nonyloxy)phenyl]-3,7-dimethyl- 2.4.6.8- nonatetraensyre 97 mmol [[2-trifluormethyl-6-(nonyloxy)phenyl]methyl]triphe-20 nylphosphoniumbromid i 600 ml tetrahydrofuran blev ved omsætning med 7-formyl-3-methyl-2,4,6-octatriensyreethylester omdannet til (alle-E)-9- (2-(trifluormethyl)-6-(nonyloxy)phenyl]-3,7-dimethyl- 2.4.6.8- nonatetraensyreethylester ved den i eksempel 3 beskrevne fremgangsmåde. Oprensning ved chromatografi og krystallisation af 25 hexan gav den rene ethylester (41%). Hydrolyse (5,2 g) som i eksempel 5 gav 3 g ren (all-E)-9-[2-(trifluormethyl)-6-(nonyloxy) phenyl]-3,7-dimethyl- 2,4,6,8-nonatetraensyre, smeltepunkt 135-136°C (af ethylacetat/hexan).

EKSEMPEL 31 30 (All-E)-9-[2-(hexyloxy)phenyl]- 3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraen syre [[2-(Hexyloxy)phenyl]methyl]triphenylphosphoniumbromid, som var fremstillet ved den i eksempel 1 beskrevne fremgangsmåde ved omsætning af 2-hydroxybenzaldehyd og l-bromhexan, blev omdannet 35 til (all-E)-9-(2-(hexyloxy)phenyl]-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyre, smeltepunkt 137-138°C (af ethanol) ved den i eksempel 3 beskrevne fremgangsmåde.

EKSEMPEL 32 34 DK 173287 B1 [[2- (Nonyloxy)-S-(hydroxy)phenyl]methyl]triphenylphosphoniumbromid

En opløsning af l mol 4-bromphenol i 500 ml tetrahydrofuran blev sat til en opslæmning af 1,17 mol natriumhydrid i 1,2 1 dimethyl-5 formamid ved 25°C. Efter færdig reaktion tilsattes 1,32 mol allylchlorid, og efter yderligere 3 timers omrøring ved 45°C blev produktet isoleret med vand og hexan. Destillering gav allyl-{4-bromphenyl)ether, kogepunkt 65-67°C ved 0,1 mm Hg (82%). Dette materiale blev opvarmet ved 195°C med dimethylanalin i 4 timer og 10 derefter destilleret, hvilket gav 0,81 mol 2-allyl-4-bromphenol.

En opløsning af 0,81 mol af dette materiale i 200 ml tetrahydrofuran sattes til en blanding af 0,8 mol 1-bromnonan, 0,92 mol natriumhydrid og 1 g kaliumiodid ill dimethylformamid ved 25°C.

Efter at hydrogenudviklingen var færdig, blev blandingen opvarmet 15 ved 50°C i 14 timer, afkølet, sat til et overskud af vand og ekstraheret med hexan. Destillering gav 256 g nonyl-(2-allyl-4-bromphenyl)ether, kogepunkt 147-156°C ved 0,1 mm Hg. 255 g af dette materiale ill dimethylsulfoxid og 0,5 1 tetrahydrofuran blev opvarmet ved 35-40°C med 2 g kalium-tert.butoxid i 2 timer, 20 hvorefter reaktionen blev standset med 5 ml eddikesyre og vand.

Isolering af reaktionsprodukterne med hexan gav 234 g rent 1-[2-(nonyloxy)-5-(brom)phenyl]propen, kogepunkt 145-155°C ved 0,1 mm Hg. En opløsning af 0,56 mol af dette materiale i 600 ml tetrahydrofuran blev omdannet til Grignard-reagenset med 1 mol magnesium 25 ved 55°C i 3 timer. Efter endt reaktion blev blandingen afkølet til 0°C og behandlet med 0,75 mol trimethylborat i 200 ml ether.

Efter yderligere 30 minutters omrøring ved 25°C blev blandingen afkølet til 0°C og udsat for 500 ml af en blanding af 10%'s ammoniumchlorid og 10%'s hydrogenperoxid og omrørt i yderligere 30 1 time ved 25°C. Tilsætning af vand og hexan gav det rå materiale efter fjernelse af hexanet under vakuum. Råproduktet blev ledt gennem en prop af silicagel, hvilket gav 73 g para-[2-(l-propenyl-4-(nonyloxy)phenyl]phenol. Acetylering af 0,8 g af dette materiale med acetylchlorid og triethylamin i dichlormethan gav [2-(l-35 propenyl)-4-(nonyloxy)-1-(acetoxy)]benzen (89%). 99 g af dette materiale blev opløst i en blanding af 150 ml methanol og 1,5 1 dichlormethan og behandlet med ozon ved- 40°C, indtil al udgangsmaterialet var blevet brugt. 50 ml dimethylsulfid og 500 ml vand tilsattes derefter, og efter kraftig omrøring i 30 minutter ved 40 25°C blev den organiske fase tørret over MgS04 og koncentreret, hvilket gav 83 g [2-(nonyloxy)-5-(acetoxy)Ibenzaldehyd. Reduktion af 80 g af dette materiale med 6 g natriumborhydrid ill ethanol ved 20°C i 2 timer gav råt [2-(nonyloxy)-5-(acetoxy)1benzenmetha- 35 DK 173287 B1 nol, som umiddelbart blev udsat for 300 ml 40%'s vandigt kaliumhydroxid ill ethanol i 30 minutter ved 60°C. Syrning med vandig syre (6M hydrogenchlorid) og ekstraktion med chloroform gav råproduktet efter koncentration. Fortynding af remanensen med hexan gav 5 63 g rent [3-(hydroxymethyl)-4-(nonyloxy) ]phenol som et fast stof.

En opløsning af 62 g af dette materiale i en blanding af 0,5 1 acetonitril og 86 g triphenylphosphinhydrobromid blev opvarmet under tilbagesvaling i 14 timer og koncentreret til tørhed ved 50eC, hvilket gav i [2-(nonyloxy) -5- (hydroxy)phenyl]methyl] triphe-10 nylphosphoniumbromid i form af en glas.

EKSEMPEL 33 (All-E)-9-[5-hydroxy-2-(nonyloxy)phenyl] - 3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyre 0,23 mol Γ [2- (nonyloxy) -5- (hydroxy)phenyl]methyl] triphenylphospho-15 niumbromid i 1,5 1 tetrahydrofuran ved -70°C blev behandlet med 315 ml n-butyllithium (1,6M i hexan) og blev derefter behandlet med 59 g ethyl 8-formyl-3,7-dimethyl-2,4,6-octatrienoat i tetrahydrofuran. Blandingen blev derefter opvarmet til -l5eC, syrnet med eddikesyre og ekstraheret i ether og 40%'s vandigt methanol. Op-20 rensning ved chromatografi på silicagel gav ren (alle-E)-9-[5- hydroxy-2- (no-nyloxy)phenyl]-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyre-ethylester. Hydrolyse af 6 g af denne ester ved den i eksempel 5 beskrevne fremgangsmåde gav 3,5 g (all-E)-9-[5-hydroxy-2-{nonyloxy) phenyl]-3,7-dimethyl-2,4,6,B-nonatetraensyre, smeltepunkt 25 170-173°C (af ethylacetat).

EKSEMPEL 34 (All-E)-9-[2-(nonyloxy)-5-(2,2,2-trifluorethoxy)phenyl]-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyre 4,4 g (all-E)-9-r5-hydroxy-2-(nonyloxy)phenyl]-3,7-dimethyl-30 2,4,6,8-nonatetraensyreethylester blev opvarmet ved 90°C i 72 timer med 7 g kaliumcarbonat og 6 g 2,2,2-trifluorethyl-p-toluen-sulfonat i 200 ml dimethyl formamid. Oparbejdning med vand og hexan efterfulgt af oprensning på silicagel gav 0,75 g af den rene ethylester. Hydrolyse af 0,9 g af denne ester ved den i eksempel 5 35 beskrevne fremgangsmåde gav 0,6 g ren (all-E)-9-[2-(nonyloxy)-5-(2,2,2-trifluorethoxy)phenyl]-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraen- 36 DK 173287 B1 syre, smeltepunkt 121eC, efter krystallisation af en blanding af tetrahydrofuran og hexan.

EKSEMPEL 35 (2)-t[2-{1-Decenyl)phenyl]methyl]triphenylphosphoniumbromid og 5 (E)-{[2-(1-Decenyl)phenyl]methyl]triphenylphosphoniumbromid

En (E,Z)-blanding af 2-(1-decenyl)-l-brombenzen fremstillet ifølge eksempel 16 (1:4) blev omdannet til en (E,Z)-blanding af 2-(l-dece-nyl)-l-hydroxymethylbenzen ved den i eksempel 17 beskrevne fremgangsmåde. Denne blanding blev adskilt ved chromatografi på 10 silicagel, hvilket gav de rene (E)- og (Z)-alkoholer. Omsætning af hver af disse isomerer med triphenylphosphinhydrobromid som beskrevet i eksempel 1 gav de tilsvarende phosphoniumsalte, dvs.

(2) -[(2-(1-decenyl)phenyl]methyl]triphenylphosphoniumbromid og (E)-[[2-(1-decenyl)phenyl]me-thyl]triphenylphosphoniumbromid.

15 EKSEMPEL 36 (All-E)-9-[2-(1-decenyl)phenyl]-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraen-syre (E)-[(2-(1-Decenyl)phenyl]methyl]triphenylphosphoniumbromidet blev omdannet til ethylesteren af (alle-E)-9-[2-(decenyl)phenyl]-3,7-20 dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyre ved den i eksempel 1 beskrevne fremgangsmåde. Hydrolyse med base som i eksempel 1 og krystallisation af den rå syre af acetonitril gav (all-E)-9-[2-(l-decenyl)-phenyl]-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyre, smeltepunkt 105-107°C.

25 EKSEMPEL 37 (E,E,E,E,Z)-9-[2-(1-Decenyl)phenyl]-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyre

Titelforbindelsen blev fremstillet på samme måde som i eksempel 36 under anvendelse af (Z)-[[2-(l-decenyl)phenyl]methyl]triphe-30 nylphosphoniumbromid. Hydrolyse af ethylesteren og krystallisation af den rå syre af ether gav ren (E,Ε,Ε,E,Z)-9-[2-(l-decenyl)phenyl] -3,7-dime-thyl-2,4,6,8-nonatetraensyre, smeltepunkt 103-105°C.

37 DK 173287 B1 I nedenstående eksempler er forbindelse A (all-E)-9-[2-(nonyloxy)-phenyl]-3,7-dimethyl-2,4,6,B-nonatetraensyre. I nedenstående eksempler blev forbindelse A testet i forskellige forsøg for sin antiinflammatoriske aktivitet i dyremodeller for inflammation og i 5 visse kroniske modeller for adjuvansarthritis.

i alle forsøgene var forbindelse A og de øvrige retinoider, der blev testet samtidig, formuleret i jordnøddeolie indeholdende 0,05% propylgallat som antioxidant. De anvendte dosismængder var 5 ml.kg'* for rotter og 10 ml.kg'' for mus. Kontroller blev doseret 10 med den passende mængde jordnøddeolie-bærer.

EKSEMPEL 38

Virkning af forbindelse A på forsinket hypersensitivitet over for methyleret bovint serumalbumin (MBSA)

Dyr·. MFI han- og hunmus, understamme E33. Startvægt ca.

15 25 g.

Materialer: Methyleret bovint serumalbumin (MBSA) (Sigma).

Freund's komplette adjuvans (Difco).

Metode: Grupper på 10 mus blev sensibiliseret (dag o) ved in tradermal injektion på to abdominale steder af 0,05 ml 20 af en vand-i-olie-emulsion af MBSA og Freund's kom plette adjuvans. På dag 9 blev musene inficeret ved injektion af 20 μΐ af en 1%'s MBSA-opløsning i den ene pote og 20 μΐ vand i den kontralaterale pote. Potevolumener blev målt 24 timer senere ved kviksølvfor-25 trængnings-plethysmografi. Den gennemsnitlige pro centvise forøgelse af potevolumenet af den MBSA-inficerede pote sammenlignet med den med vand inficerede pote blev beregnet for hver behandlingsgruppe. Dosering med bærer og retinoid begyndte på dag 0 og 30 afsluttedes på dag 9.

Resultater: Resultaterne er vist i nedenstående tabel II.

38 DK 173287 B1

Tabel II

Virkningen af forbindelse A ved MBSA-forsinket hypersensitivitetstest 5 Behandling Dosis % forøgelse af % reduktion Gennemsnit- mg. kg'1 potevolumen (jfr. jordnød- lig foran- deoliekontrol) dring af kropsvægt (g) 10 -:-—

Jordnøddeolie 109 ±11 M 3,8 F 0,2

Etretinat 10 59 ± 9** 46 M -0,8 F -2,0

TiS

15 Forbindelse A 10 102 ±12 6 M 3,3 F -0,2

Forbindelse A30 50 ±7+** 54 M2,8 F 0,5

Forbindelse A 100 40 ± 5*** 63 M 3,3 20 F -0,2

Hver gruppe bestod af 4 hantnus og 6 hunmus (i separate bure) . Lægemidlerne blev indgivet oralt i en dosismængde på 10 ml.kg"1 (10 doser).

25 ns: Ikke signifikant **: p < 0,01 ***: p < 0,001 sammenlignet med bærerkontrol under anvendelse af "Student's two-tailed t-test".

EKSEMPEL 39 30 Virkningen af forbindelse A på udviklingen af adjuvansarthritis hos rotter

Dyr: AHH/R-Hunrotter (PVG-afledt med en begyndelsesvægt i området 110-140 g) blev anvendt.

Materialer: Adjuvans til injektion. Der blev fremstillet en homo-35 geniseret suspension af varmedræbt Mj_ tuberculosis (humane stammer C, DT og PN) , 5 mg.ml'1 i flydende paraffin.

Metode: Rotterne blev tilfældigt opdelt i grupper på fem, og adjuvansarthritis blev induceret ved subplantar in-40 jektion af 0,1 ml adjuvanssuspension i højre bagpote på hver rotte. Testforbindelserne blev administreret ved intubation hver morgen startende med dagen for adjuvansinjek.tion. To grupper kontrolrotter fik bærer 39 DK 173287 B1 ligesom en gruppe på tre normale rotter, der blev medtaget til sammenligningsformål. Dosering blev foretaget daglig indtil afslutningen af forsøget på dag 15 med undtagelse af den første weekend (dag 5 og 5 6). Behandlingsgrupperne er vist i tabel III og har etretinat som standardretinoid.

Målinger af højre bagpotevolumen blev foretaget indledningsvis og på dag 2 og 4 efter adjuvansinjektion (primær fase). Højre og venstre bagpotevolumen blev 10 derefter målt på dag 8 og for hver to eller tre dage indtil afslutningen af forsøget på dag 15 (sekundær fase). På dette tidspunkt blev mobiliteten af hver ankelled og forekomsten og alvoren af sekundære læsioner på snude, ører, forpoter, venstre bagpote og hale 15 også bedømt med hensyn til graden af mulig fleksion og under anvendelse af et arbitrært pointsystem.

Bedømmelse af resultater:

Tidsforløbkurver for de injicerede poter blev integreret fra dag 0 til 4 for at afspejle primær opsvul-20 men og fra dag 8 til 15 (sekundær opsvulmen). Den sekundære opsvulmen i den ikke-injicerede pote blev integreret på lignende måde fra dag 8 til 15. Beregninger blev udført under anvendelse af et specifikt computerprogram, som beregnede gennemsnit ± se for 25 hvert integreret område. Signifikansen af forskellene i forhold til kontroller blev bestemt ved Student's t-test (2-tailed), og procentvise reduktioner af kontrolområder blev beregnet. Procentvise forbedringer i ledmobilitet og procentvise reduktioner i læsions-30 graden blev også bestemt. I sidstnævnte tilfælde blev "Wilcoxon rank sum test (2 tailed)" anvendt for at udtrykke forskellen til kontrolgraden under anvendelse af rådata. Den gennemsnitlige ændring i kropsvægt i hver gruppe blev optegnet.

35 Resultater: Resultaterne er anført i nedenstående tabel III.

40 DK 173287 B1

Tabel III

Virkning af forbindelse A og ertretinat _P& adjuvansarthrltis hoa rotter _

Behandling Dosis \ reduktion af poteopsvulmen* Lesions-^ Ledtrobt-® Cndrlng 1 mg.kg * Primår Sekundar Sekundår grad Iltet kropsvarjt i,j) peroralt (hejre) (venstre) 1NC) —---y-—-

Deg U-i!> Dag 0-15 kontrol "♦ »#3 e 3,7

Adjuvans- - - - - - --0,6-5,5 kontrol *

Forbindelse A 15 -6 30 91· 72 66 * 2i2 - 0,fc 65 '16 5l"‘ 75" 65* 66’* * 5,*, *1,2'

Crtrtlla«! 15 9 . 30 67* 56* 50 ♦ 1,0 - 5,0 1) Statistisk analyse ved Student’s t-test (2-tailed) 5 2) Statistisk analyse ved Wilcoxon rank sum test (2-tailed) * = P < 0,05, ** = p < 0,02, *** » p < 0,01 EKSEMPEL 40

Virkningen af forbindelse A på etableret type II collagenarthritis

Dyr: Alderley Park Strain 1 han- og hunrotter.

10 Materialer.· Type 2 collagen (fremstillet ud fra bovint nasalt septumbrusk), Freund’s ukomplette adjuvans (Difco).

Metode: Rotterne blev sensibiliseret over for type 2 collagen ved intradermal injektion med 1 ml af en vand-i-olie-emulsion bestående af lige store dele af en 1 mg.ml‘* 15 opløsning af type 2 collagen i 0,45M NaCl, 0,02M Tris, pH-værdi 7,4, og Freund’s ukomplette adjuvans. Rotter, der udviklede arthritis, blev på dag 15 efter sensibilisering allokeret til en arachisoliebehandlet kontrolgruppe (6 hanrotter, 4 hunrotter) eller til 20 gruppen behandlet med forbindelse A (6 hanrotter, 5 hunrotter). Målinger af bagpotevolumener blev udført for at sikre ligelig fordeling af rotter mellem grupperne. Der blev foretaget opsamling af urin natten mellem dag 15 og 16, og doseringen påbegyndtes på dag 25 16. Disse urinprøver blev analyseret for glycosami- noglycaner (GAG). Forbindelse A blev givet med 100 mg-kg'1 peroralt. Natten mellem dag 19 og 20 blev der foretaget endnu en opsamling af urin. Disse urinprøver blev analyseret for glycosaminglycaner (GAG). På dag DK 173287 Bl 41 20 blev der foretaget endnu en måling af bagpoten.

Rotterne blev derefter bedøvet med natriumpentobarbi-ton, åreladet og aflivet, og der blev taget røntgenbilleder af bag- og forpoter. Rotterne blev doseret på 5 dag 16-19 inkl. (4 doser).

Resultater: Resultaterne er vist i nedenstående tabel IV.

Tabel IV

Virkningerne af forbindelse A ved type II collagenarthritistest 10 ---

Dag Forbindelse A Kontrol 100 mg. kg"1 Jordnøddeo lie

Potevol. GAG ^g) vægt (g) Potevol. GAG ^g) Vægt (g) 15 16 2,44+0,08 15B6±307 247*14 2,48*0,07 1538*192 249*19 20 2,66±0,06 634* 72 229*10 2,46±0,07 729±134 258±19

Kommentar: Både han- og hunrotter tabte vægt under behandlingen med forbindelse A.

20 EKSEMPEL 41

Virkningen af forbindelse A på ikke-immun inflammation Dyr·. Der blev anvendt Alderley Park Strain l hunrotter med en vægt på 170-205 g ved begyndelsen af forsøget.

Materialer: λ-carrageenan. Fremstillet som en opløsning i saltvand 25 og steriliseret ved autoklavering.

Metode: Forbindelse A blev administreret oralt til grupper på 8 rotter én gang daglig i 10 dage i doser på 10, 30 og 100 mg.kg'1. Kontroldyr modtog bærer. 1 time efter den sidste dosis blev dyrene bedøvet med methohexiton 30 (Brietal, 50 mg.kg'1), og 0,2 ml 1%'s l-carrageenan blev injiceret i det pleurale hulrum. 4 timer senere blev dyrene aflivet med en overdosis pentobarbiton (Sagatal), det pleurale exudat blev opsamlet, og det pleurale hulrum blev udvasket med 2 ml phosphatpufret 35 saltopløsning (PBS-A, Oxoid). Exudatvolumenet blev optegnet, og celletal blev bestemt med en automatisk celletæller (Coulter), Differentielle celletællinger blev foretaget på exudat-udstrygningspræparater, der var farvet med Giemsa-farve for separat at bestemme 42 DK 173287 B1 antallet af polymorphonukleare leukocyter (PMN) og mononukleare celler (MN).

Umiddelbart efter opsamling af de pleurale exudater blev dyrenes skinneben udskåret, og deres brudstyrke 5 blev bestemt.

Dyrenes kropsvægt blev optegnet daglig. Statistiske analyser blev udført under anvendelse af Student's 2-tailed t-test.

Resultater: Resultaterne er anført i nedenstående tabel V. I 10 tabellen er dosis angivet i mg pr. kg pr. dag.

Tabel V

Virkningerne af forbindelse A på udviklingen af 4 timers carrageenan-lungehindebetændelse - . SMl.t Skliwi*b*n·- rorblixwi« Oo*I» YOlUMR e*ll«t»l 5«i« Ρ*β* Sul*C tw brud»tyrk* (pcrorelt) fk*jr* » v*ni?r«) (al) t «10* « «10* t «10* I C*i>r«i.«nlt » mdrlng andrlno »udring atidrlno (»9! undr 1*9

Kontrol 1*1 1,40 139,1 119,1 10,1 C,7 liridilwll·) «0,1* 0,1 O,» *0.) *0,1 rorblnd.1«. λ «·» ·.»« I10,i" s -4,S ΠΙ,*" *· -5,« 0,4H k· -17,4 »,SH *· -1,4 (oplosning) *0,00 «7,3 «*,7 *0,0 0,1 rorbUd.1.. λ o,»·· ->*,» in.i« -11,1 »·«,*· -11,< S·"·*· ‘1.1 «0,09 0,0 O,· 0,7 *0,1 7o7bUd.l.« K >“*» 0,00·· -41,9 109, l"·1· -19,7 ΙΟΙ,*-*· -14,7 Ί~Γ· -7‘,7 *,7"*· 0,1 ,0,00 *0,1 «7,1 «1,1 «0,1 N.S.: Ikke signifikant 15 * a p < 0,05, ** = p < 0,01 sammenlignet med bærerbehandlede kon troller under anvendelse af Student’s 2-tailed t-test.

EKSEMPEL 42

Virkningen af forbindelse A på imprægneret svampegranulomtest hos rotter 20 Dyr: Der blev anvendt AHH/R-hunrotter (PVG-afledt) med en begyndelsesvægt i området 120-140 g.

Materialer: Svampepræparat. Pellets (6,5 mm i diameter) blev udstanset fra cellulose-svampeklæde ("Wettex"), og 0,1 ml af en suspension indeholdende 0,5 mg.ml'1 varme-25 dræbt M^. tuberculosis (humane stammer C, DT og PN) i sterilt saltvand blev påført på hver pellet. Pellets blev tørret, vejet og autoklaveret.

43 DK 173287 B1

Metode: Rotterne blev tilfældigt opdelt i grupper på fem, og daglig dosering med testforbindelser blev påbegyndt.

Efter den femte dosis blev rotterne bedøvet med Saga-tal (45 mg.kg'1 intraperitonealt). Ryggene blev bar-5 beret, og to pellets blev implanteret subcutant (én på hver side) i hver rotte via et lille dorsalt midterlinjesnit. Snittet blev lukket, og rotterne lodes vågne op fra bedøvelsen.

7 dage efter implantationen blev rotterne aflivet, og 10 pellets blev fjernet, dissekeret fri for fremmed væv og vejet. Hver pellet blev derefter anbragt i en 4 ml’s alikvot destilleret vand, skåret i stykker med en fin saks og sonikeret. Efter centrifugering blev Na+-og K+-indholdet af supematanten bestemt ved flam-15 mefotometri. Desuden blev binyren og thymuskirtlen fra hver rotte dissekeret ud og vejet, og underbagbenene blev fjernet til måling af skinnebenets brudstyrke.

Kropsvægten blev også optegnet under hele forsøgsperioden.

20 Resultater: Resultaterne er anført i nedenstående tabel VI.

Bedømmelse af resultaterne

Gennemsnittet ± SE for hver af parametrene blev beregnet, og forskelle i forhold til kontrolværdierne blev bestemt ved Student's t-test (2-halet). Procentvise reduktioner i granulomvægt, Na+- og 25 K+-indhold og procentvise ændringer af binyre og thymus, vægt og skinnebensbrudstyrke blev bestemt.

Tabel VI

Virkningen af forbindelse A, etretinat og dexamethason på den imprægnerede svampe-30 granulomtest hos rotter «handling 0»·*· » reduktion af (..i.ulo. Pt andrind i I . . , k Anul "" * »noring 1 * rartar btnyro- thyeui»- aklnnabana- krop*vo9t [91

VidVTdt Må» Κ» v«*t »edt brudetyrke kontrol · ------ .»,4.1,1 rorbindel·* A I* por-^ s «Μ" »«,»·· -*,*·· .7,1.0,74 45 Ρ·Γ* * l0»· n o,· .1»,0*. »14,1 -1,1» .11,4.0,»« oralt 9 * * 1 - 1

Cirætlnat IS W 4 1,7 5,* O,» 07.»·· *11.7 -4.4 01,)0,4 oralt 1 ' ’ ” ηι·ΜΜ().ι·οη 0.5 mb- s 4S#S·*· S!#I··* 75,7»·· -44.S··· -TV1· -11.5* cutaat r 9 · · * 1 44 DK 173287 B1 * p = < O,OS, ** p = < 0,02, *** p = < 0,01

Kommentar: 2 kontrolrotter og i etretinatbehandlet rotte døde under bedøvelsen.

Dyr: Lewis-hanrotter fra Charles River blev anvendt til 5 disse forsøg.

Materialer: Varmedræbt, tørret Mycobacterium butvricum.

Metode: Adjuvansarthritis blev induceret ved injektion af 0,1 ml adjuvans (en suspension af varmedræbt, tørret Mvcobac terium butvricum. 0,5% (vægt/volumen) i svær 10 mineralolie indeholdende 0,2% digitonin) ved halero den. Arthritis lodes udvikle sig i 21 dage, hvorefter volumenet af begge bagpoter blev målt med en kviksolv-plethystnograf. Rotterne blev opdelt i grupper på 8 med lige store gennemsnitlige potevolumener, og derefter 15 blev rotterne behandlet med forbindelse A, indometha- cin (som kontrollægemiddel) eller bærer i 7 dage. Ved afslutningen af behandlingsperioden blev volumenet af begge bagpoter igen målt for at bedømme de antiinflammatoriske virkninger. Ændringer i kropsvægt blev 20 også fulgt, og ved afslutningen af forsøget blev plasma opsamlet til bestemmelse af plasmafibrinogen (Exner et al.. Amer. J. Clin. Path. 71. s. 521-527).

Resultater: Resultaterne er anført i nedenstående tabel VII.

Tabel VII

a 25 Virkning på forløbet af fastslået adjuvansarthritis Ændr. i Plasma- Ændr. i

Behand- Dosis potevol. fibrinogenkropsvægt

Gruppe lingb (mg/kg) (ml)e (mg/dl) (g)C

30 _____

Arthritis (10)d Bærer +0,53+0,08 1773± 30 7,5±1,2

Arthritis (10) Forb. A 100 -0,96±0,10* 874± 57* 5,2±2,1 35 Arthritis Indome- (10) thacin 1 -1,22+0,15* 978±100* 25,6±3,1* a) Gennemsnit ± S.E. er anført.

b) Lægemidlerne blev administreret én gang daglig i 7 dage ved 40 intubation begyndende på dag 22 efter induktion af ar thritis. Tween® 80 blev anvendt som bærer.

c) Ændring i potevolumen/kropsvægt er lig med potevolumen/-kropsvægt på dag 28 minus potevolumen/kropsvægt på dag 22.

Claims

1. Phenylnonatetraensyrederivater med den almene formel I Ϊ1 *7 *· R CH«CH-C *CH-CH=CH-C »C H-Rs 0| 987654321 I x-r4 hvor Rj betegner hydrogen, chlor, fluor eller trifluormethyl; R2 10 betegner hydroxy, lavere alkoxy, trifluormethyl-lavere alkoxy eller hydrogen; R4 betegner alkyl med en lige kædelængde pA 4-9 carbonatomer eller -CI^CI^IdCHjOH; x betegner -CHO-. -CH-. -O-. -C-CH- eller -N-: R10 Rio R10 R10 R5 betegner COOR9; 15 og R7, Rg, R9 og R10 betegner hydrogen eller lavere alkyl; n er 6 eller 7; og farmaceutisk acceptable salte deraf, hvor R9 betegner hydrogen.

2. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at R( betegner hydrogen, chlor eller 20 fluor; Rj betegner hydrogen eller lavere alkoxy, R4 betegner alkyl med 8-9 carbonatomer med en lige kædelængde på 8 eller 9 carbonatomer; -CH-0-. -CH-. -O-el. -N-; X betegner I L R10 Rio 10 Rj betegner COOR9, og 25 n, R7, Rg, R<j og R har den i krav 1 anførte betydning; og salte deraf, hvor betegner hydrogen. DK 173287 B1

3. Forbindelse ifølge krav 1 eller 2 kendetegnet ved, at R4 betegner alkyl som defineret i disse krav.

4. Forbindelse ifølge krav 3 5 kendetegnet ved, at X betegner -O-.

5. Forbindelse ifølge krav 4 kendetegnet ved, at R, betegner chlor eller fluor.

6. Forbindelse ifølge krav 4 kendetegnet ved, at R2 betegner lavere alkoxy.

7. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at forbindelsen er (9-[2-chlor-6-(nonyloxy)phenyl]-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyre.

8. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at forbindelsen er (all-E)-9-[2-fluor-15 6-{nonyloxy]phenyl]-3-7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyre.

9. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at forbindelsen er 3,7-dimethyl-9-(5-methoxy-2-nonyloxyphenyl)-2,4,6,8-nonatetraensyre.

10. Forbindelse ifølge krav 1, 20 kendetegnet ved, at forbindelsen er 9-[2- (nonyloxy)phenyl]-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyre.

11. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at forbindelsen er (all-E)-3,7-dime-thyl-9-(2-octylaminophenyl)-2,4,6,8-nonatetraensyre.

12. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at forbindelsen er (all-E)-3,7-dime-thyl-9-[2-[(8-hydroxyoctyl)oxy]phenyl]-2,4,6,8-nonatetraensyre. DK 173287 Bl

13. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at den er valgt blandt (all-E)-8-[2-[2-(tri fluormethyl)-6-(nonyloxy)phenyl]-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nona-tetraensyre, 5 3,7-dimethyl-9-[2-(octyloxy)phenyl]-2,4,6,8-nonatetraensyre, 3.7- dimethyl-9-(2-(2,2-dimethyloctyl)oxy]phenyl]-2,4,6,8-nonatetraensyre, 9-[2-(nonyloxy)phenyl]-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyreethyl-ester, 10 (all-E)-9-[2-(hexyloxy)phenyl]-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyre, (all-E)-9-[5-hydroxy-(2-nonyloxy)phenyl]-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyre, (all-E)-9-[2-(nonyloxy)-5-(2,2,2-trifluorethoxy)phenyl]-3,7-15 dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyre, 3.7- dimethyl-9-[2-[(octyloxy)methyl]phenyl]-2,4,6,8-nonatetraensyre, 9-(decylphenyl)-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyre, 3.7- dimethyl-9-(2-octylaminophenyl)-2,4,6,8-nonatetraensyreethyl-20 ester og (all-E)-9-[2-(1-decenyl)phenyl]-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyre.

14. Forbindelser ifølge krav 1 til anvendelse som antirheumatiske, antiarthritis- og immunosuppresive midler.

15. Forbindelser ifølge krav 14, kendetegnet ved, at den er 9-[2-(nonyloxy) phenyl]-3,7-diraethyl-2,4,6,8-nonatetraensyre.

16. Fremgangsmåde til fremstilling af forbindelser med den almene formel i ifølge krav i eller farmaceutisk acceptable salte deraf, 30 kendetegnet ved, at a) en forbindelse med den almene formel II R, iØC i XR,. ψ omsættes med en forbindelse med den almene formel VII DK 173287 B1 R-τ Ro 0 I7 I6 II OHC-C= CH-CH=CH*C=CH-C-ORq v VII eller b) en forbindelse med den almene formel XVI R, R7 Y Ro I* I7 | Z\A^CH=CH-C=CH-CH2 P-VZ' OR v 5 omsættes med en forbindelse med den almene formel XVII R„ 0 XVII i8 « OHC-C^CH-C-OR1g eller c) en forbindelse med den almene formel VIII R, R7 Rq 0 r i i7 i8 il "2 I ,CH=CH-CH=CH-CH=CH-C=CH-C-OR'Q OH 10 omsættes med en forbindelse med den almene formel R4Z, idet Rj, R2f R4, R7 og Rg i ovennævnte formler bar den i krav 1 anførte be- DK 173287 B1 tydning; 1*9' betegner lavere alkyl; Y betegner aryl; Z betegner en fraspaltelig enhed; og Z' betegner en halogenidion; hvorefter man om ønsket omdanner en carboxyl-alkylestergruppe-COOR9, som indeholdes i reaktionsproduktet, til den frie syre og 5 endvidere om ønsket omdanner syren til et farmaceutisk acceptabelt salt.

17. Farmaceutiske præparater, kendetegnet ved, at de indeholder en forbindelse ifølge krav l og en bærer.

18. Anvendelse af en forbindelse ifølge krav l til fremstilling af et farmaceutisk præparat til brug som antirheumatisk, anti-arthritis- eller immunosuppressivt middel.

19. Anvendelse ifølge krav 18, kendetegnet ved, at forbindelsen er 9-[2-(nonyloxy)-15 phenyl]-3,7-dimethyl-2,4,6,8-nonatetraensyre.