DK172253B1 - Tumorterapeutikum, fremgangsmåde til dets fremstilling samt anvendelse af humane tumorceller til fremstilling af et terapeutikum til behandling af tumorlidelser - Google Patents
Tumorterapeutikum, fremgangsmåde til dets fremstilling samt anvendelse af humane tumorceller til fremstilling af et terapeutikum til behandling af tumorlidelser Download PDFInfo
- Publication number
- DK172253B1 DK172253B1 DK402485A DK402485A DK172253B1 DK 172253 B1 DK172253 B1 DK 172253B1 DK 402485 A DK402485 A DK 402485A DK 402485 A DK402485 A DK 402485A DK 172253 B1 DK172253 B1 DK 172253B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- tumor cells
- tumor
- antigen
- therapeutic
- human tumor
- Prior art date
Links
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 22
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 13
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims description 22
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 title claims description 14
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 title claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 31
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 31
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 31
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims abstract description 10
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 claims abstract description 8
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 claims abstract description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 4
- 102100025473 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 6 Human genes 0.000 claims description 18
- 101000914326 Homo sapiens Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 6 Proteins 0.000 claims description 18
- 108010022366 Carcinoembryonic Antigen Proteins 0.000 claims description 16
- 102100025475 Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 5 Human genes 0.000 claims description 16
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 11
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 3
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 claims description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 2
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 claims 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 30
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 11
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 11
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 8
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 7
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 description 4
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910000013 Ammonium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 208000002109 Argyria Diseases 0.000 description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 2
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 description 2
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical group BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M sodium deoxycholate Chemical compound [Na+].C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC([O-])=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 FHHPUSMSKHSNKW-SMOYURAASA-M 0.000 description 2
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 2
- TUSDEZXZIZRFGC-UHFFFAOYSA-N 1-O-galloyl-3,6-(R)-HHDP-beta-D-glucose Natural products OC1C(O2)COC(=O)C3=CC(O)=C(O)C(O)=C3C3=C(O)C(O)=C(O)C=C3C(=O)OC1C(O)C2OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 TUSDEZXZIZRFGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WXHLLJAMBQLULT-UHFFFAOYSA-N 2-[[6-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]-2-methylpyrimidin-4-yl]amino]-n-(2-methyl-6-sulfanylphenyl)-1,3-thiazole-5-carboxamide;hydrate Chemical compound O.C=1C(N2CCN(CCO)CC2)=NC(C)=NC=1NC(S1)=NC=C1C(=O)NC1=C(C)C=CC=C1S WXHLLJAMBQLULT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- ZNZYKNKBJPZETN-WELNAUFTSA-N Dialdehyde 11678 Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1[C@H](C[C@H](/C(=C/O)C(=O)OC)[C@@H](C=C)C=O)NCC2 ZNZYKNKBJPZETN-WELNAUFTSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001263 FEMA 3042 Substances 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- LRBQNJMCXXYXIU-PPKXGCFTSA-N Penta-digallate-beta-D-glucose Natural products OC1=C(O)C(O)=CC(C(=O)OC=2C(=C(O)C=C(C=2)C(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)O2)OC(=O)C=2C=C(OC(=O)C=3C=C(O)C(O)=C(O)C=3)C(O)=C(O)C=2)O)=C1 LRBQNJMCXXYXIU-PPKXGCFTSA-N 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 201000008275 breast carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 150000001844 chromium Chemical class 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 1
- 208000021045 exocrine pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000010749 gastric carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 description 1
- 150000002513 isocyanates Chemical class 0.000 description 1
- 150000002540 isothiocyanates Chemical class 0.000 description 1
- 201000005296 lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 238000007694 polyacrylamide gel isoelectric focusing Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000005063 solubilization Methods 0.000 description 1
- 230000007928 solubilization Effects 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 201000000498 stomach carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000001768 subcellular fraction Anatomy 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 229920002258 tannic acid Polymers 0.000 description 1
- LRBQNJMCXXYXIU-NRMVVENXSA-N tannic acid Chemical compound OC1=C(O)C(O)=CC(C(=O)OC=2C(=C(O)C=C(C=2)C(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)[C@@H](OC(=O)C=3C=C(OC(=O)C=4C=C(O)C(O)=C(O)C=4)C(O)=C(O)C=3)O2)OC(=O)C=2C=C(OC(=O)C=3C=C(O)C(O)=C(O)C=3)C(O)=C(O)C=2)O)=C1 LRBQNJMCXXYXIU-NRMVVENXSA-N 0.000 description 1
- 229940033123 tannic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000015523 tannic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/47—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2), e.g. cellulases, lactases
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Oncology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Diaphragms For Electromechanical Transducers (AREA)
- Measuring Pulse, Heart Rate, Blood Pressure Or Blood Flow (AREA)
- Window Of Vehicle (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Description
DK 172253 B1
Opfindelsen angår et terapeutikum til behandling af en tumorlidelse, en fremgangsmåde til dets fremstilling samt anvendelse af humane tumorceller til fremstilling af et terapeutikum til behandling af tumorlidelser.
Det er f.eks.kendt fra “Mechanisms of Tumor Immunity", Gree et al., eds., 5 John Wiley Sons, N.Y., 1977, side 196, at det allerede er blevet forsøgt at behandle tumorlidelser ved podning med tumorceller, der er modificeret ved frysning og optøning, frysetørring, trykbehandling eller homogenisering. Også subcellulære fraktioner eller celleekstrakter er blevet anvendt til dette formål.
Der kendes imidlertid hidtil ikke nogen vaccine mod en tumorlidelse.
10 Det har nu ifølge opfindelsen overraskende vist sig, at frysetørrede eller ved en kemisk behandling stabiliserede humane tumorceller, der bærer de membranassocierede antigener CEA (carcinoembryonic antigen) eller NCA (non-specific cross-reacting antigen), kan anvendes som terapeutikum til behandling af tumorlidelser.
Opfindelsen angår således et terapeutikum til behandling af en tumorlidelse, 15 hvilket terapeutikum er ejendommeligt ved, at det indeholder frysetørrede eller ved en kemisk behandling stabiliserede humane tumorceller, der bærer de membran-associerede antigener CEA (carcinoembryonic antigen) eller NCA (non-specific cross-reacting antigen).
En fordel ved et sådant terapeutikum i forhold til anvendelsen af native celler 20 består i, at native celler ikke er stabile, således at de hver gang skal friskfremstilles.
De kan derfor heller ikke standardiseres.
Opfindelsen angår endvidere en fremgangsmåde' til f reTn stil ling * af et terapeutikum til behandling af en tumorlidelse, og denne fremgangsmåde er ejendommelig ved, at humane tumorceller, der bærer de membran-associerede antigener CEA 25 (carcinoembryonic antigen) eller NCA (non-specific crossreacting antigen), frysetørres eller stabiliseres ved en kemisk behandling og oparbejdes til et terapeutikum, idet der eventuelt tilsættes neuraminidase.
Endvidere angår opfindelsen anvendelsen af humane tumorceller, der bærer de membran-associerede antigener CEA (carcinoembryonic antigen) eller NCA (non-30 specific crossreacting antigen), eller de isolerede membran-associerede antigener CEA (carcinoembryonic antigen) eller NCA (non-specific crossreacting antigen) fra humane tumorceller, eventuelt i kombination med et immunresponset forstærkende tilsætningsstof, fortrinsvis neuraminidase, til fremstilling af et terapeutikum til behandling af tumorlidelser.
2 DK 172253 B1
Muligheden for at forstærke et immunrespons ved hjælp af neuraminidase er kendt fra DE offentliggørelsesskrift nr. 2.620.649.
Ved et terapeutikum skal der her forstås et middel, der kan være egnet såvel profylaktisk som til behandling af en manifesteret lidelse.
5 De inden for opfindelsens rammer anvendelige celler udvindes fra tumorer ved hjælp af kendte cellekulturmetoder. Ad mekanisk eller enzymatisk vej ud fra sådanne kulturer udvundne, eventuelt med mitomycin C inaktiverede celler tørres ved lyofiiisering, eller behandles med et for en fagmand som stabiliseringsmiddel for organiske væv kendt middel, fortrinsvis et mono- eller dialdehyd med 1-6 carbonatomer.
10 Til de til den kemiske stabilisering og fiksering særligt egnede midler hører navnlig bifunktionelle forbindelser, altså sådanne, der indeholder to grupper, der reagerer med funktionelle grupper på det biologiske materiale, og altså kan “tværbinde” dette. Der er herved tale om f.eks. dialdehyder, især aliphatiske dialdehyder med 2-8 carbonatomer. Egnede til formålet er imidlertid også monoalkanaler med 1-4 carbona-15 tomer, f.eks. formaldehyd, der kan reagere bifunktionelt, men også bifunktionelle im-munoestere såsom suberomidat, isocyanater eller isothiocyanater.
Som midler, der kan stabilisere biologisk materiale, kan der også anvendes såkaldte garvemidler, f.eks. garvesyre og dennes derivater eller chromsalte. Også sulfosalicylsyre er egnet.
20 I almindelighed foreligger cellerne som celleklumper eller som enkeltceller.
Der kan også anvendes fra tumorcellerne isolerede antigener eller cellebrudstykker. Antigenerne kan udvindes fra tumorvæv fra patienter og frå "humane" tumorer, der vokser i immundeficiente dyr, og anvendes.
De her omhandlede antigener er CEA (carcinoembryonic antigen; J. Exp.
25 Med. 122, 467 (1965)) eller NCA (non-specific crossreacting antigen; J. Immun., Ill, 1926 (1973)), som ved hjælp af immunaffinitetschromatografi kan isoleres fra tumorcellerne. Hertil bindes de i tabel I i DE offentliggørelsesskrift nr. 3.416.774 beskrevne monoklonale antistoffer som rensede proteiner covalent til CNBr-aktiveret Sepharosex 4B, og de af disse monoklonale antistoffer genkendte antigener (CEA, NCA) isoleres 30 fra D-TA-colon-carcinom-celleekstrakter. En egnet fremgangsmåde er beskrevet i Pharmacia-værket “Affinity Chromatography, Principles and Methods”, 12-18 (1979), og sammenfattet på side 15.
DK 172253 B1 3
Et sådant ved hjælp af monoklonale antistoffer udvundet antigen kan anvendes som terapeutikum, f.eks. som virksomt stof i vacciner mod en lidelse, der forårsages af de tumorceller, ud fra hvilke antigenet er blevet udvundet.
Kvalitetskontrollen af et materiale, der skal anvendes som vaccine, gennem-5 føres f.eks. ved typisering med monoklonale antistoffer, eller ved adskillelse af total-celleproteiner ved hjælp af SDS-polyacrylamidgelelektroforese eller isoelektrisk fokusering (1. dimension), kombineret med SDS-polyacrylamidgelelektroforese (2. dimension) med efterfølgende farvning af gelen (sølvfarvning).
Det antigene materiale indgives fortrinsvis i kombination med et tilsætnings-10 stof, navnlig neuraminidase Ofr. DE offentliggørelsesskrift nr. 2.620.649), og intradermalt fortrinsvis ifølge metoden til skakbrætvaccination (Cancer Immunol, and Immuno-ther. 6, 47-58 (1979), specielt side 48).
En sådan vaccine anvendes fortrinsvis mod bestemte stadier af colon-carcinomet (Duke C) samt mod andre tumorer, der bærer antigener eller epitoper, 15 som er til stede i vaccinerne. Sådanne andre tumorer er solide tumorer, f.eks. pancre-as-carcinom, mave-carcinomer, mamma-carcinomer og lunge-carcinomer. Vaccinen kan indgives parenteralt eller oralt. Antigenerne kan opløses i fysiologisk kogsaltopløsning eller suspenderes og derpå indgives, fortrinsvis intradermalt i PBS.
Som kvalitetskriterier for stabiliteten af vaccinens antigensammensætning 20 udføres der to forsøg: a) Terasaki-IIF-bestemmelsen (indirekte immunfluorescens under anvendelse af tumorceller, der vokser i de små brønde i Terasaki-mikrotiterpladenj med monoklonale antistoffer med forskellig specificitet. Ved hjælp af denne test er det muligt at måle ekspressionen af membranantigener på intakte tumorceller, mod hvilke der står 25 en række monoklonale antistoffer til rådighed, jfr. Cancer Detection and Prevention 6, 181-184 (1983). Herved kan der konstateres drastiske forandringer på DE-TA-cellemembranen under kultiveringen; b) Solubilisering af totalcelleproteinerne ved hjælp af et detergent (Hybridoma i, 413-421 (1982)) samt påfølgende SDS-polyacrylamidgelelektroforese kombineret 30 med sølvfarvning (Anal. Biochem. 105, 361-363 (1980)). Kombinationen af disse metoder sikrer, at der ikke indtræder nogen signifikante forandringer i totalproteinindhol-det af DE-TA-cellelinien
De følgende eksempler tjener til nærmere illustration af opfindelsen.
4 DK 172253 B1
Eksempel 1
Carcinom-cellelinien BW X dyrkes i cellekultur som monolag voksende i RPMI-1640-medium (Moore. G.E., Gerner, R.E., Franklin, H.A., Culture of normal human leucocytes, J.A.M.A. 199, 519-524 (1967)) med 10% kalvefosterserum i plastkol-5 ber. De adhærent voksende celler af konfluente kulturer løsnes mekanisk eller ved hjælp af tyrosin, som er opløst i kalvefosterserum-frit RPMI-1640-medium, collagen-massen inaktiveres ved tilsætning af i RPMI-1640 opløst kalvefosterserum, hvorpå cellerne ekstraheres fra vævskulturkolbeme og vaskes 3 gange i en 37°C varm phos-phatpufret kogsaltopløsning (PBS).
10 Ca. 107 celler, der for størstedelens vedkommende foreligger som klumper, inkuberes i 1 time ved 37°C i 1 ml PBS, som indeholder 100 pg mitomycin C. Derpå vaskes de således inaktiverede celler 3 gange med PBS og a) vaskes 3 gange i 0,18 molær ammoniumbicarbonat-puffer, som er indstillet på en pH-værdi på 7,4 med eddikesyre. Et til 107 celler svarende cellesediment optages i 100 μΙ af den samme am-15 moniumbicarbonat-puffer og fryses ved -70°C. Derefter frysetørres det frosne materiale og opbevares ved 4°C i køleskab i en lufttæt lukket lille glasflaske. Det således behandlede cellemateriale kan, optaget i PBS, anvendes til en vaccination af patienter.
Alternativt b) inkuberes der ved 4°C med 0,1% glutaraldehyd i PBS, og det overskydende glutaraldehyd fjernes ved 3 ganges vask med PBS og inkuberes derpå 20 med 2% BSA (Bovine Serum Albumin) i 5 minutter ved 4°C og vaskes 3 gange i PBS.
De således behandlede celler kan opbevares ved 4°C og anvendes til yaccination af patienter.
Alternativt c) inkuberes der ved 25°C i formalin ifølge Lilly (Benno Romeis (1968), side 65, kapitel 266, Oldenburg Verlag, Miinchen) under lejlighedsvis omryst-25 ning natten over. Cellerne (ca. 108) centrifugeres, den ovenstående væske dekanteres (10 minutter ved 800 G), og cellesedimentet suspenderes i 7 ml dobbeltdestilleret vand (= 1 gangs vask). Denne vaskeproces gentages 4 gange med intervaller på 1 time. Dernæst vaskes cellesedimentet 3 gange med intervaller på 1 time i hver gang 7 ml 70%’s ethanol. Derpå vaskes cellesedimentet 3 gange med intervaller på 30 minut-30 ter i hver gang 7 ml 80%’s ethanol. Derpå vaskes cellesedimentet 3 gange med intervaller på 30 minutter i hver gang 7 ml 96%’s ethanol, hvorpå cellesedimentet vaskes 3 gange med intervaller på 30 minutter i hver gang 7 ml 99%’s ethanol. Dernæst vaskes cellesedimentet 3 gange med interaller på 30 minutter i hver gang 7 ml steril PBS og DK 172253 B1 5 opbevares sterilt ved 4°C. De således behandlede celler kan opbevares ved 4°C og anvendes til vaccination af patienter.
Eksempel 2 5 Til isolering af antigener ved hjælp af immunaffinitetschromatografi fra tumor celler bindes rensede monoklonale antistoffer, der reagerer entydigt med antigener på de tumorceller, der skal anvendes som vaccine, covalent til CNBr-aktiveret Sepharose 4B. Der arbejdes ifølge Pharmacia-værket “Affinity Chromatography, Principles and Methods”, 12-18 (1979), specielt side 15. Derpå inkuberes de bærerbundne monoklo-10 nåle antistoffer i 2 timer ved 4°C under lejlighedsvis oprystning med cellesolubilisater. Disse er udvundet ud fra mekanisk fra kulturkolberne frigjorte kulturceller ved hjælp af lysepufferekstraktion (5 g natriumdesoxycholat pr. liter, 0,5 mmol PMSF = phenyl-methylsulfonylfluorid pr. liter, PBS, pH = 8,3), således som beskrevet i Hybridoma 1, 413-421 (1982), specielt på side 414.
15 Den belastede bærer centrifugeres og suspenderes til vaskning i lysepuffer- SDS (20 mM Tris-HC1. pH = 8,0, 1 mmol DMSF pr. liter, 5 g Nonidet P-40 (=octylphenyl-ethylenoxid; Fluka AG) pr. liter, 5 g natriumdesoxycholat pr. liter, 1 mol ethylendiaminotetraacetat pr. liter, 1 g natriumdodecylsulfat (SDS) pr. liter).
Denne vaskeproces gentages 3 gange. Derpå vaskes bæreme 2 gange i 20 lysepuffer uden tilsætning af SDS og derefter 1 gang med en vaskepuffer (2 M Tris-HCI, pH = 8,0, 10 mmol NaCI pr. liter, 0,1 mmol EDTA pr. liter, 0,5 g NP-40 pr. liter).
De således rensede antigener løsnes fra den faste bærer enten ved 5 minutters op-kogning ved 95°C eller ved inkubation 6 mol NH4SCN pr. liter i 30 minutter ved 4°C.
Claims (7)
1. Terapeutikum til behandling af en tumorlidelse, kendetegnet ved, at det indeholder frysetørrede eller ved en kemisk behandling stabiliserede humane tumorceller, der bærer de membran-associerede antigener CEA (carcinoembryonic 5 antigen) eller NCA (non-specific crossreacting antigen).
2. Terapeutikum ifølge krav 1, kendetegnet ved, at det indeholder de nævnte membran-associerede antigener fra humane tumorceller.
3. Terapeutikum ifølge krav 1 eller 2, kendetegnet ved, at det indeholder et immunresponset forstærkende tilsætningsstof, fortrinsvis neuraminidase.
4. Fremgangsmåde til fremstilling af et terapeutikum til behandling af en tu morlidelse, kendetegnet ved, at humane tumorceller, der bærer de membran-associerede antigener CEA (carcinoembryonic antigen) eller NCA (non-specific crossreacting antigen), frysetørres eller stabiliseres ved en kemisk behandling og oparbejdes til et terapeutikum.
5. Fremgangsmåde ifølge krav 4, kendetegnet ved, at isolerede mem bran-associerede antigener fra humane tumorceller oparbejdes til et terapeutikum.
6. Fremgangsmåde ifølge krav 4 eller 5, kendetegnet ved, at der til terapeutiket yderligere sættes et immunresponset forstærkende tilsætningsstof, fortrinsvis neuraminidase.
7. Anvendelse af humane tumorceller, der bærer de membran-associerede antigener CEA (carcinoembryonic antigen) eller NCA (non-specific crossreacting antigen), eller de isolerede membran-associerede antigener CEA (Carcinoembryonic antigen) eller NCA (non-specific crossreacting antigen) fra humane tumorceller, eventuelt i kombination med et immunresponset forstærkende tilsætningsstof, fortrinsvis neu- 25 raminidase, til fremstilling af et terapeutikum til behandling af tumorlidelser.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3432714 | 1984-09-06 | ||
| DE19843432714 DE3432714A1 (de) | 1984-09-06 | 1984-09-06 | Tumortherapeutikum und verfahren zu seiner herstellung |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK402485D0 DK402485D0 (da) | 1985-09-03 |
| DK402485A DK402485A (da) | 1986-03-07 |
| DK172253B1 true DK172253B1 (da) | 1998-02-09 |
Family
ID=6244749
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK402485A DK172253B1 (da) | 1984-09-06 | 1985-09-03 | Tumorterapeutikum, fremgangsmåde til dets fremstilling samt anvendelse af humane tumorceller til fremstilling af et terapeutikum til behandling af tumorlidelser |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0173951B1 (da) |
| JP (1) | JPS6168427A (da) |
| AT (1) | ATE64531T1 (da) |
| CA (1) | CA1277600C (da) |
| DE (2) | DE3432714A1 (da) |
| DK (1) | DK172253B1 (da) |
| ES (1) | ES8704082A1 (da) |
| FI (1) | FI88360C (da) |
| GR (1) | GR852149B (da) |
| IE (1) | IE58638B1 (da) |
| IL (1) | IL76289A (da) |
| PT (1) | PT81093B (da) |
| ZA (1) | ZA856807B (da) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3806565A1 (de) * | 1988-03-01 | 1989-09-14 | Deutsches Krebsforsch | Virusmodifizierte tumorvakzinen fuer die immuntherapie von tumormetastasen |
| AT398900B (de) * | 1991-02-12 | 1995-02-27 | Pekar Rudolf Dr | Vakzine für eine immuntherapie |
| US7070782B1 (en) | 1992-11-05 | 2006-07-04 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Prostate-specific membrane antigen |
| JP4204642B2 (ja) * | 1992-11-05 | 2009-01-07 | スローン − ケタリング・インスティテュート・フォー・キャンサー・リサーチ | 前立腺に特異的な膜抗原 |
| US7105159B1 (en) | 1992-11-05 | 2006-09-12 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Antibodies to prostate-specific membrane antigen |
| US6953668B1 (en) | 1992-11-05 | 2005-10-11 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Prostate-specific membrane antigen |
| US6569432B1 (en) | 1995-02-24 | 2003-05-27 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Prostate-specific membrane antigen and uses thereof |
| DE19506483A1 (de) * | 1995-02-24 | 1996-08-29 | Jens Dr Dr Atzpodien | Lyophilisat-Vakzine |
| DE69635801T2 (de) | 1995-02-24 | 2006-11-02 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Prostataspezifisches membranes antigen und seine anwendungen |
| US20050215472A1 (en) | 2001-10-23 | 2005-09-29 | Psma Development Company, Llc | PSMA formulations and uses thereof |
| WO2003034903A2 (en) | 2001-10-23 | 2003-05-01 | Psma Development Company, L.L.C. | Psma antibodies and protein multimers |
| CN1315536C (zh) * | 2002-09-13 | 2007-05-16 | 李进 | 肿瘤抗原疫苗及其制备方法和疫苗组合物 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4152410A (en) * | 1975-09-03 | 1979-05-01 | Eisai Co., Ltd. | Diagnosis reagent for neoplasm and method for diagnosis of neoplasm |
| DE2643215A1 (de) * | 1976-09-25 | 1978-04-06 | Bayer Ag | Cancerostatisch wirksame praeparationen aus tumorzellen und ein verfahren zu ihrer herstellung |
| ZA776822B (en) * | 1976-11-24 | 1979-06-27 | D Mccollester | Vaccine and method for immunotherapy of neoplastic disease |
| DE2918927A1 (de) * | 1979-05-10 | 1980-11-20 | Hans Prof Dr Limburg | Arzneipraeparat zur behandlung von carcinomen und verfahren zu dessen herstellung |
| US4446122A (en) * | 1979-12-28 | 1984-05-01 | Research Corporation | Purified human prostate antigen |
| US4468457A (en) * | 1981-06-01 | 1984-08-28 | David M. Goldenberg | Method for producing a CSAp tryptic peptide and anti-CSAp antibodies |
| DE3329184A1 (de) * | 1983-08-12 | 1985-02-21 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Monoklonale antikoerper mit spezifitaet fuer membran-assoziierte antigene |
| DE3416774A1 (de) * | 1984-05-07 | 1985-11-14 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Monoklonale antikoerper, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung |
-
1984
- 1984-09-06 DE DE19843432714 patent/DE3432714A1/de not_active Withdrawn
-
1985
- 1985-08-27 DE DE8585110757T patent/DE3583265D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-08-27 EP EP85110757A patent/EP0173951B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-08-27 AT AT85110757T patent/ATE64531T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-09-03 DK DK402485A patent/DK172253B1/da not_active IP Right Cessation
- 1985-09-04 IL IL76289A patent/IL76289A/xx not_active IP Right Cessation
- 1985-09-04 FI FI853389A patent/FI88360C/fi not_active IP Right Cessation
- 1985-09-04 GR GR852149A patent/GR852149B/el unknown
- 1985-09-04 ES ES546701A patent/ES8704082A1/es not_active Expired
- 1985-09-05 ZA ZA856807A patent/ZA856807B/xx unknown
- 1985-09-05 PT PT81093A patent/PT81093B/pt not_active IP Right Cessation
- 1985-09-05 IE IE219185A patent/IE58638B1/en not_active IP Right Cessation
- 1985-09-05 CA CA000490026A patent/CA1277600C/en not_active Expired - Lifetime
- 1985-09-05 JP JP60195000A patent/JPS6168427A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IE58638B1 (en) | 1993-10-20 |
| DK402485A (da) | 1986-03-07 |
| DE3432714A1 (de) | 1986-04-24 |
| DK402485D0 (da) | 1985-09-03 |
| IE852191L (en) | 1986-03-06 |
| ES8704082A1 (es) | 1987-03-16 |
| ES546701A0 (es) | 1987-03-16 |
| CA1277600C (en) | 1990-12-11 |
| FI88360B (fi) | 1993-01-29 |
| EP0173951A3 (en) | 1988-06-08 |
| FI853389A0 (fi) | 1985-09-04 |
| EP0173951B1 (de) | 1991-06-19 |
| ZA856807B (en) | 1986-04-30 |
| GR852149B (da) | 1986-01-03 |
| IL76289A0 (en) | 1986-01-31 |
| PT81093A (de) | 1985-10-01 |
| PT81093B (pt) | 1988-07-01 |
| JPS6168427A (ja) | 1986-04-08 |
| ATE64531T1 (de) | 1991-07-15 |
| IL76289A (en) | 1992-01-15 |
| FI88360C (fi) | 1993-05-10 |
| DE3583265D1 (de) | 1991-07-25 |
| FI853389L (fi) | 1986-03-07 |
| EP0173951A2 (de) | 1986-03-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK172253B1 (da) | Tumorterapeutikum, fremgangsmåde til dets fremstilling samt anvendelse af humane tumorceller til fremstilling af et terapeutikum til behandling af tumorlidelser | |
| Hurlimann et al. | The liver as the site of C-reactive protein formation | |
| Kandutsch et al. | Studies on a substance that promotes tumor homograft survival (the" enhancing substance"): Its distribution and some properties | |
| Šterzl et al. | Effect of very large doses of bacterial antigen on antibody production in newborn rabbits | |
| Nilsson et al. | Immunization of mice and rabbits by intrasplenic deposition of nanogram quantities of protein attached to Sepharose beads or nitrocellulose paper strips | |
| Veit et al. | Immune response suppression by an inhibitor in normal and immune mouse serum | |
| Apuzzo et al. | Immunological aspects of intrinsic glial tumors | |
| Fagraeus et al. | Anti-actin antibodies | |
| Watson et al. | Comparisons of Staphylococcus aureus grown in vitro or in vivo | |
| Burtin et al. | A tumor-associated antigen in human nephroblastomas | |
| US20210100887A1 (en) | Recombinant fusion protein and immunogenic composition | |
| Yoshiike et al. | Epidermolysis bullosa acquisita antigen: relationship between the collagenase-sensitive and-insensitive domains | |
| PT87244B (pt) | Processo para a preparacao de receptores do grupo de receptores pequenos com actividade de ligacao a rhinovirus | |
| Heaney-Kieras et al. | Identification and purification of a M, 75,000 cell surface human melanoma-associated antigen | |
| Nelson et al. | Successful tumour immunotherapy: possible role of antibodies to anti-inflammatory factors produced by neoplasms. | |
| PT80233B (en) | Process for preparing glycosidic linkage related antigen | |
| Burke et al. | The effect of antibody to L-phenylalanine mustard conjugate on malignant cells selectively marked through “early inflammatory-like” vascular permeability | |
| US6294172B1 (en) | Monoclonal antibodies with specificity for membrane-associated antigens | |
| Lewis | The iso-antigenic properties of alcoholic extracts of brain | |
| Comoglio et al. | Plasma‐cell and tumor‐associated membrane antigens of mouse plasmacytoma MOPC‐315 and MOPC‐460 | |
| Fakhri et al. | Studies of the rat immune response to plasmacytoma 5563 in C3H mice | |
| Lee et al. | The use of antifibrin antibodies for the destruction of tumor cells: I. Localization of antifibrin antibodies in a methylcholanthrene-induced sarcoma in guinea pigs | |
| SU820015A1 (ru) | Способ получени вакцин против лейкоза крупного рогатого скота | |
| Kloke et al. | Evidence for a T suppressor cell‐inducing antigenic determinant shared by ADJ‐PC‐5 plasmacytoma and syngeneic BALB/c spleen cells | |
| Stavrou et al. | Chemical modification and antigenicity of glioma cells |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| B1 | Patent granted (law 1993) | ||
| PBP | Patent lapsed |