DK170978B1

DK170978B1 - Derivater af 2-azabicyklo [2,2,2]octan-3-carboxylsyre, fremgangsmåde til deres fremstilling og farmaceutiske midler indeholdende sådanne

Info

Publication number: DK170978B1
Application number: DK472788A
Authority: DK
Inventors: Michel Vincent; Georges Remond; Michel Laubie
Original assignee: Adir
Priority date: 1987-08-28
Filing date: 1988-08-24
Publication date: 1996-04-09
Also published as: FR2619813A1; FR2619813B1; PT88357A; DK472788D0; IE60505B1; AU2159488A; GR3000677T3; OA08754A; ZA886368B; EP0305297A1; ATE52789T1; AU612689B2; PT88357B; EP0305297B1; DK472788A; NZ225943A; IE882599L; ES2031616T3; JPS6471875A; US4959372A

Description

i DK 170978 B1

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte derivater af 2-azabicyklo[2,2,2] octan-3-carboxylsyre, en fremgangsmåde til deres fremstilling og farmaceutiske midler indeholdende sådanne.

5 Nærmere betegnet angår opfindelsen derivater af 2-azabicyklo-[2,2,2]octan-3-carboxylsyre med formlen (I): (S)

r£V00H

CO - CH - NH - CH - CH} - (CH2)4 COOE '-' NH, hvori E betegner en lavere alkylgruppe eller fortrinsvis et hydrogenatom, samt deres additionssalte med en farmaceutisk acceptabel syre 10 eller base.

EP 105.102 Al omhandler 2-azabicyklo[2,2,2]octan-3-carboxyl-syrederivater med ACE-inhiberende virkning, hvori bl.a.

kan være (CI^^Nl^. I eksempel 30 og 31 i skriftet beskrives forbindelser, hvori R-j^ er (CH2)4NH2, dvs. lysylforbindelser.

15 Forbindelserne ifølge disse eksempler indeholder dog en cyklohexylgruppe, hvor forbindelserne ifølge opfindelsen på tilsvarende sted indeholder en phenylgruppe.

Ved undersøgelse af forbindelserne ifølge opfindelsen ved det på side 13 i skriftet beskrevne forsøg udviser disse 2 DK 170978 B1 endvidere en overlegen virkning i forhold til de fra skriftet kendte forbindelser. Således bestemmes en ED5q-værdi på 4 MSf/kg for forbindelsen ifølge eksempel 1 i nærværende beskrivelse, mens den bedste forbindelse ifølge skriftet har en 5 ED5q-værdi på 30 μg/kg.

DK 164.557 B omhandler 2-azabicyklo[5,3,0]decan-3-carboxyl-syrederivater med ACE-inhiberende virkning, hvori bl.a. kan være (CI^^NE^· De foretrukne forbindelser ifølge skriftet er sådanne, hvori R-j^ er methyl, jf. f.eks. forbindelsen 10 med formlen (II) på side 4 i skriftet, som er anvendt til det farmakologiske sammenligningsforsøg. Den bicykliske ring i disse forbindelser, 2-azabicyklo[5,3,0]decan, er endvidere strukturelt set forskellig fra den bicykliske ring i forbindelserne ifølge opfindelsen, som er 2-azabicyklo[2,2,2]octan.

15 NO 172.940 B omhandler bicykliske aminosyrer med ACE-inhiberende virkning, hvori R1 bl.a. kan være De foretrukne forbindelser angives dog at være sådanne, hvori R^ er alkyl, især methyl, jf. bl.a. side 2, linie 22 - 30 i skriftet. Den bicykliske struktur, 2-azabicyklo[3,3,0]oct-7-20 en, hos forbindelserne ifølge skriftet er endvidere strukturelt set forskellig fra den bicykliske struktur, 2-aza-bi-cyklo[2,2,2]octan, hos forbindelserne ifølge opfindelsen.

US patentskrift nr. 4.472.380 og Nature bind 288, 20. november 1980, side 280 - 283, omhandler prolinderivater med ACE-25 inhiberende virkning. Disse forbindelser afviger strukturelt set fra forbindelserne ifølge opfindelsen, idet de indeholder en prolinring i stedet for den bicykliske struktur, som 3 DK 170978 B1 indgår i forbindelserne ifølge opfindelsen.

Fra europæisk patent nr. 0.051.020 kendes forbindelser med den almene formel (II):

« COOH

— CO — CH— (CH,), — X — R, UI> ' ’ Å hvori A betegner et vinylen- eller dimethylenradikal, 5 q er 0 eller 1, R betegner et lavere alkyl radikal, der er i stand til at bære en aminogruppe, X betegner -S- og Ri betegner H, eller alternativt X betegner -NH- og 10 Rj betegner et hydrogenatom eller et radikal med formlen*.

4 DK 170978 B1 -CH-R3 co-r2 5 hvor R2 betegner en hydroxyl- eller lavere alkoxygruppe og R3 især betegner et hydrogenatom, eller et ligekædet eller forgrenet alkyl-, cykloal-kyl-, eller pheny1 a 1ky1rad ika1, der har højst 8 carlo bonatomer, idet udtrykkene alkyl- eller lavere a 1 koxyradika1 er betyder grupper, der har fra 1 til 4 carbonatomer.

De foretrukne derivater ifølge europæisk patent nr. 0.051.020 15 har en methylgruppe som betydning af R (side 2, linie 58).

Derivaterne med formlen (I) er derfor specialtilfælde af derivaterne med formlen (II), hvori R betegner en 4-aminobuty1-gruppe. Derivaterne med formlen (I) er derfor ikke de 20 foretrukne derivater ifølge europæisk patent nr. 0.051.020.

Ifølge opfindelsen er det faktisk opdaget, at derivatet med formlen (I), hvori E betegner et hydrogenatom, har en hæmmende virkning over for enzymet for omdannelse af angiotensin I til 25 angiotensin II, idet størrelsen og varigheden af virkningen er overraskende og udtalt bedre end af de foretrukne derivater ifølge europæisk patent nr. 0.051.020. Når således derivatet med formlen (I), hvori E=H, administreres oralt i en dosis på 1 mg/kg, inducerer det meget hurtigt efter administrationen en 30 meget høj procent mængde hæmning af det omdannende enzym (80% 15 minutter efter administration og i området 100% kun 30 minutter efter administrationen), og et meget højt aktivitetsniveau opretholdes i lang tid efter administrationen, da den procentiske hæmning af det omdannende enzym forbliver 35 større end 70% 6 timer efter administrationen. En sådan dosis administreret oralt af én af forbindelserne ifølge europæisk patent nr. 0.051.020 gør det ikke muligt at opnå en aktivitet, der samtidigt er så intens, hurtig og langvarig.

5 DK 170978 B1

Intensiteten af aktiviteten ved oral administration, som forbindelsen ifølge opfindelsen, hvori E er et hydrogenatom, har, er så meget mere uventet, som denne forbindelse har en disyre-struktur.

5

Forbindelserne, der specielt er gjort til genstand for krav i europæisk patent nr. 0.051.020, hvori X er NH, har faktisk en esterstruktur med hensyn til sidekæden (krav 6 og 7).

10 Di syrestrukturen er i almindelighed ugunstig for god, oral absorption. Derivaterne med di syrestruktur har derfor en terapeutisk aktivitet af lav intensitet efter administration ad denne vej. Disse derivater forbeholdes derfor i almindelighed til intravenøs administration, hvor hastigheden af virkningen 15 er fordelagtig.

Det er endvidere kendt, at forestring af carboxyl gruppen i sidekæden forbedrer den lipofile karakter af molekylet og derfor letter dets absorption efter oral administration. Denne 20 estergruppe må imidlertid så hydrolyseres i det levende 1 egerne af specifikke enzymer for at være i stand til at frigøre disyren, som alene har terapeutisk effektivitet. Dette forklarer hvorfor carboxyl syregruppen i de kendte inhibitorer for om-dannelsesenzymet - og specielt i derivaterne ifølge patent nr. 25 0.051.020 - beregnet til oral administration almindeligvis er forestret.

Denne esterstruktur har alligevel en ulempe: den tid, der kræves af legemet til at hydrolysere estergruppen af sidekæden 30 til syre, forhaler begyndelsen af en intens aktivitet.

Med forbindelsen ifølge opfindelsen med formlen I, hvor E er et hydrogenatom, er ulemperne ved di syrestrukturen og også ved ester-strukturen forsvundet og giver plads for fordelen ved begge 35 strukturer. Derivatet ifølge opfindelsen, hvori E * H, absorberes faktisk særlig godt efter oral administration, således som det påvises ved intensiteten af virkningen efter administration ad denne vej. Desuden har denne forbindelse bevaret fordelene ved di syrestrukturen, for meget kort tid efter dens administration udviser den en intens aktivitet (80% hæmni ng af omdannelsesenzymet kun 15 minutter efter administrationen).

6 DK 170978 B1 5 Som følge af disse faktorer adskiller forbindelsen ifølge opfindelsen med formlen I, hvori E er et hydrogenatcm, sig meget klart fra forbindelserne i den kendte teknik med hensyn til brugen i terapien.

10 Opfindelsen angår imidlertid også forb inde1 serne. med formlen I, hvori E er en lavere alkylgruppe, for i kraft af det foregående er disse forbindelser prolaegemidler af forbindelsen, hvori E er et hydrogenatom.

15 Opfindelsen angår også additionssaltene af forbindelserne med formlen (I) fremkommet med en terapeutisk anvendelig uorganisk eller organisk base eller syre.

Blandt syrer, der kan sættes til forbindelserne med formlen 20 (I) til dannelse af et additionssalt, kan som eksempel nævnes saltsyre, svovlsyre, phosphorsyre, vinsyre, æblesyre, malein-syre, fumarsyre, oxalsyre, methansulfonsyre, ehtansulfonsyre, kamfersyre og citronsyre og lignende.

25 Som baser, der er i stand til at saltdanne forbindelserne med formlen (I), kan anvendes natrium-, kalium-, calcium- eller aluminiumhydroxider, alkalimetal- eller jordalkalimetalcar-bonater eller organiske baser, såsom triethy1amin, benzylamin, di ethano 1amin, tert.-buty 1 am in, dicyk1ohexy1 am in og arginin og 30 1 i gnende.

Forbindelserne med formlen (I) og også deres salte har fordelagtige farmakologiske egenskaber. De udøver især en hæmmende virkning over for visse enzymer, såsom carboxypolypep-35 tidaser, encephali naser eller kininase II. De hæmmer især omdannelsen af decapeptidet angiotensin I til octapeptidet angiotensin II, som i nogle tilfælde er ansvarlig for arteriel hypertension, ved at virke på omdannelsesenzymet.

7 DK 170978 B1

Brugen af disse forbindelser i terapien gør det derfor muligt at reducere eller endog fjerne aktiviteten af disse enzymer, der er ansvarlige for hypertensiv sygdom eller hjerteinsufficiens. Virkningen af kininase II resulterer i en stigning i 5 cirkulerende bradykinin og også et fald i det arterielle blodtryk.

Forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse med formlen I er ikke blot nyttige til behandling af hypertension men også anvendelige 10 til behandling af akut og kronisk hjer te insuffi c iens, til behandling af sekundær hypera1dosteronisme, til behandling af primær og sekundær pulmonær hypertension, til glaucoma, til renal insufficiens, til renal vaskulær hypertension og til behandling af perifere vaskulære forstyrrelser, såsom migræne, 15 Raynaud's sygdom, atherosc1 erose, thrombose, arteritis i de nedre ekstremiteter, cirrhose og ascites. Endvidere har forbindelserne ifølge opfindelsen med formlen I også en hæmmende virkning over for encephalinase og kan derfor være anvendelige som et analgetikum eller antiinflammatorisk middel.

20

Opfindelsen angår også farmaceutiske midler i ndehoIdende som aktiv forbindelse en forbindelse med den almene formel (I) eller ét af dens additionssalte med en uorganisk eller organisk base eller syre i kombination med ét eller flere ugiftige indif-25 ferente hjælpestoffer, som er egnede farmaceutisk, og/eller et bindemiddel, et aromati ser ingsmidde1, en sprængmidde1, et sødemiddel, et smøremiddel eller alternativt en flydende bærer, der er egnet til intravenøs administration, såsom pyro-genfrit sterilt vand.

30

Blandt de farmaceutiske midler ifølge opfindelsen kan mere specielt nævnes de, der er egnede til oral, parenteral, okular, perkutan eller transkutan, nasal, rectal, perlingual eller respiratorisk administration, og især injicerbare 35 præparater, aerosoler, øjen- eller næsedråber, tabletter, sublinguale tabletter, gelatinekapsler, kapsler, piller, sublinguale præparater, suppositorier, cremer, salver og geler og 1 i gnende.

8 DK 170978 B1

De farmaceutiske midler ifølge opfindelsen kan desuden indeholde en anden aktiv forbindelse, der har synergistisk eller komplementær virkning.

5 Blandt de sidstnævnte aktive forbindelser kan nævnes et diu-retikum og især et saluretikum som for eksempel et thiazid, et dihydrothiazid, et chlorsulfamid, en dihydrobenzofuran-2-carboxylsyre eller et phenoxyeddikesyrederivat. Eksempler på sådanne forbindelser er N - ( 3 '-ch 1 o-r - 4 ' - s u 1 f amoy 1 be nz am i do ) - 2 -10 methy1 indolin, ethacrynsyre og furosemid.

Det er også muligt at tilsætte et a-adrenolytisk stof, en β-blokker, et calciumantagonist eller en vaskulær dopaminerg i sk receptoragoni st.

15

En passende dosis kan variere meget afhængende af patientens alder og vækst, alvoren af den terapeutiske indikation og også administrationsvejen. Den foretrukne administrationsvej er den bukkale vej, men den intravenøse vej er også fuldstændigt 20 egnet til behandling af hypertension. Generelt vil enhedsdosen fortrinsvis ligge mellem 0,05 og 20 mg.

Opfindelsen angår også én fremgangsmåde til fremstilling af forbindelserne med formlen (I), hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at et deri-25 vat med formlen (III): ^COOCH^C.H, vLnn (S) (S) (III) ^ CO-CH-NH-CH-CHa-CHa-^QJ^

(CH,)4 COOE

i NH -COOCHjCiH» hvori E’ betegner en lavere alkyl eller benzyl gruppe, under-35 kastes hydrogenering i nærværelse af en katalysator, såsom pa 11 ad ini seret trækul, til dannelse af: - forbindelsen med formlen (I), hvori E = H, i det tilfælde hvor E’ betegner en benzyl gruppe, 9 DK 170978 B1 en forbindelse med formlen (I), hvori E er en lavere alkylgruppe, i det tilfælde hvor E’ betegner en lavere alkylgruppe, hvilken forbindelse eventuelt kan underkastes alkalisk hydrolyse til dannelse af forbindelsen med formlen ^ (I), hvori E = H, hvorpå om ønsket den derved fremkomne forbindelse med formlen (I) saltdannes med en terapeutisk anvendelig uorganisk eller organisk syre eller base, og idet forbindelsen med formlen (III) selv er dannet: 10 - enten ved at underkaste et 2-oxo-4-phenylbutyrat med formlen (IV) : o=c-ch,-ch ,m 15 cooe' hvor E1 har samme betydning som i formel (III), reduktiv aminering i nærværelse af et blandet a 1ka1 i met a 1hydrid eller et blandet a 1ka1 i meta 1cyanohydrid, såsom natriumcyanoborhydrid, 20 med et lys i nderivat, hvori e-ami no- og carboxyl grupper er beskyttet med passende grupper, såsom tert.-butyl-(S)-Ne-ben-zy1oxycarbony 11ys i nat med formlen (V): CH, 25 1 *S) CH3-C-OOCH-NH, i li i CH3 O (CH2)4 (V) i

NH

30 COO - til dannelse af et derivat med formlen (VI): 10 DK 170978 B1

CH

i 3 ($) tR.S) /^λ CH3-C-O-C-CH-NH-CH- CH,- CH, \{^J) 1 il 1 · , >-/ CH3 O (CH,)4 COOE (VI) 5 i

NH

co-o-ch,-^3) 10 hvori E’ har samme betydning som i formel (III), idet de (S,R)- og (S,S)-i somere deraf isoleres ved sædvanlig adskillelsesteknik, såsom kromatografi på en s i 1 i c iumdioxidsøj1e, idet den derved fremkomne (S,S)-isomer befries for carboxyl-15 syrebeskyttelsesgruppen i surt medium til dannelse af et derivat med formlen (VII): (S) (s> HO-C-CH- NH-CH- CH, - CH,-^Q^ 20 O CH,)4 COOE' '—' NH <VII) co-o-ch,/Q) 25 hvori E' har samme betydning som i formel (III), som derpå kondenseres med en (3S )-2-azabicyklo[2,2,2]-octan-3-carboxy1 -syreester, og fortrinsvis med benzy1 es te ren med formlen (VIII) : COOCHjCeH5 (VIII) (ζρ i nærværelse af et peptidkoblingsmiddel, såsom dicyklo-hexyl-35 carbodiimid i nærværelse af hydroxybenzotriazol, til dannelse af et derivat med formlen (III), DK 170978 B1 n - eller ved at koble en ( 3S)-2-azabicyk1 o[2,2,2]octan-3-carboxyl syreester og fortrinsvis benzyl esteren med den ovennævnte formel (VIII) med et lys i nderivat, hvori o- og e-aminogrupper er beskyttet med passende grupper, såsom (S)-Na-tert.-butoxy-5 carbonyl-Ne-benzyloxycarbonyllysin med formlen (IX): , * ch3 (S) i 3 HOOC-CH-NH - COO-C-CH3 < IX> i i (CH2)4 ch3 10 , NH - COOCHjCeHj i nærværelse af et peptidkoblingsmiddel, såsom dicyklo-hexyl-carbodiimid i nærværelse af hydroxybenzotriazol til dannelse 15 af et derivat med formlen (X): C-CH-NH-COO“ C-CH3 (x)

2 0 “i I

O <CH,)4 ch3 nh-cooch3c,h, der derefter befries for α-aminobeskyttelsesgruppen i surt 25 medium til dannelse af et derivat med formlen (XI): COOCHjC.H, \uj\^ lSI (XI) 30 c-ch-nh2 il i O <CH2) i NH - COOCHaCtHt som underkastes reduktiv aminering i nærværelse af et blandet 35 alkalimetalhydrid eller blandet a 1ka1 imeta1cyanohydrid, såsom natriumcyanoborhydrid, med et derivat med formlen (IV) til dannelse af derivatet med formlen (III) i racemisk form (III, R, S) : 12 DK 170978 B1 xfs, COOCH.C.H, iZfi'5» <S> (R.S) C-CH-NH-CH-CHjCHj-i^^ ..... r, S) 5 O (CH2)4 cooe' \—/ NH - COOCHaC,H, hvori E’ har samme betydning som i formel (III), hvis (S,S,S)-10 isomer isoleres ved sædvanlig adskillelsesteknik, såsom kromatografi på en siliciumdi oxidsøjle.

Opfindelsen angår også de hidtil ukendte forbindelser med formlen (III) og deres racenet med formlen (III, R, S) samt deres additionssalte med en orga-15 nisk eller uorganisk syre, hvilke forbindelser er nyttige til fremstilling af forbindelserne med formlen (I). .

De følgende eksempler illustrerer opfindelsen, 20

Udgangsstofferne er kendt fra litteraturen.

Eksempel 1 25 {3S)-2 -{{S)-N-[(S)-l-carboxy-3-phenylpropyl]lysyl}-3-carboxy- 2-azabicyklo[2,2,2]octan-hydroch1 or id

Trin A: 30 Tert.-butyl-(S)-Na-[(S)-l-carbethoxy-3-phenylpropyl]-N€-ben-zyloxycarbonyllysinat 10 g (0,0268 mol) tert.-buty1-N€-benzy1oxycarbony 11 ysinat-hy-drochlorid opløses i 150 cn»3 vandfri ethanol. 2,71 g (0,0268 35 mol) triethylamin, 20,6 g (0,1 mol) ethyl-2-oxo-4-pheny1buty-rat og 30 g 4 A molekylarsigte tilsættes. Blandingen omrøres i en time ved 20eC. En opløsning af 1,68 g (0,0268 mol) natrium-cyanoborhydrid i 20 cm3 ethanol tilsættes så i løbet af 4 13 DK 170978 B1 timer, hvorefter omrøring fortsættes i 18 timer ved 20eC. Blandingen filtreres, bringes til tørhed og remanensen genopløses i 200 cm3 ethylacetat og opløsningen vaskes så to gange med 100 cm3 af en 10% vandig citronsyreopløsning og 5 derpå med vand, indtil vaskevæskerne er neutrale. Blandingen tørres over magnesiumsulfat og inddampes. Der opsamles 28,7 g af en olie og denne renses ved kromatografi på silicagel (eluent: methy1enchlor id/acetone 95:5). Efter fjernelse af urenheder og derpå (S,R)-isomeren fås 4,1 g tert.-buty 1 -(S)-10 Na-[(S)-l-carbethoxy-3-phenylpropyl]-Ne-benzy1oxycarbony1 lys i - nat, som anvendes uden yderligere behandling i følgende trin.

Tyndt 1agskromatograf i: bærer: Si 60 F 254 opløsningsmiddel: CH2CI2: 95 15 acetone: 5

Rf: 0,30 [(S,R)- i somer Rf: 0,40].

Trin B: 20 (S)-Na-[(S)-l-carbethoxy-3-phenylpropyl]-Nc-benzy1oxycarbony1- lysinhydrochlorid 4,1 g tert.-butyl-(S)-Na-[(s)-l-carbethoxy-3-phenylpropyl]-Ne-benzyloxycarbonyllysi nat, fremstillet i foregående trin, 25 opløses i 100 cm3 af en 4 N saltsyreopløsning i dioxan og opløsningen henstilles i 24 timer ved 20eC. Den bringes til tørhed og størknes i ether. Efter tørring i eksiccator fås 3,8 g (S)-Na-[(S)-l-carbethoxy-3-phenylpropyl]-Ne-benzyloxycarbo-nyllysinhydrochlorid.

30

Procentisk sammensætning:

Beregnet: C: 61,59 H: 6,96 N: 5,52 Cl: 6,99 fundet: C: 61,34 H: 7,26 N: 5,63 Cl: 6,93 35

Infrarød spektrograf i: vs NH: 3360 cm-1 vs CO: 1750 og 1690 cm-1.

(3S)-2-{(S)-Na-[(S)-l-carbethoxy-3-phenylpropyl]-Ne-benzyloxy- carbonyllysyl}-3-benzyloxycarbonyl-2-azabicyklo[2,2,2]octan 14 DK 170978 B1

Trin C: 5 (S)-Na-[(s)-l-carbethoxy-3-phenylpropyl]-Ne-benzyloxycarbony1 -lysinhydrochlorid, fremkommet i foregående trin, kobles ved teknikken ifølge W. Konig og R. Geiger - Chem. Ber. (1970), 103, 788 med (3S)-2-azabicyklo[2,2,2]-octan-3-carboxy1syreben-10 zylester beskrevet i europæisk patent nr. 0.051.020.

Den derved fremkomne (3S)-2-{(S)-Na-[(S)-l-carbethoxy-3-phe-ny1 propyl]-N^-benzyloxycarbonyl1ysy1}-3-benzyloxycarbony1-2-azabi cykl o[2,2,2]octan, renset ved kromatografi på silicagel 15 (eluent: ethylacetat/cyklohexan 50:50), anvendes uden yderli gere behandling i følgende trin.

Trin D: 20 (3S)-2-{(S)-Na-[(S)-l-carbethoxy-3-phenylpropyl]lysy1}-3-car- boxy-2-azabicyklo[2,2,2]octandihydrochlorid 2,8 g (3S)-2-{(S)-Na-[(S)-1-carbethoxy-3-pheny1propy1]-Ne-ben-zyloxycarbony1 lysy 1}-3-benzy1oxycarbony1-2-azabicyk1 o[2,2,2]-25 octan fremkommet i foregående trin opløses i 100 cm3 ethanol, 0,2 g pa 11 ad ini seret trækul (10% palladium) tilsættes og blandingen hydrogeneres i 18 timer ved 20eC under et hydrogentryk på 3 kg/cm2.

30 Katalysatoren frafi 1treres, 10 cm3 af en 4 N saltsyreopløsning i ether tilsættes og blandingen bringes til tørhed. Remanensen optages i ethylacetat og blandingen filtreres og tørres i ek-siccator. Der fås 1,75 g (3S)-2-{ (S )-N<*-[ (S ) - l-carbethoxy-3-phenylpropyl]-lysyl}-3-carboxy-2-azabicyklo[2,2,2]octandihy-35 drochlorid (udbytte: 80%).

Procentisk sammensætning: 15 DK 170978 B1 beregnet: C: 57,14 H: 7,56 N: 7,69 Cl: 12,97 fundet: C: 56,76 H: 7,31 N: 7,76 Cl: 12,97

Spektralundersøgelse: 5

Infrarød spektrometri vCO: 1650 og 1740 cm'l Massespektrometri : DCI-spektrum (N H 3) 10 M/Z : 474 : CM ♦ Η ]Φ 456 : CM * Η - H2O]®

COOH

15

Trin E : (3S)-2-{(S)-Na-[(S)-1-carboxy-3-phenylpropyl]lysylj-3-carboxy-2-azabicyklo[2,2,2]octandihydrochlorid 20 1,75 g (2,75 mmol) (3S)-2-{(S)-Na-[(S)-l-carbethoxy-3-phenyl-propyl]lysyl}-3-carboxy-2-azabicyklo[2,2,2]octandihydrochlo-rid, fremstillet i foregående trin, opløses i 120 cm3 (1,2 mmol) 0,1 N natriumhydroxid. Efter 48 timer ved stuetemperatur 25 neutraliseres opløsningen med 12 cm3 1 N saltsyre og bringes så til tørhed. Remanensen genopløses i 30 cm3 isopropanol og det uopløselige natriumchlorid fjernes ved filtrering. Blandingen bringes til tørhed og operationen gentages. Remanensen optages i vand og blandingen filtreres på et 0,22 μιη milli-30 porefilter og 1 yofi 1 i seres. Der fås 1,2 g ( 3S)-2-{(S)-Na[(S)-1-carboxy-3-phenylpropyl]lysylJ-3-carboxy-2-azabicyklo[2,2, 2]octandihydrochlorid.

Drejningsevne: [a]g21° c = 18,2° (c: 1% pyridin) 35

Spektralundersøgelse:

Infrarød spektrometri: vCO syre 1710 cm"* vCO 1640 cm-1 16 DK 170978 B1

Massespektrometri:

DC I

M/Z: 446 : [M + H] + 5 428:[M+H-H20]+ 291 : 0 - C - CH - NH - CH - CH2 - CH2~A^)/ <ch2)4 COOH \—/

N H 2 COOH

10 ,56 · Γ^Γ 15 ^

Kernemagnetisk resonansspektrometri:

Opløsningsmiddel D20 (T = 301°K) δ1H i ppm TMS (extern reference)

20 ,/f^COOH

i Urr* M. >.*· Mi M CO - CH -NH-CH-CH,-CH,-((J V·* «4 CH, COOH __ 2 5 I 7.47 CH, i '·’· CH, i w CH, i 30 NH, * kompleks: 1,91 til 1,64 ppm δ13 i ppm TMS (extern reference) 35 DK 170978 B1 17

Ml r£sTc°°" □ »a.2 m aa.· aa* l/^-v\

CO-CH-NH-CH-CHa-CHa-^(JV»»J

5 a*· CH, COOH - I · lav* a*.i CH, ,31>* i **.· CH, i lo 4V* CH, * 176,0 ; 173,7 ; 169,1 NH, 4 23'2 ; 22'2 7 □ 28,2 ; 26,3.

Eksempel 2: 15 (3S)-2-{(S)-N-[(S)-1-ethoxycarbony1-3-phenyl propyl]lysyl}-3-carboxy-2-azabicyklo[2,2,2]octandihydrochlorid

Trin A: 20 (3S)-2-[(S)-Na-tert.-butoxycarbonyl-Ne-benzyloxycarbonylly- syl)-3-benzyloxycarbonyl-2-azabicyklo[2,2,2]octan (S)-Na-tert.-butoxycarbonyl-N6-benzyloxycarbonyllysin kobles 25 ved teknikken ifølge W. Konig og R. Geiger - Chem. Ber.

(1970), 103, 788 med (3S)-2-azabicyk1 o[2,2,2 ] octan-3-carboxy1 -syrebenzylester beskrevet i europæisk patent nr. 0.051.020.

Den fremkomne (3S)-2-[(S)-Na-tert.-butoxycarbony1-N€-benzy1-30 oxycarbonyllysyl]-3-benzyloxycarbonyl-2-azabicyklo[2,2,2]octan renset ved kromatografi på silicagel anvendes uden yderligere behandling i følgende trin.

Trin B: (3S)-2-[(S)-N^-benzyloxycarbonyllysy 1]-3-benzyloxycarbony 1-2-azabicyklo[2,2,2]octan 35 18 DK 170978 B1

Ved at anvende metoden til befrielse for beskyttelse med trif1uoreddikesyre i vandfri methylench1 or id beskrevet af B. Gutte og K.B. Merrifield (J. Am. Chem. Soc. 1969, 91, 501) fås et kvantitativt udbytte af (3S)-2-[(S)-N€-benzyloxycarbony1ly-5 syl]-3-benzyloxycarbonyl-2-azabi cykl o[2,2,2]octan af (3 S)-2 - [(S)-Na-tert.-butoxycarbonyl-Ne-benzyloxycarbonyllysyl]-3-ben-zy1oxycarbony1-2-azabicyk1 o[2,2,2]octan fremstillet i foregående trin.

10 Tr i n C: (3S)-2-{(S)-Na-[(S)-l-carbethoxy-3-phenylpropyl]-Ne-benzyloxy- carbonynysylj-3-benzyloxycarbonyl-2-azabicyklo[2,2,2]octan 15 Den i foregående trin fremstillede (3S)-2-[(S)-N€-benzyloxy- carbonyllysyl]-3-benzyloxycarbonyl-2-azabicyklo[2,2,2]octan underkastes reduktiv aminering i nærværelse af natriumcyano-borhydrid med ethyl-2-oxo-4-pheny1butyrat til dannelse, efter rensning på silicagel og fjernelse af (S, S, R)-isomeren, af 20 (3S)-2-{(S)-Na-[(S)-l-carbethoxy-3-phenylpropyl]-Ne-benzyloxy- carbonyllysyl}-3-benzyloxycarbonyl-2-azabicyklo[2,2,2]octan, der anvendes uden yderligere behandling i de følgende trin.

Trin D: 25 (3S)-2-{(S)-N<*-[(S)-l-carbethoxy-3-phenylpropyl]lysyl}-3-car- boxy-2-azabicyklo[2,2,2]octandihydrochlorid

Ved at gå ud fra produktet fremkommet i foregående trin og 30 arbejde på samme måde som beskrevet i eksempel 1, trin D fås (3S)-2-{(S)-Na-[(S)-l-carbethoxy-3-phenylpropyl]lysyl‘)-3-car-boxy-2-azabicyklo[2,2,2]octandihydrochlorid.

Eksempel 3:

Farmakologisk undersøgelse af forbindelsen ifølge opfindelsen, hvori E = H

35 19 DK 170978 B1

Forbindelsen ifølge opfindelsen, hvori E = H, blev afprøvet ved oral administration på ikke-anaestetiserede hunde.

Hundenes arterielle blodtryk blev målt ved hjælp af en tryk-5 måler ("Statham P23 Db") efter kateter i ser ing af aorta via lårarterien. Registreringen udføres med et registreringsapparat ("Brush 400").

Angiotensin I og angiotensin II injiceres i dyrene intravenøst 10 i doser på 0,5 og 0,10 γ/kg. En kurve over dosis og aktivitet fastlægges for hvert af disse hormoner. Forbindelsen ifølge opfindelsen, hvori E = H, administreres så oralt i en dosis på 1 mg/kg. En anden kurve over dosis og aktivitet fastlægges så for angiotensin I og angiotensin II efter administration af 15 forsøgsproduktet.

Det viser sig, at forbindelsen ifølge opfindelsen, hvori E = H, har en hurtig, intens og forlænget aktivitet i en dosis på 1 mg/kg, hvilket er tilfældet, når den administreres oralt, og 20 hvilket adskiller den klart fra de kendte forbindelser. Et kvarter efter den orale administration af 1 mg/kg af forbindelsen ifølge opfindelsen i hunde er den procentiske hæmning af omdannelsesenzymet 80%. Den er i området 100% 30 minutter efter administrationen og forbliver større end 70% 6 timer 25 efter administrationen.

I sammenligning med derivaterne ifølge europæisk patent nr.

0.051.020 er det klart, at resultatet er overraskende, når man ser på den hastighed, hvormed en intens aktivitet opnås efter 30 den orale administration af en dosis på 1 mg/kg, og på den periode, hvori aktiviteten opretholdes: en hastighed af virkningen af denne art er kun blevet opnået med derivaterne ifølge europæisk patent nr. 0.051.020 efter intravenøs administration og det var muligt at iagttage en sammenlignelig 35 varighed af virkningen kun efter administration af en meget større dosis. Den nye struktur af forbindelsen ifølge opfindelsen bibringer derfor meget fordelagtig aktivitet på et niveau, der er overraskende sammenlignet med de kendte forbindelser.

Claims

10 Magnesiumstearat : 3 g Talk: 3 g

1. Derivater af 2-azabicyklo[2,2,2]octan-3-carboxylsyre med 15 formlen (I): (S) ^7\C°°h "xt*Nx (s> (s> (i> CO-CH-NH- CH-CH2-CH2-OJ> (Ch2)4 cooe nh2 hvori E er et hydrogenatom eller en lavere alkylgruppe, samt: deres additionssalte med en farmaceutisk acceptabel base eller syre.

2. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at 20 E betegner et hydrogenatom. DK 170978 B1

3. Forbindelse ifølge krav 1, kendetegnet ved, at E betegner en ethylgruppe.

4. Fremgangsmåde til fremstilling af forbindelserne ifølge krav 1 med formlen (I), kendetegnet ved, at et 5 derivat med formlen (III): ^^COOCH,C,H, L ]<s> nni (S) (s) /o\ CO-CH- NH-CH - CHa- CH3 ) (CH,)4 cooe i NH -COOCH3C*h* hvori E' betegner en lavere alkyl- eller benzylgruppe, underkastes hydrogenering i nærværelse af en katalysator til dannelse af: forbindelsen med formlen (I), hvori E = H, i det tilfælde 10 hvor E' betegner en benzylgruppe, en forbindelse med formlen (I), hvori E er en lavere alkylgruppe, i det tilfælde hvor E' betegner en lavere alkyl-gruppe, hvilken forbindelse om ønsket kan underkastes alkalisk hydrolyse til dannelse af forbindelsen med formlen (I) , 15 hvori E = H, hvorpå om ønsket forbindelsen med formlen (I) , som derved fremkommer, saltdannes med en terapeutisk anvendelig uorganisk eller organisk base eller syre, og idet forbindelsen med formlen (III) selv er dannet: 20. enten ved at underkaste et 2-oxo-4-phenylbutyrat med formlen (IV): DK 170978 B1 (IV) COOE' hvor E' har samme betydning som i formel (III), reduktiv aminering i nærværelse af et blandet alkalimetalhydrid eller et blandet alkalimetalcyanohydrid med et lysinderivat, hvori e-amino- og carboxylgrupperne er 5 beskyttet med passende grupper, fortrinsvis tert.-butyl-(S)-Ne-benzyloxycarbonyllysinat med formlen (V) : ?H> (S) CHj-C-O-C-CH- NH, » * · (v) ch3. o <ch2)4 i NH COO - CHa/Q) til dannelse af et derivat med formlen (VI) : CHj . (S) (R,S> ch3-c-o-c-ch-nih-ch- ch,- ch, “iX)) ch, o (ch,)4 cooe (vi) NH co-o.ch2^0) hvori E' har samme betydning som i formel (III), hvis (S,R)-og (S,S)-isomere isoleres ved sædvanlig adskillelsesteknik, 10 og den derved fremkomne (S,S)-isomer befries for carboxyl- DK 170978 B1 syrebeskyttelsesgruppen i surt medium til dannelse af et derivat med formlen (VII): (5) (S) /—Λ HO-C-CH- NH-CH- CH2 - O CH2)4 COOE' '-' 1 (VII) co-o-c hvori E' har samme betydning som i formel (III) , som derpå kondenseres med en (3S)-2-azabicyklo[2,2,2]-octan-3-carboxyl-5 syreester, og fortrinsvis med benzylesteren med formlen (VIII): COOCH2CeHe (VIII) c i nærværelse af et peptidkoblingsmiddel til dannelse af et derivat med formlen (III), eller ved kobling af en (3S)-2-azabicyklo[2,2,2)octan-3-10 carboxylsyreester og fortrinsvis benzylesteren med den ovennævnte formel (VIII) med et lysinderivat, hvori a- og e-aminogrupperne er beskyttet med passende grupper, fortrinsvis (S)-Na-tert.-butoxycarbonyl-Ne-benzyloxycarbonyllysin med formlen (IX) : CH, (S) « HOOC - CH - NH - COO - C - CH3 i i (IX) (ch2)4 ch3 i NH - COOCHjC,He DK 170978 Bl i nærværelse af et peptidkoblingsmiddel til dannelse af et derivat med formlen (X): fZ^COOCH.C.H, CH (S) » C-CH-NH-COO “ C-CH, (X) il i i 0 (CH3)4 ch3 i NH - COOCHjC.H, der derefter befries for a-aminobeskyttelsesgruppen i surt medium til dannelse af et derivat med formlen (XI): COOCNjC-H, \L··7i«s> (S> (X,) C-CH - NHa il i O (CHj) i NH - COOCH,CeHe 5 som underkastes reduktiv aminering i nærværelse af et blandet alkalimetalhydrid eller et blandet alkalimetalcyanohydrid med et derivat med formlen (IV) til dannelse af derivatet med formlen (III) i racemisk form (III, R, S) : COOCH,CeH, ... ..... Λ=Λ C-CH-NH-CH-CH2CH2-(( )) , ti i i 22 (HI/ R, S) O (Ch3)4 cooe' NH - COOCH2C4H, hvori E' har samme betydning som i formel (III) , hvis 10 (S,S,S)-isomer isoleres ved sædvanlig adskillelsesteknik. DK 170978 B1

5. Derivater af 2-azabicyklo[2,2,2]octan-3-carboxylsyre med de i krav 4 definerede formler (III) eller (III, RS) samt deres additionssalte med en uorganisk eller organisk syre, der er nyttige til fremstilling af forbindelserne ifølge krav 5 1.

6. Farmaceutisk middel indeholdende som aktiv forbindelse mindst én forbindelse ifølge krav 1 - 3 i kombination med ét eller flere farmaceutisk acceptable ugiftige, indifferente bærestoffer eller hjælpestoffer.

7. Farmaceutisk middel indeholdende som aktiv forbindelse forbindelsen ifølge krav 2 i kombination med ét eller flere farmaceutisk acceptable ugiftige, indifferente bærestoffer eller hjælpestoffer.

8. Farmaceutisk middel ifølge krav 6 og 7, kendeteg-15 net ved, at det desuden indeholder én eller flere andre aktive forbindelser valgt blandt et diuretikum, et a-adreno-lytisk middel, en jS-blokker, en calciumantagonist og en vaskulær dopaminergisk receptoragonist. 20