DK168667B1 - Monoklonale antistoffer, der genkender et kerneprotein fra det lymfadenopatiassocierede virus (LAV), hybridomer, der udskiller disse antistoffer, og fremgangsmåde til påvisning eller rensning af kerneproteinet - Google Patents

Monoklonale antistoffer, der genkender et kerneprotein fra det lymfadenopatiassocierede virus (LAV), hybridomer, der udskiller disse antistoffer, og fremgangsmåde til påvisning eller rensning af kerneproteinet Download PDF

Info

Publication number
DK168667B1
DK168667B1 DK450986A DK450986A DK168667B1 DK 168667 B1 DK168667 B1 DK 168667B1 DK 450986 A DK450986 A DK 450986A DK 450986 A DK450986 A DK 450986A DK 168667 B1 DK168667 B1 DK 168667B1
Authority
DK
Denmark
Prior art keywords
lav
monoclonal antibodies
polypeptide
protein
hybridomas
Prior art date
Application number
DK450986A
Other languages
English (en)
Other versions
DK450986A (da
DK450986D0 (da
Inventor
Jacques Chassagne
Pierre Verrelle
David Klatzmann
Luc Montagnier
Claude Dionet
Jean-Claude Gluckman
Original Assignee
Centre Nat Rech Scient
Pasteur Institut
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=10573161&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=DK168667(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Centre Nat Rech Scient, Pasteur Institut filed Critical Centre Nat Rech Scient
Publication of DK450986A publication Critical patent/DK450986A/da
Publication of DK450986D0 publication Critical patent/DK450986D0/da
Application granted granted Critical
Publication of DK168667B1 publication Critical patent/DK168667B1/da

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
    • C07K16/1036—Retroviridae, e.g. leukemia viruses
    • C07K16/1045—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV
    • C07K16/1054—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV gag-pol, e.g. p17, p24
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
    • C12N5/16—Animal cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C12Q1/701—Specific hybridization probes
    • C12Q1/702—Specific hybridization probes for retroviruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C12Q1/701—Specific hybridization probes
    • C12Q1/702—Specific hybridization probes for retroviruses
    • C12Q1/703—Viruses associated with AIDS
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/531—Production of immunochemical test materials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
    • C12N2740/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
    • C12N2740/00011—Details
    • C12N2740/10011—Retroviridae
    • C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
    • C12N2740/16211—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV gagpol
    • C12N2740/16222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Description

i DK 168667 B1
Den foreliggende opfindelse angår monoklonale antistoffer, der genkender et kerneprotein fra det lymfadenopati-associerede virus (LAV), hybridomer, der udskiller disse antistoffer, og en fremgangsmåde til påvisning eller rensning af et polypeptid indeholdende en epitop, som gen-5 kendes af et af de monoklonale antistoffer.
De omhandlede monoklonale antistoffer genkender såvel glycosylerede som ikke-glycosylerede polypeptider kodet for af genomt RNA fra LAV eller klonet DNA afledt deraf.
I ansøgerens internationale patentansøgning, der er indleveret d.
10 18. oktober 1985 under nummeret PCT/EP85/00548, beskrives monoklonale antistoffer, der specifikt genkender et protein, polypeptid eller glycoprotein fra omhyl ningen af LAV-vi rus. Der er ingen beskrivelser af antistoffer, som genkender kerneproteiner fra LAV-virus. Den pågældende ansøgning, der er videreført i Danmark under nr. 2849/86, var ikke ti 1 -15 gængelig for offentligheden på det tidspunkt, hvor den foreliggende ansøgning skal anses for indleveret.
Både den molekylære kloning af cDNA og af integrerede provirale former af LAV er blevet rapporteret tidligere. Rekombinantfagklonerne i soleredes fra et genombibliotek af LAV-inficeret humant T-lymfocyt DNA 20 nedbrudt delvis med Hind III. Rekombinant-fag AJ19-indskuddet genereredes ved Hind III-spaltning inden for R-elementet i den lange terminalgentagelse (LTR). Hver ekstremitet af indskuddet indeholder således en del af LTR. Muligheden for klynger af Hind III-steder i R er blevet elimineret ved sekvensbestemmelse af en del af en LAV dDNA-klon, pLAV 75, 25 svarende til dette område. Den totale sekvensinformation for LAV-genomet kan således hidrøre fra AJ19-klonen.
Under anvendelse af M13 "shotgun" klonings- og dideoxykædetermine-ringsmetoden (Sanger et al, 1977) er AJ19-indskuddets nukleotidsekvens blevet bestemt. Det rekonstruerede virusgenom med to kopier af R-sekven-30 sen er 9193 nukleotider langt. Nummereringssystemet begynder ved viruspartikel RNA'ets cap-punkt. Hele sekvensen er vist i figur la-le i den internationale ansøgning, der også er inkluderet i den foreliggende ansøgning.
Den foreliggende opfindelse har til hensigt at muliggøre mere nøj-35 agtig identifikation af betydningsfulde LAV-proteiner eller glycoprotei-ner og også at tilvejebringe monoklonale antistoffer mod proteiner og polypeptider med signifikante immunogene steder eller epitoper af LAV-virusproteinerne eller glycoproteinerne.
DK 168667 B1 2
Opfindelsen angår nærmere bestemt monoklonale antistoffer, der genkender LAV-kerneproteiner eller fragmenter deraf, specielt pl3-, pl8-, p25- og p55-proteinerne.
Specielt angår opfindelsen monoklonale antistoffer, der henholdsvis 5 genkender: et p55-protein, der menes at blive kodet for af DNA-sekvensen, der strækker sig ca. fra nukleotid 336 op til ca. nukleotid 1650 i LAV cDNA, hvilket p55-protein anses for at indeholde aminosyresekvenser svarende til sekvenserne i kerneproteinerne pl8 og p25 i LAV-viruset; 10 - et p25-protein, der menes at blive kodet for af DNA-sekvensen, der strækker sig ca. fra nukleotid 732 op til ca. nukleotid 1300 i LAV cDNA; et pl3-protein, der menes at blive kodet for af DNA-sekvensen, der strækker sig ca. fra nukleotid 1371 op til ca. nukleotid 1650; et pl8-protein, der menes at blive kodet for af DNA-sekvensen, der 15 strækker sig ca. fra nukleotid 336 op til ca. nukleotid 611.
Mere specielt angår opfindelsen monoklonale antistoffer, der genkender polypeptider med peptidsekvenser, som er identiske med eller ækvivalente til de sekvenser, der kodes for af DNA-sekvenserne, der strækker sig ca. mellem følgende nukleotidpositioner: 20 336 til 1650 (p55) 336 til 611 (pl8) - 1371 til 1650 (pl3) 656 til 1300 (p25) 25
Det bør nævnes, at pl3, pl8 og p25 alle synes at hidrøre fra samme prækursor, dvs. p55.
Mere specielt angår opfindelsen de monoklonale antistoffer, der fremstilles af hybridomerne, som den 24. oktober, 1984 er deponeret ved 30 "Collection Nationale des Cultures de Micro-organismes", også benævnt ved den forkortede betegnelse "CNCM", under følgende numre: LAV-A1 (pl8 + p55) . η· 1-355 LAV-BI (p25) ....... η· 1-356 35 LAV-C1 (p25) ....... η* 1-357 LAV-DI (membran) ... η· 1-358 LAV-El (p25) ....... η- 1-359 LAV-F1 (pl3) ....... η. 1-360 DK 168667 B1 3
De betegnelser, der anvendes til identifikation af hybridomerne, svarer til de ved standardrensningsprocedurer ud fra lysater af LAV-vi-rus opnåede rensede peptider, som indledningsvis anvendtes til immunise-5 ring af dyrene, fra hvilke de til fremstilling af de tilsvarende hybri-domer anvendte milt-celler opnåedes. Rensede peptider til brug ved fremstilling af de monoklonale antistoffer kan også opnås ved immunisering af dyr med de tilsvarende rensede ekspressionsprodukter af de i ovennævnte PCT-ansøgning omhandlede DNA-rekombinanter. Den generelle frem-10 gangsmåde til fremstilling af disse hybridomer vil blive beskrevet senere.
En generel fremgangsmåde anvendt til fremstilling af hvert af ovennævnte monoklonale antistoffer vil blive beskrevet i det følgende.
15 Immunisering af mus
Der anvendtes grupper af 6-8 uger gamle Balb/c-mus. De forskellige grupper modtog respektivt de ovenfor nævnte forskellige proteiner. Immuniseringsforskriften, der er identisk for alle grupper, omfattede injektioner tre gange ad intraperitoneal vej efterfulgt af en gang ad intra-20 venøs vej, hver gang af 10 μg af det antigeni ske præparat i nærvær af komplet Freund-adjuvans ved dag 0 og af ukomplet Freund-adjuvans ved dag 14 og uden adjuvans ved dag 28 og 42.
Fusion og dyrkning af hybriderne 25 Den azaguanin-resistente og ikke-afsondrende variant 6.53 af myelom P3 x 63 Ag8, som selv stammede fra MPOC-21-cellelinien anvendtes. Fusionen med splenocyter fra de immuniserede mus udførtes i nærvær af poly-ethylen-glycol 4000 i henhold til Faseka de St-Groth og Scheidegger's teknik på dag 45. Udvælgelsen af hybriderne i RPMI 16-40 "HAT”-medium 30 udførtes i henhold til samme dyrkningsteknik i plader med 24 brønde (Costar).
Hybridomerne, som producerede de specifikke antistoffer klonedes derefter i plader med 96 brønde i nærvær af et fødel ag af syngene thymo-cyter. De udvalgte afsondrende kloner straktes derefter i plader med 24 35 brønde stadig i nærvær af thymocyter. Når sammenflydning viste sig i en af brøndene, injiceredes klonen intraperitonealt i Balb/c-mus, som 8 dage tidligere havde modtaget en injektion af Pristane, og/eller holdtes i væskekultur.
DK 168667 B1 4 Påvisning af anti-LAV-antistofferne
Fem forskellige teknikker har tilladt karakterisering af kloner, der producerer antistofferne med ønsket specificitet. I et første trin 5 påvistes de hybrider, der udskilte de ønskede antistoffer ved en ELISA-analyse, som afslørede museimmunoglobul inerne i supernatanten. Udgående fra denne første udvælgelse blev de supernatanter, som indeholdt antistoffer orienteret mod de søgte viruskomponenter, screenet ved hjælp af en ELISA-analyse eller ved en immunofluorescensanalyse på humane celler, 10 der producerede viruset. Endelig analyseredes supernatanterne ved radio-immunopræcipitation af virus mærket med 35S-cystein og ved Westernblot teknikken på et viruspræparat, hvorved anti-LAV-antistoffernes specificiteter bestemtes.
15 Resultater
De ud fra forskellige fusioner opnåede celler dyrkedes derefter i 648 brønde. Den mikroskopiske undersøgelse har vist, at de fleste af disse brønde indeholdt en enkelt hybridklon, som var i stand til at vokse i det selektive "HAT"-medium. Mere end 50% af klonerne producerede 20 antistoffer, som gav en positiv reaktion ved antivirus-ELISA-analysen.
De mest repræsentative fusioner testedes ved Western-blot teknikken, og flere hybridomer fra hver gruppe subklonedes under hensyntagen til deres specificitet, deres reaktivitet ved antivirus-ELISA-analysen og deres udviklingshastighed i kulturer. Hybrider, der producerede antistoffer, 25 som mere specifikt genkendte de proteiner eller polypeptider, der fra start var blevet anvendt til immunisering af musene, blev bibeholdt. Alle opnåede subkloner vistes at udskille antistoffer, som efter ekspression injiceredes i syngene mus. Analysen af antistofspecificiteter i de forskellige opnåede ascites-væsker bekræftede specificiteterne af de i 30 hver af asciterne dannede antistoffer med hensyn til de tilsvarende proteiner.
Hybridomerne, som er deponeret ved CNCM, og som identificeredes ovenfor som repræsentative for de hybridomer, der kan opnås under anvendelse af ovenstående proteiner, udgør også en del af opfindelsen.
35 De opnåede monoklonale antistoffer kan i sig selv bringes til anvendelse til rensning af proteiner eller polypeptider, som har et anti-genisk sted fælles med de proteiner, der fra start anvendtes til fremstilling af hybridomerne. Opfindelsen angår således også en rensnings- DK 168667 Bl 5 fremgangsmåde som angivet i krav 10. En sådan fremgangsmåde anvendes med fordel til behandling af lysater af LAV, af inficerede T-lymfocyter eller af vilkårlige andre celler, som er i stand til at producere LAV eller et analogt virus. Fremgangsmåden kan også anvendes til identifika-5 tion af de proteiner, der fremstilles af celler, som er fremstillet genteknisk med rekombinante DNAér som ovenfor defineret og indeholdende en DNA-sekvens, der koder for den relevante epitop. De monoklonale antistoffer, der anvendes ved denne fremgangsmåde, er med fordel immobilise-ret på en fast bærer, f.eks. på en bærer, som er egnet til affinitets-10 kromatografioperationer, såsom et tre-dimensionelt tværbundet agarose-gitter, som er bragt i handelen under varemærket Sepharose af de svenske firma Pharmacia A.G., f.eks. ved cyanogenbromidmetoden.
Som et særligt aspekt angår opfindelsen anvendelsen af et monoklo-nalt antistof ifølge opfindelsen til in vitro påvisning af det eller de 15 tilsvarende polypeptider i en biologisk prøve eller af det eller de tilsvarende ekspressionsprodukter fra LAV-inficerede lymfocyter.
En udførelsesform af fremgangsmåden ifølge opfindelsen omfatter således trin, der indbefatter, at man bringer opløsningen indeholdende po-lypeptidet i kontakt med en affinitetssøjle, som bærer de monoklonale 20 antistoffer for selektivt at tilbageholde polypeptiderne, derefter udvinder polypeptidet efter dissociation af antigen-antistof-komplekset ved hjælp af en passende puffer, f.eks. en saltopløsning af passende ionstyrke, f.eks. ved pH 2-4. Et egnet salt til dannelse af sådanne puffere udgøres af ammoniumacetat.
25 Det af hybridomen deponeret ved CNCM under nr. 1-355 producerede monoklonale antistof er af særlig betydning. Nærmere bestemt genkender det monoklonale antistof både pl8 og p55. Det følger heraf, at den epitop, som genkendes mere signifikant af dette antistof, forbliver umodi-ficeret, når p55 (prækursor for pl8 og p25) spaltes i de forskellige 30 komponenter.
Dette antistof er således af speciel interesse til rensning af både pl8 og p55. De andre komponenter indeholdt i p55, specielt p25 kan så fremstilles på grundlag af det rensede p55. Det har yderligere vist sig, at dette antistof er i stand til at genkende LAV-viruset i præparater 35 indeholdende dette.
Dette antistof er således af speciel interesse til påvisning af viruspartikler i en biologisk prøve, navnlig et serum opnået fra patienter, som skal diagnosticeres for AIDS eller LAS, DK 168667 B1 6 påvisning af inficerede lymfocyter, påvisning i en biologisk prøve som ovenfor nævnt eller i en kultur af inficerede lymfocyter, og behandling af celler, som udtrykker viruset, med antistof.
5 Opfindelsen angår desuden et hvilket som helst andet monoklonalt antistof, som genkender en vilkårlig af de epitoper, der mere specifikt genkendes af de monoklonale antistoffer, som udskilles af hybridomerne, der er blevet deponeret ved CNCM og følgelig 10 - de hybridomer, som udskiller de andre monoklonale antistoffer.

Claims (9)

1. Monoklonale antistoffer, KENDETEGNET ved, at de genkender et kerneprotein fra det lymfadenopati-associerede virus (LAV) og er produ- 5 ceret af de hybridomer, der er deponeret ved CNCM under numrene 1-355, 1-356, 1-357, 1-358, 1-359 og 1-360, eller er produceret af en hvilken som helst hybridom af en art fremstillet af en hvilken som helst af ovennævnte deponerede hybridomer og genkender samme epitop som den, der genkendes af den tilsvarende deponerede hybridom. 10
2. De monoklonale antistoffer ifølge krav 1, som genkender et pl3-protein fra LAV.
3. De monoklonale antistoffer ifølge krav 1, som genkender et 15 pl8-protein fra LAV.
4. De monoklonale antistoffer ifølge krav 1, som genkender et p25-protein fra LAV.
5. De monoklonale antistoffer ifølge krav 1, som genkender et p55-protein fra LAV.
6. De monoklonale antistoffer ifølge krav 1, som både genkender et pl3-protein og et p25-protein fra LAV. 25
7. De hybridomer, der udskiller de monoklonale antistoffer ifølge et hvilket som helst af kravene 1-6.
8. Anvendelse af et monoklonalt antistof ifølge et hvilket som 30 helst af kravene 1-6 til in vitro påvisning af et polypeptid, som er identisk eller ækvivalent med et polypeptid med en peptidsekvens, som er identisk eller ækvivalent med et polypeptid kodet for af en DNA-sekvens udvalgt blandt dem, der strækker sig ca. mellem følgende nukleotidposi-tioner: 336 til 1650 (p55) 336 til 611 (pl8) - 1371 til 1650 (pl3) 35 5 8 DK 168667 B1 656 til 1300 (p25) i nukleotidsekvensen for et cDNA opnået ud fra det genome RNA for et lymfadenopati-associeret virus (LAV) og vist i fig. la til le.
9. Fremgangsmåde til rensning af et polypeptid udvalgt blandt de i krav 1 definerede polypeptider og indeholdt i opløsel iggjort form i en biologisk prøve, hvilket polypeptid indeholder en epitop, som genkendes af et af de monoklonale antistoffer ifølge et hvilket som helst af kra-10 vene 1-6, KENDETEGNET ved, at den omfatter, at man bringer det biologiske medium i kontakt med det tilsvarende monoklonale antistof fæstnet til eller immobiliseret på en uopløseliggjort bærer for at fremkalde fiksering af polypeptidet på det immobil i serede monoklonale antistof, hvorved et polypeptid-antistofkompleks dannes, fraskil!er de ikke-fikse-15 rede polypeptider og udvinder det fikserede polypeptid ved dissociering af polypepti d-anti stofkomplekset. 20 25 30 35 t ---------- ---
DK450986A 1985-01-21 1986-09-19 Monoklonale antistoffer, der genkender et kerneprotein fra det lymfadenopatiassocierede virus (LAV), hybridomer, der udskiller disse antistoffer, og fremgangsmåde til påvisning eller rensning af kerneproteinet DK168667B1 (da)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB858501473A GB8501473D0 (en) 1985-01-21 1985-01-21 Cloned dna sequences
GB8501473 1985-01-21
PCT/EP1986/000018 WO1986004336A1 (en) 1985-01-21 1986-01-21 Monoclonal antibodies against core proteins of lymphadenopathy-associated-viruses
EP8600018 1986-01-21

Publications (3)

Publication Number Publication Date
DK450986A DK450986A (da) 1986-09-19
DK450986D0 DK450986D0 (da) 1986-09-19
DK168667B1 true DK168667B1 (da) 1994-05-16

Family

ID=10573161

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DK450986A DK168667B1 (da) 1985-01-21 1986-09-19 Monoklonale antistoffer, der genkender et kerneprotein fra det lymfadenopatiassocierede virus (LAV), hybridomer, der udskiller disse antistoffer, og fremgangsmåde til påvisning eller rensning af kerneproteinet

Country Status (10)

Country Link
EP (1) EP0211022B1 (da)
JP (1) JPS62502095A (da)
KR (1) KR950008570B1 (da)
AT (1) ATE51876T1 (da)
AU (1) AU600227B2 (da)
DE (1) DE3670294D1 (da)
DK (1) DK168667B1 (da)
GB (1) GB8501473D0 (da)
OA (1) OA08413A (da)
WO (1) WO1986004336A1 (da)

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5173400A (en) * 1983-09-15 1992-12-22 Institut Pasteur Antibody detection of antibodies to viral proteins in serum
US5217861A (en) * 1983-09-15 1993-06-08 Institut Pasteur Antigen of a human retrovirus, namely p18 protein of human immunodeficiency virus (HIV), compositions containing the antigen, a diagnostic method for detecting acquired immune deficiency syndrome (AIDS) and pre-AIDS and a kit therefor
US5374519A (en) * 1983-12-05 1994-12-20 Institut Pasteur Oligopeptides comprising p18 protein of human immunodeficiency virus (HIV), compositions comprising peptides of p18 protein of HIV, and diagnostic kits and methods for detecting acquired immune deficiency syndrome (AIDS)
WO1986006099A1 (en) * 1985-04-08 1986-10-23 Genetic Systems Corporation EXPRESSION AND DIAGNOSTIC USE OF gag ENCODED PEPTIDES WHICH ARE IMMUNOLOGICALLY REACTIVE WITH ANTIBODIES TO LAV
DE3650175T3 (de) 1985-04-29 2007-09-06 Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules Synthetische antigene zum nachweis von aids.
FR2593519B1 (fr) * 1985-09-25 1994-01-07 Oncogen Vaccin contre le syndrome immunodeficitaire acquis et intermediaires pour la preparation de ce vaccin
NZ217645A (en) * 1985-09-25 1991-11-26 Oncogen Recombinant viruses expressing lav/htlv-iii related epitopes and vaccine formulations
WO1987002775A1 (en) * 1985-10-24 1987-05-07 Southwest Foundation For Biomedical Research Synthetic peptides and use for diagnosis and vaccination for aids and arc
US6130314A (en) * 1986-03-26 2000-10-10 Genetic Systems Corporation Synthetic antigen for the detection of AIDS-related disease
US4904581A (en) * 1986-05-06 1990-02-27 Epitope, Inc. Method of detecting AIDS virus infection
NZ221440A (en) * 1986-08-20 1991-11-26 Genetic Systems Corp Composition containing monoclonal antibodies/peptides useful in treating and diagnosing hiv infections
US5166050A (en) * 1986-08-20 1992-11-24 Bristol-Myers Squibb Company Monoclonal antibodies and peptides useful in treating and diagnosing HIV infections
DE3636540A1 (de) * 1986-10-27 1988-04-28 Behringwerke Ag Verfahren zur bestimmung von anti-hiv, mittel dazu und ihre verwendung in diesem verfahren
CA1341277C (en) * 1987-03-16 2001-07-31 Roland Keith Mcgready Anti-paratopic antibody and a method of its manufacture
AU625720B2 (en) * 1987-05-01 1992-07-16 Genetic Systems Corporation Monoclonal antibodies to specific antigenic regions of the human immunodeficiency virus and methods for use
CA1339363C (en) * 1987-05-01 1997-08-26 Alan Ray Flesher Monoclonal antibodies to specific antigenic regions of the human immunodeficiency virus and methods for use
US4888290A (en) * 1987-11-06 1989-12-19 Coulter Corporation Monoclonal antibody specific to HIV antigens
AU612760B2 (en) * 1987-11-06 1991-07-18 Coulter Corporation Enzyme immunoassay for detecting hiv antigens in human sera
EP0339504A3 (en) * 1988-04-26 1990-09-12 The Du Pont Merck Pharmaceutical Company Human immunodeficiency virus (hiv) env-coded peptide capable of eliciting hiv-inhibiting antibodies in mammals
FR2632310B1 (fr) * 1988-06-06 1992-04-10 Pasteur Institut Peptides ayant des proprietes protectrices d'un virus pathogene du type hiv dans des cellules sensibles
DK580789D0 (da) * 1989-11-20 1989-11-20 Novo Nordisk As Fremgangsmaade til oprensning af polypeptider
EP0495465A3 (en) * 1991-01-15 1992-12-16 Coulston International Corporation Immuno-enzymatic test for the detection of viral antibody
US6479055B1 (en) 1993-06-07 2002-11-12 Trimeris, Inc. Methods for inhibition of membrane fusion-associated events, including respiratory syncytial virus transmission

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ZA783261B (en) * 1977-06-15 1979-06-27 Wistar Inst Method of producing antibodies
JPS5939832A (ja) * 1982-08-28 1984-03-05 Ajinomoto Co Inc モノクロ−ナル抗体ならびにその製法、使用法
GB8324800D0 (en) * 1983-09-15 1983-10-19 Pasteur Institut Antigens

Also Published As

Publication number Publication date
OA08413A (en) 1988-06-30
JPS62502095A (ja) 1987-08-20
DE3670294D1 (de) 1990-05-17
DK450986A (da) 1986-09-19
AU600227B2 (en) 1990-08-09
AU5320086A (en) 1986-08-13
KR950008570B1 (ko) 1995-08-03
GB8501473D0 (en) 1985-02-20
WO1986004336A1 (en) 1986-07-31
DK450986D0 (da) 1986-09-19
KR870700073A (ko) 1987-02-28
ATE51876T1 (de) 1990-04-15
EP0211022A1 (en) 1987-02-25
EP0211022B1 (en) 1990-04-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
DK168667B1 (da) Monoklonale antistoffer, der genkender et kerneprotein fra det lymfadenopatiassocierede virus (LAV), hybridomer, der udskiller disse antistoffer, og fremgangsmåde til påvisning eller rensning af kerneproteinet
JP2752329B2 (ja) リンパ節症及び後天性免疫不全症候群のウイルスのエンベロープ抗原の製造方法
Earl et al. Native oligomeric human immunodeficiency virus type 1 envelope glycoprotein elicits diverse monoclonal antibody reactivities
Papsidero et al. Human immunodeficiency virus type 1-neutralizing monoclonal antibodies which react with p17 core protein: characterization and epitope mapping
US5166050A (en) Monoclonal antibodies and peptides useful in treating and diagnosing HIV infections
JPH02160800A (ja) ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）ｅｎｖ‐コードペプチド
JP2958346B2 (ja) 抗ＨＩＶ―２モノクローナル抗体およびそれを用いた抗ＨＩＶ―２ｇｐ４１抗体の検出方法
IE872219L (en) Treatment of hiv infections
EP0492560B1 (en) Human monoclonal antibodies directed against the transmembrane glycoprotein (gp41) of HIV-1, and related peptides
US6171596B1 (en) Oligomeric HIV-1 envelope glycoproteins
EP0581353A1 (en) Monoclonal antibodies to HiV-1 gp120, cell lines producing them and corresponding epitope structures
Robert-Guroff et al. A monoclonal antibody specific for a 52,000-molecular-weight human T-cell leukemia virus-associated glycoprotein expressed by infected cells
US6039957A (en) Oligomeric HIV-1 envelope glycoproteins
JPS62500592A (ja) リンパ節症及び後天性免疫不全症候群のウイルスの抗原，特にエンベロ−プ抗原，及びウイルス，ウイルスエンベロ−プ抗原の産生方法，免疫原組成物の調製用叉は該ウイルスに対する抗体の存在の診断用としての該抗原の
EP0448095A1 (en) Subregion of the retroviral ENV protein, DNA sequences encoding it and compositions for the diagnosis, prevention or therapy of retrovirus infections
Krust et al. Characterization of a monoclonal antibody specific for the HIV-1 precursor glycoprotein
US5407811A (en) Monoclonal antibodies to GP110 of HIV and hybridomas secreting these antibodies
CN116042531B (zh) 抗猪δ冠状病毒NS7和NS7a蛋白的杂交瘤细胞株、单克隆抗体及其应用
WO1996027012A1 (en) Specific hiv-1 group o antigens
REEVES et al. Mouse monoclonal antibodies to human immunodeficiency virus glycoprotein 120 generated by repeated immunization with glycoprotein 120 from a single isolate, or by sequential immunization with glycoprotein 120 from three isolates
KR100254811B1 (ko) 인간 면역결핍 바이러스의 덮개 단백질인 p24 에 대한 단일클론항체, 이를 생산하는 융합세포주 및 그의 제조방법
KR100250833B1 (ko) 인간 면역결핍 바이러스-1의 표면 단백질 지피41에 대한 단일클론 항체, 이를 생산하는 융합세포주및 그의 제조방법
Orlik et al. Two immunodominant regions revealed by monoclonal antibodies on the main structural protein p24 of bovine leukemia virus
Larcher et al. Characterization of monoclonal antibodies to human immunodefiency virus type 1 gp41 by HIV-1 polypeptides expressed in Escherichia coli
Qureshi et al. Identification and production of monoclonal antibodies against a discriminating protein molecule between B and D variants of encephalomyocarditis virus

Legal Events

Date Code Title Description
B1 Patent granted (law 1993)
PUP Patent expired