DK166586C

DK166586C - Spirocycliske aminosyrederivater samt deres fysiologisk acceptable salte, fremgangsmaade til deres fremstilling, deres anvendelse som laegemiddel samt laegemidler indeholdende dem

Info

Publication number: DK166586C
Application number: DK011984A
Authority: DK
Inventors: Rainer Henning; Hansjoerg Urbach; Volker Teetz; Reinhard Becker
Original assignee: Hoechst Ag
Priority date: 1983-01-12
Filing date: 1984-01-11
Publication date: 1993-11-08
Also published as: DK11984D0; JPH0759590B2; DE3300774A1; ES8500905A1; JPS59134765A; DE3476067D1; ES528761A0; ATE39931T1; DK11984A; GR79158B; EP0116276B1; PT77943B; AU2322984A; EP0116276A2; US4620012A; PT77943A; ES530290A0; DK166586B; ZA84213B; EP0116276A3

Description

i

DK 166586 C

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte, spirocycliske aminosyrederivater med formlen I

hvori m er 1 eller 2, n er 1, R er hydrogen eller (C^ til C4)-alkyl, R1 er hydrogen, (Οχ til C3)-alkyl eller 4-amino-butyl, R2 er hydrogen, (Οχ til C4)-alkyl eller benzyl, Y og Z er begge hydrogen, eller Y og Z er tilsammen oxygen, og X er phenyl, samt deres fysiologisk acceptable salte.

I DIP-A nr. 5194/81 er der beskrevet spirocycliske aminosyrederivater, der som spirocyclisk ringsystem indeholder 1,4-dithia- eller l,4-dioxa-7-azaspiro[4,4]nonan-8-car-boxylsyre. Det er nævnt, at disse aminosyrederivater kan anvendes som anti-hypertensive midler qua deres evne til inhibering af det angiotensinomdannende enzym (ACE).

Også*fra DK-B nr. 161.523 kendes spirocycliske aminosyrederivater med ovennævnte spirocycliske ringsystem, og det er for 1,4-dithia-systemet vist, at forbindelser med dette ringsystem inhiberer ACE.

De kendte ringsystemer afviger imidlertid i strukturel henseende væsentligt fra det spirocycliske ringsystem i aminosyrederivaterne med ovenstående formel I, idet dé kendte systemer er bicycliske, og de indeholder heteroatomer (0 eller S) i den ikke-N-holdige ring. Til forskel herfra er systemet i de her omhandlede forbindelser tricyclisk, og begge de ikke-N-holdige ringe er carbocycliske.

På tale som salte kommer især alkalimetal- og jord-alkalimetalsalte, salte med fysiologisk acceptable aminer og salte med uorganiske eller organiske syrer, f.eks. HC1, 2

DK 166586 C

HBr, H2SO4, maleinsyre eller fumarsyre.

Alkyl kan være ligekædet eller forgrenet.

Forbindelser med formlen I er i besiddelse af chirale C-atomer. Både R- og S-konfigurationerne ved alle asymme-5 triske centre er genstand for den foreliggende opfindelse. Forbindelserne med formlen I kan derfor foreligge som optiske isomere, som diastereomere, som racemater eller som blandinger af disse. Foretrukne er imidlertid forbindelserne med formlen I, hvori de med en stjerne (*) markerede C-atomer 10 hver især har S-konfiguration.

Særligt foretrukne forbindelser med formlen I er sådanne, hvori R er hydrogen, R1 er methyl, R2 er hydrogen eller ethyl, og de chirale C-atomer, der er markeret med en stjerne (*), har S-konfiguration.

15 I den tricycliske aminosyregruppe kan -COOR-gruppen stå exo- eller endo-stillet til den bicycliske gruppe. De her omhandlede forbindelser indeholder altså en af de to delstrukturer med formlen la og Ib 20

25 la (endo-

Konfiguration)

Ib (exo-

Konfiguration) såvel som deres spejlbilleder.

30 Den foreliggende opfindelse angår desuden en frem gangsmåde til fremstilling af forbindelser emd formlen I. Denne fremgangsmåde er ejendommelig ved det i den kendetegnende del af krav 4 angivne.

Ved fremgangsmådevariant a) omsætter man ved kendte omdannelsesmetoder inden for peptidkemien en forbindelse med formlen II

35 3

DK 166586 C

Y

HO C-CH-NH-CH-(CH0) -C-X

Il I 2 n I (II) R C02R 2

hvori n, R1', R2, X, Y og Z har de for formel I angivne betyd-10 ninger, med en forbindelse med formlen III

15

(III) hvori W er hydrogen eller betyder en surt eller hydrogenoly-tisk fraspaltelig gruppe, især en tert.butylgruppe eller en 20 benzylgruppe, og derpå eventuelt eller om nødvendigt fraspalter gruppen W ved syrebehandling eller hydrogenering og eventuelt ved yderligere syre- eller basebehandling også fraspalter gruppen R2, hvorved de frie carboxylsyrer opnås.

Ved fremgangsmådevariant b) til fremstilling af for-25 bindeiser med formlen I, hvori Y og Z tilsammen betyder oxygen, omsætter man på kendt måde i en Michael-reaktion (variant b^) (Organikum, 6. oplag, side 492, 1967) eii forbindelse med formlen IV

30 35 (IV) 4 DK 166586 0

hvori m og R1 har de for formel I angivne betydninger, og W har den for formel III angivne betydning, med en forbindelse med formlen V

R202C-CH=CH-C0-X (V)

hvori R2 og X har de for formel I angivne betydninger, og fraspalter eventuelt eller om nødvendigt gruppen W og fraspalter eventuelt gruppen R2, som ovenfor beskrevet, eller man omsætter på kendt måde i en Mannich-reaktion (variant b2) (Buil. Soc. Chim. Frankrig, 1973, side 625) en forbindelse med ovenstående formel IV med en forbindelse med den almene formel VI

0HC-C02R2 (VI)

hvori R2 har den for formel I angivne betydning, og med en forbindelse med den almene formel VII

X-CO-CH3 (VII) hvori X har den for formel I angivne betydning, og derpå fraspalter man eventuelt eller om nødvendigt gruppen W og eventuelt gruppen R2 som ovenfor beskrevet under dannelse af de frie carboxygrupper.

Ved fremgangsmådevariant c) fremstilles forbindelser med formlen I, hvor Y og Z hver især er hydrogen, ved at man omsætter en forbindelse med den ovenfor angivne formel IV ifølge den i J. Amer. Chem. Soc. 93, 2897 (1971), beskrevne fremgangsmåde med en forbindelse med formlen VIII * CO-R2 / 2 0 “ (VIII)

CH2-CH2-X

5

DK 166586 C

hvori R2 og X har de for formel I angivne betydninger, reducerer de opnåede Schiff-baser og derpå eventuelt eller om nødvendigt fraspalter gruppen W og eventuelt fraspalter gruppen R2 som ovenfor beskrevet under dannelse af de frie 5 carboxygrupper. Reduktionen af Schiff-baserne kan ske elek-trolytisk eller med reduktionsmidler, f.eks. natriumborhydrid eller natrfumcyanborhydrid.

Forbindelser med formlen I, hvori R betyder hydrogen, kan eventuelt overføres ved i og for sig kendte metoder til 10 deres estere med formlen I, hvori R betyder (C^ til C4)-alkyl, eller de kan på kendt måde overføres til et fysiologisk acceptabelt salt deraf.

De ved fremgangsmåden anvendte forbindelser med formlen III 15 20

(III)

hvori m er 1 eller 2, og W er hydrogen eller betyder en surt eller hydrogenolytisk fraspaltelig gruppe, såsom tert.-25 butyl eller benzyl, er hidtil ukendte forbindelser. Disse forbindelser kan fremstilles på den måde, at man forsæber en forbindelse med formlen XIV

30

(XIV) 35 med en mineralsyre, såsom saltsyre eller hydrogenbromidsyre, eller med en stærk base, såsom alkalimetalhydroxid, ved 6

DK 166586 C

20*c til 150°C, især ved 60 til 120'C, fortrinsvis i vand som opløsningsmiddel, og ifølge gængse metoder inden for aminosyrekemien eventuelt forestrer de opnåede aminosyrer (III/W = hydrogen). Aminosyreme (III/W = hydrogen) eller 5 de opnåede estere (III/W ψ hydrogen) kan opdeles i stereois ornere ved f.eks. chromatografi eller fraktioneret krystallisation af egnede salte.

De tricycliske nitriler med formlen XIV kan fremstilles på den måde, at man i nærværelse af en stærk base, såsom 10 et alkalimetalamid, fortrinsvis lithiumdiisopropylamid, lithiumdiethylamid eller lithiumhexamethyldisilazid, omsætter et bicyclisk nitril med formlen (IX) Γ CH Jm

15 CN TO

hvori m er 1 eller 2, med en forbindelse med formlen (X) 20 OR'

X-CH2-CH

(X) X0R3 25 hvori X betyder halogen, især chlor, brom eller iod, og R3 betyder ens eller forskellige (C^ til C4)-alkylgrupper, eller begge grupper R3 danner tilsammen en ethylen- eller en propylenbro, i et aprotisk opløsningsmiddel, såsom tetra-hydrofuran, ved -100*C til +50"C, fortrinsvis -80eC til 30 0eC, til en forbindelse med formlen (XI)

3 7

DK 166586 C

O

hvori m og R har ovennævnte betydninger, reducerer denne med et egnet reduktionsmiddel, såsom lithiumaluminium-hydrid^ i et aprotisk opløsningsmiddel, fortrinsvis diethyl-ether eller tetrahydrofuran, ved 0°C til 80°C, fortrinsvis 5 ved 20°C til 60°^ eller med et alkoholisk opløsningsmiddel, fortrinsvis ethanol eller n-butanol, ved 0°C til 120°C, fortrinsvis ved 20°C til 80oC, eller ved katalytisk hydrogenering i et alkoholisk opløsningsmiddel under tilsætning af ammoniak ved 0°C til 80°C, fortrinsvis 10 20°C til 50°C, i nærværelse af en ædelmetal- eller Ni- -katalysator, fortrinsvis Raney-nikkel eller rhodium på aluminiumoxid, til en forbindelse med formlen (XII)

(XII) 15 20 ved behandling med en mineralsyre, fortrinsvis saltsyre, i vand ved 20°C til 140°C, fortrinsvis 40°C til 100°C, til en forbindelse med formlen (XIII)

hvori m er 1 eller 2, og som dannes i blanding med deres trimere, og overfører denne ved omsætning med et alkali-metalcyanid, fortrinsvis natrium- eller kaliumcyanid, i vand under tilsætning af en mineralsyre, fortrinsvis saltsyre eller svovlsyre, ved 0°C til 60°C, fortrinsvis ved 10°C til 40°C, til nitrilet med formlen (XIV).

Nitrilerne med formlen (IX) er kendte.

35 8

DK 166586 C

De som udgangsstoffer til fremstilling af forbindelserne med formlen I anvendte forbindelser med formlen II, hvor n er l, Y og Z er hydrogen, R1 er methyl, R2 er methyl eller ethyl*, og X er phenyl, er kendte (EP-A nr. 37 231). Forbindelserne med formlen II kan fremstilles ifølge forskellige fremgangsmåder. En syntesevariant går ud fra en keton med ovennævnte formel VII, som ifølge kendte fremgangsmåder i en Mannich-reaktion omsættes med en forbindelse med ovennævnte formel VI sammen med aminosyreestere med formlen XV

H0N - CH - C0oW‘ (XV)

hvori R1 har ovennævnte betydning, og W* betyder en hydro-genolytisk eller surt fraspaltelig gruppe, især en benzyl-eller en tert.butyl-gruppe, til en forbindelse med formlen XVI

% * W’O-C-CH-NH-CH-CH.-CO-X (XVI)

I I

II 1 2

ΈΓ C02R

hvori R1, R2, X og W har ovennævnte betydninger, idet dog R2 ikke betyder W1, hvis W* betyder en hydrogenolytisk fraspaltelig gruppe, især benzyl.

Hvis man fraspalter gruppen W* hydrogenolytisk ved hjælp af f.eks. palladium, opnår man ved en hydrogenoptagelse af 3 molækvivalenter forbindelser med formlen II, hvori X og Z er hydrogen. Hvis man afbryder hydrogenoptagelsen ved 1 molækvivalent, opnår man forbindelser med formlen II, hvor n er 1, og Y og Z tilsammen er oxygen, som man ligeledes opnår, når gruppen W i formel XVI fraspaltes med syrer, såsom trifluoreddikesyre eller saltsyre, i et indifferent organisk opløsningmiddel, f.eks. dioxan.

9

DK 166586 C

Forbindelser med formlen XVI er også tilgængelige ved Michael-additioner af en forbindelse med ovennævnte formel V méd en forbindelse med ovennævnte formel XV ifølge kendte fremgangsmåder. Denne fremgangsmåde egner sig fortrinsvis til fremstilling af sådanne forbindelser med formlen XVI, hvori R1 er methyl, R2 er ethyl, og X er phenyl.

Forbindelserne med formlen XVI dannes som diastereo-merblandinger. Foretrukne diastereomere med formlen XVI er sådanne, hvori de med en stjerne markerede, chirale C-atomer hver især har S-konfiguration. Disse kan f.eks. fraskilles ved krystallisation eller ved chromatografi, f.eks. på kiselgel. Ved den efterfølgende fraspaltning af gruppen W' bibeholdes konfigurationerne af de chirale c-atomer.

De som udgangsstoffer til fremstilling af forbindelserne med formlen I anvendte forbindelser med ovenstående formel IV opnås på kendt måde ud fra forbindelserne med ovenstående formel III ved omsætning med en N-beskyttet 2-aminocarboxylsyre med formlen XVII

V - HN - CH - CO-H (XVII) hvori V er en beskyttelsesgruppe, og R1 har ovennævnte betydning. På tale som beskyttelsesgruppe V, som efter endt omsætning igen fraspaltes, kommer f.eks. tert.butoxycarbonyl.

Omsætningen af en forbindelse med formlen II med en forbindelse med formlen III til fremstilling af en forbindelse med formlen I sker ifølge en inden for peptidkemien kendt kondensationsomsætning, hvor man som kondensationsmiddel f.eks. tilsætter dicyclohexylcarbodiimid og 1-hydroxy--benzotriazpl. Ved den efterfølgende sure fraspaltning af gruppen W anvendes som syrer fortrinsvis trifluoreddikesyre eller .'saltsyre.

De ifølge den ovenfor beskrevne fremgangsmåde opnåede forbindelser med formlen III dannes som blanding og kan f.eks. skilles fra hinanden ved omkrystallisation eller ved chromatografi.

10

DK 166586 C

Forbindelserne med formlen III dannes som racemiske blandinger og kan som sådanne anvendes i de yderligere ovenfor beskrevne synteser. De kan imidlertid også anvendes som rene enantiomere efter opdeling af racematerne med gængse metoder, f.eks. over saltdannelse med optisK aktive baser eller syrer, i ae optiske antipoder..

Dannes forbindelserne med formlen I som racemater, kan også disse spaltes ifølge gængse metoder, f.eks. over saltdannelse med optisk aktive baser eller syrer, i deres enantiomere eller adskilles ved chromatografi.

De her omhandlede forbindelser med formlen I foréLigger, hvis R = hydrogen, som indre salte. Som amfotere forbindelser kan de danne salte med syrer eller baser. Disse salte fremstilles på gængs måde ved omsætning med et ækvivalent syre eller base.

Forbindelserne med formlen I og deres salte er i besiddelse af en lang, vedvarende, intensiv blodtrykssænkende virkning. De er stærke inhibitorer for Angiotensin--Converting-Enzymet (ACE-inhibitor), De kan anvendes til bekæmpelse af for højt blodtryk af forskellig oprindelse.

Også deres kombination med andre blodtrykssænkende, karudvidende eller diuretisk virksomme forbindelser er mulig. Typiske repræsentanter for denne klasse af aktive forbindelser er f.eks. beskrevet i Erhardt-Ruschig, Arzneimittel, 2. oplag, JWeinheim, 1972. Anvendelsen kan ske intravenøst, subkutant eller peroralt.

Doseringen ved oral indgivelse ligger ved 0,01-7 mg/kg/-dag, især ved 0,07-0,5 mg/kg/dag. Den kan i alvorlige tilfælde også forhøjes, idet man hidtil ikke har konstateret toksiske egenskaber. Også en nedsættelse af dosen er mulig og gennemføres først og fremmest, når der samtidigt incfcfives diuretika.

De her omhandlede forbindelser kan indgives oralt eller parenteralt i tilsvarende pharmaceutisk præparering.

Til en oral anvendelsesform blandes de aktive forbindelser med de dertil gængse tilsætningsstoffer, såsom bærerstoffer, stabilisatorer eller indifferente fortyndingsmidler, °9 bringes 11

DK 166586 C

ved gængse metoder på egnede indgivelsesformer, såsom tabletter, dragees, stikkapsler, vandige, alkoholiske eller oliebaserede suspensioner eller vandige, alkoholiske eller oliebaserede opløsninger. Som indifferente bærematerialer kan man f.eks. anvende gummi arabicum, magnesiumcarbonat, kaliumphosphat, mælkesukker, glucose eller stivelse, især majsstivelse.

Derved kan prs^areringen ske både som tør- eller fugtiggranulat. Som oliebaserede bærestoffer eller opløsningsmidler kommer f.eks. vegetabilske og animalske olier i betragtning, f.eks. solsikkeolie eller levertran.

Til subkutan eller intravenøs indgivelse bringes de aktive forbindelser eller deres fysiologisk acceptable salte, om ønsket med de dertil gængse substanser, såsom opløsningsformidlere, emulgatorer eller yderligere hjælpestoffer, i opløsning, suspension eller emulsion. Som opløsningsmiddel for de hidtil ukendte aktive forbindelser og de tilsvarende fysiologisk acceptable salte kommer f.eks. følgende på tale: vand, fysiologiske kogsaltopløsninger eller alkoholer, f.eks. ethanol, propandiol eller glycerol desuden også sukkeropløsninger, såsom glucose- eller.mannitolopiøsninger, eller en blanding af de forskellige nævnte opløsningsmidler.

Den overordentligt stærke aktivitet af forbindelserne med formlen I påvises ved hjælp af de pharmakologiske data i nedenstående tabel:

Intraduodenal indgift på narkotiserede rotter, 50%'s hæmning af den af 310 ng Angiotensin I udløste pressorreaktion 30 minutter efter indgift i en dosis på ... = ED5q· 12

DK 166586 C

O

Tabel (De angivne forbindelser er i besiddelse af S-konfigurationen ved de med en stjerne markerede C-atomer): m n X Y z R1 R2 R Konfiguration ED af COOR-gruppen (/ig/kg) 2 1 C6H5 H H ch3 C2H5 H exo 50 10 2 1 C6H5 K H CH3 C2H5 H endo 500 2 1 C6H5 H H CH3 H H exo 200 2 1 C6H5 H H CH3 H H endo 850 2 1 C6H5 - o - ch3 C2H5 H exo 80 2 1 C6H5 - 0 - CH3 C2H5 H endo 650 15 1 1 C6H5 H H CH3 C2H5 H exo/endo 80 1 1 H Π CH3 H H exo/endo 240 1 1 C6H5 - 0 - ch3 C2H5 H exo/endo 140 Symbolerne n, m, X, Y, Z, R, R1 2 og R henviser til forbindelserne med formlen I.

De efterfølgende eksempler tjener til illustrering af den foreliggende opfindelse uden at begrænse denne til de eksempelvis nævnte forbindelser.

35 13

DK 166586 C

Eksempel 1 51-Cyano-spiro-[bicyclo-[2,2,2]-octan-2,31-pyrrolidin] a) 2-Cyano-2-(1,3-dioxolan-2-yl)-methyl-bicyclo-[2,2,2]-octan 84 ml diisopropylamin opløses i 300 ml absolut tetra-hydrofuran. Under tør argon tilsætter man ved -20°C 39,9 ml n-butyllithium (l,5molaeri hexan). Efter 30 minutter ved stuetemperatur afkøles til -78°C, og der indrøres 8,1 g 2-cyano-bicyclo-[2,2,2]-octan i 30 ml absolut tetrahy-drofuran, efter 30 minutter ved 0°C afkøles der på ny til -78°C, og der tildryppes 10 g 2-brommethyl-l,3-dioxolan i 30 ml tetrahydrofuran. Man omrører i endnu 45 minutter ved -78°C, opvarmer til stuetemperatur, inddamper, optager remanensen med 2N eddikesyre og ether, vasker tre gange med vand, tørrer over natriumsulfat og fjerner opløsningsmidlet. Råproduktet chromatograferes på kiselgel med ethylacetat/-cyclohexan (1:6) som løbemiddel. Der opnås 7,9 g af forbindelsen i overskriften som en farveløs olie.

1H-NMR-data (CDC13) : <f = 5,02 + 4,95 (2t, J=6Hz, 13); 4,1 - 3,7 (m, 4H)? 1,95 (d, J * 6 Hz, 2H); 2,2-1,3 (m, 12H) ppm b) 2-Aminomethyl-2-(1,3-dioxolan-2-yl)-methyl-bicyclo-[2,2,2]--octan 3,7 g lithiumaluminiumhydrid suspenderes i 60 ml tør ether. 7,4 g 2-cyano-2-(1,3-dioxolan-2-yl)-methyl-bicyclo--[2,2,2]-octan tildryppes opløst i 80 ml tør 'ether således, at en let kogning opretholdes. Derpå koges der 2 timer ved tilbagesvaling, derpå blandes under isafkøling dråbevis efter hinanden med 2,1 ml vand, 2,1 ml IN natriumhydroxidopløsning og 15 ml vand. Aluminiumhydroxidet fra-suges og vaskes godt efter med ether. Der opnås 5,5 g af forbindelsen i overskriften som en farveløs olie.

14

DK 166586 C

1H-NMR-data (CDC13):cT = 4,87 (t, J = 6HZ, IH); 4,0 - 3,6 (m, 4H); 2,63 (s, 2H); 5 2,0-1,0 (m, 14H) ppm c) Spiro-1 2[bicyclo-[2,2,2]-octan-2,3,-pyrrolin-/^ 3'] 35 5,5 g 2-aminomethyl-2-(1,3-dioxolan-2-yl)-methyl-bi-10 cyclo-[2,2,2]-octan koges med 5N saltsyre véd’ tilbagesvaliiig i 1,5 t. ved tilbagesvaling. Efter ekstraktion med ethylacetat blandes den vandige fase under isafkøling med 4N kaliumhydroxid, ekstra-heres med ether, ekstrakten tørres med natriumsulfat, og opløsningsmidlet fjernes. Man opnår 3 g af forbindelsen i 15 overskriften som blanding af den monomere og trimere (s--triazin-derivat).

d) 51-Cyano-spiro-[bicyclo-[2,2,2]-octan-2,3'-pyrrolidin] 2 20 3 g spiro-[bicyclo- [2,2,2] -octan-2,3'-pyrrolin-/J 3'] opløses sammen med 2,25 g kaliumcyanid i 100 ml vand. Under isafkøling tildryppes 24 ml 2N saltsyre, og der omrøres i 72 timer ved stuetemperatur. Efter ekstraktion med ethylacetat indstilles den vandige opløsning på en alkalisk 25 pH-værdi med IN natriumhydroxidopløsning, ekstraheres med ether, og ekstrakten tørres over natriumsulfat. Efter ind-dampning chromatograferes råproduktet på kiselgel med ethylacetat/cyclohexan (1:1) som løbemiddel, hvorved de endo- og exo-isomere adskilles.

15

DK 166586 C

endo-Isomer: 0,83 g, smp. 78-80°C

1H-NMR-data (CDC13) : /= 4,0 (t, J=14Hz, IH) ; 2,8 (s, 2H); 2.4 (s, IH); 2,0 (d, 2H); 1.5 (br. s, 12H);

exo-Isomer; 1,5 g, smp. 38-40°C

1H-NMR-data (CDC13): cf= 4,02 (X-del af et ABX-system, IH); 2,85 (AB-system, J=15Hz, 2H); 2,5-1,0 (m, 15H) ppm.

Eksempel 2

Endo-spiro-[bicyclo-[2,2,2]-octan-2,3'-pyrrolidin]-5 * --yl-carboxylsyre_· 0,8 g endo-5'-cyano-spiro-[bicyclo-[2,2,2]-octan- -2,3'-pyrrolidin] koges med 20 ml 5N saltsyre i 5 timer ved tilbagesvaling. Efter inddampning til tørhed optages med vand, indstilles på en pH-værdi på 5,7 ved tilsætning af "Amberlite' * IRA 93 (OH -form), frafiltreres og inddampes. Remanensen udrives med methylenchlorid/isopropylether. Man opnår 0,9 g af forbindelsen i overskriften som farveløse krystaller med smp. 236°C.

1H-NMR~data (D20) : ¢^= 4,2 (X-del af et ABX-system, IH); 3,2 (s, 2H); 2,5-1,5 (AB-del af et ABX-system, 2H); 1,5 (br. s, 12H) ppm.

Massespektrum (m/e): 209 (M+, 0,8%); 165 (13%); 164 (M-COOH, 100%); 87 (14%), 16

DK 166586 C

O

Eksempel 3

Exo-spiro-[bicyclo-[2,2,2]-octan-2,3'-pyrrolidin]-51--yl-carboxylsyre_ 5 1,5 g exo-5'-cyano-spiro-[bicyclo-[2,2,2]-octan- -2,3'-pyrrolidin] omsættes med 30 ml 5N saltsyre på den i eksempel 2 beskrevne måde. Man opnår 1,68 g af for-bindelsen, i overskriften som farveløse krystaller med smp. 242°C.

10 1H-NMR-data (D20) : <f = 4,15 (X-del af et ABX-system, IH); 3,2 (AB-system, JAB=15Hz, 2H); 2,5-1,7 (AB-del af et ABX-system, 2H); 15 1,5 (br. s, 12H), ppm.

Massespektrum (m/e): 209 (M+, 0,5%); 165 (15%); 164 (M-COOH, 100%); 87 (10%); 69 (8%).

20 Eksempel 4 5'-Cyano-spiro-[bicyclo-[2,2,1]-heptan-2,3'-pyrrolidin] a) 2-Cyano-2-(l,3-dioxolan-2-yl)-methyl-bicyclo-[2,2,1]- -heptan_ 25 7,2 g norbornan-2-carbonitril omsættes med 60 mmol lithiumdiisopropylamid (fremstillet ud fra 8,2 ml diiso-propylamin og 40 ml n-butyllithium) og analogt med eksempel la med 7 g 2-brommethyl-l,3-dioxolan. Efter chromatografi 30 på kiselgel med ethylacetat/cyclohexan (1:6) som løbemiddel opnår man 8,0 g af forbindelsen i overskriften som en olie.

« 1H-NMR-data (CDCl3):cf= 4,95 (t, J=6 Hz, IH); 4.0- 3,7 (m, 4H); 2,6-2,2 (m, 2H) 2.0- 1,2 (m, 10H) ppm.

35

17 O

DK 166586 C

b) 2-Aminoethyl-2-(1,3-dioxolan-2-yl)-methyl-bicylo-[2,2,1]--heptan_ .. _ 5 8 g 2-cyanomethyl-2~(l,3-dioxolan-2-yl)-methyl-bicyclo- - [2,2,1] -heptan reduceres analogt med eksempel lb med 4,4 g lithiumaluminiumhydrid. Man opnår 6,9 g af en farveløs olie.

1H-NMR-dafca (CDC13) : cf = 4,07 (t, J = 6 Hz, IH); 10 4,0-3,6 (m, 4H); 2,6 (s, 2H); 2,4-0,7 (m, 14H) ppm.

3' c) Spiro- [bicyclo- [2,2,1] -heptan-2,3' -pyrrolin-/j ] 18

DK 166586 C

O

eksempel 2 beskrevne fremgangsmåde. Man opnår 4,35 g af forbindelsen i overskriften som et farveløst pulver.

1H-NMR-data (D20) : </= 4,3-4,0 (m, IH) ,♦ 5 3,5-3,0 (m, AB-system, 2H); 2,5-1,0 (m, 12H) ppm.

Eksempel 6

Endo-spiro- [bicyclo-[2,2,2]-octan-2,31-pyrrolidin]-51-yl-10 -carboxylsyrebenzylester-hydrochlorid_ 0,9 g endo-spiro-[bicyclo-[2,2,2]-octan-2,3'—pyrrolidin]-51-yl-carboxylsyre sættes til en ved -5°C fremstillet opløsning af 0,9 ml thionylchlorid i 9 ml benzylalkohol.

15 Efter én time ved -5°C og 18 timer ved stuetemperatur fortyndes med vand og ekstraheres med ethylacetat. Ethylace-tat-fasen tørres over magnesiumsulfat og inddampes. Benzyl-alkoholen fjernes ved højvakuum. Den olieagtige remanens udrives med diisopropylether, hvorved produktet krystalliserer. 20 Udbytte: 0,92 g, smp. 139-142°C.

35 H-NMR-data (CDC13): ^=7,3 (s, 5H)? 5,25 (s, 2H); * 4,52 (t, IH); 25 3,4 (s, 2H); 2,5-1,1 (m, 14H) ppm.

19

DK 166586 C

Eksempel 7

Exo-spiro-[bicyclo-[2,2,2]-octan-2,31-pyrrolidin]-5'-yl--carboxylsyre-benzylester-hydrochlorid_ 1,6 g exo-spiro-[bicyclo-[2,2,2]-octan-2,3’-pyrrolidin] -5' -yl-carboxylsyre forestres med 1,6 ml thionyl-chlorid og 16 ml benzylalkohol analogt med den i eksempel 6 beskrevne fremgangsmåde. Udbytte: 1,68 g, smp. 149-151°C.

^H-NMR-data (CDC1.J : <f = 7,3 (s, 5H); * «3 5.4- 5,0 (AB-system, 2H); 4,55 (t, IH); 3,35 (s, 2H); 2.4- 1,2 (m, 14H) ppm.

Eksempel 8

Spiro-[bicyclo-[2,2,1]-heptan-2,3'-pyrrolidin]-5'-yl--carboxylsyre-benzylester-hydrochlorid_ 4,3 g spiro-[bicyclo-[2,2,1]-heptan-2,31-pyrrolidin]--51-yl-carboxylsyre forestres med 43 ml thionylchlorid og 43 ml benzylalkohol analogt med den i eksempel 6 beskrevne fremgangsmåde. Udbytte: 6,7 g.

H-NMR-data (DMSO-dg) : tf = 7,4 (s, 5H) ; 5,2 (s, 2H); 4,6-4,2 (m, IH); 3,5-3,0 (m, 2H); 2,4-1,0 (m, 12H) ppm.

Massespektrum (m/e): 285 (M+, 0,1%); 150 (M -CC^Bzl, 100%). Eksempel 9 N- (l-S-CaKrbethoxy-3-phenyl-propyl) -S-alanyl-exo-spiro- [bicyclo- [2,2,2]-octan-2,3'-pyrrolidin]-5'-yl-carboxylsyre-benzylester (diastereomer A9) og N-(l-S-carbethoxy-3-phenyl--propyl)-S-alanyl-exo-spiro-[bicyclo-[2,2,2]-octan-2,31 - 20

DK 166586 C

-pyrrolidin]-5-yl-R-carboxylsyrebenzylester (diastereomer B9)_ 1,6 g af den i eksempel 7 angivne benzylester opløses sammen med 1,39 g N- (l-S-caifoethoxy-3-phenyl-propyl) -S-ala-nin, 0,59 g 1-hydroxygenzotriazol og 0,66 ml N-ethyl-morpholin i 15 ml absolut dimethylformamid. 1,08 g dicyclohexylcarbodiimid tilsættes og omrøres i 2 timer ved stuetemperatur. Bundfaldet filtreres fra, filtratet fortyndes med ethylacetat, vaskes én gang med 10%'s citronsyreopløsning, IN natriumhydrogencarbonatopløsning, vand og en mættet kogsaltopløsning, tørres over natriumsulfat og inddampes. Chromatografi af råproduktet på kiselgel med ethylacetat/cyclohexan (1:2) som løbemittel giver de to forbindelser i overskriften.

Diastereomer A9: R^-værdi 0,26 (ethylacetat/cyclohexan 1:1) ^H-NMR-data (CDC1J'· <f = 7,3 (s, 5H); 7,15 (s, 5H); * 5,15 (AB-system, 2H); 4,55 (X-del af et ABX-system, IH); 4.2 (s, 2H)j 3,7-3,1 (m, 3H); 2,9-2,4 (m, 2H); 2,3-1,0 (m, 18H); 1.2 (d+t, 6H) ppm.

f

Massespektrum (m/c): 560 (M+, 1%), 487 (4%) 355 (3%), 234 (100%).

21 O

DK 166586 C

Diastereomer B9: R^-værdi 0,20 (ethylacetat/cyclohexan 1:1) 1H-NMR-data (CDC13): cT= 7,3 (s, 5H); 7,15 (s, 5H); 5 10 5.2 (s, 2H)* 4,6-4,0 (m, 4H); 3.8- 3,0 (m, 4H) ; 2.9- 1,0 (m, 18H); 1.2 (d+t, 6H) ppm.

Massespektrum (m/e): 560 (M+, 1%); 487 (4%); 355 (3%), 348 (5%); 234 (100%).

15 Eksempel 10 N-(l-S-Carbethoxy-3-phenyl-propyl)-S-alanyl-endo-spiro-[bi-cyclo-[2,2,2]-octan-2,31-pyrrolidin]-51-yl-(RS)-carboxyl-syrebenzylester_ 20 0,91 g af den i eksempel 6 angivne benzylester omsættes med 0,8 g N-(l-S-carbethoxy-3-phenyl-propyl)-S-alanin, 0,34 g 1-hydroxybenzotriazol, 0,38 ml N-ethylmorpholin og 0,62 g dicyclohexylcarbodiimid på den i eksempel 9 beskrevne måde. Chromatografi på kiselgel' med ethylacetat/cyclohexan (1:2) 25 som løbemiddel giver 0,96 g af forbindelsen i overskriften som diastereomerblanding.

^H-NMR-data (CDC13) : = 7,3 (s, 5H); 7,15 (s, 5H) ; 30 . 5,2 (s, 2H); 4,7-4,0 (m, 3H); 3,6-3,0 (m, 4H); 2,9-2,4 (m, 2H); 2,4-1,0 (m, 24H) ppm.

35 22

DK 166586 C

Eksempel 11 N-(l-S-Carbethoxy-3-phenyl-propyl)-S-alanyl-spiro-[bi-cyclo-[2,2,1]-heptan-2,3'-pyrrolidin]-5'-yl-carboxylsyre- benzylester_ 5 (Diastereomere A 11 til C 11) 2,0 g af den i eksempel 8 angivne benzylester omsættes med 1,83 g N-(l-S-carbethoxy-3-phenyl-propyl)-S-alanin, 0,78 g 10 1-hydroxybenzotriazol, 0,87 ml itf-ethylmorpholin såvel som 1,43 g dicyclohexylcarbodiimid på den i eksempel 9 beskrevne måde. Ved chromatografi på 'kiselgel. med ethylacetat/cyclo-hexan som løbemiddel kan tre fraktioner opdeles.

15 Diastereomer A 11 (0,28 g) R^-værdi (ethylacetat/cyclohexan 1:1) 0,36 1H-NMR-data (CDCl3):/= 7,3 (s, 5H); 7.15 (s, 5H); pn 5.2 (AB-system, 2H); 4.6- 3,9 (m, 4H); 3.6- 3,0 (m, 4H); * 2,9-2,6 (m, 2H); 2.4- 1,0 (m, 22H) ppm. 25

Diastereomer B 11 (0,89 g) Rf-værdi (ethylacetat/cyclohexan 1:1) 0,32 1H-NMR-data (CDC13):<T= 7,3 (s, 5.H) ; 7.15 (s, 5H); 5.15 (AB-system, 2H)? 4,55 (X-del af et ABX-system, 2H); 4.2 (q, 2H); 4.4- 4,0 (m, IH)} 3.7- 3,0 (m, 4H); 2,9-2,5 (m, 2H) ; 2.4- 1,0 (m, 22H) ppm.

35 23

DK 166586 C

Diastereomer C 11 (0,86 g) R^-værdi (ethylacetat/cyclohexan 1:1) 0,29 1H-NMR-data (CDC13) </*= 7,3 (s, 5H) ; 7,15 (s, 5H); 5,2 (s, 2H); 4.7- 4,0 (m, 4H); 3.8- 3,1 (m, 4H); 2.9- 2,5 (m, 2H); 2,4-1,0 (m, 22H) ppm.

Eksempel 12 N-(l-S-Carbethoxy-3-phenyl-propyl)-S-alanyl-exo-spiro-[bi-cyclo-[2,2,2]-octan-2,3'-pyrrolidin]-5'-yl-S-carboxylsyre-hydrochlorid_ 553 mg af den i eksempel 9 angivne diastereomer A 9 opløses i 50 ml ethanol og hydrogeneres efter tilsætning af 0,3 g R>d/C (10%) ved stuetemperatur og normaltryk. Efter filtrering indstilles på en sur pH-værdi med 2,5N etha-nolisk saltsyre, inddampes og udrives med isopropylether.

Man opnår 0,42 g af forbindelsen i overskriften med smp. 128-130°C (sønderdeling).

1H-NMR-data (DMS0-d6) : <f= 7,25 (s, 5H) ; 4,6-3,0 (m, 7H); 3.0- 2,0 (m, 2H); 2.0- 1,0 (m, 24H) ppm.

IR-Data (KBr): 3400, 2930, 2860, 1740, 1650, 1500, 1220, 750, 700 cm

Eksempel 13 N-(l-S-Carbethoxy-3-phenyl-propyl)-S-alanyl-exo-spiro--[bicyclo-[2,2,2]-octan-2,3'-pyrrolidin]-5'-yl-R-carboxyl-syrehydrochlorid_

24 O

DK 166586 C

0,62 g af den i eksempel 9 angivne diastereomer B 9 hydrogeneres ifølge den i eksempel 12 beskrevne fremgangsmåde. Man opnår 0,41 g af den i overskriften angivne forbindelse med smp. 120°C (sønderdeling).

5 10 1H-NMR-data (DI\fS0-d6) : </= 7,25 (s, 5H) ; 4,6-3,0 (m, 7H); 3,3-2,0 (m, 2H); 2,0-1,0 (m, 18H); 1,2 (d+t, 6H) ppm.

IR-data (KBr): 3400, 2930, 2860, 1740, 1650, 1500, 1225, 750, 700 cm 15 Eksempel 14 N-(l-S-Carbethoxy-3-phenyl-propyl)-S-alanyl-endo-spiro-[bi-cyclo-[2,2,2]-octan-2,3’-pyrrolidin]-5'-yl-(RS)-carboxylsyre-hydrochlorid_________ 20 0,94 g af forbindelsen i eksempel 10 hydrogeneres ifølge den i eksempel 12 beskrevne fremgangsmåde. Man opnår 0,7 g af forbindelsen i overskriften med smp. 186-189°C (sønderdeling) .

* 25 1H-NMR-data (DMS0-d6): /= 7,2 (s, 5H) ; 4,6-3,1 (m, 7H); 3.0- 2,0 (m, 2H); 2.0- 1,0 (m, 18H); 1,2 (d+t, 6H) ppm.

30 IR-data (K3r): 3420, 2930, 2860, 1740, 1653, 1545, 1500, 1208, 750, 705 cm'1.

Massespektrum (m/e) : 470 (M+, 0,01%); 452 (i^-E^O) , 16%), 348 (100%), 302 (47%), 263 (16%).

35 25.

DK 166586 C

Eksempel 15

Endo-spiro-[bicyclo-[2,2,2]-octan-2,3'-pyrrolidin]-5'-yl--carboxylsyre-tert.butylesterhydrochlorid_

Til en til -10°C afkølet opløsning af 1,3 g af den i feksempel 2 angivne aminosyre sættes i 12 ml dioxan 1 ml koncentreret svovlsyre og 6 g isobutylen. Efter opvarmning i en autoklav til 25°C omrøres i 20 timer ved denne temperatur. Blandingen -hældes i iskoldt 50%'s natriumhydroxid, og man ekstraherer med methylenchlorid.

De forenede organiske faser vaskes med vand, tørres med natriumsulfat, remanensen opløses i ether, og gasformigt hydrogenchlorid ledes ind. Man opnår 0,95 g af forbindelsen i overskriften.

1H-NMR-data (DMSO~d6) : cf= 4,0-3,5 (m, IH); 3,2-2,6 (s, 2H); 2,0-1,1 (m, 14H); 1,3 (s, 9H) ppm.

Eksempel 16

Exo-spiro-[bicyclo-[2,2,2]-octan-2,31-pyrrolidin]-5'-yl- -carboxylsyre-tert.butylesterhydrochlorid_ *

Fremstillet ud fra 0,7 g af den i eksempel 3 angivne aminosyre på den i eksempel 15 beskrevne måde. Man opnår 0,6 g af forbindelsen i overskriften.

•’-H-NMR-data (DMS0-d6) : = 3,9-3,5 (m, IH); 3,2-2,6 (m, IH); 2,0-1,1 (m, 14H); 1,3 (s, 9H) ppm.

Eksempel 17

Spiro-[bicyclo-[2,2,1]-heptan-2,3'-pyrrolidin]-5'-yl--carboxylsyre-tert.butylesterhydrochlorid_

Fremstillet ud fra 0,6 g af aminosyren i eksempel 5 26

DK 166586 C

efter den i eksempel. 15 beskrevne fremgangsmåde. Man opnår 0,52 g af forbindelsen i overskriften.

1H-NMR-data (DMSO-d6) : /= 3,8-3,5 (m, IH)? 3,2-2,5 (m, IH)? 2,0-1,1 (m, 12H)? 1,3 (s, 9H) ppm.

Eksempel 18 N-(1-S-(Carbethoxy-3-phenyl-propyl)-S-alanyl-endo-spiro-[bi-cyclo-[2,2,2]-octan-2,3'-pyrrolidin]-51-yl-S-carboxylsyre--tert.butylester_ (Diastereomer A 18)

Analogt med fremgangsmåden i eksempel 9 opnår man ud fra 0,58 g af den i eksempel 15 angivne tert. buty lester, 0,57 g N-(l-S-carbethoxy-3-phenyl-propyl)-S-alanin, 0,27 g N-hydroxybenzotriazol såvel som 0,41 g dicyclohexylcarbo-diimid under tilsætning af 0,23 g N-ethylmorpholin 0,28 g af forbindelsen i overskriften som en farveløs olie.

1H-NMR-data (CDCl.^) : <f = 7,1 (s, 5H) ? 4,5-4,1 (m, IH)? 4.2 (g, J = 7Hz, 2H) ? 3,9-1,9 (m, 22H)? 1.3 (s, 9H)? 1,2 (d+t, J = 7H2, 6H) ppm.

Eksempel 19 N-(l-S-Carbethoxy-3-phenyl-propyl)-S-alanyl-endo-spiro--[bicyclo-[2,2,2]-octan-2,31-pyrrolidin]-51-yl-S-carboxyl- syrehydrochlorid_ 0,28 g af den i eksempel 18 angivne tert.butylester opløses i lfc5 ml trifluoreddikesyre og omrøres ved 0°C i 3 timer. Trifluoreddikesyren afdampes i vakuum, toluen tilsættes, og der inddampes endnu en gang. Efter filtrering over en kort kiselgelsøjle med methylenchlorid/ethanol (10:1) som 27

DK 166586 C

O

løbemiddel indstilles på en sur pH-værdi med ethanolisk saltsyre og inddampes. Efter opløsning i en smule methy-lenchlorid udfældes forbindelsen i overskriften med diiso-propylether. Man opnår 0,21 g, identisk med forbindelsen i 5 eksempel 12.

Eksempel 20 N-(l-S-Carboxy-3-phenyl-propyl)-S-alanyl-exo-spiro-[bi-cyclo-[2,2,2]-octan-2,31-pyrrolidin]-51-yl-S-carboxylsyre 10

En opløsning af 0,25 g af forbindelsen i eksempel 12 i 2 ml vand blandes med to ækvivalenter kaliumhydroxid og et 10%'s overskud af 4N kaliumhydroxidopløsning. Efter 8 timers omrøring ved 20 til 25°C indstilles reaktionsopløs-15 ningen med 2N saltsyre på en pH-værdi på 4 og inddampes i vakuum.*Man optager remanensen i ethylacetat og filtrerer det udskilte salt fra. Ethylacetatopløsningen inddampes, remanensen udrives med diisopropylether og frasuges.

20 1H-NMR-data (DMSO-d6): /= 7,1 (s, 5H); 4.4- 4,0 (m, IH); 3.9- 1,3 (m, 22H); 1.2 (d, 3H) ppm.

25 Eksempel 21 N-(l-S-Carboxy-3-phenyl-propyl)-S-alanyl-endo-spiro-[bicy-clo-[2,2,2]-octan-2,3 *-pyrrolidin]-51-yl-(RS)-carboxylsyre 0,32 g af forbindelsen i eksempel 14 omsættes på den i 30 eksempel 20 beskrevne måde.

35 H-NMR-data (DMSO-d6) : <f= 7,15 (s, 5H) ; 4.4- 3,9 (m, IH); 3.9- 1,3 (m, 22H); 1.2 (d, 3H) ppm.

28

DK 166586 C

O

Eksempel 22 N-(l-S-Carbethoxy-3-phenyl-propyl)-S-alanyl-spiro-[bicy-clo- [2,2,1]-heptan-2,3'-pyrrolidin]-51-yl-carboxylsyre- hydrochlorld__________________ 5 (Diastereomere A 22 til C 22)

Diastereomere A 11 til C 11 i eksempel 11 hydrogeneres på den i eksempel 12 beskrevne måde. Man opnår 10 de frie carboxylsyrer.

Diastereomer A 22 0,17 g. Smp. 189°C (sønderdeling) 1H-NMR-data (DMS0-d6) : cf = 7,2 (s, 5H) ? 15 ‘ 4,6-3,0- (m, 7H); 3.0- 2,0 (m, 2H); 2.1- 1,0 (m, 22H) ppm.

Diastereomer B 22 0,79 g. Smp. 126°C (sønderdeling) 20 1H-NMR-data (DMS0-d6) : <f = 7,2 (s,'5H); 4,5-3,1 (m, 7H); 3.1- 2,0 (m, 2H); 2.2- 1,0 (m, 22H) ppm. 25

Diastereomer C 22 0,63 g. Smp. 125°C (sønderdeling) "Sl-NMR-data (DMSO-d6) : = 7,15 (s, 5H) ? 4,5-3,1 (m, 7H)? 30 3,0-2,0 (m, 2H); 2,2-1,0 (m, 22H) ppm.

Eksempel 23 N-(l-S-Carbethoxy-3-phenyl-3-oxo-propyl)-S-alanyl-exo-spiro--[bicyclo-[2,2,2]-octan-2,3'-pyrrolidin]-51-yl-S-carboxyl-syre-tert.butylester_ 29

DK 166586 C

0,28 g af den i eksempel 16 angivne tert.butylester opløses sammen med 0,14 g 1-hydroxybenzotriazol, 0,29 g N-(l-S--carbethoxy-3-phenyl-3-oxo-propyl)-S-alanin, 0,22 g dicyclohexylcarbodiimid og 0,12 g N-ethylmorpholin i 3 ml DMF og omrøres i 3 timer ved 20°C. Efter fortynding med ethylacetat filtreres, vaskes to gange med vand, tørres og inddampes. Remanensen chromatograferes på kiselgel med cy-clohexan/éthylacetat (1:1) som løbemiddel. Man opnår 0,16 g af forbindelsen i overskriften.

1H-NMR-data (CDCl3):<f= 8,2-7,1 (m, 5H) ; 4.7- 4,1 (m, IH); 4.1 (q, 2H); 3.9- 1,3 (m, 20H); 1,3 (s, 9H); 1.2 (d+t, 6H) ppm.

Eksempel 24 N-(l-S-Carbethoxy-3-phenyl-3-oxo-propyl)-S-alanyl-endo--spiro-[bicyclo-[2,2,2]-octan-2,3'-pyrrolidin]-5'-yl-S--carboxylsyre-tert♦butylester_ 0,28 g af den i eksempel 15 angivne tert.butylester omsættes på den i eksempel 23 angivne måde. Man opnår 0,18 g af forbindelsen i overskriften.

1H-NMR-data (CDC13): /= 8,2-7,2 (m, 5H); 4.7- 4,1 (m, IH); 4,15 (q, 2H); 3.9- 1,2 (m, 20H); 1.3 (s, 9H); 1,2 (d+t, 6H) ppm.

Eksempel 25 N-(l-S-Carbethoxy-3-phenyl-3-oxo-propyl)-S-alanyl-spiro--[bicyclo- [2,2,1]-heptan-2,3'-pyrrolidin]-5'-yl-S-carboxyl-syre-tert.butylester________ 30

DK 166586 C

O

0,27 g af den i eksempel 17 angivne te'rt.butyiester omsættes på den i eksempel 23 angivne måde.

1H-iSMR-data (CDC13)<f = 8,1-7,2 (m, 5H) ; 5 4,7-4,0 (m, IH)} 4.1 (g, 2H); 3,9-1,2 (m, 18H); 1/3 (s, 9H)j 1.2 (d+t, 6H) ppm.

10

Eksempel 26 N-(l-S-Carbethoxy-3-phenyl-3-oxo-propyl)-S-alanyl-exo--spiro-[bicyclo-[2,2,2]-octan-2,3'-pyrrolidin]-5'-yl- -S-carboxylsyrehydrochlorid___ 15 0,12 g af forbindelsen i eksempel 23 omsættes på den i eksempel 19 beskrevne måde til 0,1 g af forbindelsen i overskriften.

20 1H-NMR-data (DMSO-d6) : tf = 8,2-7,1 (m, 5H) f 4,7-4,1 (m, IH)? 4.1 (q, 2H); 3,9-1,3 (m, 20H); 1.2 (d+t, 6H) ppm.

25

Eksempel 27 N~(l-S-Carbethoxy-3-phenyl-3-oxo-propyl)-S-alanyl-endo--spiro-[bicyclo-[2,2,2]-octan-2,31-pyrrolidin]-5*-yl-S- -carboxylsyrehydrochlorid_ 30 0,14 g af forbindelsen i eksempel 24 omsættes analogt med den i eksempel 19 beskrevne fremgangsmåde til 0,11 g af forbindelsen i overskriften.

35 31

DK 166586 C

1H-NMR-data (DMS0-d6):/ = 8,2-7,1 (m, 5H); 4,7-4,1 (m, IH); 4.1 ((3, 2H); 3,9-1,3 (m, 20H); 1.2 (d+t, 6H) ppm.

Eksempel 28 N-(l-S-Carbethoxy-3-phenyl-3-oxo-propyl)-S-alanyl-spiro--[bicyclo-[2,2,1]-heptan-2,31-pyrrolidin]-51-yl-S-carbo-xylsyrehydrochlorid____ 0,23 g af forbindelsen i eksempel 25 omsættes analogt med den i eksempel 19 beskrevne fremgangsmåde til 0,19 g af forbindelsen i overskriften.

1H-NMR-dafca (DMSO-d6) : 8,2-7,1 (m, 5H); 4.7- 4,1 (m, IH); 4.2 (q, 2H); 3.8- 1,2 (m, 18H); 1.2 (d+t, 6H) ppm.

Eksempel 2*9 S-Alanyl-exo-spiro-[bicyclo-[2,2,2]-octan-2,3'-pyrrolidin] -51-yl-carboxylsyre-tert.butylester___ a) N-Methylsulfonylethyloxycarbonyl (MSC)-S-alanyl--exo-spiro-[bicyclo-[2,2,2]-octan-2,31-pyrrolidin]-5'-yl--carboxyls‘yre-ter t ♦ butylester________

Til en opløsning af 10 g MSC-Ala-OH i 50 ml dimethyl-formamid sættes 6,7 g 1-hydroxybenzotriazol og 16,0 g exo-spiro-[bicyclo-[2,2,2]-octan-2,3'-pyrrolidin]-5'-yl--carboxylsyre-tert.butylester. pH-Værdien indstilles på 8,0 med SJ-ethylmorpholin. Blandingen afkøles i et isbad og blandes med 10,5 g dicyclohexylcarbodiimid. Man omrører i 15 timer ved 20-25°C. Det udfældede urinstof frasuges, filtratet inddampes i vakuum og optages i ethylacetat. Den organiske 32

DK 166586 C

fase vaskes successivt med en kaliumhydrogensulfat-, kaliumhydrogencarbonat- og natriumchloridopløsning, tørres og inddampes. Remanensen chromatograferes på kiselgel med ethylacetat/cyclohexan 1:1. Udbytte: 10 g.

1H-NMR-data (CDC13) : <f= 4,8-3,8 (m, 2H) , 3.8- 3,1 (m, 8H) ; 3,0 (s, 3H); 2.9- 1,2 (m, 14H); 1/4 (s, 9H); 1,2 (d, 3H) ppm.

b) S-Alanyl-exo-spiro-[bicyclo-[2,2,2]-octan-2, 3' - -pyrrolidin]-51-yl-carboxylsyre-tert.butylester_ • 2,0 g af forbindelsen i eksempel 29 a opløses i 15 ml methanol og 1,5 ml vand. Der indstilles til en pH-værdi på 13 med 2N natriumhydroxidopløsning, og der omrøres i 2 timer ved stuetemperatur. Derefter neutraliseres med 2N saltsyre, methanolet afdampes i vakuum, den vandige fase ekstraheres med ethylacetat, ethylacetatopløsningen vaskes med vand, tørres og inddampes. Remanensen filtreres over kiselgel med ethylacetat som elueringsmiddel. Udbytte: 0,8 g.

H-NMR-data (CDC13)= 4,7-4,2 (m, IH) j 3.9- 3,3 (m, 3H); 2.9- 1,2 (m, 19H); 1,4 (s, 9H); 1,2 (d, 3H) ppm.

Eksempel 30 N-(l-S-Carbethoxy-3-oxo-3-phenyl-propyl)-S-alanyl-exo--spiro-[bicyclo- [2,2,2]-octan-2,31-pyrrolidin]-5'-yl--carboxylsyre-tert. butylester______ 33

DK 166586 C

5 mmol af forbindelsen i eksempel 29 b opløses sammen med 5 mmol 3-benzoyl-acrylsyreethylester og 5 dråber triethylamin i 50 ml vandfrit ethanol, og blandingen omrøres i 24 timer ved 20 til 25°C. Der inddampes til tørhed/ og remanensen optages i ethylacetat. Nu vaskes der med vand, tørres og inddampes. Diastereomerblandingen chromatograferes på kiselgel· med ethylacetat/cyclohexan som elueringsmiddel. "^H-NMR-data stemmer overens med de for forbindelsen i eksempel 23 angivne data.

Eksempel 31 N-(l-S-Carbethoxy-3-phenyl-propyl)-S-alanyl-exo-spiro-[bi-cyclo-[2,2,2]-octan-2,3'-pyrrolidin]-5’-yl-S-carboxylsyre--tert.butylester_ 5 mmol af forbindelsen i eksempel 29 b opløses i 15 ml vandfrit ethanol. Opløsningen indstilles til en pH-værdi på 7,0 med ethanolisk kaliumhydroxid, og der tilsættes 0,7 g pulveriseret molekylsigte (4 Å) og derpå 5mmol 2-keto-4-phenyl-smørsyreethylester. Der tildryppes en opløsning af 0,6 g natriumcyanborhydrid i 6 ml vandfrit ethanol. Efter en reaktionstid på 20 timer ved 20 til 25°C filtreres opløsningen, og opløsningsmidlet afdestilleres. Remanensen optages i ethylacetat/vand. Efter inddampning af ethylacetatfaserne chromatograferes remanensen på kiselgel med ethylacetat/cyclohexan 1:4.

^H-NMR-data stemmer overens med de for forbindelsen i eksempel 18 angivne data.

Eksempel 32 N-(l-S-Carbethoxy-3-phenyl-3-oxo-propyl)-S-alanyl-exo-spiro-- [bicyclo-*[2,2,2] -octan-2,3' -pyrrolidin] -5' -y 1-S-carboxylsyre--tert.butylester_ 10 mmol acetophenol, 10 mmol glyoxylsyreetnylester og 10 mmol af forbindelsen i eksempel 23 b opvarmes i 30 ml iseddike i 36 timer til 45°C. Efter inddampning i vakuum indstilles 34

DK 166586 C

natriuracarbonatopløsningen på en neutral pH-værdi og ekstraheres med ethylacetat. Ethylacetatfasen inddampes og chromatograferes på kiselgel med ethylacetat/cyclo-hexan 1:1 som elueringsmiddel.

5 NMR-data stemmer overens med de for forbindelsen i eksempel 23 angivne data.

Eksempel 33 N-(l-S-Carbethoxy-3-R,S-hydroxy-3-phenyl-propyl)-S-alanyl-10 -exo-spiro-[bicyclo-[2,2,2]-octan-2,3'-pyrrolidin]-5'- -yl-S-carboxylsyre_ 0,5 g af forbindelsen i eksempel 23 opløses i 5 ml vandigt ethanol, og der tilsættes 0,1 g natriumborhydrid.

15 Der omrøres i 14 timer ved stuetemperatur. Derefter blandes med ethylacetat, ethylacetatopløsningen vaskes med vand, tørres og^inddampes. Råproduktet filtreres over kiselgel med ethylacetat/methanol 9:1 som elueringsmiddel.

Udbytte: 0,3 g.

20 dH-NMR-data (DMS0-d6) : <f = 7,3-6,9 (m, 5H) ; 5,4 (t, IH); 4,7-4,2 (m, IH); 3,9-1,3 (m, 20H); 25 1,3 (d+t, 6H) ppm.

35

Claims

35 DK 166586 C PATENTKRAV.

1. Spirocycliske aminosyrederivater, kendetegnet ved at de har formlen (I) /CH,_Z *

hvori m er 1 eller 2, n er 1, R er hydrogen eller (¾ til C4)-alkyl, R1 er hydrogen, (C^ til C3)-alkyl eller 4-amino-butyl, R2 er hydrogen, (C^ til C4)-alkyl eller benzyl, Y og Z er begge hydrogen, eller Y og Z er tilsammen oxygen, og X er phenyl, samt deres fysiologisk acceptable salte.

2. Aminosyrederivat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at de med en stjerne markerede C-atomer hver især har S-konfiguration.

3. Aminosyrederivat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at R er hydrogen, R1 er methyl, R2 er hydrogen eller ethyl, og de chirale, med en stjerne (*) markerede C-atomer har S-konfiguration.

4. Fremgangsmåde til fremstilling af aminosyrederivater ifølge et hvilket helst af kravene 1 til 4, k e n -detegnet ved, at a) man omsætter en forbindelse med formlen II Y H02C-CH-NH-CH-(CH2)n-C-X R co2R 2 Z (II) 36 DK 166586 C hvori n, R1, R2, X, Y og Z har de i krav 1 angivne betydninger, med en forbindelse med formlen III

I I * COOW r

\ H (III) hvori m er 1 eller 2, og W er hydrogen eller en surt eller hydrogenolytisk fraspaltelig gruppe, og derpå eventuelt eller om nødvendigt fraspalter W og eventuelt fraspalter R2 under dannelse af frie carboxygrupper, eller at man b) til fremstilling af forbindelserne med formlen I, hvori Y og Z tilsammen betyder oxygen, b^) omsætter en forbindelse med formlen IV

0 R (IV) hvori m og R1 har de i krav 1 angivne betydninger, og W har den ovenfor angivne betydning, med en forbindelse med formlen V (V) r2o2c-ch=ch-co-x hvori R2 og X har de i krav 1 angivne betydninger, og derpå eventuelt eller om nødvendigt fraspalter W og eventuelt fraspalter R2 under dannelse af frie carboxygrupper, eller 37 DK 166586 C b2) omsætter en forbindelse med den under b^) angivne formel IV med en forbindelse med den almene formel VI 0HC-C02R2 (VI) hvori R2 har den i krav 1 angivne betydning, og med en forbindelse med den almene formel VII X-CO-CH3 (VII) hvori X har den i krav 1 angivne betydning, og derpå eventuelt eller om nødvendigt fraspalter W og eventuelt fraspalter R2 under dannelse af frie carboxygrupper, eller c) at man til fremstilling af forbindelser med formlen I, hvori Y og Z hver især betyder hydrogen, omsætter en forbindelse med den under b^J angivne formel IV med en forbindelse med formlen VIII C0oR2 / 2 o = c (VIII) N*CH2-CH2-X hvori R2 og X har de i krav l angivne betydninger, reducerer de opnåede Schiff-baser og derpå eventuelt eller om nødvendigt fraspalter W og eventuelt fraspalter R2 under dannelse af frie carboxygrupper, og eventuelt overfører de under a) til c) opnåede forbindelser med formlen I, hvori R betyder hydrogen, til estere med formlen I, hvori R betyder (¾ til C4)-alkyl, og eventuelt overfører forbindelserne med formlen I til et fysiologisk acceptabelt salt deraf.

5. Anvendelse af et aminosyrederivat ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 3 til fremstilling af et lægemiddel. DK 166586 C 38

6. Aminosyrederivat ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 3 til anvendelse som lægemiddel.

7. Lægemiddel, kendetegnet ved, at det indeholder et aminosyrederivat ifølge et hvilket som helst 5 af kravene 1 til 3.

8. Lægemiddel, kendetegnet ved, at det indeholder et aminosyrederivat ifølge et hvilket som helst af kravene 1 til 3 i kombination med et diuretikum.

9. Anvendelse af et aminosyrederivat ifølge et hvilket 10 som helst af kravene 1 til 3 i kombination med et diuretikum som lægemiddel.