DK165983B - Fremgangsmaade til fremstilling af phosphorholdige antibiotiske forbindelser betegnet cl 1565-a, cl 1565-b og cl 1565-t eller farmaceutisk acceptable salte deraf - Google Patents
Fremgangsmaade til fremstilling af phosphorholdige antibiotiske forbindelser betegnet cl 1565-a, cl 1565-b og cl 1565-t eller farmaceutisk acceptable salte deraf Download PDFInfo
- Publication number
- DK165983B DK165983B DK075683A DK75683A DK165983B DK 165983 B DK165983 B DK 165983B DK 075683 A DK075683 A DK 075683A DK 75683 A DK75683 A DK 75683A DK 165983 B DK165983 B DK 165983B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- spectrum
- parts per
- per million
- magnetic resonance
- tms
- Prior art date
Links
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 title claims description 34
- MQLGXVOINDPKQT-BVOZHDEJSA-N [(1e,7e,9e,11e)-3,6-dihydroxy-3-methyl-1-(6-oxo-2,3-dihydropyran-2-yl)trideca-1,7,9,11-tetraen-4-yl] dihydrogen phosphate Chemical compound C\C=C\C=C\C=C\C(O)CC(OP(O)(O)=O)C(C)(O)\C=C\C1CC=CC(=O)O1 MQLGXVOINDPKQT-BVOZHDEJSA-N 0.000 title claims description 30
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 title claims description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 4
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 title description 3
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 title description 3
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 title description 2
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 title description 2
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 54
- IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M potassium bromide Chemical compound [K+].[Br-] IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 20
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 claims description 18
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 claims description 16
- CZDYPVPMEAXLPK-UHFFFAOYSA-N tetramethylsilane Chemical compound C[Si](C)(C)C CZDYPVPMEAXLPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 claims description 14
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 13
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 12
- 230000009102 absorption Effects 0.000 claims description 11
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 claims description 10
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 8
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 claims description 6
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 5
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 5
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 5
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 4
- 241000187180 Streptomyces sp. Species 0.000 claims description 3
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 claims description 2
- 229910018828 PO3H2 Inorganic materials 0.000 claims 1
- 238000005452 bending Methods 0.000 claims 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 31
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 31
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 17
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 16
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 15
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 15
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 13
- 239000000047 product Substances 0.000 description 13
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 10
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 10
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 8
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 8
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 8
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 5
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 5
- 235000010216 calcium carbonate Nutrition 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 5
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 5
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- TVZRAEYQIKYCPH-UHFFFAOYSA-N 3-(trimethylsilyl)propane-1-sulfonic acid Chemical compound C[Si](C)(C)CCCS(O)(=O)=O TVZRAEYQIKYCPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 4
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 4
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 4
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 4
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 4
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 4
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 4
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 4
- XBUIKNRVGYFSHL-IAVQPKKASA-M sodium;[(1e,3r,4r,6r,7z,9z,11e)-3,6,13-trihydroxy-3-methyl-1-[(2r)-6-oxo-2,3-dihydropyran-2-yl]trideca-1,7,9,11-tetraen-4-yl] hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OC/C=C/C=C\C=C/[C@H](O)C[C@@H](OP(O)([O-])=O)[C@@](O)(C)\C=C\[C@H]1CC=CC(=O)O1 XBUIKNRVGYFSHL-IAVQPKKASA-M 0.000 description 4
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K tripotassium phosphate Chemical compound [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 3
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- 208000028018 Lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 3
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 3
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 3
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 3
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 3
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 3
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 230000005917 in vivo anti-tumor Effects 0.000 description 3
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 3
- 208000003747 lymphoid leukemia Diseases 0.000 description 3
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 2
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 2
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 2
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 2
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 2
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 description 2
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 2
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 2
- PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M sodium ascorbate Substances [Na+].OC[C@@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RKJRWTFHSA-M 0.000 description 2
- 235000010378 sodium ascorbate Nutrition 0.000 description 2
- 229960005055 sodium ascorbate Drugs 0.000 description 2
- PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M sodium-L-ascorbate Chemical compound [Na+].OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1[O-] PPASLZSBLFJQEF-RXSVEWSESA-M 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- OSNSWKAZFASRNG-WNFIKIDCSA-N (2s,3r,4s,5s,6r)-6-(hydroxymethyl)oxane-2,3,4,5-tetrol;hydrate Chemical compound O.OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O OSNSWKAZFASRNG-WNFIKIDCSA-N 0.000 description 1
- 235000017060 Arachis glabrata Nutrition 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- 235000010777 Arachis hypogaea Nutrition 0.000 description 1
- 235000018262 Arachis monticola Nutrition 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical group [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 241001530809 Hamigera avellanea Species 0.000 description 1
- 241001149669 Hanseniaspora Species 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000223253 Rhodotorula glutinis Species 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 239000006096 absorbing agent Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 238000010564 aerobic fermentation Methods 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 238000010936 aqueous wash Methods 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000003245 coal Substances 0.000 description 1
- GVPFVAHMJGGAJG-UHFFFAOYSA-L cobalt dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Co+2] GVPFVAHMJGGAJG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 1
- ZMQRJWIYMXZORG-DSWNLJKISA-N fostriecin Chemical compound OC/C=C/C=C\C=C/[C@H](O)C[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@](O)(C)\C=C\[C@H]1CC=CC(=O)O1 ZMQRJWIYMXZORG-DSWNLJKISA-N 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 159000000003 magnesium salts Chemical class 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 150000004682 monohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 229920000151 polyglycol Polymers 0.000 description 1
- 239000010695 polyglycol Substances 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000002787 reinforcement Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 238000010898 silica gel chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000021309 simple sugar Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- JNYIQRMXGCWKOU-UHFFFAOYSA-M sodium methanol chloride Chemical compound [Na+].[Cl-].OC JNYIQRMXGCWKOU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- HWEXKRHYVOGVDA-UHFFFAOYSA-M sodium;3-trimethylsilylpropane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].C[Si](C)(C)CCCS([O-])(=O)=O HWEXKRHYVOGVDA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000008247 solid mixture Substances 0.000 description 1
- 238000010563 solid-state fermentation Methods 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000010414 supernatant solution Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 125000003698 tetramethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L zinc sulfate Chemical compound [Zn+2].[O-]S([O-])(=O)=O NWONKYPBYAMBJT-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960001763 zinc sulfate Drugs 0.000 description 1
- 229910000368 zinc sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
- C07F9/02—Phosphorus compounds
- C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
- C07F9/655—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having oxygen atoms, with or without sulfur, selenium, or tellurium atoms, as the only ring hetero atoms
- C07F9/6552—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having oxygen atoms, with or without sulfur, selenium, or tellurium atoms, as the only ring hetero atoms the oxygen atom being part of a six-membered ring
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/06—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using actinomycetales
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/02—Oxygen as only ring hetero atoms
- C12P17/06—Oxygen as only ring hetero atoms containing a six-membered hetero ring, e.g. fluorescein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
i
DK 165983 B
Den foreliggende opfindelse angår en særlig fremgangsmåde til fremstilling af phosphorholdige antibiotiske forbindelser betegnet CL 1565-A, CL 1565-B og CL 1565-T med strukturformlerne henholdsvis 1, 2a og 2b S
CH3 oh
O CH=CH-C-CH-CH2-CH-CH=CH-CH=CH-CH=CH-CH2OH
1° po3h2
1, CL 1565-A
15 r/V*1 J I P3 f 2 O ^\CH=CH^C -CHrCH0 -rCH-rCH=CH-CH=CH-CH=CH-CH 0 20 hA^ p°3h2
2a, R1 = R2 = H; CL 1565-B
2b, R1 = R2 = OH; CL 1565-T 25 eller farmaceutisk acceptable salte deraf, idet natriumsaltet af forbindelsen CL 1565-A har følgende fysiske data: 30 (a) et ultraviolet absorptionsspektrum i MeOH med en Xmax på 268 nm (a = 805) med bøjninger ved 259 opg 278 nm 1 (b) et infrarødt spektrum i kaliumbromid med hovedabsorptio-35 ner ved: 3400, 1710, 1630, 1420, 1387, 1260, 1155, 1090, 1060, 975, 920, 820 og 775 cm“lf
DK 165983 B
2 (c) en optisk drejning, [<x]q = + 28,2° (1,0% i 0,1M pH 7 phos-phatpuffer), (d) et massespektrum (via hurtigt atombombardement) med m/z 5 toppe ved 475 og 453, (e) et 360 MHz protonmagnetisk resonansspektrum i D2O med hovedsignaler ved (s = singlet, d = dublet, t = triplet, m = multiplet) 1,29 s (3H), 1,58 t (IH), 1,70 m (IH), 2,49 - 10 2,58 m (2H), 4,13 - 4,18 m (3H), 4,86 t (IH), 5,09 m (IH), 5,53 t (IH), 5,9 - 6,0 m (4H), 6,14 t (IH), 6,32 t (IH), 6,55 t (IH), 6,75 dd (IH) og 7,09 m (IH) parts per million nedfelt fra tetramethylsilan (TMS), 15 (f) et 13C-kernemagnetisk resonansspektrum i D2O med hovedsig naler ved: 168.4 79,5 149,8 79,0 138.1 75,6 20 135,0 64,4 134.4 62,7 131.3 39,4 127.4 29,7 126.7 23,5 parts per million nedfelt 25 124,9 fra tetramethyls i 1 an 124.8 120.1 idet natriumsaltet af forbindelsen CL 1565-T har følgende 30 fysiske data: (a) et ultraviolet absorptionsspektrum i MeOH med en Xmax 268 nm (a = 774) og bøjningr ved 260 og 278 nm, 35 (b) et infrarødt absorptionsspektrum i kaliumbromid med hovedabsorptioner ved: 3400, 1715, 1630, 1380, 1260, 1090, 970, 830 og 770 cm”l.
DK 165983B
3 (c) et masssespektrum via hurtigt atombombardement med en m/z top ved 491, (d) et 360 MHz protonmagnetisk resonansspektrum i D2O med 5 hovedabsorptioner ved (s = singlet, d = dublet, t 1 triplet, m = multiplet) 1,30 s (3H), 1,55 - 1,64 m (IH), 1,73 t (IH), 4,13 -4,20 m (IH), 4,16 d (2H), 4,34 dd (IH), 4,94 t (IH), 5,09 dd (IH), 5,55 t (IH), 5,89 - 6,06 m (3H), 6,16 m 1(J (2H), 6,36 t (IH), 6,56 t (IH), 6,76 dd'(lH) og 7,14 dd (IH) parts per million nedfelt fra TMS, (e) et 90,4 MHz 13C-kernemagneti sk resonansspektrum i D2O:
15 I I
Top nr. Kemisk skift . Top nr. Kemisk skift 1 24,10 11 126,91 2 41,60 12 127,18 ΛΛ 3 64,68 13 128,99 20 4 64,90 14 133,36 5 66,67 15 136,87 6 78,28 16 137,23 7 79,81 17 142,27 25 8 84,33 18 149,46 9 124,40 19 169,66 10 126,21 3q 1 parts per million nedfelt fra TMS.
og idet natriumsaltet af forbindelsen CL 1565-B har følgende fysiske data: 25 (a) et ultraviolet absorptionsspektrum i MeOH med en 4
DK 165983 B
Xmax på 267 nm (a = 805) med bøjninger ved 259 og 257 nm, 5 (b) et infrarødt absorptionsspektrum i kaliumbromid med hovedabsorptioner ved: 1720, 1640, 1385, 1200, 1060, 970 og 820 cm"l,
10 (c) et 360 MHz protonmagnetisk resonansspektrum i D2O
med hovedsignaler ved (s = singlet, d = dublet, t = triplet, m = multiplet) 1,32 S (3H), 1,58 t (IH), 1,72 t (IH), 1,79 d (3H), 2,45 - 2,68 m (2H), 4,15 t (IH), 4,89 t 15 (IH), 5,10 m (IH), 5,49 t (IH), 5,83 - 6,21 m (6H), 6,50 - 6,64 m (2H), 7,06 - 7,13 m (IH) parts per million nedfelt fra TMS, (d) et 90,4 MHz 13C-kernemagnetisk resonansspektrum i 20 D2O:
Top nr. Kemisk skift Top nr. Kemisk skift 25 1 20,70 11 127,24 2 25,06 12 129,47 3 31,91 13 129,90 4 41,85 14 134,66 5 66,85 15 135,94 3Q 6 77,87 16 136,67 7 80,87 17 140,42 8 81,64 18 152,01 9 122,41 19 170,56 10 124,45 1 35
parts per million nedfelt fra TMS
DK 165983B
5 .hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at man dyrker mikroorganismen Streptomyces sp. ATCC 31906 aerobt i et medium bestående af kilder for carbon, nitrogen, mineraler og vækstfaktorer, indtil en betydelig mængde CL 1565-forbindelse eller 5 -forbindelser er dannet, og herefter isolerer en eller flere af forbindelserne i fri syre- eller saltform.
Fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse er således en fermenteringsproces, der gør brug af en stamme af Strepto-10 myces sp., isolat ATCC 31906, til fremstilling af nævnte CL 1565-forbi ndelser.
Strukturformlerne 1, 2a og 2b for henholdsvis CL 5165-A, CL 1565-B og CL 1565-T er den bedste illustration af opbygningen 15 af disse forbi ndel ser, så vidt det er opfinderne bekendt på indleveringsdagen for nærværende ansøgning. Man nåede frem til formlerne ved sammenligning af de fysiske og spektrale karakteristika ved CL 1565-A, -B og -T og visse derivater deraf.
2o Den til opfindelsens formål egnede stamme af Streptomyces blev fundet i en jordprøve, der opsamledes i Sao Paulo, Brasilien. Organisme blev isoleret fra jordprøven ved anvendelse af et egnet agar-pletteringsonedium. Et eksempel på et sådant medium er et medium indeholdende salte, såsom kaliumphosphat, mag-25 nesiumsulfat og ferrosulfat, samt carbonsubstrater, såsom glycerol og asparagin. Jorden blev forbehandlet med calcium— carbonat, før den blev pletteret på agarmediet og inkuberet ved en gunstig temperatur, især 24°C, for at muliggøre udviklingen af jordmikroorganismerne.
30
Den isolerede organisme er en uidentificeret stamme af Streptomyces og er i henhold til Budapesttraktatet blevet deponeret hos the American Type Culture Collection, Rockville, Maryland 20852, og den opbevares i den permanente kultursamling som 35
DK 165983 B
6 ATCC 31906. Denne organisme, der producerer forbindelserne CL 1565-A, CL 1565-B og CL 1565-T, opbevares som en hvilende kultur i lyofile rør, kryogene glas og i jordrør hos the Warner-Lambert/Parke-Davis Culture Laboratory og betegnes som isolat 5 WP-426.
Antisvulstforbindelsen CL 1565-A og de nært beslægtede forbindelser CL 1565-B og CL 1565-T produceres af isolat WP-426 under aerob fermentering under kontrollerede betingelser. Fer-jq menteringsmediet består af kilder for carbon, nitrogen, mineraler og vækstfaktorer. Eksempler på carbonkilder er forskellige simple sukkerarter, såsom cerelose, mannose, fructose, xylose, ribose og glycerol, eller andre carbohydratholdige forbindelser, såsom dextrin, stivelse, majsmel og valle. Den 15 normale mængde af carbonki1derne varierer fra 0,1 til 10 vægt%.
Nitrogenkilderne er organiske, uorganiske eller blandet orga-nisk-uorganiske af natur. Eksempler på sådanne forbindelser 2o er mel af bomuldsfrø, soyabønnemel, mel af majsspirer, majsstøbevæske, bærme (distillers solubles), jordnøddemel, pepto-niseret mælk og forskellige ammoniumsalte. Den normale mængde varierer fra 0,1 til 5%, men større mængder er også acceptable.
25
Inkorporering af mineraler og vækstfaktorer i fermenteringsmediet er også gunstigt for produktionen af forbindelserne CL 1565-A, CL 1565-B og CL 1565-T. Eksempler på mediumbestand-dele, der tilvejebringer mineraler, er kaliumphosphat, natri-30 umchlorid, ferrosulfat, calciumcarbonat, kobaltchlorid og zinksulfat. Kilderne for vækstfaktorer indbefatter forskellige gærarter og mælkeprodukter.
Den foretrukne fremgangsmåde til fremstilling af forbi ndelser-35 ne CL 1565-A, CL 1565-B og CL 1565-T består i neddykket kul- 7
DK 165983 B
turfermentering. Fermenteringsingredienser fremstilles hensigtsmæssigt i opløsning og steriliseres ved autoklavering eller dampopvarmning. Det vandige mediums pH-værdi ligger fortrinsvis mellem 4 og 8. Fermenteringsmediet køles til en pas-5 sende temperatur mellem 16 og 45°C og podes derpå med den pågældende kultur. Fermentering udføres under luftning og omrøring, og den maksimale produktion af forbindelserne CL 1565-A, CL 1565-B og CL 1565-T nås sædvanligvis i løbet af 2 til 10 dage. Fermentering i fast tilstand kan også benyttes til frem-10 stilling af forbindelserne CL 1565-A, CL 1565-B og CL 1565-T.
Ved metoden til neddykket dyrkning udføres fermentering i rystekolbe eller i stationære fermenteringsbeholdere. I rystekolber frembringes luftning ved hjælp af bevægelse af kolber-15 ne, hvilket forårsager blanding af mediet med luft. I de stationære fermenteringsbeholdere tilvejebringes omrøring eller bevægelse ved hjælp af skovle eller vinger i form af pladeturbiner, turbineskovle, åbne turbiner eller skibspropellere. Luftning foretages ved indblæsning af luft eller oxygen i fer-2q menteringsblandingen.
De følgende eksempler illustrerer de foretrukne metoder, ved hjælp af hvilke forbindelserne CL 1565-A, CL 1565-B og CL 1565-T produceres.
25
Eksempel 1
Podeudvikl inq og rystekolbefermenter inq 3Q Kulturen af Streptomycesorganismen ATCC 31906 i sit hviletrin overføres til en CIM-23 skråagar og inkuberes i 7 - 14 dage ved 2 8e C. En portion af den mikrobielle vækst fra skråagaren benyttes til podning af et 18 x 150 mm poderør indeholdende 15 mm ARM 1550 podemedium. Poderøret rystes ved 24eC i 3 - 4 da- 35 9e-
DK 165983 B
• 8 CIM 23 skråagar "Amidex" majsstivelse 10 g N-Z amin, type A 2 g Kødekstrakt (Difco) 1 g Gærekstrakt (Difco) 1 g
Cobaltochlorid, 6 ^0 0,020 g
Agar 20 g
Destilleret vand 1000 ml 10 ARM 1550 medium % "Bacto"-gærekstrakt (Difco) 0,5
Glucose, monohydrat 0,1
Opløselig stivelse (Difco) 2,4 j5 "Bacto"-trypton (Difco) 0,5 "Bacto"-kødekstrakt (Difco) 0,3
CaC03 0,2
Bemærkning; Indstil pH-yaardien på 7,5 med NaOH før tilsætning af CaCO,.
20 J
En portion (1 ml) af den mikrobielle vækst overføres fra poderøret til en 300 ml Erlenmeyer-koble til skvulperystning indeholdende 50 ml SM 64 produktionsmedium. Den podede kolbe inkuberes ved 24°C i 5 dage under rystning ved anvendelse af 25 en rotationsryster (amplitude 5 cm), der var indstillet på 180 omdrejning/min. Fermenteringsvæsken er efter fem dages fermentering brun af farve, mycelierne er granulære af udseende, og fermenteringsvæskens pB-yærdi er ca. 5,5.
30 SM 64 produktionsmedium
Valle (Kroger Dairy) 35,'0. volumen%
Dextrin ("Amidex" B411),
American Maize 1,5 yægt% "Pharmamedia" (Traders Pro- 35 tein) 431307 1,5 vægt%
Destilleret vand
Bemærkning; Indstil pH til 6,5 med natriumhydroxid.
9
DK 165983 B
Fermenteringsvæsken indeholdende forbindelserne CL 1565-A, CL 1565-B og CL 1565-T afprøves i en 1:100 fortynding overfor L1210 museleukæmiceller in vitro. En 0-50% vakst af celler sammenlignet med en L1210 cellekontrol betragtes som angiven-5 de aktivitet, idet 0% er den mest aktive. Cytotoksiciteten af to eksperimentelle rystekolbefermenteringer var:
Cytotoksicitet (% vækst)
Kolbe nr. Ovenstående væske Frysetørret 10 I. 28 14 II. 17 30
De ovennævnte fermenteringsvæsker blev også afprøvet overfor flere mikroorganismer ved anvendelse af agar-plademetoden.
15 Den rå væske viste sig at være aktiv overfor Neisseria catar= rhalis 03596, Staphylococcus aureus 02482, Bacillus subtilis 04555, Kloeckera brevis M1378, Rhodotorula glutinis M1384, Saccharomyces cerevisiae 01525 og Penicillium avellaneum M2988.
20 Eksempel 2
Fermentering i 760 liter fermenter inasbeholdere
Podeudviklinq 25
Et kryogent glas indeholdende ca. 1 ml kultursuspension benyttes som kilde for podestof. Indholdet i det kryogene glas optøs og overføres aseptisk til en 2 liter Erlenmeyer-skvulpe-kolbe indeholdende 500 ml SD-05 podemedium. Den podede kolbe 30 inkuberes i 46-48 timer ved 24eC på en rotationsryster med en hastighed på 130 omdrejninger/min.
35
DK 165983B
10 SD-05 podemedium % "Amberex" 1003 (Amber Labs) 0f5
Glucosemonohydrat (Cerelose) 0,1
Dextrin-,,Amidex" B411 (Corn Products) 2,4 5 N-Z Case (Humko Sheffield) 0,5
Sprøjtetørrede opløselige stoffer fra kød (Daylin Labs) 0,3
CaC03 '0,2
Destilleret vand 10 Efter 48 timer overføres podekolbens indhold aseptisk til en 30 liter rustfri stålfermenteringsbeholder indeholdende 16 liter SD-05 podemedium. Den podede fermenteringsbeholder inkuberes i 18-24 timer ved 24°C, omrørt ved 300 omdrejninger/min. og indblæses luft med en hastighed på 1 WM. Denne mikrobiel-15 le vækst benyttes til podning af 760 liter produktionsfermenteringsbeholderen .
Produkt ions f ermen tering sbehoIdere
En 760 liter fermenteringsbeholder, der indeholder 608 liter SM 64, steriliseres ved opvarmning med damp til 121°C i 40 min. 20 Mediet køles til 24°C og podes derpå med ca. 16 liter af den mikrobielle væske fra 30 liter podefermenteringsbeholderen.
Det podede medium lades fermentere i fem til syv dage ved 24°C, bevægelse med 190 omdrejninger/min., og indblæses 1 WM luft. Antiskummidler, Dow Corning' "C" og polyglycol P-2000, benyt-25 tes til bekæmpelse af skumning.
Produktionen af CL 1565-A og de to beslægtede antisvulst-antibiotika, CL 1565-B og 1565-T, måles under fermen teringscyklen ved registrering af fermenteringsparametre, såsom pH og % sedimentation eller vækst, samt ved hjælp af in 30 vitro afprøvninger mod L1210 museleukæmiceller og en højtryksvæskekromatografisk procedure, der beskrives i det følgende.
Et eksempel på en fermenteringsprofil i en 760 liter fermenteringsbeholder er vist i den følgende tabel.
DK 165983B
π % Mikrogram
Fermenterings- sedimenta- % vækst af L1210 celler CL 1565-A/ml tid (timer) pH tion (vakst) 1:100 1:300 1:1000 (HELC-analyse) 0 6,0 0 - - - 5 12 5,8 3,6 24 5,1 13,3 NA*
36 5,15 14,7 NA
48 5,35 19,3 NA NA NA
72 5,45 22,0 NA NA NA 3-6 10 96 5,95 24,7 18,2 52,9 NA 10-20 118 7,65 43,3 0 30,2 NA 50-65 132 7,80 39,3 0 23,9 NA 60-65 142 7,90 40,0 0 17,2 NA 60-70 NA* = ikke aktiv 15 Denne fermenteringsbeholder blev høstet efter 142 timers fermentering med et høstvolumen på 532 liter.
Isolation af CL 1565-A Eksempel 3
Den høstede væske fra ovennævnte fermentering blev blandet 20 med 34 kg "Celite" 545 og filtreret gennem en filterpresse med plade og ramme. Filtratet (473 liter) blev perkoleret gennem en 30,5 cm [O.D.] søjle indeholdende 120 liter HP-20 harpiks (Gillies International, Inc., La Jolla, Californien). Harpiksen blev derpå vasket med vand (605 liter) og 90:10 25 vand:methanol (170 liter). Hovedparten af forbindelsen CL 1565-A blev derpå elueret fra harpiksen med 80:20 vand:methanol. Højtryks-væskekromatografianalyser (HPLC), udført på den ovenfor beskrevne måde, af de resulterende-eluater viste følgende eluerings-profil.
30 80:20 vand:methanol-eluat g Cl 1565-A
nr. 1 = 340 liter < 2 g nr. 2 = 340 liter 11,5 g nr. 3 = 340 liter 7,0 g
DK 165983 B
12
Eluaterne nr. 2 og nr. 3 blev separat inddampet og lyofiliseret til opnåelse af henholdsvis 90,2 g og 78,7 g mørkebrunt fast stof. Disse produkter blev kombineret og opløst i 3 liter vand. Den resulterende opløsning blev sat til 27 liter methanol un-5 der omrøring. Efter henstand natten over ved 5°C blev blandingen filtreret, og præcipitatet blev vasket med 5 liter methanol. Filtratet og vaskevæskerne blev kombineret, inddampet i vakuum og lyofiliseret til opnåelse af 104,5 g af et fast stof. En del af dette produkt (95 g) i 1,5 liter vand blev langsomt un-10 der blanding sat til 17 liter 1-propanol. Efter en time filtreredes den resulterende blanding, og præcipitatet vaskedes med 2 liter 1-propanol. Filtratet og vaskevæskerne blev kombineret, inddampet og lyofiliseret til opnåelse af 57 g af et fast stof, som ifølge HPLC-analyse indeholdt ca. 15 g CL 1565-A.
15 Dette produkt blev kromatograferet i mængder på ca. 15 g på 1,2 liter 40 ym C^g-silicagel (Analytichem International, Inc., Harbor City, Californien) indeholdt i en 7,6 cm [O.D.] søjle. Det benyttede elueringsmiddel var 0,005 M pH 4,5 ammoniumace-tatpuffer efterfulgt af 0,005 M pH 4,5 ammoniumacetat indehol-20 dende 5% acetonitril. De opsamlede fraktioner blev analyseret ved hjælp af HPLC. Fraktionerne indeholdende CL 1565-A blev kombineret, inddampet og lyofiliseret. En portion (570 mg) af det resulterende produkt blev rekromatograferet ved anvendelse af et Prep LC/system 500 apparat forsynet med en "Prep-Pak"-25 500/C^g-søjle (Waters Instruments, Inc., Milford, Massachusetts) og 0,1 M pH 6,5 phosphatpuffer indeholdende 10% acetonitril som elueringsmiddel. Hovedfraktionerne indeholdende ca. 375 mg CL 1565-A blev kombineret og inddampet i vakuum. Den vandige opløsning blev ført gennem en søjle indeholdende HP-20 harpiks, 30 der var pakket i vand. Harpiksen blev derpå vasket med ‘1400 ml vand, og på søjlen tilbageværende CL 1565-A blev elueret med 350 ml 50% methanol. Eluatet blev inddampet i vakuum og ført gennem en søjle indeholdende 35 ml ”Dowex"-50 X2 (Na+) . Afgangsvæsken (pH 5,5) og en vandig vaskeyæske fra harpiksen 35 blev kombineret og lyofiliseret til opnåelse af 180 mg renset
DK 165983 B
13
Cl 1565-A, isoleret som et natriumsalt.
Analyse af dette produkt viser, at det indeholder ca. 1,3 mol natrium pr. 1,0 mol fri CL· 1565-A stamsyre. Som følge af at de frie syrer (CL 1565-A, CL 1565-B og CL 1565-T) er labile, 5 foretrækkes det at isolere de frie CL 1565 syreforbindelser i saltform, såsom i form af natriumsalt, fortrinsvis som salte indeholdende fra ca. 1,0 til ca. 2,0 mol natrium pr. 1,0 mol fri syre.
Eksempel 4 10 Filtreret fermenteringsvæske (719 liter), der var fremstillet på samme måde som ovenfor beskrevet, blev ført gennem 31 liter "Dowex"-l x 2 (chloridform) pakket i en 30,5 cm [O.D.] søjle. Afgangsstrømmen og den påfølgende vandige vaskevæske indeholdt ikke påviselige mængder af CL 1565-kompo-15 nenterne. Hele den her beskrevne fraktionering blev målt ved hjælp af den nedenfor beskrevne HPLC-metode under anvendelse af 0,1M phosphatpuffer (Na+)-acetonitril (88:12) som opløsningsmiddelsystem. "Dowex"-l harpiksen blev derpå elueret med 1M natriumchlorid-methnol (1:1), og eluatet blev derpå 20 opsamlet i to» fraktioner på 10 liter og seks fraktioner på 15 liter. Hovedparten af CL 1565-A-, CL 1565-B-og CL 1565-T-komponenterne og yderligere mindre mængder CL 1565-komponenter forekom i eluaterne to til seks. Disse fraktioner blev kombineret og fortyndet med 246 liter acetone. Den resulterende 25 blanding blev opbevaret ved 5°C natten over. Den klare oven på stående opløsning blev fjernet og inddampet til 16 liter i vakuum. Lyofilisering af dette koncentrat resulterende i 800 g af et fast stof. Dette produkt (140 g) blev sat til 552 g af et lignende produkt, der var isoleret på samme måde, 30 og de kombinerede faste stoffer blev opløst i 20 liter vand.
Den resulterende opløsning (pH 6,0). blev kromatograferet på 50 liter HP-20 harpiks indeholdt i en 15 cm [O.D.] søjle. Eluering af HP"20-søjlen med 175 liter vand fjernede hovedpar-
DK 165983 B
14 ten af CL 1565-T og hele den .mindre mængde mere polære CL-1565-komponenter. Hovedparten af CL 1565-A-komponenten blev elueret med 100 liter methanol-vand (15:85) , medens CL 1565-B og den resterende mængde CL 1565-A blev elueret med 83 liter 5 methanol-vand (50:50). Eluaterne indeholdende den største mængde CL 1565-A blev kombineret, inddampet og lyofiliseret til opnåelse af 123 g af et fast stof, som ifølge HPLC-analyse indeholdt ca. 110 g CL 1565-A.
En portion på 75 g af dette produkt blev opløst i 2 liter 1Q 0,05M pH 6,0 phosphatpuffer og yderligere renset ved hjælp af kromatografi på 52 liter (25 kg) 100 ym C^g omvendt fase silicagel (Analytichem International, Inc., Harbor City, Californien), der var pakket i 0,05M pH 6,8 phosphatpuffer (Na+) i en 15 cm [O.D.] søjle. Søjlen blev fremkaldt med 0,05M 15 phosphatpuffer indeholdende stigende mængder (4,0-6,5%) aceto-nitril. De første fraktioner indeholdt primært CL 1565-T og yderligere mindre mængder mere polære CL 1565-komponenter. Størstedelen af CL 1565-A-komponenten blev elueret i efterfølgende fraktioner. Fraktionerne indeholdende CL 1565-A 20 som den eneste UV-absorberende komponent blev kombineret og inddampet i vakuum til 20 liter. Dette koncentrat blev opbevaret natten over ved 5°C, og det udfældede uorganiske salt blev filtreret fra. Filtratet blev derpå fyldt på en 15 cm [O.D.] søjle indeholdende 28 liter HP-20 harpiks. Harpiksen 25 blev vasket med vand (66 liter) , og CL 1565*^Α blev derpå elueret med 42 liter methanol-vand (50:50). Eluaterne indeholdende størstedelen af CL 1565-A mængden blev kombineret (26 liter), inddampet og lyofiliseret til opnåelse af 34 g CL 1565-A indeholdende nogle uorganiske urenheder. De uorga-3Q niske urenheder kan fjernes ved opløsning af produktet i methanol (ved 50 til 100 mg/ml), frafiltrering af alt uopløseligt materiale og omdannelse af filtratet til en vandig opløsning ved kontinuerlig tilsætning af vand til filtratet, således som det foreligger ved inddampning i vakuum. Afslut-25 tende rensning af CL 1565-A foretages ved hjælp af kromatografi af det resulterende vandige koncentrat på HP»-20 harpiks.
15
DK 165983 B
Isolation af yderligere CL 1565-komponenter
Omhyggelig kromatografi af koncentraterne opnået fra CL 1565 fermenteringsvæsker på C^g-silicagel eller HP-20 harpiks resulterer i fraktioner, der indeholder andre CL 1565-komponen-5 ter end CL 1565-A. Mere end seks forbindelser påvises ved hjælp af HPLC og er beslægtet med CL 1565-A på basis af lignende ultraviolette absorptionsspektre. To af disse komponenter, nemlig CL 1565-B og CL 1565-T blev isoleret som i det væsentlige rene forbindelser. CL 1565-komponenterne A, B og 10 T kan let skelnes ved hjælp af HPLC på en p"Bondapak"-C1g-silicagelsøjle (3,9 mm I.D. x 30 cm) ved anvendelse af 0,05M - 0,10M phosphatpuffere indeholdende varierende mængder acetonitril ved en strømningshastighed på 1,5 ml/min. samt påvisning ved hjælp af ultraviolet absorption ved 254 nm. Ty- 15 piske retentionstider for CL 1565-A, tB og -T under anvendelse af ovennævnte HPLC-betingelser er anført i den efterfølgende tabel.
Retentionstid (min.) i: dbe Ard
Opløsningsmiddel A Opløsningsmiddel B
20 CL 1565-T 2,8 < 1,5 CL 1565-A 4,3 <1,5 CL 1565-B > 15 * 0,05M pH 7,4 phosphatpuffer-acetonitril (87:13)
AA
0,05M pH 7,4 phosphatpuffer-acetonitril (78:22) 25 Rå fermenteringsvæsker kan analyseres på den ovennævnte måde, med mindre det benyttede opløsningsmiddel er 0,1M pH 6,8 phosphatpuffer-acetonitril (88:12). I dette tilfælde er retentionstiderne for CL 1565-i-T, CL 1565-A.og CL 1565-B henholdsvis ca. 2,7, 5,0 og > 12 min. ved en strømningshastighed på 2 ml/min.
30 CL 1565-T elueres tidligere end CL 1565-A fra HP-20 harpiks og fra omvendt fase silicagel. Den kan isoleres fra de første
DK 165983 B
16 fraktioner fra C^g-silicagelsøjlen beskreyet i ovennævnte eksempel 4 under anvendelse af HP-20 harpiks.
CL 1565-B elueres langsommere end CL 1565-A fra HP-20 harpiks og fra omvendt fase silicagel. CL 1565-B elueres med 50% metha-5 nol under HP-20 kromatografien af det rå "Dowex"-l produkt beskrevet i eksempel 4. Denne komponent kan bedst isoleres ved hjælp af rekromatografi på HP-20 efterfulgt af kromatografi på 40 pm C^g-silicagel under anvendelse af i det væsentlige den samme procedure som beskrevet for rensningen af CL 1565-A.
10 På tegningen viser fig. 1 en afbildning af det ultraviolette absorptionsspektrum i MeOH for CL 1565-A,natriumsalt, fig. 2 en afbildning af det infrarøde absorptionsspektrum i KBr af CL 1565-A,natriumsalt, 15 fig. 3 en afbildning af det 360 MHz protonmagnetiske resonansspektrum i D2O for CL 1565-A, natriumsalt, og fig. 4 en afbildning af det 13C-kernemagnetiske resonansspektrum i D2O af CL 1565-A, natriumsalt.
CL 1565-A, natriumsalts egenskaber 20 Ultraviolet-absorptionsspektrum i MeOH (fig, 1)
Xmax 268 nm (a1 = 805) med bøjninger ved 259 og 278 nm.
Infrarødt absorptionsspektrum i KBr (fig. 2)
Hovedabsorptioner ved: 34Q0, 1710, 1630, 1420, 1387, 1260, 1155, 1090, 1060, 975, 920, 820 og 775 cm"1.
25 Optisk drejning 23 [a]p = + 28,2® (1,0% i 0,1M pH 7 phosphatpuffer).
DK 165983B
17
Grunds to f analyse
%C %H %Na %P
Beregnet for C19H27 7O2.0Nal 3P: 47'84 5,86 6,27 6,49
Fundet : 48,01 5,88 6,05 6,3 5 Massespektrum (via hurtigt atombombardement)
Beregnet for £ci9H25Na209P+H·*+ = m/z 475 lC19H26Na °9P+h1+ = m/z 453 Fundet: m/z 475, 453.
360 MHz protonmagnetisk resonans spektrum i D20 (fig. 3) 10 Hovedsignaler ved: (s = singlet, d = dublet, t = triplet, m - multiplet).
1,29 s (3H), 1,58 t (IH), l/70 m (IH), 2,49-2,58 m (2H), 4,13-4,18 m (3H), 4,86 t (IH), 5,09 m (IH), 5,53 t (IH), 5,9-6,0 m (4H), 6,14 t (IH), 6,32 t (IH), 6,55 t (IH), 15 6,75 dd (IH) og 7,09 m (IH) parts pr. million nedfelt (down- field) fra natrium-2,2-dimethyl-2-silapentan-5-sulfonat (DSS).
13C-kernemagnetisk resonansspektrum i D20 (fig. 4).
Hovedsignaler ved:
Top nr. Top nr.
20 1 168,4 12 79,5 2 149,8 13 79,0 3 138,1 14 75,6 4 135,0 15 64,4 5 134,4 16 62,7 25 6 131,3 17 39,4 7 127,4 .18 29,7 8 126,7 19 23,5 parts pr. million 9 124,9 nedfelt fra 10 124,8 tetramethylsilan 30 11 120,1 (TMS)
Det 31P-kernemagnetiske resonansspektrum i ϋ£θ udviser en dublet (J = 10 Hz) ved 0,504 ppm nedfelt fra 85% phosphor- syre.
18
DK 165983 B
Høj tryksvæskekromatografi 5 Søjle: p"Bondapak" C^g-silicagel (3,9 mm I.D. x 30 cm)
Opløsningsmiddel: 0,005M pH 7,3 riatriumphosphatpuffer-aceto- nitril (90:10)
Strømnings·^ 10 hastighed: 2 ml/min.
Påvisning: Ultraviolet absorption ved 254 nm
Retentions-tid: 2,8 min.
Antisvampevirkning.
15 Papir skiver (diameter 12,7 mm) imprægneret med en vandig opløsning indeholdende 500 pg CL 1565-A/ml blev placeret på et lag agar, der var podet med de nævnte mikroorganismer. Efter inkubation natten over ved 28°C observeredes følgende inhi-beringszoner: 20 Organisme Zonediameter
Saccharomyces cerevisiae 25 mm
Saccharomyces italicus - 17 mm
Saccharomycoides ludwigii 25 mm
In vitro -virkning af CL 1565-A mod L1210 leukæmiceller 25 ID50 = ^»078 pg/ml
In vivo antisvulstvirkning af Cl 1565-A mod P388 lymfeleukæmi hos mus
DK 165983B
19
Dosis _T/C* x 100_ mg/kg/dag forsøg 1 forsøg 2 forsøg 3 25 - 174 17 255 248 5 12,5 - - 150 8,5 256 209 6.3 - - 142 4.3 170 172 2,1 173 157 10 1,1 170 139 * T/C - miådeloverlevelsestid for behandlede mus ^ middeloverlevelsestid for kontrolmus
Den benyttede forsøgsmetode er baseret på den i Cancer Che-mother. Reports 3:1-87 (del 3), 1972, beskrevne.
Egenskaber ved CL 1565-T, natriumsalt 15 Ultraviolet absorptionsspektrum i MeOH
Næsten identisk med fig. 1 med a^ = 774 ved Imax 268 nm og bøjninger ved 260 og 278 nm.
Infrarødt absorptionsspektrum i KBr
Hovedabsorptioner ved: 3400, 1715, 1630, 1380, 1260, 1090, 20 970, 830 og 770 cm"1.
Massespektrum (via hurtigt atombombardement)
Beregnet for tcigH25Na20loP+H^+ = m/z 491 Fundet: ra/z 491.
360 MHz protonmagnetisk resonansspektrum i D20.
25 ΙΗ-NMR-spektret for CL 1565-T minder meget om 1H-NMR-spektret for CL 1565-A med den undtagelse, at førstnævnte spektrum udviser et karakteristisk et protonsignal, der fremkommer som en dublet af dubletter ved 4,34 ppm, og mangler nogen som helst signaler mellem 2,2 og 3,2 ppm nedfelt fra DSS.
DK 165983 B
20
Hovedsignaler for CL 1565-T natriumsalt er ved: (s = singlet, d = dublet, t = triplet, m = multiplet) 1,30 s (3H), 1,55-1,64 m (IH), 1,73 t (IH), 4,13-4,20 m (IH), 4,16 d (2H), 4,34 dd (IH), 4,94 t (IH), 5,09 dd (IH) , 5 5,55 t (IH), 5,89-6,06 m (3H), 6,16 m (2H, 6,36 t (IH), 6,56 t (IH), 6,76 dd (IH), 7,14 dd (IH) parts per million nedfelt fra DSS.
90,4 MHz 13C-kernemagnetisk resonansspektrum i D2O:
Se φ
Top nr. .Kemisk skift Top nr. -Kemisk skift 10 1 24,10 11 126,91 2 41,60 12 127,18 3 64,68 13 128,99 4 64,90 14 133,36 5 66,67 . 15 136,87 15 6 78,28 16 137,23 7 79,81 17 142,27 8 84,33 . 18 149,46 9 124,40 19 169,66 10 126,21
20 parts per million nedfelt fra TMS
In vivo antisvulstvirkning af CL 1565 mod P388 lymfeleukæmi hos mus
Dosis T/C x 100 mg/kg/dag 25 25,0 157 12,5 147 6,3 142 3,1 147
DK 165983B
21
Egenskaber ved CL 1565-B, natriumsalt Ultraviolet absorptionsspektrum i MeOH
Amax 267 nm (a^ = 805) med bøjninger ved 259 og 277 nm.
Infrarødt absorptionsspektrum i KBr 5 Hovedabsorptioner ved: 1720, 1640, 1385, 1200, 1060, 970 og 820 cm 360 MHz protonmagnetisk resonansspektrum i D2O Hovedsignaler ved : (s = singlet, d = dublet, t = triplet, m = multiplet) 10 1,32 s (3H), 1,58 t (IH), 1,72 t (IH), 1,79 d (3H), 2,45-2,68 m (2H), 4,15 t (IH), 4,89 t (IH), 5,10 m (IH), 5,49 t (IH), 5,83-6,21 m (6H), 6,50-6,64 m (2H), 7,06-7,13 m (IH) parts per million nedfelt fra DSS.
90,4 MHz 13C-kernemagnetisk resonans spektrum i t _ *“ " ~ ~ I ~~ 15 Top nr. Kemisk skift Top nr. Kemisk skift 1 20,70 11 127,24 2 25,06 12 129,47 3 31,91 13 129,90 4 41,85 14 134,66 20 5 66,85 15 135,94 6 77,87 16 136,67 7 80,87 17 140,42 8 81,64 18 152,01 9 122,41 19 170,56 25 10 124,45
* parts per million nedfelt fra TMS
In vivo antisvulstvirkning af CL 1565—B mod P388 lymfeleukæmi hos mus
OK 165983 B
22
Dosis T/C x 100 mg/kg/dag 25,0 Toksisk 12,5 178 5 6,3 142 3,1 129
Antibiotiket CL 1565-A og forbindelserne CL 1565-B og CL 1565-T kan med hensyn til deres antimikrobielle virkning og antisvulst-virkning anvendes i form af farmaceutiske midler indeholdende 10 ethvert af de forskellige metalsalte, såsom natrium-, kalium-, calcium- eller magnesiumsaltet, og lignende salte eller i form af andre salte, såsom ammoniumsaltet eller salte dannet ud fra egnede organiske aminer. Sådanne farmaceutiske midler anvendes sammen med en dermed forligelig farmaceutisk accepta-15 bel bærer. Midlerne kan også indeholde andre aktive antimikrobielle midler og/eller antisvulstmidler. Midlerne kan bringes til at indgå i enhver farmaceutisk form, der er egnet ..til den pågældende administrationsmåde. Eksempler på sådanne midler indbefatter faste præparater til oral administration, såsom 20 tabletter, kapsler, piller, pulvere og granulater, flydende midler til topisk eller oral administration, såsom opløsninger, suspensioner, sirupper og eliksirer, samt præparater til parenteral administration, såsom sterile opløsninger, suspensioner eller emulsioner.
25 Til anvendelse som et antimikrobielt middel administreres midlerne således, at koncentrationen af aktiv bestanddel er større end den minimale inhiberende koncentration over for den pågældende organisme, der behandles.
De følgende eksempler illustrerer foretrukne farmaceutiske 30 præparater indeholdende en eller flere af forbindelserne CL 1565-A, CL 1565-B og CL 1565-T til behandling af sygdomme, især neoplastiske sygdomme
DK 165983 B
23
Eksempel A
Til parenteral anvendelse fremstilles et steril, lyofiliseret produkt, der i hver ampul indeholder 75 mg CL 1565-A, natrium-salt, ud fra opløsningen af forbindelsen (i injicerbart destil-5 leret vand).
Eksempel B
CL 1565-A, natriumsalt ........ 75 mg
Natriumascorbat ................... 33 mg
De ovennævnte komponenter anbringes i et sterilt glas. Et 10 injicerbart præparat fremstilles ved opløsning af ovennævnte blanding i en fysiologisk saltopløsning i overensstemmelse med sædvanlige procedurer. Et pufrende middel kan tilsættes efter behov.
Eksempel C
15 CL 1565-A natriumsalt (1000 mg) og natriumascorbat (440 mg) opløses i 100 ml vand. Opløsningen filtreres gennem et sterilt filter og fyldes aseptisk på forud steriliserede glas og lyofiliseres. Glassene lukkes under nitrogen med forud-steriliserede lukkeindretninger og lagres ved 5°C eller ved 20 lavere temperatur.
Andre egnede præparater kan fremstilles som beskrevet i eksempler A, B og C ovenfor under anvendelse af CL 1565-B og CL 1565-T i stedet for CL 1565-A. Til hver af forbindelserne CL 1565-A, CL 1565-B og CL 1565-T er en anbefalet dose- 25 ringsforskrift for anvendelsen som antisvulstmiddel til 2 pattedyrarter 1,0-100 mg pr m til et enkelt dagligt intravenøst behandlingsforløb.
Claims (4)
1. O CH=CH-C-CH-CH ~ -(^ H-CH=CH-CH=CH-CH=CH-CH ~ OH hUx 2 P03H2.
1, CL 1565-A 15
20 CH3 OH 0^\ 0 ^\CH=CH-i-CH-CH0-iH-CH=CH-CH=CH-CH=CH-CH0R2 4 P03H2 25 2a, R1 = R2 = H; CL 1565-B 2b, R1 = R2 = OH; CL 1565-T eller farmaceutisk acceptable salte deraf, idet natriumsaltet 30 af forbindelsen CL 1565-A har følgende fysiske data, (a) et ultraviolet absorptionsspektrum i MeOH med en Xmax på 268 nm (a = 805) med bøjninger ved 259 og 278 nm 1 35 (b) et infrarødt spektrum i kaliumbromid med hovedabsorptioner ved: 3400, 1710, 1630, 1420, 1387, 1260, 1155, 1090, 1060, 975, 920, 820 og 775 cm'l, 25 DK 165983B (c) en optisk drejning, [α]ο=+ 28,2« (1,0% i 0,1M pH 7 phos-phatpuffer), (d) et massespektrum (via hurtigt atombombardement) med m/z 5 toppe ved 475 og 453, (e) et 360 MHz protonmagnetisk resonansspektrum i D2O med hovedsignaler ved (s = singlet, d = dublet, t * triplet, m = multiplet) 1,29 s (3H), 1,58 t (IH), 1,70 m (IH), 2,49 - 10 2,58 m (2H), 4,13 - 4,18 m (3H), 4,86 t (IH), 5,09 m (IH), 5,53 t (IH), 5,9 - 6,0 m (4H), 6,14 t (IH), 6,32 t (IH), 6,55 t (IH), 6,75 dd (IH) og 7,09 m (IH) parts per million nedfelt fra tetramethylsilan (TMS), 15 (f) et 13C-kernemagnetisk resonansspektrum i D2O med hovedsig naler ved: 168.4 79,5 149,8 79,0 138.1 75,6 20 135,0 64,4 134.4 62,7 131.3 39,4 127.4 29,7 126.7 23,5 parts per million nedfelt 25 124,9 fra tetramethylsilan 124.8 120.1 idet natriumsaltet af forbindelsen CL 1565-T har følgende 30 fysiske data: (a) et ultraviolet absorptionsspektrum i MeOH med en Xmax 268 nm (a = 774) og bøjningr ved 260 og 278 nm, 35 (b) et infrarødt absorptionsspektrum i kaliumbromid med hovedabsorptioner ved: 3400, 1715, 1630, 1380, 1260, 1090, 970, 830 og 770 cm"l, 26 DK 165983 B (c) et masssespektrum via hurtigt atombombardement med en m/z top ved 491, (d) et 360 MHz protonmagnetisk resonansspektrum i D2O med 5 hovedabsorptioner ved (s = singlet, d = dublet, t = triplet, m = multiplet) 1,30 s (3H), 1,55 - 1,64 m (IH), 1,73 t (IH), 4,13 -4,20 m (IH), 4,16 d (2H), 4,34 dd (IH), 4,94 t (IH), 5,09 dd (IH), 5,55 t (IH), 5,89 - 6,0.6 m (3H) , 6,16 m 10 (2H), 6,36 t (IH), 6,56 t (IH), 6,76 dd (IH) og 7,14 dd (IH) parts per million nedfelt fra TMS, (e) et 90,4 MHz 13C-kernemagnetisk resonansspektrum i D2O: 15 - 4* i Top nr. Kemisk skift Top nr. Kemisk skift 1 24,10 11 126,91 2 41,60 12 127,18 20 3 64,68 13 128,99 4 64,90 14 133,36 5 66,67 15 136,87 6 78,28 16 137,23 7 79,81 17 142,27 25 8 84,33 18 149,46 9 124,40 19 169,66 10 126,21 30. parts per million nedfelt fra TMS. '1' og idet natriumsaltet af forbindelsen CL 1565-B har følgende fysiske data: 35 (a) et ultraviolet absorptionsspektrum i MeOH med en 27 DK 165983 B Xmax på 267 nm (a = 805) med bøjninger ved 259 og 257 nm, 5 (b) et infrarødt absorptionsspektrum i kaliumbromid med hovedabsorptioner ved: 1720, 1640, 1385, 1200, 1060, 970 og 820 cm-1, 10 (c) et 360 MHz protonmagnetisk resona'nsspektrum i D2O med hovedsignaler ved (s = singlet, d = dublet, t = triplet, m = multiplet) 1,32 s (3H), 1,58 t (IH), 1,72 t (IH), 1,79 d (3H), 2,45 - 2,68 m (2H), 4,15 t (IH), 4,89 t 15 (IH), 5,10 m (IH), 5,49 t (IH), 5,83 - 6,21 m (6H), 6,50 - 6,64 m (2H), 7,06 - 7,13 m (IH) parts per million nedfelt fra TMS, (d) et 90,4 MHz 13C-kernemagnetisk resonansspektrum i 20 020: Top nr. Kemisk skift1 Top nr. Kemisk skift1 1 20,70 11 127,24 25 2 25,06 12 129,47 3 31,91 13 129,90 4 41,85 14 134,66 5 66,85 15 135,94 6 77,87 16 136,67 30 7 80,87 17 140,42
8 I 81,64 18 152,01 9 ] 122,41 · 19 170,56 10 ! 124,45 · I i t ! i . t ! 35 parts per million nedfelt fra TMS DK 165983B 28 kendetegnet ved, at man dyrker mikroorganismen Streptomyces sp. ATCC 31906 aerobt i et medium bestående af kilder for carbon, nitrogen, mineraler og vækstfaktorer, indtil en betydelig mængde CL 1565-forbindelse eller -forbindel-5 ser er dannet, og herefter isolerer en eller flere af forbindelserne i fri syre- eller saltform. 10 15 20 25 30 35
Applications Claiming Priority (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US35170482A | 1982-02-24 | 1982-02-24 | |
| US35170482 | 1982-02-24 | ||
| US43997382A | 1982-11-08 | 1982-11-08 | |
| US43997382 | 1982-11-08 | ||
| US44754482A | 1982-12-07 | 1982-12-07 | |
| US44754482 | 1982-12-07 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK75683D0 DK75683D0 (da) | 1983-02-22 |
| DK75683A DK75683A (da) | 1983-08-25 |
| DK165983B true DK165983B (da) | 1993-02-22 |
| DK165983C DK165983C (da) | 1993-07-26 |
Family
ID=27408013
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK075683A DK165983C (da) | 1982-02-24 | 1983-02-22 | Fremgangsmaade til fremstilling af phosphorholdige antibiotiske forbindelser betegnet cl 1565-a, cl 1565-b og cl 1565-t eller farmaceutisk acceptable salte deraf |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0087021B1 (da) |
| KR (1) | KR880002688B1 (da) |
| DE (1) | DE3371997D1 (da) |
| DK (1) | DK165983C (da) |
| ES (1) | ES520015A0 (da) |
| GR (1) | GR77180B (da) |
| IE (1) | IE54287B1 (da) |
| PT (1) | PT76278B (da) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0128651A3 (en) * | 1983-05-12 | 1987-01-07 | Warner-Lambert Company | Pyranones and related compounds and methods for their production and use |
| AU574713B2 (en) * | 1983-09-12 | 1988-07-14 | Warner-Lambert Company | Cl-1957a antibiotic compound and its production |
| CA1232852A (en) * | 1983-09-12 | 1988-02-16 | Gerard C. Hokanson | Cl-1957b antibiotic compound and its production |
| ES2080068T3 (es) * | 1988-02-13 | 1996-02-01 | Suntory Ltd | Derivados de 2-piranona y su procedimiento de preparacion. |
| CN103626800A (zh) * | 2008-04-03 | 2014-03-12 | 北京华昊中天生物技术有限公司 | 福司曲星衍生物、其药用用途及制备方法 |
| CN103626801A (zh) * | 2008-04-03 | 2014-03-12 | 北京华昊中天生物技术有限公司 | 福司曲星衍生物、其药用用途及制备方法 |
| CN101550162B (zh) * | 2008-04-03 | 2015-11-25 | 北京华昊中天生物技术有限公司 | 福司曲星衍生物及其药用用途 |
| CN108773948A (zh) * | 2018-06-11 | 2018-11-09 | 佛山市顺德区唯点工业设计有限公司 | 一种环保污水高效安全治理装置 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4237053A (en) * | 1978-12-20 | 1980-12-02 | Ortho Pharmaceutical Corporation | Total synthesis of the utero-evacuant substance d,l-zoapatanol |
-
1983
- 1983-01-27 IE IE156/83A patent/IE54287B1/en not_active IP Right Cessation
- 1983-02-01 GR GR70378A patent/GR77180B/el unknown
- 1983-02-02 EP EP83100981A patent/EP0087021B1/en not_active Expired
- 1983-02-02 DE DE8383100981T patent/DE3371997D1/de not_active Expired
- 1983-02-22 DK DK075683A patent/DK165983C/da not_active IP Right Cessation
- 1983-02-23 PT PT76278A patent/PT76278B/pt unknown
- 1983-02-23 ES ES520015A patent/ES520015A0/es active Granted
- 1983-02-24 KR KR1019830000743A patent/KR880002688B1/ko not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0087021A2 (en) | 1983-08-31 |
| IE830156L (en) | 1983-08-24 |
| DE3371997D1 (en) | 1987-07-16 |
| EP0087021B1 (en) | 1987-06-10 |
| DK165983C (da) | 1993-07-26 |
| GR77180B (da) | 1984-09-11 |
| KR880002688B1 (ko) | 1988-12-20 |
| ES8403968A1 (es) | 1984-04-01 |
| ES520015A0 (es) | 1984-04-01 |
| DK75683A (da) | 1983-08-25 |
| DK75683D0 (da) | 1983-02-22 |
| PT76278B (en) | 1986-01-17 |
| IE54287B1 (en) | 1989-08-16 |
| EP0087021A3 (en) | 1985-01-09 |
| KR840003695A (ko) | 1984-09-15 |
| PT76278A (en) | 1983-03-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4530835A (en) | CL-1577 Antibiotic compounds and their production | |
| EP0182315B1 (en) | Novel antibiotic nk84-0218 pharmaceutical compositions containing it and process for the production of the same | |
| CZ390592A3 (en) | Process for preparing 4,5-dihydrogendanamycin and hydroquinone thereof and the use of such compounds | |
| IE57825B1 (en) | Bbm-2478 antibiotic complex | |
| DK165983B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af phosphorholdige antibiotiske forbindelser betegnet cl 1565-a, cl 1565-b og cl 1565-t eller farmaceutisk acceptable salte deraf | |
| EP0182152B1 (en) | Antitumor antibiotics (LL-E33288 Complex) | |
| EP0029309B1 (en) | Substances having antibiotic activity, processes for their preparation, pharmaceutical compositions containing them, their use in medicaments and microorganisms | |
| US4578383A (en) | CL 1565 antibiotic compounds | |
| US4594248A (en) | CL-1577-B4 compound, its production and use | |
| EP0345735A2 (en) | Glycoside antibiotics BU-3608D and BU-3608E | |
| EP0871638B1 (en) | Novel aminooligosaccharide derivative and process for preparing the same | |
| US5756536A (en) | Microbial transformation of taxol and cephalomannine | |
| CA1210350A (en) | Antibiotic complex producing bacterial culture | |
| EP0128651A2 (en) | Pyranones and related compounds and methods for their production and use | |
| DK149822B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af phosphonsyrederivater | |
| EP0042172B1 (en) | Antibiotic compounds, pharmaceutical compositions containing such compounds, process for production thereof | |
| US4895864A (en) | Antibiotic TAN-950A, its production and use | |
| EP0314401B1 (en) | New compound wf 2015 a and b, production thereof and use thereof | |
| US5098935A (en) | Carcinostatic or antitumor antibiotic, conagenin, and production and uses thereof | |
| US4615975A (en) | Purified culture of Actinomadura verrucaspora subspecies veractimyces | |
| JPH0578322A (ja) | 新規抗生物質ｓｆ２７３８物質及びその製造法並びに制癌剤 | |
| US4696912A (en) | Stabilized compositions | |
| EP0025713B1 (en) | An anthracycline antibiotic and a pharmaceutical composition containing the same | |
| JPH0443912B2 (da) | ||
| JP2002212187A (ja) | イソキノサイクリン系抗生物質 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PUP | Patent expired |