DK164900B - Derivater af 1-(acetylaminophenyl)-2-aminopropanon, et terapeutisk middel indeholdende disse og deres fremstilling - Google Patents

Description

i

DK 164900 B

Den foreliggende opfindelse angår hidtil ukendte derivater af l-(acetylaminophenyl)-2-aminopropanon. Den angår ligeledes et terapeutisk middel indeholdende disse hidtil ukendte derivater, der kan anvendes terapeutisk, især som antidepressormid-S ler for central nervesystemet, samt deres fremstilling.

Opfindelsen angår således hidtil ukendte derivater af 1-(ace-tylaminophenyl)-2-aminopropanon, som er terapeutisk anvendelige. Disse hidtil ukendte derivater virker alle på centralnervesystemet, især som antidepressormidler. Ved siden af de anti-depressive egenskaber, der er fælles for alle forbindelserne, konstaterer man, at disse derivater har stimulerende virkninger (eller opkvikkende virkninger) på centralnervesystemet, løvrigt har visse af disse derivater immunologiske virkninger og/eller kardiovaskulære virkninger, der er nyttige, således som beskrevet i det følgende.

De hidtil ukendte derivater af 1-(acetylaminophenyl)-2-amino-propanon ifølge opfindelsen er ejendommelige ved, at de er valgt blandt forbindelserne, der udgøres af 20 a) forbindelserne med formlen

Ar - CO - CH(CH3) - NR1R2 (I) 25 , hvor R^ er en C^-C^alkylgruppe eller en C3-C6cykloalkylgruppe, R2 er et hydrogenatom eller en C-^-C^alkylgruppe, eller 3q R1 og R2 sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet, kan danne en N-heterocyklisk gruppe med 5-7 led, som jcan (i) omfatte et andet heteroatom, valgt blandt N, o og S, og (ii) være substitueret, hvilken heterocykliske gruppe NR1R2 er valgt blandt grupperne, pyrrolidino, morpholino, 35 2

DK 164900 B

thiomorpholi.no, piperidino, hexamethylenimino, piperazino, 4- methylpiperazino, 4- (Ø-hydroxyethyl) piperazino, 4-phenyl-piperazino, 4-(p-chlorphenyl)piperazino, og 5 Ar er en acetylaminophenylgruppe med formlen ^ (II) X^'--' 10 2 hvor X er CH^CONH, og Y og Z, som kan være ens eller forskellige, hver er et hydrogenatom eller et halogenatom, og b) deres farmaceutiske acceptable additionssalte.

15

Blandt C^-Cgalkylgrupperne, der er indbefattet i definitionerne af grupperne R^ og R2, kan især nævnes grupperne CH^, CK^CH^, ch2ch2ch3, ch(ch3)2, c(ch3)3, ch(ch3)ch2ch3, ch2ch(ch3)2 og ch2ch2ch2ch3.

20

Blandt C3“CgCykloalkylgrupperne, der er indbefattet i definitionen af gruppen R^, kan især nævnes grupperne cyklopropyl, cyklopentyl og cyklohexyl.

25 De N-heterocykliske grupper NR^R2, der kan indgå i forbindelser ne ifølge opfindelsen, er med fordel mættede. De omfatter 5- 7 led, kan omfatte et andet heteroatom valgt blandt N, 0 og S og kan være substituerede især med C ^-C ^ alkyl grupper, Cl”C4hydr°xyalkylgrupper (især CH2CH2OH), aryl eller halogen- 30 aryl (især phenyl og 4-chlorphenyl).

Blandt halogenatomerne indbefattet i definitionerne af Y og Z kan især nævnes F, Cl og Br, og det foretrukne halogenatom er Cl. Acetylaminogruppen X = CH-jCONH kan være i orthostilling, 35 metastilling eller parastilling, idet stillingerne meta og para er de foretrukne. De foretrukne grupper Ar er 4-acetyl- 3

DK 164900 B

aminopheny1-,4-acetylamino-3-chlorphenylr,4-acetylamino-3,5-dichlorphenyl-,3-acetylaminophenyl-og 3-acetylamino-4-chlor-phenylgrupperne.

5

Ved additionssalte forstås her additionssaltene, der fås ved reaktion af en af de ovennævnte frie baser med en mineralsyre eller en organisk syre, og ammoniumsaltene. Blandt de syrer, der er anvendelige til at danne salte med de frie baser, kan 10 især nævnes saltsyre, brombrintesyre, eddikesyre, myresyre, propionsyre, oxalsyre, furmarsyre, maleinsyre, ravsyre, benzoesyre, kanelsyre, mandelsyre, citronsyre, æblesyre, vinsyre, asparaginsyre, glutaminsyre, methansulfonsyre, p-toluensulfon-syre. Blandt de forbindelser, der gør det muligt at få ammoni-15 umsaltene, kan især nævnes ICH^ og CICHg. Generelt foretræk kes syreadditionssaltene frem for ammoniumsaltene.

Nogle af forbindelserne ifølge opfindelsen er vist i følgende tabel I, uden at denne skal være begrænsende. De anførte 20 smeltepunkter er de øjeblikkelige smeltepunkter, bestemt på en Kofler-blok.

25 30 35 4

DK 164900 B

TABEL I.

i i i "υ o "o o o "o "u o · • «—* I +>

Pi u I 0^00-— O — OCNJLOO o o o μ SOI η o H o CO — I (N''MNvtM'-,(NliNNN CO CO CO m I I -

I O

I O

I CO

s* ! o g. i CM CO E fi CM fn

l^>ro^O Ή G G E

g co i m — ro μ 'ϋ cn cn ·η -H O

ψ « i æ η æ ^ *h e e co h ^ i v—7

' Η I O E O CO HOO^O-H ylSv V

^ El ^ o — E m o — co <n g Η Γ X T f 1

Jp si e — eoehebeecu

®. i ooo — o^ooogojI I · II

H i eeeee>iEE — o-h \ J e \ / ^ ISSSSSOiSSSSQi S s s

v I

s i

I 1 H

NI KKKKWWOMKIIIS E E E

CNI rv' . Svo i m

Vy-lm i ' ^ ' I i—I ri ri

bn χ ίΗ I EEOEEOOEEEE E E E

I I II

I CO (O (O

I I

I E E E E E E E E E E E E E E

I 22222222222 2 2 2

I OOOOOOOOOOO O O O

I OOOOOOOOOOO o o o XI (0c0(0(0<0(0(0(0(0<0<0 co co co

I EEEEEEEEEEE E E E

I OOOOOOOOOOO o o o

I I I I I I I I I I I I I I I

I <qi I cor'Cocor-'Cfto^cocoo co in • I inr'cr>H*HHcoco(OcO'3· o< o1

Ih I hhhcocococococococo co co co

Cl i—I i—I i—I i—I i—I i—I rH i—I —I i—1 i—1 i—I [—I i—I

II >3< «3« ^ O* c^EE^fS^^EEt^E Pi ^ &!

El OOOOOOOOOOO O O O

I I

I cdcdftiidnJrdnJctJteiOnj <D C ni -P i ,¾ I rHcon'srincor'cncnorH co cn ^

G I H rH rH Η H

f^J I «··«··*···· · · · 01 (1)(0(1)(1)(00)01(1)10(11(1] CO CO to

Hl 44 44 44

El HHWWEWEWEWH H W H

5

DK 164900 B

'3333 3 ! * I * ø, i o o m o o ol c η I in m vr ol m oil CO'-'IOlOlOlOlOlOll n i l oi Kl

, U I

cm i η ^ i

Ki k oi "i. j 0 li"000 i i g s v v v s i

N ! K K K K K K I

I j «. * I ϋ o 10 0 I o o

I I ID LO

I I Ol Ol * j = * s a a « i S .8 I > tr> > I o c o i I Ή

I I U U M

imæ x te κ κι o o o ·

-i g g § O O O i .41 8 43 S

i u u u u o ui ό <u a οι m

>si mon οι οι n oil Ή +J 6 4J O

I ffi K tC ffi W K I Μ 0 -¾ Η

I u o u u U U I

III i I I II H 3 Hl 3 U

i ro co m m m ro I Λ ftO Dj O

I O (1) Q) M

i I O -P M 4-> Ό I I 5-1 H <D rH >» |·Μ<01 CM O- d 0»l Ό d) T) Φ Xl . i m in id id id r-l S r-h ^ I Ol Ol Ol Ol Ol Oli £l til 3 ffl Ό

JXj I <—1 i—I i—I rH rH rH I

1 I Tf <3* »tf »tf -¾1 »tf I

οίΐοΐ P3 « K K K $ ! «ΛΟΪ®

+1IKIOU U U O U I

Mii ! 0 1 I ^ ^ Λ ^ i i id (C id id <d 3 h i -μ i Λ _ i i m i m id o· oo d ol ··

1-3 I P I rH Η rH Η H Ol J M

Mirrt ·· · · · *1 u) pq loi w w w ω tn tni +j CIMI^irM Ai ^ ^ 0

EHiOilWH H W W W I K

6

DK 164900 B

De hidtil ukendte derivater af 1- (acetylaminophenyl)-2-amino-5 propanon kan fremstilles på i og for sig kendt måde under an vendelse af klassiske reaktionsmekanismer. Til fremstilling af disse derivater anbefales syntesemetoder, der er vist skematisk ved følgende reaktioner: 10 Variant A:

ArCOCH - Hal + HNR^ -> ArCOCHNR^ ch3 ch3 15 (III) (IV)

Variant B: 7^~^\-COCHNR1R2 acetylering ^ ArCOCHNR1R2 h2 έΗ3

Z

(V) 25

Variant A består i at lade et halogenderivat med formlen III (hvor Ar er som ovenfor defineret, og Hal er et halogen atom, især Cl eller Br, fortrinsvis Cl af hensyn til udbyttet) reagere med en amin med formlen IV (hvor R^ og R2 er som ovenfor 30 defineret).

Fortrinsvis anvender man mere end ét mol af IV til ét mol af III, idet aminen IV samtidig tjener som reaktionsmiddel og opløsningsmiddel eller co-opløsningsmiddel ved reaktionen.

35 Den nævnte reaktion af 1-(acetylaminophenyl)-2-halogenpropanon III med aminen IV udføres fortrinsvis efter variant A i mindst 1/2 time ved en temperatur mellem 15°C og reaktionsmediets tilbagesvalingstemperatur .

7

DK 164900 B

Variant B består i at underkaste et derivat af l-(aminophenyl)-® 2-aminopropanon med formlen V (hvor Y, Z, Rj og Rj er som oven for defineret) en acetyleringsreaktion ved hjælp af et acety-leringsmiddel i overskud i forhold til de støkiometriske tilstande, og som er valgt blandt acetylhalogenider (fortrinsvis CH^COCl af hensyn til udbyttet) og eddikesyreanhydrid (CH^CO^O. Forbindelserne med formlen V er beskrevet i ansøgernes franske patentansøgning nr. 12.962 af 20.august 1984.

Ved variant B lader man fortrinsvis derivatet med formlen V reagere i CH^COCl i mindst 2 timer ved reaktionsmediets tilbage-svalingstemperatur i et forhold på mindst 2 mol CH^COCl (fortrinsvis 3-5 mol CH^COCl) til 1 mol af V.

Generelt foretrækkes det at udføre variant A frem for variant B til syntesen af alle derivaterne af 1-(acetylaminophenyl)-2-20 aminopropanon. Varianten B kommer i praksis kun på tale til forbindelserne Y = Z = halogen.

De foreliggende derivater af 1-(acetylaminophenyl)-2-aminopropanon er terapeutisk anvendelige. De virker alle på central-25 nervesystemet, nærmere betegnet som antidepressormidler. I

deres neuropsykofarmakologiske profil har de en stimulerende eller opkvikkende komponent. Visse af de foreliggende derivater har desuden - ved siden af deres virkninger på centralnervesystemet - interessante immunologiske egenskaber; især har 20 produkterne fra eksempel 7 (CRL 41220), 12 (CEL 41242), 14 (CEL 41247), 15 (CEL 41254) og 17 (CRL 41262) gavnlige immu-nomodulatoriske virkninger til behandling af patienter, som har en utilstrækkelig immunologisk reaktion, og de produkter, der er mest interessante med hensyn til deres immunologiske 35 egenskaber, er produkterne fra eksempel 7 (CRL 41220), 12 (CRL 41242) og 17 (CRL 41262).

8

DK 164900 B

Opfindelsen angår endvidere et terapeutisk middel, som er

S

ejendommeligt ved, at det, sammen med et fysiologisk acceptabelt hjælpestof, indeholder mindst ét derivat af 1-(acetyl-aminophenyl)-2-aminopropanon eller et af dets ugiftige additionssalte som aktivt princip.

10

Det er klart, at i et sådant middel indgår det aktive princip i en farmaceutisk effektiv mængde.

Andre fordele og ejendommeligheder ved opfindelsen forstås bedre under henvisning til den efterfølgende beskrivelse og 15 fremstillingseksemplerne og resultaterne af de farmakologiske undersøgelser, der alle kun anføres til illustration og ikke skal være begrænsende.

FREMSTILLING I.

20

Fremstilling af hydrochlorid af 1-(4-acetylamino-3,5-diclor-phenyl)-2-isopropylaminopropanon.

2 S Clv CH3C0NH-^__y“ CO - CH - NH - CH(CH3)2, HCl ,Ρ

Cl J

(Eksempel 7, kode-nr. CRL 41220).

30

Man opløser 28 g hydrochlorid af 1-(4-aminophenyl)-2-isopropylaminopropanon i 100 ml destilleret vand. Til denne opløsning, der holdes ved 10°C, sættes ved gennembobling 0,2 mol Cl2·

Man omrører i 2 timer og inddamper så til tørhed i vakuum.

3 5

Inddampningsremanensen, som er fast og af en brun farve, optages i eddikesyre og giver ved omkrystallisation 11 g (udbytte 35%) dihydrochlorid af 1-(4-amino-3,5-dichlorphenyl)-2-iso- 9

DK 164900 B

propylaminoPropan°n. Smeltepunkt >260°C.

5

Man opvarmer under tilbagesvaling i 4 timer en blanding af 11 g af det således fremkomne produkt med 50 ml CH^COCl.

Man afdamper derpå overskud af acetylchlorid i vakuum. Ind-dampnings-remanensen optages i ethanol og giver 9 g (udbytte 25%) af CRL 41220. Smeltepunkt >260°C.

FREMSTILLING II.

15 Fremstilling af hydrochlorid af 1-(4-acetylaminophenyl)-2- ethylaminopropanon.

CHjCONH-^ y— CO - CH - NH - CH2 - CH3, HCl 20 \Zl/ CH3 (Eksempel 8, kode-nr. CRL 41224).

a) 1-(4-acetylaminophenyl)-2-chlorpropanon.

25

Man hælder i løbet af 40 minutter 92 g (0,72 mol) 2-chlor-propionylchlorid (Cl-CO-CHCl-CHg) i en suspension, der udgøres af 54 g (0,40 mol) acetanilid, 160 g (1,20 mol) aluminium-chlorid og 400 ml svovlkulstof. Man opvarmer i en time til 3° tilbagesvaling og hælder så reaktionsmediet på en blanding af vand og is, der er syrnet med fortyndet HCl, hvorefter man omrører natten over ved omgivelsernes temperatur (15 - 25°C). Det dannede bundfald opsamles ved filtrering og renses så ved omkrystallisation af benzen og giver 78 g (udbytte 86,5%) 35 1-(4-acetylaminophenyl)-2-chlorpropanon. Smeltepunkt 120°C.

10

DK 164900 B

b) CEL 41224.

5

Man opvarmer til 60 - 70°C i en time en opløsning af 25 g (0,11 mol) 1-(4-acetylaminophenyl)-2-chlorpropanon i 164 ml (1,10 mol) ethylamin i en vandig opløsning med 330 g pr. liter. Man afdamper overskud af ethylamin under reduceret tryk, 10 ekstraherer inddampningsremanensen med flere fraktioner ethyl- acetat og behandler så den tørrede ethylacetatfase med etha-nolisk saltsyre. Det dannede bundfald renses ved vask i varmen med vandfri ethanol og giver 13,3 g (udbytte af trin b 44,7%, samlet udbytte 38,7%) CKL 41224. Smeltepunkt 230°C under de-15 komponering.

FREMSTILLING III.

20 Fremstilling af hydrochlorid af 1- (4-acetylaminophenyl) -2- piperidinopropanon.

ch3conh CO - CH - O , HCl CH3 25 (Eksempel 11, kode-nr. CRL 41240).

Man omrører i en time ved omgivelsernes temperatur (15 - 25°C) og derefter i 1/2 time under tilbagesvaling en opløsning, der 30 udgøres af 18 g (0,0798 mol) 1-(4-acetylaminophenyl)-2-chlor- propanon, 78,8 ml (0,7980 mol) piperidin og 50 ml vand. Man inddamper under reduceret tryk til tørhed og optager inddampningsremanensen i ethylacetat. Man vasker ethylacetatfasen med vand, tørrer på Na2SO^ og inddamper opløsningsmidlet, hvil-35 ket giver 25 g af en brunorange olie. Denne olie behandles i ethylacetat med ethanolisk saltsyre.

DK 164900B

11

Efter rensning ved krystallisation og behandling med carbon 5 i vandfri ethanol fås 19,8 g (udbytte 79,9%) CRL 41240.

Smeltepunkt 240°C under dekomponering.

FREMSTILLING IV.

10

Fremstilling af dihydrochlorid af 1-(4-acetylaminophenyl)-2-(4-methylpiperazino)propanon.

CH-CONH-^^Y- CO - CH - N - CH-, 2 HCl » 3 \=/ CH3 W 3 (Eksempel 12, kode-nr. CRL 41242).

Man omrører i en time ved omgivelsernes temperatur og derpå i 20 1/2 time ved tilbagesvalingstemperatur en blanding af 18,5 g (0,082 mol) 1-(4-acetylaminophenyl)-2-chlorpropanon og 91 ml (0,820 mol) 4-methylpiperazin i 60 ml H20. Man optager reaktionsmediet i 100 ml H20 og isolerer ved filtrering 11,6 g 1- (4-acetylaminophenyl)-2-(4-methylpiperazino)propanon.

25 Smeltepunkt 90°C.

Den således fremkomne frie base opløses i vandfri ethanol, behandles med carbon og derefter med ethanolisk saltsyre. Det dannede bundfald isoleres ved filtrering og giver 14,1 g (ud-30 bytte 47,5%) CRL 41242. Smeltepunkt 230°C under dekomponering.

FREMSTILLING V.

35 Fremstilling af hydrochlorid af 1-(4-acetylamino-3-chlorphenyl)- 2- pyrrolidinopropanon.

12

DK 164900 B

5 n CH3CONH-^ A— CO - ch - n , hci CH3 (Eksempel 6, kode-nr. 41219).

a) 1-(4-acetylamino-3-chlorphenyl)-2-chlorpropanon.

Man bringer 45 g (0,199 mol) 1-(4-acetylaminophenyl)-2-chlor-*5 propanon i suspension i 400 ml CHCl^. Man gennembobler 0,2 mol C^. Man får en gul opløsning, som inddampes til tørhed. Ved omkrystallisation af inddampningsremanensen i toluen får man 26 g (udbytte 50%) 1-(4-acetylamino-3-chlorphenyl)-2-chlor-propanon. Smeltepunkt 118°C.

20 b) CRL 41219.

Man opløser 26 g 1-(4-acetylamino-3-chlorphenyl)-2-chlorpropanon i en blanding af 100 ml pyrrolidin og 20 ml vand. Man op-25 varmer under tilbagesvaling i 2 timer,og afdamper overskydende pyrrolidin i vakuum. Inddampningsremanensen, som er olieagtig, optages i C2H3OH og udfældes ved hjasip af luftformig HCI. Man får 8 g (udbytte 24%) CRL 41219. Smeltepunkt 260°C.

30 FREMSTILLING VI.

Fremstilling af hydrochlorid af 1-(3-acetylaminophenyl)-2- piperidinopropanon.

// CO - CH - N V HCI

CH3C0HN—A— / CH3 \-' (Eksempel 17, kode-nr. CRL 41262).

35 13

DK 164900 B

a) 1-(3-acetylaminopheny1)-2-brompropanon.

5 I en opløsning af 37 g (0,19 mol) 1-(3-acetylaminophenyl)-propanon i en blanding af 300 ml tetrahydrofuran og 300 ml diethylether og i nærværelse af et spor af AlCl^ hældes ved omgivelsernes temperatur i løbet af 2 1/2 time 30,4 g (0,19 10 mol) brom. Man afgasser reaktionsmediet ved 40°C ved hjælp af en strøm af nitrogen og inddamper til tørhed under reduceret tryk. Inddampningsremanensen renses ved krystallisation af ethylacetat og giver 26,5 g (udbytte 51,6%) 1-(3-acetylamino-phenyl)-2-brompropanon. Smeltepunkt 133°C.

15 b) CRL 41262.

Man omrører i en time 18,5 g (0,0685 mol) 1-(3-acetylaminophenyl) -2-brompropanon, 68 ml (0,685 mol) piperidin og 45 ml 20 vand.ved omgivelsernes temperatur. Man bringer reaktionsmediet til tørhed mider reduceret tryk, optager inddampningsremanensen i ethylacetat og fjerner uopløseligt stof ved filtrering. Filtratet vaskes med vand, tørres på Na2SO£ og behandles derefter med ethanolisk saltsyre. Det dannede bundfald renses 25 ved omkrystallisation af en blanding af C2H5OH og CH^OH (3:5) v/v "og giver 15 g (udbytte 70,7%) CRL 41262. Smeltepunkt 245°C under dekomponering.

FREMSTILLING VII.

30 -----------------

Fremstilling af hydrochlorid af 1-(4-acetylaminophenyl)-2-isopropylaminopropanon.

35 CH3C0NH-// y- CO - CH - NH - CH(CH3)2, HC1 (Eksempel 1, kode-nr. CRL 41152).

14

DK 164900 B

a) 1-(4-acetylaminophenyl)-2-chlorpropanon.

5 27 g acetanilid indføres i en blanding af 67 g AlCl^ og 76,8 g 2-chlorpropionylchlorid (Cl-CO-CHCl-CH^) ved en temperatur mellem 35 og 45°C. Man omrører indtil fuldstændig opløsning af acetanilid. Det således fremkomne reaktionsmedium hældes på knust is. Det dannede bundfald opsamles ved filtrering, vaskes med vand til pH 7 og tørres oc| giver 39 g (udbytte 86%) 1-(4-acetylaminophenyl)-2-chlorpropanon. Smeltepunkt 124°C.

b) CKL 41152.

15

De således fremkomne 39 g 1-(4-acetylaminophenyl)-2-chlorpropanon opløses i 200 ml isopropylamin. Det fremkomne reaktionsmedium opvarmes under tilbagesvaling i 6 timer. Overskud af isopropylamin afdampes i vakuum. Inddampningsresten, der 2o fås i form af en viskos olie, optages i 200 ml vandfri ethanol, og hydrochloridet udfældes ved hjælp af en strøm af luftformig HCl. Efter omkrystallisation af ethanol fås 40 g (udbytte 70%) CEL 41152, der fås i form af et hvidt pulver, der er meget opløseligt i vand. Smeltepunkt 240°C.

25 FREMSTILLING VIII.

Fremstilling af hydrochlorid af 1-(4-acetylamino-3-chlorphenyl)-30 2 -isopropylaminopropanon.

(Eksempel 3 - kode-nr. CRL 41192).

a) l-(4-acetylamino-3-chlorphenyl)-2-chlorpropanon.

35 45 g 1-(4-acetylaminophenyl)-2-chlorpropanon bringes i suspen sion i 400 ml CHClg. Man indfører 0,2 mol CI2 ved gennembob-ling. Den fremkomne gule opløsning inddampes til tørhed. Ved 15

DK 164900 B

omkrystallisation af inddampningsresten ved hjælp af toluen 5 fås 26 g (udbytte 50%) 1-(4-acetylamino-3-chlorphenyl)-2-chlor- propanon. Smeltepunkt 118°C.

b) CRL 41192.

1° Man opløser de 26 g 1- (4-acetylamino-3-chlorphenyl) -2-chlor- propanon i 150 ml isopropylamin. Man opvarmer under tilbagesvaling i 4 timer og afdamper overskud af isopropylamin i vakuum. Inddampningsresten, der får i form af en olie, optages i ethanol, og man udfælder hydrochloridet ved hjælp af en strøm 15 af luftformig HC1. Man får 9,6 g (udbytte 15%) CRL 41192.

Smeltepunkt 260°C.

I det følgende er opsummeret resultaterne af de undersøgelser, der er foretaget med forbindelserne ifølge opfindelsen.

20 A. Undersøgelser af CRL 41224 (produkt fra eksempel 8) .

Ved de følgende neuropsykofarmakologiske undersøgelser er 25 CRL 41224 i opløsning i destilleret vand (pH 6) blevet admini streret ad intraperitoneal vej i et rumfang på 20 ml/kg til hanmus og 5 ml/kg til hanrotte.

I. Toksicitet.

30 ___________

Hos hanmus er DL-0 (maksimale ikke-dødelige dosis) ad intraperitoneal vej større end 256 mg/kg og mindre end 512 mg/kg.

25 II. Samlet adfærds- og reaktionsmønster.

Grupper på 3 dyr iagttages før og derefter 1/4 time, 1/2 time, 16

DK 164900 B

1 time, 2 timer, 3 timer og 24 timer efter administration'af 5 CRL 41224. Man konstaterer: 1) på mus: i doser på 2 og 8 mg/kg adfærd, reaktionsmønstre, variationer i pupildiameter og rekt a Itemper at tir, der stort sét er sammenlignelige med de tilsvarende værdier for en kontrolgruppe, som ikke modtager andet end destilleret vand, i en dosis på 32 mg/kg 15 en ophidselse i 3 timer, stereotypier, der varer mellem 2 og 3 timer, og en forøgelse af berøringsreaktionen og muskeltonus mellem 2 og 3 timer, i en dosis på 128 mg/kg 20 en ophidselse i 3 timer, stereotypier, der varer mellem 2 og 3 timer, en forøgelse af berøringsreaktionen og muskeltonus i 24 timer, en hypertermi mellem 2 og 3 timer (+0,9°C) og 25 en moderat mydriasis i 3 timer, 2) på rotte: i en dosis på 1 mg/kg en kort mydriasis, der viser sig 1/2 time efter admini-30 stration af CRL 41224, i en dosis på 4 mg/kg en mydriasis, der varer 2 timer, i en dosis på 16 mg/kg 35 stereotypier i 3 timer og en mydriasis, der varer 3 timer, 17

DK 164900 B

i en dosis på 64 mg/kg 5 en ophidselse i 1 time, stereotypier i 3 timer, en hårrejsning i 1 time, en forøgelse af berøringsreaktionen og muskeltonus i 3 timer, 10 en hypertermi i 3 timer (+ 1,5°C) og en mydriasis i 3 timer.

III. Reaktion med apomorphin.

15 1) På mus:

Grupper på 6 mus modtager CRL 41224 1/2 time før subkutan injektion af 1 eller 16 mg/kg apomorphin. Man iagttager, at i doser på 8 mg/kg, 32 mg/kg og 128 mg/kg modvirker 20 CRL 41224 hypotermien induceret af apomorphin uden at modificere opretningsadfærden og stereotypien.

2) På rotte: 25 CRL 41224 administreres til grupper på 6 rotter 1/2 time før subkutan injektion af 0,5 mg/kg apomorphin. Man iagttager, at i en dosis på 16 mg/kg, men især i en dosis på 64 mg/kg bevirker CRL 41224 en forstærkelse af stereotypierne induceret af apomorphin.

30 IV. Reaktion med amphetamin.

Amphetamin (2 mg/kg) injiceres intraperitonealt til grupper 35 på 6 rotter 30 minutter efter administration af CRL 41224.

Det konstateres, at i en dosis på 16 mg/kg, men især i en dosis på 64 mg/kg bevirker CRL 41224 en forstærkelse af stereotypierne induceret af amphetamin.

18

DK 164900 B

V. Reaktion med reserpin.

5 ______________________ 4 timer efter intraperitoneal injektion af 2,5 mg/kg reserpin modtager grupper på 6 mus CRL 41224.

10 Det iagttages, at fra en dosis på 2 mg/kg modvirker CRL 412.24 hypotermien induceret af reserpin. Denne antagonisme er betydelig for doser på 32 mg/kg og 128 mg/kg, og i en dosis på 128 mg/kg formindsker CRL 41224 styrken af den af reserpin inducerede ptosis.

15 VI. Reaktion med oxotremorin.

CRL 41224 administreres til grupper på 6 mus 1/2 time før intra-20 peritoneal injektion af 0,5 mg/kg oxotremorin.

1) Virkning på temperaturen:

Det viser sig, at i doser på 2 mg/kg og 8 mg/kg, men især i doser på 32 mg/kg og 128 mg/kg modvirker CRL 41224 den 25 hypoterme virkning af oxotremorin.

2) Virkning på rystelserne:

Det viser sig, at i doser på 8 mg/kg, 32 mg/kqr men især 30 128 mg/kg formindsker CRL 41224 tydeligt styrken af de af oxotremorin inducerede rystelser.

3) Virkning på de perifere cholinergiske symptomer:

Det iagttages, at i praksis ændrer CRL 41224 ikke tegnene 35 på perifer cholinergisk stimulering induceret af oxotre morin.

19

DK 164900 B

VII. Virkning på firpladeprøven, trækningen og elektrisk chok.

5 ---------------------------------------------------------

Prøven udføres på grupper på 10 mus 30 minutter efter administration af CRL 41224.

jq Det iagttages, at i en dosis på 128 mg/kg bevirker CRL 41224 en forøgelse af antallet af "straffede"passager, bevirker ikke større bevægelseshaemning, forværrer ikke krampevirkningerne og ændrer ikke de dødelige virkninger af elektrisk chok.

15 VIII. Virkning på den spontane motilitet.

1/2 time efter at have modtaget CRL 41224 anbringes musene (6 pr. dosis, 12 kontroller) i en aktivitetsmåler, hvor deres mo-20 tilitet registreres i 30 minutter.

Det bemærkes, at i en dosis på 8 mg/kg og især i doser på 32 mg/ kg og 128 mg/kg forøger CRL 41224 musenes spontane bevægelsesaktivitet.

25 IX. Virkning på aggressivitet mellem grupper.

Efter at have opholdt sig i 3 uger i hver sin halvdel af et 30 bur adskilt med en uigennemsigtig skillevæg modtager grupper på 3 mus CRL 41224. 1/2 time senere forenes de to grupper i buret ved, at skillevæggen udtrækkes, og man iagttager antallet af kampe, der sker på 10 minutter. Halvdelen af prøven udføres på sædvanlige mus (NMRI, C.E.R. Janvier), og halvdelen på 35 NMRI-mus (Iffa Credo).

20

DK 164900 B

Man konstaterer, at i en dosis på 128 mg/kg formindsker CRL ® 41224 antallet af kampe.

X. Virkning vis-å-vis nogle adfærdsf omer forstyrret med forskellige midler.

10 1) Reduceret motilitet ved tilvænning til et indelukke.

Efter 18 timers ophold i aktivitetsmåler modtager musene (6 pr. dosis, 12 kontroller) CRL 41224. De anbringes straks igen i deres respektive indelukker, og 1/2 time 15 senere noteres deres motilitet i 30 minutter.

Det iagttages, at i doser på 32 mg/kg og 128 mg/kg medfører CRL 41224 en tydelig genoptagelse af bevægelsesaktiviteten hos mus, der har vænnet sig til deres indelukke.

20 2) Reduceret motilitet ved hypoksisk angreb.

1/2 time efter, at de har modtaget CRL 41224,underkastes musene (10 pr. dosis, 20 kontroller) en akut hypobar ano- 4 xi [trykreduktion på 600 mm Hg (d.v.s. ca. 8 x 10 pascal) i 90 sekunder; frigørelse af vakuum på 45 sekunder] og anbringes så i en aktivitetsmåler, hvor deres motilitet noteres i 10 minutter.

Det iagttages, at i doser på 8 mg/kg, 32 mg/kg og især 128 mg/kg medfører CRL 41224 en tydelig forbedring i gen-3 0 vindingen af bevægeligheden hos mus, hvis motilitet er blevet undertrykt som følge af et kort ophold i et indelukke med reduceret tryk.

3) Kvælende iltmangel.

v O

Grupper på 10 mus modtager CRL 41224 1/2 time før intra-peritoneal administration af 32 mg/kg gallamintrijod-ethylat (sammenligningsmiddel med curare-virkning).

21

DK 164900 B

Det iagttages, at CRL 42224 ikke ændrer forhalingen af 5 fremkomsten af kramper og død, der følger på en kvælende iltmangel fremkaldt med et curare-middel.

XI. Reaktion med barbital.

10 1/2 time efter administration med CRL 41224 modtager grupper på 10 mus en intraperitoneal injektion af barbital (220 mg/kg).

Det viser sig, at fra en dosis på 2 mg/kg formindsker CRL 41224 15 varigheden af barbitur-søvnen (antagonismen er total ved 32 mg/ kg) .

XII. Virkning på desperationsadfærd.

20 1/2 time efter at have modtaget CRL 41224 anbringes grupper på 6 mus i et bægerglas fyldt med vand til en højde på 6 cm. Man registrerer den samlede periode af immobilitet mellem det 2. og det 6.minut efter neddykning.

25

Det iagttages, at i doser på 8 mg/kg og især 32 mg/kg og 128 mg/ kg reducerer CRL 41224 immobilitetsperioden af mus, som har været udsat for tvungen neddykning.

30 XIII. Konklusioner.

De ovenstående neuropsykofarmakologiske prøver som helhed viser, at CRL 41224 har: 35 22

DK 164900 B

Antidepressiv virkning: 5 Antagonisme af hypoteonien induceret af apomorphin, reserpin eller oxotremorin og formindskelse af varigheden af "desperations"-immobilitet.

Stimulerende virkninger:

Ophidselse hos mus, tilstedeværelse af stereotype bevægelser hos mus og rotter, forstærkelse af stereotypierne induceret af apomorphin og amphetamin, forøgelse i motorisk .aktivitet, forbedring i genvindingen af bevægelsen hos mus, hvis moti-litet er blevet undertrykt efter en kort periode i et inde-lukke med reduceret tryk og tydelig genoptagelse af bevægelsesaktiviteten hos mus, der har vænnet sig til deres indelukke.

Perifere α-adrenergiske stimulerende virkninger: 20

Mydriasis og antagonisme af ptosis induceret af reserpin og hårrejsning.

Det følger heraf, at CRL 41224 opfører sig som et antidepres-sormiddel for centralnervesystemet. De antidepresserende virkninger er i de samme doser forbundet med en tydelig stimulerende komponent.

B. Prøver vedrørende CRL 41219 -(produkt fra eksempel 6).

30

Den neuropsykofarmakologiske undersøgelse af CRL 41219 blev udført som vist ovenfor for CRL 41224. Resultaterne er anført nedenfor.

35 23

DK 164900 B

Ved intraperitonel administration til hanmus er DL-30 (dødelig dosis for 30% af dyrene) af størrelsesordenen 128 mg/kg, og 5 DL-50 er af størrelsesordenen 200 mg/kg.

I korthed har CRL 41219 en profil Som er karakteristisk ved:

Stimulerende virkninger: på mus: ophidselse med hyperreaktivitet, hyperaktivitet, forøgelse af spontan bevægelsesaktivitet, genoptagelse af bevægelsesaktivitet efter tilvænning til *5 indelukket, forbedring i bevægelsesgenvindingen efter hy- poksisk angreb og forøgelse af antallet af"straffede«passager ved firpladeprøven, sen fremkomst af stereotypier, 20 antagonisme af søvnen induceret med barbital, på rotte: ophidselse (med hyperreaktivitet), tilstedeværelse af stereotype bevægelser og forstærkelse af 25 stereotypierne induceret af apomorphin og amphetamin.

Antidepressive virkninger: antagonisme af hypotermien induceret af apomorphin, reserpin ^ og oxotremorin, 30 3 formindskelse af immobiliteten eller den såkaldte desperation .

Virkninger, der afspejler perifer α-adrenergisk stimulering: 35 antagonisme af ptosis induceret af reserpin, mydriasis, antagonisme af rystelser forårsaget af oxotremorin.

24

DK 164900 B

Desuden synes CEL 41219 at begunstige eller forstærke virk- _ ningerne af krampefremkaldende midler (forværrelse af de døde- 5 lige virkninger af elektrick chok, formindskelse af forhalingen af fremkomsten af kramper og dødelighed som følge af kvælende iltmangel).

1Q Disse resultater som helhed viser, at CRL 41219 er et stof, der har antidepressive, stimulerende og opvækkende egenskaber.

C. Prøver vedrørende CEL 41220 (produkt fra eksempel 7).

15

Den neuropsykofarmakologiske undersøgelse af CRL 41220 blev udført i overensstemmelse med de fremgangsmåder, der er anført ovenfor for CEL 41224.

I. Toksicitet.

20

Ved intraperitonel administration til hanmus har CEL 41220 følgende DL-0, DL-30 og DL-50: 25 DL-Οί større end 128 mg/kg, DL-30: af størrelsesordenen ca. 250 mg/kg, DL-50: af størrelsesordenen ca. 500 mg/kg.

II. Virkning på centralnervesystemet.

30 CEL 41220 har antidepressive og stimulerende virkninger.

III. Kardiovaskulær virkning.

4 hunde (gennemsnitsvægt 13,8 kg) anæstetiseret med nembutal modtager CRL 41220 ved intraduodenal administration i doser 35 25

DK 164900 B

på 0,1 mg/kg, 0,5 mg/kg, 1 mgAg, 2,5 mg/kg, 5 mg/kg og 10 mg/kg. Man måler arterietrykket, hjertefrekvensen, strøm-5 ningshastigheden gennem lårarterien og strømningshastigheden gennem rygsøjlearterien, rektal- og/eller hudtemperaturen samt farvningen af huden og galden (opsamlet ved kateterise-ring af galdekanalen efter ligatur af den cystiske kanal).

Det viser sig, at CRL 41220 administreret ad intraduodenal vej forøger rygsøjle-gennemstrømningshastigheden fra en dosis på 0,5 mg/kg, lårgennemstrømningshastigheden ved en dosis , _ på 1 mg/kg og hjertefrekvensen ved en dosis på 2,5 mg/kg, har en hypotensiv virkning ved en dosis på 10 mg/kg, inducerer en åndedrætsstimulering hos de 4 hunde og forhøjer rektaltemperaturen og hudtemperaturen.

20

Virkningerne af isoprenalin, undersøgt efter intraduodenal administration af CRL 41220 i en akkumuleret dosis på 19,1 mg/kg, ændres ikke, forsåvidt angår hjertefrekvensen, men ændres svagt, forsåvidt angår det diastoliske blodtryk: med 10 jig/kg iso- . prenalin ændres det diastoliske blodtryk fra 112 mm Hg (d.v.s.

Z5 4 3 ca. 1,49 x 10 pascal) til 47 mm Hg (d.v.s. ca. 6,26 x 10 pa- 4 seal) i stedet for 158 mm Hg (d.v.s. ca. 2,1 x 10 pascal) i kontroldyr, og hjertefrekvensen ændres fra 221 slag pr. minut til 275 slag pr. minut i stedet for fra 175 slag/min. til 280 slag/min. hos kontroldyrene (hundene anvendt til prøverne 3 0 benyttes også som kontroldyr).

Hypertension induceret af noradrenalin formindskes: med 2 AigAg noradrenalin ændres det systoliske blodtryk fra 202 mm Hg 4 (d.v.s. ca. 2,69 x 10 pascal) til 272 mm Hg (d.v.s. ca. 3,62 χ 35 a 10 pascal) efter intraduodenal administration af CRL 41220, 4 i stedet for fra 199 mm Hg (d.v.s. ca. 2,65 x 10 pascal) til 4 323 mm Hg (d.v.s. ca. 4,3 x 10 pascal) hos kontroldyrene.

26

DK 164900 B

I korthed virker CRL 41220 som hypo tens ivt middel (de hypotensive virkninger skyldes reduktion af det diastoliske blod-5 tryk). Da injektion af 1 mg/kg propanolol ved afslutningen af forsøget undertrykker alle virkningerne af CRL 41220, antages det, at dette produkt virker på det kardiovaskulære system ved at stimulere de fB-adrenergiske receptorer.

10 IV. Immunologiske egenskaber.

Prøven for celler, der danner lysisområder efter teknikken, ifølge A.J.Cunningham m.fl. ("Further improvements in the plague 15 technigue for detecting single antibody forming celles"), Immunology 14, side 599-601 (1968) og måling af intensiteten af den forhalede hypersensibilitet over for røde blodlegemer fra får efter teknikken ifølge T.E.Miller m.fl. ("Immuno-potentiation with BCG II modulation of the response to sheep 20 blood celles"), Journal of the National Cancer Institute 51 (nr. 5), side 1669-1676 (1973), har muliggjort påvisning af den immunomodulerende, stimulerende evne af CRL 41220.

V. Supplerende prøver.

25 CRL 41220 er påvist at være aktiv ved Lewis' carcinom-undersø-gelse hos mus efter følgende protokol: 30 a) dyr: blodsbeslægtede hunmus (C^BLg), b) inficerende celler: 105 celler injiceret subkutant i ryggen på dyrene,' c) overvågning af tumorvæksten ved måling af tumoren 2 gange 35 om ugen, d) bedømmelse af de pulmonære metastaser efter fiksering af de døde dyrs lunger i Bouin's fiksativ.

27

DK 164900 B

Under disse arbejdsbetingelser synes CRL 41220 anvendt alene at være inaktivt,medens på den anden side cyklophosphamid 5 (sammenlignende anticancermiddel) i en dosis på 100 mg/kg reducerer antallet af pulmonære metastaser og svagt nedsætter hastigheden af udviklingen af tumorer uden dog at forbedre overlevelsen af de behandlede dyr, og i en dosis på 150 mg/kg modvirker det tydeligt den proces, der igangsættes ved ad- 10 ministration af inficerende celler (overlevelse af 2 ud af 6 dyr).

Under anvendelse af samme fremgangsmåder giver CRL 41220 sam-men med 150 mg/kg cyklophosphamid de resultater, der er angivet i nedenstående tabel II.

TABEL II.

20

Cyklophosphamid + CRL 41220 Resultater 150 mg/kg 100 mg/kg Forøgelse af toksicitet sammen lignet med cyklophosphamid anvendt alene 25 150 mg/kg 5 mg/kg Stort set få forskelle sammen lignet med cyklophosphamid anvendt alene 150 mg/kg 2 mg/kg Utvivlsom beskyttende virkning over for Lewis' carcinom, alle behandlede dyr var levende flere uger efter forsøget 30 VI. Kliniske undersøgelser.

CRL 41220, administreret oralt til menneske i en dosis på 250 -500 mg (pr. gelatinekapsel eller tablet) gav gode resultater 35 28

DK 164900 B

ved behandling af patienter, der frembød cirkulationsbesvær, og som havde en utilstrækkelig immunoreaktion, f.eks. i til-5 fælde af recidiv herpes, reumatoid polyartritis og alvorlige former for mæslinger.

D. Prøver vedrørende CRL 41232 (produkt fra eksempel 9).

10

Den neuropsykofarmakologiske undersøgelse af CRL 41232 blev udført efter de fremgangsmåder, der er anført ovenfor for CRL 41224.

15 I. Toksicitet.

Administreret intraperitonealt til hanmus har CRL 41232 20 en DL-0 større end 128 mg/kg og en DL-30 af størrelsesordenen ca. 250 mg/kg.

II. Virkning på centralnervesystemet.

25 I korthed har CRL 41232:

Antidepressive virkninger: antagonisme af hypotermi induceret af apomorphin, reserpin o 0 og oxotremorin og formindskelse af varigheden af immobilitet eller "desperation" .

3 5 Stimulerende virkninger: ophidselse hos mus, tilstedeværelse af stereotype bevægelser hos mus og rotter, forstærkelse af stereotypierne induceret 29

DK 164900 B

af apomorphin og amphetamin, forøgelse af bevægelsesaktivitet, forbedring af genvindingen af bevægelsen hos mus, ® hvis motilitet er blevet undertrykt efter en kort periode i et indelukke med reduceret tryk, og tydelig genoptagelse af bevægelsesaktiviteten hos mus, der har vænnet sig til deres indelukke.

Perifer α-adrenergisk stimulering:

Mydriasis, exophtalmi og antagonisme af ptosis induceret af reserpin.

Samlet opfører CRL 41232 sig som et stimuleringsmiddel og anti-\ 5 depressivt middel for centralnervesystemet.

E. Prøver vedrørende CRL 41236 (produkt fra eksempel 10).

20

Den neuropsykofarmakologiske undersøgelse af CRL 41236 blev udført efter de fremgangsmåder, der er anført ovenfor for CRL 41224.

I. Toksicitet.

25

Administreret intraperitonealt til hanmus har CRL 41236 en DL-0 større end 256 mg/kg og 30 en DL-30 af størrelsesordenen ca. 500 mg/kg.

II. Virkning på centralnervesystemet.

35 I korthed har CRL 41236:

Antidepressive virkninger: antagonisme af hypotermi induceret af apomorphin, reserpin 30

DK 164900 B

og oxotremorin og formindskelse af immobiliteten eller "desperationen1!.

Stimulerende virkninger: ophidselse med hyperreaktivitet uden forekomst'af stereotype bevægelser, hyperaktivitet (forøgelse af den spontane moti-10 litet og bevægelsesaktiviteten efter tilvænning til indeluk ket) , forbedring af bevægelses-genvindingen efter hypoksisk angreb, moderat forøgelse af antallet afstraffede" passager i firpladeprøven, forstærkelse af stereotypierne induceret af apomorphin og amphetamin og antagonisme af søvn induce-15 ret af barbital.

' Perifer α-adrenergisk stimulering.

antagonisme af ptosis induceret af reserpin og mydriasis.

2° Desuden synes CEL 41236 at forværre de dødelige virkninger af elektrochok.

CEL 41236 opfører sig følgelig som et antidepressivt middel med stimulerende og opvækkende egenskaber.

25 F. Prøver vedrørende CEL 41240 (produkt fra eksempel 11).

Ved at følge de fremgangsmåder, der er beskrevet ovenfor for 30 undersøgelsen af CEL 41224 blev iagttaget følgende egenskaber.

I. Toksicitet.

35 Administreret intraperitonealt til hanmus har CEL 41240 en DL-0 større end 256 mg/kg.

31

DK 164900 B

II. Virkning på centralnervesystemet.

5 I korthed har CRL 41240:

Antidepressive virkninger: 10 antagonisme af hypotermier induceret af apomorphin, reserpin og oxotremorin og formindskelse af varigheden af immobilitet eller "desperation" (denne reduktion står måske i forbindelse med den stimulerende komponent).

15 Stimulerende og opvækkende virkninger: ophidselse hos mus og rotter med forekomst af stereotype bevægelser og forstærkelse af stereotypierne induceret af apomorphin og amphetamin, forøgelse i bevægelsesaktiviteten, forbedring af genvindingen af bevægelsen hos mus, hvis moti- 20 litet er blevet undertrykt efter en kort periode i et indelukke med reduceret tryk, genoptagelse af aktiviteten af mus, der har vænnet sig til deres indelukke, og en meget tydelig antagonisme af søvn induceret af barbital.

25 Perifer α-adrenergisk stimulering: mydriasis, exophthalmi og antagonisme af ptosis induceret af reserpin.

3q Virkninger mod krampe: i høj dosis: antagonisme af krampevirkningerne af elektrisk chok og forøgelse af varigheden af forhalingen af kvælningskramper .

35 Det følger heraf, at CRL 41240 opfører sig som et antidepres- sivt og stimulerende middel for centralnervesystemet.

32

DK 164900 B

G. Prøver vedrørende CRL 41242 (produkt fra eksempel 12).

5

Den neuropsykofarmakologiske undersøgelse af CRL 41242 blev udført ved de fremgangsmåder, der er beskrevet ovenfor for CRL 41224 med undtagelse af, at pH-værdien af den vandige opløsning af CRL 41242, der blev injiceret intraperitonealt, varierer som funktion af koncentrationen på den i nedenstående tabel III viste måde.

TABEL III.

15 (pH-værdi af den vandige opløsning, der skal injiceres, som funktion af koncentrationen af CRL 41242).

Koncentration af 20 CRL 41242 pH-værdi 50 g/1 2,5 13 g/1 3,0 2 g/1 3,5 25 0,8 g/1 4,0 0,4 g/1 4,5 0,2 g/1 5,0 — 0,05 g/1 5,5 30 I. Toksicitet.

Administreret intraperitonealt til hanmus har CRL 41242 en 35 DL-0 større end 256 mg/kg og en DL-60 af størrelsesordenen ca.

500 mg/kg.

33

DK 164900 B

II. Virkning på centralnervesystemet.

5 --------------------------------- I korthed har CRL 41242 i høje doser:

Sedative virkninger, der manifesterer sig ved: 1° sedation af mus og rotter med et fald i reaktiviteten og hypotermien hos mus, et fald i den spontane motilitet og antallet af "straffede" passager ved firpladeprøven med mus, 15 en formindskelse af aggressionen mellem grupper af mus, en forøgelse af varigheden af søvnen induceret af barbital hos mus, en forøgelse af den tid, det tager, før der fremkommer kramper og død som følge af kvælende iltmangel.

20

Antidepressive virkninger, der manifesterer sig ved: meget moderat antagonisme af hypotermien induceret af oxo-tremorin og 25 en svag nedsættelse af varigheden af immobiliteten hos mus, der er blevet tvangs-neddykket.

CRL 41242 har også meget tydelige virkninger af stimulerende type i svage doser.

30 III. Immunologiske egenskaber.

CRL 41242 viste sig at være særligt værdifuldt som et immuno-3 5 stimulerende stof.

34

DK 164900 B

H. Prøver vedrørende CRL 41245 (produkt fra eksempel 13).

5

Den neuropsykofarmakologiske undersøgelse af CRL 41245 blev udført ved de fremgangsmåder, der er beskrevet ovenfor for CRL 41224.

10 I. Toksicitet.

Administreret intraperitonealt til hanmus har CRL 41245 en DL-0 større end 256 mg/kg og en DL-100, der er mindre end elr ; 15 ler lig med ca. 512 mg/kg.

II. Virkning på centralnervesystemet.

20 I korthed har CRL 41245 under forsøgsbetingelserne: Antidepressive virkninger: antagonisme af hypotermien induceret af apomorphin, reser-25 pin og oxotremorin, formindskelse af varigheden af immobiliteten hos mus, der var blevet tvangs-neddykket (står måske i forbindelse med en stimulerende komponent).

30 Stimulerende og opvækkende virkninger: ophidselse med hyperreaktivitet hos mus og rotter, forøgelse af den spontane bevægelsesaktivitet hos mus med genoptagelse af bevægelsesaktiviteten hos mus, der har væn-35 net sig til deres indelukke, og forbedring i bevægelses genvindingen hos mus, der har været udsat for akut hypoxi, forøgelse af antallet af "straffede" passager ved firplade-

DK 164900B

35 prøven med mus, g formindskelse af varigheden af barbitur-søvnen, forekomst af stereotype bevægelser hos mus og rotter og forstærkelse af stereotypierne induceret af apomorphin og amphetamin hos rotter.

10 Perifer α-adrenergisk stimulering: hårrejsning hos mus og rotter, mydriasis hos rotter, formindskelse af ptosis induceret af reserpin hos mus.

15

Desuden udviser crl 41245 total antagonisme(i stærk dosis)af de krampefremkaldende virkninger af elektrisk chok, 20 reduktion (i stærk dosis) i intensiteten af rystelser, der skyldes oxotremorin, og reduktion af aggressionen mellem grupper.

Som konklusion opfører CRL 41245 sig som et antidepressivt 25 middel med en stærkt stimulerende komponent.

I. Prøver vedrørende CRL 41254 (produkt fra eksempel 15).

3q Den neuropsykofarmakologiske undersøgelse af CRL 41254 blev udført ved de fremgangsmåder, der er beskrevet ovenfor for CRL 41224.

I. Toksicitet.

35

Administreret intraperitonealt til hanmus har CRL 41254 en DL-0 større end 256 mg/kg og en DL-100 mindre end eller lig 36

DK 164900 B

med 512 mg/kg.

5 II. Virkning pa centralnervesystemet.

I stærke doser har CRL 41254 beskedne antidepressive virkninger (antagonisme af hvpotermien induceret af apomorphin og 10 oxotremorin, men ingen antagonisme af hypotermien induceret af reserpin) og svage stimulerende virkninger (dels en formindskelse af varigheden af barbitur-søvnen og dels en moderat genoptagelse af bevægelsesaktiviteten hos mus, der har vænnet sig til deres indelukke).

15 III. Immunologiske egenskaber.

I en dosis på 1 mg/kg har CRL 41254 en statistisk signifikant 20 immunostimulerende virkning ifølge prøven for celler, der danner lysisområder efter immunisering ved hjælp af røde blodlegemer fra får ("PFCIgM"-prøven), beskrevet af A.J.Cunningham m.fl., Immunology 14, side 599-601 (1968), som er nævnt ovenfor, og i doser på 10 - 100 mg/kg administreret oralt har 25 det en statistisk signifikant immunostimulerende virkning : ifølge måling af intensiteten af den forhalede hypersensibilitet for røde blodlegemer fra får, beskrevet af T.E.Miller m.fl., Journal of the National Cancer Institute 51 (nr. 5), side 1669-1676 (1973), der er nævnt ovenfor.

30 J. Prøver vedrørende CRL 41262 (produkt fra eksempel 17).

CRL 41262 har antidepressive og stimulerende virkninger på 3 5 centralnervesystemet. Det blev påvist at være særligt værdifuldt som immunomodulator på grund af dets immunostimulerende aktivitet i doser på 0,1 mg/kg, 10 mg/kg og 100 mg/kg ifølge ovennævnte PFCIgM-prøve og i doser på 10 og 100 mg/kg λ rim ini sfrorot- ϊ f rrs Γί\τ<=>ηη;ρτην(-ρ> målinn af intensiteten 37

DK 164900 B

af den forhalede hyperfølsomhed over for røde blodlegemer fra får.

5 K. Prøver vedrørende CRL 41247 (produkt fra eksempel 14).

Den neuropsykofarmakologiske undersøgelse af CRL 41247 blev udført ved de fremgangsmåder, der er beskrevet ovenfor for CRL 41224, idet CRL 41247, der skulle undersøges, var i opløsning i destilleret vand ved pH 4,5 - 5,5.

I. Toksicitet.

15 ___________

Administreret intraperitonealt til hanmus har CRL 41247 en DL-0 større end 512 mg/kg og en DL-60 af størrelsesordenen ca. 1000 mg/kg.

20 II. Virkning på centralnervesystemet.

I korthed har CRL 41247 (i kun stærke doser): 25 tydelige antidepressive virkninger, der manifesterer sig ved moderat antagonisme af hypotermier-ne induceret af apomorphin og oxotremorin (men ingen anta-3Q gonisme over for hypotermien induceret af reserpin), og ved en formindskelse af varigheden af immobilitet hos mus, der har været tvangs-neddykket, samt stimulerende virkninger, 35 der manifesterer sig ved forøgelse i bevægelsesaktiviteten hos mus, efter at de har vænnet sig til deres indelukke, og efter akut hypoxi.

38

DK 164900 B

Det iagttages også, at i stærke doser fremkalder CRL 41247 5 hypotermi (på -3,3°C, 30 minutter efter intraperitoneal ad ministration af 256 mg/kg af CRL 41247), en formindskelse af krampevirkninger af elektrochok og en forstærkelse af stereotypierne induceret af amphetamin.

III. Immunologiske egenskaber.

Det iagttages, at CRL 41247 stimulerer celleaktiviteten ifølge den ovennævnte teknik af T.E.Miller m.fl.

15 L. Prøver vedrørende produkterne fra eksempel 1-5.

Administreret intraperitonealt har CRL 41152 (eksempel 1), 2Q CRL 41177 (eksempel 2), CRL 41192 (eksempel 3), CRL 41212 (eksempel 4) og CRL 41217 (eksempel 5) ifølge opfindelsen alle: (i) stimulerende virkninger, der viser sig især som ophidselse med hvperreaktivitet hos mus, 25 forøgelse af den spontane motilitet hos mus, genoptagelse af bevægelsesaktiviteten hos mus, der har vænnet sig til deres indelukke, forbedring i genvindingen af bevægelse hos mus efter akut 30 , hypoxi, stereotype bevægelser hos rotter, antagonisme af søvnen induceret af barbital og forstærkelse af stereotypierne induceret med apomorphin eller amphetamin, (ii) antidepressive virkninger, der viser sig især som

DK 164900B

39 antagonisme af hypotermi induceret af apomorphin,oxotremo- rin eller reserpin og 5 reduktion i immobiliteten, den såkaldte desperation, (iii) virkninger, der kan afspejle perifer adrenergisk stimulering, (især mydriasis, antagonisme af ptosis induceret af 10 reserpin og antagonisme af rystelserne, der forårsages af oxotremorin), hvorimod andre tegn på a-adrenergisk stimulering, såsom spytdannelse og exophtalmirikke optræ der.

IS CRL 41152, CRL 41177, CEL 41192, CEL 41212 og CEL 41217 adskil ler sig alle fra amphetaminerne ved den omstændighed, at de stereotype bevægelser, som de inducerer i rotter, ikke undertrykkes ved forudgående injektion af α-methyltyrosiii (der er et sammenligningsstof, som blokerer pyrocatheguin-syntesen, en omstændig-20 hed, som forhindrer fremkomst af stereotypier induceret med amphetamin).

Desuden iagttages det- i modsætning til CEL 41192 og amphetami-ner - at CEL 41152, CEL 41177, CRL 41212 og CRL 41217 ikke for-25 øger toksiciteten over for mus i grupper sammenlignet med isole ret mus.

Endelig har CRL 41152, CRL 41192 og CRL 41212 antikrampevirknin-ger over for de kramper, der forårsages især af elektrochok, 30 hvorimod CEL 41177 og CRL 41217 forstærker krampevirkningerne af elektrochok.

Når endvidere CEL 41177 administreres gastrisk til hanmus (i opløsning i destilleret vand i et rumfang på 20 ml/kg), viser det 35 sig, at (i) dets virkning på spontan motilitet og (ii) dets virkning med barbital er større end ved intraperitoneal administration.

40

DK 164900 B

Ved kliniske forsøg blev CRL 41152 påvist at være et udmærket lægemiddel mod depressioner hos mennesket i form af tabletter eller gelatinekapsler, der hver indeholder 5 mg aktivt princip, i en mængde af to doser pr. dag, og CRL 41177 blev også påvist 5 at være et udmærket antidepressivt lægemiddel i form af tablet ter eller gelatinekapsler hver indeholdende 2 mg aktivt princip i en mængde af to eller tre tabletter eller gelatinekapsler pr. dag.

10 Sammen!iqningsforsøq.

Der blev foretaget et farmakologisk sammenligningsforsøg mellem kendte forbindelser og forbindelserne ifølge den foreliggende opfindelse med hensyn til deres antidepressive og stimuli- lerende virkninger samt potentiel blokering af deres stereoty pier ved hjælp af a-methyltyrosin.

I tabel A nedenfor er vist de undersøgte forbindelser.

2q "Eks" betegner forbindelserne ifølge opfindelsen, mens "CP" be tegner sammen1igningsforbindelserne.

25 30 35 41

DK 164900 B

CM

CM CM CM CM CM CM CM Λ ftl CVJ t\l (M ^

.—. ,—. —s CO

oj noocoocooos n to n os æ xxxxxxixoxxxxo ^ OOOOOUOO CVJOOOO'-'

rc -_j -s -— -—'— — CM X —' —' '—J

S xxxxxxxxoxxxxa: οοουοοου-'οουοο XXXXXXXXgggXXg Z2SSZSZ2Z2SSZ2 nnoncownw co co co o χχχχχχχεεχχκκκ x oooooooo o u o

CM

X XX

o o o CM CM CM

OOOOOXOOXOOXXX < OOOOOOOOOOUUUO

I

O χ° ΚϊϋϊϊΙΙΙΧΙΠΚΪΙίϊ

X I

in CM--- ~ «

rH

X

2 £ I · 0* < o xw x o Ej x a1 xx^xx^xx x i i o x x h

ι-ι X CO CO O O O O

Kl o till cg <τ μ- ^ co < i ___________ ___ ^ c r^S « —f— X co co co co i x x x ae \y O O O O ^ 7νχΛ co coco coo o o o o η o o o co

/ \ XXXXUOOOXXXXXX

/ \ ^ OOOUXXXXOOOOOO

/ ' x ooooszzsoooooo

/ CM OOOOCMCMCMCMOOOOOO

x xxxxxxxxxxxxgg

JH SXXXOOOOZZZZZZ

x ilillllllllj.il O’^'tcocococoncoio'f'f'ico CM CM O O- m m o) cm m

C Η H CM CM

Oj t—l Ή tH t—( o

X J J J J

X « « os o o o o ~ *0

-i u-dliij: -iKOflOO

£ ^ ro r~

£ l/) u 'n gii-4CMCO,TiniOC''C0O)H

Λ ££££0,0,0,0,0,0-040,0.0-

fcli. pLU-OUOOOOOOOU

_L-.- —- 42

DK 164900 B

j —

O O

O O O O O c c c c c G c ri il

Od Ή *H ι-i *H *H *0 Ό

K ΌΌΌΌΌ ή tH

t—t Ή Ή Ή *rt *H Η H

ffj CO CO CO CO CO CO P P P P p O O

2 S E S E E E O (U O) 4) 4> P P

o o o o o o ααααα p p 2 2 2 2 2 2 Ή Ή *H ιΗ τΗ >) >1 222222 ααααα αα » ο co co co coco cococococo coco X 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 o o o o o ooooo oo

CM

HJ CM CM CM CM CM CM

< o o o o e e o o 2 e 2 02 0 O O O O O ooooo oo o

X° X X X X X X X X X X X XX

-P

fO

03____

•P

P

0 r*

Ή ' O rH rH

w CM I Ο O

X 2 2 2 2 2 2 2 2 2 CO 2 II

CO CO

<

Pi

E

m <----

Eh co co X 2 o o rH cooocococo CO CO CO COCO coco X 2 0 0 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2

0 2 2 0 0 0 OOOOO OO

ossooo ooooo oo O CM CM o o o ooooo oo

2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 EE

2 0 0 2 2 2 22222 22

1 I I I I I I I I I I II

co co ί co t < co . [> ο Μ 01

p rH ^ CO rH

£5 CM CM CM CM

rt) rH rH rH rH

^ ^iiiii 'cr τ ι ι i cri

So o o o

K K K « K

o o o o •P Ο Ο Ο n <U ^ ' r-v X Ό Ό ΤΙ Ό p rH P-» Ό m h cm co cr m H 'H io co ^ oi

0 r-1 rH t—I tH t—I t—I t—l «Η t*H

J.j W W W IS1 d, .¾ CU CU E. CU ft. ^ ^ 1 D. D. 2

H OOOOO wwooo WO

43

DK 164900 B

o o o c c c •rt ·ιΗ ·Η

γΗ ιΗ rH

000000 _ c £ c x c x coco cvj -π α ή α -η α , '"ΐ.

PS η u r-i u ri U cm cm cm cm co oo rH OOOOOO r-N x x

OS £ g X E X E CO co co CO O U

z aoaoao ϊ i sc ϊ XX

ο ο o a oy ox o x o x ^ ^ ^ X g g e -ρ ε -p e -p z z z z zs n to to to co co cocococo coco ο xxxxxx x £ x x x x

X oooooo oooo Ο O

X

CM CVJ CM o CM

Ο Ο Ο Ο X X O O X X ox < OOOOOO oooo oo

TJ CO XXXXXX XXXX XX

fl] X

C/l

4J

P-----—-- 0

4H

CM XXXXXX XXXX XX

< X

P

w < e----- CO CO CO CO CO (0 co co coco coco

XXXXXX XXXX XX

,H OOOOOO oooo oo X OOOOOO oooo oo OOOOOO oooo oo

XXXXXX XXXX XX

Z Z Z Z Z Z Z Z Z Z z z

111111 I I I I II

'T CO (1 t O CO CO tj- -q- tfl t' N (J1 CM CD t> o vj· to to co in o

. CM CM CM C\J CM CM rH

^_j

CrHrHrHrH rHrH rH

i >3· <t ι i 'T'Tii •q-i

cs ts os cs tries IS

goooo oo o . 4-> ^ s v Λ Μ „ „ 73 73 ιη Ό £1 Ό 3 O^CCi^w-w' _ ^ ^ CM^

rc r-ι r- I-1 r-J o rH 17 H CM CO VT

o „ CM CM ,n rn ™ CM W™ p to co to co «ω w

Pn a: ac at a. a. ft ac a. a, ω °* KKXPl'OO WlflOO Wo

.. DK 164900 B

44 o o c c -t-\ Ή n s § co co ro ro ae *5 XIX X o τ' τ' CM O O o O Λ1

GC CM CM CM I I 1¾¾ COCO

r~i /—. . O O XX

CC CM CM CM y Z. / S\. ^ h) O O

2 xxx r S" & ™ o o o I ooxx

«W> I H H O O

xxx 1 J \ X M XX

2X2 N. \ / >i >i 22

2 X

o co co co co co coco coco

XXXX XX XX XX

o o o ο ο οο ου

2 X

ο CM CM ο < ΟΟΧ Ο X οχ οχ ουυ ο ο οο οο +1 * COXXX XX χχχχ , ® ^ < Ζ Ι_ I Ο Π) (Λ W *- • 3 2 >

^ :--- ·- Ο < C

1) —' (0 CM Η ο nj · I- 00 —1X3 ω - >— > η- _ι t.

Τ) -— co —· co i—i m (i cm · · t_ en s o o xxxx xx - xx xx r- +j r- ο co—

lj_; (0 fl) (0 DJ C

^ c cm in aj 4J ·' Z 4-> -r- I t-

<1)— OIU C<^i(U

C--------£T - CO Ml 3

>- UJ —»22 -I- CO 05 C

μ3 IIJ □ Z < 2 > 3 CM 0) (¾ _J Μ O ►-< O ·' C C- V) co Hzo_io;inro--r- rtj trxce-ixi-»—· co > 2 < u ο ή ο φ · i *o

X CO CD 2 CO · 3 r- < U

«Η cococo co co coco coco — — _ 1/) UJ (U I

XXXX XX XXXX ^£_C0t-

OOO O U OO OO OOt-iOr-c <35 0) +< 3 <D

OOO Ο O OO OO cm n n c- h CCDCfl Ο Ο O Ο O OO OO iOCOt»*iOOi-i-£-r- it ZC IC -C 3u ZE J-· ι-u η o >- <u <u 2 2 2 2 2 22 22 ^ « CO 05 in E UJ r- 3 ' ' ' I ' '1 ' ' 5 2 5 cm ^ hoj-c ^ ^ '"Τ ίο Ο) Μ Γ- O ·' AC I— CD -r-

3 · KND

------CO CM CO CO ^ ·γ- (/5 CD < 05 S_

I I I I I l- AC 3 X Ο O

<<<<<0(D — ΜΙ I I III— M- —

. CM O CM If) -Τ (OtO(/)(/)WrM-«OQiLO

p r—I IS <?· ’ί CM 333330(0 CM HI O U

C CM CM CM CM CM O 4MOOS-

| at £- £- 0) —< (I

QJ r-IrHl rH I τ—I I fHI 05 3 0) (fl Z « 3 O- O' ^ "T ^ .- >Ε>·«ίΧ-~< 0,, j j -, ® r Ot-lOO ·

XX X X X M- -.-(/5 CO i— CD

gg g g g ·" ' 1 i 3 -r- co — co a.

-P ,-, — (03 03 at**- 05x: M JD 3 fv-. 3 X ----— — — — P o — CM·'-' r-ι w 00 w Μ M· N li) ,-h lO l> ω 0 CM CM tn CM cn CM t- W jn rn rn V _v ® * 5 M g J2 g H g W g £

jg (Ϊ O gjO Ο Ο O

45

DK 164900 B

I en første forsøgsrække blev de i tabel A anførte forbindelser undersøgt med hensyn til deres antidepressive egenskaber (antagonisme af den hypotermi, som induceres af apomorphin og reserpin; reduktion af varigheden af fortvivlelses-immobili-5 tet) og deres stimulerende søvn induceret af barbital).

I disse forsøg blev hvert produkt, der skulle undersøges, indgivet intraperitonealt i opløsning i destilleret vand i et volumen på 20 ml/kg til hanmus.

10

De anvendte protokoller var som tidligere beskrevet, nemlig: virkning pS hypotermi induceret af apomorphin: 15 grupper på 5 mus blev via den I.P.-vej indgivet produkter, der skulle undersøges (hver i en dosis på 35 mg/kg) 0,5 time før en subkutan indgivelse af apomorphin (16 mg/kg), og en kontrolgruppe på 8 dyr fik destilleret vand i stedet for det produkt, der skulle undersøges; rektaltemperaturerne blev målt før og 20 efter behandling med henblik på at beregne den tilsvarende variation i procent af den apomorphininducerede hypotermi; virkning på hypotermi induceret af reserpin: 25 4 timer efter en intraperitoneal injektion af reserpin (2,5 mg/kg) fik grupper på 5 mus via den I.P.-vej indgivet produkter, der skulle undersøges (hver i en dosis på 35 mg/kg); variationen i procent af den reserpininducerede hypotermi blev beregnet som angivet ovenfor over for en kontrolgruppe på 8 30 dyr,· virkning Då fortvivlelses-immobi1 itet: 0,5 time efter de havde modtaget de produkter, der skulle un-3 5 dersøges (hver i en dosis på 35 mg/kg), blev grupper på 5 mus anbragt i et bæger fyldt med vand til en højde på 6 cm, idet 46

DK 164900 B

en kontrolgruppe på 8 dyr kun modtog vand; det totale tidsrum for immobilitet mellem det 2. og 6. minut efter neddykning blev noteret, og variationen i procent af varigheden af immobilitet hos mus, som var blevet tvangsneddykket, blev bereg-5 net; virkning på søvn induceret af barbital; 0,5 time efter indgivelse af de produkter, der skulle under-søges (hver i en dosis på 35 mg/kg), modtog grupper på 5 mus en intraperitoneal injektion af barbital (220 mg/kg), idet en kontrolgruppe på 8 dyr modtog vand i stedet for de produkter, der skulle undersøges; variationen i procent af varigheden af søvn induceret af barbital blev målt.

15

De opnåede resultater er givet i tabel B, hvori en negativ procentdel betegner en reduktion af virkningen (f.eks. en reduktion af hypotermi), og en positiv procentdel betegner en forøgelse af virkningen.

20 25 30 35 47

DK 164900 B

I I

to rH _ > -P Φ « 5 m > -P ^

Cfl -P -P P ’’P

^ O 'P OrHCnrHCDrHC^tnCVJOOOCnOtO

X! (O ø -i (i) CO rH rH CM li3 CO

0 c1·-1 ε i i i i i i i i i i i i i i o <d ε

•H 'P

P T3 I

CO Φ 03

ρχ: φ P cr cn CO *r) i—I

> P Φ Γ---- w JJ ^ Λ m 1) 05 J5.

.to P

oomoocMcoomcocMcoc^io w3 “1 cd cd 'tf rH co hcucvjhoocdco Ό to

C c +-1 i i I I I I I I I I I I I I

O *P ·Ρ 1-t Xi P (D P cd T3 to •H tDXi P C

cd a; iw > .-4 -(0

•H

oQ e -

P

pi Φ k +1 ^~s ^ ffi o $ cd < α c w —

Er*: rH *i-h x: a m co o o^rHomcnocoin P CD CO CO CO CO CQ T Η rt CD O Ifl lp Φ to ra iiii + ii + itiiii Φ λ U-ι p ΪΚ. co.........—-—-—- 4j ^ C φ C cd cd .

O *H ·—>’ *H Q) £ P m D. ocvjinoocvjificocvjinooocow

<d P CO CD O T CVJ CO rH rH C"· U> LO

p'^i i i i i i i ++ i i i i i i cd h o > o. cd CM CM O *tf • m cd cm m

p H rH CM CM

c

1 rH rH rH rH

φ 'tf'tf-tf'tfllilllllll

O PI J XI rJ

·£ PC K [C c . o o o o

-P

3 ir.

r£< rH Π Γ» ·>“1 O

o rHCMco^miDC^æcDrH

μ in to to to α, ^ΛίΛί^ο,α.α,ιχα.ο,ιχααΗΕχ ω κ κϋ’οοοουοοουο 48

DK 164900 B

ί·

" > +J μ_·η ω (C > -P -P -H

Qo-h in ,-h cd cm co cm co .o to in io

CtH Λ CO tri COCO ID to CO W W

0

C1« s I I I I I I I I I I I

orne

•H -H

•P Ό I cd tu in ?Xl (U P O'- w CO.H r-<

> Sri <D

j U] ,Ρ

Mri φ Π3Μ ^ ® >e 0 C/Dh r> <-ι ^ t> γη ω co o tri cm cd >b(C co co cm t n nr æ to 't to to c c +j o -η -H i i i i i i i i i i i

• n -Q

P <u u cd t3 rd

t1 CD.Q

fe c <5 aj <u —S I—I (0 -p id---- cn .

•p '2 g fe § 5 O _

02 O· c CM CM 01 ri N O) tf) ri CM CM (M

> tri CO tri t>- CO CO O' 0 ID O’ I Ί rC« O«

M ti I I I + I I I I I I I

§ Ή £ S (d «

S <D

^ "Ίκ fe «Λ----

O ^ -H

t ri P JC

P® CL CD O CD CM CO ID CO CO O CD O

Cd P fe C^ tri CO CO CO (O O' M

•ri P O

fri'O S I I I + I I I I I I I

ns c o >-fe α td

t> o CM

tri nr to

.CM CM CM

C tri tri tri 1 nr ι ι ι i i 'd- nr ι ι i ® hJ pi pi

B ve K K

go o o ^ 1-1 ·" p 10 h cm η τ m 1-1 to co

*g ω «-i *-< h tri μ j, H H H

μ £ O, PL P. fc O, £ £ fe. CL fe.

cu Wooooo· fe H o o o 49

DK 164900B

I i rd i-i > > -P •Η Φ lu > +J 'Γ 'Τ' (0 4-) ·Ρ 43 43 43 tn -r-ι N o σι o) to N æ O) o ifl ^ co

»IW43 ιΟ iO ID 'i CO η N Al i/) CM CO CVI CO CM

' LU C II I i I I I I I I I I II

§ra.^

Si-i ®£ 01 i, tn cn <0 "H d

> U <D

_r_- W jj H-i <D Λ id P - TT 'd (U X> 43 C? « _ o ίο σίΟ'νΤίηοσ) η h to ^ O cm

Srgfl O) " CO -r ^ CO CM O) m ^ co mco

c -S .ti II I I I I I I I I I I II

o X) 3 φ n £ *c co β n cw ^ i—i id 4-) ------- CO g 44 p M (1) ~ c· O 4-) n η λ ~ S CM CO i—I CO CO h (O CO CMCOOTCMCOO)

ir C <30 CO O0 CM CM CM CM CM CD t> LO ^ CO CM

OQ n Λ ' CL II I I i i I I I I I i I 1 ι-3 w W <u m <c m g „Ϊ £ *,-----

Φ y—N N

C u C & A .Q

O (U *t~4 S^» w •h o £ Μ-ω CM O) O O) m ΙΟ -M- lo r-4 co inco

+»3 a 00 C*· 00 CM CO CM CM CM 00 O' CO ^ CO CM

CB rø ti

r* C 2 i I llllll llll II

-H g cd o > α cd

CD ω O Γ" CD CM O JT

ri co co cd com c^·

CM CM CM CM CM CM CM «"I

P ri «-· «Η «-Ι iH ir·«-* .di C M-l ·Μ·Μ·^ΤΜ·|Ι ®3· I I ^ 1

d) J J J J J >J J

T3 Oi « « « « «02 K

o O O O O O O O u +j o «i oo m lo X ^ di r-n ι-H rH r-( q ,_, CD i—1 CM CO CN cr

P ,n ri CM CM CM CM CM

•Π S ID W M I» ffl n t0 o· Ma ϋϋ λ a: i, o, .* o. « 4* «

p. W0 WHKWoo KW, O O W U

a

50 DK 164900 B

ΓΓΊ (0 > 4-) > ·Η φ >4-) Ή 4-1 Ή Cd Cd

Cd 5-1 ι-c ^ w _ „ „ ^"Ο-Η t\J Ο) ΙΛ C-* ΙΟ 0)0 CO 00

ΐ^ιμΐ X) ιο ΟΙ ni · CM CV1 cm CO

— ο

£ III II II II

ο«.5 Τ3ό ι %<ΰ tn “·£ ® c tn tn

ClJ-H Τ-1 > Μ 0) I_____ ~C--- > s w 4-)

m (U

ed M mn c--.

(D cd nj

Q W W

3 H CO ri CO LD LO H ti) tH O

Wf0 ίΰ CO CO CM CM CM 00 ^ 0)00 g-H-H ....... 11

JdlH

njT3 cd -η &)X! . .

rt ffl m °-

* MM

« -|J —3-----O) D)

<0 £ J* 4C

“J *3 ^ \ ti « T 2

O +> ^ — ε E

ih o cd ca Q. w ^ U) u> "" - o CO m CO S CM C- CM t-l « w m x: r: CO CO CM CM CM CO CO O· W ^ Ti S_ £_ n ihcIII II II II o o )-14(13 4- 4- m cd <u « 2

ί Ή (4 O O

^ ^ (d_____^ ^ ^ Q) Φ +J _ _ ^+1 c m C O C cn w ° S τί 5 5

Tj <D *5 h ni to (O O) coco O CO ’“h·

Jg o O* CO CO CM CM CM i> CO (O

i I I I 1' 11 11 °: °: a 5 o : μ m > H α 05 U> O) _____X. X.

S N

CM CM ΙΩ 'ί O) O) (H ·μ- cm ε ε

CM CM CM CM CM

U " o o rH I—I (-1 r-l τ) MU) f 'i^-i -cri 'TI ^ I Mr-1 Φ (-4--1 *—1 XI (-4 -g *0 BJ OS IS « « £ 0 u u u o u ® , P4 +> ------ε Ο) μ 4J o CM ^ Μ

g ^ CN tf) r-l CO 1—1 C" 00 CO CD

(j CM CM CM CM 43 I

M in CO w “ w (D

X y 4i (1. ,¾ CU tt. -¾¾ +j - ->

H K K O H U Mu KO o CO JO

ft Z — — 51

DK 164900 B

Formålet med første forsøgsrække var at undersøge de produkter, som udviser både antidepressive og stimulerende virkninger, dvs. produkter, som ifølge hver protokol fører til en variation i procent svarende til eller 1avere end -25% [dvs.

5 produkter, som reducerer (i) hypotermi induceret af apomorphin og reserpin og fortvivlelses-immobilitet (antidepressive egenskaber) og (ii) søvnlængde induceret af barbital (stimulerende egenskaber)].

10

Tabel B viser, at eksempel 1 - eksempel 20 ifølge den foreliggende opfindelse alle udviser antidepressive og stimulerende virkninger (som enten kan være stærke eller svage), eftersom de i hvert forsøg fremkaldte en variation i procent svarende til eller mindre end -25%.

15

Af tabel B fremgår det klart, at (i) Eks. 1 - eks. 20 ifølge opfindelsen er mere aktive end de tilsvarende kendte carbonylforbindelser (A = CO; Xo = H) 20 (sammenlign f.eks. eks. 15 med CP 6; eks. 1, eks. 3 og eks. 7 med CP1, CP 3 og CP 4; og eks. 5 med CP 11 og CP 12; (ii) kendte forbindelser (A = CH2 eller CHON; X0 = CH3), som ud fra et strukturmæssigt synspunkt er analoge med amfetamin, 25 inducerer generelt (ligesom eks. 1 til 20) i hvert forsøg en variation i procent svarende til eller mindre end -25%, nemlig: CP 2, CP 8-10, CP 14-26 og CP 28 (kun CP 27 passerer ikke -25%-grænsen); 30 (i i i) blandet phenethylaminforbindelserne (Xg = H) repræsenteret af CP 5-7 og CP 13, er det kun CP 5, der passerer -25%-grænsen.

35 52

DK 164900 B

I en anden forsøgsrække blev alle forbindelserne, som udviste en variation i procent svarende til eller mindre end -25% i hvert forsøg i den første serie, undersøgt med henblik på at bestemme hvilke, som udviser en forskel i virkning over for 5 amfetamin.

Denne anden forsøgsrække blev udført over for a-methyltyrosin, et stof, der næsten fuldstændigt forhindrer forekomsten af stereotypier induceret af amfetamin og amfetaminlignende for-bindeiser.

Denne inhibering af stereotypier indikerer en blokering af catechol am i nerne in si tu.

På den ene side blev amfetaminhydrochlorid og de produkter, der skulle undersøges, indgivet via den intraperitoneale vej til hanrotter (grupper på 5 dyr pr. produkt plus en kontrolgruppe på 10 dyr, som kun modtog vand) med henblik på at bedømme intensiteten og varigheden af de inducerede stereotype 20 bevægelser.

På den anden side modtog grupper på 5 handyr 128 mg/kg a- methyltyrosin ved intraperi tonea 1 administrering 2,5 timer før administrer ing via den I.P.-vej af amfetaminhydrochlorid eller 25 de produkter, der skulle undersøges (30 mg/kg), idet en kontrolgruppe på 10 dyr blev anvendt. De opnåede resultater er givet i den efterfølgende tabel C.

30 35

DK 164900B

53

TABEL C

Forbindelse Kode-nr. Inhibering af stereotypier amphetamin HCl - 97 %

Eks 1 CRL 41 152 4 %

Eks 3 CRL 41 192 6 %

Eks 7 CRL 41 220 5 %

Eks 15 CRL 41 254 (a) CP 2 - 90 9é CP 5 - 91 % CP 8 - 85 % CP 9 - 91 % CP 10 - 87 %

Eks 5 CRL 41 217 3 % CP 14 - 86 % CP 15 - 90 %

Eks -11 CRL 41 240 5 %

Eks 17 CRL 41 262 15 % CP 16 - 84 % CP 17 - 87 % CP 18 - 90 %

Eks 6 CRL 41 219 7 96 CP 19 - 91 %

___I

^ABEL C I fortsat) 54

DK 164900 B

Forbindelse Kode—nr. Inhiberincr af stereotypier

Eks 10 CRL 41 236 (a)

Eks 14 CRL 41 247 10 %

Eks 18 CRL 41 267 12 %

Eks 19 CRL 41 269 15 % CP 20 - 80 % CP 21 - 82 %

Eks 9 CRL 41 232 4 %

Eks 16 CRL 41 259 6 % \ CP 22 - 81 % CP 23 - 84 %

Eks 2 CRL 41 177 4 % CP 24 - 82 % F.ks 4 CRL 41 212 5 %

Eks 20 CRL 41 277 6 % CP 25 - 83 %

Eks 12 CRL 41 242 (a) CP 26 - 81 %

Eks 13 CRL 41 245 3 %

Eks 8 CRL 41 224 5 % CP 28 - 87 % : Note (a) forbindelsen inducerer ikke stereotypier 55

DK 164900 B

Af dataene i tabel C fremgår det klart, at eks. 1 - eks. 20 ifølge opfindelsen har en virkningsmekanisme, som er forskellig fra (i) amfetamin og {i i) kendte forbindel ser, som udviser en amfetaminlignende virkning.

5 α-methyltyrosin fører til en inhi bering af 3% - 15% af de stereotypier, som induceres af eks. 1 - eks. 11, eks. 13 - eks.

14 og eks. 16 - eks. 20, mens eks. 10, eks. 12 og eks. 15 i modsætning til amfetamin og de kendte forbindelser ikke induc-10 erer stereotypier. Sammenlignet hermed fører α-methy1 tyros in til en i nhi bering af stereotypierne induceret af amfetamin på 97% og af CP 2, CP 5, CP 8-10, CP 14-26 og CP 28 på fra 80 til 91%.

15 Af tabellerne B og C fremgår det, at eks. 1 - eks. 20 ifølge den foreliggende opfindelse udviser en ikke-nærliggende virkning ved sammenligning med de kendte forbindelser.

Sammenliqninqsforsøg.

20

Yderligere forsøg blev foretaget med forbindelserne ifølge eks. 11 og 17 ifølge den foreliggende opfindelse, der refereres til som "Eks"-forbindel ser og deres tilsvarende kendte analoge forbindelser med formlen la, der refereres til som 25 "CP,,forbi ndel ser. De undersøgte forbindelser er anført i den efterfølgende tabel 0.

30 35

56 DK 164900 B

TABEL D

V-CO-A-B. HC1 X N '

Produkt Kode-nr. X A B

Eks 11 CRL 41 240 4-CH3COM CH(CH3) 1-piperidinyl

Eks 17 CRL 41 262 3-CH3CONH CH(CH3) 1-piperidinyl CP 1(a) - 2-CH3CONH CH2CH2 4-piperidinyl CP 2(b) - 4-CH3CONH CH2CH2 4-piperidinyl CP 3(c) - 4-CH3CONH CH2CH2 1-piperidinyl CP 4(d) - 2-CH3CONH CH2CH2CH2 1-piperidinyl CP 5(e) - 3-CH3CONH CH2CH2 4-piperidinyl CP 6(f) - 3-CH3CONH CH2CH2 1-piperidinyl CP 7(g) CRL 41 021 4-CH3CONH CH2 NHCH(CH3)2

Noter 20 (a) beskrevet i eks. 18 i US-A-4 294 841 (CHAMPSEIX et al . ) (b) ifølge US-A-4 294 841 (CHAMPSEIX et al.); isomer af CP 1 af 4-CH3CONH- og 4-piperidinyl-type; (c) ifølge US-A-4 294 841 (CHAMPSEIX et al.); isomer af CP 1 25 af 4-CH3CONH- og 1-piperidinyl-type; (d) beskrevet i spalte 11, linie 16 i US-A-3 907 812 (YAMAMOTO et. al .) ; (e) ifølge US-A-4 294 841 (CHAMPSEIX et al.); isomer af CP 1 af 3-CH3CONH- og 4-piperidinyl-type; 30 (f) ifølge US-A-4 294 841 (CHAMPSEIX et al.); isomer af CP 1 af 3-CH3CONH- og 1-piperidinyl-type; (g) beskrevet i eks. 1 i US-A-4 545 996 (Louis LAFON).

35

DK 164900 B

57

Egenskaberne hos disse forbindelser som anført i tabel D som potentielle immunomodu1 atorer blev bestemt ifølge de teknikker, som er beskrevet i det foregående. De anvendte forsøgsprocedurer var således på den ene side den såkaldte undersø-5 gelse for celler, der danner lysearealer, som er beskrevet af A.J. CUNNINGHAM et al. ("Further improvements in plaque technique for detecting simple antibody forming cells"), Immunology 14, side 599-601 (1968), og på den anden side den såkaldte undersøgelse for intensitet af forsinket hypersensitivitet 10 over for røde blodlegemer hos får, som er beskrevet af E.E. MILLER et al. ("Immunopotenti at i on with BCG II modulation of the response to sheep blod cells"), Journal of the National Cancer Institute 51 (nr. 5) side 1669-1676 (1973).

15 1) Ved forsøget til bestemmelse af celler, der danner lyseare aler (eller PFC IgM) undersøges den humorale immunitet. Fire dage efter immunisering med et T-afhængigt antigen (i dette tilfælde røde blodlegemer fra får), tælles de miltceller, som udtrykker et direkte IgM-antistofrespons. De mus, som blev an-20 vendt til dette formål, var konventionelle Swiss OFi-hunmus fri for specifikke patogene organismer med en vægt fra 20 til 30 g og opdelt i en kontrolgruppe på 14 dyr og grupper, som hver indeholder 7 dyr pr. dosis og pr. forbindelse, der skal undersøges, hvilken forbindelse blev indgivet oralt på den 25 samme dag som antigenet. Et akt i vitsindeks I beregnes for hver dosis af forbindelse ifølge følgende ligning: I = gennemsnit af lyser pr. milt for de behandlede mus gennemsnit af lyser pr. milt for kontrol musene 30

Dette forsøg gennemføres mindst to gange for hver dosis af de forbindelser, der skal undersøges (0,1, 1, 10 eller 100 mg/kg), og en statistisk undersøgelse gennemføres under anvendelse af Student t - test efter variansanalyse på antallet af lyser pr. milt.

v v 2) Forsøget til bestemmelse af intensiteten af forsinket hypersensi ti vi tet over for røde blodlegemer hos får er en teknik 58

DK 164900 B

til undersøgelse af cellulær immunitet. Hver forbi ndel se, der skal undersøges, indgives enten oralt, hvis den er uopløselig, eller (som det er tilfældet her) subkutant i potens trædepude, hvis der er opløselig i vand, idet forbindelsen indgives 3 5 dage før immunisering (ved subkutan administrering af røde blodlegemer fra får ind i trædepuden, til konventionelle Swiss OF^-hunmus, opdelt i en kontrolgruppe på 10 dyr og grupper, som hver indeholder 5 dyr pr. dosis og pr. forbindelse, der skal undersøges. De opnåede resultater er udtrykt som procent-10 vis stigning af trædepudens tykkelse.

Forsøget gennemføres mindst to gange for hver dosis af forbindelse, der skal undersøges (0,1, 1, 10 eller 100 mg/kg), og en statistisk undersøgelse gennemføres som anvist ovenfor.

15

De således opnåede resultater, er givet i den efterfølgende tabel E sammen med de anvendte doser.

20 25 30 35 59

TABEL E

DK 164900 B

Immunologisk sammenligningsforsøg ” - j

Produkt Kode-nr. Dosis (a) I (b) DHS (c)

Eks 11 CEL 41 240 0.1 1,24 12,71*

Eks 11 CEL 41 240 1 1.62* 13,12*

Eks 11 CEL 41 240 10 1,54* 13,08*

Eks 11 CEL 41 240 100 1,40* 12,81*

Eks 17 CEL 41 262 0.1 1.25 12,86*

Eks 17 CEL 41 262 lo' 1,56* 13,02*

Eks 17 CEL 41 262 100 lj38* 12,97* CP 1 - 1 1.02 8.31 CP 1 - 10 1,08 8,32 CP 1 - 100 0,98 8,29 CP 2 - 1 1,06 8,27 CP 2 - 10 1,04 8,29 CP 2 - 100 1,01 _ 8,30 CP 3 - 1 0,97 8,26 CP 3 - 10 0,96 8,25 CP 3 - 100 0,99 8,27 CP 4 - 1 1,03 8,25 CP 4 - 10 1,01 8,29 CP 4 - 100 0,98 8,30 CP 5 - 1 1,05 8,30 CP 5 - 10 1,04 8,26 CP 5 - 100 1,04 8,28 CP 6 - 1 0/97 8,25 CP 6 - 10 0,97 8,27 CP 6 - 100 1,01 8,26 60

DK 164900 B

TABEL E fortsat)

Immunologisk sammenligningsforsøg

Produkt Kode-nr. Dosis ,(a) I (b) DHS (c) 5 CP 7 CRL 41 021 0„1 1.06 8.31 CP 7 CRL 41 021 1 1.02 8,30 CP 7 CRL 41 021 10 0.97 8,26 CP 7 CRL 41 021 100 1,01 8;27

Kontroldyr ” ^700 8>28 10 ______

Noter (a) : dosis udtrykkes i mg/kg, administrationsmåden er oral til måling af aktivitetsindeks I og subkutan for måling af for- 15 sinket hypersensibi 1 itet DHS; (b) : aktivitetsindeks ifølge den såkaldte undersøgelse for celler, som danner lysearealer: 20 i = gennemsnit af lyser pr. milt for de behandlede mus gennemsnit af lyser pr. milt for kontrolmusene (c) : intensitet af den forsinkede hypersensibi1itet over for røde blodlegemer fra får udtrykkes som procentvis stigning af 25 trædepudens tykkelse; * : resultater, som statistisk er signifikante i forhold til kontrol dyrene.

30 Af resulaterne i tabel E fremgår det tydeligt, at CRL 41 240 (eks. 11) og CRL 41 262 (eks. 17) i modsætning til CP 1 - CP 7, udviser værdifulde immunologiske egenskaber som immunomodu-1 atorer.

35 Nærmere bestemt udviser CRL 41 240 (eks. 11) og CRL 41 262 (eks. 17) en indeksværdi I på henholdsvis fra 1,24 til 1,61 og fra 1,25 til 1,56 samt en DHS-værdi på henholdsvis fra 12,71

Claims (7)

1. 5 Endvidere fremgår det af tabel E, at i familien af forbindelser med formel la er der ingen struktur/aktivitet-sammenhæng for så vidt angår den immunomodulerende virkning. Følgelig er det umuligt at forudsige, hvorvidt en forbindelse med formel la, såsom eks. 11 eller eks. 17 er en værdifuld immunomodula-10 tor før undersøgelse heraf. Patentkrav.
2. 1. Derivater af l-(acetylaminophenyl)-2-aminopropanon, kendetegnet ved, at de er valgt blandt forbindelserne, der udgøres af a) forbindelserne med formlen 20 Ar-CO-CH(CH3)-NR1R2 (I) hvor Rj er en Cj-C4alkylgruppe eller en Cg-Cgcykloa 1 kyl gruppe, R2 er et hydrogenatom eller en C^-C4alkylgruppe, eller 25 Ri og R2 sammen med nitrogenatomet, hvortil de er bundet, kan danne en N-heterocykli sk gruppe med 5-7 led, som kan (i) indeholde et andet heteroatom valgt blandt N, 0 og S, og 30 (ii) være substitueret, hvilken heterocyk 1 iske gruppe NR31R2 er valgt af gruppen bestående af pyrrolidino, morpholino, thiomorpholino, piperidino, hexamethylenimino, piperazino, 4-methyl-piperazino, 4-(/3-hydroxyethy 1 )piperazino, 4-phenyl- 35 piperazino og 4-(p-chlorphenylJpiperazino, DK 164900 B 62 Ar er en acety1 am inopheny1 gruppe med formlen Z hvor X er CH3CONH, og Y og Z, der kan være ens eller forskellige, hver er et hydrogenatom eller halogenatom, og 10 b) deres farmaceutisk acceptable additionssalte.
3. 2. Derivat ifølge krav 1, kendetegnet ved, at Ar er en 4-acetylaminophenyl-, 4-acetylamino-3-chlorphenyl-, 15 4-acetylamino-3,5-dichlorphenyl-, 3-acetylaminopheny1- eller 3-acetylamino-4-chlorphenylgruppe. 3. l-(4-acetylamino-3,5-dichlorphenyl)-2-i sopropy1aminopro-panon og dens additionssalte ifølge krav 1. 20 4. 1-(4-acetylaminopheny!)-2-ethylaminopropanon og dens additionssalte ifølge krav 1. 5. l-(4-acetylaminophenyl)-2-piperidinopropanon og dens addi- 25 tionssalte ifølge krav 1. 6. 1-(4-acetylamino-3-chlorphenyl)-2-pyrrolidinopropanon og dens additionssalte ifølge krav 1. 30 7· 1-(3-acetylaminophenyl)-2-piperidinopropanon og dens addi tionssalte ifølge krav 1. 8. 1-(4-acetylaminophenyl)-2-isopropylaminopropanon og dens additionssalte ifølge krav 1. 35 9. l-(4-acetylaminophenyl}-2-tert.-butylaminopropanon og dens additionssalte ifølge krav 1. DK 164900B 63
4. 10. Terapeutisk middel, kendetegnet ved, at det sammen med et fysiologisk acceptabelt hjælpestof indeholder mindst ét derivat af 1-(acetyl aminophenyl)-2-aminopropanon ifølge krav 1 eller et af dets ugiftige additionssalte. 5
5. 11. Fremgangsmåde til fremstilling af et derivat af l-(ace-tylaminophenyl)-2-aminopropanon ifølge krav 1, kendetegnet ved, at man lader et halogenderivat med formlen
6. 10 ArCOCH(CH3) Hal (III) hvor Ar er en acetylaminophenylgruppe z (hvor X er CH3CONH, Y er H, F, Cl eller Br, Z er H, F, Cl el-20 ler Br, og Hal er Cl eller Br) reagere med en am in med f orm-1 en HNRiR2 (IV) 25 (hvor Rj og R2 er som ovenfor defineret) ved en temperatur mellem 15°C og reaktionsmediets tilbagesvalingstemperatur i mindst 1/2 time i et mængdeforhold på mere end 1 mol af aminen IV til 1 mol af halogenderivatet III.
7. 12. Fremgangsmåde til fremstilling af et derivat af l-(acetyl- aminopheny1)-2-aminopropanon ifølge krav 1, kendetegnet ved, at et derivat af 1-(aminophenyl)-2-aminopropanon med formlen 35 64 DK 164900 B (C N >— COCH(CH,)NR,R,, hnATI/ (v) g n 2^* j z hvor Y, Z, Rj og R2 er som ovenfor defineret, underkastes en acetyl er i ngs reakt ion ved hjælp af et støkiometrisk overskud af 10 et acetyleringsmiddel valgt blandt acetylhalogeniderne og ed-dikesyreanhydrid i mindst 2 timer ved reaktionsmediets tilbagesval ingstemperatur. 15 20 25 30 35