DK158666B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af 5,14-dihydrobenz-oe5,6aa-isoindolooe2,1-baa-isoquinolin-8,13-dion - Google Patents

Description

DK 158666 B

Den foreliggende opfindelse angår en analogifrem-gangsmåde til fremstilling af en hidtil ukendt isoquinolin-forbindelse som er nyttig til behandling af cancere, nemlig 5,14-dihydrobenz[5,6]-isoindolo[2,1-b]-isoquinolin-5 8,13-dion der har formlen 0 _ J ^

OCcCO

10 og fremgangsmåden ifølge opfindelsen er ejendommelig ved det i patentkravets kendetegnende del angivne.

Forbindelsen med formel I eksisterer i mindst to 15 krystalformer og som det fremgår af kravet tager opfindelsen sigte på fremstilling af begge disse former. De to isolerede krystalformer er ved pulver-røntgenkrystallografi påvist at være morfologisk distinkte og har forskellige IR-spektre. Disse to former omtales i nærværende beskri-20 velse som form A og form B og kan blandt andet kendes fra hinanden ved at form B har signifikant højere opløselighed i dimetylformamid end form A.

Hovedreaktionen, dvs. omsætningen af 2-formyl-3-karboxy-1,2,3,4-tetrahydroisoquinolin med 1,4-naftoquinon, 25 kan fx udføres i nærværelse af et alkansyreanhydrid såsom eddikesyreanhydrid, eventuelt i nærværelse af et opløsningsmiddel som fx et kulbrinteopløsningsmiddel såsom toluen. Fortrinsvis udføres processen under opvarmning til fx 80-120°C.

30 Omkrystallisation af det umiddelbare produkt af pro cessen, der normalt er form B hvis reaktionen udføres i fravær af et yderligere opløsningsmiddel, fra fx kloroform og metylenklorid, giver forbindelsen med formel I i form A. Desuden kan form A vindes ud fra form B ved opvarm-35 ning som en opslæmning i toluen, fortrinsvis i nærværelse af en podekrystal af form A.

DK 158666B

2

Forbindelsen med formel I kan vindes i form B ved opløsning deraf i et flydende opløsningsmiddel såsom di-metylformamid og dispergering af opløsningen i en anden 5 væske, fx vand, som er blandbar med det første opløsningsmiddel, og i hvilken forbindelsen I er i det væsentlige uopløselig. Hvis opløsningen af forbindelsen med formel I hurtigt dispergeres i den anden væske udfældes forbindelsen fra opløsning i findelt, fx mikrokrystallinsk form.

10 Forbindelsen med formel I har anti-canceraktivitet, navnlig mod tumorer såsom sarkomer, karcinomer og hepato-mer.

Når således forbindelsen indgives intraperitonealt eller intravenøst til mus med en subkutan svulst opstået 15 fra et implantat af S180-celler, har påfølgende eksamination vist at tumorvæksten er blevet nedsat signifikant, og i nogle tilfælde er der indtrådt total regression af svulsten. Det har således ved omfattende forsøg med det faste tumor-sarkom 180 implanteret subkutant i mus vist 20 sig, at doser af forbindelsen med formel I på 3,1 og 6,25 mg/kg legemsvægt ved daglig intraperitoneal indgift gennem 21 dage gav en stærkere reduktion end 50% af tumorvægten i sammenligning med ubehandlede kontroldyr.

Forbindelsen med formel I gav ingen signifikante 25 toxiske virkninger ved intraperitoneal eller intravenøs indgift til mus i en dosis på 25 mg/kg om dagen i indtil 20 dage.

Der er også påvist aktivitet mod hepatom (D23 fast rottetumor), HT29 humant tyktarms-xenograft hos nøgne mus, 30 og L 1210 (lymfocytisk museleukæmi dyrket ascitalt).

Forbindelsen med formel I kan således bruges til behandling af mennesker eller dyr til bekæmpelse af kræft, navnlig tumorer.

35

DK 158666B

3

Forbindelsen med formel I kan til farmaceutisk anvendelse inkorporeres i konventionelle præparater enten i fast eller flydende form.

Sådanne præparater kan fx være i en form egnet til 5 oral/ rektal, topisk eller mest foretrukket parenteral indgift. Egnede former er fx tabletter, kapsler, granuler, suppositorier, cremer, salver og lotioner og især suspensioner og/eller opløsninger til injektion eller infusion.

Det virksomme stof kan inkorporeres i excipienter 10 der sædvanligvis anvendes i farmaceutiske præparater som fx talkum, gummi arabic.um, laktose, stivelse, magniumstea-rat, kakaosmør, vandige eller ikke-vandige bærervæsker, fedtagtige stoffer af animalsk eller vegetabilsk oprindelse, paraffinderivater, glykoler, forskellige befugtnings-, 15 dispergerings- eller emulgeringsmidler og/eller konserveringsmidler .

Præparaterne kan med fordel oparbejdes som dosisenheder hvor hver .dosis er indrettet til at levere en fast dose af den omhandlede forbindelse. Egnede dosisenheder til voks-20 ne mennesker indeholder fra 50 til 1000 mg af forbindelsen med formel I. Dosisstørrelsen, der kan variere alt efter den patient som skal behandles og den involverede lidelse, kan fx være fra 0,25 til 7,0 g om dagen til voksne mennesker .

25 X betragtning af at forbindelsen med formel I i væ sentlig grad er uopløselig i vand er en særlig foretrukket indgiftform en suspension af forbindelsen i mikrokrystallinsk form. Den mikrokrystallinske forbindelse med formel I kan have enten form A eller form B og kan være en blanding af 50 de to, og fortrinsvis har det mikrokrystallinske materiale en gennemsnitlig partikelstørrelse på ikke over 2μπι.

35

DK 158666B

4 Særligt fordelagtige indgiftformer til parenteral anvendelse af forbindelsen med formel I kan fremstilles i form af en suspension til indgift enten ved injektion eller ved infusion.

5 Til injektion forefindes forbindelsen med formel I

hensigtsmæssigt i mikrokrystallinsk form med en gennemsnitlig partikelstørrelse af størrelsesordenen 1 til 2μπι (i det følgende omtalt som "den mikrofine form") og dispergeret i vand til injektion.

1 q I infusionspræparater forefindes forbindelsen med formel I hensigtsmæssigt i mikrokrystallinsk form med en gennemsnitlig partikelstørrelse af størrelsesordenen 1/2 μπι (i det følgende omtalt som "den ultrafine form"), dispergeret i vand til injektion.

15 For at fremstille suspensioner af enten den mikrofine eller den ultrafine form sættes en opløsning af forbindelsen med formel I i et opløsningsmiddel såsom dimetylformamid, eventuelt indeholdende et overfladeaktivt middel, langsomt under hurtig dispergering i et blandbart ikke-opløsningsmid-2o del, fx vand. Eksempler på egnede overfladeaktive midler er et lecithin eller et sorbitanderivat, fx polysorbat 80 BP.

Til fremstilling af det mikrofine materiale dispergeres dime tyl formami dop løs ningen fortrinsvis i et lige så stort rumfang ikke-opløsningsmiddel såsom vånd. Ultrafint materiale 25 fremstilles hensigtsmæssigt ved dispergering af dimetyl- formamidopløsningen- i omkring tre eller flere rumfang vand. Dimetylformamidet kan fjernes fra de resulterende suspensioner ved konventionel teknik såsom dialyse eller ved en metode som indebærer ultrafiltrering.

30 Suspensionen af de mikrofine krystaller er en sådan at partiklerne vil udskille sig ved centrifugering eller endog ved henståen; det krystallinske materiale kan således opsamles og gensuspenderes til højere koncentration.

Ved anvendelse af sådanne teknikker til fremstilling 35 af suspensionerne foreligger det mikrofine materiale hensigtsmæssigt i en koncentration på 5 mg/ml og det ultrafine i en koncentration på 1 mg/ml.

DK 158666B

5

Fremgangsmåden ifølge opfindelsen skal i det følgende belyses ved nogle eksempler.

Eksempel 1 5 5.14- Pihydrobenz[5,6]-isoindolo[2,1-b]-isoquinolin-8,13-dion

En blanding af 17,50 g 2-formyl-3-karboxy-l,2,3,4-te-trahydroisoquinolin og 26,95 g 1,4-naftoquinon i 437 ml eddi-kesyreanhydrid opvarmedes til 100°C under omrøring i 30 minutter. Reaktionsblandingen afkøledes og det faste stof opsamle- 1 0 des ved filtrering, vaskedes med æter og tørredes.

Omkrystallisation fra kloroform/metylenklorid gav den i overskriften angivne forbindelse i form A i en mængde på 11,13 g, Amax (ætanol) 245 (ε=43700), 265 (e=14l00) og 368 nm (ε=5200).

15 .

Det infrarøde spektrum af den i overskriften angivne forbindelse i form af en opslæmning mineralolie udviste karakteristiske toppe ved 1756 (skulder), 1748, 1598, 1572, 1546 og 838 cm

Eksempel 2 20 __________ 5.14- Dihydrobenz[5,6]-isoindolo[2,1-b]-isoquinolin-8,13-dion

En blanding af 20 g 2-formyl-3-karboxy-l,2.,3,4-tetra-hydroisoquinolin og 30,8 g 1,4-naftoquinon i 500 ml eddikesy-reanhydrid opvarmedes til 100°C under omrøring i 30 minutter.

25 Reaktionsblandingen afkøledes, det faste stof opsamledes ved filtrering, vaskedes med 50 g eddikesyreanhydrid og med 2 x 100 ml æter og tørredes til frembringelse af den i overskriften angivne forbindelse i form B i en mængde på 26 g.

Beregnet for C2oH13iI02: C 80,2 H4,3 N4,6 30 Fundet: C 80,4 H 4,3 N 4,7%.

Det infrarøde spektrum af den i overskriften angivne forbindelse i form B i mineralolie udviste karakteristiske toppe ved 1766, 1742, 1594, 1564, 1544 og 1292 cmrl.

35 Eksempel 3

Mikrofin suspension til parenteral indgift

DK 158666 B

6

Virksom bestanddel _ op til 800 mg

Dimetylf ormamid eller dimetylacetamid 200 ml

Polysorbat 80 BP 200 mg

Vand til injektion 200 ml

C

Det virksomme stof og polysorbat 80 opløses i opløsningsmidlet, der derefter sættes til vandet under kraftig omrøring så der frembringes et fint bundfald.

Derpå fjernes opløsningsmidlet ved dialyse eller ved metoder indebærende ultrafiltration. Man kan også fra-1 Ω skille krystallerne ved centrifugering og gensuspendere dem i vand til injektion,‘fortrinsvis indeholdende polysorbat 80BP. så tilsættes der natriumklorid for at gøre produktet isotonisk. Det sluttelige produkt har følgende sammensætning udtrykt i procent v/r (forhold mellem faststof og '15 væske som mellem g og ml):

Virksomt stof i mikrofin form 0,1 - 5 polysorbat 80 BP 0,1-0,05 natriumklorid 0,9 vand til injektion indtil 100

20 J

Natriumkloridet kan eventuelt erstattes med andre midler såsom glukose (5%), glycerol (2,5%) eller sorbitol (5%) .

25 Eksempel 4

Ultrafin suspension til parenteral indgift

Virksomt stof op til 800 mg dimetylf ormamid AR 200 ml 50 polysorbat 80BP 400 ml vand til injektion 600 ml

Det virksomme stof opløses i dimetylformamidet. Polysorbat 80 opløses i vandet og opløsningen af det virksomme 35 stof i dimetylformamid sættes til vandet under kraftig omrøring. Der dannes herved en ultrafin suspension. Derpå fjernes dimetylformamidet fra produktet ved en proces som inde-

DK 158666B

7 bærer ultrafiltrering, eller ved dialyse.

Så tilsættes der glycerol for at gøre produktet iso-tonisk. Slutproduktet har følgende sammensætning utrykt i procent v/r; 5 Virksomt stof i ultrafin form indtil 0,1 polysorbat 80 BP 0,05 glycerol 2,5 vand til injektion indtil 100 1q Glycerolen kan eventuelt erstattes ved andre midler såsom glukose (5%) eller sorbitol (5%).

Eksempel 5

Ultrafin suspension til parenteral indgift 18,5 mg af det virksomme stof opløses i 5 ml dimetyl-formamid ved stuetemperatur for at give opløsning A. Derefter fremstilles opløsning B ved at dispergere 0,185 g soja-bønnelecithin i 18,5 ml destilleret vand øg ultralydbehandle 20 dispersionen med en "Dawes Soniprobe" i 1 1/2 minut under nitrogen i et isbad. Derpå sættes opløsning A til opløsning B under omrøring med en skovlomrører. Dimetylformamidet fjernes ved dialyse eller ved en metode der indebærer ultrafiltrering. Derpå tilsættes der glycerol for at gøre opløsningen 25 isotonisk.

Eksempel 6

Ultrafin suspension til parenteral indgift 30 37 mg virksomt stof og 37 mg sojabønnelecithin oplø ses i 10 ml dimetylformamid. Til denne opløsning sættes der 37 ml destilleret vand under omrøring med en skovlhjulomrører eller en magnetisk omrører. Dimetylformamidet fjernes ved dialyse eller ved en metode som indebærer ultrafiltrering.

35 Så tilsættes der glycerol for at gøre produktet isotonisk.

Claims (1)

10 S) kendetegnet ved at man omsætter 2-formyl-3-karboxy-1,2,3,4-tetrahydroisoquinolin med 1,4-naftoquinon under karboxylaktiverende betingelser, og om ønsket til ^ fremstilling af forbindelsen i krystalform A (med karakteristiske IR toppe bestemt i mineralolie ved 1756 (skulder), 1748, 1598, 1572, 1546 og 838 cm omkrystalliserer forbindelsen med formel I fra et opløsningsmiddel for forbindelsen eller om ønsket til fremstilling af forbindelsen 2Q i krystalform A (som defineret ovenfor) opvarmer en opslæmning af forbindelsen med formel I i toluen eller om ønsket til fremstilling af forbindelsen i krystalform B (med karakteristiske IR toppe bestemt i mineralolie ved 1766, 1742, 1594, 1564, 1544 og 1292 cm ^) hurtigt 25 dispergerer en opløsning af forbindelsen med formel I i et væskeformigt opløsningsmiddel derfor i en anden væske som er blandbar med det væskeformige opløsningsmiddel og i hvilket forbindelsen med formel I er i det væsentlige uopløselig. 30 35