DK156122B - Fremgangsmaade til fremstilling af en sporelementpraeparat indeholdende jern og selen - Google Patents

Description

DK 156122 B

Den foreliggende opfindelsen angâr en fremgangsmâde til fremstilling af .et sporelementpræparat indeholdende jern og· selen og beregnet til behandling af mangeltilstande.

Jern og selen er essentielle grundstoffer og mangel 5 derpâ resulterer i" anæmi (jernmangelanæmi) og forringelse af evnen til at overkomme forskellige slags belastninger (selen-mangel). ünge, hurtigt voksende dyr sâsom kalve, lam og navn-lig smâgrise kan lide af jern- og selenmangel. En nyf0dt gris modtager kun 1 mg jern om dagen fra soens mælk mens behovet 10 er 7-8 mg. I omrâder hvor jordbunden er særlig fattig pâ selen modtager smâgrisene ikke tilstrækkelig meget selen og er ud-sat for forskellige degenerative sygdomme.

For at tilfredsstille jern- og selenbehovene hos voksende dyr fra fodslen og fremefter giver man nu om stunder smâ-15 grise med alderen 1-3 dage jern og selen, sædvanligvis i form af en intramuskulær eller subkutan injektion. Jern gives sædvanligvis som ferridextran svarende til 100-200 mg jern. Selen indgives som natriumselenit i en dosis pâ omkring 0,06 mg +4

Se /kg. Eftersom selenets halveringstid i organismen er kort 20 og overskud ikke oplagres i kendelig grad, giver en enkelt seleninjektion kun kort tidsbeskyttelse.

Da der mâ gives injektioner af jern og selen til et stort antal smâgrise ville der kunne spares en mængde arbejde hvis disse stoffer kunne kombineres i en enkelt injektionsop-25 losning. Læsioner pâ grund af injektionerne og risikoen for infektioner ville ogsâ blive nedsat ved at man gav en injektion i stedet for to.

Hidtil har man imidlertid ikke kombineret selen og jern i en oplesning fordi det er kendt at selen danner uoploselige 30 forbindelser med jern. Dette forhold udnyttes ved fx selenana-lyser. Faktisk er der advaret offentligt mod at indf0re selen-salte eller opl0sninger deraf i drikkevandsanlæg fordi selen udfældes i nærværelse af jernforbindelser. Det har nu vist sig at nâr en oploselig selenforbindelse kombineres i en injektions- 35 opl0sning med visse hojmolekylære jern-polysakkarid-komplekser, fældes selen ikke i modsætning til hvad man ville vente.

Det har ogsâ vist sig at injektion af et sâdant, hidtil ukendt præparat i dyr giver en yderligere kilde til selen i 2

DK 156122 B

som overraskende kan oplagres i organismen. Lagringsmekanis-men er ikke klar, men det overskydende oplagres sandsynlig-vis i form af jern-selen-komplekser.

I princippet kan en hvilken som helst fysiologisk assi-5 milerbar opl0selig selenforbindelse anvendes i det ny præparat. Særlig velegnede er natriumselenit og selendioxid.

Brugba’re jern-polysakkarid-komplekser er ferridextran og ferripolymaltose.

Jern- og selenindholdet i oplosningen kan variere inden 10 for et betydeligt omrâde ait efter om mangeltilstandene fprst og fremmest skyldes mangel pâ jern eller forst og fremmest man- gel pâ selen. Vægtforholdet mellem selen og jern kan være fra “S — 1 10 til 10 .1 overensstemmelse med det anf0rte er fremgangs- mâden ifolge opfindelsen ejendommelig ved det i krav l's ken-15 detegnende del anforte. Særligt hensigtmæssigt er et mængde-forhold pâ 10 ^ til 10

Oplosningen tilberedes ved at man oploser selenforbin-delsen i en vandig oplosning af ferridextran, ferripolymaltose eller et hydrolysat deraf og tilsætter vand efter behov.

20 Det er ogsâ muligt at blande substanserne i pulveriseret til-stand og tilsætte vand senere forud for brugen. Eventuelt kan der sættes andre stoffer som fx vitamin E til blandingen.

Den ved fremgangsmâden ifplge opfindelsen fremstillede ny type præparat indeholdende natriumselenit og ferridextran 25 blev ved forspg indgivet intramuskulært til tre grise med en vægt pâ 15-25 kg og lidende af selenmangel. Andre tre grise lidende af selenmangel fik samme dosis natriumselenit. Indholdet af selen i sérum og glutation-peroxydase-enzymaktivi-teten blev bestemt som mâl for selenets bioaktivitet i organis-30 men. Det viste sig at bâde selenindholdet og glutationperoxyda-se (gSH-Px) aktiviteten var væsentligt hojere hos de grise der fik det ved fremgangsmâden ifplge opfindelsen fremstillede præparat end hos de grise der fik natriumselenit (se nedenstâende tabel 1 hvor Iü stâr for internationale enheder). Aile grisene 35 var pâ samme diæt under hele forsogsperioden.

3

DK 156122 B

Tabel 1

Prove ved dag 8 ved dag 15

Nr. gSH-Px, Se, gSH-Px, Se, gSH-Px, Se, 5 IU/1 ng/ml IU/1 ng/ml IU/1 ng/ml 1 373 28 1065 53 632 40 2 298 19 796 47 437 32 3 325 23 926 47 484 34 10 Gns. 332 23 926 49 518 35 4 374 20 1288 65 804 46 5 279 18 1365 63 752 49 6 429 26 1643 90 706 51

Gns. 361 21 1432 73 754 49

Dyrene nr. 1, 2 og 3 fik 0,06 mg Se pr. kg legemsvægt intra-muskulært som natriumselenit.

Dyrene nr. 4, 5 og 6 modtog 0,06 mg Se pr. kg legemsvægt intra-2q muskulært som natriumselenit kombineret med ferridextran, 200 mg Fe pr. dosis.

Som det fremgâr af tabel 1 giver jern-selen-præparatet en tydeligt iagttagelig forogelse i selenets bioaktivitet. Ef-2i_ ter 8 dage var den gennemsnitlige bioaktivitet hos de dyr, der fik selen alene, 926 IU/1, mens den hos de dyr der fik jern-selen-præparatet var 1432 IU/Γ. Efter 15 dage var de tilsva-rende tal 518 IU/1 og 754 IU/1. Serumets koncentration af selen holdt sig ogsâ i væsentlig grad forh0jet. Serum-selenkon-centrationen hos de dyr der fik præparatet var uændret efter 15 dage, mens det hos dyr der fik selen alene kun var forhojet i 8 dage.

Seks nyfodte grise med en vægt pâ ca. 1 kg fik en intra-muskulær dosis pâ 2 ml af det ved fremgangsmâden ifolge opfin- ^ delsen fremstillede jern-selen-præparat, der pr. ml indeholdt ^ +3 +4 100 mg Fe som ferridextran og 0,15 mg Se som natriumselenit.

I modsætning til forventningerne viste det sig at serumkoncen- trationen af selen og glutationperoxydase stadig var hoje 4

Λ 1 J», 1-1 v« η Λ V\ Λ I/· Λ ( 4*· «*\ Λ Ί O \ T"\ A 4— "P Λ v>Vi 1 /3 4- «*· 4 5 > w «a. iS J— V» M 3 r-t m> -C /3 Λ M

4

DK 156122 B

kendsgerning at dyrene blev fodret med mælk fra en so der holdtes pâ en lavselendiæt i denne période. Fem lignende smâ- grise der fik samme diæt udgjorde en kontrolgruppe. Kontrol- +3 dyrene fik 200 mg Fe som ferridextran intramuskulært pâ sam-5 me tidspunkt som injektionen i fors0gsgruppen. Fire uger sene-re konstateredes der gennemsnitlige selenkoncentrationer pâ 55,4 ng/ml og en gennemsnitlig glutation peroxydaseaktivitet pâ 710,8 IU/1 i deres sérum. Forskellene mellem gennemsnits-værdierne for fors0gsgruppen og for kontrolgruppen var sta-10 tistisk signifikant, idet glutationperoxydaseforskellen lâ pâ 99% konfidensintervallet, Se-forskellen pâ 95%'konfidensinterval-let (Wilcoxson-Mann-Whitney's test). Koncentrationen af selen og glutationperoxydaseaktiviteten i sérum hos de grise der var blevet behandlet med det omhandlede præparat kan stadig 15 anses for tilstrækkelig h0je 4 uger efter behandlingen, mens de tilsvarende værdier for kontroldyrene viser at der hersker mangeltilstand. Det skal bemærkes at en selendosis pâ 0,3 mg/ kg som anvendt i fors0get er fem gange h0jere end den normale dosis, og det vides at selen elimineres hurtigt fra organis-20 men.

Tabel 2 0-værdier +1 uge +2 uger +4 uger

Nr. gSH-Px, Se, gSH-Px) Se, gSH-Px, Se, gSH-Px, Se 25 IU/1 ng/ml IU/1 ng/ml IU/1 ng/ml IU/1 ng/ml ~7 467 53,6 520 68,9 648 70,2 1074 97,1 8 n.d. n.d. 480 88,5 868 67,4 1010 69,5 9 402 76,4 601 L05,2 953 86,3 1006 70,1 10 357 44,5 503 77,5 555 57,8 822 54,5 3Q 11 n.d. n.d. 486 63,4 799 73,6 906 69,5 12 414 44,8 562 89,0 649 76,9 973 60,4

Gns. 410 54,8 525,3 98,5 745,3 72,0 965,2 70,2 +3 35 0,3 mg/Se/kg sammen med 200 mg Fe n.d. = ikke bestemt

Ved yderligere en unders0gelse blev to s0er holdt pâ 5

DK 156122 B

en lavselendiæt under de sidste 4 uger af drægtigheden og un- der laktationen. De 25 smâgrise der blev f0dt levende opdeltes ved en aider pâ 3 dage i to grupper (12 + 13), begge grupper in- 5 deholdende grise fra begge S0er. Der blev taget blodpr0ver fra aile smâgrisene til bestemmelse af selenværdierne og glutation- peroxydaseværdierne og til tællinger af blodceller. Testgruppen (13 grise) fik en subkutan injektion pâ 200 mg (2 ml) Fe+3 som ferridekstran hvortil der var sat natriumselenit til opnâ- 10 else af et indhold af Se+^ pâ 0,15 mg/ml. Kontrolgruppen (12 +3 +4 grise) fik 200 mg Fe som ferridekstran uden Se . Én gris i kontrolgruppen d0de senere. Efter otte dage blev der udtaget blodprover fra aile grisene. Under anvendelse af en elektronisk tæller viste det sig at den gennemsnitlige stigning i erytrocyttællingen 12 15 hos testgruppen var 1,76 + 0,44 x 10 /1 og i kontrolgruppen 12 ~ 1,41 + 0,30 x 10 /1. Forskellen var statistisk signifikant ved 95% konfidensinterval ved anvendelse af den ikke-parametriske

Wilcoxon-Mann-Whitney rank-sum pr0ve. Det har ikke tidligere været pâvist at selen foroger erytrocytsyntesen. Dette er en 20 vigtig iagttagelse som vil spille en betydelig rollë i bâde human- og veteri- nærmedicinen. Anvendelse af selen i kombination med jern vil sandsynligvis stige væsentligt. Det har ogsâ vist sig at injek- +3 +4 tion af jern plus selen (200 mg Fe og 0,3 mg Se pr. dyr) i grise med en aider pâ 3 dage som vist foran kan holde kon- 25 centrationen af selen og glutationperoxydase i sérum normalt i mindst 3 uger og ligeledes holde væksten normal i mindst +3 3 uger, mens kontroldyr (200 mg Fe pr. dyr) pâ dette tidspunkt led af alvorlig selenmangel som det fremgâr af retardering af vægtfor0gelsen. Selen oplagres sandsynligvist som et jern-30 selenkompleks, hvilket forklarer den uventede tilstrækkelig-hed af en enkelt dosis der gives pâ et tidligt alderstrin op til en vægt pâ 8-10 kg.

Resultaterne viser at det omhandlede jern-selen-præ-parat har en ganske uventet depotvirkning og langtidsvirk.ning 35 pâ organismen og tillige har overraskende hoj bioaktivitet.

Nogle eksempler belyser nærmere fremstillingen af det omhandlede præparat.

6

DK 156122 B

Eksempel 1

Sammensætning pr. dosis: 4+

Natriumselenit svarende til Se 0,150 mg . 3+ 5 Ferridekstranhydrolysat svarende til Fe 100,0 mg

Steriliseret vand indtil 1,0 ml

Natriumselenit svarende til 150 mg selen opl0stes i 5 ml ste-rilt vand og opldsningen sattes til en opldsning af ferridex-10 tran-hydrolysat. Oplosningen fyldtes op med sterilt vand til 1 liter og f0rtes gennem en filtermembran eller et sinterglas-filter til fjernelse af partikler. Filtratet fyldtes i glas-ampuller eller injektionsflasker steriliseret med varm luft.

De færdigpakkede injektionsopl0sninger steriliseredes ved au-15 toklavering.

Eksempel 2

Sammensætning pr. dosis: 4+ 20 Natriumselenit svarende til Se 0,150 mg 3+

Ferripolymaltose svarende til Fe 100,0 mg

Steriliseret vand indtil 1,0 ml

Et ferrihydroxydipolymaltosekompleks svarende til 100 mg ferri-25 jern opl0stes i 500 ml sterilt vand og der tilsattes natriumselenit. Opl0sningen suppleredes med sterilt vand op til 1 liter, filtreredes og fyldtes i beholdere og steriliseredes.

Eksempel 3 30

Sammensætning pr. dosis: 4+

Selendioxyd svarende til Se 0,1 mg . 3+

Ferridekstranhydrolysat svarende til Fe 100,0 mg

Steriliseret vand indtil 10,0 ml

Denne injektionsopldsning fremstilledes som beskrevet i eksempel 1.

35 7

DK 156122 B

Eksempel 4

Sammensætning pr. dosis:

4 “H

Natriumselenit svarende til Se 0,2 mg 5 3+

Ferrypolymaltose svarende til Fe 100,0 mg

Der fremstilledes en homogen pulverblanding pâ kendt mâde. Pulverblandingen kan eventuelt granuleres med opl0sningsmidler.

1 0 Eksempel 5 4+

Natriumselenit svarende til Se 0,06 mg 3+

Ferridekstranhydrolysat svarende til Fe 100,0 mg

Renset vand efter behov 15 Polyætylenglykoler

Selenforbindelsen og ferriforbindelsen opl0stes i en lille mængde vand. Der tilsattes polyætylenglykol til den vandige opl0sning under effektiv sammenblanding til der var dannet 20 en pasta.

25 30 35

Claims (2)

1. Fremgangsmâde til fremstilling af et sporelement- præparat indeholdende jern og selen og beregnet til be- handling af mangeltilstande, kendetegnet ved 4+ 5 at en opleselig Se -forbmdelse, hensigtsmæssigt selen- dioxid eller natriumselenit, samt ferridextran, ferri- polymaltose eller et hydrolysat deraf opleses i vand i 4+ 3+ —5 sâdanne mængder at forholdet Se /Fe bliver 10 til 10"1 .

2. Fremgangsmâde if0lge krav 1, kendetegnet ved at mængdeforholdet Se^+/Fe^+ indstilles i omrâdet 10"3 til 10-2. 15 20 25 30 35