DK155712B - Fremgangsmaade til fremstilling af et oligopetid, som selektivt inhiberer formeringen af normale og leukaemiske myeloide celler - Google Patents
Fremgangsmaade til fremstilling af et oligopetid, som selektivt inhiberer formeringen af normale og leukaemiske myeloide celler Download PDFInfo
- Publication number
- DK155712B DK155712B DK015281AA DK15281A DK155712B DK 155712 B DK155712 B DK 155712B DK 015281A A DK015281A A DK 015281AA DK 15281 A DK15281 A DK 15281A DK 155712 B DK155712 B DK 155712B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- radical
- separates
- charge
- relative
- fraction
- Prior art date
Links
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 20
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title abstract description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 4
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 15
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 12
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 12
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims abstract description 12
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 12
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims abstract description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract description 7
- 244000309466 calf Species 0.000 claims abstract description 7
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 claims abstract description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 6
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 5
- 101100505076 Caenorhabditis elegans gly-2 gene Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 101100533230 Caenorhabditis elegans ser-2 gene Proteins 0.000 claims abstract description 4
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 4
- 210000001557 animal structure Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 239000003925 fat Substances 0.000 claims abstract description 4
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 claims abstract description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims abstract description 3
- 241000024188 Andala Species 0.000 claims abstract 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims abstract 3
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 claims abstract 3
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 10
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 10
- 239000000470 constituent Substances 0.000 claims description 7
- SHLTXWFNRJQZTQ-UHFFFAOYSA-N n-chloro-2-methylaniline Chemical compound CC1=CC=CC=C1NCl SHLTXWFNRJQZTQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 125000003412 L-alanyl group Chemical group [H]N([H])[C@@](C([H])([H])[H])(C(=O)[*])[H] 0.000 claims description 4
- 125000000570 L-alpha-aspartyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[C@]([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims description 4
- 229960005261 aspartic acid Drugs 0.000 claims description 4
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 125000003338 L-glutaminyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(=O)N([H])[H] 0.000 claims description 3
- -1 Thrlf Glx3 Proteins 0.000 claims description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 3
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 3
- 125000002842 L-seryl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 claims description 2
- 125000000769 L-threonyl group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])[C@](O[H])(C([H])([H])[H])[H] 0.000 claims description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 2
- VSOJXSPWRCHWOY-GKAPJAKFSA-N (2s)-2,6-diamino-6-(2,3-dinitrophenyl)hexanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCC(N)C1=CC=CC([N+]([O-])=O)=C1[N+]([O-])=O VSOJXSPWRCHWOY-GKAPJAKFSA-N 0.000 claims 1
- 150000008280 chlorinated hydrocarbons Chemical class 0.000 claims 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 abstract description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 4
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 abstract description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 abstract 6
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 6
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 abstract 6
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 abstract 4
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 abstract 4
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 abstract 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 abstract 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 abstract 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 abstract 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 abstract 2
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 abstract 2
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 abstract 2
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 abstract 2
- 229960001153 serine Drugs 0.000 abstract 2
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 abstract 2
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 abstract 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 6
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 3
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 3
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910000013 Ammonium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 2
- 208000028018 Lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 2
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 208000003747 lymphoid leukemia Diseases 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 2
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(4-bromopyrazol-1-yl)ethyl]isoindole-1,3-dione Chemical compound C1=C(Br)C=NN1CCN1C(=O)C2=CC=CC=C2C1=O WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 239000004215 Carbon black (E152) Substances 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 230000010190 G1 phase Effects 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002168 alkylating agent Substances 0.000 description 1
- 229940100198 alkylating agent Drugs 0.000 description 1
- 230000000340 anti-metabolite Effects 0.000 description 1
- 229940100197 antimetabolite Drugs 0.000 description 1
- 239000002256 antimetabolite Substances 0.000 description 1
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 description 1
- 239000004927 clay Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000006266 hibernation Effects 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 229910001867 inorganic solvent Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003049 inorganic solvent Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000025113 myeloid leukemia Diseases 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/18—Ion-exchange chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
- C07K14/4703—Inhibitors; Suppressors
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/829—Blood
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/838—Marrow; spleen
Description
DK 155712 B
Den foreliggende opfindelse angår en hidtil ukendt fremgangsmåde til fremstilling af et oligopeptid, som kan isoleres fra sunde hvide blodlegemer eller granulocyter, og som selektivt inhiberer formeringen af normale og leukæmiske 5 myeloide celler.
De ved fremgangsmåden fremstillede oligopeptider er af den type, som har den summariske aminosyresammensætning
Tau;L, Asxlf Ser2, Thr^, Glx3, Gly2, Ala^ (PO^i, 10 hvor Tau betyder en taurinrest, Asx betyder en L-asparagin-og/eller L-asparaginsyrerest, Ser betyder en L-serinrest,
Thr betyder en L-threoninrest, Glx betyder en L-glutamin-og/eller L-glutaminsyrerest, Gly betyder en glycocolrest, og 15 Ala betyder en L-alaninrest, som ved en pH-værdi på 6,5 udviser en negativ ladning og en relativ elektroforetisk mobilitet i forhold til asparaginsyre på fra -0,55 til -0,65, som ved en pH-værdi på 1,9 ingen ladning udviser, men som udviser en relativ mobilitet i forhold til e-(dini-20 trophenyl)-lysin på 0,26, og som reagerer positivt på chlor-toluidin.
Det er velkendt, at de cytostatiske stoffer, der anvendes i chemoterapien af ondartede tumorer, såsom alkyler ingsmidler, antimetaboliter og spindelgiftstoffer, al-25 mindeligvis er yderst toksiske forbindelser, som skader alle slags celler, som formerer sig ved deling. Da ondartede tumorer er pathologiske former for en given celletype, ville det være ønskværdigt at anvende selektive stoffer til inhi-bering af formeringen af disse celler [S. Eckhardt: Klinikai 30 Onkologia, Medicina, Budapest, 1977].
Til fastlæggelse af sådanne midler, som specifikt inhiberer væksten eller formeringen af tumorceller, er der tidligere gennemført en udbredt forskningsaktivitet, og der er bl.a. beskrevet ca. 25 celleekstrakter fremstillet ud 35 fra forskellige ensartede cellevæv, om hvilke det hævdes eller er påvist, at de indeholder naturligt forekommende 2
DK 155712B
regulatorer for den selektive inhibering af formeringen af specifikke celletyper [A. Balåzs, I. Blazsek: Control of Cell Proliferatin by Endogenous Inhibitors, Akadémiai Konyv-kiado, Budapest og Elsevier - North Holland, 1979]. Der er 5 opnået særligt gunstige resultater med de rensede ekstrakter af hvide blodlegemer (granulocyter) [Rytomaa and Kiviniemi: Celle Tissue Kinet. 1, 341 (1968); Paukovits: Nat. Cancer. Inst. Monogr. 38/ 147; Paukovits et al; Oncology 34/ 187 (1977)].
10 Den biologiske aktivitet af den delvis rensede gra- nulocytekstrakt er også blevet påvist på leukæmipatienter [Rytomaa et al., Scand. J. Haematol., Suppl. 27, 5 (1976)]. Yderligere beskriver HU-patentskrift nr. 162.446 en fremgangsmåde til fremstilling af en delvis renset granulocyteks-15 trakt fra human- og kalveblod eller peritonealvæske. Den opnåede ekstrakt inhiberer selektivt formeringen af hvide blodlegemer.
De ovenfor nævnte ekstrakter er imidlertid kun delvis rensede præparater, som indeholder en væsentlig mængde uren-20 heder. Der kendes ikke nogen fremgangsmåde til fremstilling af rene, biologisk aktive stoffer, som er i stand til selektivt at inhibere væksten eller formeringen af specifikke celletyper.
Det har nu vist sig, at man ved en yderligere udvik-25 ling af de fremgangsmåder, der beskrives i HU-patentskrift nr. 162.446, kan løse problemet med fremstilling af et sådant, rent, aktivt stof. Mere specifikt har det vist sig, at man ved at underkaste egnede udgangsmaterialer, især ekstrakter af hvide blodlegemer isoleret fra hesteblod eller 30 kalvemilt, specielle fraktioneringsoperationer, kan opnå et kemisk rent, ensartet, godt karakteriserbart aktivt oligo-peptid, der inhiberer formeringen af leukæmiske myeloide celler, endog i yderst lave koncentrationer.
Den foreliggende opfindelse angår i overensstemmelse 35 hermed en hidtil ukendt fremgangsmåde til fremstilling af et biologisk aktivt oligopeptid af den ovenfor angivne type,
DK 155712B
3 hvilken fremgangsmåde er ejendommelig ved, at man a) homogeniserer sunde hvide blodlegemer isoleret fra animalsk eller humant blod, især fra hesteblod, i en pufferopløsning med en pH-værdi på fra 7 til 8, centrifugerer det 5 flydende homogenisat, adskiller de opløste bestanddele, der har en molekylvægt på mindre end 10.000, fra den ovenstående væske, underkaster denne fraktion en yderligere fraktionering, fortrinsvis ved gelchromatografi, fraskiller og, om ønsket, lyophiliserer den fraktion, som fraskilles ved vo-10 lumenværdier Ve/vQ på fra 1,15 til 1,45, eller b) homogeniserer animalske organer, der indeholder granulo-cyter, fortrinsvis kalvemilt, i et vandblandbart organisk opløsningsmiddel, adskiller faststofferne fra den opnåede flydende suspension, ekstraherer dem med et organisk opløs- 15 ningsmiddel, der er i stand til at opløse fedtstoffer, ekstraherer de således fremkomne faststoffer med vand, fraskiller den uopløselige del fra den således fremkomne, flydende suspension, adskiller de opløste bestanddele, som har en molekylvægt på mindre end 10.000, fra den flydende 20 fase, underkaster denne fraktion en yderligere fraktionering, fortrinsvis ved gelchromatografi, fraskiller og, om ønsket, lyophilisrer den fraktion, som fraskilles ved volumenværdier ve/vo På fra i*3 til 2,5, 25 og renser koncentratet af aktivt stof fremstillet ved fremgangsmådevariant a) eller b) ved en ionbytterchromatografi, som fraktionerer på basis af ionladning og partikelstørrelse, og/eller ved papirelektrophorese, fraskiller og eventuelt lyophiliserer et oligopeptid, som har en negativ lad-30 ning ved en pH-værdi på 6,5 og en relativ mobilitet på -0,55 til -0,65 i forhold til asparaginsyre, som ikke har nogen ladning ved en pH-værdi på 1,9, men har en mobilitet på ca. 0,26 i forhold til e-dinitrophenyl-lysin, og som giver en positiv chlortoluidinreaktion.
35 Den fraktion, der direkte opnås ved fremgangsmådeva riant a) eller fremgangsmådevariant b), betegnes i det føl-
DK 155712 B
4 gende "fraktion GI-3". Slutproduktet betegnes kort "GP", hvilket betyder "granulopeptid".
Volumenværdien Vq/Vq refererer til, at den aktive og specifikke fraktion kan påvises mellem elueringsmaksimum 5 for 3H-thymidin anvendt som mærkestof og vQ.
Ved fremgangsmådevariant a) foretrækkes, at man, inden man gennemfører de for fremgangsmåden ejendommelige foranstaltninger, udvinder et granulocytbundfald, som anvendes som udgangsmateriale i variant a). Dette bundfald fås, 10 ved at et granulocytberiget bundfald suspenderes i pufferopløsningen (pH 7-8) og centrifugeres. Granulocytberigelsen gennemføres med fordel, ved at animalsk eller humant blod behandles med heparin, hvorefter det på hvide blodlegemer (leukocyter) rige lag efter sedimentering skilles fra bund-15 faldet ved centrifugering.
Eventuelt kan også fraktionen indeholdende bestanddele med en molekylvægt mindre end 10.000 lyophiliseres, før den fraktioneres yderligere.
Ved fremgangsmådevariant b) kan de animalske organer, 20 som er homogeniseret med det vandblandbare organiske opløsningsmiddel fermenteres, før faststofferne fraskilles.
Ved den her omhandlede fremgangsmåde foretrækkes det, at 1) der som pufferopløsning anvendes en phosphatpufferopløs- 25 ning, f.eks. ud fra dinatriumhydrogenphosphat og kalium- dihydrogenphosphat, 2) fraskillelsen af fraktionen med en molekylvægt på mindre end 10.000 gennemføres ved molekylfiltrering, 3) acetone anvendes som det vandblandbare organiske opløs- 30 ningsmiddel, og 4) et chlorcarbonhydrid anvendes som fedtopløsende uorganisk opløsningsmiddel.
Det ved den her omhandlede fremgangsmåde fremstillede oligopeptid GP har en selektiv aktivitet. Det inhiberer 35 især formeringen af myeloide celler (granuloide celler hos mus og rotter, transplantable animalske myeloide leukæmicel- 5
DK 155712 B
ler, spontane humane akutte myeloide leukæmiceller) og er ineffektivt over for normale thymocyter, phytohæmagglutinin-stimulerede lymphocyter, subakutte lymphoide leukæmithymocy-ter, humane lymphoide leukæmiblodceller og humane HeLa-tu-5 morceller.
Fraktionen GI-3 opnået som en mellemproduktfraktion ved den her omhandlede fremgangsmåde indeholder naturligvis også det aktive stof GP, sammen med mindre aktive bestanddele og et stort antal inaktive urenheder. GI-3-fraktionen viser 10 også en specifik inhiberingsaktivitet over for formeringen af myeloide celler, til en vis udstrækning svarende til dens indhold af den aktive bestanddel GP. Ved forsøg in vitro andrager den minimale effektive dosis (MED) af GI-3-fraktionen, ved inhibering af inkorporeringen af 3H-thymidin 15 i syre-uopløselig DNA, 110 Mg/ml, medens MED i tilfælde af kapillære kolonier dannet i agargel er 8 jug/ml. De tilsvarende ED5g-værdier er 430 og 90 /jg/ml.
De fysisk-kemiske og celle-biologiske egenskaber af det aktive oligopeptid GP er som følger: 20 Varighed af virkning i suspensionskulturer: 8 timer i gelkolonier: 1 uge
Det aktive stof er ikke toksisk, idet det ikke reducerer cellevitaliteten målt ved 51Cr-frigørelsesforsøg.
Dets angrebspunkt er G1-fasen af cellens cyclus, dvs. den 25 fase, som ligger mellem fasen med DNA-syntese og fasen med celledeling.
Thermostabilitet: Stoffet mister ikke sin aktivitet og heller ikke den specifikke karakter af aktiviteten efter en behandling ved 80°C i 60 minutter. I opløsning i et tids-30 rum på 72 timer konstateres der ikke nogen sænkning i aktivitet. Stoffet kan opbevares som et lyophilisat ved -20°C i mere end 7 uger, i form af et pulver udfældet fra acetone eller chloroform ved +4°C i mere end 18 måneder.
Resultaterne af forsøg in vitro udført for at sammen-35 ligne aktiviteten af det aktive stof GP isoleret ved ionbyt-terchromatografi eller papirelektroforese og igen undersøgt 6
DK 155712B
med aktiviteten af GI-3-fraktionen og det rene aktive stof GP vises i de efterfølgende tabeller I og II.
Tabel I
5 Virkningen af 100 μg/ml GP ved inkorporering af 3H-thymidin i syreuopløselig DNA i knoglemarv og thymuscellekulturer
Antal Knoglemarvs- P Thymusin- P
forsøg inhibering i hibering i 10 % af kontrollen % af kontrollen 12 53,2 14,6 <0,001 <0,2 14 59,9 7,3 15 _
Tabel II
Dosiseffektforholdet mellem GI-3-fraktionen og GP isoleret derfra.
20
Forsøg GI-3 fraktion Granulopeptid (GP) jLtg/ml picomol/ml MED ED50 MED ED50 25 _
Inkorporering af 3H-thymidin i knoglemarvs-30 suspensionskulturer, 3-4 timer 110* 430* 2,5* 7,8*
Dannelse af 35 kolonier i et agargelkapillær, 7 dage 88* 90* 0,2** 1,6** * = målte værdier 40 ** = beregnede værdier
Den aktive forbindelse GP fremstillet ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen kan anvendes til inhibering af formeringen af normalt og leukæmisk human-knoglemarv og
DK 155712B
7 blodlegemer in vitro i en koncentration på 0,2 til 10,0 picomol/ml.
Yderligere enkeltheder for opfindelsen angives i de efterfølgende eksempler.
5
Eksempel 1
Fremstilling af GI-3 fraktion fra hesteblod 10 liter hesteblod behandles med 3500 E/liter heparin. Blodet sedimenterer derpå ved stuetemperatur i 30 minutter, 10 hvorpå det øvre lag, som er rigt på leukocyter, fraskilles og centrifugeres ved 800 G. Den fraskilte cellepopulation, der indeholder 80% granulocyter, vaskes i 200 ml af en 0,06 M phosphatpufferopløsning (pH = 7,4) under centrifugering ved 800 G. Sammensætningen af phosphatpufferen er: 15 9,500 g dinatriumhydrogenphosphat, 2H20 og 1,815 g kalium- dihydrogenphosphat i 1 liter destilleret vand. Det opnåede granulocytbundfald suspenderes i en phosphatpuffer med den ovenfor nævnte sammensætning i en tæthed på 4xl09 celler/ml i en Potter-homogenisator indstillet på 10 slag pr. minut.
20 Det opnåede homogenisat centrifugeres i 30 minutter ved 1500 G. Den adskilte ovenstående væske underkastes ul-trafiltrering under anvendelse af en "Amicon PM 10"-membran under et tryk på 3 atm. Det opnåede filtrat lyophiliseres, og det opnåede lyophilisat underkastes gelchromatografi på 25 en "Sephadex G-10"-sø]le under anvendelse af en 0,05 M ammoniumhydrogencarbonatpufferopløsning (pH = 7,9). Fraktionen svarende til ve/v0 = 1,15 til 1,45 fraskilles og lyophiliseres. Der opnås således 65 mg af et aktivt faststofkoncentrat (fraktion GI-3).
30
Eksempel 2
Fremstilling af fraktion GI-3 fra kalvemilt Til 1000 g hakket kalvemilt, frigjort fra dens fibrøse lag, sættes acetone ved 4°C, indtil rumfanget er 4 liter.
35 Blandingen homogeniseres ved denne temperatur, inkuberes i 60 minutter, centrifugeres, og det fraskilte bundfald vaskes 8
DK 155712B
med acetone og tørres ved 20°C i vakuum.
Tørstoffet ekstraheres i 30 minutter med 2 liter chloroform, den faste fase skilles fra, tørres ved stuetemperatur og opløses i 3 liter to gange destilleret vand under 5 omrøring i 16 timer. Opløsningen centrifugeres ved 20.000 G
i én time. Den ovenstående flydende fase filtreres gennem © © "Amicon XM 50" og derefter på en "Amicon PM 10"-membran under et tryk på 3 atm. Filtratet lyophiliseres. Det opnåede © lyophilisat underkastes gelchromatografi på en "Sephadex 10 G-15"-søjle under anvendelse af en 0,05 M ammoniumhydrogen-carbonatpufferopløsning (pH=7,9). Fraktionen svarende til ve/v0 = 1/3 til 2,5 fraskilles og lyophiliseres. Der opnås således 3,54 g af et aktivt faststofkoncentrat (fraktion GI-3).
15
Eksempel 3
Fremstilling af rent aktivt stof (GP) 300 mg af et aktivt faststofkoncentrat GI-3 fremstil- © let ifølge eksempel 1 eller eksempel 2 påføres et "Whatman 20 3MM" chromatografisk papir, idet der begyndes fra midten af papiret, i en længde på 30 cm. Der gennemføres elektroforese i en 90:4:900-blanding af pyridin, eddikesyre og vand (puffer, pH = 6,5) i et vandret udstyr, med en spændingsgradient på 50 V/cm i 2 timer. Stillingen for den sure ninhydrin-25 negative og chlor-positive bestanddel bestemmes ved farvning med chlortoluidin. Den opnåede aktive bestanddel elueres fra papiret med en 8:2:90-blanding af eddikesyre, myresyre og vand og underkastes yderligere elektroforese i denne pufferblanding (pH = 1,9) ved 80 V/cm i 90 minutter. Stil-30 lingen for den uladede bestanddel (det aktive stof GP) bestemmes ved en chlortoluidinreaktion. Det opnåede stof elueres fra papiret med den ovenfor beskrevne sure pufferblanding, og eluatet lyophiliseres. Der opnås således 8 μg af det rene stof GP.
Claims (5)
1. Fremgangsmåde til fremstilling af et oligopeptid, som kan isoleres fra sunde hvide blodlegemer eller granulo-cyter, som selektivt inhiberer formeringen af normale og 5 leukæmiske myeloide celler, som har den summariske aminosy-resammensætning Taux, Asxlf Ser2, Thrlf Glx3, Gly2, Alalr (PO^, 10 hvor Tau betyder en taurinrest, Asx betyder en L-asparagin-og/eller L-asparaginsyrerest, Ser betyder en L-serinrest, Thr betyder en L-threoninrest, Glx betyder en L-glutamin-og/eller L-glutaminsyrerest, Gly betyder en glycocolrest, og Ala betyder en L-alaninrest, som ved en pH-værdi på 6,5 15 udviser en negativ ladning og en relativ elektroforetisk mobilitet i forhold til asparaginsyre på fra -0,55 til -0,65, som ved en pH-værdi på 1,9 ingen ladning udviser, men som udviser en relativ mobilitet i forhold til e-(dini-trophenyl)-lysin på 0,26, og som reagerer positivt på chlor-20 toluidin, kendetegnet ved, at man a) homogeniserer sunde hvide blodlegemer isoleret fra animalsk eller humant blod, især fra hesteblod, i en pufferopløsning med en pH-værdi på fra 7 til 8, centrifugerer det flydende homogenisat, adskiller de opløste bestand- 25 dele, der har en molekylvægt på mindre end 10.000, fra den ovenstående væske, underkaster denne fraktion en yderligere fraktionering, fortrinsvis ved gelchromatografi, fraskiller og, om ønsket, lyophiliserer olen fraktion, som fraskilles ved volumenværdier Ve/VQ på fra 1,15 til 30 1,45, eller b) homogeniserer animalske organer, der indeholder granulo-cyter, fortrinsvis kalvemilt, i et vandblandbart organisk opløsningsmiddel, adskiller faststofferne fra den opnåede flydende suspension, ekstraherer dem med et organisk 35 opløsningsmiddel, der er i stand til at opløse fedtstoffer, ekstraherer de således fremkomne faststoffer med DK 155712 B vand, fraskiller den uopløselige del fra den således fremkomne, flydende suspension, adskiller de opløste bestanddele, som har en molekylvægt på mindre end 10.000, fra den flydende fase, underkaster denne fraktion en 5 yderligere fraktionering, fortrinsvis ved gelchromatogra-fi, fraskiller og, om ønsket, lyophilisrer den fraktion, som fraskilles ved volumenværdier ve/vQ på fra 1,3 til 2,5, 10 og renser koncentratet af aktivt stof fremstillet ved fremgangsmådevariant a) eller b) ved en ionbytterchromatografi, som fraktionerer på basis af ionladning og partikelstørrelse, og/eller ved papirelektrophorese, fraskiller og eventuelt lyophiliserer et oligopeptid, som har en negativ lad- 15 ning ved en pH-værdi på 6,5 og en relativ mobilitet på -0,55 til -0,65 i forhold til asparaginsyre, som ikke har nogen ladning ved en pH-værdi på 1,9, men har en mobilitet på ca. 0,26 i forhold til e-dinitrophenyl-lysin, og som giver en positiv chlortoluidinreaktion.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at bestanddelene med en molekylvægt på mindre end 10.000 fraskilles ved molekylfiltrering.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at der som vandblandbart organisk opløsningsmiddel 25 anvendes acetone.
4. Fremgangsmåde ifølge krav 1,kendetegnet ved, at fraskillelsen af de faststoffer eller uopløselige dele, som findes i de flydende suspensioner, sker ved centrifugering.
5. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendeteg net ved, at der som organisk opløsningsmiddel, der er i stand til at opløse fedtstoffer, anvendes chlorerede carbon-hydrider.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU6880 | 1980-01-15 | ||
| HU8068A HU182087B (en) | 1980-01-15 | 1980-01-15 | Process for preparing an active substance for the selective inhibition of the multiplication of normal cells and of cells in myeloide leukemia |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK15281A DK15281A (da) | 1981-07-16 |
| DK155712B true DK155712B (da) | 1989-05-08 |
| DK155712C DK155712C (da) | 1989-09-25 |
Family
ID=10947737
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK015281A DK155712C (da) | 1980-01-15 | 1981-01-14 | Fremgangsmaade til fremstilling af et oligopeptid, som selektivt inhiberer formeringen af normale og leukaemiske myeloide celler |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4384991A (da) |
| EP (1) | EP0035102B1 (da) |
| JP (1) | JPS56138118A (da) |
| AT (1) | ATE5071T1 (da) |
| AU (1) | AU542044B2 (da) |
| DE (1) | DE3161195D1 (da) |
| DK (1) | DK155712C (da) |
| HU (1) | HU182087B (da) |
| SU (2) | SU1367837A3 (da) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0085254A1 (en) * | 1981-12-28 | 1983-08-10 | Yoshio Sakagami | Proteins and their extraction |
| US4572834A (en) * | 1984-04-10 | 1986-02-25 | Clinical Reference Laboratory, Inc. | Biologic and method of preparing same |
| US5149544A (en) * | 1989-11-13 | 1992-09-22 | Research Corporation Technologies, Inc. | Method of inhibiting progenitor cell proliferation |
| UA27048C2 (uk) * | 1993-10-18 | 2000-02-28 | Центр Ембріональних Тканин "Емселл" | Лікарський препарат імуhокоригуючої дії hа осhові клітиhhої суспеhзії, спосіб лікуваhhя цукрового діабету з використаhhям цього препарату |
| EP1640012A1 (de) * | 2004-09-24 | 2006-03-29 | Salama, Zoser B. nat.rer.Dr. | Pharmazeutisches Mittel enthaltend Blutbestandteile 10 kDa und deren Verwendung zur Prophylaxe und Behandlung von Defekten des Immunsystems |
| US20060067942A1 (en) * | 2004-09-24 | 2006-03-30 | Salama Zoser B | Pharmaceutical agent comprising amino acids, peptides, proteins and/or fractions and fragments thereof and the use of same in the prophylaxis and treatment of immune system deficiency in humans and animals |
| CA2580192A1 (en) * | 2004-09-24 | 2006-03-30 | Zoser B. Salama | Pharmaceutical product containing blood constituents and or kda, and the use of the same for the prophylaxis and treatment of defects of the immune system |
| DE102004047262A1 (de) * | 2004-09-24 | 2006-04-06 | Ipss International Pharmaceutical Strategies & Solutions | Pharmazeutisches Mittel umfassend Blutprodukte und deren Verwendung als Injektions- oder Infusionsmittel zur Prophylaxe und Behandlung von Defekten des Immunsystems beim Menschen |
| US7834184B2 (en) | 2004-11-04 | 2010-11-16 | Mallinckrodt Inc. | Opiate intermediates and methods of synthesis |
| US7511060B2 (en) | 2005-10-21 | 2009-03-31 | Mallinckrodt Inc. | Opiate intermediates and methods of synthesis |
| US7622586B2 (en) * | 2005-10-21 | 2009-11-24 | Mallinckrodt Inc. | Opiate intermediates and methods of synthesis |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3937816A (en) * | 1970-07-21 | 1976-02-10 | Solco Basel Ag | Growth regulating compositions extracted from spleen |
| US3973001A (en) * | 1954-04-27 | 1976-08-03 | Solco Basel Ag | Tissue cell stimulating blood extracts |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1579120A (en) * | 1975-08-05 | 1980-11-12 | Union International Co Ltd | Extracts of the haemopoietic system |
-
1980
- 1980-01-15 HU HU8068A patent/HU182087B/hu not_active IP Right Cessation
-
1981
- 1981-01-08 US US06/223,366 patent/US4384991A/en not_active Expired - Fee Related
- 1981-01-13 JP JP275381A patent/JPS56138118A/ja active Pending
- 1981-01-14 AU AU66200/81A patent/AU542044B2/en not_active Ceased
- 1981-01-14 DK DK015281A patent/DK155712C/da not_active IP Right Cessation
- 1981-01-14 SU SU813230703A patent/SU1367837A3/ru active
- 1981-01-15 EP EP81100268A patent/EP0035102B1/de not_active Expired
- 1981-01-15 AT AT81100268T patent/ATE5071T1/de not_active IP Right Cessation
- 1981-01-15 DE DE8181100268T patent/DE3161195D1/de not_active Expired
-
1982
- 1982-02-23 SU SU823396892A patent/SU1228776A3/ru active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3973001A (en) * | 1954-04-27 | 1976-08-03 | Solco Basel Ag | Tissue cell stimulating blood extracts |
| US3937816A (en) * | 1970-07-21 | 1976-02-10 | Solco Basel Ag | Growth regulating compositions extracted from spleen |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU542044B2 (en) | 1985-02-07 |
| EP0035102A1 (de) | 1981-09-09 |
| US4384991A (en) | 1983-05-24 |
| SU1228776A3 (ru) | 1986-04-30 |
| SU1367837A3 (ru) | 1988-01-15 |
| DK15281A (da) | 1981-07-16 |
| ATE5071T1 (de) | 1983-11-15 |
| DK155712C (da) | 1989-09-25 |
| HU182087B (en) | 1983-12-28 |
| DE3161195D1 (en) | 1983-11-24 |
| EP0035102B1 (de) | 1983-10-19 |
| AU6620081A (en) | 1982-04-22 |
| JPS56138118A (en) | 1981-10-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Boyce et al. | The amount and nature of the organic matrix in urinary calculi: a review | |
| DK155712B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af et oligopetid, som selektivt inhiberer formeringen af normale og leukaemiske myeloide celler | |
| EP0409053B1 (de) | Verfahren zur Reinigung von Annexinen | |
| CN113248568B (zh) | 具有神经元保护功能的富硒蛹虫草活性硒肽及其制备方法和应用 | |
| CA1202894A (en) | Process for the preparation of cell- and tissue- regenerating substances | |
| Harris et al. | The synthesis of peptides related to gramicidin S and the significance of optical configuration in antibiotic peptides. 2. Pentapeptides | |
| CA1176193A (en) | Peptide, process for their preparation and pharmaceutical composition containing them | |
| DK172011B1 (da) | Aminoalkoholpeptidderivater, fremgangsmåde til fremstilling deraf og farmaceutiske præparater indeholdende derivaterne | |
| US4374828A (en) | Biologically active thymones from the thymus | |
| JP2002521340A (ja) | 有機溶媒含有または非含有溶液を利用した軟骨部抽出物を得る方法およびそれから分離された抽出物 | |
| US5114926A (en) | Tetrapeptide inhibiting the entry into cycle of hemopoietic stem cells processes for its preparation, and its uses | |
| JPH06256387A (ja) | 新規なペプチド、その製法およびそれを有効成分とする 血圧降下剤 | |
| CZ282924B6 (cs) | Extrakt bakteriálních makromolekul, způsob jeho přípravy a farmaceutický prostředek na jeho bázi | |
| Freeman et al. | The morphological site of synthesis of cytochrome c in mammalian cells (Krebs cells) | |
| JPH06312922A (ja) | 美白剤 | |
| US3905870A (en) | Purification of kallikrein | |
| JPH05504960A (ja) | 内皮細胞の増殖抑制剤 | |
| SU871721A3 (ru) | Способ получени биологически активного вещества,обладающего способностью усиливать секрецию инсулина и улучшать глюкозную толерантность | |
| US3475402A (en) | Process of extracting proteins from mistle press juice by carrier-free electrophoresis | |
| Jacobs-Lorena et al. | Studies on the translational control of histone synthesis: I. Translation of histone messenger RNA by heterologous cell-free systems prepared from cells inactive in DNA synthesis | |
| JPS61275224A (ja) | コラゲナ−ゼ阻害剤 | |
| EP0042560A2 (en) | A process for producing and obtaining anaphylatoxin- and cocytotaxin-containing leucotaxine preparations and of anaphylatoxin and cocytotaxin proteins in molecularly homogeneous, biologically active form | |
| US3670075A (en) | Process of preparing a protease inhibitor | |
| Koj et al. | The effect of D-galactosamine on plasma protein synthesis by the perfused rat liver from turpentine-stimulated donors. | |
| SU1243730A1 (ru) | Способ выделени иммунодепрессора из тканей млекопитающих |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed |