HU182087B - Process for preparing an active substance for the selective inhibition of the multiplication of normal cells and of cells in myeloide leukemia - Google Patents
Process for preparing an active substance for the selective inhibition of the multiplication of normal cells and of cells in myeloide leukemia Download PDFInfo
- Publication number
- HU182087B HU182087B HU8068A HU6880A HU182087B HU 182087 B HU182087 B HU 182087B HU 8068 A HU8068 A HU 8068A HU 6880 A HU6880 A HU 6880A HU 182087 B HU182087 B HU 182087B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- radical
- separates
- fraction
- value
- referred
- Prior art date
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 title description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 title description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 title 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 12
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 11
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 11
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 11
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 10
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 claims abstract description 10
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 244000309466 calf Species 0.000 claims abstract description 8
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 claims abstract description 8
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 claims abstract description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 5
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 claims abstract description 5
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 claims abstract description 5
- 210000001557 animal structure Anatomy 0.000 claims abstract description 4
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 claims abstract description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 claims description 11
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 9
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 5
- 239000008188 pellet Substances 0.000 claims description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 5
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 3
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 claims 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 claims 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 8
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 abstract description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 abstract description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 abstract 6
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 6
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 abstract 6
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 abstract 4
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 abstract 4
- XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N taurine Chemical compound NCCS(O)(=O)=O XOAAWQZATWQOTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 4
- CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N D-OH-Asp Natural products OC(=O)C(N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 3
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 abstract 3
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 abstract 3
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 abstract 3
- 241000024188 Andala Species 0.000 abstract 2
- 101100505076 Caenorhabditis elegans gly-2 gene Proteins 0.000 abstract 2
- 101100533230 Caenorhabditis elegans ser-2 gene Proteins 0.000 abstract 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 abstract 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N L-Alanine Natural products C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 abstract 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 abstract 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 abstract 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 abstract 2
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 abstract 2
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 abstract 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 abstract 2
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 abstract 2
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 abstract 2
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 abstract 2
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 abstract 2
- 229960001153 serine Drugs 0.000 abstract 2
- 229960003080 taurine Drugs 0.000 abstract 2
- 229960002898 threonine Drugs 0.000 abstract 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 abstract 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 abstract 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 abstract 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 abstract 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BPSNETAIJADFTO-UHFFFAOYSA-N 2-pyridinylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=N1 BPSNETAIJADFTO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910000013 Ammonium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 235000012538 ammonium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- MVPPADPHJFYWMZ-UHFFFAOYSA-N chlorobenzene Chemical compound ClC1=CC=CC=C1 MVPPADPHJFYWMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000025113 myeloid leukemia Diseases 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 2-[2-(4-bromopyrazol-1-yl)ethyl]isoindole-1,3-dione Chemical compound C1=C(Br)C=NN1CCN1C(=O)C2=CC=CC=C2C1=O WFIYPADYPQQLNN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N Chlorine atom Chemical compound [Cl] ZAMOUSCENKQFHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 231100000632 Spindle poison Toxicity 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000003567 ascitic fluid Anatomy 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000022131 cell cycle Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002808 molecular sieve Substances 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001467 poly(styrenesulfonates) Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- OENLEHTYJXMVBG-UHFFFAOYSA-N pyridine;hydrate Chemical compound [OH-].C1=CC=[NH+]C=C1 OENLEHTYJXMVBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N sodium aluminosilicate Chemical compound [Na+].[Al+3].[O-][Si]([O-])=O.[O-][Si]([O-])=O URGAHOPLAPQHLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 231100000167 toxic agent Toxicity 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
- C07K1/18—Ion-exchange chromatography
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
- C07K14/4703—Inhibitors; Suppressors
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/829—Blood
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
- Y10S530/838—Marrow; spleen
Description
A találmány tárgya eljárás a normál és leukémiás myeloid sejtek szaporodását szelektíven gátló hatóanyagok előállítására egészséges fehérvérsejtek kivonatából amelynek során
a) állati vagy humán vérből, célsezrűen lóvérből elkülönített fehérvérsejteket 7 és 8 közötti pH-értckű pufferoldatban homogenizáljuk, a folyékony hontogenizátumot centrifugáljuk, a szupernatáns folyadékból molekulaszűrcssel elkülönítjük a 10 000-nel kisebb molekulasúly ti frakciót ezt‘további frakcionálási eljárásnak, célszerűen gél-kromatografálásnak vetjük alá és a vc/v0 = 1,15 és 1,45 közötti frakciót liofilizáljuk, vagy
b) granulocytát tártaim rzó állati szerveket, célszerűen borjúiépet acetonban homogenizálunk, a folyékony homogenizátumot centrifugáljuk, az üledéket klorofonnmal extragáljuk, majd a szilárd maradékot vízzel elkevetjük, centrifugáljuk, a szupennatáns folyadékból molekulaszüréssel elkülönítjük a 10000-nél kisebb molekulasúlyú frakciói, ezt gél-kromatografálásnak vetjük alá és a ve(v0 = l ,3 és 2,5 ko/otti frakciót liofilizáljuk, majd az a) vagy b) eljárás szerint kapott termékei (a továbbiakban: ,,G1 3 frakció ioncserélő kromatográflának, illetve papírxrektroforézisnek vetjük alá és a 6,5 pll-értéknél ncgat'v töltésű, az aszparaginsavhoz viszonyítva -0,55 és 0.65 közötti mozgékonyságü 1,9 pH-értéknél töltéssel nem rendelkező GDNP-lizinhez viszonyítva 0,26 mozgékonyságü, klór-tolidinra pozitív peptidet elkülönítjük.
182.087 •:’jy tárgya eljárás egy az egészséges fehérvérsejüt;..·· LihJtó, a U'jx'rr/ilis és leukémiás myeloid sejtek azapc: y3. ] ekt i vcn gátló gyégysze rkészitmény előállitására.
ismeretes, hogy a rosszindulatú daganatok kemoterápiájában használatos citosztaüikus hatóanyagok túlnyomó többsébe, mint az slkilezőszorök, anbímetaböli tok, orsómérgek nagy mértékben toxikus vegyületek, amely minden osztódó sejttípust károsítanak. Ezzel szemben a malignus tumorok egyetlen sejttípus kóros elváltozásai és Így szaporodásuk gátlására szelektív hatású vegyületeket lenne kívánatos alkalmazni |vö.: Eckhardt S.: Klinikai onkológia, Medicina, Budapest, 1977·]·
Ilyen, a tumorsejtek szaporodását specifikusan gátló szerek iránt már eddig is folytattak széleskörű kutatást és ennek során már mintegy 25 különböző, egységes sejtszövetekből készült sejtkivonat előállításáról számoltak be, amelyek az egyes sejttípusokat szelektíven gátló természetes regulatorokat tartalmaznak ]vö.: Balázs A., Blazsek I.: Control of cell proliferation by endogenous inhibitora, Akadémiai Könyvkiadó, Budapest és Elsevier - North Holland, 1979/J · Különösen a fehérvérsejtek /granulocyták/ tisztított kivonataival értek el kedvező eredményeket {Rytömaa és Kivinieni: Cell Tissue Kínét. 1, 341 /1968/; Paukovits: Nat. Cancer Inat. Monogr. 38, 147 /1975/I Paukovlts és munkatársai; Oncology 34, 187 /1977/7 · Λ részlegesen tisztított granulocyta-kivonab biológiai hatékonyságát leukémiás betegeken is demonstrálták [vö.: Rytömaa és munkatársai: Scand. J. Haematol., Suppl. 27, 5 /1976/]5 korábban pedig Balázs A. és munkatársai a 162 47b számú magyar szabadalmi leírásban ismertették olyan részlegesen tisztított granulocytakivonat emberi- és borjuvérből, vagy peritoneális folyadékból történő előállítását, amely szelektíven gátolja a fehérvérsejtek szaporodását. Mindezek az eddig leírt és előállított kivonatok azonban számos kísérő anyagot tartalmazó, csupán részlegesen tisztított készítmények; az egyes sejttípusok szaporodását szelektíven gátló tiszta hatóanyag előállítása eddig nem volt ismeretes.
A fenti idézett magyar szabadalmi leírásban ismertetett kutatómunka továbbfejlesztése során azt találtuk, hogy megfelelő kiindulási anyagokból, főként lóvérből vagy borjulépből nyert fehérvérsejt-kivonatokból különleges frakcionálási műveletek utján oly kémiailag tiszta, egységes, jól jellemezhető, oligopeptid-jellegű hatóanyag állíthato elő, amely már igen kis koncentrációban is szignifikánsan gátolja a myeloid leukémiás sejtek szaporodását.
A találmány tárgya tehát eljárás a normális és leukémiás myeloid sejtek szaporodását szelektíven gátló hatóanyag előállítására egészséges fehérvérsejtek kivonatából, amelynek során a/ állati vagy humán vérből, célszerűen lóvérből elkülönített fehérvérsejteket 7 és 8 közötti pH-értékü pufferoldatban homogenizáljuk, a folyékony homogenizátumot centrifugáljuk, a szupernatáns folyadékból molekulaszüréssel elkülönítjük a 10 000-nél kisebb molekulasulyu frakciót, ezt további frakcionálási eljárásnak, célszerűen gél-krómatografálásnak vetjük alá és az 1,15 és 1,45 közötti ve/vQ térfogatnál leváló frakciót /az aktív és specifikus frakció a %[-timidin, mint marker eluciós maximuma es a v közé határolható be/ liofilizáljuk, vagy
182.087 b/ granulocytákat tartalmazó állati szerveket, célszerűen borjulépet acetonban homogenizálunk, a folyékony homogenizátumot cehtrifugáljuk, az üledéket kloroformmal extraháljuk, majd a szilárd maradékot vízzel elkeverjük, centrifugáljuk, a szupernatáns folyadékból molekulaszüxéssel elkülönítjük a 10 000-nel kisebb molekulasúlya frakciót, ezt gél-kromatografálásnak vetjük alá és az 1,3 és 2,5 közötti νθ/νθ térfogatnál leváló frakciót /az aktiv és specifikus frakció a ül-timidin, mint marker eluciós maximuma és a vQ közé határolható be/ liofilizáljuk, majd az a/ vagy b/ eljárás szerint kapott terméket /a továbbiakban: GI-3 frakció/ ionos töltés és méret alapján frakcionáló, ioncserélő kromatográfiás technikával /például Dowex 50*8 oszlopkor ómat ográf iával·/, illetve papirelektroforézissel tisztítjuk és a 6,5 pH-értéknél negatív töltésű, az aszparaginsavhoz viszonyítva -0,55 és -0,65 közötti mozgékonyságu, 1,9 pH-értéknél töltéssel nem rendelkező, f-DNP-lizinhez viszonyítva 0,26 mozgékonyságu, klór-tolidinra pozitív pepiidet elkülönitjük.
A papírról élűéit oligopeptid-jellegű termék líofilizálással különíthető el; a tiszta, kémiailag egységes hatóanyag /a továbbiakban: GP = granulopeptid/ 6,5 pH-értéknél negatív töltésű, az aszparaginsavhoz viszonyított relatív mozgékonysága -0,55 és -0,65 között van; 1,9 pH-értéknél töltése nincs, -DNP-lizinhez viszonyított mozgékonysága 0,26; szabad amino-végcsoportja nincs; az aminosav-análizis eredményei szerinti összetétele: Aspp Ser2, Τ'11!» Glu2, Ala2, Pro^, etanolaminj.
A találmány szerinti GP hatóanyag szeLektiv hatású, specifikusan csak a myeloid sejtek /egér és patkány granuloid sejtek, transzplantábilis állati myeloid leukémiás sejtek, spontán emberi akut myeloid leukémiás sejtek/ szaporodását gátolja, ellenben a normális thymocytákra, PHA-stimulalt lymphocitákra, subacut lymphoid leukémiás thymocytákra, emberi lymphoid leukémiás vérsejtekre és HeLa humán daganat-sejtekre hatástalan.
A találmány szerinti eljárás közbenső termékeként kapott GI-5 részlegesen tisztított frakció természetesen szintén tartalmazza a GP hatóanyagot, kevésbé aktiv komponensek és túlnyomó mennyiségű inaktív szennyezés kíséretében. Ez a GI-3 frakció is mutat a GP-hatóanyagtartalomnak megfelelő mértékű specifikus gátló hatást a myeloid sejtek szaporodásával szemben; in vitro kísérletekben a GI-3 frakció minimális hatékony dózisa /MED/ a ^H-timldin savoldhatatlan DNS-be épülésének gátlásakor 110yUg/’ ml, az agar-gélben képződő kapilláris kolóniák esetében 8 /ag/ml· Á megfelelő EDjq értékek 430 illetve 90/ug/ml.
A hatóanyag fizikai-kémiai és sejtbiológiai jellemzői: Hatástaxtam szuszpenziós kultuxákban>r8h) gélkolóniákban 1 hét. Nem toxlxus, mert 51cr_ie]_eage teszttel mérve nem csökkenti a sejtek vitalitását. Támadáspontja a sejtciklus G. fázisa. Termostabilitás: 60 percig 80 °C hőmérsékleten tartva biológiai aktivitását és a hatás speclficiüását hem veszíti el; oldatban 37 °C hőmérsékleten 72 óra alatt hatásossága nem csökken. Liofilizátumként -20 °C-on 7^7 héten át, aceton vagy kloroform-por alakjában +4 °C-on t=-18 hónapig tárolható.
Az ioncserélő krómatográfiával, illetve papirelektroforézissel izolált és visszatesztelt GP hatóanyag hatásosságának valamint a GI-3 frakció és a tiszta GP hatóanyag aktivitásának
182.087 ;,a3áiö in vitro végzett kísérleteink eredményeit ..., II táblázatban foglaltuk össze.
I. táblázat
100 yug/inl GP szelektív hatasa ^H-timldin savoldhatatlan DNS- 7 be épülésére csontvelő- és thymus sejtkulturákban
| Kísérletek száma n | Csontvelő gátlás a kontroll százalékában | P | Thymus gátlás a kontroll P százalékában | |
| 1. 12 | 53,2 | 14,6 | ||
| 0,001 | 0,2 | |||
| 2. 14 | 59,9 | 7,3 | ||
| II. táblázat | ||||
| A GI-3 frakció és a | belőle izolált | GP dózis- | -hatás össze- | |
| függései | ||||
| GI-3 frakció | granulopeptid | |||
| Vizsgált jelleg | /ug/ml | pmol/ml | ||
| MED | ED50 | MED ED50 | ||
| Z H-tlmldin beepüles csontvelő szuszpenzlós | 110X | 430X | 2,5X 7,'8X | |
| kultúrákba, 3-4 óra | ||||
| Kolónia képzés agar | gél | 8X | 90x | 0>2xx 1>6xx |
| kapillárisban, 7 nap |
x mért értékek ^kalkulált értékek
A találmány szerinti eljárás előnyös gyakorlati kiviteli módját az alábbi példák szemléltetik.
1. példa
GI-3 frakció előállítása lévérből liter lóvér 3500 E/liter heparinnal történő kezelés után szobahőmérsékleten 30 percig ülepítünk, majd a felső, leukocytákban dús réteget elkülönítjük es 800 g-vel centrifugáljuk. Az igy elkülönített, 80 %- granulocytát tartalmazó sejtpopulációt 200 ml 0,06 mólos, 7,4 pH-értékü foszfát-pufféroldatbán
182.087 /összetétele: 9500 g dinátrium-hidrofoszfát.211-0 és 1,815 g kállum-dihidrofoszfát 1 liter desztillált vizben/ 800 g-vel történő centrifugálással mossuk. A kapott granulocyta-üledéket ugyancsak a fenti összetételű fcszfat-pufferben 4,1θ9 aejt/ml sűrűségben szuszpendáljuk és Pctter-homogenizátorban, percenként 10 húzással homogenizáljuk.
A kapott homogenizátumot 1500 ^-vel 30 percig centrifugáljuk, majd az elkülönített szupernatans folyadékot ultraszürésnek vetjük alá Amicon PM 10-es membránnal, 3 atm nyomás alkalmazásával. Az igy kapott szürletet liofilizáljuk és a liofilizátumot 0,05 mólos ammónium-hidrogén-karbonát-pufferoldattal /pH = 7,9/ Sephadex G-10-es oszlopon gélkromatografáljuk. A v /v = 1,15 es 1,45 között leváló frakciót elkülönítjük és liofilizáljuk. Ily módon 65 mg szilárd hatóanyag-koncentrátumot kapunk /GI-3 frakció/.
2. példa
GI-3 frakció előállítása borjulépből
000 g kötőszöveti tokjától megtisztított és aprított borjuléphez 4 liter össztérfogatig 4 °C hőmérsékletű acetont adunk, az elegyet ezen a hőmérsékleten homogenizáljuk és 60 percig inkubáljuk, majd centrifugáljuk, az elkülönített üledéket acetonnal mossuk és vákuumban 20 °C hőmérsékleten megszánt juk.
A száraz anyagot 2 liter kloroformmal 30 percig extraháljuk, a szilárd részt elkülönítjük, szobahőmérsékleten megszáritjuk és 3 liter kétszer desztillált vizben 16 órai keveréssel oldjuk. Az oldatot 20 000 g-vel 1 óra hosszat centrifugáljuk, a szupernatans folyadékot először Amicon ΣΜ 50-es. majd ezt követően PM 10-es membránon át 3 atm nyomás alkalmazásával szűrjük és a szürletet liofilizáljuk. A kapott liofilizátumot 0,05 mólos ammónkum-hidrogén-carbonát-puffer-oldattal /pH = 7,9/ Sephadex G-15 oszlopon gélkromatografáljuk. A v /v = 1,3 és 2,5 között leváló frakciót elkülönítjük és liofilizáljuk. Ily módon 3,54 g szilárd hatóanyag-koncentrátumot /GI-3 frakció/ kapunk.
3. példa
Tiszta GP hatóanyag előállítása
300 mg GI-3 hatóanyag-koncentrátumot /amelyet az 1. vagy
2. példa szerint állítottunk elő/ Whatman 3MM kromatográfiás papírra visszük, a kiindulást a papír közepén elhelyezve. A felvitt minta teljes mennyiségét 30 cm hosszan osztjuk el. Az elektroforézlst 6.5 pH-értékü píridin-ecetsav-pufferelegyben /piridin-ecetsav es viz 90:4:900 arányú elegye/, horizontális elrendezésű elektroforézis-készüléken, 50 V/cm feszültség-grádienssel. 2 óra hosszat végezzük. A savas jellegű nlnhidrinnegativ es klór-pozitiv komponens helyzetét klór-tolidines festéssel határozzak meg. Az igy kapott aktiv komponenst a papírról ecetsav, hangyasav és viz 8:2:90 aránya elegyével eluáljuk, majd ebben az 1,9 pH-értékü pufferelegyben újabb elektroforezisnek vetjük alá 80 V/cm feszültség-grádienspel, 90 percig folytatva az elefctroforézist. A töltéssel nem rendelkező komponens /GP hatóanyag/ helyzetét klór-tolidin-reakcióval határozzuk meg; az igy kapott hatóanyagot a papírról a fenti össze5
I 32.081 vételü gnvaa puffereleggyel eluáljuk és az eluátumot liofilizáljuk. Ily mádon 8 /üg tiszta GP hatóanyagot kanunk.
Claims (1)
- Szabadalmi igénypontEljárás a normál és leukémiás myeloid sejtek szaporodását szelektíven gátló hatóanyag előállítására egészséges fehérvérsejtek kivonatából azzal jellemezve, hogy a/ állati vagy humán vérből, célszerűen lóvérböl elkülönített fehérvérsejteket 7 és 8 közötti pH-értékü pufferoldatban homogenizáljuk, a folyékony homogenizátumot centrifugáljuk, a szupernatáns folyadékból molekulaszüréssel elkülönítjük a 10 000-nél kisebb molekulasúlya frakciót, ezt további frakcionálási eljárásnak, célszerűen gélkromatografálásnak vetjük alá és a v /v = 1,15 és 1,4-5 közötti frakciót liofilizáljuk, vagy b/ granulocytát tartalmazó állati szerveket, célszerűen borjulépet acetonban homogenizálunk, a folyékony homogenizátumot centrifugáljuk, az üledéket kloroformmal extraháljuk, majd a szilárd maradékot vizzel elkeverjük, centrifugáljuk, a szupernatáns folyadékból molekulaszüréssel elkülönítjük a 10 OOOnél kisebb molekulasulyu frakciót, ezt gélkromatografálásnak vetjük alá és a v /v = 1,5 és 2,5 közötti frakciót liofilizáljuk, e 0 majd az a/ vagy b/ eljárás szerint kapott terméket ioncserélő kromatográfiának, illetve papir-elektroforézisnek vetjük alá és a 6,5 pH-értéknél negatív tölzéaü, az aszparaginsavhoz viszonyítva -0,55 és -0,65 közötti mozgékonyaágú, 1,9 pH-értéknél töltéssel nem rendelkező, fc-DNP-lizinhez viszonyítva 0,26 mozgékonysága, klór-tolidinra poaitiv peptidet elkülönítjük.
Priority Applications (10)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU8068A HU182087B (en) | 1980-01-15 | 1980-01-15 | Process for preparing an active substance for the selective inhibition of the multiplication of normal cells and of cells in myeloide leukemia |
| US06/223,366 US4384991A (en) | 1980-01-15 | 1981-01-08 | Process for the preparation of a biologically active substance for selective inhibition of the proliferation of leukemic and normal myeloid cells |
| JP275381A JPS56138118A (en) | 1980-01-15 | 1981-01-13 | Manufacture of biologically active substance |
| DK015281A DK155712C (da) | 1980-01-15 | 1981-01-14 | Fremgangsmaade til fremstilling af et oligopeptid, som selektivt inhiberer formeringen af normale og leukaemiske myeloide celler |
| AU66200/81A AU542044B2 (en) | 1980-01-15 | 1981-01-14 | Preparation of a biologically active substance for selective inhibition of the proliferation of leukemic and normal myeloid cells |
| SU813230703A SU1367837A3 (ru) | 1980-01-15 | 1981-01-14 | Способ получени средства, селективно тормоз щего рост или размножение нормальных и лейкемических клеток миелоидов |
| EP81100268A EP0035102B1 (de) | 1980-01-15 | 1981-01-15 | Aus gesunden weissen Blutkörperchen beziehungsweise Granulozyten isolierbares, das Wachstum beziehungsweise die Vermehrung von normalen und leukämischen myeloiden Zellen selektiv hemmendes Oligopeptid, Verfahren zu dessen Herstellung und dieses enthaltende Arzneimittel |
| DE8181100268T DE3161195D1 (en) | 1980-01-15 | 1981-01-15 | Oligopeptide selectively inhibiting the growth or multiplication of normal and leukaemic myeloid cells, to be isolated from healthy white blood cells or granulocytes, process for its preparation, and medicaments containing it |
| AT81100268T ATE5071T1 (de) | 1980-01-15 | 1981-01-15 | Aus gesunden weissen blutkoerperchen beziehungsweise granulozyten isolierbares, das wachstum beziehungsweise die vermehrung von normalen und leukaemischen myeloiden zellen selektiv hemmendes oligopeptid, verfahren zu dessen herstellung und dieses enthaltende arzneimittel. |
| SU823396892A SU1228776A3 (ru) | 1980-01-15 | 1982-02-23 | Способ получени средства,селективно тормоз щего размножение нормальных и лейкемических клеток |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU8068A HU182087B (en) | 1980-01-15 | 1980-01-15 | Process for preparing an active substance for the selective inhibition of the multiplication of normal cells and of cells in myeloide leukemia |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU182087B true HU182087B (en) | 1983-12-28 |
Family
ID=10947737
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU8068A HU182087B (en) | 1980-01-15 | 1980-01-15 | Process for preparing an active substance for the selective inhibition of the multiplication of normal cells and of cells in myeloide leukemia |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4384991A (hu) |
| EP (1) | EP0035102B1 (hu) |
| JP (1) | JPS56138118A (hu) |
| AT (1) | ATE5071T1 (hu) |
| AU (1) | AU542044B2 (hu) |
| DE (1) | DE3161195D1 (hu) |
| DK (1) | DK155712C (hu) |
| HU (1) | HU182087B (hu) |
| SU (2) | SU1367837A3 (hu) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0085254A1 (en) * | 1981-12-28 | 1983-08-10 | Yoshio Sakagami | Proteins and their extraction |
| US4572834A (en) * | 1984-04-10 | 1986-02-25 | Clinical Reference Laboratory, Inc. | Biologic and method of preparing same |
| US5149544A (en) * | 1989-11-13 | 1992-09-22 | Research Corporation Technologies, Inc. | Method of inhibiting progenitor cell proliferation |
| UA27048C2 (uk) * | 1993-10-18 | 2000-02-28 | Центр Ембріональних Тканин "Емселл" | Лікарський препарат імуhокоригуючої дії hа осhові клітиhhої суспеhзії, спосіб лікуваhhя цукрового діабету з використаhhям цього препарату |
| EP1640012A1 (de) * | 2004-09-24 | 2006-03-29 | Salama, Zoser B. nat.rer.Dr. | Pharmazeutisches Mittel enthaltend Blutbestandteile 10 kDa und deren Verwendung zur Prophylaxe und Behandlung von Defekten des Immunsystems |
| US20060067942A1 (en) * | 2004-09-24 | 2006-03-30 | Salama Zoser B | Pharmaceutical agent comprising amino acids, peptides, proteins and/or fractions and fragments thereof and the use of same in the prophylaxis and treatment of immune system deficiency in humans and animals |
| CA2580192A1 (en) * | 2004-09-24 | 2006-03-30 | Zoser B. Salama | Pharmaceutical product containing blood constituents and or kda, and the use of the same for the prophylaxis and treatment of defects of the immune system |
| DE102004047262A1 (de) * | 2004-09-24 | 2006-04-06 | Ipss International Pharmaceutical Strategies & Solutions | Pharmazeutisches Mittel umfassend Blutprodukte und deren Verwendung als Injektions- oder Infusionsmittel zur Prophylaxe und Behandlung von Defekten des Immunsystems beim Menschen |
| US7834184B2 (en) | 2004-11-04 | 2010-11-16 | Mallinckrodt Inc. | Opiate intermediates and methods of synthesis |
| US7511060B2 (en) | 2005-10-21 | 2009-03-31 | Mallinckrodt Inc. | Opiate intermediates and methods of synthesis |
| US7622586B2 (en) * | 2005-10-21 | 2009-11-24 | Mallinckrodt Inc. | Opiate intermediates and methods of synthesis |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3973001A (en) * | 1954-04-27 | 1976-08-03 | Solco Basel Ag | Tissue cell stimulating blood extracts |
| US3937816A (en) * | 1970-07-21 | 1976-02-10 | Solco Basel Ag | Growth regulating compositions extracted from spleen |
| GB1579120A (en) * | 1975-08-05 | 1980-11-12 | Union International Co Ltd | Extracts of the haemopoietic system |
-
1980
- 1980-01-15 HU HU8068A patent/HU182087B/hu not_active IP Right Cessation
-
1981
- 1981-01-08 US US06/223,366 patent/US4384991A/en not_active Expired - Fee Related
- 1981-01-13 JP JP275381A patent/JPS56138118A/ja active Pending
- 1981-01-14 AU AU66200/81A patent/AU542044B2/en not_active Ceased
- 1981-01-14 DK DK015281A patent/DK155712C/da not_active IP Right Cessation
- 1981-01-14 SU SU813230703A patent/SU1367837A3/ru active
- 1981-01-15 EP EP81100268A patent/EP0035102B1/de not_active Expired
- 1981-01-15 AT AT81100268T patent/ATE5071T1/de not_active IP Right Cessation
- 1981-01-15 DE DE8181100268T patent/DE3161195D1/de not_active Expired
-
1982
- 1982-02-23 SU SU823396892A patent/SU1228776A3/ru active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK155712B (da) | 1989-05-08 |
| AU542044B2 (en) | 1985-02-07 |
| EP0035102A1 (de) | 1981-09-09 |
| US4384991A (en) | 1983-05-24 |
| SU1228776A3 (ru) | 1986-04-30 |
| SU1367837A3 (ru) | 1988-01-15 |
| DK15281A (da) | 1981-07-16 |
| ATE5071T1 (de) | 1983-11-15 |
| DK155712C (da) | 1989-09-25 |
| DE3161195D1 (en) | 1983-11-24 |
| EP0035102B1 (de) | 1983-10-19 |
| AU6620081A (en) | 1982-04-22 |
| JPS56138118A (en) | 1981-10-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Dulak et al. | A partially purified polypeptide fraction from rat liver cell conditioned medium with multiplication‐stimulating activity for embryo fibroblasts | |
| Lim et al. | Brain cells in culture: morphological transformation by a protein | |
| Dukor et al. | Bone marrow origin of complement‐receptor lymphocytes | |
| US20160046704A1 (en) | Glycoproteins having lipid mobilising properties and therapeutic applications thereof | |
| HU182087B (en) | Process for preparing an active substance for the selective inhibition of the multiplication of normal cells and of cells in myeloide leukemia | |
| WO1997035873A2 (de) | Peptide mit antiproliferativen eigenschaften | |
| EP0288965A2 (de) | Peptide mit Phospholipase A2- hemmender Wirkung | |
| Zähringer et al. | Mechanism of iron induction of ferritin synthesis | |
| Alliegro et al. | A nuclear protein regulated during the transition from active to quiescent phenotype in cultured endothelial cells | |
| JP2002521340A (ja) | 有機溶媒含有または非含有溶液を利用した軟骨部抽出物を得る方法およびそれから分離された抽出物 | |
| Sylvén et al. | On the structure and bioligical effects of a newly-discovered cytotoxic polypeptide in tumor fluid | |
| US4120951A (en) | Polypeptide hormones of the thymus | |
| US5824648A (en) | Rnase-cv (coriolus versicolor) | |
| Sanders et al. | Isolation and purification of histones from avian erythrocytes | |
| Kiger et al. | Further purification and chemical characterization of the lymphocyte-inhibiting-factor extracted from thymus (LIFT). | |
| Kiger et al. | Some effects of a partially purified lymphocyte-inhibiting factor from calf thymus | |
| Holmberg | The effects on cell multiplication in vitro of a dialysable polypeptide derived from tumor fluids | |
| Mishkin et al. | Reduced concentrations of Z protein in Morris hepatomas. Possible role in abnormal regulation of lipid metabolism. | |
| DE2853002A1 (de) | Polypeptide und verfahren zu ihrer herstellung | |
| Balazs et al. | Purification of an endopeptide to homogenity and the verification of its selective inhibitory action on myeloid cell proliferation | |
| EP0609242B1 (de) | Neues thrombininhibitorisches protein aus zecken | |
| Migicovsky | Further studies with the mitochondrial inhibitor of cholesterol synthesis | |
| EP0778347B1 (de) | ATP- und Nukleinsäure-bindendes Protein mit Helikase- und ATPase Eigenschaften | |
| Chiba et al. | Stimulated rat T cell-derived inhibitory factor for cellular DNA synthesis (STIF). III. Effect on cell proliferation and immune responses. | |
| Li et al. | Isolation from fetal bovine serum of an apolipoprotein-H-like protein which inhibits thymidine incorporation in fetal calf erythroid cells |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HU90 | Patent valid on 900628 | ||
| HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |